RU2705367C2 - Конъюгат анти-trop2 антитело-лекарственное средство - Google Patents
Конъюгат анти-trop2 антитело-лекарственное средство Download PDFInfo
- Publication number
- RU2705367C2 RU2705367C2 RU2016130095A RU2016130095A RU2705367C2 RU 2705367 C2 RU2705367 C2 RU 2705367C2 RU 2016130095 A RU2016130095 A RU 2016130095A RU 2016130095 A RU2016130095 A RU 2016130095A RU 2705367 C2 RU2705367 C2 RU 2705367C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- amino acid
- cancer
- seq
- acid sequence
- Prior art date
Links
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 title claims abstract description 235
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 title claims abstract description 235
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 204
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 111
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims abstract description 86
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 claims abstract description 42
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 398
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 208
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 100
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 86
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 61
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 61
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 56
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 52
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 40
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 39
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 26
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 21
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 20
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 20
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 20
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 18
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 16
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 16
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 claims description 16
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 14
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 14
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 14
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 14
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 13
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 12
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 12
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 12
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 11
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 10
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 10
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 10
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 8
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 claims description 8
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 8
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 8
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 8
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 8
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 8
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 claims description 7
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 claims description 6
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 63
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 39
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 11
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 abstract description 10
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 275
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 223
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 167
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 167
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 153
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 83
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 83
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 83
- 101100260698 Drosophila melanogaster Tina-1 gene Proteins 0.000 description 82
- 102100027212 Tumor-associated calcium signal transducer 2 Human genes 0.000 description 80
- 101150117918 Tacstd2 gene Proteins 0.000 description 76
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 72
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 70
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 70
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 69
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 68
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 54
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 53
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 51
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 50
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 48
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 44
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 43
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 41
- -1 EGP-1 Proteins 0.000 description 39
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 38
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 37
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 37
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 33
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 33
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 32
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 31
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 31
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 30
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 28
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- ZVYVPGLRVWUPMP-FYSMJZIKSA-N exatecan Chemical compound C1C[C@H](N)C2=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC3=CC(F)=C(C)C1=C32 ZVYVPGLRVWUPMP-FYSMJZIKSA-N 0.000 description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 27
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 26
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 26
- 229950009429 exatecan Drugs 0.000 description 26
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 26
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 description 26
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 26
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 25
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 25
- 239000002585 base Substances 0.000 description 25
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 description 25
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 25
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 24
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 23
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 22
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 22
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 22
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 21
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 20
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 20
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 20
- PBVAJRFEEOIAGW-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(2-carboxyethyl)phosphanyl]propanoic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PBVAJRFEEOIAGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 19
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 19
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 19
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 19
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 19
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 19
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 19
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 18
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 17
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 17
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 17
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 17
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 17
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 17
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 17
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 16
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 15
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 15
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 15
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 15
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 15
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 15
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 15
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 15
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 15
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 235000014705 isoleucine Nutrition 0.000 description 15
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 15
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 15
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 14
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 14
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 14
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 13
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 13
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 13
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 13
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 13
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 13
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 13
- 238000004460 liquid liquid chromatography Methods 0.000 description 13
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 13
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 13
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 12
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 12
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 12
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 12
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 11
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 11
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 11
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 11
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 11
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 10
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 10
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 10
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 10
- BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N glycinamide Chemical compound NCC(N)=O BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 10
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 10
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- MEKOFIRRDATTAG-UHFFFAOYSA-N 2,2,5,8-tetramethyl-3,4-dihydrochromen-6-ol Chemical compound C1CC(C)(C)OC2=C1C(C)=C(O)C=C2C MEKOFIRRDATTAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 9
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 9
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 9
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 9
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OPPDZGGNDGEPAW-RVZXSAGBSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2,5-diamino-5-oxopentanoic acid Chemical group NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O OPPDZGGNDGEPAW-RVZXSAGBSA-N 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 101100368708 Homo sapiens TACSTD2 gene Proteins 0.000 description 8
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 8
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 102000046001 human TACSTD2 Human genes 0.000 description 8
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 8
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 7
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 7
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 7
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 7
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 7
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 7
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 7
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 7
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 7
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 7
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- SFGDGTNEOSZCQM-BXRBKJIMSA-N (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid;(2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoic acid Chemical group OC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O SFGDGTNEOSZCQM-BXRBKJIMSA-N 0.000 description 6
- LPZCBCRQEBKAQQ-BHFSHLQUSA-N (2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,5-diamino-5-oxopentanoic acid Chemical group C[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O LPZCBCRQEBKAQQ-BHFSHLQUSA-N 0.000 description 6
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 6
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 6
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 6
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 6
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 6
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 6
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 6
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 6
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 5
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 5
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 5
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical class C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 5
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 5
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- YUXKOWPNKJSTPQ-AXWWPMSFSA-N (2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoic acid;(2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid Chemical group OC[C@H](N)C(O)=O.C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O YUXKOWPNKJSTPQ-AXWWPMSFSA-N 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 4
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 4
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 4
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 4
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 4
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 4
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000005002 aryl methyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- ZCSHNCUQKCANBX-UHFFFAOYSA-N lithium diisopropylamide Chemical compound [Li+].CC(C)[N-]C(C)C ZCSHNCUQKCANBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 4
- 125000002524 organometallic group Chemical group 0.000 description 4
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 4
- RQJMOCIAILRHIC-JUUVMNCLSA-N (2s)-2-amino-4-methylpentanoic acid;(2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid Chemical group CC(C)C[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 RQJMOCIAILRHIC-JUUVMNCLSA-N 0.000 description 3
- HOMROMWVNDUGRI-RVZXSAGBSA-N (2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical group NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O HOMROMWVNDUGRI-RVZXSAGBSA-N 0.000 description 3
- MHJJUOJOAJLYBS-ZBRNBAAYSA-N (2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical group C[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H]1CCCN1 MHJJUOJOAJLYBS-ZBRNBAAYSA-N 0.000 description 3
- NREKYJNUNHNXAF-DHYYHALDSA-N (2s,3s)-2-amino-3-methylpentanoic acid;(2s)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical group CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O.CSCC[C@H](N)C(O)=O NREKYJNUNHNXAF-DHYYHALDSA-N 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OISVCGZHLKNMSJ-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethylpyridine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=N1 OISVCGZHLKNMSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100022002 CD59 glycoprotein Human genes 0.000 description 3
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 3
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 3
- 102100031940 Epithelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 3
- 101000897400 Homo sapiens CD59 glycoprotein Proteins 0.000 description 3
- 101000920667 Homo sapiens Epithelial cell adhesion molecule Proteins 0.000 description 3
- 101000835093 Homo sapiens Transferrin receptor protein 1 Proteins 0.000 description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000473945 Theria <moth genus> Species 0.000 description 3
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 3
- 102100026144 Transferrin receptor protein 1 Human genes 0.000 description 3
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 3
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 3
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 3
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 3
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 3
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- OGDDUPYYEQZVHV-KDDYFZQKSA-N (2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical group NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N OGDDUPYYEQZVHV-KDDYFZQKSA-N 0.000 description 2
- UOXHUUWVKCDOBO-BXRBKJIMSA-N (2s)-2-aminobutanedioic acid;(2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid Chemical group OC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O UOXHUUWVKCDOBO-BXRBKJIMSA-N 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DVVGIUUJYPYENY-UHFFFAOYSA-N 1-methylpyridin-2-one Chemical compound CN1C=CC=CC1=O DVVGIUUJYPYENY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HIDJWBGOQFTDLU-UHFFFAOYSA-N 4-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCC(O)=O HIDJWBGOQFTDLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 8-azaguanine Chemical compound NC1=NC(O)=C2NN=NC2=N1 LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005508 8-azaguanine Drugs 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N Carbon-14 Chemical compound [14C] OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- 102000003915 DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000323 DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 2
- XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N Dimethoxyethane Chemical compound COCCOC XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012739 FreeStyle 293 Expression medium Substances 0.000 description 2
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 2
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 101100370002 Mus musculus Tnfsf14 gene Proteins 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N N-Butyllithium Chemical compound [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 101150046281 NIP4-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000011789 NOD SCID mouse Methods 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 2
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Chemical compound CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 2
- 206010043515 Throat cancer Diseases 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 101150006203 Tina-1 gene Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 2
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K aluminium trichloride Chemical compound Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 2
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 125000005101 aryl methoxy carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004391 aryl sulfonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 2
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003297 gemtuzumab ozogamicin Drugs 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 208000019691 hematopoietic and lymphoid cell neoplasm Diseases 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N iodane Chemical compound [125IH] XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 2
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 2
- 150000002596 lactones Chemical group 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- YNESATAKKCNGOF-UHFFFAOYSA-N lithium bis(trimethylsilyl)amide Chemical compound [Li+].C[Si](C)(C)[N-][Si](C)(C)C YNESATAKKCNGOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N oxalyl chloride Chemical compound ClC(=O)C(Cl)=O CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- NTTOTNSKUYCDAV-UHFFFAOYSA-N potassium hydride Chemical compound [KH] NTTOTNSKUYCDAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000105 potassium hydride Inorganic materials 0.000 description 2
- LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N potassium tert-butoxide Chemical compound [K+].CC(C)(C)[O-] LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 2
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VCQURUZYYSOUHP-UHFFFAOYSA-N (2,3,4,5,6-pentafluorophenyl) 2,2,2-trifluoroacetate Chemical compound FC1=C(F)C(F)=C(OC(=O)C(F)(F)F)C(F)=C1F VCQURUZYYSOUHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOWDZACBATWTAU-FEFUEGSOSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-(dimethylamino)-3-methylbutanoyl]amino]-n-[(3r,4s,5s)-1-[(2s)-2-[(1r,2r)-3-[[(1s,2r)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-n,3-dimethylbutanamide Chemical compound CC(C)[C@H](N(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)C1=CC=CC=C1 WOWDZACBATWTAU-FEFUEGSOSA-N 0.000 description 1
- LUZILQKVENCYPI-VDQHJUMDSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;(2s)-pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical group OC(=O)[C@@H]1CCCN1.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 LUZILQKVENCYPI-VDQHJUMDSA-N 0.000 description 1
- JUJNVPREIJPIEU-BHFSHLQUSA-N (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid;(2s)-2,5-diamino-5-oxopentanoic acid Chemical group OC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O JUJNVPREIJPIEU-BHFSHLQUSA-N 0.000 description 1
- JUHJNWURSJJBNS-KNIFDHDWSA-N (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical group OC[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O JUHJNWURSJJBNS-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- QYRPFJSPYKSYEK-VWURTLBMSA-N (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid;(2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid Chemical group OC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 QYRPFJSPYKSYEK-VWURTLBMSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- SCZNXLWKYFICFV-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4,5,7,8,9-octahydropyrido[1,2-b]diazepine Chemical compound C1CCCNN2CCCC=C21 SCZNXLWKYFICFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C(CN1CC2=C(CC1)NN=N2)=O HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 10043-66-0 Chemical compound [131I][131I] PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 0.000 description 1
- UPBQMAHYLWJGDW-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]ethoxy]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCOCC(O)=O UPBQMAHYLWJGDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHCCLXNEEPMSIO-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 IHCCLXNEEPMSIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTUJJIPXBJJLLV-AWEZNQCLSA-N 2-[[(2s)-2-[[2-[[2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PTUJJIPXBJJLLV-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- FBKUOPULLUJMOC-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetyl]amino]acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FBKUOPULLUJMOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTUJJIPXBJJLLV-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[2-[[2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PTUJJIPXBJJLLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XWKFPIODWVPXLX-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-5-methylpyridine Natural products CC1=CC=C(C)N=C1 XWKFPIODWVPXLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholin-4-ium;chloride Chemical compound [Cl-].COC1=NC(OC)=NC([N+]2(C)CCOCC2)=N1 BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004217 4-methoxybenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1OC([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- VWXGRWMELBPMCU-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-1-[3-(dimethylamino)propyl]-3-phenylbenzimidazol-2-one Chemical compound O=C1N(CCCN(C)C)C2=CC=C(Cl)C=C2N1C1=CC=CC=C1 VWXGRWMELBPMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033350 ATP-dependent translocase ABCB1 Human genes 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 206010073478 Anaplastic large-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 229940122815 Aromatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100032412 Basigin Human genes 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- QLNSPJMIYWEWNF-UHFFFAOYSA-N CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C.CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C.CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C QLNSPJMIYWEWNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 description 1
- PCBZRNYXXCIELG-WYFCWLEVSA-N COC1=CC=C(C[C@H](NC(=O)OC2CCCC3(C2)OOC2(O3)C3CC4CC(C3)CC2C4)C(=O)N[C@@H]2[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]2O)N2C=NC3=C2N=CN=C3N(C)C)C=C1 Chemical compound COC1=CC=C(C[C@H](NC(=O)OC2CCCC3(C2)OOC2(O3)C3CC4CC(C3)CC2C4)C(=O)N[C@@H]2[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]2O)N2C=NC3=C2N=CN=C3N(C)C)C=C1 PCBZRNYXXCIELG-WYFCWLEVSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical group [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000006332 Choriocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000725101 Clea Species 0.000 description 1
- 102100025680 Complement decay-accelerating factor Human genes 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical compound [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 101150084967 EPCAM gene Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- KAJAOGBVWCYGHZ-JTQLQIEISA-N Gly-Gly-Phe Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 KAJAOGBVWCYGHZ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- BLCLNMBMMGCOAS-URPVMXJPSA-N Goserelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](COC(C)(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NNC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 BLCLNMBMMGCOAS-URPVMXJPSA-N 0.000 description 1
- 108010069236 Goserelin Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 101000798441 Homo sapiens Basigin Proteins 0.000 description 1
- 101000884279 Homo sapiens CD276 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000856022 Homo sapiens Complement decay-accelerating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000961414 Homo sapiens Membrane cofactor protein Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 102220470475 L-seryl-tRNA(Sec) kinase_C57L_mutation Human genes 0.000 description 1
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 1
- 208000032004 Large-Cell Anaplastic Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 108010000817 Leuprolide Proteins 0.000 description 1
- 239000002841 Lewis acid Substances 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010047230 Member 1 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 1
- 102100039373 Membrane cofactor protein Human genes 0.000 description 1
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- BZORFPDSXLZWJF-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethyl-1,4-phenylenediamine Chemical compound CN(C)C1=CC=C(N)C=C1 BZORFPDSXLZWJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002274 Nalgene Polymers 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 description 1
- 108090000315 Protein Kinase C Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000012722 SDS sample buffer Substances 0.000 description 1
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101150057140 TACSTD1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700012457 TACSTD2 Proteins 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- MJOQJPYNENPSSS-XQHKEYJVSA-N [(3r,4s,5r,6s)-4,5,6-triacetyloxyoxan-3-yl] acetate Chemical compound CC(=O)O[C@@H]1CO[C@@H](OC(C)=O)[C@H](OC(C)=O)[C@H]1OC(C)=O MJOQJPYNENPSSS-XQHKEYJVSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NKDSPEFADHLMHN-UHFFFAOYSA-N [[2-(9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetyl]amino]methyl acetate Chemical compound CC(=O)OCNC(=O)CNC(=O)OCC1c2ccccc2-c2ccccc12 NKDSPEFADHLMHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-BJUDXGSMSA-N ac1l2y5h Chemical compound [18FH] KRHYYFGTRYWZRS-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 1
- XCJLXFIGEMUOEE-UHFFFAOYSA-N acetamide;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound CC(N)=O.OC(=O)C(F)(F)F XCJLXFIGEMUOEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 description 1
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 229910000102 alkali metal hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008046 alkali metal hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004703 alkoxides Chemical class 0.000 description 1
- 125000004849 alkoxymethyl group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940103272 aluminum potassium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 150000007854 aminals Chemical group 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 229960002932 anastrozole Drugs 0.000 description 1
- YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N anastrozole Chemical compound N#CC(C)(C)C1=CC(C(C)(C#N)C)=CC(CN2N=CN=C2)=C1 YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950000242 ancitabine Drugs 0.000 description 1
- KZOWNALBTMILAP-JBMRGDGGSA-N ancitabine hydrochloride Chemical compound Cl.N=C1C=CN2[C@@H]3O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]3OC2=N1 KZOWNALBTMILAP-JBMRGDGGSA-N 0.000 description 1
- HOPRXXXSABQWAV-UHFFFAOYSA-N anhydrous collidine Natural products CC1=CC=NC(C)=C1C HOPRXXXSABQWAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 239000003886 aromatase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 238000010533 azeotropic distillation Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 229960000455 brentuximab vedotin Drugs 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- STXLEBDCAKUIQT-UHFFFAOYSA-N butanamide;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound CCCC(N)=O.OC(=O)C(F)(F)F STXLEBDCAKUIQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 description 1
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 1
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-BJUDXGSMSA-N carbon-11 Chemical compound [11C] OKTJSMMVPCPJKN-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- UTBIMNXEDGNJFE-UHFFFAOYSA-N collidine Natural products CC1=CC=C(C)C(C)=N1 UTBIMNXEDGNJFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-IGMARMGPSA-N copper-64 Chemical compound [64Cu] RYGMFSIKBFXOCR-IGMARMGPSA-N 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 description 1
- ZWWWLCMDTZFSOO-UHFFFAOYSA-N diethoxyphosphorylformonitrile Chemical compound CCOP(=O)(C#N)OCC ZWWWLCMDTZFSOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N dihydromaleimide Natural products O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 239000003118 drug derivative Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229960004750 estramustine phosphate Drugs 0.000 description 1
- ADFOJJHRTBFFOF-RBRWEJTLSA-N estramustine phosphate Chemical compound ClCCN(CCCl)C(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)OP(O)(O)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 ADFOJJHRTBFFOF-RBRWEJTLSA-N 0.000 description 1
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N fluorenylmethyloxycarbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical class C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 1
- 229960002913 goserelin Drugs 0.000 description 1
- 150000008282 halocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 102000045551 human EPCAM Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- DCPMPXBYPZGNDC-UHFFFAOYSA-N hydron;methanediimine;chloride Chemical compound Cl.N=C=N DCPMPXBYPZGNDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 230000002625 immunotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 229940055742 indium-111 Drugs 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N indium-111 Chemical compound [111In] APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-OIOBTWANSA-N iodane Chemical compound [124IH] XMBWDFGMSWQBCA-OIOBTWANSA-N 0.000 description 1
- FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M iron chloride Chemical compound [Cl-].[Fe] FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 229960003881 letrozole Drugs 0.000 description 1
- HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N letrozole Chemical compound C1=CC(C#N)=CC=C1C(N1N=CN=C1)C1=CC=C(C#N)C=C1 HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFIJNRVAKGFPGQ-LIJARHBVSA-N leuprolide Chemical compound CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 GFIJNRVAKGFPGQ-LIJARHBVSA-N 0.000 description 1
- 229960004338 leuprorelin Drugs 0.000 description 1
- 150000007517 lewis acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 229960005015 local anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 238000010841 mRNA extraction Methods 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N methane;palladium Chemical compound C.[Pd] UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 125000004184 methoxymethyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004879 molecular function Effects 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000009099 neoadjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- WBXPDJSOTKVWSJ-ZDUSSCGKSA-N pemetrexed Chemical compound C=1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2C=1CCC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 WBXPDJSOTKVWSJ-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 238000011170 pharmaceutical development Methods 0.000 description 1
- 230000004526 pharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J potassium aluminium sulfate Chemical compound [Al+3].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- CUQOHAYJWVTKDE-UHFFFAOYSA-N potassium;butan-1-olate Chemical compound [K+].CCCC[O-] CUQOHAYJWVTKDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N propionamide Chemical compound CCC(N)=O QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012514 protein characterization Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- GZUITABIAKMVPG-UHFFFAOYSA-N raloxifene Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(C(=O)C=2C=CC(OCCN3CCCCC3)=CC=2)C2=CC=C(O)C=C2S1 GZUITABIAKMVPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004622 raloxifene Drugs 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000003571 reporter gene assay Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009938 salting Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000009131 signaling function Effects 0.000 description 1
- 125000003808 silyl group Chemical group [H][Si]([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- QDRKDTQENPPHOJ-UHFFFAOYSA-N sodium ethoxide Chemical compound [Na+].CC[O-] QDRKDTQENPPHOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000021055 solid food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N sulfolane Chemical compound O=S1(=O)CCCC1 HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 1
- GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N sym-collidine Natural products CC1=CN=C(C)C(C)=C1 GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000009121 systemic therapy Methods 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 125000000037 tert-butyldiphenylsilyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[Si]([H])([*]C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 239000011135 tin Substances 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003918 triazines Chemical class 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 description 1
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- QCWXUUIWCKQGHC-YPZZEJLDSA-N zirconium-89 Chemical compound [89Zr] QCWXUUIWCKQGHC-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
- A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6857—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from lung cancer cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6859—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from liver or pancreas cancer cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6863—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from stomach or intestines cancer cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6865—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from skin, nerves or brain cancer cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
- C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3023—Lung
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/303—Liver or Pancreas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3053—Skin, nerves, brain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/77—Internalization into the cell
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к конъюгату антитело-лекарственное средство, где противоопухолевое соединение, представленное формулой:
конъюгировано с анти-TROP2 антителом посредством тиоэфирной связи, которая образуется на участке дисульфидной связи, присутствующей в шарнирной части анти-TROP2 антитела, через линкер, имеющий структуру, представленную -L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-. Технический результат: получен новый конъюгат, предназначенный для обеспечения противоопухолевого лекарственного средства, обладающего отличным терапевтическим эффектом, которое является отличным в том, что касается противоопухолевого эффекта и безопасности. 7 н. и 21 з.п. ф-лы, 22 пр., 2 табл., 27 ил.
Description
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0001]
Настоящее изобретение относится к конъюгату антитело-лекарственное средство, содержащему противоопухолевое лекарственное средство, конъюгированное с анти-TROP2 антителом через линкерную структуру, при этом такой конъюгат является полезным в качестве противоопухолевого лекарственного средства.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002]
Конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC) содержит лекарственное средство с цитотоксичностью, конъюгированное с антителом, антиген которого экспрессируется на поверхности раковых клеток и которое также связывается с антигеном, способным к интернализации клетками, и поэтому может доставлять лекарственное средство селективно к раковым клеткам и, как ожидают, будет вызывать аккумуляцию лекарственного средства в раковых клетках и убивать раковые клетки (см. не-патентную литературу 1-3). В качестве ADC, Милотарг (Гемтузумаб озогамицин (зарегистрированная торговая марка)), в котором калихеамицин конъюгирован с анти-CD33 антителом, одобрен в качестве терапевтического средства для лечения острого миелоидного лейкоза. Кроме того, Адцетрис (Брентуксимаб ведотин (зарегистрированная торговая марка)), в котором ауристатин E конъюгирован с анти-CD30 антителом, недавно был одобрен в качестве терапевтического средства для лечения лимфомы Ходжкина и анапластической крупноклеточной лимфомы (см. не-патентную литературу 4). Лекарственные средства, содержащиеся в ADC, одобренных к настоящему времени, таргетируют ДНК или тубулин.
[0003]
Что касается противоопухолевых низкомолекулярных соединений, известны камптотециновые производные - соединения, которые ингибируют топоизомеразу I для проявления противоопухолевого эффекта. Среди них противоопухолевое соединение, представленное формулой, показанной ниже
[0004]
[Формула 1]
[0005]
(экзатекан, химическое название: (1S,9S)-1-амино-9-этил-5-фтор-2,3-дигидро-9-гидрокси-4-метил-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-10,13(9H,15H)-дион), представляет собой водорастворимое производное камптотецина (Патентная литература 1 и 2). В отличие от иринотекана, используемого в настоящее время в клинических условиях, это соединение не требует активации ферментом для проявления противоопухолевого эффекта. Кроме того, ингибирующее действие на топоизомеразу I выше, чем у SN-38, который представляет собой основное фармацевтически активное вещество иринотекана и топотекана, также используемго в клинических условиях, и более высокая in vitro убивающая клетки активность достигается против различных раковых клеток. В частности, оно демонстрирует эффект против раковых клеток, которые обладают резистентностью к SN-38 или т.п. в результате экспрессии P-гликопротеина. Кроме того, в мышиной модели с подкожно трансплантированной человеческой опухолью, оно продемонстрировало сильный противоопухолевый эффект и, таким образом, прошло клинические испытания, но еще не поставляется на рынок (см. не-патентную литературу 5-10). Остается неясным действует или нет экзатекан эффективно в качестве ADC.
[0006]
DE-310 представляет собой комплекс, в котором экзатекан конъюгирован с биоразлагаемым карбоксиметилдекстран-полиспирт полимером через GGFG пептидный спейсер (Патентная литература 3). Путем преобразования экзатекана в форму полимерного пролекарства, свойство удержания его высоких уровней в крови может сохраняться, и также высокая способность таргетировать участок опухоли пассивно увеличивается путем использования повышенной проницаемости новых образованных кровеносных сосудов в опухоли и свойства удерживания в опухолевых тканях. Что касается DE-310, через расщепление пептидного спейсера ферментом, экзатекан и экзатекан с глицином, связанным с амино группой, непрерывно высвобождаются в качестве основного активного вещества. Как результат, фармакокинетике свойства улучшаются. Было обнаружено, что DE-310 обладает более высокой эффективностью, чем экзатекан, вводимый отдельно, даже при том, что общее количество экзатекана, содержащегося в нем, меньше, чем в случае введения экзатекана отдельно, в соответствии с различными моделями оценки опухоли в не-клинических исследованиях. Было проведено клиническое испытание для DE-310, и также были подтверждены эффективные случаи, в сообщении о которых предполагается, что основное активное вещество аккумулируется в опухоли, а не в нормальных тканях, однако, существует также сообщение, указывающее, что аккумуляция DE-310 и основного активного вещества в опухоли не намного отличается от аккумуляции в нормальных тканях у человека, и, таким образом, никакого пассивного таргетирования у человека не наблюдали (см. не-патентную литературу 11-14). Как результат, DE-310 также не был запущен в серийное производство, и остается неясным действует или нет экзатекан эффективно в качестве лекарственного средства, предназначенного для такого таргетирования.
[0007]
В качестве соединения, относящегося к DE-310, также известен комплекс, в котором структурный элемент, представленный как -NH-(CH2)4-C(=O)-, встроен между -GGFG-спейсером и экзатеканом с образованием -GGFG-NH-(CH2)4-C(=O)-, используемого в качестве спейсерной структуры (Патентная литература 4). Однако противоопухолевый эффект указанного комплекса вообще неизвестен.
[0008]
Человеческий TROP2 (TACSTD2: опухоль-ассоциированный кальциевый сигнальный трансдуктор 2, GA733-1, EGP-1, M1S1; далее указан как hTROP2) представляет собой однопроходный трансмембранного типа 1 мембранный белок, состоящий из 323 аминокислотных остатков. Хотя присутствие мембранного белка, вовлеченного в иммунорезистентность, который является одинаковым для человеческих трофобластов и раковых клеток (Не-патентная литература 15), было предположено ранее, молекула антигена, распознаваемая моноклональным антителом (162-25.3 или 162-46.2) против мембранного белка, в клеточной линии человеческой хориокарциномы была идентифицирована и обозначена как TROP2 как одна из молекул, экспрессируемых в человеческих трофобластах (Не-патентная литература 16). Эта молекула также была обнаружена позднее другими исследователями и также обозначена как опухолевый антиген GA733-1, распознаваемый мышиным моноклональным антителом GA733 (Не-патентная литература 17), полученным путем иммунизации гастральной раковой клеточной линией, или эпителиальный гликопротеин (EGP-1; Не-патентная литература 18), распознаваемый мышиным моноклональным антителом RS7-3G11, полученным путем иммунизации раковыми клетками немелкоклеточного рака легкого. В 1995, однако, TROP2 ген был клонирован, и было подтверждено, что все эти молекулы являются идентичными молекулами (Не-патентная литература 19). ДНК-последовательность и аминокислотная последовательность hTROP2 являются доступными из общей базы данных и могут указываться, например, под номерами доступа NM_002353 и NP_002344 (NCBI).
hTROP2 ген относится к TACSTD семейству генов, вместе с человеческим TROP-1 (EpCAM, EGP-2, TACSTD1) геном, имеющим гомологию около 50% (Не-патентная литература 21). hTROP2 белок состоит из сигнальной последовательности, состоящей из N-концевых 26 аминокислотных остатков, внеклеточного домена, состоящего из 248 аминокислотных остатков, трансмембранного домена, состоящего из 23 аминокислотных остатков, и внутриклеточного домена, состоящего из 26 аминокислотных остатков. Внеклеточный домен содержит четыре N-связанных сайта гликозилирования, и известно, что он имеет кажущуюся молекулярную массу около 10 кДа плюс теоретическое рассчитанное значение 35 кДа (Не-патентная литература 19).
До сих пор не был идентифицирован ни физиологический лиганд hTROP2 ни его молекулярные функции. Было обнаружено, что hTROP2 осуществляет трансдукцию кальциевых сигналов в опухолевых клетках (Не-патентная литература 20). Кроме того, hTROP2 фосфорилируется по внутриклеточному остатку серина 303 протеинкиназой C, которая представляет собой Ca2+-зависимую киназу (Не-патентная литература 18), и содержит PIP2-связывающую последовательность в внутриклеточном домене, что предполагает сигнальные функции в опухолевых клетках (Не-патентная литература 22).
В иммуногистохимическом анализе с использованием клинических образцов было обнаружено, что hTROP2 чрезмерно экспрессируется в различных эпителиальноклеточных карциномах и экспрессируется в эпителиальных клетках в ограниченных типах нормальных тканей при низком уровне экспрессии по сравнению с опухолевыми тканями (Не-патентная литература 23-27). Также сообщалось о том, что экспрессия hTROP2 соотносится с плохим прогнозом колоректального рака (Не-патентная литература 23), гастрального рака (Не-патентная литература 24), панкреатического рака (Не-патентная литература 25), рака полости рта (Не-патентная литература 26) и глиомы (Не-патентная литература 27).
Также сообщалось, на основании моделей с использованием колоректальных раковых клеток, что экспрессия hTROP2 вовлечена в каркас-независимый клеточный рост опухолевых клеток и карциногенез у иммунодефицитных мышей (Не-патентная литература 28).
[0009]
В ответ на такую информацию, предполагающую связь с раком, к настоящему времени было получено множество анти-hTROP2 антител, и они были исследованы на противоопухолевые эффекты. Среди этих антител, раскрывается, например, неконъюгированное антитело, которое само демонстрирует противоопухолевую активность в моделях ксенотрансплантата у голых мышей (Патентная литература 5-8), а также антитело, которое демонстрирует противоопухолевую активность как ADC с цитотоксическим лекарственным средством (Патентная литература 9-12). Однако сила или охват их активности все же недостаточны, и существует неудовлетворенная медицинская потребность в hTROP2 в качестве терапевтической цели.
ПЕРЕЧЕНЬ ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПАТЕНТНАЯ ЛИТЕРАТУРА
[0010]
Патентная литература 1: Японская выложенная патентная заявка № 5-59061
Патентная литература 2: Японская выложенная патентная заявка № 8-337584
Патентная литература 3: Международная публикация № WO 1997/46260
Патентная литература 4: Международная публикация № WO 2000/25825
Патентная литература 5: Международная публикация № WO 2008/144891
Патентная литература 6: Международная публикация № WO 2011/145744
Патентная литература 7: Международная публикация № WO 2011/155579
Патентная литература 8: Международная публикация № WO 2013/077458
Патентная литература 9: Международная публикация № WO 2003/074566
Патентная литература 10: Международная публикация № WO 2011/068845
Патентная литература 11: Международная публикация № WO 2013/068946
Патентная литература 12: Патент США № 7999083
НЕ-ПАТЕНТНАЯ ЛИТЕРАТУРА
[0011]
Не-патентная литература 1: Ducry, L., et al., Bioconjugate Chem. (2010) 21, 5-13.
Не-патентная литература 2: Alley, S. C., et al., Current Opinion in Chemical Biology (2010) 14, 529-537.
Не-патентная литература 3: Damle N.K., Expert Opin. Biol. Ther. (2004) 4, 1445-1452.
Не-патентная литература 4: Senter P. D., et al., Nature Biotechnology (2012) 30, 631-637.
Не-патентная литература 5: Kumazawa, E., Tohgo, A., Exp. Opin. Invest. Drugs (1998) 7, 625-632.
Не-патентная литература 6: Mitsui, I., et al., Jpn J. Cancer Res. (1995) 86, 776-782.
Не-патентная литература 7: Takiguchi, S., et al., Jpn J. Cancer Res. (1997) 88, 760-769.
Не-патентная литература 8: Joto, N. et al., Int J Cancer (1997) 72, 680-686.
Не-патентная литература 9: Kumazawa, E. et al., Cancer Chemother. Pharmacol. (1998) 42, 210-220.
Не-патентная литература 10: De Jager, R., et al., Ann N Y Acad Sci (2000) 922, 260-273.
Не-патентная литература 11: Inoue, K. et al., Polymer Drugs in the Clinical Stage, Edited by Maeda et al. (2003), 145-153.
Не-патентная литература 12: Kumazawa, E. et al., Cancer Sci (2004) 95, 168-175.
Не-патентная литература 13: Soepenberg, O. et al., Clinical Cancer Research, (2005) 11, 703-711.
Не-патентная литература 14: Wente M. N. et al., Investigational New Drugs (2005) 23, 339-347.
Не-патентная литература 15: Faulk WP, et al., Proc. Natl. Acad. Sci.75(4), 1947-1951 (1978).
Не-патентная литература 16: Lipinski M, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 78(8), 5147-5150 (1981).
Не-патентная литература 17: Linnenbach A J, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 86(1), 27-31 (1989).
Не-патентная литература 18: Basu A, et al., Int. J. Cancer, 62(4), 472-479 (1995).
Не-патентная литература 19: Fornaro M, et al., Int. J. Cancer, 62(5), 610-618 (1995).
Не-патентная литература 20: Ripani E, et al., Int. J. Cancer, 76(5), 671-676 (1998).
Не-патентная литература 21: Calabrese G, et al., Cytogenet. Cell Genet., 92(1-2), 164-165 (2001).
Не-патентная литература 22: El Sewedy T, et al., Int. J. Cancer, 75(2), 324-330 (1998).
Не-патентная литература 23: Ohmachi T, et al., Clin. Cancer Res., 12(10), 3057-3063 (2006).
Не-патентная литература 24: Muhlmann G, et al., J. Clin. Pathol., 62(2), 152-158 (2009).
Не-патентная литература 25: Fong D, et al., Br. J. Cancer, 99(8), 1290-1295 (2008).
Не-патентная литература 26: Fong D, et al., Mod. Pathol., 21(2), 186-191 (2008).
Не-патентная литература 27: Ning S, et al., Neurol. Sci., 34(10), 1745-1750 (2013).
Не-патентная литература 28: Wang J, et al., Mol. Cancer Ther., 7(2), 280-285 (2008).
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Техническая проблема
[0012]
Что касается лечения опухоли антителом, недостаточный противоопухолевый эффект можно наблюдать, даже когда антитело распознает антиген для связывания с опухолевыми клетками, и есть случаи, когда необходимо более эффективное противоопухолевое антитело. Кроме того, многие противоопухолевые низкомолекулярные соединения имеют проблему безопасности, такую как побочный эффект и токсичность, даже если соединения обладают отличным противоопухолевым эффектом, и остается проблема достижения более высокого терапевтического эффекта при большем усилении безопасности. Таким образом, целью настоящего изобретения является обеспечение противоопухолевого лекарственного средства, обладающего отличным терапевтическим эффектом, которое является отличным в том, что касается противоопухолевого эффекта и безопасности.
[0013]
Авторы настоящего изобретения полагали, что, когда противоопухолевое соединение экзатекан преобразуют в конъюгат антитело-лекарственное средство через линкерную структуру путем конъюгации с анти-TROP2 антителом, которое способно таргетировать опухолевые клетки, то есть обладает такими свойствами, как способность распознавания опухолевых клеток, способностью связывания с опухолевыми клетками, свойством интернализации в опухолевых клетках или т.п., может приобретаться убивающая клетки активность на основании антитела, противоопухолевое соединение более надежно может доставляться к опухолевым клеткам для специфического проявления противоопухолевого эффекта соединения в опухолевых клетках, и, таким образом, противоопухолевый эффект наверняка может быть продемонстрирован, и дозу противоопухолевого соединения можно уменьшить по сравнению со случаем введения соединения отдельно, и, таким образом, влияние противоопухолевого соединения на нормальные клетки можно ослабить для достижения большей безопасности.
В этой связи авторы настоящего изобретения создали линкер с специфической структурой, и им удалось получить конъюгат антитело-лекарственное средство, в котором анти-TROP2 антитело и экзатекан конъюгированы друг с другом через линкер, и подтвердить отличный противоопухолевый эффект, демонстрируемый конъюгатом, создав, таким образом, настоящее изобретение.
[0014]
В частности, настоящее изобретение относится к следующему.
[1] Конъюгат антитело-лекарственное средство, где противоопухолевое соединение, представленное следующей формулой:
[Формула 2]
конъюгировано с анти-TROP2 антителом посредством тиоэфирной связи, которая образуется на участке дисульфидной связи, присутствующей в шарнирной части анти-TROP2 антитела, через линкер, имеющий структуру, представленную следующей формулой:
-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-
[0015]
Здесь, анти-TROP2 антитело связано с концевой частью L1, противоопухолевое соединение связано с карбонильной группой -(CH2)n2-C(=O)- группировки, с атомом азота амино группы в положении 1 в качестве положения связывания,
где
n1 представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 6,
n2 представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 5,
L1 представляет собой -(Сукцинимид-3-ил-N)-(CH2)n3-C(=O)-,
где n3 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 8,
L2 представляет собой -NH-(CH2CH2-O)n4-CH2CH2-C(=O)- или простую связь,
где n4 представляет собой целое число, имеющее значение от 1 до 6,
LP представляет собой пептидный остаток, состоящий из 2-7 аминокислот,
La представляет собой -O- или простую связь, и
-(Сукцинимид-3-ил-N)- имеет структуру, представленную следующей формулой:
[Формула 3]
которая связана с анти-TROP2 антителом в положении 3 и связана с метиленовой группой в линкерной структуре, содержащей эту структуру, по атому азота в положении 1.
[0016]
Настоящее изобретение также относится к каждому из следующих.
[2] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с пунктом [1], где пептидный остаток LP представляет собой пептидный остаток, включающий аминокислоту, выбранную из фенилаланина, глицина, валина, лизина, цитруллина, серина, глутаминовой кислоты и аспарагиновой кислоты.
[3] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с пунктом [1] или [2], где LP представляет собой пептидный остаток, выбранный из следующей группы:
-GGF-,
-DGGF-,
-(D-)D-GGF-,
-EGGF-,
-GGFG-,
-SGGF-,
-KGGF-,
-DGGFG-,
-GGFGG-,
-DDGGFG-,
-KDGGFG-, и
-GGFGGGF-;
где "(D-)D" представляет собой D-аспарагиновую кислоту.
[4] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с пунктом [1] или [2], где LP представляет собой пептидный остаток, состоящий из 4 аминокислот.
[5] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[4], где LP представляет собой тетрапептидный остаток -GGFG-.
[0017]
[6] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[5], где n3 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 5, и L2 представляет собой простую связь.
[7] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[5], где n3 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 5, L2 представляет собой -NH-(CH2CH2-O)n4-CH2CH2-C(=O)-, и n4 имеет значение 2 или 4.
[8] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[7], где -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)- представляет собой частичную структуру, имеющую длину цепи от 4 до 7 атомов.
[9] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[7], где -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)- представляет собой частичную структуру, имеющую длину цепи 5 или 6 атомов.
[10] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[9], где -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)- представляет собой
-NH-CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2-O-CH2-C(=O)- или
-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-.
[11] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[9], где -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)- представляет собой
-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2-O-CH2-C(=O)- или
-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-.
[0018]
[12] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[9], где структурный фрагмент лекарственное средство-линкер, содержащий лекарственное средство, связанное с -L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-, представляет собой одну лекарственное средство-линкер структуру, выбранную из следующей группы:
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX).
[0019]
Где -(Сукцинимид-3-ил-N)- имеет структуру, представленную следующей формулой:
[Формула 4]
которая связана с анти-TROP2 антителом в положении 3 и связана с метиленовой группой в линкерной структуре, содержащей эту структуру, по атому азота в положении 1,
-(NH-DX) представляет собой группу, представленную следующей формулой:
[Формула 5]
где атом азота амино группы в положении 1 представляет собой положение связывания, и
-GGFG- представляет собой тетрапептидный остаток -Gly-Gly-Phe-Gly-.
[0020]
[13] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[9], где структурный фрагмент лекарственное средство-линкер, содержащий лекарственное средство, связанное с -L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-, представляет собой одну лекарственное средство-линкер структуру, выбранную из следующей группы:
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX).
[0021]
Здесь, -(Сукцинимид-3-ил-N)-, -(NH-DX) и -GGFG- являются такими, как определено выше.
[0022]
[14] Конъюгат антитело-лекарственное средство, где противоопухолевое соединение, представленное следующей формулой:
[Формула 6]
конъюгировано с анти-TROP2 антителом посредством тиоэфирной связи, которая образуется на участке дисульфидной связи, присутствующей в шарнирной части анти-TROP2 антитела, через линкер, имеющий структуру, представленную следующей формулой:
-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-
где анти-TROP2 антитело связано с концевой частью L1, противоопухолевое соединение связано с карбонильной группой -(CH2)n2-C(=O)-,
где
n1 представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 6,
n2 представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 5,
L1 представляет собой -(Сукцинимид-3-ил-N)-(CH2)n3-C(=O)-,
где n3 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 8,
L2 представляет собой -NH-(CH2CH2-O)n4-CH2CH2-C(=O)- или простую связь,
где n4 представляет собой целое число, имеющее значение от 1 до 6,
LP представляет собой тетрапептидный остаток -GGFG-,
La представляет собой -O- или простую связь, и
-(Сукцинимид-3-ил-N)- имеет структуру, представленную следующей формулой:
[Формула 7]
которая связана с анти-TROP2 антителом в положении 3 и связана с метиленовой группой в линкерной структуре, содержащей эту структуру, по атому азота в положении 1.
[0023]
[15] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с пунктом [14], где
n1 имеет значение 3, n2 имеет значение 0, n3 имеет значение 2, L2 представляет собой -NH-(CH2CH2-O)n4-CH2CH2-C(=O)-, n4 имеет значение 2, и La представляет собой простую связь,
n1 имеет значение 1, n2 имеет значение 1, n3 имеет значение 5, L2 представляет собой простую связь, и La представляет собой -O-, или
n1 имеет значение 2, n2 имеет значение 1, n3 имеет значение 5, L2 представляет собой простую связь, и La представляет собой -O-.
[16] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с пунктом [14] или [15], где n3 имеет значение 2 или 5, и L2 представляет собой простую связь.
[17] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с пунктом [14] или [15], где n3 имеет значение 2 или 5, L2 представляет собой -NH-(CH2CH2-O)n4-CH2CH2-C(=O)-, и n4 имеет значение 2 или 4.
[18] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [14]-[17], где -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)- представляет собой
-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2-O-CH2-C(=O)- или
-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-.
[0024]
[19] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [14]-[18], где структурный фрагмент лекарственное средство-линкер, содержащий лекарственное средство, связанное с -L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-, представляет собой одну лекарственное средство-линкер структуру, выбранную из следующей группы:
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX);
[0025]
где -(Сукцинимид-3-ил-N)- имеет структуру, представленную следующей формулой:
[Формула 8]
которая связана с анти-TROP2 антителом в положении 3 и связана с метиленовой группой в линкерной структуре, содержащей эту структуру, по атому азота в положении 1,
-(NH-DX) представляет собой группу, представленную следующей формулой:
[Формула 9]
где атом азота амино группы в положении 1 представляет собой положение связывания, и
-GGFG- представляет собой тетрапептидный остаток -Gly-Gly-Phe-Gly-.
[0026]
[20] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [14]-[18], где структурный фрагмент лекарственное средство-линкер, содержащий лекарственное средство, связанное с -L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-, представляет собой одну лекарственное средство-линкер структуру, выбранную из следующей группы:
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX).
Здесь, -(Сукцинимид-3-ил-N)-, -(NH-DX) и -GGFG- являются такими, как определено выше.
[0027]
[21] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[20], где среднее количество конъюгированных единиц выбранной одной лекарственное средство-линкер структуры в расчете на антитело находится в пределах от 1 до 10.
[22] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[20], где среднее количество конъюгированных единиц выбранной одной лекарственное средство-линкер структуры в расчете на антитело находится в пределах от 2 до 8.
[23] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[20], где среднее количество конъюгированных единиц выбранной одной лекарственное средство-линкер структуры в расчете на антитело находится в пределах от 3 до 8.
[0028]
[24] Лекарственное средство, содержащее конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[23], его соль или его гидрат.
[25] Противоопухолевое лекарственное средство и/или противораковое лекарственное средство, содержащее конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[23], его соль или его гидрат.
[26] Противоопухолевое лекарственное средство и/или противораковое лекарственное средство в соответствии с пунктом [25], которое применяют для лечения рака легкого, рака почки, уротелиального рака, колоректального рака, рака предстательной железы, мультиформной глиобластомы, рака яичников, панкреатического рака, рака молочной железы, меланомы, рака печени, рака мочевого пузыря, гастрального рака, цервикального рака, рака головы и шеи или эзофагеального рака.
[27] Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[23], его соль или его гидрат в качестве активного компонента и фармацевтически приемлемый компонент для формулирования коспозиции.
[28] Фармацевтическая композиция в соответствии с пунктом [27], которую применяют для лечения рака легкого, рака почки, уротелиального рака, колоректального рака, рака предстательной железы, мультиформной глиобластомы, рака яичников, панкреатического рака, рака молочной железы, меланомы, рака печени, рака мочевого пузыря, гастрального рака, цервикального рак, рака головы и шеи или эзофагеального рака.
[29] Способ лечения опухоли и/или рака, включающий введение конъюгата антитело-лекарственное средство в соответствии с любым из пунктов [1]-[23], его соли или его гидрата.
[0029]
[30] Способ получения конъюгата антитело-лекарственное средство, включающий взаимодействие соединения, представленного следующей формулой:
(малеимид-N-ил)-(CH2)n3-C(=O)-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-(NH-DX)
с анти-TROP2 антителом или его реакционноспособным производным и конъюгирование лекарственное средство-линкер структуры с антителом способом образования тиоэфирной связи на участке дисульфидной связи, присутствующей в шарнирной части антитела.
[0030]
В формуле, n3 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 8,
L2 представляет собой -NH-(CH2CH2-O)n4-CH2CH2-C(=O)- или простую связь,
где n4 представляет собой целое число, имеющее значение от 1 до 6,
LP представляет собой пептидный остаток, состоящий из 2-7 аминокислот, выбранных из фенилаланина, глицина, валина, лизина, цитруллина, серина, глутаминовой кислоты и аспарагиновой кислоты,
n1 представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 6,
n2 представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 5,
La представляет собой -O- или простую связь,
(малеимид-N-ил)- представляет собой группу, представленную следующей формулой:
[Формула 10]
где атом азота представляет собой положение связывания.
-(NH-DX) представляет собой группу, представленную следующей формулой:
[Формула 11]
где атом азота амино группы в положении 1 представляет собой положение связывания.
[0031]
[31] Способ получения в соответствии с пунктом [30], где способ конъюгирования лекарственное средство-линкер структуры с анти-TROP2 антителом представляет собой способ восстановления антитела для преобразования антитела в реакционноспособное производное.
[0032]
[32] Способ получения в соответствии с пунктом [30] или [31], где среднее количество конъюгированных единиц выбранной одной лекарственное средство-линкер структуры в расчете на антитело находится в пределах от 1 до 10.
[33] Способ получения в соответствии с пунктом [30] или [31], где среднее количество конъюгированных единиц выбранной одной лекарственное средство-линкер структуры в расчете на антитело находится в пределах от 2 до 8.
[34] Способ получения в соответствии с пунктом [30] или [31], где среднее количество конъюгированных единиц выбранной одной лекарственное средство-линкер структуры в расчете на антитело находится в пределах от 3 до 8.
[35] Конъюгат антитело-лекарственное средство, полученный способом получения в соответствии с любым из пунктов [30]-[34].
[0033]
[36] Конъюгат антитело-лекарственное средство, полученный путем образования тиоэфирной связи на участке сульфидной связи в шарнирной части анти-TROP2 антитела, где анти-TROP2 антитело обрабатывают в восстановительных условиях и затем подвергают взаимодействию с соединением, выбранным из следующей группы:
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX), и
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX).
[0034]
В перечисленных выше, (малеимид-N-ил)- представляет собой группу, представленную следующей формулой:
[Формула 12]
где атом азота представляет собой положение связывания.
-(NH-DX) представляет собой группу, представленную следующей формулой:
[Формула 13]
где атом азота амино группы в положении 1 представляет собой положение связывания.
-GGFG- представляет собой тетрапептидный остаток -Gly-Gly-Phe-Gly-.
[0035]
[37] Конъюгат антитело-лекарственное средство, полученный путем образования тиоэфирной связи на участке сульфидной связи, присутствующей в шарнирной части анти-TROP2 антитела, где анти-TROP2 антитело обрабатывают в восстановительных условиях и затем подвергают взаимодействию с соединением, выбранным из следующей группы:
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX), и
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX).
Здесь, (малеимид-N-ил)-, -(NH-DX) и -GGFG- являются такими, как определено выше.
[0036]
[38] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с пунктом [36] или [37], где среднее количество конъюгированных единиц выбранной одной лекарственное средство-линкер структуры в расчете на антитело находится в пределах от 1 до 10.
[39] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с пунктом [36] или [37], где среднее количество конъюгированных единиц выбранной одной лекарственное средство-линкер структуры в расчете на антитело находится в пределах от 2 до 8.
[40] Конъюгат антитело-лекарственное средство в соответствии с пунктом [36] или [37], где среднее количество конъюгированных единиц выбранной одной лекарственное средство-линкер структуры в расчете на антитело находится в пределах от 3 до 8.
ВЫГОДНЫЕ ЭФФЕКТЫ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0037]
С использованием конъюгата анти-TROP2 антитело-лекарственное средство, содержащего противоопухолевое соединение экзатекан, конъюгированное через линкер с специфической структурой, может достигаться отличный противоопухолевый эффект и безопасность.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ РИСУНКОВ
[0038]
[Фиг. 1] Фиг. 1 показывает нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 7) и аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 8) тяжелой цепи cTINA1 антитела.
[Фиг. 2] Фиг. 2 показывает нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 9) и аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 10) легкой цепи cTINA1 антитела.
[Фиг. 3] Фиг. 3 показывает нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 11) и аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 12) тяжелой цепи hTINA1-H1.
[Фиг. 4] Фиг. 4 показывает нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 13) и аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 14) тяжелой цепи hTINA1-H2.
[Фиг. 5] Фиг. 5 показывает нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 15) и аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 16) тяжелой цепи hTINA1-H3.
[Фиг. 6] Фиг. 6 показывает нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 17) и аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 18) легкой цепи hTINA1-L1.
[Фиг. 7] Фиг. 7 показывает нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 19) и аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 20) легкой цепи hTINA1-L2.
[Фиг. 8] Фиг. 8 показывает нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 21) и аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 22) легкой цепи hTINA1-L3.
[Фиг. 9] Фиг. 9 показывает аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 23) CDRH1 TINA1 антитела, аминокислотую последовательность (SEQ ID NO: 24) его CDRH2, аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 25) его CDRH3, аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 26) его CDRL1, аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 27) его CDRL2 и аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 28) его CDRL3.
[Фиг. 10] Фиг. 10 показывает способность к клеточной интернализации анти-CD9 антитела, анти-CD46 антитела, анти-CD55 антитела, анти-CD59 антитела, анти-CD71 антитела, анти-CD73 антитела, анти-CD147 антитела, анти-CD276 антитела, анти-EpCAM антитела, анти-EGFR антитела и анти-TROP2 антитела (TINA1 антитело).
[Фиг. 11] Фиг. 11 показывает способность к клеточной интернализации анти-CD59 антитела, анти-CD71 антитела, анти-EGFR антитела, анти-EpCAM антитела и анти-TROP2 антитела (TINA1 антитело).
[Фиг. 12] Фиг. 12 показывает способность к клеточной интернализации различных анти-TROP2 антител.
[Фиг. 13] Фиг. 13 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (1), (6) или (12) на клеточную линию колоректального рака человека COLO205, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 14] Фиг. 14 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (1), (6) или (12) на клеточную линию панкреатической аденокарциномы человека BxPC-3, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 15] Фиг. 15 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (1), (6) или (12) на клеточную линию панкреатической аденокарцины человека Capan-1, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 16] Фиг. 16 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (2), (5), (7) или (10) на клеточную линию колоректального рака человека COLO205, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 17] Фиг. 17 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (2), (5), (7) или (10) на клеточную линию панкреатической аденокарциномы человека BxPC-3, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 18] Фиг. 18 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) на клеточную линию колоректального рака человека COLO205, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 19] Фиг. 19 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (3), (4), (8), или (9) на клеточную линию панкреатической аденокарциномы человека BxPC-3, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 20] Фиг. 20 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) на клеточную линию рака яичников человека NIH:OVCAR-3, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 21] Фиг. 21 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) на клеточную линию гастрального рака человека NCI-N87, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 22] Фиг. 22 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) на клеточную линию рака легкого человека NCI-H292, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 23] Фиг. 23 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) на клеточную линию рака горла человека FaDu, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 24] Фиг. 24 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) на клеточную линию панкреатической аденокарциномы человека CFPAC-1, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 25] Фиг. 25 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (8) или (13) на клеточную линию панкреатической аденокарциномы человека CFPAC-1, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 26] Фиг. 26 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (8) или (13) на клеточную линию панкреатической аденокарциномы человека HPAC, подкожно трансплантированную BALB/c-nu/nu мышам.
[Фиг. 27] Фиг. 27 показывает противоопухолевый эффект конъюгата антитело-лекарственное средство (8) или (13) на ткани эзофагеального рака человека, подкожно трансплантированные NOD-scid мышам.
ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ВОПЛОЩЕНИЯ
[0039]
Далее предпочтительные способы осуществления настоящего изобретения будут описаны со ссылкой на рисунки. Варианты воплощения, описанные ниже, представлены как типичные примеры вариантов воплощения настоящего изобретения и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
[0040]
Конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению представляет собой противоопухолевое лекарственное средство, в котором анти-TROP2 антитело конъюгировано с противоопухолевым соединением через линкерную структуру, и подробно описан ниже.
[0041]
[Антитело]
Анти-TROP2 антитело, используемое в конъюгате анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению, может происходить из любых видов, и предпочтительные примеры видов могут включать человека, крыс, мышей и кроликов. В случае, когда оно происходит из вида, отличного от человека, его предпочтительно подвергают химеризации или гуманизации с использованием хорошо известного метода. Антитело по настоящему изобретению может быть поликлональным антителом или моноклональным антителом, и предпочтительно оно является моноклональным антителом.
Анти-TROP2 антитело способно таргетировать опухолевые клетки, то есть обладает способностью распознавания опухолевой клетки, способностью связывания с опухолевой клеткой, свойством интернализации в опухолевой клетке или т.п., и может быть преобразовано в конъюгат антитело-лекарственное средство путем конъюгации с соединением, обладающим противоопухолевой активностью, через линкер.
Связывающую активность антитела против опухолевых клеток можно подтвердить методом проточной цитометрии. Примеры способа для подтверждения интернализации антитела в опухолевых клетках могут включать (1) анализ визуализации антитела, инкорпорированного в клетки, под флуоресцентным микроскопом с использованием вторичного антитела (флуоресцентно меченного), связывающегося с терапевтическим антителом (Cell Death and Differentiation (2008) 15, 751-761), (2) анализ измерения интенсивности флуоресценции, инкорпорированной в клетки, с использованием вторичного антитела (флуоресцентно меченного), связывающегося с терапевтическим антителом (Molecular Biology of the Cell, Vol. 15, 5268-5282, December 2004), или (3) Mab-ZAP анализ с использованием иммунотоксина, связывающегося с терапевтическим антителом, где токсин высвобождается при инкорпорировании в клетки для ингибирования клеточного роста (Bio Techniques 28: 162-165, January 2000). Рекомбинантный комплексный белок на основе каталитической области дифтерийного токсина и G-белка можно использовать в качестве иммунотоксина.
Поскольку лекарственное средство, конъюгированное в конъюгате антитело-лекарственное средство, проявляет противоопухолевый эффект, предпочтительно, но необязательно, чтобы антитело само обладало противоопухолевым эффектом. Для специфического и селективного проявления убивающей клетки активности противоопухолевого соединения, действующего на опухолевые клетки, важно и также предпочтительно, чтобы антитело обладало свойством интернализации для миграции в опухолевые клетки.
[0042]
Анти-TROP2 антитело можно получить с использованием способа, обычно используемого в данной области техники, который включает иммунизацию животных антигенным полипептидом и сбор и очистку антител, продуцируемых in vivo. Происхождение антигена не ограничивается человеческим происхождением, и животных можно иммунизировать антигеном, происходящим из отличного от человека животного, такого как мышь, крыса и т.п. В этом случае, перекрестная реактивность антител, связывающихся с полученным гетерологичным антигеном и человеческими антигенами, может быть испытана для скрининга антитела, применимого для заболевания человека.
Альтернативно, антитело-продуцирующие клетки, которые продуцируют антитела против антигена, сливают с клетками миеломы в соответствии со способом, известным в данной области техники (например, Kohler and Milstein, Nature (1975) 256, p. 495-497; и Kennet, R. ed., Monoclonal Antibodies,, p. 365-367, Plenum Press, N.Y. (1980)), для создания гибридом, из которых, в свою очередь, могут быть получены моноклональные антитела.
Антиген можно получить с использованием генноинженерных методов для получения клеток хозяина, продуцирующих ген, кодирующий антигенный белок. В частности, получают векторы, которые позволяют осуществлять экспрессию гена для такого антигена, и переносят в клетки хозяина так, чтобы экспрессировался этот ген. Антиген, экспрессируемый таким образом, может быть очищен. Антитело также можно получить с использованием способа иммунизации животных описанными выше генноинженерными антиген-экспрессирующими клетками или клеточной линией, экспрессирующей антиген.
Анти-TROP2 антитело можно получить с использованием процедуры, известной в данной области техники.
[0043]
Анти-TROP2 антитело, которое можно использовать в настоящем изобретении, конкретно не ограничивается, и, например, предпочтительно можно использовать антитела, охарактеризованные аминокислотными последовательностями, представленными в Перечне последовательностей в настоящей заявке. Анти-TROP2 антитело, используемое в настоящем изобретении, предпочтительно имеет свойства, описанные ниже.
(1) Антитело, имеющее следующие свойства:
(a) специфически связывается с TROP2 и
(b) обладает активностью интернализации в TROP2-экспрессирующих клетках путем связывания с TROP2.
(2) Антитело в соответствии с (1), где TROP2 представляет собой человеческий TROP2.
(3) Антитело в соответствии с (1) или (2), где антитело содержит CDRH1, включающую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23, CDRH2, включающую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 24, и CDRH3, включающую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25, в качестве определяющих комплементарность областей тяжелой цепи, и CDRL1, включающую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 26, CDRL2, включающую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 27, и CDRL3, включающую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 28, в качестве определяющих комплементарность областей легкой цепи.
(4) Антитело в соответствии с любым из пунктов (1)-(3), где его константная область представляет собой константную область человеческого происхождения.
(5) Антитело в соответствии с любым из пунктов (1)-(4), где антитело представляет собой гуманизированное антитело.
(6) Антитело в соответствии с (5), где антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотую последовательность, выбранную из группы, включающей (a) аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 12, (b) аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 14, (c) аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 16, (d) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% или более высокую гомологию с любой из последовательностей (a) - (c), и (e) аминокислотную последовательность, полученную из любой из последовательностей (a) - (c) путем делеций, замен или добавлений по меньшей мере одной аминокислоты, и вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотую последовательность, выбранную из группы, включающей (f) аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 18, (g) аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 20, (h) аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 22, (i) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% или более высокую гомологию с любой из последовательностей (f)-(h), и (j) аминокислотную последовательность, полученную из любой из последовательностей (f) - (h) путем делеций, замен или добавлений по меньшей мере одной аминокислоты.
(7) Антитело в соответствии с пунктом (6), где антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, выбранные из группы, состоящей из вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 12, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 18, вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 12, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 20, вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 12, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 22, вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 14, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 18, вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 14, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 20, вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 14, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 22, вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 16, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 18, вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 16, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 20, и вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 16, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 22.
(8) Антитело в соответствии с пунктом (7), где антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, выбранные из группы, состоящей из вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 12, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 18, вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 14, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 18, вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 14, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 20, и вариабельной области тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-140 в SEQ ID NO: 16, и вариабельной области легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-129 в SEQ ID NO: 22.
(9) Антитело в соответствии с пунктом (6) или (7), где антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, выбранные из группы, состоящей из тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 18, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 20, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 22, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 18, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 20, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 22, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 18, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 20, и тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 22.
(10) Антитело в соответствии с пунктом (6) или (7), где антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, выбранные из группы, состоящей из тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 20, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 20, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 20, и тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 22.
(11) Антитело в соответствии с пунктом (8), где антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, выбранные из группы, состоящей из тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 18, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 18, тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 20, и тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 20-470 в SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность, описанную в положениях аминокислот 21-234 в SEQ ID NO: 22.
(12) Антитело в соответствии с любым из пунктов (1)-(11), где антитело не содержит лизиновый остаток на карбоксильном конце тяжелой цепи.
(13) Антитело, полученное способом получения антитела в соответствии с любым из пунктов (1)-(12), где способ включает следующие стадии: культивирование клетки хозяина, трансформированной экспрессирующим вектором, содержащим полинуклеотид, кодирующий антитело; и сбор антитела, представляющего интерес, из культур, полученных на предыдущей стадии.
[0044]
Далее будет описано анти-TROP2 антитело, используемое в изобретении.
Термины "рак" и "опухоль", как они используются в настоящей заявке, имеют одинаковое значение.
Термин "ген", как он используется в настоящей заявке, включает не только DNA, но также его мРНК, его кДНК и его кРНК.
Термин "полинуклеотид", как он используется в настоящей заявке, используется с тем же значением, что и нуклеиновая кислота, и также включает ДНК, РНК, зонды, олигонуклеотиды и праймеры.
Термины "полипептид" и "белок", как они используются в настоящей заявке, имеют одинаковое значение.
Термин "клетка", как он используется в настоящей заявке, также включает клетки у отдельного животного и культивируемые клетки.
Термин "TROP2", как он используется в настоящей заявке, имеет такое же значение, как и TROP2 белок.
Термин "CDR", как он используется в настоящей заявке, относится к определяющей комплементарность области (CDR). Известно, что каждая тяжелая и легкая цепь молекулы антитела имеет три определяющие комплементарность области (CDRs). CDR также называют гипервариабельным доменом, и он присутствует в вариабельной области каждой тяжелой и легкой цепи антитела. Он представляет собой сайт, который имеет необычно высокую вариабельность в своей первичной структуре, и существует три отдельных CDR в первичной структуре каждой тяжелой и легкой полипептидной цепи. В настоящем описании, что касается CDRs антитела, CDR тяжелой цепи представлены как CDRH1, CDRH2 и CDRH3 от амино-концевого участка аминокислотной последовательности тяжелой цепи, и CDRs легкой цепи представлены как CDRL1, CDRL2 и CDRL3 от амино-концевого участка аминокислотной последовательности легкой цепи. Эти сайты находятся в непосредственной близости друг к другу в третичной структуре и определяют специфичность в отношении антигена, с которым связывается антитело.
Фраза "гибридизацию осуществляют в жестких условиях", как она используется в настоящей заявке, относится к способу, в котором гибридизацию осуществляют в условиях, в которых идентификация может достигаться путем осуществления гибридизации при 68°C в коммерчески доступном растворе для гибридизации ExpressHyb Hybridization Solution (изготовитель Clontech, Inc.) или путем осуществления гибридизации при 68°C в присутствии 0,7-1,0 M NaCl с использованием фильтра, содержащего иммобилизованную на нем ДНК, с последующим осуществлением промывки при 68°C с использованием 0,1-2 × SSC раствора (1 × SSC раствор состоит из 150 мМ NaCl и 15 мМ цитрата натрия), или в условиях эквивалетных этим.
[0045]
1. TROP2
TROP2 представляет собой член TACSTD семейства, экспрессируемый в трофобластах человека, и представляет собой однопроходный трансмембранный типа 1 мембранный белок, вовлеченный в иммунорезистентность, который является одинаковым для человеческих трофобластов и раковых клеток.
Что касается TROP2 белка для использования в изобретении, TROP2 белок можно непосредственно очистить из TROP2-экспрессирующих клеток человека или отличного от человека млекопитающего (такого как крыса или мышь) и использовать, или можно получить и использовать фракцию клеточных мембран описанных выше клеток. Кроме того, TROP2 можно получить путем его синтеза in vitro или продукции в клетке хозяина генно-инженерным метотом. В генной инженерии, в частности, после того как TROP2 кДНК встраивают в вектор, способный экспрессировать TROP2 кДНК, TROP2 белок можно получить путем его синтеза в растворе, содержащем фермент, субстрат и энергетическое вещество, необходимое для транскрипции и трансляции, или путем экспрессии TROP2 в другой прокариотической или эукариотической трансформированной клетке хозяина. Альтернативно, описанные выше генно-инженерные TROP2-экспрессирующие клетки или клеточную линию, экспрессирующую TROP2, можно использовать в качестве TROP2 белка.
ДНК-последовательность и аминокислотная последовательность TROP2 являются доступными в публичной базе данных и могут быть указаны, например, под номерами доступа NM_002353 и NP_002344 (NCBI).
Кроме того, белок, который состоит из аминокислотной последовательности, где одна или несколько аминокислот заменены, делетированы и/или добавлены в любой из описанных выше аминокислотных последовательностей TROP2, а также обладает биологической активностью эквивалетной активности белка, также включен в TROP2.
TROP2 белок человека включает сигнальную последовательность, состоящую из N-концевых 26 аминокислотных остатков, внеклеточный домен, состоящий из 248 аминокислотных остатков, трансмембранный домен, состоящий из 23 аминокислотных остатков, и внутриклеточный домен, состоящий из 26 аминокислотных остатков.
[0046]
2. Получение анти-TROP2 антитела
Антитело против TROP2 по настоящему изобретению можно получить с использованием способа, обычно используемого в данной области техники, который включает иммунизацию животного при помощи TROP2 или произвольного полипептида, выбранного из аминокислотной последовательности TROP2, и сбор и очистку антитела, продуцируемого in vivo. Биологический вид TROP2, который можно использовать в качестве антигена, не ограничивается человеком, и животное можно иммунизировать при помощи TROP2, происходящим из животного, отличного от человека, такого как мышь или крыса. В этом случае, путем исследования перекрестной реактивности между антителом, связывающимся с полученным гетерологичным TROP2 и человеческим TROP2, можно выбрать антитело, применимое для заболевания человека.
Кроме того, моноклональное антитело можно получить из гибридомы, полученной путем слияния антитело-продуцирующих клеток, которые продуцируют антитело против TROP2, с клетками миеломы в соответствии с известным способом (например, Kohler and Milstein, Nature, (1975) 256, pp. 495-497; Kennet, R. ed., Monoclonal Antobodies, pp. 365-367, Plenum Press, N.Y. (1980)).
TROP2, который можно использовать в качестве антигена, можно получить путем экспрессии TROP2 гена в клетке хозяина методом генной инженерии.
В частности, получают вектор, способный экспрессировать TROP2 ген, и полученным вектором трансфицируют клетку хозяина для экспрессии гена и затем экспрессированный TROP2 очищают.
Альтернативно, описанные выше генно-инженерные TROP2-экспрессирующие клетки или клеточную линию, экспрессирующую TROP2, можно использовать в качестве TROP2 белка. Далее подробно описан способ получения антитела против TROP2.
[0047]
(1) Получение антигена
Примеры антигена для использования для получения анти-TROP2 антитела включают TROP2 или полипептид, состоящий из частичной аминокислотной последовательности, включающей по меньшей мере 6 следующих подряд аминокислот из TROP2, или производное, полученное путем добавления определенной аминокислотной последовательности или носителя.
TROP2 можно очистить непосредственно из опухолевых тканей или опухолевых клеток человека и использовать. Кроме того, TROP2 можно получить путем синтеза in vitro или путем его продуцирования в клетке хозяина генно-инженерным методом.
Что касается генной инженерии, в частности, после того как TROP2 кДНК встраивают в вектор, способный экспрессировать TROP2 кДНК, антиген можно получить путем его синтеза в растворе, содержащем фермент, субстрат и энергетическое вещество, необходимое для транскрипции и трансляции, или путем экспрессии TROP2 в другой прокариотической или эукариотической трансформированной клетке хозяина.
Кроме того, антиген также можно получить в виде секреторного белка путем экспрессии гибридного белка, полученного путем лигирования внеклеточного домена TROP2, который представляет собой мембранный белок, с константной областью антитела в подходящей системе хозяин-вектор.
TROP2 кДНК можно получить, например, при помощи так называемого ПЦР способа, в котором полимеразную цепную реакцию (далее указана как "ПЦР"; см. Saiki, R. K., et al., Science, (1988) 239, pp. 487-489) осуществляют с использованием кДНК библиотеки, экспрессирующей TROP2 кДНК в качестве матрицы, и праймеров, которые специфически амплифицируют TROP2 кДНК.
В качестве примера in vitro синтеза полипептида, например, можно указать, но не ограничиваясь этим, Быструю Систему Трансляции (RTS) изготовитель Roche Diagnostics, Inc.
Примеры прокариотических клеток хозяина включают Escherichia coli и Bacillus subtilis. Для трансформирования клеток хозяина целевым геном, клетки хозяина трансформируют плазмидным вектором, включающим репликон, т.е. точку начала репликации, происходящую из вида, совместимого с хозяином, и регуляторную последовательность. Кроме того, вектор предпочтительно содержит последовательность, способную сообщать фенотипическую селективность трансформированной клетке.
Примеры эукариотических клеток хозяина включают клетки позвоночных, клетки насекомых и клетки дрожжей. В качестве клеток позвоночных, например, часто используют COS клетки обезьян (Gluzman, Y., Cell, (1981) 23, pp. 175-182, ATCC CRL-1650; ATCC: American Type Culture Collection), мышиные фибробласты NIH3T3 (ATCC No. CRL-1658) и дигидрофолатредуктаза-дефицитные штаммы (Urlaub, G. And Chasin, L. A., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1980) 77, pp. 4126-4220) клеток яичников китайского хомячка (CHO клетки; ATCC: CCL-61); и т.п., однако, клетки не ограничиваются этим.
Полученный таким образом трансформант можно культивировать в соответствии со способом, обычно используемым в данной области техники, и путем культивирования трансформанта целевой полипептид продуцируется внутриклеточно или внеклеточно.
Подходящую для культивирования среду сможет выбрать специалист в данной области из различных традиционно используемых сред для культивирования в зависимости от используемых клеток хозяина. Если используют Escherichia coli, например, можно использовать LB среду, дополненную антибиотиком, таким как ампициллин или IPMG, по мере необходимости.
Рекомбинантный белок, продуцируемый трансформантом внутриклеточно или внеклеточно путем такого культивирования, может быть отделен и очищен любым из различных известных способов разделения на основании физического или химического свойства белка.
Конкретные примеры способов включают обработку традиционным агентом осаждения белка, ультрафильтрацию, различные типы жидкостной хроматографии, такие как хроматография на молекулярных ситах (гель-фильтрация), адсорбционная хроматография, ионообменная хроматография и аффинная хроматография, диализ и комбинацию таких способов.
Кроме того, путем присоединения метки из шести гистидиновых остатков к рекомбинантному белку, экспрессию которого осуществляют, белок может быть эффективно очищен на колонке с никелем для аффинной хроматографии. Альтернативно, путем присоединения IgG Fc области к рекомбинантному белку, экспрессию которого осуществляют, белок может быть эффективно очищен на колонке с белком A.
Путем комбинирования описанных выше способов легко можно получить большое количество целевого полипептида с высоким выходом и высокой чистотой.
Описанный выше трансформант как таковой также можно использовать в качестве антигена. Альтернативно, клеточную линию, экспрессирующую TROP2, можно использовать в качестве антигена. Примеры такой клеточной линии могут включать линии рака легких человека NCI-H322, PC14, NCIH-H2122 и LCAM1, линию рака предстательной железы человека PC3, линии панкреатического рака человек BxPC-3, Capan-1 и PK-1, линию рака яичников человека SKOV3 и линию колоректального рака человека COLO205, хотя клеточная линия в соответствии с настоящим изобретением не ограничивается этими клеточными линиями, при условии, что линии экспрессируют TROP2.
[0048]
(2) Получение анти-TROP2 моноклонального антитела
Примеры антитела, специфически связывающегося с TROP2, включают моноклональное антитело, специфически связывающееся с TROP2, и способ получения такого антитела описан ниже.
Получение моноклонального антитела, как правило, требует осуществления следующих рабочих стадий:
(a) очистка биополимера, который можно использовать в качестве антигена, или получение антиген-экспрессирующих клеток;
(b) получение антитело-продуцирующих клеток иммунизацией животного путем введения инъекции антигена, сбор крови, анализ титра антител для определения времени удаления селезенки;
(c) получение клеток миеломы (далее указаны как "миелома");
(d) слияние антитело-продуцирующих клеток с миеломой;
(e) скрининг группы гибридом, продуцирующих желаемое антитело;
(f) разделение гибридом на одноклеточные клоны (клонирование);
(g) необязательно, культивирование гибридомы или выращивание животного с имплантированной гибридомой для получения большого количества моноклонального антитела;
(h) исследование полученного таким образом моноклонального антитела на биологическую активность и специфичность связывания или анализ антитела на свойства в качестве меченого реагента; и т.п.
Далее, способ получения моноклонального антитела, следуя описанным выше стадиям, будет описан подробно, однако, способ не ограничивается этим, и, например, можно использовать антитело-продуцирующие клетки, отличные от клеток селезенки и миеломы.
[0049]
(a) Очистка антигена
В качестве антигена можно использовать TROP2, полученный способом, описанным выше, или его частичный пептид.
Кроме того, мембранную фракцию, полученную из рекомбинантных клеток, экспрессирующих TROP2, или сами рекомбинантные клетки, экспрессирующие TROP2, а также частичный пептид белка по настоящему изобретению, химически синтезированный способом, известным специалистам в данной области, также можно использовать в качестве антигена.
Кроме того, клеточную линию, экспрессирующую TROP2, также можно использовать в качестве антигена.
[0050]
(b) Получение антитело-продуцирующих клеток
Антиген, полученный на стадии (a), смешивают с адъювантом, таким как полный или неполный адъювант Фрейнда, или вспомогательным веществом, таким как алюминия-калия сульфат, и полученную смесь используют в качестве иммуногена для иммунизации экспериментального животного. В альтернативном способе, экспериментальное животное иммунизируют антиген-экспрессирующими клетками в качестве иммуногена. В качестве экспериментального животного можно безбоязненно использовать любое животное, используемое в известном способе получения гибридом. В частности, можно использовать, например, мышь, крысу, козу, овцу, корову, лошадь или т.п. Однако, с точки зрения простоты доступности миеломных клеток для слияния с экстрагированными антитело-продуцирующими клетками, предпочтительно используют мышь или крысу в качестве животного для иммунизации.
Кроме того, штамм мыши или крысы, который можно использовать, конкретно не ограничивается, и в случае мыши, например, можно использовать различные штаммы, такие как A, AKR, BALB/c, BDP, BA, CE, C3H, 57BL, C57BL, C57L, DBA, FL, HTH, HT1, LP, NZB, NZW, RF, R III, SJL, SWR, WB и 129 и т.п., и в случае крысы, можно использовать, например, Wistar, Low, Lewis, Sprague, Dawley, ACI, BN, Fischer и т.п.
Эти мышей и крыс можно получить от компаний-производителей/дистрибьюторов экспериментальных животных, например, CLEA Japan, Inc. и Charles River Laboratories Japan, Inc.
При рассмотрении совместимости слияния с миеломными клетками, описанными ниже, в случае мыши штамм BALB/c, а в случае крысы штаммы Wistar и Low являются особенно предпочтительными в качестве животного для иммунизации.
Кроме того, с учетом антигенной гомологии между человеком и мышью, также предпочтительно использовать мышь, имеющую пониженную биологическую функцию для удаления аутоантител, то есть мышь с аутоиммунным заболеванием.
Возраст такой мыши или крысы на момент иммунизации предпочтительно составляет 5-12 недель, более предпочтительно 6-8 недель.
Для иммунизации животного TROP2 или его рекомбинантом, можно использовать, например, известный способ, описанный подробно, например, в Weir, D. M., Handbook of Experimental Immunology Vol. I. II. III., Blackwell Scientific Publications, Oxford (1987); Kabat, E. A. and Mayer, M. M., Experimental Immunochemistry, Charles C Thomas Publisher Springfield, Illinois (1964) или т.п.
Из этих способов иммунизации конкретный предпочтительный в настоящем изобретении способ представляет собой, например, следующий.
А именно, сначала фракцию мембранного белка, служащего в качестве антигена, или клетки, в которых вызывают экспрессию антигена, внутрикожно или интраперитонеально вводят животному. Однако комбинация обоих путей введения является предпочтительной для повышения эффективности иммунизации, и когда внутрикожное введение осуществляют в первой половине, и интраперитонеальное введение осуществляют в следующей половине или только как последнее введение, эффективность иммунизации особенно повышается.
Схема введения антигена варьируется в зависимости от типа животного, подлежащего иммунизации, индивидуальных особенностей или т.п. Однако, как правило, схема введения, в которой частота введенияя антигена составляет от 3 до 6 раз и интервал дозирования составляет от 2 до 6 недель, является предпочтительной, и более предпочтительной является схема введения, в которой частота введения антигена составляет от 3 до 4 раз и интервал дозирования составляет от 2 до 4 недель.
Кроме того, доза антигена варьируется в зависимости от типа животного, индивидуальных особенностей или т.п., однако, дозу, как правило, устанавливают на уровне 0,05-5 мг, предпочтительно около 0,1-0,5 мг.
Бустер-иммунизацию осуществляют через 1-6 недель, предпочтительно 1-4 недель, более предпочтительно 1-3 недель после введения антигена, описанного выше. Когда иммуноген представляет собой клетки, используют от 1×106 до 1×107 клеток.
Доза антигена на момент времени осуществления бустер-иммунизации варьируется в зависимости от типа или размера животного или т.п., однако, в случае, например, мыши, дозу, как правило, устанавливают на уровне 0,05-5 мг, предпочтительно 0,1-0,5 мг, более предпочтительно около 0,1-0,2 мг. Когда иммуноген представляет собой клетки, используют от 1×106 до 1×107 клеток.
Клетки селезенки или лимфоциты, включая антитело-продуцирующие клетки, асептически выделяют у иммунизированного животного через 1-10 дней, предпочтительно 2-5 дней, более предпочтительно 2-3 дня после бустер-иммунизации. В это время измеряют титр антител, и, если животное, имеющее достаточно повышенный титр антител, используют в качестве источника антитело-продуцирующих клеток, последующую процедуру можно осуществить более эффективно.
Примеры способа измерения титра антител, который можно использовать в настоящем изобретении, включают RIA метод и ELISA метод, но способ не ограничивается этим. Например, если используют ELISA, измерение титра антител в настоящем изобретении можно осуществить в соответствии с процедурами, описанными ниже.
Сначала очищенный или частично очищенный антиген адсорбируют на поверхности твердой фазы, такой как 96-луночный планшет для ELISA, и поверхность твердой фазы, не содержащую никакого адсорбированного антигена, покрывают белком, не связанным с антигеном, таким как бычий сывороточный альбумин (BSA). После промывки поверхности, поверхность приводят в контакт с серийно разведенным образцом (например, мышиная сыворотка) в качестве первичного антитела для обеспечения возможности связывания содержащегося в образце антитела с антигеном.
Затем, в качестве вторичного антитела, добавляют антитело, против мышиного антитела, меченное ферментом, и обеспечивают возможность связывания с мышиным антителом. После промывки добавляют субстрат для фермента и измеряют изменение поглощения, которое происходит из-за проявления цвета, индуцируемого разложением субстрата или т.п., и титр антител рассчитывают на основании полученных показателей.
Выделение антитело-продуцирующих клеток из клеток селезенки или лимфоцитов иммунизированного животного можно осуществить в соответствии с известным способом (например, Kohler et al., Nature (1975), 256, p. 495; Kohler et al., Eur. J. Immunol. (1977), 6, p. 511; Milstein et al., Nature (1977), 266, p. 550; Walsh, Nature (1977), 266, p. 495). Например, в случае клеток селезенки, можно использовать общий способ, в котором антитело-продуцирующие клетки выделяют путем гомогенизации селезенки с получением клеток через фильтрацию с использованием сита из нержавеющей стали и суспендирования клеток в минимальной эссенциальной среде Игла (MEM).
[0051]
(c) Получение миеломных клеткок (далее указаны как "миелома")
Миеломные клетки, которые можно использовать для клеточного слияния, конкретно не ограничиваются, и подходящие клетки можно выбрать из известных клеточных линий. Однако, учитывая удобство, когда гибридому выбирают из слитых клеток, предпочтительно использовать HGPRT (гипоксантин-гуанинфосфорибозилтрансфераза)-дефицитный штамм, процедура выбора которого хорошо известна.
Более конкретно, примеры HGPRT-дефицитного штамма включают X63-Ag8(X63), NS1-ANS/1(NS1), P3X63-Ag8.U1(P3U1), X63-Ag8.653(X63,653), SP2/0-Ag14(SP2/0), MPC11-45.6TG1.7(45.6TG), FO, S149/5XXO и BU.1, выделенные от мышей; 210.RSY3.Ag.1.2.3(Y3), выделенный от крыс; и U266AR(SKO-007), GM1500⋅GTG-A12(GM1500), UC729-6, LICR-LOW-HMy2(HMy2) и 8226AR/NIP4-1(NP41), выделенные от человека. Эти HGPRT-дефицитные штаммы доступны, например, от ATCC или т.п.
Эти клеточные штаммы субкультивируют в подходящей среде, такой как среда с 8-азагуанином (среда, полученная путем добавления 8-азагуанина к RPMI 1640 среде, дополненной глутамином, 2-меркаптоэтанолом, гентамицином и фетальной телячьей сывороткой (далее указана как "FBS")), модифицированная Исковом среда Дульбекко (IMDM) или среда Дульбекко, модифицированная Иглом (DMEM). В этом случае, за 3-4 дня до осуществляния клеточного слияния клетки субкультивируют в нормальной среде (например, ASF104 среда (изготовитель Ajinomoto Co., Ltd.), содержащая 10% FCS) для обеспечения не менее чем 2 × 107 клеток в день слияния клеток.
[0052]
(d) Клеточное слияние
Слияние между антитело-продуцирующими клетками и миеломными клетками можно подходящим образом осуществить в соответствии с известным способом (Weir, D. M. Handbook of Experimental Immunology Vol. I. II. III., Blackwell Scientific Publications, Oxford (1987); Kabat, E. A. and Mayer, M. M., Experimental Immunochemistry, Charles C Thomas Publisher, Springfield, Illinois (1964), etc.) в таких условиях, чтобы процент выживания клеток сильно не уменьшался.
В качестве такого способа можно использовать, например, химический способ, в котором антитело-продуцирующие клетки и миеломные клетки смешивают в растворе, содержащем полимер, такой как полиэтиленгликоль, при высокой концентрации, физический способ с использованием электрической стимуляции или т.п. Из этих способов, конкретный пример химического способа описан ниже.
А именно, в случае, когда используют полиэтиленгликоль в растворе, содержащем полимер при высокой концентрации, антитело-продуцирующие клетки и миеломные клетки смешивают в растворе полиэтиленгликоля, имеющего молекулярную массу 1500-6000, более предпочтительно 2000-4000, при температуре от 30 до 40°C, предпочтительно от 35 до 38°C, в течение 1-10 минут, предпочтительно 5-8 минут.
[0053]
(e) Выбор группы гибридом
Способ выбора гибридом, полученных путем описанного выше клеточного слияния, конкретно не ограничивается. Обычно используют HAT (гипоксантин, аминоптерин, тимидин) способ выбора (Kohler et al., Nature (1975), 256, p. 495; Milstein et al., Nature (1977), 266, p. 550).
Этот способ эффективен, когда гибридомы получены с использованием миеломных клеток HGPRT-дефицитного штамма, которые не могут выживать в присутствии аминоптерина. То есть путем культивирования неслитых клеток и гибридом в HAT среде, дают возможность выжить и пролиферировать только гибридомам, резистентным к аминоптерину.
[0054]
(f) Деление на одноклеточные клоны (клонирование)
В качестве метода клонирования для гибридом можно использовать известный метод, такой как метод с использованием метилцеллюлозы, метод с использованием мягкой агарозы или метод серийных разведений (см., например, Barbara, B. M. and Stanley, M. S.: Selected Methods in Cellular Immunology, W. H. Freeman and Company, San Francisco (1980)). Из этих методов особенно предпочтительным является метод трехмерного культивирования, такой какой метод с использованием метилцеллюлозы. Например, группу гибридом, полученных путем клеточного слияния, суспендируют в метилцеллюлозной среде, такой как ClonaCell-HY Selection Medium D (изготовитель StemCell Technologies, Inc., #03804), и культивируют. Затем образовавшиеся колонии гибридом собирают, таким образом, можно получить моноклональные гибридомы. Собранные соответствующие колонии гибридом культивируют, и гибридому, которую подтверждают как имеющую стабильный титр антител в полученном супернатанте культуры гибридом, выбирают в качестве TROP2 моноклональное антитело-продуцирующего гибридомного штамма.
[0055]
Примеры полученного таким образом гибридомного штамма включают TROP2 гибридому TINA1. В настоящем описании, антитело, продуцируемое TROP2 гибридомой TINA1, указано как "TINA1 антитело" или просто "TINA1".
Вариабельная область тяжелой цепи TINA1 антитела имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2 в Перечне последовательностей. Кроме того, вариабельная область легкой цепи TINA1 антитела имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4 в Перечне последовательностей.
[0056]
(g) Получение моноклонального антитела путем культивирования гибридомы
Путем культивирования выбранной таким образом гибридомы можно осуществить эффективное получение моноклонального антитела. Однако предпочтительно до культивирования осуществить скрининг гибридомы, которая продуцирует целевое моноклональное антитело.
Для такого скрининга можно использовать известный способ.
Измерение титра антител в настоящем изобретении можно осуществить, например, методом ELISA, который объясняется в пункте (b), описанном выше.
Гибридому, полученную способом, описанным выше, можно хранить в замороженном состоянии в жидком азоте или в морозильнике при -80°C или ниже.
После завершения клонирования среду HT заменяют нормальной средой и осуществляют культивирование гибридомы.
Крупномасштабное культивирование осуществляют путем ротации культуры с использованием большого культурального сосуда или путем центрифугирования культуры. Из супернатанта, полученного путем крупномасштабного культивирования, можно получить моноклональное антитело, которое специфически связывается с белком по настоящему изобретению, путем очистки с использованием способа, известного специалистам в данной области, такого как гель-фильтрация.
Кроме того, гибридому вводят путем инъекции в брюшную полость мыши того же штамма, что и гибридома (например, описанного выше BALB/c), или Nu/Nu мыши для пролиферации гибридомы, посредством чего можно получить асциты, содержащие большое количество моноклонального антитела по настоящему изобретению.
В случае, когда гибридому вводят в брюшную полость, если за 3-7 дней до этого вводят минеральное масло, такое как 2,6,10,14-тетраметилпентадекан (пристан), можно получить большее количество асцитов.
Например, предварительно вводят иммуносупрессант путем инъекции в брюшную полость мыши того же штамма, что и гибридома, для инактивации T клеток. Через 20 дней после этого 106-107 клеток гибридомного клона суспендируют в бессывороточной среде (0,5 мл) и суспензию вводят в брюшную полость мыши. Как правило, когда брюшная полость увеличивается и наполняется асцитами, асциты собирают от мыши. Этим способом можно получить моноклональное антитело при концентрации, которая примерно в 100 раз или более выше, чем концентрация в культуральном растворе.
Моноклональное антитело, полученное способом, описанным выше, можно очистить способом, описанным, например, в Weir, D. M., Handbook of Experimental Immunology Vol. I. II. III., Blackwell Scientific Publications, Oxford (1987).
Полученное таким образом моноклональное антитело имеет высокую антиген-специфичность в отношении TROP2.
[0057]
(h) Анализ моноклонального антитела
Изотип и подкласс полученного таким образом моноклонального антитела можно определить следующим образом.
Прежде всего, примеры способа идентификации включают метод Оухтерлони, метод ELISA и метод RIA.
Метод Оухтерлони является простым, но когда концентрация моноклонального антитела является низкой, необходима процедура конденсации.
С другой стороны, когда используют метод ELISA или метод RIA, путем непосредственного взаимодействия культурального супернатанта с антиген-адсорбированной твердой фазой и с использованием антител, соответствующих различным изотипам и подклассам иммуноглобулинов, в качестве вторичных антител, можно идентифицировать изотип и подкласс моноклонального антитела.
Кроме того, в качестве более простого способа также можно использовать коммерчески доступный идентификационный набор (например, Mouse Typer Kit, изготовитель Bio-Rad Laboratories, Inc.) или т.п. Кроме того, количественное определение белка можно осуществить методом Фолина-Лоури и методом расчета на основании поглощения при 280 нм (1,4 (OD 280)=Иммуноглобулин 1 мг/мл).
Кроме того, даже когда моноклональное антитело получают отдельно и независимо путем осуществления снова стадий (a)-(h) в пункте (2), можно получить антитело, обладающее цитотоксической активностью эквивалетной активности TINA1 антитела. В качестве одного примера такого антитела можно указать антитело, которое связывается с тем же эпитопом, что и TINA1 антитело. Если новое полученное моноклональное антитело связывается с частичным пептидом или частичной третичной структурой, с которой связывается TINA1 антитело, можно определить, что моноклональное антитело связывается с тем же эпитопом, что и TINA1 антитело. Кроме того, путем подтверждения, что моноклональное антитело конкурирует с TINA1 антителом за связывание с TROP2 (то есть моноклональное антитело ингибирует связывание между TINA1 антителом и TROP2), можно определить, что моноклональное антитело связывается с тем же эпитопом, что и анти-TROP2 антитело, даже если специфическая последовательность эпитопа или структура не определена. Когда подтверждают, что моноклональное антитело связывается с тем же эпитопом, что и анти-TROP2 антитело, можно с уверенностью ожидать, что моноклональное антитело обладает аффинностью связывания с антигеном и биологической активностью, эквивалетной активности TINA1 антитела.
[0058]
(3) Другие антитела
Антитело по настоящему изобретению включает не только описанное выше моноклональное антитело против TROP2, но также рекомбинантное антитело, полученное путем искусственной модификации в целях снижения гетерологичной антигенности для человека, такое как химерное антитело, гуманизированное антитело и человеческое антитело. Эти антитела можно получить с использованием известного способа.
В качестве химерного антитела, можно указать в качестве примера антитело, в котором вариабельная и константная области антитела происходят из разных видов, например, химерное антитело в котором происходящая из мыши или крысы вариабельная область антитела связана с имеющей человеческое происхождение константной областью антитела (см. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 6851-6855, (1984)).
В качестве гуманизированного антитела, можно указать в качестве примера антитело, полученное путем интегрирования только определяющей комплементарность области (CDR) в антитело человеческого происхождения (см. Nature (1986) 321, pp. 522-525), и антитело, полученное путем прививки части аминокислотных остатков каркаса, а также CDR последовательности к человеческому антителу методом CDR-прививки (Международная публикация № WO 90/07861).
Однако гуманизированное антитело, полученное из TINA1 антитела, не ограничивается конкретным гуманизированным антителом, при условии, что гуманизированное антитело имеет все 6 типов CDR последовательностей TINA1 антитела. Вариабельная область тяжелой цепи TINA1 антитела содержит CDRH1 (TAGMQ), состоящую из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 23 в Перечне последовательностей, CDRH2 (WINTHSGVPKYAEDFKG), состоящую из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 24 в Перечне последовательностей, и CDRH3 (SGFGSSYWYFDV), состоящую из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 25 в Перечне последовательностей. Кроме того, вариабельная область легкой цепи TINA1 антитела содержит CDRL1 (KASQDVSTAVA), состоящую из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 26 в Перечне последовательностей, CDRL2 (SASYRYT), состоящую из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 27 в Перечне последовательностей, и CDRL3 (QQHYITPLT), состоящую из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 28 в Перечне последовательностей.
[0059]
В качестве примера гуманизированного антитела мышиного антитела TINA1, можно указать произвольную комбинацию тяжелой цепи, включающую вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из любой из (1) аминокислотной последовательности, состоящей из аминокислотных остатков 20-140 SEQ ID NO: 12, 14 или 16 в Перечне последовательностей, (2) аминокислотной последовательности, имеющей гомологию по меньшей мере 95% или более с аминокислотной последовательностью (1), описанной выше, и (3) аминокислотной последовательности, где одна или несколько аминокислот в аминокислотной последовательности (1), описанной выше, делетированы, заменены или добавлены, и легкой цепи, включающей вариабельную область легкой цепи, состоящую из любой из (4) аминокислотной последовательности, состоящей из аминокислотных остатков 21-129 SEQ ID NO: 18, 20 или 22 в Перечне последовательностей, (5) аминокислотной последовательности, имеющей гомологию по меньшей мере 95% или более с аминокислотной последовательностью (4), описанной выше, и (6) аминокислотной последовательности, где одна или несколько аминокислот в аминокислотной последовательности (4), описанной выше, делетированы, заменены или добавлены.
Термин "несколько", как он используется в настоящей заявке, относится к 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3 или 1 или 2.
[0060]
В качестве аминокислотнной замены в настоящем описании, консервативная аминокислотная замена является предпочтительной. Консервативная аминокислотная замена относится к замене, происходящей в группе аминокислот, относящихся к боковым цепям аминокислот. Предпочтительными аминокислотными группами являются следующие: кислотная группа (аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота); оснóвная группа (лизин, аргинин и гистидин); не-полярная группа (аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин и триптофан); и незаряженное полярное семейство (глицин, аспарагин, глутамин, цистеин, серин, треонин и тирозин). Более предпочтительные аминокислотные группы представляют собой следующие: алифатическая гидрокси группа (серин и треонин); амид-содержащая группа (аспарагин и глутамин); алифатическая группа (аланин, валин, лейцин и изолейцин); и ароматическая группа (фенилаланин, триптофан и тирозин). Такую аминокислотную замену предпочтительно осуществляют в пределах, которые не ухудшают свойства вещества, имеющего исходную аминокислотную последовательность.
[0061]
В качестве антитела, которое имеет предпочтительную комбинацию тяжелой цепи и легкой цепи, описанную выше, можно указать в качестве примера антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-140 SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-129 SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-140 SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-129 SEQ ID NO: 20; антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-140 SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-129 SEQ ID NO: 22; антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-140 SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-129 SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-140 SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-129 SEQ ID NO: 20; антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-140 SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-129 SEQ ID NO: 22; антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-140 SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-129 SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-140 SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-129 SEQ ID NO: 20; и антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-140 SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-129 SEQ ID NO: 22.
[0062]
Кроме того, в качестве антитела, которое имеет более предпочтительную комбинацию тяжелой цепи и легкой цепи, описанную выше, можно указать в качестве примера антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 20; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 22; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 20; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 22; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 20; и антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 22.
[0063]
В качестве антитела, которое имеет наиболее предпочтительную комбинацию тяжелой цепи и легкой цепи, описанную выше, можно указать в качестве примера антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из аминокислотных остатков 20-140 SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из аминокислотных остатков 21-129 SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из аминокислотных остатков 20-140 SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из аминокислотных остатков 21-129 SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из аминокислотных остатков 20-140 SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из аминокислотных остатков 21-129 SEQ ID NO: 20; и антитело, состоящее из тяжелой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из аминокислотных остатков 20-140 SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, включающей вариабельную область, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из аминокислотных остатков 21-129 SEQ ID NO: 22.
[0064]
Кроме того, в качестве антитела, которое имеет другую более предпочтительную комбинацию тяжелой цепи и легкой цепи, описанную выше, можно указать в качестве примера антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 22; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 22; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20; и антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 22.
[0065]
В качестве антитела, которое имеет еще более предпочтительную комбинацию тяжелой цепи и легкой цепи, описанную выше, можно указать в качестве примера антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 20; и антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-470 SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 22.
[0066]
Кроме того, в качестве антитела, которое имеет даже еще более предпочтительную комбинацию тяжелой цепи и легкой цепи, описанную выше, можно указать в качестве примера антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-469 SEQ ID NO: 12, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-469 SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 18; антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-469 SEQ ID NO: 14, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 20; и антитело, состоящее из тяжелой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 20-469 SEQ ID NO: 16, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности, состоящей из положений аминокислот 21-234 SEQ ID NO: 22.
[0067]
Путем комбинирования последовательности, имеющей высокую гомологию с описанной выше аминокислотной последовательностью тяжелой цепи, с последовательностью, имеющей высокую гомологию с описанной выше аминокислотной последовательностью легкой цепи, можно выбрать антитело, обладающее биологической активностью, эквивалетной активности каждого из описанных выше антител. Такая гомология представляет собой, как правило, гомологию 80% или более, предпочтительно гомологию 90% или более, более предпочтительно гомологию 95% или более, наиболее предпочтительно гомологию 99% или более. Кроме того, путем комбинирования аминокислотной последовательности, где от одного до нескольких аминокислотных остатков заменены, делетированы или добавлены в аминокислотной последовательности тяжелой цепи или легкой цепи, также можно выбрать антитело, обладающее биологической активностью, эквивалетной активности каждого из описанных выше антител.
[0068]
Гомологию между двумя аминокислотными последовательностями можно определить с использованием параметров по умолчанию Blast алгоритма, версия 2.2.2 (Altschul, Stephen F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaeffer, Jinghui Zhang, Zheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997), "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402). Blast алгоритм можно использовать также через интернет с доступом к сайту www.ncbi.nlm.nih.gov/blast.
[0069]
В аминокислотной последовательности тяжелой цепи, представленной в SEQ ID NO: 12, 14 или 16 в Перечне последовательностей, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 1-19, представляет собой сигнальную последовательность, аминокислотая последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 20-140, представляет собой вариабельную область, и аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 141-470, представляет собой константную область. Последовательности SEQ ID NO: 12, 14 и 16 показаны на Фиг. 3, 4 и 5, соответственно.
Кроме того, в аминокислотной последовательности легкой цепи, представленной в SEQ ID NO: 18, 20 или 22 в Перечне последовательностей, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 1-20, представляет собой сигнальную последовательность, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 21-129, представляет собой вариабельную область, и аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 130-234, представляет собой константную область. Последовательности SEQ ID NO: 18, 20 и 22 показаны на Фиг. 6, 7 и 8, соответственно.
[0070]
Кроме того, антитело по настоящему изобретению включает человеческое антитело, которое связывается с TROP2. Анти-TROP2 человеческое антитело относится к человеческому антителу, содержащему только последовательность антитела, происходящую из хромосомы человека. Анти-TROP2 человеческое антитело можно получить способом с использованием мыши, продуцирующей человеческое антитело, имеющее фрагмент хромосомы человека, включающий гены тяжелой и легкой цепи человеческого антитела (см. Tomizuka, K. et al., Nature Genetics (1997) 16, pp. 133-143; Kuroiwa, Y. et al., Nucl. Acids Res. (1998) 26, pp. 3447-3448; Yoshida, H. et al., Animal Cell Technology: Basic and Applied Aspects vol. 10, pp. 69-73 (Kitagawa, Y., Matuda, T. and Iijima, S. eds.), Kluwer Academic Publishers, 1999; Tomizuka, K. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000) 97, pp. 722-727, etc.).
[0071]
Такую продуцирующую человеческое антитело мышь можно создать, в частности, следующим способом. Создают генетически модифицированное животное, у которого локусы эндогенных генов тяжелой и легкой цепи иммуноглобулина были разорваны и вместо этого были вставлены локусы генов тяжелой и легкой цепи человеческого иммуноглобулина через вектор, представляющий собой искусственную дрожжевую хромосому (YAC) или т.п., путем получения нокаут-животного и трансгенного животного и спаривания этих животных.
Кроме того, в соответствии с методом рекомбинантной ДНК, путем использования кДНК, кодирующих каждую из таких тяжелой цепи и легкой цепи человеческого антитела, и предпочтительно вектора, включающего такие кДНК, эукариотные клетки трансформируют и трансформированную клетку, которая продуцирует рекомбинантное человеческое моноклональное антитело, культивируют, посредством чего антитело также может быть получено из культурального супернатанта.
Здесь, в качестве хозяина можно использовать, например, эукариотные клетки, предпочтительно клетки млекопитающего, такие как CHO клетки, лимфоциты или миеломные клетки.
[0072]
Кроме того, также известен способ получения человеческого антитела с применением фагового дисплея, которое выбрано из библиотеки человеческих антител (см. Wormstone, I. M. et al., Investigative Ophthalmology & Visual Science. (2002) 43 (7), pp. 2301-2308; Carmen, S. et al., Briefings in Functional Genomics and Proteomics (2002), 1 (2), pp. 189-203; Siriwardena, D. et al., Ophthalmology (2002) 109 (3), pp. 427-431, etc.).
Например, можно использовать способ с применением фагового дисплея, в котором вариабельная область человеческого антитела экспрессируется на поверхности фага в виде одноцепочечного антитела (scFv), и можно выбрать фаг, который связывается с антигеном (Nature Biotechnology (2005), 23, (9), pp. 1105-1116).
Путем анализа гена фага, выбранного на основании связывания с антигеном, можно определить последовательность ДНК, кодирующую вариабельную область человеческого антитела, которое связывается с антигеном.
Если определена ДНК-последовательность scFv, которое связывается с антигеном, человеческое антитело можно получить путем получения вектора экспрессии, включающего эту последовательность, и введения вектора подходящему хозяину для ее экспрессии (Международная публикация № WO 92/01047, WO 92/20791, WO 93/06213, WO 93/11236, WO 93/19172, WO 95/01438, WO 95/15388; Annu. Rev. Immunol. (1994) 12, pp. 433-455; Nature Biotechnology (2005) 23 (9), pp. 1105-1116).
Если полученное таким образом человеческое антитело связывается с частичным пептидом или частичной третичной структурой, с которыми связывается TINA1 антитело, можно определить, что человеческое антитело связывается с тем же эпитопом, что и TINA1 антитело. Кроме того, путем подтверждения, что человеческое антитело конкурирует с TINA1 антителом за связывание с TROP2 (то есть человеческое антитело ингибирует связывание между TINA1 антителом и TROP2), можно определить, что человеческое антитело связывается с тем же эпитопом, что и TINA1 антитело, даже если специфическая последовательность или структура эпитопа не была определена. Когда подтверждают, что человеческое антитело связывается с тем же эпитопом, что и TINA1 антитело, можно с уверенностью ожидать, что человеческое антитело обладает биологической активностью, эквивалетной активности TINA1 антитела.
Химерные антитела, гуманизированные антитела или человеческие антитела, полученные способом, описанным выше, оценивают на свойство связывания с антигеном известным способом или т.п., и можно выбрать предпочтительное антитело.
[0073]
В качестве одного примера другого критерия для использования в сравнении свойств антител, можно указать стабильность антител. Дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК) представляет собой инструмент для быстрого и точного измерения средней температуры термической денатурации (Tm), которую можно использовать в качестве подходящего показателя относительной конформационной стабильности белков. Путем измерения Tm значений с использованием ДСК и сравнения значений можно определить разницу в термостабильности. Известно, что стабильность при хранении антител показывает некоторую корреляцию с термостабильностью антител (Lori Burton, et. al., Pharmaceutical Development and Technology (2007) 12, pp. 265-273), и предпочтительное антитело можно выбрать с использованием термостабильности в качестве критерия оценки. Примеры других критериев для выбора антитела включают следующие: выход в подходящей клетке хозяина является ввысоким; и агрегируемость в водном растворе является низкой. Например, антитело, которое показывает самый высокий выход, не всегда демонстрирует самую высокую термостабильность, и поэтому необходимо выбрать антитело, наиболее подходящее для введения человеку, путем осуществления всесторонней оценки на основании описанных выше критериев.
[0074]
В настоящее изобретение также включен модифицированный вариант антитела. Модифицированный вариант относится к варианту, который получают подвергая антитело по настоящему изобретению химической или биологической модификации. Примеры химически модифицированного варианта включают варианты, химически модифицированные путем связывания химической группы с аминокислотным скелетом, варианты, химически модифицированные N-связанной или O-связанной углеводной цепью, и т.д. Примеры биологически модифицированного варианта включают варианты, полученные путем посттрансляционной модификации (такие как N-связанное или O-связанное гликозилирование, N- или C-концевой процессинг, де-амидирование, изомеризация аспарагиновой кислоты или окисление метионина), и варианты, в которых метиониновый остаток был добавлен к N концу путем экспрессии в прокариотической клетке хозяина.
Кроме того, антитело, меченное таким образом, чтобы обеспечить детекцию или выделение антитела или антигена по настоящему изобретению, например, фермент-меченное антитело, флуоресцентно-меченное антитело и аффинно-меченное антитело, также включены в значение модифицированного варианта. Такой модифицированный вариант антитела по настоящему изобретению является полезным для улучшения стабильности и удержания в кровотоке антитела, снижения его антигенности, детекции или выделения антитела или антигена и т.д.
[0075]
Кроме того, регулируя модификацию гликана, который связывают с антителом по настоящему изобретению (гликозилирование, дефукозилирование и т.д.), можно повысить антитело-зависимую клеточную цитотоксическую активность. Способ регулирования модификации гликана антител известен из Международной публикации № WO 1999/54342, WO 2000/61739, WO 2002/31140 и т.д. Однако способ не ограничивается этим. Антитело по настоящему изобретению также включает антитело, в котором модификация гликана регулируется.
В случае, когда антитело получают, выделяя сначала ген антитела, и затем вводят этот ген подходящему хозяину, можно использовать комбинацию подходящего хозяина и подходящего экспрессирующего вектора. Конкретные примеры гена антитела включают комбинацию гена, кодирующего последовательность тяжелой цепи антитела, описанного в настоящем описании, и гена, кодирующего последовательность его легкой цепи. Когда трансформируют клетку хозяина, можно вставить последовательность гена тяжелой цепи и последовательность гена легкой цепи в один и тот же экспрессирующий вектор, а также в разные экспрессирующие векторы отдельно.
В случае, когда используют эукариотные клетки в качестве хозяина, можно использовать животные клетки, растительные клетки и эукариотные микроорганизмы. В качестве примера животных клеток можно указать клетки млекопитающих, например, обезьяньи COS клетки (Gluzman, Y., Cell, (1981) 23, pp. 175-182, ATCC CRL-1650), мышиные фибробласты NIH3T3 (ATCC No. CRL-1658) и дигидрофолатредуктаза-дефицитные штаммы (Urlaub, G. and Chasin, L. A., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1980) 77, pp. 4126-4220) клеток яичников китайского хомячка (CHO клетки; ATCC: CCL-61).
В случае, когда используют прокариотические клетки, например, Escherichia coli и Bacillus subtilis можно указать в качестве примера.
Путем введения гена желаемого антитела в эти клетки через трансформацию и культивирования трансформированных таким образом клеток in vitro можно получить антитело. В описанном выше способе культивирования, выход может иногда варьировать в зависимости от последовательности антитела, и поэтому из антител, обладающих эквивалетной активностью связывания, используя выход в качестве критерия оценки, можно выбрать антитело, которое легко можно получить в качестве фармацевтического средства. Поэтому в антитело по настоящему изобретению, также включено антитело, полученное способом получения антитела, отличающимся тем, что он включает стадию культивирования трансформированной клетки хозяина и стадию сбора желаемого антитела из культивированного продукта, полученного на стадии культивирования.
[0076]
Известно, что лизиновый остаток на карбоксильном конце тяжелой цепи антитела, которое продуцируется в культивированной клетке млекопитающего, делетирован (Journal of Chromatography A, 705: 129-134 (1995)), и также известно, что два аминокислотных остатка (глицин и лизин) на карбоксильном конце тяжелой цепи антитела, которое продуцируется в культивированной клетке млекопитающего, делетированы, и новый пролиновый остаток на карбоксильном конце амидирован (Analytical Biochemistry, 360: 75-83 (2007)). Однако такая делеция и модификация последовательности тяжелой цепи не влияют на аффинность связывания с антигеном и эффекторную функцию (активация комплемента, антитело-зависимая клеточная цитотоксичность и т.д.) антитела. Поэтому в антитело в соответствии с настоящим изобретением также включено антитело, подвергаемое такой модификации, и функциональный фрагмент антитела, а также охватываются делеционный вариант, в котором одна или две аминокислоты делетированы на карбоксильном конце тяжелой цепи, вариант, полученный амидированием делеционного варианта (например, тяжелая цепь, в которой карбокси-концевой пролиновый остаток амидирован), и т.п. Тип делеционного варианта, включающий делецию на карбоксильном конце тяжелой цепи антитела в соответствии с изобретением не ограничивается описанными выше вариантами, при условии, что аффинность связывания с антигеном и эффекторная функция сохраняются. Две тяжелых цепи антитела в соответствии с изобретением могут быть одного типа, выбранного из группы, состоящей из полноразмерной тяжелой цепи и описанного выше делеционного варианта, или могут быть двух типов в комбинации, выбранной из них. На отношение количества каждого делеционного варианта может влиять тип культивируемых клеток млекопитающего, которые продуцируют антитело в соответствии с изобретением, и условия культивирования, однако, в качестве примера можно указать случай, где один аминокислотный остаток на карбоксильном конце делетирован в каждой из двух тяжелых цепей, содержащихся в качестве основных компонентов в антителе в соответствии с изобретением.
[0077]
В качестве примера изотипа антитела по настоящему изобретению, например, можно указать IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), предпочтительным примером является IgG1 или IgG2.
[0078]
В качестве примера биологической активности антитела, в основном, можно указать антиген-связывающую активность, активность интернализации в клетках, экспрессирующих антиген, путем связывания с антигеном, действие, нейтрализующее активность антигена, действие, повышающее активность антигена, антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC), комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC) и антитело-зависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз (ADCP). Функцией антитела по настоящему изобретению является активность связывания с TROP2, предпочтительно активность интернализации в TROP2-экспрессирующих клетках путем связывания с TROP2. Кроме того, антитело по настоящему изобретению может обладать ADCC активностью, CDC активностью и/или ADCP активностью, помимо активности интернализации в клетках.
[0079]
Полученное антитело можно очистить до гомогенности. Выделение и очистку антитела можно осуществить с использованием традиционного метода разделения и очистки белков. Например, антитело можно выделить и очистить путем подходящего выбора и сочетания колоночной хроматографии, фильтрации, ультрафильтраци, осаждения солей, диализа, препаративного электрофореза на полиакриламидном геле, электрофореза с изоэлектрическим фокусированием и т.п. (Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual, Daniel R. Marshak et al. eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1996); Antibodies: A Laboratory Manual. Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)), но способ не ограничивается этим.
Примеры такой хроматографии включают аффинную хроматографию, ионообменную хроматографию, гидрофобную хроматографию, гель-фильтрационную хроматографию, обращенно-фазовую хроматографию и адсорбционную хроматографию.
Такую хроматографию можно осуществить с использованием жидкостной хроматографии, такой как высоко-эффективная жидкостная хроматография или жидкостная хроматография быстрого разрешения.
В качестве примера колонки для использования в аффинной хроматографии, можно указать колонку с Белком A и колонку с Белком G. Например, использование колонки с Белком A, Hyper D, POROS, Сефарозой FF (Pharmacia) и т.п. можно указать в качестве примера.
Кроме того, используя носитель, содержащий иммобилизованный на нем антиген, антитело также можно очистить с использованием свойства связывания антитела с антигеном.
[0080]
[Противоопухолевое соединение]
Раскрывается противоопухолевое соединение, которое используют в конъюгате анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению. Противоопухолевое соединение, используемое в настоящем изобретении, конкретно не ограничивается, если оно представляет собой соединение, обладающее противоопухолевым эффектом и содержащее группу заместителя или частичную структуру, обеспечивающую возможность связывания с линкерной структурой. Когда часть или весь линкер расщепляется в опухолевых клетках, группа противоопухолевого соединения высвобождается для проявления противоопухолевого эффекта противоопухолевого соединения. Поскольку линкер отщепляется в положении связывания с лекарственным средством, противоопухолевое соединение высвобождается в его немодифицированной структуре для проявления присущего ему противоопухолевого эффекта.
В качестве противоопухолевого соединения, используемого в настоящем изобретении, предпочтительно можно использовать экзатекан (((1S,9S)-1-амино-9-этил-5-фтор-2,3-дигидро-9-гидрокси-4-метил-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-10,13(9H,15H)-дион; показан в представленной ниже формуле), одно из производных камптотецина.
[0081]
[Формула 14]
[0082]
Хотя он обладает отличным противоопухолевым эффектом, экзатекан не является коммерческим продуктом, поставляемым на рынок в качестве противоопухолевого лекарственного средства. Соединение легко можно получить известным способом, и амино группу в положении 1 предпочтительно можно использовать в качестве положения связывания с линкерной структурой. Кроме того, хотя экзатекан также может высвобождаться в опухолевых клетках в то время, как часть линкера все еще присоединена к нему, он представляет собой отличное соединение, демонстрирующее отличный противоопухолевый эффект даже в такой структуре.
Поскольку экзатекан имеет структуру камптотецина, известно, что равновесие сдвигается к структуре с замкнутым лактоновым кольцом (замкнутое кольцо) в кислой водной среде (например, pH 3 или подобный), но оно сдвигается к структуре с открытым лактоновым кольцом (раскрытое кольцо) в водно-щелочной среде (например, pH 10 или подобный). Конъюгат лекарственного средства с введенным экзатекановым остатком, соответствующим структуре с замкнутым кольцом и структуре с раскрытым кольцом, как ожидают, также будет иметь такой же противоопухолевый эффект, и само собой разумеется, что любое из этих состояний охватывается объемом настоящего изобретения.
[0083]
Другие примеры противоопухолевого соединения могут включать доксорубицин, даунорубицин, митомицин C, блеомицин, циклоцитидин, винкристин, винбластин, метотрексат, противоопухолевое средство на основе платины (цисплатин или его производные), таксол или его производные и камптотецин или его производные (противоопухолевое средство, описанное в Японской выложенной патентной заявке № 6-87746).
[0084]
Что касается конъюгата антитело-лекарственное средство, количество конъюгированных молекул лекарственного средства на молекулу антитела является ключевым фактором, влияющим на эффективность и безопасность. Получение конъюгата антитело-лекарственное средство осуществляют путем определения реакционных условий, включая количество используемого сырья и реагентов для реакции, чтобы иметь постоянное количество конъюгированных молекул лекарственного средства, и конъюгат антитело-лекарственное средство, как правило, получают в виде смеси, содержащей разные количества конъюгированных молекул лекарственного средства, в отличие от химической реакции низкомолекулярного соединения. Количество молекул лекарственного средства, конъюгированных в молекуле антитела, выражают или охарактеризовывают средним значением, то есть средним количеством конъюгированных молекул лекарственного средства. Если специально не указано иное в качестве принципа, количество конъюгированных молекул лекарственного средства означает среднюю величину, за исключением случая конъюгата антитело-лекарственное средство, имеющего определенное количество конъюгированных молекул лекарственного средства, который включен в смесь конъюгатов антитело-лекарственное средство, имеющих разное количество конъюгированных молекул лекарственного средства. Количество молекул экзатекана, конъюгированных с молекулой антитела, является контролируемым, и в качестве среднего количества конъюгированных молекул лекарственного средства на антитело можно присоединить примерно от 1 до 10 молекул экзатекана. Предпочтительно от 2 до 8, и более предпочтительно от 3 до 8 молекул. В то же время, специалист в данной области сможет рассчитать реакцию для конъюгирования необходимого количества молекул лекарственного средства с молекулой антитела на основании описания Примеров настоящей заявки и сможет получить конъюгат антитело-лекарственное средство с контролируемым количеством молекул экзатекана.
[0085]
[Линкерная структура]
Что касается конъюгата анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению, далее раскрывается линкерная структура для конъюгирования противоопухолевого соединения с анти-TROP2 антителом. Линкер имеет структуру следующей формулы:
-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-
Антитело связывается с концевой частью L1 (конец противоположный связыванию с L2), и противоопухолевое соединение связывается с карбонильной группой -La-(CH2)n2-C(=O)-.
n1 представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 6, и предпочтительно представляет собой целое число, имеющее значение от 1 до 5, и более предпочтительно 1-3.
[0086]
1. L1
L1 представлен следующей структурой
-(Сукцинимид-3-ил-N)-(CH2)n3-C(=O)-.
В представленной выше структуре, n3 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 8, и "-(Сукцинимид-3-ил-N)-" имеет структуру, представленную следующей формулой:
[0087]
[Формула 15]
[0088]
Положение 3 представленной выше частичной структуры представляет собой положение связывания с анти-TROP2 антителом. Связь с анти-TROP2 антителом в положении 3 характеризуется связыванием с образованием тиоэфира. Атом азота в положении 1 структурного элемента связан с атомом углерода метилена, который присутствует линкере, включающем эту структуру. В частности, -(Сукцинимид-3-ил-N)-(CH2)n3-C(=O)-L2- представляет собой структуру, представленную следующей формулой (здесь, "антитело-S-" происходит из антитела).
[0089]
[Формула 16]
[0090]
В формуле, n3 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 8, и предпочтительно от 2 до 5.
[0091]
Конкретные примеры L1 могут включать
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-.
[0092]
2. L2
L2 представляет собой линкер, представленный следующей структурой:
-NH-(CH2CH2-O)n4-CH2CH2-C(=O)-,
L2 может не присутствовать, и в таком случае L2 представляет собой простую связь. В структуре выше, n4 представляет собой целое число, имеющее значение от 1 до 6, и предпочтительно от 2 до 4. L2 связан с L1 по его концевой амино группе и связан с LP по его карбонильной группе на другом конце.
[0093]
Конкретные примеры L2 могут включать
-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-.
[0094]
3. LP
LP представляет собой пептидный остаток, состоящий из 2-7 аминокислот. В частности, он состоит из олигопептидного кАтатка, в котором от 2 до 7 аминокислот связаны пептидной связью. LP связан с L2 по его N концу и связан с амино группой -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)- фрагмента линкера по его C концу.
[0095]
Аминокислота, содержащаяся в LP группе в линкере конкретно не ограничивается, однако, ее примеры включают L- или D-аминокислоту, предпочтительно L-аминокислоту. И это может быть аминокислота, имеющая структуру, такую как β-аланин, ε-аминокапроновая кислота или γ-аминомасляная кислота, в добавление к α-аминокислоте, кроме того, это может быть аминокислота не-природного типа, такая как N-метилированная аминокислота.
Аминокислотная последовательность LP конкретно не ограничивается, но примеры содержащейся в ней аминокислоты включают фенилаланин (Phe; F), тирозин (Tyr; Y), лейцин (Leu; L), глицин (Gly; G), аланин (Ala; A), валин (Val; V), лизин (Lys; K), цитруллин (Cit), серин (Ser; S), глутаминовую кислоту (Glu; E) и аспарагиновую кислоту (Asp; D).
Среди них, предпочтительные примеры включают фенилаланин, глицин, валин, лизин, цитруллин, серин, глутаминовую кислоту и аспарагиновую кислоту. В зависимости от типа аминокислоты, можно контролировать картину высвобождения лекарственного средства. Количество аминокислот может быть от 2 до 7.
[0096]
Конкретные примеры LP могут включать
-GGF-,
-DGGF-,
-(D-)D-GGF-,
-EGGF-,
-GGFG-,
-SGGF-,
-KGGF-,
-DGGFG-,
-GGFGG-,
-DDGGFG-,
-KDGGFG-,
-GGFGGGF-.
В перечисленных выше, "(D-)D" представляет собой D-аспарагиновую кислоту.
Особенно предпочтительные примеры LP для конъюгата антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению могут включать тетрапептидный остаток -GGFG-.
[0097]
4. La-(CH2)n2-C(=O)-
La в La-(CH2)n2-C(=O)- представляет собой структуру -O- или простую связь. n2 представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 5, более предпочтительно от 0 до 3, более предпочтительно 0 или 1.
Примеры La-(CH2)n2-C(=O)- могут включать группы, имеющие следующие структуры:
-O-CH2-C(=O)-,
-O-CH2CH2-C(=O)-,
-O-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-O-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-,
-O-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-,
-CH2-C(=O)-,
-CH2CH2-C(=O)-,
-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-,
-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-.
Из них
-O-CH2-C(=O)-,
-O-CH2CH2-C(=O)- или
случай, когда La представляет собой простую связь, и n2 имеет значение 0, являются предпочтительными.
[0098]
Конкретные примеры структуры, представленной как -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-, в линкере могут включать
-NH-CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2-O-C(=O)-,
-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-.
[0099]
Более предпочтительным является -NH-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-NH-CH2-O-CH2-C(=O)- или
-NH-CH2CH2-O-C(=O)-.
[0100]
В линкере длина цепи -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)- предпочтительно представляет собой цепь, имеющую длину от 4 до 7 атомов, и более предпочтительно цепь, имеющую длину 5 или 6 атомов.
[0101]
Что касается конъюгата анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению, считается, что, когда конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство проникает внутрь опухолевых клеток, линкерная группа отщепляется и производное лекарственного средства, имеющее структуру, представленную как NH2-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-(NH-DX), высвобождается с проявлением противоопухолевого действия. Примеры противоопухолевого производного, демонстрирующего противоопухолевый эффект путем высвобождения из конъюгата антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению, включают противоопухолевое производное, имеющее структурную группу, в которой структура, представленная как -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)- линкера, содержит концевую амино группу, и особенно предпочтительные включают следующие.
NH2-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
NH2-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
NH2-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
NH2-CHCH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX).
При этом, в случае NH2-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX), было подтверждено, что, поскольку аминальная структура в молекуле является нестабильной, она снова претерпевает саморазложение с высвобождением следующего
HO-CH2-C(=O)-(NH-DX). Такие соединения также можно предпочтительно использовать в качестве промежуточного продукта способа получения конъюгата антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению.
[0102]
Для конъюгата антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению, в котором в качестве лекарственного средства используют экзатекан, предпочтительно, чтобы структурный фрагмент лекарственное средство-линкер [-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-(NH-DX)], имеющий следующую структуру, был связан с антителом. Среднее конъюгированное количество указанных структурных фрагментов лекарственное средство-линкер на антитело может быть от 1 до 10. Предпочтительно оно составляет от 2 до 8, и более предпочтительно от 3 до 8.
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX).
Среди них, более предпочтительными являются следующие.
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX).
Особенно предпочтительными являются следующие.
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX).
[0103]
Что касается линкерной структуры для конъюгирования анти-TROP2 антитела и лекарственного средства в конъюгате антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению, предпочтительный линкер можно сконструировать путем связывания предпочтительных структур, показанных для каждой части линкера, раскрываемого выше. Что касается структуры линкера, предпочтительно используют линкеры со следующей структурой. При этом, левый конец структуры представляет собой положение связывания с антителом, а правый конец представляет собой положение связывания с лекарственным средством.
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-.
Среди них, более предпочтительными являются следующие.
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-.
Особенно предпочтительные включают следующие.
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-,
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-.
[0104]
[Способ получения]
Далее представлены объяснения, касающиеся репрезентативного способа получения конъюгата антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению или получения его промежуточного соединения. При этом, соединения описаны ниже с номером соединения, показанным в каждой формуле реакции. В частности, они указываются как "соединение формулы (1)", "соединение (1)" или т.п. Соединения с другими номерами также описаны аналогичным образом.
[0105]
1. Способ получения 1
Конъюгат антитело-лекарственное средство, представленный формулой (1), который связан со структурным фрагментом лекарственное средство-линкер через тиоэфир, можно получить, например, следующим способом.
[0106]
[Формула 17]
[0107]
[В формуле, AB представляет собой антитело, содержащее сульфгидрильную группу, и L1' представляет собой L1 линкерную структуру, в которой концевая часть линкера представляет собой малеимидильную группу (формула показана ниже)
[0108]
[Формула 18]
[0109]
(в формуле, атом азота представляет собой положение связывания),
и, например, представляет собой группу, в которой -(сукцинимид-3-ил-N)- часть в -(сукцинимид-3-ил-N)-(CH2)n3-C(=O)- группе L1 представляет собой малеимидильную группу. Кроме того, -(NH-DX) представляет собой структуру, представленную следующей формулой:
[0110]
[Формула 19]
[0111]
и представляет собой группу, образованную путем удаления одного атома водорода амино группы в положении 1 экзатекана.]
[0112]
Кроме того, соединение формулы (1) в представленной выше формуле реакции интерпретируется как структура, в которой один структурный фрагмент, соответствующий фрагменту от лекарственного средства до конца линкера, связывается с одним антителом. Однако это только описание, представленное для удобства, и на самом деле существует множество случаев, где несколько структурных фрагментов связаны с одной молекулой антитела. То же относится и к способу получения, описанному ниже.
[0113]
Конъюгат антитело-лекарственное средство (1) можно получить путем взаимодействия соединения (2), которое может быть получено способом, описанным ниже, с антителом (3a), содержащим сульфгидрильную группу.
Антитело (3a), содержащее сульфгидрильную группу, можно получить способом, хорошо известным в данной области техники (Hermanson, G.T, Bioconjugate Techniques, pp. 56-136, pp. 456-493, Academic Press (1996)). Примеры включают: реагент Трота подвергают взаимодействию с амино группой антитела; N-сукцинимидил S-ацетилтиоалканоаты подвергают взаимодействию с амино группой антитела с последующим взаимодействием с гидроксиламином; после взаимодействия с N-сукцинимидил 3-(пиридилдитио)пропионатом антитело подвергают взаимодействию с восстановителем; антитело подвергают взаимодействию с восстановителем, таким как дитиотреитол, 2-меркаптоэтанол и трис(2-карбоксиэтил)фосфин гидрохлорид (TCEP), для восстановления дисульфидной связи в шарнирной части в антителе с образованием сульфгидрильной группы, но не ограничиваются этим.
В частности, путем использования 0,3-3 молярных эквивалентов TCEP в качестве восстановителя на дисульфид в шарнирной части в антителе и взаимодействия с антителом в буферном растворе, содержащем хелатообразующий агент, можно получить антитело с частично или полностью восстановленным дисульфидом в шарнирной части в антителе. Примеры хелатообразующего агента включают этилендиаминтетрауксусную кислоту (EDTA) и диэтилентриаминпентауксусную кислоту (DTPA). Его можно использовать при концентрации от 1 мМ до 20 мМ. Примеры буферного раствора, который можно использовать, включают раствор фосфата натрия, бората натрия или ацетата натрия. В частности, путем взаимодействия антитела с TCEP при 4°C-37°C в течение 1-4 часов можно получить антитело (3a), содержащее частично или полностью восстановленную сульфгидрильную группу.
При этом, путем осуществления реакции для добавления сульфгидрильной группы к фрагменту лекарственное средство-линкер, фрагмент лекарственное средство-линкер может быть конъюгирован посредством тиоэфирной связи.
С использованием от 2 до 20 молярных эквивалентов соединения (2) на антитело (3a), содержащее сульфгидрильную группу, можно получить конъюгат антитело-лекарственное средство (1), в котором конъюгированы от 2 до 8 молекул лекарственного средства на антитело. В частности, достаточно добавить раствор, содержащий соединение (2), растворенное в нем, к буферному раствору, содержащему антитело (3a), содержащее сульфгидрильную группу, для реакции. Здесь, примеры буферного раствора, который можно использовать, включают раствор ацетата натрия, фосфата натрия и бората натрия. pH для реакции находится на уровне 5-9, и более предпочтительно реакцию осуществляют при около pH 7. Примеры растворителя для растворения соединения (2) включают органический растворитель, такой как диметилсульфоксид (ДМСО), диметилформамид (DMF), диметилацетамид (DMA) и N-метил-2-пиридон (NMP).
Достаточно, когда органический растворитель, содержащий соединение (2), растворенное в нем, добавляют при 1-20% об./об. к буферному раствору, содержащему антитело (3a), содержащее сульфгидрильную группу, для реакции. Температура реакции составляет 0-37°C, более предпочтительно 10-25°C, и время реакции составляет от 0,5 до 2 часов. Реакцию можно остановить путем дезактивации реактивности непрореагировавшего соединения (2) тиол-содержащим реагентом. Примеры тиол-содержащего реагента включают цистеин и N-ацетил-L-цистеин (NAC). Более конкретно, 1-2 молярных эквивалета NAC добавляют к используемому соединению (2), и реакцию можно остановить путем инкубации при комнатной температуре в течение 10-30 минут.
Полученный конъюгат антитело-лекарственное средство (1) можно подвергнуть, после концентрирования, буферного обмена, очистки и измерения концентрации антитела и среднего количества конъюгированных молекул лекарственного средства на молекулу антитела в соответствии с общими процедурами, описанными ниже, идентификации конъюгата антитело-лекарственное средство (1).
[0114]
Общая процедура A: Концентрирование водного раствора антитела или конъюгата антитело-лекарственное средство
В Amicon Ultra (50000 MWCO, Millipore Corporation) контейнер добавляли раствор антитела или конъюгата антитело-лекарственное средство и раствор антитела или конъюгата антитело-лекарственное средство концентрировали путем центрифугирования (центрифугирование в течение 5-20 минут при 2000 G - 3800 G) с использованием центрифуги (Allegra X-15R, Beckman Coulter, Inc.).
Общая процедура B: Измерение концентрации антитела
С использованием УФ-детектора (Nanodrop 1000, Thermo Fisher Scientific Inc.) осуществляли измерение концентраци антитела в соответствии со способом, указанным изготовителем. В то же время, использовали 280 нм коэффициент поглощения, разный для каждого антитела (1,3 млмг-1см-1-1,8 млмг-1см-1).
Общая процедура C-1: Буферный обмен для антитела
NAP-25 колонку (Cat. No. 17-0852-02, GE Healthcare Japan Corporation) с использованием Sephadex G-25 носителя уравновешивали фосфатным буфером (10 мМ, pH 6,0; указывается как PBS6,0/EDTA в описании изобретения), содержащем хлорид натрия (137 мМ) и этилендиаминтетрауксусную кислоту (EDTA, 5 мМ), в соответствии со способом, указанным изготовителем. Водный раствор антитела вводили в количестве 2,5 мл в одну NAP-25 колонку и затем фракцию (3,5 мл), которую элюировали при помощи 3,5 мл PBS6,0/EDTA, собирали. Полученную фракцию концентрировали с использованием Общей процедуры A. После измерения концентрации антитела с использованием Общей процедуры B концентрацию антитела доводили до 10 мг/мл с использованием PBS6,0/EDTA.
Общая процедура C-2: Буферный обмен для антитела
NAP-25 колонку (Cat. No. 17-0852-02, GE Healthcare Japan Corporation) с использованием Sephadex G-25 носителя уравновешивали фосфатным буфером (50 мМ, pH 6,5; указывается как PBS6,5/EDTA в описании изобретения), содержащем хлорид натрия (50 мМ) и EDTA (2 мМ), в соответствии со способом, указанным изготовителем. Водный раствор антитела вводили в количестве 2,5 мл в одну NAP-25 колонку и затем фракцию (3,5 мл), которую элюировали при помощи 3,5 мл PBS6,5/EDTA, собирали. Полученную фракцию концентрировали с использованием Общей процедуры A. После измерения концентрации антитела с использованием Общей процедуры B, концентрацию антитела доводили до 20 мг/мл с использованием PBS6,5/EDTA.
Общая процедура D: Очистка конъюгата антитело-лекарственное средство
NAP-25 колонку уравновешивали любым буфером, выбранным из коммерчески доступного фосфатного буфера (PBS7,4, Cat. No. 10010-023, Invitrogen), натрийфосфатного буфера (10 мМ, pH 6,0; указывается как PBS6,0), содержащего хлорид натрия (137 мМ), и ацетатного буфера, содержащего сорбит (5%) (10 мМ, pH 5,5; указывается как ABS в описании изобретения). Водный раствор конъюгата антитело-лекарственное средство вводили в количестве около 1,5 мл в NAP-25 колонку и затем элюировали при помощи буфера в количестве, указанном изготовителем, для сбора фракции антитела. Собранную фракцию снова наносили на NAP-25 колонку и, повторяя от 2 до 3 раз в целом процесс гель-фильтрационной очистки для элюирования буфером, получали конъюгат антитело-лекарственное средство, не включающий неконъюгированное лекарственное средство-линкер и низкомолекулярное соединение (трис(2-карбоксиэтил)фосфин гидрохлорид (TCEP), N-ацетил-L-цистеин (NAC) и диметилсульфоксид).
Общая процедура E: Измерение концентрации антитела в конъюгате антитело-лекарственное средство и среднего количества конъюгированных молекул лекарственного средства на молекулу антитела (1).
Концентрацию конъюгированного лекарственного средства в конъюгате антитело-лекарственное средство можно рассчитать путем измерения УФ-поглощения водного раствора конъюгата антитело-лекарственное средство при двух длинах волн 280 нм и 370 нм, с последующим осуществлением расчета, как показано ниже.
Поскольку общее поглощение при любой длине волны равно сумме поглощений каждого поглощающего свет химического вещества, которые присутствуют в системе (аддитивность поглощения), когда молярные коэффициенты поглощения антитела и лекарственного средства остаются такими же до и после конъюгациии между антителом и лекарственным средством, концентрацию антитела и концентрацию лекарственного средства в конъюгате антитело-лекарственное средство выражают следующими уравнениями.
A280=AD,280+AA,280=εD,280CD+εA,280CA Уравнение (I)
A370=AD,370+ AA,370=εD,370CD+εA,370CA Уравнение (II)
В представленных выше уравнениях, A280 представляет собой поглощение водного раствора конъюгата антитело-лекарственное средство при 280 нм, A370 представляет собой поглощение водного раствора конъюгата антитело-лекарственное средство при 370 нм, AA,280 представляет собой поглощение антитела при 280 нм, AA,370 представляет собой поглощение антитела при 370 нм, AD,280 представляет собой поглощение предшественника конъюгата при 280 нм, AD,370 представляет собой поглощение предшественника конъюгата при 370 нм, εA,280 представляет собой молярный коэффициент поглощения антитела при 280 нм, εA,370 представляет собой молярный коэффициент поглощения антитела при 370 нм, εD,280 представляет собой молярный коэффициент поглощения предшественника конъюгата при 280 нм, εD,370 представляет собой молярный коэффициент поглощения предшественника конъюгата при 370 нм, CA представляет собой концентрацию антитела в конъюгате антитело-лекарственное средство, и CD представляет собой концентрацию лекарственного средства в конъюгате антитело-лекарственное средство.
Что касается εA,280, εA,370, εD,280 и εD,370 в представленных выше уравнениях, используют предварительно полученные значения (расчетное значение на основании вычисления или измерения значения, полученного УФ-измерением соединения). Например, εA,280 можно рассчитать из аминокислотной последовательности антитела с использованием известного метода расчета (Protein Science, 1995, vol. 4, 2411-2423). εA,370, как правило, равен нулю. εD,280 и εD,370 можно получить на основании закона Бугера-Ламберта-Бера's (Поглощение=молярная концентрация × молярный коэффициент поглощения × длина поглощающего слоя) путем измерения поглощения раствора, в котором предшественник конъюгата, подходящий для использования, растворяют при определенной молярной концентрации. Путем измерения A280 и A370 водного раствора конъюгата антитело-лекарственное средство и решения параллельных уравнений (I) и (II) с использованием полученных значений, можно получить CA и CD. Кроме того, путем деления CD на CA можно получить среднее количество конъюгированного лекарственного средства на антитело.
[0115]
Общая процедура F: Измерение среднего количества конъюгированных молекул лекарственного средства на молекулу антитела в конъюгате антитело-лекарственное средство - (2).
Среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства на молекулу антитела в конъюгате антитело-лекарственное средство также можно определить при помощи высоко-эффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием способа, описанного ниже, в дополнение к описанной выше Общей процедуре E.
[F-1. Получение образца для ВЭЖХ анализа (восстановление конъюгата антитело-лекарственное средство)]
Раствор конъюгата антитело-лекарственное средство (около 1 мг/мл, 60 мкл) смешивают с водным раствором дитиотреитола (DTT) (100 мМ, 15 мкл). Смесь инкубируют при 37°C в течение 30 минут для расщепления дисульфидной связи между L цепью и H цепью конъюгата антитело-лекарственное средство. Полученный образец используют в ВЭЖХ анализе.
[F-2. ВЭЖХ анализ]
ВЭЖХ анализ осуществляют в следующих условиях измерения:
ВЭЖХ система: ВЭЖХ система Agilent 1290 (Agilent Technologies, Inc.)
Детектор: УФ-спектрометр (измерение длины волны: 280 нм)
Колонка: PLRP-S (2,1×50 мм, 8 мкм, 1000 ангстрем; Agilent Technologies, Inc., P/N PL1912-1802)
Температура колонки: 80°C
Подвижная фаза A: 0,04% водный раствор трифторуксусной кислоты (TFA)
Подвижная фаза B: раствор ацетонитрила, содержащий 0,04% TFA
Программа градиента: 29%-36% (0 мин-12,5 мин), 36%-42% (12,5-15 мин), 42%-29% (15 мин-15,1 мин), 29%-29% (15,1 мин-25 мин)
Объем вводимой пробы: 15 мкл
[F-3. Анализ данных]
[F-3-1] По сравнению с L цепью (L0) и H цепью (H0) неконъюгированного антитела, лекарственное средство-конъюгированные L цепь (L цепь, связанная с одной молекулой лекарственного средства: L1) и H цепи (H цепь, связанная с одной молекулой лекарственного средства: H1, H цепь, связанная с двумя молекулами лекарственного средства: H2, H цепь, связанная с тремя молекулами лекарственного средства: H3) демонстрируют более высокую гидрофобность пропорционально количеству конъюгированных молекул лекарственного средства и, таким образом, имеют большее время удерживания. Поэтому эти цепи элюируют в порядке L0 и L1 или H0, H1, H2 и H3. Детектируемые пики могут быть приписаны любой из L0, L1, H0, H1, H2 и H3 путем сравнения времени удерживания с L0 и H0.
[F-3-2] Поскольку лекарственное средство-линкер имеет УФ-абсорбцию, значения площади пиков корректируют в ответ на количество конъюгированных молекул лекарственное средство-линкер в соответствии со следующей формулой с использованием молярных коэффициентов поглощения L цепи, H цепи и лекарственного средства-линкера.
[0116]
[Формула 1]
[0117]
[Формула 2]
[0118]
Здесь, что касается коэффициента молярной экстинкции (280 нм) L цепи или H цепи каждого антитела, можно использовать значение, рассчитанное из аминокислотной последовательности L цепи или H цепи каждого антитела известным способом расчета (Protein Science, 1995, vol. 4, 2411-2423). В случае hTINA, коэффициент молярной экстинкции 34690 и коэффициент молярной экстинкции 95000 использовали в качестве расчетного значения для L цепи или H цепи, соответственно, в соответствии с его аминокислотной последовательностью. Что касается коэффициента молярной экстинкции (280 нм) лекарственного средства-линкера, использовали измеренный коэффициент молярной экстинкции (280 нм) соединения, в котором малеимидная группа была преобразована в сукцинимидный тиоэфир путем взаимодействия каждого лекарственного средства-линкера с меркаптоэтанолом или N-ацетилцистеином.
[F-3-3] Отношение площадей пиков (%) каждой цепи рассчитывают для всех скорректированных значений площадей пиков в соответствии со следующей формулой.
[0119]
[Формула 3]
[0120]
[F-3-4] Среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства на молекулу антитела в конъюгате антитело-лекарственное средство рассчитывают в соответствии со следующей формулой.
Среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства=(L0 отношение площадей пиков × 0+L0 отношение площадей пиков × 1+H0 отношение площадей пиков × 0+H1 отношение площадей пиков × 1+H2 отношение площадей пиков × 2+H3 отношение площадей пиков × 3)/100 × 2
[0121]
Соединение, представленное формулой (2), в Способе получения 1, представляет собой соединение, представленное следующей формулой:
(малеимид-N-ил)-(CH2)n3-C(=O)-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-(NH-DX)
В формуле,
n3 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 8,
L2 представляет собой -NH-(CH2CH2-O)n4-CH2CH2-C(=O)- или простую связь,
где n4 представляет собой целое число, имеющее значение от 1 до 6,
LP представляет собой пептидный остаток, состоящий из 2-7 аминокислот, выбранных из фенилаланина, глицина, валина, лизина, цитруллина, серина, глутаминовой кислоты и аспарагиновой кислоты
n1 представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 6,
n2 представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 5,
La представляет собой -O- или простую связь,
(малеимид-N-ил)- представляет собой малеимидильную группу (2,5-диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ильную группу), представленную следующей формулой:
[0122]
[Формула 20]
[0123]
где атом азота представляет собой положение связывания,
-(NH-DX) представляет собой группу, представленную следующей формулой:
[0124]
[Формула 21]
[0125]
где атом азота амино группы в положении 1 представляет собой положение связывания.
[0126]
Когда L2 представляет собой простую связь или -NH-(CH2CH2-O)n4-CH2CH2-C(=O)-, соединение, в котором n4 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 4, является предпочтительным в качестве промежуточного продукта способа получения.
Что касается пептидного остатка LP, соединение, содержащее пептидный остаток, включающий аминокислоту, выбранную из фенилаланина, глицина, валина, лизина, цитруллина, серина, глутаминовой кислоты и аспарагиновой кислоты, является предпочтительным в качестве промежуточного продукта способа получения. Из таких пептидных остатков, соединение, в котором LP представляет собой пептидный остаток, состоящий из 4 аминокислот, является предпочтительным в качестве промежуточного продукта способа получения. Более конкретно, соединение, в котором LP представляет собой тетрапептидный остаток -GGFG- является предпочтительным в качестве промежуточного продукта способа получения.
[0127]
Кроме того, что касается -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-, соединение, содержащее -NH-CH2CH2-, -NH-CH2CH2CH2-, -NH-CH2CH2CH2CH2-, -NH-CH2CH2CH2CH2CH2-, -NH-CH2-O-CH2- или -NH-CH2CH2-O-CH2-, является предпочтительным в качестве промежуточного продукта способа получения. Соединение, содержащее -NH-CH2CH2CH2-, -NH-CH2-O-CH2- или -NH-CH2CH2-O-CH2, является более предпочтительным.
[0128]
Кроме того, в соединении, представленном формулой (2), соединение, в котором n3 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 5, L2 представляет собой простую связь, и -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2- представляет собой -NH-CH2CH2-, -NH-CH2CH2CH2-, -NH-CH2CH2CH2CH2-, -NH-CH2CH2CH2CH2CH2-, -NH-CH2-O-CH2- или -NH-CH2CH2-O-CH2-, является предпочтительным в качестве промежуточного продукта способа получения. Соединение, в котором -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2- представляет собой -NH-CH2CH2-, -NH-CH2CH2CH2-, -NH-CH2-O-CH2- или -NH-CH2CH2-O-CH2-, является более предпочтительным. Соединение, в котором n3 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 или 5, является еще более предпочтительным.
[0129]
Кроме того, в соединении, представленном формулой (2), соединение, в котором n3 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 5, L2 представляет собой -NH-(CH2CH2-O)n4-CH2CH2-C(=O)-, n4 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 4, и -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2- представляет собой -NH-CH2CH2-, -NH-CH2CH2CH2-, -NH-CH2CH2CH2CH2-, -NH-CH2CH2CH2CH2CH2-, -NH-CH2-O-CH2- или -NH-CH2CH2-O-CH2-, является предпочтительным в качестве промежуточного продукта способа получения. Соединение, в котором n4 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 или 4, является более предпочтительным. Соединение, в котором -NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2- представляет собой -NH-CH2CH2CH2-, -NH-CH2-O-CH2- или -NH-CH2CH2-O-CH2-, является еще более предпочтительным.
[0130]
В качестве примера таких предпочтительных промежуточных соединений, полезных в получении соединения по настоящему изобретению, можно указать следующие.
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX).
[0131]
Конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению можно получить путем взаимодействия соединения лекарственное средство-линкер, выбранного из описанной выше группы промежуточных соединений способа получения, с анти-TROP2 антителом или его реакционноспособным производным и образования тиоэфирной связи на участке дисульфидной связи, присутствующей в шарнирной части анти-TROP2 антитела. В этом случае предпочтительно используют реакционно-способное производное анти-TROP2 антитела. В частности, реакционноспособное производное, полученное путем восстановления анти-TROP2 антитела, является предпочтительным.
[0132]
Ниже представлены соединения, являющиеся более предпочтительными в качестве промежуточных соединений в способе получения.
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX).
[0133]
Из описанной выше группы промежуточных соединений, соединение, представленное следующей формулой:
(малеимид-N-ил)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX) или
(малеимид-N-ил)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
является еще более предпочтительным соединением.
[0134]
Чтобы гарантировать определенное количество конъюгата, множество конъюгатов, полученных в аналогичных условиях получения, чтобы они содержали эквивалетное количество молекул лекарственного средства (например, около±1), можно смешать для получения новых партий. В этом случае, среднее количество лекарственных средств попадает в пределы средних количеств лекарственных средств в конъюгатах до смешивания.
[0135]
2. Способ получения 2
Соединение, представленное формулой (2), в качестве промежуточного соединения, используемого в предыдущем способе получения, и его фармакологически приемлемую соль можно получить, например, следующим способом.
[0136]
[Формула 22]
[0137]
В формуле, L1' представляет собой малеимидильную группу, и P1, P2 и P3 каждый представляет собой защитную группу.
[0138]
Соединение (6) можно получить путем дериватизации карбоновой кислоты (5) в активный сложный эфир, смешанный ангидрид кислоты, галогенангидрид кислоты или т.п. и его взаимодействия с NH2-DX (4) или его фармакологически приемлемой солью в присутствии основания. NH2-DX (4) представляет собой экзатекан (химическое название: (1S,9S)-1-амино-9-этил-5-фтор-2,3-дигидро-9-гидрокси-4-метил-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-10,13(9H,15H)-дион).
Для этой реакции можно использовать реагенты и условия реакции, которые традиционно используют для синтеза пептидов. Существуют различные виды активного сложного эфира. Например, его можно получить путем взаимодействия фенолов, таких как п-нитрофенол, N-гидроксибензотриазол, N-гидроксисукцинимид или т.п., с карбоновой кислотой (5) с использованием агента конденсации, такого как N,N'-дициклогексилкарбодиимид или 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорид. Кроме того, активный сложный эфир также можно получить путем взаимодействия карбоновой кислоты (5) с пентафторфенилтрифторацетатом или т.п.; взаимодействия карбоновой кислоты (5) с 1-бензотриазолилокситрипирролидинофосфоний гексафторфосфитом; взаимодействия карбоновой кислоты (5) с диэтилцианофосфонатом (метод всаливания); взаимодействия карбоновой кислоты (5) с трифенилфосфином и 2,2'-дипиридилдисульфидом (метод Мукаяма); взаимодействия карбоновой кислоты (5) с триазиновым производным, таким как 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолинийхлорид (DMTММ); или т.п. Кроме того, реакцию также можно осуществить, например, способом с использованием галогенангидрида кислоты, в котором карбоновую кислоту (5) обрабатывают галогенангидридом кислоты, таким как тионилхлорид и оксалилхлорид, в присутствии основания.
Путем взаимодействия активного сложного эфира, смешанного ангидрида кислоты или галогенангидрида карбоновой кислоты (5), полученных как описано выше, с соединением (4) в присутствии подходящего основания в инертном растворителе при температуре реакции -78°C-150°C можно получить соединение (6). При этом, "инертный растворитель" означает растворитель, который не ингибирует целевую реакцию, для которой используют этот растворитель.
[0139]
Конкретные примеры основания, используемого для каждой стадии, описанной выше, могут включать карбонат, алкоксид, гидроксид или гидрид щелочного металла или щелочно-земельного металла, включая карбонат натрия, карбонат калия, этоксид натрия, бутоксид калия, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидрид натрия и гидрид калия, металлоорганическое основание, представленное алкиллитием, включая н-бутиллитий, диалкиламинолитием, включая диизопропиламид лития; металлоорганическое основание биссилиламина, включая бис(триметилсилил)амид лития; и органическое основание, включая третичный амин или азот-содержащее гетероциклическое соединение, такое как пиридин, 2,6-лутидин, коллидин, 4-диметиламинопиридин, триэтиламин, N-метилморфолин, диизопропилэтиламин и диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU).
[0140]
Примеры инертного растворителя, который используют для реакции по настоящему изобретению, включают галогенированный углеводородый растворитель, такой как дихлорметан, хлороформ и тетрахлорид углерода; эфирный растворитель, такой как тетрагидрофуран, 1,2-диметоксиэтан и диоксан; ароматический углеводородный растворитель, такой как бензол и толуол; и амидный растворитель, такой как N,N-диметилформамид, N,N-диметилацетамид и N-метилпирролидин-2-он. В дополнение к ним, в некоторых случаях можно использовать сульфоксидный растворитель, такой как диметилсульфоксид и сульфолан; кетоновый растворитель, такой как ацетон и метилэтилкетон; и спиртовой растворитель, такой как метанол и этанол. Кроме того, эти растворители можно смешивать для использования.
[0141]
Что касается защитной группы P1 для концевой амино группы соединения (6), можно использовать защитную группу для амино группы, которую, как правило, используют для синтеза пептидов, например, трет-бутилоксикарбонильную группу, 9-флуоренилметилоксикарбонильную группу и бензилоксикарбонильную группу. Примеры другой защитной группы для амино группы могут включать алканоильную группу, такую как ацетильная группа; алкоксикарбонильную группу, такую как метоксикарбонильная группа и этоксикарбонильная группа; арилметоксикарбонильную группу, такую как параметоксибензилоксикарбонильная группа и пара (или орто)нитробензилоксикарбонильная группа; арилметильную группу, такую как бензильная группа и трифенилметильная группа; ароильную группу, такую как бензоильная группа; и арилсульфонильную группу, такую как 2,4-динитробензолсульфонильная группа и ортонитробензолсульфонильная группа. Защитную группу P1 можно выбрать в зависимости от, например, свойства соединения, содержащего амино группу, подлежащую защите.
Путем удаления защитной группы P1 для концевой амино группы полученного соединения (6) можно получить соединение (7). Для такой процедуры удаления защиты можно выбрать реагенты и условия в зависимости от защитной группы.
Соединение (9) можно получить путем дериватизации карбоновой кислоты пептида (8) с N концом, защищенным группой P2, в активный сложный эфир, смешанный ангидрид кислоты или т.п. и взаимодействия этого соединения с полученным соединением (7). Реакционные условия, реагенты, основание и инертный растворитель, используемые для образования пептидной связи между карбоновой кислотой пептида (8) и соединением (7), можно соответствующим образом выбрать и использовать из тех, которые описаны для синтеза соединения (6). Защитную группу P2, можно соответствующим образом выбрать и использовать из тех, которые описаны для защитной группы соединения (6), и выбор можно сделать на основании, например, свойств соединения, содержащего амино группу, подлежащую защите. Поскольку это, как правило, используют для синтеза пептидов, повторяя последовательно реакцию и процедуру удаления защиты аминокислоты или содержащейся в пептиде карбоновой кислоты (8) для элонгации, также можно получить соединение (9).
Путем удаления защитной группы P2 для амино группы полученного соединения (9) можно получить соединение (10). Для такой процедуры удаления защиты можно выбрать реагенты и условия в зависимости от защитной группы.
Можно получить соединение (2) путем дериватизации карбоновой кислоты (11) в активный сложный эфир, смешанный ангидрид кислоты, галогенангидрид кислоты или т.п. и взаимодействия этого соединения с полученным соединением (10). Реакционные условия, реагенты, основание и инертный растворитель, используемые для образования пептидной связи между карбоновой кислотой (11) и соединением (10), можно соответствующим образом выбрать и использовать из тех, которые описаны для синтеза соединения (6).
[0142]
Соединение (9) также можно получить, например, следующим способом.
Соединение (13) можно получить путем дериватизации карбоновой кислоты пептида (8) с N концом, защищенным группой P2, в активный сложный эфир, смешанный ангидрид кислоты или т.п. и взаимодействия этого соединения в присутствии основания аминовым соединением (12), содержащем карбокси группу, защищенную группой P3. Реакционные условия, реагенты, основание и инертный растворитель, используемые для образования пептидной связи между карбоновой кислотой пептида (8) и соединением (12), можно соответствующим образом выбрать и использовать из тех, которые описаны для синтеза соединения (6).
Защитная группа P2 для амино группы соединения (13) может быть защищена защитной группой, которую традиционно используют.
В частности, примеры защитной группы для гидроксильной группы включают алкоксиметильную группу, такую как метоксиметильная группа; арилметильную группу, такую как бензильная группа, 4-метоксибензильная группа и трифенилметильная группа; алканоильную группу, такую как ацетильная группа; ароильную группу, такую как бензоильная группа; и силильную группу, такую как трет-бутилдифенилсилильная группа. Карбокси группа может быть защищена, например, в виде сложного эфира алкильной группой, такой как метильная группа, этильная группа и трет-бутильная группа, аллильной группой или арилметильной группой, такой как бензильная группа. Примеры защитной группы для амино группы включают, например, алкилоксикарбонильную группу, такую как трет-бутилоксикарбонильная группа, метоксикарбонильная группа и этоксикарбонильная группа; аллилоксикарбонильную группу или арилметоксикарбонильную группу, такую как 9-флуоренилметилоксикарбонильная группа, бензилоксикарбонильная группа, параметоксибензилоксикарбонильная группа и пара (или орто)нитроyбензилоксикарбонильная группа; алканоильную группу, такую как ацетильная группа; арилметильную группу, такую как бензильная группа и трифенилметильная группа; ароильную группу, такую как бензоильная группа; и арилсульфонильную группу, такую как 2,4-динитробензолсульфонильная группа или ортонитробензолсульфонильная группа.
Что касается защитной группы P3 для карбокси группы, можно использовать защитную группу, традиционно используемую в качестве защитной группы для карбокси группы в химии органического синтеза, в частности, синтеза пептидов. Конкретные примеры включают сложные эфиры с алкильной группой, такой как метильная группа, этильная группа или трет-бутильная группа, аллиловые сложные эфиры и бензиловые сложные эфиры, и защитную группу можно соответствующим образом выбрать из описанных выше защитных групп. В таком случае, предпочтительно, чтобы защитная группа для амино группы и защитная группа для карбокси группы были такими, которые предпочтительно удаляют разным способом или в разных условиях. Например, репрезентативный пример включает комбинацию, в которой P2 представляет собой трет-бутилоксикарбонильную группу, и P3 представляет собой бензильную группу. Защитные группы можно выбрать из указанных выше групп в зависимости от, например, свойств соединения, содержащего амино группу и карбокси группу, подлежащие защите. Для удаления защитных групп реагенты и условия можно выбрать в зависимости от защитной группы.
Путем удаления защитной группы P3 для карбокси группы полученного соединения (13) можно получить соединение (14). Для такой процедуры удаления защиты реагенты и условия выбирают в зависимости от защитной группы.
Соединение (9) можно получить путем дериватизации полученного соединения (14) в активный сложный эфир, смешанный ангидрид кислоты, галогенангидрид кислоты или т.п. и взаимодействия с соединением (4) в присутствии основания. Для этой реакции также можно использовать реагенты и условия реакции, которые, как правило, используют для синтеза пептидов, и реакционные условия, реагенты, основание и инертный растворитель, используемые для этой реакции, можно соответствующим образом выбрать из тех, которые описаны для синтеза соединения (6).
[0143]
Соединение (2) также можно получить, например, следующим способом.
Путем удаления защитной группы P2 для амино группы соединения (13) можно получить соединение (15). Для такой процедуры удаления защиты можно выбрать реагенты и условия в зависимости от защитной группы.
Соединение (16) можно получить путем дериватизации карбоновокислотного производного (11) в активный сложный эфир, смешанный ангидрид кислоты, галогенангидрид кислоты или т.п. и взаимодействия этого соединения с полученным соединением (15) в присутствии основания. Реакционные условия, реагенты, основание и инертный растворитель, используемые для образования амидной связи между карбоновой кислотой пептида (11) и соединением (15), можно соответствующим образом выбрать из тех, которые описаны для синтеза соединения (6).
Путем удаления защитной группы для карбокси группы полученного соединения (16) можно получить соединение (17). Эту процедуру удаления защиты можно осуществить подобно удалению защиты карбокси группы для получения соединения (14).
Соединение (2) можно получить путем дериватизации соединения (17) в активный сложный эфир, смешанный ангидрид кислоты, галогенангидрид кислоты или т.п. и взаимодействия этого соединения с соединением (4) в присутствии основания. Для этой реакции также можно использовать реагенты и условия реакции, которые, как правило, используют для синтеза пептидов, и реакционные условия, реагенты, основание и инертный растворитель, используемые для этой реакции, можно соответствующим образом выбрать из тех, которые описаны для синтеза соединения (6).
[0144]
3. Способ получения 3
Соединение, представленное формулой (2) промежуточного соединения, также можно получить следующим способом.
[0145]
[Формула 23]
[0146]
В формуле, L1' соответствует L1, имеющему структуру, в которой концевая группа преобразована в малеимидильную группу, и P4 представляет собой защитную группу.
[0147]
Соединение (19) можно получить путем дериватизации соединения (11) в активный сложный эфир, смешанный ангидрид кислоты или т.п. и взаимодействия этого соединения в присутствии основания с карбоновой кислотой пептида (18) с C концом, защищенным группой P4. Реакционные условия, реагенты, основание и инертный растворитель, используемые для образования пептидной связи между карбоновой кислотой пептида (18) и соединением (11), можно соответствующим образом выбрать из тех, которые описаны для синтеза соединения (6). Защитную группу P4 для карбокси группы соединения (18) можно соответствующим образом выбрать из защитных групп, описанных выше.
Путем удаления защитной группы для карбокси группы полученного соединения (19) можно получить соединение (20). Эту процедуру удаления защиты можно осуществить подобно удалению защиты карбокси группы для получения соединения (14).
Соединение (2) можно получить путем дериватизации полученного соединения (20) в активный сложный эфир, смешанный ангидрид кислоты или т.п. и взаимодействия этого соединения с соединением (7). Для этой реакции также можно использовать реагенты и условия реакции, которые, как правило, используют для синтеза пептидов, и реакционные условия, реагенты, основание и инертный растворитель, используемые для этой реакции, можно соответствующим образом выбрать из тех, которые описаны для синтеза соединения (6).
[0148]
4. Способ получения 4
Ниже подробно описан способ получения соединения (10b), которое имеет n1=1, La=O в промежуточном соединении (10), описанном в Способе получения 2. Соединение, представленное формулой (10b), его соль или сольват можно получить, например, в соответствии со следующим способом.
[0149]
[Формула 24]
[0150]
В формуле, LP имеет значение, определенное выше, L представляет собой ацильную группу, которая представляет собой алканоильную группу, такую как ацетильная группа, или ароильную группу, такую как бензоильная группа, атом водорода или т.п., X и Y каждый представляют собой олигопептид, состоящий из 1-3 аминокислот, P5 и P7 каждый представляет собой защитную группу для амино группы, и P6 представляет собой защитную группу для карбокси группы.
[0151]
Соединение, представленное формулой (21), можно получить с использованием или с применением способа, описанного в Японской выложенной патентной заявке № 2002-60351 или в литературе (J. Org. Chem., Vol. 51, page 3196, 1986), и осуществляя процедуры удаления защитных групп или модификации функциональных групп, если необходимо. Альтернативно, его также можно получить путем обработки аминокислоты с защищенной концевой амино группой или амида кислоты олигопептида с защищенной амино группой альдегидом или кетоном.
Путем взаимодействия соединения (21) с соединением (22), содержащем гидроксильную группу, при температуре в пределах от низкотемпературных условий охлаждения до комнатной температуры в инертном растворителе в присутствии кислоты или основания можно получить соединение (23).
Примеры кислоты, которую можно использовать, могут включать неорганическую кислоту, так как фтористоводородная кислота, хлористый водород, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и борная кислота; органическую кислоту, такую как уксусная кислота, лимонная кислота, паратолуолсульфоновая кислота и метансульфоновая кислота; и кислоту Льюиса, такую как тетрафторборат, хлорид цинка, хлоридолова, хлорид алюминия и хлорид железа. Из них, сульфоновые кислоты являются предпочтительными, в частности, паратолуолсульфоновая кислота. Что касается основания, любое из указанных выше оснований можно соответствующим образом выбрать и использовать. Предпочтительные примеры таких оснований включают алкоксид щелочного металла, такой как трет-бутоксид калия; гидроксид щелочного металла, такой как гидроксид натрия и гидроксид калия; гидрид щелочного металла, такой как гидрид натрия и гидрид калия; металлоорганическое основание, представленное диалкиламинолитием, такое как диизопропиламид лития; и металлоорганическое основание биссилиламина, такое как бис(триметилсилил)амид лития. Примеры растворителя, который можно использовать для этой реакции, включают эфирный растворитель, такой как тетрагидрофуран и 1,4-диоксан; и ароматический углеводородный растворитель, такой как бензол и толуол. Эти растворители можно получить в виде смеси с водой. Кроме того, защитная группа для амино группы, представленная как P5, конкретно не ограничивается, при условии, что она представляет собой группу, традиционно используемую для защиты амино группы. Репрезентативные примеры включают защитные группы для амино группы, которые описаны в Способе получения 2. Однако в данной реакции может быть случай, когда защитная группа для амино группы, представленная как P5, отщепляется. В таком случае, необходимо осуществить взаимодействие с подходящим реагентом для защиты амино группы, если это может потребоваться, с введением защитной группы снова.
Соединение (24) можно получить путем удаления защитной группы P6 соединения (23). Здесь, репрезентативные примеры защитной группы для карбокси группы, представленной как P6, описаны в Способе получения 2, и из них можно выбрать подходящую группу. В соединении (23) желательно, чтобы защитная группа P5 для амино группы и защитная группа P6 для карбокси группы были такими, которые удаляют разным способом или в разных условиях. Например, репрезентативный пример включает комбинацию, в которой P5 представляет собой 9-флуоренилметилоксикарбонильную группу, и P6 представляет собой бензильную группу. Защитные группы можно выбрать в зависимости от, например, свойств соединения, содержащего амино группу и карбокси группу, подлежащие защите. Для удаления защитных групп выбирают реагенты и условия в зависимости от защитной группы.
Соединение (26) можно получить путем дериватизации карбоновой кислоты (24) в активный сложный эфир, смешанный ангидрид кислоты, галогенангидрид кислоты или т.п. и взаимодействия этого соединения с соединением (4) или его фармакологически приемлемой солью с получением соединения (25), с последующим удалением защитной группы P5 полученного соединения (25). Для этой реакции между соединением (4) и карбоновой кислотой (24) и реакции удаления защитной группы P6 можно использовать те же реагенты и реакционные условия, которые описаны для Способа получения 2.
Соединение (10b) можно получить путем взаимодействия соединения (26) с аминокислотой, содержащей защищенную концевую амино группу, или олигопептидом (27), содержащим защищенную амино группу, с получением соединения (9b) и удаления защитной группы P7 полученного соединения (9b). Защитная группа для амино группы, представленная как P7, конкретно не ограничивается, при условии, что ее, как правило, используют для защиты амино группы. Репрезентативные примеры включают защитные группы для амино группы, которые описаны в Способе получения 2. Для удаления защитной группы реагенты и условия выбирают в зависимости от защитной группы. Для этой реакции между соединением (26) и соединением (27) можно использовать реагенты и условия реакции, которые традиционно используют для синтеза пептидов. Соединение (10b), полученное указанным выше способом, можно преобразовать в соединение (1) по настоящему изобретению в соответствии со способом, описанным выше.
[0152]
Конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению, когда его оставляют на воздухе или перекристаллизовывают, например, для очистки, может абсорбировать влагу и содержать адсорбированную воду или превращаться в гидрат, и такое соединение и соль, содержащая воду, также включены в настоящее изобретение.
Соединение, меченное различными радиоактивными или не-радиоактивными изотопами, также включено в настоящее изобретение. Один или несколько атомов, содержащихся в конъюгате антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению, могут содержать атомный изотоп в не существующем в природе отношении. Примеры атомного изотопа включают дейтерий (2H), тритий (3H), иод-125 (125I) и углерод-14 (14C). Кроме того, соединение по настоящему изобретению может быть мечено радиоактивным изотопом, таким как тритий (3H), иод-125 (125I), углерод-14 (14C), медь-64 (64Cu), цирконий-89 (89Zr), иод-124 (124I), фтор-18 (18F), индий-111 (111I), углерод-11 (11C) и иод-131 (131I). Соединение, меченное радиоактивным изотопом, является полезным в качестве терапевтического или профилактического средства, реагента для исследований, такого как реагент для анализа, и средства для диагностики, такого как in vivo диагностического визуализирующего агента. Не будучи связанным с радиоактивностью, любой изотопный вариант конъюгата антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению охватывается объемом настоящего изобретения.
[0153]
[Лекарственные средства]
Конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению демонстрирует цитотоксическую активность против раковых клеток, и, таким образом, его можно использовать в качестве лекарственного средства, особенно в качестве терапевтического средства и/или профилактического средства от рака.
А именно, конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению можно селективно использовать в качестве лекарственного средства для химиотерапии, которая представляет собой основной способ для лечения рака, и, как результат, можно отсрочить развитие раковых клеток, ингибировать их рост и затем убивать раковые клетки. Это может обеспечить для раковых пациентов возможность не иметь симптомы, вызываемые раком, или достижения улучшения QOL раковых пациентов и достижения терапевтического эффекта, поддерживая жизнь раковых пациентов. Даже если конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению не осуществляет уничтожение раковых клеток, он способен достигать более высокого QOL раковых пациентов с достижением их более долгого периода выживания, путем ингибирования или контроля роста раковых клеток.
В такой лекарственной терапии его можно использовать в качестве лекарственного средства отдельно, а также лекарственного средства в комбинации с дополнительной терапией в адъювантной терапии, и можно использовать в сочетании с хирургической операцией, лучевой терапией, гормональной терапией или т.п. Кроме того, его также можно использовать в качестве лекарственного средства для лекарственной терапии в неоадъювантной терапии.
Помимо терапевтического применения, описанного выше, эффект подавления роста минорного количества метастатических раковых клеток и затем их уничтожения путем связывания с этими раковыми клетками также можно ожидать благодаря свойству связывания антитела с антигеном. В частности, когда экспрессию TROP2 подтверждают в первичных раковых клетках, можно ожидать ингибирования раковых метастазов или профилактический эффект при введении конъюгата анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению. Например, можно ожидать эффекта ингибирования и уничтожения раковых клеткок в жидкости организма при образовании метастазов или эффекта, например, ингибирования и уничтожения минорных количеств раковых клеток сразу после имплантации в любой ткани. Кроме того, можно ожидать ингибирования раковых метастазов или профилактического эффекта, в частности, после хирургического удаления рака. Соответственно, можно ожидать эффекта ингибирования раковых метастазов.
Можно ожидать, что конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению будет проявлять терапевтический эффект путем при введении пациентам в качестве системной терапии и дополнительно путем местного введения в раковые ткани.
[0154]
Примеры типа рака, для которого применяют конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению, включают рак легкого, рак почки, уротелиальный рак, колоректальный рак, рак предстательной железы, мультиформную глиобластому, рак яичников, панкреатический рак, рак молочной железы, меланому, рак печени, рак мочевого пузыря, гастральный рак, цервикальный рак, рак головы и шеи или эзофагеальный рак, однако, не ограничиваются этим, при условии, что он представляет собой раковую клетку, экспрессирующую, в раковой клетке как субъекте лечения, белок, который антитело, присутствующее в конъюгате антитело-лекарственное средство, может распознавать.
[0155]
Конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению предпочтительно можно вводить млекопитающему, но более предпочтительно его вводят человеку.
[0156]
Вещества, используемые в фармацевтической композиции, содержащей конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению, можно соответствующим образом выбрать и использовать из добавок для формулирования композиций или т.п., которые, как правило, используют в данной области техники, с учетом дозы или используемой для введения концентрации.
[0157]
Конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению можно вводить в виде фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере один фармацевтически подходящий ингредиент. Например, указанная выше фармацевтическая композиция типично содержит по меньшей мере один фармацевтический носитель (например, стерилизованную жидкость). Здесь, жидкость включает, например, воду и масло (минеральное масло и масло животного происхождения, растительного происхождения или синтетического происхождения). Масло может представлять собой, например, арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло или кунжутное масло. Вода является более типичным носителем, когда фармацевтическую композицию, указанную выше, вводят внутривенно. Физиологический солевой раствор, водный раствор декстрозы и водный раствор глицерина также можно использовать в качестве жидкого носителя, в частности, в растворе для инъекций. Подходящий фармацевтический носитель известен в данной области техники. Если желательно, композиция, указанная выше, также может содержать следовые количества увлажнителя, эмульгатора или pH буферного агента. Примеры подходящего фармацевтического носителя раскрыты в "Remington's Pharmacetical Sciences" by E. W. Martin. Композиции соответствуют способу введения.
[0158]
Известны различные системы доставки, и их можно использовать для введения конъюгата анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению. Примеры пути введения включают внутрикожный, внутримышечный, интраперитонеальный, внутривенный и подкожный пути, но не ограничиваются этим. Введение можно осуществить путем инъекции или болюсной инъекции, например. В соответствии со специальным предпочтительным вариантом воплощения, введение конъюгата антитело-лекарственное средство осуществляют путем введения инъекции. Парентеральное введение является предпочтительным путем введения.
[0159]
В соответствии с репрезентативным вариантом воплощения, фармацевтическая композиция предназначена в качестве фармацевтической композиции, подходящей для внутривенного введения человеку в соответствии с традиционными процедурами. Композиция для внутривенного введения типично представляет собой раствор в стерильном и изотоническом водном буферном растворе. Если необходимо, лекарственное средство может содержать солюбилизирующее вещество и местные анестетики для облегчения боли в месте инъекции (например, лигнокаин). Как правило, ингредиент, указанный выше, обеспечивают индивидуально либо в виде лиофилизированного порошка либо безводного концентрата, содержащегося в контейнере, который получают в виде герметично закрытой ампулы или саше, содержащих определенное количество активного вещества, или в виде смеси в стандартной лекарственной форме. Когда лекарственное средство находится в форме для введения путем инъекции, его можно вводить из флакона с инъекционным раствором, который содержит стерильную воду или солевой раствор фармацевтической степени чистоты. Когда лекарственное средство вводят путем инъекции, можно обеспечить ампулу со стерильной водой или солевым раствором для инъекций, чтобы указанные выше ингредиенты смешивать друг с другом перед введением.
[0160]
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может представлять собой фармацевтическую композицию, содержащую только конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство, раскрытый в настоящей заявке, или фармацевтическую композицию, содержащую конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство и по меньшей мере одно средство для лечения рака, помимо конъюгата. Конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению можно вводить с другим средством для лечения рака. Противораковый эффект может соответственно усиливаться. Другое противораковое средство, используемое для этих целей, можно вводить субъекту одновременно с конъюгатом антитело-лекарственное средство, отдельно от него или после его введения, и введение можно осуществлять, варьируя интервал между введениями для каждого. Примеры средства для лечения рака включают абраксан, паклитаксел, цисплатин, гемцитабин, иринотекан (CPT-11), паклитаксел, преметрексед, сорафениб, винорелбин, лекарственные средства, описанные в Международной публикации № WO 2003/038043, LH-RH аналоги (лейпрорелин, гозерелин или т.п.), эстрамустин фосфат, антагонист эстрогена (тамоксифен, ралоксифен или т.п.) и ингибитор ароматазы (анастрозол, летрозол, эместен или т.п.), но этим не ограничиваются, при условии, что это лекарственное средство, которое обладает противоопухолевой активностью.
[0161]
Фармацевтическую композицию можно сформулировать в виде лиофилизированного препарата или жидкого препарата, в виде препарата, содержащего желаемую композицию и имеющего требуемую чистоту. Когда композиция сформулирована в виде лиофилизированного препарата, это может быть препарат, содержащий подходящие для формулирования добавки, которые используют в данной области. Также, что касается жидкой композиции, ее можно сформулировать в виде жидкого препарата, содержащего различные добавки для формулирования, которые используют в данной области.
[0162]
Композиция и концентрация фармацевтической композиции могут варьироваться в зависимости от способа введения. Однако конъюгат анти-TROP2 антитело-лекарственное средство, содержащийся в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может проявлять фармацевтический эффект даже при низкой дозе, когда конъюгат антитело-лекарственное средство имеет более высокую аффинность к антигену, то есть более высокую аффинность (= более низкое Kd значение), выраженную как константа диссоциации (то есть Kd значение) для антигена. Таким образом, что касается определения дозы конъюгата антитело-лекарственное средство, дозу можно определить в свете ситуации, касающейся аффинности между конъюгатом антитело-лекарственное средство и антигеном. Когда конъюгат антитело-лекарственное средство по настоящему изобретению вводят человеку, например, около 0,001-100 мг/кг можно вводить один раз или вводить несколько раз с интервалом один раз в течение 1-180 дней.
Примеры
[0163]
Настоящее изобретение более конкретно описывается в свете примеров, представленных ниже. Однако настоящее изобретение не ограничивается ими. Кроме того, это ни в коем случае нельзя рассматривать как ограничение. Кроме того, если специально не указано иное, реагент, растворитель и исходное вещество, описанные в описании изобретения, легко можно получить от коммерческого поставщика.
[0164]
[Пример 1: Иммунизация мыши и получение гибридомы]
1-1) Получение клетки для использования в иммунизации мыши
5×106 NCI-H322 клеток (клеточная линия немелкоклеточного рака легкого человека, ATCC CRL-5806; ATCC: American Type Culture Collection) культивировали в RPMI-1640 (Roswell Park Memorial Institute-1640) среде (10 мл) в течение 5 дней, затем извлекали, промывали при помощи PBS (фосфат-буферный солевой раствор) два раза и ресуспендировали в PBS (500 мкл).
[0165]
1-2) Иммунизация мыши
Для первой иммунизации каждую BALB/c мышь (6-недельного возраста) интраперитонеально иммунизировали NCI-H322 клетками (1×107 клеток). Для второй-пятой иммунизаций мышь интраперитонеально иммунизировали с использованием 1×106 NCI-H322 клеток с 1-недельными интервалами. Для шестой (конечной) иммунизации мышь иммунизировали через хвостовую вену и интраперитонеально NCI-H322 клетками при 1×106 клеток/200 мкл PBS для каждого пути. Клетки селезенки выделяли через 3 дня после конечной иммунизации.
[0166]
1-3) Получение клеток селезенки иммунизированной мыши
Селезенку иммунизированной мыши вырезали, затем измельчали и суспендировали в RPMI 1640 10% FBS (фетальная бычья сыворотка)(+) среде. Клеточную суспензию пропускали через клеточный фильтр (100 мкм, BD Falcon) и затем центрифугировали при 1500 об/мин при комнатной температуре в течение 5 минут и супернатант сливали. Трис-NH4Cl раствор (20 мМ Трис-HCl pH 7,5, 0,83% NH4Cl; 10 мл) добавляли к остатку, с последующей обработкой при комнатной температуре в течение 5 минут. RPMI 1640 FBS(+) среду (10 мл) добавляли к клеточной суспензии и смесь пропускали через клеточный фильтр и затем центрифугировали при 1500 об/мин при комнатной температуре в течение 5 минут. Супернатант сливали и клетки селезенки ресуспендировали в RPMI 1640 FBS(-) среде (10 мл).
[0167]
1-4) Получение миеломных клеток
P3U1 клетки (клеточная линия миеломы мыши) извлекали и центрифугировали при 1500 об/мин при комнатной температуре в течение 5 минут. EDTA (0,02%) раствор (10 мл) добавляли к P3U1 клеткам, с последующей обработкой при 37°C в течение 5 минут. Суспензию P3U1 клеток центрифугировали при 1500 об/мин при комнатной температуре в течение 5 минут. Супернатант сливали и ресуспендировали в RPMI 1640 FBS(-) среде (10 мл).
[0168]
1-5) Клеточное слияние
Клетки селезенки и клетки миелома смешивали при соотношении 5:1 и центрифугировали (1200 об/мин, 5 минут). Полученные клетки в осажденной фракции хорошо отделялись друг от друга, и затем постепенно добавляли полиэтиленгликоль-4000 (PEG-4000; 1 мл) в течение примерно 1 минуты при перемешивании. Затем RPMI среду (1 мл) добавляли к жидкости, содержащей клетки, несколько раз с интервалом 1 минута и затем добавляли RPMI среду для доведения общего количества до 50 мл. Клеточную суспензию центрифугировали (900 об/мин, 5 минут), и полученные клетки в осажденной фракции слегка отделялись друг от друга, и затем их осторожно суспендировали в HAT среде (PRMI 1640 среда, дополненная 10% фетальной бычьей сывороткой и HAT добавкой к среде; 100 мл). Суспензию переносили при 200 мкл/лунка в 96-луночный планшет для культур и культивировали до 50% конфлюентности в 5% CO2 инкубаторе при 37°C.
[0169]
1-6) Скрининг гибридомы с использованием варианта аденовируса FZ33
NCI-H322 клетки высевали при 5×103 клеток/лунка в 96-луночный планшет и культивировали при 37°C в течение 48 часов. Клетки промывали при помощи PBS 150 мкл/лунка два раза и культуральный супернатант каждой гибридомы (50 мкл) добавляли в каждую лунку и осуществляли взаимодействие при 4°C в течение 1 часа. Клетки промывали при помощи PBS 150 мкл/лунка два раза. Аденовирус Ax3CAZ3-FZ33 (β-галактозидаза-экспрессирующий аденовирус, модифицированный Z33 волокном, чтобы связываться с антителом (см. публикацию патентной заявки США № 2012/0237518)), разбавляли RPMI1640(-) средой до концентрации 3×106 вирусных частиц/100 мкл (1×103 вирусных частиц/клетка) и этот разбавленный раствор добавляли в каждую лунку при 100 мкл/лунка. После взаимодействия при 4°C в течение 1 часа клетки промывали при помощи PBS 150 мкл/лунка два раза. Добавляли RPMI1640 FBS(+) среду при 100 мкл/лунка и клетки культивировали при 37°C в течение 24 часов. NCI-H322 клетки, обработанные образцом для анализа, содержащим β-Gal репортерный ген, с использованием Galacto-Light Plus Reporter Gene Assay System (Applied Biosystems, Inc.), промывали при помощи PBS 200 мкл/лунка. Добавляли лизисный раствор при 50 мкл/лунка и смесь оставляли при комнатной температуре в течение 10 минут. Этот клеточный лизат (10 мкл) разбавляли 100-кратно при помощи Galacton-Plus Galacto Reaction Buffer Diluent, затем добавляли в White microwell SH 96-луночный планшет (Nunc/Thermo Fisher Scientific, Inc.) и осуществляли взаимодействие при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляли акселератор II при 150 мкл/лунка. Хемилюминесценцию измеряли в течение 5 секунд с использованием лабораторного счетчика Wallac 1420 ARVOsx (PerkinElmer, Inc.) и инфекционную дозу вируса в NCI-H322 клетках указывали в виде среднего значения в секунду как RLU (количество люминесценции). В скрининге гибридомной группы, осуществляемом таким образом, клон, измеренное значение (RLU) которого было 5000 RLU или больше, выбирали из всей группы (минимум: 1383 RLU, среднее: 10914 RLU, максимум: 78746 RLU). Сначала, в качестве первичного скрининга, 81 положительных лунок выбирали из 960 гибридомных лунок, полученных путем одноклеточного слияния. В качестве валидационного скрининга, анализ затем осуществляли в двух повторах с использованием такого же подхода, как в первичном скрининге. Когда лунку, показавшую измеренное значение 5000 RLU или выше в обоих испытаниях, считали как положительную, 52 положительные лунки выбирали из 81 лунок, полученных в первичном скрининге. Выбранные клоны субклонировали от 2 до 4 раз для установления 44 моноклональных гибридомных клеточных линий.
[0170]
[Пример 2: Очистка антитела из гибридомы]
Пристан (2,6,10,14-тетраметилпентадекан; 0,5 мл) интраперитонеально вводили заранее каждой мыши 8-10-недельного возраста или «голой» мыши, которую затем выращивали в течение 2 недель. Каждую моноклональное антитело-продуцирующую гибридому, полученную в Примере 1, интраперитонеально вводили путем инъекции мыши. Через 10-21 дней гибридоме давали возможность вызывать развитие асцитной опухоли и асциты затем собирали. Полученные асциты центрифугировали для удаления твердых частиц. Затем антитела очищали путем высаливания с использованием 40-50% раствора сульфата аммония, способа осаждения каприловой кислотой, колонки с DEAE-Сефарозой и колонки с G-белком и IgG или IgM фракции собирали и использовали как очищенные моноклональные антитела.
[0171]
[Пример 3: Идентификация антигена, с которым связывается антитело, продуцируемое гибридомой]
Антиген идентифицировали на TINA1 - антитело, продуцируемое гибридомой, полученное в Примере 2.
[0172]
3-1) Иммунопреципитация биотин-меченного клеточно-поверхностного белка с использованием TINA1 антитела
5×106 NCI-H322 клеток выделяли и промывали при помощи PBS три раза. EZ-Link Сульфо-NHS-Биотин (Pierce/Thermo Fisher Scientific, Inc.) суспендировали в PBS при концентрации 0,1 мг/мл. NCI-H322 клетки подвергали вращению при комнатной температуре в течение 30 минут в биотин/PBS растворе, затем промывали раствором 100 мМ глицин/PBS (25 мл) два раза и затем промывали при помощи PBS (25 мл) три раза. Клетки, промытые таким образом, ресуспендировали в лизисном буфере (150 мМ NaCl, 50 мМ Трис-HCl pH 7,6, 1% NP-40+ингибитор протеазы, 1 таблетка/50 мл Complete без EDTA (Hoffmann-La Roche Ltd.); 2 мл) и обрабатывали при 4°C в течение 30 минут. Белок G-Сефароза/лизисный буфер (50% суспензия; 30 мкл), полученный путем замены буфера Белка G-Сефарозы (Protein G Sepharose 4 Fast Flow (GE Healthcare Japan Corporation)) лизисным буфером, добавляли к клеточному лизату и смесь вращали при 4°C в течение 1 часа и затем центрифугировали при 4°C в течение 5 минут для выделения супернатанта. TINA1 антитело (3 мкг) добавляли к супернатанту и смесь вращали при 4°C в течение 1 часа. Затем добавляли Белок G-Сефароза/лизисный буфер (50% суспензия; 60 мкл) и смесь вращали при 4°C в течение 2 часов. Белок G-Сефарозу промывали лизисным буфером (1 мл) шесть раз и затем ресуспендировали в 1×SDS буфер для образца/5% 2-ME (2-меркаптоэтанол) буфере (62,5 мМ Трис-HCl (pH 6,8 при 25°C), 2% (масс/об) SDS, 10% глицерина и 0,01% (масс/об) фенолового красного). Суспензию обрабатывали при 100°C в течение 5 минут и раствор затем извлекали и использовали в качестве образца для SDS-PAGE (электрофорез на полиакриламидном геле).
[0173]
3-2) SDS-PAGE и Вестерн-блоттинг
SDS-PAGE образец, полученный в 3-1), подвергали электрофорезу при 20 мА с использованием Ready Gels J 5-20% (Bio-Rad Laboratories, Inc.) и затем переносили промоканием при 0,1 мА/см2 из геля на мембрану. Мембрану промывали при помощи PBS-T (PBS(-)-0,05% Tween 20) в течение 5 минут и затем блокировали в течение 1 часа. Мембрану промывали при помощи PBS-T в течение 5 минут три раза и затем осуществляли взаимодействие с конъюгатом Стрептавидин-пероксидаза хрена (Amersham Biosciences Corp.; разбавленный 2000-кратно при помощи PBS-T для использования) в течение 1 часа. Мембрану промывали при помощи PBS-T в течение 10 минут четыре раза и целевую полосу затем определяли с использованием ECL реагентов для детекции вестерн-блоттингом (Amersham Biosciences Corp.) и Hyperfilm ECL (Amersham Biosciences Corp.). NCI-H322 клетки, меченные биотином с использованием процедур Примера 3-1), подвергали иммунопреципитации с использованием KCI7A3 антитела, антиген которого уже был обнаружен как представляющий собой TROP2 методом масс-спектрометрии, или TINA1 антитела и полученные иммуноосажденные продукты анализировали при помощи SDS-PAGE и Вестерн-блоттинга в присутствии или в отсутствие DTT. В любом случае использования KCI7A3 антитела или TINA1 антитела, полосу определяли при молекулярной массе 46 кДа в отсутствие DTT, и полосу определяли при молекулярной массе 37 кДа в образцах, дополненных DTT.
[0174]
3-3) FACS анализ
Поскольку было предсказано, что антиген TINA1 антитела представляет собой TROP2, на основании характерной полосы, анализ гиперэкспрессии способом переноса генов осуществляли без масс-спектрометрии. Как результат FACS анализа, TINA1 антитело продемонстрировало сильный положительный ответ в CHOK1 клетках, экспрессирующих человеческий TROP2, указывая на то, что антигеном TINA1 антитела является TROP2. Подобный FACS анализ осуществляли с использованием клеточной линии рака легкого PC14, клеточной линии рака легкого NCI-H322, клеточной линии рака легкого NCI-H2122, клеточной линии рака легкого LCAM1, клеточной линии рака легкого LC2/ad, панкреатической раковой клеточной линии MIAPaCa2, панкреатической раковой клеточной линии PK-1, клеточной линии рака предстательной железы PC3, колоректальной раковой клеточной линии HCT116, клеточной линии меланомы A375, клеточной линии рака яичников SKOV3, гематопоэтической опухолевой клеточной линии RPMI8226, гематопоэтической опухолевой клеточной линии K562, PBMC (мононуклеарные клетки периферической крови человека) и человеческих тромбоцитов. Все исследованные клеточные линии рака легкого были TROP2-положительными, и PC3, PK1 и SKOV3 были положительными в качестве клеточных линий, за исключением клеточных линий рака легкого. С другой стороны, все из нормальных клеток крови были отрицательными.
[0175]
[Пример 4: Измерение активности интернализации антител]
4-1) Система оценки активности интернализации антител
Рекомбинантный гибридный белок DT3C получали для измерения активности интернализации и иммунотоксической активности антитела. Этот DT3C представляет собой белок, содержащий каталитический домен дифтерийного токсина (DT) и три антитело-связывающие области белка G. DT3C специфически связывается с Fc фрагментом антитела, является стабильным и индуцирует гибель клеток путем ингибирования синтеза белка при поглощении в клетках. С использованием этой системы эффект интернализации антитела и его убивающий клетки эффект посредством иммунотоксина можно наблюдать одновременно (Yamaguchi, M., Hamada, H., et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 454 (2014) 600-603).
[0176]
4-2) Оценка активности интернализации и активности иммунотоксина с использованием DT3C
4 мкг/мл DT3C добавляли при 25 мкл/лунка в 96-луночный планшет, затем культуральные супернатанты 11 гибридом, полученных способом Примера 1 или эквивалетным способом, каждый добавляли при 25 мкл/лунка в планшет и планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Антигены, распознаваемые антителами, продуцируемыми гибридомами, отличными от TINA1 антитело-продуцирующей гибридомы, были заранее подтверждены как представляющие собой CD9, CD46, CD55, CD59, CD71, CD73, CD147, CD276, EpCAM или EGFR. 2×104 клеток/мл (RPMI1640 среда, дополненная FBS с низкой концентрацией IgG 20%) NCI-H322 клеток высевали при 50 мкл/лунка. После инкубации при комнатной температуре в течение 30 минут клетки культивировали в течение 3 дней в CO2 инкубаторе при 37°C. После культивирования супернатант удаляли и в планшет добавляли 10% WST-10%FBS-RPMI1640 при 100 мкл/лунка. После инкубации в течение 1 часа в CO2 инкубаторе при 37°C количество жизнеспособных клеток измеряли с использованием считывающего устройства для микропланшетов (OD450-OD640, infinite 200, Tecan Trading AG). Из культуральных супернатантов оцениваемых гибридомных клеток, антитела против CD59, CD71, EGFR, EpCAM или TROP2, как было подтверждено, обладают сильной активностью интернализации и активностью иммунотоксина (Фиг. 10).
[0177]
4-3) Разница в активности интернализации и активности иммунотоксина между антителами против CD59, CD71, EGFR, EpCAM или TROP2
Каждый разбавленный раствор DT3C (0, 0,004, 0,04, 0,4, 4 или 40 мкг/мл) добавляли при 25 мкл/лунка в 96-луночный планшет, затем каждое антитело (40 мкг/мл) добавляли при 25 мкл/лунка в планшет и планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем высевали 2×104 клеток/мл (RPMI1640 среда, дополненная FBS с низкой концентрацией IgG 20%) NCI-H322 клеток при 50 мкл/лунка. После инкубации при комнатной температуре в течение 30 минут клетки культивировали в течение 3 дней в CO2 инкубаторе при 37°C. После культивирования супернатант удаляли и в планшет добавляли 10% WST-1-10% FBS-RPMI1640 при 100 мкл/лунка. После инкубации в течение 1 часа в CO2 инкубаторе при 37°C количество жизнеспособных клеток измеряли с использованием планшет-ридера (OD450 - OD640). Из оцениваемых антител, TINA1, антитело против TROP2, имело самую сильную активность интернализации и активность иммунотоксина (Фиг. 11).
[0178]
4-4) Разница в активности интернализации и активности иммунотоксина между клонами анти-TROP2 антитела
Анти-TROP2 антитела TINA1 (иммуноген: линия рака легкого NCI-H322), KCL7A3 и KCL2D6 (иммуноген: панкреатическая раковая клеточная линия KCL-MOH1), Pr1E11 и Pr8H10 (иммуноген: клеточная линия рака предстательной железы Pc-1) и NY16 и NY17 (иммуноген: панкреатическая раковая клеточная линия PK-1), полученные способом Примера 1 или эквивалетным способом, и коммерчески доступный 77220 (R&D Systems Inc.) оценивали на их активность интернализации и активность иммунотоксина таким же способом, как в Примере 4-3). В результате, из 8 анти-TROP2 антител TINA1 антитело имело самую сильную активность (Фиг. 12).
[0179]
[Пример 5: Определение нуклеотидной последовательности кодирующей вариабельную область кДНК гена TINA1 антитела и получение химерного TINA1 (далее указано как cTINA1) антитело]
5-1) Определение нуклеотидной последовательности кодирующей вариабельную область кДНК гена TINA1 антитела
5-1-1) Получение мРНК из TINA1 антитело-продуцирующей гибридомы
Для амплификации кДНК, кодирующих вариабельные области TINA1 антитела, мРНК получали из TINA1 антитело-продуцирующей гибридомы с использованием набора для выделения мРНК (Roche Applied Science).
[0180]
5-1-2) Синтез кДНК (5'-RACE-Ready кДНК)
кДНК (5'-RACE-Ready кДНК) синтезировали с использованием мРНК (100 нг), полученной в 5-1-1), и Набора SMARTer RACE для амплификации кДНК (Clontech Laboratories, Inc.).
[0181]
5-1-3) Амплификация кДНК, кодирующей вариабельную область тяжелой цепи TINA1 антитела, при помощи 5ʹ-RACE ПЦР и определение последовательности
UPM (Universal Primer A Mix: включен в Набор SMARTer RACE для амплификации кДНК) и олигонуклеотид, имеющий последовательность 5'-AGAGTTCCAGGTCAAGGTCACTGGCTCAGG-3' (SEQ ID NO: 33: праймер mG2aVR2) использовали в качестве праймеров для амплификации кДНК вариабельной области гена тяжелой цепи при помощи ПЦР. Использовали UPM, включенный в Набор SMARTer RACE для амплификаци кДНК (Clontech Laboratories, Inc.), и mG2aVR2 был сконструирован из последовательности константной области тяжелой цепи (IgG2a) мыши из базы данных.
кДНК, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи TINA1 антитела, амплифицировали при помощи 5ʹ-RACE ПЦР с использованием этого набора праймеров и кДНК (5'-RACE-Ready кДНК), синтезированной в Примере 5-1-2), в качестве матрицы. Эту ПЦР осуществляли в соответствии в руководством, включенном в набора SMARTer RACE для амплификаци кДНК (Clontech Laboratories, Inc.), по программе ступенчатой ПЦР с использованием KOD-плюс (Toyobo Co., Ltd.) в качестве полимеразы.
кДНК, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, амплифицированную при помощи 5ʹ-RACE ПЦР, очищали с использованием Набора MinElute для очистки продуктов ПЦР (QIAGEN N.V.) и затем клонировали с использованием набора Zero Blunt TOPO PCR Cloning Kit (Invitrogen Corp.). Нуклеотидную последовательность клонированной кДНК, кодирующей вариабельную область тяжелой цепи, анализировали путем секвенирования. Праймеры, используемые для секвенирования, представляли собой описанный выше праймер mG2aVR2, сконструированный из последовательности константной области тяжелой цепи мыши из базы данных, и NUP (Nested Universal Праймер A: включенный в Набор SMARTer RACE для амплификаци кДНК).
Анализ секвенирования осуществляли с использованием устройства для анализа последовательностей генов ("ABI PRISM 3700 DNA Analyzer" или "Applied Biosystems 3730×l Analyzer", Applied Biosystems, Inc.) и реакции секвенирования с использованием Gene Amp 9700 (Applied Biosystems, Inc.).
Установленная нуклеотидная последовательность кДНК, кодирующей вариабельную область тяжелой цепи TINA1 антитела, показана в SEQ ID NO: 1 в Перечне последовательностей, и аминокислотная последовательность, кодируемая ею, показана в SEQ ID NO: 2.
[0182]
5-1-4) Амплификация кДНК, кодирующей вариабельную область легкой цепи TINA1 антитела, при помощи 5ʹ-RACE ПЦР и определение последовательности
UPM (Universal Primer A Mix: включенный в Набор SMARTer RACE для амплификаци кДНК) и олигонуклеотид, имеющий последовательность 5'-AGTCCAACTGTTCAGGACGCCATTTTGTCG-3' (SEQ ID NO: 34: праймер mKVR2), использовали в качестве праймеров для амплификации кДНК вариабельной области гена легкой цепи TINA1 антитела при помощи ПЦР. Использовали UPM, включенный в Набор SMARTer RACE для амплификаци кДНК (Clontech Laboratories, Inc.), и mKVR2 был сконструирован из последовательности константной области легкой цепи мыши из базы данных.
кДНК, кодирующую вариабельную область легкой цепи TINA1 антитела, амплифицировали при помощи 5ʹ-RACE ПЦР с использованием этого набора праймеров и кДНК (5'-RACE-Ready кДНК), синтезированной в Примере 5-1-2), в качестве матрицы. Эту ПЦР осуществляли в соответствии в руководством, включенным в набора SMARTer RACE для амплификаци кДНК (Clontech Laboratories, Inc.), по программе ступенчатой ПЦР с использованием KOD-Plus-(Toyobo Co., Ltd.) в качестве полимеразы.
кДНК, кодирующую вариабельную область легкой цепи, амплифицированную при помощи 5ʹ-RACE ПЦР, очищали с использованием Набора MinElute для очистки продуктов ПЦР (QIAGEN N.V.) и затем клонировали с использованием набора Zero Blunt TOPO PCR Cloning Kit (Invitrogen Corp.). Нуклеотидную последовательность клонированной кДНК, кодирующей вариабельную область легкой цепи, анализировали путем секвенирования.
Праймеры, используемые для секвенирования, представляли собой описанные выше праймер mKVR2, сконструированный из последовательности константной области легкой цепи мыши из базы данных, и NUP.
В анализе секвенирования и реакции секвенирования использовали описанное выше оборудование.
Установленная нуклеотидная последовательность кДНК, кодирующей вариабельную область легкой цепи TINA1 антитела, показана в SEQ ID NO: 3 в Перечне последовательностей, и аминокислотная последовательность, кодируемая ею, показана в SEQ ID NO: 4.
[0183]
5-2) Получение cTINA1 антитела
5-2-1) Конструирование pCMA-LK вектора экспрессии легкой цепи химерного и гуманизированного антитела
Фрагмент около 5,4 т.п.н., полученный путем расщепления плазмиды pкDNA3,3-TOPO/LacZ (Invitrogen Corp.) рестрикционными ферментами XbaI и PmeI, и ДНК фрагмент, содержащий последовательность ДНК, кодирующую сигнал секреции κ цепи человека и константную область κ цепи человека, которая показана в SEQ ID NO: 5, лигировали с использованием набора In-Fusion Advantage PCR Cloning Kit (Clontech Laboratories, Inc.) с получением pкDNA3.3/LK.
pкDNA3.3/LK использовали в качестве матрицы в ПЦР с использованием набора праймеров, описанного ниже. Полученный фрагмент около 3,8 т.п.н. подвергали фосфорилированию и затем самолигированию для конструирования pCMA-LK вектора экспрессии легкой цепи химерного и гуманизированного антитела, содержащего сигнальную последовательность, сайт клонирования и ген константной области κ цепи человека ниже от CMV промотора.
Набор праймеров
5'-tataccgtcgacctctagctagagcttggc-3' (SEQ ID NO: 35: праймер 3.3-F1)
5'-gctatggcagggcctgccgccccgacgttg-3' (SEQ ID NO: 36: праймер 3.3-R1)
[0184]
5-2-2) Конструирование pCMA-G1 вектора экспрессии тяжелой цепи химерного и гуманизированного антитела IgG1-типа
ДНК фрагмент pCMA-LK, не содержащий последовательность ДНК, кодирующую сигнал секреции κ цепи человека и константную область κ цепи человека в результате расщепления XbaI и PmeI ферментами, и ДНК фрагмент, содержащий ДНК последовательность, кодирующую аминокислоты сигнальной последовательности тяжелой цепи человека и константной области IgG1 человека, показанную в SEQ ID NO: 6, лигировали с использованием набора In-Fusion Advantage PCR Cloning Kit (Clontech Laboratories, Inc.) для конструирования экспрессирующего вектора pCMA-G1 для экспрессии тяжелой цепи химерного и гуманизированного антитела IgG1-типа, содержащего сигнальную последовательность, сайт клонирования и ген константной области тяжелой цепи IgG1 человека ниже от CMV промотора.
[0185]
5-2-3) Конструирование вектора экспрессии тяжелой цепи cTINA1 антитела
ДНК фрагмент, содержащий кДНК, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи TINA1 антитела, амплифицировали с использованием кДНК, кодирующей вариабельную область тяжелой цепи, полученной в Примере 5-1-3), в качестве матрицы, KOD-Plus-(Toyobo Co., Ltd.) и набора праймеров, описанного ниже, и вставляли в расщепленный рестрикционным ферментом BlpI сайт pCMA-G1 вектора экспрессии тяжелой цепи химерного и гуманизированного антитела IgG1-типа с использованием набора In-Fusion HD PCR Cloning Kit (Clontech Laboratories, Inc.) для конструирования вектора экспрессии тяжелой цепи cTINA1 антитела. Полученный экспрессирующий вектор был обозначен как "pCMA-G1/cTINA1". Нуклеотидная последовательность тяжелой цепи cTINA1 антитела показана в SEQ ID NO: 7, и аминокислотная последовательность, кодируемая ею, показана в SEQ ID NO: 8. Нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 7 и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 8 также описаны на Фиг. 1.
Набор праймеров для тяжелой цепи cTINA1 антитела
5'-CCAGATGGGTGCTGAGCCAGATCCAGTTGGTGCAGTCTGGACCTGAG-3' (SEQ ID NO: 37: праймер TINA1H-F)
5'-CTTGGTGGAGGCTGAGCTGACGGTGACCGCGGTCCCTGCGCCCCAGAC-3' (SEQ ID NO: 38: праймер TINA1H-R)
[0186]
5-2-4) Конструирование вектора экспрессии легкой цепи cTINA1 антитела
ДНК фрагмент, содержащий кДНК, кодирующую вариабельную область легкой цепи TINA1 антитела, амплифицировали с использованием кДНК, кодирующей вариабельную область легкой цепи, полученной в Примере 5-1-4), в качестве матрицы, KOD-Plus-(Toyobo Co., Ltd.) и набора праймеров, описанного ниже, и вставляли в расщепленный рестрикционным ферментом BsiWI сайт многоцелевого вектора экспрессии легкой цепи химерного и гуманизированного антитела pCMA-LK с использованием набора In-Fusion HD PCR Cloning Kit (Clontech Laboratories, Inc.) для конструирования вектора экспрессии легкой цепи cTINA1 антитела. Полученный экспрессирующий вектор был обозначен как "pCMA-LK/cTINA1". Нуклеотидная последовательность легкой цепи cTINA1 антитела показана в SEQ ID NO: 9, и аминокислотная последовательность, кодируемая ею, показана в SEQ ID NO: 10. Нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 9 и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 10 также описаны на Фиг. 2.
Набор праймеров для легкой цепи cTINA1 антитела
5'-ATCTCCGGCGCGTACGGCGACATTGTGATGACCCAGTCTCACAAATTC-3' (SEQ ID NO: 39: праймер TINA1L-F)
5'-GGAGGGGGCGGCCACAGCCCGTTTCAGCTCCAGCTTGGTCCCAGC-3' (SEQ ID NO: 40: праймер TINA1L-R)
[0187]
5-2-5) Маломасштабное получение cTINA1 антитела
FreeStyle 293F клетки (Invitrogen Corp.) субкультивировали и культивировали в соответствии с инструкциями.
1×107 FreeStyle 293F клетки (Invitrogen Corp.) в логарифмической фазе роста разбавляли FreeStyle 293 средой для экспрессии (Invitrogen Corp.) до 9,6 мл, затем высевали в 30-мл квадратный сосуд Square Storage Bottle (Nalgene/Thermo Fisher Scientific, Inc.) и затем культивировали при встряхивании при 90 об/мин в течение 1 часа в 8% CO2 инкубаторе при 37°C. Полиэтиленимин (Polyscience #24765; 30 мкг) растворяли в Opti-Pro SFM (Invitrogen Corp.; 200 мкл). Затем вектор экспрессии легкой цепи (6 мкг) и вектор экспрессии тяжелой цепи (4 мкг), полученные с использованием набора плазмид PureLink HiPure (Invitrogen Corp.), добавляли к Opti-Pro SFM (Invitrogen Corp.; 200 мкл). Смешанный раствор вектор экспрессии/Opti-Pro SFM (200 мкл) добавляли к полиэтиленимин/Opti-Pro SFM смешанному раствору (200 мкл) и смесь осторожно перемешивали, затем оставляли на 5 минут и затем добавляли к FreeStyle 293F клеткам. Культуральный супернатант, полученный путем встряхивания культуры при 90 об/мин в течение 7 дней в 8% CO2 инкубаторе при 37°C, фильтровали через Minisart-Plus фильтр (Sartorius AG) и использовали в качестве образца для оценки.
Человеческое химерное TINA1 антитело, полученное путем комбинации pCMA-G1/cTINA1 и pCMA-LK/cTINA1, было обозначено как "cTINA1 антитело".
[0188]
[Пример 6: Конструирование гуманизированного антитела мышиного анти-TROP2 моноклонального антитела]
6-1) Конструирование гуманизированного варианта TINA1
6-1-1) Молекулярное моделирование вариабельной области TINA1
Молекулярное моделирование вариабельных областей TINA1 осуществляли способом, известным в данной области техники как гомологичное моделирование (Methods in Enzymology, 203, 121-153 (1991)). Вариабельные области TINA1, определенные выше, сравнивали с первичными последовательностями (трехмерные структуры, полученные из рентгеновских кристаллических структур, являются доступными) вариабельных областей человеческого иммуноглобулина, зарегистрированными в Protein Data Bank (Nuc. Acid Res. 35, D301-D303 (2007)). В результате, 1ZEA было выбрано как имеющее самую высокую гомологию последовательности с вариабельной областью тяжелой цепи TINA1, среди антител, имеющих подобную делецию в их каркасах. Также, 3IU4 было выбрано как имеющее самую высокую гомологию последовательности с вариабельной областью легкой цепи TINA1. Трехмерные структуры каркасных областей были получены в качестве "каркасной модели" путем комбинирования координат 1ZEA и 3IU4, соответствующих тяжелой цепи и легкой цепи TINA1. Затем типичную конформацию каждой CDR встраивали в каркасную модель.
В завершение, осуществляли расчет энергии для исключения неблагоприятного межатомного контакта для получения возможных молекулярных моделей вариабельных областей TINA1 с точки зрения энергии. Эти процедуры осуществляли с использованием коммерчески доступной программы прогнозирования трехмерных белковых структур Discovery Studio (Accelrys, Inc.).
[0189]
6-1-2) Конструирование аминокислотной последовательности для гуманизированного TINA1
Гуманизированное TINA1 антитело конструировали способом, известным в данной области техники как прививка CDR (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 10029-10033 (1989)). Акцепторное антитело выбирали на основании гомологии аминокислот в каркасных областях. Последовательности каркасных областей TINA1 сравнивали с последовательностями всех человеческих каркасных областей, зарегистрированных в базе данных Kabat (Nuc. Acid Res., 29, 205-206 (2001)) аминокислотных последовательностей антител. В результате, HuPR1A3 антитело было выбрано в качестве акцептора на основании 74% гомологии его последовательности, что касается каркасных областей. Аминокислотные остатки каркасных областей в HuPR1A3 выравнивали с аминокислотными остатками каркасных областей TINA1 для определения положений аминокислот, которые не совпадали в этих последовательностях. Положения этих остатков анализировали с использованием трехмерной модели TINA1, сконструированной выше. Затем, донорные остатки для прививки на акцептор выбирали в соответствии с критериями, указанными в Queen et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 10029-10033 (1989)). Некоторые донорные остатки, выбранные таким образом, переносили в акцепторное антитело для конструирования последовательности гуманизированного TINA1, описанной в Примерах ниже.
[0190]
6-2) Гуманизация тяжелой цепи TINA1
6-2-1) Тяжелая цепь hTINA1-H1-типа:
Гуманизированная тяжелая цепь TINA1, сконструированная с использованием замены аминокислоты в положении 21 (изолейцин) валином, аминокислоты в положении 28 (пролин) аланином, аминокислоты в положении 30 (лейцин) валином, аминокислоты в положении 35 (глутаминовая кислота) аланином, аминокислоты в положении 36 (треонин) серином, аминокислоты в положении 38 (аргинин) лизином, аминокислоты в положении 39 (изолейцин) валином, аминокислоты в положении 57 (глутамин) аргинином, аминокислоты в положении 58 (лизин) глутамином, аминокислоты в положении 59 (метионин) аланином, аминокислоты в положении 62 (лизин) глутамином, аминокислоты в положении 65 (лизин) глутаминомовой кислотой, аминокислоты в положении 67 (изолейцин) метионином, аминокислоты в положении 87 (фенилаланин) валином, аминокислоты в положении 88 (аланин) треонином, аминокислоты в положении 89 (фенилаланин) изолейцином, аминокислоты в положении 91 (лейцин) аланином, аминокислоты в положении 92 (глутаминовая кислота) аспарагиновой кислотой, аминокислоты в положении 95 (аланин) треонином, аминокислоты в положении 102 (изолейцин) лейцином, аминокислоты в положении 104 (аспарагин) серином, аминокислоты в положении 107 (аспарагин) серином, аминокислоты в положении 111 (треонин) аланином, аминокислоты в положении 112 (треонин) валином, аминокислоты в положении 114 (фенилаланин) тирозином, аминокислоты в положении 132 (аланин) глутамином и аминокислоты в положении 135 (аланин) лейцином, что касается тяжелой цепи TINA1, показанной в SEQ ID NO: 8 в Перечне последовательностей, была обозначена как "тяжелая цепь hTINA1-H1-типа".
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи hTINA1-H1-типа описана в SEQ ID NO: 12 в Перечне последовательностей. Последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 1-19, последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 20-140, и последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 141-470, в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12 соответствуют сигнальной последовательности, вариабельной области тяжелой цепи и константной области тяжелой цепи, соответственно. Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, описана в SEQ ID NO: 11 в Перечне последовательностей. Последовательность, состоящая из нуклеотидов 1-57, последовательность, состоящая из нуклеотидов 58-420, и последовательность, состоящая из нуклеотидов 421-1410, в нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 11 кодируют сигнальную последовательность, последовательность вариабельной области тяжелой цепи и последовательность константной области тяжелой цепи, соответственно. Нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 11 и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 12 также описаны на Фиг. 3.
[0191]
6-2-2) Тяжелая цепь hTINA1-H2-типа:
Гуманизированная тяжелая цепь TINA1, сконструированная с использованием замены аминокислоты в положении 21 (изолейцин) валином, аминокислоты в положении 28 (пролин) аланином, аминокислоты в положении 30 (лейцин) валином, аминокислоты в положении 35 (глутаминовая кислота) аланином, аминокислоты в положении 36 (треонин) серином, аминокислоты в положении 38 (аргинин) лизином, аминокислоты в положении 39 (изолейцин) валином, аминокислоты в положении 57 (глутамин) аргинином, аминокислоты в положении 58 (лизин) глутамином, аминокислоты в положении 59 (метионин) аланином, аминокислоты в положении 62 (лизин) глутамином, аминокислоты в положении 65 (лизин) глутаминомовой кислотой, аминокислоты в положении 67 (изолейцин) метионином, аминокислоты в положении 87 (фенилаланин) валином, аминокислоты в положении 88 (аланин) треонином, аминокислоты в положении 89 (фенилаланин) изолейцином, аминокислоты в положении 92 (глутаминовая кислота) аспарагиновой кислотой, аминокислоты в положении 95 (аланин) треонином, аминокислоты в положении 102 (изолейцин) лейцином, аминокислоты в положении 104 (аспарагин) серином, аминокислоты в положении 107 (аспарагин) серином, аминокислоты в положении 111 (треонин) аланином, аминокислоты в положении 112 (треонин) валином, аминокислоты в положении 114 (фенилаланин) тирозином, аминокислоты в положении 132 (аланин) глутамином и аминокислоты в положении 135 (аланин) лейцином, что касается тяжелой цепи TINA1, показанной в SEQ ID NO: 8 в Перечне последовательностей, была обозначена как "тяжелая цепь hTINA1-H2-типа".
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи hTINA1-H2-типа описана в SEQ ID NO: 14 в Перечне последовательностей. Последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 1-19, последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 20-140, и последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 141-470, в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 14 соответствуют сигнальной последовательности, вариабельной области тяжелой цепи и константной области тяжелой цепи, соответственно. Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, описана в SEQ ID NO: 13 в Перечне последовательностей. Последовательность, состоящая из нуклеотидов 1-57, последовательность, состоящая из нуклеотидов 58-420, и последовательность, состоящая из нуклеотидов 421-1410, в нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 13 кодируют сигнальную последовательность, последовательность вариабельной области тяжелой цепи и последовательность константной области тяжелой цепи, соответственно. Нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 13 и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 14 также описаны на Фиг. 4.
[0192]
6-2-3) Тяжелая цепь hTINA1-H3-типа:
Гуманизированная тяжелая цепь TINA1, сконструированная с использованием замены аминокислоты в положении 28 (пролин) аланином, аминокислоты в положении 30 (лейцин) валином, аминокислоты в положении 36 (треонин) серином, аминокислоты в положении 38 (аргинин) лизином, аминокислоты в положении 39 (изолейцин) валином, аминокислоты в положении 58 (лизин) глутамином, аминокислоты в положении 65 (лизин) глутаминомовой кислотой, аминокислоты в положении 67 (изолейцин) метионином, аминокислоты в положении 87 (фенилаланин) валином, аминокислоты в положении 88 (аланин) треонином, аминокислоты в положении 92 (глутаминовая кислота) аспарагиновой кислотой, аминокислоты в положении 95 (аланин) треонином, аминокислоты в положении 102 (изолейцин) лейцином, аминокислоты в положении 104 (аспарагин) серином, аминокислоты в положении 107 (аспарагин) серином, аминокислоты в положении 111 (треонин) аланином, аминокислоты в положении 112 (треонин) валином, аминокислоты в положении 114 (фенилаланин) тирозином, аминокислоты в положении 132 (аланин) глутамином и аминокислоты в положении 135 (аланин) лейцином, что касается тяжелой цепи TINA1, показанной в SEQ ID NO: 8 в Перечне последовательностей, была обозначена как "тяжелая цепь hTINA1-H3-типа ".
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи hTINA1-H3-типа описана в SEQ ID NO: 16 в Перечне последовательностей. Последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 1-19, последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 20-140 и последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 141-470, в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16 соответствуют сигнальной последовательности, вариабельной области тяжелой цепи и константной области тяжелой цепи, соответственно. Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, описана в SEQ ID NO: 15 в Перечне последовательностей. Последовательность, состоящая из нуклеотидов 1-57, последовательность, состоящая из нуклеотидов 58-420, и последовательность, состоящая из нуклеотидов 421-1410, в нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 15 кодируют сигнальную последовательность, последовательность вариабельной области тяжелой цепи и последовательность константной области тяжелой цепи, соответственно. Нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 15 и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 16 также описаны на Фиг. 5.
[0193]
6-3) Гуманизация легкой цепи TINA1
6-3-1) Легкая цепь hTINA1-L1-типа:
Гуманизированная легкая цепь TINA1, сконструированная с использованием замены аминокислоты в положении 23 (валин) глутамином, аминокислоты в положении 28 (гистидин) пролином, аминокислоты в положении 29 (лизин) серином, аминокислоты в положении 30 (фенилаланин) серином, аминокислоты в положении 31 (метионин) лейцином, аминокислоты в положении 33 (треонин) аланином, аминокислоты в положении 40 (серин) треонином, аминокислоты в положении 62 (глутамин) лизином, аминокислоты в положении 63 (серин) аланином, аминокислоты в положении 80 (аспарагиновая кислота) серином, аминокислоты в положении 83 (треонин) серином, аминокислоты в положении 90 (аланин) аспарагиновой кислотой, аминокислоты в положении 93 (фенилаланин) лейцином, аминокислоты в положении 98 (валин) лейцином, аминокислоты в положении 100 (аланин) пролином, аминокислоты в положении 103 (лейцин) фенилаланином, аминокислоты в положении 120 (аланин) глутамином, аминокислоты в положении 126 (лейцин) изолейцином и аминокислоты в положении 129 (аланин) треонином, что касается TINA1 легкой цепи, показанной в SEQ ID NO: 10 в Перечне последовательностей, была обозначена как "легкая цепь hTINA1-L1-типа".
Аминокислотная последовательность легкой цепи hTINA1-L1-типа описана в SEQ ID NO: 18 в Перечне последовательностей. Последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 1-20, последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 21-129, и последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 130-234, в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18 соответствуют сигнальной последовательности, вариабельной области легкой цепи и константной области легкой цепи, соответственно. Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18, описана в SEQ ID NO: 17 в Перечне последовательностей. Последовательность, состоящая из нуклеотидов 1-60, последовательность, состоящая из нуклеотидов 61-387, и последовательность, состоящая из нуклеотидов 388-702, в нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 17 кодируют сигнальную последовательность, последовательность вариабельной области легкой цепи и последовательность константной области легкой цепи, соответственно. Нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 17 и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 18 также описаны на Фиг. 6.
[0194]
6-3-2) Легкая цепь hTINA1-L2-типа:
Гуманизированная легкая цепь TINA1, сконструированная с использованием замены аминокислоты в положении 28 (гистидин) пролином, аминокислоты в положении 29 (лизин) серином, аминокислоты в положении 30 (фенилаланин) серином, аминокислоты в положении 31 (метионин) лейцином, аминокислоты в положении 33 (треонин) аланином, аминокислоты в положении 40 (серин) треонином, аминокислоты в положении 62 (глутамин) лизином, аминокислоты в положении 63 (серин) аланином, аминокислоты в положении 80 (аспарагиновая кислота) серином, аминокислоты в положении 83 (треонин) серином, аминокислоты в положении 90 (аланин) аспарагиновой кислотой, аминокислоты в положении 93 (фенилаланин) лейцином, аминокислоты в положении 98 (валин) лейцином, аминокислоты в положении 100 (аланин) пролином, аминокислоты в положении 103 (лейцин) фенилаланином, аминокислоты в положении 120 (аланин) глутамином, аминокислоты в положении 126 (лейцин) изолейцином и аминокислоты в положении 129 (аланин) треонином, что касается легкой цепи TINA1, показанной в SEQ ID NO: 10 в Перечне последовательностей, была обозначена как "легкая цепь hTINA1-L2-типа".
Аминокислотная последовательность легкой цепи hTINA1-L2-типа описана в SEQ ID NO: 20 в Перечне последовательностей. Последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 1-20, последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 21-129, и последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 130-234, в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20 соответствуют сигнальной последовательности, вариабельной области легкой цепи и константной области легкой цепи, соответственно. Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, описана в SEQ ID NO: 19 в Перечне последовательностей. Последовательность, состоящая из нуклеотидов 1-60, последовательность, состоящая из нуклеотидов 61-387, и последовательность, состоящая из нуклеотидов 388-702, в нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 19 кодируют сигнальную последовательность, последовательность вариабельной области легкой цепи и последовательность константной области легкой цепи, соответственно. Нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 19 и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 20 также описаны на Фиг. 7.
[0195]
6-3-3) Легкая цепь hTINA1-L3-типа:
Гуманизированная легкая цепь TINA1, сконструированная с использованием замены аминокислоты в положении 28 (гистидин) пролином, аминокислоты в положении 29 (лизин) серином, аминокислоты в положении 30 (фенилаланин) серином, аминокислоты в положении 31 (метионин) лейцином, аминокислоты в положении 33 (треонин) аланином, аминокислоты в положении 40 (серин) треонином, аминокислоты в положении 62 (глутамин) лизином, аминокислоты в положении 63 (серин) глутамином, аминокислоты в положении 80 (аспарагиновая кислота) серином, аминокислоты в положении 83 (треонин) серином, аминокислоты в положении 90 (аланин) аспарагиновой кислотой, аминокислоты в положении 93 (фенилаланин) лейцином, аминокислоты в положении 98 (валин) лейцином, аминокислоты в положении 100 (аланин) пролином, аминокислоты в положении 103 (лейцин) фенилаланином, аминокислоты в положении 120 (аланин) глутамином, аминокислоты в положении 126 (лейцин) изолейцином и аминокислоты в положении 129 (аланин) треонином, что касается TINA1 легкой цепи, показанной в SEQ ID NO: 10 в Перечне последовательностей, была обозначена как "легкая цепь hTINA1-L3-типа".
Аминокислотная последовательность легкой цепи hTINA1-L3-типа описана в SEQ ID NO: 22 в Перечне последовательностей. Последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 1-20, последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 21-129, и последовательность, состоящая из аминокислотных остатков 130-234, в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 22 соответствуют сигнальной последовательности, вариабельной области легкой цепи и константной области легкой цепи, соответственно. Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, описана в SEQ ID NO: 21 в Перечне последовательностей. Последовательность, состоящая из нуклеотидов 1-60, последовательность, состоящая из нуклеотидов 61-387, и последовательность, состоящая из нуклеотидов 388-702, в нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 21 кодируют сигнальную последовательность, последовательность вариабельной области легкой цепи и последовательность константной области легкой цепи, соответственно. Нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 21 и аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 22 также описаны на Фиг. 8.
[0196]
[Пример 7: Конструирование вектора для экспрессии hTINA1 антитела и получение антитела]
7-1) Конструирование вектора для экспрессии тяжелой цепи hTINA1
7-1-1) Конструирование вектора для экспрессии hTINA1-H1
Cинтезировали (GeneArt Artificial Gene Sequence service) ДНК фрагмент, содержащий последовательность ДНК, кодирующую вариабельную область hTINA1-H1, показаную в положениях нуклеотидов 36-437 нуклеотидной последовательности hTINA1-H1, представленной в SEQ ID NO: 11 в Перечне последовательностей. ДНК фрагмент, содержащий последовательность ДНК, кодирующую вариабельную область hTINA1-H1, амплифицировали с использованием синтезированного ДНК фрагмента в качестве матрицы, KOD-Plus-(Toyobo Co., Ltd.) и набора праймеров, описанного ниже, и вставляли в расщепленный рестрикционным ферментом BlpI сайт pCMA-G1 вектора экспрессии химерной и гуманизированной тяжелой цепи IgG1-типа с использованием набора In-Fusion HD PCR Cloning Kit (Clontech Laboratories, Inc.) для конструирования вектора экспрессии hTINA1-H1. Полученный вектор экспрессии был обозначен как "pCMA-G1/hTINA1-H1".
Набор праймеров
5'-agctcccagatgggtgctgagc-3' (SEQ ID NO: 41: праймер EG-Inf-F)
5'-gggcccttggtggaggctgagc-3' (SEQ ID NO: 42: праймер EG1-Inf-R)
[0197]
7-1-2) Конструирование вектора для экспрессии hTINA1-H2
Cинтезировали (GeneArt Artificial Gene Sequence service) ДНК фрагмент, содержащий последовательность ДНК, кодирующую вариабельную область hTINA1-H2, показанную в положениях нуклеотидов 36-437 нуклеотидной последовательности hTINA1-H2, представленной в SEQ ID NO: 13 в Перечне последовательностей, и вектор экспрессии hTINA1-H2 конструировали таким же способом, как в Примере 7-1-1). Полученный вектор экспрессии был обозначен как "pCMA-G1/hTINA1-H2".
[0198]
7-1-3) Конструирование вектора для экспрессии hTINA1-H3
Cинтезировали (GeneArt Artificial Gene Sequence service) ДНК фрагмент, содержащий последовательность ДНК, кодирующую вариабельную область hTINA1-H3, показанную в положениях нуклеотидов 36-437 нуклеотидной последовательности hTINA1-H3, представленной в SEQ ID NO: 15 в Перечне последовательностей, и конструировали вектор экспрессии hTINA1-H3 таким же способом, как в Примере 7-1-1). Полученный вектор экспрессии был обозначен как "pCMA-G1/hTINA1-H3".
[0199]
7-2) Конструирование вектора экспрессии легкой цепи hTINA1
7-2-1) Конструирование вектора экспрессии hTINA1-L1
Cинтезировали (GeneArt Artificial Gene Sequence service) ДНК фрагмент, содержащий последовательность ДНК, кодирующую вариабельную область hTINA1-L1, показанную в положениях нуклеотидов 38-402 нуклеотидной последовательности hTINA1-L1, представленной в SEQ ID NO: 17 в Перечне последовательностей. ДНК фрагмент, содержащий последовательность ДНК, кодирующую вариабельную область hTINA1-L1, амплифицировали с использованием синтезированного ДНК фрагмента в качестве матрицы, KOD-Plus-(Toyobo Co., Ltd.) и набора праймеров, описанного ниже, и вставляли в расщепленный рестрикционным ферментом BsiWl сайт вектора pCMA-LK для экспрессии легкой цепи химерного и гуманизированного антитела с использованием набора In-Fusion HD PCR Cloning Kit (Clontech Laboratories, Inc.) для конструирования вектора экспрессии hTINA1-L1. Полученный вектор экспрессии был обозначен как "pCMA-LK/hTINA1-L1".
Набор праймеров
5'-ctgtggatctccggcgcgtacggc-3' (SEQ ID NO: 43: праймер CM-LKF)
5'-ggagggggcggccaccgtacg-3' (SEQ ID NO: 44: праймер KCL-Inf-R)
[0200]
7-2-2) Конструирование вектора для экспрессии hTINA1-L2
Cинтезировали (GeneArt Artificial Gene Sequence service) ДНК фрагмент, содержащий последовательность ДНК, кодирующую вариабельную область hTINA1-L2, показанную в положениях нуклеотидов 38-402 нуклеотидной последовательности hTINA1-L2, представленной в SEQ ID NO: 19 в Перечне последовательностей, и конструировали вектор экспрессии hTINA1-L2 таким же способом, как в Примере 7-2-1). Полученный вектор экспрессии был обозначен как "pCMA-LK/hTINA1-L2".
[0201]
7-2-3) Конструирование вектора экспрессии hTINA1-L3
Cинтезировали (GeneArt Artificial Gene Sequence service) ДНК фрагмент, содержащий последовательность ДНК, кодирующую вариабельную область hTINA1-L3, показанную в положениях нуклеотидов 38-402 нуклеотидной последовательности hTINA1-L3, представленной в SEQ ID NO: 21 в Перечне последовательностей, и вектор экспрессии hTINA1-L3 конструировали таким же способом, как в Примере 7-2-1). Полученный вектор экспрессии был обозначен как "pCMA-LK/hTINA1-L3".
[0202]
7-3) Получение и очистка hTINA1 антитела
7-3-1) Маломасштабное получение hTINA1 антитела
Каждое антитело получали таким же способом, как в Примере 5-2-5).
hTINA1 антитело, полученное путем комбинации pCMA-G1/hTINA1-H1 и pCMA-LK/hTINA1-L1, было обозначено как "hTINA1-H1L1"; hTINA1 антитело, полученное путем комбинации pCMA-G1/hTINA1-H2 и pCMA-LK/hTINA1-L1, было обозначено как "hTINA1-H2L1"; hTINA1 антитело, полученное путем комбинации pCMA-G1/hTINA1-H2 и pCMA-LK/hTINA1-L2, было обозначено как "hTINA1-H2L2"; и hTINA1 антитело, полученное путем комбинации pCMA-G1/hTINA1-H3 и pCMA-LK/hTINA1-L3, было обозначено как "hTINA1-H3L3".
[0203]
7-3-2) Получение hTINA1 антитела
hTINA1-H1L1, hTINA1-H2L1, hTINA1-H2L2 и hTINA1-H3L3 получали следующим способом.
FreeStyle 293F клетки (Invitrogen Corp.) субкультивировали и культивировали в соответствии с инструкциями. 1,2×109 FreeStyle 293F клеток (Invitrogen Corp.) в логарифмической фазе роста высевали в 3-л колбу Фернбаха Эрленмейера (Corning Inc.), затем разбавляли средой для экспрессии FreeStyle 293 (Invitrogen Corp.) до 1,0×106 клеток/мл и затем культивировали при встряхивании при 90 об/мин в течение 1 часа в 8% CO2 инкубаторе при 37°C. Полиэтиленимин (Polyscience #24765; 3,6 мг) растворяли в Opti-Pro SFM (Invitrogen Corp.; 20 мл). Затем вектор экспрессии легкой цепи (0,8 мг) и вектор экспрессии тяжелой цепи (0,4 мг), полученные с использованием набора плазмид PureLink HiPure (Invitrogen Corp.) добавляли к Opti-Pro SFM (Invitrogen Corp.; 20 мл). Смешанный раствор вектор экспрессии/Opti-Pro SFM (20 мл) добавляли к полиэтиленимин/Opti-Pro SFM смешанному раствору (20 мл) и смесь осторожно перемешивали, затем оставляли на 5 минут и затем добавляли к FreeStyle 293F клеткам. Культуральный супернатант, полученный путем встряхивания культуры при 90 об/мин в течение 7 дней в 8% CO2 инкубаторе при 37°C, фильтровали через одноразовый капсульный фильтр (ADVANTEC #CCS-045-E1H).
[0204]
7-3-3) Очистка hTINA1 антитела
Каждое антитело очищали из культурльного супернатанта, полученного в 7-3-2) выше, в две стадии с использованием rProtein A аффинной хроматографии (4-6°C) и керамического гидроксиапатита (комнатная температура). Стадии замены буфера после очистка rProtein A аффинной хроматографией и после очистки керамическим гидроксиапатитом осуществляли при 4-6°C. Сначала культуральный супернатант наносили на MabSelect SuRe (изготовитель GE Healthcare Japan Corporation, HiTrap колонка), уравновешенную при помощи PBS. После введения всего культурального супернатанта в колонку, колонку промывали при помощи PBS в количестве, составляющем по меньшей мере два объема колонки. Затем антитело-содержащие фракции собирали путем элюирования раствором 2 M аргинингидрохлорида (pH 4,0). Осуществляли замену буфера в фракциях на PBS путем диализа (Thermo Fisher Scientific, Inc., Slide-A-Lyzer Dialysis Cassette) и затем разбавляли 5-кратно буфером 5 мМ фосфата натрия и 50 мМ MES (pH 7,0). Полученный раствор антитела наносили на колонку с керамическим гидроксиапатитом (Bio-Rad Laboratories, Inc., Bio-Scale CHT Type-I Hydroxyapatite Column), уравновешенную буфером 5 мМ NaPi, 50 мМ MES и 30 мМ NaCl (pH 7,0). Антитело-содержащие фракции собирали путем элюирования с линейным градиентом концентрации с использованием хлорида натрия. Осуществляли замену буфера в фракциях на HBSor (25 мМ гистидина/5% сорбита, pH 6,0) путем диализа (Thermo Fisher Scientific, Inc., Slide-A-Lyzer Dialysis Cassette). В завершение, фракции концентрировали и доводили до IgG концентрации 20 мг/мл или выше с использованием центрифужного UF фильтровального устройства VIVASPIN 20 (отсечка молекулярной массы: UF10K, Sartorius AG, 4°C) и использовали в качестве очищенного образца.
[0205]
[Ссылочный Пример 1: Получение вектора экспрессии hRS7 антитела и получение антитела]
hRS7 антитело получали на основании аминокислотных последовательностей легкой цепи и тяжелой цепи, описанных в Международной публикации № WO 2003/074566.
1-1) Конструирование вектора экспрессии тяжелой цепи hRS7 антитела
Cинтезировали (GeneArt Artificial Gene Sequence service) ДНК фрагмент, содержащий последовательность ДНК, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи hRS7 антитела, показанную в положениях нуклеотидов 36-437 нуклеотидной последовательности тяжелой цепи hRS7 антитела, представленной в SEQ ID NO: 29 в Перечне последовательностей, и вектор экспрессии тяжелой цепи hRS7 антитела конструировали таким же способом, как в Примере 7-1-1). Полученный вектор экспрессии был обозначен как "pCMA-G1/hRS7". Аминокислотная последовательность тяжелой цепи hRS7 антитела показана в SEQ ID NO: 30 в Перечне последовательностей.
[0206]
1-2) Конструирование вектора экспрессии легкой цепи hRS7 антитела
Cинтезировали (GeneArt Artificial Gene Sequence service) ДНК фрагмент, содержащий последовательность ДНК, кодирующую вариабельную область легкой цепи hRS7 антитела, показанную в положениях нуклеотидов 38-402 нуклеотидной последовательности легкой цепи hRS7 антитела, представленной в SEQ ID NO: 31 в Перечне последовательностей, и вектор экспрессии легкой цепи hRS7 антитела конструировали таким же способом, как в Примере 7-2-1). Полученный вектор экспрессии был обозначен как "pCMA-LK/hRS7". Аминокислотная последовательность тяжелой цепи hRS7 антитела показана в SEQ ID NO: 32 в Перечне последовательностей.
[0207]
1-3) Получение и очистка hRS7 антитела
1-3-1) Получение hRS7 антитела
hRS7 антитело получали таким же способом, как в Примере 7-3-2), комбинированием pCMA-G1/hRS7 и pCMA-LK/hRS7.
[0208]
1-3-2) Очистка hRS7 антитела
Антитело очищали из культурльного супернатанта, полученного в 1-3-1), таким же способом, как в Примере 7-3-3).
[0209]
[Пример 8: Измерение аффинности связывания с антигеном hTINA1 антитела и hRS7 антитела]
8-1) Измерение аффинности связывания с антигеном с использованием антитела (культуральный супернатант), полученного в малом масштабе
Каждое антитело анализировали на его константу диссоциации для антигена (Recombinant Human TROP-2 Fc chimera) с использованием Biacore 3000 (GE Healthcare Japan Corporation) способом захвата антитела в виде лиганда на иммобилизованном анти-человеческом IgG (Fab) антителе и анализа антигена в качестве аналита. Около 2000 RU анти-человеческого IgG (Fab) антитела (Human Fab capture kit, GE Healthcare Japan Corporation) ковалентно связывали с сенсорным чипом CM5 (BIAcore, Inc.) способом аминного связывания. Подобным образом, это антитело было иммобилизовано на эталонной проточной ячейке. Используемый подвижный буфер представлял собой HBS-EP+ (10 мМ HEPES pH 7,4, 0,15 M NaCl, 3 мМ EDTA, 0,05% Поверхностно-активное вещество P20). Культуральный супернатант, содержащий антитело, добавляли в течение 80 секунд на чип с иммобилизованным анти-человеческим IgG (Fab) антителом и затем серийные разведения антигена (1-1000 нМ) каждое добавляли при скорости потока 30 мкл/мин в течение 300 секунд. Затем фазу диссоциации контролировали в течение 600 секунд. Добавляли 10 мМ Gly-HCl (pH 1,5), содержащий 20% ДМСО, в качестве восстанавливающего раствора при скорости потока 10 мкл/мин в течение 60 секунд. Данные анализировали с использованием модели бивалентного связывания аналитической программы (BIAevaluation software, version 4.1) для расчета константы скорости ассоциации kon, константы скорости диссоциации koff и константы диссоциации (KD; KD=koff/kon).
[0210]
Таблица 1 | ||
Название | KD (M) |
|
1 | hTINA1-H1L1 | 6,3E-08 |
2 | hTINA1-H2L1 | 6,9E-08 |
3 | hTINA1-H2L2 | 7,1E-08 |
4 | hTINA1-H3L3 | 5,8E-08 |
5 | cTINA1 | 5,6E-08 |
Связывающая активность с использованием культурального супернатанта в качестве образца антитела
[0211]
8-2) Измерение аффинности связывания с антигеном с использованием очищенного антитела
Каждое антитело анализировали на его константу диссоциации для антигена (Recombinant Human TROP-2 Fc chimera) с использованием Biacore 3000 (GE Healthcare Japan Corporation) способом захвата антитела в виде лиганда на иммобилизованном анти-человеческом IgG (Fab) антителе и анализа антигена в качестве аналита. Около 2000 RU анти-человеческого IgG (Fab) антитела (Human Fab capture kit, GE Healthcare Japan Corporation) ковалентно связывали с сенсорным чипом CM5 (BIAcore, Inc.) способом аминного связывания. Подобным образом, это антитело было иммобилизовано на эталонной проточной ячейке. Используемый подвижный буфер представлял собой HBS-EP+ (10 мМ HEPES pH 7,4, 0,15 M NaCl, 3 мМ EDTA, 0,05% Поверхностно-активное вещество P20). Антитело добавляли в течение 1 минуты на чип с иммобилизованным анти-человеческим IgG (Fab) антителом и затем серийные разведения антигена (1-1000 нМ) каждое добавляли при скорости потока 30 мкл/мин в течение 300 секунд. Затем фазу диссоциации контролировали в течение 600 секунд. Добавляли два раза 25 мМ NaOH, разбавленного подвижным буфером, в качестве восстанавливающего раствора при скорости потока 100 мкл/мин в течение 3 секунд. Данные анализировали таким же способом, как описано выше.
[0212]
Таблица 2 | ||
Название | KD (M) |
|
1 | hTINA1-H1L1 | 2,7E-08 |
2 | hTINA1-H2L1 | 3,0E-08 |
3 | hTINA1-H2L2 | 2,7E-08 |
4 | hTINA1-H3L3 | 1,5E-08 |
5 | hRS7 | 3,0E-10 |
Измерение связывающей активности с использованием очищенного антитела в качестве образца антитела
[0213]
[Пример 9: Получение hTINA1-H1L1 ADC (1)]
[0214]
[Формула 25]
[0215]
Стадия 1: трет-Бутил (4-{[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-4-оксобутил)карбамат
4-(трет-Бутоксикарбониламино)бутановую кислоту (0,237 г, 1,13 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли N-гидроксисукцинимид (0,130 г, 1,13 ммоль) и 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорид (0,216 г, 1,13 ммоль) и перемешивали в течение 1 часа. Реакционный раствор добавляли по каплям к раствору N,N-диметилформамида (10 мл), содержащего экзатекан мезилат (0,500 г, 0,94 ммоль) и триэтиламин (0,157 мл, 1,13 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 дня. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле [хлороформ-хлороформ:метанол=8:2 (об/об)] с получением указанного в заголовке соединения (0,595 г, количественный выход).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 0,87 (3H, т, J=7,2 Гц), 1,31 (9H, с), 1,58 (1H, т, J=7,2 Гц), 1,66 (2H, т, J=7,2 Гц), 1,89-1,82 (2H, м), 2,12-2,21 (3H, м), 2,39 (3H, с), 2,92 (2H, т, J=6,5 Гц), 3,17 (2H, с), 5,16 (1H, д, J=19,2 Гц), 5,24 (1H, д, J=18,8 Гц), 5,42 (2H, с), 5,59-5,55 (1H, м), 6,53 (1H, с), 6,78 (1H, т, J=6,3 Гц), 7,30 (1H, с), 7,79 (1H, д, J=11,0 Гц), 8,40 (1H, д, J=8,6 Гц).
MS (APCI) m/z: 621 (M+H)+.
[0216]
Стадия 2: 4-Амино-N-[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]бутанамид трифторацетат
Соединение (0,388 г, 0,61 ммоль), полученное на Стадии 1 выше, растворяли в дихлорметане (9 мл). Добавляли трифторуксусную кислоту (9 мл) и смесь перемешивали в течение 4 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученные остатки очищали колоночной хроматографией на силикагеле [хлороформ-разделенный органический слой хлороформ:метанол:вода=7:3:1 (об./об./об.)] с получением указанного в заголовке соединения (0,343 г, количественный выход).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 0,87 (3H, т, J=7,2 Гц), 1,79-1,92 (4H, м), 2,10-2,17 (2H, м), 2,27 (2H, т, J=7,0 Гц), 2,40 (3H, с), 2,80-2,86 (2H, м), 3,15-3,20 (2H, м), 5,15 (1H, д, J=18,8 Гц), 5,26 (1H, д, J=18,8 Гц), 5,42 (2H, с), 5,54-5,61 (1H, м), 6,55 (1H, с), 7,32 (1H, с), 7,72 (3H, шир.с), 7,82 (1H, д, J=11,0 Гц), 8,54 (1H, д, J=8,6 Гц).
MS (APCI) m/z: 521 (M+H)+.
[0217]
Стадия 3: N-(трет-Бутоксикарбонил)глицилглицил-L-фенилаланил-N-(4-{[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-4-оксобутил)глицинамид
N-(трет-Бутоксикарбонил)глицилглицил-L-фенилаланилглицин (0,081 г, 0,19 ммоль) растворяли в дихлорметане (3 мл), добавляли N-гидроксисукцинимид (0,021 г, 0,19 моль) и 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорид (0,036 г, 0,19 ммоль) и затем перемешивали в течение 3,5 часов. Реакционный раствор добавляли по каплям к раствору N,N-диметилформамида (1,5 мл), содержащего соединение (0,080 г, 0,15 ммоль), полученное на Стадии 2 выше, и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученные остатки очищали колоночной хроматографией на силикагеле [хлороформ-хлороформ:метанол=8:2 (об./об.)] с получением указанного в заголовке соединения (0,106 г, 73%).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 0,87 (3H, т, J=7,4 Гц), 1,36 (9H, с), 1,71 (2H, м), 1,86 (2H, т, J=7,8 Гц), 2,15-2,19 (4H, м), 2,40 (3H, с), 2,77 (1H, дд, J=12,7, 8,8 Гц), 3,02 (1H, дд, J=14,1, 4,7 Гц), 3,08-3,11 (2H, м), 3,16-3,19 (2H, м), 3,54 (2H, д, J=5,9 Гц), 3,57-3,77 (4H, м), 4,46-4,48 (1H, м), 5,16 (1H, д, J=19,2 Гц), 5,25 (1H, д, J=18,8 Гц), 5,42 (2H, с), 5,55-5,60 (1H, м), 6,53 (1H, с), 7,00 (1H, т, J=6,3 Гц), 7,17-7,26 (5H, м), 7,31 (1H, с), 7,71 (1H, т, J=5,7 Гц), 7,80 (1H, д, J=11,0 Гц), 7,92 (1H, т, J=5,7 Гц), 8,15 (1H, д, J=8,2 Гц), 8,27 (1H, т, J=5,5 Гц), 8,46 (1H, д, J=8,2 Гц).
MS (APCI) m/z: 939 (M+H)+.
[0218]
Стадия 4: Глицилглицил-L-фенилаланил-N-(4-{[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-4-оксобутил)глицинамид трифторацетат
Соединение (1,97 г, 2,10 ммоль), полученное на Стадии 3 выше, растворяли в дихлорметане (7 мл). После добавления трифторуксусной кислоты (7 мл) смесь перемешивали в течение 1 часа. Растворитель удаляли при пониженном давлении и к смеси добавляли толуол для азеотропной перегонки. Полученные остатки очищали колоночной хроматографией на силикагеле [хлороформ-разделенный органический слой хлороформ:метанол:вода=7:3:1 (об/об/об)] с получением указанного в заголовке соединения (1,97 г, 99%).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 0,87 (3H, т, J=7,4 Гц), 1,71-1,73 (2H, м), 1,82-1,90 (2H, м), 2,12-2,20 (4H, м), 2,40 (3H, с), 2,75 (1H, дд, J=13,7, 9,4 Гц), 3,03-3,09 (3H, м), 3,18-3,19 (2H, м), 3,58-3,60 (2H, м), 3,64 (1H, д, J=5,9 Гц), 3,69 (1H, д, J=5,9 Гц), 3,72 (1H, д, J=5,5 Гц), 3,87 (1H, дд, J=16,8, 5,9 Гц), 4,50-4,56 (1H, м), 5,16 (1H, д, J=19,2 Гц), 5,25 (1H, д, J=18,8 Гц), 5,42 (2H, с), 5,55-5,60 (1H, м), 7,17-7,27 (5H, м), 7,32 (1H, с), 7,78-7,81 (2H, м), 7,95-7,97 (3H, м), 8,33-8,35 (2H, м), 8,48-8,51 (2H, м).
MS (APCI) m/z: 839 (M+H)+.
[0219]
Стадия 5: N-{3-[2-(2-{[3-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)пропаноил]амино}этокси)этокси]пропаноил}глицилглицил-L-фенилаланил-N-(4-{[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-4-оксобутил)глицинамид
К раствору соединения (100 мг, 0,119 ммоль), полученного на Стадии 4 выше, в N,N-диметилформамиде (1,20 мл) добавляли диизопропилэтиламин (20,8 мкл, 0,119 ммоль) и N-сукцинимидил 3-(2-(2-(3-малеинимидпропанамид)этокси)этокси)пропаноат (50,7 мг, 0,119 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученные остатки очищали колоночной хроматографией на силикагеле [хлороформ-хлороформ:метанол=5:1 (об./об.)] с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (66,5 мг, 48%).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 0,85 (3H, т, J=7,4 Гц), 1,65-1,74 (2H, м), 1,77-1,90 (2H, м), 2,07-2,19 (4H, м), 2,30 (2H, т, J=7,2 Гц), 2,33-2,36 (2H, м), 2,38 (3H, с), 2,76 (1H, дд, J=13,7, 9,8 Гц), 2,96-3,18 (9H, м), 3,42-3,44 (4H, м), 3,53-3,76 (10H, м), 4,43 (1H, тд, J=8,6, 4,7 Гц), 5,14 (1H, д, J=18,8 Гц), 5,23 (1H, д, J=18,8 Гц), 5,38 (1H, д, J=17,2 Гц), 5,42 (1H, д, J=17,2 Гц), 5,52-5,58 (1H, м), 6,52 (1H, с), 6,98 (2H, с), 7,12-7,17 (1H, м), 7,18-7,25 (4H, м), 7,29 (1H, с), 7,69 (1H, т, J=5,5 Гц), 7,78 (1H, д, J=11,3 Гц), 7,98-8,03 (2H, м), 8,11 (1H, д, J=7,8 Гц), 8,16 (1H, т, J=5,7 Гц), 8,23 (1H, т, J=5,9 Гц), 8,44 (1H, д, J=9,0 Гц).
MS (APCI) m/z: 1149 (M+H)+.
[0220]
Стадия 6: Конъюгат антитело-лекарственное средство (1)
Восстановление антитела: Получали раствор hTINA1-H1L1, полученного в Примере 7, с концентрацией антитела 10 мг/мл с PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,54) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (10,0 мл) собирали в 50-мл пробирку и добавляли водный раствор 10 мМ TCEP (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (0,317 мл; 4,6 эквивалентов на молекулу антитела) и водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (Nacalai Tesque, Inc.; 0,500 мл). После подтверждения, что раствор имел pH 7,4±0,1, дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем инкубации при 37°C в течение 1 часа.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После инкубации указанного выше раствора в течение 10 минут на водяной бане, имеющей комнатную температуру, к смеси добавляли диметилсульфоксид (0,567 мл). Затем диметилсульфоксидный раствор, содержащий 10 мМ соединения, полученного на описанной выше Стадии 5 (0,635 мл; 9,2 эквивалентов на молекулу антитела), добавляли к смеси и перемешивали с использованием цилиндрического вращающего устройства (MTR-103, изготовитель AS ONE Corporation) для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом при комнатной температуре в течение 40 минут. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,127 мл; 18,4 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC (Sigma-Aldrich Co. LLC) и перемешивали для завершения реакции лекарственного средства-линкера при комнатной температуре еще в течение 20 минут.
Очистка: Полученный раствор подвергали очистке с использованием Общей процедуры D, описанной в Способе получения 1, с получением 35,0 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общей процедуры E, описанной в Способе получения 1 (использовали εD,280=4964 (измеренное среднее значение) и εD,370=18982 (измеренное среднее значение)), получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 2,70 мг/мл, выход антитела: 94,5 мг (95%), и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры E: 6,6.
[0221]
[Пример 10: Получение hTINA1-H1L1 ADC (2)]
[0222]
[Формула 26]
[0223]
Стадия 1: Конъюгат антитело-лекарственное средство (2)
Восстановление антитела: Получали раствор hTINA1-H1L1, полученного в Примере 7, с концентрацией антитела 10 мг/мл с PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,54) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (2,00 мл) собирали в 4-мл пробирку и добавляли водный раствор 10 мМ TCEP (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (0,0690 мл; 5,0 эквивалентов на молекулу антитела) и водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (Nacalai Tesque, Inc.; 0,100 мл). После подтверждения, что раствор имел pH 7,4±0,1, дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем инкубации при 37°C в течение 1 часа.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После инкубации указанного выше раствора в течение 10 минут на водяной бане, имеющей температуру 15°C, к смеси добавляли диметилсульфоксидный раствор (0,127 мл; 9,2 эквивалентов на молекулу антитела), содержащий 10 мМ соединения, полученного на Стадии 5 Примера 9, и инкубировали для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом на водяной бане, имеющей температуру 15°C, в течение 1 часа. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,0190 мл; 13,8 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC (Sigma-Aldrich Co. LLC) и перемешивали с использованием цилиндрического вращающего устройства для завершения реакции лекарственного средства-линкера при комнатной температуре в течение 20 минут.
Очистка: Полученный раствор подвергали очистке с использованием Общей процедуры D, описанной в Способе получения 1, с получением 9,00 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общей процедуры E, описанной в Способе получения 1 (использовали εD,280=4964 (измеренное среднее значение) и εD,370=18982 (измеренное среднее значение)), получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 2,08 мг/мл, выход антитела: 18,7 мг (94%), и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры E: 6,1.
[0224]
[Пример 11: Получение hTINA1-H1L1 ADC (3)]
[0225]
[Формула 27]
[0226]
Стадия 1: Конъюгат антитело-лекарственное средство (3)
Восстановление антитела: Получали раствор hTINA1-H1L1, полученного в Примере 7, с концентрацией антитела 10 мг/мл с PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,54) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (5,0 мл) собирали 15-мл контейнер, добавляли водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (Nacalai Tesque, Inc.; 0,0813 мл) при перемешивании и затем перемешивали при 37°C в течение 10 минут. После добавления к смеси водного раствора 10 мМ TCEP (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (0,0745 мл; 2,3 эквивалентов на молекулу антитела) при перемешивании и затем подтверждения, что раствор имел pH 7,0±0,1, дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем перемешивания при 37°C в течение 1 часа.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После перемешивания указанного выше раствора в течение 10 минут на водяной бане, имеющей температуру 15°C, постепенно добавляли по каплям диметилсульфоксидный раствор (0,162 мл; 5,0 эквивалентов на молекулу антитела), содержащий 10 мМ соединения, полученного на Стадии 5 Примера 9, и перемешивали для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом на водяной бане, имеющей температуру 15°C, в течение 1 часа. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,0418 мл; 12,9 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC (Sigma-Aldrich Co. LLC) и перемешивали для завершения реакции лекарственного средства-линкера при комнатной температуре в течение 20 минут.
Очистка: Полученный раствор подвергали очистке с использованием Общей процедуры D, описанной в Способе получения 1, с получением 21,0 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общих процедур E и F, описанных в Способе получения 1 (использовали εD,280=4964 (измеренное среднее значение) и εD,370=18982 (измеренное среднее значение)), получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 2,19 мг/мл, выход антитела: 46,0 мг (92%), среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры E: 3,6, и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры F: 3,6.
[0227]
[Пример 12: Получение hTINA1-H1L1 ADC (4)]
[0228]
[Формула 28]
[0229]
Стадия 1: Конъюгат антитело-лекарственное средство (4)
Восстановление антитела: Получали раствор hTINA1-H1L1, полученного в Примере 7, с концентрацией антитела 10,0 мг/мл с PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,54) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (5,00 мл) собирали в 15-мл контейнер, добавляли водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (Nacalai Tesque, Inc.; 0,0813 мл) при перемешивании и затем перемешивали при 37°C в течение 10 минут. После добавления к смеси водного раствора 10 мМ TCEP (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (0,162 мл; 5,0 эквивалентов на молекулу антитела) при перемешивании и затем подтверждения, что раствор имел pH 7,0±0,1, дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем перемешивания при 37°C в течение 1 часа.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После перемешивания указанного выше раствора в течение 10 минут на водяной бане, имеющей температуру 15°C, постепенно добавляли по каплям диметилсульфоксидный раствор (0,389 мл; 12,0 эквивалентов на молекулу антитела), содержащий 10 мМ соединения, полученного на Стадии 5 Примера 9, и перемешивали для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом на водяной бане, имеющей температуру 15°C, в течение 1 часа. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,0418 мл; 12,9 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC (Sigma-Aldrich Co. LLC) и перемешивали для завершения реакции лекарственного средства-линкера при комнатной температуре в течение 20 минут.
Очистка: Полученный раствор подвергали очистке с использованием Общей процедуры D, описанной в Способе получения 1, с получением 21,0 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общих процедур E и F, описанных в Способе получения 1 (использовали εD,280=4964 (измеренное среднее значение) и εD,370=18982 (измеренное среднее значение)), получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 2,19 мг/мл, выход антитела: 46,0 мг (92%), среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры E: 7,0, и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры F: 7,0.
[0230]
[Ссылочный Пример 13: Получение hRS7 ADC (5)]
[0231]
[Формула 29]
[0232]
Стадия 1: Конъюгат антитело-лекарственное средство (5)
Восстановление антитела: Получали раствор hRS7, полученного в Ссылочном Примере 1, с концентрацией антитела 10 мг/мл с PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,56) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (2,0 мл) собирали в 4-мл пробирку и добавляли водный раствор 10 мМ TCEP (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (0,0690 мл; 5,0 эквивалентов на молекулу антитела) и водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (Nacalai Tesque, Inc.; 0,100 мл). После подтверждения, что раствор имел pH 7,4±0,1, дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем инкубации при 37°C в течение 1 часа.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После инкубации указанного выше раствора в течение 10 минут на водяной бане, имеющей температуру 15°C, к смеси добавляли диметилсульфоксидный раствор (0,127 мл; 9,2 эквивалентов на молекулу антитела), содержащий 10 мМ соединения, полученного на Стадии 5 Примера 9, и инкубировали для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом на водяной бане, имеющей температуру 15°C, в течение 1 часа. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,0190 мл; 13,8 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC (Sigma-Aldrich Co. LLC) и перемешивали с использованием цилиндрического вращающего устройства для завершения реакции лекарственного средства-линкера при комнатной температуре в течение 20 минут.
Очистка: Полученный раствор подвергали очистке с использованием Общей процедуры D, описанной в Способе получения 1, с получением 9,00 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общей процедуры E, описанной в Способе получения 1 (использовали εD,280=4964 (измеренное среднее значение) и εD,370=18982 (измеренное среднее значение)), получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 2,04 мг/мл, выход антитела: 18,4 мг (92%), и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры E: 6,2.
[0233]
[Пример 14: Получение hTINA1-H1L1 ADC (6)]
[0234]
[Формула 30]
[0235]
Стадия 1: ({N-[(9H-Флуорен-9-илметокси)карбонил]глицил}амино)метилацетат
К смеси, содержащей N-9-флуоренилметоксикарбонилглицилглицин (4,33 г, 12,2 ммоль), тетрагидрофуран (120 мл) и толуол (40,0 мл), добавляли пиридин (1,16 мл, 14,7 ммоль) и тетраацетат свинца (6,84 г, 14,7 ммоль) и нагревали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 5 часов. После охлаждения реакционного раствора до комнатной температуры нерастворимые вещества удаляли фильтрованием через Целит и концентрировали при пониженном давлении. Полученные остатки растворяли в этилацетате и промывали водой и насыщенным солевым раствором и затем органический слой сушили над безводным сульфатом магния. После удаления растворителя при пониженном давлении полученные остатки очищали колоночной хроматографией на силикагеле [гексан:этилацетат=9:1 (об./об.)-этилацетат] с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного твердого вещества (3,00 г, 67%).
1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 2,07 (3H, с), 3,90 (2H, д, J=5,1 Гц), 4,23 (1H, т, J=7,0 Гц), 4,46 (2H, д, J=6,6 Гц), 5,26 (2H, д, J=7,0 Гц), 5,32 (1H, шир.с), 6,96 (1H, шир.с), 7,32 (2H, т, J=7,3 Гц), 7,41 (2H, т, J=7,3 Гц), 7,59 (2H, д, J=7,3 Гц), 7,77 (2H, д, J=7,3 Гц).
[0236]
Стадия 2: Бензил [({N-[(9H-Флуорен-9-илметокси)карбонил]глицил}амино)метокси]ацетат
К раствору в тетрагидрофуране (40,0 мл) соединения (3,68 г, 10,0 ммоль), полученного на Стадии 1 выше, и бензилгликолята (4,99 г, 30,0 ммоль), добавляли трет-бутоксид калия (2,24 г, 20,0 ммоль) при 0°C и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. К реакционному раствору добавляли этилацетат и воду при 0°C и экстрагировали этилацетатом и хлороформом. Полученный органический слой сушили над сульфатом натрия и фильтровали. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученные остатки растворяли в диоксане (40,0 мл) и воде (10,0 мл), добавляли гидрокарбонат натрия (1,01 г, 12,0 ммоль) и 9-флуоренилметилхлороформиат (2,59 г, 10,0 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. К реакционному раствору добавляли воду и экстрагировали этилацетатом. Полученный органический слой сушили над сульфатом натрия и фильтровали. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученные остатки очищали колоночной хроматографией на силикагеле [гексан:этилацетат=100:0 (об./об.)-0:100] с получением указанного в заголовке соединения в бесцветного маслянистого вещества (1,88 г, 40%).
1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 3,84 (2H, д, J=5,5 Гц), 4,24 (3H, т, J=6,5 Гц), 4,49 (2H, д, J=6,7 Гц), 4,88 (2H, д, J=6,7 Гц), 5,15-5,27 (1H, м), 5,19 (2H, с), 6,74 (1H, шир.с), 7,31-7,39 (7H, м), 7,43 (2H, т, J=7,4 Гц), 7,61 (2H, д, J=7,4 Гц), 7,79 (2H, д, J=7,4 Гц).
[0237]
Стадия 3: [({N-[(9H-Флуорен-9-илметокси)карбонил]глицил}амино)метокси]уксусная кислота
Соединение (1,88 г, 3,96 ммоль), полученное на Стадии 2 выше, растворяли в этаноле (40,0 мл) и этилацетате (20,0 мл). После добавления катализатор палладия на углероде (376 мг) смесь перемешивали в атмосфере водород при комнатной температуре в течение 2 часов. Нерастворимые вещества удаляли фильтрованием через Целит и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного твердого вещества (1,52 г, количественный выход).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 3,62 (2H, д, J=6,3 Гц), 3,97 (2H, с), 4,18-4,32 (3H, м), 4,60 (2H, д, J=6,7 Гц), 7,29-7,46 (4H, м), 7,58 (1H, т, J=5,9 Гц), 7,72 (2H, д, J=7,4 Гц), 7,90 (2H, д, J=7,4 Гц), 8,71 (1H, т, J=6,5 Гц).
[0238]
Стадия 4: 9H-Флуорен-9-илметил(2-{[(2-{[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-2-оксоэтокси)метил]амино}-2-оксоэтил)карбамат
При охлаждении льдом, к раствору экзатекан мезилата (0,283 г, 0,533 ммоль), N-гидроксисукцинимида (61,4 мг, 0,533 ммоль) и соединения (0,205 г, 0,533 ммоль), полученное на Стадии 3 выше, в N,N-диметилформамиде (10,0 мл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (92,9 мкл, 0,533 ммоль) и N,N'-дициклогексилкарбодиимид (0,143 г, 0,693 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученные остатки очищали колоночной хроматографией на силикагеле [хлороформ-разделенный органический слой хлороформ:метанол:вода=7:3:1 (об./об./об.)] с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-коричневого твердого вещества (0,352 г, 82%).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 0,81 (3H, т, J=7,4 Гц), 1,73-1,87 (2H, м), 2,06-2,20 (2H, м), 2,34 (3H, с), 3,01-3,23 (2H, м), 3,58 (2H, д, J=6,7 Гц), 3,98 (2H, с), 4,13-4,25 (3H, м), 4,60 (2H, д, J=6,7 Гц), 5,09-5,22 (2H, м), 5,32-5,42 (2H, м), 5,50-5,59 (1H, м), 6,49 (1H, с), 7,24-7,30 (3H, м), 7,36 (2H, т, J=7,4 Гц), 7,53 (1H, т, J=6,3 Гц), 7,66 (2H, д, J=7,4 Гц), 7,75 (1H, д, J=11,0 Гц), 7,84 (2H, д, J=7,4 Гц), 8,47 (1H, д, J=8,6 Гц), 8,77 (1H, т, J=6,7 Гц).
MS (ESI) m/z: 802 (M+H)+.
[0239]
Стадия 5: N-[(2-{[(1S,9S)-9-Этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-2-оксоэтокси)метил]глицинамид
К раствору соединения (0,881 г, 1,10 ммоль), полученного на Стадии 4 выше, в N,N-диметилформамиде (11,0 мл) добавляли пиперидин (1,1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением смеси, содержащей указанное в заголовке соединение. Смесь использовали для следующей реакции без дополнительной очистки.
[0240]
Стадия 6: N-[(9H-Флуорен-9-илметокси)карбонил]глицилглицил-L-фенилаланил-N-[(2-{[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-2-оксоэтокси)метил]глицинамид
При охлаждении льдом к раствору в N,N-диметилформамиде (50,0 мл) смеси (0,439 ммоль), полученной на Стадии 5 выше, N-гидроксисукцинимида (0,101 г, 0,878 ммоль) и N-[(9H-флуорен-9-илметокси)карбонил]глицилглицил-L-фенилаланина (Японская выложенная патентная заявка № 2002-60351; 0,440 г, 0,878 ммоль), добавляли N,N'-дициклогексилкарбодиимид (0,181 г, 0,878 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 дней. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученные остатки очищали колоночной хроматографией на силикагеле [хлороформ-хлороформ:метанол=9:1 (об./об.)] с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-оранжевого твердого вещества (0,269 г, 58%).
MS (ESI) m/z: 1063 (M+H)+.
[0241]
Стадия 7: Глицилглицил-L-фенилаланил-N-[(2-{[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-2-оксоэтокси)метил]глицинамид
К раствору соединения (0,269 г, 0,253 ммоль), полученного на Стадии 6 выше, в N,N-диметилформамиде (4,00 мл) добавляли пиперидин (0,251 мл, 2,53 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением смеси, содержащей указанное в заголовке соединение. Смесь использовали для следующей реакции без дополнительной очистки.
[0242]
Стадия 8: N-[6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]глицилглицил-L-фенилаланил-N-[(2-{[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-2-оксоэтокси)метил]глицинамид
К раствору соединения (0,253 ммоль), полученного на Стадии 7 выше, в N,N-диметилформамиде (10,0 мл) добавляли N-сукцинимидил 6-малеимид гексаноат (0,156 г, 0,506 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученные остатки очищали колоночной хроматографией на силикагеле [хлороформ-хлороформ:метанол=9:1 (об./об.)] с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (0,100 г, 38%).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 0,83 (3H, т, J=7,2 Гц), 1,09-1,21 (2H, м), 1,33-1,47 (4H, м), 1,75-1,90 (2H, м), 2,00-2,23 (4H, м), 2,36 (3H, с), 2,69-2,81 (1H, м), 2,94-3,03 (1H, м), 3,06-3,22 (2H, м), 3,23-3,74 (8H, м), 3,98 (2H, с), 4,39-4,50 (1H, м), 4,60 (2H, д, J=6,7 Гц), 5,17 (2H, с), 5,39 (2H, с), 5,53-5,61 (1H, м), 6,50 (1H, с), 6,96 (2H, с), 7,11-7,24 (5H, м), 7,28 (1H, с), 7,75 (1H, д, J=11,0 Гц), 7,97 (1H, т, J=5,7 Гц), 8,03 (1H, т, J=5,9 Гц), 8,09 (1H, д, J=7,8 Гц), 8,27 (1H, т, J=6,5 Гц), 8,48 (1H, д, J=9,0 Гц), 8,60 (1H, т, J=6,5 Гц).
MS (ESI) m/z: 1034 (M+H)+.
[0243]
Стадия 9: Конъюгат антитело-лекарственное средство (6)
Восстановление антитела: Получали раствор hTINA1-H1L1, полученного в Примере 7, с концентрацией антитела 10 мг/мл с PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,54) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (10,0 мл) собирали в 50-мл пробирку и добавляли водный раствор 10 мМ TCEP (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (0,317 мл; 4,6 эквивалентов на молекулу антитела) и водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (Nacalai Tesque, Inc.; 0,500 мл). После подтверждения, что раствор имел pH 7,4±0,1, дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем инкубации при 37°C в течение 1 часа.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После инкубации указанного выше раствора в течение 10 минут на водяной бане, имеющей обычную температуру, к смеси добавляли диметилсульфоксид (0,567 мл). Затем к смеси добавляли диметилсульфоксидный раствор, содержащий 10 мМ соединения, полученного на описанной выше Стадии 8 (0,635 мл; 9,2 эквивалентов на молекулу антитела), и перемешивали с использованием цилиндрического вращающего устройства для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом при комнатной температуре в течение 40 минут. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,127 мл; 18,4 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC (Sigma-Aldrich Co. LLC) и перемешивали для завершения реакции лекарственного средства-линкера при комнатной температуре еще в течение 20 минут.
Очистка: Полученный раствор подвергали очистке с использованием Общей процедуры D, описанной в Способе получения 1, с получением 35,0 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общей процедуры E, описанной в Способе получения 1 (использовали εD,280=5178 (измеренное среднее значение) и εD,370=20217 (измеренное среднее значение)), получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 2,70 мг/мл, выход антитела: 94,5 мг (95%), и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры E: 6,4.
[0244]
[Пример 15: Получение hTINA1-H1L1 ADC (7)]
[0245]
[Формула 31]
[0246]
Стадия 1: Конъюгат антитело-лекарственное средство (7)
Восстановление антитела: Получали раствор hTINA1-H1L1, полученного в Примере 7, с концентрацией антитела 10 мг/мл с PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,54) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (2,0 мл) собирали в 4-мл пробирку и добавляли водный раствор 10 мМ TCEP (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (0,0690 мл; 5,0 эквивалентов на молекулу антитела) и водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (Nacalai Tesque, Inc.; 0,0299 мл). После подтверждения, что раствор имел pH 7,0±0,1, дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем инкубации при 37°C в течение 1 часа.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После инкубации указанного выше раствора в течение 10 минут на водяной бане, имеющей температуру 15°C, к смеси добавляли диметилсульфоксидный раствор (0,127 мл; 9,2 эквивалентов на молекулу антитела), содержащий 10 мМ соединения, полученного на Стадии 8 Примера 14, и инкубировали для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом на водяной бане, имеющей температуру 15°C, в течение 1 часа. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,0190 мл; 13,8 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC (Sigma-Aldrich Co. LLC) и перемешивали с использованием цилиндрического вращающего устройства для завершения реакции лекарственного средства-линкера при комнатной температуре в течение 20 минут.
Очистка: Полученный раствор подвергали очистке с использованием Общей процедуры D, описанной в Способе получения 1, с получением 9,00 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общей процедуры E, описанной в Способе получения 1 (использовали εD,280=5178 (измеренное среднее значение) и εD,370=20217 (измеренное среднее значение)), получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 2,04 мг/мл, выход антитела: 18,4 мг (92%), и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры E: 5,7.
[0247]
[Пример 16: Получение hTINA1-H1L1 ADC (8)]
[0248]
[Формула 32]
[0249]
Стадия 1: Конъюгат антитело-лекарственное средство (8)
Восстановление антитела: Получали раствор hTINA1-H1L1, полученного в Примере 7, с концентрацией антитела 10 мг/мл с PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,54) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (30,0 мл) собирали в 100-мл контейнер, добавляли водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (Nacalai Tesque, Inc.; 0,4875 мл) при перемешивании и затем перемешивали при 37°C в течение 10 минут. После добавления к смеси водного раствора 10 мМ TCEP (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (0,9721 мл; 5,0 эквивалентов на молекулу антитела) при перемешивании и затем подтверждения, что раствор имел pH 7,0±0,1, дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем перемешивания при 37°C в течение 1 часа.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После перемешивания указанного выше раствора в течение 10 минут на водяной бане, имеющей температуру 15°C, постепенно добавляли по каплям диметилсульфоксидный раствор (2,33 мл; 12,0 эквивалентов на молекулу антитела), содержащий 10 мМ соединения, полученного на Стадии 8 Примера 14, и перемешивали для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом на водяной бане, имеющей температуру 15°C, в течение 1 часа. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,251 мл; 12,9 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC (Sigma-Aldrich Co. LLC) и перемешивали для завершения реакции лекарственного средства-линкера при комнатной температуре в течение 20 минут.
Очистка: Полученный раствор подвергали очистке с использованием Общей процедуры D, описанной в Способе получения 1, с получением 98,0 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство. Затем раствор концентрировали в соответствии с Общей процедурой A, описанной в Способе получения 1, с получением 17,5 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общих процедур E и F, описанных в Способе получения 1 (использовали εD,280=5178 (измеренное среднее значение) и εD,370=20217 (измеренное среднее значение)), получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 14,6 мг/мл, выход антитела: 256 мг (85%), среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры E: 6,7, и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры F: 7,0.
[0250]
[Пример 17: Получение hTINA1-H1L1 ADC (9)]
[0251]
[Формула 33]
[0252]
Стадия 1: Конъюгат антитело-лекарственное средство (9)
Восстановление антитела: Получали раствор hTINA1-H1L1, полученного в Примере 7, с концентрацией антитела 10 мг/мл с PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,54) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (5,0 мл) собирали в 15-мл контейнер, добавляли водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (Nacalai Tesque, Inc.; 0,0813 мл) при перемешивании и затем перемешивали при 37°C в течение 10 минут. После добавления к смеси водного раствора 10 мМ TCEP (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (0,0778 мл; 2,4 эквивалентов на молекулу антитела) при перемешивании и затем подтверждения, что раствор имел pH 7,0±0,1, дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем перемешивания при 37°C в течение 1 часа.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После перемешивания указанного выше раствора в течение 10 минут на водяной бане, имеющей температуру 15°C, постепенно добавляли по каплям диметилсульфоксидный раствор (0,162 мл; 5,0 эквивалентов на молекулу антитела), содержащий 10 мМ соединения, полученного на Стадии 8 Примера 14, и перемешивали для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом на водяной бане, имеющей температуру 15°C, в течение 1 часа. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,0418 мл; 12,9 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC (Sigma-Aldrich Co. LLC) и перемешивали для завершения реакции лекарственного средства-линкера при комнатной температуре в течение 20 минут.
Очистка: Полученный раствор подвергали очистке с использованием Общей процедуры D, описанной в Способе получения 1, с получением 21,0 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общих процедур E и F, описанных в Способе получения 1 (использовали εD,280=5178 (измеренное среднее значение) и εD,370=20217 (измеренное среднее значение)), получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 2,26 мг/мл, выход антитела: 47,5 мг (95%), среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры E: 3,5, и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры F: 3,6.
[0253]
[Ссылочный Пример 18: Получение hRS7 ADC (10)]
[0254]
[Формула 34]
[0255]
Стадия 1: Конъюгат антитело-лекарственное средство (10)
Восстановление антитела: Получали раствор hRS7, полученного в Ссылочном Примере 1, с концентрацией антитела 10 мг/мл с PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,56) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (2,0 мл) собирали в 4-мл пробирку и добавляли водный раствор 10 мМ TCEP (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (0,0690 мл; 5,0 эквивалентов на молекулу антитела) и водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (Nacalai Tesque, Inc.; 0,0299 мл). После подтверждения, что раствор имел pH 7,0±0,1, дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем инкубации при 37°C в течение 1 часа.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После инкубации указанного выше раствора в течение 10 минут на водяной бане, имеющей температуру 15°C, к смеси добавляли диметилсульфоксидный раствор (0,1269 мл; 9,2 эквивалентов на молекулу антитела), содержащий 10 мМ соединения, полученного на Стадии 8 Примера 14, и инкубировали для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом на водяной бане, имеющей температуру 15°C в течение 1 часа. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,0190 мл; 13,8 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC (Sigma-Aldrich Co. LLC) и перемешивали с использованием цилиндрического вращающего устройства для завершения реакции лекарственного средства-линкера при комнатной температуре в течение 20 минут.
Очистка: Полученный раствор подвергали очистке с использованием Общей процедуры D, описанной в Способе получения 1, с получением 9,00 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общей процедуры E, описанной в Способе получения 1 (использовали εD,280=5178 (измеренное среднее значение) и εD,370=20217 (измеренное среднее значение)), получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 2,07 мг/мл, выход антитела: 18,6 мг (93%), и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры E: 5,6.
[0256]
[Пример 19: Получение hTINA1-H1L1 ADC (11)]
[0257]
[Формула 35]
[0258]
Стадия 1: трет-Бутил [2-(2-{[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-2-оксоэтокси)этил]карбамат
Осуществляли взаимодействие экзатекан мезилата (3,10 г, 5,47 моль) таким же способом, как на Стадии 1 Примера 1, с использованием {2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]этокси}уксусной кислоты (J. Med. Chem., 1992, Vol. 35, p. 2928; 1,55 г, 6,01 ммоль) вместо 4-(трет-Бутоксикарбониламино)бутановой кислоты с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (2,56 г, 73%).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 0,87 (3H, т, J=7,3 Гц), 1,26 (9H, с), 1,81-1,91 (2H, м), 2,13-2,22 (2H, м), 2,40 (3H, с), 3,08-3,26 (4H, м), 3,43-3,53 (2H, м), 4,00 (1H, д, J=15,1 Гц), 4,05 (1H, д, J=15,1 Гц), 5,14 (1H, д, J=18,7 Гц), 5,22 (1H, д, J=18,7 Гц), 5,40 (1H, д, J=16,6 Гц), 5,44 (1H, д, J=16,6 Гц), 5,59-5,66 (1H, м), 6,53 (1H, с), 6,86 (1H, т, J=5,4 Гц), 7,31 (1H, с), 7,79 (1H, д, J=10,9 Гц), 8,49 (1H, д, J=9,1 Гц).
MS (APCI) m/z: 637 (M+H)+.
[0259]
Стадия 2: 2-(2-Аминоэтокси)-N-[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]ацетамид трифторацетат
Осуществляли взаимодействие соединения (1,50 г, 2,36 моль), полученного на Стадии 1 выше, таким же способом, как на Стадии 2 Примера 1, с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (1,50 г, количественный выход).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 0,87 (3H, т, J=7,5 Гц), 1,81-1,92 (2H, м), 2,15-2,23 (2H, м), 2,41 (3H, с), 3,05 (2H, т, J=5,1 Гц), 3,15-3,23 (2H, м), 3,71 (2H, т, J=5,1 Гц), 4,10 (2H, с), 5,19 (1H, д, J=18,7 Гц), 5,24 (1H, д, J=18,7 Гц), 5,43 (2H, с), 5,58-5,66 (1H, м), 6,55 (1H, с), 7,33 (1H, с), 7,73-7,84 (4H, м), 8,55 (1H, д, J=9,1 Гц).
MS (APCI) m/z: 537 (M+H)+.
[0260]
Стадия 3: N-(трет-Бутоксикарбонил)глицилглицил-L-фенилаланил-N-[2-(2-{[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-2-оксоэтокси)этил]глицинамид
Осуществляли взаимодействие соединения (554 мг, 0,85 ммоль), полученного на Стадии 2 выше, таким же способом, как на Стадии 3 Примера 1, с получением указанного в заголовке соединения (775 мг, 95%).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 0,85 (3H, т, J=7,3 Гц), 1,36 (9H, с), 1,78-1,89 (2H, м), 2,13-2,22 (2H, м), 2,39 (3H, с), 2,71 (1H, дд, J=13,4, 9,8 Гц), 2,95 (1H, дд, J=13,4, 4,3 Гц), 3,09-3,23 (1H, м), 3,23-3,32 (2H, м), 3,40-3,62 (8H, м), 3,73 (1H, дд, J=16,5, 5,5 Гц), 4,03 (2H, с), 4,39-4,47 (1H, м), 5,17 (1H, д, J=18,9 Гц), 5,25 (1H, д, J=18,9 Гц), 5,41 (1H, д, J=16,8 Гц), 5,45 (1H, д, J=16,8 Гц), 5,57-5,64 (1H, м), 6,54 (1H, с), 6,99 (1H, т, J=5,8 Гц), 7,13-7,26 (5H, м), 7,31 (1H, с), 7,76-7,82 (2H, м), 7,90 (1H, т, J=5,2 Гц), 8,13 (1H, д, J=7,9 Гц), 8,27 (1H, т, J=5,8 Гц), 8,49 (1H, д, J=8,5 Гц).
MS (APCI) m/z: 955 (M+H)+.
[0261]
Стадия 4: Глицилглицил-L-фенилаланил-N-[2-(2-{[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-2-оксоэтокси)этил]глицинамид трифторацетат
Осуществляли взаимодействие соединения (630 мг, 0,659 ммоль), полученного на Стадии 3 выше, таким же способом, как на Стадии 4 Примера 1, с получением указанного в заголовке соединения (588 мг, 92%).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 0,86 (3H, т, J=7,3 Гц), 1,79-1,90 (2H, м), 2,13-2,22 (2H, м), 2,39 (3H, с), 2,71 (1H, дд, J=13,4, 10,1 Гц), 2,99 (1H, дд, J=13,4, 4,3 Гц), 3,09-3,23 (1H, м), 3,24-3,32 (3H, м), 3,41-3,71 (7H, м), 3,86 (1H, дд, J=16,8, 5,8 Гц), 4,04 (2H, с), 4,52 (1H, тд, J=9,0, 4,1 Гц), 5,17 (1H, д, J=18,9 Гц), 5,25 (1H, д, J=18,9 Гц), 5,41 (1H, д, J=16,5 Гц), 5,45 (1H, д, J=16,5 Гц), 5,56-5,65 (1H, м), 6,55 (1H, с), 7,13-7,26 (5H, м), 7,32 (1H, с), 7,80 (1H, д, J=11,0 Гц), 7,87-8,01 (4H, м), 8,29-8,36 (2H, м), 8,46-8,55 (2H, м).
MS (APCI) m/z: 855 (M+H)+.
[0262]
Стадия 5: N-[6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)гексаноил]глицилглицил-L-фенилаланил-N-[2-(2-{[(1S,9S)-9-этил-5-фтор-9-гидрокси-4-метил-10,13-диоксо-2,3,9,10,13,15-гексагидро-1H,12H-бензо[de]пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-1-ил]амино}-2-оксоэтокси)этил]глицинамид
Осуществляли взаимодействие соединения (240 мг, 0,247 ммоль), полученного на Стадии 4 выше, таким же способом, как на Стадии 5 Примера 1, с использованием триэтиламина (31,4 мкл, 0,22 ммоль) вместо диизопропилэтиламина и с использованием N-сукцинимидил 6-малеимидгексаноата (95,3 мг, 0,31 ммоль) вместо N-сукцинимидил 3-(2-(2-(3-малеинимидпропанамид)этокси)этокси)пропаноата, с получением указанного в заголовке соединения (162 мг, 62%).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ: 0,86 (3H, т, J=7,6 Гц), 1,13-1,22 (2H, м), 1,40-1,51 (4H, м), 1,78-1,90 (2H, м), 2,09 (2H, т, J=7,6 Гц), 2,14-2,21 (2H, м), 2,39 (3H, с), 2,74 (1H, дд, J=13,6, 9,7 Гц), 2,96 (1H, дд, J=13,6, 4,5 Гц), 3,08-3,24 (1H, м), 3,24-3,30 (1H, м), 3,33-3,40 (4H, м), 3,47-3,68 (7H, м), 3,72 (1H, дд, J=16,6, 5,7 Гц), 4,03 (2H, с), 4,42 (1H, тд, J=8,6, 4,2 Гц), 5,17 (1H, д, J=18,7 Гц), 5,25 (1H, д, J=18,7 Гц), 5,40 (1H, д, J=17,2 Гц), 5,44 (1H, д, J=17,2 Гц), 5,57-5,64 (1H, м), 6,52 (1H, с), 6,99 (2H, с), 7,13-7,25 (5H, м), 7,31 (1H, с), 7,74-7,81 (2H, м), 7,99 (1H, т, J=5,7 Гц), 8,03-8,11 (2H, м), 8,22 (1H, т, J=5,7 Гц), 8,47 (1H, д, J=9,1 Гц).
MS (APCI) m/z: 1048 (M+H)+.
[0263]
Стадия 6: Конъюгат антитело-лекарственное средство (11)
Восстановление антитела: Получали раствор hTINA1-H1L1, полученного в Примере 7, с концентрацией антитела 10 мг/мл с PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,54) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (3,0 мл) собирали в 15-мл контейнер, добавляли водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (Nacalai Tesque, Inc.; 0,0488 мл) при перемешивании и затем перемешивали при 37°C в течение 10 минут. После добавления к смеси водного раствора 10 мМ TCEP (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (0,0972 мл; 5,0 эквивалентов на молекулу антитела) при перемешивании и затем подтверждения, что раствор имел pH 7,0±0,1, дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем перемешивания при 37°C в течение 1 часа.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После перемешивания указанного выше раствора в течение 10 минут на водяной бане, имеющей температуру 15°C, постепенно добавляли по каплям диметилсульфоксидный раствор (0,2333 мл; 12,0 эквивалентов на молекулу антитела), содержащий 10 мМ соединения, полученного на Стадии 8 Примера 11, и перемешивали для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом на водяной бане, имеющей температуру 15°C, в течение 1 часа. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,0251 мл; 12,9 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC (Sigma-Aldrich Co. LLC) и перемешивали для завершения реакции лекарственного средства-линкера при комнатной температуре в течение 20 минут.
Очистка: Полученный раствор подвергали очистке с использованием Общей процедуры D, описанной в Способе получения 1, с получением 14 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общих процедур E и F, описанных в Способе получения 1 (использовали εD,280=5193 (измеренное среднее значение) и εD,370=20347 (измеренное среднее значение)), получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 1,93 мг/мл, выход антитела: 27,0 мг (90%), среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры E: 7,1, и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры F: 7,0.
[0264]
[Ссылочный Пример 2: Получение hRS7-CL2A-SN38 (12)]
[0265]
[Формула 36]
[0266]
Стадия 1: Конъюгат антитело-лекарственное средство (12)
Восстановление антитела: Получали раствор hRS7, полученного в Ссылочном Примере 1, с концентрацией антитела 10 мг/мл с PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,54) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (10,0 мл) собирали в 50-мл пробирку и добавляли водный раствор 10 мМ TCEP (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (0,317 мл; 4,6 эквивалентов на молекулу антитела) и водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (Nacalai Tesque, Inc.; 0,500 мл). После подтверждения, что раствор имел pH 7,4±0,1, дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем инкубации при 37°C в течение 1 часа.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После инкубации указанного выше раствора в течение 10 минут на водяной бане, имеющей обычную температуру, к смеси добавляли диметилсульфоксид (0,567 мл). Затем к смеси добавляли диметилсульфоксидный раствор, содержащий 10 мМ CL2A-SN38, синтезированного в соответствии с Патентной публикацией США № 2011/0293513 (0,635 мл; 9,2 эквивалентов на молекулу антитела), и перемешивали с использованием цилиндрического вращающего устройства для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом при комнатной температуре в течение 40 минут. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,127 мл; 18,4 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC (Sigma-Aldrich Co. LLC) и перемешивали для завершения реакции лекарственного средства-линкера при комнатной температуре еще в течение 20 минут.
Очистка: Вышеуказанный реакционный раствор подвергали два раза поочередно гель-фильтрации и очистке, описанной в Общей процедуре D способа получения, и затем подвергали подобным образом гель-фильтрационной очистке на NAP-25 колонке с использованием раствора 25 мМ трегалозы, содержащего полисорбат 80 (0,01%). Затем полученный элюат (35 мл) лиофилизировали.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общей процедуры E, описанной в Способе получения 1, для элюата перед лиофилизацией получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 2,78 мг/мл, выход антитела: 97,3 мг (97%), и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела: 5,6.
[0267]
[Пример 20: Получение hTINA1-H1L1 ADC (13)]
[0268]
[Формула 37]
[0269]
Стадия 1: Конъюгат антитело-лекарственное средство (13)
Восстановление антитела: Получали раствор hTINA1-H1L1, полученного в Примере 7, с концентрацией антитела 10 мг/мл путем замены среды на PBS6.0/EDTA с использованием Общей процедуры B (использовали коэффициент поглощения при 280 нм, равный 1,54) и Общей процедуры C, описанной в Способе получения 1. Раствор (100 мл) помещали в 250-мл поликарбонатную колбу Эрленмейера, добавляли водный раствор 1 M дикалия гидрофосфата (1,4 мл) при комнатной температуре при перемешивании с использованием магнитной мешалки и затем добавляли водный раствор 10 мМ TCEP (1,62 мл; 2,5 эквивалентов на молекулу антитела). После подтверждения, что раствор имел pH 7,0±0,1, перемешивание прекращали и дисульфидную связь в шарнирной части в антителе восстанавливали путем инкубации при 37°C в течение 2 часов.
Конъюгация между антителом и лекарственным средством-линкером: После охлаждения вышеуказанного раствора до 15°C постепенно добавляли по каплям ДМСО (3,24 мл) при перемешивании. Затем постепенно добавляли по каплям ДМСО раствор, содержащий 10 мМ соединения, полученного на Стадии 8 Примера 14 (1,76 мл; 5,0 эквивалентов на молекулу антитела). Этот раствор перемешивали для конъюгирования лекарственного средства-линкера с антителом при 15°C в течение 1 часа. Затем к смеси добавляли водный раствор (0,324 мл; 5,0 эквивалентов на молекулу антитела) 100 мМ NAC при перемешивании и инкубировали для завершения реакции непрореагировавшего лекарственного средства-линкера при комнатной температуре еще в течение 20 минут.
Очистка: 20% водный раствор уксусной кислоты (около 0,52 мл) и ABS (100 мл) постепенно добавляли к вышеуказанному раствору при перемешивании для доведения pH раствора до 5,5±0,1. Этот раствор подвергали микрофильтрации (0,45 мкм, PVDF мембрана) для удаления белой мутности и получения около 200 мл фильтрата. Этот фильтрат подвергали ультрафильтрационной очистке с использованием ультрафильтрационного устройства, состоящего из ультрафильтрационной мембраны (Merck Japan, Pellicon XL Cassette, Ultracell 30 кДа), шлангового насоса (Cole-Parmer International, MasterFlex Pump model 77521-40, Pump Head model 7518-00) и цилиндра (Cole-Parmer International, MasterFlex Tube L/S16). В частности, при добавлении по каплям ABS (общее количество 1600 мл) в качестве буферного раствора для очистки к реакционному раствору осуществляли ультрафильтрационную очистку для удаления неконъюгированных молекул лекарственное средство-линкер и других низкомолекулярных реагентов, также заменяя буферный раствор на ABS, и затем концентрировали раствор. Полученный очищенный раствор подвергали микрофильтрации (0,22 мкм, PVDF мембрана) с получением 88 мл раствора, содержащего указанный в заголовке конъюгат антитело-лекарственное средство.
Определение физико-химических характеристик: С использованием Общей процедуры E и Общей процедуры F (использовали εD,280=5178 и εD,370=20217) получали следующие характеристические значения.
Концентрация антитела: 9,96 мг/мл, выход антитела: 876 мг (88%), среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры E: 3,8, и среднее количество конъюгированных молекул лекарственного средства (n) на молекулу антитела, измеренное с использованием Общей процедуры F: 3,8.
[0270]
[Пример 21: Оценка противоопухолевого эффекта ADC]
21-a) Противоопухолевый эффект ADC - (1)
Мышь: 5-6-недельным самкам BALB/c-nu/nu мышей (Charles River Laboratories Japan, Inc.) давали акклиматизироваться в течение 4-7 дней в SPF условиях перед использованием в эксперименте. Мышам давали стерилизованную твердую пищу (FR-2, Funabashi Farms Co., Ltd) и давали стерилизованную водопроводную воду (полученную путем добавления 5-15 ч/млн раствора гипозлорита натрия).
Анализ и расчет экспрессии: во всех исследованиях, длинную ось и короткую ось опухоли измеряли два раза в неделю с использованием электронно-цифрового циркуля (CD-15C, Mitutoyo Corp.) и рассчитывали объем опухоли (мм3). Расчет экспрессии показан ниже.
Объем опухоли (мм3)=1/2×Длинная ось (мм)×[Короткая ось (мм)]2
[0271]
Все конъюгаты антитело-лекарственное средство разбавляли физиологическим солевым раствором (Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc.) и использовали в объеме 10 мл/кг для внутривенного введения в хвост каждой мыши. Человеческую колоректальную раковую клеточную линию COLO205 закупали у ATCC и суспендировали в физиологическом солевом растворе. 2×106 клеток суспензии подкожно трансплантировали в правую часть брюшной полости каждой самки BALB/c-nu/nu мыши (День 0) и мышей рандомизированно делили на группы в День 7. Конъюгат антитело-лекарственное средство (1), (6) или (12) внутривенно вводили при дозе 10 мг/кг в хвост каждой мыши в Дни 7, 14 и 21. Неконъюгированное hTINA1-H1L1 антитело и hRS7 антитело, каждое, вводили в качестве отрицательного контроля при дозе 25 мг/кг таким же путем, как указано выше. Введение конъюгата антитело-лекарственное средство (1) или (6) значительно уменьшало объем опухоли по сравнению с введением конъюгата антитело-лекарственное средство (12), и оба конъюгата антитело-лекарственное средство проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 13). На этой Фиг. ось абсцисс показывает количество дней, а ось ординат показывает объем опухоли.
[0272]
21-b) Противоопухолевый эффект ADC - (2)
Человеческую панкреатическую клеточную линию аденокарциномы Bx-PC3, которую закупали у ATCC, трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши и затем пересаживали в качестве твердого опухолевого трансплантата. Этот опухолевый трансплантат подкожно трансплантировали в правую часть брюшной полости каждой самки BALB/c-nu/nu мышей (День 0) и мышей рандомизированно делили на группы в День 16. Конъюгат антитело-лекарственное средство (1), (6) или (12) внутривенно вводили при дозе 10 мг/кг в хвост каждой мыши в Дни 16, 23 и 30. Неконъюгированное hTINA1-H1L1 антитело и hRS7 антитело, каждое, вводили в качестве отрицательного контроля при дозе 25 мг/кг таким же путем, как указано выше. Введение конъюгата антитело-лекарственное средство (1) или (6) значительно уменьшало объем опухоли по сравнению с введением конъюгата антитело-лекарственное средство (12), и оба конъюгата антитело-лекарственное средство проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 14).
[0273]
21-c) Противоопухолевый эффект ADC - (3)
Человеческую панкреатическую клеточную линию аденокарцинома Capan-1, которую закупали у ATCC, трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши и затем пересаживали в качестве твердого опухолевого трансплантата. Этот опухолевый трансплантат подкожно трансплантировали в правую часть брюшной полости каждой самки BALB/c-nu/nu мыши (День 0) и мышей рандомизированно делили на группы в День 18. Конъюгат антитело-лекарственное средство (1), (6) или (12) внутривенно вводили при дозе 10 мг/кг в хвост каждой мыши в Дни 18, 25 и 32. Неконъюгированное hTINA1-H1L1 антитело и hRS7 антитело, каждое, вводили в качестве отрицательного контроля при дозе 25 мг/кг таким же путем, как указано выше. Введение конъюгата антитело-лекарственное средство (1) или (6) значительно уменьшало объем опухоли по сравнению с введением конъюгата антитело-лекарственное средство (12), и оба конъюгата антитело-лекарственное средство проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 15).
[0274]
21-d) Противоопухолевый эффект ADC - (4)
COLO205 подкожно трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши таким же способом, как в Примере 21-a) (День 0), и мышей рандомизированно делили на группы в День 11. Конъюгат антитело-лекарственное средство (2) или (5) при дозе 10 мг/кг и конъюгат антитело-лекарственное средство (7) или (10) при дозе 3 мг/кг внутривенно вводили, соответственно, в хвост каждой мыши в Дни 11, 18 и 25. Все конъюгаты антитело-лекарственное средство (2), (5), (7) и (10), которые вводили, проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 16).
[0275]
21-e) Противоопухолевый эффект ADC - (5)
Bx-PC3 подкожно трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши таким же способом, как в Примере 21-b) (День 0), и мышей рандомизированно делили на группы в День 25. Конъюгат антитело-лекарственное средство (2), (5), (7) или (10) внутривенно вводили при дозе 3 мг/кг в хвост каждой мыши в Дни 25 и 32. Все конъюгаты антитело-лекарственное средство (2), (5), (7) и (10), которые вводили, проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 17).
[0276]
21-f) Противоопухолевый эффект ADC - (6)
COLO205 подкожно трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши таким же способом, как в Примере 21-a) (День 0), и мышей рандомизированно делили на группы в День 9. Конъюгат антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) внутривенно вводили при дозе 10 мг/кг в хвост каждой мыши в Дни 9 и 16. Все конъюгаты антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) и (9), которые вводили, проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 18).
[0277]
21-g) Противоопухолевый эффект ADC - (7)
Bx-PC3 подкожно трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши таким же способом, как в Примере 21-b) (День 0), и мышей рандомизированно делили на группы в День 21. Конъюгат антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) внутривенно вводили при дозе 3 мг/кг в хвост каждой мыши в Дни 21 и 28. Все конъюгаты антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) и (9), которые вводили, проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 19).
[0278]
21-h) Противоопухолевый эффект ADC - (8)
8 × 106 клетки человеческой клеточной линии рака яичников NIH:OVCAR-3, которые закупали у ATCC, суспендировали в Matrigel (Becton, Dickinson and Company) и подкожно трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши (День 0) и мышей рандомизированно делили на группы в День 25. Конъюгат антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) внутривенно вводили при дозе 3 мг/кг в хвост каждой мыши в День 25. Все конъюгаты антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) и (9), которые вводили, проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 20).
[0279]
21-i) Противоопухолевый эффект ADC - (9)
1×107 клетки человеческой гастральной раковой клеточной линии NCI-N87, которые закупали у ATCC, суспендировали в физиологическом солевом растворе и подкожно трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши (День 0) и мышей рандомизированно делили на группы в День 6. Конъюгат антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) внутривенно вводили при дозе 3 мг/кг в хвост каждой мыши в День 6. Все конъюгаты антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) и (9), которые вводили, проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 21).
[0280]
21-j) Противоопухолевый эффект ADC - (10)
5×106 клетки человеческой клеточной линии рака легкого NCI-H292, которые закупали у ATCC, суспендировали в физиологическом солевом растворе и подкожно трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши (День 0) и мышей рандомизированно делили на группы в День 9. Конъюгат антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) внутривенно вводили при дозе 3 мг/кг в хвост каждой мыши в День 9. Все конъюгаты антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) и (9), которые вводили, проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 22).
[0281]
21-k) Противоопухолевый эффект ADC - (11)
3×106 клетки человеческой клеточной линии рака горла FaDu, которые закупали у ATCC, суспендировали в физиологическом солевом растворе и подкожно трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши (День 0) и мышей рандомизированно делили на группы в День 11. Конъюгат антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) внутривенно вводили при дозе 3 мг/кг в хвост каждой мыши в День 11. Все конъюгаты антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) и (9), которые вводили, проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 23).
[0282]
21-l) Противоопухолевый эффект ADC - (12)
4×106 клетки человеческой панкреатической клеточной линии аденокарциномы CFPAC-1, которые закупали у ATCC, суспендировали в физиологическом солевом растворе и подкожно трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши (День 0) и мышей рандомизированно делили на группы в День 14. Конъюгат антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) или (9) внутривенно вводили при дозе 3 мг/кг в хвост каждой мыши в День 14. Все конъюгаты антитело-лекарственное средство (3), (4), (8) и (9), которые вводили, проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 24).
[0283]
21-m) Противоопухолевый эффект ADC - (13)
CFPAC-1 подкожно трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши таким же способом, как в Примере 21-l (День 0), и мышей рандомизированно делили на группы в День 14. Конъюгат антитело-лекарственное средство (8) или (13) внутривенно вводили при дозе 1 мг/кг в хвост каждой мыши в День 14. Все конъюгаты антитело-лекарственное средство (8) или (13), которые вводили, проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 25).
[0284]
21-n) Противоопухолевый эффект ADC - (14)
3×106 клетки человеческой панкреатической клеточной линии аденокарциномы HPAC, которые закупали у ATCC, суспендировали в физиологическом солевом растворе и подкожно трансплантировали каждой самке BALB/c-nu/nu мыши (День 0) и мышей рандомизированно делили на группы в День 12. Конъюгат антитело-лекарственное средство (8) или (13) внутривенно вводили при дозе 3 мг/кг в хвост каждой мыши в День 12. Все конъюгаты антитело-лекарственное средство (8) или (13), которые вводили, проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 26).
[0285]
21-o) Противоопухолевый эффект ADC - (15)
Человеческие эзофагеальные раковые ткани, полученные от Japan Health Sciences Foundation, подкожно трансплантировали каждой NOG мыши (Central Institute for Experimental Animals) и давали расти. Полученный опухолевый трансплантат затем подкожно трансплантировали каждой самке NOD-scid мыши (Charles River Laboratories Japan, Inc.) (День 0) и мышей рандомизированно делили на группы в День 27. Конъюгат антитело-лекарственное средство (8) или (13) внутривенно вводили при дозе 3 мг/кг в хвост каждой мыши в День 27. Оба конъюгата антитело-лекарственное средство (8) и (13), которые вводили, проявили эффект ингибирования роста опухоли (Фиг. 27).
[0286]
[Пример 22: Оценка эффекта ингибирования клеточного роста, демонстрируемого ADC]
BxPC3, NCI-H292, NIH:OVCAR-3, CFPAC-1, FaDu, человеческую клеточную линию аденокарциномы легкого Calu-3 (ATCC) и человеческую клеточную линию рака яичников CaOV3 (ATCC) в качестве TROP2 антиген-положительных клеточных линий и человеческую клеточную линию рака легкого Calu-6 (ATCC) и человеческую клеточную линию меланомы кожи A375 (ATCC) в качестве TROP2 антиген-отрицательных клеточных линий использовали в оценке эффекта ингибирования клеточного роста, проявляемого каждым ADC. BxPC3 и NCI-H292 подготавливали с использованием RPMI1640 Среды (Gibco), содержащей 10% фетальную бычью сыворотку (Moregate Biotech), NIH:OVCAR-3 подготавливали с использованием RPMI1640 Среды, содержащей 20% содержащей фетальную бычью сыворотку и 0,01 мг/мл инсулина (Invitrogen Corp.), CFPAC-1 подготавливали с использованием модифицированной Исковом среды Дульбекко (Gibco), содержащей 10% фетальную бычью сыворотку, FaDu, Calu-3 и Calu-6 подготавливали с использованием минимальной эссенциальной среды Игла (ATCC), содержащей 10% фетальную бычью сыворотку, и CaOV3 и A375 подготавливали с использованием модифицированной Иглом среды Дульбекко (Gibco), содержащей 10% фетальную бычью сыворотку, так, чтобы каждая среда содержала 2,2×106 клеток/мл. Каждую клеточную суспензию высевали при 90 мкл/лунка в 96-луночный микропланшет для клеточной культуры. Конъюгат антитело-лекарственное средство (4) или (8), разбавленный RPMI1640 Средой до 100 нМ, 20 нМ, 4 нМ, 0,8 нМ, 0,16 нМ, 0,032 нМ или 0,0064 нМ, или RPMI1640 Среду для сравнения добавляли при 10 мкл/лунка и клетки культивировали в условиях 5% CO2 при 37°C в течение 6 дней. После культивирования микропланшет извлекали из инкубатора и оставляли выстаиваться при комнатной температуре в течение 30 минут. К культуральному раствору добавляли равное количество CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega) и перемешивали в течение 10 минут с использованием смесительного устройства для планшетов. После лизиса клеток измеряли интенсивность люминесценции с использованием планшет-ридера
Процент ингибирования клеточного роста после культивирования в течение 6 дней рассчитывали в соответствии со следующим уравнением:
Ингибирование клеточного роста (%)=a/b×100
a: Среднее значение из лунок с образцом после культивирования в течение 6 дней - Среднее значение из не содержащих образец лунок в начале культивирования
b: Среднее значение из лунок, в которые добавляли среду, после культивирования в течение 6 дней - Среднее значение из не содержащих среду лунок в начале культивирования
GI50 значение рассчитывали в соответствии со следующим уравнением:
GI50 (нМ)=antilog((50-f)×(LOG10(d)-LOG10(c))/(f-e)+LOG10(d))
c: Концентрация c образца
d: Концентрация d образца
e: Процент ингибирования клеточного роста при концентрации c образца
f: Процент ингибирования клеточного роста при концентрации d образца
Концентрации c и d устанавливают отношение c>d, пересекающее 50% ингибирование клеточного роста.
[0287]
Конъюгаты антитело-лекарственное средство (4) и (8) продемонстрировали эффект ингибирования клеточного роста GI50 <1 (нМ) на TROP2 антиген-положительные клеточные линии BxPC3, NCI-H292, NIH:OVCAR-3, CFPAC-1, FaDu, Calu-3 и CaOV3. С другой стороны, эти конъюгаты антитело-лекарственное средство не демонстрируют никакого эффекта ингибирования клеточного роста (>100 (нМ)) на TROP2 антиген-отрицательные клеточные линии Calu-6 и A375.
Свободный текст Перечня последовательностей
[0288]
SEQ ID NO: 1: Нуклеотидная последовательность кДНК, кодирующей вариабельную область тяжелой цепи TINA1 антитела
SEQ ID NO: 2: Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи TINA1 антитела
SEQ ID NO: 3: Нуклеотидная последовательность кДНК, кодирующей вариабельную область легкой цепи TINA1 антитела
SEQ ID NO: 4: Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи TINA1 антитела
SEQ ID NO: 5: Нуклеотидная последовательность, кодирующая сигнал секреции κ цепи человека и константную область κ цепи человека
SEQ ID NO: 6: Нуклеотидная последовательность, кодирующая сигнал секреции тяжелой цепи человека и константную область человеческого IgG1
SEQ ID NO: 7: Нуклеотидная последовательность тяжелой цепи cTINA1 антитела
SEQ ID NO: 8: Аминокислотная последовательность тяжелой цепи cTINA1 антитела
SEQ ID NO: 9: Нуклеотидная последовательность легкой цепи cTINA1 антитела
SEQ ID NO: 10: Аминокислотная последовательность легкой цепи cTINA1 антитела
SEQ ID NO: 11: Нуклеотидная последовательность hTINA1-H1
SEQ ID NO: 12: Аминокислотная последовательность hTINA1-H1
SEQ ID NO: 13: Нуклеотидная последовательность hTINA1-H2
SEQ ID NO: 14: Аминокислотная последовательность hTINA1-H2
SEQ ID NO: 15: Нуклеотидная последовательность hTINA1-H3
SEQ ID NO: 16: Аминокислотная последовательность hTINA1-H3
SEQ ID NO: 17: Нуклеотидная последовательность of hTINA1-L1
SEQ ID NO: 18: Аминокислотная последовательность of hTINA1-L1
SEQ ID NO: 19: Нуклеотидная последовательность hTINA1-L2
SEQ ID NO: 20: Аминокислотная последовательность hTINA1-L2
SEQ ID NO: 21: Нуклеотидная последовательность hTINA1-L3
SEQ ID NO: 22: Аминокислотная последовательность hTINA1-L3
SEQ ID NO: 23: Аминокислотная последовательность CDRH1 TINA1 антитела
SEQ ID NO: 24: Аминокислотная последовательность CDRH2 TINA1 антитела
SEQ ID NO: 25: Аминокислотная последовательность CDRH3 TINA1 антитела
SEQ ID NO: 26: Аминокислотная последовательность CDRL1 TINA1 антитела
SEQ ID NO: 27: Аминокислотная последовательность CDRL2 TINA1 антитела
SEQ ID NO: 28: Аминокислотная последовательность CDRL3 TINA1 антитела
SEQ ID NO: 29: Нуклеотидная последовательность тяжелой цепи hRS7 антитела
SEQ ID NO: 30: Аминокислотная последовательность тяжелой цепи hRS7 антитела
SEQ ID NO: 31: Нуклеотидная последовательность легкой цепи hRS7 антитела
SEQ ID NO: 32: Аминокислотная последовательность легкой цепи hRS7 антитела
SEQ ID NO: 33: Праймер mG2aVR2
SEQ ID NO: 34: Праймер mKVR2
SEQ ID NO: 35: Праймер 3.3-F1
SEQ ID NO: 36: Праймер 3.3-R1
SEQ ID NO: 37: Праймер TINA1H-F
SEQ ID NO: 38: Праймер TINA1H-R
SEQ ID NO: 39: Праймер TINA1L-F
SEQ ID NO: 40: Праймер TINA1L-R
SEQ ID NO: 41: Праймер EG-Inf-F
SEQ ID NO: 42: Праймер EG1-Inf-R
SEQ ID NO: 43: Праймер CM-LKF
SEQ ID NO: 44: Праймер KCL-Inf-R
Claims (85)
1. Конъюгат антитело-лекарственное средство, где противоопухолевое соединение, представленное следующей формулой:
[Формула 1]
конъюгировано с анти-TROP2 антителом посредством тиоэфирной связи, которая образуется на участке дисульфидной связи, присутствующей в шарнирной части анти-TROP2 антитела, через линкер, имеющий структуру, представленную следующей формулой:
-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-
где анти-TROP2 антитело связано с концевой частью L1, противоопухолевое соединение связано с карбонильной группой -(CH2)n2-C(=O)- группировки, с атомом азота амино группы в положении 1 в качестве положения связывания,
где
n1 представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 6,
n2 представляет собой целое число, имеющее значение от 0 до 5,
L1 представляет собой -(Сукцинимид-3-ил-N)-(CH2)n3-C(=O)-,
где n3 представляет собой целое число, имеющее значение от 2 до 8,
L2 представляет собой -NH-(CH2CH2-O)n4-CH2CH2-C(=O)- или простую связь,
где n4 представляет собой целое число, имеющее значение от 1 до 6,
LP представляет собой тетрапептидный остаток -GGFG-,
La представляет собой -O- или простую связь, и
-(Сукцинимид-3-ил-N)- имеет структуру, представленную следующей формулой:
[Формула 2]
которая связана с анти-TROP2 антителом в положении 3 и связана с метиленовой группой в линкерной структуре, содержащей эту структуру, по атому азота в положении 1,
где анти-TROP2 антитело содержит CDRH1, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 23, CDRH2, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24, и CDRH3, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25, в его вариабельной области тяжелой цепи, и CDRL1, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26, CDRL2, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27, и CDRL3, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28, в вариабельной области легкой цепи.
2. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п. 1, где структурный фрагмент лекарственное средство-линкер, содержащий лекарственное средство, связанное с -L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-(CH2)n2-C(=O)-, представляет собой одну лекарственное средство-линкер структуру, выбранную из следующей группы:
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX) и
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX);
где -(Сукцинимид-3-ил-N)- имеет структуру, представленную следующей формулой:
[Формула 3]
которая связана с анти-TROP2 антителом в положении 3 и связана с метиленовой группой в линкерной структуре, содержащей эту структуру, по атому азота в положении 1,
-(NH-DX) представляет собой группу, представленную следующей формулой:
[Формула 4]
где атом азота амино группы в положении 1 представляет собой положение связывания, и
-GGFG- представляет собой тетрапептидный остаток -Gly-Gly-Phe-Gly-.
3. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п. 2, где структурный фрагмент лекарственное средство-линкер представляет собой одну лекарственное средство-линкер структуру, выбранную из следующей группы:
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX),
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX) и
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX).
4. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п. 3, где структурный фрагмент лекарственное средство-линкер представляет собой:
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX).
5. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п. 3, где структурный фрагмент лекарственное средство-линкер представляет собой:
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX).
6. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п. 3, где структурный фрагмент лекарственное средство-линкер представляет собой:
-(Сукцинимид-3-ил-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX).
7. Конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп.1-6, где анти-TROP2 антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, выбранные из группы:
вариабельная область тяжелой цепи, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 20 по 140 SEQ ID NO: 12, и вариабельная область легкой цепи, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 21 по 129 SEQ ID NO: 18,
вариабельная область тяжелой цепи, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 20 по 140 SEQ ID NO: 14, и вариабельная область легкой цепи, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 21 по 129 SEQ ID NO: 18,
вариабельная область тяжелой цепи, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 20 по 140 SEQ ID NO: 14, и вариабельная область легкой цепи, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 21 по 129 SEQ ID NO: 20, и
вариабельная область тяжелой цепи, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 20 по 140 SEQ ID NO: 16, и вариабельная область легкой цепи, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 21 по 129 SEQ ID NO: 22.
8. Конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп. 1-6, где анти-TROP2 антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, выбранные из группы:
тяжелая цепь, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 20 по 470 SEQ ID NO: 12, и легкая цепь, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 21 по 234 SEQ ID NO: 18,
тяжелая цепь, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 20 по 470 SEQ ID NO: 14, и легкая цепь, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 21 по 234 SEQ ID NO: 18,
тяжелая цепь, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 20 по 470 SEQ ID NO: 14, и легкая цепь, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 21 по 234 SEQ ID NO: 20, and
тяжелая цепь, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 20 по 470 SEQ ID NO: 16, и легкая цепь, состоящая из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 21 по 234 SEQ ID NO: 22.
9. Конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп. 1-6, где анти-TROP2 антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 20 по 140 SEQ ID NO: 12, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 21 по 129 SEQ ID NO: 18.
10. Конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп. 1-6, где анти-TROP2 антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 20 по 470 SEQ ID NO: 12, и вариабельную область легкой цепи, состоящую из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 21 по 234 SEQ ID NO: 18.
11. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п. 8, где анти-TROP2 антитело не содержит лизиновый остаток на карбоксильном конце тяжелой цепи.
12. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п. 10, где анти-TROP2 антитело не содержит лизиновый остаток на карбоксильном конце тяжелой цепи.
13. Конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп. 1-12, где среднее количество конъюгированных единиц выбранной одной лекарственное средство-линкер структуры в расчете на антитело находится в пределах от 2 до 8.
14. Конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп. 1-12, где среднее количество конъюгированных единиц выбранной одной лекарственное средство-линкер структуры в расчете на антитело находится в пределах от 3 до 8.
15. Лекарственное средство для лечения опухоли и/или рака, содержащее конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп. 1-14.
16. Лекарственное средство по п. 15 для использования против рака легкого, рака почки, уротелиального рака, колоректального рака, рака предстательной железы, мультиформной глиобластомы, рака яичников, панкреатического рака, рака молочной железы, меланомы, рака печени, рака мочевого пузыря, гастрального рака, цервикального рака, рака головы и шеи или эзофагеального рака.
17. Фармацевтическая композиция для лечения опухоли и/или рака, содержащая конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп. 1-14 в качестве активного компонента и фармацевтически приемлемый компонент для формирования коспозиции.
18. Фармацевтическая композиция по п. 17 для использования против рака легкого, рака почки, уротелиального рака, колоректального рака, рака предстательной железы, мультиформной глиобластомы, рака яичников, панкреатического рака, рака молочной железы, меланомы, рака печени, рака мочевого пузыря, гастрального рака, цервикального рака, рака головы и шеи или эзофагеального рака.
19. Способ лечения опухоли и/или рака, включающий введение пациенту конъюгата антитело-лекарственное средство по любому из пп. 1-14.
20. Способ по п. 19, для использования против рака легкого, рака почки, уротелиального рака, колоректального рака, рака предстательной железы, мультиформной глиобластомы, рака яичников, панкреатического рака, рака молочной железы, меланомы, рака печени, рака мочевого пузыря, гастрального рака, цервикального рака, рака головы и шеи или эзофагеального рака.
21. Конъюгат антитело-лекарственное средство, представленное следующей формулой:
где n представляет собой среднее количество единиц структуры лекарственное средство-линкер, конъюгированных с анти-TROP2 антителом, и
где анти-TROP2 антитело содержит:
тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, представленную положениями с 20 по 470 SEQ ID NO: 12, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности, представленной положениями с 21 по 234 SEQ ID NO: 18.
22. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п. 21, где анти-TROP2 антитело не содержит лизиновый остаток на карбоксильном конце тяжелой цепи.
23. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п. 21 или 22, где n имеет значение от 2 до 8.
24. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п. 21 или 22, где n имеет значение от 3 до 8.
25. Фармацевтическая композиция для лечения опухоли и/или рака, содержащая конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп. 21-24 в качестве активного компонента и фармацевтически приемлемый компонент для формулирования композиции.
26. Фармацевтическая композиция по п. 25 для использования против рака легкого, рака почки, уротелиального рака, колоректального рака, рака предстательной железы, мультиформной глиобластомы, рака яичников, панкреатического рака, рака молочной железы, меланомы, рака печени, рака мочевого пузыря, гастрального рака, цервикального рака, рака головы и шеи или эзофагеального рака.
27. Способ лечения опухоли и/или рака, включающий введение пациенту конъюгата антитело-лекарственное средство по любому из пп. 21-24.
28. Способ по п. 27 для использования против рака легкого, рака почки, уротелиального рака, колоректального рака, рака предстательной железы, мультиформной глиобластомы, рака яичников, панкреатического рака, рака молочной железы, меланомы, рака печени, рака мочевого пузыря, гастрального рака, цервикального рака, рака головы и шеи или эзофагеального рака.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2013-267548 | 2013-12-25 | ||
JP2013267548 | 2013-12-25 | ||
PCT/JP2014/006421 WO2015098099A1 (ja) | 2013-12-25 | 2014-12-24 | 抗trop2抗体-薬物コンジュゲート |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019134399A Division RU2743077C2 (ru) | 2013-12-25 | 2014-12-24 | Конъюгат анти-trop2 антитело-лекарственное средство |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016130095A RU2016130095A (ru) | 2018-01-30 |
RU2016130095A3 RU2016130095A3 (ru) | 2018-09-03 |
RU2705367C2 true RU2705367C2 (ru) | 2019-11-07 |
Family
ID=53477995
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019134399A RU2743077C2 (ru) | 2013-12-25 | 2014-12-24 | Конъюгат анти-trop2 антитело-лекарственное средство |
RU2016130095A RU2705367C2 (ru) | 2013-12-25 | 2014-12-24 | Конъюгат анти-trop2 антитело-лекарственное средство |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019134399A RU2743077C2 (ru) | 2013-12-25 | 2014-12-24 | Конъюгат анти-trop2 антитело-лекарственное средство |
Country Status (27)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US9850312B2 (ru) |
EP (2) | EP3424955A1 (ru) |
JP (6) | JP6130517B2 (ru) |
KR (10) | KR102088169B1 (ru) |
CN (3) | CN111228510B (ru) |
AU (3) | AU2014371934B2 (ru) |
CA (1) | CA2933666C (ru) |
CY (1) | CY1121246T1 (ru) |
DK (1) | DK3088419T3 (ru) |
ES (1) | ES2703903T3 (ru) |
HR (1) | HRP20190056T1 (ru) |
HU (1) | HUE042512T2 (ru) |
IL (3) | IL246361B (ru) |
LT (1) | LT3088419T (ru) |
MX (3) | MX2016008192A (ru) |
MY (1) | MY195162A (ru) |
NZ (1) | NZ721213A (ru) |
PH (2) | PH12016501233B1 (ru) |
PL (1) | PL3088419T3 (ru) |
PT (1) | PT3088419T (ru) |
RS (1) | RS58173B1 (ru) |
RU (2) | RU2743077C2 (ru) |
SG (2) | SG10201902571VA (ru) |
SI (1) | SI3088419T1 (ru) |
TR (1) | TR201900176T4 (ru) |
TW (5) | TWI633893B (ru) |
WO (1) | WO2015098099A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2771292C2 (ru) * | 2017-10-14 | 2022-04-29 | Эббви Инк. | Конъюгаты анти-cd71 активируемое антитело-лекарственное средство и способы их применения |
Families Citing this family (102)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102088169B1 (ko) * | 2013-12-25 | 2020-03-12 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 항 trop2 항체-약물 컨쥬게이트 |
KR102190548B1 (ko) | 2014-01-31 | 2020-12-14 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 항-her2 항체-약물 접합체 |
ES2754348T3 (es) * | 2014-04-10 | 2020-04-17 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Conjugado de (anticuerpo anti-HER2)-fármaco |
US20170151281A1 (en) | 2015-02-19 | 2017-06-01 | Batu Biologics, Inc. | Chimeric antigen receptor dendritic cell (car-dc) for treatment of cancer |
BR112017027690A2 (pt) | 2015-06-29 | 2018-10-09 | Daiichi Sankyo Co Ltd | método para produção de uma composição de conjugado anticorpo-fármaco, e, composição de conjugado anticorpo-fármaco |
CN109843327B (zh) | 2016-07-07 | 2022-05-13 | 小利兰·斯坦福大学托管委员会 | 抗体佐剂缀合物 |
CN108066772B (zh) * | 2016-11-14 | 2021-07-13 | 中国科学院上海药物研究所 | 靶向tacstd2的抗体与药物偶联体(adc)分子 |
EP3552626A4 (en) | 2016-12-12 | 2020-06-10 | Daiichi Sankyo Company, Limited | ASSOCIATION OF AN ANTIBODY DRUG CONJUGATE AND AN IMMUNE CONTROL POINT INHIBITOR |
CN110382535A (zh) | 2017-01-17 | 2019-10-25 | 第一三共株式会社 | 抗-gpr20抗体以及抗-gpr20抗体-药物缀合物 |
TWI794230B (zh) | 2017-05-15 | 2023-03-01 | 日商第一三共股份有限公司 | 抗cdh6抗體及抗cdh6抗體-藥物結合物、以及其製造方法 |
EP3420906A1 (en) | 2017-06-29 | 2019-01-02 | Koninklijke Philips N.V. | Image contrast enhancement of an x-ray image |
CN107446050A (zh) * | 2017-08-11 | 2017-12-08 | 百奥泰生物科技(广州)有限公司 | Trop2阳性疾病治疗的化合物及方法 |
MA49987A (fr) | 2017-08-23 | 2020-07-01 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Préparation de conjugué anticorps-médicament et lyophilisation associée |
CN111065621B (zh) | 2017-08-31 | 2024-01-26 | 第一三共株式会社 | 制备抗体-药物缀合物的新方法 |
SG11202000997YA (en) * | 2017-08-31 | 2020-03-30 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Improved method for producing antibody-drug conjugate |
IL301638B1 (en) | 2017-09-29 | 2024-05-01 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Conjugation of an antibody with a pyrrolobenzodiazepine derivative |
EP4249002A3 (en) | 2018-05-18 | 2023-11-22 | Daiichi Sankyo Co., Ltd. | Anti-muc1- exatecan antibody-drug conjugate |
CN114014932A (zh) * | 2018-07-09 | 2022-02-08 | 启德医药科技(苏州)有限公司 | 滋养层细胞表面抗原2(trop2)特异性抗体 |
KR20210038904A (ko) | 2018-07-25 | 2021-04-08 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 항체-약물 콘쥬게이트의 효과적인 제조 방법 |
EP3831853A4 (en) | 2018-07-27 | 2022-06-01 | Daiichi Sankyo Company, Limited | ANTIBODY-DRUG CONJUGATE PROTEIN-RECOGNIZING DRUG UNIT |
AU2019315177A1 (en) * | 2018-07-31 | 2021-02-25 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Treatment of metastatic brain tumor by administration of antibody-drug conjugate |
BR112021001750A2 (pt) * | 2018-08-06 | 2021-04-27 | Daiichi Sankyo Company, Limited | composição farmacêutica |
JP7481255B2 (ja) | 2018-08-23 | 2024-05-10 | 第一三共株式会社 | 抗体薬物複合体の感受性マーカー |
CN113260384A (zh) | 2018-11-05 | 2021-08-13 | 西纳福克斯股份有限公司 | 用于靶向表达trop-2的肿瘤的抗体缀合物 |
CA3119956A1 (en) | 2018-11-14 | 2020-05-22 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Anti-cdh6 antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate |
CN113271942A (zh) * | 2018-12-11 | 2021-08-17 | 第一三共株式会社 | 抗体-药物缀合物与parp抑制剂的组合 |
AU2019407426A1 (en) * | 2018-12-21 | 2021-07-22 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Combination of antibody-drug conjugate and kinase inhibitor |
WO2020164561A1 (en) * | 2019-02-15 | 2020-08-20 | Wuxi Biologics (Shanghai) Co. Ltd. | Process for preparing antibody-drug conjugates with improved homogeneity |
AU2020241686A1 (en) | 2019-03-15 | 2021-11-04 | Bolt Biotherapeutics, Inc. | Immunoconjugates targeting HER2 |
US20220153862A1 (en) * | 2019-03-19 | 2022-05-19 | CSPC Megalith Biopharmaceutical Co., Ltd. | Anti-trophoblast cell surface antigen 2 (trop2) antibodies and antibody drug conjugates comprising same |
EP3950061A4 (en) | 2019-03-25 | 2022-11-16 | Daiichi Sankyo Company, Limited | ANTIBODY PYRROLOBENZODIAZEPINE DERIVATIVE CONJUGATE |
US20220168438A1 (en) | 2019-03-27 | 2022-06-02 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Combination of antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate and parp inhibitor |
HUE060364T2 (hu) | 2019-03-29 | 2023-02-28 | Medimmune Ltd | Vegyületek és konjugátumaik |
DK3958977T3 (en) * | 2019-04-26 | 2023-12-11 | Immunogen Inc | Camptothecinderivater |
AU2020285681A1 (en) * | 2019-05-29 | 2022-01-27 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Dosage of an antibody-drug conjugate |
WO2020249063A1 (en) * | 2019-06-13 | 2020-12-17 | Bio-Thera Solutions, Ltd. | Methods for the treatment of trop2 positive diseases |
CN112390885B (zh) * | 2019-08-12 | 2024-01-19 | 凯惠科技发展(上海)有限公司 | 一种trop2抗体及其制备方法、其偶联物和应用 |
CN112646038A (zh) * | 2019-10-11 | 2021-04-13 | 迈威(上海)生物科技股份有限公司 | 抗人Trop-2抗体及其应用 |
WO2021136483A1 (en) * | 2019-12-31 | 2021-07-08 | Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. | Anti-trop2 antibodies, antibody-drug conjugates, and application of the same |
CN114846021B (zh) * | 2020-01-22 | 2024-06-14 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 抗trop-2抗体-依喜替康类似物偶联物及其医药用途 |
BR112022015283A2 (pt) | 2020-03-06 | 2022-09-20 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Conjugado anticorpo-fármaco incluindo derivados de dinucleotídeos cíclicos |
JP2023518410A (ja) | 2020-03-20 | 2023-05-01 | イミュノメディックス, インコーポレイテッド | サシツズマブゴビテカン療法用のバイオマーカー |
CN115298220A (zh) * | 2020-03-24 | 2022-11-04 | 上海翰森生物医药科技有限公司 | 抗体-药物偶联物及其医药用途 |
CN111518212B (zh) * | 2020-04-16 | 2021-03-12 | 上海洛启生物医药技术有限公司 | 抗Trop2纳米抗体及其应用 |
CA3176626A1 (en) | 2020-05-08 | 2021-11-11 | David Dornan | Elastase-substrate, peptide linker immunoconjugates, and uses thereof |
JP2023539715A (ja) | 2020-06-24 | 2023-09-19 | アストラゼネカ ユーケー リミテッド | 抗体-薬物コンジュゲートとatm阻害剤との組合わせ |
WO2021260582A1 (en) | 2020-06-24 | 2021-12-30 | Astrazeneca Uk Limited | Combination of antibody-drug conjugate and aurora b inhibitor |
WO2021260583A1 (en) | 2020-06-24 | 2021-12-30 | Astrazeneca Uk Limited | Combination of antibody-drug conjugate and dna-pk inhibitor |
TW202216208A (zh) | 2020-06-24 | 2022-05-01 | 英商阿斯特捷利康英國股份有限公司 | 抗體-藥物結合物及atr抑制劑之組合 |
TW202216207A (zh) | 2020-06-24 | 2022-05-01 | 英商阿斯特捷利康英國股份有限公司 | 抗體-藥物結合物及cdk9抑制劑之組合 |
CN115515644A (zh) * | 2020-06-28 | 2022-12-23 | 昆山新蕴达生物科技有限公司 | 一种抗体-药物偶联物,其制备方法及应用 |
BR112023000711A2 (pt) | 2020-07-17 | 2023-01-31 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Método para produzir uma composição de conjugado de anticorpo-fármaco, e, composição de conjugado de anticorpo-fármaco |
JP2023537940A (ja) | 2020-08-13 | 2023-09-06 | ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド | ピラゾロアゼピンイムノコンジュゲート、及びその使用 |
IL301921A (en) | 2020-10-09 | 2023-06-01 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Combining an antibody-drug conjugate and a selective 1PARP inhibitor |
CN112321715B (zh) * | 2020-11-03 | 2022-05-10 | 博奥信生物技术(南京)有限公司 | 抗trop2纳米抗体及其制备方法和应用 |
AU2021376354A1 (en) * | 2020-11-04 | 2023-06-22 | Myeloid Therapeutics, Inc. | Engineered chimeric fusion protein compositions and methods of use thereof |
KR20230106645A (ko) | 2020-11-11 | 2023-07-13 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 항체-약물 콘주게이트와 항 SIRPα 항체의 조합 |
US20230398230A1 (en) | 2020-11-12 | 2023-12-14 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Treatment of mesothelioma by administration of anti-b7-h3 antibody-drug conjugate |
KR20230121842A (ko) * | 2020-12-18 | 2023-08-21 | 상하이 후단-장지앙 바이오-파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 | Trop2를 표적으로 하는 항체 약물 접합체, 이의 제조방법 및 용도 |
TW202245844A (zh) | 2021-01-13 | 2022-12-01 | 紀念斯隆凱特琳癌症中心 | 抗dll3抗體-藥物結合物 |
WO2022152308A1 (en) * | 2021-01-18 | 2022-07-21 | Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. | Engineered anti-trop2 antibody and antibody-drug conjugate thereof |
JP2024504262A (ja) | 2021-01-28 | 2024-01-31 | ジーンクアンタム ヘルスケア (スーチョウ) シーオー., エルティーディー. | リガーゼ融合タンパク質及びその使用 |
TW202241454A (zh) | 2021-02-01 | 2022-11-01 | 日商第一三共股份有限公司 | 抗體-免疫賦活化劑共軛物之新穎製造方法 |
IL305816A (en) | 2021-03-12 | 2023-11-01 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Glycan and a method for preparing a medicine containing it |
TW202300175A (zh) | 2021-03-26 | 2023-01-01 | 美商博特生物治療公司 | 2-胺基-4-羧醯胺-苯并氮呯免疫結合物及其用途 |
JP2024511088A (ja) | 2021-03-26 | 2024-03-12 | ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド | 2-アミノ-4-カルボキサミド-ベンゾアゼピン免疫複合体、及びその使用 |
EP4349371A1 (en) | 2021-06-02 | 2024-04-10 | Bio-Thera Solutions, Ltd. | Drug conjugate and use thereof |
US11931424B2 (en) | 2021-06-11 | 2024-03-19 | Gilead Sciences, Inc. | Combination MCL-1 inhibitors with anti-body drug conjugates |
JP2024520801A (ja) | 2021-06-11 | 2024-05-24 | ギリアード サイエンシーズ, インコーポレイテッド | Mcl-1阻害剤と抗がん剤との組み合わせ |
CN115558026A (zh) * | 2021-07-02 | 2023-01-03 | 和迈生物科技有限公司 | 抗trop2单域抗体及其应用 |
TW202320859A (zh) | 2021-07-21 | 2023-06-01 | 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 | 一種含抗trop2抗體藥物偶聯物的醫藥組成物及其用途 |
AU2022347380A1 (en) | 2021-09-15 | 2024-04-11 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Antibody-drug conjugate for use in methods of treating chemotherapy-resistant cancer |
TW202330041A (zh) | 2021-10-18 | 2023-08-01 | 日商第一三共股份有限公司 | 抗cd37抗體-藥物結合物 |
CA3234909A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Gilead Sciences, Inc. | Pyridizin-3(2h)-one derivatives |
AU2022376954A1 (en) | 2021-10-29 | 2024-05-02 | Gilead Sciences, Inc. | Cd73 compounds |
CA3234604A1 (en) | 2021-10-29 | 2023-05-04 | Shelley Erin ACKERMAN | Tlr agonist immunoconjugates with cysteine-mutant antibodies, and uses thereof |
WO2023089527A1 (en) | 2021-11-18 | 2023-05-25 | Astrazeneca Uk Limited | Combination of antibody-drug conjugate and parp1 selective inhibitor |
TW202334238A (zh) | 2021-11-30 | 2023-09-01 | 日商第一三共股份有限公司 | 蛋白酶分解性遮蔽抗體 |
WO2023122615A1 (en) | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Gilead Sciences, Inc. | Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof |
US20240124412A1 (en) | 2021-12-22 | 2024-04-18 | Gilead Sciences, Inc. | Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof |
TW202333800A (zh) | 2021-12-28 | 2023-09-01 | 英商阿斯特捷利康英國股份有限公司 | 抗體-藥物結合物及rasg12c抑制劑之組合 |
CA3240724A1 (en) | 2021-12-28 | 2023-07-06 | Astrazeneca Uk Limited | Combination of antibody-drug conjugate and atr inhibitor |
TW202340168A (zh) | 2022-01-28 | 2023-10-16 | 美商基利科學股份有限公司 | Parp7抑制劑 |
WO2023175483A1 (en) * | 2022-03-16 | 2023-09-21 | Astrazeneca Uk Limited | A scoring method for an anti-trop2 antibody‑drug conjugate therapy |
EP4245756A1 (en) | 2022-03-17 | 2023-09-20 | Gilead Sciences, Inc. | Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof |
WO2023180485A1 (en) | 2022-03-23 | 2023-09-28 | Synaffix B.V. | Antibody-conjugates for targeting of tumours expressing trop-2 |
WO2023194800A1 (en) * | 2022-04-06 | 2023-10-12 | Legochem Biosciences, Inc. | Antibody-drug conjugate comprising antibody against human trop2 and use thereof |
WO2023201267A1 (en) | 2022-04-13 | 2023-10-19 | Gilead Sciences, Inc. | Combination therapy for treating trop-2 expressing cancers |
WO2023201268A1 (en) | 2022-04-13 | 2023-10-19 | Gilead Sciences, Inc. | Combination therapy for treating tumor antigen expressing cancers |
TW202400138A (zh) | 2022-04-21 | 2024-01-01 | 美商基利科學股份有限公司 | Kras g12d調節化合物 |
TW202400140A (zh) | 2022-04-27 | 2024-01-01 | 日商第一三共股份有限公司 | 抗體-藥物結合物與ezh1及/或ezh2抑制劑之組合 |
TW202400650A (zh) | 2022-05-11 | 2024-01-01 | 日商第一三共股份有限公司 | 抗體與cd47抑制劑之組合 |
WO2023228095A1 (en) | 2022-05-24 | 2023-11-30 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Dosage regimen of an anti-cdh6 antibody-drug conjugate |
WO2023240135A2 (en) | 2022-06-07 | 2023-12-14 | Actinium Pharmaceuticals, Inc. | Bifunctional chelators and conjugates |
WO2024006929A1 (en) | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Gilead Sciences, Inc. | Cd73 compounds |
WO2024012566A2 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. | Antibody, linkers, payload, conjugates and applications thereof |
WO2024023750A1 (en) | 2022-07-28 | 2024-02-01 | Astrazeneca Uk Limited | Combination of antibody-drug conjugate and bispecific checkpoint inhibitor |
WO2024050031A2 (en) * | 2022-08-31 | 2024-03-07 | Bionecure Therapeutics Inc | Novel camptothecin derivatves as antibody-drug conjugates (adc) payloads |
KR20240032207A (ko) | 2022-08-31 | 2024-03-12 | 경북대학교 산학협력단 | Trop2에 결합하는 펩타이드 및 이의 용도 |
WO2024097812A1 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Gilead Sciences, Inc. | Therapy for treating bladder cancer |
WO2024102693A2 (en) | 2022-11-07 | 2024-05-16 | Xencor, Inc. | Il-18-fc fusion proteins |
WO2024116094A1 (en) | 2022-11-30 | 2024-06-06 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Combination of antibody-drug conjugates and dnmt inhibitors |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EA200100485A1 (ru) * | 1998-10-30 | 2001-12-24 | Дайити Фармасьютикал Ко., Лтд. | Соединение сдлс и способ его измерения |
US20050123536A1 (en) * | 2001-11-20 | 2005-06-09 | Che-Leung Law | Treatment of immunological disorders using anti-dc30 antibodies |
EA200702313A1 (ru) * | 2005-04-22 | 2008-06-30 | Амген Инк. | Терапевтические агенты на основе токсичных пептидов |
US20080305044A1 (en) * | 2004-11-29 | 2008-12-11 | Seattle Genetics, Inc. | Engineered Antibodies and Immunoconjugates |
RU2008152431A (ru) * | 2006-05-30 | 2010-07-10 | Дженентек, Инк. (Us) | Антитела и иммуноконъюгаты и их применения |
US20110293513A1 (en) * | 2002-12-13 | 2011-12-01 | Immunomedics, Inc. | Immunoconjugates with an Intracellularly-Cleavable Linkage |
US20130123178A1 (en) * | 2010-05-13 | 2013-05-16 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon superfamily peptides exhibiting nuclear hormone receptor activity |
Family Cites Families (73)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3040121B2 (ja) | 1988-01-12 | 2000-05-08 | ジェネンテク,インコーポレイテッド | 増殖因子レセプターの機能を阻害することにより腫瘍細胞を処置する方法 |
IL162181A (en) | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
ATE185601T1 (de) | 1990-07-10 | 1999-10-15 | Cambridge Antibody Tech | Verfahren zur herstellung von spezifischen bindungspaargliedern |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
JP3008226B2 (ja) | 1991-01-16 | 2000-02-14 | 第一製薬株式会社 | 六環性化合物 |
US5637770A (en) | 1991-01-16 | 1997-06-10 | Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. | Hexa-cyclic compound |
DK0590058T3 (da) | 1991-06-14 | 2004-03-29 | Genentech Inc | Humaniseret heregulin-antistof |
DK0605522T3 (da) | 1991-09-23 | 2000-01-17 | Medical Res Council | Fremgangsmåde til fremstilling af humaniserede antistoffer |
ATE463573T1 (de) | 1991-12-02 | 2010-04-15 | Medimmune Ltd | Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken |
EP0656941B1 (en) | 1992-03-24 | 2005-06-01 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
JP3359955B2 (ja) | 1992-07-16 | 2002-12-24 | 第一製薬株式会社 | 抗腫瘍剤 |
US6214345B1 (en) | 1993-05-14 | 2001-04-10 | Bristol-Myers Squibb Co. | Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates |
GB9313509D0 (en) | 1993-06-30 | 1993-08-11 | Medical Res Council | Chemisynthetic libraries |
EP0731842A1 (en) | 1993-12-03 | 1996-09-18 | Medical Research Council | Recombinant binding proteins and peptides |
JPH08337584A (ja) | 1995-04-10 | 1996-12-24 | Dai Ichi Seiyaku Co Ltd | 縮合六環式アミノ化合物、これを含有する医薬及びその製法 |
US6504029B1 (en) | 1995-04-10 | 2003-01-07 | Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. | Condensed-hexacyclic compounds and a process therefor |
SG50747A1 (en) | 1995-08-02 | 1998-07-20 | Tanabe Seiyaku Co | Comptothecin derivatives |
JPH1095802A (ja) | 1995-12-28 | 1998-04-14 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | カンプトテシン誘導体 |
CA2192725C (en) | 1995-12-28 | 2004-04-20 | Kenji Tsujihara | Camptothecin derivatives |
TW527183B (en) | 1996-06-06 | 2003-04-11 | Daiichi Seiyaku Co | Drug complex |
TW409058B (en) | 1996-06-06 | 2000-10-21 | Daiichi Seiyaku Co | Method for preparation of a drug complex |
JPH1171280A (ja) | 1997-06-26 | 1999-03-16 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | 医薬組成物 |
JPH1192405A (ja) | 1997-09-19 | 1999-04-06 | Dai Ichi Seiyaku Co Ltd | 薬物複合体 |
DE69942021D1 (de) | 1998-04-20 | 2010-04-01 | Glycart Biotechnology Ag | Glykosylierungs-engineering von antikörpern zur verbesserung der antikörperabhängigen zellvermittelten zytotoxizität |
JP4560210B2 (ja) | 1998-05-22 | 2010-10-13 | 第一三共株式会社 | 薬物複合体 |
DK2270149T3 (en) | 1999-04-09 | 2016-05-09 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | PROCEDURE TO CONTROL THE ACTIVITY OF IMMUNOLOGICAL FUNCTIONAL MOLECULE. |
BRPI0017590B8 (pt) | 1999-06-25 | 2021-05-25 | Genentech Inc | conjugado de maitansinoide - anticorpo anti-erbb, e formulação farmacêutica |
JP2002060351A (ja) | 2000-03-22 | 2002-02-26 | Dai Ichi Seiyaku Co Ltd | 水酸基を有する薬物を含むdds化合物 |
IL153505A0 (en) | 2000-06-29 | 2003-07-06 | Daiichi Seiyaku Co | Dds compound and process for the preparation thereof |
CN1556712A (zh) | 2000-07-13 | 2004-12-22 | ��һ��������ҩ��ʽ���� | 含dds化合物的药用组合物 |
CN102311986B (zh) | 2000-10-06 | 2015-08-19 | 协和发酵麒麟株式会社 | 产生抗体组合物的细胞 |
KR100573565B1 (ko) | 2001-08-29 | 2006-04-25 | 주식회사 포스코 | 요철부가 형성된 실린더 링과 이 실린더 링이 결합된 맨드릴 |
WO2003038043A2 (en) | 2001-11-01 | 2003-05-08 | Uab Research Foundation | Combinations of dr5 antibody and other therapeutic agents |
US8877901B2 (en) | 2002-12-13 | 2014-11-04 | Immunomedics, Inc. | Camptothecin-binding moiety conjugates |
ATE417067T1 (de) | 2002-03-01 | 2008-12-15 | Immunomedics Inc | Rs7 antikörper |
US9745380B2 (en) * | 2002-03-01 | 2017-08-29 | Immunomedics, Inc. | RS7 antibodies |
AU2003215732B2 (en) * | 2002-03-01 | 2009-12-17 | Immunomedics, Inc. | Internalizing anti-CD74 antibodies and methods of use |
US20050276812A1 (en) | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Genentech, Inc. | Antibody-drug conjugates and methods |
EP1572242B1 (en) | 2002-12-13 | 2014-04-16 | Immunomedics, Inc. | Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage |
US20040202666A1 (en) | 2003-01-24 | 2004-10-14 | Immunomedics, Inc. | Anti-cancer anthracycline drug-antibody conjugates |
WO2005084390A2 (en) | 2004-03-02 | 2005-09-15 | Seattle Genetics, Inc. | Partially loaded antibodies and methods of their conjugation |
JP4806680B2 (ja) | 2004-05-19 | 2011-11-02 | メダレックス インコーポレイテッド | 自己犠牲リンカー及び薬剤複合体 |
KR20120068807A (ko) | 2004-07-22 | 2012-06-27 | 제넨테크, 인크. | Her2 항체 조성물 |
US8802820B2 (en) | 2004-11-12 | 2014-08-12 | Xencor, Inc. | Fc variants with altered binding to FcRn |
KR20170134771A (ko) | 2005-01-21 | 2017-12-06 | 제넨테크, 인크. | Her 항체의 고정 용량 투여법 |
DE102005009084A1 (de) | 2005-02-28 | 2006-08-31 | Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh | Proteinbindende Anthrazyklin-Peptid-Derivate und diese enthaltende Arzneimittel |
DE102005009099A1 (de) | 2005-02-28 | 2006-08-31 | Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh | Proteinbindende Camptothecin-Peptid-Derivate und diese enthaltende Arzneimittel |
US20080131428A1 (en) | 2006-02-24 | 2008-06-05 | Arius Research, Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of TROP-2 |
UA95958C2 (en) | 2006-05-30 | 2011-09-26 | Дженентек, Инк. | Antibody that binds to cd22, immunoconjugates and uses therefor |
US7780340B2 (en) | 2006-11-30 | 2010-08-24 | Advanced Process Technologies, Inc. | Cheese vat having fluid accessible seal assembly |
PL2281006T3 (pl) | 2008-04-30 | 2018-01-31 | Immunogen Inc | Środki łączące i ich zastosowania |
AU2009246516B2 (en) | 2008-05-13 | 2015-03-05 | Genentech, Inc. | Analysis of antibody drug conjugates by bead-based affinity capture and mass spectrometry |
BRPI0921586A2 (pt) | 2008-11-18 | 2019-09-24 | Merrimack Pharmaceuticals Inc | articuladores de albumina de soro humana e conjugados destes |
KR20120104158A (ko) | 2009-07-22 | 2012-09-20 | 엔즌 파마슈티칼스, 인코포레이티드 | 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 다분지형 중합 컨쥬게이트와 her2 수용체 길항제를 병용하여 her2 양성 암을 치료하는 방법 |
WO2011022474A2 (en) | 2009-08-18 | 2011-02-24 | Baker Hughes Incorporated | Method of forming polystalline diamond elements, polycrystalline diamond elements, and earth boring tools carrying such polycrystalline diamond elements |
CA2775350A1 (en) | 2009-09-24 | 2011-03-31 | Seattle Genetics, Inc. | Dr5 ligand drug conjugates |
WO2011068845A1 (en) * | 2009-12-02 | 2011-06-09 | Immunomedics, Inc. | Combining radioimmunotherapy and antibody-drug conjugates for improved cancer therapy |
NZ702053A (en) | 2010-05-17 | 2016-01-29 | Livtech Inc | Anti-human trop-2 antibody having antitumor activity in vivo |
CN105797168A (zh) | 2010-05-18 | 2016-07-27 | 天蓝制药公司 | 用于治疗自身免疫性疾病或其它疾病的组合物和方法 |
EP2594589A1 (en) | 2010-06-10 | 2013-05-22 | Sapporo Medical University | ANTI-Trop-2 ANTIBODY |
BR112013000951A2 (pt) | 2010-07-12 | 2016-05-17 | Covx Technologies Ireland Ltd | conjungados de anticorpo multifuncionais |
WO2012074757A1 (en) * | 2010-11-17 | 2012-06-07 | Genentech, Inc. | Alaninyl maytansinol antibody conjugates |
EP2776470A2 (en) | 2011-11-11 | 2014-09-17 | Rinat Neuroscience Corporation | Antibodies specific for trop-2 and their uses |
US9427464B2 (en) | 2011-11-22 | 2016-08-30 | Chiome Bioscience Inc. | Anti-human TROP-2 antibody having an antitumor activity in vivo |
SG11201403085PA (en) | 2011-12-14 | 2014-10-30 | Seattle Genetics Inc | Fgfr antibody drug conjugates (adcs) and the use thereof |
US20130280282A1 (en) | 2012-04-24 | 2013-10-24 | Daiichi Sankyo Co., Ltd. | Dr5 ligand drug conjugates |
KR20150023729A (ko) | 2012-06-14 | 2015-03-05 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 핵 수용체 리간드 폴리펩티드에 접합된 항-psma 항체 |
SI2907824T1 (en) * | 2012-10-11 | 2018-06-29 | Daiichi Sankyo Company, Limited | THE HEALTHY KJUBIER OF THE PROTITEL |
US9872924B2 (en) | 2012-10-19 | 2018-01-23 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Antibody-drug conjugate produced by binding through linker having hydrophilic structure |
JP6262768B2 (ja) | 2013-01-03 | 2018-01-17 | セルトリオン, インク. | 抗体−リンカー−薬物結合体、その製造方法およびそれを含む抗癌剤組成物 |
KR102088169B1 (ko) * | 2013-12-25 | 2020-03-12 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 항 trop2 항체-약물 컨쥬게이트 |
KR102190548B1 (ko) * | 2014-01-31 | 2020-12-14 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 항-her2 항체-약물 접합체 |
KR20240008415A (ko) * | 2014-04-10 | 2024-01-18 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 항her3 항체-약물 콘주게이트 |
-
2014
- 2014-12-24 KR KR1020197000700A patent/KR102088169B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-24 JP JP2015554565A patent/JP6130517B2/ja active Active
- 2014-12-24 SI SI201430973T patent/SI3088419T1/sl unknown
- 2014-12-24 KR KR1020227015978A patent/KR102444529B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-24 DK DK14874745.4T patent/DK3088419T3/en active
- 2014-12-24 ES ES14874745T patent/ES2703903T3/es active Active
- 2014-12-24 EP EP18187671.5A patent/EP3424955A1/en active Pending
- 2014-12-24 KR KR1020217009822A patent/KR102288093B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-24 KR KR1020227000880A patent/KR102399141B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-24 SG SG10201902571VA patent/SG10201902571VA/en unknown
- 2014-12-24 LT LTEP14874745.4T patent/LT3088419T/lt unknown
- 2014-12-24 MY MYPI2016001186A patent/MY195162A/en unknown
- 2014-12-24 KR KR1020207006601A patent/KR102237803B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-24 SG SG11201605215YA patent/SG11201605215YA/en unknown
- 2014-12-24 CN CN202010034409.0A patent/CN111228510B/zh active Active
- 2014-12-24 PL PL14874745T patent/PL3088419T3/pl unknown
- 2014-12-24 KR KR1020167015563A patent/KR101941758B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-24 NZ NZ721213A patent/NZ721213A/en unknown
- 2014-12-24 EP EP14874745.4A patent/EP3088419B1/en active Active
- 2014-12-24 KR KR1020217024615A patent/KR102351164B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-24 RS RS20181597A patent/RS58173B1/sr unknown
- 2014-12-24 MX MX2016008192A patent/MX2016008192A/es active IP Right Grant
- 2014-12-24 CN CN202310800520.XA patent/CN116987193A/zh active Pending
- 2014-12-24 HU HUE14874745A patent/HUE042512T2/hu unknown
- 2014-12-24 CN CN201480071134.0A patent/CN105849126B/zh active Active
- 2014-12-24 RU RU2019134399A patent/RU2743077C2/ru active
- 2014-12-24 WO PCT/JP2014/006421 patent/WO2015098099A1/ja active Application Filing
- 2014-12-24 KR KR1020227031871A patent/KR102491710B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-24 PT PT14874745T patent/PT3088419T/pt unknown
- 2014-12-24 AU AU2014371934A patent/AU2014371934B2/en active Active
- 2014-12-24 CA CA2933666A patent/CA2933666C/en active Active
- 2014-12-24 RU RU2016130095A patent/RU2705367C2/ru active
- 2014-12-24 TR TR2019/00176T patent/TR201900176T4/tr unknown
- 2014-12-24 KR KR1020237002152A patent/KR102535900B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-24 KR KR1020237016957A patent/KR20230078820A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-12-25 TW TW103145458A patent/TWI633893B/zh active
- 2014-12-25 TW TW107124674A patent/TWI712423B/zh active
- 2014-12-25 TW TW112127350A patent/TW202344273A/zh unknown
- 2014-12-25 TW TW109138661A patent/TWI779386B/zh active
- 2014-12-25 TW TW111132669A patent/TWI812438B/zh active
-
2016
- 2016-06-20 MX MX2020009970A patent/MX2020009970A/es unknown
- 2016-06-20 IL IL246361A patent/IL246361B/en active IP Right Grant
- 2016-06-20 US US15/187,179 patent/US9850312B2/en active Active
- 2016-06-20 MX MX2020009971A patent/MX2020009971A/es unknown
- 2016-06-22 PH PH12016501233A patent/PH12016501233B1/en unknown
-
2017
- 2017-04-13 JP JP2017079392A patent/JP6449366B2/ja active Active
- 2017-11-22 US US15/821,662 patent/US10227417B2/en active Active
-
2018
- 2018-12-05 JP JP2018227733A patent/JP6832907B2/ja active Active
-
2019
- 2019-01-02 CY CY20191100002T patent/CY1121246T1/el unknown
- 2019-01-09 HR HRP20190056TT patent/HRP20190056T1/hr unknown
- 2019-01-24 US US16/256,715 patent/US11008398B2/en active Active
- 2019-06-24 IL IL267618A patent/IL267618B/en unknown
-
2020
- 2020-03-31 AU AU2020202305A patent/AU2020202305B2/en active Active
- 2020-08-03 JP JP2020131505A patent/JP7030909B2/ja active Active
- 2020-11-13 PH PH12020551943A patent/PH12020551943A1/en unknown
-
2021
- 2021-04-14 US US17/230,543 patent/US20210238303A1/en active Pending
-
2022
- 2022-02-22 JP JP2022025259A patent/JP7259104B2/ja active Active
- 2022-03-16 IL IL291446A patent/IL291446A/en unknown
-
2023
- 2023-02-16 AU AU2023200883A patent/AU2023200883A1/en active Pending
- 2023-04-05 JP JP2023061539A patent/JP2023085465A/ja active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EA200100485A1 (ru) * | 1998-10-30 | 2001-12-24 | Дайити Фармасьютикал Ко., Лтд. | Соединение сдлс и способ его измерения |
US20050123536A1 (en) * | 2001-11-20 | 2005-06-09 | Che-Leung Law | Treatment of immunological disorders using anti-dc30 antibodies |
US20110293513A1 (en) * | 2002-12-13 | 2011-12-01 | Immunomedics, Inc. | Immunoconjugates with an Intracellularly-Cleavable Linkage |
US20080305044A1 (en) * | 2004-11-29 | 2008-12-11 | Seattle Genetics, Inc. | Engineered Antibodies and Immunoconjugates |
EA200702313A1 (ru) * | 2005-04-22 | 2008-06-30 | Амген Инк. | Терапевтические агенты на основе токсичных пептидов |
RU2008152431A (ru) * | 2006-05-30 | 2010-07-10 | Дженентек, Инк. (Us) | Антитела и иммуноконъюгаты и их применения |
US20130123178A1 (en) * | 2010-05-13 | 2013-05-16 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon superfamily peptides exhibiting nuclear hormone receptor activity |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
MITSUI I ET AL, A NEW WATER-SOLUBLE CAMPTOTHECIN DERIVATIVE, DX-8951F, EXHIBITS POTENT ANTITUMOR ACTIVITY AGAINST HUMAN TUMORS IN VITRO AND IN VIVO, JAPANESE JOURNAL OF CANCER RESE, т. 86, 8, стр.:776 - 782, 1995. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2771292C2 (ru) * | 2017-10-14 | 2022-04-29 | Эббви Инк. | Конъюгаты анти-cd71 активируемое антитело-лекарственное средство и способы их применения |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7259104B2 (ja) | 抗trop2抗体-薬物コンジュゲート | |
JP7170812B2 (ja) | 抗体-薬物コンジュゲート | |
JP7146031B2 (ja) | 抗her2抗体-薬物コンジュゲート | |
BR112016013704B1 (pt) | Conjugado de anticorpo-fármaco anti-trop2,fármaco antitumor e/ou anticâncer,composição farmacêutica e uso dos mesmos. |