RU2649129C2 - ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОРЕГУЛЯТОРНОГО БЕЛКА ГАНОДЕРМА (rLZ-8) В ПОЛУЧЕНИИ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МЕЛАНОМЫ - Google Patents
ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОРЕГУЛЯТОРНОГО БЕЛКА ГАНОДЕРМА (rLZ-8) В ПОЛУЧЕНИИ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МЕЛАНОМЫ Download PDFInfo
- Publication number
- RU2649129C2 RU2649129C2 RU2016109085A RU2016109085A RU2649129C2 RU 2649129 C2 RU2649129 C2 RU 2649129C2 RU 2016109085 A RU2016109085 A RU 2016109085A RU 2016109085 A RU2016109085 A RU 2016109085A RU 2649129 C2 RU2649129 C2 RU 2649129C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rlz
- group
- drug
- melanoma
- mice
- Prior art date
Links
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 title claims abstract description 51
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 26
- 240000008397 Ganoderma lucidum Species 0.000 title abstract 2
- 235000001637 Ganoderma lucidum Nutrition 0.000 title abstract 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 title abstract 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 52
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 40
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 22
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 18
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 9
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 8
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 241000222336 Ganoderma Species 0.000 claims description 5
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 4
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 76
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 24
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 14
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 6
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 62
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 30
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 23
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 15
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 11
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 10
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 8
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 6
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 6
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 5
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 5
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 5
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 4
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 4
- 239000003777 experimental drug Substances 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 3
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 3
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 3
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 3
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 3
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 102000003914 Cholinesterases Human genes 0.000 description 2
- 108090000322 Cholinesterases Proteins 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 2
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 2
- 229940048961 cholinesterase Drugs 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 210000003899 penis Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000002195 soluble material Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000009121 systemic therapy Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 206010052804 Drug tolerance Diseases 0.000 description 1
- 108010058643 Fungal Proteins Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025652 Malignant melanoma in situ Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010048245 Yellow skin Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 210000002255 anal canal Anatomy 0.000 description 1
- 229960004977 anhydrous lactose Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011281 clinical therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229960003901 dacarbazine Drugs 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000011521 systemic chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Группа изобретений описывает применение рекомбинантного иммунорегуляторного белка ганодерма (rLZ-8) для получения лекарственного средства для лечения меланомы. На экспериментальных моделях ортотопических опухолей и метастатических опухолей на животных исследован противоопухолевый эффект rLZ-8, который показал, что rLZ-8 достоверно ингибирует рост ортотопических опухолей меланомы и образование метастазов меланомы. Также раскрыт способ лечения меланомы у субъекта. Группа изобретений обеспечивает расширение арсенала терапевтических средств. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 4 ил., 7 табл., 5 пр.
Description
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к области биомедицины и точнее к применению рекомбинантного иммунорегуляторного белка ганодерма (rLZ-8) в ингибировании роста и метастазирования меланомы.
Описание связанной области техники
Злокачественная меланома, так же известная как меланома или меланобластома, представляет собой рак меланоцитов с относительно высокой злокачественностью, преимущественно наблюдаемый в коже и также наблюдаемый в слизистых оболочках, приближенных к коже, таких как конъюнктива, полость рта, полость носа, анальный канал, прямая кишка, шейка матки, влагалище, пенис и головка полового члена. Европейское Обновление руководства по диагностике и лечению меланомы, в 2012, показало, что частота меланомы увеличивается, достигая 10-20/105 в Европе, 20-23/105 в Соединенных Штатах и 50-60/105 в Австралии. Частота меланомы для китайцев с желтой кожей ниже чем 1/105. В соответствии со статистикой ВОЗ (Всемирная Организация Здравоохранения) около 66000 людей умирает от рака кожи каждый год, из них 80% умирают от меланомы. Пациенты с распространенной меланомой имеют средний период выживаемости 7-9 месяцев и выживаемость в течение года около 25%.
Соответственно, в отношении метода лечения ортотопической меланомы, операция предпочтительна для лечения меланомы in situ; пациентов с метастазами опухоли преимущественно лечат системной терапией, которая сочетает несколько схем лечения. Системная терапия метастатической меланомы преимущественно включает таргетную терапию и химиотерапию. Исследования, связанные с таргетной терапией, демонстрируют, что для пациентов с мутацией V600E таргетная терапия, обеспечивая высокую степень ответа опухоли (около 50%), существенно не удлиняет время выживаемости по сравнению с Дакарбазином (DTIC). Данные по иммунотерапии показывают, что терапия анти-CTLA-4 антителом (ипилимумаб) является первым лекарственным средством, которое демонстрирует интегральные преимущества выживаемости для метастатической меланомы, но имеет частоту положительной реакции только около 10,9%. Химические лекарственные средства принадлежат к клинической терапии, которая в настоящее время имеет самую длительную историю применения, и являются наиболее широко применяемыми. Множество химических лекарственных средств имеют эквивалентные эффекты и применяются для системной химиотерапии распространенной меланомы. Химиотерапия может вызывать уменьшение размеров опухоли и уменьшение симптомов, связанных с опухолью, где DTIC является наиболее классическим лекарственным средством с эффективностью приблизительно 5-10%.
В качестве заключения, опухоль может быть ликвидирована посредством операции; однако, как только некоторые отдельные опухолевые клетки распространяются в теле, операция становится бесполезной. Неэффективно применять химиопрепараты у пациентов на ранней стадии опухоли; более того, резистентность к лекарственным средствам опухолевых клеток ухудшает эффективность химиопрепаратов в уничтожении раковых клеток и вызывает исключительно токсические побочные эффекты. Следовательно, лечение злокачественной меланомы главным образом осуществляют обычными методиками, а именно операцией, лучевой терапией и химиотерапией, и снова лучевой терапией и химиотерапией при любом рецидиве. Химиотерапию широко применяют при распространенной меланоме, и она в большинстве случаев не работает. Неспецифическая иммунотерапия редко дает продолжительный эффект. Следовательно, необходимо разработать новое лекарственное средство для облегчения симптомов пациентов со злокачественной меланомой и увеличения продолжительности жизни.
Иммунорегуляторный белок ганодерма (LZ-8) принадлежит к семейству иммунорегуляторных грибковых белков. Предшествующие исследования показали, что рекомбинантный LZ-8, полученный генно-инженерным способом, эффективно уничтожает человеческие клетки рака желудка (SGC-7901) и человеческие клетки карциномы легких (A549) in vitro. Не предполагали, что иммунорегуляторный белок rLZ-8 способен непосредственно уничтожать опухолевые клетки in vivo, так что нет сообщений про уровень rLZ-8 относительно опухолевых клеток in vivo. Жители востока всегда рассматривали ганодерму как лекарственное средство для большинства тяжелых заболеваний, являющееся наиболее важным среди китайских растительных лекарственных средств. В качестве одного компонента ганодерма rLZ-8, очевидно, что возможность применения rLZ-8 для лечения заболеваний человека должна быть оценена посредством антираковых исследований in vivo. В последние 6 лет авторы настоящего изобретения изучали уничтожающий эффект rLZ-8 в отношении почти сотен видов опухолевых клеток. Обнаружено, что только 10 видов опухолевых клеток, включая клетки рака печени Hep G2 и меланому, являются относительно чувствительными к уничтожающему эффекту rLZ-8 и демонстрируют достоверное отличие от группы отрицательного сравнения в отношении противоопухолевого эффекта, где уничтожающий эффект в отношении клеток меланомы является наиболее достоверным. Настоящее изобретение обеспечивает применение rLZ-8 в профилактике и лечении роста и метастазирования меланомы, улучшая выживаемость и удлиняя продолжительность жизни, и демонстрирует неожиданные эффекты rLZ-8 в уничтожении меланомы.
СУЩНОСТЬ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к применению rLZ-8 в получении лекарственного средства для лечения меланомы. Ряд экспериментов и результатов показали, что rLZ-8 обладает существенным ингибирующим эффектом в отношении меланомы, особенно, как указано далее.
В настоящем изобретении использовали мышей Kunming с опухолями в качестве объектов исследования, и создали экспериментальные модели на животных - мышей с трансплантированной меланомой, соответственно модель ортотопических опухолей и модель метастатических опухолей. В настоящем изобретении обеспечивают пять экспериментальных групп, включающих группу отрицательного сравнения (физиологический раствор), группу положительного сравнения (DTIC), группу с низкой дозировкой rLZ-8, группу со средней дозировкой rLZ-8 и группу с высокой дозировкой rLZ-8. Каждая группа включает 10 мышей с меланомой. Дозировка DTIC составляет 2,5 мг/кг; дозировки в группе с низкой дозой rLZ-8, группе со средней дозой rLZ-8 и группе с высокой дозой rLZ-8 составляют соответственно 123 мкг/кг, 246 мкг/кг и 492 мкг/кг. Обеспечивали два пути введения: непрерывное введение в течение 28 дней и непрерывное введение в течение 56 дней, таким образом, изучая влияние различных периодов введения лекарственного средства на эффект излечения. Исследуемые показатели эксперимента противоопухолевой фармакодинамики rLZ-8, главным образом, включают два жизненных аспекта и эффект излечения. В отношении жизненных аспектов мышей с опухолью наблюдали в отношении блеска шерсти, основного питания, экскрементов, движения и быстроты действия; в отношении аспекта излечения, главным образом, записывали и рассчитывали массу тела, массу опухоли, объем опухоли, количество лейкоцитов и смертность. В тесте нейтрализации rLZ-8 сыворотку крови нормальных макак (Macaca fascicularis) после продолжительного введения выбирали для исследования антител rLZ-8 посредством иммуноферментного анализа (ELISA) и исследовали нейтрализующую активность анти-rLZ-8 антител посредством метода биологической активности. Результаты теста показали, что rLZ-8 не создает нейтрализующих антител у Macaca fascicularis и что rLZ-8 не нейтрализуется антителами на всем протяжении процесса лечения меланомы. В исследовании токсичности rLZ-8 крысам SD, как объектам исследования, интраперитонеально вводили белок rLZ-8 непрерывно в течение 46 дней. Результаты теста показали, что белок rLZ-8 способен стимулировать рост крыс; и белок rLZ-8 не оказывает очевидного нежелательного эффекта на функцию печени и почек крыс. В исследовании токсичности, четко повышенная мочевая кислота (UA) играет важную роль в антиокислительной способности; белок rLZ-8 не оказывает очевидного неблагоприятного воздействия на основные органы крыс.
Результаты серии фармакодинамических экспериментов с rLZ-8 на экспериментальных моделях на животных с трансплантированной меланомой показали, что rLZ-8 способен улучшать выживаемость мышей с опухолями и обладает значительным противоопухолевым действием по сравнению с положительным сравнительным лекарственным средством DTIC.
В отношении степени ингибирования опухоли и переносимости лекарственного средства rLZ-8 способен значительно ингибировать рост ортотопических опухолей in vivo у мышей. Группа с высокой дозой rLZ-8, непрерывно вводимой в течение 28 дней, имела лучший ингибирующий эффект, чем группа положительного сравнения (DTIC). После непрерывного введения в течение 56 дней в группе с низкой дозой rLZ-8, группе со средней дозой rLZ-8 и группе с высокой дозой rLZ-8 наблюдали более высокую скорость ингибирования опухоли, чем в группе положительного сравнения (DTIC), и особенно степень ингибирования опухоли в группе с высокой дозой составила 95,66±1,77%, что редко встречается в фармакодинамических экспериментах использования противоопухолевых лекарственных средств in vivo. Между тем при сравнении данных каждой группы между введением в течение 28 дней и введением в течение 56 дней, степень ингибирования опухоли в группе DTIC снижалась, тогда как группы с любой дозировкой rLZ-8 демонстрировали увеличение около 15%. Это показывало, что мыши начинали формировать устойчивость к лекарственному средству DTIC во время лечения ортотопических опухолей in vivo, тогда как во всех группах с введением rLZ-8 устойчивости не развивалось. Следовательно, rLZ-8 является применимым для длительной терапии опухолей.
В отношении иммунной регуляции организма и безопасности, настоящее изобретение включает исследование образца крови из хвостовой вены в определенном экспериментальном периоде для мышей с опухолями. Гематологический анализатор определял количество лейкоцитов в каждом образце крови. Обнаружено, что количество лейкоцитов у мышей с опухолями в группе с любой дозировкой rLZ-8 всегда сохранялось на относительно высоком уровне в нормальном диапазоне, тогда как количество лейкоцитов у мышей с опухолями в группе положительного сравнения (DTIC) было существенно изменено. Количество лейкоцитов у мышей с опухолями в группе положительного сравнения существенно снижалось при увеличении продолжительности лечения; иммунитет организма существенно нарушался и проявлялся выраженный токсический эффект. Исследование образцов крови из хвостовой вены показало, что в группе rLZ-8 удавалось поддерживать количество лейкоцитов в организме и сохранять стабильность иммунной системы организма в течение процесса подавления роста и метастазирования меланомы, что четко доказывает безопасность rLZ-8 в лечении мышей с опухолями.
В отношении степени удлинения продолжительности жизни, тест rLZ-8 в оценке продолжительности жизни у мышей с опухолями показал, что rLZ-8 достоверно увеличивает продолжительность жизни у мышей с опухолями по сравнению с DTIC. При помощи создания экспериментальной модели метастазов меланомы в легких было обнаружено, что rLZ-8 достоверно ингибирует образование и рост метастазов меланомы в легких и достоверно обладает лучшим эффектом, чем средство положительного сравнения DTIC.
Настоящее изобретение имеет следующие преимущества. Описание настоящего изобретения доказывает, что rLZ-8 является применимым в получении лекарственного средства для лечения меланомы. rLZ-8 способен уничтожать клетки меланомы in vivo при поддержании количества лейкоцитов организма; более того, rLZ-8 способен эффективно контролировать метастазирование опухолевых клеток в другие ткани, не вызывая устойчивости и с хорошей безопасностью. Описание, представленное выше, доказывает применение rLZ-8 в получении лекарственного средства для лечения меланомы с множества позиций.
Указанные и другие цели, характеристики и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из следующего подробного описания, приложенных чертежей и приложенной формулы изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг.1 представляет собой диаграмму изменения массы тела мышей, которым вводили rLZ-8 в течение 28 дней, в соответствии с примерами по настоящему изобретению.
Фиг.2 представляет собой диаграмму изменения массы тела мышей, которым вводили rLZ-8 в течение 56 дней, в соответствии с примерами по настоящему изобретению.
Фиг.3 представляет собой кривую количества лейкоцитов мышей в течение периода лечения в соответствии с примерами по настоящему изобретению.
Фиг.4 демонстрирует выживаемость каждой экспериментальной группы после смерти всей группы отрицательного сравнения мышей с метастазами в легких, в соответствии с примерами по настоящему изобретению.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОГО ВАРИАНТА ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Пример 1: Уничтожение ортотопической меланомы in vivo, поддержание количества лейкоцитов и улучшение жизненных показателей мышей с опухолями посредством rLZ-8
Методы
(1) Материалы и реагенты
Самцов мышей Kunming в возрасте 6-8 недель, весом 18-22 г, покупали в Laboratory Animal Center of Norman Bethune University of Medical Science и содержали в специфических условиях без патогенов (SPF) в Northeast Normal University, при температуре, поддерживаемой на уровне (20±2)°C, и влажности 48% и с 12-часовым освещением. Мышам трансплантировали клеточную линию меланомы B16-F10.
Среда Игла, модифицированная Дульбекко (DMEM), фетальная бычья сыворотка, фосфатный буферный солевой раствор (PBS), трипсин-EDTA, диметилсульфоксид (DMSO), 0,9% раствор NaCl, Tris-HCl буфер с pH 7,6 для промывки, 0,05% трипсин, rLZ-8, и DTIC (средство положительного сравнения).
(2) Инструменты, оборудование и прибор
CO2 термостатный инкубатор, микроскоп с инверсией, пипетка, пинцет, бокс, гематологический анализатор, низкоскоростная центрифуга, шкаф для хранения при ультранизких температурах, электронные весы, шкаф для свежего хранения, холодильник, стерилизатор, водяная баня, боксы для выращивания мышей, контейнеры для воды; одноразовые медицинские стерильные перчатки, медицинская стерильная вата, 50 мл центрифужные пробирки, наконечник для пипеток, криогенный флакон, 10 см плашки для культивирования клеток, культуральные колбы, 1,5 мл EP пробирки и камера для подсчета клеток; одноразовый 1 мл шприц, подстилка для мышей и корм для мышей.
(3) Группы и введение лекарственного средства
Клетки меланомы мышей B16-F10 культивировали в DMEM, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, при 37°C в CO2 термостатном инкубаторе. 200 мкл суспензии клеток B16-F10 (содержащей 1×107 клеток) вводили медленно подкожно в дорсо-вентральный бок мыши посредством 1 мл шприца, так, чтобы получить модель мыши с трансплантированной опухолью. Через 24 часа, мышам вводили в хвостовую вену rLZ-8 (123 мкг/кг, 246 мкг/кг и 492 мкг/кг), DTIC (2,5 мг/кг) и физиологический раствор соответственно. rLZ-8 вводили один раз в сутки; DTIC длительно вводили в хвостовую вену в течение 5 дней и вводили второй раз через 3 недели. В течение эксперимента наблюдали жизненные показатели мышей; мышей взвешивали раз в каждые 7 дней; образцы крови получали из хвостовых вен мышей каждые 2 недели; объем опухолей, подкожно введенных мышам, измеряли каждые 2 дня; для каждой группы опухоли иссекали в конце эксперимента и взвешивали на весах, массы записывали. В соответствии с формулой, что степень ингибирования роста опухоли = (средняя масса опухолей в группе физиологического раствора-средняя масса опухолей в группах, которым вводили лекарственное средство)/средняя масса опухоли в группе физиологического раствора, рассчитывали степень ингибирования rLZ-8 в отношении роста ортотопической опухоли.
Результаты
(1) Результаты анализа жизненных показателей
Через 28 дней непрерывного введения rLZ-8 мышам с опухолями, не наблюдали существенных различий в аспектах блеска шерсти, основного питания и экскрементов среди групп rLZ-8 (три дозировки), группы DTIC, группы физиологического раствора и нормальной группой; физиологическая группа хуже двигалась и была менее оживленной, чем группы rLZ-8 и группа DTIC, и особенно группа с высокой дозировкой rLZ-8 имела достоверно большую подвижность, чем группа с физиологическим раствором. Через 56 дней непрерывного введения rLZ-8 наблюдали, что группы, которым вводили rLZ-8, имели лучший блеск шерсти, чем группа отрицательного сравнения и группа DTIC.
(2) Результаты анализа влияния лечения лекарственным средством на массу тела мышей
Через 28 дней непрерывного введения rLZ-8 мышам с опухолями не наблюдали достоверных различий массы тела во всех группах до эксперимента; после эксперимента группа с высокой дозой rLZ-8 имела немного меньшую массу, чем другие группы, как показано на Фиг.1. После 56 дней непрерывного введения rLZ-8, группа rLZ-8 и группа DTIC имели большую массу, чем группа отрицательного сравнения, тогда как пять экспериментальных групп все имели меньшую массу, чем нормальная группа, как показано на Фиг.2. Через 28 дней непрерывного введения и затем 28 дней выращивания без введения лекарственного средства, в отношении массы тела, в конечном счете, выживших мышей, группа DTIC и группа с низкой дозировкой rLZ-8 имели меньшую массу, чем группа отрицательного сравнения, и пять экспериментальных групп имели меньшую массу, чем нормальная группа, что демонстрирует, что rLZ-8 способен регулировать у мышей состояние организма.
(3) Влияние лекарственного средства на морфологию опухоли мыши
Масса опухоли
Опухоли иссекали и взвешивали, и затем рассчитывали среднюю массу опухолей в каждой группе. Как показано в таблице 1 и таблице 2, после 28 дней введения rLZ-8 группа с высокой дозой rLZ-8 имела меньшую массу опухоли, чем группа DTIC; для трех групп rLZ-8 с постепенно повышаемой концентрацией rLZ-8 масса опухоли постепенно снижалась. Группы rLZ-8 имели достоверные отличия от группы отрицательного сравнения, тогда как группа с низкой дозой rLZ-8, группа со средней дозой rLZ-8 и группа с высокой дозой rLZ-8 имели достоверные различия (n=10, P<0,05). Когда введение лекарственного средства достигало 56 дней, при взвешивании опухолей выживших мышей группы rLZ-8 имели лучший эффект ингибирования опухоли, чем группа DTIC, и особенно группа с высокой дозой rLZ-8 имела достоверное отличие от группы DTIC (n=10, P<0,05). Следовательно, после 28 дней введения rLZ-8 группа с высокой дозой rLZ-8 имела меньшую массу опухоли, чем группа DTIC; среди трех групп rLZ-8 с постепенно увеличивающейся концентрацией rLZ-8 масса подкожной опухоли постепенно снижалась; когда продолжительность введения увеличивалась до 56 дней, масса опухолей выживших мышей показывала, что в группах rLZ-8 наблюдали значительный эффект ингибирования опухоли по сравнению с группой DTIC.
Объем опухоли
В течение 28 дней введения лекарственного средства с постепенным увеличением концентрации rLZ-8 объем подкожной опухоли постепенно уменьшался; группы rLZ-8 имели достоверно меньший объем опухолей, чем группа DTIC, и особенно группы rLZ-8 демонстрировали значительное ингибирование роста опухоли по сравнению с группой сравнения (n=10). В результате анализа объемов опухолей, как показано в таблице 1, для 28 дней введения лекарственного средства группа с высокой дозой rLZ-8 обладала более выраженной степенью ингибирования опухоли, чем группа DTIC; среди групп rLZ-8 при постепенном увеличении дозировки лекарственного средства степень ингибирования постепенно увеличивалась. Когда период введения лекарственного средства продлевался до 56 дней, группы rLZ-8 демонстрировали особенно значительную степень ингибирования опухоли по сравнению с группой DTIC.
(4) Результаты исследования реакции устойчивости организма к лекарственному средству относительно DTIC и rLZ-8
При ингибировании массы опухоли, DTIC и rLZ-8 оказывали определенное влияние на устойчивость организма к лекарственному средству. Как показано в таблице 1 и таблице 2, после введения DTIC в течение 28 дней и в течение 56 дней, степень ингибирования существенно снижалась, и скорость роста опухоли существенно увеличивалась, что подтверждало постепенное формирование устойчивости организма в отношении DTIC с увеличением периода введения DTIC, так что ингибирование опухоли ослаблялось; однако, после введения rLZ-8 в течение 28 дней и в течение 56 дней, степень ингибирования существенно увеличивалась, что показывало, что устойчивость организма не увеличивалась с увеличением периода введения rLZ-8, и дополнительно доказало, что rLZ-8 оказывал лечебный эффект существенно лучше, чем DTIC.
Таблица 1
Влияние rLZ-8 на рост ортотопической опухоли (введение в течение 28 дней)
| Группа | Вариант введения | |||
| Непрерывное введение в течение 28 дней | ||||
| Количество животных | Масса опухоли (г) | Объем опухоли (мм3) | Степень ингибирования роста опухоли (%) | |
| Физиологический раствор | 10 | 1,24±0,47 | 1,1±0,38 | - |
| DTIC | 10 | 0,23±0,12** | 0,19±0,09** | 81,26±0,27 |
| Низкая доза rLZ-8 | 10 | 0,6±0,21** ## | 0,5±0,14** ## | 51,81±0,41 ## |
| Средняя доза rLZ-8 | 10 | 0,43±0,17** ## | 0,36±0,14** ## | 65,00±0,77 ## |
| Высокая доза rLZ-8 | 10 | 0,14±0,04** | 0,11±0,03** | 88,49±0,51 # |
Обратите внимание: по сравнению с группой сравнения, ** P<0,01, * P<0,05 тест повторяли три раза, с согласующейся общей тенденцией результатов, где вышеуказанная таблица показывает результаты теста; по сравнению с группой DTIC, ## P<0,01, # P<0,05 тест повторяли три раза, с согласующейся общей тенденцией результатов, где вышеуказанная таблица демонстрирует результаты одного теста.
Таблица 2
Влияние rLZ-8 на рост ортотопической опухоли (введение в течение 56 дней)
| Группа | Вариант введения | |||
| Непрерывное введение в течение 56 дней | ||||
| Количество животных | Масса опухоли (г) | Объем опухоли (мм3) | Степень ингибирования роста опухоли (%) | |
| Физиологический раствор | 10 | 3,40±0,87 | 2,83±0,77 | - |
| DTIC | 8 | 0,87±0,26* | 0,73±0,21* | 64,42±0,41 |
| Низкая доза rLZ-8 | 9 | 0,79±0,31** | 0,65±0,24**# | 76,76±0,53## |
| Средняя доза rLZ-8 | 9 | 0,68±0,19**## | 0,56±0,18**## | 80,10±1,01## |
| Высокая доза rLZ-8 | 10 | 0,15±0,07**## | 0,13±0,09**## | 95,66±1,77## |
Обратите внимание: по сравнению с группой сравнения, ** P<0,01, * P<0,05 тест повторяли три раза, с согласующимися тенденциями всех результатов, где вышеуказанная таблица показывает результаты одного теста; по сравнению с группой DTIC, ## P<0,01, # P<0,05 тест повторяли три раза, с согласующимися общими тенденциями результатов, где вышеуказанная таблица демонстрирует результаты одного теста.
(5) Влияние rLZ-8 на количество лейкоцитов и безопасность
При введении в течение 28 дней постепенно повышающейся концентрации rLZ-8 количество лейкоцитов у мышей немного увеличивалось, тогда как количество лейкоцитов в группе положительного сравниваемого лекарственного средства (DTIC) явно снижалось; в частности, каждая группа rLZ-8 имела особенно значимое влияние на количество лейкоцитов по сравнению с группой сравнения (n=10). При увеличении времени введения до 56 дней количество лейкоцитов в каждой группе rLZ-8 достоверно отличалось от группы DTIC (n=10), как показано на Фиг.3; количество лейкоцитов группы DTIC достигало минимального значения. При введении лекарственного средства в течение 28 дней и дальнейшем выращивании без введения лекарственного средства, количество лейкоцитов в группе rLZ-8 немного снижалось; количество лейкоцитов в группе DTIC непрерывно снижалось и затем оставалось стабильным в течение некоторого времени. При анализе количества лейкоцитов, было показано, что группа rLZ-8 демонстрировала небольшое влияние на количество лейкоцитов в экспериментальном противоопухолевом лечении, тогда как в группе положительного сравниваемого лекарственного средства (DTIC) существенно снижалось количество лейкоцитов при экспериментальном противоопухолевом лечении, что повреждало и ослабляло иммунную систему организма, вызывая скрытую опасность иммунодефицита в процессе противоопухолевого лечения. Более того, в противоопухолевом эксперименте rLZ-8 оказался способен не только эффективно ингибировать рост опухоли, а также обладал функциями сохранения и защиты иммунитета организма. rLZ-8 имел лучшую безопасность, чем положительное сравниваемое лекарственное средство (DTIC).
(6) Влияние rLZ-8 на степень продления жизни у мышей с опухолями
После непрерывного введения лекарственного средства в течение 28 дней мыши не умирали в течение эксперимента. После непрерывного введения лекарственного средства в течение 56 дней смерть имела место в группе отрицательного сравнения и группе положительного сравниваемого лекарственного средства (DTIC), где массивную смертность наблюдали в группе положительного сравниваемого лекарственного средства (DTIC). Однако мыши не умирали во всех группах rLZ-8, как показано в таблице 3. Следовательно, rLZ-8 демонстрировал достоверное отличие в поддержании увеличения продолжительности жизни мышей с опухолями относительно DTIC, с достоверным преимуществом.
Таблица 3
Статистические результаты относительных индексов смерти мышей в течение введения
| Группа | Смертность | ||
| Количество животных | Смертность (введение в течение 28 дней) | Смертность (введение в течение 56 дней) | |
| Физиологический раствор | 10 | 0/10 | 1/10 |
| DTIC | 10 | 0/10 | 4/10 |
| Низкая доза rLZ-8 | 10 | 0/10 | 0/10 |
| Средняя доза rLZ-8 | 10 | 0/10 | 0/10 |
| Высокая доза rLZ-8 | 10 | 0/10 | 0/10 |
Пример 2: Ингибирование роста метастазов меланомы в легкие посредством rLZ-8 и влияние rLZ-8 на степень продления жизни мышей с меланомой с метастазами меланомы в легких
Методы
(1) Материалы и реагенты
Самцов мышей Kunming в возрасте 6-8 недель, весом 18-22 г, покупали у Laboratory Animal Center of Norman Bethune University of Medical Science и выдерживали в условиях SPF в Northeast Normal University, при температуре (20±2)°C и влажности 48%, с 12-часовым световым циклом. Мышам трансплантировали клеточную линию меланомы B16-F10. DMEM, фетальная бычья сыворотка, PBS, трипсин-EDTA, DMSO, Tris-HCl буфер с pH 7,6 для промывки, 0,05% трипсин, rLZ-8, и DTIC.
(2) Инструменты, оборудование и прибор те же, как в примере 1
(3) Группы и метод введения
Клетки меланомы мышей B16-F10 культивировали в DMEM, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, при 37°C в CO2 термостатном инкубаторе. 200 мкл суспензии клеток меланомы B16-F10 (содержащей 1×107 клеток) медленно внутривенно вводили в хвостовую вену мыши посредством 1 мл шприца, так чтобы получить модель мыши с трансплантированной опухолью. Через 24 часа мышам вводили в хвостовую вену rLZ-8 (123 мкг/кг, 246 мкг/кг и 492 мкг/кг), DTIC (2,5 мг/кг) и физиологический раствор соответственно. rLZ-8 вводили один раз в сутки; DTIC длительно вводили в хвостовую вену в течение 5 дней и вводили второй раз через 3 недели. После смерти мышей легкие мертвых мышей иссекали и подсчитывали количество черных пятен на поверхности легких, образованных агрегацией клеток метастазов, так чтобы рассчитать степень ингибирования роста метастазов в легких лекарственным средством, как: степень ингибирования = (среднее количество метастазов в группе отрицательного сравнения - среднее количество метастазов в группе, которой вводили лекарственное средство)/среднее количество метастазов в группе отрицательного сравнения×100%. Время и количество мертвых мышей в каждой экспериментальной группе записывали подробно, особенно во время непрерывного введения лекарственного средства, до того, как группа отрицательного сравнения полностью умирала; и затем анализировали выживаемость мышей в экспериментальных группах и группах сравнения. Выживаемость рассчитывали в соответствии с количеством мертвых мышей в других группах, когда все мыши группы отрицательного сравнения умирали, на основании формулы, что выживаемость = (общее количество мышей - количество умерших мышей)/общее количество мышей.
Результаты
(1) Ингибирование метастазов меланомы в легкие
На основании анализа статистики метастазов меланомы в легких, каждая группа rLZ-8 имела меньшее количество метастазов опухоли, чем группа отрицательного сравнения и группа положительного сравнения; группа положительного сравнения имела четко меньше метастазов, чем группа отрицательного сравнения. В соответствии с формулой степени ингибирования, рассчитывали ингибирование метастазирования опухоли лекарственным средством в каждой группе. Как показано на Фиг.4, для 28 дней введения лекарственного средства группа с низкой дозой rLZ-8 имела степень ингибирования 62,13±1,88% по сравнению с группой сравнения; группа со средней дозой rLZ-8 имела степень ингибирования 67,65±2,1% по сравнению с группой сравнения; и группа с высокой дозой rLZ-8 имела степень ингибирования 71,17±2,43% по сравнению с группой сравнения. Следовательно, rLZ-8 достоверно ингибировал образование и рост в легких метастазов B16-F10, которую вводили внутривенно в хвостовую вену мышей. Группа положительного сравнения имела степень ингибирования 32,04±1,27%, ниже чем в трех группах экспериментального лекарственного средства, что показало, что rLZ-8 оказывал лучший ингибирующий эффект на метастазы в легких B16-F10, которую вводили внутривенно в хвостовую вену мышей, чем положительное сравниваемое лекарственное средство DTIC, как показано в таблице 4.
Таблица 4
Степень ингибирования относительно роста метастатических опухолей меланомы в легких
| Группа | Степень ингибирования | ||
| Количество животных | Введение в течение 28 дней. Степень ингибирования метастазов опухоли (%) | Введение в течение 56 дней. Степень ингибирования метастазов опухоли (%) | |
| Физиологический раствор | 10 | - | - |
| DTIC | 10 | 32,04±1,27 | 58,43±3,21 |
| Низкая доза rLZ-8 | 10 | 62,13±1,88** | 66,18±1,79* |
| Средняя доза rLZ-8 | 10 | 67,65±2,1** | 84,31±3,12** |
| Высокая доза rLZ-8 | 10 | 71,17±2,43** | 89,78±2,77** |
Обратите внимание: по сравнению с группой DTIC, ** P<0,01, * P<0,05 тест повторяли три раза, с однородной общей тенденцией результатов, где вышеуказанная таблица демонстрирует результаты одного теста.
(2) Влияние rLZ-8 на увеличение продолжительности жизни мышей с метастатическими опухолями легких
Как показано в таблице 4, посредством подробной записи времени и количества мертвых мышей в каждой группе анализировали выживаемость мышей в экспериментальных группах и группах сравнения. Когда все мыши в группе отрицательного сравнения умерли (соответственно на 87й день и на 95й день после введения опухолей, в двух повторных тестах), выживаемость мышей, оставшихся в группе положительного сравнения лекарственного средства DTIC, составила 10%, то есть 10% от исходного общего количества мышей были все еще живы; выживаемость в трех экспериментальных группах с различными концентрациями экспериментального лекарственного средства составила соответственно 25%, 30% и 10%. Из результатов заключили, что лекарственное средство положительного сравнения и экспериментальное лекарственное средство оказались в некоторой степени эффективными в увеличении времени выживаемости мышей. В общем, экспериментальное лекарственное средство продлевало выживаемость мышей и улучшало степень увеличения продолжительности жизни лучше, чем лекарственное средство положительного сравнения DTIC.
Пример 3: Образование антител и нейтрализующих антител после длительного многократного введения rLZ-8 Macaca fascicularis in vivo
Методы
Для грибкового рекомбинантного генноинженерного лекарственного средства важно отслеживать образование антител к rLZ-8 для доклинического исследования. Образцы сыворотки крови нормальных макак, Macaca fascicularis после длительного введения выбирали для исследования антитела rLZ-8 посредством ELISA и для исследования нейтрализующей активности анти-rLZ-8 антитела посредством метода биологической активности.
Результаты
На 9й-11й дни введения лекарственного средства у трех обезьян был выявлен низкий титр (1:5) анти-rLZ-8 антител; после 28го дня введения титр антител сохранялся низким с диапазоном 1:25-1:125. Не обнаруживали анти-rLZ-8 антител у обезьян группы сравнения. На основании исследования влияния культуральной среды, с сывороткой крови обезьян, положительной по анти-rLZ-8 антителам (1:125) (разведенной в 10 раз) и без сыворотки крови обезьян, на IFN-γ секретирующую экспрессию, стимулированную различными концентрациями rLZ-8, в кривой пролиферации клеток культуральной среды с сывороткой крови обезьян, значение максимальной экспрессии (Emax) значения A снижалось до 0,78±0,09; полумаксимальная ингибирующая концентрация ИК50 повышалась; и наклон кривой снижался до 0,77±0,20. Следовательно, ингибирующий эффект на сыворотку крови обезьян не был свойством конкурентного нейтрализующего антитела.
Заключение: rLZ-8 не вызывает образование нейтрализующих антител у обезьян и не нейтрализуется антителами в течение всего процесса лечения меланомы.
Пример 4: Исследование токсичности rLZ-8 у крыс
Методы
(1) Материалы и реагенты
98 крыс SD (49 самцов и 49 самок), массой 100-120 г, покупали у Laboratory Animal Center of Norman Bethune University of Medical Science и выдерживали в условиях SPF в Northeast Normal University, при температуре (20±2)oC и влажности 48%, с 12-часовым световым циклом.
(2) Инструменты, оборудование и приборы те же, что в примере 1
(3) Группы и метод введения
Вводимые дозы для крыс рассчитывали на основании вводимой дозы для мышей; крыс делили на группу сравнения (физиологический раствор), группу с низкой дозировкой (15 мкл/кг массы тела), группу со средней дозировкой (30 мкл/кг массы тела) и группу с высокой дозировкой (60 мкл/кг массы тела). Методом введения была интраперитонеальная инъекция.
(4) Исследуемые показатели
Количество корма, масса; серология: функция печени и функция почек; иммунитет: индекс тимуса и индекс селезенки; комплемент сыворотки IgM, IgG, C3 и C4; патологоанатомическое исследование: сердце, печень, селезенка, легкие, почки, поджелудочная железа, тимус, гонады и др.
Результаты
Таблица 5
Статистические данные набора массы тела 
| Группа | Самцы | Самки |
| Сравнение | 202,50±13,43 | 124,17±15,16 |
| Низкая дозировка | 215,25±17,82 | 140,00±23,48* |
| Средняя дозировка | 218,67±10,89* | 124,08±14,17 |
| Высокая дозировка | 221,92±21,84** | 133,37±15,29 |
По сравнению с группой сравнения, ** P<0,01 * P<0,05.
Как показано в таблице 5, в группе со средней дозировкой белка rLZ-8 и группе с высокой дозировкой белка rLZ-8 масса самцов крыс достоверно увеличивалась; в группе с низкой дозировкой белка rLZ-8 масса самок крыс достоверно увеличивалась. Белок rLZ-8 не оказывал нежелательного явления на общие ростовые показатели крыс SD, такие как питание. Более того, в группе со средней дозировкой белка rLZ-8 и группе с высокой дозировкой белка rLZ-8 масса самцов крыс достоверно увеличивалась; в группе с низкой дозировкой белка rLZ-8 масса самок крыс достоверно увеличивалась.
Таблица 6
Функция печени и функция почек крыс
| Показатель | Группа | |||
| Сравнение | Низкая дозировка | Средняя дозировка | Высокая дозировка | |
| Alb | 36,48±2,10 | 37,54±1,62 | 36,57±2,20 | 34,77±1,44* |
| ЩФ | 252,83±85,53 | 243,50±103,54 | 242,83±80,94 | 218,50±69,98 |
| АЛТ | 34,08±5,99 | 35,50±4,93 | 34,42±4,50 | 30,75±2,42* |
| АСТ | 171,42±31,08 | 175,00±34,96 | 169,08±30,83 | 128,58±18,74** |
| BUN | 8,05±0,96 | 7,54±0,47 | 7,36±0,97 | 7,24±0,89* |
| ХЭ | 474,58±320,63 | 474,17±305,10 | 487,17±303,02 | 456,17±309,59 |
| CRE | 27,33±2,50 | 24,97±1,89* | 24,26±3,55** | 24,22±2,55** |
| TBA | 26,70±11,29 | 30,13±16,29 | 38,25±18,15 | 37,30±17,63 |
| ТР | 65,73±4,64 | 67,58±3,34 | 66,58±4,77 | 63,23±2,88 |
| МК | 125,17±39,94 | 174,42±46,65* | 186,83±45,67** | 164,50±28,94** |
Обратите внимание: сравнение с группой сравнения, ** P<0,01 * P<0,05. Alb: альбумин; ЩФ: щелочная фосфатаза; АЛТ: аланин аминотрансфераза; АСТ: аспартатаминотрансфераза; BUN: мочевина; ХЭ: холинэстераза; CRE: креатинин; TBA: общие желчные кислоты; TP: общий белок; UA: мочевая кислота.
Как показано в таблице 6, белок rLZ-8 не оказывал очевидного нежелательного воздействия на функцию печени и функцию почек у крыс. В группе с низкой дозой rLZ-8 достоверно увеличивалось содержание Alb; в группе с высокой дозировкой rLZ-8 наблюдали более низкое содержание АсТ, чем в группе со средней дозировкой rLZ-8; в группах белка rLZ-8 наблюдали более низкое содержание BUN, чем в группе сравнения, где в группе со средней дозировкой rLZ-8 и группе с высокой дозировкой rLZ-8 наблюдали достоверно низкое содержание BUN. Уровень CHE в группе с низкой дозировкой rLZ-8 и в группе со средней дозировкой rLZ-8 достоверно увеличивался; уровень CRE во всех группах белка rLZ-8 достоверно увеличивался. В группе со средней дозировкой rLZ-8 уровень TBA и уровень UA достоверно увеличивался; в группе с низкой дозировкой rLZ-8 уровень TP достоверно увеличивался. Для самок крыс содержание ALB и содержание АсТ в группе с высокой дозировкой rLZ-8 достоверно снижалось; содержание TP в группе с высокой дозировкой rLZ-8 снижалось; и содержание UA в каждой из групп rLZ-8 достоверно увеличивалось.
Таблица 7
Индекс селезенки и индекс почки крыс
| Показатель | Группа | |||
| Сравнение | Низкая дозировка | Средняя дозировка | Высокая дозировка | |
| Индекс селезенки (масса селезенки/масса ×100) | 0,21±0,03 | 0,19±0,03 | 0,18±0,02 | 0,19±0,02 |
| Индекс тимуса (масса тимуса/масса×100) | 0,12±0,03 | 0,15±0,03 | 0,12±0,02 | 0,17±0,03 |
| IgG (г/л) | 0,116±0,088 | 0,146±0,021 | 0,121±0,021 | 0,124±0,081 |
| IgM (г/л) | 0,204±0,051 | 0,220±0,080 | 0,228±0,084 | 0,236±0,076 |
| С3 (г/л) | 0,435±0,100 | 0,449±0,097 | 0,457±0,088 | 0,428±0,082 |
| С4 (г/л) | 0,394±0,020 | 0,397±0,021 | 0,412±0,017 | 0,352±0,016 |
В отношении таблицы 7 результаты иммунологического исследования показали, что индекс селезенки (за исключением группы с низкой дозировкой) и индекс тимуса каждой из групп rLZ-8 увеличивался по сравнению с группой сравнения, но не достоверно. В отношении IgG и IgM, во всех группах введения они немного недостоверно повышались по сравнению с группой сравнения. В отношении C3 и C4 не наблюдали достоверных различий между всеми группами дозировки и группой сравнения и, следовательно, rLZ-8 не влиял на C3 и C4 крыс.
Патологическое исследование: при сравнении исследуемых органов с органами группы сравнения не наблюдали очевидных морфологических изменений.
Результаты
Белок rLZ-8 ускорял рост крыс; белок rLZ-8 не оказывал нежелательного влияния на функцию печени и функцию почек у крыс. UA является полезной и вредной для организма, при этом первое относится к антиоксидантным свойствам и последнее относится в стимуляции пролиферации гладкомышечных клеток кровеносных сосудов и повреждению функций эндотелиальных клеток. В примере 4 достоверное повышение UA может играть важную роль в антиоксидантной способности; белок rLZ-8 достоверно усиливает иммунитет крыс, особенно гуморальный иммунитет; и белок rLZ-8 не оказывает достоверного нежелательного воздействия на основные органы крыс.
Пример 5: Противоопухолевая комбинация rLZ-8 и получение
1. Вышеуказанные фармакологические тесты показывают, что противоопухолевый эффект rLZ-8 является существенным в поддержании уровня лейкоцитов без токсичности. Следовательно, rLZ-8 является подходящим и безопасным в качестве лекарственного средства.
2. В качестве противоопухолевого лекарственного средства rLZ-8 можно вводить перорально и парентерально. Вводимая дозировка зависит от симптома, возраста, массы тела и др. Для взрослых пероральное введение осуществляют в количестве 10-1000 мг на дозировку/на человека, несколько раз в сутки; парентеральное введение осуществляют в количестве 10-100 мг несколько раз в сутки.
3. Лекарственное средство для перорального введения по настоящему изобретению может быть таблетками, пилюлями и капсулами (твердые капсулы и мягкие капсулы). Лекарственное средство для перорального введения включает rLZ-8 и по меньшей мере один инертный разбавитель, такой как лактоза, маннит, глюкоза, крахмал и поливинилпирролидон; и дополнительно включает фармацевтически приемлемые добавки, за исключением инертного разбавителя, такие как смазывающее вещество, дезинтегрирующее вещество и стабилизатор. Если необходимо, таблетки или пилюли могут быть покрыты оболочкой с помощью по меньшей мере одного слоя пленки, состоящей из желудочно-растворимого материала или кишечно-растворимого материала. Инъекционный препарат для парентерального введения по настоящему изобретению включает rLZ-8 и по меньшей мере один инертный жидкий разбавитель, такой как дистиллированная вода для инъекций и физиологический раствор. rLZ-8 может быть преобразован в лиофилизированный порошок и растворен в инертном разбавителе для инъекции.
(1) Препарат 1
1000 мг rLZ-8 растворяли в 100 мл стерильного физиологического раствора, гомогенно перемешивали, разделяли на каждое введение с концентрацией rLZ-8 10 мг/мл/на инъекцию для хранения в каждом пузырьке, герметизировали и стерилизовали в продукты. Другие пункты соответствуют требованиям для инъекций в Pharmacopoeia of the People’s Republic of China, 2010 edition.
(2) Препарат 2
100 г rLZ-8 и 0,5 кг фармацевтического крахмала получали в капсулах с помощью известных методик и устройств для получения капсул, rLZ-8 10 мг/на капсулу. Другие пункты соответствовали требованиям для капсул в Pharmacopoeia of the People’s Republic of China, 2010 edition.
(3) Препарат 3
100 г rLZ-8, 560 г микрокристаллической целлюлозы, 380 г безводной лактозы и 200 г стеарата магния получали в таблетках в соответствии с известными методиками и устройствами получения таблеток, rLZ-8 10 мг/на таблетку. Другие показатели соответствовали требованиям для капсул в Pharmacopoeia of the People’s Republic of China, 2010 edition.
(4) Получение 4
Определенное количество rLZ-8 в соответствии с требованиями для пероральной жидкости, в соответствии с Pharmacopoeia of the People’s Republic of China, 2010 edition, получали в пероральной жидкости посредством известных методик и устройств для получения пероральной жидкости.
Специалист в области техники понимает, что варианты осуществления настоящего изобретения, как показано в чертежах и описано выше, являются только примерными и не предназначены для ограничения.
Следовательно, очевидно, что цели настоящего изобретения были полностью и эффективно осуществлены. Его варианты осуществления показаны и описаны для иллюстрации функциональных и структурных принципов настоящего изобретения и могут быть изменены без отклонения от указанных принципов. Следовательно, настоящее изобретение включает все модификации, охватываемые сущностью и объемом следующей формулы изобретения.
Claims (9)
1. Применение рекомбинантного иммунорегуляторного белка ганодерма (rLZ-8) для получения лекарственного средства для лечения меланомы у пациента.
2. Применение, как указано в п. 1, где лекарственное средство ингибирует пролиферацию меланомы.
3. Применение, как указано в п. 1, где лекарственное средство ингибирует образование метастазов меланомы.
4. Применение, как указано в п. 1, где лекарственное средство имеет основные компоненты терапевтически эффективного количества rLZ-8 и произвольные фармацевтически приемлемые добавки.
5. Применение, как указано в п. 1 или 2, где лекарственное средство вводят перорально или парентерально, где лекарственное средство для перорального введения является пероральной жидкостью, таблеткой, пилюлей или капсулой; и лекарственное средство для парентерального введения представляет собой наружное лекарственное средство или инъекцию.
6. Способ лечения меланомы у субъекта, включающий введение субъекту лекарственного средства, включающего рекомбинантный иммунорегуляторный белок ганодерма (rLZ-8), при сохранении числа лейкоцитов у субъекта.
7. Способ по п.6, в котором лекарственное средство вводится перорально или парентерально.
8. Способ по п.7, в котором лекарственным средством для перорального введения является пероральная жидкость, таблетка, пилюля или капсула.
9. Способ по п.7, в котором лекарственное средство для парентерального введения представляет собой наружное лекарственное средство или инъекцию.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310357176.8 | 2013-08-16 | ||
| CN201310357176.8A CN103417953B (zh) | 2013-08-16 | 2013-08-16 | 重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)在制备治疗黑色素瘤药物中的应用 |
| PCT/CN2014/079813 WO2015021817A1 (zh) | 2013-08-16 | 2014-06-13 | 重组灵芝免疫调节蛋白（rLZ—8）在制备治疗黑色素瘤药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016109085A RU2016109085A (ru) | 2017-09-21 |
| RU2649129C2 true RU2649129C2 (ru) | 2018-03-29 |
Family
ID=49643693
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016109085A RU2649129C2 (ru) | 2013-08-16 | 2014-06-13 | ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОРЕГУЛЯТОРНОГО БЕЛКА ГАНОДЕРМА (rLZ-8) В ПОЛУЧЕНИИ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МЕЛАНОМЫ |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20160129077A1 (ru) |
| EP (1) | EP3023104B1 (ru) |
| CN (1) | CN103417953B (ru) |
| AU (1) | AU2014308357A1 (ru) |
| CA (1) | CA2919678C (ru) |
| RU (1) | RU2649129C2 (ru) |
| WO (1) | WO2015021817A1 (ru) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103417953B (zh) * | 2013-08-16 | 2015-06-17 | 张喜田 | 重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)在制备治疗黑色素瘤药物中的应用 |
| CN103463618B (zh) * | 2013-09-06 | 2014-09-03 | 张喜田 | 重组灵芝免疫调节蛋白在制备治疗局灶性脑缺血药物中的应用 |
| CN104940898A (zh) * | 2014-06-18 | 2015-09-30 | 张喜田 | 重组灵芝免疫调节蛋白rLZ-8在制备治疗脑胶质瘤药物中的应用 |
| CN107118263B (zh) * | 2017-04-08 | 2020-07-03 | 张喜田 | 重组灵芝免疫调节蛋白突变体及其应用 |
| KR20240029777A (ko) * | 2021-08-09 | 2024-03-06 | 장춘 인텔리크라운 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 | 재조합 영지버섯 면역 조절 단백질의 새로운 돌연변이체 및 이의 용도 |
| CN113768812A (zh) * | 2021-09-08 | 2021-12-10 | 上海交通大学 | 重组真菌免疫调节蛋白rFIP-glu的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070071766A1 (en) * | 2005-09-23 | 2007-03-29 | Ko Jiunn L | Compositions comprising fungal immunomodulatory protein and use thereof |
| RU2402604C1 (ru) * | 2009-02-12 | 2010-10-27 | Государственное учреждение Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН | КЛЕТОЧНАЯ ЛИНИЯ МЕЛАНОМЫ ЧЕЛОВЕКА mel H, ИСПОЛЬЗУЕМАЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ВАКЦИН |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100009915A1 (en) * | 2005-09-23 | 2010-01-14 | Yeastern Biotech Co., Ltd. | Compositions comprising fungal immunomodulatory protein and use thereof |
| US8629096B2 (en) * | 2005-09-23 | 2014-01-14 | Yeastern Biotech Co., Ltd. | Compositions comprising fungal immunomodulatory protein and use thereof |
| CN101475632B (zh) * | 2008-01-03 | 2012-01-04 | 张喜田 | 具有抗肿瘤作用的重组灵芝免疫调节蛋白及其药物制剂 |
| CN103417953B (zh) * | 2013-08-16 | 2015-06-17 | 张喜田 | 重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)在制备治疗黑色素瘤药物中的应用 |
-
2013
- 2013-08-16 CN CN201310357176.8A patent/CN103417953B/zh not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-06-13 RU RU2016109085A patent/RU2649129C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2014-06-13 US US14/907,263 patent/US20160129077A1/en not_active Abandoned
- 2014-06-13 EP EP14836534.9A patent/EP3023104B1/en not_active Not-in-force
- 2014-06-13 CA CA2919678A patent/CA2919678C/en not_active Expired - Fee Related
- 2014-06-13 AU AU2014308357A patent/AU2014308357A1/en not_active Abandoned
- 2014-06-13 WO PCT/CN2014/079813 patent/WO2015021817A1/zh active Application Filing
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070071766A1 (en) * | 2005-09-23 | 2007-03-29 | Ko Jiunn L | Compositions comprising fungal immunomodulatory protein and use thereof |
| RU2402604C1 (ru) * | 2009-02-12 | 2010-10-27 | Государственное учреждение Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН | КЛЕТОЧНАЯ ЛИНИЯ МЕЛАНОМЫ ЧЕЛОВЕКА mel H, ИСПОЛЬЗУЕМАЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ВАКЦИН |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| HUANG CY et al., Ling-Zhi polysaccharides potentiate cytotoxic effects of anticancer drugs against drug-resistant urothelial carcinoma cells. J Agric Food Chem. 2010 Aug 11; N 58(15), c. 798-805. * |
| МИХНИН А.Е., Злокачественная меланома кожи: поиски стандартов лечения, Практическая онкология, N 4(8) (декабрь) 2001 с. 69-72. * |
| МИХНИН А.Е., Злокачественная меланома кожи: поиски стандартов лечения, Практическая онкология, N 4(8) (декабрь) 2001 с. 69-72. HUANG CY et al., Ling-Zhi polysaccharides potentiate cytotoxic effects of anticancer drugs against drug-resistant urothelial carcinoma cells. J Agric Food Chem. 2010 Aug 11; N 58(15), c. 798-805. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2919678A1 (en) | 2015-02-19 |
| CN103417953A (zh) | 2013-12-04 |
| EP3023104B1 (en) | 2017-10-25 |
| CN103417953B (zh) | 2015-06-17 |
| US20160129077A1 (en) | 2016-05-12 |
| AU2014308357A1 (en) | 2016-03-17 |
| RU2016109085A (ru) | 2017-09-21 |
| WO2015021817A1 (zh) | 2015-02-19 |
| EP3023104A4 (en) | 2016-11-23 |
| EP3023104A1 (en) | 2016-05-25 |
| CA2919678C (en) | 2019-01-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2649129C2 (ru) | ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОРЕГУЛЯТОРНОГО БЕЛКА ГАНОДЕРМА (rLZ-8) В ПОЛУЧЕНИИ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МЕЛАНОМЫ | |
| Sahud et al. | Effect of aspirin ingestion on ascorbic-acid levels in rheumatoid arthritis | |
| JP6294476B2 (ja) | 血球減少を予防又は治療するための薬物の製造におけるアンヒドロイカリチンの使用 | |
| US20190269609A1 (en) | A multi-component injection | |
| CN104856996B (zh) | 吡咯喹啉醌、其衍生物和/或盐新的药用用途以及药用组合物 | |
| CN103948575A (zh) | 肉桂醛在制备促血管新生药物中的应用 | |
| CN102065865A (zh) | 多发性骨髓瘤治疗 | |
| WO2021032212A1 (zh) | 靶向组织微环境中衰老细胞的抗衰老药物d/a及其应用 | |
| TWI631943B (zh) | 治療脂肪肝疾病之方法 | |
| CN107158008B (zh) | 一种治疗心肌梗死的药物组合物 | |
| Tyndel | Hyaluronidase as an adjuvant in insulin shock therapy | |
| CN112641783B (zh) | 乙氧基血根碱的用途及相关产品 | |
| CN115501231A (zh) | 预防和/或治疗肝癌的联用药物组合物及其应用 | |
| CN113908149A (zh) | 刺芒柄花素在制备防治急性肺损伤药物中的用途 | |
| EP3466422B1 (en) | Use of z-butylidenephthalide in activating autoimmune system | |
| CN113768956A (zh) | 无细胞脂肪提取液对巨噬细胞极化调节与疾病治疗的作用 | |
| CN103948614B (zh) | 七叶皂苷及其盐的制药用途 | |
| CN115518158B (zh) | mTOR抑制剂体外诱导树突状细胞及其应用 | |
| TW200423954A (en) | Compositions containing an active fraction isolated from tannins and methods of use | |
| CN100450545C (zh) | 肌肉生长抑制素在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| KR100711977B1 (ko) | 면역기능 증강 및 항암활성 의약 조성물 | |
| RU2504401C2 (ru) | Лекарственное средство, обладающее иммунорегуляторным свойством, для лечения аутоиммунных заболеваний | |
| CN109420166A (zh) | 一种治疗b淋巴细胞相关疾病的联合用药物 | |
| CN114886889A (zh) | 土木香内酯或其衍生物在制备用于预防或治疗肥胖的药物、保健品或食品中的用途 | |
| CN117653650A (zh) | 三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在治疗肥胖症中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190614 |