CN109420166A - 一种治疗b淋巴细胞相关疾病的联合用药物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物，它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的绿原酸与抗CD20单克隆抗体，以及药学上可接受的载体。本发明绿原酸与抗CD20单克隆抗体的联合使用可以发挥协同增效的作用，克服单用抗CD20抗体后产生的耐药性，缓解单用抗CD20抗体后产生的机体损伤，有效降低抗CD20抗体的毒副作用，临床应用前景良好。

Description

一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物

技术领域

本发明涉及一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物。

背景技术

B淋巴细胞，是由骨髓中的造血干细胞分化发育而成，其过分增值或过分抑制均会导致机体相关功能的紊乱，进而引起疾病。与B淋巴细胞相关性较高的疾病主要有B淋巴细胞瘤，淋巴细胞白血病等恶性肿瘤，以及类风湿性关节炎等自身免疫系统相关疾病。CD20是B淋巴细胞表面特有的标识，仅表达于前B淋巴细胞、未成熟B淋巴细胞、成熟B淋巴细胞、激活B淋巴细胞中，在浆细胞、淋巴多能干细胞及其他组织中均无表达，另外，超过95％的B淋巴细胞瘤也都有CD20的表达。因此，CD20在B淋巴细胞相关疾病的治疗中，是药品研发和临床治疗的重要靶点，抗CD20单抗也被用于上述B淋巴细胞相关疾病的治疗中。

大量的基础和临床研究证实，抗CD20抗体往往因为其杀伤力不足、容易产生耐药等特点，在治疗CD20阳性B淋巴细胞相关疾病上表现出治疗缺陷。为增加疗效，临床常用抗CD20抗体与化疗药物联合治疗，但由于化疗药物存在较大的毒副作用，故对机体损伤较大。因此，构建既能增强抗CD20抗体的药效，又不会对机体造成较大伤害的联合用药方式，是此类疾病临床研究中迫切需要解决的问题。

绿原酸是一种具有强生物活性的天然物质，目前的临床试验已经证实，绿原酸是一种安全、无毒、广谱的抗肿瘤药物，可以用于包括肺癌、脑胶质瘤、肝细胞癌、淋巴细胞肿瘤等多种恶性肿瘤的治疗，同时机理研究显示，绿原酸主要通过调节机体T细胞介导的细胞免疫过程，发挥抗肿瘤作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物，以提高抗CD20抗体单独用药的疗效，及降低抗CD20抗体的毒副作用。

本发明提供了一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物，其特征在于：它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的绿原酸和抗CD20单克隆抗体，以及药学上可接受的载体。

其中，所述抗CD20单克隆抗体包括利妥昔单抗、奥法木单抗。

其中，绿原酸和抗CD20单克隆抗体的重量比为300:1-1.5:1；摩尔比为100:0.025-100:0.6。

其中，绿原酸和抗CD20单克隆抗体的重量比为40:3。

本发明还提供了前述的联合用药物在制备治疗B淋巴细胞相关疾病中的用途。

其中，所述B淋巴细胞相关疾病为B淋巴细胞瘤、淋巴细胞白血病或类风湿性关节炎。

本发明还提供了绿原酸和抗CD20单克隆抗体在制备治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物中的用途。

本发明还提供了绿原酸在制备降低抗CD20单克隆抗体的毒副作用的药物中的用途。

其中，所述药物是减弱抗CD20单克隆抗体导致体重变轻的副作用的药物。

本发明最后提供了绿原酸在制备降低肿瘤对CD20单克隆抗体的耐药性的药物中的用途。

本发明绿原酸与抗CD20单克隆抗体的联合使用治疗B淋巴细胞相关疾病可以发挥协同增效的作用，克服单用抗CD20抗体后产生的耐药性，缓解单用抗CD20抗体后产生的机体损伤，有效降低抗CD20抗体的毒副作用，将绿原酸与抗CD20单克隆抗体制成联合用药物的疗效优良，毒性小，临床应用前景良好。

下面通过具体实施方式对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

附图说明

图1为不同给药组对Raji细胞凋亡的影响；

图2为不同给药组对B淋巴细胞瘤小鼠的体重影响；

图3为不同给药组的小鼠B淋巴细胞瘤体积-时间生长曲线；

图4为不同给药组的小鼠B淋巴细胞瘤质量；

图5为不同给药组在Daudi细胞和Daudi-R细胞上对肿瘤细胞的抑制率；

图6为不同给药组类风湿性关节炎小鼠的关节炎累积评分；

图7为不同给药组类风湿性关节炎小鼠的体重监测结果；

图8为不同给药组类风湿性关节炎小鼠的关节病理切片；

图9为不同给药组类风湿性关节炎小鼠的血清细胞因子检测结果，从左往右依次分别为：血清中TNF-α检测结果、血清中IL-6检测结果。

具体实施方式

实施例1体外MTT法检测绿原酸联合抗CD20单抗对恶性肿瘤细胞的抑制作用及药物联合作用的评价

1、材料

药品：利妥昔单抗注射液(美罗华，罗氏)，奥法木单抗(Arzerra，葛兰素史克)绿原酸原料药(99.1％纯度，四川九章生物科技有限公司)

细胞株：Raji细胞(人淋巴瘤细胞)，BALL-1细胞(人B淋巴细胞白血病细胞)，Daudi细胞(人B淋巴细胞)

2、实验方法

2.1单药及联合用药MTT实验

分别取对数生长期的细胞Raji细胞、BALL-1细胞和Daudi细胞，胰酶消化计数，1000r/min离心5min并弃上清，RPMI-1640完全培养基调整浓度至2.5×106个/mL，分别接种于3个96孔板中，每个96孔板中留3个孔不加细胞，只加培养基，作为空白对照组，其余每孔加入细胞悬液200μL，在5％CO2、37℃条件培养箱中孵育12h，待细胞完全贴壁后，吸弃原培养基。

加入RPMI-1640完全培养基稀释的不同浓度的不同药物并按照表1中的5个不同浓度交叉组合，每个96孔板(一种细胞)中，分别是绿原酸与2种抗CD20单抗的药物组合，同时设置相应的对照组(不加药物)。每组均设置3个复孔，培养48h后每孔加入PBS配制的5mg/mL的MTT溶液20μL，继续孵育4h，小心吸弃上清，每孔加150μLDMSO后置水平摇床上低速振荡10min，充分溶解结晶，490nm波长处测量各孔吸光值(A)。分别计算各加药组的抑制率。

表1每种细胞96孔板中设置的不同药物的浓度及组合

2.2药物联合作用的评价

①根据上述实验结果计算不同药物对不同细胞的抑制率，抑制率计算公式如下：抑制率(IC)＝1-(实验组A-空白对照组A)/(阴性对照组A-空白对照组A)×100％

②以同一药物不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图，可得到剂量效应曲线。

③根据药物浓度及对应的肿瘤细胞抑制率，采用Logit法IC50计算软件计算半数抑制浓度(IC50值)。

④联合用药以公式Q＝E(a+b)/(Ea+Eb-Ea×Eb)计算有无协同作用。其中E(a+b)为两药合用的抑制率，即实测合并效应，Ea和Eb为两药单用时的抑制率，分母(Ea+Eb-Ea×Eb)为期望合并效应，Q为两者比值。Q值在0.85～1.15时，两药合并效应为相加(+)，Q值在1.15～20时为协同(++)，Q值＞20为明显协同(+++)，Q值在0.05～0.85时为拮抗，Q值＜0.05为明显拮抗。

3、实验结果

对上述实验结果按照联合用药指数法进行分析后，算得联合用药的联合用药的Q值，结果如表2、表3所示：

试验结果如表表2、表3：

表2不同浓度的绿原酸与利妥昔单抗联合作用于Raji细胞、BALL-1细胞和Daudi细胞的联合指数

表3不同浓度的绿原酸与奥伐木单抗联合作用于Raji细胞、BALL-1细胞和Daudi细胞的联合指数

由表2、表3可以看出：不同浓度绿原酸原料药联合利妥昔单抗或奥伐木单抗作用于不同种CD20+细胞(Raji、BALL-1和Daudi)上，其联合用药的Q值均在1.15至20之间，在部分浓度组合表现出强烈协同作用(Q＞20)。表明绿原酸和抗CD20单抗联合使用在该类细胞上表现为协同作用，可以显著的加强对Raji细胞、BALL-1细胞和Daudi细胞的抑制作用。

实验结果说明，绿原酸联合抗CD20单抗作用于不同的恶性肿瘤细胞上，均可以在特定的浓度，达到较强的协同作用。

实施例2绿原酸联合抗CD20单抗对肿瘤细胞凋亡的影响

1、材料

药品：利妥昔单抗(美罗华，罗氏)，奥法木单抗(Arzerra，葛兰素史克)绿原酸原料药(99.1％纯度，四川九章生物科技有限公司)

细胞株：Raji细胞(人淋巴瘤细胞，CD20+)

2、实验方法

取对数生长期细胞，以1×10⁶个/mL的浓度将Raji细胞接种于2个6孔板中，每板共设4组，分别为对照组、单抗组、绿原酸单药组及两药联用组，其中，联合用药组均选择上述实施例1中Q值最大的(联合效应最强)的浓度组合，具体分组如表4所示。将细胞置于37℃、5％CO₂的恒温细胞培养箱中培养24h。完全贴壁生长后，按照设计向各处理组中加入药物处理48h后，用0.5％的胰酶消化细胞，1000r/min离心5min，然后用PBS洗2遍，再次1000r/min离心5min，加入2.5mL含10％新生牛血清的RPMI-1640培养基制成细胞悬液。取100μL细胞悬液加入5μL AnnexinV-FITC和5μL PI混匀后避光15min，流式细胞仪检测凋亡率。

表4绿原酸联合抗CD20单抗作用于Raji细胞的分组及浓度

3、实验结果

流式细胞仪检测细胞凋亡的结果如图1所示，空白对照组Raji细胞的凋亡率为6.3％，绿原酸单药作用后的细胞凋亡率为16.6％，奥法木单抗单药作用后的细胞凋亡率为26.1％，绿原酸联合利妥昔作用后的细胞凋亡率为94.4％，绿原酸联合利妥昔作用后的细胞凋亡率为80.8％。2组联合用药组的细胞凋亡率均显著高于各药单用后细胞凋亡率的加和，显示绿原酸联合抗CD20单抗(利妥昔单抗或奥法木单抗)使用可以协同促进肿瘤细胞的凋亡。实验结果说明，绿原酸与DHFR抑制剂具有协同作用，能够提高单独用药的疗效。绿原酸对叶酸代谢受阻导致的造血功能损伤具有修复作用，能够缓解DHFR抑制剂导致的红细胞性贫血症及肌体损伤，有效降低DHFR抑制剂的毒副作用，提高小鼠的存活率。

实验结果表明：绿原酸联合抗CD20单抗使用的给药方案，可以促进肿瘤细胞的凋亡，达到显著的协同增效作用。

实施例3绿原酸联合抗CD20单抗治疗小鼠B淋巴细胞瘤的体内动物实验

1、材料

药品：利妥昔单抗(美罗华，罗氏)，奥法木单抗(Arzerra，葛兰素史克)绿原酸原料药(99.1％纯度，四川九章生物科技有限公司)

细胞株：Daudi细胞

动物：40只雌性Scid小鼠，6-8周龄

2、实验方法

2.1动物模型的建立与分组

取处于对数期生长的Daudi细胞，胰酶消化分散后，用RPMI-1640配成浓度为1×106/mL肿瘤细胞悬液，待小鼠肿瘤大小长至200mm3以上时，将建模成功的小鼠随机分为6组，分别为：①阴性对照组(不给予任何处理)；②绿原酸单药组(腹腔注射)；③利妥昔单药组(静脉注射)；④奥法木单药组(静脉注射)；⑤绿原酸联合利妥昔组；⑥绿原酸联合奥法木组，每组6只小鼠，具体的分组、给药方式、给药剂量如表5所示：

表5动物实验分组及给药剂量

2.2实验操作

按上述表5的分组及给药方式，每隔2天注射一次，共给药6次。①外周血白细胞的测定：

分别于D0、D9和D18(最后一次给药后第3天)给药8h后眼眶取血20μL，迅速放入加有稀释液的试管中混匀，F-820全自动血球计数仪检测外周血白细胞计数(×109个)，另取3只未造模正常小鼠的外周血，也于D0、D9和D18天进行白细胞计数，作为该指标的基线参考；

②小鼠体重的监测

分别于于D0、D6、D12和D18给药前称量小鼠的体重,；

③肿瘤体积的监测

分别于D0、D3、D6、D9、D12、D15和D18给药前用游标卡尺量取瘤体的大小，并用公式：瘤体积＝L(瘤最长径)×S(与最长径垂直的短径)2计算各组的瘤体积大小，最后一次给药后第3天(D18)，量取各组小鼠瘤体积后，处死各组小鼠，将瘤体剥离，称取瘤体重量。

3、实验结果

3.1小鼠外周血白细胞检测结果，结果如表6所示：

试验结果如表6：

表6不同给药组小鼠的外周血白细胞计数结果

由表6可以看出，对各组小鼠不同时间点的外周血中白细胞进行计数后的结果显示，单用抗CD20单抗(利妥昔/奥法木)治疗的小鼠，其外周血白细胞较其它各组均有明显的下降，结合临床已有的研究资料显示，该类药物对小鼠产生了机体损伤，白细胞下降即为机体损伤的特征表现之一。根据实验结束后的最后一次检测结果(D18)，绿原酸联合利妥昔/奥法木治疗组的小鼠，与正常小鼠的基线数值相比，并未出现明显的白细胞下降的现象(p＞0.05)，与单用抗CD25单抗药物组相比，白细胞计数明显上升(p＜0.05)。

3.2小鼠体重监测结果

对各组小鼠不同时间点体重监测结果显示，单用抗CD20单抗(利妥昔/奥法木)治疗的小鼠，其体重较其它各组均有明显的下降，结合临床已有的研究资料显示，该类药物对小鼠产生了机体损伤，体重减轻即为机体损伤的表现之一。根据实验过程中不同给药组小鼠体重的监测结果，绿原酸联合利妥昔单抗/奥法木单抗治疗能显著的抑制小鼠体重下降的趋势，具体实验结果如图2所示。

3.3小鼠肿瘤体积监测结果

绿原酸联合利妥昔/奥法木治疗组的小鼠，其肿瘤体积生长的速率显著低于其它各组，最终的肿瘤质量也是所有组中最小的，分别与单独使用利妥昔/奥法木单抗相比，具有显著性差异(p＜0.05)。此实施例证明，在体内动物实验中，绿原酸联合抗CD20单抗(利妥昔/奥法木)，可以显著的减缓小鼠体内肿瘤的生长速率，具有显著的协同作用。实验结果如图3和图4所示。

实验结果表明：绿原酸联合抗CD20单抗(利妥昔/奥法木)可以显著的增强单用抗CD20单抗的体内抑瘤效果，且可以降低单用抗CD20单抗产生的机体损伤，抑制白细胞的降低，抑制小鼠体重的下降，减少该类药物的不良反应，达到增效减毒的。

实施例4绿原酸对利妥昔单抗耐药细胞株的增敏作用研究

1、材料

药品：利妥昔单抗(美罗华，罗氏)，奥法木单抗(Arzerra，葛兰素史克)绿原酸原料药(99.1％纯度，四川九章生物科技有限公司)

细胞株：Daudi细胞

2、实验方法

2.1耐药细胞株的构建

本实施例采用"梯度加药法"诱导Daudi细胞的耐药。取对数生长期的Daudi细胞重悬于含10％新鲜人血清的PRMI-1640完全培养基中，加入0.125μg/mL利妥昔单抗，8小时候换正常细胞培养基培养至细胞状态恢复正常(3-4天)。在下一个周期将利妥昔单抗的浓度提高到0.25μg/mL(前一周期浓度的2倍)，按此法重复11周期后，得到对128μg/mL利妥昔单抗耐药的淋巴瘤细胞株，命名为Daudi-R细胞，完成耐药细胞株的构建。

2.2CCK法检测不同给药组对耐药细胞株Daudi-R的杀伤作用

取生长状态良好的Daudi细胞和Daudi-R细胞，调整细胞浓度为2.5×106个/mL，分别接种在2个96孔板内，正常培养12h，每个96孔板均分为1.阴性对照组(只有细胞不加药)；2.空白对照组(没有细胞只有培养基)；3.绿原酸单药组；4.利妥昔单药组；5.绿原酸联合利妥昔组，其中绿原酸和利妥昔的浓度仍选择上述实施例中CI值最小时对应的药物浓度，绿原酸250μmol/L，利妥昔单抗0.3μmol/L。向每组待测物质加入96孔板中，每组设置3个复孔，将96孔板正常孵育24h后，向每孔中加入10μLCKK溶液，加完后继续孵育2h，用酶标仪在450nm处读取吸光值(A)。按下述公式计算细胞抑制率：

细胞抑制率(％)＝1-[A(药)-A(空白对照)]/[A(阴性对照)-A(空白对照)]×100％

3、实验结果

实验结果显示，在正常的Daudi细胞中，利妥昔可以显著的抑制Daudi细胞的活力，然而在Daudi-R细胞中，同样浓度的利妥昔对细胞活力的抑制作用显著下降，而绿原酸联合利妥昔在2种细胞中，均能显著的抑制肿瘤细胞的活力，在Daudi细胞中，与单用利妥昔相比，绿原酸联合利妥昔给药组对细胞的抑制率有显著性差异(p＜0.05)，在Daudi-R细胞中，与单用利妥昔相比，绿原酸联合利妥昔给药组对细胞的抑制率亦有显著性差异(p＜0.05)，实验结果如图5所示。该实施例证明，绿原酸联合利妥昔单抗不仅可以发挥协同作用抑制肿瘤细胞的活性，还能增强耐药细胞株对利妥昔单抗的敏感性，达到增强增敏的作用。

实验结果表明：绿原酸联合利妥昔单抗可以克服耐药细胞株对利妥昔单抗的抵抗性，增加肿瘤细胞对药物的敏感度，在协同作用的同时，达到增敏的作用。

实施例5绿原酸联合抗CD20单抗对小鼠免疫系统的调节作用及其与类风湿性关节炎治疗相关性的研究评价

1、材料

药品：利妥昔单抗(美罗华，罗氏)，奥法木单抗(Arzerra，葛兰素史克)绿原酸原料药(99.1％纯度，四川九章生物科技有限公司)

动物：DBA/1小鼠

2、实验方法

2.1类风湿性关节炎小鼠模型的建立

(1)胶原-佐剂混合乳剂的配制

①将牛II型胶原溶于0.1M冰醋酸溶液中，浓度为2mg/mL，4℃放置12h；

②分别取1mL的II型胶原和1mL的佐剂混合；

③用注射器将上述混合剂来回推拉，使II型胶原和佐剂充分的混匀，呈乳白色，此过程须在冰浴上进行。

(2)小鼠模型的建立

将小鼠固定于自制的固定装置中，用75％乙醇消毒背部皮肤，每只小鼠背部皮下注射200μL胶原-完全弗氏佐剂混合乳剂。3周后，将不完全弗氏佐剂与牛II型胶原一算溶液等量混合并乳化，于每只小鼠尾根部进行皮下注射，总共100μL，进行加强免疫，即得类风湿性关节炎小鼠。对照组小鼠则按上述方法，于同样的时间，注射等量的生理盐水。

2.2动物分组和治疗

取上述建好的模型小鼠12只，随机分为4组，分别命名为①阴性对照组；②绿原酸单药组；③利妥昔单药组；④绿原酸联合利妥昔治疗组，共4组，于造模成功第二天开始，分别给予不同的药物治疗，连续给药40天，具体分组和给药方案如表7所示：

表7不同分组小鼠的给药方案

2.3试验小鼠关节炎评分

连续观察不同给药组小鼠足趾及踝关节的情况，于初次免疫后第21天开始，每天观察1次，连续8周，并对小鼠的关节炎进行量化评分，每组3只小鼠，以3只小鼠的评分总和作为该组的关节炎评分结果，具体的评分标准入表8所示：

表8关节炎量化评分标准

2.4小鼠体重的监测

在小鼠建模过程中，于初次免疫后开始称量各组小鼠的体重，每周测定一次，一直记录到第8周实验结束。

2.5病理组织的观察

于末次治疗后第2天，取各组小鼠的后爪和踝关节，经石蜡切片并进行HE染色后，与光学显微镜下观察各组小鼠的病理组织切片。

2.6血清细胞因子的检测

取实验结束时的小鼠血清，用ELISA方法，按照各自的试剂盒说明书，检测TNF-α和IL-6的含量，计算各细胞因子的相对浓度。

3、实验结果

3.1小鼠关节炎评分结果

与阴性对照组相比，各药物治疗组均能一定程度的改善小鼠的关节肿胀情况，其中，绿原酸联合利妥昔治疗的作用效果尤其明显，具体的实验评分如图6所示。

3.2小鼠体重监测结果

对实验过程中各组小鼠的体重进行监测(每周一次)，结果发现，绿原酸单药组可以抑制小鼠体重的下降，绿原酸联合利妥昔单抗治疗组的小鼠，体重也未发生明显下降，而阴性对照组和利妥昔单药治疗组的小鼠，体重下降非常显著，如图7所示。

3.3病理组织观察结果

对各组小鼠的后爪和踝关节的病理切片观察后，结果显示，阴性对照组小鼠的关节间隙几乎消失，滑膜中有明显的炎细胞浸润、软骨损伤、骨侵蚀并由血管翳形成，显示造模成功，呈典型的类风湿性关节炎病理表现；在绿原酸单药组，小鼠的关节间隙较阴性对照组清晰，但炎性细胞浸润程度显著减轻；在利妥昔单药治疗组，小鼠的关节间隙清晰、软骨破坏和骨侵蚀较阴性对照组显著减轻；在绿原酸联合利妥昔治疗组，小鼠关节间隙清晰、炎症细胞浸润显著降低、血管翳数量明显减少，软骨破坏和骨侵蚀的程度也明显被抑制。较其它各组，绿原酸联合利妥昔单抗治疗组的小鼠病理切片结果显示出更为优势的疗效。病理切片图如图8所示。

3.4血清细胞因子的检测结果

对各组小鼠的血清中细胞因子TNF-α和IL-6进行检测后发现，与利妥昔单药治疗组相比，绿原酸联合利妥昔治疗组可以显著的降低小鼠血清细胞因子TNF-α和IL-6的含量，此结果与病理切片观察到的现象一致。结果如图9所示。

实验结果表明：绿原酸联合抗CD20单抗能调节类风湿性关节炎小鼠免疫系统，控制炎性介质的产生，改善关节肿胀情况，达到协同增效作用，同时可以降低单用抗CD20单抗产生的机体损伤，抑制小鼠体重的下降，减少该类药物的不良反应。

综上，本发明绿原酸与抗CD20单克隆抗体的联合使用治疗B淋巴细胞相关疾病可以发挥协同增效的作用，克服单用抗CD20抗体后产生的耐药性，缓解单用抗CD20抗体后产生的机体损伤，有效降低抗CD20抗体的毒副作用，将绿原酸与抗CD20单克隆抗体制成联合用药物的疗效优良，毒性小，临床应用前景良好。

Claims (10)

1.一种治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物，其特征在于：它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的绿原酸和抗CD20单克隆抗体，以及药学上可接受的载体。

2.根据权利要求1所述的联合用药物，其特征在于：所述抗CD20单克隆抗体包括利妥昔单抗、奥法木单抗。

3.根据权利要求1或2所述的联合用药物，其特征在于：绿原酸和抗CD20单克隆抗体的重量比为300:1-1.5:1；摩尔比为100:0.025-100:0.6。

4.根据权利要求3所述的联合用药物，其特征在于：绿原酸和抗CD20单克隆抗体的重量比为40:3。

5.权利要求1～4任意一项所述的联合用药物在制备治疗B淋巴细胞相关疾病中的用途。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述B淋巴细胞相关疾病为B淋巴细胞瘤、淋巴细胞白血病或类风湿性关节炎。

7.绿原酸和抗CD20单克隆抗体在制备治疗B淋巴细胞相关疾病的联合用药物中的用途。

8.绿原酸在制备降低抗CD20单克隆抗体的毒副作用的药物中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述药物是减弱抗CD20单克隆抗体导致体重变轻的副作用的药物。

10.绿原酸在制备降低肿瘤对CD20单克隆抗体的耐药性的药物中的用途。