CN107261145A - 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途 - Google Patents

一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN107261145A
CN107261145A CN201710671908.9A CN201710671908A CN107261145A CN 107261145 A CN107261145 A CN 107261145A CN 201710671908 A CN201710671908 A CN 201710671908A CN 107261145 A CN107261145 A CN 107261145A
Authority
CN
China
Prior art keywords
chlorogenic acid
cell
inhibitor
cancer
drug
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710671908.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107261145B (zh
Inventor
张洁
黄望
杨华蓉
张梦甜
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan Jiuzhang Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Sichuan Jiuzhang Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan Jiuzhang Biotechnology Co Ltd filed Critical Sichuan Jiuzhang Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201710671908.9A priority Critical patent/CN107261145B/zh
Publication of CN107261145A publication Critical patent/CN107261145A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107261145B publication Critical patent/CN107261145B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/216—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acids having aromatic rings, e.g. benactizyne, clofibrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明公开了一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途，所述联合用药物包括第一制剂和第二制剂，所述抗肿瘤联合用药物按重量份数计为第一制剂10‑40份，第二制剂30‑100份。本发明还公开了绿原酸在制备抗癌药物毒副作用抑制剂中的用途，所述抗癌药物为HER‑2抑制剂。本发明所述技术方案可提高HER‑2抑制剂在乳腺癌、胃癌中的靶向性，降低其毒副作用，并逆转HER‑2抑制剂的耐药性。

Description

一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途
技术领域
本发明涉生物医药领域，具体为一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途。
背景技术
绿原酸是植物在进行有氧呼吸的过程，经磷酸戊糖途径中间产物合成的一种苯丙素类物质。其提取、合成技术成熟，绿原酸已经被开发应用于食品，保健品，化妆品和药品等多个领域。目前研究结果表明，绿原酸有保护心血管、抗氧化、抗紫外以及抗辐射、抗癌、抗菌、抗病毒以及免疫调节等作用。
HER-2基因(human epidermal growth receptor2gene)，又被称作ERBB2或 HER2/neu基因。HER-2原癌基因或C-erbB2编码一个单一的受体样跨膜蛋白，分子量185kDa，其结构上与表皮生长因子受体相关。在原发性乳腺癌患者中观察到有 25％-30％的患者HER-2过度表达。HER-2基因扩增的结果是这些肿瘤细胞表面 HER-2蛋白表达增加，导致HER-2受体活化。HER-2基因是1981年Shih等首先发现的原癌基因，通常在人类胎儿期表达，仅在成人部分组织中低水平表达。细胞内 HER-2基因大量扩增会引起其蛋白产物p185的过表达，使得HER-2受体异源二聚体数量增加，通过这些信号传递途径，作用于特定的信号蛋白，引起细胞增殖、分化和抗凋亡，从而诱发肿瘤的发生。
HER-2过度表达，不仅存在于乳腺癌，也存在于胃癌。大约有16％的胃癌患者HER-2检测呈阳性。胃癌很难被发现，一般早期胃癌多无症状或者仅仅是轻微症状，而当临床症状明显时，病变已属晚期。因此，进展期的胃癌患者很难治疗，预后很差。
目前以HER-2为靶点的药物分为两大类，一类为单抗药物，另一类为小分子抑制剂。
曲妥珠单抗是一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，选择性地作用于人表皮生长因子受体-2(HER2)的细胞外部位。此抗体属IgGl型，含人的框架区，适用于治疗HER-2过度表达的转移性乳腺癌。帕妥珠单抗是一种人源化单克隆抗体，该药还能阻断其他的HER家族成员，包括EGFR、HER3和HER4，临床试验研究结果表明，单独使用帕妥珠单抗仅产生较弱的抗肿瘤作用。小分子抑制剂主要有拉帕替尼，拉帕替尼是小分子4-苯胺基喹唑啉类受体酪氨酸激酶抑制剂，抑制表皮生长因子受体(ErbB1)和人表皮因子受体2(ErbB2)。
近10年的随机临床试验研究发现，在转移性乳腺癌及早期乳腺癌中，单用小分子抑制剂或者抗体都能提高生存率方面效果。但单药的有效率有限，并且具有毒副作用的缺陷，而且大部分治疗有效者常在1年内产生耐药性，影响临床应用。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途，以及绿原酸在制备抗癌药物毒副作用抑制剂中的用途，所述抗癌药物为HER-2抑制剂。本发明所述技术方案可提高HER-2抑制剂在乳腺癌、胃癌中的靶向性，降低其毒副作用，并逆转HER-2抑制剂的耐药性。
为解决以上技术问题，本发明技术方案为采用一种抗肿瘤联合用药物，包括绿原酸和药学上可接收的载体形成的第一制剂，及HER-2抑制剂和药学上可接收的载体形成的第二制剂。
优选的，所述第一制剂10-40份，所述第二制剂30-100份。
优选的，所述HER-2抑制剂包括HER-2小分子抑制剂、抗HER-2抗体中的一种或多种。
优选的，所述抗HER-2抗体包括曲妥珠单抗、帕妥珠单抗。
更为优选的，根据上述联合用药物，所述制剂的剂型为注射剂或口服制剂。
本发明还提供一种上述联合用药物在制备抗癌药物中的用途。
优选的，所述癌症包括乳腺癌、胃癌。
本发明还提供一种绿原酸在制备抗癌药物毒副作用抑制剂中的用途。
优选的，所述抗癌药物为HER-2抑制剂。
目前，大量的实验均证明绿原酸具有抗诱变及抗癌的作用。绿原酸作为G6PT(葡萄糖-6-磷酸转移酶)的抑制剂，可以启动中性粒细胞及前髓细胞HL-60的程序性细胞死亡,抑制人Hep3B肝癌细胞的金属硫蛋白(MMP)分泌，抑制神经胶质瘤的迁移。。绿原酸对HER-2抑制剂的增敏作用可能与上述机理有关。其次绿原酸分子中含有一定量的活性羟基,能形成具有抗氧化作用的氢自由基,可以消除羟基自由基和超氧阴离子等自由基的活性,保护组织免受氧化作用的损伤。此外，绿原酸对上皮内淋巴细胞 (IEL)上清液以及肠道固有层淋巴细胞(LPL)上清液中NF-γ和TNF-α水平影响均较大。体外研究显示绿原酸能诱导人淋巴细胞及人外周血白细胞生成IFN-γ和 IFN-α，这些作用也可能与绿原酸在本申请中能降低HER-2抑制剂毒副作用有关。
曲妥珠单抗的耐药分为原发性耐药和继发性耐药，曲妥珠单抗发挥抗HER-2疗效的根本机制是其能够正确地与肿瘤细胞膜上的HER-2受体结合。阻止抗体与受体有效结合的细胞产物或HER-2跨膜蛋白结构的改变均可导致曲妥珠单抗不能与HER-2受体结合，从而不能发挥有效作用，产生原发性耐药。此外HER-2蛋白下游信号通路的改变，也可导致耐药。包括HER-2蛋白与HER家族其他成员形成异源二聚体活化下游信号通路或者PI3K/AKT信号通路的改变，PI3K/AKT信号通路因与肿瘤的发展具有相关性而备受瞩目，PI3K/AKT信号通路基本作用机制为生长因子受体形成二聚体后，激活酪氨酸激酶活性，进而激活PI3K活性，PI3K能够催化磷脂酰肌醇二磷酸 (phosphatidylinositol bisphosphate，PIP2)磷酸化形成第二信使PIP3，PIP3活化下游AKT信号通路，从而调节细胞增殖、存活和迁移等。PI3K突变会使其磷酸化活性增强，持续将PIP2磷酸化成为具有信号转导功能的PIP3，从而持续活化下游AKT 信号通路，继而导致曲妥珠单抗耐药性的产生。本发明中，绿原酸逆转了HER-2抑制剂包括HER-2小分子抑制剂及单抗的耐药性，其机理可能与上述机制相关，但HER-2 耐药性的机理较为复杂，绿原酸具体的抗耐药机制还需要进一步的研究证实。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
人类表皮生长因子受体2(human epidermalgrowth factor receptor 2,HER2)属于跨膜酪氨酸激酶受体家族的成员,在肿瘤细胞中存在过表达。自从HER2在肿瘤形成过程中的作用机制被发现,HER2就成为了癌症研究的热点之一。研究显示,在乳腺癌、卵巢癌、胃癌、肺癌、前列腺癌中均存在不同程度的HER2过表达。HER2这种在肿瘤中过表达以及具有细胞外结构域的特点,使之成为抗体药物研发的一个理想靶点。
曲妥珠单抗是人工合成的重组单克隆抗体，与HER2的胞外结构域结合后，选择性地阻断配体依赖的HER2-HER3结合，进而抑制HER2相关信号通路。通过上述曲妥珠单抗对HER2的作用，阻断PI3K信号通路并下调下游细胞周期蛋白，如cyclin D1。除此之外，曲妥珠单抗还可通过抗体依赖的细胞毒性作用来激活HER2过表达细胞的免疫反应。然而，该抗体虽然对HER2过表达的乳腺癌患者产生选择性抗肿瘤作用，对HER2表达正常的肿瘤却没有作用。尽管曲妥珠单抗及其与其他化学疗法的联合应用对治疗HER2阳性乳腺癌具有很好的治疗效果，但曲妥珠单抗治疗的抵抗却成为治疗中的缺陷。有数据显示，曲妥珠单抗单一疗法治疗HER2阳性转移性乳腺癌的临床有效率只有48％。
在治疗乳腺癌中，曲妥珠单抗临床上最常见的不良反应包括发热、恶心、呕吐、输注反应、腹泻、感染、咳嗽加重、头痛、乏力、呼吸困难、皮疹、中性粒细胞减少症、贫血和肌痛。在用于胃癌治疗中，最常见的不良反应是中性粒细胞减少症、腹泻、乏力、贫血、口腔炎、体重减轻、发热、血小板减少等。其中感染、腹泻和发热性中性粒细胞减少症可导致治疗停止。接受帕妥珠单抗联合曲妥珠单抗和多烯紫杉醇治疗者最常见的副作用是腹泻、脱发、对抗感染的白细胞减少、恶心、乏力、皮疹和神经损伤(周围感觉神经病变)。拉帕替尼常见副作用主要有腹泻、恶心、呕吐、皮疹、疲劳和手一足综合征等。
介于上述抗HER-2抗体药物出现的抵抗与耐药性，以及此类药物包括HER-2小分子抑制剂的毒副作用，结合绿原酸在人体多个系统表现出的有益效果，本申请创造性的将二者结合起来，产生了意料不到的技术效果。
本发明公开了一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途，所述联合用药物包括第一制剂和第二制剂，所述抗肿瘤联合用药物按重量份数计为第一制剂 10-40份，优选10-30份，更为优选10-20份，第二制剂30-100份，优选40-80份，更为优选50-60份。本发明还公开了绿原酸在制备抗癌药物毒副作用抑制剂中的用途，所述抗癌药物为HER-2抑制剂。
在本发明实验中，MTT实验表明实验结果显示，在人正常乳腺细胞MCF10A、人正常胃上皮细胞GES-1抑制试验中，绿原酸分别与曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼联合用药可降低曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼对人正常乳腺细胞及胃上皮细胞的毒性，一定程度上提高该两种药物的靶向性。对乳腺癌细胞株BT474及胃癌细胞株NCI-N87抑制作用实验中，绿原酸分别与曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼联合用药达到了协同增效的作用。
此外，本发明体外细胞实验表明无细胞增殖抑制的绿原酸剂量能够逆转曲妥珠单抗耐药乳腺癌细胞株BT474及胃癌细胞株NKN45的耐药性，体外动物实验进一步证实了该结果。
最后，在体外动物实验中证实，绿原酸与曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼联合用药对BT474移植瘤及NCI-N87移植瘤小鼠达到了增敏的效果，同时还减轻了上述药物的毒副作用。
综上所述，本发明所述技术方案可提高HER-2抑制剂在乳腺癌、胃癌中的靶向性，降低其毒副作用，并逆转HER-2抑制剂的耐药性。
以上是对发明内容的详细分析，下面为该发明的实施例。
实施例1MTT测定联合用药的增殖抑制
1.1材料
受试药品：绿原酸、曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼
细胞株：乳腺癌细胞株BT474细胞、胃癌细胞株NCI-N87、人正常乳腺细胞 MCF10A、人正常胃上皮细胞GES-1。
1.2方法
对数生长期细胞一瓶，PBS洗涤2次，0.25％胰蛋白酶消化，用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液配成单细胞悬液计数。无菌条件下接种于96孔培养板，接种细胞数均为5×l03/孔。细胞于37℃、5％CO2孵箱中分别孵育24h后更换培养基。细胞分为，阴性对照组、HER-2抑制剂药物单独用药组、绿原酸组以及联合用药组，空白对照组不接种细胞。每个孔培养液和药物总量为200μl,每个浓度设3个复孔，并以等体积培养液代替药物作为空白对照。继续置5％CO2饱和湿度37℃温箱中继续培养。48h后，每孔加入浓度为5mg/ml MTT 20μl继续培养4h后，小心吸弃孔内液体，加150μl二甲基亚枫溶解沉淀，充分振荡10min，溶解结晶物。选择570nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，计算抑制率及联合指数。以上实验至少重复3次。
1.3数据处理
(1)抑制率＝(1-OD570(实验组-空白组)/OD570(对照组-空白组))*100％。
(2)联合用药以公式Q＝E(a+b)/(Ea+Eb-Ea×Eb)计算有无协同作用。其中E(a+b)为两药合用的抑制率，即实测合并效应，Ea和Eb为两药单用时的抑制率，分母(Ea+Eb-Ea×Eb)为期望合并效应，Q为两者比值。Q值在0.85～1.15时，两药合并效应为相加(+)，Q值在1.15～20时为协同(++)，Q值＞20为明显协同 (+++)，Q值在0.05～0.85时为拮抗，Q值＜0.05为明显拮抗
1.4实验结果
1.4.1单独用药及联合用药对不同正常细胞株的影响
表1单独用药对不同正常细胞株的影响
表2联合用药对不同正常细胞株的影响
实验结果显示，在人正常乳腺细胞MCF10A、人正常胃上皮细胞GES-1抑制试验中，绿原酸(20μg/ml)单独应用时，IC50值分别为1365.6ug/ml、1118.4ug/ml，说明绿原酸本身对正常细胞株无毒性。在人正常乳腺细胞MCF10A抑制试验中，绿原酸 (20μg/ml)分别与曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼联合用药IC50值均高于单独使用时的IC50值，说明绿原酸可降低曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼对人正常乳腺细胞MCF10AB的毒性，一定程度上提高此类药物的靶向性。在人正常胃上皮细胞GES-1抑制试验中，绿原酸(20μg/ml)分别与曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼联合用药IC50值均高于单独使用时的IC50值，说明绿原酸可降低曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼对人正常乳腺细胞MCF10AB的毒性，一定程度上提高该两种药物的靶向性。上述实验数据说明绿原酸可降低HER-2抑制剂的毒副作用，一定程度上提高其靶向性。
1.4.2单独用药及联合用药对不同肿瘤细胞株的影响
表3单独用药对不同肿瘤细胞株的影响
表4 HER-2抑制剂药物与绿原酸联合用药对乳腺癌细胞株BT474细胞抑制作用
结果显示，在HER-2抑制剂与绿原酸联合用药对乳腺癌细胞株BT474抑制作用实验中，50ug/ml曲妥珠单抗与10-50μg/ml绿原酸联合用药的Q值在1.15～20，两药合并效应为协同(++)；100ug/ml帕妥珠单抗与10-50μg/ml绿原酸联合用药的 Q值在1.15～20，两药合并效应为协同(++)；6ug/ml拉帕替尼与10-50μg/ml绿原酸联合用药的Q值在1.15～20，两药合并效应为协同(++)。
表5以HER-2抑制剂药物与绿原酸联合用药对胃癌细胞株NCI-N87抑制作用
结果显示，在HER-2抑制剂药物与绿原酸联合用药对胃癌细胞株NCI-N87抑制作用实验中，50ug/ml曲妥珠单抗与10-50μg/ml绿原酸联合用药的Q值在1.15～ 20，两药合并效应为协同(++)；100ug/ml帕妥珠单抗与10-50μg/ml绿原酸联合用药的Q值在1.15～20，两药合并效应为协同(++)；6ug/ml拉帕替尼与10-50μg/ml 绿原酸联合用药的Q值在1.15～20，两药合并效应为协同(++)。
实施例2绿原酸体外逆转人乳腺癌及胃癌细胞对曲妥珠单抗和拉帕替尼的耐药性
2.1材料
受试药品：绿原酸、曲妥珠单抗、拉帕替尼。
细胞株：乳腺癌细胞株BT474细胞及胃癌细胞株NCI-N87为实验室常规培养细株，临用前传代，取生长状态良好，处于对数期生长的细胞备用。
2.2试验方法
2.2.1耐药细胞株的培育
乳腺癌细胞株BT474与胃癌细胞株NCI-N87分别暴露于曲妥珠单抗50ug/ml长达3个月，离心，培养出曲妥珠单抗耐药的BT474/NY细胞与NCI-N87/NY细胞，每天观察细胞，3天左右1传3传代，保证细胞活力。
2.2.2检测曲妥珠单抗对细胞株与耐药株的IC50，计算耐药倍数
取对数生长期的上述的细胞株及耐药细胞株，调整细胞浓度为8×103个/孔接种于96孔板。实验分别分成3组：空白组、对照组及实验组。空白组只加入培养基，无需接种细胞；对照组加培养基并接种细胞；实验组在上述基础上再加入不同浓度的曲妥珠单抗工作液，置于培养箱孵育48h后每孔加入5mg/ml MTT20μl，继续孵育4h，吸去上液，每孔加入DMSO150μl，静置30min，待结晶完全溶解。用酶标仪检测570nm处各孔吸光值OD值，计算肿瘤细胞生长抑制率。抑制率＝ (1-OD570(实验组-空白组)/OD570(对照组-空白组))×100％。计算IC50。耐药倍数＝耐药细胞IC50值/敏感细胞IC50值。
2.2.3MTT法测定无细胞毒的绿原酸浓度
细胞及耐药细胞培养及处理方法同上。实验分别分成3组：空白组、对照组及实验组。空白组只加入培养基，无需接种细胞；对照组加培养基并接种细胞；实验组在上述基础上再加入不同浓度的绿原酸工作液，使其最终浓度分别为1、2、4、8、 16、32、64、128μg/mL，置于培养箱孵育48h后每孔加入5mg/ml MTT20μl，继续孵育4h，吸去上液，每孔加入DMSO150μl，静置30min，待结晶完全溶解。用酶标仪检测570nm处各孔吸光值OD值，计算肿瘤细胞生长抑制率。抑制率＝ (1-OD570(实验组-空白组)/OD570(对照组-空白组))×100％，取抑制率10％以下浓度的绿原酸浓度作为无毒剂量的逆转浓度。
2.2.4绿原酸逆转耐药细胞株的作用
细胞培养以及实验方法同上。实验分组如下：耐药细胞阴性组、耐药细胞+绿原酸10ug/ml组、耐药细胞+绿原酸20ug/ml组，实验组分别加入不同浓度的曲妥珠单抗，每个浓度3复孔，测定各孔的OD值，观察无细胞毒性绿原酸(10μg/ml、20 μg/ml)联合曲妥珠单抗作用于耐药细胞与曲妥珠单抗单用于对耐药细胞的效果做比较,计算曲妥珠单抗对耐药细胞株的IC50以及用10ug/ml，20ug/ml逆转耐药细胞株后的IC50。逆转倍数＝逆转前IC50值/逆转后IC50值。
2.3试验结果
2.3.1耐药倍数
2.3.1.1曲妥珠对乳腺癌细胞株BT474及BT474/NY的IC50分别为51.5ug/ml 和162ug/ml L。按公式计算出耐药倍数为3.17。
2.3.1.2曲妥珠对胃癌细胞株NCI-N87及NCI-N87/NY的IC50分别为78.3ug/ml 和491ug/ml。按公式计算出耐药倍数为6.27。
2.3.2MTT法测定对耐药细胞无细胞毒的绿原酸浓度结果
2.3.2.1绿原酸对乳腺癌耐药细胞BT474/NY均有抑制增殖作用，IC50为 3577ug/ml。当绿原酸浓度低于357.7μg/ml时，对BT474/NY耐药细胞的抑制率均 <10％,无显著细胞毒性。
2.3.2.2绿原酸对胃癌耐药细胞NCI-N87/NY均有抑制增殖作用，IC50为 3210ug/ml。当绿原酸浓度低于321μg/ml时，对NCI-N87/NY耐药细胞的抑制率均 <10％,无显著细胞毒性。
2.3.3绿原酸对乳腺癌及胃癌耐药细胞的逆转作用
绿原酸无细胞毒浓度(10μg/ml、20μg/ml)作用于乳腺癌耐药细胞BT474/NY 之后，曲妥珠单抗对耐药细胞株BT474/NY的IC50降低。10μg/ml绿原酸作为逆转剂时，曲妥珠单抗对BT474/NY的IC50为71.4ug/ml，逆转倍数为2.67，以20μg/ml 绿原酸作为逆转剂时，曲妥珠单抗对BT474/NY的IC50为60.4ug/ml，逆转倍数为 2.68。如表6所示
绿原酸无细胞毒浓度(10μg/ml、20μg/ml)作用于胃癌耐药细胞NCI-N87/NY之后，曲妥珠单抗对耐药细胞株NCI-N87/NY的IC50降低。10μg/ml绿原酸作为逆转剂时，曲妥珠单抗对NCI-N87/NY的IC50为71.4ug/ml，逆转倍数为2.67，以20μ g/ml绿原酸作为逆转剂时，曲妥珠单抗对NCI-N87/NY的IC50为80.7ug/ml，逆转倍数为6.08。如表7所示
表6绿原酸对BT474/NY耐药细胞的逆转作用
表7绿原酸对NCI-N87/NY耐药细胞的逆转作用
2.4小结
无细胞增殖抑制的绿原酸剂量能够逆转曲妥珠单抗耐药乳腺癌细胞株BT474及胃癌细胞株NKN45的耐药性，其逆转倍数与剂量有一定相关性。
实施例3绿原酸与以HER-2靶向抑制剂的药物联合体内抑瘤的增效减毒作用
3.1材料与仪器
受试药品：绿原酸、曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼。
细胞株：乳腺癌细胞株BT474细胞、胃癌细胞株NCI-N87为实验室常规培养细株，临用前传代，取生长状态良好，处于对数期生长的细胞备用。
受试动物：BABL/c-nu小鼠，18-22g，雌
3.2试验方法
3.2.1实验动物肿瘤模型的建立
收集对数生长期细胞，1000rpm离心5min，细胞沉用PBS洗涤2次，计数后用无血清培养液调整细胞浓度为1×107/m1，无菌条件下送到动物室。在无菌实验条件下，小鼠右侧腋窝皮下注射1×107/m1的细胞，每只0.1ml，注射局部出现明显皮丘，1周后裸鼠左侧腋窝处出现米粒大结节，说明移植模型成功建立，此时按照随机分组法分成12组。
待肿瘤平均直径达100mm3后开始治疗，每天腹腔注射一次，生理盐水对照组给0.2ml无菌生理盐水。
3.2.3抗肿瘤作用评价
观察给药后每天测动物体重；待阴性组瘤体积约为0.5cm3时停止实验，眼球摘除取血测定WBC、HBC及HGB含量，脱颈椎处死小鼠并称重，剥取肿瘤并称重。
抑瘤率＝(对照组瘤重-实验组瘤重)/对照组瘤重×100％。
两药合并Q＝E(a+b)/(Ea+Eb-Ea×Eb)，其中E(a+b)为两药合用的抑制率，即实测合并效应，Ea和Eb为两药单用时的抑制率，分母(Ea+Eb-Ea×Eb)为期望合并效应，Q为两者比值。Q值在0.85～1.15时，两药合并效应为相加(+)，Q值在1.15～ 20时为协同(++)，Q值＞20为明显协同(+++)，Q值在0.05～0.85时为拮抗，Q值＜0.05为明显拮抗。
3.2.4统计学分析
实验数据用SPSS 17.0统计软件进行处理，所有数据均以均数士标准差(mean±SD)表示。组间比较采用单因素方差分析进行统计学处理，P<0.05认为有差异， P<0.01认为有显著性差异。
3.3试验结果
3.3.1联合用药对抑瘤率的影响
表8绿原酸对乳腺癌BT474移植瘤的抑瘤率
与阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01
表9绿原酸对胃癌NCI-N87移植瘤的抑瘤率
与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01
如表8、表9所示，绿原酸，曲妥珠单抗，帕妥珠单抗，拉帕替尼使用较低剂量，对乳腺癌、胃癌移植瘤有较弱的抑制作用，与模型空白组比较无显著性差异。但绿原酸与抑制剂联合使用有较好的抑瘤作用，与单用相比有显著性差异。联合用药Q值计算结果表明，绿原酸与曲妥珠单抗、帕妥珠单抗以及拉帕替尼联用有协同效应。
3.3.2联合用药对小鼠体重的影响
表10绿原酸对BT474移植瘤小鼠体重的影响
与阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01
表11绿原酸对NCI-N87移植瘤小鼠体重的影响
与阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01
结果显示，第15天绿原酸联合用药组的体重大于HER-2抑制剂单独用药组，结果有差异，表明绿原酸联合用药组可提高小鼠体重，改善小鼠机能状态。
3.3.3联合用药的对小鼠血常规的影响
表12联合用药对BT474移植瘤小鼠血常规的影响
与阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01
表13联合用药对NCI-N87移植瘤小鼠血常规的影响
与阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01。

Claims (9)

1.一种抗肿瘤联合用药物，其特征在于，包括绿原酸和药学上可接收的载体形成的第一制剂，及HER-2抑制剂和药学上可接收的载体形成的第二制剂。
2.根据权利要求1所述的联合用药物，其特征在于，所述第一制剂10-40份，所述第二制剂30-100份。
3.根据权利要求2所述的联合用药物，其特征在于，所述HER-2抑制剂包括HER-2小分子抑制剂、抗HER-2抗体中的一种或多种。
4.根据权利要求4所述的联合用药物，其特征在于，所述抗HER-2抗体包括曲妥珠单抗、帕妥珠单抗。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的联合用药物，其特征在于，所述制剂的剂型为注射剂或口服制剂。
6.一种权利要求1所述的联合用药物在制备抗癌药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述癌症包括乳腺癌、胃癌。
8.一种绿原酸在制备抗癌药物毒副作用抑制剂中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述抗癌药物为HER-2抑制剂。
CN201710671908.9A 2017-08-08 2017-08-08 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途 Active CN107261145B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710671908.9A CN107261145B (zh) 2017-08-08 2017-08-08 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710671908.9A CN107261145B (zh) 2017-08-08 2017-08-08 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107261145A true CN107261145A (zh) 2017-10-20
CN107261145B CN107261145B (zh) 2021-03-09

Family

ID=60077634

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710671908.9A Active CN107261145B (zh) 2017-08-08 2017-08-08 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107261145B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108324942A (zh) * 2018-03-27 2018-07-27 新乡医学院 蛇床子素和曲妥珠联合制备治疗胃癌药物中的应用
WO2019034069A1 (zh) * 2017-08-18 2019-02-21 四川九章生物科技有限公司 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013152313A1 (en) * 2012-04-05 2013-10-10 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for treating cancer and diseases and conditions responsive to growth factor inhibition
CN104436194A (zh) * 2013-09-18 2015-03-25 北京大学 具有协同增效作用的抗癌组合物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013152313A1 (en) * 2012-04-05 2013-10-10 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for treating cancer and diseases and conditions responsive to growth factor inhibition
CN104436194A (zh) * 2013-09-18 2015-03-25 北京大学 具有协同增效作用的抗癌组合物

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张洁琼，等: "拉帕替尼与绿原酸联合应用抑制巨噬细胞M2型极化及抗乳腺癌转移的作用研究", 《浙江大学学报（医学版）》 *
王雅萍: "《拉帕替尼和曲妥珠单抗分别联合芳香化酶抑制剂一线治疗HR和HER2均阳性的转移性乳腺癌——系统评价及经济学分析》（第1-3章）翻译实践报告", 《华中科技大学 硕士论文》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019034069A1 (zh) * 2017-08-18 2019-02-21 四川九章生物科技有限公司 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途
CN108324942A (zh) * 2018-03-27 2018-07-27 新乡医学院 蛇床子素和曲妥珠联合制备治疗胃癌药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN107261145B (zh) 2021-03-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ozbay et al. In vitro evaluation of pan-PI3-kinase inhibitor SF1126 in trastuzumab-sensitive and trastuzumab-resistant HER2-over-expressing breast cancer cells
CN103533961A (zh) 以表皮生长因子受体为靶向的治疗癌症的组合方法
CN107801379A (zh) 抗癌剂
CN105916504A (zh) 用于治疗癌症的组合制剂
CN107148279A (zh) 用免疫刺激剂治疗癌症
CN103547598A (zh) 包含抗-erbb3药剂的联合治疗
CN109091480A (zh) 癌组合物10-羟基喜树碱和克唑替尼治疗肺癌及用途
CN108498802A (zh) 用于治疗非小细胞肺癌的药物组合物及其制剂
Tang et al. Icariside II enhances cisplatin-induced apoptosis by promoting endoplasmic reticulum stress signalling in non-small cell lung cancer cells
Menke et al. Preclinical evaluation of antitumoral and cytotoxic properties of viscum album fraxini extract on pediatric tumor cells
CN113876946B (zh) 一种pd-1抗体和绿脓杆菌的联合制药用途及药物组合物
CN107261145A (zh) 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途
CN107375258A (zh) 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途
CN107412777A (zh) 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途
CN107441075A (zh) 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途
CN109420167B (zh) 一种治疗肿瘤的联合用药物
CN109602752A (zh) 雷公藤甲素在诱导癌细胞自噬以及协同hdac抑制剂治疗肿瘤中的应用
Huang et al. Effects of ischemic post-conditioning on the expressions of LC3-II and Beclin-1 in the hippocampus of rats after cerebral ischemia and reperfusion
CN102327256B (zh) 二甲双胍在制备治疗淋巴瘤疾病药物中的应用
CN101530427B (zh) 促造血的药物组合物及其制备方法
Zhao et al. The Yunnan national medicine Maytenus compound inhibits the proliferation of hepatocellular carcinoma (HCC) by suppressing the activation of the EGFR-PI3K-AKT signaling pathway
CN101147803B (zh) 抗Toll样受体2抗体抑制肿瘤转移的用途
CN108815188A (zh) 包含间充质干细胞制剂与免疫检查点抑制剂的肿瘤治疗组合物、试剂盒及其用途
CN1951962B (zh) 用于制备抗肿瘤抗体的多肽及其应用
CN113750239B (zh) 一种用于治疗宫颈癌的药物组合物及其药物制剂和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant