RU2155772C2 - Циклопептолид, штамм гриба, способ получения циклопептолида, терапевтический состав - Google Patents
Циклопептолид, штамм гриба, способ получения циклопептолида, терапевтический состав Download PDFInfo
- Publication number
- RU2155772C2 RU2155772C2 RU97102700/04A RU97102700A RU2155772C2 RU 2155772 C2 RU2155772 C2 RU 2155772C2 RU 97102700/04 A RU97102700/04 A RU 97102700/04A RU 97102700 A RU97102700 A RU 97102700A RU 2155772 C2 RU2155772 C2 RU 2155772C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- leu
- ddd
- indole
- formula
- meala
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 29
- VDCLCAXYTCLVQY-CTVGSUQISA-N 2-[(3s,6s,9s,15s,18s,21s,24s,27s)-15,18-di(butan-2-yl)-6-[(4-methoxyphenyl)methyl]-3,10,16,19,22,28-hexamethyl-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-decaoxo-9,24,27-tri(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28-decazabicyclo[28.4.0]tetratriacontan-21-yl]acetic acid Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N2CCCCC2C(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N(C)[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N(C)[C@@H](C(C)CC)C(=O)N(C)[C@H](C(NCC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)N1)=O)C(C)CC)C(C)C)C1=CC=C(OC)C=C1 VDCLCAXYTCLVQY-CTVGSUQISA-N 0.000 title claims description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title abstract 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 186
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 34
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 22
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 22
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 19
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 13
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 10
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 10
- -1 α-amino-γ-methyl-substituted octanoic acid Chemical class 0.000 claims description 10
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 7
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 claims description 7
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 7
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 6
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical group CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- CZCIKBSVHDNIDH-NSHDSACASA-N N(alpha)-methyl-L-tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH2+]C)C([O-])=O)=CNC2=C1 CZCIKBSVHDNIDH-NSHDSACASA-N 0.000 claims description 5
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 241001373669 Bartalinia sp. Species 0.000 claims description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 4
- CZCIKBSVHDNIDH-UHFFFAOYSA-N Nalpha-methyl-DL-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC)C(O)=O)=CNC2=C1 CZCIKBSVHDNIDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 claims description 4
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 3
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 abstract 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 abstract 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract 1
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 327
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 228
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 182
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 156
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 154
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 154
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 154
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 84
- XJODGRWDFZVTKW-LURJTMIESA-N (2s)-4-methyl-2-(methylamino)pentanoic acid Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CC(C)C XJODGRWDFZVTKW-LURJTMIESA-N 0.000 description 66
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 60
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 44
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 33
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 33
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 26
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 22
- 102000015271 Intercellular Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 19
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 17
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 16
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 description 14
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 14
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 14
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 14
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethyl-3-carbazolamine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 13
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 13
- 108010024212 E-Selectin Proteins 0.000 description 12
- 102100023471 E-selectin Human genes 0.000 description 12
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 12
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 12
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 9
- SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybutyric acid Chemical compound OCCCC(O)=O SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 8
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 8
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 6
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 239000008259 solid foam Substances 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 5
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 5
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 4
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 4
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N Diazomethane Chemical compound C=[N+]=[N-] YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 3
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical group C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N boron;methylsulfanylmethane Chemical compound [B].CSC MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004276 hyalin Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 3
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- PTXVSDKCUJCCLC-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxyindole Chemical compound C1=CC=C2N(O)C=CC2=C1 PTXVSDKCUJCCLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000351901 Bartalinia Species 0.000 description 2
- 0 CCCCC(C)CC(*C(C(CCC#*)OC(C(C(C)C)*(C)*C(C(C)C)*=CC(C(CC(C1=C2CCC=C1)=CC2OC)*(C)C(C(CC(C)C)C=*C(C(CC(C)C)*1C)=O)=O)=O)O)=O)C1=O Chemical compound CCCCC(C)CC(*C(C(CCC#*)OC(C(C(C)C)*(C)*C(C(C)C)*=CC(C(CC(C1=C2CCC=C1)=CC2OC)*(C)C(C(CC(C)C)C=*C(C(CC(C)C)*1C)=O)=O)=O)O)=O)C1=O 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N Caprylic acid Natural products CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N N-Butyllithium Chemical compound [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 2
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 2
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 2
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- WRIKHQLVHPKCJU-UHFFFAOYSA-N sodium bis(trimethylsilyl)amide Chemical compound C[Si](C)(C)N([Na])[Si](C)(C)C WRIKHQLVHPKCJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- HJUGFYREWKUQJT-UHFFFAOYSA-N tetrabromomethane Chemical compound BrC(Br)(Br)Br HJUGFYREWKUQJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- AQRLNPVMDITEJU-UHFFFAOYSA-N triethylsilane Chemical compound CC[SiH](CC)CC AQRLNPVMDITEJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LIBASNWCFRYHQB-UHFFFAOYSA-N (2,3-dichlorophenyl)-diphenylphosphane Chemical compound ClC1=CC=CC(P(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1Cl LIBASNWCFRYHQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBDJFVFTHLOSDW-DNDLZOGFSA-N (2r,3r,4r,5r)-2,3,5,6-tetrahydroxy-4-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyhexanal;hydrate Chemical compound O.O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HBDJFVFTHLOSDW-DNDLZOGFSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000229 (C1-C4)alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- FJJYHTVHBVXEEQ-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropanal Chemical compound CC(C)(C)C=O FJJYHTVHBVXEEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUGISKODRCWQNE-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methylphenyl)ethanol Chemical compound CC1=CC=CC=C1CCO RUGISKODRCWQNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APISVOVOJVZIBA-UHFFFAOYSA-N 2-(triphenyl-$l^{5}-phosphanylidene)acetonitrile Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)(=CC#N)C1=CC=CC=C1 APISVOVOJVZIBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFENDNXGAFYKQO-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybutyric acid Chemical group CCC(O)C(O)=O AFENDNXGAFYKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 3-[(1r)-1-[(2r,6s)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]ethyl]-n-[6-methyl-3-(1h-pyrazol-4-yl)imidazo[1,2-a]pyrazin-8-yl]-1,2-thiazol-5-amine Chemical compound N1([C@H](C)C2=NSC(NC=3C4=NC=C(N4C=C(C)N=3)C3=CNN=C3)=C2)C[C@H](C)O[C@H](C)C1 QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 238000010953 Ames test Methods 0.000 description 1
- 231100000039 Ames test Toxicity 0.000 description 1
- 241000243818 Annelida Species 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001027553 Bos taurus Fibronectin Proteins 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 101100095895 Drosophila melanogaster sle gene Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007818 Grignard reagent Substances 0.000 description 1
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 description 1
- 108010008212 Integrin alpha4beta1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 101710128836 Large T antigen Proteins 0.000 description 1
- LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N N-methyl-L-alanine Chemical compound C[NH2+][C@@H](C)C([O-])=O GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N N-methyl-L-valine Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(O)=O AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OKJPEAGHQZHRQV-UHFFFAOYSA-N Triiodomethane Natural products IC(I)I OKJPEAGHQZHRQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ITLHXEGAYQFOHJ-UHFFFAOYSA-N [diazo(phenyl)methyl]benzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=[N+]=[N-])C1=CC=CC=C1 ITLHXEGAYQFOHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WXFJTQMFCGITBC-UHFFFAOYSA-N [phenyl(sulfosulfonyloxy)phosphanyl]benzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(OS(=O)(=O)S(=O)(=O)O)C1=CC=CC=C1 WXFJTQMFCGITBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003668 acetyloxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)O[*] 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 208000037919 acquired disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000008578 acute process Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002603 aneugenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- UORVGPXVDQYIDP-UHFFFAOYSA-N borane Chemical class B UORVGPXVDQYIDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 230000008711 chromosomal rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 231100000505 clastogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003541 clastogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 229940125846 compound 25 Drugs 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- ASWXNYNXAOQCCD-UHFFFAOYSA-N dichloro(triphenyl)-$l^{5}-phosphane Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(Cl)(C=1C=CC=CC=1)(Cl)C1=CC=CC=C1 ASWXNYNXAOQCCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- CLUOCCWZZAGLPM-UHFFFAOYSA-N diphenyl-sulfanyl-sulfanylidene-$l^{5}-phosphane Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=S)(S)C1=CC=CC=C1 CLUOCCWZZAGLPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005982 diphenylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000004795 grignard reagents Chemical class 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 108010091798 leucylleucine Proteins 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 229960003017 maltose monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229910052987 metal hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004681 metal hydrides Chemical class 0.000 description 1
- NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N methanol;propan-2-one Chemical compound OC.CC(C)=O NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSEFCHWGJNHZNT-UHFFFAOYSA-M methyl(triphenyl)phosphanium;bromide Chemical compound [Br-].C=1C=CC=CC=1[P+](C=1C=CC=CC=1)(C)C1=CC=CC=C1 LSEFCHWGJNHZNT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- PVWOIHVRPOBWPI-UHFFFAOYSA-N n-propyl iodide Chemical compound CCCI PVWOIHVRPOBWPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000002902 organometallic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L palladium(ii) acetate Chemical compound [Pd+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- ODZPKZBBUMBTMG-UHFFFAOYSA-N sodium amide Chemical compound [NH2-].[Na+] ODZPKZBBUMBTMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N sodium tungstate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][W]([O-])(=O)=O XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003463 sulfur Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran thf Chemical compound C1CCOC1.C1CCOC1 WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- PBYZMCDFOULPGH-UHFFFAOYSA-N tungstate Chemical compound [O-][W]([O-])(=O)=O PBYZMCDFOULPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K11/02—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof cyclic, e.g. valinomycins ; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Botany (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
Abstract
Изобретение охватывает новый класс циклогептапептолидов формулы I, где A, B, R1 Ieu, С, Х и Y охарактеризованы в описании, и их терапевтическое применение в качестве ингибиторов экспрессии молекул адгезии для лечения многих болезненных состояний. Получение данного соединения возможно путем культивирования штамма гриба Bartalinia sp. NRRL21123 в питательной среде с последующим выделением из среды указанного соединения. В изобретении описывается также получение терапевтического состава, обладающего способностью ингибировать экспрессию молекул адгезии, включающего в качестве активного ингредиента соединение формулы I в эффективном количестве, а также целевые добавки. 4 с. и 2 з.п. ф-лы, 6 табл., 7 ил.
Description
Изобретение касается циклопептолидов и их терапевтического применения в качестве ингибиторов экспрессии молекул адгезии. Клеточные молекулы адгезии, такие как ICAM-1, VCAM-1 и E-селектин, экспрессируются на поверхности эндотелиальных клеток, а также кератиноцитов в случае ICAM-1, в ответ на действие провоспалительных медиаторов, включающих TNFα, IFNγ, IL1 и LPS. Соответствующие контрлиганды, например LFA-1, VLA-4 и SLEx, экспрессируются на поверхности циркулирующих кровяных клеток. Трансэндотелиальная миграция лейкоцитов во время воспалительных процессов, а также межклеточное взаимодействие вне сосудов регулируются путем взаимодействия между этими молекулами адгезии и их контрлигандами. Следовательно, представляется возможным использовать ингибиторы экспрессии молекул адгезии для лечения многих болезненных состояний. Однако к настоящему времени нет подходящих низкомолекулярных ингибиторов экспрессии молекул адгезии.
Циклопептолиды представляют собой вещества с замкнутыми в цикл молекулами, содержащими аминокислотные остатки, соединенные пептидными связями, и по меньшей мере один гидроксизамещенный остаток карбоновой кислоты, который соединен через заместитель его гидроксильной группы с соседним кислотным остатком посредством эфирной связи.
Мы открыли новый класс циклопептолидов, являющихся ингибиторами экспрессии ICAM-1, VCAM-1 и E-селектина.
Настоящее изобретение относится к циклогептапептолиду формулы I
где А обозначает остаток масляной кислоты, замещенной по α-гидроксильной группе, который может быть дополнительно замещен по γ-положению радикалом R6, обозначающим CN, COOR2, CONR3R4, COR5, CSNH2 или алкил, который может быть замещен азидогруппой, атомом галогена, алкоксигруппой, возможно защищенной гидроксильной или аминогруппой, винил, который может быть замещен алкилом, атомом галогена или CN-группой, циклоалкил, тетразолил или группу -C≡CH; где R2 обозначает водород или алкил, который может быть дополнительно замещен арилом, R3 и R4 - одинаковые или различные и обозначают водород или алкил либо образуют совместно с атомом азота кольцо, состоящее из 3-6 атомов, 20 которое может содержать второй гетероатом, а R5 обозначают водород или низший алкил;
B обозначает остаток α-амино-γ-метилзамещенной октановой кислоты;
R1 обозначает водород или метил;
C обозначает триптофан или N-метилтриптофан формулы VI
где R8 обозначает водород, алкоксигруппу, алкил или бензил, R9 обозначает водород или галоген, R10 обозначает водород или метил и обозначает одинарную или двойную связь,
X обозначает остаток α-аминозамещенной (C2-C14)карбоновой кислоты, и Y обозначает остаток α-амино- или N-метил-α-аминозамещенной (C2-C10)карбоновой кислоты.
где А обозначает остаток масляной кислоты, замещенной по α-гидроксильной группе, который может быть дополнительно замещен по γ-положению радикалом R6, обозначающим CN, COOR2, CONR3R4, COR5, CSNH2 или алкил, который может быть замещен азидогруппой, атомом галогена, алкоксигруппой, возможно защищенной гидроксильной или аминогруппой, винил, который может быть замещен алкилом, атомом галогена или CN-группой, циклоалкил, тетразолил или группу -C≡CH; где R2 обозначает водород или алкил, который может быть дополнительно замещен арилом, R3 и R4 - одинаковые или различные и обозначают водород или алкил либо образуют совместно с атомом азота кольцо, состоящее из 3-6 атомов, 20 которое может содержать второй гетероатом, а R5 обозначают водород или низший алкил;
B обозначает остаток α-амино-γ-метилзамещенной октановой кислоты;
R1 обозначает водород или метил;
C обозначает триптофан или N-метилтриптофан формулы VI
где R8 обозначает водород, алкоксигруппу, алкил или бензил, R9 обозначает водород или галоген, R10 обозначает водород или метил и обозначает одинарную или двойную связь,
X обозначает остаток α-аминозамещенной (C2-C14)карбоновой кислоты, и Y обозначает остаток α-амино- или N-метил-α-аминозамещенной (C2-C10)карбоновой кислоты.
Расположение аминокислотных остатков в формуле I таково, что направление от C-конца к N-концу ориентировано по часовой стрелке, а пептолидная эфирная связь располагается между остатками A и Y. Если R1 является метилом, то остатки R1-Leu и Leu представляют собой остатки N-метиллейцина и лейцина соответственно.
Предпочтительно, когда A представляет собой остаток α-гидроксимасляной кислоты, замещенный в γ-положении цианогрупой; группой COOR2, где R2 представляет собой водород, низший алкил с числом атомов углерода от 1 до 4 или дифенилметил; CONR3R4, где R3 представляет собой атом водорода или метил, а R4 - атом водорода или алкил, либо R3 и R4 образуют совместно с атомом азота кольцо, содержащее от 3 до 6 атомов, или морфолиновое кольцо; COR5, где R5 представляет собой атом водорода или низший алкил, содержащий от 1 до 4 атомов углерода; винилом, который может быть дополнительно замещен группой CN, Br или низшим алкилом, содержащим от 1 до 4 атомов углерода; алкилом, который может быть дополнительно замещен азидо-, амино-, гидрокси-, хлор- или алкоксигруппой; CSNH2 или -C≡CH.
А также может быть замещен в γ-положении CH2OH, тетразолилом или циклопропилом.
А также может быть замещен в γ-положении CH2OH, тетразолилом или циклопропилом.
Предпочтительно, чтобы C являлся остатком N-метилтриптофана формулы VI, где R8 представляет собой атом водорода, (C1-C4)алкоксигруппу, главным образом метоксигруппу, или алкил, а R9 - атом водорода или галогена.
Предпочтительным остатком X является остаток α-аминозамещенной (C4-C8)карбоновой кислоты, который может быть дополнительно замещен β- или γ-(C1-C4)алкильным заместителем. Наиболее предпочтительно, чтобы X представлял собой α-амино-β- или γ-(C1-C4)алкил-, главным образом метил-, замещенный остаток октановой или масляной кислоты.
Предпочтительным остатком Y является остаток N-метил-α-аминозамещенной (C2-C4)карбоновой кислоты, который может быть дополнительно замещен β- или γ-(C1-C4)алкильным заместителем. Наиболее предпочтительно, чтобы Y являлся остатком N-метилаланина или N-метилвалина.
Соединения формулы I имеют асимметричные атомы углерода, и соединения могут иметь как R-, так и S-конфигурацию.
Пептиды или пептолиды могут быть также с открытой цепью. Эти соединения с открытой цепью обычно получают как путем разрыва эфирной связи между остатками Y и A, так и путем разрыва амидной связи между любой другой парой соседних кислотных остатков. Например, производными с открытой цепью могут быть соединения формул IV и V:
H-C-X-Y-A-B-R1Leu-Leu•OR7 IV
HA-B-R1Leu-Leu-C-X-Y•OR7 V
где R7 представляет собой атом водорода или алкил.
H-C-X-Y-A-B-R1Leu-Leu•OR7 IV
HA-B-R1Leu-Leu-C-X-Y•OR7 V
где R7 представляет собой атом водорода или алкил.
Предпочтительной подгруппой соединений по изобретению являются соединения формулы Ip
где Ap представляет собой остаток α-гидроксизамещенной масляной кислоты, который может быть замещен по γ-положению группой R6p, представляющей собой CN-группу, возможно защищенные группы CH2OH, COOR2p, CONR3pR4p, COR5p или -CH= CH2, где R2p является атомом водорода или алкилом, который может быть дополнительно замещен арилом, R3p и R4p - одинаковые или различные и представляют собой атом водорода или алкил, либо образуют совместно с атомом азота 5- или 6-членное кольцо, которое может содержать второй гетероатом, а R5p представляет собой атом водорода или низший алкил;
Bp является остатком α-амино-γ-метилзамещенной октановой кислоты;
R1p является атомом водорода или метилом;
представляет собой остаток триптофана или N-метилтриптофана, который может быть N'-(C1-C4)алкоксизамещенным;
Xp является α-аминозамещенным (C2-C14)остатком карбоновой кислоты; и
Yp представляет собой α-амино- или N-метил-α-аминозамещенный (C2-C10)остаток карбоновой кислоты.
где Ap представляет собой остаток α-гидроксизамещенной масляной кислоты, который может быть замещен по γ-положению группой R6p, представляющей собой CN-группу, возможно защищенные группы CH2OH, COOR2p, CONR3pR4p, COR5p или -CH= CH2, где R2p является атомом водорода или алкилом, который может быть дополнительно замещен арилом, R3p и R4p - одинаковые или различные и представляют собой атом водорода или алкил, либо образуют совместно с атомом азота 5- или 6-членное кольцо, которое может содержать второй гетероатом, а R5p представляет собой атом водорода или низший алкил;
Bp является остатком α-амино-γ-метилзамещенной октановой кислоты;
R1p является атомом водорода или метилом;
представляет собой остаток триптофана или N-метилтриптофана, который может быть N'-(C1-C4)алкоксизамещенным;
Xp является α-аминозамещенным (C2-C14)остатком карбоновой кислоты; и
Yp представляет собой α-амино- или N-метил-α-аминозамещенный (C2-C10)остаток карбоновой кислоты.
Следующей подгруппой соединений по изобретению являются соединения формулы I'p
где A'p представляет собой остаток α-гидроксизамещенной масляной кислоты, который может быть замещен по γ-положению группой R'6p, представляющей собой CN, COOR'2p, CONR'3pR'4p, COR'5p, алкил, который может быть замещен азидогруппой, атомом галогена, алкоксигруппой, возможно защищенным гидроксилом или аминогруппой, винил (может быть замещен алкилом, атомом галогена или CN-группой), циклоалкил, тетразолил или группу -C≡CH; где R'2p представляет собой атом водорода или алкил, который может быть замещен арилом, R'3p и R'4p - одинаковые или различные и представляют собой атом водорода или алкил, либо образуют вместе с атомом азота кольцо, состоящее из 3-6 атомов, и которое может содержать второй гетероатом, а R'5p представляет собой атом водорода или низший алкил;
B'p является остатком α-амино-γ-метилзамещенной октановой кислоты;
R'1p является атомом водорода или метилом;
C'p представляет собой остаток триптофана или N-метилтриптофана формулы
где R'8p представляет собой атом водорода, алкоксигруппу, алкил или бензил, R'9p - атом водорода или галогена, R'10p - атом водорода или метил, а представляет собой одинарную или двойную связь;
X'p является α-аминозамещенным (C2-C14)остатком карбоновой кислоты; и
Y'p представляет собой α-амино- или N-метил-α-аминозамещенный (C2-C10)остаток карбоновой кислоты.
где A'p представляет собой остаток α-гидроксизамещенной масляной кислоты, который может быть замещен по γ-положению группой R'6p, представляющей собой CN, COOR'2p, CONR'3pR'4p, COR'5p, алкил, который может быть замещен азидогруппой, атомом галогена, алкоксигруппой, возможно защищенным гидроксилом или аминогруппой, винил (может быть замещен алкилом, атомом галогена или CN-группой), циклоалкил, тетразолил или группу -C≡CH; где R'2p представляет собой атом водорода или алкил, который может быть замещен арилом, R'3p и R'4p - одинаковые или различные и представляют собой атом водорода или алкил, либо образуют вместе с атомом азота кольцо, состоящее из 3-6 атомов, и которое может содержать второй гетероатом, а R'5p представляет собой атом водорода или низший алкил;
B'p является остатком α-амино-γ-метилзамещенной октановой кислоты;
R'1p является атомом водорода или метилом;
C'p представляет собой остаток триптофана или N-метилтриптофана формулы
где R'8p представляет собой атом водорода, алкоксигруппу, алкил или бензил, R'9p - атом водорода или галогена, R'10p - атом водорода или метил, а представляет собой одинарную или двойную связь;
X'p является α-аминозамещенным (C2-C14)остатком карбоновой кислоты; и
Y'p представляет собой α-амино- или N-метил-α-аминозамещенный (C2-C10)остаток карбоновой кислоты.
Все соединения по изобретению могут быть в виде их солей и эфиров, равно как и в свободном виде.
Наиболее предпочтительными являются соединения формул II и III (обозначаемые далее как соединения A и B соответственно)
а также циклопептолид формулы I, где
R1 = CH3
Объектом настоящего изобретения является также штамм гриба Bartalinia sp. NRRL 21123 - продуцент циклопептолида формулы I.
а также циклопептолид формулы I, где
R1 = CH3
Объектом настоящего изобретения является также штамм гриба Bartalinia sp. NRRL 21123 - продуцент циклопептолида формулы I.
Объектом изобретения также является способ получения соединения формулы I, заключающийся в том, что проводят культивирование штамма гриба Bartalinia sp. NRRL 21123 в питательной среде, с последующим выделением из среды указанного соединения.
Циклогептапептолиды формулы A и B были выделены из культур грибного штамма F92-4471/08, изолированного из образцов лиственной подстилки, собранных вблизи Ла Платы (La Plata, Аргентина), для которого экспериментально установлено, что он принадлежит к роду Bartalinia. Образцы штамма F92-4471/08 в соответствии с условиями Будапештского договора были депонированы Отделом Сельского хозяйства США (коллекция NRRL-культур) 2 июля 1993 года и данному штамму присвоен депозитный номер NRRL 21123. Характеристики грибного штамма F92-4471/08 описаны далее в примере 1.
Таким образом, настоящее изобретение включает как штамм F92-4471/08 (NRRL 21123) в изолированной форме.
Соединения A и B и родственные соединения могут быть получены путем культивирования штамма F92-4471/08/NRRL 21123, или штаммов схожих грибных видов в питательной среде и извлечения из них указанных соединений, например, как описано в примере 2.
Характеристики соединений A и B приводятся в примере 3.
Соединения по изобретению могут быть получены путем модификаций соединений A и B, включающих:
а) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу COOR2', где R2' является алкилом, который может быть замещен арилом, взаимодействие соединений формулы I, где R6 представлен CN-группой, с нуклеофилами, предпочтительно со спиртами, с соответствующим основным или кислотным катализатором, предпочтительно соляной кислотой, в органических растворителях, предпочтительно эфире, или
б) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой COалкил, взаимодействие соединений формулы I, где R6 представлен CN-группой, с использованием в качестве нуклеофилов органометаллических соединений, предпочтительно соединений Гриньяра или литийалкилов, которые взаимодействуют в апротонных органических растворителях, предпочтительно эфирах, в присутствии катализатора или без него, или
в) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу COOH, гидролиз соединений формулы I, где R6 представлен COOалкилом, с помощью минеральной кислоты, предпочтительно соляной, в водно-спиртовом растворе, или основания, или
г) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу COOR2', этерификацию соединений формулы I, где R6 представлен группой COOH, стандартными методами, предпочтительно путем превращения в хлорангидрид кислоты с помощью, например, тионилхлорида, и обработки подходящим спиртом в присутствии или отсутствие кислотного связующего, или
д) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу CH2OH, восстановление соединений формулы I, где R6 представлен группой COOR2, с помощью гидридов металлов или гидридов бора, предпочтительно борандиметилсульфидного комплекса, в органических растворителях, или
е) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу CONR3R4, превращение соединений формулы I, где R6 представлен группой COOR2, реакцией с аминами, предпочтительно путем превращения свободной кислоты в хлорангидрид кислоты и затем реакцией с амином формулы HNR3R4, или
ж) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу CHO, окисление соединений формулы I, где R6 представлен группой CH2OH, или
з) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой возможно замещенный винил, взаимодействие соединений формулы I, где R6 представлен группой CHO и метильного производного реагента Виттига, или
и) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой возможно замещенный алкил из соединений формулы I, где R6 представлен группой CH2OH, или
к) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу CH2NH2, восстановление соединений формулы I, где R6 представлен группой CH2N3, или
л) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу -C≡CH, из соединений формулы I, где R6 представлен группой CH=CBr2, или
м) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой циклопропил, взаимодействие соединений формулы I, где R6 представлен винилом, с диазометаном, или
н) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой тетразолил, взаимодействие соединений формулы I, где R6 представлен группой CN, с азидом, или
о) для получения соединений формулы I, в которых R8 представляет собой атом водорода, удаление метоксигруппы из соединений формулы I, где R8 представлен группой OCH3, или
п) для получения соединений формулы I, в которых символ обозначает одинарную связь, восстановление соединений формулы I, где символ обозначает двойную связь, или
р) для получения соединений формулы I, в которых R8 представляет собой алкил или бензил, введение этих групп в соединения формулы I, где R8 представлен атомом водорода, или
с) для получения соединений формулы I, в которых R9 представляет собой атом галогена, галогенирование соединений формулы I, где R9 представлен атомом водорода, или
т) для получения соединений формулы I, в которых R8 представляет собой алкоксигруппу, а символ обозначает двойную связь, взаимодействие соединений формулы I, где R8 представлен атомом водорода, а символ обозначает одинарную связь, с щелочным вольфраматом и перекисью водорода и алкилирование N-гидроксииндольного промежуточного соединения, или
у) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу CSNH2, взаимодействие соединений формулы I с производными серы, предпочтительно с дифенилфосфинодитионовой кислотой.
а) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу COOR2', где R2' является алкилом, который может быть замещен арилом, взаимодействие соединений формулы I, где R6 представлен CN-группой, с нуклеофилами, предпочтительно со спиртами, с соответствующим основным или кислотным катализатором, предпочтительно соляной кислотой, в органических растворителях, предпочтительно эфире, или
б) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой COалкил, взаимодействие соединений формулы I, где R6 представлен CN-группой, с использованием в качестве нуклеофилов органометаллических соединений, предпочтительно соединений Гриньяра или литийалкилов, которые взаимодействуют в апротонных органических растворителях, предпочтительно эфирах, в присутствии катализатора или без него, или
в) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу COOH, гидролиз соединений формулы I, где R6 представлен COOалкилом, с помощью минеральной кислоты, предпочтительно соляной, в водно-спиртовом растворе, или основания, или
г) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу COOR2', этерификацию соединений формулы I, где R6 представлен группой COOH, стандартными методами, предпочтительно путем превращения в хлорангидрид кислоты с помощью, например, тионилхлорида, и обработки подходящим спиртом в присутствии или отсутствие кислотного связующего, или
д) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу CH2OH, восстановление соединений формулы I, где R6 представлен группой COOR2, с помощью гидридов металлов или гидридов бора, предпочтительно борандиметилсульфидного комплекса, в органических растворителях, или
е) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу CONR3R4, превращение соединений формулы I, где R6 представлен группой COOR2, реакцией с аминами, предпочтительно путем превращения свободной кислоты в хлорангидрид кислоты и затем реакцией с амином формулы HNR3R4, или
ж) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу CHO, окисление соединений формулы I, где R6 представлен группой CH2OH, или
з) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой возможно замещенный винил, взаимодействие соединений формулы I, где R6 представлен группой CHO и метильного производного реагента Виттига, или
и) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой возможно замещенный алкил из соединений формулы I, где R6 представлен группой CH2OH, или
к) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу CH2NH2, восстановление соединений формулы I, где R6 представлен группой CH2N3, или
л) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу -C≡CH, из соединений формулы I, где R6 представлен группой CH=CBr2, или
м) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой циклопропил, взаимодействие соединений формулы I, где R6 представлен винилом, с диазометаном, или
н) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой тетразолил, взаимодействие соединений формулы I, где R6 представлен группой CN, с азидом, или
о) для получения соединений формулы I, в которых R8 представляет собой атом водорода, удаление метоксигруппы из соединений формулы I, где R8 представлен группой OCH3, или
п) для получения соединений формулы I, в которых символ обозначает одинарную связь, восстановление соединений формулы I, где символ обозначает двойную связь, или
р) для получения соединений формулы I, в которых R8 представляет собой алкил или бензил, введение этих групп в соединения формулы I, где R8 представлен атомом водорода, или
с) для получения соединений формулы I, в которых R9 представляет собой атом галогена, галогенирование соединений формулы I, где R9 представлен атомом водорода, или
т) для получения соединений формулы I, в которых R8 представляет собой алкоксигруппу, а символ обозначает двойную связь, взаимодействие соединений формулы I, где R8 представлен атомом водорода, а символ обозначает одинарную связь, с щелочным вольфраматом и перекисью водорода и алкилирование N-гидроксииндольного промежуточного соединения, или
у) для получения соединений формулы I, в которых R6 представляет собой группу CSNH2, взаимодействие соединений формулы I с производными серы, предпочтительно с дифенилфосфинодитионовой кислотой.
Соединения по настоящему изобретению могут также быть получены с помощью химического синтеза, например, с использованием обычных методик пептидного синтеза. Типичным завершающим этапом получения таких соединений является стадия циклизации, в которой линейный пептид или пептолид, содержащий соединенные друг с другом в нужном порядке остатки A, B, R1Leu, Leu, C, X и Y, замыкаются в цикл в результате образования амидной или эфирной связи.
Таким образом, изобретение охватывает способ получения циклических пептолидов формулы I, включающий в себя циклизацию линейных пептидов или пептолидов, содержащих остатки A, B, R1Leu, Leu, C, X и Y, соединенные друг с другом в соответствующем порядке.
Соединения по настоящему изобретению проявляют фармакологическую активность и могут поэтому быть использованы в качестве фармацевтических средств. В частности, данные соединения являются ингибиторами стимулированной экспрессии клеточных молекул адгезии, в особенности ингибиторами VCAM-1-экспрессии по сравнению с экспрессией E-селектина и ICAM-1. Эффект ингибирования VCAM-1 проявляется как на транскрипционном, так и посттранскрипционном уровнях. Способы анализа, с помощью которых можно зарегистрировать ингибирование экспрессии ICAM-1, VCAM-1 и E-селектина под действием соединений по изобретению, описаны после раздела "Примеры". Ввиду этого данные соединения могут быть полезны для лечения или профилактики тех болезней, при которых имеет место экспрессия клеточных молекул адгезии. Подобными болезнями являются многие приобретенные и наследственные заболевания/расстройства, при которых передвижение лейкоцитов играет значимую роль в патогенном процессе, особенно при остром и хроническом воспалительном процессе (например, аллергии, астме, псориазе, травме при реперфузии, ревматоидном артрите и септическом шоке) и аутоиммунных состояниях (например, рассеянном склерозе). Другие показания для применения соединений по изобретению включают раковые метастазы (например, при меланоме, остеокарциноме) и отторжение алло/ксенотрансплантата, так как известно, что ингибирование молекул адгезии сосудов может значительно улучшать прогнозы этих процессов.
Кроме этого, соединения по данному изобретению возможно использовать для лечения как гиперпролиферативных (псориаз), так и разнообразных злокачественных заболеваний кожи ввиду того, что они обладают ингибирующей активностью в субмикромолярных концентрациях, что обнаружено при тестировании в течение 72 часов как в основанных на измерениях кератиноцитов, так и в других тестах на пролиферацию.
Соединения по данному изобретению проявляют ингибирующую активность в отношении индуцируемого TNFα и IL6 размножения ВИЧ в U1-клеточной линии культуры моноцитов, как количественно установлено с помощью p24 ELISA, и ввиду этого также могут быть полезны при лечении иммунодефицитов и вирусных заболеваний, особенно СПИДа.
Таким образом, изобретение также включает терапевтическое применение соединений по изобретению и содержащих их терапевтических составов.
При лечении и профилактике заболеваний, вызываемых экспрессией молекул адгезии, вводят субъекту терапевтически и профилактически эффективное количество соединения, предусмотренного изобретением.
Изобретение также относится к терапевтическому составу, обладающему способностью ингибировать экспрессию молекул адгезии и включающему в качестве активного ингредиента соединение формулы I в эффективном количестве и целевые добавки.
Соединения по изобретению могут быть использованы для получения лекарственных средств с целью лечения и профилактики заболеваний, вызываемых экспрессией молекул адгезии.
Составы могут быть использованы для парентерального, перорального, аэрозольного и местного применения и обычно включают один или несколько приемлемых носителей, разбавителей или эксципиентов и могут содержать стабилизаторы и подобные им добавки.
Применяемые дозы соединений можно, среди прочего, варьировать в зависимости от состояния или вида заболевания, от того, используются они для лечения или профилактики, и от способа и пути введения лекарственного препарата. В целом, однако, удовлетворительные результаты получены при пероральном введении в дозах от приблизительно 0,05 до приблизительно 10 мг/кг/день, предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 7,5 мг/кг/день, более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 2 мг/кг/день при однократном введении или с разбивкой на дозы, вводимые от 2 до 4 раз в день. Альтернативно, для парентерального введения, например, посредством капельного внутривенного вливания или инфузии могут быть использованы дозы от приблизительно 0,01 до приблизительно 5 мг/кг/день, предпочтительно от приблизительно 0,05 до приблизительно 1 мг/кг/день и более предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 1,0 мг/кг/день.
Подходящие для человека дневные дозы составляют таким образом при пероральном введении приблизительно от 2,5 до 500 мг, предпочтительно - приблизительно от 5 до 250 мг, более предпочтительно - приблизительно от 5 до 100 мг; или при внутривенном введении - приблизительно от 0,5 до 250 мг, предпочтительно - приблизительно от 2,5 до 125 мг, более предпочтительно - приблизительно от 2,5 до 50 мг.
Рассматриваемые соединения могут вводиться любым подходящим способом, включая энтеральный, парентеральный и местный или с помощью ингалятора. Приемлемыми для энтерального введения формами являются растворы для питья, таблетки и капсулы. Приемлемыми для парентерального введения формами являются растворы или суспензии для инъекций. Приемлемые для местного введения формы включают кремы, лосьоны и подобные им формы, содержащие в этом случае от 0,01 до 10%, предпочтительно - от 0,1 до 1% по весу основного ингредиента. Приемлемая разовая доза соединения по изобретению при пероральном введении может лежать в пределах от 1 до 50 мг, обычно она составляет от 1 до 10 мг. Соединение из примера 4 является предпочтительным соединением по изобретению и может вводиться высшим млекопитающим, например людям, с использованием тех же способов введения и тех же или меньших доз, что и обычно используемые соединения с известными нормами для подобных показаний.
Дальнейшее описание изобретения приводится в нижеследующих примерах, данных только с целью иллюстрации и ссылающихся на диаграммы, на которых:
Фиг. 1 показывает УФ-спектры соединения A (а) и B (б).
Фиг. 1 показывает УФ-спектры соединения A (а) и B (б).
Фиг. 2 показывает ИК-спектр соединения A.
Фиг. 3 показывает ИК-спектр соединения B.
Фиг. 4 показывает спектр протонного ЯМР соединения A.
Фиг. 5 показывает спектр протонного ЯМР соединения B.
Фиг. 6 показывает спектр 13C ЯМР соединения A.
Фиг. 7 показывает спектр 13C ЯМР соединения B.
В последующих примерах, иллюстрирующих изобретение, не ограничивая его, значения температуры даны везде в градусах Цельсия и использованы следующие сокращения:
Bz - бензил;
iPr - изопропил;
nPr - н-пропил;
HBa - модифицированная 2-гидроксимасляная кислота;
TFA - трифторуксусная кислота;
THF - тетрагидрофуран;
db - двойная связь;
sb - одинарная связь;
br - широкий;
d - дуплет;
m - мультиплет;
q - квартет;
t - триплет;
Пример 1. Описание штамма F/92-4471/08 (NRRL 21123)
Грибной штамм NRRL 21123, продуцирующий соединения A и B, был выделен из образца лиственной подстилки, собранной вблизи Ла Платы, Аргентина.
Bz - бензил;
iPr - изопропил;
nPr - н-пропил;
HBa - модифицированная 2-гидроксимасляная кислота;
TFA - трифторуксусная кислота;
THF - тетрагидрофуран;
db - двойная связь;
sb - одинарная связь;
br - широкий;
d - дуплет;
m - мультиплет;
q - квартет;
t - триплет;
Пример 1. Описание штамма F/92-4471/08 (NRRL 21123)
Грибной штамм NRRL 21123, продуцирующий соединения A и B, был выделен из образца лиственной подстилки, собранной вблизи Ла Платы, Аргентина.
В процессе роста на солодовой Среде А (2% экстракта солода, 0,4% дрожжевого экстракта, 2% агара в деионизированной воде) штамм NRRL 21123 образует после 3 дней инкубации при 27oC колонии диаметром от 25 до 35 мм. Колонии обычно дают короткий воздушный мицелий от белой до серой или серовато-коричневой окраски.
На основании измерения диаметра колоний на Среде А можно сказать, что оптимальной для роста является температура от 21 до 30oC, минимальной - температура от 0 до 6oC и максимальной - от 33 до 38oC. По истечении 4 дней инкубации при температуре от 21 до 33oC наблюдается образование спор.
Грибной штамм NRRL 21123 образует гиалин для светло-коричневых конидий на фиалидных или аннелидных конидиогенных клетках, внутри хорошо различимой пикниды. Конидии, как правило, состоят из пяти клеток, имеют цилиндрическую форму, обычно слегка изогнуты и в большинстве случаев имеют размеры 24-26 х 2,6-4 мкм. Каждая конидия несет на одном конце единичный неразветвленный гиалиновый отросток, а на другой концевой клетке от 2 до 4 (обычно 3) гиалиновых и неразветвленных отростков.
На основании этих морфологических характеристик и следуя правилам идентификации [B. C. Sutton (1960): The Coelomycetes (публикация Commonwealth Mycological Institude, Surrey, England)], штамм NRRL 21123 может быть приписан к роду Bartalinia Tassi.
Пример 2. Ферментация
Штамм NRRL 21123 выращивают в течение 15 дней при температуре 21oC на косяке агара, содержащем Среду А (2% экстракта солода, 0,4% дрожжевого экстракта, 2% агара, деионизированная вода). Конидии с одного косяка суспендируют в 10 мл стерильной водопроводной воды. Суспензией конидий (по 1 мл) инокулируют каждую из двух колб Эрленмейера вместимостью 500 мл, содержащих по 200 мл Среды Б (2% экстракта солода, 0,4% дрожжевого экстракта в деионизированной воде). Для получения затравочной культуры колбы инкубируют в течение 6 дней при температуре 21oC на ротационном шейкере при 200 об/мин. Затравочной культурой (по 2 мл) инокулируют каждую из 200 колб Эрленмейера вместимостью 500 мл, содержащих по 200 мл Среды В (2,2% моногидрата мальтозы, 0,72% дрожжевого экстракта в деионизованной воде). Колбы инкубируют при температуре 21oC на ротационном шейкере при 200 об/мин и полученную через 6 дней клеточную культуру объединяют для дальнейшей обработки.
Штамм NRRL 21123 выращивают в течение 15 дней при температуре 21oC на косяке агара, содержащем Среду А (2% экстракта солода, 0,4% дрожжевого экстракта, 2% агара, деионизированная вода). Конидии с одного косяка суспендируют в 10 мл стерильной водопроводной воды. Суспензией конидий (по 1 мл) инокулируют каждую из двух колб Эрленмейера вместимостью 500 мл, содержащих по 200 мл Среды Б (2% экстракта солода, 0,4% дрожжевого экстракта в деионизированной воде). Для получения затравочной культуры колбы инкубируют в течение 6 дней при температуре 21oC на ротационном шейкере при 200 об/мин. Затравочной культурой (по 2 мл) инокулируют каждую из 200 колб Эрленмейера вместимостью 500 мл, содержащих по 200 мл Среды В (2,2% моногидрата мальтозы, 0,72% дрожжевого экстракта в деионизованной воде). Колбы инкубируют при температуре 21oC на ротационном шейкере при 200 об/мин и полученную через 6 дней клеточную культуру объединяют для дальнейшей обработки.
Пример 3. Выделение метаболитов, соединений A и B
50 л глубинной культуры штамма NRRL 21123, выращенного, как описано в примере 2, фильтруют, используя в качестве ускорителя фильтрования Clarcel. Собранный влажный мицелий экстрагируют смесью метанол-ацетон (1:1) (3 х 15 л). Объединенные экстракты концентрируют в вакууме на циркуляционном испарителе до остаточного объема жидкости приблизительно 3 л, который экстрагирует (4 х 1 л) этилацетатом. Этилацетатные экстракты объединяют и концентрируют в вакууме до получения 25 г маслянистого остатка, который затем фракционируют трехкратным распределением в системе растворителей: 90% водный метанол и гексан, получая после концентрирования в вакууме в виде нижней фазы 4,5 г неочищенного твердого материала. Полученный материал наносят на колонку с силикагелем (Мерк, Кизельгель 60, 40-63 мкм) размером 5,5 см внутр. диам. х 38 см и хроматографируют, элюируя сначала 1,4 л смеси растворителей метил-трет-бутиловый эфир/метанол (98: 2), затем 1 л той же смеси растворителей, взятых в отношении 95:5. Скорость подачи растворителя поддерживают равной 110 мл/мин. Отбирают фракции объемом 90 мл каждая, проявляющие ингибирующую активность в отношении ICAM-1-экспрессии (пример 4) и содержащие или соединение A (N 9-10) или соединение B (N 11-25).
50 л глубинной культуры штамма NRRL 21123, выращенного, как описано в примере 2, фильтруют, используя в качестве ускорителя фильтрования Clarcel. Собранный влажный мицелий экстрагируют смесью метанол-ацетон (1:1) (3 х 15 л). Объединенные экстракты концентрируют в вакууме на циркуляционном испарителе до остаточного объема жидкости приблизительно 3 л, который экстрагирует (4 х 1 л) этилацетатом. Этилацетатные экстракты объединяют и концентрируют в вакууме до получения 25 г маслянистого остатка, который затем фракционируют трехкратным распределением в системе растворителей: 90% водный метанол и гексан, получая после концентрирования в вакууме в виде нижней фазы 4,5 г неочищенного твердого материала. Полученный материал наносят на колонку с силикагелем (Мерк, Кизельгель 60, 40-63 мкм) размером 5,5 см внутр. диам. х 38 см и хроматографируют, элюируя сначала 1,4 л смеси растворителей метил-трет-бутиловый эфир/метанол (98: 2), затем 1 л той же смеси растворителей, взятых в отношении 95:5. Скорость подачи растворителя поддерживают равной 110 мл/мин. Отбирают фракции объемом 90 мл каждая, проявляющие ингибирующую активность в отношении ICAM-1-экспрессии (пример 4) и содержащие или соединение A (N 9-10) или соединение B (N 11-25).
Соединение A
Объединенные фракции 9-10, полученные, как описано выше, в результате хроматографирования на силикагеле, упаривают в вакууме, получая 1 г неочищенного материала. Далее его очищают с помощью препаративной ЖХВД, используя колонку фирмы Мерк (50 мм внутр. диам. х 250 мм) с носителем LiChrosper RP-18 (7 мкм). Элюирование осуществляют линейным градиентом метанола в воде (80-100%) в течение 60 мин при скорости потока 25 мл/мин. В процессе хроматографирования осуществляют детектирование на длине волны 220 нм и собирают фракции объемом 25 мл. На основании данных по поглощению в УФ, ТСХ и биологической активности отбирают фракции 56-62, объединяют и концентрируют в вакууме, получая 0,6 г остатка. Окончательную очистку осуществляют с помощью хроматографии на Сефадексе LH-20 с использованием колонки размерами 2,7 см внутр. диам. х 86 см и элюируя метанолом. Элюированные фракции, содержащие по данным ТСХ соединение A в очищенном виде, объединяют и упаривают досуха в вакууме, получая 580 мг бесцветного порошка. Свойства соединения A приведены ниже в таблице 1.
Объединенные фракции 9-10, полученные, как описано выше, в результате хроматографирования на силикагеле, упаривают в вакууме, получая 1 г неочищенного материала. Далее его очищают с помощью препаративной ЖХВД, используя колонку фирмы Мерк (50 мм внутр. диам. х 250 мм) с носителем LiChrosper RP-18 (7 мкм). Элюирование осуществляют линейным градиентом метанола в воде (80-100%) в течение 60 мин при скорости потока 25 мл/мин. В процессе хроматографирования осуществляют детектирование на длине волны 220 нм и собирают фракции объемом 25 мл. На основании данных по поглощению в УФ, ТСХ и биологической активности отбирают фракции 56-62, объединяют и концентрируют в вакууме, получая 0,6 г остатка. Окончательную очистку осуществляют с помощью хроматографии на Сефадексе LH-20 с использованием колонки размерами 2,7 см внутр. диам. х 86 см и элюируя метанолом. Элюированные фракции, содержащие по данным ТСХ соединение A в очищенном виде, объединяют и упаривают досуха в вакууме, получая 580 мг бесцветного порошка. Свойства соединения A приведены ниже в таблице 1.
Соединение B
Объединенные фракции 11-25 дают после упаривания растворителя в вакууме 2 г неочищенного материала, который далее очищают препаративной ЖХВД, используя колонку фирмы Мерк (50 мм внутр. диам. х 250 мм) с носителем LiChrosper RP-18 (7 мкм). Элюирование осуществляют линейным градиентом метанола в воде (80-100%) в течение 60 мин при скорости потока 25 мл/мин. В процессе хроматографирования осуществляют детектирование на длине волны 220 нм и собирают фракции объемом 25 мл. Фракции 47-55 содержат основную часть соединения B по данным поглощения в УФ, ТСХ и биологической активности. Их объединяют и концентрируют в вакууме, получая 0,4 г остатка. Дальнейшую очистку осуществляют с помощью хроматографии на Сефадексе LH-20 на колонке размерами 2,7 см внутр. диам. х 86 см с элюированием метанолом. В процессе хроматографии осуществляют детектирование на длине волны 220 нм и собирают фракции объемом 12 мл. На основании данных по поглощению в УФ, ТСХ и биологической активности фракции 23-27 объединяют и упаривают в вакууме, получая 0,3 г остатка. Окончательный этап хроматографической очистки с использованием колонки (2,2 см внутр. диам. х 16 см), заполненной Кизельгелем 60, 40-63 мкм фирмы Мерк, с элюированием системой растворителей толуол-этанол (95:5) дает чистое по данным ТСХ соединение B. Полученные фракции объединяют и упаривают досуха в вакууме, получая 145 мг бесцветного порошка. Свойства соединения B также приведены ниже в таблице 1.
Объединенные фракции 11-25 дают после упаривания растворителя в вакууме 2 г неочищенного материала, который далее очищают препаративной ЖХВД, используя колонку фирмы Мерк (50 мм внутр. диам. х 250 мм) с носителем LiChrosper RP-18 (7 мкм). Элюирование осуществляют линейным градиентом метанола в воде (80-100%) в течение 60 мин при скорости потока 25 мл/мин. В процессе хроматографирования осуществляют детектирование на длине волны 220 нм и собирают фракции объемом 25 мл. Фракции 47-55 содержат основную часть соединения B по данным поглощения в УФ, ТСХ и биологической активности. Их объединяют и концентрируют в вакууме, получая 0,4 г остатка. Дальнейшую очистку осуществляют с помощью хроматографии на Сефадексе LH-20 на колонке размерами 2,7 см внутр. диам. х 86 см с элюированием метанолом. В процессе хроматографии осуществляют детектирование на длине волны 220 нм и собирают фракции объемом 12 мл. На основании данных по поглощению в УФ, ТСХ и биологической активности фракции 23-27 объединяют и упаривают в вакууме, получая 0,3 г остатка. Окончательный этап хроматографической очистки с использованием колонки (2,2 см внутр. диам. х 16 см), заполненной Кизельгелем 60, 40-63 мкм фирмы Мерк, с элюированием системой растворителей толуол-этанол (95:5) дает чистое по данным ТСХ соединение B. Полученные фракции объединяют и упаривают досуха в вакууме, получая 145 мг бесцветного порошка. Свойства соединения B также приведены ниже в таблице 1.
В таблице 1 даны ссылки на фиг. 1-7.
Пример 4. Соединение формулы I
(A = A', R6 = COOCH3, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К смеси, состоящей из 2 г соединения A и 1,65 мл метанола, добавляют холодный раствор HCl в эфире (30 мл, 17% вес/объем, -20oC) и полученную смесь выдерживают в течение 3 дней при -20oC. После этого реакционную смесь выливают в водный бикарбонатный раствор и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт растворяют в 30 мл смеси метанол/конц. водн. HCl (9/1) и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Далее раствор разбавляют водой и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме. Неочищенную реакционную смесь очищают при помощи хроматографии с обратимой фазой на LiChroprep RP-8 (градиент: метанол/вода = от 8/2 до 10/0) и последующей хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 95/5), получая указанное в заголовке соединение в виде бесцветной пены и производное соединения формулы IV с незамкнутой цепью (R6 = 15 COOCH3, R7 = CH3) в виде бесцветного твердого вещества.
(A = A', R6 = COOCH3, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К смеси, состоящей из 2 г соединения A и 1,65 мл метанола, добавляют холодный раствор HCl в эфире (30 мл, 17% вес/объем, -20oC) и полученную смесь выдерживают в течение 3 дней при -20oC. После этого реакционную смесь выливают в водный бикарбонатный раствор и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт растворяют в 30 мл смеси метанол/конц. водн. HCl (9/1) и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Далее раствор разбавляют водой и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме. Неочищенную реакционную смесь очищают при помощи хроматографии с обратимой фазой на LiChroprep RP-8 (градиент: метанол/вода = от 8/2 до 10/0) и последующей хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 95/5), получая указанное в заголовке соединение в виде бесцветной пены и производное соединения формулы IV с незамкнутой цепью (R6 = 15 COOCH3, R7 = CH3) в виде бесцветного твердого вещества.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,41 (указанное в заголовке соединение), Rf = 0,38 (производное с незамкнутой цепью); хроматография с обратимой фазой на RP-8, метанол/вода/трифторуксусная кислота = 95/4/1, Rf = 0,34 (указанное в заголовке соединение), Rf = 0,51 (производное с незамкнутой цепью).
Пример 5. Соединение формулы I
(A = A', R6 = COOH, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 209 мг соединения формулы I из примера 4 в 15 мл смеси трет-бутанол/конц. водн. HCl (9/1), нагревают при 60oC в течение 8 часов. Реакционную смесь выливают в насыщенный водный бикарбонатный раствор и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают буферным раствором pH 7, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 95/5), получая указанное в заголовке соединение в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = COOH, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 209 мг соединения формулы I из примера 4 в 15 мл смеси трет-бутанол/конц. водн. HCl (9/1), нагревают при 60oC в течение 8 часов. Реакционную смесь выливают в насыщенный водный бикарбонатный раствор и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают буферным раствором pH 7, высушивают над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 95/5), получая указанное в заголовке соединение в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,25; хроматография с обратимой фазой на RP-8, метанол/вода = 92/8, Rf = 0,34.
Пример 6. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CO•NH•CH3, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К охлажденному до 0oC раствору, содержащему 10 мг соединения из примера 5 в 0,5 мл дихлорметана, добавляют 50 мкл тионилхлорида. Реакционную смесь выдерживают при 0oC в течение 1,5 часов, после чего упаривают в вакууме при 0oC. Оставшееся масло желтого цвета растворяют в 1 мл дихлорметана при 0oC и к нему добавляют 100 мкл 40% водного раствора метиламина. Через 45 минут реакционную смесь выливают в 0,1 М водный HCl, экстрагируют этилацетатом и распределяют между этилацетатом и насыщенным водным бикарбонатным раствором. Органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/этилацетат/метанол = от 100/0/0 до 65/25/10), получая указанное в заголовке соединение в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CO•NH•CH3, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К охлажденному до 0oC раствору, содержащему 10 мг соединения из примера 5 в 0,5 мл дихлорметана, добавляют 50 мкл тионилхлорида. Реакционную смесь выдерживают при 0oC в течение 1,5 часов, после чего упаривают в вакууме при 0oC. Оставшееся масло желтого цвета растворяют в 1 мл дихлорметана при 0oC и к нему добавляют 100 мкл 40% водного раствора метиламина. Через 45 минут реакционную смесь выливают в 0,1 М водный HCl, экстрагируют этилацетатом и распределяют между этилацетатом и насыщенным водным бикарбонатным раствором. Органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/этилацетат/метанол = от 100/0/0 до 65/25/10), получая указанное в заголовке соединение в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,25; хроматография с обратимой фазой на RP-8, метанол/вода = 95/5, Rf = 0,33.
Аналогично тому, как описано в примере 6, получают соединения формулы I (A = A', B = B', C = C', X = X', Y = Y' и R1 = CH3), представленные в табл. А.
Пример 13. Соединение формулы I
(A = A', R6 = COO-iPr, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К охлажденному до 0oC раствору, содержащему 15 мг соединения из примера 5 в 0,75 мл дихлорметана, добавляют 75 мкл тионилхлорида. Реакционную смесь выдерживают при 0oC в течение 2 часов, после чего упаривают в вакууме при 0oC. Оставшееся масло желтого цвета растворяют в 1 мл дихлорметана при 0oC и к нему добавляют 30 мкл изопропанола. По истечении 3 часов при 0oC реакционную смесь выливают в 0,1 М водный HCl и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 95/5), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = COO-iPr, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К охлажденному до 0oC раствору, содержащему 15 мг соединения из примера 5 в 0,75 мл дихлорметана, добавляют 75 мкл тионилхлорида. Реакционную смесь выдерживают при 0oC в течение 2 часов, после чего упаривают в вакууме при 0oC. Оставшееся масло желтого цвета растворяют в 1 мл дихлорметана при 0oC и к нему добавляют 30 мкл изопропанола. По истечении 3 часов при 0oC реакционную смесь выливают в 0,1 М водный HCl и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 95/5), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,47; хроматография с обратимой фазой на RP-8, метанол/вода = 95/5, Rf = 0,37.
Аналогично тому, как описано в примере 9, получают соединения формулы I (A = A', B = B', C = C', X = X', Y = Y' и R1 = CH3), представленные в табл. Б.
Пример 16. Соединение формулы I
(A = A', R6 = COCH3, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор 200 мг соединения A в 2 мл добавляют к раствору метильного производного реактива Гриньяра (2 ммоля в 5 мл эфира) и перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. После этого добавляют дополнительные 2 ммоля MeMgJ в эфире и опять перемешивают 24 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь выливают в 0,1 М раствор HCl и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают раствором бикарбоната натрия и солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенную реакционную смесь очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/этилацетат/метанол = от 100/0/0 до 68/27/5), получая как указанное в заголовке вещество, так и значительное количество исходного соединения.
(A = A', R6 = COCH3, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор 200 мг соединения A в 2 мл добавляют к раствору метильного производного реактива Гриньяра (2 ммоля в 5 мл эфира) и перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. После этого добавляют дополнительные 2 ммоля MeMgJ в эфире и опять перемешивают 24 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь выливают в 0,1 М раствор HCl и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают раствором бикарбоната натрия и солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенную реакционную смесь очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/этилацетат/метанол = от 100/0/0 до 68/27/5), получая как указанное в заголовке вещество, так и значительное количество исходного соединения.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,30.
Пример 17. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CH2OH, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
0,5 мл 2 М раствора борандиметилсульфидного комплекса добавляют при комнатной температуре к раствору, содержащему 27 мг соединения из примера 5 в 2 мл тетрагидрофурана. Реакционную смесь перемешивают в течение 2,5 часов, выливают в 0,1 М HCl и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают фосфатным буферным раствором (pH 7), высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный материал очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 95/5), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CH2OH, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
0,5 мл 2 М раствора борандиметилсульфидного комплекса добавляют при комнатной температуре к раствору, содержащему 27 мг соединения из примера 5 в 2 мл тетрагидрофурана. Реакционную смесь перемешивают в течение 2,5 часов, выливают в 0,1 М HCl и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают фосфатным буферным раствором (pH 7), высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный материал очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 95/5), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,27; хроматография с обратимой фазой на RP-8, метанол/вода = 92/8, исходное соединение не отделяется.
Пример 18. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CN, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = H, двойная связь, X = X', Y = Y')
18 мг палладия на активированном угле (10%) добавляют к раствору, содержащему 53 мг соединения A и 66 мг ацетата натрия в 4 мл уксусного ангидрида. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 20 часов (50% конверсия по данным ТСХ), выливают в водный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу высушивают над сульфатом натрия и упаривают в глубоком вакууме. Неочищенный материал очищают при помощи хроматографии с обратимой фазой на носителе RP-8 (градиент: метанол/воды = от 80/20 до 100/0), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CN, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = H, двойная связь, X = X', Y = Y')
18 мг палладия на активированном угле (10%) добавляют к раствору, содержащему 53 мг соединения A и 66 мг ацетата натрия в 4 мл уксусного ангидрида. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 20 часов (50% конверсия по данным ТСХ), выливают в водный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу высушивают над сульфатом натрия и упаривают в глубоком вакууме. Неочищенный материал очищают при помощи хроматографии с обратимой фазой на носителе RP-8 (градиент: метанол/воды = от 80/20 до 100/0), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,33; хроматография с обратимой фазой на RP-8, метанол/вода = 92/8, Rf = 0,50 (исходное соединение Rf = 0,44).
Пример 19. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CHO, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К раствору, содержащему 50 мг соединения из примера 17 в 4 мл дихлорметана, добавляют 35 мг периодированный реагент Десс-Марбина (1,1,1-трис(ацетилокси)-1,1-дигидро-1,2-бенздиоксол-3-(1H)-он) и суспензию перемешивают при 20oC в течение 3 часов. После этого неочищенную " реакционную смесь наносят на силикагель и элюируют этилацетатом. Фракции, содержащие продукт, объединяют, упаривают в вакууме и очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 95/5), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CHO, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К раствору, содержащему 50 мг соединения из примера 17 в 4 мл дихлорметана, добавляют 35 мг периодированный реагент Десс-Марбина (1,1,1-трис(ацетилокси)-1,1-дигидро-1,2-бенздиоксол-3-(1H)-он) и суспензию перемешивают при 20oC в течение 3 часов. После этого неочищенную " реакционную смесь наносят на силикагель и элюируют этилацетатом. Фракции, содержащие продукт, объединяют, упаривают в вакууме и очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 95/5), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
Пример 20. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CH=CH2, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор метильного реагента Виттинга, полученный путем перемешивания 15 метилтрифенилфосфонийбромида и амида натрия в сухом THF, медленно добавляют при температуре 20oC к раствору, содержащему 24,7 мг соединения из примера 19 в сухом THF до тех пор, пока сохраняется желтая окраска реагента. После этого реакционную смесь выливают в 0,1 М соляную кислоту и экстрагируют этилацетатом. Органический экстракт упаривают в вакууме и оставшийся после упаривания неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 97/3), получая указанное в заголовке соединение в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CH=CH2, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор метильного реагента Виттинга, полученный путем перемешивания 15 метилтрифенилфосфонийбромида и амида натрия в сухом THF, медленно добавляют при температуре 20oC к раствору, содержащему 24,7 мг соединения из примера 19 в сухом THF до тех пор, пока сохраняется желтая окраска реагента. После этого реакционную смесь выливают в 0,1 М соляную кислоту и экстрагируют этилацетатом. Органический экстракт упаривают в вакууме и оставшийся после упаривания неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 97/3), получая указанное в заголовке соединение в виде бесцветной пены.
Пример 21. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CH=CH-C2H5, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Указанное в заголовке соединение получают аналогично тому, как описано в примере 20.
(A = A', R6 = CH=CH-C2H5, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Указанное в заголовке соединение получают аналогично тому, как описано в примере 20.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,44.
Пример 22. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CH2N3, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К раствору, содержащему 30 мг соединения из примера 17 и 12 мг трифенилфосфина в 3 мл сухого THF, добавляют 150 мкл 0,38 М раствора азотисто-водородной кислоты в толуоле. К раствору до исчезновения желтой окраски добавляют при комнатной температуре диэтилазобикарбоксилат и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 минут. Неочищенную реакционную смесь наносят на 5 г нейтрального оксида алюминия и элюируют этилацетатом. Фракции, содержащие продукт, упаривают в вакууме и очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 99,5/0,5 до 95/5), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CH2N3, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К раствору, содержащему 30 мг соединения из примера 17 и 12 мг трифенилфосфина в 3 мл сухого THF, добавляют 150 мкл 0,38 М раствора азотисто-водородной кислоты в толуоле. К раствору до исчезновения желтой окраски добавляют при комнатной температуре диэтилазобикарбоксилат и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 минут. Неочищенную реакционную смесь наносят на 5 г нейтрального оксида алюминия и элюируют этилацетатом. Фракции, содержащие продукт, упаривают в вакууме и очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 99,5/0,5 до 95/5), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,46; хроматография с обратимой фазой на RP-8, метанол/вода/TFA = 95/4/1, Rf = 0,41.
Пример 23. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CH2•NH2, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 20 мг соединения из примера 22 в 2 мл метанола, перемешивают в атмосфере водорода с 4 мг палладия на угле (10%) в течение 20 часов. Катализатор удаляют фильтрованием и реакционную смесь упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии с обратимой фазой на RP-8 (градиент: метанол/0,5% водн. TFA = от 80/20 до 100/0), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CH2•NH2, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 20 мг соединения из примера 22 в 2 мл метанола, перемешивают в атмосфере водорода с 4 мг палладия на угле (10%) в течение 20 часов. Катализатор удаляют фильтрованием и реакционную смесь упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии с обратимой фазой на RP-8 (градиент: метанол/0,5% водн. TFA = от 80/20 до 100/0), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
ТСХ: с обратимой фазой на RP-8, метанол/вода/TFA = 95/4/1, Rf = 0,69.
Пример 24. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CH= CBr2, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 225 мг соединения из примера 19 в 2,5 мл дихлорметана, добавляют к смеси, состоящей из 30 мг цинкового порошка, 120 мг трифенилфосфина и 150 мг тетрабромметана, и перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре. После этого смесь наносят на 5 г оксида алюминия и элюируют этилацетатом. Фракции, содержащие продукт, упаривают в вакууме и очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 99,5/0,5 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной твердой пены.
(A = A', R6 = CH= CBr2, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 225 мг соединения из примера 19 в 2,5 мл дихлорметана, добавляют к смеси, состоящей из 30 мг цинкового порошка, 120 мг трифенилфосфина и 150 мг тетрабромметана, и перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре. После этого смесь наносят на 5 г оксида алюминия и элюируют этилацетатом. Фракции, содержащие продукт, упаривают в вакууме и очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 99,5/0,5 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной твердой пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,27.
Пример 25. Соединение формулы I
(A = A', R6 = C≡CH, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор н-бутиллития в гексане (3 моль-эквивалента) добавляют при температуре -78oC в течение 2 часов к 50 мг соединения из примера 24. Реакционную смесь выливают в 0,1 М водный HCl и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают бикарбонатным и солевым растворами и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 99,5/0,5 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной твердой пены.
(A = A', R6 = C≡CH, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор н-бутиллития в гексане (3 моль-эквивалента) добавляют при температуре -78oC в течение 2 часов к 50 мг соединения из примера 24. Реакционную смесь выливают в 0,1 М водный HCl и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают бикарбонатным и солевым растворами и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 99,5/0,5 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной твердой пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,44.
Пример 26. Соединение формулы I
(A = A'. R6 = C= CH-CN, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 30 мг соединения из примера 19 и 270 мг цианометилентрифенилфосфорана в 5 мл толуола, перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. После этого неочищенную реакционную смесь фильтруют через нейтральный оксид алюминия и элюируют этилацетатом. Фракции, содержащие продукт, объединяют и упаривают в вакууме. Указанное в заголовке соединение представляет собой смесь E/Z изомеров.
(A = A'. R6 = C= CH-CN, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 30 мг соединения из примера 19 и 270 мг цианометилентрифенилфосфорана в 5 мл толуола, перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. После этого неочищенную реакционную смесь фильтруют через нейтральный оксид алюминия и элюируют этилацетатом. Фракции, содержащие продукт, объединяют и упаривают в вакууме. Указанное в заголовке соединение представляет собой смесь E/Z изомеров.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,39.
Пример 27. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CH2Cl, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 20 мг соединения из примера 17 в 1 мл толуола, добавляют к раствору 10 мг дихлортрифенилфосфорана в 1 мл толуола и перемешивают при температуре 60oC. Через 2 часа в реакционную смесь вносят дополнительные 35 мг дихлортрифенилфосфина. По истечении 1 часа реакционную смесь фильтруют через нейтральный оксид алюминия и элюируют этилацетатом. Фракции, содержащие продукт, упаривают и неочищенный материал очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной твердой пены.
(A = A', R6 = CH2Cl, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 20 мг соединения из примера 17 в 1 мл толуола, добавляют к раствору 10 мг дихлортрифенилфосфорана в 1 мл толуола и перемешивают при температуре 60oC. Через 2 часа в реакционную смесь вносят дополнительные 35 мг дихлортрифенилфосфина. По истечении 1 часа реакционную смесь фильтруют через нейтральный оксид алюминия и элюируют этилацетатом. Фракции, содержащие продукт, упаривают и неочищенный материал очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной твердой пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,34.
Пример 28. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CH2•O•CH3, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 34 мг соединения из примера 17 в 6 мл дихлорметана и 100 мг силикагеля, обрабатывают эфирным раствором диазометана до тех пор, пока не прореагирует весь исходный материал. Для удаления образующегося в ходе реакции смесь полиметилена фильтруют, упаривают и добавляют к ней свежие порции дихлорметана и силикагеля. После окончательного упаривания в вакууме неочищенный материал очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 99,7/0,3 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной твердой пены.
(A = A', R6 = CH2•O•CH3, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 34 мг соединения из примера 17 в 6 мл дихлорметана и 100 мг силикагеля, обрабатывают эфирным раствором диазометана до тех пор, пока не прореагирует весь исходный материал. Для удаления образующегося в ходе реакции смесь полиметилена фильтруют, упаривают и добавляют к ней свежие порции дихлорметана и силикагеля. После окончательного упаривания в вакууме неочищенный материал очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 99,7/0,3 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной твердой пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,34.
Пример 29. Соединение формулы I
(A = A', , B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 13 мг соединения из примера 20 и 2,8 мг ацетата палладия в 2,5 мл дихлорметана, обрабатывают при комнатной температуре эфирным раствором диазометана до тех пор, пока не прореагирует весь исходный материал. Неочищенную реакционную смесь фильтруют через силикагель и элюируют смесью толуол/метанол. Фракции, содержащие продукт, упаривают и неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 99,5/0,5 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной твердой пены.
(A = A', , B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 13 мг соединения из примера 20 и 2,8 мг ацетата палладия в 2,5 мл дихлорметана, обрабатывают при комнатной температуре эфирным раствором диазометана до тех пор, пока не прореагирует весь исходный материал. Неочищенную реакционную смесь фильтруют через силикагель и элюируют смесью толуол/метанол. Фракции, содержащие продукт, упаривают и неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 99,5/0,5 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной твердой пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,38; хроматография с обратимой фазой RP-8, метанол/фосфатный буфер pH 7 = 92/8, Rf = 0,27.
Пример 30. Соединение формулы I
(A = A', R6 = COO•CH(C6H5)2, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 8,2 мг соединения из примера 5 и 3,1 мг дифенилдиазометана в 0,5 мл толуола, нагревают при 60oC в течение 3 часов. Далее раствор непосредственно очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной твердой пены.
(A = A', R6 = COO•CH(C6H5)2, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 8,2 мг соединения из примера 5 и 3,1 мг дифенилдиазометана в 0,5 мл толуола, нагревают при 60oC в течение 3 часов. Далее раствор непосредственно очищают хроматографией на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной твердой пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,46.
Пример 31. Соединение формулы I
(A = A', , B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 50 мг вещества A в 1 мл диметилформамида, нагревают с 125 мг хлорида трибутилтия и 25 мг азида натрия при температуре 100oC в течение 8 дней. Затем смесь выливают в 1 М водный HCl, экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0,25 до 100/2,5), получая указанное в заголовке 25 вещество в виде бесцветной пены.
(A = A', , B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 50 мг вещества A в 1 мл диметилформамида, нагревают с 125 мг хлорида трибутилтия и 25 мг азида натрия при температуре 100oC в течение 8 дней. Затем смесь выливают в 1 М водный HCl, экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0,25 до 100/2,5), получая указанное в заголовке 25 вещество в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,12; хроматография с обратимой фазой на RP-8, метанол/фосфатный буфер pH 7 = 92/8, Rf = 0,48.
Пример 32. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CN, B = B', C = C', R8 = CH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 20 мг соединения из примера 18 в 1 мл сухого диметилформамида, перемешивают 1 мл йодметана, после чего к нему добавляют раствор 5 мг бис(триметилсилил)амида натрия в 0,3 мл диметилформамида. После перемешивания реакционной смеси в течение 1,5 часов при комнатной температуре ее выливают в 0,1 М водный HCl, экстрагируют этилацетатом и распределяют между этилацетатом и насыщенным водным бикарбонатным раствором. Органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0,25 до 100/2,5), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CN, B = B', C = C', R8 = CH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 20 мг соединения из примера 18 в 1 мл сухого диметилформамида, перемешивают 1 мл йодметана, после чего к нему добавляют раствор 5 мг бис(триметилсилил)амида натрия в 0,3 мл диметилформамида. После перемешивания реакционной смеси в течение 1,5 часов при комнатной температуре ее выливают в 0,1 М водный HCl, экстрагируют этилацетатом и распределяют между этилацетатом и насыщенным водным бикарбонатным раствором. Органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0,25 до 100/2,5), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,43.
Аналогично тому, как описано в примере 32, получают соединения формулы I (A = A', R6 = CN, B = B', X = X', Y = Y'), представленные в табл. В.
Пример 35. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CN, B = B', C = C', R8 = CH2C(CH3)3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К раствору, содержащему 38 мг соединения из примера 18 в 2 мл уксусной кислоты и 0,2 мл пивальальдегида, добавляют 30 мкл 2 М раствора боран-диметилсульфидного комплекса в THF и смесь перемешивают 5 минут при комнатной температуре. После этого смесь выливают в бикарбонат натрия/этилацетат и к ней добавляют небольшое количество воды. Органический слой отделяют, промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Оставшееся бесцветное масло (ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол 9/1, Rf = 0,53) растворяют в 3 мл THF и к нему при комнатной температуре добавляют раствор 2,3-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохинона (DDQ) в THF (8 мг в 0,2 мл) до тех пор, пока смесь не станет темной. Смесь фильтруют через 5 г силикагеля и градиентно элюируют системой растворителей толуол/метанол = от 100/0,5 до 95/5, получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CN, B = B', C = C', R8 = CH2C(CH3)3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К раствору, содержащему 38 мг соединения из примера 18 в 2 мл уксусной кислоты и 0,2 мл пивальальдегида, добавляют 30 мкл 2 М раствора боран-диметилсульфидного комплекса в THF и смесь перемешивают 5 минут при комнатной температуре. После этого смесь выливают в бикарбонат натрия/этилацетат и к ней добавляют небольшое количество воды. Органический слой отделяют, промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Оставшееся бесцветное масло (ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол 9/1, Rf = 0,53) растворяют в 3 мл THF и к нему при комнатной температуре добавляют раствор 2,3-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохинона (DDQ) в THF (8 мг в 0,2 мл) до тех пор, пока смесь не станет темной. Смесь фильтруют через 5 г силикагеля и градиентно элюируют системой растворителей толуол/метанол = от 100/0,5 до 95/5, получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол 9/1, Rf = 0,49.
Аналогично тому, как описано в примере 35, получают соединения формулы I (A = A', R6 = CN, B = B', X = X', Y = Y'), представленные в табл. Г.
Пример 38. Соединения формулы I
(A = A', R6 = CN, V = V', C = C', R8 = H, двойная связь, X = X', Y = Y')
Гетерогенную смесь, состоящую из 25 мг соединения из примера 18, 1 мл трифторуксусной кислоты и 0,3 мл триэтилсилана, энергично перемешивают в атмосфере аргона при 4oC в течение 20 ч. Затем реакционную смесь выливают в насыщенный водный бикарбонатный раствор и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол в отношении от 100/0,5 до 100/5), получая указанные в заголовке соединения в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CN, V = V', C = C', R8 = H, двойная связь, X = X', Y = Y')
Гетерогенную смесь, состоящую из 25 мг соединения из примера 18, 1 мл трифторуксусной кислоты и 0,3 мл триэтилсилана, энергично перемешивают в атмосфере аргона при 4oC в течение 20 ч. Затем реакционную смесь выливают в насыщенный водный бикарбонатный раствор и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол в отношении от 100/0,5 до 100/5), получая указанные в заголовке соединения в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, индолин A Rf = 0,16, индолин B Rf = 0,10; хроматография с обратимой фазой на RP-8, метанол/вода/TFA = 95/4/1, индолин A + B Rf = 0,71.
Пример 39. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CN, B = B', C = C', R8 = O(CH2)2CH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К раствору, содержащему 30 мг соединения из примера 38 (смесь диастереомеров) в 1 мл метанола, добавляют 100 мг вольфрамата натрия (Na2WO4•2H2O) и 100 мкл 30% перекиси водорода. Реакционную смесь перемешивают 20 минут при комнатной температуре и затем непосредственно очищают с помощью гель-проникающей хроматографии (Сефадекс LH-20, метанол/этилацетат = 1:1). Фракции, содержащие N-гидроксииндольное промежуточное соединение, упаривают, остаток переносят в 2 мл сухого DMF, в который добавляют 2 мл пропилйодида и 7,5 мг бис(триметилсилил)амида натрия. После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 минут содержимое реакционной смеси выливают в 0,1 М соляную кислоту и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают раствором бикарбоната натрия и солевым раствором и упаривают в вакууме. Продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0,5 до 98/2) и хроматографии с обратной фазой (RP-8, градиент - водный раствор метанола в концентрации от 75 до 100%), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CN, B = B', C = C', R8 = O(CH2)2CH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
К раствору, содержащему 30 мг соединения из примера 38 (смесь диастереомеров) в 1 мл метанола, добавляют 100 мг вольфрамата натрия (Na2WO4•2H2O) и 100 мкл 30% перекиси водорода. Реакционную смесь перемешивают 20 минут при комнатной температуре и затем непосредственно очищают с помощью гель-проникающей хроматографии (Сефадекс LH-20, метанол/этилацетат = 1:1). Фракции, содержащие N-гидроксииндольное промежуточное соединение, упаривают, остаток переносят в 2 мл сухого DMF, в который добавляют 2 мл пропилйодида и 7,5 мг бис(триметилсилил)амида натрия. После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 минут содержимое реакционной смеси выливают в 0,1 М соляную кислоту и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают раствором бикарбоната натрия и солевым раствором и упаривают в вакууме. Продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0,5 до 98/2) и хроматографии с обратной фазой (RP-8, градиент - водный раствор метанола в концентрации от 75 до 100%), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 90/10, Rf = 0,51; на RP-8, метанол/фосфатный буфер pH 7 = 92/8, Rf = 0,30.
Пример 40. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CN, B = B', C = C', R8 = OC2H5, двойная связь, X = X', Y = Y')
Указанное в заголовке соединение получают аналогично тому, как описано в примере 39.
(A = A', R6 = CN, B = B', C = C', R8 = OC2H5, двойная связь, X = X', Y = Y')
Указанное в заголовке соединение получают аналогично тому, как описано в примере 39.
Пример 41. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CN, B = B', C = C', R8 = OCH3, R9 = Br, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 50 мг соединения A в 2 мл тетрахлорметана, перемешивают с 3 мг порошка железа и к нему в течение 1 часа добавляют раствор брома (10 мг) в тетрахлорметане. Неочищенную реакционную смесь выливают в водный бикарбонатный раствор и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают раствором тиосульфата натрия и солевым раствором, после чего упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 99,5/0,5 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CN, B = B', C = C', R8 = OCH3, R9 = Br, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 50 мг соединения A в 2 мл тетрахлорметана, перемешивают с 3 мг порошка железа и к нему в течение 1 часа добавляют раствор брома (10 мг) в тетрахлорметане. Неочищенную реакционную смесь выливают в водный бикарбонатный раствор и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают раствором тиосульфата натрия и солевым раствором, после чего упаривают в вакууме. Неочищенный продукт очищают при помощи хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 99,5/0,5 до 97/3), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 90/10, Rf = 0,48 хроматография с обратимой фазой; на RP-8, метанол/вода = 92/8, Rf = 0,19.
Пример 42. Соединение формулы I
(A = A', R6 = CSNH2, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 50 мг соединения A и 50 мг дифенилфосфинодитиокислоты в 4 мл изопропанола, нагревают при 60oC в течение 3 дней. Реакционную смесь охлаждают до -20oC, преципитат удаляют фильтрованием, раствор разбавляют этилацетатом и экстрагируют водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу упаривают в вакууме и неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0,5 до 96/4), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
(A = A', R6 = CSNH2, B = B', R1 = CH3, C = C', R8 = OCH3, двойная связь, X = X', Y = Y')
Раствор, содержащий 50 мг соединения A и 50 мг дифенилфосфинодитиокислоты в 4 мл изопропанола, нагревают при 60oC в течение 3 дней. Реакционную смесь охлаждают до -20oC, преципитат удаляют фильтрованием, раствор разбавляют этилацетатом и экстрагируют водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу упаривают в вакууме и неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (градиент: толуол/метанол = от 100/0,5 до 96/4), получая указанное в заголовке вещество в виде бесцветной пены.
ТСХ: на силикагеле, толуол/метанол = 9/1, Rf = 0,29.
Биологическая активность
Активность соединений по изобретению протестирована как в анализах на цитотоксичность и ингибирование экспрессии ICAM-1, VCAM-1 и E-селектина, так и в анализах на клеточную пролиферацию. Концентрации соединений, необходимые для проявления ингибирующего эффекта величиной в половину от максимального (IC50), для каждого вида анализа приведены ниже в таблице 2.
Активность соединений по изобретению протестирована как в анализах на цитотоксичность и ингибирование экспрессии ICAM-1, VCAM-1 и E-селектина, так и в анализах на клеточную пролиферацию. Концентрации соединений, необходимые для проявления ингибирующего эффекта величиной в половину от максимального (IC50), для каждого вида анализа приведены ниже в таблице 2.
Анализы проводили следующим образом:
в обоих видах анализов, как на клеточную пролиферацию, так и в ELISA-анализе на ICAM-1, использовали HaCaT-клетки - спонтанно трансформированную, неопухолеродную клеточную линию человеческих кератиноцитов с высококонсервативными характеристиками фенотипической дифференциации нормальных кератиноцитов [(BouKamp et al., 1988, J. Cell. Biol. 106, 761-771)].
в обоих видах анализов, как на клеточную пролиферацию, так и в ELISA-анализе на ICAM-1, использовали HaCaT-клетки - спонтанно трансформированную, неопухолеродную клеточную линию человеческих кератиноцитов с высококонсервативными характеристиками фенотипической дифференциации нормальных кератиноцитов [(BouKamp et al., 1988, J. Cell. Biol. 106, 761-771)].
А. Клеточный ELISA-анализ на ICAM-1
I. Клеточный ELISA-анализ на ICAM-1 кератиноцитов
Клеточный ELISA-анализ на ICAM-1 используется для установления ингибирования экспрессии ICAM-1 в значительной степени так же, как описано в работе [WinisKi and Foster (1992, J. Inverst, Dermatol., 99, 48-52)]. HaCaT-клетки высевают в 96-луночные планшеты для микротитрования (2 • 104 клеток на лунку в культуральной среде следующего состава: DMEM с 5% FSC, 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ глутамина, 1 мМ пирувата натрия), выращивают до слияния, после чего инкубируют в течение приблизительно 24 часов в свежей тест-среде (такая же, как культуральная, но с 0,5% FSC вместо 5%) в присутствии и отсутствие стимулирующей среды с IFN-γ/TFN-α (тест-среда, содержащая 1000 ед/мл IFN-γ/3 нг/мл TNF-α) в обоих случаях в присутствии и отсутствии соединения A и B. После этого 1 еще раз смывают культуральную среду и клеточные монослои фиксируют 1% параформальдегидом. Монослои инкубируют с насыщающими количествами первичных (моноклональных мышиных антиICAM-1) и вторичных (козьих, антимышиных, конъюгированных с пероксидазой) антител. В последующей пероксидазной реакции с использованием 3-амино-9-этилкарбазола (AEC) в качестве субстрата образуется нерастворимый окрашенный продукт, содержание которого легко измеряется с помощью стандартной техники для прочтения планшетов.
I. Клеточный ELISA-анализ на ICAM-1 кератиноцитов
Клеточный ELISA-анализ на ICAM-1 используется для установления ингибирования экспрессии ICAM-1 в значительной степени так же, как описано в работе [WinisKi and Foster (1992, J. Inverst, Dermatol., 99, 48-52)]. HaCaT-клетки высевают в 96-луночные планшеты для микротитрования (2 • 104 клеток на лунку в культуральной среде следующего состава: DMEM с 5% FSC, 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 2 мМ глутамина, 1 мМ пирувата натрия), выращивают до слияния, после чего инкубируют в течение приблизительно 24 часов в свежей тест-среде (такая же, как культуральная, но с 0,5% FSC вместо 5%) в присутствии и отсутствие стимулирующей среды с IFN-γ/TFN-α (тест-среда, содержащая 1000 ед/мл IFN-γ/3 нг/мл TNF-α) в обоих случаях в присутствии и отсутствии соединения A и B. После этого 1 еще раз смывают культуральную среду и клеточные монослои фиксируют 1% параформальдегидом. Монослои инкубируют с насыщающими количествами первичных (моноклональных мышиных антиICAM-1) и вторичных (козьих, антимышиных, конъюгированных с пероксидазой) антител. В последующей пероксидазной реакции с использованием 3-амино-9-этилкарбазола (AEC) в качестве субстрата образуется нерастворимый окрашенный продукт, содержание которого легко измеряется с помощью стандартной техники для прочтения планшетов.
II. Степень цитотоксичности
По завершении реакции детектирования ICAM-1 с помощью AEC монослои HaCaT-клеток прополаскивают PBS (200 мкл), PBS убирают из планшетов, которые далее подсушивают встряхиванием над бумажным полотенцем. Нижние поверхности планшетов аккуратно протирают сначала влажной салфеткой для ухода за лицом, затем сухой салфеткой и измеряют поглощение света при 492 нм. Перед тем, как монослои высохнут, в каждую лунку добавляют по 0,1 мл 0,1% раствора фиолетового кристаллического в PBS (предварительно профильтрованного через 0,2 мкм фильтр). Планшеты затем инкубируют при комнатной температуре в течение 10 минут, тщательно промывают 5 раз с помощью PBS, удаляют избыток жидкости тем же способом, что и ранее, и прежде чем монослои подсохнут, измеряют поглощение света при 492 нм. Разница оптических плотностей до и после окрашивания дает величины, обусловленные связыванием фиолетового кристаллического, и, следовательно, указывает на количество клеточного монослоя в лунках. Эти величины используют для коррекции данных, полученных с помощью AEC.
По завершении реакции детектирования ICAM-1 с помощью AEC монослои HaCaT-клеток прополаскивают PBS (200 мкл), PBS убирают из планшетов, которые далее подсушивают встряхиванием над бумажным полотенцем. Нижние поверхности планшетов аккуратно протирают сначала влажной салфеткой для ухода за лицом, затем сухой салфеткой и измеряют поглощение света при 492 нм. Перед тем, как монослои высохнут, в каждую лунку добавляют по 0,1 мл 0,1% раствора фиолетового кристаллического в PBS (предварительно профильтрованного через 0,2 мкм фильтр). Планшеты затем инкубируют при комнатной температуре в течение 10 минут, тщательно промывают 5 раз с помощью PBS, удаляют избыток жидкости тем же способом, что и ранее, и прежде чем монослои подсохнут, измеряют поглощение света при 492 нм. Разница оптических плотностей до и после окрашивания дает величины, обусловленные связыванием фиолетового кристаллического, и, следовательно, указывает на количество клеточного монослоя в лунках. Эти величины используют для коррекции данных, полученных с помощью AEC.
Б. Клеточный ELISA-анализ на VCAM-1, ICAM-1 и E-селектин эндотелиальных клеток
Метод основан на клеточном ELISA-анализе с использованием 96-луночных планшетов линии эндотелиальных клеток микрососудов человека (HMEC-1) и эндотелиальных клеток пуповинных вен человека (HUVEC). Клетки предварительно обрабатывают в течение четырех часов тестируемыми соединениями A и B, стимулируют в течение следующих 8-16 часов с помощью TNFα, после чего фиксируют параформальдегидом для последующей оценки экспрессии VCAM-1, ICAM-1 или E-селектина с использованием непрямой иммунопероксидазной методики окрашивания. Цитотоксические эффекты определяют подсчетом относительного числа клеток (с помощью ядерного красителя Giemsa) после выдерживания с тестируемыми веществами в сравнении с контрольными лунками (только растворитель и среда). Считается, что соединения оказывают положительный эффект, если они вызывают ингибирование VCAM-1, ICAM-1 или E-селектина ≥50% при потере клеток < 25%.
Метод основан на клеточном ELISA-анализе с использованием 96-луночных планшетов линии эндотелиальных клеток микрососудов человека (HMEC-1) и эндотелиальных клеток пуповинных вен человека (HUVEC). Клетки предварительно обрабатывают в течение четырех часов тестируемыми соединениями A и B, стимулируют в течение следующих 8-16 часов с помощью TNFα, после чего фиксируют параформальдегидом для последующей оценки экспрессии VCAM-1, ICAM-1 или E-селектина с использованием непрямой иммунопероксидазной методики окрашивания. Цитотоксические эффекты определяют подсчетом относительного числа клеток (с помощью ядерного красителя Giemsa) после выдерживания с тестируемыми веществами в сравнении с контрольными лунками (только растворитель и среда). Считается, что соединения оказывают положительный эффект, если они вызывают ингибирование VCAM-1, ICAM-1 или E-селектина ≥50% при потере клеток < 25%.
Методология
I. Клеточная линия: в анализах на ингибирование экспресси. VCAM-1 и ICAM-1 используют иммортализованную (большой T-антиген вируса SV-40) линию эндотелиальных клеток микрососудов человека (HMEC-1 [Ades et al. Irl Invest Dermatol 99: 683-690, 1992]). Данная клеточная линия конститутивно экспрессирует в небольшом количестве ICAM-1, который регулируется воспалительными медиаторами. Однако после цитокиновой стимуляции они экспрессируют только VCAM-1. Были проведены эксперименты для определения оптимальных условий индукции экспрессии VCAM-1 и ICAM-1 в зависимости от дозы и времени воздействия.
I. Клеточная линия: в анализах на ингибирование экспресси. VCAM-1 и ICAM-1 используют иммортализованную (большой T-антиген вируса SV-40) линию эндотелиальных клеток микрососудов человека (HMEC-1 [Ades et al. Irl Invest Dermatol 99: 683-690, 1992]). Данная клеточная линия конститутивно экспрессирует в небольшом количестве ICAM-1, который регулируется воспалительными медиаторами. Однако после цитокиновой стимуляции они экспрессируют только VCAM-1. Были проведены эксперименты для определения оптимальных условий индукции экспрессии VCAM-1 и ICAM-1 в зависимости от дозы и времени воздействия.
II. Условия роста: клетки HMEC-1 выращивают в T-75 колбах (Nunc) в стандартных условиях (37oC, 5% CO2) с 1,5 • 106 клеток в мл культуральной среды (CM) (CM = основная среда для эндотелиальных клеток [EBM; Clonetics], дополненная 10% FSC, 10 мг/мл человеческого EGF (Boehringr), 1 мкг/мл гидрокортизона (Sigma # 0888), 2,2 г/л NaHCO3, 15 мМ HEPES, 0,11 г/л пирувата натрия, 4 мМ глутамина, 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина). После трипсинизации в мягких условиях (0,25% трипсина с 0,1% ЭДТА в течение 8 мин) и ресуспендирования клетки пересевают каждые 2-3 дня, разделяя в отношении 1:3.
III. Клеточный ELISA-анализ на VCAM-1 и ICAM-1
Поверхность лунок плоскодонных 96-луночных планшетов для микротитрования предварительно покрывают бычьим фибронектином (FN; Sigma # F1141), после чего лунки засевают клетками (2 • 104 клеток на лунку в 200 мкл EBM-среды для роста) и инкубируют в течение ночи. На следующий день культуральную среду (CM) заменяют сначала на EBM-среду для анализа (CM с 5% FCS вместо 10%), затем на среду (180 мкл на лунку), содержащую либо (1) нужные концентрации соединения A или B, либо (2) соответствующие концентрации среды, экстрагированной растворителем/метанолом, либо (3) только одну EBM-среду для анализа, и инкубируют в течение 4 ч при температуре 37oC. Каждый из 96-луночных анализов выполняется в двух повторах. После этого клетки стимулируют, добавляя 20 мкл концентрированного раствора цитокина (2000 ед/мл TNFα), и инкубируют в течение 16 ч при температуре 37oC.
Поверхность лунок плоскодонных 96-луночных планшетов для микротитрования предварительно покрывают бычьим фибронектином (FN; Sigma # F1141), после чего лунки засевают клетками (2 • 104 клеток на лунку в 200 мкл EBM-среды для роста) и инкубируют в течение ночи. На следующий день культуральную среду (CM) заменяют сначала на EBM-среду для анализа (CM с 5% FCS вместо 10%), затем на среду (180 мкл на лунку), содержащую либо (1) нужные концентрации соединения A или B, либо (2) соответствующие концентрации среды, экстрагированной растворителем/метанолом, либо (3) только одну EBM-среду для анализа, и инкубируют в течение 4 ч при температуре 37oC. Каждый из 96-луночных анализов выполняется в двух повторах. После этого клетки стимулируют, добавляя 20 мкл концентрированного раствора цитокина (2000 ед/мл TNFα), и инкубируют в течение 16 ч при температуре 37oC.
Клеточный монослой промывают 1% параформальдегидом в EBM-среде, фиксируют 2% параформальдегидом в течение 15 мин при комнатной температуре (RT) и несколько раз прополаскивают PBS. После удаления PBS монослои инкубируют в течение 30 мин в PBS, содержащем 10% нормальной козьей сыворотки (NGS). Раствор NGS заменяют раствором моноклональных анти-VCAM-1 и анти-ICAM-1 антител (100 мкл на лунку) и инкубируют в течение ночи при 4oC. После удаления раствора моноклональных антител (mAb) клетки прополаскивают PBS с последующей инкубацией в течение 30-60 мин при RT в PBS, содержащем 10% NGS. Удаляют раствор NGS, в лунки добавляют по 100 мкл конъюгата пероксидазы хрена с козьими F(Ab')2-антителами против IgG мыши (Tago; разведение 1:500 в PBS, содержащем 5% NGS) и инкубируют в течение 1 ч при RT. По окончании инкубации удаляют вторичные антитела, клетки прополаскивают PBS, который заменяют затем на свежеприготовленный отфильтрованный раствор AEC (3-амино-9-этилкарбазол; Sigma; 150 мкл на лунку) и инкубируют в течение 45-60 мин при RT. Субстрат пероксидазы удаляют и клетки прополаскивают PBS. Далее с помощью оборудования для прочтения планшетов производят измерения поглощения света AEC при 550 нм и полученные значения корректируют с учетом "бланка" или значений сравнения, измеренных при 690 нм.
IV. Анализ на E-селектин: анализ на E-селектин проводят, используя свежевыделенные HUVEC-клетки, по существу так же, как описано для анализа на VCAM-1 и ICAM-1, за исключением более короткого периода стимуляции под действием TNFα (6-8 часов).
V. Степень цитотоксичности (учет потери клеток на основании окрашивания клеточных ядер)
Эндотелиальные клетки отмывают, заменяя на 20 мин PBS на 95% этанол (2 смены по 10 мин), с контролем под микроскопом. Вслед за этим клетки прополаскивают в дистиллированной воде (Aquadest) и монослои покрывают 33% раствором Giemsa в Aquadest на 5 минут при RT. Лунки промывают Aquadest и сушат воздухом в течение по меньшей мере 15 минут. С помощью микроскопа контролируют, чтобы окрашиванию подвергались только ядра, но не цитоплазма. Проводят измерения поглощения света при 550 нм, обусловленного связыванием красителя Giemsa и полученные значения корректируют с учетом поглощения "бланка" (ряды лунок без клеток) при 690 нм.
Эндотелиальные клетки отмывают, заменяя на 20 мин PBS на 95% этанол (2 смены по 10 мин), с контролем под микроскопом. Вслед за этим клетки прополаскивают в дистиллированной воде (Aquadest) и монослои покрывают 33% раствором Giemsa в Aquadest на 5 минут при RT. Лунки промывают Aquadest и сушат воздухом в течение по меньшей мере 15 минут. С помощью микроскопа контролируют, чтобы окрашиванию подвергались только ядра, но не цитоплазма. Проводят измерения поглощения света при 550 нм, обусловленного связыванием красителя Giemsa и полученные значения корректируют с учетом поглощения "бланка" (ряды лунок без клеток) при 690 нм.
VI. Обработка данных: результаты анализа с AEC для конститутивной экспрессии VCAM-1 или E-селектина (контрольные лунки без стимулирования) совпадают в значительной степени с результатами для изотипически парных контрольных mAb и отражают фоновую окраску. Для каждой из 96 лунок среднее значение величины конститутивной экспрессии вычитают из среднего значения соответствующей величины, полученной в анализе с AEC для стимулированной цитокином группы (как для контрольной на EBM и растворитель, так и для тестируемого вещества), в результате чего получают число, выражающее величину регулируемой в случае ICAM-1 и индуцируемой в случае VCAM-1 или E-селектина экспрессии клеточных молекул адгезии (CAM), обозначенную здесь как AEC-CAM. Значение AEC-CAM в каждом случае затем делят на соответствующее значение величины, определенной в анализе с Giemsa, получая число, дающее оценку уровня экспрессии CAM по отношению к плотности клеток, измеренной на основании окрашивания клеточных ядер (обозначено здесь как отношение AEC:Giemsa).
AEC (стимулированная) - AEC (нестимулированная) = AEC-CAM AEC-CAM/Giemsa = отношение AEC:Giemsa
Таким образом, "истинные" величины IC50 экспрессии CAM определяют, сравнивая величины AEC:Giemsa, полученные в пробах тестируемых соединений, с соответствующими величинами для стимулированных контрольных проб (EBM, растворитель). Значения этих величин сравнивают со значениями величин IC50 только для Giemsa. Строгий критерий, показывающий наличие ингибирования CAM в сравнении с профилем цитотоксичности (Giemsa) означает "реальную" цель, которая должна быть достигнута.
Таким образом, "истинные" величины IC50 экспрессии CAM определяют, сравнивая величины AEC:Giemsa, полученные в пробах тестируемых соединений, с соответствующими величинами для стимулированных контрольных проб (EBM, растворитель). Значения этих величин сравнивают со значениями величин IC50 только для Giemsa. Строгий критерий, показывающий наличие ингибирования CAM в сравнении с профилем цитотоксичности (Giemsa) означает "реальную" цель, которая должна быть достигнута.
В. Анализ пролиферации HaCaT-клеток
HaCaT-клетки культивируют в DMEM (Gibro # 074-02100), дополненной 2,2 г/л NaHCO3, 0,11 г/л пирувата натрия, 15 г/л HEPES, 5% эмбриональной телячьей сыворотки (FCS), пенициллином (100 ед. /мл), стрептомицином (100 мкг/мл) и глутамином (для увеличения конечной концентрации до 4 мМ). Для проведения анализа на пролиферацию клетки обрабатывают трипсином, суспендируют в свежей среде и высеивают на 96-луночные планшеты для микротитрования, при этом значение конечной плотности клеточной суспензии соответствует 4000 клеток/0,2 мл на лунку. Через 24 часа (день 0) среду заменяют на свежую, содержащую набор концентраций тестируемых соединений. По окончании 3 дней инкубации при 37oC/5% CO2, степень клеточной пролиферации в сравнении с контролями (растворитель) измеряют колориметрически, определяя относительную клеточную массу с помощью красителя сульфородамина B [(Skehan et al., 1990, I. Natt. Cancer Inst. 82, 1107-1112)]. "Стартовое клеточное число" определяют, измеряя относительную клеточную массу в день 0. Результаты выражают в % ингибирования = 100% - % контрольного поглощения (где 100% - это контроль с растворителем) и представляют по результатам трех измерений в виде среднего значения ± стандартного отклонения. График зависимости от дозы строят в полулогарифмическом масштабе, определяя концентрацию, необходимую для ингибирования в половину от максимального (IC50) с помощью линейной интерполяции. Максимальное ингибирование без потери клеток, выражаемое значением "стартового клеточного числа", обычно составляет 90-98%.
HaCaT-клетки культивируют в DMEM (Gibro # 074-02100), дополненной 2,2 г/л NaHCO3, 0,11 г/л пирувата натрия, 15 г/л HEPES, 5% эмбриональной телячьей сыворотки (FCS), пенициллином (100 ед. /мл), стрептомицином (100 мкг/мл) и глутамином (для увеличения конечной концентрации до 4 мМ). Для проведения анализа на пролиферацию клетки обрабатывают трипсином, суспендируют в свежей среде и высеивают на 96-луночные планшеты для микротитрования, при этом значение конечной плотности клеточной суспензии соответствует 4000 клеток/0,2 мл на лунку. Через 24 часа (день 0) среду заменяют на свежую, содержащую набор концентраций тестируемых соединений. По окончании 3 дней инкубации при 37oC/5% CO2, степень клеточной пролиферации в сравнении с контролями (растворитель) измеряют колориметрически, определяя относительную клеточную массу с помощью красителя сульфородамина B [(Skehan et al., 1990, I. Natt. Cancer Inst. 82, 1107-1112)]. "Стартовое клеточное число" определяют, измеряя относительную клеточную массу в день 0. Результаты выражают в % ингибирования = 100% - % контрольного поглощения (где 100% - это контроль с растворителем) и представляют по результатам трех измерений в виде среднего значения ± стандартного отклонения. График зависимости от дозы строят в полулогарифмическом масштабе, определяя концентрацию, необходимую для ингибирования в половину от максимального (IC50) с помощью линейной интерполяции. Максимальное ингибирование без потери клеток, выражаемое значением "стартового клеточного числа", обычно составляет 90-98%.
Для демонстрации токсичности заявленных соединений ниже приведены исследования на примере соединений согласно примеру 15.
Тестирование in vitro в отношении микронуклеусов.
Клетки китайского хомячка V79 обрабатывали тестируемым соединением, растворенным в диметилсульфоксиде, в присутствии или без S9 гомогената печени (10%) самца крысы, предварительно обработанного Aroclor 1254. Выявляли фракции клеток, содержащие микронуклеусы в качестве индикаторов хромосомных перестроек.
Исходя из условий этого теста (клетки обрабатывали различными дозами соединения) тестируемое соединение не является кластогенным или анеугенным.
Тест Эймса
Были тестированы следующие концентрации: первый тест 5, 50 и 5000 мкг/чашку; второй тест: 250, 750 и 2500 мкг/чашку.
Были тестированы следующие концентрации: первый тест 5, 50 и 5000 мкг/чашку; второй тест: 250, 750 и 2500 мкг/чашку.
Исходя из условий этого анализа не было получено доказательств наличия бактериотоксического эффекта у тестируемого соединения в концентрациях до 5000 мкг/чашку (самая высокая изученная концентрация). Кроме того, циклопептолиды не увеличивали соответствующую норму при других условиях анализа.
Спектр:
(3 конформера 55: 44:3, основной и дополнит, конформеры помечены * и o соотв. ): 8.80* (d, J = 10 Hz, NH); 7.89* (d, J = 10 Hz, NH); 7.78o (d, J = 10 Hz, NH); 7.57o (d, J = 10 Hz, NH); 7.50* o (d, J = 7 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7.39o, 7.37o (2d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-7'), 7.20* o (m, MeMeOTrp, H-6'); 7.11o, 7,06* (2s, MeMeOTrp H-2'); 7.03* o (2dd, MeMeOTrp H-5'); 6.16o (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.95* (d, J = 6 Hz, Leu NH); 5.30o (m, al-H); 5.10* (dd, hydoxybutyric acid al-H); 5.03-4.98 (m, al-H); 4.91 (dd, al-H); 4.85 (m, al-H); 4.71o (m, al-H); 4.45* (dd, al-H); 4.29* (m, al-H); 4.03*, 4.02o (2s, N-OMe); 3.87 (dd); 3.72*, 3.64o (2s, COOMe); 3.63-3.50 (m); 3.47* (q, J = 7 Hz, MeAla al-H); 3.41o (s, N-Me); 3.36* (dd, MeMeOTrp β-H); 3.23-3.17 (m); 3.20* (s, MeAla N-Me); 3.19o (s, N-Me); 2.91* (s, MeMeOTrp N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.51o (s, MeMeOTrp N-Me); 2.43-2.09 (m); 2.03-1.89 (m); 1.83-1.75 (m); 1.68-1.07 (m); 1.52* (d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.48o (d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.04 (d, J = 6.5 Hz); 0.98-0.83 (m); 0.53* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); 0,01* (d, J = 6.6, Leu Me); -0.32 (ddd, J = 3.6 Hz, J = 11.1 Hz, J = 14.5 Hz, Leu β-CH).
(3 конформера 55: 44:3, основной и дополнит, конформеры помечены * и o соотв. ): 8.80* (d, J = 10 Hz, NH); 7.89* (d, J = 10 Hz, NH); 7.78o (d, J = 10 Hz, NH); 7.57o (d, J = 10 Hz, NH); 7.50* o (d, J = 7 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7.39o, 7.37o (2d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-7'), 7.20* o (m, MeMeOTrp, H-6'); 7.11o, 7,06* (2s, MeMeOTrp H-2'); 7.03* o (2dd, MeMeOTrp H-5'); 6.16o (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.95* (d, J = 6 Hz, Leu NH); 5.30o (m, al-H); 5.10* (dd, hydoxybutyric acid al-H); 5.03-4.98 (m, al-H); 4.91 (dd, al-H); 4.85 (m, al-H); 4.71o (m, al-H); 4.45* (dd, al-H); 4.29* (m, al-H); 4.03*, 4.02o (2s, N-OMe); 3.87 (dd); 3.72*, 3.64o (2s, COOMe); 3.63-3.50 (m); 3.47* (q, J = 7 Hz, MeAla al-H); 3.41o (s, N-Me); 3.36* (dd, MeMeOTrp β-H); 3.23-3.17 (m); 3.20* (s, MeAla N-Me); 3.19o (s, N-Me); 2.91* (s, MeMeOTrp N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.51o (s, MeMeOTrp N-Me); 2.43-2.09 (m); 2.03-1.89 (m); 1.83-1.75 (m); 1.68-1.07 (m); 1.52* (d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.48o (d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.04 (d, J = 6.5 Hz); 0.98-0.83 (m); 0.53* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); 0,01* (d, J = 6.6, Leu Me); -0.32 (ddd, J = 3.6 Hz, J = 11.1 Hz, J = 14.5 Hz, Leu β-CH).
(производное с открытой цепью формулы IV): (два конформера 68:32, основной и дополнит, конформеры помечены * и o соотв.): 8.16, 8.12, 8.05, 8.00 (4d, NH); 7.58o, 7.55* (2d, J = 8 Hz, MeMeOTrp 4'-H); 7.38* o (d, MeMeOTrp H-7'); 7.22*, 7.20o (2m, MeMeOTrp H-6'); 7.15*, 7.12o (2s, MeMeOTrp H-2'); 7.07*, 7.03o (2m, MeMeOTrp H-5'); 6.57 (s br, NH); 5.10o (dd, al-H); 5.17* (dd, hydroxybutyric acid al-H); 5.11* o (m, MeLeu al-H); 5.04* o (dd, al-H); 4.99* (ddd, al-H); 4.88o (ddd, al-H); 4.51o (dd); 4.53* (m, Leu al-H); 4.48o (m); 4.42* (m br, MeAla al-H); 4.05*, 4.03o (2s, N-OMe); 3.88o (q, J = 7 Hz, MeAla al-H); 3.71o, 3.68* (2s, COOMe); 3.57*, 3.54o (2s, COOMe); 3.47* (m br, MeMeOTrp al-H); 3.27o, 3.21* (2s, NMe); 3.2 (m, MeMeOTrp β-Ha); 3.00* (s, NMe); 2.9 (m, MeMeOTrp β-Hb); 2.64o (s, NMe); 2.32*, 2.28o (2s, NMe); 2.33-2.13 (m); 2.20 (m); 1.86 (m); 1.7-1.1 (m); 1.50o, 1.48* (2d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 0.97-0.93 (m); 0.90-0.76 (m).
Пример 5.
(3 конформера 2:2:1, дополнит, конформер помечен *): 8.81 (d, J = 10 Hz, NH); 7.93 (d, J = 10 Hz, NH); 7.79 (d, J = 9 Hz, NH); 7.65 (m br, NH); 7.54 (m, MeMeOTrp H-4'); 7.38, 7.37, 7.34* (3d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-7'); 7.19 (m, MeMeOTrp, H-6'); 7.08-6.98 (m, MeMeOTrp H-5'); 7.02 (s, MeMeOTrp H-2'); 6.14 (d, J = 10 Hz, Leu NH); 6.29* (d, J = 7 Hz, Leu NH); 6.07 (d, J = 6 Hz, Leu NH); 5.25 (m, al-H); 5.12-4.92 (al-H); 4.84 (m, al-H); 4.69 (m, al-H); 4.43 (m, al-H); 4.29 (m, al-H); 4.03*, 4.02, 4.00 (3s, N-OMe); 3.98 (m, al-H); 3.63-3.3 (m); 3.39-3.34* (s br NMe); 3.21 (s, NMe); 3.18* (s, NMe); 3.13 (m); 3.07* (s, NMe); 3.04* (s, NMe); 2.91 (s, N-Ms); 2.53 (s, NMe); 2.37 (s br, NMe); 2.5-1.05 (m); 1.47, 1.43, 1.41* (3d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.03 (d, J = 6.5 Hz); 0.98-0.83 (m); 0.68*, 0.55, 0.47*, -0.02 (4d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.32 (ddd, Leu β-CH).
Пример 6.
(3 конформера 4:3:1, дополнит, конформер помечен *): 8.82 (d, J = 10 Hz, NH); 7.95* (d, J = 9.3 Hz, NH); 7.90 (d, J = 9.8 Hz, NH); 7.80 (d, J = 9.4 Hz, NH); 7.59, 7.53 (2d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7.45-7.30 (m, MeMeOTrp H-7'); 7.23-7.15 (m, MeMeOTrp, H-6'); 7.20, 7.18 (2s, MeMeOTrp H-2'); 7.11-7.03 (m, MeMeOTrp H-5'); 6.86* (q, J = 5 Hz, NHMe), 6.23 (d, 9.5 Hz, Leu NH); 5.95 (d, J = 6.5 Hz, Leu NH; q, NHMe); 5.84* (d, J = 8.9 Hz, Leu NH); 5.55 (q, 5 Hz, NHMe); 5.3-4.95 (m, al-H); 4.84 (ddd, al-H); 4.69 (ddd, al-H); 4.42 (dd, MeLeu al-H); 4.34 (ddd, Leu al-H); 4.05*, 4.03, 4.02 (3s, N-OMe); 3.98 (m, al-H); 3.63-3.52 (m, al-H); 3.47 (q, Ala al-H); 3.37, 3.35*, 3.24*, 3.22, 3.20 (5s, NMe); 3.3-3.2 (m); 3.03*, 2.92 (2s, NMe); 2.85, 2.74, 2.70* (3d, J = 5 Hz, NH-Me), 2.53, 2.52 (2s, NMe); 2.23-1.93 (m); 1.85-1.05 (m); 1.53, 1.47, 1.44* (3d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.03 (d, J = 6.5 Hz); 0.98-0.80 (m); 0.57*, 0.55, 0.38*, 0.08 (4d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.30 (ddd. Leu β-CH).
Пример 7.
(3 конформера 40: 53: 7, помечены *, o и '): 8.81* (d, J = 10 Hz, C9AA NH); 7.88* (d, J = 10 Hz, C9AA NH); 7.78o (d, J = 10 Hz, NH); 7.57o (d, J = 10 Hz, NH); 7.52* o (2d, J = 7 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7.39*, 7.37o (2d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-7'); 7.27* (s, MeMeOTrp H-2'); 7.20, 7.18 (2m, MeMeOTrp, H-6'); 7.17* (s, MeMeOTrp H-2'); 7.03o, 7.01* (2m, MeMeOTrp H-5'); 6.17o (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.98* (d, J = 6 Hz, Leu NH); 5.77' (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.31o (ddd, MeAla al-H); 5.19* (dd, hydroxybutyric acid al-H); 5.05-4.94 (m, al-H); 4.88-4.83 (m, al-H); 4.70-4.64 (m, al-H); 4.48* (dd, MeLeu al-H); 4.32* (m, Leu al-H); 4.03*, 4.02o (2s, N-OMe); 3.93o (m, al-H); 3.7-3.5 (m, morpholine); 3.5-3.2 (m); 3.40o (s, N-Me); 3.34o (dd, MeMeOTrp H-βa); 3.22 (m, MeMeOTrp H-βb), 3.20o (s, N-Me); 3,17* (s, N-Me); 2.93* (s, MeMeOTrp N-Me); 2.54* (s, MeLeu N-Me); 2.53o (s, N-Me); 2.4-2.35 (m); 2.2-1.9 (m); 1.83-1.05 (m); 1.53*, 1.50o (2d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.04 (d, J = 6.5 Hz, MeLeu Me); 1.00-0.77 (m); 0.57* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); 0.52', 0.34' (2d, J = 6.6 Hz, Leu Me); 0.09* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.25 (ddd, Leu β-CH).
Пример 8.
(2 конформера 45: 55, помечены *, o): 8.84* (d, J = 10 Hz, C9AA NH); 7.87* (d, J = 10 Hz, C9AA NH); 7.77o (d, J = 10 Hz, NH); 7.57o (d, J = 10 Hz, NH); 7.55*, 7.52o (2d, J = 7 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7.36*, 7.35o (2d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-7'), 7.36* (s, MeMeOTrp H-2'); 7.23* (s, MeMeOTrp H-2'); 7.20, 7.17 (2m, MeMeOTrp, H-6'); 7.03o, 7.01* (2m, MeMeOTrp H-5'); 6.17o (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.95* (d, J = 6 Hz, Leu NH); 5.31o (ddd, MeAla al-H); 5.24* (dd, hydroxybutyric acid al-H); 5.05-4.97 (m, al-H); 4.93 (dd, al-H); 4.87 (dd, al-H); 4.88-4.83 (m, al-H); 4.66-4.60 (m, al-H); 4.48* (dd, MeLeu al-H); 4.38* (ddd, Leu al-H); 4.15-4.00 (m); 4.03*, 4.02o (2s, N-OMe); 3.98o (m, al-H); 3.7-3.2 (m); 3.40o (s, N-Me); 3.20o (s, N-Me); 3.17* (s, N-Me); 3.05-2.9 (m); 2.99, 2.98 (2s, CON-Me); 2.96 (s, 2xCON-Me); 2.92* (s, MeMeOTrp N-Me); 2.54 (s, MeLeu N-Me and N-Me); 2.4-2.25 (m); 2.15-1.9 (m); 1.83-1.05 (m); . 1.53*, 1.50o (2d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.04 (d, J = 6.5 Hz, MeLeu Me); 1.00-0.83 (m); 0.79o, 0.74o (2d); 0.57* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); 0.13* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.25 (ddd, Leu β-CH).
Пример 9.
(3 конформера 0: 28:2, помечены *, o, '): 8.89* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.89* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.77o (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.52o (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.50o (d, PrLeu2 NH); 7.48* (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.38* (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.37o (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.19o (dd, indole H-6'); 7.18* (dd, indole H-6'); 7.13o (s, indole H-2'); 7.02* (s, indole H-2'); 6.99o (dd, indole H-5'); 6.90* (dd, indole H-5'); 6.18o (d br, 10 Hz, Leu NH); 5.93* (d, 6 Hz, Leu NH); 5.83' (d, Leu NH); 5.30o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.30* (dd, Hba α-H); 5.02* (ddd, PrLeu6 α-H); 5.00o (ddd, PrLeu2 α-H); 4.89* (dd, MeTrp α-H); 4.84* (ddd, PrLeu2 α-H); 4.71o (ddd, α-H); 4.44* (dd, MeLeu α-H); 4.37* (ddd, Leu α-H); 4.03*, 4.02o (2s, N-OMe); 3.63-3.52; 3.49* (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.40o (s, N-Me); 3.38* (dd, MeTrp β-Ha); 3.26-3.20; 3.23* (s, MeAla N-Me); 3.21o (s, N-Me); 2.93* (s, MeTrp N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.52o (s, N-Me); 2.45-1.75; 2.33, 2.15 (2m, aziridine); 1.56-1.07; 1.50* (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1.47o (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1.03* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.98-O.83; 0.48* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); -0.13* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.48* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 10.
(3 конформера 45:51:4, помечены *, o и '): 8.86* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.87* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.75o (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.57* (d, 8 Hz, indole H-4'), 7.55o (d, PrLeu2 NH); 7.51o (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.41o (s, indole H-2'); 7.38* (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.36o (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.29* (s, indole H-2'); 7.18* (dd, indole H-6'); 7.17o (dd, indole H-6'); 7.03o (dd, indole H-5'); 7.01* (dd, indole H-5'); 6.17o (d br, 10 Hz, Leu NH); 5.94* (d, 6 Hz, Leu NH); 5.79' (d, Leu NH); 5.30o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.27* (dd, α-H); 5.00* (ddd, PrLeu6 α-H); 4.98o (ddd, α-H); 4.93o (dd, α-H); 4.87* (dd, α-H); 4.85* (ddd, PrLeu2 α-H); 4.63o (ddd, α-H); 4.47* (dd, MeLeu α-H); 4.40 (m); 4.02* (ddd, Leu α-H); 4.02, 4.01 (2s, N-OMe); 3.68-3.22; 3.40o (s, N-Me); 3.20o (s, N-Me); 3.18* (s, MeAla N-Me); 2.91* (s, MeTrp N-Me); 2.55o (s, N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.35-1.05; 1.54* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.50o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.03* (d. 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.98-0.83; 0.78o (d, 6 Hz, Leu δ′-Me); 0.73o (d, 6 Hz, Leu δ″-Me); 0.57* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.16* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.27 (ddd, Leu γ-CH).
Пример 11.
(3 конформера 46:51:3, помечены *, o и '): 8.87* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.87* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.76o (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.56o (d, PrLeu2 NH); 7.55* (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.52o (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.37 (d, 8 Hz, indole H); 7.36 (d, 8 Hz, indole H); 7.36o (s, indole H-2'); 7.22* (s, indole H-2'); 7.20* (dd, indole H-6'); 7.18o (cc, indole H-6'); 7.03o (dd, indole H-5'); 7.00o (dd, indole H-5'); 6.16o (d, 10 Hz, Leu NH); 5.94* (d, 6 Hz, Leu NH); 5.78' (d, Leu NH); 5.31o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.27* (dd, α-H); 5.06-4.80; 4.65 (ddd, α-H); 4.47* (dd, MeLeu α-H); 4.33 (m); 4.03, 4.01 (2s, N-OMe); 4.00 (ddd, α-H); 3.75-3.20; 3.40 (s, N-Me); 3.20 (s, N-Me); 3.18* (s, MeAla N-Me); 2.91* (s, MeTrp MeMe); 2.53 (s, N-Me); 2.53o (s, MeLeu N-Me); 2.45-1.07; 1.53* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.49o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.03* (d. 6.5 Hz, MeLeu
d-Me); 0.98-0.83; 0.79 (d, 6 Hz, Me); 0.74 (d, 6 Hz, Me); 0.55* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.07* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.36* (ddd, Leu β-CH).
d-Me); 0.98-0.83; 0.79 (d, 6 Hz, Me); 0.74 (d, 6 Hz, Me); 0.55* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.07* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.36* (ddd, Leu β-CH).
Пример 12.
(4 конформера 27:33:17:33 помечены *, o, ', ''): 8.9* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 8.82' (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.9* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.86' (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.76o (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.75'' (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.24* (s, indole); 7.03* (dd, indole); 6.17'' (d br, 10 Hz, Leu NH); 6.17o (d br, 10 Hz, Leu NH); 6.03' (d, 6Hz, Leu NH); 5.98* (d, 6 Hz, Leu NH); 4.02'' (s); 4.02o (s); 4.02* (s); 4.02' (s); 3.40 (s, N-Me); 3.40 (s, N-Me); 3.20 (s, N-Me); 3.20 (s, N-Me); 3.17 (s, N-Me); 2.97 (s, N-Me); 2.94 (s, N-Me); 2.94 (s, N-Me); 2.93 (s, N-Me); 2.91 (s, N-Me); 2.56 (s, N-Me); 2.56 (s, N-Me); 2.53' (s, MeLeu N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 1.53* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.53' (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.50o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.50'' (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.03' (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 1.03* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.78o (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.77'' (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.72'' (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); 0.72o (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); 0.61' (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.55* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.21' (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); 0.12* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.17' (ddd, Leu γ-CH); -0.31* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 13.
(2 конформера 55: 45, основной и дополнит. конформеры помечены * и o): 8.80* (d, J = 10 Hz, NH); 7.88* (d, J = 10 Hz, NH); 7.77o (d, J = 10 Hz, NH); 7.57o (d, J = 10 Hz, NH); 7.52*, 7.51o (2d, J = 7 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7.39*, 7.37o (2d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-7'); 7.20* o (m, MeMeOTrp, H-6'); 7.16o, 7.09* (2s, MeMeOTrp H-2'); 7.03* o (2dd, MeMeOTrp H-5'); 6.17o (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.97* (d, J = 6 Hz, Leu NH); 5.31o (m. MeAla al-H); 5.11-4.96 (m, al-H); 4.92* (dd, MeMeOTrp al-H); 4.87 (ddd, al-H); 4.69o (m, Leu al-H); 4.47* (dd, MeLeu al-H); 4.27* (dd, Leu al-H); 4.03*, 4.02o (2s, N-OMe); 3.92 (dd); 3.65-3.15 (m); 3.47* (q, J = 7 Hz; MeAla al-H); 3.41o (s, N-Me); 3.21* (s, MeAla NMe); 3.20o (s, N-Me); 2.92* (s, MeMeOTrp N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.51o (s, N-Me); 2.35-2.75 (m); 1.7-1.05 (m); 1.53* (d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.49o (d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.28*, 1.25*, 1.23o, 1.18o (4d, J = 6 Hz, COOCHMe2); 1.04 (d, J = 6.5 Hz, MeLeu Me); 0.98-0.83 (m); 0.55* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); 0.05* (d, J = 6.6, Leu Me); -0.31 (ddd, Leu β-CH).
Пример 14.
(3 конформера 55: 43: 2, помечены, *, o и '): 8.82* (d, J = 10 Hz, C9AANH); 7.85* (d, J = 10 Hz, C9AANH), 7.78o (d, J = 10 Hz, NH); 7.58o (d, J = 10 Hz, NH), 7.52*, 7.51o (2d, J = 7 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7.39*, 7.37o (2d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-7'); 7.22*, 7.21o (2m, MeMeOTrp, H-6'); 7.14o, 7.08* (2s, MeMeOTrp H-2'); 7.03* o (2dd, MeMeOTrp H-5'); 6.17o (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.95* (d, J = 6 Hz, Leu NH); 5.78' (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.31o (ddd, MeAla al-H); 5.12* (dd, hydroxybutyric acid al-H); 5.05-4.98 (m, al-H); 4.91* (dd, MeMeOTrp al-H); 4.86* (ddd, C9AA al-H) 4.73-4.68 (m, Leu al-H); 4.47* (dd, MeLeu al-H); 4.32-4.26 (m, Leu al-H); 4.25 (dq, J = 11 Hz, J = 7 Hz, COOCH2-); 4.15-4.07 (m, COOCH2-); 4.04*, 4.03o (2s, N-OMe); 3.84 (m, al-H); 3.64-3.50 (m); 3.47* (q, J = 7 Hz, MeAla al-H); 3.41o (s, N-Me); 3.34o (dd, MeMeOTrp H-βa); 3.22 (m, MeMeOTrp H-βb); 3.20* (s, MeAla NMe); 3.19o (s, N-Me); 2.93* (s, MeMeOTrp N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.52o (s, N-Me); 2.4-2.1 (m); 2.05-1.9 (m); 1.83-1.76 (m); 1.7-1.07 (m); 1.53*, 1.49o (2d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.30, 1.25 (2t, J = 7 Hz, COOCH2CH3); 1.04 (d, J = 6.5 Hz, MeLeu Me); 1.00-0.84 (m); 0.55* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); 0.03* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.32 (ddd, Leu β-CH).
Пример 15.
(3 конформера 57: 41: 2, помечены *, o и '): 8.82* (d, J = 10 Hz, C9AA NH); 7.90* (d, J = 10 Hz, C9AA NH); 7.78o (d, J = 10 Hz, NH); 7.58o (d, J = 10 Hz, NH); 7.52* o (2d, J = 7 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7.39*, 7.38o (2d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-7'); 7.22*, 7.21o (2m, MeMeOTrp, H-6'); 7.14o, 7.08* (2s, MeMeOTrp H-2'); 7.03o, 7.02* (2m, MeMeOTrp H-5'); 6.17o (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.98* (d, J = 6 Hz, Leu NH); 5.82' (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.31o (ddd, MeAla al-H); 5.12* (dd, hydroxybutyric acid al-H); 5.05-4.98 (m, al-H); 4.91* (dd, MeMeOTrp al-H); 4.86* (ddd, C9AA al-H) 4.73-4.68 (m, Leu al-H); 4.47* (dd, MeLeu al-H); 4.28* (m, Leu al-H); 4.2-3.95 (m, COOCH2); 4.03*, 4.02o (2s, N-OMe); 3.90o (m, al-H); 3.64-3.42 (m); 3.47* (q, J = 7 Hz, MeAla al-H); 3.41o (s, N-Me); 3.34o (dd, MeMeOTrp H-βa); 3.22 (m, MeMeOTrp H-βb); 3.20*(s, MeAla NMe); 3.19o (s, N-Me); 2.93* (s, MeMeOTrp N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.52o (s, N-Me); 2.4-2.1 (m); 2.03-1.9 (m); 1.83-1.76 (m); 1.72-1.58 (m, COOCH2CH2CH3); 1.55-1.07 (m); 1.53*, 1.49o (2d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.04 (d, J = 6.5 Hz, MeLeu Me); 1.00-0.84 (m); 0.54* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); 0.02* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.34 (ddd, Leu β-CH).
Пример 16.
(2 конформера 70:30, помечены * и o): 8.92*, 7.87, 7.75o, 7.58o (4d, J = 10 Hz, NH); 7.49* (d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7.37* (d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-7'); 7.20* (dt, MeMeOTrp H-6'); 7.18o, 7.03* (2s, MeMeOTrp H-2'); 7.03o, 6.97* (2 dt, MeMeOTrp H-5'); 6.20o (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.96* (d, J = 7 Hz, Leu NH); 5.33* (m, hydroxybutyric acid al-H); 5.02 (m, al-H); 4.90* (dd, al-H); 4.83* (ddd, al-H); 4.79* (dd, al-H); 4.70o (m, al-H); 4.39* (dd, al-H); 4.38o (m, al-H); 4.03* (s, N-OMe); 3.92o (m); 3.63-3.53 (m); 3.44-3.40 (m); 3.39o, 3.20o (2s, NMe); 3.32-3.18 (m); 3.17* (s, MeAla NMe); 2.94* (s, MeMeOTrp NMe); 2.53* (s, MsLeu NMe); 2.52o (s, NMe); 2.5-2.3 (m); 2.1-1.1 (m); 2.17*, 2.11o (2s, COMe); 1.51*, 1.48o (2d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.03* (d, J = 6.5 Hz); 0.98-0.83 (m); 0.52*, -0.11* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.39* (ddd, Leu β-CH).
Пример 17.
(3 конформера 45: 40:15, помечены *, o, '): 8.78o (d, J = 9.9 Hz, NH); 7.83* (d, J = 9,7 Hz, NH); 7.76' (d, NH); 7.59' (d, J = 7.8 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7.57 (d, J = 9.5 Hz, NH); 7.56, 7.53 (2d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7.46' (s, MeMeOTrp H-2'); 7.42*, 7.39o, 7.34' (3d, J = 8.2 Hz, MeMeOTrp H-7'); 7.24*, 7.22o, 7.18' (3t, MeMeOTrp H-6'); 7.11*, 7.08', 7.06o (3t, MeMeOTrp H-5'); 7.04*, 7.03o (2s, MeMeOTrp H-2'); 6.25o (d, J = 9.5 Hz, Leu NH); 6.03* (d, J = 7 Hz, Leu NH); 5.99' (d, J = 8.8 Hz, Leu NH); 5.28* (m, al-H); 5.13' (t, J = 4 Hz, OH); 5.09-4.98 (m, al-H); 5.02 (t, J = 4 Hz, OH); 4.97 (dd, al-H), 4.88 (dd, al-H); 4.84 (m, al-H); 4.78-4.70 (m, al-H); 4.41 (dd, MeLeu al-H); 4.18 (ddd, Leu al-H); 4.04, 4.02 (2s, N-OMe); 3.78 (m, al-H); 3.65-3.35 (m); 3.42o, 3.32', 3.22*, 3.20o (4s, NMe); 3.17-3.08 (m); 3.03', 2.92', 2.90*, 2.52*, 2.51o (5s, NMe); 2.01-1.1 (m); 1.53, 1.49, 1.40' (3d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.04 (d, J = 6.5 Hz); 0.98-0.83 (m); 0.72', 0.60*, 0.56', 0.03* (4d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.16 (ddd, Leu β-CH).
Пример 18.
(3 конформера 73: 20: 7, помечены *, o, '): 8.54o (d, J = 10 Hz, NH); 8.38' (s br, MeTrp N'-H); 8.26*, 8.17o (2d br, J = 2 Hz, MeTrp N'-H); 8.13*, 8.03o, 8.01' (3d, J = 9.7 Hz, NH); 7.78* (d, J = 7.7 Hz, MeTrp H-4'); 7.74', 7.70', 7.63o, 7.63o (4d); 7.46*, 7.44o, 7.40' (3d, J = 8 Hz MeTrp H-7'); 7.27* (dt, MeTrp H-6'); 7.20*, 7.17o (2dt, MeTrp H-5'); 7.09o, 7.03* (2d, J = 2 Hz, MeTrp H-2'); 6.33o (d, J = 10 Hz, Leu NH); 6.17* (d, J = 7.4 Hz, Leu NH); 5.97' (d, J = 9 Hz, Leu NH); 5.38o (m, al-H); 5.27* (dd, hydroxybutyric acid al-H); 5.21o (dd, al-H); 5.12* (ddd, al-H); 5.07* (dd, al-H); 4.96* (ddd, al-H); 4.87 (m); 4.55* (dd, MeLeu al-H); 4.29* (ddd, Leu al-H); 3.85-3.25 (m); 3.76* (q, J = 7 Hz, MeAla al-H); 3.49o, 3.36' (2s, NMe); 3.13* (s, MeAla NMe); 3.29o, 3.13' (2s NMe); 3.02* (s, MeTrp NMe); 2.62o (s, NMe); 2.60* (s, MeLeu NMe); 2.38-1.15 (m); 1.62*, 1.56o, 1.51' (3d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.13* (d, J = 6.5 Hz MeLeu); 1.07-0.93 (m); 0.73', 0.63*, 0.58', 0.02* (4d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.28* (ddd, Leu β-CH).
Пример 19.
(3 конформера 67:29:4, помечены *, o и '): 9.52* (t, J = 1.5 Hz, CHO); 9.41o (t, J = 1 Hz, CHO); 9.05' (m, CHO); 8.73* (d, J = 10 Hz, C9AA NH); 7.86* (d, J = 10 Hz, C9AA NH); 7.77o (d, J = 10 Hz, NH); 7.60o (d, J = 10 Hz, NH); 7.47* o (2d, J = 7 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7.38* o (2d, J = 8 Hz, MeMeOTrp H-7'); 7.20* o (2t, MeMeOTrp, H-6'); 7.15o, 7.04* (2s, MeMeOTrp H-2'); 7.03o (m, MeMeOTrp H-5'); 7.00* (dd, MeMeOTrp H-5); 6.22o (d, J = 10 Hz, Leu NH); 6.02* (d, J = 6 Hz, Leu NH); 5.87' (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.29o (ddd, MeAla al-H); 5.17* (dd, hydroxybutyric acid al-H); 5.03-4.93 (m, al-H); 4.91* (dd, MeMeOTrp al-H); 4.84* (ddd, C9AA al-H); 4.79-4.64o (m, Leu al-H); 4.43* (dd, MeLeu al-H); 4.35* (ddd, Leu al-H); 4.04', 4.03*, 4.02o (3s, N-OMe); 3.81o (m, al-H); 3.63o (dd); 3.57-3.50 (m); 3.48-3.42 (m); 3.43* (q, J = 7 Hz, MeAla al-H); 3.38o (s, N-Me); 3.30-3.12 (m); 3.20o (s, N-Me); 3.15* (s, MeAla NMe); 2.93* (s, MeMeOTrp N-Me); 2.58o (s, N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.25 (m, CH2-CHO); 2.15-1.9 (m); 1.85-1.74 (m); 1.65-1.08 (m); 1.48*, 1.45o (2d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.04* (d, J = 6.5 Hz, MeLeu Me); 0.98-0.83 (m); 0.67', 0.58*, 0.52', 0.01* (4d, J = 6.6 Hz, Leu Me); - 0.20* (ddd, Leu β-CH).
Пример 20.
(2 конформера 1: 1): 8.77 (d, J = 10 Hz, C9AA NH); 7.79 (d, J = 10 Hz, C9AA NH); 7.73 (d, J = 10 Hz, NH); 7.65 (d, J = 10 Hz, NH); 7.44, 7.44, 7.42, 7.39 (4d, MeMeOTrp H-4' and H-7'); 7.25, 7.22 (2t, MeMeOTrp, H-6'); 7.13-7.03 (m, MeMeOTrp H-5'); 7.02, 6.98 (2s, MeMeOTrp H-2'); 6.19 (d, J = 10 Hz, Leu NH); 6.00 (d, J = 6 Hz, Leu NH); 5.80-5.53 (m, olefin-H); 5.31 (ddd, MeAla al-H); 5.08-4.67 (m, al-H, olefin-H); 4.47 (dd, MeLeu al-H); 4.15-3.98 (m); 4.05, 4.02 (2s, N-OMe); 3.7-3.0 (m); 3.44, 3.21, 3.20, 2.92, 2.52, 2.44 (6s, N-Me); 2.15-1.90 (m); 1.90-1.08 (m); 1.55, 1.50 (2d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.05 (d, J = 6.5 Hz, MeLeu Me); 1.0-0.8 (m); 0.60, 0.06 (2d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.20 (ddd, Leu β-CH).
Пример 21.
(3 конформера 44: 53:3 помечены *, o, '): 8.81* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.78, 7.73, 7.67 (3d, 10 Hz, NH); 7.43, 7.42 (2d, 8 Hz, indole H-4'); 7.37 (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.28-7.00; 7.02, 6.97 (2s, indole H-2'); 6.21o (d, 10 Hz, Leu NH); 5.97* (d, 6 Hz, Leu NH); 5.75' (d, Leu NH); 5.50-4.65; 4.47* (dd, MeLeu α-H); 4.05 (ddd, α-H); 4.04 (s, OMe); 4.02 (s, OMe); 3.65-3.10; 3.44o (s, MeAla N-Me); 3.22 (s, MeAla N-Me); 3.19 (s, N-Me); 2.93* (s, MeTrp N-Me); 2.52, 2.39 (2s, N-Me); 2.15-0.82; 1.54*, 1.50o (2d, 7 Hz, MaAla β-Me); 1.04* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.57* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.48' (d, Leu δ′-Me); 0.26' (d, Leu δ″-Me); -0.04* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me).
Пример 22.
(3 конформера 47:48:5, помечены *, o, '): 8.63, 7.87, 7.77, 7.63 (4d, 10 Hz, PrLeu NH); 7.49* (d, 7 Hz, indole H-4'); 7.48o (d, 7 Hz, indole H-4'); 7.43* (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.41o (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.27* (dd, indole H-6'); 7.23o (dd, indole H-6'); 7.13* (dd, indole H-5'); 7.08o (dd, indole H-5'); 7.04o (s, indole H-2'); 7.02* (s, indole H-2'); 6.98' (s, indole H-2'); 6.2o (d, 10 Hz, Leu NH); 6.01* (d, 7 Hz, Leu NH); 5.79' (d, 9 Hz, Leu NH); 5.30o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.07* (dd, Hba α-H); 5.03* (ddd, PrLeu6 α-H); 4.86* (ddd, PrLeu2 α-H); 4.79 (dd, MeTrp α-H); 4.47* (dd, MeLeu α-H); 4.18* (ddd, Leu α-H); 4.06 (s, N-OMe); 4.05' (s, N-OMe); 4.03 (s, N-OMe); 3.71-3.50; 3.42 (s, N-Me); 3.23-3.05; 3.20 (s, N-Me); 3.18 (s, N-Me); 2.92 (s, N-Me); 2.52 (s, N-Me); 2.51 (s, N-Me); 2.03-1.08; 1.54* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.50o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.05* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.98-0.84; 0.63* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.53' (d, 7 Hz, Leu δ′-Me); 0.34' (d, 7 Hz, Leu δ″-Me); 0.11* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.13* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 23.
[3 конформера 40:40:20, помечены *, o, '): 8.50* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 8.20 (m); 7.98* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.57* (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.53-7.35; 7.25-7.18; 7.23* (s, indole H-2'); 7.13-7.06; 7.05o (s, indole H-2'); 6.69 (d); 6.29 (d, br); 6.22 (d, br); 6.14o (d, 7 Hz, Leu NH); 6.07* (d, 9 Hz, Leu NH); 5.5o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.26-4.63 (m, α-H); 4.36 (m, MeLeu α-H); 4.18* (ddd, Leu α-H); 4.04 (s, OMe); 4.03' (s, OMe,); 4.02 (s, OMe); 3.68-2.78; 3.34 (s, N-Me); 3.19 (s, N-Me); 3.12 (s, N-Me); 3.03 (s, N-Me); 2.91 (s, N-Me); 2.53 (s, N-Me); 2.10-1.05; 1.03-0.78; 0.76 (d); 0.71 (d, 6.5 Hz, Leu g-Me); 0.60 (d, 6.6 Hz, Leu g-Me); 0.08 (d, 6.6 Hz, Leu g-Me); -0.10 (ddd, Leu γ-CH).
Пример 24.
(3 конформера 43:47:5, помечены *, o и '): 8.68* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.87* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.80o (d, 10 Hz, NH); 7.63o (d, 10 Hz, NH); 7.55-7.37 (m, indole); 7.27-7.10 (m, indole); 7.08o (s, indole H-2'); 7.03* (s, indole H-2'); 6.58 (t, 8 Hz C=C); 6.23 (t, 8 Hz C=C); 6.18o (d, 6.7 Hz, Leu NH); 6.03* (d, 10 Hz, Leu NH), 5.80' (d. Leu NH); 5.31o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.08-4.91 (α-H); 4.86* (add, PrLeu2 α-H); 4.77-4.68 M, α-H); 4.46* (dd, MeLeu α-H); 4.14* (ddd, Leu α-H); 4.05o (s, OMe); 4.03* (s, OMe); 4.02' (s, OMe, ); 3.71o (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.60* (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.53-3.00; 3.44o (s, MeAla N-Me); 3.23 (s, N-Me); 3.20 (s, N-Me); 2.93* (s, MeTrp N-Me); 2.52 (s, N-Me); 2.44 (s, N-Me); 2.20-0.83; 1.56* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.51o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.05* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.62* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.57' (d, Leu δ′-Me); 0.40' (d, Leu δ″-Me); 0.10* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.17* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 25.
(3 конформера 51:45:4, помечены *, o и '): 8.68* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.87* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.81o (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.63o (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.53 (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.51 (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.43 (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.40 (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.26 (dd, indole H-6'); 7.23 (dd, indole H-6'); 7.13 (dd, indole H-5'); 7.07o (s, indole H-2'); 7.07 (dd, indole H-5'); 7.03* (s, indole H-2'); 6.21o (d, 10 Hz, Leu NH); 6.05* (d, 6 Hz, Leu NH); 5.79' (d. 10 Hz, Leu NH); 5.32o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.14* (dd, Hba α-H);) 5.03* (ddd, PrLeu6 α-H); 4.87* (ddd, PrLeu2 α-H); 4.83* (dd, MeTrp α-H); 4.77o (ddd, Leu α- H); 4.51* (dd, MeLeu α-H); 4.13* (ddd, Leu α-H); 4.06o (s, OMe); 4.03* (s, OMe); 3.68*(m); 3.57* (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.44o (s, MeAla N-Me); 3.36* (dd, MeTrp β-Ha); 3.23 (dd, MeTrp β-Hb); 3.22 (s, N-Me); 3.17 (s, N-Me); 3.14 (dd); 2.96 (m, CCH); 2.93* (s, MeTrp N-Me); 2.53 (s, N-Me); 2.49 (s, N-Me); 2.25-1.97; 1.86-1.78; 1.55* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.52o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.50-1.09; 1.06* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 1.00-0.85; 0.63* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.58' (d, Leu δ′-Me); 0.38' (d, Leu δ″-Me); 0.07* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.11* (ddd, Leu γ-CH).
(смесь E/Z изомеров 6: 4 в виде трех конформеров, имеющих один характерный сигнал): 8.61, 8.48, 7.93, 7.84, 7.82. 7.74, (d, 10 Hz, PrLeu NH); 7.52 (d, 8 Hz, indole); 7.08 (s, indole H-2'), 6.44, 6.22 (2dt, CH=CHCN); 6.36-6.26 (m); 6.13, 6.07, 5.87 (3d, Leu NH); 5.33-5.28 (m); 5.24, 5.20 (2dm, CH= CHCN); 5.06-4.97.(m); 4.92 (2d); 4.87-4.75 (m); 4.49, 4.46 (2dd, MeLeu α-H); 4.28, 4.18 (2ddd, Leu α-H); 4.07, 4.06, 4.05, 4.03 (4s, N-OMe); 3.88, 3.82 (2q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.43, 3.40, 3.23, 3.21, 3.19, 3.12, 2.93, 2.55, 2.53, 2.52, 2.51 (11s, N-Me); 1.54-1.49 (5d, MeAla β-Me); 1.06, 1.04 (2d, 7 Hz, MeLeu d-Me); 0.74, 0.65, 0.52, 0.26, 0.08 (5d, Leu g-Me); -0.04 (ddd, Leu γ-CH).
Пример 27.
(3 конформера 51: 46:3 помечены *, o, '): 8.71* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.90* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.76o (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.6o (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.52* (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.48o (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.42 (d, 8 Hz, indole); 7.40 (d, 8 Hz, indole); 7.26* (dd, indole H-6'); 7.13* (dd, indole H-5'); 7.07o (dd, indole H-5'); 7.03* (s, indole H-2'); 7.02o (s, indole H-2'); 6.16 (d br, 10 Hz, Leu NH); 6.01* (d, 6 Hz, Leu NH); 5.77' (d, Leu NH); 5.31 (ddd, α-H); 5.05-4.97; 4.86 (ddd, α-H); 4.82 (dd, α-H); 4.74 (m); 4.46* (dd, MeLeu α-H); 4.17* (ddd, Leu α-H); 4.05* (s, N-OMe); 4.03o (s, N-OMe); 3.68 (m); 3.57 (m); 3.47* (m, CH2Cl); 3.43 (s, N-Me); 3.28* (dd, MeTrp β-Ha); 3.23* (s, MeAla N-Me); 3.21 (s, N-Me); 3.20* (dd, MeTrp β-Hb); 2.92* (s, MeTrp N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.49 (s, N-Me); 2.23o (dd, indole H-6'); 2.05-1.1; 1.54* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.50o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.05* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.98-0.85; 0.57* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.52' (d, Leu δ′-Me); 0.28' (d, Leu δ″-Me); 0.06* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.32* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 28.
(3 конформера 37: 59:4 помечены *, o, '): 8.73* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.8* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.73o (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.63o (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.49o (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.47* (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.42* (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.38o (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.25 (dd, indole); 7.22o (dd, indole H-6'); 7.12* (dd, indole H-5'); 7.06o (dd, indole H-5'); 7.04 (s, indole H-2'); 7.03 (s. indole H-2'); 6.22o (d br, 10 Hz, Leu NH); 6.00* (d, 6 Hz, Leu NH); 5.78' (d, Leu NH); 5.31o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.07 (dd, α-H); 5.05-4.90; 4.87 (ddd, α-H); 4.79 (dd, α-H); 4.72 (m); 4.49* (dd, MeLeu α-H); 4.11* (ddd, Leu α-H); 4.05* (s, N-OMe); 4.03o (s, N-OMe); 3.75-3.50; 3.43 (s, N-Me); 3.38-3.13; 3.28 (s, OMe); 3.28 (s, OMe); 3.23 (s, N-Me); 3.21o (s, N-Me); 2.92* (s, MeTrp N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.48o (s, N-Me); 2.00-1.08; 1.55* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.50o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.05* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.98-0.85; 0.60* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.05* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.18* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 29.
(2 конформера 50:50, помечены * и o): 8,70* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.80* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.71o (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.69o (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.47-7.35; 7.24 (dd, indole); 7.21 (dd, indole); 7.04 (dd, indole); 7.01 (dd, indole); 7.01 (s, indole H-2'); 6.97 (s, indole H-2'); 6.25o (d br, 10 Hz, Leu NH); 6.00* (d, 6 Hz, Leu NH); 5.30o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.10-4.69; 4.49* (dd, MeLeu α-H); 4.07* (ddd, Leu α-H); 4.04* (s); 4.02o (s); 3.72-3.02; 3.41 (s, N-Me); 3.20 (s, N-Me); 3.20* (s, MeAla N-Me); 2.91* (s, MeTrp N-Me); 2.53 (s, N-Me); 2.45 (s, N-Me); 2.07-0.82; 1.55* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.50o (d, 7 Hz, MeAia β-Me); 1.04* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.6* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.41 (m, cyPr); -0.03* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.24* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 30.
(3 конформера 63:35:2, помечены *, o и '): 8.78o (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.93*, 7.77o (2d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.47* (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.43* (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.40-7.23; 7.17o, 7.13* (2dd, indole H-6'); 7.04, 7.03 (2s, indois H-2'); 6.93o (dd, indole H-5'); 6.97, 6.93 (2s, CH-Ph2,); 6.74* (dd, indole H-5'); 6.14o (d, 10 Hz, Leu NH); 5.92* (d, 6 Hz, Leu NH); 5.78' (d, Leu NH); 5.27o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.12* (dd, Hba α-H); 4.98* (ddd, PrLeu6 α-H); 4.96* (dd, MeTrp α-H); 4.85* (ddd, PrLeu2 α-H); 4.70o (ddd, α-H); 4.47* (dd, MeLeu α-H); 4.18* (ddd, Leu α-H); 4.00*, 3.97o (2s, OMe); 3.57o (dd, MeTrp β-Ha); 3.53o (dd, MeTrp β-Hb); 3.37* (dd, MeTrp β-Ha); 3.27* (dd, MeTrp β-Hb); 3.20, 3.19, 2.93, 2.83 (4s, N-Me); 2.66 (q, 7 Hz); 2.55-2.33; 2.52 (s, N-Me); 2.46 (s, N-Me); 2.27-1.92; 1.80 (m); 1.68-1.05; 1.35o, 1.28* (2d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.03* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.96-0.83; 0.53' (d, Leu δ′-Me); 0.49* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.32' (d, Leu δ″-Me); -0.12* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.49* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 31.
(смесь конформеров, дающих только один сигнал): 7.13, 7.03 (2s, indole H-2'); 4.56, 4.40 (2m, α-H); 4.03 (s, N-OMe); 3.42, 3.23, 3.07, 2.94, 2.53 (5s, N-Me); 0.57, 0.53, (2d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.17, 0.03 (2d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.03,-0.27 (2ddd, Leu β-CH).
Пример 32.
(3 конформера 78: 16:6, помечены *, o, '): 8.45* (d, J = 10 Hz, PrLeu6 NH); 8.04* (d, J = 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.83o (d, J = 10 Hz, NH); 7.68*, 7.53o (2d, J = 7 Hz, indole H-4'); 7.30* (d, J = 8 Hz, indole H-7'); 7.23* (m, indole H-6'); 7.10* (dd, indole H-5'); 6.87o, 6.79* (2s, indoie H-2'); 6.28o (d, J = 10 Hz, Leu NH); 6.07* (d, J = 6 Hz, Leu NH); 5.83' (d, J = 10 Hz, Leu NH); 5.31o (ddd, PrLeu α-H); 5.18* (dd, Hba α-H); 5.13o (dd, Hba α-H); 5.05* (ddd, PrLeu6 α-H); 4.98o (ddd, Leu α-H); 4.93* (dd, MeTrp α-H); 4.84* (ddd, PrLeu2 α-H); 4.78o (ddd, PrLeu2 α-H); 4.47* (dd, MeLeu α-H); 4.13* (ddd, Leu α-H); 3.8-3.5 (m); 3.72* o (2s, MeTrp N1'-Me); 3.69* (q, J = 7 Hz, MeAla α-H); 3.40o (s, MeAla N-Me); 3.28* (s, MeAla N-Me); 3.20 (dd, MeTrp β-Hb); 3.12* (dd, MeTrp β-Ha); 2.93* (s, MeTrp, N-Me); 2.53o (s, N-Me); 2.52* (s, MeLeu N-Me); 3.21o (s, N-Me); 2.25-2.08 (m, Hba γ-CH2, β-Ha); 1.92* (m, Hba β-Hb); 1.83-1.75 (m); 1.7-1.07 (m); 1.53*, 1.48o (2d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.04 (d, J = 6.5 Hz, MeLeu δ-Me); 0.97-0.84 (m); 0.53* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me) 0.28' (d); -0.17* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.53* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 33.
(3 конформера 80:14:6, помечены *, o, '): 8.48* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 8.06* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.94o (d, 10 Hz, PrLeu NH); 7.68* (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.54o (d, indole); 7.33* (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.31o (d, 8 Hz, indole); 7.22* (dd, indole H-6'); 7.1* (dd, indole H-5'); 7.53o (d, PrLeu NH); 6.93o (s, indole H-2'); 6.84* (s, indole H-2'); 6.26o (d, br, Leu NH); 6.05* (d, 7.5 Hz, Leu NH); 5.84' (d, Leu NH); 5.31o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.18* (dd, Hba α-H); 5.13o (dd, Hba α-H); 5.06* (ddd, PrLeu6 α-H); 4.99o (ddd, Leu α-H); 4.93* (dd, MeTrp α-H); 4.87* (ddd, PrLeu2 α-H); 4.8o (ddd, PrLeu2 α-H); 4.47* (dd, MeLeu α-H); 4.16* (ddd, Leu α-H); 4.1* (m, N-CH2); 3.78-3.57; 3.69* (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.47-2.90; 3.42o (s, MeAla N-Me); 3.32* (dd, MeTrp β-Ha); 3.3* (s, MeAla N-Me); 3.23* (dd, MeTrp β-Hb); 3.21o (s, N-Me); 3.06' (s, N-Me); 2.93* (s, MeTrp N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.52o (s, N-Me); 2.32-2.10; 1.93* (m, Hba γ-CHb); 1.83-1.08; 1.53* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.48o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.04* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.97-0.84; 0.52* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.26' (d, Leu δ″-Me); -0.17* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.55* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 34.
(3 конформера 71:24:5, помечены *, o и '): 8.50* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 8.06* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.94o (d, 10 Hz, PrLeu NH); 7.77o (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.72* (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.53o (d, 10 Hz, PrLeu NH); 7.40-7.05, 6.92o (s, indole H-2'); 6.88* (s, indole H-2'); 6.23o (d, 9.4 Hz, Leu NH); 6.09* (d, 7.4 Hz, Leu NH); 5.87' (d, Leu NH); 5.32o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.23* (AB; N1'-CH2); 5.20* (AB; N1'-CH2); 5.17* (dd, Hba α-H); 5.14o (dd, Hba α-H); 5.04* (ddd, PrLeu6 α-H); 4.99o (ddd, PrLeu2 α-H); 4.96* (dd, MeTrp α-H); 4.87* (ddd, PrLeu2 α-H); 4.78o (ddd, Leu α-H); 4.47* (dd, MeLeu α-H); 421* (ddd, Leu α-H); 3.76o (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.73-3.65, 3.67* (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.58o (dd, MeLeu α-H); 3.50-3.37, 3.42o (s, MeAla N-Me); 3.33* (dd, MeTrp β-Ha); 3.27* (s, MeAla N-Me); 3.23o (s, N-Me); 3.23* (dd, MeTrp β-Hb); 2.92* (s, MeTrp N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.52o (s, N-Me); 2.28-1.08; 1.53* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.49o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.06* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.98-0.82, 0.50' (d, Leu δ′-Me); 0.45* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.28' (d, Leu δ″-Me); -0.11* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.47* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 35.
(3 конформера 1:1:1): 8.62, 8.43, 8.07, 7.94, 7.87, 7.42 (6d, J = 10 Hz, NH); 7.12 (d, J = 7.4 Hz, indoline arom. H); 7.08-6.99 (m, indoline arom. H); 6.72, 6.69, (2dd indoline arom. H); 6.66-6.63 (m, indoline arom. H); 6.58 (d, J = 8 Hz, indoline arom. H); 6.29 (d, J = 8 Hz, Leu NH); 6.15 (m br, Leu NH); 5.88 (d, J = 8 Hz, Leu NH); 5.28-4.98 (m, α-H); 4.93 (ddd, α-H); 4.74 (ddd, α-H); 4.65 (m, α-H); 4.54 (dd, α-H); 4.43 (dd, α-H); 3.80-3.65 (m); 3.55-3.0 (m); 3.46, 3.35, 3.31, 3.24, 3.22, 3.12, 3.00, 2.82, 2.57 (9s, N-Me); 2.55-1.1 (m); 1.52, 1.48, 1.43 (3d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.13 (d, J = 7 Hz); 1.03-0.83 (m); 0.78, 0.76, 0.73 (3d, J = 6.5 Hz).
Пример 36.
(3 конформера 73: 23:4, помечены *, o и '): 8.53* (d, J = 10 Hz, PrLeu NH); 8.06* (d, J = 10 Hz, PrLeu' NH); 7.95o (d, J = 10 Hz, NH); 7.67*, 7.52o (2d, J = 7 Hz, indole H-4'); 7.55o (d, J = 10 Hz, NH); 7.33*, 7.31o (2d, J = 8 Hz, indole
H-7'); 7.19*, 7.17o (2dd, indole H-6'); 7.08*, 7.04o (2dd, indole H-5'); 6.98', 6.88o, 6.80* (3s, indole H-2'); 6.23o (d, J = 9.3 Hz, Leu NH); 6.05* (d, J = 7.5 Hz, Leu NH); 5.84' (d, Leu NH); 5.33o (ddd, PrLeu α-H); 5.18* (dd, Hba α-H); 5.14o (dd, Hba α-H); 5.05* (ddd, PrLeu α-H); 4.98o (ddd, Leu α-H); 4.93* (dd, indole α-H); 4.87* (ddd, PrLeu' α-H); 4.81o (ddd, Leu α-H); 4.47* (dd, MeLeu α-H); 4.22* (ddd Leu α-H); 3.86-3.67 (m); 3.83* (s, t-Bu-CH2-N); 3.69* (q, J = 7 Hz, MeAla α-H); 3.5-3.2 (m); 3.43o (s, MeAla N-Me); 3.30* (s, MeAla N-Me); 3.22o (s, N-Me); 2.93* (s, MeMeTrp, N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.53o (s, N-Me); 2.25 (m, Hba g-CH2); 2.18 (m, Hba β-Ha); 2.0-1.08 (m); 1.54*, 1.49o (2d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.05 (d, J = 6.5 Hz, MeLeu Me); 0.97-0.84 (m); 0.52* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); 0.28' (d); -0.06* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.49* (ddd, Leu γ-CH).
H-7'); 7.19*, 7.17o (2dd, indole H-6'); 7.08*, 7.04o (2dd, indole H-5'); 6.98', 6.88o, 6.80* (3s, indole H-2'); 6.23o (d, J = 9.3 Hz, Leu NH); 6.05* (d, J = 7.5 Hz, Leu NH); 5.84' (d, Leu NH); 5.33o (ddd, PrLeu α-H); 5.18* (dd, Hba α-H); 5.14o (dd, Hba α-H); 5.05* (ddd, PrLeu α-H); 4.98o (ddd, Leu α-H); 4.93* (dd, indole α-H); 4.87* (ddd, PrLeu' α-H); 4.81o (ddd, Leu α-H); 4.47* (dd, MeLeu α-H); 4.22* (ddd Leu α-H); 3.86-3.67 (m); 3.83* (s, t-Bu-CH2-N); 3.69* (q, J = 7 Hz, MeAla α-H); 3.5-3.2 (m); 3.43o (s, MeAla N-Me); 3.30* (s, MeAla N-Me); 3.22o (s, N-Me); 2.93* (s, MeMeTrp, N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.53o (s, N-Me); 2.25 (m, Hba g-CH2); 2.18 (m, Hba β-Ha); 2.0-1.08 (m); 1.54*, 1.49o (2d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.05 (d, J = 6.5 Hz, MeLeu Me); 0.97-0.84 (m); 0.52* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); 0.28' (d); -0.06* (d, J = 6.6 Hz, Leu Me); -0.49* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 37.
(3 конформера 78:19:3, помечены *, o, '): 8.52* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 8.06* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.94o (d, 10 Hz, PrLeu NH); 7.68* (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.53o (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.52o (d, 10 Hz, PrLeu NH); 7.36* (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.33o (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.2* (dd, indole H-6'); 7.17o (dd, indole H-6'); 7.09* (dd, indole H-5'); 7.05o (dd, indole H-5'); 7.02o (s, indole H-2'); 6.91* (s, indole H-2'); 6.23o (d, 9.5 Hz, Leu NH); 6.03* (d, 7.4 Hz, Leu NH); 5.87' (d, Leu NH); 5.32o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.18* (dd, Hba α-H); 5.14o (dd, Hba α-H); 5.05* (ddd, PrLeu6 α-H); 4.98o (ddd, PrLeu2 α-H); 4.93* (dd, MeTrp α-H); 4.87* (ddd, PrLeu2 α-H); 4.81o (ddd, Leu α-H); 4.60 (m, N-CH); 4.46* (dd, MeLeu α-H); 4.16* (ddd, Leu α-H); 3.75o (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.70 (m); 3.69* (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.57o (dd, MeLeu α-H); 3.45 (m); 3.42o (s, MeAla N-Me); 3.32* (dd, MeTrp β-Ha); 3.31* (s, MeAla N-Me); 3.23* (dd, MeTrp β-Hb); 3.21o (s, N-Me); 2.93* (s, MeTrp N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.50o (s, N-Me); 2.28 (AB-XY); 2.18 (AB-XY, Hba g-CH2); 2.13* (m, Hba γ-CHa); 1.93* (m, Hba γ-CHb); 1.85-1.08; 1.53* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.47 (m, N-CHMe2); 1.04* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.98-0.83; 0.52' (d, Leu δ′-Me); 0.51* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.34' (d, Leu δ″-Me); -0.2* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.60* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 38.
Индолин A (3 конформера 46:27:27, помечены *, o, o): 8.62* (d, J = 10 Hz, PrLeu NH); 8.13o (d, J = 10 Hz, NH); 8.02o (d, J = 10 Hz, NH); 7.92o (d, J = 10 Hz, NH); 7.86* (d, J = 10 Hz, PrLeu' NH); 7.40o (d, J = 10 Hz, NH); 7.23o, 7.16*, 7.09o (3d, J = 7.4 Hz, indoline arom. H); 7.05o, 7.02*, 7.02o (3dd, indoline arom. H); 6.76o, 6.72*, 6.71o (3dd, indoline arom. H); 6.64o, 6.62o, 6.58* (3d, J = 7.7 Hz, indoline arom. H); 6.32o (d, J = 8 Hz, Leu NH); 6.10o (m br, Leu NH); 5.94* (d, J = 9 Hz, Leu NH); 5.28-4.73 (m); 4.60o (dd, α-H); 4.13* (dd, α-H); 3.75-2.85 (m); 3.45*, 3.33o, 3.33*, 3.23o, 3.20o, 3.02*, 2.81o, 2.79o, 2.57o (9s, N-Me); 2.45-0.83 (m); 1.52o, 1.46o, 1.42* (3d, J = 7 Hz, MeAla β-Me).
Индолин B (3 конформ. 1:1:1): 8.62, 8.43, 8.07, 7.94, 7.87, 7.42 (6d, J = 10 Hz, NH); 7.12 (s, J = 7.4 Hz, indoline arom. H); 7.08-6.99 (m, indoline arom. H); 6.72, 6.69, (2dd indoline arom. H); 6.66-6.63 (m, indoline arom. H); 6.58 (d, J = 8 Hz, indoline arom. H); 6.29 (d, J = 8 Hz, Leu NH); 6.15 (m br, Leu NH); 5.88 (d, J = 8 Hz, Leu NH); 5.28-4.98 (m, α-H); 4.93 (ddd, α-H); 4.74 (ddd, α-H); 4.65 (m, α-H); 4.54 (dd, α-H); 4.43 (dd, α-H), 3.80-3.66 (m); 3.55-3.0 (m); 3.46, 3.35, 3.31, 3.24, 3.22, 3.12, 3.00, 2.82, 2.57 (9s, N-Me); 2.55-1.1 (m); 1.52, 1.48, 1.43 (3d, J = 7 Hz, MeAla β-Me); 1.13 (d, J = 7 Hz); 1.03-0.83 (m); 0.78, 0.76, 0.73 (3d, J = 6.5 Hz).
Пример 39.
(3 конформера 76:18:6, помечены *, o и '): 8.49* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 8.05* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.94o (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.67* (d, 8 Hz, indoie H-4'); 7.53o (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.52o (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.4* (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.38o (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.23* (dd, indoie H-6'); 7.19o (dd, indole H-6'); 7.11* (dd, indoie H-5'); 7.07o (dd, indole H-5'); 7.05o (s, indole H-2'); 7.01* (s, indole H-2'); 6.22o (d, br, Leu NH); 6.05* (d, 7.5 Hz, Leu NH); 5.84' (d, Leu NH); 5.31o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.19* (dd, Hba α-H); 5.16o (dd, Hba α-H); 5.04* (ddd, PrLeu6 α-H); 5.00o (ddd, PrLeu2 α-H); 4.94* (dd, MeTrp α-H); 4.87* (ddd, PrLeu2 α-H); 4.81o (ddd, Leu α-H); 4.67' (ddd, Leu α-H); 4.45* (dd, MeLeu α-H); 4.18* (ddd, Leu α-H); 4.14 (s, OPr); 3.80-3.55; 3.67* (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.50-3.40; 3.42o (s, N-Me); 3.29* (dd, MeTrp β-Ha); 3.27* (s, MeAla N-Me); 3.21o (s, N-Me); 3.18* (dd, MeTrp β-Hb); 3.04' (s, N-Me); 2.93* (s, MeTrp N-Me); 2.55o (s, N-Me); 2.53* (s, MeLeu N-Me); 2.30-1.90; 1.80 (m, OPr); 1.53* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.48o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.08o (t, OPr); 1.07 (t, OPr); 1.05* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.98-0.85; 0,59' (d, Leu δ′-Me); 0.57* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.37' (d, Leu δ″-Me); -0.07* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me).
Пример 40.
(3 конформера 73:21:6, помечены *, o, '): 8.49* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 8.05* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.94o (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.67* (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.53o (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.52o (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.4* (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.38o (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.23* (dd, indole H-6'); 7.19o (dd, indole H-6'); 7.11* (dd, indole H-5'); 7.07o (dd, indole H-5'); 7.05o (s, indole H-2'); 7.01* (s, indole H-2'); 6.22o (d, 9.4 Hz, Leu NH); 6.05* (d, 7.3 Hz, Leu NH); 5.86' (d, Leu NH); 5.31o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.19* (dd, Hba α-H); 5.16o (dd, Hba α-H); 5.03* (ddd, PrLeu6 α-H); 5o (ddd, PrLeu2 α-H); 4.94* (dd, MeTrp α-H); 4.87* (ddd, PrLeu2 α-H); 4.81o (ddd, Leu α- H); 4.65' (ddd, Leu α-H); 4.46* (dd, MeLeu α-H); 4.26* (q, OEt); 4.26o (q, OEt); 4.19* (ddd, Leu α-H); 3.80-3.56; 3.67* (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.45-3.33; 3.41o (s, MeAla N-Me); 3.29* (dd, MeTrp β-Ha); 3.27* (s, MeAla N-Me); 3.21o (s, N-Me); 3.19* (dd, MeTrp β-Hb); 3.04' (s, N-Me); 2.93* (s, MeTrp N-Me); 2.57o (s, N-Me); 2.52* (s, MeLeu N-Me); 2.32-1.08; 1.53* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.48o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.40o (t, OEt); 1.40* (t, OEt); 1.05* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.98-0.84; 0.60' (d, Leu δ′-Me); 0.57* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.37' (d, Leu δ″-Me); -0.07* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.36* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 41.
(3 конформера 63:32:5, помечены *, o, '): 8.45* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 8.06* (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.97o (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.90' (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 7.63* (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.56o (d, 10 Hz, PrLeu2 NH); 7.45o (d, 8 Hz, indole H-4'); 7.4* (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.38o (d, 8 Hz, indole H-7'); 7.23* (dd, indole H-6'); 7.22o (dd, indole H-6'); 7.13* (dd, indole H-5'); 7.08o (dd, indole H-5'); 6.2o (d, 10 Hz, Leu NH); 6.07* (d, 7.5 Hz, Leu NH); 5.77' (d, 8.5 Hz, Leu NH); 5.32o (ddd, PrLeu6 α-H); 5.26' (dd, Hba α-H); 5.2* (dd, Hba α-H); 5.16o (dd, Hba α-H); 5.03* (ddd, PrLeu6 α-H); 4.97* (dd, MeTrp α-H); 4.87* (ddd, PrLeu2 α-H); 4.67o (ddd, α-H); 4.46* (dd, MeLeu α-H); 4.13* (ddd, Leu α-H); 4.09* (s, N-OMe); 4.04' (s, N-OMe); 4.03o (s, N-OMe); 3.74o (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.71* (q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.70-3.60; 3.54-3.50; 3.47o (s, MeAla N-Me); 3.28-3.17; 3.25* (s, MeAla N-Me); 3.20o (s, N-Me); 2.97* (s, MeTrp N-Me); 2.52* (s, MeLeu N-Me); 2.42o (s, N-Me); 2.40-2.14; 1.97 (m); 1.79 (m); 1.65-1.08; 1.53* (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.5o (d, 7 Hz, MeAla β-Me); 1.04* (d, 6.5 Hz, MeLeu d-Me); 0.98-0.83; 0.62' (d, Leu δ′-Me); 0.57* (d, 6.6 Hz, Leu δ′-Me); 0.37' (d, Leu δ″-Me); -0.09* (d, 6.6 Hz, Leu δ″-Me); -0.35* (ddd, Leu γ-CH).
Пример 42.
(3 конфорнера 44: 30:26, помечены *, o и '): 8.85 (d. CSNH2); 8.60 (d, PrLeu6 NH); 8.17 (d, CSNH2); 8.03, 8.00 (2d, NH); 7.88 (m, CSNH2); 7.6-7.1; 6.28* (d, 10 Hz, Leu NH); 6.07o (d, 7 Hz, Leu NH); 5.87' (d, 9 Hz, Leu NH); 6.26* (ddd, PrLeu2 α-H), 5.22 (dd, Hba α-H); 5.15-4.95, 5.08*, (dd, Hba α-H); 4.83o (ddd, PrLeu2 α-H); 4.50* (ddd, Leu α-H); 4.37* (dd, MeTrp α-H); 4.25o (ddd, Leu α-H); 4.09, 4.05, 4.03* (3s, OMe); 3.89 (m, α-H); 3.65*, 3.63', 3.52o (3q, 7 Hz, MeAla α-H); 3.57 (m), 3.17, 3.16, 3.15, 3.22, 3.20, 3.05, 2.92, 2.55, 2.53 (9s, NMe); 1.8-1.1; 1.05 (d, 7 Hz); 0.99-0.82, 0.60o, 0.55', 0.23', 0.17o (4d, 7 Hz, Leu δ-Me); -0.15o, -0.17' (ddd, Leu γ-CH).
Claims (4)
1. Циклопептолид формулы I
где A обозначает остаток масляной кислоты, замещенной по α-гидроксильной группе, который может быть дополнительно замещен по γ-положению радикалом R6, обозначающим CN, COOR2, CONR3R4, COR5, CSNH2 или алкил, который может быть замещен азидогруппой, атомом галогена, алкоксигруппой, возможно защищенной гидроксильной или аминогруппой, винил, который может быть замещен алкилом, атомом галогена или CN-группой, циклоалкил, тетразолил или группу -C≡CH; где R2 обозначает водород или алкил, который может быть дополнительно замещен арилом, R3 и R4 - одинаковые или различные и обозначают водород или алкил либо образуют совместно с атомом азота кольцо, состоящее из от 3 до 6 атомов, которое может содержать второй гетероатом, а R5 обозначают водород или низший алкил;
B обозначает остаток α-амино-γ-метилзамещенной октановой кислоты;
R1 обозначает водород или метил;
С обозначает триптофан или N-метилтриптофан формулы VI
где R8 обозначает водород, алкоксигруппу, алкил или бензил;
R9 обозначает водород или галоген;
R10 обозначает водород или метил;
обозначает одинарную или двойную связь,
X обозначает остаток α-аминозамещенной (C2-C14)карбоновой кислоты, и Y обозначает остаток α-амино- или N-метил-α-аминозамещенной (C2-С10) карбоновой кислоты.
где A обозначает остаток масляной кислоты, замещенной по α-гидроксильной группе, который может быть дополнительно замещен по γ-положению радикалом R6, обозначающим CN, COOR2, CONR3R4, COR5, CSNH2 или алкил, который может быть замещен азидогруппой, атомом галогена, алкоксигруппой, возможно защищенной гидроксильной или аминогруппой, винил, который может быть замещен алкилом, атомом галогена или CN-группой, циклоалкил, тетразолил или группу -C≡CH; где R2 обозначает водород или алкил, который может быть дополнительно замещен арилом, R3 и R4 - одинаковые или различные и обозначают водород или алкил либо образуют совместно с атомом азота кольцо, состоящее из от 3 до 6 атомов, которое может содержать второй гетероатом, а R5 обозначают водород или низший алкил;
B обозначает остаток α-амино-γ-метилзамещенной октановой кислоты;
R1 обозначает водород или метил;
С обозначает триптофан или N-метилтриптофан формулы VI
где R8 обозначает водород, алкоксигруппу, алкил или бензил;
R9 обозначает водород или галоген;
R10 обозначает водород или метил;
обозначает одинарную или двойную связь,
X обозначает остаток α-аминозамещенной (C2-C14)карбоновой кислоты, и Y обозначает остаток α-амино- или N-метил-α-аминозамещенной (C2-С10) карбоновой кислоты.
5. Способ получения соединения по п.1, отличающийся тем, что проводят культивирование штамма гриба Bartalinia sp. NRRL 21123 в питательной среде с последующим выделением из среды указанного соединения.
6. Терапевтический состав, обладающий способностью ингибировать экспрессию молекул адгезии, включающий в качестве активного ингредиента соединение формулы I по п.1 в эффективном количестве и целевые добавки.
Приоритет по признакам:
27.07.94 - соединения, попадающие под формулу I, где R6 - возможно защищенные группы CH2OH, C3H6OH или -CH=CH2; R3 и R4 - образуют совместно с атомом азота 5 - или 6-членное кольцо; C- N-метилтриптофан, который может быть N'-(C1-C4)алкоксизамещенным;
03.03.95 - соединения подпадающие под формулу I, где R6 - алкил, который может быть замещен азидогруппой, атомом галогена, алкоксигруппой, возможно защищенным гидроксилом или аминогруппой, винил (может быть замещен алкилом, атомом галогена или CN-группой), циклоалкил, тетразолил или группа -C≡CH; R3 и R4 образуют вместе с атомом азота кольцо, состоящее из 3 - 6 атомов; C - N-метилтриптофан формулы
где R8 - атом водорода, алкоксигруппа, алкил или бензил;
R9 - атом водорода или галогена;
R10 - атом водорода или метил;
одинарная или двойная связь.
27.07.94 - соединения, попадающие под формулу I, где R6 - возможно защищенные группы CH2OH, C3H6OH или -CH=CH2; R3 и R4 - образуют совместно с атомом азота 5 - или 6-членное кольцо; C- N-метилтриптофан, который может быть N'-(C1-C4)алкоксизамещенным;
03.03.95 - соединения подпадающие под формулу I, где R6 - алкил, который может быть замещен азидогруппой, атомом галогена, алкоксигруппой, возможно защищенным гидроксилом или аминогруппой, винил (может быть замещен алкилом, атомом галогена или CN-группой), циклоалкил, тетразолил или группа -C≡CH; R3 и R4 образуют вместе с атомом азота кольцо, состоящее из 3 - 6 атомов; C - N-метилтриптофан формулы
где R8 - атом водорода, алкоксигруппа, алкил или бензил;
R9 - атом водорода или галогена;
R10 - атом водорода или метил;
одинарная или двойная связь.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB9415168A GB9415168D0 (en) | 1994-07-27 | 1994-07-27 | Organic compounds |
GB9415168.5 | 1994-07-27 | ||
GB9504332.9 | 1995-03-03 | ||
GBGB9504332.9A GB9504332D0 (en) | 1995-03-03 | 1995-03-03 | Organic compounds |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU97102700A RU97102700A (ru) | 1999-04-27 |
RU2155772C2 true RU2155772C2 (ru) | 2000-09-10 |
Family
ID=26305345
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU97102700/04A RU2155772C2 (ru) | 1994-07-27 | 1995-07-26 | Циклопептолид, штамм гриба, способ получения циклопептолида, терапевтический состав |
Country Status (26)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6013627A (ru) |
EP (1) | EP0775158B1 (ru) |
JP (1) | JP3425763B2 (ru) |
KR (1) | KR100378974B1 (ru) |
CN (1) | CN1116304C (ru) |
AT (1) | ATE187461T1 (ru) |
AU (1) | AU702332B2 (ru) |
BR (1) | BR9508342A (ru) |
CA (1) | CA2192786C (ru) |
CY (1) | CY2225B1 (ru) |
CZ (1) | CZ289311B6 (ru) |
DE (1) | DE69513837T2 (ru) |
DK (1) | DK0775158T3 (ru) |
ES (1) | ES2142490T3 (ru) |
FI (1) | FI970279A0 (ru) |
GR (1) | GR3032698T3 (ru) |
HK (1) | HK1014011A1 (ru) |
HU (1) | HUT77388A (ru) |
MX (1) | MX9606494A (ru) |
NO (1) | NO970340L (ru) |
NZ (1) | NZ291168A (ru) |
PL (1) | PL181990B1 (ru) |
PT (1) | PT775158E (ru) |
RU (1) | RU2155772C2 (ru) |
SK (1) | SK11797A3 (ru) |
WO (1) | WO1996003430A1 (ru) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6187757B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-02-13 | Ariad Pharmaceuticals, Inc. | Regulation of biological events using novel compounds |
US6011136A (en) * | 1995-11-21 | 2000-01-04 | Novartis Ag | Cyclopeptolides |
WO1999014082A1 (en) | 1996-09-18 | 1999-03-25 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Adhesively-bonded inflatable restraint and method of making |
US6365619B1 (en) | 1999-07-22 | 2002-04-02 | Novartis Ag | Treatment of arteriosclerosis |
US7067526B1 (en) | 1999-08-24 | 2006-06-27 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | 28-epirapalogs |
ES2219388T3 (es) * | 1999-08-24 | 2004-12-01 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | 28-epi-rapalogos. |
WO2002034283A2 (en) * | 2000-10-27 | 2002-05-02 | Novartis Ag | Vegh inhibitors and their use |
GB0028367D0 (en) * | 2000-11-21 | 2001-01-03 | Celltech Chiroscience Ltd | Chemical compounds |
GB0101598D0 (en) * | 2001-01-22 | 2001-03-07 | Novartis Ag | Organic compounds |
EP1594459B1 (en) | 2002-12-30 | 2010-02-17 | Angiotech International Ag | Drug delivery from rapid gelling polymer composition |
CA2711765A1 (en) | 2008-01-11 | 2009-07-16 | Massachusetts Eye & Ear Infirmary | Conditional-stop dimerizable caspase transgenic animals |
CA2905229C (en) | 2013-06-11 | 2023-10-10 | Clontech Laboratories, Inc. | Protein enriched microvesicles and methods of making and using the same |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4443367A (en) * | 1982-04-08 | 1984-04-17 | Monsanto Company | Peptide and peptolide substrates for mammalian collagenase |
US4425428A (en) * | 1982-04-08 | 1984-01-10 | Monsanto Company | Novel peptide and peptolide substrates for mammalian collagenase |
ATE110784T1 (de) * | 1987-06-19 | 1994-09-15 | Sandoz Ag | Zyklische peptolide. |
DE3832059A1 (de) * | 1988-09-21 | 1990-03-29 | Howaldtswerke Deutsche Werft | Tauchtiefengesteuerte ausblasventil-einrichtung |
DE3832362A1 (de) * | 1988-09-23 | 1990-03-29 | Sandoz Ag | Neue cyclopeptolide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
-
1995
- 1995-07-26 CZ CZ1997221A patent/CZ289311B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 NZ NZ291168A patent/NZ291168A/en unknown
- 1995-07-26 PL PL95317349A patent/PL181990B1/pl unknown
- 1995-07-26 RU RU97102700/04A patent/RU2155772C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 DE DE69513837T patent/DE69513837T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 KR KR1019970700504A patent/KR100378974B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 PT PT95928473T patent/PT775158E/pt unknown
- 1995-07-26 DK DK95928473T patent/DK0775158T3/da active
- 1995-07-26 ES ES95928473T patent/ES2142490T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-07-26 AT AT95928473T patent/ATE187461T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 SK SK117-97A patent/SK11797A3/sk unknown
- 1995-07-26 AU AU32221/95A patent/AU702332B2/en not_active Ceased
- 1995-07-26 BR BR9508342A patent/BR9508342A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-07-26 CN CN95194370A patent/CN1116304C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 CA CA002192786A patent/CA2192786C/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 WO PCT/EP1995/002966 patent/WO1996003430A1/en active IP Right Grant
- 1995-07-26 EP EP95928473A patent/EP0775158B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-07-26 HU HU9700226A patent/HUT77388A/hu unknown
- 1995-07-26 JP JP50548596A patent/JP3425763B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 US US08/776,440 patent/US6013627A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 MX MX9606494A patent/MX9606494A/es not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-01-23 FI FI970279A patent/FI970279A0/fi unknown
- 1997-01-27 NO NO970340A patent/NO970340L/no unknown
-
1998
- 1998-12-23 HK HK98115157A patent/HK1014011A1/xx unknown
-
2000
- 2000-02-18 GR GR20000400396T patent/GR3032698T3/el unknown
-
2001
- 2001-06-08 CY CY0100011A patent/CY2225B1/xx unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CZ22197A3 (en) | 1997-05-14 |
EP0775158B1 (en) | 1999-12-08 |
GR3032698T3 (en) | 2000-06-30 |
DK0775158T3 (da) | 2000-05-22 |
WO1996003430A1 (en) | 1996-02-08 |
CZ289311B6 (cs) | 2001-12-12 |
BR9508342A (pt) | 1997-10-21 |
FI970279A (fi) | 1997-01-23 |
AU3222195A (en) | 1996-02-22 |
JP3425763B2 (ja) | 2003-07-14 |
KR100378974B1 (ko) | 2003-10-08 |
FI970279A0 (fi) | 1997-01-23 |
US6013627A (en) | 2000-01-11 |
NZ291168A (en) | 1998-06-26 |
AU702332B2 (en) | 1999-02-18 |
CA2192786C (en) | 2009-06-16 |
HK1014011A1 (en) | 1999-09-17 |
CN1116304C (zh) | 2003-07-30 |
SK11797A3 (en) | 1997-07-09 |
JPH10504540A (ja) | 1998-05-06 |
CY2225B1 (en) | 2003-04-18 |
DE69513837T2 (de) | 2000-05-18 |
NO970340D0 (no) | 1997-01-27 |
PL317349A1 (en) | 1997-04-01 |
PT775158E (pt) | 2000-05-31 |
DE69513837D1 (de) | 2000-01-13 |
MX9606494A (es) | 1997-03-29 |
PL181990B1 (pl) | 2001-10-31 |
ES2142490T3 (es) | 2000-04-16 |
NO970340L (no) | 1997-01-27 |
EP0775158A1 (en) | 1997-05-28 |
HUT77388A (hu) | 1998-04-28 |
ATE187461T1 (de) | 1999-12-15 |
CN1154705A (zh) | 1997-07-16 |
CA2192786A1 (en) | 1996-02-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA1335083C (en) | Fr901228 substance and preparation thereof | |
RU2155772C2 (ru) | Циклопептолид, штамм гриба, способ получения циклопептолида, терапевтический состав | |
US6512099B2 (en) | Roselipin derivative | |
DE68921128T2 (de) | Pipocolinsäure enthaltende cyclische Peptolide, ihre Herstellung und sie enthaltende Zusammensetzungen. | |
KR930003107B1 (ko) | 항종양 항생물질 화합물 | |
WO1995006649A1 (en) | Macrolides as antagonists of macrophilin binding immunosuppressants | |
EP0866801B1 (en) | Cyclopeptolides | |
JP7057945B2 (ja) | 上皮間葉転換誘導細胞阻害剤 | |
US6251885B1 (en) | Cytotrienins, process for preparing the same and anti-tumor agent | |
WO1996006847A1 (en) | Process for preparing demethylrapamycins | |
KR100224476B1 (ko) | 신균주 곰팡이 슈달레세리아 속 mt60109(kctc 8804p)와 포스포리파제 c 활성저해용 조성물 | |
KR830002249B1 (ko) | 신규 항생 활성화합물 및 그것의 발효적 제조 | |
US6620938B1 (en) | Compounds that inhibit GRB2-SHC binding and process for preparing same | |
EP1740566A1 (de) | Hki10311129, neues antibiotikum, verfahren zu dessen herstellung und dessen verwendung | |
JPH06343480A (ja) | Sf2315aの製造法及びその薬学的用途 | |
JPH08301862A (ja) | Penicillium種の抗生物質シリアノンおよびその化学誘導体並びにその製造法および使用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20030727 |