HUT77388A - Ciklopeptolidok és gyógyszerkészítményekben való felhasználásuk - Google Patents
Ciklopeptolidok és gyógyszerkészítményekben való felhasználásuk Download PDFInfo
- Publication number
- HUT77388A HUT77388A HU9700226A HU9700226A HUT77388A HU T77388 A HUT77388 A HU T77388A HU 9700226 A HU9700226 A HU 9700226A HU 9700226 A HU9700226 A HU 9700226A HU T77388 A HUT77388 A HU T77388A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- formula
- compounds
- leu
- hydrogen
- alkyl
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 221
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 56
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 56
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 48
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 44
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical group [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 206010029897 Obsessive thoughts Diseases 0.000 claims description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 34
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- -1 cyano, thiocarbamoyl Chemical group 0.000 claims description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 27
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 18
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 17
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 17
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical group 0.000 claims description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 14
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 13
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 13
- VDCLCAXYTCLVQY-CTVGSUQISA-N 2-[(3s,6s,9s,15s,18s,21s,24s,27s)-15,18-di(butan-2-yl)-6-[(4-methoxyphenyl)methyl]-3,10,16,19,22,28-hexamethyl-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-decaoxo-9,24,27-tri(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28-decazabicyclo[28.4.0]tetratriacontan-21-yl]acetic acid Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N2CCCCC2C(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N(C)[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N(C)[C@@H](C(C)CC)C(=O)N(C)[C@H](C(NCC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)N1)=O)C(C)CC)C(C)C)C1=CC=C(OC)C=C1 VDCLCAXYTCLVQY-CTVGSUQISA-N 0.000 claims description 12
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 9
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 claims description 9
- CZCIKBSVHDNIDH-NSHDSACASA-N N(alpha)-methyl-L-tryptophan Chemical group C1=CC=C2C(C[C@H]([NH2+]C)C([O-])=O)=CNC2=C1 CZCIKBSVHDNIDH-NSHDSACASA-N 0.000 claims description 8
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 claims description 8
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 claims description 8
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 8
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 claims description 8
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 8
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 6
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 6
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 5
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 claims description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 5
- 125000005473 octanoic acid group Chemical class 0.000 claims description 5
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical class CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N Diazomethane Chemical compound C=[N+]=[N-] YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 claims description 4
- MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N boron;methylsulfanylmethane Chemical compound [B].CSC MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 4
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 4
- PTXVSDKCUJCCLC-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxyindole Chemical compound C1=CC=C2N(O)C=CC2=C1 PTXVSDKCUJCCLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 3
- 125000003107 substituted aryl group Chemical group 0.000 claims description 3
- AFENDNXGAFYKQO-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybutyric acid Chemical group CCC(O)C(O)=O AFENDNXGAFYKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N N-methyl-L-alanine Chemical compound C[NH2+][C@@H](C)C([O-])=O GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N N-methyl-L-valine Chemical group CN[C@@H](C(C)C)C(O)=O AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 2
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 claims description 2
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 2
- CLUOCCWZZAGLPM-UHFFFAOYSA-N diphenyl-sulfanyl-sulfanylidene-$l^{5}-phosphane Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=S)(S)C1=CC=CC=C1 CLUOCCWZZAGLPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000005982 diphenylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 230000002140 halogenating effect Effects 0.000 claims description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 claims description 2
- 229910052987 metal hydride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000004681 metal hydrides Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 2
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 claims description 2
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 claims description 2
- 150000002902 organometallic compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 claims description 2
- 150000003463 sulfur Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 claims description 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims 4
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 claims 2
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 claims 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 claims 1
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 claims 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims 1
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 claims 1
- NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N ethyl (e)-3-[3-amino-2-cyano-1-[(e)-3-ethoxy-3-oxoprop-1-enyl]sulfanyl-3-oxoprop-1-enyl]sulfanylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C\SC(=C(C#N)C(N)=O)S\C=C\C(=O)OCC NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 claims 1
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 claims 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 claims 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 342
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 166
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 166
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 153
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 108
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 84
- XJODGRWDFZVTKW-LURJTMIESA-N (2s)-4-methyl-2-(methylamino)pentanoic acid Chemical group CN[C@H](C(O)=O)CC(C)C XJODGRWDFZVTKW-LURJTMIESA-N 0.000 description 66
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 56
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 44
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 44
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 44
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 39
- BKBMACKZOSMMGT-UHFFFAOYSA-N methanol;toluene Chemical compound OC.CC1=CC=CC=C1 BKBMACKZOSMMGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 34
- SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybutyric acid Chemical compound OCCCC(O)=O SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 31
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 26
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 25
- 102000015271 Intercellular Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 description 25
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 22
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 18
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 15
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 15
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 15
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 15
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethyl-3-carbazolamine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108010024212 E-Selectin Proteins 0.000 description 12
- 102100023471 E-selectin Human genes 0.000 description 12
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 12
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 12
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 description 11
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 11
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 11
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 11
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 9
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 7
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 6
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000008259 solid foam Substances 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 5
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical class O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- HZNVUJQVZSTENZ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone Chemical compound ClC1=C(Cl)C(=O)C(C#N)=C(C#N)C1=O HZNVUJQVZSTENZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 4
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 4
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003039 volatile agent Substances 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- FJJYHTVHBVXEEQ-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropanal Chemical compound CC(C)(C)C=O FJJYHTVHBVXEEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000351901 Bartalinia Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N N-Butyllithium Chemical compound [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 229950005499 carbon tetrachloride Drugs 0.000 description 2
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- NKLCNNUWBJBICK-UHFFFAOYSA-N dess–martin periodinane Chemical compound C1=CC=C2I(OC(=O)C)(OC(C)=O)(OC(C)=O)OC(=O)C2=C1 NKLCNNUWBJBICK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASWXNYNXAOQCCD-UHFFFAOYSA-N dichloro(triphenyl)-$l^{5}-phosphane Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(Cl)(C=1C=CC=CC=1)(Cl)C1=CC=CC=C1 ASWXNYNXAOQCCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 2
- 210000004925 microvascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- WRIKHQLVHPKCJU-UHFFFAOYSA-N sodium bis(trimethylsilyl)amide Chemical compound C[Si](C)(C)N([Na])[Si](C)(C)C WRIKHQLVHPKCJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- HJUGFYREWKUQJT-UHFFFAOYSA-N tetrabromomethane Chemical compound BrC(Br)(Br)Br HJUGFYREWKUQJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AQRLNPVMDITEJU-UHFFFAOYSA-N triethylsilane Chemical compound CC[SiH](CC)CC AQRLNPVMDITEJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 2
- AFENDNXGAFYKQO-VKHMYHEASA-N (S)-2-hydroxybutyric acid Chemical group CC[C@H](O)C(O)=O AFENDNXGAFYKQO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- APISVOVOJVZIBA-UHFFFAOYSA-N 2-(triphenyl-$l^{5}-phosphanylidene)acetonitrile Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)(=CC#N)C1=CC=CC=C1 APISVOVOJVZIBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(diethylamino)-3-(diethyliminiumyl)-3h-xanthen-9-yl]-5-sulfobenzene-1-sulfonate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YSEQNZOXHCKLOG-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-octanoic acid Chemical compound CCCCCCC(C)C(O)=O YSEQNZOXHCKLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000243818 Annelida Species 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001027553 Bos taurus Fibronectin Proteins 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006519 CCH3 Chemical group 0.000 description 1
- BCSPHBIPNKBQGL-UHFFFAOYSA-N CO.O.F.F.F Chemical compound CO.O.F.F.F BCSPHBIPNKBQGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100095895 Drosophila melanogaster sle gene Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 description 1
- 108010008212 Integrin alpha4beta1 Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 101710128836 Large T antigen Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMOVVBIIQSXZSZ-UHFFFAOYSA-N [6-(4-acetyloxy-5,9a-dimethyl-2,7-dioxo-4,5a,6,9-tetrahydro-3h-pyrano[3,4-b]oxepin-5-yl)-5-formyloxy-3-(furan-3-yl)-3a-methyl-7-methylidene-1a,2,3,4,5,6-hexahydroindeno[1,7a-b]oxiren-4-yl] 2-hydroxy-3-methylpentanoate Chemical compound CC12C(OC(=O)C(O)C(C)CC)C(OC=O)C(C3(C)C(CC(=O)OC4(C)COC(=O)CC43)OC(C)=O)C(=C)C32OC3CC1C=1C=COC=1 OMOVVBIIQSXZSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ITLHXEGAYQFOHJ-UHFFFAOYSA-N [diazo(phenyl)methyl]benzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=[N+]=[N-])C1=CC=CC=C1 ITLHXEGAYQFOHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037919 acquired disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 238000010504 bond cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000006364 carbonyl oxy methylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])OC([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 210000003040 circulating cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- FAMRKDQNMBBFBR-BQYQJAHWSA-N diethyl azodicarboxylate Substances CCOC(=O)\N=N\C(=O)OCC FAMRKDQNMBBFBR-BQYQJAHWSA-N 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- NJSUFZNXBBXAAC-UHFFFAOYSA-N ethanol;toluene Chemical compound CCO.CC1=CC=CC=C1 NJSUFZNXBBXAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 1
- FAMRKDQNMBBFBR-UHFFFAOYSA-N ethyl n-ethoxycarbonyliminocarbamate Chemical compound CCOC(=O)N=NC(=O)OCC FAMRKDQNMBBFBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- JUINSXZKUKVTMD-UHFFFAOYSA-N hydrogen azide Chemical compound N=[N+]=[N-] JUINSXZKUKVTMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- LPAGFVYQRIESJQ-UHFFFAOYSA-N indoline Chemical compound C1=CC=C2NCCC2=C1 LPAGFVYQRIESJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000009940 knitting Methods 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- VXWPONVCMVLXBW-UHFFFAOYSA-M magnesium;carbanide;iodide Chemical compound [CH3-].[Mg+2].[I-] VXWPONVCMVLXBW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N methanol;propan-2-one Chemical compound OC.CC(C)=O NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSEFCHWGJNHZNT-UHFFFAOYSA-M methyl(triphenyl)phosphanium;bromide Chemical compound [Br-].C=1C=CC=CC=1[P+](C=1C=CC=CC=1)(C)C1=CC=CC=C1 LSEFCHWGJNHZNT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 125000006518 morpholino carbonyl group Chemical group [H]C1([H])OC([H])([H])C([H])([H])N(C(*)=O)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 239000010813 municipal solid waste Substances 0.000 description 1
- PVWOIHVRPOBWPI-UHFFFAOYSA-N n-propyl iodide Chemical compound CCCI PVWOIHVRPOBWPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 231100001221 nontumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- LXNAVEXFUKBNMK-UHFFFAOYSA-N palladium(II) acetate Substances [Pd].CC(O)=O.CC(O)=O LXNAVEXFUKBNMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L palladium(ii) acetate Chemical compound [Pd+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004742 propyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000006798 ring closing metathesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- ODZPKZBBUMBTMG-UHFFFAOYSA-N sodium amide Chemical compound [NH2-].[Na+] ODZPKZBBUMBTMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran thf Chemical compound C1CCOC1.C1CCOC1 WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004299 tetrazol-5-yl group Chemical group [H]N1N=NC(*)=N1 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N tributylstannane Chemical compound CCCC[SnH](CCCC)CCCC DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K11/02—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof cyclic, e.g. valinomycins ; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Botany (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
Description
A találmány tárgyát ciklopeptolidok, valamint adhéziós (a sejtek felületére tapadó) molekulák expressziójának inhibitoraként történő gyógyászati felhasználásuk képezi.
A sejtek felületére tapadó olyan molekulák, mint például az ICAM-1, VCAM-1 és az E-selectin a gyulladást közvetítő (mediáló) molekulák (ideértve a TNFcy, IFN-^ζ ILI és LPS molekulákat) hatására adott válaszként expresszálódnak az endoteliális (belhám) sejtek felületén, illetve az ICAM-1 a keratinociták felületén is expresszálódik. A megfelelő ellen-ligandumok, például az LFA-1, VLA-4 és az SLEX a vérben keringő sejtek felszínén expresszálódnak. A gyulladásos folyamatok esetében a leukociták transzendoteliális migrációját illetve az éren kívüli (extravaszkuláris) sejt-sejt kölcsönhatásokat az ezen adhéziós molekulák és azok ellen-ligandumjai közötti kölcsönhatások szabályozzák. Ennek értelmében az adhéziós molekulák expresszióját gátló anyagok lehetőséget nyújtanak számos betegség kezelésére. Jelenleg azonban nem rendelkezünk az adhéziós molekulák expresszióját gátló kis molekulatömegű inhibitorokkal.
A ciklopeptolidok gyűrűs szerkezetű molekulák, amelyek egymással peptidkötéssel kapcsolódó olyan aminosav-maradékokból állnak, amelyek között legalább egy hidroxi-szubsztituált aminosav-maradék található, amelynek hidroxi-szubsztituense észterkötéssel kapcsolódik a szomszédos savmaradékhoz.
Azt találtuk, hogy létezik a ciklopeptolidoknak egy olyan új osztálya, amely gátolja az ICAM-1, VCAM-1 és E-selectin molekulák expresszióját.
A találmány tárgyát képezik az (I) általános képletű ►
··· ···· · · cikloheptapeptolidok — amely képletben
A jelentése egy adott esetben helyzetben Rg csoporttal szubsztituált a-hidroxi-vaj sav-maradék, ahol Rg jelentése -COOR2, -CONR3R4 vagy -CORg általános képletű csoport, illetve ciano-, tiokarbamoil- vagy alkilcsoport, amely utóbbi szubsztituált lehet halogénatommal, azido-, alkoxi-, adott esetben védett hidroxi- vagy aminocsoporttál, vinilcsoport, amely szubsztituált lehet halogénatommal, továbbá ciano-, vagy alkilcsoporttal, cikloalkil-, tetrazolil- vagy etinilcsoport, és a fenti általános képletű csoportokban
R2 jelentése hidrogénatom vagy adott esetben arilcsoporttal szubsztituált alkilcsoport;
R3 és R4 azonosak vagy különbözők, és jelentésük hidrogénatom vagy alkilcsoport, vagy a nitrogénatommal együtt 3-6 tagú, adott esetben még egy másik heteroatomot is tartalmazó gyűrűt képezhetnek, és
Rg jelentése hidrogénatom vagy kis szénatomszámú alkilcsoport;
B jelentése egy a-amino- T -metil-szubsztituált oktánsav-maradék;
R^ jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;
C jelentése triptofán vagy egy (VI) általános képletű N-metil-triptofán-maradék, amely képletben
Rg jelentése hidrogénatom, alkoxi-, alkil- vagy benzil4
-csoport,
Rg jelentése hidrogénatom vagy halogénatom,
R10 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, és --- jelentése egyes vagy kettős kötés;
X jelentése egy α-amino-szubsztituált, 2-től 14-ig terjedő szénatomszámú karbonsav-maradék; és
Y jelentése egy a-amino- vagy N-metil-a-amino-szubsztituált, 2-től 10-ig terjedő szénatomszámú karbonsav-maradék.
Az (I) általános képletben az aminosav-maradékok C-terminálisának az N-terminális felé mutató iránya megegyezik az óramutató járásával, és a peptolid észterkötés az A és az Y maradékok között jön létre. Ha R-j. jelentése metilcsoport, akkor az R-^-Leu jelentése N-metil-leucin, és Leu jelentése leucin.
A jelentése előnyösen olyan α-hidroxi-vajsav-maradék, amely ^-helyzetben cianocsoporttal vagy -COOR'2 általános képletű csoporttal — ahol R'2 jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy difenil-metil-csoport —, továbbá -CONR'3R'4 általános képletű csoporttal — ahol R'3 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport és R'4 jelentése hidrogénatom vagy alkilcsoport, vagy R'3 és R'4 a nitrogénatommal együtt 3-6 tagú gyűrűt vagy morfolinocsoportot képeznek — továbbá hidroxi-metil- vagy -COR'3 általános képletű csoporttal — ahol R'5 jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport —, adott esetben brómatommal, ciano- vagy 1-4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituált vinilcsoporttal, adott esetben klóratommal, azido-, amino-, hidroxi- vagy alkoxicsoporttal szubsztituált alkilcsoporttal, továbbá tetrazolil-, ciklopro► pil-, tiokarbamoil- vagy etinilcsoporttal szubsztituált.
C jelentése előnyösen egy (VI) általános képletű N-metil-triptofán-maradék, amely képletben Rg jelentése hidrogénatom,
1- 4 szénatomos alkoxicsoport, különösen metoxicsoport vagy alkilcsoport, és Rg jelentése hidrogénatom vagy halogénatom.
X jelentése előnyösen egy a-amino-szubsztituált, 4-től
8-ig terjedő szénatomszámú karbonsav-maradék, amely adott esetben β- vagy ^-helyzetben 1-4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituált. X jelentése legelőnyösebben egy a-amino-βvagy ^-(1-4 szénatomos alkil)-, különösen metil-oktánsav vagy -vaj sav-maradék.
Y jelentése előnyösen egy N-metil-a-amino-szubsztituált
2- 4 szénatomos karbonsav-maradék, amely adott esetben β- vagy ^-helyzetben 1-4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituált. Y jelentése legelőnyösebben egy N-metil-alanin vagy N-metil-va1in-maradék.
Az (I) általános képletű vegyületek aszimmetrikus szénatomokat tartalmaznak, amelyek vagy R vagy S konfigurációjúak.
Az (I) általános képletű nyíltláncú peptidek és peptolidok egyaránt a találmány tárgyát képezik; például a nyílt láncú molekulákat vagy az Y és A maradékok közötti észterkötés hasításával vagy két szomszédos savmaradék közötti peptidkötés hasításával lehet előállítani. Előnyös nyílt láncú származékok a (IV) és (V) általános képletű vegyületek, amelyek képletében R-y jelentése hidrogénatom vagy alkilcsoport.
A találmány szerinti vegyületek előnyös alcsoportját képezik az (Ip) általános képletű vegyületek — amely képletben ►
Ap jelentése egy adott esetben ^-helyzetben Rgp csoporttal szubsztituált α-hidroxi-vaj sav-maradék, ahol Rgp jelentése ciano-, adott esetben védett hidroxi-metilvagy vinil-, illetve -COOR2p, -CONR2pR4p vagy -CORgp általános képletű csoport, ahol
R2p jelentése hidrogénatom vagy adott esetben árucsoporttal szubsztituált alkilcsoport,
R3p és R4p azonosak vagy különbözők, és jelentésük nitrogénatom, alkilcsoport vagy a nitrogénatommal együtt egy 5- vagy 6-tagú, adott esetben egy második heteroatomot is tartalmazó gyűrűt képeznek, és
R5p jelentése hidrogénatom vagy kis szénatomszámű alkilcsoport,
Bp jelentése egy a-amino- T -metil-szubsztituált oktánsav-maradék,
R-^p jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport,
Cp jelentése egy triptofán vagy N-metil-triptofán-maradék, amely adott esetben Ν'-(1-4 szénatomos alkoxicsoporttal) szubsztituált,
Xp jelentése egy a-amino-szubsztituált(2-4 szénatomos karbonsav)-maradék, és
Yp jelentése egy α-amino- vagy N-metil-a-amino-szubsztituált(2-10 szénatomos karbonsav)-maradék.
A találmány szerinti vegyületek egy másik alcsoportját képezik az (I'p) általános képletű vegyületek — amely képletben
A'p jelentése egy α-hidroxi-szubsztituált vaj savmaradék, amely adott esetben ^-helyzetben R'gp csoporttal szubsztituált,
- Ί amelynek jelentése cianocsoport vagy -COOR'2p -CONR'3pR'4p vagy -COR'5p általános képletű csoport, továbbá alkilcsoport, amely szubsztituált lehet halogénatommal, azido- vagy alkoxicsoporttal, adott esetben védett hidroxi- vagy aminocsoport, azután vinilcsoport, amely szubsztituált lehet halogénatommal, alkil- vagy cianocsoporttal, továbbá cikloalkil-, tetrazolil- vagy etinilcsoport, ahol R'2p jelentése hidrogénatom vagy adott esetben arilcsoporttal szubsztituált alkilcsoport, R'3p és R'4p azonosak vagy különbözők, és jelentésük hidrogénatom, alkilcsoport vagy a nitrogénatommal együtt 5- vagy 6-tagú, adott esetben egy második heteroatomot is tartalmazó gyűrűt képeznek, és R'5p jelentése hidrogénatom vagy kis szénatomszámú alkilcsoport,
B'p jelentése egy a-amino- T -metil-szubsztituált oktánsav-maradék,
R'lp jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport,
C'p jelentése triptofán- vagy (VI1p) általános képletű, N-metil-triptofán-maradék, amely képletben
R'8p jelentése hidrogénatom, alkoxi-, alkil- vagy benzil-csoport,
R'gp jelentése hidrogénatom vagy halogénatom,
R'lOp jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, és ----- jelentése egyes vagy kettős kötés;
X'p 3 elentése egy a-amino-szubsztituált(2-14 szénatomos karbonsav) -maradék; és
Y'p jelentése egy α-amino- vagy N-metil-a-amino-szubsztituált
-(2-10 szénatomos karbonsav)-maradék.
« «
Szintén a találmány tárgyát képezi valamennyi találmány szerinti vegyület akár szabadon, akár só vagy észter formájában fordulnak is elő.
A (II) és (III) képletű vegyületeket (amelyeket a továbbiakban A és B vegyületként említünk) az F92-4471/08 jelű gombatörzs fermentlevéből izoláltuk; magát a gombatörzset Argentínában, La Plata közelében izoláltuk egy levelekből álló hulladékmintából, és a Bartalinia genus tagjaként határoztuk meg. Az F92-4471/08 jelű törzsmintát 1993. július 2-án helyeztük letétbe a Budapesti szerződés rendelkezései szerint az Amerikai Egyesült Államok Mezőgazdasági Minisztériumának (US Department of Agriculture) NRRL törzsgyüjteményében, azonosítási száma: NRRL 21123. Az F92-4471/08 jelű gombatörzs jellemzőit az 1. kiviteli példában ismertetjük.
| A találmány tárgyát képezi | az | F92-4471/08 | (NRRL 21123 | ||
| jelű törzs | izolált | formájában, | továbbá annak | mutánsai | és |
| változatai, | valamint | az ezen törzs | által termelt | összes | új |
ciklopeptolid.
Az A és B vegyületek és a velük rokon vegyületek az F92-4471/08 (NRRL 21123) vagy annak egy mutánsa vagy változata tápoldatban történő tenyésztésével állíthatók elő, és abból különíthetők el például a 2. kiviteli példában ismertetett módon.
Az A és B vegyületek jellemzését a 3. kiviteli példában adj uk meg.
A találmány szerinti vegyületeket az A és B vegyületekből származékok képzésével állíthatjuk elő, ami a következő műveletekből áll:
• · · · « * · # • · · ··· ···· ····
a) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése -COOR'2 általános képletű csoport, ahol R'2 jelentése adott esetben arilcsoporttal szubsztituált alkilcsoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése cianocsoport — nukleofilékké1, előnyösen egy alkohollal reagáltatunk megfelelő bázikus vagy savas katalizátor, előnyösen sósav jelenlétében, szerves oldószerben, előnyösen dietil-éterben; vagy
b) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése -CO-alkil — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése cianocsoport — nukleofil fémorganikus vegyületekkel, előnyösen Grignard vegyületekkel vagy lítium-alkil vegyületekkel reagáltatunk aprótikus szerves oldószerekben, előnyösen éterekben, katalizátor jelenlétében vagy anélkül ; vagy
c) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése karboxicsoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése -COO-alkil-csoport — ásványi savval, előnyösen vizes-alkoholos oldatban sósavval, vagy bázissal hidrolizálunk;
vagy
d) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése -COOR'2 általános képletű csoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése karboxicsoport — sztenderd módsze»
-lőrékkel észteresítünk, előnyösen például úgy, hogy szulfinil-dikloriddal savkloriddá alakítjuk, amelyet azután megfelelő savmegkőtő jelenlétében vagy anélkül a megfelelő alkohollal reagáltatunk; vagy
e) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése hidroxi-metil-csoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése -COOR2 általános képletű csoport — fém-hidridekkel vagy bór-hidridekkel, előnyösen borán-dimetil-szulfid-komplexszel, szerves oldószerben redukálunk; vagy
f) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése -CONR3R4 általános képletű csoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése -COOR2 általános képletű csoport — aminokkal reagáltatunk; előnyösen úgy járunk el, hogy a szabad karbonsavat savkloriddá alakítjuk, és azt reagáltatjuk egy HNR3R4 általános képletű aminnal; vagy
g) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése formilcsoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése hidroxi-metil-csoport — oxidálunk; vagy
h) olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben
Rg jelentése adott esetben szubsztituált vinilcsoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése formilcsoport — egy metil-Wittig reagenssel viszünk reakcióba; vagy
i) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése adott esetben szubsztituált >
»··
- 11 alkilcsoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése hidroxi-metil-csoport — reagáltatunk; vagy
j) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése amino-metil-csoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése azido-metil-csoport — redukálunk; vagy
k) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése etinil-csoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése 2,2-dibróm-vinil-csoport — reagáltatunk; vagy
l) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése ciklopropilcsoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése vinilcsoport — diazo-metánnal reagáltatunk;
vagy
m) olyan (I) általános képletű .vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése tetrazolilcsoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése cianocsoport — egy azid-vegyülettel reagáltatunk; vagy
n) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése hidrogénatom — olyan (I) általános képletű vegyületekből — amelyekben Rg jelentése metoxicsoport — ezt a csoportot eltávolítjuk; vagy
o) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben crccc, jelentése egyes kötés — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben ---- jelentése kettős kötés — redukálunk; vagy • ·
- 12 p) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése alkil- vagy benzilcsoport — olyan (I) általános képletű vegyületekbe — amelyekben Rg jelentése hidrogénatom — ezeket a csoportokat visszük;
vagy
q) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése halogénatom — halogénezzük azokat az (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Rg jelentése hidrogénatom; vagy
r) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése alkoxicsoport, és ---- jelentése kettős kötés — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg jelentése hidrogénatom, és ---- jelentése egyes kötés — alkáli-[tetraoxo-volframát(VI)]-tál és hidrogén-peroxiddal reagáltatunk, azután pedig az N-hidroxi-indol köztiterméket alkilezzük; vagy
s) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén — amelyekben Rg jelentése tiokarbamoil-csoport — olyan (I) általános képletű vegyületeket — amelyekben Rg cianocsoportot jelent — kén-származékokkal, előnyösen difenil-foszfino-ditiosawal reagáltatunk.
A találmány szerinti vegyületeket kémiai szintézissel is elő lehet állítani, például a szokásos peptid-szintézis technikákkal. A szintézis tipikus utolsó lépése a ciklizálási (gyűrűzárási) lépés; ekkor alakul át a lineáris peptid peptoliddá. A szintézis során az A, B, R-^Leu, Leu, C, X és Y í
maradékokat a megfelelő sorrendben összekapcsoljuk, majd ciklizáljuk egy amid- vagy észter-képzési reakció segítségé- 13 vei.
A találmány tárgyát képezi egy eljárás is az (I) általános képletű gyűrűs peptolid előállítására, amely magában foglalja a megfelelő sorrendben egymáshoz kapcsolt A, B, R-^Leu, Leu, C, X és Y savmaradékokból álló peptolid vagy lineáris peptid ciklizálását.
A találmány szerinti vegyületek farmakológiailag aktívak, ezért gyógyszerekként felhasználhatók. A vegyületek különösen celluláris adhéziós molekulák stimulált expresszióját gátolják, különösen a VCAM-1 illetve az E-selectin és ICAM-1 expresszió inhibitorai. A VCAM-l-gyel kapcsolatos gátló hatás transzkripciós és posttranszkripciós szinten egyaránt megvalósul. Azokat a vizsgálati módszereket, amelyekkel kimutatható a találmány szerinti vegyületeknek az ICAM-1, VCAM-1 és E-selectin expressziójára gyakorolt gátló hatás, a kiviteli példák után ismertetjük. Ezért a vegyületek felhasználhatók a sejtekre tapadó molekulák expressziójaként létrejövő megbetegedések kezelésére vagy megelőzésére. Ezen megbetegedések közé tartozik több szerzett illetve örökölt olyan megbetegedés/rendellenesség, amelynél kiemelt szerepet játszik a fehérvérsejtek (leukociták) migrációja. Legismertebbek az akut és krónikus gyulladásos megbetegedések (például az allergia, asztma, pszoriázis, reperfúziós sérülések, reumatoid artritisz és a szeptikus sokk) és az autoimmun állapotok (például a szklerózis multiplex). A találmány szerinti vegyületek egyéb indikációját jelenti a daganat-áttétek (például a melanómánál, osteokarcinómánál) és az allograft/xenograftok visszafejlesztése, minthogy ismeretes, hogy az erekhez tapadó molekulák • ·
- 14 gátlása lényegesen javítja ezen folyamatok prognózisát.
A találmány szerinti vegyületek a hiperproliferatív (fokozott növekedéssel járó) bőrbetegségek és különböző rosszindulatú megbetegedések tekintetében terápiás potenciállal bírnak tekintettel arra, hogy gátló hatásukat szubmikromoláris szinten fejtik ki. Ezt bizonyították a 72 órás, keratinocitákkal kapcsolatos és egyéb más proliferációs tesztek is.
A találmány szerinti vegyületek gátolják az U1 monocita sejtvonalban a TNFo; vagy az IL6 által indukált HÍV termelést — amint azt a p24 Elisa vizsgálattal kiértékeltük — ezért jól felhasználhatók immunhiányos és vírusos megbetegedések, különösen az AIDS kezelésében.
A találmány tárgyát képezi ezért a találmány szerinti vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények gyógyászatban történő felhasználása is.
Különösen a találmány tárgyát képezik azok az adhéziós molekulák expressziójával kapcsolatos megbetegedések kezelésére vagy megelőzésére szolgáló módszerek, amelyek során egy beteget a találmány szerinti vegyületek terápiásán vagy profilaktikusan hatékony mennyiségével kezelünk.
A találmány tárgyát képezik azok a gyógyszerkészítmények is, amelyek a találmány szerinti vegyületek terápiásán hatékony mennyiségét tartalmazzák.
A találmány tárgyát képezi továbbá a találmány szerinti vegyületek felhasználása az adhéziós molekulák expressziójával összefüggő megbetegedések kezelésére vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerek előállítására.
A gyógyszerkészítmények parenterális, orális, aeroszolos vagy helyi alkalmazásra megfelelők lehetnek, és rendszerint egy vagy több gyógyászatilag elfogadható vivő-, hígító- vagy adalékanyagot és stabilizátorokat és más hasonló adalékokat is tartalmaznak.
A felhasznált vegyületek dózisa változhat attól függően, hogy milyen körülményekről vagy betegségek kezeléséről van szó, megelőzés vagy kezelés céljából alkalmazzuk-e és egyebek mellett az adagolás módjától is. Általában véve ahhoz, hogy kielégítő eredményeket érjünk el orális adagolás esetén, a dózisnak 0,05 és 10 mg/testtőmeg kg/nap-nak kell lennie, előnyösebb azonban, ha a dózis 0,1-2 mg/testtömeg kg/nap egyszerre vagy több alkalommal, naponta 2-4-szer adagolva. Hasonlóképpen parenterális alkalmazás esetén, például intravénás cseppinfúzióval, a dózis mintegy 0,01-5 mg/testtömeg kg/nap, előnyösen 0,05-1,0 mg/testtömeg kg/nap és legelőnyösebben 0,1-1,0 mg/testtömeg kg/nap lehet.
Humán pácienseknek a megfelelő napi adag orális adagolás esetén 2,5-500 mg, előnyösen 5-250 mg, legelőnyő- sebben 5-100 mg. Intravénás adagolás esetén ugyanez 0,5-250 mg, előnyösen 2,5-125 mg és legelőnyösebben 2,5-50 mg.
A vegyületeket egyéb más, megfelelő módon is adagolhatjuk, például enterálisan, parenterálisan és helyileg vagy inhalációval. Enterális adagolásra megfelelőek az ivóoldat, a tabletták vagy a kapszulák. Megfelelő parenterális adagolási formák az injektálható oldatok vagy szuszpenziók. Helyi alkalmazás céljára használhatók a krémek, lemosószerek és a hasonlóak, amelyekben a hatóanyag koncentrációja — a készítmény tömegére számítva — 0,01-10 %, előnyösen 0,1-1 %.
Orális ·· ·· ·· · • · · · · ···· • · · · * · · · ············ ··
- 16 alkalmazásra az adagolási forma 1-50 mg, rendszerint 1-10 mg vegyületet tartalmaz. A 4. kiviteli példában ismertetett vegyület a találmány szerinti előnyös vegyület, amelyet nagyobb emlősöknek, például embereknek az általánosan alkalmazott módokon és alacsony dózisokban adhatunk az ilyen indikációkra ismert mérték szerint.
A találmányt — csupán illusztrációképpen — a következő kiviteli példákban ismertetjük, ideértve a kísérő diagramokat is, amelyek a következők:
1. ábra: az A (a) és a B (b) vegyületek UV-spektruma,
2. ábra: az A vegyület infravörös spektruma,
3. ábra: a B vegyület infravörös spektruma,
4. ábra: az A vegyület 1H-NMR spektruma,
5. ábra: a B vegyület 1H-NMR spektruma,
6. ábra: az A vegyület 13C-NMR spektruma,
7. ábra: a B vegyület 13C-NMR spektruma.
| A | következő kiviteli | példákban, | amelyek a találmányt | |
| bemutatják, de az oltalmi | kört semmilyen vonatkozásban nem | |||
| korlátozzák, a hőmérsékleti | adatokat | Celsius fokokban adjuk | ||
| meg, | és az alábbi rövidítéseket alkalmazzuk: | |||
| Bz | = | benzilcsoport, | Hba | = módosított 2-hidroxi- |
| iPr | = | i zopropilcsoport, | vaj sav, | |
| nPr | = | propilcsoport, | m | = multiplett, |
| db | = | kettős kötés, | q | = kvartett, |
| sb | - | egyes kötés, | t | - triplett, |
| br | = | széles, | TFA | = trifluor-ecetsav, |
d = dublett,
THF tetrahidrofurán.
• · • · · · · · • · · • · · • ·· · ···· ····
- 17 1. példa:
Az F/92-4471/08 (NRRL 21123) törzs jellemzése
Az NRRL 21123 törzset, amely az A és B vegyületeket termeli, Argentínában, La Plata közelében izoláltuk egy leveelekből álló szemétmintából.
Az NRRL 21123 törzs 2 % malátakivonatot tartalmazó agar (A táptalaj) táptalajon (2 % malátakivonat, 0,4 % élesztőkivonat, 2 % agar ionmentes vízben) három napig inkubálva 27 C°-on 25-35 mm átmérőjű telepeket fejleszt. A telepek rendszerint egy rövid légmicéliumot is növesztenek, amelyek színe a fehértől a szürkéig vagy a szürkésbarnáig terjed.
Az A jelű táptalajon mért telepátmérők alapján megállapítható, hogy a növekedéshez szükséges optimális hőmérséklet 21-30 C° között van, a minimál hőmérséklet 0-6 C°, a maximális hőmérséklet pedig 33-38 C° közé esik. Spóraképződést négy napig tartó inkubáció (21-33 C° közötti hőmérsékleten) után figyeltünk meg.
Az NRRL 21123 gombatörzs az üvegszerüen átlátszótól az egészen enyhén világos barna színig terjedő kinézetű konidiumokat növeszt, amelyek phialid vagy annelid konidiosejteken helyezkednek el, bennük jól meghatározott piknidiumokkal. A konidiumok általában öt sejtből álló, hengeres, rendszerint enyhén görbült formájúak, és legtöbbük mérete 24-26 x 2,6-4 pm. Mindegyik konidium az egyik végén egy üvegszerüen átlátszó el nem ágazó függeléket, a másik terminális sejten pedig 2-4 (rendszerint 3) üvegszerüen átlátszó és el nem ágazó függeléket hordoz.
• · • · · • · • · · · ····
- 18 A fenti morfológiai jellemzők és a B.C.Sutton (1980): The Coelomycetes (kiadta a Commonwealth Mycological Institute, Surrey, England) című könyvében leírt azonosítási kulcsok alapján az NRRL 21123 jelű törzset a Bartalinia Tassi genusba tartozónak határoztuk meg.
2. példa:
Fermentáció
Az NRRL 21123 jelű törzset 15 napig növesztjük 21 C°-on A táptalajt (2 % malátakivonatot, 0,4 % élesztőkivonatot, 2 % agar ionmentes vízben) tartalmazó ferde agaron. Az egy ferde agart tartalmazó csőben kinőtt konidiumokat 10 ml steril csapvízben szuszpendáljuk. A konidiumokat tartalmazó szuszpenzióból inokulumként 1 ml-t adunk két 500 ml-es Erlenmeyer lombikba, amelyek mindegyike 200 ml B táptalajt (2 % malátakivonat, 0,4 % élesztőkivonat ionmentes vízben) tartalmaz. A lombikokat 6 napon keresztül inkubáljuk 21 C°-on 200 fordulat/perc sebességű rázóasztalon az előkultura nyerése céljából. Ebből az előtenyészetből 2-2 ml-t adunk inokulumként 200 db 500 ml-es Erlenmeyer lombikba, amelyek mindegyike 200-200 ml C táptalajt (2,2 % malátakivonatot, 0,72 % élesztőkivonatot ionmentes vízben) tartalmaz. A lombikokat 200 fordulat/perc sebességű rázóasztalon inkubáljuk 21 C° hőmérsékleten, és 6 nap eltelte után a lombikok tartalmát egyesítve feldolgozzuk.
• · · · • · · · ···· ···· ···· ··
- 19 3. példa:
A metabolitok, az A és a B vegyület izolálása
Az NRRL 21123 jelű törzs 2. példában leírt módon nyert fermentlevéből 50 litert Clarcel szűrési segédanyaggal leszűrünk. A nedves micéliumot összegyűjtjük, és háromszor extraháljuk 15-15 liter metanol-aceton (1:1) eleggyel. Az egyesített extraktumból rotációs desztilláló készülékben, csökkentett nyomáson az oldószereket ledesztilláljuk; ekkor megközelítőleg 3 liter vizes oldat marad vissza. Ezt négyszer extraháljuk 1-1 liter etil-acetáttal, az etil-acetátos extraktumokat egyesítjük, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Visszamarad 25 g olajos anyag, amelyet 90 %-os vizes metanol és hexán között háromszor megoszlatunk. Az alsó fázisból az illő anyagok eltávolítása után, a desztillálást csökkentett nyomáson végrehajtva, 4,5 g szilárd nyersterméket kapunk. Ezt a szilárd anyagot 5,5 cm (belső átmérő) x 38 cm-es méretű szilikagél oszlopon (Merck, Kieselgel 60, 40-63 μτη) kromatográfiával tisztítjuk; kifejlesztő elegyek: először metil-(terc-butil)-éter/metanol (98:2) arányú elegyébol 1,4 liter, azután pedig metil-(terc-butil)-éter/metanol (95:5) arányú elegyből 1 liter. Az áramlási sebesség 110 ml/perc. Azokat a frakciókat, amelyek a 4. példában ismertetett ICAM-1 expresszió gátlási tesztben aktívnak mutatkoznak (térfogatuk egyenként 90 ml) és amelyek vagy az A (9-10. frakció) vagy a B anyagot (11-25. frakciók) tartalmazzák, egyesítjük.
Az A vegyület izolálása
A szilikagéles kromatográfia során kapott 9. és 10.
···· ···· ···«
- 20 frakciót egyesítjük, az oldószert ledesztilláljuk csökkentett nyomáson, ekkor 1 g nyersterméket kapunk. Ezt tovább tisztítjuk preparatív HPLC-vel, 50 mm belső átmérőjű x 250 mm méretű Merck oszlopon, amelynek töltete 7 μπι-es LiChrospher RP-18. Az elúciót 80 100 % lineáris grádiens szerint metanol-víz eleggyel végezzük 60 percen keresztül. Az áramlási sebesség 25 ml/perc. 25 ml-es frakciókat szedünk, amelyeket 220 nm-en vizsgálunk. Az UV, a vékonyréteg-kromatográfia és a biológiai aktivitás alapján megfelelő frakciókat (56-62. frakciók) egyesítjük, az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, ekkor 0,6 g maradékot kapunk. Ezt 2,7 cm belső átmérő x 86 cm hosszú Sephadex LH 20 oszlopon kromatografáljuk, metanollal eluálva. A tiszta A anyagot tartalmazó frakciókat — az azonosítást és a tisztaságot vékonyréteg-kromatográfiával ellenőrizzük — egyesítjük, az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, ekkor 580 mg színtelen porszerű anyagot kapunk. Az A vegyület jellemző adatait az 1. táblázat tartalmazza (lásd alább).
A B vegyület izolálása
Az egyesített 11-25. frakciókból, az oldószer csökkentett nyomáson történő ledesztillálása után, 2 g nyersterméket kapunk, amelyet tovább tisztítunk preparatív HPLC-vel, az alkalmazott oszlop 50 mm belső átmérő x 250 mm hosszú Merck oszlop, amely 7 μπι-es LiChrospher Rp-18. Az elúciót metanol-víz eleggyel, 80 -» 100 % lineáris grádiens szerint végezzük 60 percen keresztül. Az áramlási sebesség 25 ml/perc és 25 ml-es frakciókat szedünk; az anyag jelenlétét 220 nm-en detek• · · · ···· táljuk. A 47-55. frakciók tartalmazzák a B vegyület főtömegét; ezt az UV, a vékonyréteg-kromatográfiás és a biológiai aktivitás-mérések egyaránt igazolják. A frakciókat egyesítjük, az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, ekkor 0,4 g maradékot nyerünk. Ezt 2,7 cm x 86 cm Sephadex LH 20 oszlopon kromatografáljuk metanollal végezve az elúciót. 12 mm-es frakciókat szedünk, és azokat 220 nm-en vizsgáljuk. Az UV, a vékonyréteg-kromatogramm és a biológiai aktivitás alapján a 23-27. frakciókat egyesítjük, az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A kapott 0,3 g termék végső tisztítását 2,2 cm belső átmérő x 16 cm hosszú szilikagél oszlopon végezzük, amelynek töltete Merck Kieselgel 60, 40-63 μπι, az eluens toluol-etanol (95:5). A vékonyréteg-kromatogramm szerint a kapott B termék tiszta. A megfelelő frakciókat egyesítjük, az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, ekkor 145 mg színtelen port kapunk. A B termék jellemző adatait az 1. táblázat tartalmazza, amelyben utalások vannak az 1-7. ábrákra is.
• · · «»* ·*·· 9»··
- 22 1. táblázat
Tulaj donságok
A vegyület
B vegyület
| 1. 2 . | megjelenési forma [<xl 25d | színtelen por -234° (metanol; | színtelen por -243° (metanol; |
| 3 . | tömegspektrum (FAB) | c = 1,11) m/e = 977 (MH+) | c = 1,08) m/e =949 (MH+) |
| 4 . | összegképlet | C53H84n8°9 | C51H80N8°9 |
| 5. | ultraibolya spektrum | lásd la. ábra | lásd lb. ábra |
| 6 . | (metanol) infravörös spektrum | lásd 2. ábra | lásd 3. ábra |
| 7 . | (KBr) 1H-NMR spektrum, | CDC13-DMSO-dg | CDC13-DMSO-dg |
| 500 MHz, DMSO-dg | oldatban (3:2), | (4:1) oldatban, | |
| belső sztenderd | lásd 4. ábra, | lásd 5. ábra | |
| 8. | l^c-NMR spektrum, | CDCI3-DMSO-dg | CDCI3-DMSO-dg |
| 125,7 MHz, DMSO-dg | (3:2), lásd | (4:1) oldatban, | |
| belső sztenderd | 6. ábra | lásd 7. ábra |
9. oldhatóság oldható kloroformban, metanolban, dimetil-szulfoxidban, oldhatatlan vízben és hexánban
| 10. vékonyréteg- -kromatogramma (Rf érték) | 0,31 | 0,24 |
| 11. HPLcb (retenciós | 4,2 perc | 3,3 perc |
| idő, Rt) |
J ·
- 23 a 5 cm x 20 cm szilikagél lemez, Merck 60 F254; toluol-metanol (95:5) b Merck LiChrospher 100 RP-18 (5 pm), 4 x 125 mm; metanol-víz (9:1); 1,2 ml/perc; detektálás 220 nm-nél Waters 996 típusú fotodiódasoros detektorral.
4. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = COOCH3, Β = B', RT = CH3, C = C', Rg = OCH3, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y')
Hidrogén-klorid-gáz dietil-éterrel készített hideg oldatát (térfogata: 30 ml, töménysége: 17 % tömeg/térfogat szerint, hőmérséklete -20 C°) adjuk 2 g A vegyület és 1,65 ml metanol elegyéhez, amelyet 3 napon keresztül -20 C°-on tartunk. A reakcióelegyet nátrium-hidrogén-karbonát vizes oldatával elegyítjük, és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves extraktumot nátrium-szulfáton megszárítjuk, szűrjük és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket feloldjuk 30 ml metanol/tömény vizes sósavoldat (9:1) arányú elegyében, és szobahőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük. Ezután az oldatot vízzel hígítjuk, és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves extraktumot nátrium-szulfáton megszárátjuk, leszűrjük, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket fordított fázisú kromatográfiával tisztítjuk LiChroprep RP-8 töltetű oszlopon (grádiens elúció, metanol-víz 8/2-től 10/0-ig), majd szilikagél oszlopon folytatjuk a tisztítást (grádiens elúció, toluol-metanol ·· *' ·- ' ·, • „ ‘ » · · · .· .
• ·* .’ : ··· ···· ···· ··-. ί, ..·
- 24 100/0-tól 95/5-ig). A cím szerinti vegyület színtelen hab, a (IV) általános képletű nyílt láncú vegyület (Rg = COOCH3, R7 = CH3) pedig színtelen szilárd anyag.
Vékonyréteg-kromatográfia: toluol-metanol (9:1), Rf 0,41 (cím szerinti vegyület), Rf = 0,38 (nyílt láncú származék); fordított fázis RP-8, metanol/víz/trifluor-ecetsav 95:4:1, Rf = 0,34 (cím szerinti vegyület), Rf = 0,51 (nyílt láncú vegyület).
5. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = COOH, Β = B’, Rf = CH3, C = C1, Rg = OCHg,
---- kettős kötés, X = X1, Y = Y')
209 mg 4. példa szerint előállított (I) általános képletű vegyületet 15 ml tere-butanol/tömény vizes sósavoldat (9:1) elegyében 60 C°-on tartjuk 8 órán keresztül. A reakcióelegyet telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal elegyítjük és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist pH 7-es pufferoldattal mossuk, nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket szilikagélen végzett kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol-metanol elegy 100/0-tól 95/5-ig); a cím szerinti vegyületet színtelen hab formájában kapjuk meg.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,25; fordított fázis RP-8, metanol-víz (92:8), Rf = 0,34.
6. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CO-NH-CH3, Β = Β', R3 = CH3, C = C', Rg = OCH3, ---- kettős kötés, X = X', Y - Y') mg 5. példa szerint előállított vegyületet feloldunk 0,5 ml metilén-dikloridban, az oldatot lehűtjük 0 C°-ra, és 50 μΐ szulfinil-dikloridot adunk hozzá. Az elegyet 1,5 órán keresztül 0 °C-on tartjuk, és az illő anyagokat ugyanezen a hőmérsékleten, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A visszamaradó sárga olajat feloldjuk 1 ml metilén-dikloridban, és 0 C°-on hozzáadunk 100 μΐ 40 %-os vizes metil-amin-oldatot. 45 percig reagálni engedjük, azután a reakcióelegyet 0,1 M vizes sósavoldathoz öntjük, és etil-acetáttal extraháljuk, majd megoszlatjuk etil-acetát és telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között. A szerves fázist telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket szilikagélen végzett kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol/etil-acetát/metanol 100/0/0-tól 65/25/10-ig), a cím szerinti vegyületet színtelen hab formájában kapj uk meg.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rj = 0,25; fordított fázis RP-8, metanol-víz (95:5), Rf = 0,33.
A 6. példában leírtak szerint állítjuk elő a következő (I) általános képletű vegyületeket is (valamennyi esetében A = A', Β = B', X = X', Y = Y' és R3 = CH3):
• · · · · ···· ···· ···· ·· ··
- 26 7. példa: Rg = morfolino-karbonil-csoport, Rg = OCHg, ---- = kettős kötés,
8. példa: Rg = N,N-dimetil-karbamoil-csoport, Rg = OCHg, ---- = kettős kötés,
9. példa: Rg = aziridinil-karbonil-csoport, Rg = OCHg, ---- = kettős kötés,
10. példa: Rg = pirrolidinil-karbonil-csoport, Rg = OCHg, ---- = kettős kötés,
11. példa: Rg = piperidinil-karbonil-csoport, Rg = OCHg, ---- = kettős kötés,
12. példa: Rg = N-metil-N-propil-karbamoil-csoport, Rg
OCHg, ---- = kettős kötés.
13. példa:
(I) általános képletű vegyület (A =A', Rg = COOiPr, B = B', RT = CHg, C = C', Rg = OCHg, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg 5. példa szerint előállított vegyületet feloldunk 0,75 ml metilén-dikloridban, és a 0 C°-ra lehűtött oldathoz 75 μΐ szulfinil-dikloridot adunk. A reakcióelegyet 2 órán keresztül 0 C°-on tartjuk, azután az illő anyagokat csökkentett nyomáson, 0 C°-on ledesztilláljuk. A visszamaradó sárga olajat feloldjuk 1 ml metilén-dikloridban 0 C°-on, és 30 μΐ • · • · · · · · · • · · · · ···· ···· ···· ·· ··
- 27 izopropil-alkoholt adunk hozzá. 3 órán keresztül reagálni hagyjuk az elegyet, ezután 0,1 M vizes sósavoldathoz öntjük, és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket szilikagélen végzett kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol-metanol 100/0-tól 95/5-ig); a terméket színtelen hab formájában kapjuk meg.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,47, fordított fázis RP-8, metanol-víz (95:5), Rf = 0,37.
A 9. példában leírtakkal analóg módon állítjuk elő a következő (I) általános képletű vegyületeket is (mindkét esetben az alábbi csoportok jelentése azonos és a következő:
(A = A', B = B', C = C', X = X', Y = Y' és Rf = CH3) :
14. példa: Rg = etoxi-karbonil-csoport, Rg = OCH3,
---- = kettős kötés,
15. példa: Rg = propoxi-karbonil-csoport Rg = OCH3,
---- = kettős kötés.
16. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = COCH3, Β = B', Rf = CH3, C = C', Rg = OCH3, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y')
200 mg A vegyület 2 ml dietil-éterrel készített oldatához ml dietil-éterben oldott 2 mmol metil-Grignard vegyületet adunk, és az elegyet szobahőmérsékleten keverjük 24 órán keresztül. Ekkor további 2 mmol metil-magnézium-jodidot adunk hozzá dietil-éterben oldva, és a keverést még 24 órán át végezzük. A reakcióelegyet 0,1 M vizes sósavoldathoz öntjük, és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A kapott nyersterméket szilikagélen kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol/etil-acetát/metanol 100/0/0-tól 68/27/5-ig), akkor a cím szerinti vegyületet kapjuk és a kiindulási vegyület jelentős mennyiségét.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,30.
17. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CH2OH, Β = B', Rf = CH3, C = C', Rg = 0CH3, ---- = kettős kötés, X = X', X = Y') mg 5. példa szerint előállított vegyület 2 ml tetrahidrofuránnal készített oldatához 0,5 ml 2 M borán-dimetil-szülfid-kompiex oldatát adjuk szobahőmérsékleten. A reakcióelegyet 2,5 órán át keverjük, azután 0,1 M vizes sósavoldathoz öntjük, és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist pH
7-es foszfát pufferoldattal mossuk, nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket szilikagélen végzett kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol-metanol 100/0-tól 95/5-ig); a cím • · « ·· ·· ···· · • · · · · · · • « · · · ···· ···· ···· ·· ··
- 29 szerinti vegyületet színtelen hab formájában kapjuk meg.
Vékonyrétegkromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,27; fordított fázis RP-8, metanol-víz (92:8), a kiindulási vegyülettől nem különül el.
18. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CN, Β = Β', Rf = CH3, C = C', Rg = H,
---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg A vegyület és 66 mg nátrium-acetát 4 ml ecetsavanhidriddel készített oldatához 18 mg palládium-aktív szén (10 %) katalizátort adunk, és a reakcióelegyet hidrogéngáz atmoszférában, szobahőmérsékleten keverjük 20 órán keresztül (a vékonyréteg kromatográfia szerint a konverzió 50 %-os), majd az elegyet vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal elegyítjük, és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert erősen csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket RP-8 hordozón fordított fázison kromatografáljuk (grádiens lúció, metanol-víz 80/20-tól 100/0-ig). A cím szerinti vegyület színtelen hab.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,33; fordított fázis RP-8, metanol-víz (92:8), Rf = 0,50 (kiindulási vegyület Rf = 0,44).
19. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CHO, Β = B', Rf = CH3, C = C', Rg = OCH3, • · «* ······· * · · · · ···· ···· ···· ·· ··
- 30 ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg 17. példa szerint előállított vegyület 4 ml metilén-dikloriddal készített oldatához 35 mg Dess-Martin perjodinán-reagenst [1,1,1-trisz-acetoxi-l,1-dihidro-l,2-benzjodoxol-3(1H)-on] adunk, és a keletkezett szuszpenziót 20 C°-on 3 órán keresztül keverjük. Ezután a reakcióelegyet szilikagél oszlopra visszük, és etil-acetáttal eluáljuk az oszlopot. A terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk (grádiens elúció, toluol-metanol 100/0-tól 95/5-ig). A cím szerinti vegyület színtelen habként keletkezik.
20. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A' , R6 = CH = CH2, B = B' , R-l = CH3, C = C' , Rg = OCH3, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y')
24,7 g 19. példa szerinti vegyület vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatához metil-Wittig reagens oldatát (amelyet metil-trifenil-foszfónium-bromid és nátrium-amid elegyéből állítunk elő vízmentes tetrahidrofuránban, keverés közben) adjuk 20 C°-on addig, amíg a reagens sárga színe tartósan megmarad. Ezután a reakcióelegyet 0,1 M vizes sósavoldattal elegyítjük, és etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumból az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk (grádiens elúció, toluol-metanol 100/0-tól 97/3-ig). A cím szerinti vegyületet színtelen hab alakjában nyerjük.
• · ···· ····
- 31 21. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CH = CH-C2H5, Β = Β', R-l = CH3, C = C',
Rg = OCHg, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y')
A vegyületet a 20. példában leírtakkal analóg módon állítjuk elő.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,44.
22. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CH2N3, Β = B1 , Rf = CH3, C = C', Rg = OCHg, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg 17. példa szerinti vegyület és 12 mg trifenil-foszfin 3 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatához 150 μΐ 0,38 M toluolos hidrogén-azid-oldatot adunk. Ezt követően addig adunk az elegyhez dietil-azodikarboxilátot szobahőmérsékleten, amíg az oldat színe sárga marad, majd az elegyet még 10 percig szobahőmérsékleten keverjük. A nyers reakcióelegyet semleges alumínium-oxidra öntjük, és etil-acetáttal eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk (grádiens elúció, toluol-metanol 99,5/0,5-től 95/5-ig). A cím szerinti vegyületet színtelen szilárd hab alakjában kapjuk meg.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,46; fordított fázis RP-8, metanol-víz-trifluor• · · ·
-ecetsav (95:4:1), Rg = 0,41.
23. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CH2NH2' Β = Β', Rx = CH3, C = C', Rg = OCHg, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg 22. példa szerinti vegyület 2 ml metanollal készített oldatát hidrogéngáz atmoszférában keverjük 4 C°-on 4 mg palládium-aktív szén (10 %) katalizátor jelenlétében 20 órán keresztül. A katalizátort kiszűrjük, és a szűrletből az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket fordított fázisú kromatográfiával, RP-8 tölteten kromatografáljuk (grádiens elúció, metanol/víz + 0,5 % trifluor-ecetsav 80/20-tól 100/0-ig. A cím szerinti vegyület színtelen szilárd hab formájában keletkezik.
Vékonyréteg kromatográfia: fordított fázis RP-8, metanol-víz-trifluor-ecetsav (95:4:1), Rg = 0,69.
24. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CH = CBr2, B = B', Rg = CH3, C = C', Rg = OCH3, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y')
225 mg 19. példa szerinti vegyület 2,5 ml metilén-dikloriddal készített oldatát hozzáadjuk 30 mg cinkpor, 120 mg trifenil-foszfin és 150 mg tetrabróm-metán elegyéhez, és a kapott reakcióelegyet 30 percig keverjük szobahőmérsékleten. Az elegyet 5 g alumínium-oxidra öntjük, és etil-acetáttal eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és az ···· ···· oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékot szilikagélen végzett kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol-metanol 99,5/0,5-től 97/3-ig). A terméket szilárd, színtelen hab formájában kapjuk meg.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,27.
25. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = C = CH, Β = B', Rf = CH3, C = C', Rg = OCH3, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg 24. példa szerinti vegyülethez 3 mólekvivalens butil-lítium-oldatot (hexánban) adunk -78 C°-on 2 óra alatt. A reakcióelegyet 0,1 M vizes sósavoldatba öntjük, és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist nátrium-hidrogén-karbonát vizes oldatával, azután telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket szilikagélen végzett kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol-metanol 99,5/0,5-től 97/3-ig). A cím szerinti vegyület szilárd, színtelen hab formájában marad vissza.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,44.
26. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CH = CH-CN, Β = B', Rf = CH3, C = C', Rg =
OCH3, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y')
mg 19. példa szerinti vegyület és 270 mg (ciano-metilén)-trifenil-foszforán 5 ml toluollal készített oldatát szobahőmérsékleten keverjük 4 órán keresztül. A nyers reakcióelegyet semleges alumínium-oxidon átszűrjük, és etil-acetáttal eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A cím szerinti vegyület az E és Z izomerek keveréke.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,39.
27. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CH2C1, Β = B', Rf = CH3, C = C', Rg = OCH3, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg 17. példa szerinti vegyület 1 ml toluollal készített oldatát hozzáadjuk 10 mg diklór-trifenil-foszforán 1 ml toluollal készített oldatához, és az elegyet 60 C°-on keverjük. 2 órai reagáltatás után további 35 mg diklór-trifenil-foszforánt adunk hozzá, és még 1 órán keresztül reagáltatjuk. Ekkor semleges alumínium-oxidon át leszűrjük a reakcióelegyet, és etil-acetáttal eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert ledesztilláljuk, és a nyersterméket szilikagélen kromatografáljuk (grádiens elúció, toluol-metanol 100/0-tól 97/3-ig). A cím szerinti vegyületet színtelen, szilárd hab alakjában kapjuk meg.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,39.
• · · · · ···· · • · · · · · · • · · « · ···· ···· «··· ·· ··
28. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CH2OCH3, Β = B', R! = CH3, C = C', Rg =
OCH3, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg 17. példa szerinti vegyület 6 ml metilén-dikloriddal készített oldatához 100 mg szilikagélt adunk, majd diazo-metán dietil-éterrel készített oldatával reagáltatjuk, amíg a kiindulási vegyület teljesen átalakul. A reakció során keletkezett polimerektől való megszabadulás céljából az elegyet szűrjük, az oldószert ledesztilláljuk, és a maradékhoz friss metilén-dikloridot és szilikagélt adunk. Végül az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk (grádiens elúció, toluol-metanol 99,7/0,3-tól 97/3-ig), ekkor a cím szerinti vegyületet színtelen, szilárd hab formájában nyerjük.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,34.
29, példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = ciklopropilcsoport, Β = B', R]_ = CH3, C C', R8 = OCH3, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg 20. példa szerinti vegyület és 2,8 mg palládium-diacetát 2,5 ml metilén-dikloriddal készített oldatához addig adjuk diazo-metán dietil-éterrel készített oldatát, amíg a kiindulási vegyület teljesen átalakul. A nyers reakcióelegyet szilikagélen leszűrjük, és toluol-metanol eleggyel eluáljuk. A • · • · ···· ···· terméket tartalmazó frakciókból az oldószert ledesztilláljuk, és a maradékot szilikagélen végzett kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol-metanol 99,5/0,5-től 97/3-ig), ekkor a cím szerinti anyagot színtelen, szilárd hab formájában kapjuk meg.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,38; fordított fázis, RP-8, metanol-pH 7 foszfát pufferoldat (92:8), Rf = 0,27.
30. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = COO-CH(C6H5)2, Β = B', Rf = CH3, C = C',
Rg = OCHg, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y')
8,2 mg 5. példa szerinti vegyületet, 3,1 mg difenil-diazo-metánt és 0,5 ml toluolt 60 C°-on melegítünk 3 órán keresztül. Az oldatot közvetlenül kromatografáljuk szilikagél oszlopon (grádiens elúció, toluol-metanol 100/0-tól 97/3-ig).
A cím szerinti vegyület színtelen, szilárd hab.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,46.
31. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A1, Rg = tetrazol-5-il-csoport, Β = B1, Rf = CH3, C = C1, Rg = OCH3, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg A vegyületet, 125 mg tributil-ón(IV)-hidridet és 25 mg nátrium-azidot 1 ml N,N-dimetil-formamidban melegítünk 100 C°-on 8 napon keresztül. A reakcióelegyet 1 M vizes sósavol• «
- 37 dattal elegyítjük, és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket szilikagélen végzett kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol-metanol 100/0,25-től 100/2,5-ig). A cím szerinti vegyületet színtelen hab formájában kapjuk meg.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,12; fordított fázis RP-8, metanol-pH 7 foszfát pufferoldat (92:8), Rf = 0,48.
32. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CN, Β = B', C = C', Rg = CHg, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg 18. példa szerinti vegyület 1 ml vízmentes N,N-dimetil-f ormamiddal készített oldatához 1 ml metil-jodidot, azt követően pedig 5 mg nátrium-bisz(trimetil-szilil)-amid 0,3 ml N,N-dimetil-formamiddal készített oldatát adjuk, és az elegyet másfél órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyhez 0,1 M vizes sósavoldatot adunk, és etil-acetáttal extraháljuk, majd megoszlatjuk etil-acetát és telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között. A szerves fázist telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket szilikagélen végzett kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol-metanol 100/0,25-től 100/2,5-ig). A cím szerinti vegyületet színtelen • · hab alakjában kapjuk meg.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,43.
A 32. példában leírtakkal analóg módon állítjuk elő a következő (I) általános képletű vegyületeket is (A = A',
Rg = CN, Β = Β', X = X', Y = Y' ) :
33. példa: C = C', Rg = C2H5, ---- = kettős kötés.
34. példa: C = C', Rg = benzilcsoport, ---- = kettős kötés.
35. példa (I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CN, Β = B', C = C', Rg = CH2C(CH3)3, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg 38. példa szerinti vegyület és 0,2 ml trimetil-acetaldehid 2 ml ecetsavval készített oldatához hozzáadunk 30 μΐ tetrahidrofurános 2M borán-dimetil-szulfid-oldatot, és az elegyet szobahőmérsékleten keverjük 5 percig, azután nátrium-hidrogén-karbonát-oldat/etil-acetát elegyéhez adjuk, azután még kevés vizet is adunk hozzá. A szerves réteget elválasztjuk, telített, vizes nátrium-karbonát-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A visszamaradó színtelen olajat (vékonyréteg-kromatográfia, szilikagél, toluol-metanol 9:1, Rf = 0,53) feloldjuk 3 ml tetrahidrofuránban. A tetrahidrofurános oldathoz 2,3-diklór-5,6-diciano-l,4-benzokinon (DDQ, 8 mg • * »-» «« · • ·« ···· ···· ···· ·· ··
- 39 oldva 0,2 ml tetrahidrofuránban) oldatát adjuk szobahőmérsékleten, amíg a reakcióelegy megsötétedik. Az elegyet 5 g szilikagélen szűrjük, és toluol-metanol elegyekkel (100/0,5-től 95/5-ig) grádiens elúcióval tisztítjuk. A cím szerinti vegyületet színtelen hab formájában kapjuk meg.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,49.
A 35. példában leírtakkal analóg módon állítjuk elő a következő (I) általános képletű vegyületeket is (A = A1, Rg = CN, Β = Β', X = X', Y = Y' ):
36. példa: C = C', Rg = benzilcsoport, ---- = egyes kötés
37. példa: C = C', Rg = CH(CH3)2, ---- = kettős kötés.
38. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CN, Β = B', C = C', Rg = H, ---- = egyes kötés, X = X', Y = Y') mg 18. példa szerinti vegyületet, 1 ml trifluor-ecetsavat és 0,3 ml trietil-szilánt elegyítünk, és a heterogén keveréket erőteljesen keverjük argongáz atmoszférában, 4 C°-on 20 órán keresztül. A reakcióelegyet telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal keverjük össze, és etil-acetáttal háljuk. A szerves fázist telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentet nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket szilikagélen kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol• « **» w » · t · · • · · · · ···· ·*«· ««·· »· ·♦
-metanol 100/0,5-től 100/5-ig). A cím szerinti vegyület színtelen hab formájában keletkezik.
Vékonyréteg kromatográfia: toluol-metanol (9:1), Rf = 0,16 (indolin A) és 0,10 (indolin B) fordított fázis RP-8, metanol-víz-trifluor-ecetsav (95:4:1), indolin A+B Rf = 0,71.
39. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CN, B = B', C = C', Rg = O(CH2)2-CH3,
---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg 38. példa szerinti vegyület (sztereoizomerek keveréke) 1 ml metanollal készített oldatához 100 mg nátrium-[tetraoxo-volframát(VI)]-ot és 100 μΐ 30 %-os hidrogén-peroxid-oldatot adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten keverjük 20 percig, azután direkt módon tisztítjuk gélszűréses kromatográfiával (Sephadex LH-20, metanol/etil-acetát 1:1). Az N-hidroxi-indol köztiterméket tartalmazó frakcióból az oldószert ledesztilláljuk, a maradékot feloldjuk 2 ml vízmentes N,N-dimetil-formamidban, és hozzáadunk 2 ml propil-jodidot és
7,5 mg nátrium-bisz(trimetil-szilil)-amidot. Az elegyet 30 percig keverjük szobahőmérsékleten, azután 0,1 M vizes sósavoldattal elegyítjük, és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves réteget nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A terméket szilikagélen végzett kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol-metanol 100/0,5-től 98/2-ig), azt követően pedig fordított fázisú kromatográfiával (RP-8, vizes metanol grádiens elúció, 75-től • tr · » 99 9 • · * « · ·Λ·* ·*·« «··>· *» ··
- 41 100 %-ig). A cím szerinti vegyületet színtelen hab alakjában kapjuk meg.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol
90/10, Rj = 0,51; metanol-pH 7 foszfát pufferoldat 92/8, Rf 0,30.
40. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CN, Β = B', C = C', Rg = OC2H5, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y')
A cím szerinti vegyületet a 39. példában leírtakkal analóg módon állítjuk elő.
41. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CN, Β = B', C = C', Rg = OCH3, Rg = Br, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg A vegyület 2 ml tetraklór-metánnal készített oldatát 3 mg vas porral keverjük, és 1 óra leforgása alatt hozzáadjuk 10 mg bróm tetraklór-metánnal készített oldatát. A nyers reakcióelegyet vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal elegyítjük, és etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist nátrium-tioszulfát-oldattal és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A nyersterméket szilikagélen végzett kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol-metanol 99,5/0,5-től 97/3-ig). A cím szerinti vegyület színtelen hab.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol * » « · ··· · · · « ·»Γ· ···· »·9· «· ··
- 42 (9:1), Rf = 0,48; fordított fázis RP-8, metanol-víz (92:8), Rf = 0,19.
42. példa:
(I) általános képletű vegyület (A = A', Rg = CSNH2, Β = B', C=C', Rf = CH3, Rg = OCH3, ---- = kettős kötés, X = X', Y = Y') mg A vegyület, 50 mg difenil-foszfino-ditiosav és 4 ml izopropil-alkohol elegyét 60 C°-on melegítjük 3 napon keresztül. A reakcióelegyet lehűtjük -20 C°-ra, a csapadékot kiszűrjük, a szűrletet etil-acetáttal hígítjuk, és vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal extraháljuk. A szerves fázisból az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a nyersterméket szilikagélen való kromatográfiával tisztítjuk (grádiens elúció, toluol-metanol 100/0,5-től 96/4-ig). A cím szerinti vegyületet színtelen hab formájában nyerjük.
Vékonyréteg kromatográfia: szilikagél, toluol-metanol (9:1), Rf = 0,29.
Biológiai aktivitás
A találmány szerinti vegyületek aktivitását a következő tesztekben vizsgáljuk: citotoxicitás, az ICAM-1, VCAM-1 és az E-selectin expresszió, valamint a sejt proliferáció gátlása. Az egyes tesztekben a maximális gátlási koncentráció feléhez (IC50) szükséges hatóanyag koncentrációkat az itt következő 2. táblázatban adjuk meg.
• ·· « * » 4 · * t· • » · b • · · U · ··-*· ···· ···· ·» ·«
2. táblázat
| Vegyület | IC50 | (μΜ) tesztenként | ||||
| ICAM-1 | ICAM-1 | VCAM-1 | E-selec- tin | citotoxi- citás | sej tproliferáció | |
| (HaCat) | (HMEC) | (HMEC) | (HUVEC) | (24 óra) | (HaCat 72 óra) |
| A vegyület | 0,009 | 0,06 | 0,002 | 0,04 | 40 | 0,006 |
| B vegyület | 0,02 | 1,3 | 0,03 | 40 | 0,05 |
A teszteket a következő módon hajtjuk végre:
HaCaT sejteket, amelyek egy olyan spontán transzformációval keletkezett, nem tumorigén humán keratinocita sejtvonalat jelentenek, amely sejtek a normális keratinocitákra jellemező fenotipusos elkülönülésüket messzemenően megőrizték [Boukamp és munkatársai, J. Cell. Bioi. 106. 761-771 (1988)] használunk fel mind a sejtproliferációhoz, mind az ICAM-1 sejt Elisa teszthez.
A. ICAM-1 sejt Elisa teszt
I. Keratinocita ICAM-1 sejt Elisa teszt
Az ICAM-1 expresszió gátlásának meghatározására szolgáló ICAM-1 sejt Elisa tesztet lényegében úgy végezzük, ahogyan azt Winiski és Foster [J. Invest. Dermatol. , 99, 48-52 (1992)] leírták. HaCat sejteket viszünk fel 96 titrálóhelyes mikrotitráló lemezre (titrálóhelyenként 2 x 104 sejtet) DMEM tenyész• ·
- 44 -tápoldatban, amely 5 % FCS-t, 100 egység/ml penicillint, 100 pig/ml streptomycint, 2 mM glutamint, 1 mM nátrium-piruvátot tartalmaz, és addig növesztjük, amíg egybefüggő sejtréteg képződik, azután az inkubálást friss teszt-tápoldatban (ez lényegében azonos a tenyész-tápoldattal, azonban 5 % FCS helyett csak 0,5 % FCS-t tartalmaz) folytatjuk IFN-f|'~/TNF-Q! stimulációs tápoldattal (teszt-tápoldat + 1000 egység/ml IFN-ΊΓ73 ng/ml TNF-α), mindkét esetben az A vegyület vagy a B ve- gyület jelenlétében, illetve távollétében mintegy 24 órán keresztül. A tápoldatot ezután lemossuk a lemezről, és az egy sejt vastagságú sejtréteget 1 % paraformaldehiddel fixáljuk (rögzítjük). Az egy sejt vastagságú sejtréteget telítéshez elegendő mennyiségű prímért (egér ICAM-1 monoklonális) és szekunder (kecske anti-egér peroxidáz konjugált) antitestekkel inkubáljuk. Az ezt követő reakció során szubsztrátként 3-amino-9-etil-karbazolt (angol nyelvű rövidítése: AEC) használunk, ekkor egy oldhatatlan, színes termék keletkezik, amelyet a sztenderd mikrotitráló lemezleolvasóval könnyen mérhetünk.
II. A citotoxicitás meghatározása
Amint az ICAM-1 kimutatását célzó AEC reakció befejeződik, a HaCat mono-sejtréteget PBS-sel (foszfát puffért tartalmazó fiziológiás nátrium-klorid-oldattal) leöblítjük, a PBS folyadékot leöntjük a titrálólemezről, azután papírtörlőt rátéve enyhén ütögetjük a fölösleges folyadék eltávolítása céljából. A mikrotitráló lemez alját finoman letöröljük egy nedves arctörlő kendővel, azután egy ugyanolyan, de száraz kendővel, és az abszorbanciát 492 nm-nél megmérjük. Mielőtt a • ·
- 45 mono-sejtréteg kiszáradna, mindegyik titrálőhelyhez hozzáadunk 0,1 ml 0,1 % kristályibolyát tartalmazó és 0,2 gm-es szűrőn átengedett PBS-oldatot. Ezután a lemezeket szobahőmérsékleten 10 percig inkubáljuk, ötször alaposan átmossuk PBS-oldattal, a fölösleges folyadékot a fentebb ismertetett módon eltávolítjuk, és az abszorbanciát ismét megmérjük 492 nm-nél, mielőtt a mono-sejtréteg kiszáradna. A festés előtti és a festés utáni optikai sűrűség-értékeket egymásból kivonva megkapjuk azt a kristályibolya mennyiséget, amely a titrálólemezek mélyedéseiben jelenlévő sejttömeghez (a mono-sejtrétegben lévő összes sejt mennyiségéhez) tartozik. Ezt az értéket az AEC értékek korrigálására használjuk fel.
B. Endotél sejt VCAM-1, ICAM-1 és E-selectin sejt-Elisa teszt
A teszt alapja a 96 titrálóhelyes sejt-Elisa módszer, amelynél humán mikrovaszkuláris endotél sejtvonalat (HMEC-1) és humán köldökvéna endotél sejtvonalat (HUVEC) használunk fel. A sejteket az A vagy a B vegyülettel 4 órán át előkezeljük, a következő 8-16 órán keresztül TNF-a-val stimuláljuk majd paraformaldehiddel fixáljuk, és a VCAM-1, ICAM-1 és E-selectin expressziót egy indirekt immunperoxidáz festési technikával kiértékeljük. A citotoxikus hatást úgy határozzuk meg, hogy megszámláljuk (Giemsa sejtmagfestés után) a vizsgálandó anyagoknak kitett sejtek relatív számát, és ezt a kontrolihoz viszonyítjuk (ekkor a titrálóhelyek csak oldószert és tápoldatot tartalmaznak). A vegyületeket akkor pontozzuk pozitívan, ha a VCAM-1, ICAM-1 vagy az E-selectin 50 %-os vagy • · · · · .· .:1. .:
- 46 annál nagyobb mértékű gátlása 25 %-nál kisebb sejtveszteséggel valósul meg.
Módszertan
I. Sejtvonal
A VCAM-1 és ICAM-1 tesztekhez egy halhatatlan (SV-40 vírus nagy T antigén) humán mikrovaszkuláris endotél sejtvonalat [HMEC-1; Ades és munkatársai, Jrl Invest. Dermatol., 99,
683-690 (1992)] használunk. A HMEC-1 sejtek lényegében alacsony szinten ICAM-l-et választanak ki, és ezt a folyamatot a gyulladást közvetítő (kiváltó) anyag szabályozzák. Ugyanakkor VCAM-l csak citokin stimulációt követően termelődik. Dózis-hatás és időbeni lefutást tanulmányozó kísérleteket végeztünk a VCAM-1 és az ICAM-1 expresszió indukálása optimális feltételeinek meghatározása céljából.
II. Tenyésztési (nővesztési) feltételek
A HMEC-1 sejteket T-75 típusú (Nunc) edényekben növesztjük sztenderd körülmények (37 C°, a légtérben 5 % széndioxid koncentráció) között úgy, hogy a tenyészfolyadék minden ml-nyi mennyiségére 1,5 x 106 sejt jut [a tenyészfolyadék tulajdonképpen endotél sejt minimál táptalaj (angol nyelvű rövitítése: EBM; gyártó cég: Clonetics), amelyet kiegészítünk 10 % FCS, 10 ng/ml humán EGF (felhám növekedési faktor) (Boehringer gyártmány), 1 gg/ml hidrokortizon (Sigma, 0888), 2,2 g/liter nátrium-hidrogén-karbonát, 15 mM Hepes, 0,11 g/liter nátrium-piruvát, 4 mM glutamin, 100 egység/ml penicillin és 100 ^g/ml sztreptomicin hozzáadásával]. Enyhe tripszines
- 47 kezelés (0,25 % tripszin + 0,1 % EDTA 8 percig) és újraszuszpendálás után a sejteket minden 2-3 napban újratelepítjük 1:3 hasadási arány mellett.
III. VCAM-1 és ICAM-1 sejt-Elisa titrálóhelyes simafenekű mikrotitráló lemezt előzetesen bevonunk szarvasmarha fibronektinnel (FN; Sigma F1141), és mindegyik titrálóhelybe 2 χ 104 számú sejtet és 200 μΐ EBM tenyésztőfolyadékot mérünk, és a lemezt éjjelen át inkubáljuk. A következő napon először a tenyésztőfolyadékot kicseréljük 200 μΐ EBM vizsgálati folyadékkal (tápoldattal) (ez endotél sejt minimál táptalaj, de nem 10 %, hanem csak 5 % FCS tartalommal) , majd ezt kicseréljük 180 μΐ olyan tápoldattal, amely a megfelelő koncentrációban tartalmazza az A vagy B vegyületet , a megfelelő koncentrációjú oldószer/metanol eleggyel extrahált tápoldatot tartalmazza, vagy egyedül az EBM tápoldatot tartalmazza; és az egészet 4 órán keresztül 37 C°-on inkubáljuk. Valamennyi 96 titrálóhelyes tesztet úgy végezzük, hogy a titrálóhelyek számát megkettőzzük. Ezután a sejteket 20 μΐ koncentrált citokin-oldattal (2000 egység/ml TNFa) stimuláljuk és, 16 órán keresztül 37 C°-on inkubáljuk. Ezután a mono-sejtréteget 1 % paraformaldehidet oldva tartalmazó EBM tápoldattal mossuk, és 2 %-os paraformaldehid oldatban 15 percig fixáljuk szobahőmérsékleten, majd néhányszor leöblítjük PBS oldattal. A PBS oldatot a sejtekről eltávolítjuk, és a mono-sejtréteget PBS-t tartalmazó 10 %-os normál kecskeszérumban (angol nyelvű rövidítése NGS) 30 percig inkubáljuk. Ezután az NGS oldatot titrálóhelyenként 100 μΐ anti-VCAM-1 vagy ICAM-1 monoklonális antitesttel helyettesítjük, és éjjelen át 4 C°-on inkubáljuk. A monoklonális antitest-oldatot eltávolítjuk, a sejteket néhányszor PBS oldattal leöblítjük, és 10 % NGS-t tartalmazó PBS oldattal inkubáljuk szobahőmérsékleten 30-60 percen keresztül. Az NGS oldatot eltávolítjuk, és 100 μΐ torma peroxidázzal konjugált kecske f(Ab1)2 anti-egér IgG antitestet (Tago; 1:500 hígítás 5 % NGS-t tartalmazó PBS oldatban) adunk hozzá, és a lemezeket 1 órán keresztül szobahőmérsékleten inkubáljuk. Azután a másodlagos antitesteket eltávolítjuk, a sejteket PBS oldattal leöblítjük, majd titrálóhelyenként 150 μΐ frissen készített és leszúrt AEC oldatot (3-amino-9-etil-karbazol; Sigma) adunk hozzá, és a lemezeket szobahőmérsékleten inkubáljuk 45-60 percig. A peroxidáz szubsztrátot eltávolítjuk, és a sejteket leöblítjük PBS oldattal. Az AEC abszorbancia értékeket mikrotiter lemez-leolvasóval 550 nm-nél megmérjük, és az üres értékkel — a 690 nm-nél felvett referencia értékkel — korrigáljuk.
IV. E-selectin teszt
Az E-selectin tesztet lényegében frissen izolált HUVEC sejtekkel a VCAM-1 illetve az ICAM-1 tesztre leírtak szerint végezzük, azonban a TNFo:-stimulációt rövidebb ideig végezzük (6-8 órán át).
V. A citotoxicitás meghatározása (sejtmagfestésen alapuló sej tveszteség)
Az endotél sejtekből a festéket kioldjuk úgy, hogy a PBS oldat helyett etanollal kezeljük azokat 20 percen keresztül (kétszer 10-10 perces kezelés), és a folyamatot mikroszkóppal ellenőrizzük. A sejteket desztillált vízzel (Aquadest) leöblítjük, és a mono-sejtréteget 33 %-os Giemsa oldattal fedjük be (desztillált vizes oldat) 5 percig szobahőmérsékleten. Ezután a titrálóhelyeket desztillált vízzel mossuk, és legalább 15 percig levegőn szárítjuk. Mikroszkóppal ellenőrizzük, hogy csak a sejtmagok festődtek-e meg, és a citoplazma nem festődött. A Giemsa abszorbancia értékeket mikrotiter lemez-leolvasóval 550 nm-nél megmérjük, és az üres értékkel (sorok sejtek nélkül) korrigáljuk, amelyet 690 nm-nél mérünk.
VI. Az adatok értékelése
A VCAM-1 komponens vagy az E-selectin expresszióra vonatkozó AEC értékek (a nem stimulált kontroll titrálóhelyek) lényegében azonosak egy azonos típusú kontroll mAb értékeivel, és a háttér festettségét jelentik. Valamennyi 96 titrálóhelyes lemez esetében úgy járunk el, hogy mindegyik citokinnel stimulált csoport (EBM és oldószer kontrollok valamint vizsgálandó anyagok) AEC értékeinek átlagából kivonjuk a (megfelelő) komponens értékeinek átlagát, ekkor olyan számot kapunk, amely a túlszabályozott ICAM-1 és az indukálható VCAM-1 vagy E-selectin sejtfelületre tapadó molekulák (CAM) expresszióját reprezentálja (ez az úgynevezett AEC-CAM érték). Ezután mindegyik AEC-CAM értéket elosztjuk a megfelelő Giemsa értékek • · · ?· .* ·: · ·:
* · · · · ·!·· ···« ···· ·· ·· átlagával, és ekkor olyan számot kapunk, amely az adott, a magok számán alapuló sejtsűrűségre vonatkozó CAM expresszió relatív szintjét becsüli fel, (ezt nevezzük AEC-Giemsa aránynak) .
AEC (stimulált) - AEC (nem stimulált) = AEC-CAM AEC-CAM / Giemsa = AEC:Giemsa arány
Az aktuális CAM IC50 értéket úgy határozzuk meg, hogy a vizsgált vegyületre vonatkozó AEC:Giemsa arányt a stimulált kontrollra (EBM, oldószer) vonatkozó hasonló aránnyal összehasonlítjuk. Ezeket az értékeket azután úgy analizáljuk, hogy az IC5Q értékeket hasonlítjuk kizárólag a Giemsa értékekhez. Szigorú kritériumok határozzák meg, hogy a sejt-toxicitással (Giemsa) összevetett CAM gátlási profil vajon azt a valós erdményt mutatja-e, amelyet követni kellene.
C. HaCat sejt proliferációs teszt
A HaCat sejteket 2,2 g/liter nátrium-hidrogén-karbonáttál, 0,11 g/liter nátrium-piruváttal, 15 mM Hepes-sel, 5 % borjú magzati szérummal (angol nyelvű rövidítése: FCS), 100 egység/ml penicillinnel, 100 /xg/ml sztreptomicinnel és a végső koncentrációt 4 mM-lal növelő mennyiségű glutaminnal kiegészített DMEM táptalajon (Gibco # 074-02100) tenyésztjük. A proliferáció vizsgálatához a sejteket tripszines kezeléssel szétválasztjuk, friss tápoldatban elszuszpendáljuk, és a szuszpenziót úgy visszük fel egy 96 mérőhelyes mikrotitráló lemezre, hogy titrálóhelyenként 0,2 ml tápoldatban 4000 sejt legyen. 24 óra elteltével (0. nap) a tápoldatot a vizsgálandó vegyület ·»·· ···* · · · · gradiensét tartalmazó tápoldattal helyettesítjük. A lemezt 37 C°-on, 5 % szén-dioxidot tartalmazó légtérben 3 napig inkubáljuk. A sejt-proliferáció mértékét az oldószeres kontrolihoz viszonyítva kolorimetriásan határozzuk meg oly módon, hogy a relatív sejttömeget mérjük szulforodamin B-vel végzett festés után [Skehan et al. , J. Natl. Cancer Inst. , 82., 1107-11112 (1990)]. A kezdeti sejtszámot a 0. napon végzett relatív sejttömeg-méréssel határozzuk meg. Az eredményt a következő módon adj uk meg:
a gátlás %-a = 100 - a kontroll abszorbancia %-a (az oldószer kontroll = 100 %). Végül három mérés átlagát + standard deviáció értéket ábrázolunk. A dózis-hatásgőrbét fél-logaritmusos papíron ábrázoljuk, és a maximális gátló koncentráció fél értékét (IC50) lineáris interpolációval határozzuk meg. A tiszta, sejtveszteség nélküli maximális gátlást a kezdeti sejtszám jeleníti meg, amely rendszerint 90-98 % közé esik.
·♦ ·· ·· Λ • ♦ · · · · *ί • · · ί • · · · ···· ···· ···· ·· •'H-NMR- spektrumok (CDC13)
Példa: Spektrum:
(3 konformer 55:44:3, a major és minor konformert -gal illetve °-vel jelöljük): 8,80* (d, J = 10Hz, NH); 7,89* (d, j = 10 Hz, NH), 7,78° (d, J = 10 Hz, NH), 7,57° (d, J = 10 Hz,
NH); 7,50*° (d, J = 7 Hz, MeMeOTrp H-4'); 7,39*, 7,37° (2d, J = 8Hz, MeMeOTrp H-7'); 7,20 *° (m, MeMeOTrp, H-6'); 7,11°,
7,06* (2s, MeMeOTrp H-2'); 7,03*° (2dd, MeMeOTrp H-5'); 6,16° (d, J = 10Hz, Leu NH); 5,95 (d, J = 6Hz, Leu NH); 5,30' (m, α-H); 5,10 (dd, hidroxi-vajsav α-H); 5,03-4,98 (m, α-H); 4,91 (dd, α-H); 4,85 (m, α-H); 4,71° (m, α-Ή); 4,45* (dd, α-H) ; 4,29* (m, α-H); 4,03*, 4,02° (2s, N-OMe); 3,87 (dd); 3,72*, 3,64° (2s, COOMe); 3,63-3,50 (m); 3,47* (q, J = 7Hz, MeAla α-Η) ; 3,41° (s, N-Me); 3,36* (dd, MeMeOTrp β-Η); 3,23-3,17 (m) ; 3,20* (s, MeAla N-Me); 3,19° (s, N-Me); 2,91* (s,
MeMeOTrp N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,51° (s, MeMeOTrp
N-Me); 2,43-2,09 (m) ; 2,03-1,89 (m) ; 1,83-1,75 (m) ; 1,68-1,07 (m); 1,52* (d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,48° (d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,04 (d, J = 6,5Hz); 0,98-0,83 (m) ; 0,53* (d, J = 6,6Hz, Leu Me); 0,01* (d, J = 6,6, Leu Me); -0,32 (ddd, J 3,6Hz, J = 11,1Hz, J = 14,5Hz, Leu β-CH).
(a (IV) általános képletű nyílt láncú származék): (2 konformer 68:32, a major és minor konformert *-gal illetve°-vel jelöljük) : 8,16, 8,12, 8,05, 8,00 (4d, NH); 7,58°, 7,55* (2d, J = 8Hz, MeMeOTrp 4'-H); 7,38*° (d, MeMeOTrp H-7'); 7,22*, 7,20° • · · (2m, MeMeOTrp H-6'); 7,15*, 7,12° (2s, MeMeOTrp H-2'); 7,07*,
7,03° (2m, MeMeOTrp H-5'); 6,57 (s széles, NH); 5,10° (dd, α-H) ; 5,17* (dd, hidroxi-vaj sav α-H); 5,11*° (m, MeLeu α-H) ; 5,04*° (dd, α-H); 4,99* (ddd, α-H); 4,88° (ddd, α-H); 4,51° (dd) ; 4,53* (m, Leu α-H); 4,48° (m) ; 4,42* (m széles, MeAla α-H); 4,05*, 4,03° (2s, N-OMe); 3,88° (q, J = 7Hz, MeAla α-H);
3,71°, 3,68 (2s, COOMe); 3,57 , 3,54° (2s, COOME); 3,47’ (m széles, MeMeOTrp α-H); 3,27°, 3,21 (2s, NMe); 3,2 (m,
MeMeOTrp E-Ha); 3,00* (s, NMe); 2,9 (m, MeMeOTrp β-Η^); 2,64° (S, NMe); 2,32*, 2,28° (2s, NMe); 2,33-2,13 (tn) ; 2,20 (tn) ;
1,86 (τη) ; 1,7-1,1 (m); 1,50°, 1,48’ 0,97-0,93 (tn) ; 0,90-0,76 (m).
(2d, J = 7Hz, MeAla β-Me);
(3 konformer 2:2:1, a minor konformert *-gal jelöljük): 8,81 (d, J = 10Hz, NH); 7,93 (d, J = 10Hz, NH); 7,79 (d, J = 9Hz, NH) ; 7,65 (m széles, NH) ; 7,54 (tn, MeMeOTrp H-4'); 7,38, 7,37, 7,34* (3d, J = 8Hz, MeMeOTrp H-7'); 7,1'9 (tn, MeMeOTrp, H-6'); 7,08-6,98 (m, MeMeOTrp H-5'); 7,02 (s, MeMeOTrp H-2'); 6,14 (d, J = 10Hz, Leu NH); 6,29* (d, J = 7Hz, Leu NH); 6,07 (d, J = 6Hz, Leu NH); 5,25 (m, α-H); 5,12-4,92 (α-H); 4,84 (m, α-H) ; 4,69 (tn, α-H) ; 4,43 (m, α-H) ; 4,29 (m, α-H) ; 4,03*, 4,02, 4,00 (3s, N-OMe); 3,98 (tn, α-H) ; 3,63-3,3 (m) ; 3,39-3,34* (s széles NMe); 3,21 (s, NMe); 3,18* (s, NMe); 3,13 (m) ; 3,07* (s, NMe); 3,04* (s, NMe); 2,91 (s, N-Me); 2,53 (s, NMe); 2,37 (s széles, NMe); 2,5-1,05 (m) ; 1,47, 1,43, 1,41* (3d, J = Hz, MeAla β-Me); 1,03 (d, J = 6,5Hz); 0,98-0,83 (m) ; 0,68*, 0,55, 0,47*, -0,02 (4d, J = 6,6Hz, Leu Me); -0,32 (ddd, Leu β-CH).
·· ·· • · · · * · • · ··«» ·♦·· »· • · • ·· (3 konformer 4:3:1, a minor konformert *-gal jelöljük): 8,82 (d, J = 10Hz, NH); 7,95* (d, J = 9,3Hz, NH); 7,90 (d, J = 9,8 Hz, NH); 7,80 (d, J = 9,4Hz, NH); 7,59, 7,53 (2d, J = 8Hz,
MeMeOTrp H-4'); 7,45-7,30 (m, MeMeOTrp H-7'); 7,23-7,15 (m,
MeMeOTrp, H-6'); 7,20, 7,18 (2s, MeMeOTrp H-2'); 7,11-7,03 (m, MeMeOTRp H-5'); 6,86* (q, J = 5Hz, NHMe); 6,23 (d, 9,5Hz, Leu NH); 5,95 (d, J = 6,5Hz, Leu NH; q NHMe); 5,84* (d, J = 8,9Hz,
Leu NH); 5,55 (q, 5Hz, NHMe); 5,3-4,95 (m, α-H); 4,84 (ddd, α-H); 4,69 (ddd, α-H); 4,42 (dd, MeLeu α-H); 4,34 (ddd, Leu α-H); 4,05*, 4,03, 4,02 (3s, N-OMe); 3,98 (m, α-H); 3,63-3,52 (m, α-H); 3,47 (q, Alaa-H); 3,37, 3,35*, 3,24*, 3,22, 3,20 (5s, NMe) ; 3,3-3,2 (m) ; 3,03*, 2,92 (2s, NMe); 2,85, 2,74, 2,70* (3d, J = 5Hz, NH-Me); 2,53, 2,52 (2s, NMe); 2,23-1,93 (m) ; 1,85-1,05 (m) ; 1,53, 1,47, 1,44* (3d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,03 (d, J = 6,5Hz); 0,98-0,80 (m); 0,57*, 0,55, 0,38*, 0,08 (4d, J = 6,6Hz, Leu Me); -0,30 (ddd, Leu β-CH).
(3 konformer 40:53:7, *gal, °-vel és '-jellel jelölve): 8,81* (d, J = 10Hz, CgAA NH); 7,88* (d, J = 10Hz, CgAA NH); 7,78°
| (d, | J = 10Hz, | NH); 7,57° (d, J = 10HZ, NH); 7, | 52*° | (2d, J = |
| 7Hz, | MeMeOTrp | H-4'); 7,39*, 7,37° (2d, J = | 8Hz, | MeMeOTrp |
| h-7 '; | ); 7,27* | (s, MeMeOTrp H-21); 7,20, 7,18 | (2m, | MeMeOTrp, |
| h-6 ': | ); 7,17* | (s, MeMeOTrp H-2'); 7,03°, 7,01* | (2m, | MeMeOTrp |
| h-5 '; | ); 6,17° | (d, J = 10Hz, Leu NH); 5,98* (d, | J = | 6Hz, Leu |
NH); 5,77' (d, J = 10Hz, Leu NH); 5,31° (ddd, MeAla a-H);
5,19* (dd, hidroxi-vajsav α-H); 5,05-4,94 (m, α-H); 4,88-4,83 (m, α-H); 4,70-4,64 (m, a-H); 4,48* (dd, MeLeu a-H); 4,32* (m, Leu a-H); 4,03*, 4,02° (2s, N-OMe); 3,93° (m, a-H); 3,7-3,5
μ. .: .'*·/
- . · ··· • « * ♦ ···· ·· (m, morfolin); 3,5-3,2 (m) ; 3,40° (s, N-Me); 3,34° (dd,
MeMeOTrp H-Sa); 3,22 (m, MeMeOTrp H-fib); 3,20° (s, N-Me);
3,17* (s, N-Me); 2,93* (s, MeMeOTrp N-Me); 2,54* (s, MeLeu
N-Me); 2,53° (s, N-Me); 2,4-2,35 (m) ; 2,2-1,9 (m) ; 1,83-1,05 (m) ; 1,53*, 1,50° (2d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,04 (d, J =
6,5Hz, MeLeu Me) ; 1,00-0,77 (m) ; 0,57* (d, J= 6,6Hz, Leu Me) ; 0,52-, 0,34' (2d, J = 6,6Hz, Leu Me); 0,09* (d, J = 6,6Hz, Leu Me); -0,25 (ddd, Leu β-CH).
(2 konformer 45:55, -gal és °-vel jelölve): 8,84* (d, J =
10Hz, C9AA NH); 7,87* (d, J = 10Hz, C9AA NH); 7,77° (d, J =
10Hz, NH); 7,57° (d, J = 10Hz, NH); 7,55*, 7,52° (2d, J = 7Hz,
MeMeOTrp H-4'); 7,36*, 7,35° (2d, J = 8Hz, MeMeOTrp H-7');
7,36* (s, MeMeOTrp H-2') ; 7,23* (s, MeMeOTrp H-2'). ; 7,20, 7,17 (2m, MeMeOTrp, H-6'); 7,03°, 7,01* (2m, MeMeOTrp H-5'); 6,17° (d, J = 10Hz, Leu NH); 5,95* (d, J = 6Hz, Leu NH); 5,31° (ddd, MeAla a-H); 5,24* (dd, hidroxi-vajsav a-H); 5,05-4,97 (m, α-H); 4,93 (dd, a-H); 4,87 (dd, a-H); 4,88-4,83 (m, a-H);
4,66-4,60 (m, a-H); 4,48* (dd, MeLeu a-H); 4,38* (ddd, Leu a-H); 4,15-4,00 (m) ; 4,03*, 4,02° (2s, N-OMe) ; 3,98° (m, a-H) ; 3,7-3,2 (m) ; 3,40° (s, N-Me); 3,20° (s, N-Me); 3,17* (s, N-Me); 3,05-2,9 (m) ; 2,99, 2,98 (2s, CON-Me) ; 2,96 (s, 2xCON-Me); 2,92* (s, MeMeOTrp N-Me); 2,54 (s, MeLeu N-Me és
N-Me); 2,4-2,25 (m) ; 2,15-1,9 (m) ; 1,83-1,05 (m) ; 1,53*, 1,50° (2d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,04 (d, J = 6,5Hz, MeLeu Me);
1,00-0,83 (m) ; 0,79°, 0,74° (2d) ; 0,57* (d, J= 6,6Hz,
Me); 0,13* (d, J = 6,6Hz, Leu Me); -0,25 (ddd, Leu β-CH).
Leu
- 56 (3 konformer 70:28:2, -gal, °-vel vagy '-jellel jelölve): 8,89* (d, 10Hz, PrLeuő NH); 7,89* (d, 10Hz, PrLeu2 NH); 7,77° (d, 10Hz, PrLeuő NH); 7,52° (d, 8Hz, indol H-4'); 7,50° (d,
PrLeu2 NH); 7,48* (d, 8Hz, indol H-4'); 7,38* (d, 8Hz, indol H-7'); 7,37° (d, 8Hz, indol H-7'); 7,19° (dd, indol H-6');
7,18* (dd, indol H-6'); 7,13 (s, indol H-2'); 7,02* (s, indol H-2'); 6,99° (dd, indol H-5'); 6,90* (dd, indol H-5'); 6,18° (d széles, 10Hz, Leu NH); 5,93* (d, 6Hz, Leu NH); 5,83' (d,
Leu NH) ; 5,30° (ddd, PrLeuő a-H); 5,30* (dd, hidroxi-vaj sav α-H); 5,02* (ddd, PrLeu6 a-H); 5,00° (ddd, PrLeu2 α-H); 4,89* (dd, MeTrp α-H); 4,84* (ddd, PrLeu2 a-H); 4,71° (ddd, a-H);
4,44* (dd, MeLeu a-H); 4,37* (ddd, Leu a-H); 4,03*, 4,02° (2s, N-OMe); 3,63-3,52; 3,49* (q, 7Hz, MeAla a-H); 3,40° (s, N-Me); 3,38* (dd, MeTrp β-Ha); 3,26-3,20; 3,23* (s, MeAla N-Me);
3,21° (s, N-Me); 2,93* (s, MeTrp N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me);
2,52° (s, N-Me); 2,45-1,75; 2,33, 2,15 (2m, aziridin);
1,56-1,07; 1,50* (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,47° (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,03 (d, 6,5Hz, MeLeu δ-Me); 0,98-0,83; 0,48’ (d,
6,6Hz, Leu δ'-Me); -0,13 (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); -0,48 (ddd,
Leu Τ'-CH) .
(3 konformer 45:51:4, *-gal, °-vei vagy '-jellel jelöljük): 8,86* (d, 10Hz, PrLeuő NH); 7,87* (d, 10Hz, PrLeu2 NH); 7,75° (d, 10Hz, PrLeuő NH); 7,57* (d, 8Hz, indol H-4');. 7,55' (d,
PrLeu2 NH); 7,51° (d, 8Hz, indol H-4'), 7,41° (s, indol H-2'); 7,38* (d, 8Hz, indol H-7'); 7,36° (d, 8Hz, indol H-7'); 7,29* (s, indol H-2'); 7,18* (dd, indol H-6'); 7,17° (dd, indol H-6') 7,03 (dd, indol H-5'); 7,01* (dd, indol H-5'); 6,17°
··· «
- 57 (d széles, 10Hz, Leu NH); 5,94* (d, 6Hz, Leu NH); 5,79' (d,
Leu NH); 5,30° (ddd, PrLeu6 α-H); 5,27* (dd, α-H); 5,00* (ddd, PrLeu6 α-H); 4,98° (ddd, Oí-H) ; 4,93° (dd, α-H); 4,87* (dd, α-H); 4,85* (ddd, PrLeu2 α-H); 4,63° (ddd, α-H); 4,47* (dd, MeLeu α-H); 4,40 (m) ; 4,02* (ddd, Leu α-H) ; 4,02, 4,01 (2s, N-OMe); 3,68-3,22; 3,40° (s, N-Me); 3,20° (s, N-Me);
3,18* (s, MeAla N-Me); 2,91* (s, MeTrp N-Me); 2,55° (s, N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,35-1,05; 1,54* (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,50° (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,03* (d, 6,5Hz, MeLeu δ-Me); 0,98-0,83; 0,78° (d, 6Hz, Leu δ'-Me); 0,73° (d, 6Hz, Leu δ’ '-Me); 0,57* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,16* (d, 6,6Hz, Leu δ·
-Me); -0,27* (ddd, Leu T-CH).
(3 konformer 46:51:3 *-gal, °-vel vagy '-jelekkel jelölve): 8,87* (d, 10Hz, PrLeu6 NH); 7,87* (d, 10Hz, PrLeu2 NH); 7,76° (d, 10Hz, PrLeu6 NH); 7,56 (d, PrLeu2 NH); 7,55* (d, 8Hz, indol H-4'); 7,52° (d, 8Hz, indol H-41); 7,37 d, 8Hz, indol H); 7,36 (d, 8Hz, indol H); 7,36° (s, indol H-2'); 7,22* (s, indol H-2'); 7,20* (dd, indol H-6'); 7,18° (dd, indol H-6'); 7,03° (dd, indol H-5'); 7,00* (dd, indol H-5'); 6,16° (d,
10Hz, Leu NH) ; 5,94* (d, 6Hz, Leu NH); 5,78' (d, Leu NH) ;
5,31° (ddd, PrLeu6 α-H); 5,27* (dd, α-H); 5,06-4,80; 4,65 (ddd, α-H); 4,47* (dd, MeLeu α-H); 4,33 (m); 4,03, 4,01 (2s,
N-OMe); 4,00 (ddd, α-H) ; 3,75-3,20; 3,40 (s, N-Me); 3,20 (s,
N-Me); 3,18* (s, MeAla N-Me); 2,91* (s, MeTrp N-Me); 2,53 (s,
| N-Me); 2,53° | (s, MeLeu | N-Me); 2,45-1, | 07; 1,53* (d, 7Hz, | MeAla |
| β-Me); 1,49° | (d, 7Hz, | MeAla β-Me); | 1,03* (d, 6,5Hz, | MeLeu |
| d-Me); 0,98-0 | ,83; 0,79 | (d, 6Hz, Me); | 0,74 (d, 6Hz, Me); | 0,55* |
(d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,07* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me) ; -0,36* (ddd, Leu β-CH).
konformer 27:33:17:33 *-gal, °-vel,' vagy ''-jelekkel jelölve): 8,9* (d, 10Hz, PrLeu7 NH); 8,82' (d, 10Hz, PrLeuő
| NH) ; | 7,9 | (d, | 10Hz, PrLeu2 NH); | 7,86 ' | (d, | 10Hz, PrLeu2 NH); |
| 7,76° | (d, | 10Hz, | PrLeu6 NH); 7,75' | ’ (d, | 10Hz, PrLeu6 NH); 7,24* | |
| (s, | indol | ) ; 7 | ,03* (dd, indol); | 6,17' | ' (d | széles, 10Hz, Leu |
| NH) ; | 6,17° | (d, | széles, 10Hz, Leu | NH) ; | 6,03' | (d, 6Hz, Leu NH); |
| 5,98* | (d, | 6Hz | , Leu NH); 4,02'' | (S) ; | 4,02° | (S); 4,02* (S); |
| 4,02' | (s) | ; 3, | 40 (s, N-Me); 3,4C | ' (s, | N-Me) | ; 3,20 (s, N-Me); |
| 3,20 | (s, | N-Me) | ; 3,17 (s, N-Me); | 2,97 | (S, N | -Me); 2,94 (s, N- |
| -Me) ; | 2,94 | (s, | N-Me); 2,93 (s, N- | Me) ; | 2,91 | (s, N-Me); 2,56 (s, |
N-Me); 2,56 (s, N-Me); 2,53' (s, MeLeu N-Me); 2,53* (s, MeLeu
| N-Me); 1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me); | 1,53' | (d, 7Hz, MeAla β-Me); |
| 1,50° (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,50'' | (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,03' | |
| (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me); 1,03* (d, | 6,5Hz, | MeLeu d-Me); 0,78° |
| (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,77'' (d, | 6,6Hz, | Leu δ'-Me); 0,72'' |
| (d, 6,6Hz, Leuő-Me); 0,72° (d, | 6,6Hz, | Leu δ 1 '-Me); 0,61' |
(d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,55* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,21' (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); 0,12* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); -0,17' (ddd, Leu Τ'-CH) ; -0,31* (ddd, Leu T’CH) .
(2 konformer 55:45, a major és minor konformer *-gal illetve °-vel jelöle): 8,80* (d, J = 10Hz, NH); 7,88* (d, J = 10Hz, NH); 7,77° (d, J = 10Hz, NH); 7,57° (d, J = 10Hz, NH) ; 7,52*, 7,51° (2d, J = 7Hz, MeMeOTrp H-4'); 7,39*, 7,37° (2d, J = 8Hz, MeMeOTrp H-7’); 7,20*° (m, MeMeOTrp, H-6'); 7,16°, 7,09* (2s, • · · ·
- 59 MeMeOTrp H-2'); 7,03*° (2dd, MeMeOTrp H-5'); 6,17° (d, J =
10Hz, Leu NH); 5,97* (d, J = 6Hz, Leu NH); 5,31° (m, MeAla α-H) ; 5,11-4,96 (m, α-H) ; 4,92* (dd, MeMeOTrp α-H) ; 4,87 (ddd, α-H); 4,69° (m, Leu a-H), 4,47* (dd, MeLeu a-H); 4,27* (dd,
Leua-H); 4,03*, 4,02° (2s, N-OMe) ; 3,92 (dd) ; 3,65-3,15 (m) ;
3,47* (q, J = 7Hz, MeAla a-H); 3,41° (s, N-Me); 3,21* (s,
MeAla NMe); 3,20° (s, N-Me); 2,92* (s, MeMeOTrp N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,51° (s, N-Me); 2,35-2,75 (m) ; 1,7-1,05 . (m) ; 1,53* (d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,49° (d, J = 7Hz, MeAla βMe); 1,28*, 1,25*, 1,23°, 1,18° (4d, J = 6Hz, COOCHMe2); 1,04 (d, J = 6,5Hz, MeLeu Me); 0,98-0,83 (m); 0,55* (d, J = 6,6Hz,
Leu Me); 0,05* (d, J 6,6, Leu Me); -0,31 (ddd, Leu β-CH).
(3 konformer 55:43:2, jelölve *-gal, °-vel vagy '-jellel):
8,82* (d, J = 10Hz, CgAA NH); 7,85* (d, J = 10Hz, CgAA NH) ;
7,78° (d, J = 10Hz, NH); 7,58 ° (d, J = 10Hz, NH); 7,52*,
7,51° (2d, J = 7Hz, MeMeOTrp H-4'); 7,39*, 7,37° (2d, J = 8Hz, MeMeOTrp H-7'); 7,22*, 7,21° (2m, MeMeOTrp, H-6'); 7,14°,
7,08* (2s, MeMeOTrp H-2'); 7,03*° (2dd, MeMeOTrp H-5'); 6,17° (d, J = 10Hz, Leu NH); 5,95* (d, J = 6Hz, Leu NH); 5,78' (d, J = 10Hz, Leu NH); 5,31° (ddd, MeAla α-H); 5,12* (dd, hidroxi-vajsav a-H); 5,05-4,98 (m, a-H); 4,91* (dd, MeMeOTrp a-H); 4,86* (ddd, CgAA a-H); 4,73-4,68 (m, Leu a-H); 4,47* (dd,
MeLeu a-H); 4,32-4,26 (m, Leu a-H); 4,25 (dq, J = 11Hz, J = 7Hz, COOCH2-); 4,15 -4,07 (m, COOCH2-); 4,04*, 4,03° (2s, N-OMe); 3,84° (m, a-H); 3,64-3,50 (m); 3,47* (q, J = Hz, MeAla a-H); 3,41° (s, N-Me); 3,34° (dd, MeMeOTrp H-Sa); 3,22 (m,
MeMeOTrp H-Eb); 3,20* (s, MeAla NMe); 3,19° s, N-Me); 2,93* • · ' ·· ·· · *· • · · ·· · ·· · · • · · · · · · • · · · · ············ ·· ·· (s, MeMeOTrp N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,52° (s, N-Me);
2,4-2,1 (m) ; 2,05-1,9 (m) ; 1,83-1,76 (m) ; 1,7-1,07 (m) ; 1,53*,
1,49° (2d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,30, 1,25 (2t, J = Hz,
COOCH2CH3); 1,04 (d, J = 6,5 Hz, MeLeu Me); 1,00-0,84 (m);
0,55* (d, J = 6,6Hz, Leu Me) ; 0,03* (d, J = 6,6Hz, Leu Me) ;
-0,32 (ddd, Leu β-CH).
(3 konformert 57:41:2, jelölésük *-gal, °-vel vagy '-jellel): 8,82* (d, J = 10Hz, CgAA NH); 7,90* (d, J = 10Hz, CgAA NH) ; 7,78° (d, J = 10Hz, NH); 7,58° (d, J = 10Hz, NH); 7,52*° (2d, J = 7Hz, MeMeOTrp H-4'); 7,39*, 7,38° (2d, J = 8Hz, MeMeOTrp H-7'); 7,22*, 7,21° (2m, MeMeOTrp, H-6'); 7,14°, 7,08* (2s,
MeMeOTrp H-2'); 7,03°, 7,02* (2m, MeMeOTrp H-5'); 6,17° (d, J = 10Hz, Leu NH); 5,98* (d, J = 6Hz, Leu NH); 5,82' (d, J =
10Hz, Leu NH); 5,31° (ddd, MeAla a-H); 5,12* (dd, hidroxi-vajsav a-H); 5,05-4,98 (m, α-H); 4,91* (dd, MeMeOTrp α-H); 4,86* (ddd, CgAA a-H); 4,73-4,68 (m, Leu a-H); 4,47* (dd, MeLeu a-H); 4,28* (m, Leu a-H); 4,2-3,95 (m, COOCH2); 4,03*, 4,02° (2s, N-OMe); 3,90° (m, a-H); 3,64-3,42 (m); 3,47* (q, J = 7Hz, MeAla a-H); 3,41° (s, N-Me); 3,34° (dd, MeMeOTrp H-fia); 3,22 (m, MeMeOTrp H-Eb); 3,20* (s, MeAla NMe); 3,19° (s, N-Me);
2,93* (s, MeMeOTrp N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,52° (s, NMe); 2,4-2,1 (m); 2,03-1,9 (m); 1,83-1,76 (m); 1,72-1,58 (m,
COOCH2CH2CH3); 1,55-1,07 (m); 1,53*, 1,49° (2d, J = 7Hz, MeAla α-Me); 1,04 (d, J = 6,5 Hz, MeLeu Me); 1,00-0,84 (m); 0,54* (d, J = 6,6Hz, Leu Me); 0,02* (d, J = 6,6Hz, Leu Me) ; -0,34 (ddd, Leu β-CH).
(2 konformer 70:30, jelölésük *-gal illetve °-vel): 8,92*,
7,87*, 7,75°, 7,58° (4d, J = 10Hz, NH); 7,49* (d, J = 8Hz,
MeMeOTrp H-4'); 7,37* (d, J = 8Hz, MeMeOTrp H-7'); 7,20* (dt,
MeMeOTrp H-6'); 7,18°, 7,03* (2s, MeMeOTrp H-21); 7,03°, 6,97* (2 dt, MeMeOTrp H-5'); 6,20° (d, J = 10Hz, Leu NH); 5,96* (d,
J = 7Hz, Leu NH) ; 5,33* (m, hidroxi-vajsav a-H); 5,02 (m, a-H); 4,90* (dd, α-H); 4,83* (ddd, α-H); 4,79* (dd, a-H); 4,70° (m, a-H); 4,39* (dd, a-H); 4,38° (m, a-H); 4,03* (s, N-OMe); 3,92° (m) ; 3,63-3,53 (m) ; 3,44-3,40 (m) ; 3,39°, 3,20° (2s,
NMe); 3,32-3,18 (m) ; 3,17* (s, MeAla NMe); 2,94* (s, MeMeOTrp NMe); 2,53* (s, MeLeu NMe) ; 2,52° (s, NMe); 2,5-2,3 (tn) ; 2,1-1,1 (m) ; 2,17*, 2,11° (2s, COMe) ; 1,51*, 1,48° (2d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,03* (d, J = 6,5Hz); 0,98-0,83 . (tn) ; 0,52*,
-0,11* (d, J = 6,6Hz, Leu Me); -0,39* (ddd, Leu β-CH).
(3 konformer 45:40:15, jelölésük -gal, °-vel vagy '-jellel):
8,78° (d, J = 9,9Hz, NH); 7,83* (d, J = 9,7Hz, NH); 7,76' (d,
NH) ; 7,59' (d, J = 7,8Hz, MeMeOTrp H-4'); 7,57 (d, J = 9,5 Hz,
NH); 7,56, 7,53 (2d, J = 8Hz, MeMeOTrp H-4'); 7,46' (s,
MeMeOTrp H-2'); 7,42*, 7,39°, 7,34' (3d, J= 8,2Hz, MeMeOTrp
H-7'); 7,24*, 7,22°, 7,18' (3t, MeMeOTrp H-6'); 7,11*, 7,08',
7,06° (3t, MeMeOTrp H-5'); 7,04*, 7,03° (2s, MeMeOTrp H-2');
6,25° (d, J = 9,5 Hz, Leu NH); 6,03* (d, J = 7Hz, Leu NH) ;
5,99' (d, J = 8,8Hz, Leu NH); 5,28* (m, a-H); 5,13' (t, J =
4Hz, OH); 5,09-4,98 (m, a-H); 5,02 (t, J = 4Hz, OH);, 4,97 (dd, a-H); 4,88 (dd, a-H); 4,84 (m, a-H); 4,78-4,70 (m, a-H); 4,41 (dd, MeLeu a-H); 4,18 (ddd, Leu a-H); 4,04, 4,02 (2s, N-OMe);
• · ·
- 62 3,78 (m, α-H); 3,65-3,35 (m); 3,42°, 3,32', 3,22*, 3,20° (4s,
NMe); 3,17-3,08 (m); 3,03', 2,92', 2,90*, 2,52*, 2,51° (5s,
NMe); 2,01-1,1 (m); 1,53, 1,49, 1,40', (3d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,04 (d, J = 6,5Hz); 0,98-0,83 (m) ; 0,72', 0,60*,
0,56', 0,03* (4d, J = 6,6Hz, Leu Me) ; -0,16 (ddd, Leu β-CH).
(3 konformer 73:20:7, jelölésük *-gal, °-vel vagy '-jellel):
8,54° (d, J =10Hz, NH); 8,38'(s, széles, MeTrp N'-H); 8,26*,
8,17° (2d széles, J = 2Hz, MeTrp N'-H); 8,13*, 8,03°, 8,01' (3d, J = 9,7Hz, NH); 7,78* (d, J = 7,7Hz, MeTrp H-4'); 7,74',
7,70', 7,63°, 7,63° (4d); 7,46*, 7,44°, 7,40' (3d, J = 8Hz
MeTrp H-7'); 7,27* (dt, MeTrp H-6'); 7,20*, 7,17° (2dt, MeTrp H-5'); 7,09°, 7,03* (2d, J = 2Hz, MeTrp H-2'); 6,33° (d, J =
10Hz, Leu NH); 6,17* (d, J = 7,4Hz, Leu NH); 5,97' (d, J =
9Hz, Leu NH) ; 5,38° (m, α-H) ; 5,27* (dd, hidroxi-vaj sav α-Η) ,δ,21° (dd, a-H) ; 5,12* (ddd, a-H) ; 5,07* (dd, a-H) ; 4,96* (ddd, a-H); 4,87 (m); 4,55* (dd, MeLeu a-H); 4,29* (ddd, Leu a-H); 3,85-3,25 (m) ; 3,76* (q, J = 7Hz, MeAla a-H); 3,49°, 3,36' (2s, NMe); 3,13* (s, MeAla NMe); 3,29°, 3,13' (2s, NMe);
3,02* (s, MeTrp NMe); 2,62° (s, NMe); 2,60* (s, MeLeu NMe);
2,38-1,15 (m) ; 1,62*, 1,56°, 1,51' (3d, J = 7Hz, MeAla β-Me) ;
1,13* (d, J = 6,5Hz MeLeu); 1,07-0,93 (m) ; 0,73', 0,63*,
0,58', 0,02* (4d, J= 6,6Hz, Leu Me); -0,28* (ddd, Leu β-CH).
(3 konformer 67:29:4, jelölésük *-gal, °-vel vagy '-jellel):
9,52* (t, J = 1,5Hz, CHO); 9,41° (t, J = 1Hz, CHO); ,9,05' (m,
CHO) ; 8,73* (d, J = 10Hz, CgAA NH); 7,86* (d, J = 10Hz, CgAA
NH); 7,77° (d, J = 10Hz, NH); 7,60° (d, J = 10Hz, NH); 7,47*° « « · • ·· · ···· ···· · » (2d, J = 7Hz, MeMeOTrp H-4'); 7,38 ° (2d, J = 8Hz, MeMeOTrp
H-7'); 7,20*° (2t, MeMeOTrp, H-6'); 7,15°, 7,04* (2s, MeMeOTrp
H-2'); 7,03° (m, MeMeOTrp H-5'); 7,00* (dd, MeMeOTrp H-5); 6,22° (d, J = 10Hz, Leu NH) ; 6,02* (d, J = 6Hz, Leu NH); 5,87' (d, J = 10Hz, Leu NH); 5,29° (ddd, MeAla α-H); 5,17’ (dd, hidroxi-vajsav a-H); 5,03-4,93 (m, a-H); 4,91 (dd, MeMeOTrp α-H); 4,84* (ddd, CgAAa-H); 4,79-4,64° (m, Leu a-H); 4,43* (dd, MeLeu a-H); 4,35* (ddd, Leu a-H); 4,04', 4,03*, 4,02° (3S, N-OMe); 3,81° (m, a-H); 3,63° (dd) ; 3,57-3,50 (m) ; 3,48-34,2 (m) ; 3,43* (q, J = 7Hz, MeAla a-H); 3,38° (s, N-Me);
3,30-3,12 (m) ; 3,20° (s, N-Me); 3,15* (s, MeAla NMe) ; 2,93* (s, MeMeOTrp N-Me); 2,58° (s, N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,25 (m, CH2-CHO); 2,15-1,9 (m) ; 1,85-1,74 (m) ; 1,65-1,08 (m) ; 1,48*, 1,45° (2d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,04* (d, J = 6,5Hz,
MeLeu Me); 0,98-0,83 (m) ; 0,67', 0,58*, 0,52', 0,01* (4d, J =
6,6Hz, Leu Me); -0,20* (ddd, Leu β-CH).
(2 konformer 1:1): 8,77 (d, J = 10Hz, CgAANH); 7,79 (d, J = 10Hz, CgAA NH); 7,73 (d, J = 10Hz, NH); 7,65 (d, J = 10Hz, NH); 7,44, 7,44, 7,42, 7,39 (4d, MeMeOTrp H-4' és H-7'); 7,25, 7,22 (2t, MeMeOTrp, H-6'); 7,13-7,03 (m, MeMeOTrp H-5'); 7,02, 6,98 (2s, MeMeOTrp H-2'); 6,19 (d, J = 10Hz, Leu NH); 6,00 (d, J = 6Hz, Leu NH) ; 5,80-5,53 (m, olefin-H); 5,31 (ddd, MeAla a-H); 5,08-4,67 (m, a-H, olefin-H); 4,47 (dd, MeLeu a-H);
4,15-3,98 (m) ; 4,05, 4,02 (2s, N-OMe); 3,7-3,0 (m) ; 3,44,
3,21, 3,20, 2,92, 2,52, 2,44 (6s, N-Me); 2,15-1,90 (m); 1,90-1,08 (m); 1,55, 1,50 (2d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,05 (d, J =
6,5Hz, MeLeu Me); 1,0-0,8 (m); 0,60, 0,06 (2d, J = 6,6Hz, Leu ···· ····
Me) ; -0,20 (ddd, Leu β-CH).
(3 konformer 44:53:3 jelölésük: *-gal, 0-vei, illetve '-jel- 64 -
| lel | ) : 8,81* | (d, 10Hz, PrLeu6 NH) ; | 7,78, | 7,73, 7,67 (3d, | 10Hz, |
| NH) | ; 7,43, | 7,42 (2d, 8Hz, indol | H-4 ' ) | ; 7,37 (d, 8Hz, | indol |
| H-7 | ') ; 7,28 | -7,00; 7,02, 6,97 (2s, | indol | H-2'); 6,21° (d, | 10Hz, |
| Leu | NH); 5, | 97* (d, 6Hz, Leu NH); | 5,75' | (d, Leu NH); 5,50 | 4,65; |
4,47* (dd, MeLeua-H); 4,05 (ddd, α-H); 4,04 (s, OMe); 4,02 (s, OMe); 3,65-3,10; 3,44° (s, MeAla N-Me); 3,22 (s, MeAla N-Me); 3,19 (s, N-Me); 2,93* (s, MeTrp N-Me); 2,52, 2,39 (2s, N-Me); 2,15-0,82; 1,54*, 1,50° (2d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,04* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me); 0,57* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,48' (d,
Leu δ'-Me); 0,26' (d, Leu δ''-Me); -0,04* (d, 6,6Hz, Leu δ’
-Me) .
(3 konformer 47:48:5, jelölésük: -gal, °-vel, illetve '-jellel): 8,63, 7,87, 7,77, 7,63 (4d, 10Hz, PrLeu NH); 7,49’ (d,
| 7Hz, | indol | H-4 1 ) ; 7,48° (d, | 7Hz, indol H-4'); 7, | 43* | (d, 8Hz, |
| indol | H-7 ') | ; 7,41° (d, 8Hz, | indol H-7'); 7,27* (dd, | indol H- | |
| -6') ; | 7,23° | (dd, indol H-6') | ; 7,13* (dd, indol | H-5 | '); 7,08° |
| (dd, | indol | H-5'); 7,04° (s, | indol H-2'); 7,02* ( | s, | indol H- |
| -2') ; | 6,98' | (s, indol H-2'); | 6,2° (d, 10Hz, Leu NH); | 6,01* (d, | |
| 7Hz, | Leu NH) | ; 5,79' (d, 9Hz, | Leu NH); 5,30° (ddd, | PrLeu6 α-H); | |
| 5,07* | (dd, | Hba α-H); 5,03* | (ddd, PrLeu6 α-H); | 4, | 86* (ddd, |
| PrLeu2 a-H) | ; 4,79 (dd, MeTrp α-H); 4,47* (dd, | MeLeu α-H); | |||
| 4,18* | (ddd, | Leu α-H); 4,06 (s | , N-OMe); 4,05' (s, | N-OMe); 4,03 | |
| (s, | N-OMe); | 3,71-3,50; 3,42 | (s, N-Me); 3,23-3, | 05; | 3,20 (s, |
N-Me); 3,18 (s, N-Me); 2,9 (s, N-Me); 2,52 (s, N-Me); 2,51 (s,
N-Me); 2,03-1,08; 1,54* (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,50° (d, 7Hz,
MeAla β-Me); 1,05* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me); 0,98-0,84; 0,63* (d, 6,6Hz, Leu ő'-Me); 0,53' (d, 7Hz, Leu δ'-Me); 0,34' (d,
7Hz, Leu δ''-Me); 0,11* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); -0,13* (ddd, Leu ^CH) .
(3 konformer 40:40:20, jelölésük: *-gal, °-vel, illetve '-jellel) : 8,50* (d, 10Hz, PrLeu6 NH); 8,20 (m); 7,98* (d, 10Hz,
PrLeu2 NH); 7,57* (d, 8Hz, indol H-4'); 7,53-7,35; 7,25-7,18;
7,23* (s, indol H-2'); 7,13-7,06; 7,05° (s, indol H-2'); 6,69 (d); 6,29 (d, széles); 6,22 (d, széles); 6,14° (d, 7Hz, Leu NH); 6,07* (d, 9Hz, Leu NH); 5,5° (ddd, PrLeuő α-H); 5,26-4,63 (m, α-H); 4,36 (m, MeLeu α-H); 4,18* (ddd, Leu α-H); 4,04 (s, OMe); 4,03' (s, OMe); 4,02 (s, OMe); 3,68-2,78; 3,34 (s, N-Me); 3,19 s, N-Me); 3,12 (s, N-Me); 3,03 (s, N-Me); 2,91 (s, N-Me); 2,53 (s, N-Me); 2,10-1,05; 1,03-0,78; 0,76 (d); 0,71 (d, 6,5Hz, Leu g-Me); 0,60 (d, 6,6Hz, Leu g-Me); 0,08 (d, 6,6Hz, Leu g-Me); -0,10 (ddd, Leu 'T^CH) .
(3 konformer 43:47:5, jelölésük: -gal, °-vel, illetve '-jellel) : 8,68* (d, 10Hz, PrLeuő NH); 7,87* (d, 10Hz, PrLeu2 NH) ; 7,80° (d, 10Hz, NH); 7,63° (d, 10Hz, NH); 7,55-7,37 (m, indol); 7,27-7,10 (m, indol); 7,08° (s, indol H-2'); 7,03* (s, indol H-2'); 6,58 (t, 8Hz C=C,); 6,23 (t, 8Hz C=C,); 6,18° (d,
6,7Hz, Leu NH); 6,03* (d, 10Hz, Leu NH); 5,80' (d, Leu NH) ;
5,31° (ddd, PrLeuő α-H) ; 5,08-4,91 (α-H); 4,86* (ddd, PrLeu2 Qf-H) ; 4,77-4,68 M, (α-H) ; 4,46* (dd, MeLeu Oi-H) ; 4,14* (ddd, Leu Oi-H) ; 4,05° (s, OMe); 4,03* (s, OMe); 4,02' (s, OMe);
3,71° (q, 7Hz, MeAla a-H); 3,60* (q, 7Hz, MeAla α-H); 3,53-3,00; 3,44° (s, MeAla N-Me); 3,23 (s, N-Me); 3,20 (s, N-Me); 2,93* (s, MeTrp N-Me); 2,52 (s, N-Me); 2,44 (s, N-Me); 2,20-0,83; 1,56* (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,51° (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,05* (d, 6,5Hz, MeLeud-Me); 0,62* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,57' (d, Leu δ'-Me); 0,40' (d, Leu δ''-Me); 0,10* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); -0,17* (ddd, Leu T^CH) .
(3 konformer 51:45:4, jelölésük: *-gal, °-vel, illetve '-jellel): 8,68* (d, 10Hz, PrLeuő NH); 7,87* (d, 10Hz, PrLeu2 NH) ; 7,81° (d, 10Hz, PrLeu6 NH); 7,63° (d, 10Hz, PrLeu2 NH); 7,53 (d, 8Hz, indol H-4'); 7,51 (d, 8Hz, indol H-4'); 7,43 (d, 8Hz, indol H-7'); 7,40 (d, 8Hz, indol H-7'); 7,26 (dd, indol H-6');
| 7,23 | (dd, indol H-6'); | 7,13 (dd, indol H-5'); | 7,07° (s, | indol |
| H-2 ' ) | ; 7,07 (dd, indol | H-5'); 7,03* (s, indol | H-2'); 6,21 | ° (d, |
| 10Hz, | Leu NH); 6,05* | (d, 6Hz, Leu NH); 5,79' | ' (d, 10Hz, | Leu |
| NH) ; | 5,32° (ddd, PrLeuő | a-H); 5,14 (dd, hidroxi-vajsav | α-H) ; |
5,03* (ddd, PrLeuő a-H); 4,87* (ddd, PrLeu2 a-H); 4,83* (dd,
MeTrp a-H); 4,77° (ddd, Leu a-H); 4,51* (dd, MeLeu a-H); 4,13* (ddd, Leu a-H); 4,06° (s, OMe); 4,03* (s, OMe); 3,68 (m) ;
3,57* (q, 7Hz, MeAla a-H); 3,44° (s, MeAla N-Me); 3,36* (dd,
MeTrp β-Ha); 3,23 (dd, MeTrp β-Hb); 3,22 (s, N-Me); 3,17 (s,
N-Me); 3,14 (dd); 2,96 (m CCH,); 2,93* (s, MeTrp N-Me); 2,53 (s, N-Me); 2,49 (s, N-Me); 2,25-1,97; 1,86-1,78; 1,55* (d,
7Hz, MeAla β-Me); 1,52° (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,50-1,09; 1,06* (d, 6,5Hz, MeLeud-Me); 1,00-0,85; 0,63* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,58' (d, Leu δ'-Me); 0,38' (d, Leu δ''-Me); 0,07* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); -0,11* (ddd, Leu Τ'-CH) .
• · · · · · (E/Z izomerek (6:4) arányú keveréke, mindegyiknek 3-3 konformerje; csak a jellemző szignálokat adjuk meg): 8,61, 8,48,
| 7,93, | 7,84, 7,82, 7,74, (d, 10Hz, PrLeuNH); | 7,52 | (d, | 8Hz, |
| indol); 7,08 s (indol H-2'); 6,44, 6,22 (2dt, | CH=CHCN); | 6,36- | ||
| -6,26 | (m) ; 6,13, 6,07, 5,87 (3d, Leu NH) ; 5,33 | -5,28 | (m) ; | 5,24, |
| 5,20 | (2dm, CH=CHCN); 5,06-4,97 (m); 4,92 (2d); | 4,87 | -4,75 | (m) ; |
| 4,49, | 4,46 (2dd, MeLeu a-H); 4,28, 4,18 (2ddd, | Leu | α-H) ; | 4,07, |
| 4,06, | 4,05, 4,03 (4s, N-OMe); 3,88, 3,82 (2q, | 7Hz, | MeAla | α-H) ; |
| 3,43, | 3,40, 3,23, 3,21, 3,19, 3,12, 2,93, 2,55, 2 | ,53, | 2,52, | |
| 251 | (lls, N-Me); 1,54-1,49 (5d, MeAla β-Me); | 1,06, | 1,04 | (2d, |
| 7Hz, | MeLeu d-Me); 0,74, 0,65, 0,52, 0,26, 0,08 | (5d, | Leu c | [-Me) ; |
| -0,04 | (ddd, Leu ^Γ-CH). |
(3 konformer 51:46:3 jelölésük: *-gal, °-vei, illetve '-jellel): 8,71* (d, 10Hz, PrLeu6 NH); 7,90* (d, 10Hz, PrLeu2 NH) ; 7,76° (d, 10Hz, PrLeu6 NH); 7,6° (d, 10Hz, PrLeu2 NH); 7,52* (d, 8Hz, indol H-4'); 7,48° (d, 8Hz, indol H-4'); 7,42 (d,
8Hz, indol); 7,40 (d, 8Hz, indol); 7,26* (dd, indol H-6'); 7,13* (dd, indol H-5'); 7,07° (dd, indol H-5'); 7,03* (s, indol H-2'); 7,02° (s, indol H-2'); 6,16° (d széles, 10Hz, Leu
NH); 6,01* (d, 6Hz, Leu NH); 5,77' (d, Leu NH); 5,31 (ddd, a-H) ; 5,05-4,97; 4,86 (ddd, α-H); 4,82 (dd, a-H); 4,74 (m) ;
4,46* (dd, MeLeu a-H); 4,17* (ddd, Leu a-H); 4,05* (s, N-OMe); 4,03° (s, N-OMe); 3,68 (m); 3,57 (m); 3,47* (m, CH2Cl); 3,43 (s, N-Me); 3,28* (dd, MeTrp β-Ha); 3,23* (s, MeAla N-Me); 3,21 (s, N-Me); 3,20* (dd, MeTrp β-Hb); 2,92* (s, MeTrp N-Me);
2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,49 (s, N-Me); 2,23° (dd, indol H-6');
• . · · · · ·
2,05-1,1; 1,54* (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,50° (d, 7Hz, MeAla β-Me) ; 1,05* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me) ; 0,98-0,85; 0,57* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,52' (d, Leu δ'-Me); 0,28' (d, Leu δ'1-Me) ; 0,06* (d, 6,6Hz, Leu δ' '-Me); -0,32* (ddd, Leu ΤΓ-CH) .
(3 konformer 37:59:4, jelölésük: *-gal, °-vel, illetve '-jel-
| lel): 8,73* (d, 10Hz, PrLeuő NH); 7,8* (d, 10Hz, | PrLeu2 NH) ; |
| 7,73° (d, 10Hz, PrLeu6 NH); 7,63° (d, 10Hz, PrLeu2 | NH); 7,49° |
| (d, 8Hz, indol H-4'); 7,47* (d, 8Hz, indol H-4'); | 7,42* (d, |
| 8Hz, indol H-7'); 7,38° (d, 8Hz, indol H-7'); | 7,25 (dd, |
indol); 7,22° (dd, indol H-6'); 7,12* (dd, indol H-5'); 7,06° (dd, indol H-5'); 7,04 (s, indol H-21); 7,03 (s, indol H-2');
6,22° (d széles, 10Hz, Leu NH); 6,00* (d, 6Hz, Leu NH); 5,78' (d, Leu NH); 5,31° (ddd, PrLeu6 α-H); 5,07 (dd, .α-H); 5,05-4,90; 4,87 (ddd, α-H); 4,79 (dd, α-H); 4,72 (m); 4,49* (dd,
MeLeu α-H) ; 4,11* (ddd, Leu α-H); 4,05* (s, N-OMe); 4,03° (s,
N-OMe); 3,75-3,50; 3,43 (s, N-Me); 3,38-3,13; 3,28 (s, OMe) ; 3,28 (s, OMe); 3,23 (s, N-Me); 3,21° (s, N-Me); 2,92* (s,
MeTrp N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,48° (s, N-Me); 2,00-1,08; 1,55* (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,50° (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,05* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me); 0,98-0,85; 0,60* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,05* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); -0,18* (ddd, Leu T^CH).
(2 konformer 50:50, jelölésük: *-gal, illetve °-vel): 8,70 (d, 10Hz, PrLeuő NH); 7,80* (d, 10Hz, PrLeu2 NH) ; 7,71° (d, 10Hz, PrLeuö NH); 7,69° (d, 10Hz, PrLeu2 NH); 7,47-7,35; 7,24 (dd, indol); 7,21 (dd, indol); 7,04 (dd, indol); 7,01 (dd, indol); 7,01 (s, indol H-2'); 6,97 (s, indol H-2'); 6,25° (d széles, • · · · ··· • · · · · ···· ···· ···· ·· ··
10Hz, Leu NH); 6,00* (d, 6Hz, Leu NH); 5,30° (ddd, PrLeu6 a-H) ; 5,10-4,69; 4,49* (dd, MeLeu a-H); 4,07* (ddd, Leu a-H) ; 4,04* (s); 4,02° (s); 3,72-3,02; 3,41 (s, N-Me); 3,20 (s, N-Me) ; 3,20* (s, MeAla N-Me); 2,91* (s, MeTrp N-Me); 2,53 (s, N-Me); 2,45 (s, N-Me); 2,07-0,82; 1,55* (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,50° (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,04* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me); 0,6* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,41 (m, CyPr); -0,03* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); -0,24 (ddd, Leu T^CH).
| (3 konformer 63:35:2, jelölésük: *-gal, °-vel, illetve | '-jel- |
| lel): 8,78° (d, 10Hz, PrLeu6 NH); 7,93*, 7,77° (2d, | 10Hz, |
| PrLeu2 NH); 7,47* (d, 8Hz, indol H-7'); 7,43* (d, 8Hz, | indol |
| H-4'); 7,40-7,23; 7,17°, 7,13* (2dd, indol H-6'); 7,04, | 7,03 |
(2s, indol H-2'); 6,93° (dd, indol H-5'); 6,97, 6,93 (2s, CH-
| -pH2); | 6,74* (dd, indol H-5'); 6,14° (d, 10Hz, Leu NH); | 5,92* |
| (d, 6Hz, Leu NH); 5,78' (d, Leu NH); 5,27° (ddd, PrLeu6 | a-H) ; | |
| 5,12* | (dd, Hba a-H); 4,98* (ddd, PrLeu6 a-H); 4,96* (dd, | MeTrp |
| a-H) ; | 4,85* (ddd, PrLeu2 a-H); 4,70° (ddd, a-H); 4,47* | (dd, |
| MeLeu | a-H); 4,18* (ddd, Leu a-H); 4,00*, 3,97° (2s, | OMe) ; |
| 3,57° | (dd, MeTrp β-Ha); 3,53° (dd, MeTrp β-Hb); 3,37* | (dd, |
| MeTrp | β-Ha); 3,27* (dd, MeTrp β-Hb); 3,20, 3,19, 2,93, | 2,83 |
(4s, N-Me); 2,66 (q, 7Hz); 2,55-2,33; 2,52 (s, N-Me); 2,46 (s, N-Me); 2,27-1,92; 1,80 (m); 1,68-1,05; 1,35°, 1,28* (2d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,03* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me); 0,96-0,83; 0,53' (d, Leu δ'-Me); 0,49* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,32’ (d, Leu δ’’-Me); -0,12* (d, 6,6Hz, Leu δ’’-Me); -0,49* (ddd, Leu 3^CH)
ΊΟ • · · · · · · • · · · · ···· ·«·· ···· «· ·· (Konformerek keveréke, csak kiválaszott jelek adatait adjuk meg): 7,13, 7,03 (2s, indol H-2'); 4,56, 4,40 (2m, a-H); 4,03 (S, N-OMe); 3,42, 3,23, 3,07, 2,94, 2,53 (5s, N-Me); 0,57,
0,53 (2d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,17, 0,03 (2d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); -0,03, -0,27 (2ddd, Leu β-CH).
(3 konformer 78:16:6, jelölésük: *-gal, °-vel, illetve '-jellel) : 8,45* (d, J = 10Hz, PrLeu6 NH); 8,04* (d, J = 10Hz, PrLeu2NH); 7,83° (d, J = 10Hz, NH); 7,68*, 7,53° (2d, J = 7Hz, indol H-4’); 7,30* (d, J = 8Hz, indol H-7'); 7,23* (m, indol H-6'); 7,10* (dd, indol H-5'); 6,87°, 6,79* (2s, indol H-2'); 6,28° (d, J = 10Hz, Leu NH); 6,07* (d, J = 6Hz, Leu NH); 5,83' (d, J = 10Hz, Leu NH); 5,31° (ddd, PrLeu a-H); 5,18* (dd, hidroxi-vajsav a-H); 5,13° (dd, hidroxi-vajsav a-H); 5,05* (ddd, PrLeu6 a-H); 4,98° (ddd, Leu a-H); 4,93* (dd, MeTrp a-H); 4,84* (ddd, PrLeu2 a-H); 4,78° (ddd, PrLeu2 a-H); 4,47* (dd, MeLeu a-H); 4,13* (ddd Leu a-H) 3,8-3,5 (m) ; 3,72*° (2s,
MeTrp Nl'-Me); 3,69* (q, J = 7Hz, MeAla a-H); 3,40° (s, MeAla N-Me); 3,28* (s, MeAla N-Me); 3,20 (dd, MeTrp β-Hb); 3,12* (dd, MeTrp β-Ha); 2,93* (s, MeTrp, N-Me); 2,53° (s, N-Me);
2,52* (s, MeLeu N-Me); 3,21° (s, N-Me); 2,25-2,08 (m, hidroxi-vajsav -CH2, β-Ha); 1,92* (m, Hba β-Hb); 1,83-1,75 (m) ;
1,7-1,07 (m) ; 1,53*, 1,48° (2d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,04 (d,
J = 6,5Hz, MeLeu δ-Me) ; 0,97-0,84 (m) ; 0,53* (d, J = 6,6Hz, Leu Me) ; 0,28' (d) ; -0,17* (d, J = 6,6Hz, Leu Me) ; -0,53* (ddd, Leu ^CH) .
| - 71 | • · · « « · ···« ···· ·»·· | • » · « • · ·♦ ·· | |
| (3 konformer 80:14:6, jelölésük: * | -gal, °-vel, illetve | -jel- | |
| lel) : | 8,48* (d, 10Hz, PrLeuő NH); | 8,06* (d, 10Hz, PrLeu2 | NH) ; |
| 7,94° | (d, 10Hz, PrLeu NH); 7,68* | (d, 8Hz, indol H-4'); | 7,54° |
(d, indol); 7,33* (d, 8Hz, indol H-7'); 7,31° (d, 8Hz, indol); 7,22* (dd, indol H-6'); 7,1* (dd, indol H-5'); 7,53° (d, PrLeu NH) ; 6,93° (s, indol H-2'); 6,84* (s, indol H-2'); 6,26° (d, széles, Leu NH); 6,05* (d, 7,5Hz, Leu NH); 5,84' (d, Leu, NH) ;
5,31° (ddd, PrLeuő a-H); 5,18* (dd, Hba a-H); 5,13° (dd, Hba a-H); 5,06* (ddd, PrLeuő a-H); 4,99° (ddd, Leu a-H); 4,93* (dd, MeTrp a-H); 4,87* (ddd, PrLeu2 a-H); 4,8° (ddd, PrLeu2 a-H); 4,47* (dd, MeLeu a-H); 4,16* (ddd, Leu a-H); 4,1* (m, N-CH2); 3,78-3,57; 3,69* (q, 7Hz, MeAla a-H); 3,47-2,90; 3,42° (s, MeAla N-Me); 3,32* (dd, MeTrp β-Ha); 3,3* (s, MeAla N-Me); 3,23* (dd, MeTrp β-Hb); 3,21° (s, N-Me); 3,06'. (s, N-Me);
2,93* (s, MeTrp N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,52° (s, N-Me); 2,32-2,10; 1,93* (m, hidroxi-vaj sav T^CHb) ; 1,83-1,08; 1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,48° (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,04* (d,
6,5Hz, MeLeu d-Me); 0,97-0,84; 0,52* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,26' (d, Leu δ''-Me); -0,17* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); -0,55* (ddd, Leu T^CH) .
(3 konformer 71:24:5, jelölésük: -gal,°-vel, illetve '-jellel): 8,50* (d, 10Hz, PrLeuő NH); 8,06* (d, 10Hz, PrLeu2 NH) ;
| 7,94 | ° (d, | 10Hz, | PrLeu | NH) ; | 7,77 | ° (d, | 8Hz, | indol H-41); 7,72* | |
| (d, | 8Hz, | indol | H-4 | 7,53 | ° (d, | 10Hz, | PrLeu NH); 7,40-7,05, | ||
| 6,92 | ° (s, | indol | H-2 1 | ') ; | 6,88 | * / (s, | indol | H-2 | ' ) ; 6,23° (d, 9,4Hz, |
| Leu | NH) ; | 6,09* | (d, | 7, | 4 Hz, | Leu | NH) ; 5 | ,87' | (d, Leu NH); 5,32° |
(ddd, PrLeuő a-H); 5,23* (AB; N1'-CH2); 5,20* (AB; N1'-CH2);
···· ··«· ·«
5,17 (dd, hidroxi-vajsav α-Η) ; 5,14° (dd, hidroxi-vaj sav a-H); 5,04* (ddd, PrLeu6 α-Η); 4,99° (ddd, PrLeu2 α-Η) ; 4,96* (dd, MeTrp α-Η); 4,87* (ddd, PrLeu2 α-Η); 4,78° (ddd, Leu a-H); 4,47* (dd, MeLeu α-Η); 4,21* (ddd, Leu α-Η); 3,76° (q,
7Hz, MeAla α-Η) ; 3,73-3,65, 3,67* (q, 7Hz, MeAla α-Η); 3,58° (dd, MeLeu α-Η); 3,50-3,37, 3,42° (s, MeAla N-Me); 3,33* (dd,
MeTrp β-Ha); 3,27* (s, MeAla N-Me); 3,23° (s, N-Me); 3,23* (dd, MeTrp β-Hb); 2,92* (s, MeTrp N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,52° (s, N-Me); 2,28-1,08, 1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,49° (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,06* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me); 0,98-0,82, 0,50' (d, Leu δ'-Me); 0,45* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me);
0,28' (d, Leu δ''-Me); -0,11* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); -0,47* (ddd, Leu r-cH).
(3 konformer 1:1:1): 8,62, 8,43, 8,07, 7,94, 7,87, 7,42 (6d, J
- 10Hz, NH); 7,12 (d, J = 7,4Hz, indolin arom. H); 7,08-6,99 (m, indolin arom. H); 6,72, 6,69 (2dd indolin arom. H); 6,66-6,63 (m, indolin arom. H); 6,58 (d, J = 8Hz, indolin arom. H); 6,29 (d, J = 8Hz, Leu NH); 6,15 (m széles, Leu NH); 5,88 (d, J = 8Hz, Leu NH); 5,28-4,98 (m, α-Η); 4,93 (ddd, α-Η) ; 4,74 (ddd, α-Η); 4,65 (m, α-Η); 4,54 (dd, α-Η); 4,43 (dd, αΗ); 3,80-3,66 (m) ; 3,55-3,0 (m) ; 3,46, 3,35, 3,31, 3,24, 3,22, 3,12, 3,00, 2,82, 2,57 (9s, N-Me); 2,55-1,1 (m) ; 1,52, 1,48,
1,43 (3d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,13 (d, J = 7Hz); 1,03-0,83 (m) ; 0,78, 0,76, 0,73 (3d, J = 6,5 Hz).
(3 konformer 73:23:4, jelölésük: *-gal, °-vel, illetve '-jellel): 8,53* (d, J = 10Hz, PrLeu NH); 8,06* (d, J =
10Hz, • * » » » • · « • · « · · ···· ···· ···· ·· ♦ ·
- 73 PrLeu' NH); 7,95° (d, J = 10Hz, NH); 7,67*, 7,52° (2d, J =
7Hz, indol H-4'); 7,55° (d, J = 10Hz, NH); 7,33*, 7,31° (2d, J = 8Hz, indol H-7'); 7,19*, 7,17° (2dd, indol H-6'); 7,08*,
7,04° (2dd, H-5'); 6,98', 6,88°, 6,80* (3s, indol H-2'), 6,23° (d, J = 9,3Hz, Leu NH); 6,05* (d, J = 7,5Hz, Leu NH) ; 5,84'
| (d, Leu NH) ; | 5,33° (ddd, PrLeu a-H); 5,18* | (dd, hidroxi-vajsav | |
| a-H) ; | 5,14° | (dd, hidroxi-vaj sav a-H); 5,05 | * (ddd, PrLeu α-H); |
| 4,98° | (ddd, | Leu a-H); 4,93* (dd, indol | a-H); 4,87* (ddd, |
| PrLeu' | a-H) | ; 4,81° (ddd, Leu a-H); 4,47* | (dd, MeLeu a-H); |
| 4,22* | (ddd | Leu a-H); 3,86-3,67 (m); 3,83* | (s, t-Bu-CH2-N); |
| 3,69* | (q, J | = 7Hz, MeAla a-H); 3,5-3,2 (m) ; | 3,43° (s, MeAla N- |
| -Me) ; | 3,30* | (s, MeAla N-Me); 3,22° (s, | N-Me); 2,93* (s, |
| MeMeTrp, N- | Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,53° (s, N-Me); 2,25 |
(m, hidroxi-vaj sav g-CH2); 2,18 (m, hidroxi-vaj sav β-Ha); 2,ΟΙ,08 (m) ; 1,54*, 1,49° (2d, J = 7Hz, MeAla β-Me); 1,05 (d, J = 6,5Hz, MeLeu Me) ; 0,97-0,84 (m) ; 0,52* (d, J = 6,6Hz, Leu,
Me); 0,29' (d); -0,06* (d, J = 6,6Hz, Leu Me); -0,49* (ddd,
Leu 7<CH).
| (3 konformer 78: | 19:3, jelölésük: | *-gal, °-vel, illetve | ' -jel- |
| lel):8,52* (d, | 10Hz, PrLeuő NH); | 8,06* (d, 10Hz, PrLeu2 | NH) ; |
| 7,94° (d, 10Hz, | PrLeu NH); 7,68* | (d, 8Hz, indol H-4'); | 7,53° |
| (d, 8Hz, indol | H-4' ) ; 7,52° (d, | 10Hz, PrLeu NH); 7,36 | * (d, |
| 8Hz, indol H-7') | ; 7,33° (d, 8Hz, | indol H-7'); 7,2* (dd, | indol |
5,87
H-6'); 7,17° (dd, indol H-6'); 7,09* (dd, indol H-5'); 7,05° (dd, indol H-5'); 7,02° (s, indol H-2'); 6,91* (s, . indol H-2'); 6,23° (d, 9,5Hz, Leu NH); 6,03* (d, 7,4Hz, ' (d, Leu NH); 5,32° (ddd, PrLeu6 a-H); 5,18*
Leu NH) ; (dd, híd·· ·» »*
• · * • ♦ · · ··«· ···· ···
- 74 roxi-vajsav α-H); 5,14° (dd, hidroxi-vaj sav a-H); 5,05* (ddd, PrLeu6 a-H); 4,98° (ddd, PrLeu2 a-H); 4,93* (dd, MeTrp a-H); 4,87* (ddd, PrLeu2 a-H); 4,81° (ddd, Leu a-H); 4,60 (tn, N-CH); 4,46* (dd, MeLeu a-H); 4,16* (ddd, Leu a-H); 3,75° (q, 7Hz, MeAla a-H); 3,70 (m); 3,69* (q, 7Hz, MeAla a-H); 3,57° (dd, MeLeu a-H); 3,45 (m); 3,42° (s, MeAla N-Me); 3,32* (dd, MeTrp β-Ha); 3,31* (s, MeAla N-Me); 3,23* (dd, MeTrp β-Hb); 3,21° (s, N-Me); 2,93* (s, MeTrp N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me); 2,50° (s, N-Me); 2,28 (AB-XY); 2,18 (AB-XY, hidroxi-vajsav g-CH2); 2,13* tn, hidroxi-vaj sav Y^CHa) ; 1,93* (m, hidroxi-vaj sav -CHb); 1,85-1,08; 1,53* (d, 6Hz, MeAla β-Me); 1,47 (m, N-CHMe2); 1,04* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me); 0,98-0,83; 0,52' (d,
Leu δ'-Me); 0,51* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,34' (d, Leu δ1'-Me); -0,2* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); -0,60* (ddd, Leu T^CH).
Indolin A (3 konformer jelölésük: *-gal, °-vel): 8,62* (d, J = 10Hz, PrLeu NH); 8,13° (d, J = 10Hz, NH); 8,02° (d, J = 10Hz, NH); 7,92° (d, J = 10Hz, NH); 7,86* (d, J = Hz, PrLeu' NH) ; 7,40° (d, J = 10Hz, NH); 7,23°, 7,16*, 7,09° (3d, J = 7,4Hz, indolin arom. H); 7,05°, 7,02*, 7,02° (3dd, indolin arom. H) ;
6,76°, 6,72*, 6,71° (3dd, indolin arom. H); 6,64°, 6,62°,
6,58* (3d, J =7,7Hz, indolin arom. H); 6,32° (d, J = 8Hz, Leu NH) ; 6,10° (m széles, Leu NH); 5,94* (d, J = 9Hz, Leu NH) ; 5,28-4,73 (m) ; 4,60° (dd, a-H); 4,13* (dd, a-H); 3,75-2,85 (m) , 3,45*, 3,33°, 3,33*, 3,23°, 3,20°, 3,02*, 2,81°, 2,79°,
2,57° (9s, N-Me); 2,45-0,83 (m) ; 1,52°, 1,46°, 1,42* (3d, J = 7Hz, MeAla β-Me) . Indolin B (3 komformer 1:1:1) : 8,62, 8,43,
8,07, 7,94, 7,87, 7,42 (6d, J = 10Hz, NH); 7,12 (d, J = 7,4Hz,
6,69
6,58 * » * - « • · « • · • » ···« ·« «» indolin arom. H); 7,08-6,99 (m, indolin arom. H); 6,72, (2dd indolin arom. H): 6,66-6,63 (m, indolin arom. H) ;
(d, J = 8Hz, indolin arom. H); 6,29 (d, J = 8Hz, Leu NH); 6,15 (m széles, Leu NH); 5,88 (d, J = 8Hz, Leu NH); 5,28-4,98 (m, α-H) ; 4,93 (ddd, a-H); 4,74 (ddd, a-H) ; 4,65 (m, a-H); 4,54 (dd, a-H); 4,43 (dd, a-H); 3,80-3,66 (m); 3,55-3,0 (m); 3,46,
3,35, 3,31, 3,24, 3,22, 3,12, 3,00, 2,82, 2,57 (9s, N-Me);
2,55-1,1 (m); 1,52 (1,48, 1,43 (3d, J = 7Hz, MeAla S-Me);
1,13 (d, J = 7Hz) ; 1,03-0,83 (m) ; 0,78, 0,76, 0,73 (3d, J =
6,5 Hz) .
(3 konformer 76:18:6, jelölésük: *-gal, °-vel, illetve '-jellel): 8,49* (d, 10Hz, PrLeu6 NH); 8,05* (d, 10Hz, PrLeu2 NH) ;
7,94° (d, 10Hz, PrLeuő NH); 7,67* (d, 8Hz, indol H-4'); 7,53° (d, 8Hz, indol H-4'); 7,52° (d, 10Hz, PrLeu2 NH); 7,4* (d, 8Hz, indol H-7'); 7,38° (d, 8Hz, indol H-7'); 7,23* (dd, indol H-6'); 7,19° (dd, indol H-6'); 7,11* (dd, indol H-5'); 7,07° (dd, indol H-5'); 7,05° (s, indol H-2'); 7,01* (s, indol H-2'); 6,22° (d, széles, Leu NH); 6,05* (d, 7,5Hz, Leu NH) ; 5,84' (d, Leu NH); 5,31° (ddd, PrLeuő a-H); 5,19* (dd, hidroxi-vajsav a-H); 5,16° (dd, hidroxi-vajsav a-H); 5,04* (ddd, PrLeuő a-H); 5,00° (ddd, PrLeu2 a-H); 4,94* (dd, MeTrp a-H);
4,87* (ddd, PrLeu2 a-H); 4,81° (ddd, Leu a-H); 4,67' (ddd, Leu a-H); 4,45* (dd, MeLeu a-H); 4,18* (ddd, Leu a-H); 4,14 (s,
OPr); 3,80-3,55; 3,67* (q, 7Hz, MeAla a-H); 3,50-3,40; 3,42° (s, N-Me); 3,29* (dd, MeTrp S-Ha); 3,27* (s, MeAla N-Me); 3,21° (s, N-Me); 3,18* (dd, MeTrp S-Hb); 3,04' (s, N-Me); 2,93* (s, MeTrp N-Me); 2,55° (s, N-Me); 2,53* (s, MeLeu N-Me);
2,30-1,90; 1,80 (m, OPr); 1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,48° (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,08° (t, OPr); 1,07 (t, OPr); 1,05* (d,
6,5Hz, MeLeu d-Me); 0,98-0,85; 0,59' (d, Leu δ'-Me); 0,57* (d,
6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,37' (d, Leu δ''-Me); -0,07* (d, 6,6Hz,
Leu δ 1 1-Me) .
(3 konformer 73:21:6, jelölésük: *-gal, °-vel, illetve '-jellel): 8,49* (d, 10 Hz, PrLeu6 NH); 8,05* (d, 10Hz, PrLeu2 NH) ; 7,94° (d, 10Hz, PrLeuő NH); 7,67* (d, 8Hz, indol H-4'); 7,53° (d, 8Hz, indol H-4'); 7,52° (d, 10Hz, PrLeu2 NH); 7,4* (d, 8Hz, indol H-7’); 7,38° (d, 8Hz, indol H-7'); 7,23* (dd, indol H-6'); 7,19° (dd, indol H-6'); 7,11* (dd, indol H-5'); 7,07° (dd, indol H-5'); 7,05° (s, indol H-2'); 7,01* (s, indol H-2'); 6,22° (d, 9,4Hz, Leu NH); 6,05* (d, 7,3Hz, Leu NH) ; 5,86' (d, Leu, NH); 5,31° (ddd, PrLeuő a-H); 5,19* (dd, hidroxi-vajsav a-H); 5,16° dd, hidroxi-vajsav a-H); 5,03* (ddd, PrLeuő a-H); 5° (ddd, PrLeu2 a-H); 4,94* (dd, MeTrp a-H); 4,87* (ddd, PrLeu2 a-H); 4,81° (ddd, Leu a-H); 4,65' (ddd, Leu a-H); 4,46* (dd, MeLeu a-H); 4,26* (q, OEt); 4,26° (q,
OEt); 4,19* (ddd, Leu a-H); 3,80-3,56; 3,67* (q, 7Hz, MeAla a-H); 3,45-3,33; 3,41° (s, MeAla N-Me); 3,29* (dd, MeTrp β-Ha); 3,27* (s, MeAla N-Me); 3,21° (s, N-Me); 3,19* (dd, MeTrp β-Hb) ; 3,04' (s, N-Me); 2,93* (s, MeTrp N-Me) ; 2,57° (s, N-Me); 2,52* (s, MeLeu N-Me); 2,32-1,08; 1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,48 ° (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,40° (t, OEt); 1,40* (t,
OEt); 1,05* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me); 0,98-0,84; 0,60' (d, Leu δ'-Me); 0,57* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,37' (d, Leu δ ' ’-Me) ,-0,07* (d, 6,6Hz, Leu δ ' '-Me) ; -0,36* (ddd, Leu ^CH) .
•••r ···· ···» ··· *
··
| (3 konformer 63:32:5, | jelölésük: | *-gal, °-vel, illetve 1 | 1 - jel- | |
| lel) : | 8,45* (d, 10Hz, | PrLeuő NH); | • 8,06* (d, 10Hz, PrLeu2 | NH) ; |
| 7,97° | (d, 10Hz, PrLeu6 | NH); 7,90' | (d, 10Hz, PrLeuő NH); | 7,63* |
(d, 8Hz, indol H-4'); 7,56° (d, 10Hz, PrLeu2 NH); 7,45° (d, 8Hz, indol H-4'); 7,4* (d, 8Hz, indol H-7'); 7,38° (d, 8Hz, indol H-7'); 7,23* (dd, indol H-6'); 7,22° (dd, indol H-6'); 7,13* (dd, indol H-5'); 7,08° (dd, indol H-5'); 6,2° (d, 10Hz, Leu NH); 6,07* (d, 7,5Hz, Leu NH) ; 5,77' (d, 8,5Hz, Leu NH) ; 5,32° (ddd, PrLeuő a-H); 5,26' (dd, Hba a-H); 5,2* (dd, hidroxi-vajsav a-H); 5,16° (dd, Hba a-H); 5,03* (ddd, PrLeu6 a-
| H) ; | 4,97* | (dd, MeTrp a-H); 4,87* | (ddd, | PrLeu2 | a-H) ; | 4,67° |
| (ddd, | a-H) | ; 4,46* (dd, MeLeu a-H); | 4,13* | (ddd, | PrLeu2 | a-H) ; |
| •ff 4,09 | (S, | N-OMe); 4,04’ (s, N-OMe) | ; 4,03 | ° (s, | N-OMe); | 3,74° |
(q, 7Hz, MeAla a-H); 3,71* (q, 7Hz, MeAla a-H); 3,70-3,60;
3,54-3,50; 3,47° (s, MeAla N-Me); 3,28-3,17; 3,25* (s, MeAla N-Me); 3,20° (s, N-Me); 2,97* (s, MeTrp N-Me); 2,52* (s,
MeLeu N-Me); 2,42° (s, N-Me); 2,40-2,14,-1,97 (m) ; 1,79 (m) ;
1,65-1,08; 1,53* (d, 7Hz, Me Alá β-Me); 1,5° (d, 7Hz, MeAla β-Me); 1,04* (d, 6,5Hz, MeLeud-Me); 0,98-0,83; 0,62' (d, Leu δ'-Me); 0,57* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me); 0,37' (d, Leu δ''-Me);
-0,09* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me); -0,35* (ddd, Leu (f^CH) .
(3 konformer 44:30:26, jelölésük: *-gal, °-vel, illetve '-jel lel): 8,85 (d, CSNH2); 8,60 (d, PrLeuő NH); 8,17 (d, CSNH2);
8,03, 8,00 (2d, NH) ; 7,88 (m, CSNH2); 7,6-7,1,- 6,28* (d, 10Hz, Leu NH); 6,07° (d, 7Hz, Leu NH); 5,87' (d, 9Hz, Leu NH) ; 6,26* (ddd, PrLeu2 a-H); 5,22 (dd, hidroxi-vaj sav a-H); 5,15···· ···· ·· ·
- 78 -4,95, 5,08* (dd, hidroxi-vaj sav a-H); 4,83° (ddd, PrLeu2 a-H); 4,50* (ddd, Leu a-H); 4,37* (dd, MeTrp a-H); 4,25° (ddd, Leu a-H); 4,09, 4,05, 4,03* (3s, OMe); 3,89 (m, a-H); 3,65*, 3,63', 3,52° (3q, 7Hz, MeAla a-H); 3,57 (m); 3,17, 3,16, 3,15, 3,22, 3,20, 3,05, 2,92, 2,55, 2,53 (9s, NMe); 1,8-1,1; 1,05 (d, 7Hz); 0,99-0,82, 0,60°, 0,55', 0,23', 0,17° (4d, 7Hz, Leu δ-Me); -0,15°, -0,17' (ddd, Leu QT^CH).
Claims (29)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Egy (I) általános képletű ciklopeptolid — amely képletbenA jelentése adott esetben ΊΓ-helyzetben Rg csoporttal szubsztituált a-hidroxi-szubsztituált vaj sav-maradék, ahol Rg jelentése ciano-, tiokarbamoil-, -COOR2, -CONR3R4 vagy -CORg általános képletű csoport, illetve alkilcsoport, amely szubsztituált lehet halogénatommal, azido- vagy alkoxicsoporttal, továbbá adott esetben védett hidroxi- vagy amino-csoport vagy vinil-csoport, amely halogénatommal, alkil- vagy cikloalkilcsoporttal szubsztituált lehet, végül tetrazolilvagy etinilcsoport, aholR2 jelentése hidrogénatom vagy adott esetben arilcsoporttal szubsztituált alkilcsoport,R3 és R4 azonosak vagy különbözők, és jelentésük hidrogénatom vagy alkilcsoport, vagy a nitrogénatommal együtt adott esetben egy második heteroatomot is tartalmazó 3-6-tagű gyűrűt jelentenek;ésRg jelentése hidrogénatom vagy kis szénatomszámú alkilcsoport;B jelentése α-amino-7S* -metil-szubsztituált oktánsav-maradék; Rf jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;C jelentése (VI) általános képletű triptofán- vagy N-metil-triptofán-maradék, aholRg jelentése hidrogénatom, alkoxi-, alkil- vagy benzil• «- 80 csoport,Rg jelentése hidrogénatom vagy halogénatom,R10 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, és ---- jelentése egyes vagy kettős kötés;X jelentése a-amino-szubsztituált 2-14 szénatomos karbonsav-maradék; ésY jelentése α-amino- vagy N-metil-a-amino-szubsztituált 2-10 szénatomos karbonsav-maradék.
- 2. Egy 1. igénypont szerinti ciklopeptolid, amelyben A jelentése olyan α-hidroxi-vajsav-maradék, amely ^-helyzetben szubsztituált ciano- vagy -COOR2' általános képletű csoporttal, ahol R2 1 jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilvagy difenil-metil-csoport, -CONR3'R4' általános képletű csoporttal, ahol Rg' jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, és R4 ' jelentése hidrogénatom vagy alkilcsoport, vagy együtt a nitrogénatommal együtt 3-6-tagú gyűrűt vagy morfolino-gyűrűt képeznek, hidroxi-metil- vagy -CORg' általános képletű csoporttal, ahol R5 1 jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport, adott esetben brómatommal, ciano- vagy 1-4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituált vinilcsoporttal, adott esetben klóratommal, azido-, amino-, hidroxi- vagy alkoxicsoporttal szubsztituált alkilcsoporttal, továbbá tetrazolil-, ciklopropil-, tiokarbamoil- vagy etinilcsoporttal.
- 3. Egy 1. vagy 2. igénypont szerinti ciklopeptolid, amelyben C jelentése olyan (VI) általános képletű N-metil-triptofán-maradék, ahol Rg jelentése hidrogénatom, 1-
- 4 szénatomos alkoxi-, különösen metoxi- vagy alkilcsoport, és Rg jelentése hidrogénatom vagy halogénatom.I ι- 81 4. Egy 1., 2. vagy 3. igénypont szerinti ciklopeptolid, amelyben X jelentése olyan a-amino-szubsztituált 4-8 szénatomos karbonsav-maradék, amely adott esetben β- vagy helyzetben 1-4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituált.
- 5. Egy 1-4. igénypontok szerinti ciklopeptolid, amelyben X jelentése a-amino-β- vagy V-helyzetben 1-4 szénatomos alkilcsoporttal, elsősorban metilcsoporttal szubsztituált oktánsav- vagy vaj sav-maradék.
- 6. Egy az 1-5. igénypontok szerinti ciklopeptolid, amelyben Y jelentése olyan N-metil-a-amino-szubsztituált 2-4 szénatomos karbonsav-maradék, amely adott esetben β- vagy V-helyzetben 1-4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituált.
- 7. Egy az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti ciklopeptolid, amelyben Y jelentése N-metil-alanin vagy N-metilvalin-mara- dék.
- 8. Egy (II) általános képletű, (A) jelű ciklopeptolid.
- 9. Egy (III) általános képletű, (B) jelű ciklopeptolid.
- 10. Egy nyíltláncú peptid vagy peptolid, amely az előző igénypontok bármelyike szerinti ciklopeptolidnak felel meg.
- 11. Egy (IV) általános képletű nyíltláncű peptid vagy peptolid, amely képletben a szubsztituensek jelentése azonos az 1. igénypontban meghatározottakkal, és R-j jelentése hidrogénatom vagy alkilcsoport.
- 12. Egy (V) általános képletű nyíltláncú peptid vagy peptolid, amely képletben a szubsztituensek jelentése azonos az 1. igénypontban meghatározottakkal, és R7 jelentése hidrogénatom vagy alkilcsoport.
- 13. Egy (Ip) általános képletű ciklopeptolid, amely kép82 letbenAp jelentése α-hidroxi-szubsztituált vaj sav-maradék, amelyadott esetben 7fhelyzetben Rgp csoporttal szubsztituált, ahol Rgp jelentése ciano-, adott esetben védett hidroxi-metil-, -COOR2p általános képletű, -CONR3pR4p vagy -CORgp általános képletű vagy vinilcsoport, ahol R2p jelentése hidrogénatom vagy adott esetben arilcsoporttal szubsztituált alkilcsoport, R3p és R4p azonosak vagy különbözőek, és jelentésük hidrogénatom vagy alkilcsoport, vagy a nitrogénatommal együtt egy adott esetben második heteroatomot is tartalmazó 5- vagy 6-tagú gyűrűt képeznek, ésR5p jelentése hidrogénatom vagy kis szénatomszámú alkilcsoport; Bp jelentése α-amino- IT-metil-szubsztituált oktánsav-maradék; Rgp jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport;Cp jelentése egy triptofán- vagy N-metil-triptofán-maradék, amely adott esetben Ν'-1-4 szénatomos alkilcsoporttal szubsztituált;X„ jelentése a-amino-szubsztituált 2-14 szénatomos karbonsavP J-maradék; ésYp jelentése α-amino- vagy N-metil-a-amino-szubsztituált 2-10 szénatomos karbonsav-maradék.
- 14. Egy (I'p) általános képletű ciklopeptolid, amely képletbenA'p jelentése egy adott esetben helyzetben R'gp csoporttal szubsztituált α-hidroxi-szubsztituált vaj sav-maradék, ahol R'gp jelentése ciano-, -COOR'2p, -CONR3pR4p vagy -CORgp általános képletű csoport, alkilcsoport, amely szubsztituált lehet halogénatommal, azido- vagy alkoxicsoporttal, adott esetben védett hidroxi- vagy aminocsoport, vinilcsoport, amely szubsztituált lehet halogénatommal, aikilvagy cianocsoporttal, cikloalkil-, tetrazolil- vagy etinilcsoport, aholR'2p jelentése hidrogénatom vagy adott esetben árucsoporttal szubsztituált alkilcsoport,R'3p és R'4p azonosak vagy különbözőek, és jelentésük hidrogénatom, alkilcsoport vagy á nitrogénatommal együtt egy adott esetben második heteroatomot is tartalmazó 3-6-tagú gyűrűt képeznek, ésR'cjp jelentése hidrogénatom vagy kis szénatomszámű alkilcsoport ,B'p jelentése egy α-amino- -metil-szubsztituált oktánsav-maradék,R'jp jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport,C'p jelentése triptofán- vagy (VI’p) általános képletű N-metil-triptofán-maradék, aholR'gp jelentése hidrogénatom, alkoxi-, aikil- vagy benzilcsoport,R'9p jelentése hidrogénatom vagy halogénatom,R'lOp jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, és ---- jelentése egyes vagy kettős kötés;X'p jelentése a-amino-szubsztituált 2-14 szénatomos karbonsav-maradék,Y'p jelentése α-amíno- vagy N-metil-a-amino-szubsztituált 2-10 szénatomos karbonsav-maradék.
- 15. Egy előző igénypontok bármelyike szerinti vegyület só vagy észter formájában.·· ·· ·· · n • · · · · ··· · · • · · · · · · • · · · · ···· ···· ···· ·· ··
- 16. Egy vegyület, amely rendelkezik az A vegyület 1. táblázatban megadott, 2., 3. és 5-8. jellemzőivel.
- 17. Egy vegyület, amely rendelkezik a B vegyület 1. táblázatban megadott 2., 3. és 5-8. jellemzőivel.
- 18. Az NRRL 21123 számon letétbe helyezett F92-4471/08 jelű gombatörzs vagy egy mutánsa vagy származéka.
- 19. Az NRRL 21123 számon letétbe helyezett F92-4471/08 számú gombatörzs által termelt új ciklopeptolidok.
- 20. Eljárás egy 1. igénypont szerinti vegyület előállítására, azzal jellemezve, hogy az F92-4471/08 (NRRL 21123) gombatörzset vagy mutánsát vagy származékát vagy egy hasonló gombafajt tápoldatban tenyésztjük, és abból a vegyületet kinyerjük.
- 21. Eljárás egy 1. igénypont szerinti vegyület előállítására egy (II) vagy (III) általános képletű vegyület származék-képzésével, azzal jellemezve, hogya) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése -COOR'2 általános képletű csoport, olyan (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Rg jelentése cianocsoport, nukleofilekkel, elsősorban egy alkohollal, megfelelő bázisos vagy savas katalízissel, előnyösen sósavval, szerves oldószerben, előnyösen dietil-éterben reagáltatunk; vagyb) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése -CO-alkil általános képletű csoport, olyan (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Rg jelentése cianocsoport, nukleofil fémorganikus vegyületekkel, előnyösen Grignard-vegyületekkel vagy lítium-alkilekkel aprotikus szerves oldószerben, előnyösen dietil-éterben katalizátor jelenlétében vagy anélkül reagáltatunk; vagyc) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése karboxicsoport, olyan (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Rg jelentése -COO-alkil általános képletű csoport, ásványi savval, előnyösen vizes-alkoholos oldatban sósavval vagy bázissal hídrólizálunk; vagyd) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése -COOR'2 általános képletű csoport, olyan (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Rg jelentése karboxicsoport, sztenderd módszereket alkalmazva észteresítünk, előnyösen úgy, hogy a karbonsavat szulfinil-dikloriddal savkloriddá alakítjuk, amelyet azután a megfelelő alkohollal reagáltatunk savmegkötő jelenlétében vagy anélkül; vagye) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése hidroxi-metil-csoport, olyan (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Rg jelentése -COOR2 általános képletű csoport, fémhidridekkel vagy bórhidridekkel, előnyösen borán-dimetil-szulfid komplexszel szerves oldószerekben redukálunk; vagyf) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése -CONR3R4 általános képletű csoport, olyan (I) általános képletű vegyületeket, ame4 lyekben Rg jelentése -COOR2 általános képletű csoport, aminokkal reagáltatunk előnyösen úgy, hogy a szabad savat- 86 először savkloriddá alakítjuk, majd ezt egy HNR3R4 általános képletű aminnal reagáltatjuk; vagyg) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése formilcsoport, olyan (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Rg jelentése hidroxi-metil-csoport, oxidálunk; vagyh) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése adott esetben szubsztituált vinilcsoport, olyan (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Rg jelentése formilcsoport, metil-Wittig-reagenssel reagáltatunk; vagyi) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése adott esetben szubsztituált alkilcsoport, olyan (I) általános képletű vegyületeket viszünk reakcióba, amelyekben Rg jelentése hidroxi-metil-csoport; vagyj) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése amino-metil-csoport, az olyan (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Rg jelentése azido-metil-csoport, redukálunk; vagyk) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése etinilcsoport, olyan (I) általános képletű vegyületeket reagáltatunk, amelyekben Rg jelentése 2,2-dibróm-vinil-csoport; vagyl) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése ciklopropilcsoport, az olyan (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Rg jelentése vinilcsoport, diazo-metánnal reagáltatunk; vagyA • · fim) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése tetrazolilcsoport, olyan (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Rg jelentése cianocsoport, egy azid-vegyülettel reagáltatunk; vagyn) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése hidrogénatom, olyan az(I) általános képletű vegyületekből, amelyekben Rg jelentése metoxicsoport, a metoxicsoportot eltávolítjuk; vagyo) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben ---- jelentése egyes kötés, olyan (I) általános képletű vegyületeket amelyekben ---- jelentése kettős kötés, redukálunk; vagyp) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése alkil- vagy benzilcsoport, ezeket a csoportokat olyan (I) általános képletű vegyületekbe visszük be, amelyekben Rg jelentése hidrogénatom; vagyq) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése halogénatom, olyan (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Rg jelentése hidrogénatom, halogénezünk; vagyr) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése metoxicsoport, és --- kettős kötést jelent, az olyan (I) általános képletű vegyűleteket, amelyekben Rg jelentése hidrogénatom, és ---egyes kötés, egy alkáli-[tetraoxo-volfrámát(VI)]-tál és hidrogén-peroxiddal reagáltatunk, azután pedig az N-hidroxi-indol köztiterméket alkilezzük; vagy »·· ··»·s) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítása esetén, amelyekben Rg jelentése tiokarbamoil-csoport, (I) általános képletű vegyületeket kén-származékokkal, előnyösen difenil-foszfino-ditiosawal reagáltatunk.
- 22. Eljárás egy 1. igénypont szerinti vegyület előállítására, azzal jellemezve, hogy az A, B, R-^Leu, Leu, C, X és Y savmaradékokat megfelelő sorrendben összekapcsolva tartalmazó lineáris peptidet vagy peptolidot ciklizáljuk.
- 23. Egy 1. igénypont szerinti vegyület gyógyászati célú felhasználása.
- 24. Egy 1. igénypont szerinti vegyület gyógyászati célú felhasználása adhéziós molekulák expressziójának gátlására.
- 25. Egy 1. igénypont szerinti vegyület gyógyszerként történő alkalmazása.
- 26. Gyógyszerkészítmény, amely egy 1. igénypont szerinti vegyület terápiásán hatékony mennyiségét tartalmazza.
- 27. A 24. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény krém, lemosószer vagy más hasonló formában helyi alkalmazás céljára.
- 28. A 24. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény aeroszol formában, inhaláló készülékben történő alkalmazás céljára.
- 29. Egy 1. igénypont szerinti vegyület felhasználása adhéziós molekulák megnövekedett szintű expressziója következtében fellépő megbetegedések kezelésére vagy megelőzésére szolgáló, terápiás alkalmazású gyógyszer előállítására.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9415168A GB9415168D0 (en) | 1994-07-27 | 1994-07-27 | Organic compounds |
| GBGB9504332.9A GB9504332D0 (en) | 1995-03-03 | 1995-03-03 | Organic compounds |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT77388A true HUT77388A (hu) | 1998-04-28 |
Family
ID=26305345
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9700226A HUT77388A (hu) | 1994-07-27 | 1995-07-26 | Ciklopeptolidok és gyógyszerkészítményekben való felhasználásuk |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6013627A (hu) |
| EP (1) | EP0775158B1 (hu) |
| JP (1) | JP3425763B2 (hu) |
| KR (1) | KR100378974B1 (hu) |
| CN (1) | CN1116304C (hu) |
| AT (1) | ATE187461T1 (hu) |
| AU (1) | AU702332B2 (hu) |
| BR (1) | BR9508342A (hu) |
| CA (1) | CA2192786C (hu) |
| CY (1) | CY2225B1 (hu) |
| CZ (1) | CZ289311B6 (hu) |
| DE (1) | DE69513837T2 (hu) |
| DK (1) | DK0775158T3 (hu) |
| ES (1) | ES2142490T3 (hu) |
| FI (1) | FI970279A (hu) |
| GR (1) | GR3032698T3 (hu) |
| HK (1) | HK1014011A1 (hu) |
| HU (1) | HUT77388A (hu) |
| MX (1) | MX9606494A (hu) |
| NO (1) | NO970340D0 (hu) |
| NZ (1) | NZ291168A (hu) |
| PL (1) | PL181990B1 (hu) |
| PT (1) | PT775158E (hu) |
| RU (1) | RU2155772C2 (hu) |
| SK (1) | SK11797A3 (hu) |
| WO (1) | WO1996003430A1 (hu) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6187757B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-02-13 | Ariad Pharmaceuticals, Inc. | Regulation of biological events using novel compounds |
| US6011136A (en) * | 1995-11-21 | 2000-01-04 | Novartis Ag | Cyclopeptolides |
| WO1999014082A1 (en) | 1996-09-18 | 1999-03-25 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Adhesively-bonded inflatable restraint and method of making |
| US6365619B1 (en) | 1999-07-22 | 2002-04-02 | Novartis Ag | Treatment of arteriosclerosis |
| EP1212331B1 (en) * | 1999-08-24 | 2004-04-21 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | 28-epirapalogs |
| US7067526B1 (en) | 1999-08-24 | 2006-06-27 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | 28-epirapalogs |
| AU2002223649A1 (en) * | 2000-10-27 | 2002-05-06 | Novartis Ag | Vegh inhibitors and their use |
| GB0028367D0 (en) * | 2000-11-21 | 2001-01-03 | Celltech Chiroscience Ltd | Chemical compounds |
| GB0101598D0 (en) * | 2001-01-22 | 2001-03-07 | Novartis Ag | Organic compounds |
| EP1594459B1 (en) | 2002-12-30 | 2010-02-17 | Angiotech International Ag | Drug delivery from rapid gelling polymer composition |
| WO2009089549A1 (en) | 2008-01-11 | 2009-07-16 | Massachusetts Eye & Ear Infirmary | Conditional-stop dimerizable caspase transgenic animals |
| US9593356B2 (en) | 2013-06-11 | 2017-03-14 | Takara Bio Usa, Inc. | Protein enriched microvesicles and methods of making and using the same |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4443367A (en) * | 1982-04-08 | 1984-04-17 | Monsanto Company | Peptide and peptolide substrates for mammalian collagenase |
| US4425428A (en) * | 1982-04-08 | 1984-01-10 | Monsanto Company | Novel peptide and peptolide substrates for mammalian collagenase |
| DE3851268T2 (de) * | 1987-06-19 | 1995-01-26 | Sandoz Ag | Zyklische Peptolide. |
| DE3832059A1 (de) * | 1988-09-21 | 1990-03-29 | Howaldtswerke Deutsche Werft | Tauchtiefengesteuerte ausblasventil-einrichtung |
| DE3832362A1 (de) * | 1988-09-23 | 1990-03-29 | Sandoz Ag | Neue cyclopeptolide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
-
1995
- 1995-07-26 NZ NZ291168A patent/NZ291168A/en unknown
- 1995-07-26 CA CA002192786A patent/CA2192786C/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 JP JP50548596A patent/JP3425763B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 EP EP95928473A patent/EP0775158B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-07-26 PL PL95317349A patent/PL181990B1/pl unknown
- 1995-07-26 DE DE69513837T patent/DE69513837T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 CZ CZ1997221A patent/CZ289311B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 CN CN95194370A patent/CN1116304C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 US US08/776,440 patent/US6013627A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 MX MX9606494A patent/MX9606494A/es not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 HU HU9700226A patent/HUT77388A/hu unknown
- 1995-07-26 KR KR1019970700504A patent/KR100378974B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 DK DK95928473T patent/DK0775158T3/da active
- 1995-07-26 BR BR9508342A patent/BR9508342A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-07-26 RU RU97102700/04A patent/RU2155772C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 ES ES95928473T patent/ES2142490T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-07-26 AU AU32221/95A patent/AU702332B2/en not_active Ceased
- 1995-07-26 AT AT95928473T patent/ATE187461T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 PT PT95928473T patent/PT775158E/pt unknown
- 1995-07-26 WO PCT/EP1995/002966 patent/WO1996003430A1/en active IP Right Grant
- 1995-07-26 SK SK117-97A patent/SK11797A3/sk unknown
-
1997
- 1997-01-23 FI FI970279A patent/FI970279A/fi unknown
- 1997-01-27 NO NO970340A patent/NO970340D0/no unknown
-
1998
- 1998-12-23 HK HK98115157A patent/HK1014011A1/xx unknown
-
2000
- 2000-02-18 GR GR20000400396T patent/GR3032698T3/el unknown
-
2001
- 2001-06-08 CY CY0100011A patent/CY2225B1/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ289311B6 (cs) | 2001-12-12 |
| US6013627A (en) | 2000-01-11 |
| PL181990B1 (pl) | 2001-10-31 |
| PT775158E (pt) | 2000-05-31 |
| AU3222195A (en) | 1996-02-22 |
| CZ22197A3 (en) | 1997-05-14 |
| DE69513837T2 (de) | 2000-05-18 |
| ATE187461T1 (de) | 1999-12-15 |
| AU702332B2 (en) | 1999-02-18 |
| CY2225B1 (en) | 2003-04-18 |
| NZ291168A (en) | 1998-06-26 |
| DK0775158T3 (da) | 2000-05-22 |
| JPH10504540A (ja) | 1998-05-06 |
| CN1116304C (zh) | 2003-07-30 |
| BR9508342A (pt) | 1997-10-21 |
| FI970279A0 (fi) | 1997-01-23 |
| EP0775158A1 (en) | 1997-05-28 |
| HK1014011A1 (en) | 1999-09-17 |
| NO970340L (no) | 1997-01-27 |
| GR3032698T3 (en) | 2000-06-30 |
| PL317349A1 (en) | 1997-04-01 |
| CN1154705A (zh) | 1997-07-16 |
| KR100378974B1 (ko) | 2003-10-08 |
| DE69513837D1 (de) | 2000-01-13 |
| JP3425763B2 (ja) | 2003-07-14 |
| WO1996003430A1 (en) | 1996-02-08 |
| RU2155772C2 (ru) | 2000-09-10 |
| ES2142490T3 (es) | 2000-04-16 |
| CA2192786A1 (en) | 1996-02-08 |
| NO970340D0 (no) | 1997-01-27 |
| CA2192786C (en) | 2009-06-16 |
| MX9606494A (es) | 1997-03-29 |
| EP0775158B1 (en) | 1999-12-08 |
| FI970279A (fi) | 1997-01-23 |
| SK11797A3 (en) | 1997-07-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5767069A (en) | Cyclosporins | |
| HUT77388A (hu) | Ciklopeptolidok és gyógyszerkészítményekben való felhasználásuk | |
| US5643869A (en) | Pipecolic acid-containing peptolides, their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| KR101566046B1 (ko) | 환형 화합물을 생산하는 미생물 | |
| JP2003529585A (ja) | ケモカインレセプターアンタゴニスト | |
| KR920006881B1 (ko) | 프리파스타틴(plipastatin)의 제조방법 | |
| AU712900B2 (en) | Cyclopeptolides | |
| US6251885B1 (en) | Cytotrienins, process for preparing the same and anti-tumor agent | |
| US7803600B2 (en) | Micromonospora species that produces a bafilomycin-like metabolite | |
| US7112581B2 (en) | Macrocyclic lactams | |
| JPH08301862A (ja) | Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ種の抗生物質シリアノンおよびその化学誘導体並びにその製造法および使用 |