CN1154705A

CN1154705A - 有机化合物

Info

Publication number: CN1154705A
Application number: CN95194370A
Authority: CN
Inventors: M·M·德赖弗斯; C·A·福斯特; H·U·内格利; B·奥伯豪泽尔
Original assignee: Sandoz AG
Current assignee: Sandoz AG
Priority date: 1994-07-27
Filing date: 1995-07-26
Publication date: 1997-07-16
Anticipated expiration: 2015-07-26
Also published as: HK1014011A1; DK0775158T3; EP0775158A1; JPH10504540A; NZ291168A; DE69513837T2; BR9508342A; DE69513837D1; PL181990B1; ATE187461T1; ES2142490T3; CA2192786C; MX9606494A; EP0775158B1; FI970279A0; PL317349A1; WO1996003430A1; HUT77388A; GR3032698T3; US6013627A

Abstract

式I环缩肽：其中A、B、R₁Leu、Leu、C、X和Y的定义如说明书所述，该肽为粘着分子表达抑制剂，因此可用于治疗炎症和其它与粘着分子高水平表达有关的病症。

Description

有机化合物

本发明涉及环缩肽(cyclopeptolide)以及它们作为粘着分子表达抑制剂的治疗应用。

为响应包括TNFα、IFNγ、IL1及LPS在内的前炎性淋巴因子，细胞粘着分子如ICAM-1、VCAM-1和E-选择蛋白在内皮样细胞、以及对于ICAM-1在角化细胞的表面表达。相应的抗衡配体如LFA-1、VLA-4和SLE^*在循环血细胞表面表达。通过这些粘着分子和其抗衡配体间的相互作用，调节发炎过程期间白细胞经内皮移行，以及调节血管外细胞-细胞相互作用。因此，粘着分子表达抑制剂对众多病症的治疗是强有效的。然而，目前仍没有合适的低分子量粘着分子表达抑制剂可供使用。

环缩肽为包含通过肽键相互连结的氨基酸残基和至少一个羟基取代的羧酸残基的环状分子，其中羧酸残基通过其羟基取代基与相邻的羧酸残基以酯键连结。

我们现已发现一类新的环缩肽化合物，它们为ICAM-1，VCAM-1和E-选择蛋白表达抑制剂。

本发明提供了式(I)环缩七肽：

其中：

A代表任选被R₆γ-取代的α-羟基取代的丁酸残基，其中R₆代表CN、COOR₂、CONR₃R₄、COR₅、CSNH₂或烷基(该烷基可被叠氮基、卤素、烷氧基、任选保护的羟基或氨基取代)、乙烯基(它可被烷基，卤素或CN取代)、环烷基、四唑基或-C≡CH，其中R₂代表氢或任选被芳基取代的烷基，R₃和R₄相同或不同并代表氢或烷基或者与氮共同形成任选含有其它杂原子的3-至6-元环，R₅代表氢或低级烷基；

B代表α-氨基-γ-甲基取代的辛酸残基；

R₁代表氢或甲基；

C代表式(VI)色氨酸或N-甲基色氨酸残基：

其中R₈代表氢，烷氧基，烷基或苄基，R₉代表氢或卤素，R₁₀代表氢或甲基，表示单或双键，

X代表α-氨基取代的(C₂-C₁₄)羧酸残基，以及

Y代表α-氨基-或N-甲基-α-氨基-取代的(C₂-C₁₀)羧酸残基。

式(I)中，氨基酸残基的C-末端相对于N-末端的取向为顺时针方向，且环缩肽酯键位于残基A和Y之间。当R₁为甲基时，残基R₁-Leu和Leu分别为N-甲基-亮氨酸和亮氨酸。

优选A代表α-羟基丁酸残基，该基团被氰基，COOR’₂(其中R’₂代表氢，具有1至4个碳原子的低级烷基或二苯基甲基)，CONR’₃R’₄(R’₃代表氢或甲基，R’₄代表氢或烷基，或者R’₃和R’₄与氮共同形成3-至6-元环或吗啉基环)，CH₂OH，COR₅”(R₅”代表氢或1-4碳原子低级烷基)，任选被CN、Br或具有1至4碳原子的低级烷基取代的乙烯基，任选被以下基团γ取代：叠氮基、氨基、羟基、氯或烷氧基取代的烷基，四唑基，环丙基，CSNH₂或-C≡CH。

优选C代表式VI的N-甲基色氨酸残基，其中R₈代表氢，(C₁-C₄)烷氧基，特别是甲氧基或烷基，R₉代表氢或卤素。

优选X代表α-氨基取代的(C₂-C₈)羧酸残基，该残基任选被β-或γ-(C₁-C₄)烷基取代。最优选X代表α-氨基-β-或γ-(C₁-C₄)烷基，尤其是甲基，取代的辛酸或丁酸残基。

优选Y代表N-甲基-α-氨基-取代的(C₂-C₄)羧酸残基，该残基任选被β-或γ-(C₁-C₄)烷基取代。最优选Y代表N-甲基-丙氨酸或N-甲基-缬氨酸残基。

式I化合物包含不对称C原子，因此它们可以R或S构型存在。

本发明包括对应于式I化合物的开链肽或缩肽；例如，通过裂解残基Y和A之间的酯键或裂解任何其它相邻酸残基对之间的酰胺键所得开链分子。优选的开链衍生物为式IV和V化合物：

H-C-X-Y-A-B-R₁Leu-LeuOR₇ IV

和

HA-B-R₁Leu-Leu-C-X-YOR₇ V其中R₇代表氢或烷基。优选的本发明化合物为式Ip化合物：

其中：

A_p代表任选被R_6pγ-取代的α-羟基-取代丁酸残基，其中R_6p代表CN、任选保护的CH₂OH、COOR_2p、CONR_3pR_4p、COR_5p或-CH＝CH₂，其中R_2p代表氢或任选被芳基取代的烷基，R_3p和R_4p相同或不同并代表氢或烷基或者与氮共同形成任选含有其它杂原子的5-至6-元环，R_5p代表氢或低级烷基，

B_p代表α-氨基-γ-甲基-取代辛酸残基；

R_1p代表氢或甲基；

C_p代表色氨酸或N-甲基色氨酸残基，它们任选被N’-(C₁-C₄)烷氧基取代；

X_p代表α-氨基-取代的(C₂-C₁₄)羧酸残基，以及

Y_p代表α-氨基-或N-甲基-α-氨基-取代的(C₂-C₁₀)羧酸残基。

另一组本发明化合物为式I’p化合物

其中：

A’_p代表任选被R’_6pγ-取代的α-羟基取代的丁酸残基，其中R’_6p代表CN、COOR’_2p、CONR’_3pR’_4p、COR’_5p、烷基(该烷基可被叠氮基，卤素，烷氧基，任选保护的羟基或氨基取代)、乙烯基(它可被烷基，卤素或CN取代)、环烷基、四唑基或-C≡CH，其中R’_2p代表氢或任选被芳基取代的烷基，R’_3p和R’_4p相同或不同并代表氢或烷基或者与氮共同形成任选含有其它杂原子的3-至6-元环，R’_5p代表氢或低级烷基，

B’_p代表α-氨基-γ-甲基取代的辛酸残基；

R’_1p代表氢或甲基；

C’_p代表式(VI’_p)色氨酸或N-甲基色氨酸残基：

其中R’_8p代表氢、烷氧基、烷基或苄基，R’_9p代表氢或卤素，R’_10p代表氢或甲基，

表示单或双键，

X’_p代表α-氨基取代的(C₂-C₁₄)羧酸残基，以及

Y’_p代表α-氨基-或N-甲基-α-氨基取代的(C₂-C₁₀)羧酸残基。

同样本发明还包括所有盐或酯形式以及游离形式的本发明化合物。

式II和III化合物(以下分别称作化合物A和B)已从F924471/08真菌菌株的培养物内分离得到，所述菌株从临近阿根廷LaPlata的叶屑样品内分离出并临时指定作Bartalinia属。菌株F924471/08样品按1993年7月2日的布达佩斯条约保藏在美国农业部NRRL培养保藏中心，保藏号为NRRL21123。F92447/08真菌菌株的特性见下面实施例1中所述。

本发明包括分离形式的F924471/08菌株(NRRL 21123)及其突变体和衍生物以及所有由此菌株产生的新的环缩肽。

化合物A和B及相关化合物可按如下方法制得：在营养培养基中培养F924471/08/NRRL 21123或其突变体或衍生物或类似真菌类，并按如实施例2中所述从其中分离出化合物。

化合物A和B的特性见实施例3中所述。

本发明化合物可通过衍生化合物A和B化合物而制备，它包括：

a)-为制备其中R₆代表COOR₂’，而R₂’代表任选被芳基取代的烷基的式I化合物，使其中R₆代表CN的式I化合物与亲核试剂，优选醇，借助碱性或酸性催化剂(优选盐酸)，在有机溶剂(优选醚)中反应，或

b)-为制备其中R₆代表CO烷基的式I化合物，在有或无催化剂存在下，于质子惰性有机溶剂中使其中R₆代表CN的式I化合物与亲核试剂有机金属化合物(优选格利雅化合物或烷基锂)反应，或

c)-为制备其中R₆代表COOH的式I化合物，用无机酸(优选盐酸)在醇水溶液中或用碱水解其中R₆代表COO烷基的式I化合物，或

d)-为制备其中R₆代表COOR₂’的式I化合物，按常规方法酯化其中R₆代表COOH的式I化合物，优选利用如亚硫酰氯转化成酰氯，并在有或无酸结合剂存在下用适宜醇处理，或

e)-为制备其中R₆代表CH₂OH的式I化合物，在有机溶剂中，用金属氢化物或硼氢化物(优选甲硼烷-二甲硫配合物)还原其中R₆代表COOR₂的式I化合物，或

f)-为制备其中R代表CONR₃R₄的式I化合物，通过与胺反应转化其中R₆代表COOR₂的式I化合物，优选通过转化游离酸成酰氯再与HNR₃R₄反应进行转化，或

g)-为制备其中R₆代表CHO的式I化合物，氧化其中R₆代表CH₂OH的式I化合物，或

h)-为制备其中R₆代表任意取代的乙烯基的式I化合物，将其中R₆代表CHO的式I化合物与甲基-维悌希试剂反应，或

i)-为制备其中R₆代表任意取代的烷基的式I化合物，将其中R₆代表CH₂OH的式I化合物进行反应，或

j)-为制备其中R₆代表CH₂NH₂的式I化合物，还原其中R₆代表CH₂N₃的式I化合物，或

k)-为制备其中R₆代表C≡CH的式I化合物，反应其中R₆代表CH＝CBr₂的式I化合物，或

l)-为制备其中R₆代表环丙基的式I化合物，将其中R₆代表乙烯基的式I化合物与重氮甲烷反应，或

m)-为制备其中R₆代表四唑基的式I化合物，将其中R₆代表CN的式I化合物与叠氮化物反应，或

n)-为制备其中R₆代表H的式I化合物，除去其中R₆代表OCH₃的式I化合物的甲氧基，或

o)-为制备其中符号表示单键的式I化合物，还原其中符号

表示双键的I化合物，或

p)-为制备其中R₈代表烷基或苄基的式I化合物，在其中R₈代表氢的式I化合物上引入这些基团，或

q)-为制备其中R₉代表卤素的式I化合物，卤化其中R₉代表氢的式I化合物，或

r)-为制备其中R₈代表烷氧基且符号

表示双键的式I化合物，使其中R₈代表氢且符号

表示单键的式I化合物与碱金属钨酸盐和过氧化氢反应并烷基化N-羟基-吲哚-中间体，或

s)-为制备其中R₆代表CSNH₂的式I化合物，将式I化合物与硫衍生物反应，优选与二苯二硫代次膦酸反应。

本发明化合物也可通过化学合成制备；例如采用常规肽合成技术。化合物制备的最后步骤一般为成环步骤，其中包含以适当次序相互连结的酸残基A、B、R₁Leu、Leu、C、X和Y的直链肽或缩肽经成酰胺或酯键反应环化。

因此，本发明包括制备式I环缩肽的方法，该方法包括将包含以适当次序相互连结的酸残基A、B、R₁Leu、Leu、C、X和Y的直链肽或缩肽成环。

本发明化合物显示出药理活性，因此可用作药物。具体讲，本发明化合物为细胞粘着分子受激表达抑制剂，尤其是与E-选择蛋白和ICAM-1表达有关的VCAM-1表达抑制剂。对VCAM-1的抑制作用在转录和转录后水平下发生。可用于检测本发明化合物对ICAM-1、VCAM-1和E-选择蛋白表达抑制的测定见实施例后面所述。因此本发明化合物可用于治疗或预防包含细胞粘着分子表达的疾病过程。这些疾病过程包括许多其中白细胞传送在致病过程中起重要作用的获得性和遗传性疾病/病症，最显著的为急性和慢性炎症(如变态反应、哮喘、牛皮癣、再融合损伤、类风湿性关节炎和败血症性休克)和自身免疫病(如多发性硬化)。本发明化合物的其它适应症包括肿瘤转移(如黑瘤，骨癌)和同种移植/异种移植排斥，这是因为抑制血管粘着分子能大大改进这些过程的预后。

同样，由于本发明化合物当在基于角化细胞以及其它增生试验中测试72小时时在亚微摩尔浓度下有抑制活性，它们对过多增生性皮肤病(如牛皮癣)以及各种恶性肿瘤具有有效的治疗作用。

正如p24 Elisa试验所测定的那样，本发明化合物对U1单核细胞系产生的TNFα-或IL6诱导的HIV的抑制具有活性，因此它们也可用于治疗免疫缺陷和病毒引起的疾病，尤其是用于治疗爱滋病。

因此，本发明还包括本发明化合物的治疗用途及含有它们的治疗组合物。

具体讲，本发明包括治疗或预防与粘着分子表达有关的疾病的方法，包括对受治疗者施用治疗或预防有效量本发明化合物。

本发明还包括含有治疗有效量的本发明化合物的治疗组合物。

此外，本发明还包括本发明化合物在制备用于治疗或预防与粘着分子表达有关疾病的药物方面的应用。

本发明组合物可供肠胃外，口服，气溶胶或局部施用，且一般包括一种或多种可药用载体稀释剂或赋形剂并且可包括添加剂如稳定剂等。

化合物剂量依据所处理的病症，是用于治疗还是预防以及给药方式和途径等而改变。然而，一般说来，每天每千克体重口服给药约0.05至约10mg，优选约0.1至约7.5mg，更优选约0.1至约2mg剂量，可以一次给药或以分剂量形式分2至4次给药，都能得到令人满意的结果。另一方面，对于肠胃外用药，如通过静脉内滴注或输注给药，可使用的剂量为0.01至约5mg/kg/天，优选约0.05至约1mg/kg/天，更优选约0.1至约1.0mg/kg/天。

因此，对于人患者，适宜的口服日剂量为约2.5至约500mg，优选约5至约250mg，更优选约5至100mg；或静脉内给药，日剂量为约0.5至约250mg，优选约2.5至125mg，更优选约2.5至约50mg。

本发明化合物可通过任何适宜途径给药，这些途径包括肠内、肠胃外和局部或吸入给药途径。合适的肠内给药形式为供口服的溶液，片剂或胶囊。合适的肠胃外给药形式为可注射溶液或悬浮液。合适的局部给药形式为乳油、洗剂等，按这类制剂的重量计，其浓度为0.01-10％，优选0.1-1％。合适的口服单位剂量形式可包含1至50mg化合物，通常为1至10mg。实施例4的化合物为本发明优选的化合物，并且与常规用于这类适应症的已知标准药物相比，可以以类似的给药方式，以相似或较低的剂量对较大哺乳动物(例如人)给药。

本发明通过下述实施例并参照附图以说明性方式进一步阐述，附图中：

图1示出了化合物A(a)和B(b)的UV光谱；

图2示出了化合物A的IR谱；

图3示出了化合物B的IR谱；

图4示出了化合物A的质子NMR谱；

图5示出了化合物B的质子NMR谱；

图6示出了化合物A的¹³CNMR谱，和

图7示出了化合物B的¹³CNMR谱。

下述说明性而非限制性的实施例中，所有温度均以摄氏度给出且使用下列缩略语：

Bz＝苄基 TFA＝三氟乙酸

iPr＝异丙基 THF＝四氢呋喃

nPr＝正丙基

db＝双键

sb＝单键

br＝宽

d＝双峰

Hba＝改性2-羟基丁酸

m＝多重峰

q＝四重峰

t＝三重峰

实施例1：菌株F/92-4471/08(NRRL 21123)的表征

产生化合物A和B的真菌菌株NRRL 21123从临近阿根廷La Plata采集到的叶屑样品内分离出。

当在2％麦芽琼脂培养基A(2％麦芽提取物，0.4％酵母提取物，2％琼脂，去离子水)于27℃培育3天后，菌株NRRL 21123产生25至35mm直径集落。集落通常形成白至灰色或灰褐色短气生菌丝体。

利用集落直径在培养基A内进行测量，生长的最佳温度为21至30℃，最低温度为0至6℃，且最高温度为33至38℃。在21至33℃之间培育4天后，观测到孢子形成。

真菌菌株NRRL21123在完全确定的分子孢子器内对瓶梗或环节动物生分生孢子细胞产生透明至浅棕色分生孢子。分生孢子一般为五细胞，圆柱状，通常稍弯曲且最大尺寸24-26×2，6-4um。每个分生孢子在一端载有一个透明无支链附器而在另一端细胞载有二至四个(通常三个)透明且无支链附器。

基于这些形态特征并按照B.C.Sutton(1980)：体腔霉菌(TheCoelomycetes)(Commonwealth真菌学院，Surrey，英国出版)中的鉴别图解，菌株NRRL 21123被确定属于Bartalinia Tassi属内。

实施例2：发酵

21℃下，菌株NRRL21123在含有培养基A(2％麦芽提取物，0.4％酵母提取物，2％琼脂，去离子水)的琼脂斜面上生长15天。将一面斜面上的分生孢子悬浮于10ml无菌自来水内。将1ml分生孢子悬浮液接种到两个各含有200ml培养基B(2％麦芽提取物，0.4％酵母提取物，去离子水)的500ml锥形烧瓶内，这些烧瓶在21℃下于200RPM速度旋转的旋转振荡器上培养6天，以产生前培养。2ml前培养物然后接种到各含有200ml培养基C(2.2％麦芽糖一水合物，0.72％酵母提取物，去离子水)的200ml，500ml锥形烧瓶内。这些烧瓶在21℃下于200RPM速度旋转的旋转振荡器上培养，6天后合并收集供进一步处理。

实施例3：分离代谢物，化合物A和B

采用Clarcel作为助滤剂过滤实施例2中所述的50升菌株NRRL 21123的发酵液。收集湿菌丝体并用15升甲醇-丙酮(1∶1)提取3x。用循环蒸发器真空浓缩合并的提取液至大约3升残留水溶液。此溶液用1升乙酸乙酯提取4x。合并乙酸乙酯提取液并真空浓缩至25g油状残留物，然后将其在90％含水甲醇和己烷溶剂体系中分配，真空浓缩后较低相给出4.5g粗固体。该固体加到5.5cm(内径)×38cm硅胶柱(Merck，Kieselgel60，40-63μm)并用1.4升甲基-叔丁基醚/甲醇(98∶2)，然后1升(95∶5)层析。流速保持110ml/min，收集含有化合物A(Nos.9-10)或化合物B(Nos.11-25)部分，这些部分在如实施例4(各90ml)中所述的ICAM-1表达抑制试验中显示出活性。

化合物A

合并从上述硅胶色谱得到的9-10部分，真空蒸发至干，得1g粗产品，将其通过制备HPLC进一步纯化，采用具有7μm LiChrospher RP-18的50mm(内径)×250mmMerck柱，60分钟内使用线形梯度(80→100％)的甲醇水溶液洗脱。流速25ml/min，收集25ml部分并在220nm检测。基于UV、TLC和生物活性，合并56-62部分，然后真空浓缩，得0.6g残留物。通过具有2.7cm(内径)×86cm柱的Sephadex LH20色谱进行最后纯化，甲醇洗脱。合并经TLC检测包含纯净形式化合物A的洗脱部分，真空蒸发至干，得580mg无色粉末。化合物A的性质见下表1中所示。

化合物B

合并的11-25部分在蒸去溶剂后给出2g粗物料，将其通过制备HPLC进一步纯化，采用具有7μm LiChrospher RP-18的50mm(内径)×250mmMerck柱，60分钟内使用线形梯度(80→100％)的甲醇水溶液洗脱。流速25ml/min，收集25ml部分并在220nm检测。根据UV、vTLC和生物活性，47-55部分主要含有化合物B，合并这些部分，真空蒸发，得0.4g残留物。通过用具有2.7cm×86cm柱的Sephadex LH20色谱进一步纯化，收集12ml洗脱部分，220nm处检测。根据UV，TLC和生物活性，合并23-27部分，然后真空蒸发，得0.3g残留物。最后通过使用2.2cm(内径)×16cm柱(填充有40-63μmMerck Kieselgel 60)进行硅胶色谱层析，甲苯-乙醇(95∶5)洗脱，得纯净化合物B(TLC检测)合并所得到的各部分，真空蒸发至干，得145mg无色粉末。化合物B的性质也见下表1中所示。

下述表1涉及的是图1-7。

表 1

性质化合物A 化合物B1. 外观无色粉末无色粉末2. [α]_D ²⁵ -234°(MeOH，c＝1.11) -243°(MeOH，c＝1.08)3. 质谱(FAB) m/e＝977(MH⁺) m/e＝949(MH⁺)4. 分子式 C₅₃H₈₄N₈O₉ C₅₁H₈₀N₈O₉5. UV光谱参见图1a 参见图1b6. IR光谱(KBr) 参见图2 参见图37. 质子NMR，在CDCl₃-DMSO-d₆＝在CDCl₃-DMSO-d₆＝

500MHz， 3∶2中，参见图4 4∶1中，参见图5

DMSO-d₆

作为内标8. ¹³C NMR，在CDCl₃-DMSO-d₆＝在CDCl₃-DMSO-d₆＝

125.7Mhz， 3∶2中，参见图6 4∶1中，参见图7

DMSO-d₆

作为内标9. 溶解性在氯仿，甲醇，DMSO中溶解，不溶于水和己烷10.TLC^a(Rf值) 0.31 0.2411.HPLC^b(Rt) 4.2分钟 3.3分钟^a5cm×20cm硅胶板60F₂₅₄(Merck)；甲苯-甲醇(95∶5)^bMerck LiChrospher 100RP-18(5μm)，4×125mm；MeOH-H₂O(9∶1)；1.2ml/min；使用Waters 996发光二极管排列检测器在220nm下检测

实施例4：式I化合物

(A＝A’，R₆＝COOCH₃，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃，

Y＝Y’)

将HCl的乙醚冷溶液(30ml，17％w/v，-20℃)加到含2g化合物A和1.65ml甲醇的混合物内并在-20℃保持3天。然后将反应混合物倒入碳酸氢钠水溶液内并用乙酸乙酯提取。用无水硫酸钠干燥有机提取物，过滤并真空蒸发。粗产物溶于30ml甲醇/浓盐酸(9/1)内并于室温搅拌3小时。然后用水稀释溶液并用乙酸乙酯提取。用无水硫酸钠干燥有机提取物，过滤并真空蒸发。粗反应产物通过LiChroprep RP-8反相色谱纯化(梯度：甲醇/水＝8/2至10/0)，且接着通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝100/0至95/5)，得无色泡沫标题物质和无色固体式IV开链衍生物(R₆＝COOCH₃，R₇＝CH₃)。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.41(标题物质)，Rf＝0.38(开链衍生物)；反相RP-8，甲醇/水/三氟乙酸＝95/4/1，Rf＝0.34(标题物质)，Rf＝0.51(开链衍生物)。

实施例5：式I化合物(A＝A’，R₆＝COOH，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃，

Y＝Y’)

将209mg实施例4的式I化合物的15ml叔丁醇/浓盐酸(9/1)溶液在60℃加热8小时。反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液内并用乙酸乙酯提取。有机相用pH7缓冲液洗涤，硫酸钠干燥并真空蒸发。粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝100/0至95/5)，得无色泡沫标题物质。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.25；反相RP-8，甲醇/水＝92/8，Rf＝0.34。

实施例6：式I化合物(A＝A’，R₆＝CONHCH₃，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃，

Y＝Y’)

将10mg实施例5化合物的0.5ml二氯甲烷溶液冷却至0℃并加入50μl亚硫酰氯。反应混合物在0℃保持1.5小时，然后在0℃真空下蒸发。残留的黄色油在0℃溶于1ml二氯甲烷内并加入100μl 40％甲胺水溶液。45分钟后，将反应混合物倒入0.1M HCl内，乙酸乙酯提取，并在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液间分配。有机相用盐水洗涤，硫酸钠干燥并真空蒸发。粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/乙酸乙酯/甲醇＝100/0/0至65/25/10)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.25；反相RP-8，甲醇/水＝95/5，Rf＝0.33。

类似实施例6中所述，得到下述式I化合物(A＝A’，B＝B’，C＝C’，X＝X’，Y＝Y’和R₁＝CH₃)：

实施例13：式I化合物

(A＝A’，R₆＝COOiPr，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃， Y＝Y’)

将15mg实施例5化合物的0.75ml二氯甲烷溶液冷却至0℃并加入75μl亚硫酰氯。反应混合物在0℃保持2小时，然后在0℃真空下蒸发。残留的黄色油在0℃溶于1ml二氯甲烷内并加入30μl异丙醇。在0℃3小时后，将反应混合物倒入0.1MHCl水溶液内，乙酸乙酯提取。有机相用盐水洗涤，硫酸钠干燥并真空蒸发。粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝100/0至95/5)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.47；反相RP-8，甲醇/水＝95/5，Rf＝0.37。

类似实施例9中所述，得到下述式I化合物(A＝A’，B＝B’，C＝C’，X＝X’，Y＝Y’和R₁＝CH₃)：

实施例16：式I化合物

(A＝A’，R₆＝COCH₃，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃， Y＝Y’)

将200mg化合物A的2ml溶液加到2mmol溶在5ml乙醚中的甲基-格利雅溶液并在室温下搅拌24小时。然后再加入2mmol MeMgJ乙醚溶液并在室温再搅拌24小时。将反应混合物倒入0.1 MHCl内，乙酸乙酯提取。有机相用碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，硫酸钠干燥并真空蒸发。粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/乙酸乙酯/甲醇＝100/0/0至68/27/5)，得标题物质以及相当量未转化原料。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.30。

实施例17：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CH₂OH，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃，

Y＝Y’)

室温下，将0.5ml 2M硼烷二甲硫配合物溶液加到27mg实施例5化合物的2ml四氢呋喃溶液内。搅拌反应混合物2.5小时，倒入0.1M HCl内并用乙酸乙酯提取。有机相用磷酸盐缓冲液(pH7)洗涤，硫酸钠干燥并真空蒸发。粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝100/0至95/5)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.27；反相RP-8，甲醇/水＝92/8没能与原料分开。

实施例18：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CN，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝H，

将18mg钯/活性炭(10％)加到53mg化合物A和66mg乙酸钠的4ml乙酐溶液内。在氢气氛中室温搅拌反应混合物20小时(TLC检测有50％转化)，然后倒入碳酸氢钠水溶液内并用乙酸乙酯提取。有机溶液用硫酸钠干燥并在高真空下蒸发。粗产物通过RP-8材料的反相色谱纯化(梯度：甲醇/水＝80/20至100/0)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.33；反相RP-8，甲醇/水＝92/8，Rf＝0.50(原料Rf＝0.44)。

实施例19：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CHO，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃，

将35mg Dess-Martin periodinane试剂(1，1，1-三(乙酰氧基)-1，1-二氢-1，2-benziodoxol-3(1H)-酮〕加到50mg实施例7化合物的4ml二氯甲烷溶液内并将悬浮液在20℃搅拌3小时。然后粗反应混合物倒入硅胶上并用乙酸乙酯洗脱。合并含产物部分，真空蒸发并通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝100/0至95/5)，得标题物质，未无色泡沫体。

实施例20：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CH＝CH₂，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃，

Y＝Y’)

将甲基-维悌希试剂(通过在无水THF中搅拌溴化甲基三苯膦和氨基钠制得)在20℃下缓慢加到24.7mg实施例19化合物的无水THF溶液中，至试剂保持黄色为止。然后将反应混合物倒入0.1MHCl水溶液内，乙酸乙酯提取。真空蒸发有机提取液。粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝100/0至97/3)，得标题化合物，为无色泡沫体。

实施例21：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CH＝CH-C₂H₅，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃， Y＝Y’)

标题化合物以类似实施例20中所述方法制备。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.44。

实施例22：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CH₂N₃，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃， Y＝Y’)

向30mg实施例17化合物和12mg三苯膦的3ml无水THF溶液内加入150μ10.38M叠氮酸的甲苯溶液。室温下加入偶氮二甲酸二甲酯至溶液保持黄色为止，室温搅拌混合物10分钟。粗反应混合物倒入5g氧化铝(中性)上并用乙酸乙酯洗脱。真空蒸发含产物部分并利用硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝99.5/0.5至95/5)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.46；反相RP-8，甲醇/水/TFA＝95/4/1，Rf＝0.41。

实施例23：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CH₂NH₂，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃， Y＝Y’)

将20mg实施例22化合物的2ml甲醇溶液在4℃下于氢气氛中与4mg钯/碳(10％)一同搅拌20小时。滤出催化剂，将反应混合物真空蒸发。粗产物通过RP-8反相色谱纯化(梯度：甲醇/水0.5％TFA＝80/20至100/0)，得标题化合物，为无色泡末体。

TLC：反相RP-8，甲醇/水/TFA＝95/4/1，Rf＝0.69。

实施例24：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CH＝CBr₂，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃，

Y＝Y’)

将225mg实施例19化合物的2.5ml二氯甲烷溶液加到含30mg锌粉，120mg三苯膦和150mg四溴甲烷的混合物内，并于室温搅拌30分钟。反应混合物然后倒在5g氧化铝上并用乙酸乙酯洗脱。真空蒸发含产物部分并利用硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝99.5/0.5至97/3)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.27。

实施例25：式I化合物

(A＝A’，R₆＝C≡CH，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃，

-78℃下，于2小时内将正丁基锂己烷溶液(3摩尔当量)加到50mg实施例24化合物中。将反应混合物倒入0.1M HCl水溶液内，乙酸乙酯提取。有机相用碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，并真空蒸发。粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝99.5/0.5至97/3)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.44。

实施例26：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CH＝CH-CN，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃， Y＝Y’)

将30mg实施例19化合物和270mg氰基亚甲基三苯基正膦的5ml甲苯溶液室温搅拌4小时。然后反应混合物通过氧化铝(中性)过滤并用乙酸乙酯洗脱。合并含产物部分并真空蒸。标题物质为E/Z异构体混合物。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.39。

实施例27：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CH₂Cl，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃， Y＝Y’)

将20mg实施例17化合物的1ml甲苯溶液加到10mg二氯三苯基正膦的1ml甲苯溶液内并于60℃搅拌。2小时后，再加入35mg二氯三苯基正膦。1小时后，反应混合物通过中性氧化铝过滤并用乙酸乙酯洗脱。蒸发含产物部分并将粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝100/0至97/3)，得标题物质，为无色泡沫体。TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.39。

实施例28：式I化合物

(A=A’，R₆=CH₂OCH₃，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃，

Y＝Y’)

将34mg实施例17化合物的6ml二氯甲烷溶液和100mg硅胶用重氮甲烷乙醚溶液处理至原料耗尽为止。为除去反应过程中形成的聚亚甲基，过滤反应混合物并加入新鲜二氯甲烷和硅胶。在最后真空蒸发之后，粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇=99.7/0.3至97/3)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇=9/1，Rf＝0.34。

实施例29：式I化合物

(A=A’，R₆＝

B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃，

将13mg实施例20化合物和2.8mg乙酸钯的2.5ml二氯甲烷溶液在室温下用重氮甲烷的乙醚溶液处理至原料耗尽为止。粗反应混合物通过硅胶过滤并用甲苯/甲醇洗脱。蒸发含产物部分并将粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝99.5/0.5至97/3)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.38；反相RP-8，甲醇/磷酸盐缓冲液pH7＝92/8，Rf＝0.27。

实施例30：式I化合物

(A＝A’，R₆＝COOCH(C₆H₅)₂，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃，

X＝X’，Y＝Y’)

将8.2mg实施例5化合物和3.1mg二苯基重氮甲烷的0.5ml甲苯溶液在60℃加热3小时。然后将溶液直接加到硅胶色谱柱中纯化(梯度：甲苯/甲醇＝100/0至97/3)，得标题物质，为无色固体泡末。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.46。

实施例31：式I化合物

(A＝A’，

B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃， X＝X’，Y＝Y’)

将50mg化合物A的1ml二甲基甲酰胺溶液与125mg氯化三丁基锡和25mg叠氮化钠一同在100℃加热8天。然后将反应混合物倒入1MHCl水溶液内，乙酸乙酯提取。有机相用盐水洗涤，硫酸钠干燥并真空蒸发。粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝100/0.25至100/2.5)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.12；反相RP-8，甲醇/磷酸盐缓冲液pH7＝92/8，Rf＝0.48。

实施例32：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CN，B＝B’，C＝C’，R₈＝CH₃，

X＝X’，Y＝Y’)

将20mg实施例18化合物的ml无水二甲基甲酰胺溶液与1ml碘甲烷混合并加入5mg双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的0.3ml二甲基甲酰胺溶液。室温搅拌反应混合物1.5小时后，将反应混合物倒入0.1MHCl水溶液内，乙酸乙酯提取并在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液间分配。有机相用盐水洗涤，硫酸钠干燥并真空蒸发。粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝100/0.25至100/2.5)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.43。

类似实施例32所述，得到下述式I化合物(A＝A’，R₆＝CN，B＝B’，X＝X’，Y＝Y’)：

实施例35：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CN，B＝B’，C＝C’，R₈＝CH₂C(CH₃)₃，

X＝X’，Y＝Y’)

向38mg实施例38化合物的2ml乙酸和0.2ml新戊醛溶液内加入30μl2M硼烷-二甲硫配合物的THF溶液，并将混合物室温搅拌5分钟。然后将混合物倒入碳酸氢钠/乙酸乙酯内并加入少量水。分出有机层，盐水洗涤，硫酸钠干燥并真空蒸发。残留物无色油(TLC：硅胶，甲苯/甲醇9/1，Rf＝0.53)溶于3ml THF，并于室温加入2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ，8mg溶于0.2ml THF内)至反应混合物变黑为止。混合物通过5g硅胶过滤并用甲苯/甲醇(＝100/0.5至95/5)洗脱，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.49。

类似实施例35所述，得到下述式I化合物(A＝A’，R₆＝CN，B＝B’，X＝X’，Y＝Y’)：

实施例38：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CN，B＝B’，C＝C’，R₈＝H， X＝X’，Y＝Y’)

4℃下，于氮气氛中剧烈搅拌含25mg实施例18化合物，1ml三氟乙酸和0.3ml三乙基甲硅烷的多相混合物20小时。反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液中并用乙酸乙酯提取。有机相用盐水洗涤，硫酸钠干燥并真空蒸发。粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝100/0.5至100/5)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，二氢吲哚A Rf＝0.16，二氢吲哚BRf＝0.10；反相RP-8，甲醇/水/TFA＝95/4/1，二氢吲哚A＋B＝0.71。

实施例39：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CN，B＝B’，C＝C’，R₈＝O(CH₂)₂CH₃，

X＝X’，Y＝Y’)

向30mg实施例38化合物(非对应异构体混合物)的1ml甲醇溶液中加入100mg钨酸钠(Na₂WO₄.2H₂O)和100μl30％过氧化氢溶液。反应混合物在室温下搅拌20分钟，然后直接通过凝胶渗透色谱纯化(SephadexLH-20，甲醇/乙酸乙酯＝1∶1)。蒸发含N-羟基吲哚中间体的部分，残留物溶于2ml无水DMF，加入2ml丙基碘和7.5g双(三甲基甲硅烷基)氨化钠。室温搅拌30分钟后，将反应混合物倒入0.1MHCl水溶液内，乙酸乙酯提取。有机层用碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，并真空蒸发。产物通过硅胶色谱(梯度：甲苯/甲醇＝100/0.5至98/2)和反相色谱(RP-8，梯度：含水甲醇＝75至100％)纯化，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝90/10，Rf＝0.51，RP-8，甲醇/磷酸盐缓冲液pH7＝92/8，Rf＝0.30。

实施例40：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CN，B＝B’，＝C’，R₈＝OC₂H₅， X＝X’，Y＝Y’)

类似实施例39所述，制得标题化合物。

实施例41：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CN，B＝B’，C＝C”，R₈＝OCH₃，R₉＝Br，

X＝X’，Y＝Y’)

将50mg化合物A的2ml四氯甲烷溶液与3mg铁粉一起搅拌，并在1小时内加入10mg溴的四氯甲烷溶液。反应混合物倒入碳酸氢钠溶液中并用乙酸乙酯提取。有机相用硫代硫酸钠和盐水洗涤，并真空蒸发。粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝99.5/0.5至97/3)，得标题物质，为无色固体泡沫。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.48，反相RP-8，甲醇/水＝92/8，Rf＝0.19。

实施例42：式I化合物

(A＝A’，R₆＝CSNH₂，B＝B’，R₁＝CH₃，C＝C’，R₈＝OCH₃，

X＝X’，Y＝Y’)

将50mg化合物A和50mg二苯基二硫代次膦酸的4ml异丙醇溶液加热至60℃反应3天。冷却反应混合物至-20℃，滤出沉淀物，溶液用乙酸乙酯稀释并用碳酸氢钠水溶液提取。真空蒸发有机相，粗产物通过硅胶色谱纯化(梯度：甲苯/甲醇＝100/0.5至96/4)，得标题物质，为无色泡沫体。

TLC：硅胶，甲苯/甲醇＝9/1，Rf＝0.29。

生物学活性

本发明化合物的活性将在细胞毒性和ICAM-1、VCAM-1和E-选择蛋白表达的抑制以及细胞增生的测定中测试。下述表2中给出了各测定中得到50％最大抑制所需的化合物浓度(IC₅₀)：

表2化合物 IC₅₀(μM)/测定

ICAM-1 ICAM-1 VCAM-1 E-选择蛋白细胞毒性细胞增生

(HaCat) (HMEC) (HMEC) (HUVEC) (24hr.) (HaCat 72hr.)化合物A 0.009 0.06 0.002 0.04 ＞40 0.006化合物B 0.02 1.3 0.03 ＞40 0.05测定方法如下：

对于细胞增生测定和ICAM-1细胞Elisa测定，使用HaCaT细胞，这些细胞为具有正常角化细胞的高度保藏表型分化特性的自发转化，非生瘤人角化细胞系(Boukamp等人，1988，细胞生物学(J.Cell Biol.)106，761-771)。

A.ICAM-1细胞Elisa测定

I.角化细胞ICAM-1细胞Elisa测定

用于测定ICAM-1表达抑制的ICAM-1细胞Elisa测定基本上如Winiski和Foster所述(1992，J.Invest.Dermatol.，99，48-52)。HaCaT细胞种于96孔微量滴定板(2×10⁴细胞孔，培养基：含有5％FCS、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、2mM谷酰胺、1mM丙酮酸钠的DMEM)，逐渐铺满，然后在含有或无IFN-γ/TNF-α刺激培养基(测试培养基+1000U/mlIFN-γ/3ng/ml TNF-α)的新鲜测试培养基(同培养培养基，只是用0.5％FCS替代5％)中在有和无化合物A或化合物B存在下培养大约24小时。然后洗去培养基并将单细胞层用1％多聚甲醛固定。单细胞层用饱和量初级(小鼠抗ICAM-1单克隆)和次级(山羊抗小鼠过氧化物酶结合)抗体培养。接续的过氧化酶反应采用3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)作为底物并产生不溶无色产物，此产物很容易用标准微量滴定板读出器测定。

II.测定细胞毒性

在用于检测ICAM-1的AEC反应完成后，HaCaT单层用PBS(200μl)清洗，并从板中倒出PBS，然后将板在纸巾上面轻拍干燥，除去过量液体。微量滴定板的低面先用湿面织物，再用干面织物慢慢揩干并在492nm测量吸光度。在单细胞层干燥之前，向各孔中加入0.1ml 0.1％结晶紫的PBS溶液(先通过0.2μm滤器过滤)。然后将板在室温下培育10分钟，用PBS彻底洗涤(5x)，按上所述除去过量液体并在单细胞层得以干燥之前再次在492nm下测量它们的吸光度。由于结晶紫染色，染色前后光密度相减给出一数值，，因此这些数值与各孔中存在的细胞单层的量有关。这些数值用于校对AEC值。

B.内皮样细胞VCAM-1，ICAM-1和E-选择蛋白细胞Elisa测定

测定基于96-孔细胞Elisa测定法，并采用人微脉管内皮样细胞系HMEC-1和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。细胞用测试化合物A或化合物B预处理4小时，再用TNFα刺激8-16小时，然后用多聚甲醛固定，随后利用间接免疫过氧化酶染色技术评价VCAM-1、ICAM-1或E-选择蛋白表达。与对照孔(仅有溶剂和培养液)相比，在暴露在供测物质之中后，通过计数细胞(Giemsa核染色)的相对量测定细胞毒性作用。如果它们显示出≥50％VCAM-1、ICAM-1或E-选择蛋白抑制，且细胞损失＜25％，则这些化合物定为阳性。

方法学

I.细胞系：VCAM-1和ICAM-1测定使用无限增殖的(SV-40病毒巨大T抗原)人微脉管内皮样细胞系(HMEC-1；Ades等人。Jrl InvestDermatol99：683-690，1992)。HEMC-1细胞在组成上表达低水平ICAM-1，它由炎性淋巴因子增量调节。但是，它们仅在细胞因子刺激后表达VCAM-1。进行剂量响应与时间过程试验，测定包括VCAM-1和ICAM-1表达的最佳条件。

II.生长条件：标准条件下(37℃，5％CO₂)，将HMEC-1在具有1.5×10⁶细胞/ml培养基(CM＝内皮细胞基础培养基[EBM；Clonetics]，该培养基补加有10％FCS、10ng/ml人EGF(Boehringer)、1μg/ml氢化可的松(Sigma#0888)，2.2g/lNaHCO₃、15mM Hepes，0.11g/l丙酮酸钠、4mM谷酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素)的T-75烧瓶中生长。在轻度胰蛋白酶消化(0.25％胰蛋白酶+0.1％EDTA，消化8分钟)和再悬浮之后，每2-3天以1∶3分裂速率再成熟细胞。

III.VCAM-1和ICAM-1细胞Elisa测定

96孔平底微量滴定板用牛纤连蛋白(FN；Sigma#F1141)预涂，然后以2×10⁴细胞/孔接种在200μl EBM生长培养基上，并孵育过夜。第二天，培养基(CM)起初用200μl EBM测定培养基(补加有替代10％的5％FCS的CM)替换，接着用含有下述成分之一的180μl培养基替换：(1)适当浓度化合物A或化合物B，(2)合适浓度溶剂/甲醇提取培养基，或(3)仅EBM测定培养基，并在37℃下温育4小时。各96孔测定采用双孔进行。然后加入20μl浓缩细胞因子(2000U/ml TNFα)刺激细胞并在37℃孵育16小时。

然后，将细胞单层用位于EBM培养基中的1％多聚甲醛洗涤，室温(RT)下固定在2％多聚甲醛中并用PBS漂洗数次。从细胞中除去PBS，并将细胞单层在含10％正常山羊血清(NGS)的PBS中孵育30分钟。NGS溶液用100μl/孔抗-VCAM-1或IVCAM-1单克隆抗体替换并在4℃孵育过夜。然后移去mAb溶液并将细胞用PBS漂洗数次，继之用含10％NGS的PBS室温孵育30-60min.。移去NGS溶液并加入100μl辣根过氧化物酶结合的山羊F(Ab’)₂抗鼠IgG抗体(Tago；在含5％NGS的PBS中1∶500稀释)，并将板室温孵育1小时。然后移去次级抗体并将细胞用PBS漂洗，然后PBS用150μl/孔新制备和过滤的AEC溶液(3-氨基-9-乙基-咔唑；Sigma)替换并将板在室温下孵育45-60min。移出过氧化物酶底物，细胞用PBS漂洗。用微量滴定板读出器在550nm下测量AEC吸光值并校正690nm下的“空白”或参比值。

IV.E-选择蛋白测定：基本上按VCAM-1或ICAM-1测定所述方法，采用新分离到的HUVEC进行E-选择蛋白测定，只是TNFα刺激时间较短(6-8小时)。

V.细胞毒性测定(基于核染色细胞损失)：

内皮细胞用95％乙醇替换PBS脱色20分钟(两次10分钟替换)，通过显微测定控制。细胞然后在蒸馏水(Aquadest)中漂洗，并将单细胞层用33％Giemsa的Aquadest溶液室温覆盖5分钟。然后各孔用Aquadest洗涤并风干至少15分钟。显微测定用于检测仅有核被染色，基本上无细胞质染色。用微量滴定板读出器在550nm下测量Giemsa吸光值并校正690nm下的“空白”参比值(无细胞列)。

VI.数据评估：组成VCAM-1或E-选择蛋白表达的AEC值(未刺激对照孔)基本上等于同种型匹配mAb的那些值并表示负染色法。对于各96-孔板，各细胞因子刺激组(EBM和溶剂对照物，以及测试物质)的平均AEC值减去平均组成值，得一数值，，该数值表示增量调节ICAM-1和诱导VCAM-1或E-选择蛋白细胞粘着分子(CAM)表达(称作AEC-CAM)。然后各AEC-CAM值除以响应的Giemsa值，得一数值，该数值用于估算给定细胞密度(基于核的数量)的CAM表达的相对水平(称作AEC：Giemsa比)。

AEC(刺激)-AEC(未刺激)＝AEC-CAM

AEC-CAM/Giemsa＝AEC：Giemsa之比

因此，“实际”CAM IC50值是通过比较测试化合物和刺激对照组(EBM，溶剂)的AEC：Giemsa值测定的。然后以只有Giemsa的IC50值为基准，分析这些数值。严格标准决定CAM抑制与细胞毒性(Giemsa)体现能否显示所应追求的“真正”目的。

C.HaCaT细胞增生测定

在补加有2.2g/l NaHCO₃、0.11g/l丙酮酸钠、15mM Hepes、5％小牛血清(FCS)、青霉素(100U/ml)、链霉素(100μg/ml)和谷酰胺(在最终浓度基础上增加4mM)DMEM(Gibco#074-02100)中培养HaCaT细胞。对于增生测定，细胞通过胰蛋白酶消化分离，悬浮于新鲜培养基内，并以4000细胞/0.2ml/孔最终浓度接种到96孔微量滴定板内。24小时后(第0天)，培养基用含有梯度浓度测试化合物的新鲜培养基替换。在37℃/5％CO₂下孵育3天后，通过比色测定法，利用染料sulforhodamine B测量相对细胞质量，测定与溶剂对照组相比细胞增生的程度(Skehan等人，1990，国家癌症协会杂志82，1107-1112)。通过在第0天测量相对细胞质量测定“初始细胞数”。结果表示为抑制％＝100-对照组吸光度％(溶剂对照组＝100％)，并表示三次测量的平均值±标准偏差。半对数法绘制剂量反应曲线并通过线形内推法测定50％最大抑制所需要的浓度(IC₅₀)。无细胞净损失的最大抑制用“初始细胞数”表示，通常在90-98％之间。

NMR-波谱

(CDCl₃)实施例波谱

(3种构象体55∶44∶3，主和次构象体分别用^*和°标记)：

8.80^*(d，J＝10Hz，NH)；7.89^*(d，J＝10Hz，NH)；7.78°(d，J＝10Hz，NH)；7.57°

(d，J＝10Hz，NH)；7.50^*°(d，J＝7Hz，MeMeOTrpH-4′)；7.39^*，7.37°(2d，

J＝8Hz，MeMeOTrpH-7′)；7.20^*°(m，MeMeOTrp，H-6′)；7.11°，7，06^*(2s，

MeMeOTrp H-2′)；7.03^*°(2dd，MeMeOTrp H-5’)；6.16°(d，J＝10Hz，Leu NH)；

5.95^*(d，J＝6Hz，Leu NH)；5.30°(m，al-H)；5.10^*(dd，羟基丁酸al-

H)；5.03-4.98(m，al-H)；4.91(dd，al-H)；4.85(m，al-H)；4.71°(m，al-H)；4.45^*

(dd，al-H)；4.29^*(m，al-H)；4.03^*，4.02°(2s，N-OMe)；3.87(dd)；3.72^*，3.64°

(2s，COOMe)；3.63-3.50(m)；3.47^*(q，J＝7Hz，MeAla al-H)；3.41°(s，N-Me)；

3.36^*(dd，MeMeOTrpβ-H)；3.23-3.17(m)；3.20^*(s，MeAla N-Me)；3.19°(s，

N-Me)；2.91^*(s，MeMeOTrpN-Me)；2.53^*(s，MeLeu N-Me)；2.51°(s，

MeMeOTrpN-Me)；2.43-2.09(m)；2.03-1.89(m)；1.83-1.75(m)；1.68-1.07

(m)；1.52^*(d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.48°(d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.04(d，

J＝6.5Hz)；0.98-0.83(m)；0.53^*(d，J＝6.6Hz，Leu Me)；0，01^*(d，J＝6.6，Leu

Me)；-0.32(ddd，J＝3.6Hz，J＝11.1Hz，J＝14.5Hz，Leu β-CH).

(式IV开链衍生物)：(2种构象体68∶32，主和次构象体

分别用^*和°标记)：8.16，8.12，8.05，8.00(4d，NH)；7.58°，7.55^*

(2d，J＝8Hz，MeMeOTrp4′-H)；7.38^*°(d，MeMeOTrpH-7′)；7.22^*，7.20°(2m，

MeMeOTrpH-6′)；7.15^*，7.12°(2s，MeMeOTrpH-2′)；7.07^*，7.03°(2m，

MeMeOTrpH-5′)；6.57(s br，NH)；5.10°(dd，al-H)；5.17^*(dd，羟基丁酸

al-H)；5.11^*°(m，MeLeu al-H)；5.04^1*°(dd，al-H)；4.99^*(ddd，al-H)；4.88°

(ddd，al-H)；4.51°(dd)；4.53^*(m，Leu al-H)；4.48°(m)；4.42^*(m br，MeAla

al-H)；4.05^*，4.03°(2s，N-OMe)；3.88°(q，J＝7Hz，MeAla al-H)；3.71°，3.68^*

(2s，COOMe)；3.57^*，3.54°(2s，COOMe)；3.47^*(m br，MeMeOTrpal-H)；

3.27°，3.21^*(2s，NMe)；3.2(m，MeMeOTrpβ-H_a)；3.00^*(s，NMe)；2.9(m，

MeMeOTrpβ-H_b)；2.64°(s，NMe)；2.32^*，2.28°(2s，NMe)；2.33-2.13(m)；2.20

(m)；1.86(m)；1.7-1.1(m)；1.50°，1.48^*(2d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；0.97-0.93

(m)；0.90-0.76(m).

(3种构象体2∶2∶1，次构象体用^*标记)：8.81(d，J＝10Hz，NH)；

7.93(d，J＝10Hz，NH)；7.79(d，J＝9Hz，NH)；7.65(m br，NH)；7.54(m，

MeMeOTrpH-4′)；7.38，7.37，7.34^*(3d，J＝8Hz，MeMeOTrpH-7′)；7.19(m，

MeMeOTrp，H-6′)；7.08-6.98(m，MeMeOTrpH-5′)；7.02(s，MeMeOTrpH-2′)；

6.14(d，J＝10Hz，Leu NH)；6.29^*(d，J＝7Hz，Leu NH)；6.07(d，J＝6Hz，Leu

NH)；5.25(m，al-H)；5.12-4.92(al-H)；4.84(m，al-H)；4.69(m，al-H)；4.43(m，

al-H)；4.29(m，al-H)；4.03^*，4.02，4.00(3s，N-OMe)；3.98(m，al-H)；3.63-3.3

(m)；3.39-3.34^*(s br NMe)；3.21(s，NMe)；3.18^*(s，NMe)；3.13(m)；3.07^*(s，

NMe)；3.04^*(s，NMe)；2.91(s，N-Me)；2.53(s，NMe)；2.37(s br，NMe)；2.5-

1.05(m)；1.47，1.43，1.41^*(3d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.03(d，J＝6.5Hz)；

0.98-0.83(m)；0.68^*，O.55，0.47^*，-0.02(4d，J＝6.6Hz，Leu Me)；-0.32(ddd，

Leu β-CH).

(3种构象体4∶3∶1，次构象体用^*标记)：8.82(d，J＝10Hz，NH)；

7.95^*(d，J＝9.3Hz，NH)；7.90(d，J＝9.8Hz，NH)；7.80(d，J＝9.4Hz，NH)；7.59，

7.53(2d，J＝8Hz，MeMeOTrpH-4′)；7.45-7.30(m，MeMeOTrpH-7′)；7.23-7.15

(m，MeMeOTrp，H-6′)；7.20，7.18(2s，MeMeOTrpH-2′)；7.11-7.03(m，

MeMeOTrpH-5′)；6.86^*(q，J＝5Hz，NHMe)；6.23(d，9.5Hz，Leu NH)；5.95(d，

J＝6.5Hz，Leu NH；q，NHMe)；5.84^*(d，J＝8.9Hz，Leu NH)；5.55(q，5Hz，

NHMe)；5.3-4.95(m，al-H)；4.84(ddd，al-H)；4.69(ddd，al-H)；4.42(dd，

MeLeu al-H)；4.34(ddd，Leu al-H)；4.05^*，4.03，4.02(3s，N-OMe)；3.98(m，

al-H)；3.63-3.52(m，al-H)；3.47(q，Ala al-H)；3.37，3.35^*，3.24^*，3.22，3.20

(5s，NMe)；3.3-3.2(m)；3.03^*，2.92(2s，NMe)；2.85，2.74，2.70^*(3d，J＝5Hz，

NH-Me)，2.53，2.52(2s，NMe)；2.23-1.93(m)；1.85-1.05(m)；1.53，1.47，

1.44^*(3d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.03(d，J＝6.5Hz)；0.98-0.80(m)；0.57^*，0.55，

0.38^*，0.08(4d，J＝6.6Hz，Leu Me)；-0.30(ddd，Leu β-CH).

(3种构象体40∶53∶7，

标记)：8.81^*(d，J＝10Hz，C₉AA NH)；

7.88^*(d，J＝10Hz，C₉AA NH)；7.78°(d，J＝10Hz，NH)；7.57°(d，J＝10Hz，NH)；

7.52^*°(2d，J＝7Hz，MeMeOTrpH-4′)；7.39^*，7.37°(2d，J＝8Hz，MeMeOTrp

H-7′)；7.27^*(s，MeMeOTrpH-2′)；7.20，7.18(2m，MeMeOTrp，H-6′)；7.17^*(s，

MeMeOTrpH-2′)；7.03°，7.01^*(2m，MeMeOTrpH-5′)；6.17°(d，J＝10Hz，Leu

NH)；5.98^*(d，J＝6Hz，Leu NH)；5.77′(d，J＝10Hz，Leu NH)；5.31°(ddd，

Me Ala al-H)；5.19^*(dd，羟基丁酸al-H)；5.05-4.94(m，al-H)；

4.88-4.83(m，al-H)；4.70-4.64(m，al-H)；4.48^*(dd，MeLeu al-H)；4.32^*(m，

Leu al-H)；4.03^*，4.02°(2s，N-OMe)；3.93°(m，al-H)；3.7-3.5(m，morpholine)；

3.5-3.2(m)；3.40°(s，N-Me)；3.34°(dd，MeMeOTrpH-βa)；3.22(m，

MeMeOTrpH-βb)；3.20°(s，N-Me)；3.17^*(s，N-Me)；2.93^*(s，MeMeOTrp

N-Me)；2.54^*(s，MeLeu N-Me)；2.53°(s，N-Me)；2.4-2.35(m)；2.2-1.9(m)；

1.83-1.05(m)；1.53^*，1.50°(2d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.04(d，J＝6.5Hz，

MeLeu Me)；1.00-0.77(m)；0.57^*(d，J＝6.6Hz，Leu Me)；0.52′，0.34′(2d，

J＝6.6Hz，Leu Me)；0.09^*(d，J＝6.6Hz，Leu Me)；-0.25(ddd，Leu β-CH).

(2种构象体45∶55，

标记)：8.84^*(d，J＝10Hz，C9AA NH)；7.87^*

(d，J＝10Hz，C9AA NH)；7.77°(d，J＝10Hz，NH)；7.57°(d，J＝10Hz，NH)；7.55^*，

7.52°(2d，J＝7Hz，MeMeOTrpH-4′)；7.36^*，7.35°(2d，J＝8Hz，MeMeOTrp

H-7′)；7.36^*(s，MeMeOTrpH-2′)；7.23^*(s，MeMeOTrpH-2′)；7.20，7.17(2m，

MeMeOTrp，H-6′)；7.03°，7.01^*(2m，MeMeOTrpH-5′)；6.17°(d，J＝10Hz，Leu

NH)；5.95^*(d，J＝6Hz，Leu NH)；5.31°(ddd，MeAla al-H)；5.24^*(dd，

羟基丁酸al-H)；5.05-4.97(m，al-H)；4.93(dd，al-H)；4.87(dd，

al-H)；4.88-4.83(m，al-H)；4.66-4.60(m，al-H)；4.48^*(dd，MeLeu al-H)；4.38^*

(ddd，Leu al-H)；4.15-4.00(m)；4.03^*，4.02°(2s，N-OMe)；3.98°(m，al-H)；

3.7-3.2(m)；3.40°(s，N-Me)；3.20°(s，N-Me)；3.17^*(s，N-Me)；3.05-2.9(m)；

2.99，2.98(2s，CON-Me)；2.96(s，2×CON-Me)；2.92^*(s，MeMeOTrpN-Me)；

2.54(s，MeLeu N-Me and N-Me)；2.4-2.25(m)；2.15-1.9(m)；1.83-1.05(m)；

1.53^*，1.50°(2d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.04(d，J＝6.5Hz，MeLeu Me)；

1.00-0.83(m)；0.79°，0.74°(2d)；0.57^*(d，J＝6.6Hz，Leu Me)；0.13^*(d，

J＝6.6Hz，Leu Me)；-0.25(ddd，Leu β-CH).

(3种构象体70∶28∶2，

标记)：8.89^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.89^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.77°(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.52°(d.8Hz，吲哚

H-4′)；7.50°(d，PrLeu2 NH)；7.48^*(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.38^*(d，8Hz，吲哚

H-7′)；7.37°(d，8Hz，吲哚H-7′)；7.19°(dd，吲哚H-6′)；7.18^*(dd，吲哚

H-6′)；7.13°(s，吲哚H-2′)；7.02^*(s，吲哚H-2′)；6.99°(dd，吲哚H-5′)；

6.90^*(dd，吲哚H-5′)；6.18°(d br，10Hz，Leu NH)；5.93^*(d，6Hz，Leu NH)；

5.83′(d，Leu NH)；5.30°(ddd，PrLeu6α-H)；5.30^*(dd，Hbaα-H)；5.02^*(ddd，

PrLeu6α-H)；5.00°(ddd，PrLeu2α-H)；4.89^*(dd，MeTrpα-H)；4.84^*(ddd，

PrLeu2α-H)；4.71°(ddd，α-H)；4.44^*(dd，MeLeuα-H)；4.37^*(ddd，Leuα-H)；

4.03^*，4.02°(2s，N-OMe)；3.63-3.52；3.49^*(q，7Hz，MeAlaα-H)；3.40°(s，

N-Me)；3.38^*(dd，MeTrpβ-Ha)；3.26-3.20；3.23^*(s，MeAla N-Me)；3.21°(s，

N-Me)；2.93^*(s，MeTrpN-Me)；2.53^*(s，MeLeu N-Me)；2.52°(s，N-Me)；

2.45-1.75；2.33，2.15(2m，氮丙啶)1.56-1.07；1.50^*(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；

1.47°(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；1.03^*(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.98-0.83；0.48^*

(d，6.6Hz，Leu δ′-Me)；-0.13^*(d，6.6Hz，Leuδ″-Me)；-0.48^*(ddd，Leuγ-CH).

(3种构象体45∶51∶4，

标记)：8.86^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.87^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.75°(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.57^*(d，8Hz，吲哚

H-4′)；7.55°(d，PrLeu2 NH)；7.51°(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.41°(s，吲哚

H-2′)；7.38^*(d，8Hz，吲哚H-7′)；7.36°(d，8Hz，吲哚H-7′)；7.29^*(s，吲哚

H-2′)；7.18^*(dd，吲哚H-6′)；7.17°(dd，吲哚H-6′)；7.03°(dd，吲哚H-5′)；

7.01^*(dd，吲哚H-5′)；6.17°(d br，10Hz，Leu NH)；5.94^*(d，6Hz，Leu NH)；

5.79′(d，Leu NH)；5.30°(ddd，PrLeu6α-H)；5.27^*(dd，α-H)；5.00^*(ddd，

PrLeu6α-H)；4.98°(ddd，α-H)；4.93°(dd，α-H)；4.87^*(dd，α-H)；4.85^*(ddd，

PrLeu2α-H)；4.63°(ddd，α-H)；4.47^*(dd，MeLeuα-H)；4.40(m)；4.02^*(ddd，

Leuα-H)；4.02，4.01(2s，N-OMe)；3.68-3.22；3.40°(s，N-Me)；3.20°(s，

N-Me)；3.18^*(s，MeAla N-Me)；2.91^*(，MeTrpN-Me)；2.55°(s，N-Me)；2.53^*

(s，MeLeu N-Me)；2.35-1.05；1.54^*(d，7Hz，MeAla β-Me)；1.50°(d，7Hz，

MeAla β-Me)；1.03^*(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.98-0.83；0.78°(d，6Hz，Leu

δ′-Me)；0.73°(d，6Hz，Leuδ″-Me)；0.57^*(d，6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.16^*(d，

6.6Hz，Leuδ″-Me)；-0.27^*(ddd，Leuγ-CH).

(3种构象体46∶51∶3

标记)：8.87^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.87^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.76°(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.56°(d，PrLeu2 NH)；

7.55^*(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.52°(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.37(d，8Hz，吲哚

H)；7.36(d，8Hz，吲哚H)；7.36°(s，吲哚H-2′)；7.22^*(s，吲哚H-2′)；7.20^*

(dd，吲哚H-6′)；7.18°(dd，吲哚H-6′)；7.03°(dd，吲哚H-5′)；7.00^*(dd，

吲哚H-5′)；6.16°(d，10Hz，Leu NH)；5.94^*(d，6Hz，Leu NH)；5.78′(d，Leu

NH)；5.31°(ddd，PrLeu6α-H)；5.27^*(dd，α-H)；5.06-4.80；4.65(ddd，α-H)；

4.47^*(dd，MeLeuα-H)；4.33(m)；4.03，4.01(2s，N-OMe)；4.00(ddd，α-H)；

3.75-3.20；3.40(s，N-Me)；3.20(s，N-Me)；3.18^*(s，MeAla N-Me)；2.91^*(s，

MeTrpN-Me)；2.53(s，N-Me)；2.53°(s，MeLeu N-Me)；2.45-1.07；1.53^*(d，

7Hz，MeAlaβ-Me)；1.49°(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；1.03^*(d，6.5Hz，MeLeu

d-Me)；0.98-0.83；0.79(d，6Hz，Me)；0.74(d，6Hz，Me)；0.55^*(d，6.6Hz，Leu

δ′-Me)；0.07^*(d，6.6Hz，Leuδ″-Me)；-0.36^*(ddd，Leuβ-CH).

(4种构象体27∶33∶17∶33

”标记)：8.9^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；

8.82′(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.9^*(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.86′(d，10Hz，

PrLeu2 NH)；7.76°(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.75^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.24^*

(s，吲哚)；7.03^*(dd，吲哚)；6.17^*(d br，10Hz，Leu NH)；6.17°(d br，10Hz，

Leu NH)；6.03′(d，6Hz，Leu NH)；5.98^*(d，6Hz，Leu NH)；4.02″(s)；4.02°(s)；

4.02^*(s)；4.02′(s)；3.40(s，N-Me)；3.40(s，N-Me)；3.20(s，N-Me)；3.20(s，

N-Me)；3.17(s，N-Me)；2.97(s，N-Me)；2.94(s，N-Me)；2.94(s，N-Me)；2.93

(s，N-Me)；2.91(s，N-Me)；2.56(s，N-Me)；2.56(s，N-Me)；2.53′(s，MeLeu

N-Me)；2.53^*(s，MeLeu N-Me)；1.53^*(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；1.53′(d，7Hz，

MeAla β-Me)；1.50°(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；1.50^*(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；

1.03′(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；1.03^*(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.78°(d，

6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.77″(d，6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.72^*(d，6.6Hz，Leuδ″-Me)；

0.72°(d，6.6Hz，Leuδ″-Me)；0.61′(d，6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.55^*(d，6.6Hz，

Leuδ′-Me)；0.21′(d，6.6Hz，Leuδ″-Me)；0.12^*(d，6.6Hz，Leuδ″-Me)；-0.17′

(ddd，Leuγ-CH)；-0.31^*(ddd，Leuγ-CH).

(2种构象体55∶45，主和次构象体分别用^*和°标记)；

8.80^*(d，J＝10Hz，NH)；7.88^*(d，J＝10Hz，NH)；7.77°(d，J＝10Hz，NH)；7.57°

(d，J＝10Hz，NH)；7.52^*，7.51°(2d，J＝7Hz，MeMeOTrpH-4′)；7.39^*，7.37°(2d，

J＝8Hz，MeMeOTrpH-7′)；7.20^*°(m，MeMeOTrp，H-6′)；7.16°，7.09^*(2s，

MeMeOTrpH-2′)；7.03^*°(2dd，MeMeOTrp H-5′)；6.17°(d，J＝10Hz，Leu NH)；

5.97^*(d，J＝6Hz，Leu NH)；5.31°(m，MeAla al-H)；5.11-4.96(m，al-H)；4.92^*

(dd，MeMeOTrp al-H)；4.87(ddd，al-H)；4.69°(m，Leu al-H)；4.47^*(dd，

MeLeu al-H)；4.27^*(dd，Leu al-H)；4.03^*，4.02°(2s，N-OMe)；3.92(dd)；3.65-

3.15(m)；3.47^*(q，J＝7Hz，MeAla al-H)；3.41°(s，N-Me)；3.21^*(s，MeAla

NMe)；3.20°(s，N-Me)；2.92^*(s，MeMeOTrpN-Me)；2.53^*(s，MeLeu N-Me)；

2.51°(s，N-Me)；2.35-2.75(m)；1.7-1.05(m)；1.53^*(d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；

1.49°(d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.28^*，1.25^*，1.23°，1.18°(4d，J＝6Hz，

COOCHMe₂)；1.04(d，J＝6.5Hz，MeLeu Me)；0.98-0.83(m)；0.55^*(d，

J＝6.6Hz，Leu Me)；0.05^*(d，J＝6.6，Leu Me)；-0.31(ddd，Leu β-CH).

(3种构象体55∶43∶2，

标记)：8.82^*(d，J＝10Hz，C9AA NH)；7.85^*

(d，J＝10Hz，C₉AA NH)；7.78°(d，J＝10Hz，NH)；7.58°(d，J＝10Hz，NH)；7.52^*，

7.51°(2d，J＝7Hz，MeMeOTrpH-4′)；7.39^*，7.37°(2d，J＝8Hz，MeMeOTrp

H-7′)；7.22^*，7.21°(2m，MeMeOTrp，H-6′)；7.14°，7.08^*(2s，MeMeOTrpH-2′)；

7.03^*°(2dd，MeMeOTrpH-5′)；6.17°(d，J＝10Hz，Leu NH)；5.95^*(d，J＝6Hz，

Leu NH)；5.78′(d，J＝10Hz，Leu NH)；5.31°(ddd，MeAla al-H)；5.12^*(dd，

羟基丁酸al-H)；5.05-4.98(m，al-H)；4.91^*(dd，MeMeOTrp al-H)；

4.86^*(ddd，C₉AA al-H)4.73-4.68(m，Leu al-H)；4.47^*(dd，MeLeu al-H)；

4.32-4.26(m，Leu al-H)；4，25(dq，J＝11Hz，J＝7Hz，COOCH₂-)；4.15-4.07(m，

COOCH₂-)；4.04^*，4.03°(2s，N-OMe)；3.84°(m，al-H)；3.64-3.50(m)；3.47^*

(q，J＝7Hz，MeAla al-H)；3.41°(s，N-Me)；3.34°(dd，MeMeOTrpH-βa)；3.22

(m，MeMeOTrpH-βb)；3.20^*(s，MeAla NMe)；3.19°(s，N-Me)；2.93^*(s，

MeMeOTrp N-Me)；2.53^*(s，MeLeu N-Me)；2.52°(s，N-Me)；2.4-2.1(m)；

2.05-1.9(m)；1.83-1.76(m)；1.7-1.07(m)；1.53^*，1.49°(2d，J＝7Hz，MeAla

β-Me)；1.30，1.25(2t，J＝7Hz，COOCH2CH3)；1.04(d，J＝6.5Hz，MeLeu Me)；

1.00-0.84(m)；0.55^*(d，J＝6.6Hz，Leu Me)；0.03^*(d，J＝6.6Hz，Leu Me)；-0.32

(ddd，Leu β-CH).

(3种构象体57∶41∶2，标记)：8.82^*(d，J＝10Hz，C₉AA NH)；7.90^*

(d，J＝10Hz，C₉AA NH)；7.78°(d，J＝10Hz，NH)；7.58°(d，J＝10Hz，NH)；7.52^*°

(2d，J＝7Hz，MeMeOTrpH-4′)；7.39^*，7.38°(2d，J＝8Hz，MeMeOTrpH-7′)；

7.22^*，7.21°(2m，MeMeOTrp，H-6′)；7.14°，7.08^*(2s，MeMeOTrp H-2′)；

7.03°，7.02^*(2m，MeMeOTrpH-5′)；6.17°(d，J＝10Hz，Leu NH)；5.98^*(d，

J＝6Hz，Leu NH)；5.82′(d，J＝10Hz，Leu NH)；5.31°(ddd，MeAla al-H)；5.12^*

(dd，羟基丁酸al-H)；5.05-4.98(m，al-H)；4.91^*(dd，MeMeOTrp

al-H)；4.86^*(ddd，C₉AA al-H)4.73-4.68(m，Leu al-H)；4.47^*(dd，MeLeu

al-H)；4.28^*(m，Leu al-H)；4.2-3.95(m，COOCH₂)；4.03^*，4.02°(2s，N-OMe)；

3.90°(m，al-H)；3.64-3.42(m)；3.47^*(q，J＝7Hz，MeAla al-H)；3.41°(s，N-Me)；

3.34°(dd，MeMeOTrpH-βa)；3.22(m，MeMeOTrpH-βb)；3.20^*(s，MeAla

NMe)；3.19°(s，N-Me)；2.93^*(s，MeMeOTrpN-Me)；2.53^*(s，MeLeu N-Me)；

2.52°(s，N-Me)；2.4-2.1(m)；2.03-1.9(m)；1.83-1.76(m)；1.72-1.58(m，

COOCH₂CH₂CH₃)；1.55-1.07(m)；1.53^*，1.49°(2d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；

1.04(d，J＝6.5Hz，MeLeu Me)；1.00-0.84(m)；0.54^*(d，J＝6.6Hz，Leu Me)；

0.02^*(d，J＝6.6Hz，Leu Me)；-0.34(ddd，Leu β-CH).

(2种构象体70∶30，分别用^*和°标记)；8.92^*，7.87^*7.75°，7.58°(4d，

J＝10Hz，NH)；7.49^*(d，J＝8Hz，MeMeOTrpH-4′)；7.37^*(d，J＝8Hz，

MeMeOTrpH-7′)；7.20^*(dt，MeMeOTrpH-6′)；7.18°，7.03^*(2s，MeMeOTrp

H-2′)；7.03°，6.97^*(2 dt，MeMeOTrp H-5′)；6.20°(d，J＝10Hz，Leu NH)；5.96^*

(d，J＝7Hz，Leu NH)；5.33^*(m，羟基丁酸al-H)；5.02(m，al-H)；

4.90^*(dd，al-H)；4.83^*(ddd，al-H)：4.79^*(dd，al-H)；4.70°(m，al-H)；4.39^*

(dd，al-H)；4.38°(m，al-H)；4.03^*(s，N-OMe)；3.92°(m)；3.63-3.53(m)；3.44-

3.40(m)；3.39°，3.20°(2s，NMe)；3.32-3.18(m)；3.17^*(s，MeAla NMe)；2.94^*

(s，MeMeOTrpNMe)；2.53^*(s，MeLeu NMe)；2.52°(s，NMe)；2.5-2.3(m)；

2.1-1.1(m)；2.17^*，2.11°(2s，COMe)；1.51^*，1.48°(2d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；

1.03^*(d，J＝6.5Hz)；0.98-0.83(m)；0.52^*，-0.11^*(d，J＝6.6Hz，Leu Me)；-O.39^*

(ddd，Leu β-CH).

(3种构象体45∶40∶15，

标记)：8.78°(d，J＝9.9Hz，NH)；7.83^*(d，

J＝9，7Hz，NH)；7.76′(d，NH)；7.59′(d，J＝7.8Hz，MeMeOTrpH-4′)；7.57(d，

J＝9.5Hz，NH)；7.56，7.53(2d，J＝8Hz，MeMeOTrpH-4′)；7.46′(s，MeMeOTrp

H-2′)；7.42^*，7.39°，7.34′(3d，J＝8.2Hz，MeMeOTrp H-7′)；7.24^*，7.22°，7.18′

(3t，MeMeOTrp H-6′)；7.11^*，7.08′，7.06°(3t，MeMeOTrpH-5′)；7.04^*，7.03°

(2s，MeMeOTrp H-2′)；6.25°(d，J＝9.5Hz，Leu NH)；6.03^*(d，J＝7Hz，Leu

NH)；5.99′(d，J＝8.8Hz，Leu NH)；5.28^*(m，al-H)；5.13′(t，J＝4Hz，OH)；5.09-

4.98(m，al-H)；5.02(t，J＝4Hz，OH)；4.97(dd，al-H)，4.88(dd，al-H)；4.84(m，

al-H)；4.78-4.70(m，al-H)；4.41(dd，MeLeu al-H)；4.13(ddd，Leu al-H)；4.04，

4.02(2s，N-OMe)；3.78(m，al-H)；3.65-3.35(m)；3.42°，3.32′，3.22^*，3.20°

(4s，NMe)；3.17-3.08(m)；3.03′，2.92′，2.90^*，2.52^*，2.51°(5s，NMe)；2.01-1.1

(m)；1.53，1.49，1.40′(3d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.04(d，J＝6.5Hz)；0.98-0.83

(m)；0.72′，0.60^*，0.56′，0.03^*(4d，J＝6.6Hz，Leu Me)；-0.16(ddd，Leu β-CH).

(3种构象体73∶20∶7，标记)：8.54°(d，J＝10Hz，NH)；8.38′(s br，

MeTrpN′-H)；8.26^*，8.17°(2d br，J＝2Hz，MeTrpN′-H)；8.13^*，8.03°，8.01′

(3d，J＝9.7Hz，NH)；7.78^*(d，J＝7.7Hz，MeTrpH-4′)；7.74′，7.70′，7.63°，7.63°

(4d)；7.46^*，7.44°，7.40′(3d，J＝8Hz MeTrpH-7′)；7.27^*(dt，MeTrpH-6′)；

7.20^*，7.17°(2dt，MeTrpH-5′)；7.09°，7.03^*(2d，J＝2Hz，MeTrpH-2′)；6.33°

(d，J＝10Hz，Leu NH)；6.17^*(d，J＝7.4Hz，Leu NH)；5.97′(d，J＝9Hz，Leu NH)；

5.38°(m，al-H)；5.27^*(dd，羟基丁酸al-H)；5.21°(dd，al-H)；5.12^*

(ddd，al-H)；5.07^*(dd，al-H)；4.96^*(ddd，al-H)；4.87(m)；4.55^*(dd，MeLeu

al-H)；4.29^*(ddd，Leu al-H)；3.85-3.25(m)；3.76^*(q，J＝7Hz，MeAla al-H)；

3.49°，3.36′(2s，NMe)；3.13^*(s，MeAla NMe)；3.29°，3.13′(2s NMe)；3.02^*

(s，MeTrpNMe)；2.62°(s，NMe)；2.60^*(s，MeLeu NMe)；2.38-1.15(m)；

1.62^*，1.56°，1.51′(3d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.13^*(d，J＝6.5Hz MeLeu)；1.07-

0.93(m)；0.73′，0.63^*，0.58′，0.02^*(4d，J＝6.6Hz，Leu Me)；-0.28^*(ddd，Leu

β-CH).

(3种构象体67∶29∶4，标记)：9.52^*(t，J＝1.5Hz，CHO)；9.41°(t，

J＝1Hz，CHO)；9.05′(m，CHO)；8.73^*(d，J＝10Hz，C₉AA NH)；7.86^*(d，

J＝10Hz，C₉AA NH)；7.77°(d，J＝10Hz，NH)；7.60°(d，J＝10Hz，NH)；7.47^*°

(2d，J＝7Hz，MeMeOTrpH-4′)；7.38^*°(2d，J＝8Hz，MeMeOTrpH-7′)；7.20^*°

(2t，MeMeOTrp，H-6′)；7.15°，7.04^*(2s，MeMeOTrpH-2′)；7.03°(m，

MeMeOTrpH-5′)；7.00^*(dd，MeMeOTrpH-5)；6.22°(d，J＝10Hz，Leu NH)；

6.02^*(d，J＝6Hz，Leu NH)；5.87′(d，J＝10Hz，Leu NH)；5.29°(ddd，MeAla

al-H)；5.17^*(dd，羟基丁酸al-H)；5.03-4.93(m，al-H)；4.91^*(dd，

MeMeOTrp al-H)；4.84^*(ddd，C₉AA al-H)；4.79-4.64°(m，Leu al-H)；4.43^*

(dd，MeLeu al-H)；4.35^*(ddd，Leu al-H)；4.04′，4.03^*，4.02°(3s，N-OMe)；

3.81°(m，ak-H)；3.63°(dd)；3.57-3.50(m)；3.48-3.42(m)；3.43^*(q，J＝7Hz，

MeAla al-H)；3.38°(s，N-Me)；3.30-3.12(m)；3.20°(s，N-Me)；3.15^*(s，MeAla

NMe)；2.93^*(s，MeMeOTrpN-Me)；2.58°(s，N-Me)；2.53^*(s，MeLeuN-Me)；

2.25(m，CH₂-CHO)；2.15-1.9(m)；1.85-1.74(m)；1.65-1.08(m)；1.48^*，1.45°

(2d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.04^*(d，J＝6.5Hz，MeLeu Me)；0.98-0.83(m)；

0.67′，0.58^*，0.52′，0.01^*(4d，J＝6.6Hz，Leu Me)；-0.20^*(ddd，Leu β-CH).

20 (2种构象体1∶1)：8.77(d，J＝10Hz，C₉AA NH)；7.79(d，J＝10Hz，C₉AA NH)；

7.73(d，J＝10Hz，NH)；7.65(d，J＝10Hz，NH)；7.44，7.44，7.42，7.39(4d，

MeMeOTrpH-4′and H-7′)；7.25，7.22(2t，MeMeOTrp，H-6′)；7.13-7.03(m，

MeMeOTrpH-5′)；7.02，6.98(2s，MeMeOTrp H-2′)；6.19(d，J＝10Hz，Leu

NH)；6.00(d，J＝6Hz，Leu NH)；5.80-5.53(m，olefin-H)；5.31(ddd，MeAla

al-H)；5.08-4.67(m，al-H，烯烃-H)；4.47(dd，MeLeu al-H)；4.15-3.98(m)；；

4.05，4.02(2s，N-OMe)；3.7-3.0(m)；3.44，3.21，3.20，2.92，2.52，2.44(6s，

N-Me)；2.15-1.90(m)；1.90-1.08(m)；1.55，1.50(2d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；

1.05(d，J＝6.5Hz，MeLeu Me)；1.0-0.8(m)；0.60，0.06(2d，J＝6.6Hz，Leu Me)；

-0.20(ddd，Leu β-CH).

(3种构象体44∶53∶3 标记)：8.81^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.78，

7.73，7.67(3d，10Hz，NH)；7.43，7.42(2d，8Hz，吲哚H-4′)；7.37(d，8Hz，

吲哚H-7′)；7.28-7.00；7.02，6.97(2s，吲哚H-2′)；6.21°(d，10Hz，Leu NH)；

5.97^*(d，6Hz，Leu NH)；5.75′(d，Leu NH)；5.50-4.65；4.47^*(dd，MeLeuα-H)；

4.05(ddd，α-H)；4.04(s，OMe)；4.02(s，OMe)；3.65-3.10；3.44°(s，MeAla

N-Me)；3.22(s，MeAla N-Me)；3.19(s，N-Me)；2.93^*(s，MeTrpN-Me)；2.52，

2.39(2s，N-Me)；2.15-0.82；1.54^*，1.50°(2d，7Hz，MeAlaβ-Me)；1.04^*(d，

6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.57^*(d，6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.48′(d，Leuδ′-Me)；

0.26′(d，Leuδ″-Me)；-0.04^*(d，6.6Hz，Leuδ″-Me).

(3种构象体47∶48∶5，

标记)：8.63，7.87，7.77，7.63(4d，10Hz，

PrLeu NH)；7.49^*(d，7Hz，吲哚H-4′)；7.48°(d，7Hz，吲哚H-4′)；7.43^*(d，

8Hz，吲哚H-7′)；7.41°(d，8Hz，吲哚H-7′)；7.27^*(dd，吲哚H-6′)；7.23°

(dd，吲哚H-6′)；7.13^*(dd，吲哚H-5′)；7.08°(dd，吲哚H-5′)；7.04°(s，

吲哚H-2′)；7.02^*(s，吲哚H-2′)；6.98′(s，吲哚H-2′)；6.2°(d，10Hz，Leu

NH)；6.01^*(d，7Hz，Leu NH)；5.79′(d，9Hz，Leu NH)；5.30°(ddd，PrLeu6

α-H)；5.07^*(dd，Hbaα-H)；5.03^*(ddd，PrLeu6α-H)；4.86^*(ddd，PrLeu2

α-H)；4.79(dd，MeTrpα-H)；4.47^*(dd，MeLeuα-H)；4.18^*(ddd，Leuα-H)；

4.06(s，N-OMe)；4.05′(s，N-OMe，)；4.03(s，N-OMe)；3.71-3.50；3.42(s，

N-Me)；3.23-3.05；3.20(s，N-Me)；3.18(s，N-Me)；2.92(s，N-Me)；2.52(s，

N-Me)；2.51(s，N-Me)；2.03-1.08；1.54^*(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；1.50°(d，7Hz，

MeAlaβ-Me)；1.05^*(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.98-0.84；0.63^*(d，6.6Hz，Leu

δ′-Me)；0.53′(d，7Hz，Leuδ′-Me)；0.34′(d，7Hz，Leuδ″-Me)；0.11^*(d，6.6Hz，

Leuδ″-Me)；-0.13^*(ddd，Leuγ-CH).

(3种构象体40∶40∶20，

标记)：8.50^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；8.20

(m)；7.98^*(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.57^*(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.53-7.35；

7.25-7.18；7.23^*(s，吲哚H-2′)；7.13-7.06；7.05°(s，吲哚H-2′)；6.69(d)；

6.29(d，br)；6.22(d，br)；6.14°(d，7Hz，Leu NH)；6.07^*(d，9Hz，Leu NH)；

5.5°(ddd，PrLeu6α-H)；5.26-4.63(m，α-H)；4.36(m，MeLeu α-H)；4.18^*

(ddd，Leuα-H)；4.04(s，OMe)；4.03′(s，OMe，)；4.02(s，OMe)；3.68-2.78；

3.34(s，N-Me)；3.19(s，N-Me)；3.12(s，N-Me)；3.03(s，N-Me)；2.91(s，

N-Me)；2.53(s，N-Me)；2.10-1.05；1.03-0.78；0.76(d)；0.71(d，6.5Hz，Leu

g-Me)；0.60(d，6.6Hz，Leu g-Me)；0.08(d，6.6Hz，Leu g-Me)；-0.10(ddd，Leu

γ-CH).

(3种构象体43∶47∶5，标记)：8.68^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.87^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.80°(d，10Hz，NH)；7.63°(d，10Hz，NH)；7.55-7.37

(m，吲哚)；7.27-7.10(m，吲哚)；7.08°(s，吲哚H-2′)；7.03^*(s，吲哚

H-2′)；6.58(t，8Hz C＝C，)；6.23(t，8Hz C＝C，)；6.18°(d，6.7Hz，Leu NH)；

6.03^*(d，10Hz，Leu NH)；5.80′(d，Leu NH)；5.31°(ddd，PrLeu6α-H)；

5.08-4.91(α-H)；4.86^*(ddd，PrLeu2α-H)；4.77-4.68 M，α-H)；4.46^*(dd，

MeLeuα-H)；4.14^*(ddd，Leuα-H)；4.05°(s，OMe)；4.03^*(s，OMe)；4.02′(s，

OMe，)；3.71°(q，7Hz，MeAlaα-H)；3.60^*(q，7Hz，MeAlaα-H)；3.53-3.00；

3.44°(s，MeAla N-Me)；3.23(s，N-Me)；3.20(s，N-Me)；2.93^*(s，MeTrp

N-Me)；2.52(s，N-Me)；2.44(s，N-Me)；2.20-0.83；1.56^*(d，7Hz，MeAla

β-Me)；1.51°(d，7Hz，MeAla β-Me)；1.05^*(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.62^*(d，

6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.57′(d，Leuδ′-Me)；0.40′(d，Leuδ″-Me)；0.10^*(d，

6.6Hz.Leuδ″-Me)；-0.17^*(ddd，Leuγ-CH).

(3种构象体51∶45∶4，标记)：8.68^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.87^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.81°(d，10Hz，Prteu6 NH)；7.63°(d，10Hz，PrLeu2

NH)；7.53(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.51(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.43(d，8Hz，

吲哚H-7′)；7.40(d，8Hz，吲哚H-7′)；7.26(dd，吲哚H-6′)；7，23(dd，

吲哚H-6′)；7.13(dd，吲哚H-5′)；7.07°(s，吲哚H-2′)；7.07(dd，吲哚

H-5′)；7.03^*(s，吲哚H-2′)；6.21°(d，10Hz，Leu NH)；6.05^*(d，6Hz，Leu

NH)；5.79′(d，10Hz，Leu NH)；5.32°(ddd，PrLeu6α-H)；5.14^*(dd，Hbaα-H)；

5.03^*(ddd，PrLeu6α-H)；4.87^*(ddd，PrLeu2α-H)；4.83^*(dd，MeTrpα-H)；

4.77°(ddd，Leuα-H)；4.51^*(dd，MeLeuα-H)；4.13^*(ddd，Leuα-H)；4.06°(s，

OMe)；4.03^*(s，OMe)；3.68(m)；3.57^*(q，7Hz，MeAlaα-H)；3.44°(s，MeAla

N-Me)；3.36^*(dd，MeTrpβ-Ha)；3.23(dd，MeTrpβ-Hb)；3.22(s，N-Me)；3.17

(s，N-Me)；3.14(dd)；2.96(m CCH，)；2.93^*(s，MeTrpN-Me)；2.53(s，N-Me)；

2.49(s，N-Me)；2.25-1.97；1.86-1.78；1.55^*(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；1.52°(d，

7Hz，MeAla β-Me)；1.50-1.09；1.06^*(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；1.00-0.85；

0.63^*(d，6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.58′(d，Leuδ′-Me)；0.38′(d，Leuδ″-Me)；

0.07^*(d，6.6Hz，Leuδ″-Me)；-0.11^*(ddd，Leuγ-CH).

(6∶4E/Z异构体混合物，每一种有3种构象体，仅给出

特征信号)：8.61，8.48，7.93，7.84，7.82，7.74，(d，10Hz，PrLeuNH)；7.52

(d，8Hz，吲哚)；7.08 s(吲哚H-2′)；6.44，6.22(2dt，CH＝CHCN)；6.36-6.26

(m)；6.13，6.07，5.87(3d，Leu NH)；5.33-5.28(m)；5.24，5.20(2dm，

CH＝CHCN)；5.06-4.97(m)；4.92(2d)；4.87-4.75(m)；4.49，4.46(2dd，MeLeu

α-H)；4.28，4.18(2ddd，Leuα-H)；4.07，4.06，4.05，4.03(4s，N-OMe)；3.88，

3.82(2q，7Hz，MeAlaα-H)；3.43，3.40，3.23，3.21，3.19，3.12，2.93，2.55，

2.53，2.52，2.51(11s，N-Me)；1.54-1.49(5d，MeAlaβ-Me)；1.06，1.04(2d，

7Hz，MeLeu d-Me)；0.74，0.65，0.52，0.26，0.08(5d，Leu g-Me)；-0.04(ddd，

Leuγ-CH).

(3种构象体51∶46∶3

标记)：8.71^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.90^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.76°(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.6°(d，10Hz，PrLeu2

NH)；7.52^*(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.48°(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.42(d，8Hz，

吲哚)；7.40(d，8Hz，吲哚；7.26^*(dd，吲哚H-6′)；7.13^*(dd，吲哚H-5′)；

7.07°(dd，吲哚H-5′)；7.03^*(s，吲哚H-2′)；7.02°(s，吲哚H-2′)；6.16°(d

br，10Hz，Leu NH)；6.01^*(d，6Hz，Leu NH)；5.77′(d，Leu NH)；5.31(ddd，

α-H)；5.05-4.97；4.86(ddd，α-H)；4.82(dd，α-H)；4.74(m)；4.46^*(dd，MeLeu

α-H)；4.17^*(ddd，Leuα-H)；4.05^*(s，N-OMe)；4.03°(s，N-OMe)；3.68(m)；

3.57(m)；3.47^*(m，CH2Cl，)；3.43(s，N-Me)；3.28^*(dd，MeTrpβ-Ha)；3.23^*

(s，MeAla N-Me)；3.21(s，N-Me)；3.20^*(dd，MeTrpβ-Hb)；2.92^*(s，MeTrp

N-Me)；2.53^*(s，MeLeu N-Me)；2.49(s，N-Me)；2.23°(dd，indole H-6′)；

2.05-1.1；1.54^*(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；1.50°(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；1.05^*(d，

6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.98-0.85；0.57^*(d，6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.52′(d，Leu

δ′-Me)；0.28′(d，Leuδ″-Me)；0.06^*(d，6.6Hz，Leuδ″-Me)；-0.32^*(ddd，Leu

γ-CH).

(3种构象体37∶59∶4

标记)：8.73^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.8^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.73°(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.63°(d，10Hz，PrLeu2

NH)；7.49°(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.47^*(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.42^*(d，8Hz，

吲哚H-7′)；7.38°(d，8Hz，吲哚H-7′)；7.25(dd，吲哚)；7.22°(dd，吲哚

H-6′)；7.12^*(dd，吲哚H-5′)；7.06°(dd，吲哚H-5′)；7.04(s，吲哚H-2′)；

7.03(s，吲哚H-2′)；6.22°(d br，10Hz，Leu NH)；6.00^*(d，6Hz，Leu NH)；

5.78′(d，Leu NH)；5.31°(ddd，PrLeu6α-H)；5.07(dd，α-H)；5.05-4.90；4.87

(ddd，α-H)；4.79(dd，α-H)；4.72(m)；4.49^*(dd，MeLeuα-H)；4.11^*(ddd，Leu

α-H)；4.05^*(s，N-OMe)；4.03°(s，N-OMe)；3.75-3.50；3.43(s，N-Me)；

3.38-3.13；3.28(s，OMe)；3.28(s，OMe)；3.23(s，N-Me)；3.21°(s，N-Me)；

2.92^*(s，MeTrpN-Me)；2.53^*(s，MeLeu N-Me)；2.48°(s，N-Me)；2.00-1.08；

1.55^*(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；1.50°(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；1.05^*(d，6.5Hz，

MeLeu d-Me)；0.98-0.85；0.60^*(d，6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.05^*(d，6.6Hz，Leu

δ″-Me)；-0.18^*(ddd，Leuγ-CH).

(2种构象体50∶50

标记)：8.70^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.80^*(d，

10Hz，PrLeu2 NH)；7.71°(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.69°(d，10Hz，PrLeu2

NH)；7.47-7.35；7.24(dd，吲哚)；7.21(dd，吲哚)；7.04(dd，吲哚)；7.01

(dd，吲哚)；7.01(s，吲哚H-2′)；6.97(s，吲哚H-2′)；6.25°(dbr，10Hz，Leu

NH)；6.00^*(d，6Hz，Leu NH)；5.30°(ddd，PrLeu6α-H)；5.10-4.69；4.49^*(dd，

MeLeuα-H)；4.07^*(ddd，Leuα-H)；4.04^*(s)；4.02°(s)；3.72-3.02；3.41(s，

N-Me)；3.20(s，N-Me)；3.20^*(s，MeAla N-Me)；2.91^*(s，MeTrpN-Me)；2.53

(s，N-Me)；2.45(s，N-Me)；2.07-0.82；1.55^*(d，7Hz，MeAla β-Me)；1.50°(d，

7Hz，MeAla β-Me)；1.04^*(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.6^*(d，6.6Hz，Leu

δ′-Me)；0.41(m，cyPr)；-0.03^*(d，6.6Hz，Leuδ″-Me)；-0.24^*(ddd，Leuγ-CH).

(3种构象体63∶35∶2 标记)：8.78°(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.93^*，

7.77°(2d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.47^*(d，8Hz，吲哚H-7′)；7.43^*(d，8Hz，

吲哚H-4′)；7.40-7.23；7.17°，7.13^*(2dd，吲哚H-6′)；7.04，7.03(2s，吲哚

H-2′)；6.93°(dd，吲哚H-5′)；6.97，6.93(2s，CH-Ph2，)；6.74^*(dd，吲哚

H-5′)；6.14°(d，10Hz，Leu NH)；5.92^*(d，6Hz，Leu NH)；5.78′(d，Leu NH)；

5.27°(ddd，PrLeu6α-H)；5.12^*(dd，Hba α-H)；4.98^*(ddd，PrLeu6α-H)；

4.96^*(dd，MeTrpα-H)；4.85^*(ddd，PrLeu2α-H)；4.70°(ddd，α-H)；4.47^*(dd，

MeLeu α-H)；4.18^*(ddd，Leuα-H)；4.00^*，3.97°(2s，OMe)；3.57°(dd，MeTrp

β-Ha)；3.53°(dd，MeTrpβ-Hb)；3.37^*(dd，MeTrpβ-Ha)；3.27^*(dd，MeTrp

β-Hb)；3.20，3.19，2.93，2.83(4s，N-Me)；2.66(q，7Hz)；2.55-2.33；2.52(s，

N-Me)；2.46(s，N-Me)；2.27-1.92；1.80(m)；1.68-1.05；1.35°，1.28^*(2d，7Hz，

MeAla β-Me)；1.03^*(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.96-0.83；0.53′(d，Leu

δ′-Me)；0.49^*(d，6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.32′(d，Leuδ″-Me)；-0.12^*(d，6.6Hz，

Leuδ″-Me)；-0.49^*(ddd，Leuγ-CH).

(异构体混合物，仅给出特征信号)：7.13，7.03(2s，吲哚

H-2′)；4.56，4.40(2m，α-H)；4.03(s，N-OMe)；3.42，3.23，3.07，2.94，2.53(5s，

N-Me)；0.57，0.53，(2d，6.6Hz，Leu δ′-Me)；0.17，0.03(2d，6.6Hz，Leu

δ″-Me)；-0.03，-0.27(2ddd，Leuβ-CH).

(3种构象体78∶16∶6，

标记)：8.45^*(d，J＝10Hz，PrLeu6 NH)；

8.04^*(d，J＝10Hz，PrLeu2NH)；7.83°(d，J＝10Hz，NH)；7.68^*，7.53°(2d，

J＝7Hz，吲哚H-4′)；7.30^*(d，J＝8Hz，吲哚H-7′)；7.23^*(m，吲哚H-6′)；

7.10^*(dd，吲哚H-5′)；6.87°，6.79^*(2s，吲哚H-2′)；6.28°(d，J＝10Hz，Leu

NH)；6.07^*(d，J＝6Hz，Leu NH)；5.83′(d，J＝10Hz，Leu NH)；5.31°(ddd，

PrLeu α-H)；5.18^*(dd，Hba 0-H)；5.13°(dd，Hba α-H)；5.05^*(ddd，PrLeu6

α-H)；4.98°(ddd，Leuα-H)；4.93^*(dd，MeTrpα-H)；4.84^*(ddd，PrLeu2α-H)；

4.78°(ddd，PrLeu2α-H)；4.47^*(dd，MeLeuα-H)；4.13^*(ddd Leuα-H)；

3.8-3.5(m)；3.72^*°(2s，MeTrpN1′-Me)；3.69^*(q，J＝7Hz，MeAla α-H)；3.40°

(s，MeAla N-Me)；3.28^*(s，MeAla N-Me)；3.20(dd，MeTrpβ-Hb)；3.12^*(dd，

MeTrpβ-Ha)；2.93^*(s，MeTrp，N-Me)；2.53°(s，N-Me)；2.52^*(s，MeLeu

N-Me)；3.21°(s，N-Me)；2.25-2.08(m，Hbaγ-CH₂，β-Ha)；1.92^*(m，Hba

β-Hb)；1.83-1.75(m)；1.7-1.07(m)；1.53^*，1.48°(2d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；

1.04(d，J＝6.5Hz，MeLeuδ-Me)；0.97-0.84(m)；0.53^*(d，J＝6.6Hz，Leu Me)；

0.28′(d)；-0.17^*(d，J＝6.6Hz，Leu Me)；-0.53^*(ddd，Leuγ-CH).

(3种构象体80∶14∶6，标记)：8.48^*(d，10Hz， PrLeu6 NH)；8.06^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.94°(d，10Hz，PrLeu NH)；7.68^*(d，8Hz，吲哚

H-4′)；7.54°(d，吲哚)；7.33^*(d，8Hz，吲哚H-7′)；7.31°(d，8Hz，吲哚)；

7.22^*(dd，吲哚H-6′)；7.1^*(dd，吲哚H-5′)；7.53°(d，PrLeu NH)；6.93°(s，

吲哚H-2′)；6.84^*(s，吲哚H-2′)；6.26°(d，br，Leu NH)；6.05^*(d，7.5Hz，

Leu NH)；5.84′(d，Leu NH)；5.31°(ddd，PrLeu6α-H)；5.18^*(dd，Hbaα-H)；

5.13°(dd，Hbaα-H)；5.06^*(ddd，PrLeu6α-H)；4.99°(ddd，Leuα-H)；4.93^*

(dd，MeTrpα-H)；4.87^*(ddd，PrLeu2 α-H)；4.8°(ddd，PrLeu2α-H)；4.47^*

(dd，MeLeuα-H)；4.16^*(ddd，Leuα-H)；4.1^*(m，N-CH2)；3.78-3.57；3.69^*(q，

7Hz，MeAlaα-H)；3.47-2.90；3.42°(s，MeAla N-Me)；3.32^*(dd，MeTrpβ-Ha)；

3.3^*(s，MeAla N-Me)；3.23^*(dd，MeTrpβ-Hb)；3.21°(s，N-Me)；3.06′(s，

N-Me)；2.93^*(s，MeTrpN-Me)；2.53^*(s，MeLeu N-Me)；2.52°(s，N-Me)；

2.32-2.10；1.93^*(m，Hbaγ-CHb)；1.83-1.08；1.53^*(d，7Hz，MeAla β-Me)；

1.48°(d，7Hz，MeAla β-Me)；1.04^*(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.97-0.84；0.52^*

(d，6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.26′(d，Leuδ″-Me)；-0.17^*(d，6.6Hz，Leu δ″-Me)；

-0.55^*(ddd，Leuγ-CH).

(3种构象体71∶24∶5，标记)：8.50^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；8.06^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.94°(d，10Hz，PrLeu NH)；7.77°(d，8Hz，吲哚

H-4′)；7.72^*(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.53°(d，10Hz，PrLeu NH)；7.40-7.05，

6.92°(s，吲哚H-2′)；6.88^*(s，吲哚H-2′)；6.23°(d，9.4Hz，Leu NH)；6.09^*

(d，7.4Hz，Leu NH)；5.87′(d，Leu NH)；5.32°(ddd，PrLeu6α-H)；5.23^*(AB；

N1′-CH2)；5.20^*(AB；N1′-CH2)；5.17^*(dd，Hbaα-H)；5.14°(dd，Hbaα-H)；

5.04^*(ddd，PrLeu6α-H)；4.99°(ddd，PrLeu2α-H)；4.96^*(dd，MeTrpα-H)；

4.87^*(ddd，PrLeu2α-H)；4.78°(ddd，Leuα-H)；4.47^*(dd，MeLeuα-H)；4.21^*

(ddd，Leuα-H)；3.76°(q，7Hz，MeAlaα-H)；3.73-3.65，3.67^*(q，7Hz，MeAla

α-H)；3.58°(dd，MeLeuα-H)；3.50-3.37，3.42°(s，MeAla N-Me)；3.33^*(dd，

MeTrpβ-Ha)；3.27^*(s，MeAla N-Me)；3.23°(s，N-Me)；3.23^*(dd，MeTrp

β-Hb)；2.92^*(s，MeTrpN-Me)；2.53^*(s，MeLeu N-Me)；2.52°(s，N-Me)；

2.28-1.08，1.53^*(d，7Hz，MeAla β-Me)；1.49°(d，7Hz，MeAla β-Me)；1.06^*

(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.98-0.82，0.50′(d，Leu δ′-Me)；0.45^*(d，6.6Hz，

Leuδ′-Me)；0.28′(d，Leuδ″-Me)；-0.11^*(d，6.6Hz，Leuδ″-Me)；-0.47^*(ddd，

Leuγ-CH).

(3种构象体1∶1∶1)∶8.62，8.43，8.07，7.94，7.87，7.42(6d，J＝10Hz，NH)；

7.12(d，J＝7.4Hz，二氢吲哚芳族H)；7.08-6.99(m，二氢吲哚芳族H)；6.72，

6.69，(2dd二氢吲哚芳族H)；6.66-6.63(m，二氢吲哚芳族H)；6.58(d，

J＝8Hz，二氢吲哚芳族H)；6.29(d，J＝8Hz，Leu NH)；6.15(m br，Leu NH)；

5.88(d，J＝8Hz，Leu NH)；5.28-4.98(m，α-H)；4.93(ddd，α-H)；4.74(ddd，

α-H)；4.65(m，α-H)；4.54(dd，α-H)；4.43(dd，α-H)；3.80-3.66(m)；3.55-3.0

(m)；3.46，3.35，3.31，3.24，3.22，3.12，3.00，2.82，2.57(9s，N-Me)；2.55-1.1

(m)；1.52，1.48，1.43(3d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.13(d，J＝7Hz)；1.03-0.83

(m)；0.78，0.76，0.73(3d，J＝6.5Hz).

(3种构象体73∶23∶4，

标记)：8.53^*(d，J＝10Hz，PrLeu NH)；

8.06^*(d，J＝10Hz，PrLeu′NH)；7.95°(d，J＝10Hz，NH)；7.67^*，7.52°(2d，

J＝7Hz，吲哚H-4′)；7.55°(d，J＝10Hz，NH)；7.33^*，7.31°(2d，J＝8Hz，吲哚

H-7′)；7.19^*，7.17°(2dd，吲哚H-6′)；7.08^*，7.04°(2dd，吲哚H-5′)；6.98′，

6.88°，6.80^*(3s，吲哚H-2′)；6.23°(d，J＝9.3Hz，Leu NH)；6.05^*(d，J＝7.5Hz，

Leu NH)；5.84′(d，Leu NH)；5.33°(ddd，PrLeuα-H)；5.18^*(dd，Hbaα-H)；

5.14°(dd，Hbaα-H)；5.05^*(ddd，PrLeuα-H)；4.98°(ddd，Leuα-H)；4.93^*

(dd，indoleα-H)；4.87^*(ddd，PrLeu′α-H)；4.81°(ddd，Leuα-H)；4.47^*(dd，

MeLeuα-H)；4.22^*(ddd Leuα-H)；3.86-3.67(m)；3.83^*(s，t-Bu-CH2-N)；

3.69^*(q，J＝7Hz，MeAlaα-H)；3.5-3.2(m)；3.43°(s，MeAla N-Me)；3.30^*(s，

MeAla N-Me)；3.22°(s，N-Me)；2.93^*(s，MeMeTrp，N-Me)；2.53^*(s，MeLeu

N-Me)；2.53°(s，N-Me)；2.25(m，Hbag-CH2)；2.18(m，Hbaβ-Ha)；2.0-1.08

(m)；1.54^*，1.49°(2d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.05(d，J＝6.5Hz，MeLeu Me)；

0.97-0.84(m)；0.52^*(d，J＝6.6Hz，Leu Me)；0.28′(d)；-0.06^*(d，J＝6.6Hz，Leu

Me)；-0.49^*(ddd，Leuγ-CH).

(3种构象体s 78∶19∶3，

标记)：8.52^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；8.06^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.94°(d，10Hz，PrLeu NH)；7.68^*(d，8Hz，吲哚

H-4′)；7.53°(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.52°(d，10Hz，PrLeu NH)；7.36^*(d，8Hz，

吲哚H-7′)；7.33°(d，8Hz，吲哚H-7′)；7.2^*(dd，吲哚H-6′)；7.17°(dd，

吲哚H-6′)；7.09^*(dd，吲哚H-5′)；7.05°(dd，吲哚H-5′)；7.02°(s，吲哚

H-2′)；6.91^*(s，吲哚H-2′)；-6.23°(d，9.5Hz，Leu NH)；6.03^*(d，7.4Hz，Leu

NH)；5.87′(d，Leu NH)；5.32°(ddd，PrLeu6 α-H)；5.18^*(dd，Hbaα-H)；5.14°

(dd，Hbaα-H)；5.05^*(ddd，PrLeu6α-H)；4.98°(ddd，PrLeu2α-H)；4.93^*(dd，

MeTrpα-H)；4.87^*(ddd，PrLeu2α-H)；4.81°(ddd，Leuα-H)；4.60(m，

N-CH)4.46^*(dd，MeLeuα-H)；4.16^*(ddd，Leuα-H)；3.75°(q，7Hz，MeAla

α-H)；3.70(m)；3.69^*(q，7Hz，MeAlaα-H)；3.57°(dd，MeLeuα-H)；3.45(m)；

3.42°(s，MeAla N-Me)；3.32^*(dd，MeTrpβ-Ha)；3.31^*(s，MeAla N-Me)；

3.23^*(dd，MeTrpβ-Hb)；3.21°(s，N-Me)；2.93^*(s，MeTrpN-Me)；2.53^*(s，

MeLeu N-Me)；2.50°(s，N-Me)；2.28(AB-XY)；2.18(AB-XY，Hba g-CH2)；

2.13^*(m，Hbaγ-CHa)；1.93^*(m，Hbaγ-CHb)；1.85-1.08；1.53^*(d，7Hz，

MeAla β-Me)；1.47(m，N-CHMe2)1.04^*(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.98-0.83；

0.52′(d，Leu δ′-Me)；0.51^*(d，6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.34′(d，Leu δ″-Me)；-0.2^*

(d，6.6Hz，Leu δ″-Me)；-0.60^*(ddd，Leuγ-CH).

二氢吲哚A(3种构象体46∶27∶27，标记)：8.62^*(d，J＝10Hz，

PrLeu NH)；8.13°(d，J＝10Hz，NH)；8.02°(d，J＝10Hz，NH)；7.92°(d，J＝10Hz，

NH)；7.86^*(d，J＝10Hz，PrLeu′NH)；7.40°(d，J＝10Hz，NH)；7.23°7.16^*，

7.09°(3d，J＝7.4Hz，二氢吲哚芳族H)；7.05°，7.02^*，7.02°(3dd，二氢吲哚

芳族.H)；6.76°，6.72^*，6.71°(3dd，二氢吲哚芳族H)；6.64°，6.62°，6.58^*(3d，

J＝7.7Hz，二氢吲哚芳族H)；6.32°(d，J＝8Hz，Leu NH)；6.10°(m br，

Leu NH)；5.94^*(d，J＝9Hz，Leu NH)；5.28-4.73(m)；4.60°(dd，α-H)；4.13^*

(dd，α-H)；3.75-2.85(m)；3.45^*，3.33°，3.33^*，3.23°，3.20°，3.02^*，2.81°，

2.79°，2.57°(9s，N-Me)；2.45-0.83(m)；1.52°，1.46°，1.42^*(3d，J＝7Hz，MeAla

β-Me)二氢吲哚B(3-种构象体1∶1∶1)：8.62，8.43，8.07，7.94，7.87，7.42(6d，

J＝10Hz，NH)；7.12(d，J＝7.4Hz，二氢吲哚芳族H)；7.08-6.99(m，二氢吲

哚芳族H)；6.72，6.69，(2dd二氢吲哚芳族H)；6.66-6.63(m，二氢吲哚芳族

H)；6.58(d，J＝8Hz，二氢吲哚芳族H)；6.29(d，J＝8Hz，Leu NH)；6.15(m br，

Leu NH)；5.88(d，J＝8Hz，Leu NH)；5.28-4.98(m，α-H)；4.93(ddd，α-H)；4.74

(ddd，α-H)；4.65(m，α-H)；4.54(dd，α-H)；4.43(dd，α-H)；3.80-3.66(m)；

3.55-3.0(m)；3.46，3.35，3.31，3.24，3.22，3.12，3.00，2.82，2.57(9s，N-Me)；

2.55-1.1(m)；1.52，1.48，1.43(3d，J＝7Hz，MeAla β-Me)；1.13(d，J＝7Hz)；

1.03-0.83(m)；0.78，0.76，0.73(3d，J＝6.5Hz).

(3种构象体76∶18∶6，

标记)：8.49^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；8.05^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.94°(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.67^*(d，8Hz，吲哚

H-4′)；7.53°(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.52°(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.4^*(d，8Hz，

吲哚H-7′)；7.38°(d，8Hz，吲哚H-7′)；7.23^*(dd，吲哚H-6′)；7.19°(dd，

吲哚H-6′)；7.11^*(dd，吲哚H-5′)：7.07°(dd，吲哚H-5′)；7.05°(s，吲哚

H-2′)；7.01^*(s，吲哚H-2′)；6.22°(d，br，Leu NH)；6.05^*(d，7.5Hz，Leu NH)；

5.84′(d，Leu NH)；5.31°(ddd，PrLeu6 α-H)；5.19^*(dd，Hbaα-H)；5.16°(dd，

Hba α-H)；5.04^*(ddd，PrLeu6α-H)；5.00°(ddd，PrLeu2α-H)；4.94^*(dd，

MeTrpα-H)；4.87^*(ddd，PrLeu2α-H)；4.81°(ddd，Leuα-H)；4.67′(ddd，Leu

α-H)；4.45^*(dd，MeLeuα-H)；4.18^*(ddd，Leuα-H)；4.14(s，OPr)；3.80-3.55；

3.67^*(q，7Hz，MeAlaα-H)；3.50-3.40；3.42°(s，N-Me)；3.29^*(dd，MeTrpβ-

Ha)；3.27^*(s，MeAla N-Me)；3.21°(s，N-Me)；3.18^*(dd，MeTrpβ-Hb)；3.04′

(s，N-Me)；2.93^*(s，MeTrp N-Me)；2.55°(s，N-Me)；2.53^*(s，MeLeu N-Me)；

2.30-1.90；1.80(m，OPr)；1.53^*(d，7Hz，MeAla β-Me)；1.48°(d，7Hz，MeAla

β-Me)；1.08°(t，OPr)；1.07(t，OPr)；1.05^*(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.98-

0.85；0.59′(d，Leu δ′-Me)；0.57^*(d，6.6Hz，Leu δ′-Me)；0.37′(d，Leuδ′-Me)；

-0.07^*(d，6.6Hz，Leuδ″-Me).

(3种构象体73∶21∶6，标记)：8.49^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；8.05^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.94°(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.67*(d，8Hz，吲哚

吲哚H-6′)；7.11^*(dd，吲哚H-5′)；7.07°(dd，吲哚H-5′)；7.05°(s，吲哚

H-2′)；7.01^*(s，吲哚H-2′)；6.22°(d，9.4Hz，Leu NH)；6.05^*(d，7.3Hz，Leu

NH)；5.86′(d，Leu NH)；5.31°(ddd，PrLeu6α-H)；5.19^*(dd，Hbaα-H)；5.16°

(dd，Hbaα-H)；5.03^*(ddd，PrLeu6α-H)；5°(ddd，PrLeu2α-H)；4.94^*(dd，

MeTrpα-H)；4.87^*(ddd，PrLeu2α-H)；4.81°(ddd，Leuα-H)；4.65′(ddd，Leu

α-H)；″4.46^*(dd，MeLeuα-H)；4.26^*(q，OEt)；4.26°(q，OEt)；4.19^*(ddd，Leu

α-H)；3.80-3.56；3.67^*(q，7Hz，MeAlaα-H)；3.45-3.33；3.41°(s，MeAla

N-Me)；3.29^*(dd，MeTrpβ-Ha)；3.27^*(s，MeAla N-Me)；3.21°(s，N-Me)；

3.19^*(dd，MeTrpβ-Hb)；3.04′(s，N-Me)；2.93^*(s，MeTrp N-Me)；2.57°(s，

N-Me)；2.52^*(s，MeLeu N-Me)；2.32-1.08；1.53^*(d，7Hz，MeAla β-Me)；1.48°

(d，7Hz，MeAla β-Me)；1.40°(t，OEt)；1.40^*(t，OEt)；1.05^*(d，6.5Hz，MeLeu

d-Me)；0.98-0.84；0.60′(d，Leu δ′-Me)；0.57^*(d，6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.37′(d，

Leuδ″-Me)；-0.07^*(d，6.6Hz，Leuδ″-Me)；-0.36^*(ddd，Leuγ-CH).

(3种构象体63∶32∶5, 标记)：8.45^*(d，10Hz，PrLeu6 NH)；8.06^*

(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.97°(d，10Hz，PrLeu6 NH)；7.90′(d，10Hz，PrLeu6

NH)；7.63^*(d，8Hz，吲哚H-4′)；7.56°(d，10Hz，PrLeu2 NH)；7.45°(d，8Hz，

吲哚H-4′)；7.4^*(d，8Hz，吲哚H-7′)；7.38°(d，8Hz，吲哚H-7′)；7.23^*(dd，

吲哚H-6′)；7.22°(dd，吲哚H-6′)；7.13^*(dd，吲哚H-5′)；7.08°(dd，

吲哚 H-5′)；6.2°(d，10Hz，Leu NH)；6.07^*(d，7.5Hz，Leu NH)；5.77′(d，

8.5Hz，Leu NH)；5.32°(ddd，PrLeu6α-H)；5.26′(dd，Hbaα-H)；5.2^*(dd，Hba

α-H)；5.16°(dd，Hbaα-H)；5.03^*(ddd，PrLeu6α-H)；4.97^*(dd，MeTrpα-H)；

4.87^*(ddd，PrLeu2α-H)；4.67°(ddd，α-H)；4.46^*(dd，MeLeuα-H)；4.13^*

(ddd，Leuα-H)；4.09^*(s，N-OMe)；4.04′(s，N-OMe)；4.03°(s，N-0Me)；3.74°

(q，7Hz，MeAlaα-H)；3.71^*(q，7Hz，MeAlaα-H)；3.70-3.60；3.54-3.50；3.47°

(s，MeAla N-Me)；3.28-3.17；3.25^*(s，MeAla N-Me)；3.20°(s，N-Me)；2.97^*(s，

MeTrpN-Me)；2.52^*(s，MeLeu N-Me)；2.42°(s，N-Me)；2.40-2.14；1.97

(m)；1.79(m)；1.65-1.08；1.53^*(d，7Hz，MeAlaβ-Me)；1.5°(d，7Hz，MeAla

β-Me)；1.04^*(d，6.5Hz，MeLeu d-Me)；0.98-0.83；0.62′(d，Leuδ′-Me)；0.57^*

(d，6.6Hz，Leuδ′-Me)；0.37′(d，Leuδ″-Me)；-0.09^*(d，6.6Hz，Leuδ″-Me)；

-0.35^*(ddd，Leuγ-CH).

(3种构象体s44∶30∶26，标记)：8.85(d，CSNH2)；8.60(d，PrLeu6

NH)；8.17(d，CSNH2)；8.03，8.00(2d，NH)；7.88(m，CSNH2)；7.6-7.1；6.28^*

(d，10Hz，Leu NH)；6.07°(d，7Hz，Leu NH)；5.87′(d，9Hz，Leu NH)；6.26^*

(ddd，PrLeu2α-H)，5.22(dd，Hbaα-H)；5.15-4.95，5.08^*(dd，Hbaα-H)；4.83°

(ddd，PrLeu2α-H)；4.50^*(ddd，Leuα-H)；4.37^*(dd，MeTrpα-H)；4.25°(ddd，

Leuα-H)；4.09，4.05，4.03^*(3s，OMe)；3.89(m，α-H)；3.65^*，3.63′，3.52°(3q，

7Hz，MeAla α-H)；3.57(m)，3.17，3.16，3.15，3.22，3.20，3.05，2.92，2.55，

2.53(9s，NMe)；1.8-1.1；1.05(d，7Hz)；0.99-0.82，0.60°，0.55′，0.23′，0.17°

(4d，7Hz，Leuδ-Me)；-0.15°，-0.17′(ddd，Leuγ-CH).

Claims

1.式I环缩肽

其中：

A代表任选被R₆γ-取代的α-羟基取代的丁酸残基，其中R₆代表CN；COOR₂；CONR₃R₄；COR₅；CSNH₂；烷基，该烷基可被叠氮基、卤素、烷氧基、任选保护的羟基或氨基取代；乙烯基，它可被烷基、卤素或CN取代；环烷基；四唑基或-C≡CH；其中R₂代表氢或任选被芳基取代的烷基，R₃和R₄相同或不同并代表氢或烷基或者与氮共同形成任选含有其它杂原子的3-至6-元环，R₅代表氢或低级烷基；

B代表α-氨基-γ-甲基取代的辛酸残基；

R₁代表氢或甲基；

C代表式VI色氨酸或N-甲基色氨酸残基：

其中R₈代表氢、烷氧基、烷基或苄基，R₉代表氢或卤素，R₁₀代表氢或甲基，…表示单或双键，

X代表α-氨基取代的(C₂-C₁₄)羧酸残基，以及

Y代表α-氨基或N-甲基-α-氨基取代的(C₂-C₁₀)羧酸残基。

2.根据权利要求1的环缩肽，其中A代表α-羟基丁酸残基，该基团被下列基团γ-取代：氰基；COOR₂’，其中R₂’代表氢，具有1至4个碳原子的低级烷基或二苯基甲基；CONR₃’R₄’，其中R₃’代表氢或甲基，R₄’代表氢或烷基，或者R₃’和R₄’与氮共同形成3-至6-元环或吗啉基环；CH₂OH；COR₅’，其中R₅’代表氢或具有1至4个碳原子的低级烷基；任选被CN、Br或具有1至4个碳原子的低级烷基取代的乙烯基；任选被叠氮基、氨基、羟基、氯或烷氧基取代的烷基；四唑基；环丙基；CSNH₂或-C≡CH。

3.根据权利要求1或2的环缩肽，其中C代表式VI的N-甲基色氨酸残基，其中R₈代表氢，(C₁-C₄)烷氧基，特别是甲氧基，或烷基，R₉代表氢或卤素。

4.根据权利要求1、2或3的环缩肽，其中X代表α-氨基取代的(C₄-C₈)羧酸残基，该残基任选被β-或γ-(C₁-C₄)烷基取代。

5.根据权利要求1至4的环缩肽，其中X代表α-氨基-β-或γ-(C₁-C₄)烷基，特别是甲基，取代的辛酸或丁酸残基。

6.根据权利要求1至5的环缩肽，其中Y代表N-甲基-α-氨基取代的(C₂-C₄)羧酸残基，该残基任选被β-或γ-(C₁-C₄)烷基取代。

7.根据权利要求1至5的环缩肽，其中Y代表N-甲基-丙氨酸或N-甲基-缬氨酸残基。

8.式II环缩肽

9.式III环缩肽

10.根据上述权利要求任一权项的环缩肽的开链肽或缩肽。

11.式IV的开链肽或缩肽H-C-X-Y-A-B-R₁Leu-Leu.OR₇ IV其中取代基的定义同权利要求1中所述，R₇代表氢或烷基。

12.式V的开链肽或缩肽HA-B-R₁Leu-Leu-C-X-Y.OR₇ V其中取代基的定义同权利要求1中所述，R₇代表氢或烷基。

13.式Ip的环缩肽

其中：

A_p代表任选被R_6pγ-取代的α-羟基取代的丁酸残基，其中R_6p代表CN、任选保护的CH₂OH、COOR₂p、CONR_3pR_4p、COR_5p或-CH＝CH₂，其中R_2p代表氢或任选芳基取代的烷基，R_3p和R_4p相同或不同并代表氢或烷基或者与氮共同形成任选含有其它杂原子的5-至6-元环，R_5p代表氢或低级烷基；

B_p代表α-氨基-γ-甲基取代的辛酸残基；

R_1p代表氢或甲基；

X_p代表α-氨基取代的(C₂-C₁₄)羧酸残基，以及

Y_p代表α-氨基或N-甲基-α-氨基取代的(C₂-C₁₀)羧酸残基。

14.式I’p环缩肽

其中：

A’_p代表任选被R’_6pγ-取代的α-羟基取代的丁酸残基，其中R’_6p代表CN；COOR’_2p；CONR’_3pR’_4p；COR’_5p；烷基，该烷基可被叠氮基、卤素、烷氧基、任选保护的羟基或氨基取代；乙烯基，该乙烯基可被烷基、卤素或CN取代；环烷基；四唑基或-C≡CH；其中R’_2p代表氢或任选被芳基取代的烷基，R’_3p和R’_4p相同或不同并代表氢或烷基或者与氮共同形成任选含有其它杂原子的3-至6-元环，R’_5p代表氢或低级烷基；

B’_p代表α-氨基-γ-甲基取代的辛酸残基；

R’_1p代表氢或甲基；

C’_p代表式VI’_p的色氨酸或N-甲基色氨酸残基：其中R’_8p代表氢，烷氧基，烷基或苄基，R’_9p代表氢或卤素，R’_10p代表氢或甲基，

表示单或双键，

X’_p代表α-氨基取代的(C₂-C₁₄)羧酸残基，以及

Y’_p代表α-氨基-或N-甲基-α-氨基-取代的(C₂-C₁₀)羧酸残基。

15.盐或酯形式的上述权利要求任一权项的化合物。

16.具有表1所给出的化合物A的性质2、3和5-8的化合物。

17.具有表1所给出的化合物B的性质2、3和5-8的化合物。

18.以NRRL21123号保藏的真菌菌株F92-4471/08或其突变体或衍生物。

19.以NRRL 21123号保藏的菌株F92-4471/08产生的新的环缩肽。

20.制备权利要求1的化合物的方法，该方法包括在营养培养基中培养F92-4471/08(NRRL 21123)或其突变体或衍生物或类似真菌，并从中回收化合物。

21.通过衍生式II或III化合物来制备权利要求1的化合物的方法，该方法包括：

a)-为制备其中R₆代表COOR₂’，而R₂’代表任选被芳基取代的烷基的式I化合物，使其中R₆代表CN的式I化合物与优选为醇的亲核试剂，借助优选为盐酸的适当的碱性或酸性催化剂，在优选为醚的有机溶剂中反应，或

b)-为制备其中R₆代表CO烷基的式I化合物，在有或无催化剂存在下，于优选为醚的质子惰性有机溶剂中使其中R₆代表CN的式I化合物与优选为格利雅化合物或烷基锂的亲核有机金属化合物反应，或

c)-为制备其中R₆代表COOH的式I化合物，用优选为在醇的水溶液中的盐酸的无机酸或用碱水解其中R₆代表COO烷基的式I化合物，或

e)-为制备其中R₆代表CH₂OH的式I化合物，在有机溶剂中，用优选为甲硼烷-二甲硫配合物的金属氢化物或硼氢化物，还原其中R₆代表COOR₂的式I化合物，或

f)-为制备其中R₆代表CONR₃R₄的式I化合物，通过与胺反应转化其中R₆代表COOR₂的式I化合物，优选通过将游离酸转化成酰氯再与胺HNR₃R₄反应进行转化，或

k)-为制备其中R₆代表C≡CH的式I化合物，将其中R₆代表CH＝CBr₂的式I化合物进行反应，或

n)-为制备其中R₈代表氢的式I化合物，除去其中R₈代表OCH₃的式I化合物的甲氧基，或

o)-为制备其中符号

表示单键的式I化合物，还原其中符号表示双键的式I化合物，或

p)-为制备其中R₈代表烷基或苄基的式I化合物，在其中R₈代表氢的式I化合物中导入这些基团，或

r)-为制备其中R₈代表烷氧基且符号

表示双键的式I化合物，使其中R₈代表氢且符号

22.制备权利要求1的化合物的方法，其包括将包含以适当次序相互连结的酸残基A，B，R₁Leu，Leu，C，X和Y的直链肽或缩肽环化。

23.权利要求1的化合物的治疗应用。

24.权利要求1化合物抑制粘着分子表达的治疗应用。

25.用作药物的权利要求1的化合物。

26.包括治疗有效量的权利要求1化合物的治疗组合物。

27.用于局部使用的呈乳油或洗剂等形式的权利要求24的治疗组合物。

28.用于吸入器使用的呈气雾剂形式的权利要求24的治疗组合物。

29.权利要求1的化合物在制备用于治疗或预防与粘着分子高水平表达有关的疾病的药物中的应用。