CZ289311B6 - Cyklopeptolidy, způsoby jejich připravy a terapeutický prostředek, který je obsahuje - Google Patents
Cyklopeptolidy, způsoby jejich připravy a terapeutický prostředek, který je obsahuje Download PDFInfo
- Publication number
- CZ289311B6 CZ289311B6 CZ1997221A CZ22197A CZ289311B6 CZ 289311 B6 CZ289311 B6 CZ 289311B6 CZ 1997221 A CZ1997221 A CZ 1997221A CZ 22197 A CZ22197 A CZ 22197A CZ 289311 B6 CZ289311 B6 CZ 289311B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- leu
- indole
- ddd
- meala
- formula
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 19
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 13
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 13
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 12
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical class CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 claims abstract description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 6
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 6
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 241000351901 Bartalinia Species 0.000 claims description 3
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000005473 octanoic acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- VDCLCAXYTCLVQY-CTVGSUQISA-N 2-[(3s,6s,9s,15s,18s,21s,24s,27s)-15,18-di(butan-2-yl)-6-[(4-methoxyphenyl)methyl]-3,10,16,19,22,28-hexamethyl-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-decaoxo-9,24,27-tri(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28-decazabicyclo[28.4.0]tetratriacontan-21-yl]acetic acid Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N2CCCCC2C(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N(C)[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N(C)[C@@H](C(C)CC)C(=O)N(C)[C@H](C(NCC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)N1)=O)C(C)CC)C(C)C)C1=CC=C(OC)C=C1 VDCLCAXYTCLVQY-CTVGSUQISA-N 0.000 claims 4
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 claims 2
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 claims 2
- 150000001735 carboxylic acids Chemical group 0.000 claims 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 168
- -1 alpha-amino-gamma-methyl-substituted octanoic acid residue Chemical group 0.000 abstract description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 7
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 abstract description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 333
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 240
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 181
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 161
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 161
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 156
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 145
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 84
- XJODGRWDFZVTKW-LURJTMIESA-N (2s)-4-methyl-2-(methylamino)pentanoic acid Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CC(C)C XJODGRWDFZVTKW-LURJTMIESA-N 0.000 description 68
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 57
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 43
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 37
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 34
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 32
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 32
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 25
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 24
- 102000015271 Intercellular Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 22
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 20
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 19
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 17
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 17
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 description 16
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 16
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 108010024212 E-Selectin Proteins 0.000 description 13
- 102100023471 E-selectin Human genes 0.000 description 13
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 13
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethyl-3-carbazolamine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 12
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 12
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 12
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 12
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybutyric acid Chemical compound OCCCC(O)=O SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 8
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 7
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 7
- 239000008259 solid foam Substances 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 6
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 5
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N DMSO-d6 Substances [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 4
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N Diazomethane Chemical compound C=[N+]=[N-] YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N boron;methylsulfanylmethane Chemical compound [B].CSC MCQRPQCQMGVWIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 3
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 3
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 3
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 3
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 3
- PTXVSDKCUJCCLC-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxyindole Chemical compound C1=CC=C2N(O)C=CC2=C1 PTXVSDKCUJCCLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJJYHTVHBVXEEQ-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropanal Chemical compound CC(C)(C)C=O FJJYHTVHBVXEEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N Caprylic acid Natural products CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N N-Butyllithium Chemical compound [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical group 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 2
- 210000004925 microvascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- WRIKHQLVHPKCJU-UHFFFAOYSA-N sodium bis(trimethylsilyl)amide Chemical compound C[Si](C)(C)N([Na])[Si](C)(C)C WRIKHQLVHPKCJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- HJUGFYREWKUQJT-UHFFFAOYSA-N tetrabromomethane Chemical compound BrC(Br)(Br)Br HJUGFYREWKUQJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 2
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- HBDJFVFTHLOSDW-DNDLZOGFSA-N (2r,3r,4r,5r)-2,3,5,6-tetrahydroxy-4-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyhexanal;hydrate Chemical compound O.O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HBDJFVFTHLOSDW-DNDLZOGFSA-N 0.000 description 1
- AFENDNXGAFYKQO-VKHMYHEASA-N (S)-2-hydroxybutyric acid Chemical compound CC[C@H](O)C(O)=O AFENDNXGAFYKQO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 2-(diethylamino)ethyl 4-aminobenzoate;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;hydrate Chemical group O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 0.000 description 1
- APISVOVOJVZIBA-UHFFFAOYSA-N 2-(triphenyl-$l^{5}-phosphanylidene)acetonitrile Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)(=CC#N)C1=CC=CC=C1 APISVOVOJVZIBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(diethylamino)-3-(diethyliminiumyl)-3h-xanthen-9-yl]-5-sulfobenzene-1-sulfonate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001027553 Bos taurus Fibronectin Proteins 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006646 Dess-Martin oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 101100095895 Drosophila melanogaster sle gene Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007818 Grignard reagent Substances 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 description 1
- 108010008212 Integrin alpha4beta1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- CZCIKBSVHDNIDH-NSHDSACASA-N N(alpha)-methyl-L-tryptophan Chemical group C1=CC=C2C(C[C@H]([NH2+]C)C([O-])=O)=CNC2=C1 CZCIKBSVHDNIDH-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N N-methyl-L-alanine Chemical compound C[NH2+][C@@H](C)C([O-])=O GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N N-methyl-L-valine Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(O)=O AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229910004803 Na2 WO4.2H2 O Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004133 Sodium thiosulphate Substances 0.000 description 1
- GCTFWCDSFPMHHS-UHFFFAOYSA-M Tributyltin chloride Chemical compound CCCC[Sn](Cl)(CCCC)CCCC GCTFWCDSFPMHHS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OKJPEAGHQZHRQV-UHFFFAOYSA-N Triiodomethane Natural products IC(I)I OKJPEAGHQZHRQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ITLHXEGAYQFOHJ-UHFFFAOYSA-N [diazo(phenyl)methyl]benzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=[N+]=[N-])C1=CC=CC=C1 ITLHXEGAYQFOHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003668 acetyloxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)O[*] 0.000 description 1
- 238000007171 acid catalysis Methods 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000006364 carbonyl oxy methylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])OC([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000002701 cell growth assay Methods 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000011157 data evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- NKLCNNUWBJBICK-UHFFFAOYSA-N dess–martin periodinane Chemical compound C1=CC=C2I(OC(=O)C)(OC(C)=O)(OC(C)=O)OC(=O)C2=C1 NKLCNNUWBJBICK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAMRKDQNMBBFBR-BQYQJAHWSA-N diethyl azodicarboxylate Substances CCOC(=O)\N=N\C(=O)OCC FAMRKDQNMBBFBR-BQYQJAHWSA-N 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 1
- FAMRKDQNMBBFBR-UHFFFAOYSA-N ethyl n-ethoxycarbonyliminocarbamate Chemical compound CCOC(=O)N=NC(=O)OCC FAMRKDQNMBBFBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000004795 grignard reagents Chemical class 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- GGQOPZKTDHXXON-UHFFFAOYSA-N hexane;methanol Chemical compound OC.CCCCCC GGQOPZKTDHXXON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011141 high resolution liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000003780 keratinization Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 108010091798 leucylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 229960003017 maltose monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229910052987 metal hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004681 metal hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BKBMACKZOSMMGT-UHFFFAOYSA-N methanol;toluene Chemical compound OC.CC1=CC=CC=C1 BKBMACKZOSMMGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSEFCHWGJNHZNT-UHFFFAOYSA-M methyl(triphenyl)phosphanium;bromide Chemical compound [Br-].C=1C=CC=CC=1[P+](C=1C=CC=CC=1)(C)C1=CC=CC=C1 LSEFCHWGJNHZNT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- PVWOIHVRPOBWPI-UHFFFAOYSA-N n-propyl iodide Chemical compound CCCI PVWOIHVRPOBWPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000002902 organometallic compounds Chemical class 0.000 description 1
- YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L palladium(ii) acetate Chemical compound [Pd+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- ODZPKZBBUMBTMG-UHFFFAOYSA-N sodium amide Chemical compound [NH2-].[Na+] ODZPKZBBUMBTMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N sodium tungstate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][W]([O-])(=O)=O XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003463 sulfur Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- RLUJQBLWUQZMDG-UHFFFAOYSA-N toluene;hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=CC=CC=C1 RLUJQBLWUQZMDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K11/02—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof cyclic, e.g. valinomycins ; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
Abstract
Popisuj se cyklopeptolidy obecn ho vzorce I, ve kter m A je zbytek kyseliny m seln substituovan v poloze .alfa. atomem -O- a pop° pad d le substituovan v poloze .gama., B je zbytek oktanov kyseliny substituovan v poloze .alfa. skupinou -NH- a v poloze .gama. methylovou skupinou, R.sub.1.n. je vod k nebo methyl, C je zbytek pop° pad substituovan ho tryptofanu, X je zbytek karboxylov kyseliny se 2 a 14 atomy uhl ku substituovan v poloze .alfa. skupinou -NH-, a Y je zbytek karboxylov kyseliny se 2 a 10 atomy uhl ku substituovan v poloze .alfa. skupinou -NH- nebo -N(CH.sub.3.n.)-, ve voln form nebo ve form soli. Tyto slou eniny jsou inhibitory exprese adhezn ch molekul a jsou tak pou iteln pro l en z n tliv²ch a jin²ch onemocn n zp soben²ch zv² en²mi hladinami exprese adhezn ch molekul. D le se popisuje zp sob p° pravy t chto slou enin a terapeutick prost°edky, kter je obsahuj .\
Description
Vynález se týká cyklopeptolidů a jejich terapeutického použití jako inhibitorů exprese adhezních molekul.
Dosavadní stav techniky
Celulámí adhezní molekuly jako ICAM-1, VCAM-1 a E-selektin se exprimují na povrchu endoteliálních buněk, stejně jako keratinocyty pro ICAM-1, při odezvě na protizánětlivé mediátory, včetně TNFa, IFNy, IL1 a LPS. Odpovídající kontraligandy, například LFA-1, VLA-4 aSLE*, se exprimují na povrchu cirkulujících krevních buněk. Transendoteliální migrace leukocytů během zánětlivých procesů, jakož i extravaskulámí interakce buňka-buňka, jsou regulovány jako následek interakcí mezi těmito adhezními molekulami a jejich kontraligandami. Následkem toho inhibitory exprese adhezních molekul jsou potenciálně použitelné pro léčení mnohých chorobných stavů. V současnosti však nejsou dostupné žádné vhodné nízkomolekulámí inhibitory exprese adhezních molekul.
Cyklopeptolidy jsou cyklické molekuly obsahující zbytky aminokyselin vázané navzájem peptidovými vazbami a alespoň jeden zbytek hydroxysubstituované karboxylové kyseliny, který je vázán svým hydroxylovým substituentem na zbytek sousední kyseliny esterovou vazbou.
Nyní byla objevena nová třída cyklopeptolidů, které jsou inhibitory ICAM-1, VCAM-1 a E-selektinové exprese.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu jsou cykloheptapeptolidy obecného vzorce I
A - B - (RJ Leu - Leu - C - X ve kterém
A je zbytek kyseliny máselné substituované v poloze a atomem -O- a popřípadě substituované v poloze γ substituentem R«, který znamená skupinu CN nebo COOR2, kde R2 znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,
B je zbytek oktanové kyseliny substituované v poloze a skupinou -NH- a v poloze γ methylovou skupinou,
Ri je atom vodíku nebo methylová skupina,
-1CZ 289311 B6
C je zbytek tryptofanu obecného vzorce VI
(ví)
kde Rg znamená atom vodíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzylovou skupinu, R9 znamená atom vodíku nebo atom halogenu, Ri0 znamená atom vodíku nebo methylovou skupinu a----znamená jednoduchou nebo dvojnou vazbu,
X je zbytek karboxylové kyseliny se 2 až 14 atomy uhlíku substituované v poloze a skupinou -NH-, a
Y je zbytek karboxylové kyseliny se 2 až 10 atomy uhlíku substituované v poloze a skupinou -NH- nebo -N(CH3)-, ve volné formě nebo ve formě soli.
V obecném vzorci I je orientace C-koncových až N-koncových zbytků aminokyselin ve směru hodinových ručiček a peptolidová esterová vazba je mezi zbytky A a Y. Jestliže R] je methylová skupina, zbytky Ri-Leu a Leu jsou zbytky N-methylleucinu a leucinu.
Výhodně je C zbytek N-methyltryptofanu obecného vzorce VI, kde Rg znamená atom vodíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, zejména methoxyskupinu, nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a R]0 znamená methylovou skupinu.
Výhodně je X zbytek α-amino-substituované karboxylové kyseliny se 4 až 8 atomy uhlíku, která je popřípadě β- nebo γ-substituována alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku. Nejvýhodněji je X zbytek a-amino-β- nebo γ-substituované oktanové nebo máselné kyseliny, přičemž substituentem je alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, zejména methylová skupina.
Výhodně je Y zbytek N-methyl-a-amino-substituované karboxylové kyseliny se 2 až 4 atomy uhlíku, která je popřípadě β- nebo γ-substituována alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku. Nejvýhodněji je Y zbytek N-methylalaninu nebo N-methylvalinu.
Sloučeniny obecného vzorce I obsahují asymetrické uhlíkové atomy a proto mohou mít buď R nebo S konfiguraci.
Výhodně jsou rovněž sloučeniny obecného vzorce I, ve kterých
A představuje skupinu -OCH-(CH2)2-COO-n-propyl,
I co
-2CZ 289311 B6
B znamená skupinu
-NH-CH-CH2-CH(CH3)(CH2)3CH3,
I co
R] představuje methylovou skupinu,
C znamená skupinu
COCH2—CH-NCV k l
OCH3
-NH-CH-COI
X představuje skupinu CH2CH-CH3 a
I (CH2)3-CH3 ch3
I
Y představuje skupinu -N-CH-CO-.
I
CHj
Sloučeniny vzorců II a III (zde označované jako sloučeniny A a B)
(A)
-3CZ 289311 B6
byly izolovány z kultur plísňového kmen F92-4471/08, který byl izolován ze vzorku listového 5 odpadu poblíž La Plata v Argentině a je experimentálně přiřazen k rodu Bartalinia. Vzorky kmene F92-4471/08 byly uloženy v US Department of Agriculture, kolekce NRRL kultur podle ustanovení Budapešťské dohody z 2. července 1993 a jsou označeny vkladovým číslem NRRL 21123. Charakteristiky plísňového kmene F92-4471/08 jsou dále popsány v příkladu 1.
io Vynález se týká kmene F92-4471/08 (NRRL 21123) v izolované formě, jeho mutantů a derivátů, jakož i nových cyklopeptolidů produkovaných tímto kmenem.
Sloučeniny A a B a příbuzné sloučeniny lze získat kultivací F92-4471/08/NRRL 21123 nebo jeho mutantu nebo derivátu nebo podobných plísňových kmenů v živném médiu a izolováním 15 těchto sloučenin z něho, jak je popsáno například v příkladu 2.
Charakteristiky sloučenin A a B jsou uvedeny v příkladu 3.
Sloučeniny podle vynálezu lze připravovat derivatizací sloučenin A a B, která spočívá v tom, že
a) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Re znamená skupinu COOR'2, kde R'2 je alkylová skupina, popřípadě substituovaná arylovou skupinou, se nechají reagovat sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Re znamená kyanoskupinu, s nukleofily, s výhodou s alkoholem, za příslušné bazické nebo kyselé katalýzy, s výhodou za použití kyseliny chlorovodíkové, v organickém rozpouštědle, s výhodou v etheru, nebo
b) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Re znamená skupinu COalkyl, se nechají reagovat sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Re znamená kyanoskupinu, za použití organokovových sloučenin, s výhodou Grignardových sloučenin nebo alkyllithia, jako nukleofilů, přičemž reakce se provádí v aprotických organických rozpouštědlech, s výhodou v etherech, za použití katalyzátorů nebo bez použití katalyzátorů, nebo
c) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Re znamená skupinu COOH, se hydrolyzují sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Re znamená skupinu COOalkyl, minerální kyselinou, s výhodou kyselinou chlorovodíkovou, ve vodně-alkoholickém roztoku nebo bazickou hydrolýzou, nebo
-4CZ 289311 B6
d) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém R6 znamená skupinu COOR'2, se esterifikují sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R« znamená skupinu COOH, standardními způsoby, s výhodou konverzi na chlorid kyseliny, například s thionylchloridem a zpracováním s příslušným alkoholem v přítomností nebo bez přítomnosti činidla vázajícího kyselinu, nebo
e) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Ró znamená skupinu CH2OH, se redukují sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Ró znamená skupinu COOR2, hydridy kovů nebo borohydridy, s výhodou komplexem boranu s dimethylsulfidem, v organických rozpouštědlech, nebo
f) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Re znamená skupinu CONR3R4, se převedou sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Re znamená skupinu COOR2, reakci s aminy, s výhodou konverzí volné kyseliny, na chlorid kyseliny a ten se nechá reagovat s aminem vzorce HNR3R4, nebo
g) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém R6 znamená skupinu CHO, se oxidují sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Ró znamená skupinu CH2OH, nebo
h) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém R« znamená popřípadě substituovanou vinylovou skupinu, se nechají reagovat sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R« znamená skupinu CHO, s methylovaným Wittigovým činidlem, nebo
i) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Ró znamená popřípadě substituovanou alkylovou skupinu, se nechají reagovat sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R« znamená skupinu CH2OH, nebo
j) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém R« znamená skupinu CH2NH2, se redukují sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R^ znamená skupinu CH2N3, nebo
k) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém R$ znamená skupinu C=CH, se nechají reagovat sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Re znamená skupinu CH=Br2, nebo
l) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Re znamená cyklopropylovou skupinu, se nechají reagovat sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Re znamená vinylovou skupinu, s diazomethanem, nebo
m) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Re znamená tetrazolylovou skupinu, se nechají reagovat sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Re znamená kyanoskupinu, s azidovou sloučeninou, nebo
n) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Rg znamená atom vodíku, se odstraní methoxyskupina ze sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Rg znamená skupinu OCH3, nebo
o) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém symbol----znamená jednoduchou vazbu, se redukují sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém symbol----znamená dvojnou vazbu, nebo
p) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Rg znamená alkylovou skupinu nebo benzylovou skupinu, se zavádějí tyto skupiny do sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Rg znamená atom vodíku, nebo
q) pro přípravu sloučenin obecného vzorci, ve kterém R9 znamená atom halogenu, se halogenují sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R9 znamená atom vodíku nebo
-5CZ 289311 B6
r) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém R« znamená alkoxyskupinu a symbol
----znamená dvojnou vazbu, se nechají reagovat sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Rg znamená atom vodíku a symbol----znamená jednoduchou vazbu, s wolframanem alkalického kovu a peroxidem vodíku a N-hydroxyindolový meziprodukt se alkyluje, nebo
s) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, ve kterém Rs znamená skupinu CSNH2, se nechají reagovat sloučeniny obecného vzorce I s deriváty síry, výhodně s difenylfosfinodithiovou kyselinou.
Sloučeniny podle vynálezu lze také připravovat chemickou syntézou, například použitím běžných technik pro syntézu peptidů. Typickým konečným stupněm při přípravě těchto sloučenin je cyklizační stupeň, při kterém se lineární peptid nebo peptolid, obsahující zbytky kyselin A, B, RiLeu, Leu, C, X a Y vázané dohromady v příslušném pořadí, cyklizuje reakcí, při které vzniká amidová nebo esterová vazba.
Sloučeniny podle vynálezu vykazují farmakologický účinek a jsou proto použitelné jako léčiva. Zejména jsou tyto sloučeniny inhibitory stimulované exprese buněčných adhezních molekul, obzvláště inhibitory VCAM-1 vztahující se na expresi E-selektinu a ICAM-1. Účinek na inhibici VCAM-l probíhá na úrovni jak transkripční tak posttranskripční. Testy, které se mohou použít pro detekci inhibice exprese ICAM-1, VCAM-1 a E-selektinu sloučeninami podle vynálezu jsou dále popsány v příkladech. Sloučeniny jsou tak použitelné pro léčení a profylaxi onemocnění, která vyvolávají expresi buněčných adhezních molekul. Tato onemocnění zahrnují mnohá nevražená a zděděná onemocnění/poruchy, kde cirkulující leukocyty hrají prominentní roli v patogenních procesech, hlavně patrné u akutních a chronických zánětů (například alergie, astma, psoriáza, reperfuzní poranění, revmatoidní artritida a septický šok) a u autoimunních stavů (například skleróza multiplex). Ostatní indikace pro sloučeniny podle vynálezu zahrnují nádorové metastáze (například melanom, osteokarcinom) a odmítání aloimplantátu/xenoimplantátu, protože je známo, že inhibice vaskulámích adhezních molekul může značně zlepšit prognózy těchto procesů.
Sloučeniny podle vynálezu také přicházejí terapeuticky v úvahu při hyperproliferaci kožních onemocnění (například psoriázy), jakož i u různých zhoubných bujení, vzhledem kjejich inhibičním aktivitám při submikromolámích koncentracích, při kterých byly testovány 72 hodin v testech keratinizace, jakož i při testech bujení.
Sloučeniny podle vynálezu jsou účinné při inhibici TNFa- nebo IL6-indukované HTV produkci u U1 monocytických buněčných linií, jak bylo vyhodnoceno pomocí p24 Elisa a jsou proto také použitelné pro léčení onemocnění vyvolaných deficitem imunity a onemocnění vyvolaných viry, zejména pro léčení AIDS.
Sloučeniny podle vynálezu tak lze použít k léčení nebo profylaxi onemocnění, která se týkají exprese adhezních molekul, přičemž se přitom danému pacientovi podává terapeuticky nebo profylakticky účinné množství sloučeniny podle vynálezu.
Vynález se také týká terapeutických prostředků obsahujících terapeuticky účinné množství sloučeniny podle vynálezu.
Sloučeniny podle vynálezu lze tak použít pro přípravu léčiv pro léčení nebo profylaxi onemocnění, která se týkají exprese adhezních molekul.
Tyto prostředky mohou být pro parenterální, orální, aerosolové nebo topické použití a obvykle obsahují jedno nebo více farmaceuticky přijatelných ředidel nebo nosičů a mohou obsahovat aditiva, jako jsou stabilizátory a pod.
-6CZ 289311 B6
Dávky použitých sloučenin se mohou měnit podle stavu a onemocnění, zda se používají pro léčení nebo profylaxi, a způsobu podávání spolu s dalšími věcmi. Obecně se však dosáhne uspokojivých výsledků při orálním podávání v dávkách od asi 0,05 do asi 10 mg/kg/den, výhodně od asi 0,1 do asi 7,5 mg/kg/den, ještě výhodněji od asi 0,1 do asi 2 mg/kg/den, přičemž podávání se provádí v jedné nebo více rozdělených dávkách dvakrát až čtyřikrát denně. Alternativně lze pro parenterální podávání, například intravenózním kapáním nebo infuzí, použít dávky od asi 0,01 do asi 5 mg/kg/den, výhodně od asi 0,05 do asi 1 mg/kg/den a ještě výhodněji od asi 0,1 do asi 1,0 mg/kg/den.
Vhodné denní dávky pro lidi jsou tak od asi 2,5 do asi 500 mg, výhodně od asi 5 do asi 250 mg a ještě výhodněji od asi 5 do asi 100 mg, perorálně, nebo od asi 0,5 do asi 250 mg, výhodně od asi 2,5 do asi 125 mg a ještě výhodněji od asi 2,5 do asi 50 mg, intravenózně.
Sloučeniny mohou být podávány jakýmkoliv vhodným způsobem, včetně podávání enterálního, parenterálního a topického a též inhalací. Vhodnými enterálními formami jsou roztoky pro pití, tablety nebo kapsle. Vhodnými parenterálními formami jsou injikovatelné roztoky nebo suspenze. Vhodnými formami pro topickou aplikaci jsou krémy, tekuté lékové formy k zevnímu použití a pod. při koncentračním rozmezí 0,01 až 10 %, s výhodou 0,1 až 1 % hmotnostní pro takovéto přípravky. Vhodné jednotkové dávkové formy pro orální aplikaci mohou obsahovat od 1 do 50 mg sloučeniny, obvykle od 1 do 10 mg. Sloučenina podle příkladu 4 je výhodnou sloučeninou podle vynálezu a může být podávána větším savcům, například lidem, podobnými způsoby podávání v podobných nebo nižších dávkách než jsou dávky běžně používané u známých standardních látek pro dané indikace.
Předložený vynález je dále blíže popsán v následujících příkladech, které jsou doprovázeny grafy, přičemž:
Obr. 1 uvádí UV spektra sloučenin A (a) a B (b), obr. 2 uvádí IČ spektrum sloučeniny A, kde na ose x je uveden vlnočet v cm-1 a na ose y transmitance v %, obr. 3 uvádí IČ spektrum sloučeniny B, kde na ose x je uveden vlnočet v cm-1 a na ose y transmitance v %, obr. 4 uvádí protonové NMR spektrum sloučeniny A, obr. 5 uvádí protonové NMR spektrum sloučeniny B, obr. 6 uvádí 13C NMR spektrum sloučeniny A, obr. 7 uvádí 13C NMR spektrum sloučeniny B.
V následujících příkladech, které vynález blíže ilustrují, aniž by jej omezovaly, jsou teploty uvedeny ve stupních Celsia a jsou použity následující zkratky:
Bz = benzyl, iPr = izopropyl, nPr = n-propyl, Me = methyl, db = dvojná vazba, sb = jednoduchá vazba, br = široký, d = dublet, m = multiplet, q = kvartet, t = triplet, Hba = modifikovaná
2-hydroxymáselná kyselina, TFA = trifluoroctová kyselina, THF = tetrahydrofuran, DMSO = dimethylsulfoxid, CDC13 = deuterochloroform, TLC = chromatografie na tenké vrstvě, HPLC = kapalinová chromatografie s vysokou rozlišovací schopností, DMEM = Dulbeccovo modifikované Eaglovo médium FCS = plodové telecí sérum, PBS = fosfátem pufrovaný fyziologický roztok, EBM = základní médium pro endoteliální buňky, CM = živné (kultivační) médium,
A' = -O.CH.(CH2)2.R6
I co
B' =-NH-CH-CH2.CH(CH3).(CH2)3.CH3
I co
χ·=
-NH-CH-COI
CH-CHj (CH^-CHj
-NHXjH-COCH / \ CHj CH,
Y =
CHjCH,
-8CZ 289311 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Charakterizace kmen F/92-4471/08 (NRRL 21123)
Kmen plísně NRRL 21123 který produkuje sloučeniny A a B, byl izolován ze vzorku listového odpadu sebraného poblíž La Plata, Argentina.
Při pěstování na 2% sladovém agarovém médiu A (2% extraktu ze sladu, 0,4% extraktu z kvasnic, 2% agaru v deionizované vodě) kmen NRRL 21123 po třech dnech po naočkování produkuje při 27 °C kolonie o průměru 25 až 35 mm. Kolonie obvykle vyvíjejí krátké vzdušné mycelium, které je bílé až šedé nebo šedohnědé.
Podle měření průměru kolonie na médiu A je optimální teplota pro růst mezi 21 a 30 °C, minimální teplota je mezi 0 a 6 °C, a maximální teplota je mezi 33 a 38 °C. Sporulace byla pozorována po čtyřech dnech inkubace v rozmezí mezi 21 a 33 °C.
Kmen plíně NRRL 21123 produkuje sklovitě průsvitné až velmi světle hnědé konidie na lahvičkovitých nebo kroužkovitých konidiogenních buňkách v dobře definovaných pycnidiích. Konidie jsou obecně pětibuněčné, cylindrické, obvykle mírně zakřivené a převážná část měří 24-26 x 2,6-4 pm. Každé konidium má na jednom konci jeden sklovitě průsvitný nerozvětvený přívěšek a na druhé koncové buňce dva až čtyři (obvykle tři) sklovitě průsvitné a nerozvětvené přívěšky.
Na podkladě těchto morfologických charakteristik a podle identifikačního klíče v práci B. C. Sutton (1980): The Coelomycetes (publikováno Commonwealth Mycological Institute, Surrey, England) je kmen NRRL 21123 v souladu s rodem Bartalinia Tassi.
Příklad 2
Fermentace
Kmen NRRL 21123 se pěstuje 15 dnů při 21 °C na šikmém agaru obsahujícím médium A (2 % extraktu ze sladu, 0,4 % extraktu z kvasnic, 2 % agaru, deionizovaná voda). Konidie jedné šikmé kultury se suspendují v 10 ml sterilní vodovodní vody. 1 ml suspenze konidií se naočkuje do každé ze dvou 500ml Erlenmeyrových baněk obsahujících 200 ml média B (2 % extraktu ze sladu, 0,4 extraktu z kvasnic v deionizované vodě). Tyto baňky se inkubují 6 dnů při 21 °C na rotační třepačce rychlostí 200 otáček za minutu, čímž se připraví předkultura. 2 ml předkultury se potom očkují do každé z dvouset 500ml Erlenmeyrových baněk obsahujících 200 ml média C (2,2 % monohydrátu maltózy, 0,72 % extraktu z kvasnic v deionizované vodě). Tyto baňky se inkubují při 21 °C na rotační třepačce rychlostí 200 otáček za minutu a sklidí se dohromady po 6 dnech pro další zpracování.
Příklad 3
Izolace metabolitů, sloučeniny A a B litrů fermentačního bujónu kmene NRRL 21123, jak je popsán v příkladu 2, se filtruje za pomoci Clarcelu jako filtrační pomůcky. Vlhké mycelium se sebere a extrahuje se třikrát 15 1 směsi methanolu a acetonu (1:1). Spojené extrakty se zahustí na cirkulační odparce za sníženého
-9CZ 289311 B6 tlaku na přibližně 3 1 zbytkového vodného roztoku. Ten se extrahuje čtyřikrát 11 ethylacetátu. Ethylacetátové extrakty se spojí a zahustí se za sníženého tlaku na 25 g olejovitého zbytku, kteiý se potom rozdělí třikrát v rozpouštědlovém systému 90 % vodného methanolu a hexanu, spodní fáze po zahuštění za sníženého tlaku poskytne 4,5 g surové pevné látky. Tato pevná látka se nanese na kolonu 5,5 cm vnitřního průměru x 38 cm se silikagelem (Měrek, Kieselgel 60,40 až 63 pm) a chromatografuje se 1,41 směsi methylterc.butyletheru a methanolu (98:2) a potom 11(95:5). Průtoková iychlost se udržuje na 110 ml za minutu. Frakce, které vykazují aktivitu v testu inhibice ICAM-1 exprese, jak je popsán v příkladu 4, (každá 90 ml), obsahující buď sloučeninu A (čís. 9 až 10) nebo sloučeninu B (čís. 11 až 25) se spojí.
Sloučenina A
Spojená frakce 9 až 10 z chromatografie na silikagelu popsané výše se odpaří za sníženého tlaku k suchu, čímž se získá 1 g surové látky. Ta se dále čistí preparativní HPLC, za použití Měrek kolony 50 mm vnitřního průměru x 250 mm se 7 pm LiChrospher RP-18. Během 60 minut se aplikuje lineární gradient 80 -> 100 % methanolu ve vodě. Průtoková rychlost je 25 ml/min, 25ml frakce se seberou a monitorují se při 220 nm. Frakce 56 až 62 se spojí na základě UV, TLC a biologické účinnosti a potom se zahustí za sníženého tlaku, čímž se získá 0,6 g zbytku. Konečné čištění se provádí chromatografií na Sephadexu LH 20 za použití kolony 2,7 cm vnitřního průměru x 86 cm a elucí methanolem. Eluované frakce, které obsahují sloučeninu A v čisté formě, jak bylo stanoveno pomocí TLC, se spojí a odpaří za sníženého tlaku k suchu, čímž se získá 580 mg bezbarvého prášku. Vlastnosti sloučeniny A jsou uvedeny v tabulce 1 níže.
Sloučenina B
Spojené frakce 11 až 25 poskytnou po odpaření rozpouštědla za sníženého tlaku 2 g surové látky, která se dále čistí preparativní HPLC, za použití Měrek kolony 50 mm vnitřního průměru x 250 mm se 7 pm LiChrospher RP-18. Eluce se provádí lineárním gradientem 80 -> 100 % methanolu ve vodě během 60 minut. Průtoková rychlost je 25 ml/min, 25ml frakce se seberou a detekují se při 220 nm. Frakce 47 až 55 obsahují hlavně sloučeninu B, na základě UV, TLC a biologické účinnosti. Frakce se spojí, odpaří se za sníženého tlaku a získá se 0,4 g zbytku. Ten se dále čistí chromatografií na Sephadexu LH 20 na koloně 2,7 cm x 86 cm a eluce se provádí methanolem. 12ml frakce se seberou a monitorují se při 220 nm. Na základě UV, TLC a biologické účinnosti se frakce 23 až 27 spojí, odpaří se za sníženého tlaku a získá se 0,3 g zbytku. Po konečné chromatografií na silikagelu za použití kolony 2,2 cm vnitřního průměru x 16 cm, naplněné Měrek Kieselgel 60, 40 až 63 pm, a elucí směsí toluenu a ethanolu (95:5) se získá čistá sloučenina B, stanoveno TLC. Výsledné frakce se spojí a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 145 mg bezbarvého prášku. Vlastnosti sloučeniny B jsou také uvedeny v tabulce 1 níže.
Tabulka 1 níže se vztahuje k obrázkům 1 až 7.
-10CZ 289311 B6
Tabulka 1
| vlastnosti | sloučenina A | sloučenina B |
| 1. vzhled | bezbarvý prášek | bezbarvý prášek |
| 2. [a]D 25 3. hmotnostní | -234° (MeOH, c= 1,11) | -243° (MeOH, c= 1,08) |
| spektrum (FAB) 4. molekulový | m/e=977 MH+) | m/e=949 MH*) |
| vzorec 5. UV spektrum | CssH^NgOg | C5iHg0N8O9 |
| (MeOH) 6. IČ spektrum | viz obr. la | viz obr. Ib |
| (KBr) | viz. obr. 2 | viz obr. 3 |
| 7. protonová NMR, | vCDCl3-DMSO-dó= | v CDClr-DMSO-d6= |
| 500MHz, DMSO-d6 jako vnitřní standard | 3:2, viz obr. 4 | 4:1, viz obr. 5 |
| 8. nCNMR, | v CDCl3-DMSO-d6= | vCDCl3-DMSO-d6= |
| 125,7 MHz, DMSO-dé jako vnitřní standard | 3:2, viz obr. 6 | 4:1, viz obr. Ί |
| 9. rozpustnost | rozpustná v chloroformu, nerozpustná ve vodě a hexanu | methanolu, DMSO, |
| 10. TLCa(Rf) | 0,31 | 0,24 |
| ll.HPLCb(Rt) | 4,2 minuty | 3,3 minuty |
a 5 cm x 20 cm silikagelová destička 60 F254 (Měrek), toluen-MeOH (95:5), b Měrek LiChrospher 100 RP-18 (5 pm), 4 x 125 mm, MeOH-HíO (9:1), 1,2 ml/min, detekce při 220 nm za použití fotodiodového mřížkového detektoru Waters 996.
Příklad 4
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=COOCH3, B=B', Ri=CH3, C=C', Rg=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
Ke směsi 2 g sloučeniny A a 1,65 ml methanolu se přidá studený roztok HCl v etheru (30 ml, 17 % hmotn./obj., -20 °C) a udržuje se při -20 °C po dobu 3 dnů. Reakční směs se potom naleje do vodného roztoku hydrogenuhličitanu a extrahuje se ethylacetátem. Organický extrakt se vysuší síranem sodným, přefiltruje se a odpaří za sníženého tlaku. Surový produkt se rozpustí v 30 ml směsi methanolu a koncentrované vodné HCl (9:1) a míchá se při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. Roztok se potom zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem. Organický extrakt se vysuší síranem sodným, přefiltruje se a odpaří za sníženého tlaku. Surová reakční směs se čistí chromatografií s obrácenými fázemi na LiChroprep RP-8 (gradient: methanol/voda =8/2 až 10/0) a následnou chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 100/0 až 95/5), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny a derivát s otevřeným řetězcem obecného vzorce IV (Ré=COOCH3, R7=CH3) ve formě bezbarvé pevné látky.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf=0,41 (sloučenina uvedená v názvu), Rf=0,38 (derivát s otevřeným řetězcem), obrácená fáze RP-8, methanol/voda/trifluoroctová kyselina = 95/4/1, Rf = 0,34 (sloučenina uvedená v názvu), Rf = 0,51 (derivát s otevřeným řetězcem).
-11CZ 289311 B6
Příklad 5
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=COOH, B=B', Ri=CH3, C=C', Re=OCH3,----=db, X=Y', Y=Y')
Roztok 209 mg sloučeniny vzorce I podle příkladu 4 v 15 ml směsi terc.butanolu a koncentrované vodné HC1 (9/1) se zahřívá na teplotu 60 °C po dobu 8 hodin. Reakční směs se naleje do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje pufrem pH 7, vysuší se síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 100/0 až 95/5), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,25, obrácená fáze RP-8, methanol/voda = 92/8, Rf=0,34.
Příklad 6
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=CO.NH.CH3, B=B', Ri=CH3, C=C', Rs=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
Roztok 10 mg sloučeniny podle příkladu 5 v 0,5 ml dichlormethanu se ochladí na 0 °C a přidá se 50 μϊ thionylchloridu. Reakční směs se udržuje na teplotě 0 °C po dobu 1,5 hodiny a potom se při 0 °C odpaří za sníženého tlaku. Zbylý žlutý olej se rozpustí 1 ml dichlormethanu při 0 °C a přidá se 100 μϊ 40% vodného roztoku methylaminu. Po 45 minutách se reakční směs naleje do 0,1 M vodné HC1, extrahuje se ethylacetátem a rozdělí se mezi ethylacetát a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu. Organická fáze se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/ethylacetát/methanol = 100/0/0 až 65/25/10, čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol =9/1, Rf=0,25, obrácená fáze RP-8, methanol/voda = 95/5, Rf = 0,33.
Analogicky podle příkladu 6 se získají následující sloučeniny vzorce I (A=A', B=B', C=C', X=X',Y=Y'aR1=CH3):
-12CZ 289311 B6
| příklad | Re | Rs | — |
| 7 | -co-θ | och3 | db |
| 8 | CH3 / -CO-N \ ch3 | och3 | db |
| 9 | -CO.<J | och3 | db |
| 10 | -CO-N\ | och3 | db |
| 11 | C0-N\2 | och3 | db |
| 12 | -CO-N-(CH2)2.CH3 1 ch3 | och3 | db |
Příklad 13
Sloučenina vzorce I (A=A', R^COO.iPr, B=B', R,=CH3, C=C', Rg=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
Roztok 15 mg sloučeniny podle příkladu 5 v 0,75 ml dichlormethanu se ochladí na 0 °C a přidá se 75 μΐ thionylchloridu. Reakční směs se udržuje na 0 °C po dobu 2 hodin a potom se odpaří při 0 °C za sníženého tlaku. Zbylý žlutý olej se rozpustí v 1 ml dichlomethanu při 0 °C a přidá se 30 μΐ izopropanolu. Po 3 hodinách při teplotě 0 °C se reakční směs naleje do 0,1 M vodné HC1 a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 100/0 až 95/5), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,47, obrácená fáze RP-8, methanol/voda = 95/5, Rf=0,37.
Analogicky podle příkladu 9 se připraví následující sloučeniny vzorce I (A=A', B=B', C=C', X=X', Y=Y'a R]=CH3):
| příklad | Rí | Rs | — |
| 14 | -COO.C2H5 | OCH3 | db |
| 15 | -COO.nPr | och3 | db |
-13CZ 289311 B6
Příklad 16
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=COCH3, B=B', Ri=CH3, C=C', Rs=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
Roztok 200 mg sloučeniny A ve 2 ml etheru se přidá k roztoku methylovaného Grignardova činidla 2 mmol v 5 ml etheru a míchá se při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Potom se přidají další 2 mmol MeMgJ v etheru a směs se znovu míchá při teplotě místnosti po dobu 24 hodin.
Reakční směs se pak naleje do 0,1 M roztoku HC1 a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Surová reakční směs se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/ethylacetát/methanol = 100/0/0 až 68/27/5), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu, jakož i značné množství nezreagované výchozí látky.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,30.
Příklad 17
Sloučenina vzorce I (A=A', R«=CH2OH, B=B', Ri=CH3, C=C', Rť=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
K roztoku 27 mg sloučeniny podle příkladu 5 ve 2 ml tetrahydrofuranu se při teplotě místnosti přidá 0,5 ml 2 M roztoku komplexu boranu a dimethylsulfidu. Reakční směs se míchá po dobu
2,5 hodiny, naleje se do 0,1 M HC1 a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje fosfátovým pufrem (pH 7), vysuší se síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Surová látka se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 100/0 až 95/5), čímž se 30 získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,27, obrácená fáze RP-8, methanol/voda = 92/8, neodděleno od výchozí látky.
Příklad 18
Sloučenina vzorce I (A=A', Re=CN, B=B', Ri=CH3, C=C', Rs=H,----=db, X=X', Y=Y')
K roztoku 53 mg sloučeniny A a 66 mg octanu sodného ve 4 ml acetanhydridu se přidá 18 mg palladia na aktivním uhlí (10 %). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti v atmosféře vodíku po dobu 20 hodin (50% konverze podle TLC) a potom se naleje do vodného roztoku 45 hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se ethylacetátem. Organický roztok se vysuší síranem sodným a odpaří se ve vysokém vakuu. Surový produkt se čistí chromatografií s obráceným fázemi na RP-8 (gradient: methanol/voda = 80/20 až 100/0), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol - 9/1, Rf = 0,33, obrácená fáze RP-8, methanol/voda =92/8, Rf = 0,50 (výchozí látka Rf = 0,44).
-14CZ 289311 B6
Příklad 19
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=CHO, B=B', 1^=(¾ C=C', Rg=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
K roztoku 50 mg sloučeniny podle příkladu 17 ve 4 ml dichlormethanu se přidá 35 mg DessMartinova perjodovaného činidla (1,1,1-tris(acetyloxy)-1,1-dihydro-1,2-benzjodoxol-3(lH)onu) a suspenze se míchá při teplotě 20 °C po dobu 3 hodin. Potom se surová reakční směs naleje na silikagel a eluuje se ethylacetátem. Frakce obsahující produkt se spojí, odpaří se za sníženého tlaku a čistí se chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 100/0 až 95/5), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
Příklad 20
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=CH=CH2, B=B', Ri=CH3, C=C', Rs=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
Roztok methylovaného Wittigova činidla, připravený mícháním směsi methyltrifenylfosfoniumbromidu a natriumamidu v bezvodém THF, se přidává pomalu při teplotě 20 °C k roztoku 24,7 mg sloučeniny podle příkladu 19 v bezvodém THF až zůstává žlutá barva činidla. Potom se reakční směs naleje do 0,1 M kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se ethylacetátem. Organický extrakt se odpaří za sníženého tlaku a zbylý surový produkt se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 100/0 až 97/3), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
Příklad 21
Sloučenina vzorce I (A=Ař, R6=CH=CH-C2H5, B=B', Ri=CH3, C=C', Rs=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
Sloučenina uvedená v názvu se připraví analogicky podle příkladu 20.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,44.
Příklad 22
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=CH2N3, B=B', Rj=CH3, C=C', Rs=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
K roztoku 30 mg sloučeniny podle příkladu 17 a 12 mg trifenylfosfinu ve 3 ml bezvodého THF se přidá 150 μΐ 0,38 M toluenového roztoku kyseliny azidovodíkové. Při teplotě místnosti se přidává diethylazodikarboxylát, až roztok zůstává žlutý a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 10 minut. Surová reakční směs se naleje na 5 g oxidu hlinitého (neutrálního) a eluuje se ethylacetátem. Frakce obsahující produkt se odpaří za sníženého tlaku a čistí se chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 99,5/0,5 až 95/5), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
-15CZ 289311 B6
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf= 0,46, obrácená fáze RP-8, methanol/voda/TFA = 95/4/1, Rf= 0,41.
Příklad 23
Sloučenina vzorce I (A=A', R<í=CH2NH2, B=B', Ri=CH3, C=C', Re=OCH3,——=db, X=X', Y=Y')
Roztok 20 mg sloučeniny podle příkladu 22 ve 2 ml methanolu se míchá v atmosféře vodíku při teplotě 4 °C se 4 mg palladia na uhlí (10 %) po dobu 20 hodin. Katalyzátor se odfiltruje a reakční směs se odpaří za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí chromatografií s obrácenými fázemi na RP-8 (gradient: methanol/vodná 0,5% TFA = 80/20 až 100/0), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
TLC: obrácená fáze RP-8, methanol/voda/TFA = 95/4/1, Rf = 0,69.
Příklad 24
Sloučenina vzorce I (A=Ař, R6=CH=CBr2, B=B', R^Hj, C=C', R8=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
Roztok 225 mg sloučeniny podle příkladu 19 v 2,5 ml dichlormethanu se přidá ke směsi 30 mg práškového zinku, 120 mg trifenylfosfinu a 150 mg tetrabrommethanu a míchá se po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Směs se potom naleje na 5 g oxidu hlinitého a eluuje se ethylacetátem. Frakce obsahující produkt se odpaří za sníženého tlaku a čistí se chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 99,5/0,5 až 97/3), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé tuhé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,27.
Příklad 25
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=CHs€H, B=B', Ri=CH3, C=C', R«=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
Roztok n-butyllithia v hexanu (3 molekvivalenty) se přidává k 50 mg sloučeniny podle příkladu 24 při teplotě -78 °C během 2 hodin. Reakční směs se naleje do 0,1 M vodné HC1 a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje roztokem hydrogenuhličitanu a roztokem chloridu sodného a odpaří se za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 99,5/0,5 až 97/3), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé tuhé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,44.
-16CZ 289311 B6
Příklad 26
Sloučenina vzorce I (A=A', RÓ=CH=CH-CN, B=B', Ri=CH3, C=C', R8=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
Roztok 30 mg sloučeniny podle příkladu 19 a 270 mg kyanmethylentrifenylfosforanu v 5 ml toluenu se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Potom se surová reakční směs přefiltruje přes oxid hlinitý (nutrální) a eluuje se ethylacetátem. Frakce obsahující produkt se spojí a odpaří za sníženého tlaku. Sloučenina uvedená v názvu je směsi E/Z izomerů.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,39.
Příklad 27
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=CH2C1, B=B', Ri=CH3, C=C', R8=OCH3,----=db. X=X', Y=Y')
Roztok 20 mg sloučeniny podle příkladu 17 v 1 ml toluenu se přidá k roztoku 10 mg dichlortrifenylfosforanu v 1 ml toluenu a míchá se při teplotě 60 °C. Po dvou hodinách se přidá dalších 35 mg dichlortrifenylfosfinu. Po jedné hodině se reakční směs přefiltruje přes neutrální oxid hlinitý a eluuje se ethylacetátem. Frakce obsahující produkt se odpaří a surová látka se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 100/0 až 97/3), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé tuhé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,39.
Příklad 28
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=CH2.O.CH3, B=B', Ri=CH3, C=C', Rs=OCH3,----=db. X=X', Y=Y')
Roztok 34 mg sloučeniny podle příkladu 17 v 6 ml dichlormethanu a 100 ml silikagelu se nechá reagovat s roztokem diazomethanu v etheru, až se výchozí látka spotřebuje. Pro zbavení se polymethylenu vytvořeného v průběhu reakce se směs přefiltruje, odpaří se a přidá se čerstvý dichlormethan a silikagel. Po konečném odpaření za sníženého tlaku se surová látka čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 99,7/0,3 až 97/3), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé tuhé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,34.
-17CZ 289311 B6
Příklad 29
Sloučenina vzorce I (A=A', Re= B=B', Rt=CH3, C=C', R8=OCH3----=db, X=X', Y=Y')
Roztok 13 mg sloučeniny podle příkladu 20 a 2,8 mg palladiumacetátu v 2,5 ml dichlormethanu se nechá reagovat s etherickým roztokem diazomethanu při teplotě místnosti, až se výchozí látka spotřebuje. Surová reakční směs se přefiltruje přes silikagel a eluuje se směsí toluenu a methanolu. Frakce obsahující produkt se odpaří a surová látka se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 99,5/0,5 až 97/3), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé tuhé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,38, obrácená fáze RP-8, methanol/fosfátový pufr pH 7 = 92/8, Rf = 0,27.
Příklad 30
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=COO.CH(C6H5)2, B=B', Ri=CH3, C=C', Rg=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
Roztok 8,2 mg sloučeniny podle příkladu 5 a 3,1 mg difenyldiazomethanu v 0,5 ml toluenu se zahřívá na teplotu 60 °C po dobu 3 hodin. Roztok se potom přímo nanese na chromatografickou kolonu se silikagelem (gradient: toluen/methanol = 100/0 až 97/3), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé tuhé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,46.
Příklad 31
Sloučenina vzorce I
NH—N (A=A', Rý= —,B=B,,Ri=CH3,C=C',Ře=OCH3,=z1r^:!=db,X=X',Y=Y9
Roztok 50 mg sloučeniny A v 1 ml dimethylformamidu se zahřívá se 125 mg tributylcínchloridu a 25 mg azidu sodného při teplotě 100 °C po dobu 8 dnů. Potom se směs naleje do 1 M vodné HC1 a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 100/0,25 až 100/2,5), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol - 9/1, Rf = 0,12, obrácená fáze RP-8, methanol/fosfátový pufr pH 7 = 92/8, Rf = 0,48.
-18CZ 289311 B6
Příklad 32
Sloučenina vzorce I (A=A', R«=CN, B=B', C=C', R8=CH3,----=db, X=X', Y=Y')
Roztok 20 mg sloučeniny podle příkladu 18 v 1 ml dimethylformamidu se smíchá s 1 ml jodmethanu a přidá se roztok 5 mg natrium-bis(trimethylsilyl)amidu v 0,3 ml dimethylformamidu. Po míchání reakční směsi při teplotě místnosti po dobu 1,5 hodiny se směs naleje do 0,1 M vodné HC1, extrahuje se ethylacetátem a rozdělí se mezi ethylacetát a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu. Organická fáze se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 100/0,25 až 100/2,5), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,43.
Analogicky podle příkladu 32 se připraví následující sloučeniny vzorce I (A=A', Rí=CN, B=B', X=X', Y=Y'):
| příklad | C | Ré | — |
| 33 | C' | c2h5 | db |
| 34 | C' | Bz | db |
Příklad 35
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=CN, B=B', C=C', R8=CH2C(CH3)3,----=db, X=X', Y=Y')
K roztoku 38 mg sloučeniny podle příkladu 38 ve 2 ml kyseliny octové a 0,2 ml pivalaldehydu se přidá 30 pl 2 M komplexu boranu s dimethylsulfidem v THF a směs se míchá při teplotě místnosti 5 minut. Směs se potom naleje do směsi hydrogenuhličitanu sodného a ethylacetátu a přidá se malé množství vody. Organická vrstva se oddělí, promyje se roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Zbylý bezbarvý olej (TLC: silikagel, toluen/methanol 9/1, Rf= 0,53) se rozpustí ve 3 ml THF a při teplotě místnosti se přidává tetrahydrofuranový roztok 2,3-dichlor-5,6-dikyan-l,4-benzochinonu (DDQ, 8 mg v 0,2 ml), až reakční směs ztmavne. Směs se přefiltruje přes 5 g silikagelu a eluuje se směsí toluenu a methanolu 100/0,5 až 95/5), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol 9/1, Rf = 0,49.
Analogicky podle příkladu 35 se připraví následující sloučeniny vzorce I (A=A', R6=CN, B=B', X=X', Y=Y'):
| příklad | C | R« | — |
| 36 | C' | Bz | sb |
| 37 | C' | CH(CH3)2 | db |
-19CZ 289311 B6
Příklad 38
Sloučenina vzorce I (A=A', Rfi=CN, B=B', C=C', Rg=H,----=sb, X=X', Y=Y')
Heterogenní směs 25 mg sloučeniny podle příkladu 18, 1 ml trifluoroctové kyseliny a 0,3 ml trimethyisilanu se intenzivně míchá v atmosféře argonu při teplotě 4°C po dobu 20 hodin. Reakční směs se naleje do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 100/0,5 až 100/5), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, indolin A Rf=0,16, indolin B Rf=0,10, obrácená fáze RP-8, methanol/voda/TFA = 95/4/1, indolin A + B Rf = 0,71.
Příklad 39
Sloučenina vzorce I (A=A', R«=CN, B=B', C=C', R8=O.(CH2)2.CH3,----=db, X=X', Y=Y')
K roztoku 30 mg sloučeniny podle příkladu 38 (směs diastereoizomerů) v 1 ml methanolu se přidá 100 mg wolfřamanu sodného (Na2WO4.2H2O) a 100 μΐ 30% roztoku peroxidu vodíku. Reakční směs se míchá 20 minut při teplotě místnosti a potom se přímo čistí gelovou chromatografií (Sephadex LH-20, methanoí/ethylacetát = 1 : 1). Frakce obsahující N-hydroxyindolový meziprodukt se odpaří, zbytek se vyjme do 2 ml bezvodého DMF a přidají se 2 ml propyljodidu a 7,5 mg natrium-bis(trimethylsilyl)amidu. Po 30timinutovém míchání při teplotě místnosti se reakční směs naleje do 0,1 M kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se ethylacetátem. Organická vrstva se promyje hydrogenuhličitanem sodným a roztokem chloridu sodného a odpaří se za sníženého tlaku. Produkt se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 100/0,5 až 98/2) a chromatografií s obrácenými fázemi (RP-8, gradient vodný methanol = 75 až 100 %), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 90/10, Rf = 0,51, RP-8, methanol/fosfátový pufř pH 7 = 92/8, Rf = 0,30.
Příklad 40
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=CN, B=B', C=C', R«=O.C2H5,----=db, X=X', Y=Y')
Sloučenina uvedená v názvu se připraví analogicky, jak je popsáno v příkladu 39.
-20CZ 289311 B6
Příklad 41
Sloučenina vzorce I (A=A', Re=CN, B=B', C=C, R8=OCH3, R9=Br,----=db, X=X', Y=Y')
Roztok 50 mg sloučeniny A ve 2 ml tetrachlormethanu se míchá se 3 mg práškového železa a během 1 hodiny se přidá 10 mg bromu v tetrachlormethanu. Surová reakční směs se naleje do vodného roztoku hydrogenuhličitanu a extrahuje se ethylacetátem. Organická fáze se promyje roztokem thiosíranu sodného a roztokem chloridu sodného a odpaří se za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 99,5/0,5 až 97/3), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé tuhé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,48, obrácená fáze RP-8, methanol/voda = 92/8, Rf=0,19.
Příklad 42
Sloučenina vzorce I (A=A', R6=CSNH2, B=B', Ri=CH3, C=C', R8=OCH3,----=db, X=X', Y=Y')
Roztok 50 mg sloučeniny A a 50 mg difenylfosfmodithiové kyseliny ve 4 ml izopropanolu se zahřívá na 60 °C po dobu 3 dnů. Reakční směs se ochladí na -20 °C, sraženina se odstraní filtrací, roztok se zředí ethylacetátem a extrahuje se vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se odpaří za sníženého tlaku a surový produkt se čistí chromatografií na silikagelu (gradient: toluen/methanol = 100/0,5 až 96/4), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu ve formě bezbarvé pěny.
TLC: silikagel, toluen/methanol = 9/1, Rf = 0,29.
Biologická účinnost
Účinnosti sloučenin podle vynálezu byly testovány v testech cytotoxicity a inhibice exprese ICAM-1, VCAM-1 a E-selektinu, jakož i v testech buněčného bujení. Koncentrace sloučenin nutných pro polovinu maximální inhibice (IC50) jsou pro každý test uvedeny v tabulce 2 níže.
Tabulka 2
| slouč. | IC50 (pM)/test | ||||
| ICAM-1 | ICAM-1 | VCAM-1 | E-selektin | cytotox. buněč. bujení | |
| (HaCat) | (HMEC) | (HMEC) | (HUVEC) | (24 h) . (HaCat 72 h) | |
| sl.A | 0,009 | 0,06 | 0,002 | 0,04 | >40 0,006 |
| sl. B | 0,02 | 1,3 | 0,03 | >40 0,05 |
Tyto testy byly provedeny následujícím způsobem:
HaCaT buňky, spontánně transformované nenádorové lidské keratinocytické buněčné linie s vysoce zachovanými fenotypickými diferenciačními charakteristikami normálních keratinocytů (Boukamp a j., 1988 J. Cell Biol. 106, 761 až 771), byly použity jak pro test bujení tak pro test ICAM-1 buněčná Elisa.
-21CZ 289311 B6
A. ICAM-1 test buněčná Elisa
I. Keratinocyty ICAM-1 buněčná Elisa
Test ICAM-1 buněčná Elisa byl použit pro stanovení inhibice ICAM-1 exprese v podstatě tak, jak je popsáno v práci Winisko a Foster (1992, J. Invest. Dermatol., 99.48 až 52). HaCaT buňky byly naočkovány do 96jamkových mikrotitračních desek (2 x 104 buněk na jamku v živném médiu: DMEM s 5% FCS, 100 jednotek/ml penicilinu, 100pg/ml streptomycinu, 2mM glutaminu, 1 mM pyruvátu sodného), ponechány růst až do shluknutí a potom byly inkubovány v čerstvém testovacím médiu (stejném jako živné médium, avšak za použití 0,5 % FCS místo 5 %), a to s nebo bez IFN-y/TNF-a stimulačního média (testovaní médium + 1000 jednotek/ml IFN-y/3 ng/ml TNF-α), jak v přítomnosti tak za absence sloučeniny A nebo sloučeniny B po dobu asi 24 hodin. Médium se potom vymyje a vrstvy skládající se z jedné řady buněk (monovrstvy) se fixují 1 % paraformaldehydu. Monovrstvy se inkubují sytícími množstvími primárních protilátek (monoklonální myší anti-ICAM-1) a sekundárních protilátek (kozí antimyší s konjugovanou peroxidázou). Následující reakcí peroxidázy za použití 3-amino-9-ethylkarbazolu (AEC) jako substrátu se vytvoří nerozpustný barevný produkt, který se snadno měří ve standardním čtecím zařízení z mikrotitračních desek.
Π. Měření cytotoxicity
Po skončení AEC reakce pro detekci ICAM-1 se HaCaT propláchnou PBS (200 μΐ), PBS se odleje z desek, které se potom zbaví přebytečné kapaliny poklepáváním povrchu papírovým ubrouskem. Spodní povrchy mikrotitračních desek se jemně otřou vlhkou faciální tkání a potom znovu suchou faciální tkání a odečte se absorbance při 492 nm. Dříve než monovrstvy mohou vyschnout, přidá se do každé jamky 0,1 ml 0,1% roztoku krystalické violeti v PBS (nejprve přefiltrované přes 0,2 pm filtr). Desky se potom inkubují při teplotě místnosti po dobu 10 minut, promyjí se pečlivě 5 x PBS, přebytek kapaliny se odstraní způsobem popsaným výše a znovu, dříve než monovrstvy stačí oschnout, se odečte absorbance při 492 nm. Odečtením optických hustot před a po vybarvení se získají hodnoty vyvolané vybarvením krystalickou violetí a ty jsou tak ve vztahu k množství buněk monovrstvy přítomných v jamkách. Tyto hodnoty jsou používány pro korekci AEC hodnot.
B. Buněčný test Elisa endoteliálních buněk VCAM-1, ICAM-1 a E-selektinu
Test je založen na 96jamkové buněčné Elisa metodě za použití lidské mikrovaskulámí endoteliální buněčné linie HMEC-1 a lidských umbilikálních žitních endoteliálních buněk (HUVEC). Buňky se předem 4 hodiny ošetřují testovanou sloučeninou A nebo sloučeninou B, stimulují se následujících 8 až 16 hodin s TNF-α a potom se fixují paraformaldehydem pro následující stanovení exprese VCAM-1, ICAM-1 nebo E-selektinu nepřímou imunoperoxidázovou barvicí technikou. Cytotoxické účinky se stanoví spočítáním relativního počtu buněk (jádrové barvivo Giemsa) po expozici na testovanou sloučeninu, ve srovnání s kontrolními jamkami (pouze s rozpouštědlem a médii). Sloučeniny jsou skórovány jako pozitivní, jestliže vykazují >50% inhibici VCAM-1, ICAM-1 nebo E-selektinu při <25% úbytku buněk.
Metodologie
I. Buněčná linie: Při VCAM-1 a ICAM-1 testu se používají zvěčnělé (SV-40 virus velký T antigen) lidské mikrovaskulámí endoteliální buněčné linie (HMEC-1, Ades a j., Jrl Invest Dermatol 99, 683 až 690, 1992). HMEC-1 buňky podstatně exprimují nízké hladiny ICAM-1, které jsou doregulovávány zánětlivými mediátory. Avšak pouze ony mohou exprimovat VCAM-1 po cytokinové stimulaci. Pokusy dávka-odezva a časové závislosti byly provedeny tak, aby byly stanoveny optimální podmínky pro vyvolání exprese VCAM-1 a ICAM-1.
-22CZ 289311 B6
Π. Podmínky růstu: HMEC-1 buňky byly ponechány růst vT-75 baňkách (Nunc) za standardních podmínek (37 °C, 5 % CO2) s 1,5 x 106 buněk/ml živného média (CM = endoteliální buňky základního média [EBM, Clonetics] doplněného 10% FCS, lOng/ml lidského EGF (Boehringer), 1 pg/ml hydrokortisonu (Sigma # 0888), 2,2 g/1 NaHCO3, 15 mM Hepes, 0,11 g/1 pyruvátu sodného, 4 mM glutaminu, 100 jednotek/ml penicilinu a 100 μg/ml streptomycinu). Po mírné trypsinizaci (0,25 % trypsinu + 0,1 % EDTA po dobu 8 minut) a resuspendaci se buňky přeočkují každé 2 až 3 dny v rozdělovacím poměru 1 : 3.
ΠΙ. Test buněčná Elisa VCAM-1 a ICAM-1
Mikrotitrační desky s 96 jamkami s plochým dnem se předem povléknou hovězím fibronektinem (FN, Sigma # FI 141) a potom se naočkují 2 x 104 buněk na jamku v 200 μΐ EBM růstového média a inkubují se přes noc. Následující den se živné médium (CM) nejprve nahradí 200 μΐ na jamku EBM testovacího média (CM doplněné 5 % FCS místo 10 %) a potom se nahradí 180 μΐ média obsahujícího buď (1) příslušné koncentrace sloučeniny A nebo sloučeniny B, (2) odpovídající koncentrace média extrahovaného rozpouštědlem/methanolem, nebo (3) samotné EBM testovací médium a inkubují se při teplotě 37 °C po dobu 4 hodin. Každý z testů v 96 jamkách se provádí se zdvojenými jamkami. Buňky se potom stimulují přidáním 20 μΐ koncentrovaného cytokinového roztoku (2000 jednotek/ml TNF-α) a inkubují se při 37 °C po dobu 16 hodin.
Buněčná monovrstva se potom promyje 1% paraformaldehydem v EBM médiu, fixuje se 2% paraformaldehydem při teplotě místnosti po dobu 15 minut a několikrát se promyje PBS. PBS se z buněk odstraní a monovrstva se inkubuje 30 minut v PBS obsahujícím 10 % normální kozího séra (NGS). NGS roztok se nahradí 100 μΐ na jamku anti-VCAM-1 nebo ICAM-1 monoklonálních protilátek a inkubují se přes noc při 4 °C. Roztok mAb se potom odstraní a buňky se několikrát promyjí PBS a následně se inkubují sPBS obsahující 10% NGS po dobu 30 až 60 minut při teplotě místnosti. NGS roztok se odstraní a přidá se 100 μΐ křenové peroxidázy konjugované s kozí F(Ab')2 antimyší IgG protilátkou (Tágo, ředění 1 : 500 v PBS obsahující 5 % NGS) a desky se inkubují 1 hodinu při teplotě místnosti. Sekundární protilátky se potom odstraní a buňky se promyjí PBS, který se pak nahradí za 150 μΐ na jamku čerstvě připraveného a přefiltrovaného AEC roztoku (3-amino-9-ethylkarbazol, Sigma) a desky se inkubují po dobu 45 až 60 minut při teplotě místnosti. Peroxidázový substrát se odstraní a buňky se promyjí v PBS. Odečtou se hodnoty absorbance na mikrotitrační desce při 550 nm a korigují se na slepý pokus („blank“) nebo na referenční hodnotu při 690 nm.
IV. E-selektinový test
E-selektinový test se provádí za použití čerstvě izolovaného HUVEC, v podstatě tak, jak bylo popsáno pro VCAM-1 nebo ICAM-1 test, s výjimkou kratší stimulace TNF-a (6 až 8 hodin).
V. Měření cytotoxicity (úbytek buněk na podkladě barvení jadérka):
Endoteliální buňky se odbarvují náhradou PBS ze 95% ethanol po dobu 20 minut (dvakrát obměna po 10 minutách) za mikroskopického vyhodnocování. Buňky se potom propláchnou v destilované vodě (Aquadest) a monovrstva se překryje 33% roztokem Giemsa v destilované vodě na 5 minut při teplotě místnosti. Jamky se potom promyjí destilovanou vodou a suší se na vzduchu po dobu alespoň 15 minut. Pro kontrolu, zda jsou vybarvena pouze jadérka, se použije mikroskopická vyhodnocení, přičemž v podstatě není obarvena žádná cytoplazma. Hodnoty Giemsa absorbance se odečtou na čtecím zařízení pro mikrotitrační destičky při 550 nm a korigují se na hodnoty slepého pokusu (řady bez buněk) při 690 nm.
-23CZ 289311 B6
VI. Vyhodnocování dat:
AEC hodnoty pro stanovení exprese VCAM-1 nebo E-selektinu (nestimulovaná kontrola jamek) jsou v podstatě stejné jako hodnoty z grafu srovnatelné kontroly mAb a reprezentují pozadí barvení. V každé z 96 jamkových destiček se průměr hodnot stanovení odečte od průměrné AEC hodnoty pro každou cytokinem stimulovanou skupinu (EBM, kontroly s rozpouštědlem i s testovanou látkou) a získá se číslo, které reprezentuje expresi regulované ICAM-1 a vyvolané VCAM-1 nebo buněčné adhezní molekuly (CAM) E-selektinu (zde označeno jako AEC-CAM). Každá hodnota AEC-CAM se pak dělí odpovídající průměrnou hodnotou Giemsa a získá se číslo, které stanovuje relativní hladiny exprese CAM pro danou hustotu, vztaženo na počet jader (zde označeno jako poměr AEC: Giemsa).
AEC (stimulovaný) - AEC (nestimulovaný) = AEC-CAM AEC-CAM/Giemsa = AEC : Giemsa poměr
Tak „aktuální“ hodnoty CAM IC50 se stanovují srovnáním AEC:Giemsa hodnot pro testovanou látku s hodnotami stimulované kontroly (EBM, rozpouštědlo). Tyto hodnoty se potom analyzují relativně k hodnotám IC50 pro samotné Giemsa. Přesná kritéria stanoví, zda profil CAM inhibice versus cytotoxicita (Giemsa) indikuje „skutečný“ úspěch, který by měl být sledován.
C. Test HaCaT buněčného bujení
HaCaT buňky se kultivují v DMEM (Gibco # 074-02100) doplněném 2,2 g/1 NaHCOj, 0,11 g/1 pyruvátu sodného, 15 mM Hepes, 5 % plodového telecího séra (FCS), penicilinem 100 jednotek/ml, streptomycinem (100 pg/ml) a glutaminem (pro zvýšení konečné koncentrace na 4 mM). Pro test bujení se buňky oddělí trypsinizací, suspendují se v čerstvém médiu a naočkují se do 96jamkových mikrotitračních destiček při konečné hustotě 4000 buněk/0,2 ml/jamka. Po 24 hodinách (den 0) se médium nahradí za čerstvé médium obsahující odstupňované koncentrace testované sloučeniny. Po 3 dnech inkubace při 37 °C/5 % CO2 se měří rozsah buněčného bujení ve srovnání s rozpouštědlovou kontrolou kolorimetrickým testem, který měří relativní hmotu buněk použitím barviva sulforhodaminu B (Shekan a j., 1990, J. Nati. Cancer Inst., 82. 1107 až 1112). „Výchozí počet buněk“ se stanoví změřením relativní hmoty buněk v den 0. Výsledky se vyjádří jako % inhibice = 100 - % kontrolní absorbance (kde rozpouštědlová kontrola = 100 %) a reprezentuje průměr ± standardní odchylka ze tří měření. Křivka dávka-odezva se vynáší semilogaritmicky a koncentrace nutná pro polovinu maximální inhibice (IC50) se stanoví lineární interpolací. Maximální inhibice bez čisté ztráty buněk reprezentuje „výchozí počet buněk“ a je obvykle mezi 90 až 98 %.
NMR spektra (CDC13) příklad: spektrum:
(3 konformeiy 55:44:3, majoritní a minoritní konformer označen *, popřípadě p): 8,80* (d, J=10Hz, NH), 7,89* (d, J=10Hz, NH), 7,78° (d, J=10Hz, NH), 7,57° (d, J=10Hz, NH), 7,50*° (d, J=7 Hz, MeMeOTrp H-4'), 7,39*, 7,37° (2d, J=8 Hz, MeMeOTrp H-7'), 7,20*° (m, MeMeOTrp, H-6'), 7,11°, 7,06* (2s, MeMeOTrp H-2'), 7,03*° (2dd, MeMeOTrp H,5'), 6,16° (d, J=10Hz, Leu NH), 5,95* (d, J=6Hz, Leu NH), 5,30° (m, al-H), 5,10* (dd, hydroxymáselná kyselina al-H), 5,03-4,98 (m, al-H), 4,91 (dd, al-H), 4,85 (m, al-H), 4,71° (m, al-H), 4,45* (dd, al-H), 4,29* (m, al-H), 4,03*, 4,02° (2s, N-OMe), 3,87 (dd), 3,72*, 3,64° (2s, COOMe), 3,63-3,50 (m), 3,47* (q, J=7 Hz, MeAla al-H), 3,41° (s, N-Me), 3,36* (dd, MeMeOTrp β-Η), 3,23-3,17 (m), 3,20* (s, MeAla N-Me), 3,19° (s, N-Me), 2,91* (s, MeMeOTrp N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,51° (s, MeMeOTrp N-Me), 2,43-2,09 (m), 2,03-1,89 (m), 1,83-1,75 (m), 1,68-1,07 (m), 1,52* (d, J=7 Hz, MeAla β-Me), 1,48° (d, J=7 Hz,
-24CZ 289311 B6
MeAla β-Me), 1,04 (d, J=6,5 Hz), 0,98-0,83 (m), 0,53* (d, J=6,6Hz, Leu Me), 0,01* (d, J=6,6 Hz, Leu Me), -0,32 (ddd, J=3,6 Hz, J=11,1 Hz, J=14,5 Hz, Leu β-CH).
(derivát obecného vzorce IV s otevřeným řetězcem): (2 konformery 68:32, majoritní a minoritní konformer označen *, popřípadě °): 8,16, 8,12, 8,05, 8,00 (4d, NH), 7,58°, 7,55* (2d, J=8Hz, MeMeOTrp 4'-H), 7,38*° (d, MeMeOTrp H-7'), 7,22*, 7,20° (2m, MeMeOTrp H-6'), 7,15*, 7,12° (2s, MeMeOTrp H-2'), 7,07*, 7,03° (2m, MeMeOTrp H-5'), 6,57 (s, br, NH), 5,10° (dd, al-H), 5,17* (dd, hydroxymáselná kyselina al-H), 5,11*° (m, MeLeu al-H), 5,04*° (dd, al-H), 4,99* (ddd, al-H), 4,88° (ddd, al-H), 4,51° (dd), 4,53* (m, Leu al-H), 4,48° (m), 4,42* (m br, MeAla al-H), 4,05*, 4,03° (2s, N-OMe) 3,88° (q, J=Hz, MeAla al-H), 3,71°, 3,68* (2s, COOMe), 3,57*, 3,54° (2s, COOMe), 3,47* (m br, MeMeOTrp al-H), 3,27°, 3,21* (2s, NMe), 3,2 (m, MeMeOTrp p-Ha), 3,00* (s, NMe), 2,9 (m, MeMeOTrp β-ΗΒ), 2,64° (s,NMe), 2,32*, 2,28° (2s, NMe), 2,33-2,13 (m), 2,20 (m), 1,86 (m), 1,7-1,1 (m), 1,50°, 1,48* (2d, J=7Hz, MeAla β-Me), 0,97-0,93 (m), 0,90-0,76 (m).
(3 konformery 2:2:1, minoritní konformer označen *): 8,81 (d, J=10Hz, NH), 7,93 (d, J=10Hz, NH), 7,79 (d, J=9Hz, NH), 7,65 (m br, NH), 7,54 (m, MeMeOTrp H-4'), 7,38,7,37, 7,34* (3d, J=8Hz, MeMeOTrp H-7'), 7,19 (m, MeMeOTrp, H-6'), 7,08-6,98 (m, MeMeOTrp H-5'), 7,02 (s, MeMeOTrp H-2'), 6,14 (d, J=10Hz, Leu NH), 6,29* (d, J=7Hz, Leu NH), 6,07 (d, J=6Hz, Leu NH), 5,25 (m, al-H), 5,12-4,92 (al-H), 4,84 (m, al-H), 4,69 (m, al-H), 4,43 (m, al-H), 4,29 (m, al-H), 4,03*, 4,02, 4,00 (3s, N-OMe), 3,98 (m, al-H), 3,63-3,3 (m), 3,39-3,34 (s, NMe), 3,04* (s, NMe), 2,91 (s, N-Me), 2,53 (s, NMe), 2,37 (s br, NMe), 2,5-1,0 (m), 1,47,1,43,1,41* (3d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,03 (d, J=6,5Hz), 0,98-9,83 (m), 0,68*, 0,55, 0,47*, -0,02 (4d, J=6,6Hz, Leu Me), -0,32 (ddd, Leu β-CH).
(3 konformery 4:3:1, minoritní konformer označen *): 8,82 (d, J=10Hz, NH), 7,95* (d, J=9,3Hz, NH), 7,90 (d, J=9,8Hz, NH), 7,80 (d, J=9,4Hz, NH), 7,59, 7,53 (2d, J=8Hz, MeMeOTrp H-4'), 7,45-7,30 (m, MeMeOTrp H-7'), 7,23-7,15 (m, MeMeOTrp H-6'), 7,20,
7,18 (2s, MeMeOTrp H-2'), 7,11-7,03 (m, MeMeOTrp H-5'), 6,86* (q, J=5Hz, NHMe), 6,23 (d, J=9,5Hz, Leu NH), 5,95 (d, J=6,5Hz, Leu NH, q, N//Me), 5,84* (d, >8,9Hz, Leu NH), 5,55 (q, 5Hz, NHMe), 5,3-4,95 (m, al-H), 4,84 (ddd, al-H), 4,69 (ddd, al-H), 4,42 (dd, MeLeu al-H), 4,34 (ddd, Leu al-H), 4,05*, 4,03, 4,02 (3s, N-OMe), 3,98 (m, al-H), 3,63-3,52 (m, al-H), 3,47 (q, Ala al-H), 3,37, 3,35*, 3,24*, 3,22, 3,20 (5s, NMe), 3,3-3,2 (m), 3,03* 2,92 (2s, NMe), 2,85, 2,74, 2,70* (3d, J=5Hz, NH-Afe), 2,53, 2,52 (2s, NMe), 2,23-1,93 (m), 1-85-1,05 (m), 1,53, 1,47, 1,44* (3d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,03 (d, J=6,5Hz), 0,98-0,80 (m), 0,57*, 0,55, 0,38*, 0,08 (4d, J=6,6Hz, Leu Me), -0,30 (ddd, Leu β-CH).
(3 konformery 40:53:7, označené *°'): 8,81* (d, J=10Hz, C9AA NH), 7,88* (d, J=10Hz, C9AA NH), 7,78° (d, J=10Hz, NH), 7,57° (d, J=10Hz, NH), 7,52*° (2d, J=7Hz, MeMeOTrp H-4'), 7,39*, 7,37° (2d, J-8Hz, MeMeOTrp H-7'), 7,27* (s, MeMeOTrp H-2'), 7,20, 7,18 (2m, MeMeOTrp H-6'), 7,17* (s, MeMeOTrp H-2'), 7,03°, 7,01* (2m, MeMeOTrp H-5'), 6,17° (d, J=10Hz, Le MH), 5,98* (d, J=6Hz, Leu NH), 5,77' (d, J=10Hz, Leu NH), 5,31° (ddd, MeAla al-H), 5,19* (dd, hydroxymáselná kyselina al-H), 5,05-4,94 (m, al-H), 4,88-4,83 (m, al-H),
4,70-4,64 (m, al-H), 4,48* (dd, MeLeu al-H), 4,32* (m, Leu al-H), 4,03*, 4,02° (2s, N-OMe), 3,93° (dd, MeMeOTrp H-pa), 3,22 (m, MeMeOTrp H-pb), 3,20° (s, N-Me), 3,17* (s, N-Me), 2,93* (s, MeMeOTrp N-Me), 2,54* (s, MeLeu N-Me), 2,53° (s, N-Me), 2,4-2,35 (m), 2,2-1,9 (m), 1,83-1,05 (m), 1,53*, 1,50° (2d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,04 (d, J=6,5Hz, MeLeu Me), 1,00-0,77 (m), 0,57* (d, J=6,6Hz, Leu Me), 0,52', 0,34' (2d, J=6,6Hz, Leu Me), 0,9* (d, J=6,6Hz, Leu Me), -0,25 (ddd, Leu β-CH).
(2 konformery 45:55, označené *°): 8,84 (d, J=10Hz, C9AA NH), 7,87* (d, J=10Hz, C9AA NH), 7,77° (d, J=10Hz, NH), 7,57° (d, J=10Hz, NH), 7,55°, 7,52 (2d, J=7Hz, MeMeOTrp H-4'), 7,36*, 7,35° (2d, J=8Hz, MeMeOTrp H-7'), 7,36* (s, MeMeOtrp H-2'), 7,20, 7,17
-25CZ 289311 B6 (2m, MeMeOTrp H-6'), 7,03°, 7,01* (2m, MeMeOTrp H-5'), 6,17° (d, J=10Hz, Leu NH), 5,95* (d, J=6Hz, Leu NH), 5,31° (ddd, MeAla al-H), 5,24° (dd, hydroxymáselná kyselina al-H), 5,05-4,97 (m, al-H), 4,93 (dd, al-H), 4,87 (dd, al-H), 4,88-4,83 (m, al-H), 4,66-4,60 (m, al-H), 4,48* (dd, MeLeu al-H), 4,38* (ddd, Leu al-H), 4,15-4,00 (m), 4,03*, 4,02° (2s, N-OMe), 3,98° (m, al-H), 3,7-3,2 (m), 3,40° (s, N-Me), 3,20° (s, N-Me), 3,17* (s, N-Me), 3,05-2,9 (m), 2,99, 2,98 (2s, NOC-Me), 2,96 (s, 2xCON-Me), 2,92* (2,92* (s, MeMeOTrp N-Me), 2,54 (s, MeLeu N-Me a N-Me), 2,4-2,25 (m), 2,15-1,9 (m), 1,83-1,05 (m), 1,53*, 1,50° (2d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,04 (d, J=6,5Hz, MeLeu Me), 1,00-0,83 (m), 0,79°, 0,74° (2d), 0,57* (d, J=6,6Hz, Leu Me), 0,13* (d, J=6,6Hz, Leu Me),-0,25 (ddd, Leu β-CH).
(3-konformery 70:28:2, označené *0'): 8,89* (d, 10Hz, PrLeuó NH), 7,89* (d, lOhz, PrLeu2 NH), 7,77° (d, 10Hz, PrLeuó NH), 7,52° (d, 8Hz, indol H-4'), 7,50° (d, PrLeu2 NH), 7,48* (d, 8Hz, indol H-4'), 7,38* (d, 8Hz, indol H-7'), 7,37° (d, 8Hz, indol H-7'), 7,19° (dd, indol H-6'), 7,18* (dd, indol H-6'), 7,13° (s, indol H-2'), 7,02* (s, indol H-2'), 6,99° (dd, indol H-5'), 6,90 * (dd, indol H-5'), 6,18° (d br, 10Hz, Leu NH), 5,93* (d, 6Hz, Leu NH), 5,83° (d, Leu NH), 5,30° (ddd, PrLeuó a-H), 5,30* (dd, HBa a-H), 5,02* (ddd, PrLeuó a-H), 5,00° (ddd, PrLeu2 a-H), 4,89* (dd, MeTrp a-H), 4,84* (ddd, PrLeu2 a-H), 4,71° (ddd, a-H), 4,44* (dd, MeLeu aH), 4,37* (ddd, Leu a-H), 4,03*, 4,02° (2s, N-OMe), 3,63-3,52, 3,49* (q, 7Hz, MeAla a-H), 3,40° (s, N-Me), 3,38* (dd, MeTrp β-Ha), 3,26-3,20,3,23* (s, MeAla N-Me), 3,21° (s, N-Me), 2,93* (s, MeTrp N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,52° (s, N-Me), 2,45-1,75, 2,33, 2,15 (2m, aziridin), 1,56-1,07, 1,50* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,47° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,03* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,98-0,83, 0,48* (d, 6,6Hz, Leu δ’-Me), -0,13* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me), -0,48* (ddd, Leu γ-CH).
(3 konformery 45:51:4, označené *°'): 8,86* (d, 10Hz, PrLeuó NH), 7,87* (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,75° (d, 10Hz, PrLeuó NH), 7,57* (d, 8Hz, indol H-4'), 7,55° (d, PrLeu2 NH), 7,51° (d, 8Hz, indol H-4'), 7,41° (s, indol H-2'), 7,38* (d, 8Hz, indol H-7'), 7,36° (d, 8Hz, indol H7'), 7,29* (s, indol H-2'), 7,18* (dd, indol H-6'), 7,17° (dd, indol H-6'), 7,03° (dd, indol H-5'), 7,01* (dd, indol H-5'), 6,17° (d br, 10Hz, Leu NH), 5,94* (d, 6Hz, Leu NH), 5,79° (d, Leu NH), 5,30° (ddd, PrLeuó a-H), 5,27* (dd, a-H), 5,00* (ddd, prLeuó a-H), 4,98° (ddd, a-H), 4,63° (ddd, a-H), 4,47* (dd, MeLeu a-H), 4,40 (m), 4,02* (ddd, Leu a-H), 4,02, 4,01 (2s, N-OMe), 3,68,3,22,3,40° (s, N-Me), 3,20° (s, N-Me), 3,18* (s, MeAla N-Me), 2,91* (s, MeTrp N-Me), 2,55° (s, N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,35-1,05, 1,54* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,50° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,03* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,98-0,83, 0,78° (d, 6Hz, Leu δ'-Me), 0,73° (d, 6Hz, Leu δ''-Me), 0,57* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,16* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me), -0,27* (ddd, Leu γ-CH).
(3 konformery 46:51:3, označené *0'): 8,87* (d, 10Hz, PrLeuó NH), 7,87* (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,76° (d, 10Hz, PrLeuó NZ), 7,56° (d, PrLeu2 NH), 7,55* (d, 8Hz, indol H-4'), 7,52° (d, 8Hz, indol H-4'), 7,37 (d, 8Hz, indol H), 7,36 (d, 8Hz, indol H), 7,36° (s, indol H-2'), 7,22* (s, indol H-2'), 7,20* (dd, indol H-6'), 7,18° (dd, indol H-6'), 7,03° (dd, indol H-5'), 7,00* (dd, indol H-5'), 6,16° (d, 10Hz, Leu NH), 5,94* (D, 6Hz, Leu NH), 5,78' (d, Leu NH), 5,31° (ddd, PrLeuó a-H), 5,27* (dd, a-H), 5,06-4,80,4,65 (ddd, a-H), 4,47* (dd, MeLeu a-H), 4,33 (m), 4,03, 4,01, (2s, N-OMe), 4,00 (ddd, a-H), 3,75-3,20, 3,40 (s, N-Me), 3,20 (s, N-Me), 3,18* (s, MeAla N-Me), 2,91* (s, MeTrp N-Me), 2,53 (s, N-Me), 2,53° (s, MeLeu N-Me), 2,45-1,07, 1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,49° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,03* (d, 6,5Hz, MeLue d-Me), 0,98-0,83, 0,79 (d, 6Hz, Me), 0,74 (d, 6Hz, Me), 0,55* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,07* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me), -0,36* (ddd, Leu β-ΟΗ).
(4 konformery 27:33:17:33, označené *0' ): 8,9* (d, 10Hz, PrLeuó NH), 8,82' (d, 10Hz, PrLeuó NH), 7,9* (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,86' (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,76° (d, 10Hz, PrLeuó NH), 7,75 (d, 10Hz, PrLeuó NZ), 7,24* (s, indol), 7,03* (dd, indol), 6,17 (d Br, 10Hz, Leu
-26CZ 289311 B6
NH), 6,17° (d br, 10Hz, Leu NH), 6,03' (d, 6Hz, Leu NH), 5,98* (d, 6Hz, Le NH), 4,02 (s), 4,02° (s), 4,02* (s), 4,02' (s), 3,40 (s, N-Me), 3,40 (s, N-Me), 3,20 (s, N-Me), 3,20 (s, N-Me), 3,17 (s, N-Me), 2,97 (s, N-Me), 2,94 (s, N-Me), 2,94 (s, N-Me), 2,93 (s, N-Me), 2,91 (s, N-Me), 2,56 (s, N-Me), 2,56 (s, N-Me), 2,53' (s, MeLeu N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,53' (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,50° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,50 (d, 7Hz, MeAla βΜε), 1,03' (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 1,03* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,78° (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,77 (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,72 (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me), 0,72° (d, 6,6Hz, Leu 5-Me), 0,61' (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,55* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,21' (d, 6,6Hz, Leu 5-Me), 0,12* (d, 6,6Hz, Leu 5-Me), -0,17' (ddd, Leu γ-CH), -0,31* (ddd, Leu γ-CH).
(2 konformery 55:45, majoritní a minoritní konformer označen *, popřípadě °): 8,80* (d, J=10Hz, NH), 7,88* (d, J=10Hz, NH), 7,77° (d, J=10Hz, NH), 7,57° (d, J=10Hz, NH), 7,52*, 7,51° (2d, J=7Hz, MeMeOTrp H-4'), 7,39*, 7,37° (2d, J=8Hz, MeMeOTrp H-7'), 7,20*° (m, MeMeOTrp H-6'), 7,16°, 7,09* (2s, MeMeOtrp H-2'), 7,03*° (2dd, MeMeOTrp H-5'), 6,17° (d, J=10Hz, Leu NH), 5,97* (d, J=6Hz, Leu NH), 5,31° (m, MeAla al-H), 5,11-4,96 (m, al-H), 4,92* (dd, MeMeOtrp al-H), 4,27* (dd, Leu al-H), 4,03*, 4,02° (2s, N-OMe), 3,92 (dd),
3-65-3,15 (m), 3,47* (q, J=7Hz, MeAla al-H), 3,41° (s, N-Me), 3,21* (s, MeAla NMe), 3,20° (s, N-Me), 2,92* (s, MeMeOTrp N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,51° (s, N-Me), 2,35-2,75 (m), 1,7-1,05 (m), 1,53* (d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,49° (d, J=7Hz, MeALa β-Me), 1,28*, 1,25*, 1,23°, 1,18° (4d, J=6Hz, COOCHMe2), 1,04 (d, J=6,5Hz, MeLeu Me), 0,98-0,83 (m), 0,55* (d, >6,6Hz, Leu Me), 0,05* (d, J=6,6Hz, Leu Me), -0,31 (ddd, Leu β-CH).
(3 konformery 55:43:2, označené *°'): 8,82* (dd, J=10Hz, C9AA NH), 7,85* (d, J=10Hz, C,AA NH), 7,78° (d, J=10Hz, NH), 7,58° (d, J=10Hz, NH), 7,52*, 7,51° (2d, J=7Hz, MeMeOTrp H-4'), 7,39*, 7,37° (2d, J=8Hz, MeMeOTrp H-7'), 7,22*, 7,21° (2m, MeMeOTrp H-6'), 7,14°, 7,08* (2s, MeMeOTrp H-2'), 7,03*° (2dd, MeMeOTrp H-'), 6,17° (d, J=10Hz, Leu NH), 5,95* (d, J=6Hz, Leu NH), 5,78 (d, J=10Hz, LeuNH), 5,31° (ddd, MeAla al-H), 5,12* (dd, hydroxymáselná kyselina al-H), 5,05-4,98 (m, al-H), 4,91* (dd, MeMeOTrp al-H), 4,86 (ddd, C9AA al-H), 4,73-4,68 (m, Leu al-H), 4,47* (dd, MeLeu al-H), 4,32-4,26 (m, Leu al-H), 4,25 dq, J=llHz, J=7hz, COOCHr-), 4,15-4,07 (m, COOCZfy-), 4,04*, 4,03° (2s, N-OMe), 3,84° (m, al-H), 3,64-3,50 (m), 3,47* (q, J=7Hz, MeAla al-H), 3,41° (s, N-Me), 3,34° (dd, MeMeOTrp Η-βΒ), 3,22 (m, MeMeOTrp Η-βδ), 3,20* (s, MeAla NMe), 3,19° (s, N-Me), 2,93* (s, MeMeOTrp N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,52° (s, N-Me), 2,4-2,1 (m), 2,05-1,9 (m), 1,83-1,76 (m), 1,7-1,07 (m), 1,53*, 1,49° (2d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,30,1,25 (2t, J=7Hz, COOCH2C/73), 1,04 (d, J=6,5Hz, MeLeu Me), 1,00-0,84 (m), 0,55* (d, J=6,6Hz, Leu Me), 0,03* (d, J=6,6Hz, Leu Me), -0,32 (ddd, Leu β-CH).
(3 konformery 57:41:2, označené *°'): 8,82* (d, J=10Hz, C9AA NH), 7,90* (d, J=10Hz, C9AA NH), 7,78° (d, J=10Hz, NH), 7,58° (d, J=10Hz, NH), 7,52*° (2d, J=7Hz, MeMeOTrp H-4'), 7,39* 7,38° (2d, J=8Hz, MeMeOTrp H-7'), 7,22*, 7,21° (2m, MeMeOTrp H-6'), 7,14°, 7,08* (2s, MeMeOTrp H-2'), 7,03°, 7,02* (2m, MeMeOTrp H-5'), 6,17° (d, J=10Hz, Leu NH), 5,98* (d, J=6Hz, Leu NH), 5,82' (d, J=10Hz, Leu NH), 5,31° (ddd, MeAla al-H), 5,12* (dd, hydroxymáselná kyselina al-H), 5,31° (ddd, MeAla al-H), 4,91* (dd, MeMeOTrp al-H), 4,86* (ddd, C9AA al-H), 4,73-4,68 (m, Leu al-H), 4,47* (dd, MeLeu al-H), 4,28* (m, Leu al-H), 4,2-3,95 (m, COOC/6), 4,03*, 4,02° (2s, N-OMe), 3,90° (m, al-H), 3,64-3,42 (m), 3,47* (q, J=7Hz, MeAla al-H), 3,41° (s, N-Me), 3,34° (dd, MeMeOtrp H-pa), 3,22 (m, MeMeOTrp H-pb), 3,20* (s, MeAla NMe), 3,19° (s, N-Me), 2,93* (s, MeMeOTrp N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,52° (s, N-Me), 2,4-2,1 (m), 2,03-1,9 (m), 1,83-1,76 (m), 1,72-1,58 (m, COOCH2CZ6CH3), 1,55-1,07 (m), 1,53*, 1,49° (2d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,04 (d, J=6,5Hz, MeLeu Me), 1,00-0,84 (m), 0,54* (d, J=6,6Hz, Leu Me), 0,02* (d, J=6,6Hz, Leu Me), -0,34 (ddd, Leu PCH).
-27CZ 289311 B6 (2 konformery 70:30, označené *, popřípadě °): 8,92*, 7,87*, 7,75°, 7,58° (4d, J=10Hz, NH), 7,49* (d, J=8Hz, MeMeOTrp H-4'), 7,37* (d, J=8,Hz, MeMeOTrp H-7'), 7,20* (dt, MeMeOTrp H-6'), 7,18°, 7,03* (2s, MeMeOTrp H-2'), 6,20° (d, J=10Hz, Leu NH), 5,96* (d, J=7Hz, Leu NH), 5,33* (m, hydroxymáselná kyselina al-H), 5,02 (m, al-H), 4,90* (dd, al-H), 4,83* (ddd, al-H), 4,79* (dd, al-H), 4,70° (m, al-H), 4,39* (dd, al-H), 4,38° (m, al-H), 4,03* (s, N-OMe), 3,92° (m), 3,63-3,53 (m), 3,44-3,40 (m), 3,39°, 3,20° (2s, NMe), 3,32-3,18 (m), 3,17* (s, MeAla NMe), 2,94* (s, MeMeOTrp NMe), 2,53* (s, MeLeuNMe), 2,52° (s, NMe), 2,94* (s, MeMeOTrp NMe), 2,53* (s, MeLeu NMe), 2,52° (s, NMe), 2,5-2,3 (m), 2,1-1,1 (m), 2,17*, 2,11° (2s, COMe), 1,51*, 1,48° (2d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,03* (d, J=6,5Hz), 0,98-0,83 (m), 0,52*, -0,11* (d, J=6,6Hz, Leu Me), -0,39* (ddd, Leu β-ΟΗ).
(3 konformery 45:40:15, označené*0'): 8,78° (d, J=9,9Hz, NH), 7,83* (d, J=9,7Hz, NH), 7,76' (d, NH), 7,59' (d, J=7,8Hz, MeMeOTrp H-4'), 7,57 (d, J=9,5Hz, NH), 7,56, 7,53 (2d, J=8Hz, MeMeOTrp H-4'), 7,46' (s, MeMeOTrp H-2'), 7,42*, 7,39°, 7,34' (3d, J=8,2Hz, MeMeOTrp H-7'), 7,24*, 7,22°, 7,18' (3ζ MeMeOTrp H-6'), 7,11*, 7,08', 7,06° (3t, MeMeOTrp H-5'), 7,04*°, 7,03° (2s, MeMeOTrp H-2'), 6,25° (d, J=9,5Hz, Leu NH), 6,03* (d, J=7Hz, Leu NH), 5,99' (d, J=8,8Hz, Leu NH), 5,28* (m, al-H), 4,97 (dd, al-H), 4,88 (dd, al-H), 4,84 (m, al-H), 4,78-4,70 (m, al-H), 4,41 (dd, MeLeu al-H), 4,13 (ddd, Leu al-H), 4,04, 4,02 (2s, N-OMe), 3,78 (m, al-H), 3,65-3,35 (m), 3,42° , 3,32', 3,22*, 3,20° (4s, NMe), 3,17-3,08 (m), 3,03', 2,92', 2,90*, 2,52*, 2,51° (5s, NMe), 3,17-3,08 (m), 3,03', 2,92', 2,90*, 2,52*, 2,51° (5s, NMe), 2,01-1,1 (m), 1,53, 1,49, 1,40' (3d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,04 (d, J=6,5Hz), 0,98-0,83 (m), 0,72', 0,60*, 0,56', 0,03* (4d, J=6,6hz, Leu Me), -0,16 (ddd, Leu β-ΟΗ).
(3 konformery 73:20:7, označené *°'): 8,54° (d, J=10Hz, NH), 8,38' (s br, MeTrp N'-H), 8,17° (2d, br, J=2Hz, MeTrp N'-H), 8,13*, 8,03°, 8,01' (3d, J=9,7Hz, NH), 7,78* (d, J=7,7Hz, MeTrp H-4'), 7,74', 7,70', 7,63°, 7,63° (4d), 7,46*, 7,44°, 7,40' (3d, J=8Hz MeTrp H-7'), 7,27* (dt, MeTrp H-6'), 7,20*, 7,17° (2dt, MeTrp H-5'), 7,09°, 7,03* (2d, J=2Hz, MeTrp H-2'), 6,33° (d, J=10Hz, Leu NH), 6,17* (d, J=7,4Hz, Leu NH), 5,97' (d, J=9Hz, Leu NH), 5,38° (m, al-H), 5,27* (dd, hydroxymáselná kyselina al-H), 5,21° (dd, al-H), 5,12* (ddd, al-H), 5,07* (dd, al-H), 4,96* (ddd, al-H, 4,87 (m), 4,55* (dd, MeLeu al-H), 4,29* (ddd, Leu al-H), 3,85-3,25 (m), 3,76* (q, J=7Hz, MeAla al-H), 3,49°, 3,36' (2s, NMe), 3,13* (s, MeAla NMe), 3,29°, 3,13' (2s,NMe), 3,02* (s, MeTrp NMe), 2,62° (s, NMe), 2,60* (s, MeLeu NMe), 2,38-1,15 (m), 1,62*, 1,56°, 1,51' (3d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,13* (d, J=6,5Hz, MeLeu), 1,07-0,93 (m), 0,73', 0,63*, 0,58', 0,02* (4d, J=6,6Hz, Leu Me), -0,28* (ddd, Leu β-ΟΗ).
(3 konformery 67:29:4, označené *0'): 9,52* (t, J=l,5Hz, CHO), 9,41° (t, J=lHz, CHO), 9,05' (m, CHO), 8,73* (d, J=10Hz, C9AA NH), 7,86* (d, J=10Hz, C9AA NH), 7,77° (d, J=10Hz, NH), 7,60° (d, J=10Hz, NH), 7,47*° (2d, J=7Hz, MeMeOTrp H-4'), 7,38*° (2d, J=8Hz, MeMeOTrp H-7'), 7,20*° (2t, J=8Hz, MeMeOTrp H-6'), 7,15°, 7,04* (2s, MeMeOTrp H-2'), 7,03° (m, MeMeOTrp H-5'), 7,00* (dd, MeMeOTrp H-5), 6,22° (d, J=10Hz, Leu NH), 6,02* (d, J=6Hz, Leu NH), 5,87' (d, J=10Hz, Leu NH), 5,29° (ddd, MeAla al-H), 5,17* (dd, hydroxymáselná kyselina al-H), 5,03-4,93 (m, al-H), 4,91* (dd, MeMeOTrp al-H), 4,84* (ddd, C9AAA al-H), 4,79-4,64° (m, Leu al-H), 4,43* (dd, MeLeu al-H), 4,35* (ddd, Leu al-H), 4,04', 4,03*, 4,02° (3s, N-OMe), 3,81° (m, al-H), 3,63 (dd), 3,57-3,50 (m), 3,48-3,42 (m), 3,43* (q, J=7Hz, MeAla al-H), 3,38° (s, N-Me), 3,30-3,12 (m), 3,20° (s, N-Me), 3,15* (s, MeAla NMe), 2,93* (s, MeMeOTrp N-Me), 2,58° (s, N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,25 (m, C/6-CHO), 2,15-1,9 (m), 1,85-1,74 (m), 1,65-1,08 (m), 1,48*, 1,45° (2d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,04* (d, J=6,5Hz, MeLeu Me), 0,98-0,83 (m), 0,67', 0,58*, 0,52', 0,01* (4d, J=6,6Hz, Leu Me), -0,20* (ddd, Leu β-ΟΗ).
(2 konformery 1:1): 8,77 (d, J=10Hz, C9AA NH), 7,79 (d, J=10Hz, 0<>AA NH), 7,73 (d, J=10Hz, NH), 7,65 (d, J=10Hz, NH), 7,44, 7,44, 7,42, 7,39 (4d, MeMeOTrp H-4' a H-7'),
-28CZ 289311 B6
7,25, 7,22, (2t, MeMeOTrp H-6'), 7,13-7,03 (m, MeMeOTrp H-5'), 7,02, 6,98 (2s, MeMeOTrp H-2'), 6,19 (d, J=10Hz, Leu NH), 6,00 (d, J=6Hz, Leu NH), 5,80-5,53 (m, olefin-H), 5,31 (ddd, MeAla al-H), 5,08-4,67 (m, al-H, olefin-H), 4,47 (dd, MeLeu al-H), 4,15-3,98 (m), 4,05, 4,02 (2s, N-OMe), 3,7-3,0 (m), 3,44, 3,21, 3,20, 2,92, 2,52, 2,44 (6s, N-Me), 2,15-1,90 (m), 1,90-1,08 (m), 1,55, 1,50 (2d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,05 (d, J=6,5Hz, MeLeu Me), 1,0-0,8 (m), 0,60,0,06 (2d, J=6,6Hz, Leu Me), -0,20 (ddd, Leu β-CH).
(3 konformery 44:53:3, označené *0'): 8,81* (d, 10Hz, PrLeu6 NH), 7,78, 7,73, 7,67 (3d, 10Hz, NH), 7,43, 7,42, (2d, 8Hz, indol H-4'), 7,37 (d, 8Hz, indol H-7'), 7,28-7,00, 7,02, 6,97 (2s, indol H-2'), 6,21° (d, 10Hz, Leu NH), 5,97* (d, 5Hz, Leu NH), 5,75' (d, Leu NH), 5,50-4,65, 4,47* (dd, MeLeu a-H), 4,05 (ddd, a-H), 4,04 (s, OMe), 4,02 (s, OMe), 3,65-3,10, 3,44° (s, MeAla N-Me), 3,22 (s, MeAla NMe), 3,19 (s, N-Me), 2,93* (s, MeTrp N-Me), 2,52, 2,39 (2s, N-Me), 2,15-0,82, 1,54*, 1,50° (2d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,04* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,57* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,48' (d, Leu δ'-Me), 0,26' (d, Leu δ''-Me), -0,04* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me).
(3 konformery 47:48:5, označené *0'): 8,63, 7,87, 7,77, 7,63 (4d, 10Hz, PrLeu NH), 7,49* (d, 7Hz, indol H-4'), 7,48° (d, 7Hz, indol H-4'), 7,43* (d, 8Hz, indol H-7'), 7,41° (d, 8Hz, indol H-7'), 7,27* (dd, indol H-6'), 7,23° (dd, indol H-6'), 7,13* (dd, indol H-5'), 7,08° (dd, indol H-5'), 7,04° (s, indol H-2'), 7,02* (s, indol H-2'), 6,98' (s, indol H-2'), 6,2° (d, 10Hz, Leu NH), 6,01* (d, 7Hz, Leu NH), 5,79' (d, 9Hz, Leu NH), 5,30° (ddd, PrLeu6 a-H), 5,07* (dd, Hba a-H), 5,03* (ddd, PrLeu6 a-H), 4,86* (ddd, PrLeu a-H), 4,79 (dd, MeTrp a-H), 4,47* (dd, MeLeu a-H), 4,18* (ddd, Leu a-H), 4,06 (s, N-OMe), 4,05' (s, N-OMe), 4,03 (s, N-OMe),
3,71-3,50, 3,42 (s, N-Me), 3,23-3,05, 3,20 (s, N-Me), 3,18 (s, N-Me), 2,92 (s, N-Me), 2,52 (s,N-Me), 2,51 (s, N-Me), 2,03-1,08, 1,54* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,50° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,05* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,98-0,84, 0,63* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,53' (d, 7Hz, Leu δ'-Me), 0,34' (d, 7Hz, Leu δ''-Me), 0,11 * (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me), -0,13* (ddd, Leuγ-CH).
(3 konformery 40:40:20, označené *0'): 8,50* (d, 10Hz, PrLeu6 NH), 8,20 (m), 7,98* (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,57* (d, 8Hz, indol H-4'), 7,53-7,35, 7,25-7,18, 7,23* (s, indol H-2'), 7,13-7,06, 7,05° (s, indol H-2'), 6,69 (d), 6,29 (d br), 6,22 (d, br), 6,14° (d, 7Hz, Leu NH), 6,07* (d, 9Hz, Leu NH), 5,5° (ddd, PrLeu6 a-H), 5,26-4,63 (m, a-H), 4,36 (m, MeLeu a-H), 4,18* (ddd, Leu a-H), 4,04 (s, OMe), 4,03' (s, OMe), 4,02 (s, OMe), 3,68-2,78, 3,34 (s, N-Me), 3,19 (s, N-Me), 3,12 (s, N-Me), 3,03 (s, N-Me), 2,91 (s, N-Me), 2,53 (s, N-Me), 2,10-1,05, 1,03-0,78, 0,76 (d), 0,71 (d, 6,5Hz, Leu g-Me), 0,60 (d, 6,6Hz, Leu g-Me), 0,08 (d, 6,6Hz, Leu g-Me), -0,10 (ddd, Lez γ-CH).
(3 konformery 43:47:5, označené *°'): 8,68* (d, 10Hz, PrLeu6 NH), 7,87* (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,80° (d, 10Hz, NH), 7,63° (d, 10Hz, NH), 7,55-7,37 (m, indol), 7,27-7,10 (m, indol), 7,08° (s, indol H-2'), 7,03* (s, indol H-2'), 6,58 (t, 8Hz, C=C,), 6,23 (t, 8Hz, C=C), 6,18° (d, 6,7Hz, Leu NH), 6,03* (d, 10Hz, Leu NH), 5,80' (d, Leu NH), 5,31° (ddd, PrLeu6 a-H), 5,08-4,91 (a-H), 4,86* (ddd, PrLeu a-H), 4,77-4,68 M, a-H), 4,46* (dd, MeLeu a-H), 4,14* (ddd, Leu a-H), 4,05° (s, OMe), 4,03* (s, OMe), 4,02' (s, OMe), 3,71° (q, 7Hz, MeAla a-J), 3,60* (q, 7Hz, MeAla a-H), 3,53-3,00, 3,44° (s, MeAla N-Me), 3,23 (s, N-Me), 3,20 (s,N-Me), 2,93* (s, MeTrp N-Me), 2,52 (s, N-Me), 2,44 (s, N-Me), 2,20-0,83, 1,56* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,51° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,05* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,62* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,57' (d, Leu δ'-Me), 0,40' (d, Leu δ''-Me), 0,10* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me), -0,17* (ddd, Leu γ-CH).
(3 konformery 51:45:4, označené *°'): 8,68* (d, 10Hz, PrLeu6 NH), 7,87* (d, 10Hz, PrLeu NH), 7,81° (d, 10Hz, PrLeu6 NH), 7,63° (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,53 (d, 8Hz, indol H-4'), 7,51 (d, 8Hz, indol H-4'), 7,43 (d, 8Hz, indol H-7'), 7,40 (d, 8Hz, indol H-7'), 7,26 (dd, indol H-6'),
-29CZ 289311 B6
7,23 (dd, indol H-6'), 7,13 (dd, indol H-5'), 7,07° (s, indol H-2'), 7,07 (dd, indol H-5'), 7,03* (s, indol H-2'), 6,21° (d, 10Hz, Leu NH), 6,05* (d, 6Hz, Leu NH), 5,79' (d, 10Hz, Leu NH), 5,32° (ddd, PrLeu6 a-H), 5,14* (dd, Hba a-H), 5,03* (ddd, PrLeu6 a-H), 4,87* (ddd, PrLeu2 a-H), 4,83* (dd, MeTrp a-H), 4,77° (ddd, Leu a-H), 4,51* (dd, MeLeu a-J), 4,13* (ddd, Leu a-H), 4,061 (s, OMe), 4,03* (s, OMe), 3,68 (m), 3,57* (q, 7Hz, MeAla a-H), 3,44° (s, MeAla N-Me), 3,36* (dd, MeTrp β-Ha), 3,23 (dd, MeTrp β-Hb), 3,22 (s, N-Me), 3,17 (s, N-Me), 3,14 (dd), 2,96 (m, CCH), 2,93* (s, MeTrp N-Me), 2,53 (s, N-Me), 2,49 (s, N-Me), 2,25-1,97, 1,86-1,78, 1,55* (d, 7H, MeAla β-Me), 1,52° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,50-1,09, 1,06* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 1,00-0,85, 0,63* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,58' (d, Leu δ'-Me), 0,38' (d, Leu δ''-Me), 0,07* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me), -0,11* (ddd, Leu γ-CH).
(směs E/Z izomerů 6:4 každý se 3 konformery, uvedeny pouze charakteristické signály): 8,61, 8,48,7,93,7,84, 7,82,7,74 (d, 10Hz, PrLeu NH), 7,52 (d, 8Hz, indol), 7,08 (s, indol H-2'), 6,44,6,22 (2dt, C/f=CHCN), 6,36-6,26 (m), 6,13,6,07, 5,87 (3d, Leu NH), 5,33-5,28 (m), 5,24, 5,20 (2dm, CH=C#CN), 5,06-4,97 (m), 4,92 (2d), 4,87-4,75 (m), 4,49,4,46 (2dd, MeLeu a-H),
4,28,4,18 (2ddd, Leu a-H), 4,07,4,06,4,05, 4,03 (4s, N-OMe), 3,88, 3,82 (2q, 7Hz, MeAla aH), 3,43, 2,40, 3,23, 3,21, 3,19, 3,12, 2,93, 2,55, 2,53, 2,52, 2,51 (lis, N-Me), 1,54-1,49 (5d, MeAla δ-Me), 1,06, 1,04 (2d, 7Hz, MeLeu d-Me), 0,74, 0,65, 0,52, 0,26, 0,08 (5d, Leu g-Me), -0,04 (ddd, Leu γ-CH).
(3 konformery 51:46:3, označené *0'): 8,71* (d, 10Hz, PrLeu6 NH), 7,90* (d, 10Hz, PrLeu NH), 7,76° (d, 10Hz, PrLeu6 NH), 7,6° (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,52* (d, 8Hz, indol H-4'), 7,481 (d, 8Hz, indol H-4'), 7,42 (d, 8Hz, indol), 7,40 (d, 8Hz, indol), 7,26* (dd, indol H-6’), 7,13 (dd, indol H-5'), 7,07° (dd, indol H-5'), 7,03*, (s, indol H-2'), 7,02° (s, indol H-2'), 6,16° (d, br, 10Hz, Leu NH), 6,01* (d, 6Hz, Leu NH), 5,77' (d, Leu NH), 5,31 (ddd, a-H), 5,05-4,97, 4,86 (ddd, a-H), 4,82 (dd, a-H), 4,74 (m), 4,46* (dd, MeLeu a-H), 4,17* (ddd, Leu a-H), 4,05* (s, N-OMe), 4,03° (s, N-OMe), 3,68 (m), 3,57 (m), 3,47* (m, CH2C1), 3,43 (s, N-Me), 3,28* (dd, MeTrp β-Ha), 3,23* (s, MeAla N-Me), 3,21 (s, N-Me), 3,20* (dd, MeTrp β-Hb), 2,92* (s, MeTrp N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,49 (s, N-Me), 2,23° (dd, indol H-6'), 2,05-1,1, 1,54* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,50° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,05* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,98-0,85, 0,57* (d, 6,6Hz, leu δ'-Me), 0,52' (d, Leu δ'-Me), 0,28' (d, Leu δ''-Me), 0,06* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me), -0,32* (ddd, Leu γ-CH).
(3-konformery 37:59:4, označené *°'): 8,73* (d, 10Hz, PrLeu6 NH), 7,8* (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,73° (d, 10Hz, PrLeu6 NH), 7,63° (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,49° (d, 8Hz, indol H-4'), 7,47* (d, 8Hz, indol H-4'), 7,42* (d, 8Hz, indol H-7'), 7,38° (d, 8Hz, indol H-7'), 7,25 (dd, indol), 7,22° (dd, indol H-6'), 7,12* (dd, indol H-5'), 7,06° (dd, indol H-5'), 7,04 (s, indol H-2'), 7,03 (s, indol H-2'), 6,22° (d br, 10Hz, Leu NH), 6,00* (d, 6Hz, Leu NH), 5,78' (d, Leu NH), 5,31° (ddd, PrLeu6 a-H), 5,07 (dd, a-H), 5,05-4,90,4,87 (ddd, a-H), 4,79 (dd, a-H), 4,72 (m), 4,49* (dd, MeLeu a-H), 4,11* (ddd, Leu a-H), 4,05* (s, N-OMe), 4,03° (s, N-OMe), 3,75-3,50, 3,43 (s, N-Me), 3,38-3,13, 3,28 (s, OMe), 3,28 (s, OMe), 3,23 (s, N-Me), 3,21° (s, N-Me), 2,92* (s, MeTrp N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,48° (s, N-Me), 2,00-1,08,1,55* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,50° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,05* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,98-0,85,0,60* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,05* (d, 6,6Hz, Leu 6-Me), -0,18* (ddd, Leu γ-CH).
(2 konformery 50:50, označené *°): 8,70* (d, 10Hz, PrLeu 6 NH), 7,80* (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,71° (d, 10Hz, PrLeu6 NH), 7,69° (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,47-7,35,7,24 (dd, indol), 7,21 (dd, indol), 7,04 (dd, indol), 7,01 (dd, indol), 7,01 (s, indol H-2'), 6,97 (s, indol H-2'), 6,25° (d br, 10Hz, Leu NH), 6,00* (d, 6Hz, Leu NH), 5,30° (ddd, PrLeu6 a-H), 4,04* (s), 4,02° (s),
3,72-3,02, 3,41 (s, N-Me), 3,20 (s, N-Me), 3,20* (s, MeAla N-Me), 2,91* (s, MeTrp N-Me), 2,53 (s, N-Me), 2,45 (s, N-Me), 2,07-0,82,1,55* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,50° (d, 7Hz, MeAla
-30CZ 289311 B6 β- Me), 1,04* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,6* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,41 (m, cyPr), -0,03* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me), -0,24* (ddd, Leu γ-CH).
(3 konformery 63:35:2, označené *°'): 8,78° (d, 10Hz, PrLe6 NH), 7,93*, 7,77* (2d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,47* (d, 8Hz, indol H-7'), 7,43* (d, 8Hz, indol H-4'), 7,40-7,23, 7,17°, 7,13* (2dd, indol H-6'), 7,04, 7,03 (2s, indol H-2'), 6,93° (dd, indol H-5'), 6,97, 6,93 (2s, CH-Ph2), 6,74* (dd, indol H-5'), 6,14° (d, 10Hz, Leu NH), 5,92* (d, 6Hz, Leu NH), 5,78' (d, Leu NH), 5,27° (ddd, PrLeu6 a-H), 5,12* (dd, Hba a-H), 4,98* (ddd, PrLeu6 a-H), 4,96* (dd, MeTrp a-H), 4,85* (ddd, PrLeu2 a-H), 4,70° (ddd, a-H), 4,47* (dd, MeLeu a-H), 4,18* (ddd, Leu a-H), 4,00*, 3,97° (2s, OMe), 3,57° (dd, MeTrp β-Ha), 3,53° (dd, MeTrp β-Hb), 3,37* (dd, MeTrp β-Ja), 3,27* (dd, MeTrp β-Hb), 3,20, 3,19, 2,93, 2,83 (4s, N-Me), 2,66 (q, 7Hz), 2,55-2,33, 2,52 (s, N-Me), 2,46 (s, N-Me), 2,27-1,92, 1,80 (m), 1,68-1,05, 1,35°, 1,28* (2d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,03* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,96-0,83, 0,53' (d, Leu δ'-Me), 0,49* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,32' (d, leu δ''-Me), -0,12* (d, 6,6Hz, leu 6-Me), -0,49* (ddd, Leu γ-CH).
(směs konformerů, uvedeny pouze vybrané signály): 7,13, 7,03 (2s, indol H-2'), 4,56, 4,40 (2m, a-H), 4,03 (s, N-OMe), 3,42,3,23,3,07,2,94,2,53 (5s, N-Me), 0,57,0,53 (2d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,17,0,03 (2d, 6,6Hz, Leu δ''-Me), -0,03, -0,27 (2ddd, leu β-CH).
(3 konformery 78:16:6, označené *°'): 8,45* (d, J=10Hz, PrLeu6 NH), 8,04* (d, J=10Hz, PrLeu2 NH), 7,83° (d, J=10Hz, NH), 7,68*, 7,53° (2d, J=7Hz, indol H-4'), 7,30* (d, J=8Hz, indol H-7'), 7,23* (m, indol H-6'), 7,10* (dd, indol H-5'), 6,87°, 6,79* (2s, indol H-2'), 6,28° (d, J=10Hz, Leu NH), 6,07* (d, J=6,Hz, Leu NH), 5,83' (d, J=10Hz, Leu NH), 5,31° (ddd, PrLeu a-H), 5,18* (dd, Hba, a-H), 5,13° (dd, Hba a-H), 5,05* (ddd, PrLeu 6 a-H), 4,98° (ddd, Leu a-H), 4,93* (dd, MeTrp a-H), 4,84* (ddd, PrLeu2 a-H), 4,78° (ddd, PrLeu2 a-H), 4,47* (dd, MeLeu a-H), 4,13* (ddd, Leu a-H), 3,8-3,5 (m), 3,72*° (2s, MeTrp Nl'-Me), 3,69* (q, J=7Hz,, MeAla a-H), 3,40° (s, MeAla N-Me), 3,28* (s, MeAla N-Me), 3,20 (dd, MeTrp β-Hb), 3,12* (dd, MeTrp β-Ha), 2,93* (s, MeTrp N-Me), 2,53° (s, N-Me), 2,52* (s, MeLeu N-Me), 3,21° (s, N-Me), 2,25-2,08 (m, Hba y-CH2, β-Ha), 1,92* (m, Hba, β-Hb), 1,83-1,75 (m), 1,7-1,07 (m), 1,53*, 1,48° (2d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,04 (d, J=6,5Hz, MeLeu δ-Me), 0,97-0,84 (m), 0,53* (d, J=6,6Hz, Leu Me), 0,28' (d), -0,17* (d, J=6,6Hz, Leu Me), -0,53* (ddd, Leu γ-CH).
(3 konformery 80:14:6, označené *°'): 8,48* (d, 10Hz, PrLeu6 NH), 8,06* (d, 10Hz, PrLeu 2, NH), 7,94° (d, 10Hz, PrLeu NH), 7,68* (d, 8Hz, indol H-4'), 7,54° (d, indol), 7,33* (d, 8Hz, indol H-7'), 7,31° (d, 8Hz, indol), 7,22* (dd, indol H-6'), 7,l*°(dd, indol H-5'), 7,53° (d, PrLeu NH), 6,93° (d, indol H-2'), 6,84* (s, indol H-2'), 6,26° (d, br, Leu NH), 6,05* (d, 7,5Hz, Leu NH), 5,84' (d, Leu NH), 5,31° (ddd, PrLeuó a-H), 5,18* (dd, Hba a-H), 5,13° (dd, Hba a-H), 5,06* (ddd, PrLeuó a-H), 4,99° (ddd, Leu a-H), 4,93* (dd, MeTrp a-H), 4,87* (ddd, PrLeu2 a-H), 4,8° (ddd, PrLeu2 a-H), 4,47* (dd, MeLeu a-H), 4,16* (ddd, Leu a-J), 4,1* (m, N-CH2), 3,78-3,57, 3,69* (q, 7Hz, MeAla a-H), 3,47-2,90, 3,42° (s, MeAla N-Me), 3,32* (dd, MeTrp β-Ha), 3,3* (s, MeAla N-Me), 3,23* (dd, MeTrp β-Hb), 3,21° (s, N-Me), 3,06' (s, N-Me), 2,93* (s, MeTrp N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,52° (s, N-Me), 2,32-2,10, 1,93* (m, Hba γ-CHb), 1,83-1,08, 1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,48° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,04* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,97-0,84,0,52* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,26' (d, Leu δ''-Me), -0,17* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me), -0,55* (ddd, Leu γ-CH).
(3 konformery 71:24:5, označené *°'): 8,50* (d, 10Hz, PrLeuó NH), 8,06* (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,94° (d, 10Hz, PrLeu NH), 7,77° (d, 8Hz, indol H-4'), 7,72* (d, 8Hz, indol H-4'), 7,53° (d, 10Hz, PrLeu NH), 7,40-7,05, 6,92° (s, indol H-2'), 6,88* (s, indol H-2'), 6,23° (d, 9,4Hz, Leu NH), 6,09* (d, 7,4Hz, Leu NH), 5,87' (d, Leu NH), 5,32° (ddd, PrLeuó a-H), 5,23* (AB,
-31CZ 289311 B6
N1'-CH2), 5,20* (AB, N1'-CH2), 5,17* (dd, Hba a-H), 5,14° (dd, Hba a-H), 5,04* (ddd, PrLeuó a-H), 4,99° (ddd, PrLeu2 a-H), 4,96* (dd, MeTrp a-H), 4,87* (ddd, PrLeu2 a-H), 4,78° (ddd, Leu a-H), 4,47*° (dd, MeLeu a-H), 4,21* (ddd, Leu a-H), 3,76° (q, 7Hz, MeAla a-H), 3,73-3,65, 3,67* (q, 7Hz, MeAla a-H), 3,58° (dd, MeLeu a-H), 3,50-3,37, 3,42° (s, MeAla N-Me), 3,33* (dd, MeTrp β-Ha), 3,27* (s, MeAla N-Me), 3,23° (s, N-Me), 3,23* (dd, MeTrp β-Hb), 2,92* (s, MeTrp N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,52° (s, N-Me), 2,28-1,08,1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,49° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,06* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,98-0,82, 0,50' (d, Leu δ'-Me), 0,45* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,28' (d, Leu δ''-Me), -0,1 l*(d, 6,6Hz, Leu δ''-Me),-0,47* (ddd, Leu γ-CH).
(3 konformery 1:1:1): 8,62, 8,43, 8,07, 7,94, 7,87, 7,42 (6d, J=10Hz, NH), 7,12 (d, J=7Hz, indol arom. H), 7,08-6,99 (m, indolin arom. H), 6,72, 6,69 (2dd, indolin arom. H), 6,66-6,63 (m, indolin arom. H), 6,58 (d, J=8Hz, indolin arom. H), 6,29 (d, J=8Hz, Leu NH), 6,15 (m, br, Leu NH), 5,88 (d, J=8Hz, Leu NH), 5,28-4,98 (m, a-H), 4,93 (ddd, a-H), 4,74 (ddd, a-H), 4,65 (m, a-H), 4,54 (dd, a-H), 4,43 (dd, a-H), 3,80-3,66 (m), 3,55-3,0 (m), 3,46, 3,35, 3,31, 3,24, 3,22, 3,12, 3,00, 2,82, 2,57 (9s, N-Me), 2,55-1,1 (m), 1,52, 1,48, 1,43 (3d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,13 (d, J=7Hz), 1,03-0,83 (m), 0,78,0,76,0,73 (3d, J=6,5Hz).
(3 konformery 73:23:4, označené *°'): 8,53* (d, J=10Hz, PrLeu NH), 8,06* (d, J=10Hz, PrLeu' NH), 7,95° (d, J=10Hz, NH, 7,67*, 7,52° (2d, J=7Hz, indol H-4'), 7,55° (d, J=10Hz, NH), 7,33*, 7,31° (2d, J=8Hz, indol H-7'), 7,19*, 7,17° (2dd, indol H-6'), 7,08*, 7,04° (2dd, indol H-5'), 6,98', 6,88°, 6,80* (3s, indol H-2'), 6,23° (d, J=9,3Hz, Leu NH), 6,05* (d, J=7,5Hz, Leu NH), 5,84' (d, Leu NH), 5,33° (ddd, PrLeu a-H, 5,18* (dd, Hba a-J), 5,14° (dd, Hba a-H), 5,05* (ddd, PrLeu a-H), 4,98° (ddd, Leu a-H), 4,93* (dd, indol a-H), 4,87* (ddd, PrLeu’ a-H), 4,81° (ddd, Leu a-H), 4,47* (dd, MeLeu a-H), 4,22* (ddd, Leu a-H), 3,86-3,67 (m), 3,83* (s, t-Bu-Cf/r-N), 3,69* (q, J=7Hz, MeAla a-H), 3,5-3,2 (m), 3,43° (s, MeAla N-Me), 3,30* (s, MeAla N-Me), 3,22° (s, N-Me), 2,93* (s, MeMeTrp, N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,53° (s, N-Me), 2,25 (m, Hba q-Cff2), 2,18 (m, Hba β-Ha), 2,0-1,08 (m), 1,54*, 1,49° (2d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,05 (d, J=6,5Hz, MeLeu Me), 0,97-0,84 (m), 0,52* (d, J=6,6Hz, Leu Me), 0,28' (d), -0,06* (d J=6,6Hz, Leu Me), -0,49* (ddd, Leu γ-CH).
(3 konformery 78:19:3, označené *°'): 8,52* (d, 10Hz, PrLeuó NH), 8,06* (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,94° (d, 10Hz, PrLeu NH), 7,68* (d, 8Hz, indol H-4'), 7,53° (d, 8Hz, indol H-4'), 7,52° (d, 10Hz, PrLeu NH), 7,36* (d, 8Hz, indol H-7'), 7,33° (d, 8Hz, indol H-7'), 7,2* (dd, indol H6'), 7,17° (dd, indol H-6'), 7,09* (dd, indol H-5'), 7,05° (dd, indol H-5'), 7,02° (s, indol H-2'), 6,91* (s, indol H-2'), 6,23° (d, 9,5Hz, Leu NH), 6,03* (d, 7,4Hz, Leu NH), 5,87' (d, Leu NH), 5,32° (ddd, PrLeuó a-H), 5,18* (dd, Hba a-H), 5,14° (dd, Hba a-H), 5,05* (ddd, PrLeuó a-H), 4,98° (ddd, PrLeu2 a-H), 4,93* (dd, MeTrp a-H), 4,87* (ddd, PrLeu2 a-H), 4,81° (ddd, Leu a-H), 4,60 (m, N-CH), 4,46* (dd, MeLeu a-H), 4,16* (ddd, Leu a-H), 3,75° (q, 7Hz, MeAla a-H), 3,70 (m), 3,69* (q, 7Hz, MeAla a-H), 3,57° (dd, MeLeu a-H), 3,45 (m), 3,42° (s, MeAla N-Me), 3,32* (dd, MeTrp β-Ha), 3,31* (s, MeAla N-Me), 3,23* (dd, MeTrp β-Hb), 3,21° (s,N-Me), 2,93* (s, MeTrp N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,50° (s, N-Me), 2,28 (AB-XY),
2,18 (AB-XY, Hba g-CH2), 2,13* (m, Hba γ-CHa), 1,93* (m, Hba γ-CHb), 1,85-1,08, 1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,47 (m, N-CHA/e2), 1,04* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,98-0,83, 0,52' (d, Leu δ'-Me), 0,51* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,34' (d, Leu 6-Me), -0,2* (d, 6,6Hz, Leu δ -Me), -0,60* (ddd, Leu γ-CH).
Indol A (3 konformery 46:27:27, označené *°'): 8,62* (d, J=10Hz, PrLeu NH), 8,13° (d, J=10Hz, NH), 8,02° (d, J=10Hz, NH), 7,92° (d, J=10Hz, NH), 7,86* (d, J=10Hz, PrLeu' NH), 7,40° (d, J=10Hz, NH), 7,23°, 7,16*, 7,09° (3d, J=7,4Hz, indolin arom. H), 7,05°, 7,02*, 7,02° (3dd, indolin arom. H), 6,76°, 6,72* 6,71° (3dd, indolin arom. H), 6,64°, 6,62°, 6,58* (3d,J=7,7Hz, indolin arom. H), 6,32° (d, J=8Hz, Leu NH), 6,10° (m br, Leu NH), 5,94*
-32CZ 289311 B6 (d, J=9Hz, Leu NH), 5,28-4,73 (m), 4,60° (dd, a-H), 4,13* (dd, a-H), 3,75-2,85 (m), 3,45*, 3,30°, 3,33*, 3,23°, 3,20, 3,02*, 2,81°, 2,79°, 2,57° (9s, N-Me), 2,45-0,83 (m), 1,52°, 1,46°, 1,42* (3d, J=7Hz, MeAla β-Me).
Indolin B (3 konformery 1:1:1): 8,62, 8,43, 8,07, 7,94, 7,87, 7,42 (6d, J=10Hz, NH), 7,12 (d, J=7,4Hz, indolin arom. H), 7,08-6,99 (m, indolin arom. H), 6,72,6,69 (2dd, indolin arom. H), 6,66-6,63 (m, indolin arom. H), 6,58 (d, J=8Hz, indolin arom. H), 6,29 (d, J=8Hz, Leu NH), 6,15 (m, br, Leu NH), 5,88 (d, J=8Hz, Leu NH), 5,28-4,98 (m, a-H), 4,93 (ddd, a-H), 4,74 (ddd, a-H), 4,65 (m, a-H), 4,54 (dd, a-H), 4,43 (dd, a-H), 3,80-3,66 (m), 3,55-3,0 (m), 3,46, 3,35, 3,31, 3,24, 3,22, 3,12, 3,00, 2,82, 2,57 (9s, N-Me), 2,55-1,1 (m), 1,52, 1,48, 1,43 (3d, J=7Hz, MeAla β-Me), 1,13 (d, J=7Hz), 1,03-0,83 (m), 0,78, 0,76,0,73 (3d, J=6,5Hz).
(3 konformery 76:18:6, označené *°'): 8,49* (d, 10Hz, PrLeuó NH), 8,05* (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,94° (d, 10Hz, PrLeuó NH), 7,67* (d, 8Hz, Indol H-4'), 7,53° (d, 8Hz, indol H-4'), 7,52° (d, 10Hz, PrLeu NH), 7,4* (d, 8Hz, indol H-7'), 7,38° (d, 8Hz, indol H-7'), 7,23* (d, 8Hz, indol H-7'), 7,19° (dd, indol H-6'), 7,11* (dd, indol H-5'), 7,07° (dd, indol H-5'), 7,05° (dd, indol H-2'), 7,01* (dd, indol H-2'), 6,22° (d, r, Leu NH), 6,05* (d, 7,5Hz, leu NH), 5,84' (d, Leu NH), 5,31° (ddd, PrLeuó a-H), 5,19* (dd, Hba a-H), 5,16° (dd, Hba a-H), 5,04* (ddd, PrLeuó a-H), 5,00° (ddd, PrLeu2 a-H), 4,94* (dd, MeTrp a-H), 4,87* (ddd, PrLeu2 a-H), 4,81° (ddd, Leu a-H), 4,67' (ddd, Leu a-H), 4,45* (dd, MeLeu a-H), 4,18* (ddd, Leu a-H), 4,14 (s, OPr), 3,80-3,55, 3,67* (q, 7Hz, MeAla a-H), 3,50-3,40, 3,42° (s, N-Me), 3,29* (dd, MeTrp β-Ba), 3,27* (s, MeAla N-Me), 3,21° (s, N-Me), 3,18* (dd, MeTrp β-Hb), 3,04' (s, N-Me), 2,93* (s, MeTrp N-Me), 2,55° (s, N-Me), 2,53* (s, MeLeu N-Me), 2,30-1,90, 1,80 (m, OPr), 1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,48° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,08° (t, OPr), 1,07 (t, OPr), 1,05* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,98-0,85, 0,59' (d, Leu δ'-Me), 0,57* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,37' (d, leu δ''-Me), -0,07* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me).
(3 konformery 73:21:6, označené *°'): 8,49* (d, 10Hz, PrLeuó NH), 8,05* (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,94° (d, 10Hz, PrLeuó NH), 7,67* (d, 8Hz, indol H-4'), 7,53 (d, 8Hz, indol H-4'), 7,52° (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,48 (d, 8Hz, indol H-7'), 7,38° (d, 8Hz, indol H-7'), 7,23* (dd, indol H6'), 7,19° (dd, indol H-6'), 7,11* (dd, indol H-5'), 7,07° (dd, indol H-5'), 7,05° (s, indol H-2'), 7,01* (s, indol H-2'), 6,22° (d, 9,4Hz, Leu NH), 6,05* (d, 7,3Hz, Leu NH), 5,86' (d, Leu NH), 5,31° (ddd, PrLeuó Hba a-H), 5,19* (dd, Hba a-H), 5,16° (dd, Hba a-H), 5,03* (ddd, PrLeuó Hba a-H) 5° (ddd, PrLeu2 a-H), 4,94* (dd, MeTrp a-H), 4,87* (ddd, PrLeu2 a-H), 4,81° (ddd, Leu, a-H), 4,65' (ddd, Leu a-H), 4,46* (dd, MeLeu a-H), 4,26* (q, OEt, 4,26° (q, OEt), 4,19* (ddd, Leu a-H), 3,80-3,56, 3,67* (q, 7Hz, MeAla a-H), 3,45-3,33, 3,41° (s, MeAla N-Me), 3,29* (dd, MeTrp β-Ha), 3,27* (s, MeAla N-Me), 3,21° (s, N-Me), 3,19* (dd, MeTrp β-Hb), 3,04' (s, N-Me), 2,93* (s, MeTrp N-Me), 2,57° (s, N-Me), 2,52* (s, MeLeu N-Me), 2,32-1,08, 1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,48° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,40° (t, OEt), 1,40* (t, OEt), 1,05* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,98-0,84, 0,60' (d, Leu δ'-Me), 0,57* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,37' (d, Leu δ''-Me), -0,07* (d, 6,6Hz, Leu δ''-Me), -0,36* (ddd, Leu γ-CH).
(3 konformery 63:32:5, označené *0'): 8,45* (d, 10Hz, PrLeuó NH), 8,06* (d, 10Hz, PrLeu2 NH), 7,97° (d, 10Hz, PrLeuó NH), 7,90' (d, 10Hz, PrLeuó NH), 7,63* (d, 8Hz, indol H-4'), 7,56° (d, 10Hz, PrLeu NH), 7,45° (d, 8Hz, indol H-4'), 7,4* (d, 8Hz, indol H-7'), 7,38° (d, 8Hz, indol H-7'), 7,23* (dd, indol H-6'), 7,22° (dd, indol H-6'), 7,13* (dd, indol H-5'), 7,08° (dd, indol H-5'), 6,2° (d, 10Hz, Leu NH), 6,07* (d, 7,5Hz, Leu NH), 5,77' (d, 8,5Hz, Leu NH), 5,32° (ddd, PrLeuó a-H), 5,26' (dd, Hba a-H), 5,2* (dd, Hba a-H), 5,16° (dd, Hba a-H), 5,03* (ddd, PrLeuó a-H), 4,97* (dd, MeTrp a-H), 4,87* (ddd, PrLeu2 a-H), 4,67° (ddd, a-H), 4,46* (dd, MeLeu a-H), 4,13* (ddd, Leu a-H), 4,09* (s, N-OMe), 4,04' (s, N-OMe), 4,03° (s, N-OMe), 3,74° (q, 7Hz, MeAla a-H), 3,71* (q, 7Hz, MeAla a-H), 3,70-3,60, 3,54-3,50, 3,47° (s, MeAla N-Me), 3,28-3,17, 3,25* (s, MeLeu N-Me), 2,42° (s, N-Me), 2,40-2,14, 1,97
-33CZ 289311 B6 (m), 1,79 (m), 1,65-1,08, 1,53* (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,5° (d, 7Hz, MeAla β-Me), 1,04* (d, 6,5Hz, MeLeu d-Me), 0,98-0,83, 0,62' (d, Leu δ'-Me), 0,57* (d, 6,6Hz, Leu δ'-Me), 0,37' (d, Leu δ''-Me), -0,09* (d, 6,6Hz, Leu 5-Me), -0,35* (ddd, Leu γ-CH).
(3 konformery 44:30:26, označené *0'): 8,85 (d, CSNH2), 8,60 (d, PrLeu6 NH), 8,17 (d, CSNH2), 8,03, 8,00 (2d, NH), 7,88 (m, CSNH2), 7,6-7,1, 6,28* (d, 10Hz, Leu NH), 6,07° (d, 7Hz, Leu NH), 5,87' (d, 9Hz, Leu NH), 6,26* (ddd, PrLeu2 a-H), 5,22 (dd, Hba a-H), 5,15-4,95, 5,08* (dd, Hba a-H), 4,83° (ddd, PrLeu2 a-H), 4,50* (ddd, Leu a-H), 4,37* (dd, MeTrp a-H), 4,25° (ddd, Leu a-H), 4,09, 4,05, 4,03* (3s, OMe), 3,89 (m, a-H), 3,65*, 3,63', 3,52 (3q, 7Hz, MeAla a-H), 3,57 (m), 3,17, 3,16, 3,15, 3,22, 3,20, 3,05, 2,92, 2,55, 2,53 (9s, NMe), 1,8-1,1, 1,05 (d, 7Hz), 0,99-0,82, 0,60°, 0,55', 0,23', 0,17° (4d, 7Hz, Leu δ-Me), -0,15°, -0,17' (ddd, Leu γ-CH).
Claims (7)
1. Cyklopeptolid obecného vzorce I (I) ve kterém
A je zbytek kyseliny máselné substituované v poloze a atomem -O- a popřípadě substituované v poloze γ substituentem R$, který znamená skupinu CN nebo COOR2, kde R2 znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,
B je zbytek oktanové kyseliny substituované v poloze a skupinou -NH- a v poloze γ methylovou skupinou,
Ri je atom vodíku nebo methylová skupina,
C je zbytek tryptofanu obecného vzorce VI
CO(ví )z
-34CZ 289311 B6 kde Rg znamená atom vodíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzylovou skupinu, R9 znamená atom vodíku nebo atom halogenu, R10 znamená atom vodíku nebo methylovou skupinu a----znamená jednoduchou nebo dvojnou vazbu,
X je zbytek karboxylové kyseliny se 2 až 14 atomy uhlíku substituované v poloze a skupinou -NH-, a
Y je zbytek karboxylové kyseliny se 2 až 10 atomy uhlíku substituované v poloze a skupinou 10 -NH- nebo -N(CH3)-, ve volné formě nebo ve formě soli.
2. Cyklopeptolid podle nároku 1 vzorce II nebo ΠΙ (III)
-35CZ 289311 B6
3. Cyklopeptid obecného vzorce I podle nároku 1, ve kterém
A představuje skupinu -OCH-(CH2)2-COO-n-propyl,
I co
I
B znamená skupinu -NH-CH-CH2-CH(CH3)(CH2)3CH3,
I co
I
Ri představuje methylovou skupinu,
CO—
C znamená skupinu
ÓcHg
X představuje skupinu
Y představuje skupinu
-NH-CH-COI ch2ch-ch3
I (CH2)3-CH3
CH3
I
-N-CH-CO-.
I ch3
4. Plísňový kmen F92-4471/08 uložený jako NRRL 21123 nebo jeho mutant.
5. Způsob přípravy cyklopeptolídu obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se tí m, že se kultivuje plísňový kmen rodu Bartalinia F92/4471/08 (NRRL 21123) nebo jeho mutant v živném médiu a cyklopeptid se z něho izoluje.
6. Terapeutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství cyklopeptolídu obecného vzorce I podle nároku 1.
7 výkresů
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9415168A GB9415168D0 (en) | 1994-07-27 | 1994-07-27 | Organic compounds |
| GBGB9504332.9A GB9504332D0 (en) | 1995-03-03 | 1995-03-03 | Organic compounds |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ22197A3 CZ22197A3 (en) | 1997-05-14 |
| CZ289311B6 true CZ289311B6 (cs) | 2001-12-12 |
Family
ID=26305345
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ1997221A CZ289311B6 (cs) | 1994-07-27 | 1995-07-26 | Cyklopeptolidy, způsoby jejich připravy a terapeutický prostředek, který je obsahuje |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6013627A (cs) |
| EP (1) | EP0775158B1 (cs) |
| JP (1) | JP3425763B2 (cs) |
| KR (1) | KR100378974B1 (cs) |
| CN (1) | CN1116304C (cs) |
| AT (1) | ATE187461T1 (cs) |
| AU (1) | AU702332B2 (cs) |
| BR (1) | BR9508342A (cs) |
| CA (1) | CA2192786C (cs) |
| CY (1) | CY2225B1 (cs) |
| CZ (1) | CZ289311B6 (cs) |
| DE (1) | DE69513837T2 (cs) |
| DK (1) | DK0775158T3 (cs) |
| ES (1) | ES2142490T3 (cs) |
| FI (1) | FI970279A0 (cs) |
| GR (1) | GR3032698T3 (cs) |
| HK (1) | HK1014011A1 (cs) |
| HU (1) | HUT77388A (cs) |
| MX (1) | MX9606494A (cs) |
| NO (1) | NO970340D0 (cs) |
| NZ (1) | NZ291168A (cs) |
| PL (1) | PL181990B1 (cs) |
| PT (1) | PT775158E (cs) |
| RU (1) | RU2155772C2 (cs) |
| SK (1) | SK11797A3 (cs) |
| WO (1) | WO1996003430A1 (cs) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6187757B1 (en) * | 1995-06-07 | 2001-02-13 | Ariad Pharmaceuticals, Inc. | Regulation of biological events using novel compounds |
| US6011136A (en) * | 1995-11-21 | 2000-01-04 | Novartis Ag | Cyclopeptolides |
| WO1999014082A1 (en) | 1996-09-18 | 1999-03-25 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Adhesively-bonded inflatable restraint and method of making |
| US6365619B1 (en) | 1999-07-22 | 2002-04-02 | Novartis Ag | Treatment of arteriosclerosis |
| US7067526B1 (en) | 1999-08-24 | 2006-06-27 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | 28-epirapalogs |
| ES2219388T3 (es) * | 1999-08-24 | 2004-12-01 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | 28-epi-rapalogos. |
| AU2002223649A1 (en) * | 2000-10-27 | 2002-05-06 | Novartis Ag | Vegh inhibitors and their use |
| GB0028367D0 (en) * | 2000-11-21 | 2001-01-03 | Celltech Chiroscience Ltd | Chemical compounds |
| GB0101598D0 (en) * | 2001-01-22 | 2001-03-07 | Novartis Ag | Organic compounds |
| JP2006516548A (ja) | 2002-12-30 | 2006-07-06 | アンジオテック インターナショナル アクツィエン ゲゼルシャフト | 迅速ゲル化ポリマー組成物からの薬物送達法 |
| US8921642B2 (en) | 2008-01-11 | 2014-12-30 | Massachusetts Eye And Ear Infirmary | Conditional-stop dimerizable caspase transgenic animals |
| CN105283553B (zh) | 2013-06-11 | 2021-06-25 | 克隆技术实验室有限公司 | 蛋白质富集的微泡及其制备和使用方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4443367A (en) * | 1982-04-08 | 1984-04-17 | Monsanto Company | Peptide and peptolide substrates for mammalian collagenase |
| US4425428A (en) * | 1982-04-08 | 1984-01-10 | Monsanto Company | Novel peptide and peptolide substrates for mammalian collagenase |
| DE3851268T2 (de) * | 1987-06-19 | 1995-01-26 | Sandoz Ag | Zyklische Peptolide. |
| DE3832059A1 (de) * | 1988-09-21 | 1990-03-29 | Howaldtswerke Deutsche Werft | Tauchtiefengesteuerte ausblasventil-einrichtung |
| DE3832362A1 (de) * | 1988-09-23 | 1990-03-29 | Sandoz Ag | Neue cyclopeptolide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
-
1995
- 1995-07-26 NZ NZ291168A patent/NZ291168A/en unknown
- 1995-07-26 WO PCT/EP1995/002966 patent/WO1996003430A1/en active IP Right Grant
- 1995-07-26 JP JP50548596A patent/JP3425763B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 AU AU32221/95A patent/AU702332B2/en not_active Ceased
- 1995-07-26 CZ CZ1997221A patent/CZ289311B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 KR KR1019970700504A patent/KR100378974B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 EP EP95928473A patent/EP0775158B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-07-26 DE DE69513837T patent/DE69513837T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 MX MX9606494A patent/MX9606494A/es not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 DK DK95928473T patent/DK0775158T3/da active
- 1995-07-26 AT AT95928473T patent/ATE187461T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 PL PL95317349A patent/PL181990B1/pl unknown
- 1995-07-26 CA CA002192786A patent/CA2192786C/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 CN CN95194370A patent/CN1116304C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 PT PT95928473T patent/PT775158E/pt unknown
- 1995-07-26 BR BR9508342A patent/BR9508342A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-07-26 ES ES95928473T patent/ES2142490T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-07-26 RU RU97102700/04A patent/RU2155772C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-07-26 SK SK117-97A patent/SK11797A3/sk unknown
- 1995-07-26 US US08/776,440 patent/US6013627A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-26 HU HU9700226A patent/HUT77388A/hu unknown
-
1997
- 1997-01-23 FI FI970279A patent/FI970279A0/fi unknown
- 1997-01-27 NO NO970340A patent/NO970340D0/no unknown
-
1998
- 1998-12-23 HK HK98115157A patent/HK1014011A1/xx unknown
-
2000
- 2000-02-18 GR GR20000400396T patent/GR3032698T3/el unknown
-
2001
- 2001-06-08 CY CY0100011A patent/CY2225B1/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1996003430A1 (en) | 1996-02-08 |
| MX9606494A (es) | 1997-03-29 |
| BR9508342A (pt) | 1997-10-21 |
| CA2192786C (en) | 2009-06-16 |
| EP0775158B1 (en) | 1999-12-08 |
| RU2155772C2 (ru) | 2000-09-10 |
| ES2142490T3 (es) | 2000-04-16 |
| CY2225B1 (en) | 2003-04-18 |
| NO970340L (no) | 1997-01-27 |
| AU3222195A (en) | 1996-02-22 |
| JPH10504540A (ja) | 1998-05-06 |
| DE69513837T2 (de) | 2000-05-18 |
| SK11797A3 (en) | 1997-07-09 |
| DK0775158T3 (da) | 2000-05-22 |
| FI970279A (fi) | 1997-01-23 |
| CZ22197A3 (en) | 1997-05-14 |
| ATE187461T1 (de) | 1999-12-15 |
| AU702332B2 (en) | 1999-02-18 |
| HUT77388A (hu) | 1998-04-28 |
| NZ291168A (en) | 1998-06-26 |
| CN1154705A (zh) | 1997-07-16 |
| NO970340D0 (no) | 1997-01-27 |
| KR100378974B1 (ko) | 2003-10-08 |
| JP3425763B2 (ja) | 2003-07-14 |
| PT775158E (pt) | 2000-05-31 |
| PL181990B1 (pl) | 2001-10-31 |
| PL317349A1 (en) | 1997-04-01 |
| EP0775158A1 (en) | 1997-05-28 |
| GR3032698T3 (en) | 2000-06-30 |
| CA2192786A1 (en) | 1996-02-08 |
| CN1116304C (zh) | 2003-07-30 |
| DE69513837D1 (de) | 2000-01-13 |
| US6013627A (en) | 2000-01-11 |
| HK1014011A1 (en) | 1999-09-17 |
| FI970279A0 (fi) | 1997-01-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2641256B2 (ja) | 環状ペプトリド類 | |
| CZ289311B6 (cs) | Cyklopeptolidy, způsoby jejich připravy a terapeutický prostředek, který je obsahuje | |
| US5643869A (en) | Pipecolic acid-containing peptolides, their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| KR920006881B1 (ko) | 프리파스타틴(plipastatin)의 제조방법 | |
| DK170892B1 (da) | 14-Oxa-1,11-diazatetracyclo[7.4.1.02,7.010,12]tetra-deca-2,4,6-trien-forbindelser, fremgangsmåde til fremstilling heraf, farmaceutiske præparater der indeholder forbindelserne samt anvendelse af forbindelserne til fremstilling af lægemidler og en kultur af mikroorganismen Streptomyces sandaensis | |
| US5789602A (en) | Physiologically active substances PF1092A, PF1092B and PF1092C, process for the production thereof, and contraceptives and anticancer drugs containing the same as active ingredients | |
| AU621857B2 (en) | Novel compounds, process for the preparation thereof and uses thereof | |
| CA2237157C (en) | Cyclopeptolide inhibitors of adhesion molecules | |
| US7803600B2 (en) | Micromonospora species that produces a bafilomycin-like metabolite | |
| CA2224025A1 (en) | Novel antibiotic, feglymycin, processes for its preparation and its use | |
| WO2004012756A1 (en) | New cytotoxic cyclopeptide and its use for the treatment of cancer | |
| JPH1017527A (ja) | 抗菌性物質ｂｅ−３９５８９類及びその製造法 | |
| WO2004087938A1 (ja) | 新規生理活性物質ｐｆ１２７０ａ、ｂおよびｃ物質 | |
| HU195839B (en) | Process for producing cyclic peptide derivatives marked a-21978 c |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20030726 |