RU2095409C1 - Способ изготовления вакцины против сибирской язвы животных - Google Patents
Способ изготовления вакцины против сибирской язвы животных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2095409C1 RU2095409C1 RU95111037A RU95111037A RU2095409C1 RU 2095409 C1 RU2095409 C1 RU 2095409C1 RU 95111037 A RU95111037 A RU 95111037A RU 95111037 A RU95111037 A RU 95111037A RU 2095409 C1 RU2095409 C1 RU 2095409C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sulfate
- spores
- strain
- spore
- vniivvim
- Prior art date
Links
Abstract
Использование: биотехнология, микробиология, вакцина против сибирской язвы животных. Сущность изобретения: культивирование вакцинного штамма 5-ВНИИВВиМ осуществляют в жидкой споруляционно-ростовой среде, содержащей дрожжевой экстракт, пептон, калий фосфорнокислый двузамещенный, кальций хлористый, цинк сернокислый, медь сернокислую, железо сернокислое, аммоний сернокислый и воду (pH 7,2±0,2). При этом культивирование штамма осуществляют в реакторе в течение 23 - 25 ч, из них первые 17 - 19 ч при аэрации, поддерживая скорость растворения кислорода в среде 5,5±0,2 ммоль на 1 л среды в час. Для концентрирования спор используют натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, которую вносят в суспензию до концентрации 0,2 - 0,3%, а отстаивание осуществляют при температуре 0 - 25oC в течение 23 - 25 ч. 2 з.п. ф-лы.
Description
Изобретение относится к области микробиологии, в частности к биотехнологии вакцинных препаратов, и может быть использовано при изготовлении вакцины против сибирской язвы.
Для изготовления вакцины против сибирской язвы животных используют способ культивирования бактерий вида B.anthracis в бутылях-четвертях на плотной питательной споруляционной среде, содержащей в качестве основного компонента гидролизат кормовых дрожжей [1]
Недостатком данного способа является длительность процесса культивирования штамма B. anthracis (72 82 ч), а также трудоемкость, так как наработка спорового материала производится в бутылях-четвертях.
Недостатком данного способа является длительность процесса культивирования штамма B. anthracis (72 82 ч), а также трудоемкость, так как наработка спорового материала производится в бутылях-четвертях.
Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является способ культивирования штамма 55-ВНИИВВиМ в жидкой питательной среде с использованием в качестве источника азота кислотного гидролизата говяжьего мяса. Способ позволяет за 48 ч получить споровый материал, содержащий 100 300 млн. жизнеспособных спор штамма 55-ВНИИВВиМ [2]
Основные недостатки этого способа заключаются в небольшом выходе спорового материала с 1 см3 питательной среды (100 300 млн. спор в 1 см3), в использовании в среде культивирования мяса, ценного продукта питания человека, а также в длительности процесса выращивания культуры и получения спор (2 сут).
Основные недостатки этого способа заключаются в небольшом выходе спорового материала с 1 см3 питательной среды (100 300 млн. спор в 1 см3), в использовании в среде культивирования мяса, ценного продукта питания человека, а также в длительности процесса выращивания культуры и получения спор (2 сут).
Известен способ концентрирования бактериальных спор отстаиванием с использованием вспомогательного вещества полиэтиленимина (авт.св. N 1792969, кл. C 12 N 1/02, авторы Бакулов И.А и др.). Он позволяет проводить концентрирование бактериальных спор в суспензии за 4 5 сут.
Основные недостатки этого способа заключается в длительности процесса концентрирования (4 5 сут), а также в образовании прочных конгломератов спор при отстаивании, которые трудно ресуспендировать. Наличие конгломератов спор в вакцине недопустимо.
Целью настоящего изобретения является увеличение выхода количества спор с единицы питательной среды, сокращение трудоемкости способа, материальных затрат и времени на получение и концентрирование спорового материала для изготовления вакцины.
Цель достигается тем, что в предлагаемом способе изготовления вакцины против сибирской язвы культивирование осуществляют в реакторе с использованием разработанной нами и апробированной при производстве вакцины жидкой споруляционно-ростовой среды следующего состава (мас.):
Дрожжевой экстракт сухой 0,2 0,3
Пептон ферментативный сухой 0,2 0,3
Калий фосфорнокислый двузамещенный 0,04 0,06
Кальций хлористый 0,004 0,006
Магний сернокислый 0,03 0,05
Цинк сернокислый 0,0005 0,0015
Медь сернокислая 0,0005 0,0015
Железо сернокислое 0,00005 0,00015
Аммоний сернокислый 0,15 0,25
Вода деминерализованная (pH 7,2±0,2) Остальное
Кроме того, используют иные условия культивирования. В первые 18 ч культуру штамма 55-ВНИИВВиМ аэрируют воздухом путем барботирования, уровень аэрации составляет 5,3 5,7 ммолей растворенного кислорода на 1 л среды в 1 ч, при этом 95 100% выросших бактериальных клеток образуют споры. Затем аэрирование прекращают и культуру выдерживают 6 ч до завершения спорообразования и полного лизиса вегетативного материала.
Дрожжевой экстракт сухой 0,2 0,3
Пептон ферментативный сухой 0,2 0,3
Калий фосфорнокислый двузамещенный 0,04 0,06
Кальций хлористый 0,004 0,006
Магний сернокислый 0,03 0,05
Цинк сернокислый 0,0005 0,0015
Медь сернокислая 0,0005 0,0015
Железо сернокислое 0,00005 0,00015
Аммоний сернокислый 0,15 0,25
Вода деминерализованная (pH 7,2±0,2) Остальное
Кроме того, используют иные условия культивирования. В первые 18 ч культуру штамма 55-ВНИИВВиМ аэрируют воздухом путем барботирования, уровень аэрации составляет 5,3 5,7 ммолей растворенного кислорода на 1 л среды в 1 ч, при этом 95 100% выросших бактериальных клеток образуют споры. Затем аэрирование прекращают и культуру выдерживают 6 ч до завершения спорообразования и полного лизиса вегетативного материала.
Сокращение времени на концентрирование спорового материала достигается использованием в качестве вспомогательного вещества натриевой соли: карбоксиметилцеллюлозы (Na КМЦ) в оптимальной концентрации 0,2 0,3% Кроме того, осаждение спор осуществляют непосредственно в реакторе при температуре 0 25oC в течение 23 25 ч.
Способ культивирования разработан на 5-литровом ферментере "Бромма" (фирма ЛКБ Швеция) и воспроизведен в 250-литровом реакторе. Указанный способ может быть осуществлен в сосудах для культивирования различного объема. Для этого необходимо определить массообменные по кислороду характеристики используемых сосудов. Это можно выполнить с помощью сульфитного метода.
Пример 1. Определение массообмена по кислороду в 250-литровом реакторе, выращивание культуры штамма 55-ВНИИВВиМ и получение спор.
В 250-литровом реакторе, содержащем 160 л дистиллированной воды, по усовершенствованному сульфитному методу определяют скорость растворения кислорода (ммолей O2 в час) при подаче воздуха через барботер в реакторе в количестве 2,5 дм3/л воды в мин или 40 дм3/160 л воды в мин (1-е измерение); 5 дм3/л воды в мин или 80 дм3/160 л в мин (2-е измерение) и 7,5 дм3/л воды в мин или 120 дм3/160 л воды в мин (3-е измерение).
Полученные числовые значения трех измерений используют для построения графика, отражающего зависимость уровня аэрации (ммолей O2/л в час) от скорости подачи воздуха в реактор (дм3/л в мин).
Выращивание культуры штамма 55-ВНИИВВиМ и получение спор.
В реакторе (250 л) приготавливают 160 л споруляционно-ростовой среды по прописи (см. выше). Реактивы растворяют в той же последовательности, в которой они написаны. Устанавливают pH среды 7,2±0,2 добавлением 25%-ного раствора гидроокиси калия или натрия. Среду стерилизуют при 134oC в течение 1 ч и охлаждают до 30 35oC.
В реактор с питательной средой заливают через пробоотборник посевной материал, споровую суспензию штамма 55-ВНИИВВиМ, в количестве 1,5 - 3,0•1012 жизнеспособных спор, что составляет 1 2•107 спор на см3 среды. Весь посевной материал должен содержаться в объеме 2 5 л.
Устанавливают температуру инкубирования 37oC, в засеянную питательную среду подают сжатый воздух через барботер. Скорость подачи воздуха определяют по графику массообмена. Она должна обеспечивать уровень аэрации 5,5 ммолей O2/л в час. Культивируют 18 ч. Следующие 6 ч инкубируют без аэрации.
Культура вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ, выращенная в этих условиях, состоит из зрелых жизнеспособных спор, количество которых в 1 см3 составляет 350 500 млн.
Повышение уровня аэрации выше 5,7 ммолей O2/л в час отрицательно влияет на рост и спорообразование культуры штамма 55-ВНИИВВиМ: "урожай" спор с 1 см3 питательной среды снижается на 30 40% спорообразование происходит лишь у 70 80% выросших вегетативных клеток.
Снижение уровня аэрации ниже 5,3 ммолей O2/л в час вызывает резкое уменьшение процента спорообразования. Спорулируют лишь 50 60% вегетативных клеток. Выход спор с 1 см3 питательной среды уменьшается на 45 50%
Пример 2. Осаждение спор в культуре вакцинного сибиреязвенного штамма 55-ВНИИВВиМ непосредственно в реакторе.
Пример 2. Осаждение спор в культуре вакцинного сибиреязвенного штамма 55-ВНИИВВиМ непосредственно в реакторе.
В реактор, содержащий 160 л споровой культуры штамма 55-ВНИИВВиМ с концентрацией спор 350 500 млн./см3, заливают через пробоотборник 16 л 2%-ного раствора Na КМЦ, простерилизованного при 121oC в течение 1 ч и охлажденного до 40 50oC. Содержимое реактора перемешивают и оставляют в состоянии покоя на 20 24 ч. По истечении этого времени надосадок осторожно декантируют, а осадок тщательно перемешивают и сливают в отдельный сосуд, например 20-литровую стеклянную бутыль. Осадок в количестве 10 15 л содержит 4 6 млрд. жизнеспособных спор/см3, легко ресуспендируется и его используют для изготовления вакцины против сибирской язвы животных. В этих условиях происходит 10-15-кратное концентрирование спорового материала.
При добавлении в споровую культуру Na КМЦ в конечной концентрации более 0,2% скорость осаждения спор не увеличивается.
При добавлении в споровую культуру Na КМЦ в количестве 0,10 0,15% осаждение спор происходит медленно в течение 10 12 сут. Изменение температуры от 0 до 25oC не влияет на скорость осаждения спор.
К суперконцентрированному споровому материалу добавляют глицерин до конечной концентрации 30% Полученную в результате жидкую суперконцентрированную вакцину из штамма 55-ВНИИВВиМ с содержанием 50 300 доз в объеме 1 5 мл разливают в ампулы и отпаивают без вакуума.
Использование предлагаемого способа изготовления вакцины из штамма 55-ВНИИВВиМ по сравнению с существующими способами обеспечивает следующие преимущества:
позволяет изготавливать в реакторах большие объемы спор штамма 55-ВНИИВВиМ и концентрировать их, соблюдая условия стерильности;
сокращает время на изготовление спорового материала в 2 раза, а на концентрирование спор в 5 раз;
позволяет проводить концентрирование спор в широком диапазоне температуры (0 25oC);
дает возможность увеличить выход спор с 1 см3 питательной среды в 2 раза;
позволяет получать жидкую суперконцентрированную вакцину.
позволяет изготавливать в реакторах большие объемы спор штамма 55-ВНИИВВиМ и концентрировать их, соблюдая условия стерильности;
сокращает время на изготовление спорового материала в 2 раза, а на концентрирование спор в 5 раз;
позволяет проводить концентрирование спор в широком диапазоне температуры (0 25oC);
дает возможность увеличить выход спор с 1 см3 питательной среды в 2 раза;
позволяет получать жидкую суперконцентрированную вакцину.
Claims (2)
1. Способ изготовления вакцины против сибирской язвы животных, включающий культивирование штамма 55-ВНИИВВиМ в жидкой питательной среде, содержащей органический источник азота, до максимального образования спор и концентрирование споровой культуры с использованием вспомогательного вещества с последующим отстаиванием смеси и отделением осадка, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода количества спор с единицы питательной среды, сокращения трудоемкости способа, материальных затрат и времени на получение и концентрирование спорового материала, штамм 55-ВНИИВВиМ культивируют на питательной среде, содержащей дрожжевой экстракт сухой, пептон, калий фосфорнокислый двузамещенный, кальций хлористый, магний сернокислый, цинк сернокислый, медь сернокислую, железо сернокислое, аммоний сернокислый при следующем соотношении компонентов, мас.
Дрожжевой экстракт сухой 0,2 0,3
Пептон ферментативный сухой 0,2 0,3
Калий фосфорнокислый двузамещенный 0,04 0,06
Кальций хлористый 0,004 0,006
Магний сернокислый 0,03 0,05
Цинк сернокислый 0,0005 0,0015
Медь сернокислая 0,0005 0,0015
Железо сернокислое 0,00005 0,00015
Аммоний сернокислый 0,15 0,25
Вода деминерализованная (pН 7,2 ± 0,2 ) Остальное
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в реакторе в течение 23 25 ч, из них первые 17 19 ч при аэрации, поддерживая скорость растворения кислорода в среде (5,5 ± 0,2) ммоль на 1 л среды в час.
Пептон ферментативный сухой 0,2 0,3
Калий фосфорнокислый двузамещенный 0,04 0,06
Кальций хлористый 0,004 0,006
Магний сернокислый 0,03 0,05
Цинк сернокислый 0,0005 0,0015
Медь сернокислая 0,0005 0,0015
Железо сернокислое 0,00005 0,00015
Аммоний сернокислый 0,15 0,25
Вода деминерализованная (pН 7,2 ± 0,2 ) Остальное
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в реакторе в течение 23 25 ч, из них первые 17 19 ч при аэрации, поддерживая скорость растворения кислорода в среде (5,5 ± 0,2) ммоль на 1 л среды в час.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что для концентрирования бактериальных спор в качестве вспомогательного вещества используют натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, которую вносят в суспензию до конечной концентрации 0,2 0,3% а отстаивание проводят при 0 25oС в течение 23 25 ч.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95111037A RU2095409C1 (ru) | 1995-06-27 | 1995-06-27 | Способ изготовления вакцины против сибирской язвы животных |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95111037A RU2095409C1 (ru) | 1995-06-27 | 1995-06-27 | Способ изготовления вакцины против сибирской язвы животных |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95111037A RU95111037A (ru) | 1997-06-20 |
RU2095409C1 true RU2095409C1 (ru) | 1997-11-10 |
Family
ID=20169466
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95111037A RU2095409C1 (ru) | 1995-06-27 | 1995-06-27 | Способ изготовления вакцины против сибирской язвы животных |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2095409C1 (ru) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6984378B1 (en) | 1999-02-26 | 2006-01-10 | Pfizer, Inc. | Method for the purification, recovery, and sporulation of cysts and oocysts |
US8409590B2 (en) | 2004-02-11 | 2013-04-02 | Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. | Anthrax antigens and methods of use |
RU2544951C1 (ru) * | 2013-12-03 | 2015-03-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии | АТТЕНУИРОВАННЫЙ ШТАММ Bacillus anthracis ДЛЯ РАЗРАБОТКИ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ |
EA030794B1 (ru) * | 2011-03-04 | 2018-09-28 | Бэйджинг Креатед Трибиотехнолэджи Ко., Лтд | Жидкая питательная среда и способ крупномасштабного производства антибактериального слитого полипептида колицина и феромона |
-
1995
- 1995-06-27 RU RU95111037A patent/RU2095409C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
1. 1. SU, авторское свидетельство, 1837071, кл.C 12N 1/20,1993. 2. SU, авторское свидетельство, 1791449, кл.C 12N 3/00, 1993. * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6984378B1 (en) | 1999-02-26 | 2006-01-10 | Pfizer, Inc. | Method for the purification, recovery, and sporulation of cysts and oocysts |
US7229615B2 (en) | 1999-02-26 | 2007-06-12 | Pfizer, Inc. | Method for the purification, recovery, and sporulation of cysts and oocysts |
US8409590B2 (en) | 2004-02-11 | 2013-04-02 | Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. | Anthrax antigens and methods of use |
EA030794B1 (ru) * | 2011-03-04 | 2018-09-28 | Бэйджинг Креатед Трибиотехнолэджи Ко., Лтд | Жидкая питательная среда и способ крупномасштабного производства антибактериального слитого полипептида колицина и феромона |
RU2544951C1 (ru) * | 2013-12-03 | 2015-03-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии | АТТЕНУИРОВАННЫЙ ШТАММ Bacillus anthracis ДЛЯ РАЗРАБОТКИ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU95111037A (ru) | 1997-06-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2107097C1 (ru) | Способ получения лизина | |
RU2095409C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против сибирской язвы животных | |
JPH08508875A (ja) | 蛋白分泌細胞の流加回分培養法 | |
SU521849A3 (ru) | Способ получени цефалоспорина с | |
JPH10127298A (ja) | アカルボース調製のためのオスモル濃度制御発酵法 | |
CN104357586B (zh) | 基于磷酸甜菜碱浓度为控制参数的利福霉素sv的发酵生产方法 | |
SU671738A3 (ru) | Способ получени биомассы микроорганизмов | |
Tzeng et al. | High productivity tank fermentation for gramicidin S synthetases | |
US4048013A (en) | Process for producing single-cell protein from methanol using methylomonas sp. DSM 580 | |
CN116590203B (zh) | 一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-异亮氨酸中的应用 | |
SI9600120A (en) | New and improved fermentative procedure for the production of clavulanic acid and its salts | |
SU500767A3 (ru) | Способ производства биомассы | |
KR810000509B1 (ko) | 단세포 단백질의 제조방법 | |
SU786916A3 (ru) | Способ получени биомассы | |
SU1017733A1 (ru) | Способ производства лимонной кислоты | |
SU644833A1 (ru) | Штамм 85-продуцент -аспарагиновой кислоты | |
RU1791449C (ru) | Способ культивировани штамма BacILLUS аUтRасIS | |
SU661006A1 (ru) | Способ получени биомассы,обогащенной полинуклеотидфосфорилазой | |
SU1711750A1 (ru) | Способ культивировани инфузорий РаRамесIUм саUDатUм | |
SU939544A1 (ru) | Способ выращивани актиномицетов | |
RU2053292C1 (ru) | Штамм бактерий alcaligenes eutrophus - продуцент белковой биомассы | |
SU990812A1 (ru) | Способ получени бактериальных амилаз | |
SU615130A1 (ru) | Способ получени 5- инозиновой кислоты | |
SU675980A1 (ru) | Способ получени -лизина | |
RU1837071C (ru) | Способ культивировани бактерий вида BacILLUS аNтнRасIS |