CN116590203B - 一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-异亮氨酸中的应用 - Google Patents
一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-异亮氨酸中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116590203B CN116590203B CN202310849086.4A CN202310849086A CN116590203B CN 116590203 B CN116590203 B CN 116590203B CN 202310849086 A CN202310849086 A CN 202310849086A CN 116590203 B CN116590203 B CN 116590203B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- isoleucine
- corynebacterium glutamicum
- fermentation
- strain
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 title claims abstract description 133
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 title claims abstract description 132
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 title claims abstract description 129
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 102
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 102
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 title claims abstract description 71
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 31
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 25
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 20
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 50
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 45
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 31
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 31
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 28
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 21
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 21
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 21
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 21
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 21
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 14
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 14
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 14
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 14
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 12
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 7
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 7
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 7
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims description 7
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 7
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 7
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 claims description 7
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 7
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 3
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 abstract description 52
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 abstract description 26
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 abstract description 26
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 abstract description 24
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 18
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 8
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 5
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- DENRZWYUOJLTMF-UHFFFAOYSA-N diethyl sulfate Chemical compound CCOS(=O)(=O)OCC DENRZWYUOJLTMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940008406 diethyl sulfate Drugs 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-AKGZTFGVSA-N (2s)-2-amino-3-methylpentanoic acid Chemical compound CCC(C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-AKGZTFGVSA-N 0.000 description 3
- 241001485655 Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 Species 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobutanoic acid Natural products CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LGVJIYCMHMKTPB-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxynorvaline Chemical class CCC(O)C(N)C(O)=O LGVJIYCMHMKTPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-SCSAIBSYSA-N D-2-aminopentanoic acid Chemical class CCC[C@@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N D-alpha-aminobutyric acid Chemical class CC[C@@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000004886 process control Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C227/00—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C227/38—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C227/40—Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C227/00—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C227/38—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C227/40—Separation; Purification
- C07C227/42—Crystallisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/265—Micrococcus
- C12R2001/28—Micrococcus glutamicus ; Corynebacterium glutamicum
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产L‑异亮氨酸中的应用，所述谷氨酸棒杆菌为谷氨酸棒杆菌cglzh1006，该谷氨酸棒杆菌cglzh1006保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2022年8月1日，菌种保藏编号为CGMCC No.25469。使用本发明的谷氨酸棒杆菌cglzh1006生产L‑异亮氨酸，发酵结束后L‑异亮氨酸的含量有了显著提高，副产物L‑赖氨酸的含量极低，更易于L‑异亮氨酸的提取纯化，该菌株具有良好的稳定性，并且培养基简单、培养条件粗放，易于工业化放大生产，具有较好的实际应用价值。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产L-异亮氨酸中的应用。
背景技术
L-异亮氨酸(isoleucine，L-Ile)，化学名“α-氨基-β-甲基戊酸”，是八种必需氨基酸之一，因具有分支的甲基基团，故与L-缬氨酸和L-亮氨酸通称为“支链氨基酸”。L-异亮氨酸可参与人体内酶类、激素的合成，具有促进蛋白质合成和抑制分解的功能，已广泛应用于医药、食品、农业、化妆品等诸多领域。
目前工业化生产L-异亮氨酸主要采用提取法和发酵法等方法。提取法是用强酸水解动植物蛋白组织，获得L-异亮氨酸，操作过程中需用到强酸等化学试剂，对环境会造成严重污染。相比提取法而言，发酵法因具有操作简单、成本低、对环境友好、绿色可持续发展等优点使其在大规模工业化生产中占据明显的优势。在L-异亮氨酸生物合成途径中，由于L-异亮氨酸、L-苏氨酸、L-甲硫氨酸、L-赖氨酸等氨基酸来源于L-天冬氨酸，故合称为天冬氨酸族氨基酸，在天冬氨酸族氨基酸生物合成途径中，代谢流在经天冬氨酸-β-半醛和L-高丝氨酸后分别流向L-赖氨酸和L-甲硫氨酸等分支途径，会导致在异亮氨酸发酵生产过程中产生较多副产物，增加提取纯化难度，最终会造成产品杂质含量较高、纯度不高等问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产L-异亮氨酸中的应用。
本发明提供一株谷氨酸棒杆菌，为谷氨酸棒杆菌cglzh1006，其分类命名为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum），已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2022年8月1日，菌种保藏编号为CGMCC No.25469。
本发明还提供上述谷氨酸棒杆菌的应用，采用谷氨酸棒杆菌cglzh1006发酵生产L-异亮氨酸。使用该菌株进行发酵生产L-异亮氨酸，发酵液中具有较高的L-异亮氨酸含量和较低的副产物L-赖氨酸含量。
采用谷氨酸棒杆菌cglzh1006发酵生产L-异亮氨酸，包括如下步骤：
S1)将谷氨酸棒杆菌cglzh1006活化培养；
S2）将培养至对数期的菌种接种于种子培养基放大培养；
S3）将放大培养结束的种子液接种于发酵培养基发酵培养，获得L-异亮氨酸发酵液；
S4）将L-异亮氨酸发酵液进行提取纯化，获得L-异亮氨酸晶体。
所述活化培养基包括葡萄糖10~20 g/L、蛋白胨10~20 g/L、牛肉膏10~20 g/L、酵母膏5~10 g/L、氯化钠2.5~5 g/L、磷酸二氢钾1~5 g/L。
所述种子培养基包括葡萄糖20~50 g/L、硫酸铵3~5 g/L、尿素2~5 g/L、磷酸二氢钾1~5 g/L、硫酸镁0.1~3 g/L、多肽粉10~20 g/L、蛋白胨1~5 g/L。
所述发酵培养基包括葡萄糖90~120 g/L、硫酸铵30~50 g/L、磷酸二氢钾1~5 g/L、磷酸氢二钾1~5 g/L、硫酸镁0.1~3 g/L、多肽粉5~15 g/L、蛋白胨1~5 g/L。
所述发酵培养的控制条件为：培养温度32~35℃、罐压0.05~0.10MPa、溶氧30~40%，发酵过程中通过补糖控制残糖在1.0~1.5%。
所述提取纯化过程为：
先将L-异亮氨酸发酵液经过陶瓷膜过滤得到过滤清液，将过滤清液进行离子交换，收集L-异亮氨酸富集液，将L-异亮氨酸富集液进行蒸发浓缩结晶，将得到的晶浆进行离心分离去除母液，得到L-异亮氨酸湿晶体，将L-异亮氨酸湿晶体进行干燥，得到L-异亮氨酸晶体。
本发明的有益效果为：本发明通过大量诱变筛选试验，获得一株L-异亮氨酸高产谷氨酸棒杆菌cglzh1006，该菌株已保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.25469，经过检测鉴定，该菌株具有独特的生理和生化特性，可在科研、工业等领域进行研究和应用。使用本发明中谷氨酸棒杆菌cglzh1006生产L-异亮氨酸，发酵结束后L-异亮氨酸的含量有了显著提高、副产物L-赖氨酸的含量极低，更易于L-异亮氨酸的提取纯化，该菌株具有良好的稳定性，并且培养基简单、培养条件粗放，易于工业化放大生产，具有较好的实际应用价值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
实施例1
一株谷氨酸棒杆菌，为谷氨酸棒杆菌cglzh1006，其分类命名为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏时间为2022年8月1日，菌种保藏编号为CGMCC No.25469。
所述谷氨酸棒杆菌的应用，采用谷氨酸棒杆菌cglzh1006发酵生产L-异亮氨酸。
发酵生产L-异亮氨酸的方法包括如下步骤：
S1)将谷氨酸棒杆菌cglzh1006活化培养，活化培养基为葡萄糖10 g/L、蛋白胨12g/L、牛肉膏10 g/L、酵母膏5 g/L、氯化钠2.5 g/L、磷酸二氢钾1 g/L。
S2)将培养至对数期的菌种接种于种子培养基放大培养; 种子培养基为葡萄糖20g/L、硫酸铵3 g/L、尿素2 g/L、磷酸二氢钾1 g/L、硫酸镁0.1 g/L、多肽粉20 g/L、蛋白胨1g/L。
S3) 将放大培养结束的种子液接种于发酵培养基发酵培养，获得L-异亮氨酸发酵液；发酵培养基为葡萄糖90 g/L、硫酸铵30 g/L、磷酸二氢钾1 g/L、磷酸氢二钾1 g/L、硫酸镁0.1 g/L、多肽粉15 g/L、蛋白胨1 g/L；培养温度32~35℃、罐压0.05~0.10MPa、溶氧30~40%，发酵过程中通过补糖控制残糖在1.0~1.5%。
S4)将L-异亮氨酸发酵液进行提取纯化，获得L-异亮氨酸晶体；
提取纯化过程为：
先将L-异亮氨酸发酵液经过陶瓷膜过滤得到过滤清液，将过滤清液进行离子交换，收集L-异亮氨酸富集液，将L-异亮氨酸富集液进行蒸发浓缩结晶，将得到的晶浆进行离心分离去除母液，得到L-异亮氨酸湿晶体，将L-异亮氨酸湿晶体进行干燥，得到L-异亮氨酸晶体。
通过使用30 L发酵罐培养，培养结束发酵液中L-异亮氨酸含量为48.86g/L、副产物L-赖氨酸含量为0.02g/L，对葡萄糖的转化率为35.5%（转化率计算公式=（发酵液体积L×发酵产L-异亮氨酸含量g/L）/发酵葡萄糖用量g×100%）。经过提取纯化，得到L-异亮氨酸晶体814.51g，L-异亮氨酸晶体中副产物L-赖氨酸含量小于0.01%。
实施例2
一株谷氨酸棒杆菌，为谷氨酸棒杆菌cglzh1006，其分类命名为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏时间为2022年8月1日，菌种保藏编号为CGMCC No.25469。
所述谷氨酸棒杆菌的应用，采用谷氨酸棒杆菌cglzh1006发酵生产L-异亮氨酸。
发酵生产L-异亮氨酸的方法包括如下步骤：
S1)将谷氨酸棒杆菌cglzh1006活化培养，活化培养基为葡萄糖12 g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏12 g/L、酵母膏10 g/L、氯化钠5 g/L、磷酸二氢钾3 g/L。
S2)将培养至对数期的菌种接种于种子培养基放大培养; 种子培养基为葡萄糖25g/L、硫酸铵3 g/L、尿素4 g/L、磷酸二氢钾2 g/L、硫酸镁0.5 g/L、多肽粉18 g/L、蛋白胨3g/L。
S3) 将放大培养结束的种子液接种于发酵培养基发酵培养，获得L-异亮氨酸发酵液；发酵培养基为葡萄糖95 g/L、硫酸铵50 g/L、磷酸二氢钾4 g/L、磷酸氢二钾2 g/L、硫酸镁1 g/L、多肽粉12 g/L、蛋白胨4 g/L，培养温度32~35℃、罐压0.05~0.10MPa、溶氧30~40%，发酵过程中通过补糖控制残糖在1.0~1.5%。
S4)将L-异亮氨酸发酵液进行提取纯化，获得L-异亮氨酸晶体；
提取纯化过程为：
先将L-异亮氨酸发酵液经过陶瓷膜过滤得到过滤清液，将过滤清液进行离子交换，收集L-异亮氨酸富集液，将L-异亮氨酸富集液进行蒸发浓缩结晶，将得到的晶浆进行离心分离去除母液，得到L-异亮氨酸湿晶体，将L-异亮氨酸湿晶体进行干燥，得到L-异亮氨酸晶体。
通过使用30 L发酵罐培养，培养结束发酵液中L-异亮氨酸含量为49.71g/L、副产物L-赖氨酸含量为0.02g/L，对葡萄糖的转化率为35.3%（转化率计算公式=（发酵液体积L×发酵产L-异亮氨酸含量g/L）/发酵葡萄糖用量g×100%）。经过提取纯化，得到L-异亮氨酸晶体815.48g，L-异亮氨酸晶体中副产物L-赖氨酸含量小于0.01%。
实施例3
一株谷氨酸棒杆菌，为谷氨酸棒杆菌cglzh1006，其分类命名为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏时间为2022年8月1日，菌种保藏编号为CGMCC No.25469。
所述谷氨酸棒杆菌的应用，采用谷氨酸棒杆菌cglzh1006发酵生产L-异亮氨酸。
发酵生产L-异亮氨酸的方法包括如下步骤：
S1)将谷氨酸棒杆菌cglzh1006活化培养，活化培养基为葡萄糖15 g/L、蛋白胨20g/L、牛肉膏14 g/L、酵母膏7 g/L、氯化钠3 g/L、磷酸二氢钾4 g/L。
S2)将培养至对数期的菌种接种于种子培养基放大培养; 种子培养基为葡萄糖35g/L、硫酸铵4 g/L、尿素3 g/L、磷酸二氢钾3 g/L、硫酸镁3 g/L、多肽粉14 g/L、蛋白胨4 g/L。
S3) 将放大培养结束的种子液接种于发酵培养基发酵培养，获得L-异亮氨酸发酵液；发酵培养基为葡萄糖100 g/L、硫酸铵40 g/L、磷酸二氢钾3 g/L、磷酸氢二钾3 g/L、硫酸镁3 g/L、多肽粉14 g/L、蛋白胨3 g/L，培养温度32~35℃、罐压0.05~0.10MPa、溶氧30~40%，发酵过程中通过补糖控制残糖在1.0~1.5%。
S4)将L-异亮氨酸发酵液进行提取纯化，获得L-异亮氨酸晶体；
提取纯化过程为：
先将L-异亮氨酸发酵液经过陶瓷膜过滤得到过滤清液，将过滤清液进行离子交换，收集L-异亮氨酸富集液，将L-异亮氨酸富集液进行蒸发浓缩结晶，将得到的晶浆进行离心分离去除母液，得到L-异亮氨酸湿晶体，将L-异亮氨酸湿晶体进行干燥，得到L-异亮氨酸晶体。
通过使用30 L发酵罐培养，培养结束发酵液中L-异亮氨酸含量为48.67g/L、副产物L-赖氨酸含量为0.02g/L，对葡萄糖的转化率为35.7%（转化率计算公式=（发酵液体积L×发酵产L-异亮氨酸含量g/L）/发酵葡萄糖用量g×100%），经过提取纯化，得到L-异亮氨酸晶体814.07g，L-异亮氨酸晶体中副产物L-赖氨酸含量小于0.01%。
实施例4
一株谷氨酸棒杆菌，为谷氨酸棒杆菌cglzh1006，其分类命名为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏时间为2022年8月1日，菌种保藏编号为CGMCC No.25469。
所述谷氨酸棒杆菌的应用，采用谷氨酸棒杆菌cglzh1006发酵生产L-异亮氨酸。
发酵生产L-异亮氨酸的方法包括如下步骤：
S1)将谷氨酸棒杆菌cglzh1006活化培养，活化培养基为葡萄糖18 g/L、蛋白胨15g/L、牛肉膏20 g/L、酵母膏8 g/L、氯化钠4 g/L、磷酸二氢钾3.5 g/L。
S2)将培养至对数期的菌种接种于种子培养基放大培养; 种子培养基为葡萄糖40g/L、硫酸铵5 g/L、尿素2 g/L、磷酸二氢钾5 g/L、硫酸镁2 g/L、多肽粉12 g/L、蛋白胨2 g/L。
S3) 将放大培养结束的种子液接种于发酵培养基发酵培养，获得L-异亮氨酸发酵液；发酵培养基为葡萄糖110 g/L、硫酸铵35 g/L、磷酸二氢钾2 g/L、磷酸氢二钾5 g/L、硫酸镁1.5 g/L、多肽粉10 g/L、蛋白胨2 g/L，培养温度32~35℃、罐压0.05~0.10MPa、溶氧30~40%，发酵过程中通过补糖控制残糖在1.0~1.5%。
S4)将L-异亮氨酸发酵液进行提取纯化，获得L-异亮氨酸晶体；
提取纯化过程为：
先将L-异亮氨酸发酵液经过陶瓷膜过滤得到过滤清液，将过滤清液进行离子交换，收集L-异亮氨酸富集液，将L-异亮氨酸富集液进行蒸发浓缩结晶，将得到的晶浆进行离心分离去除母液，得到L-异亮氨酸湿晶体，将L-异亮氨酸湿晶体进行干燥，得到L-异亮氨酸晶体。
50立方发酵罐培养，培养结束发酵液中L-异亮氨酸含量为47.46 g/L、副产物L-赖氨酸含量为0.03g/L，对葡萄糖的转化率为36.2%（转化率计算公式=（发酵液体积L×发酵产L-异亮氨酸含量g/L）/发酵葡萄糖用量g×100%）。经过提取纯化，得到L-异亮氨酸晶体1.313t，L-异亮氨酸晶体中副产物L-赖氨酸含量小于0.01%。
实施例5
一株谷氨酸棒杆菌，为谷氨酸棒杆菌cglzh1006，其分类命名为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏时间为2022年8月1日，菌种保藏编号为CGMCC No.25469。
所述谷氨酸棒杆菌的应用，采用谷氨酸棒杆菌cglzh1006发酵生产L-异亮氨酸。
发酵生产L-异亮氨酸的方法包括如下步骤：
S1)将谷氨酸棒杆菌cglzh1006活化培养，活化培养基为葡萄糖20 g/L、蛋白胨17g/L、牛肉膏18 g/L、酵母膏6 g/L、氯化钠4.5 g/L、磷酸二氢钾5 g/L。
S2)将培养至对数期的菌种接种于种子培养基放大培养; 种子培养基为葡萄糖50g/L、硫酸铵4 g/L、尿素5 g/L、磷酸二氢钾4 g/L、硫酸镁1.5 g/L、多肽粉10 g/L、蛋白胨5g/L。
S3) 将放大培养结束的种子液接种于发酵培养基发酵培养，获得L-异亮氨酸发酵液；发酵培养基为葡萄糖120 g/L、硫酸铵45 g/L、磷酸二氢钾5 g/L、磷酸氢二钾4 g/L、硫酸镁2 g/L、多肽粉5 g/L、蛋白胨5 g/L，培养温度32~35℃、罐压0.05~0.10MPa、溶氧30~40%，发酵过程中通过补糖控制残糖在1.0~1.5%。
S4)将L-异亮氨酸发酵液进行提取纯化，获得L-异亮氨酸晶体；
提取纯化过程为：
先将L-异亮氨酸发酵液经过陶瓷膜过滤得到过滤清液，将过滤清液进行离子交换，收集L-异亮氨酸富集液，将L-异亮氨酸富集液进行蒸发浓缩结晶，将得到的晶浆进行离心分离去除母液，得到L-异亮氨酸湿晶体，将L-异亮氨酸湿晶体进行干燥，得到L-异亮氨酸晶体。
50立方发酵罐培养，培养结束发酵液中L-异亮氨酸含量为47.98 g/L、副产物L-赖氨酸含量为0.03g/L，对葡萄糖的转化率为36.5%（转化率计算公式=（发酵液体积L×发酵产L-异亮氨酸含量g/L）/发酵葡萄糖用量g×100%）。经过提取纯化，得到L-异亮氨酸晶体1.315t，L-异亮氨酸晶体中副产物L-赖氨酸含量小于0.01%。
实施例6
诱变筛选方法
以谷氨酸棒杆菌ATCC13032变种为出发菌，经过多轮硫酸二乙酯（DES）化学诱变、常压室温等离子（atmospheric and room temperature plasma，ARTP ）诱变处理，同时结合结构类似物抗性定向筛选，筛选获得具有L-异亮氨酸高产并且副产物L-赖氨酸含量较低的菌株。谷氨酸棒杆菌ATCC13032变种由美国典型培养物保藏中心ATCC13032突变后获得。
DES化学诱变方法：将谷氨酸棒杆菌ATCC13032变种斜面活化，接种于肉汤培养基中，32℃ 200r/min培养12h，然后用pH7.0磷酸缓冲液洗涤2次，磷酸缓冲液均匀悬浮后取4mL，在装有16mL pH7.0磷酸缓冲液的250mL带玻璃珠三角瓶中加入0.2mL DES原液，32℃恒温震荡诱变30min，加入Na2S2O3终止反应，摇匀，取1mL转入肉汤培养基进行中间培养，32℃200r/min振荡培养过夜，离心，洗涤，弃去上清液，收集菌体，稀释后分别涂布基本营养培养基平板和抗性平板。
ARTP诱变选育方法：从新鲜活化斜面上挑取一环菌种于种子培养基中，180 r/min、32℃ 摇床培养4.5h，取1mL种子液于1.5mL EP管，4000rpm离心，去除上清液，加入1mL生理盐水，混匀，反复三次，将菌悬液稀释，使菌悬液OD600为0.6~1.0；取10µL稀释菌液均匀涂到无菌不锈钢载片上，ARTP 诱变条件：射频功率120 W，处理距离2mm，载气流量10SLM(Standard liters per minute)，处理温度为室温（20~40℃），诱变处理时间选择致死率达到90%以上的处理时间。将处理过的载片放入装有1mL无菌生理盐水的EP管中，震荡混匀，然后稀释到10-1、10-2倍，取100 µL均匀涂布到平板上，每个梯度做两个平行，32℃培养48 h。
抗性菌株筛选方法：用接种环从诱变后的平板中取一满环菌种于无菌离心管中，用无菌水离心洗涤两次，然后悬于无菌水中制成菌悬液，按浓度梯度制备一系列的α-氨基丁酸、D-正缬氨酸、α-氨基-β-羟基戊酸抗性培养基平板，直接将菌悬液分别涂布于抗性平板上，32℃培养2～3d。根据出发菌株耐受结构类似物的浓度确定诱变菌株筛选用结构类似物浓度，随机挑选生长菌落进行筛选。
菌种初筛：将种子培养基分装到96孔板中，每个0.1mL，将平板上的单菌落挑到种子液孔板中，180 r/min，32 ℃培养18h，并同时接种到另一块平板上，32℃培养22h后放入冰箱。将发酵培养基分装到孔板中，每个0.09 mL，种子液接0.015 mL，180 r/min，32℃培养24 h。挑取发酵结束L-异亮氨酸含量较高并且副产物L-赖氨酸含量较低的菌株，将平板上对应序号的菌种挑至斜面，32℃培养24 h，甘油管保存。
菌种复筛：将初筛甘油管保藏的菌种分别划一支斜面，32℃培养24 h。从斜面上挑一环菌至500 mL种子摇瓶中，180 r/min，32℃培养18 h，转接500 mL发酵摇瓶，180 r/min，32℃培养24h，测发酵液中L-异亮氨酸含量和L-赖氨酸含量，挑取L-异亮氨酸含量较高并且副产物L-赖氨酸含量较低的菌种保存。
遗传稳定性试验：
将上述筛选获得的菌株进行单菌落分离，连续摇瓶传代。摇瓶传代方法：把菌株从斜面转接摇瓶中，培养至对数生长期后转接至发酵摇瓶培养。选择遗传稳定的菌株用于进一步研究。
将最终获得的一株L-异亮氨酸高产菌株cglzh1006再连续传种十次，使用30L发酵罐培养考察其L-异亮氨酸的产量及副产物L-赖氨酸产量。结果如下：
表1 菌株cglzh1006的遗传稳定性
从表1中可以看出，突变菌株cglzh1006的遗传稳定性良好，连续传代10次在30L发酵罐培养结束的L-异亮氨酸产量均保持较高水平，同时副产物L-赖氨酸含量均保持相对较低水平，菌株cglzh1006的遗传稳定性良好。
对比实验：
使用本发明中的谷氨酸棒杆菌cglzh1006和原菌株ATCC13032变种，结合本发明中的相关工艺分别进行30L罐发酵培养，分别培养三批次，取三个批次平均值计算结果如下表：
表2 突变菌株和出发菌发酵性能比较
从表2中可以看出，本发明中的菌株cglzh1006相比出发菌在发酵结束后L-异亮氨酸产量有了较大提高，而副产物L-赖氨酸产量则大幅降低，菌株cglzh1006生产L-异亮氨酸的能力得到了较大提升，并且副产物L-赖氨酸大量减少，将该菌株和工艺应用于异亮氨酸工业化生产，可以明显降低L-异亮氨酸的提取纯化成本，更容易生产高纯度L-异亮氨酸，具有较好的应用前景。
对该菌株进行传代保藏，命名为谷氨酸棒杆菌cglzh1006，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），其分类命名为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum），保藏日期为2022年8月1日，菌种保藏编号为CGMCC No.25469，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
中国科学院微生物研究所对谷氨酸棒杆菌cglzh1006的细胞形态、生理生化特征、16S rRNA基因序列（其基因序列如SEQ NO.1所示）等项目进行了检测鉴定，经过对检测鉴定实验数据综合分析，参考《伯杰氏系统细菌手册》以及International Journal ofSystematic and Evolutionary Microbiology有关研究论文，菌株编号cglzh1006的鉴定结果为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）。
本发明所述的谷氨酸棒杆菌cglzh1006及其在发酵生产异亮氨酸中的应用，菌种稳定性大大提高，L-异亮氨酸产量有了较大提高，同时发酵液中的副产物L-赖氨酸含量极低，采用该菌种发酵生产L-异亮氨酸，L-异亮氨酸产量较高而副产物L-赖氨酸含量极低，在提取过程中可以减少针对副产物L-赖氨酸的处理工艺，大大降低生产成本，更容易生产高纯度L-异亮氨酸，该菌种工艺具有显著先进性，并且发酵原材料简单易得、工艺控制简单、生产技术水平稳定，更易于工业化生产推广。
以上所述者仅为用以解释本发明之较佳实施例，并非企图具以对本发明做任何形式上之限制，是以，凡有在相同之发明精神下所作有关本发明之任何修饰或变更，皆仍应包括在本发明意图保护之范畴。
Claims (8)
1.一株谷氨酸棒杆菌，其特征在于：所述谷氨酸棒杆菌为谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）cglzh1006，该谷氨酸棒杆菌cglzh1006保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2022年8月1日，菌种保藏编号为CGMCC No.25469。
2.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌的应用，其特征在于：采用谷氨酸棒杆菌cglzh1006发酵生产L-异亮氨酸。
3.根据权利要求2所述的谷氨酸棒杆菌的应用，其特征在于：采用谷氨酸棒杆菌cglzh1006发酵生产L-异亮氨酸包括如下步骤：
S1) 将谷氨酸棒杆菌cglzh1006活化培养；
S2）将培养至对数期的菌种接种于种子培养基放大培养；
S3）将放大培养结束的种子液接种于发酵培养基发酵培养，获得L-异亮氨酸发酵液；
S4）将L-异亮氨酸发酵液进行提取纯化，获得L-异亮氨酸晶体。
4.根据权利要求3所述的谷氨酸棒杆菌的应用，其特征在于：所述的提取纯化过程为：
先将L-异亮氨酸发酵液经过陶瓷膜过滤得到过滤清液，将过滤清液进行离子交换，收集L-异亮氨酸富集液，将L-异亮氨酸富集液进行蒸发浓缩结晶，将得到的晶浆进行离心分离去除母液，得到L-异亮氨酸湿晶体，将L-异亮氨酸湿晶体进行干燥，得到L-异亮氨酸晶体。
5.根据权利要求3所述的谷氨酸棒杆菌的应用，其特征在于：活化培养基包括葡萄糖10-20 g/L、蛋白胨10-20 g/L、牛肉膏10-20 g/L、酵母膏5-10 g/L、氯化钠2.5-5 g/L、磷酸二氢钾1-5 g/L。
6.根据权利要求3所述的谷氨酸棒杆菌的应用，其特征在于：种子培养基包括葡萄糖20-50 g/L、硫酸铵3-5 g/L、尿素2-5 g/L、磷酸二氢钾1-5 g/L、硫酸镁0.1-3 g/L、多肽粉10-20 g/L、蛋白胨1-5 g/L。
7.根据权利要求3所述的谷氨酸棒杆菌的应用，其特征在于：发酵培养基包括葡萄糖90-120 g/L、硫酸铵30-50 g/L、磷酸二氢钾1-5 g/L、磷酸氢二钾1-5 g/L、硫酸镁0.1-3 g/L、多肽粉5-15 g/L、蛋白胨1-5 g/L。
8.根据权利要求7所述的谷氨酸棒杆菌的应用，其特征在于：发酵培养的控制条件为：培养温度32~35℃、罐压0.05~0.10MPa、溶氧30~40%，发酵过程中通过补糖控制残糖在1.0~1.5%。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310849086.4A CN116590203B (zh) | 2023-07-12 | 2023-07-12 | 一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-异亮氨酸中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310849086.4A CN116590203B (zh) | 2023-07-12 | 2023-07-12 | 一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-异亮氨酸中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116590203A CN116590203A (zh) | 2023-08-15 |
| CN116590203B true CN116590203B (zh) | 2023-09-12 |
Family
ID=87594030
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310849086.4A Active CN116590203B (zh) | 2023-07-12 | 2023-07-12 | 一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-异亮氨酸中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116590203B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4656135A (en) * | 1984-06-29 | 1987-04-07 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing L-isoleucine by fermentation |
| CN105886431A (zh) * | 2016-04-27 | 2016-08-24 | 天津科技大学 | 一株谷氨酸棒状杆菌及其高产异亮氨酸的方法 |
| CN108841758A (zh) * | 2018-07-13 | 2018-11-20 | 大连医诺生物股份有限公司 | 谷氨酸棒杆菌突变株及其在l-亮氨酸生产中的应用 |
| CN109576261A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-04-05 | 三峡大学 | 一种高产异亮氨酸的谷氨酸棒杆菌的选育方法及应用 |
| CN111944857A (zh) * | 2020-07-22 | 2020-11-17 | 新泰市佳禾生物科技有限公司 | 一种提高l-异亮氨酸产率的发酵方法 |
| CN116121135A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-05-16 | 大连医诺生物股份有限公司 | 一种谷氨酸棒杆菌突变株及其在l-异亮氨酸发酵中的应用 |
-
2023
- 2023-07-12 CN CN202310849086.4A patent/CN116590203B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4656135A (en) * | 1984-06-29 | 1987-04-07 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing L-isoleucine by fermentation |
| CN105886431A (zh) * | 2016-04-27 | 2016-08-24 | 天津科技大学 | 一株谷氨酸棒状杆菌及其高产异亮氨酸的方法 |
| CN108841758A (zh) * | 2018-07-13 | 2018-11-20 | 大连医诺生物股份有限公司 | 谷氨酸棒杆菌突变株及其在l-亮氨酸生产中的应用 |
| CN109576261A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-04-05 | 三峡大学 | 一种高产异亮氨酸的谷氨酸棒杆菌的选育方法及应用 |
| CN111944857A (zh) * | 2020-07-22 | 2020-11-17 | 新泰市佳禾生物科技有限公司 | 一种提高l-异亮氨酸产率的发酵方法 |
| CN116121135A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-05-16 | 大连医诺生物股份有限公司 | 一种谷氨酸棒杆菌突变株及其在l-异亮氨酸发酵中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Rational Design of Corynebacterium glutamicum YILW for Isoleucine Production Based on Gene Transcription and Metabolite Analysis;Wen Bing;Ma Jie;Li Zhixiang;Zhang Chenglin;Xu Qingyang;Chen Ning;食品科学;第38卷(第4期);第32-38页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116590203A (zh) | 2023-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN114480173B (zh) | 一株大肠埃希氏菌及其在发酵生产l-色氨酸中的应用 | |
| CN113430151B (zh) | 一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-缬氨酸中的应用 | |
| CN116496950B (zh) | 一株赖氨酸生产菌株及用途，生产赖氨酸的方法 | |
| CN110791462B (zh) | 一株枯草芽孢杆菌及其在发酵生产腺苷中的应用 | |
| CN116731933B (zh) | 一种谷氨酸棒杆菌及其在生产缬氨酸中的应用 | |
| CN116716231B (zh) | 一株大肠埃希氏菌及其在发酵生产色氨酸中的应用 | |
| CN110964760A (zh) | 一种高产γ-氨基丁酸菌株的诱变选育方法 | |
| CN112300953B (zh) | 枯草芽孢杆菌及其在发酵生产腺苷酸脱氨酶中的应用 | |
| WO2023016387A1 (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其在制备1-脱氧野尻霉素中的应用 | |
| CN109266578B (zh) | 大肠埃希氏菌ACThr1032及其在发酵生产L-苏氨酸中的应用 | |
| CN116590203B (zh) | 一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-异亮氨酸中的应用 | |
| CN113604390B (zh) | 一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-鸟氨酸中的应用 | |
| CN116590202B (zh) | 一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-亮氨酸中的应用 | |
| CN111197014B (zh) | 谷氨酸棒状杆菌诱变菌株及其应用 | |
| RU2745093C1 (ru) | Штамм метанокисляющих бактерий Methylococcus capsulatus BF19-07 - продуцент для получения микробной белковой массы | |
| CN116694540B (zh) | 一株大肠埃希氏菌及其在生产苏氨酸中的应用 | |
| CN112746026B (zh) | 一株维斯假丝酵母及其应用 | |
| CN116355814B (zh) | 一株大肠埃希氏菌及其在发酵生产l-精氨酸中的应用 | |
| CN116731934B (zh) | 一株大肠埃希氏菌及其在生产氨基葡萄糖中的应用 | |
| CN116286513B (zh) | 一株希氏乳杆菌FR-1012及其工业化生产γ-氨基丁酸的方法 | |
| CN111100802A (zh) | 一株粪肠球菌及其应用 | |
| CN116676200B (zh) | 一株黑曲霉及其在制备柠檬酸中的应用 | |
| CN116004750B (zh) | 桃色欧文氏菌产安吉菌素的方法 | |
| CN116836885A (zh) | 一株谷氨酸棒杆菌及其在生产l-谷氨酸中的应用 | |
| CN109312298B (zh) | 米氏硫胺素芽孢杆菌菌株及其用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |