RU2038377C1 - Способ получения полиненасыщенных жирных кислот - Google Patents
Способ получения полиненасыщенных жирных кислот Download PDFInfo
- Publication number
- RU2038377C1 RU2038377C1 SU914894242A SU4894242A RU2038377C1 RU 2038377 C1 RU2038377 C1 RU 2038377C1 SU 914894242 A SU914894242 A SU 914894242A SU 4894242 A SU4894242 A SU 4894242A RU 2038377 C1 RU2038377 C1 RU 2038377C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fatty acids
- hours
- skoog
- murashige
- medium
- Prior art date
Links
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 241000518474 Brachythecium rutabulum Species 0.000 claims description 3
- 241000184277 Eurhynchium striatum Species 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 241001600662 Pseudoscleropodium purum Species 0.000 claims description 2
- 241001136234 Rhytidiadelphus triquetrus Species 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 abstract description 8
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 abstract description 7
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 abstract description 7
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 7
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 5
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 4
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 4
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 4
- WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N acetyl chloride Chemical compound CC(Cl)=O WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012346 acetyl chloride Substances 0.000 description 3
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 241001600678 Brachythecium salebrosum Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000518454 Rhytidiadelphus squarrosus Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- OFIDNKMQBYGNIW-UHFFFAOYSA-N arachidonic acid methyl ester Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(=O)OC OFIDNKMQBYGNIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- OFIDNKMQBYGNIW-ZKWNWVNESA-N methyl arachidonate Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)OC OFIDNKMQBYGNIW-ZKWNWVNESA-N 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 241001480517 Conidiobolus Species 0.000 description 1
- 241001491638 Corallina Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 241000235575 Mortierella Species 0.000 description 1
- 241001136237 Rhytidiadelphus Species 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006177 biological buffer Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- -1 fatty acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6458—Glycerides by transesterification, e.g. interesterification, ester interchange, alcoholysis or acidolysis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Использование: биотехнология, культивирование клеток и тканей растений, биохимия, фармакология. Сущность изобретения: полиненасыщенные жирные кислоты получают при экстракции культивируемой биомассы клеток ряда видов мха на питательных средах, основанных на прописи Мурасеге-Скуга. 2 з.п. ф-лы.
Description
Изобретение относится к способу получения полиненасыщенных жирных кислот, таких как, например, арахидоновая или эйкозапентановая кислоты. Полиненасыщенные жирные кислоты широко используются в пищевой или парфюмерной промышленности. Например, арахидоновая кислота имеет важное значение как предшественник лейкотриенов и простагландинов, являющихся важными элементами для регулирования функционирования некоторых клеток и физиологических функций. Эйкозапентановая кислота играет важную роль при снижении риска заболевания тромбозом или артериосклерозом.
Известен способ получения полиненасыщенных жирных кислот [1] путем ферментативной реакции с использованием микроорганизма типа Mortierella или даже культуры этого микроорганизма в присутствии углеводорода и жирной кислоты [2]
Известен также способ получения ненасыщенных жирных кислот [3] который включает культивацию микроорганизма типа Conidiobolus в среде, содержащей в качестве источника углерода ненасыщенную жирную кислоту.
Известен также способ получения ненасыщенных жирных кислот [3] который включает культивацию микроорганизма типа Conidiobolus в среде, содержащей в качестве источника углерода ненасыщенную жирную кислоту.
Известен способ [4] получения эйкозапентановой кислоты из морских водорослей, относящихся к классу Corallina.
Целью изобретения является создание простого способа получения в больших количествах полиненасыщенных жирных кислот из природных источников, например мхов.
Предлагаемый способ получения полиненасыщенных жирных кислот включает культивирование растительного материала, получение биомассы клеток, ее выращивание и экстракцию целевого продукта, причем в качестве растительного материала используют споры мха одного из видов: Eurhynchium striatum, Brachythecium rutabulum, Brachythecium salebrosum, Rhytidiadelphus squarrogus, Scleropodium purum и Rhytidiadelphus Triquetrus, и культивирование осуществляют на полутвердой среде Мурасиге-Скуга в течение 1-4 мес при температуре 15-30оС и освещенности 2000-7000 лк при продолжительности светового дня 14-18 ч и ночи 6-10 ч, выращивание биомассы проводят в жидкой безгормональной питательной среде Мурасиге-Скуга, дополнительно содержащей 0-25 г/л глюкозы, в течение 2-6 нед. при температуре 15-30оС, освещенности 2000-7000 лк, при продолжительности светового дня 14-18 ч и ночи 6-10 ч, при рН питательной среды 5,5-7,0, и экстракцию целевого продукта осуществляют хлороформом, метанолом, изопропанолом, гексаном или смесью указанных соединений. Причем рН можно устанавливать путем добавления в питательную среду 0,05-0,2%-ной 2-морфолиноэтансульфоновой кислоты.
Используемая питательная среда предпочтительно Мурасиге-Скуга может быть разбавлена до 8-12 мас.
Одно из преимуществ предлагаемого изобретения состоит в том, что с его помощью можно получать стабилизированную культуру клеток определенного мха, продуцирующую целевые полиненасыщенные жирные кислоты постоянным и воспроизводимым образом.
Другим преимуществом изобретения является возможность получения с его помощью ненасыщенных жирных кислот, связанных обычно в гликолипиды, которые могут использоваться в косметических продуктах.
Мхи обычно состоят из двух частей, а именно: гаплоидной или гаметофитной и диплоидной или спорофитной фаз. Гаплоидные споры продуцируются спорофитом в результате мейоза. Эти споры могут развиваться за счет прорастания, образуя гаметофит.
Для осуществления способа в соответствии с предлагаемым изобретением можно использовать капсулы, содержащие указанные споры. Предпочтительно это должны быть зрелые споры. Собранные капсулы подвергают стерилизации, например, путем погружения в разбавленный раствор хлорида натрия, последующего погружения на короткое время в этанол и промывки дистиллированной водой, или любым другим способом, позволяющим удалить с их поверхности микробов.
Стерилизованные капсулы вскрывают и находящиеся в них споры помещают в культуральную среду, обычно использующуюся в таких случаях, например в среду Murashige b Skoog (T. Murashige u Skoog F. (1962), Physiol. Plant. 15, 473-497). Расход клеток для засева культурной среды составляет, например, 0,1-0,8 мг (в расчете на сухое вещество) на 1 мл среды.
рН жидкой культурной среды устанавливают в пределах 5,5-7,0, например, путем добавления биологического буферного раствора, обычно использующегося в тканевых культурах. Такая стабилизация рН обеспечивает быструю дифференциацию клеток и более интенсивное продуцирование биомассы.
В процессе культивации среды перемешивают целиком или частично, например, с помощью мешалки, вращающейся со скоростью 100-120 об/мин.
После окончания инкубации клетки отделяют путем фильтрации или центрифугирования.
Выделенные клетки могут быть затем гомогенизированы, например, в растворе, содержащем 1-3 мас.ч. хлороформа на 1 мас.ч. метанола, в растворе гексана, изопропанола или их смеси. Перед экстракцией клетки обрабатывают путем погружения на 2-6 мин в кипящий изопропанол для ингибирования активности липаз. Полученный экстракт осветляют при необходимости путем фильтрации и затем высушивают, например в ротационном испарителе при 35-40оС и пониженном давлении. Полученная в результате липидная фракция содержит целевые полиненасыщенные жирные кислоты, а также другие жирные кислоты.
Присутствующие в липидной фракции различные полиненасыщенные жирные кислоты могут быть разделены. Так, для получения метиловых эфиров целевых полиненасыщенных жирных кислот используют переэтерификацию, осуществляемую с помощью ацетилхлорида. Полученные метиловые эфиры экстрагируют, например гексаном. Полученные таким образом эфиры идентифицируют с помощью, например, газовой хроматографии путем сравнения с известными характеристиками стандартных соединений или с помощью масс-спектрометрии.
Полученные таким образом полиненасыщенные жирные кислоты могут использоваться в пищевых и/или косметических продуктах.
П р и м е р 1. 200 мл разбавленной до 10 мас. жидкой культурной среды Murashige и Skoog, не содержащей гормонов роста и витаминов и содержащей 10 г/л глюкозы, засевают 100 мг сухих клеток Rhytidiadelphus squarrosuc. рН культурной среды устанавливают равным 6,5, добавляя к ней 0,1%-ную (мас.) 2-морфолиноэтансульфоновую кислоту. Клетки выдерживают при 20оС и освещенности 5000 лк в течение 16 ч и затем в течение 8 ч в темноте при постоянном перемешивании со скоростью вращения мешалки 110 об./мин.
После инкубации в течение 3 нед суспензию фильтруют, получая в результате 820 мг клеток в расчете на сухое вещество.
Полученные клетки погружают на 2 мин в раствор изопропанола при 80-90оС, после чего суспендируют в растворе, содержащем 2 мас.ч. хлороформа на 1 мас. ч. метанола. Полученный экстракт фильтруют и высушивают в ротационном испарителе при 40оС и пониженном давлении, после чего подвергают очистке путем экстракции 0,88%-ным (мас.) раствором KCl. В результате получают 52,5 мг липидной фракции, т.е. 6,4 мас. от исходного количества сухих клеток.
52,5 мг липидной фракции подвергают переэтерификации ацетилхлоридом. Образующиеся в результате метиловые эфиры экстрагируют гексаном. Полученные эфиры разделяют с помощью газовой хроматографии и идентифицируют путем сравнения их масс-спектра с масс-спектром стандартных соединений.
В нижеприведенной табл. 1 эфиры жирных кислот определяются числом атомов углерода и числом и положением двойных связей в исходной жирной кислоте.
Экстракт метиловых эфиров содержит все жирные кислоты упомянутой липидной фракции в этерифицированной форме и имеет следующий состав (мас.):
В результате получают 5,8 мг метиларахидоната (20:4, n-6) и 0,98 мг метилэйкозапентаноата (20:5, n-3).
В результате получают 5,8 мг метиларахидоната (20:4, n-6) и 0,98 мг метилэйкозапентаноата (20:5, n-3).
П р и м е р 2. 100 мг сухих клеток различных мхов засевают как это описано в примере 1 в жидкую культурную среду Murashige и Skoog, которая может быть разбавлена и рН которой устанавливают равным 6,5 путем добавления 0,1%-ной (мас.) 2-морфолиноэтансульфоновой кислоты (МES-кислота).
Содержание арахидоновой (АА) и эйкозапентановой (ЕРА) кислот определяют в мас. в расчете на общее количество жирных кислот (1) и в мг на г сухих клеток мха (11).
При этом получают следующие результаты, приведенные в табл. 2.
Для различных мхов используют следующие культурные среды:
для B. rutabulum, R. triquetrus и R.squarrosus разбавленную до 10 мас. среду Murashige и Skoog, содержащую MES-кислоту (рН 6,5);
для B. salebrosum неразбавленную среду Murashige и Skoog, содержащую MES-кислоту (рН 6,5);
для S.purum неразбавленную среду Murashige и Skoog (рН 5,8);
для E.striatum разбавленную до 10 мас. среду Murashige и Skoog (рН 5,8).
для B. rutabulum, R. triquetrus и R.squarrosus разбавленную до 10 мас. среду Murashige и Skoog, содержащую MES-кислоту (рН 6,5);
для B. salebrosum неразбавленную среду Murashige и Skoog, содержащую MES-кислоту (рН 6,5);
для S.purum неразбавленную среду Murashige и Skoog (рН 5,8);
для E.striatum разбавленную до 10 мас. среду Murashige и Skoog (рН 5,8).
П р и м е р 3. 40 мл культурной среды Murashige и Skoog, не содержащей гормонов и витаминов и содержащей 10 г/л глюкозы (рН 5,8), засевают 20 г сухих клеток R.squarrosus. Клетки выдерживают при 20оС и освещенности 5000 лк в течение 16 ч и затем в темноте в течение 8 ч при постоянном перемешивании при вращении мешалки со скоростью 110 об/мин. После инкубации в течение 3 нед суспензию фильтруют, получая в результате 30 мг клеток в расчете на сухое вещество.
Полученные клетки погружают на 2 мин в раствор изопропанола при 80-90оС и затем суспендируют их в растворе, содержащем 2 мас.ч. хлороформа на 1 мас. ч. метанола. Экстракт фильтруют, высушивают и подвергают очистке таким же образом, как это описано в примере 1. В результате получают 4,7 мг липидной фракции, т.е. 15,6 мас. в расчете на исходное количество сухих клеток. Липидную фракцию подвергают переэтерефикации с помощью ацетилхлорида, и образующиеся метиловые эфиры экстрагируют гексаном. В результате после разделения получают 0,40 мг метиларахидоната, т.е. 13,2 мг/г сухих клеток, и 0,06 мг метилэйкозапентаноата, т.е. 2,1 мг/г сухих клеток.
Claims (3)
1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИНЕНАСЫЩЕННЫХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ, включающий культивирование растительного материала, получение биомассы клеток, ее выращивание и экстракцию целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве растительного материала используют споры мха одного из видов: eurhynchium striatum, brachythecium rutabulum, brachythecium salebrosum, rhytidiadelphus squarrosus, scleropodium purum, rhytidiadelphus triquetrus, культивирование осуществляют на полутвердой среде Мурасиге-Скуга в течение 1 4 месяцев при температуре 15 30oС и освещенности 2000 7000 лк при продолжительности светового дня 14 18 ч и ночи 6 10 ч, выращивание биомассы проводят в жидкой безгормональной среде Мурасиге-Скуга, дополнительно содержащей 0 25 г/л глюкозы, в течение 2 6 недель при температуре 15 - 30oС и освещенности 2000 7000 лк при продолжительности светового дня 14 18 ч и ночи 6 10 ч, при рН питательной среды 5,5 7,0 и экстракцию целевого продукта осуществляют хлороформом, метанолом, изопропанолом, гексаном или смесью указанных соединений.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что рН устанавливают путем добавления в питательную среду 0,05 0,2%-ной 2-морфолиноэтансульфоновой кислоты.
3. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что используемая питательная среда Мурасиге-Скуга может быть разбавлена до 8 12 мас.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH146/90A CH680448A5 (ru) | 1990-01-17 | 1990-01-17 | |
| CH146/90 | 1990-01-17 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2038377C1 true RU2038377C1 (ru) | 1995-06-27 |
Family
ID=4180300
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU914894242A RU2038377C1 (ru) | 1990-01-17 | 1991-01-16 | Способ получения полиненасыщенных жирных кислот |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0437710A1 (ru) |
| JP (1) | JPH05111384A (ru) |
| AU (1) | AU622061B2 (ru) |
| CA (1) | CA2032648A1 (ru) |
| CH (1) | CH680448A5 (ru) |
| FI (1) | FI910175A (ru) |
| HU (1) | HUT61334A (ru) |
| IE (1) | IE904512A1 (ru) |
| IL (1) | IL96584A0 (ru) |
| NO (1) | NO910018L (ru) |
| NZ (1) | NZ236537A (ru) |
| PT (1) | PT96492A (ru) |
| RU (1) | RU2038377C1 (ru) |
| ZA (1) | ZA9151B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2551779C2 (ru) * | 2009-03-18 | 2015-05-27 | Сантори Холдингз Лимитед | Новая ацетил-coa-карбоксилаза |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1284345B (de) * | 1961-07-14 | 1968-11-28 | Laeis Werke Ag | Verfahren zum Formen von als Ringabschnitte gestalteten Futtersteinen fuer Giesspfannen, OEfen od. dgl. und Presse zum Durchfuehren des Verfahrens |
| JP2700741B2 (ja) * | 1992-03-24 | 1998-01-21 | 財団法人平岡環境科学研究所 | 培養種を用いたコケ類の栽培方法 |
| CZ299290B6 (cs) * | 1997-02-20 | 2008-06-11 | Dsm Ip Assets B.V. | Zpusob výroby beta-laktamové slouceniny, zpusob prípravy a/nebo zlepšení vláknitého mikrobiálního kmene a použití chemicky definovaného fermentacníhomédia |
| AU1499601A (en) * | 1999-11-25 | 2001-06-04 | Basf Plant Science Gmbh | Moss genes from physcomitrella patents encoding proteins involved in the synthesis of polyunsaturated fatty acids and lipids |
| JP5374710B2 (ja) * | 2009-08-24 | 2013-12-25 | 北陸電力株式会社 | ゼニゴケの長鎖多不飽和脂肪酸の生産方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0273708B1 (en) * | 1986-12-26 | 1994-03-23 | Sagami Chemical Research Center | Process for production of eicosapentaenoic acid |
| JPS63185390A (ja) * | 1987-01-27 | 1988-07-30 | Suntory Ltd | 藻類によるエイコサペンタエン酸の製造方法 |
| JPH01243993A (ja) * | 1988-03-24 | 1989-09-28 | Suntory Ltd | 苔類の細胞培養によるエイコサペンタエン酸及びそれを含有する脂質の製造方法 |
| JPH0324018A (ja) * | 1989-06-22 | 1991-02-01 | Tosoh Corp | 脂質代謝改善剤 |
-
1990
- 1990-01-17 CH CH146/90A patent/CH680448A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1990-11-30 EP EP90122936A patent/EP0437710A1/fr not_active Withdrawn
- 1990-11-30 HU HU908018A patent/HUT61334A/hu unknown
- 1990-12-06 IL IL96584A patent/IL96584A0/xx unknown
- 1990-12-14 IE IE451290A patent/IE904512A1/en unknown
- 1990-12-19 CA CA002032648A patent/CA2032648A1/en not_active Abandoned
- 1990-12-19 NZ NZ236537A patent/NZ236537A/xx unknown
- 1990-12-24 AU AU68456/90A patent/AU622061B2/en not_active Ceased
-
1991
- 1991-01-03 ZA ZA9151A patent/ZA9151B/xx unknown
- 1991-01-03 NO NO91910018A patent/NO910018L/no unknown
- 1991-01-14 FI FI910175A patent/FI910175A/fi not_active Application Discontinuation
- 1991-01-16 PT PT96492A patent/PT96492A/pt not_active Application Discontinuation
- 1991-01-16 RU SU914894242A patent/RU2038377C1/ru active
- 1991-01-16 JP JP3003160A patent/JPH05111384A/ja not_active Withdrawn
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 1. ЕР N 0276982, кл. C 12P 7/64, 1987. * |
| 2. ЕР N 0276541, кл. C 12P 7/64, 1987. * |
| 3. ЕР N 0304049, кл. C 12P 7/64, 1989. * |
| 4. ЕР N 0277747, кл. C 12P 7/64, 1987. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2551779C2 (ru) * | 2009-03-18 | 2015-05-27 | Сантори Холдингз Лимитед | Новая ацетил-coa-карбоксилаза |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI910175A (fi) | 1991-07-18 |
| ZA9151B (en) | 1991-10-30 |
| AU622061B2 (en) | 1992-03-26 |
| NO910018D0 (no) | 1991-01-03 |
| IL96584A0 (en) | 1991-09-16 |
| FI910175A0 (fi) | 1991-01-14 |
| HUT61334A (en) | 1992-12-28 |
| AU6845690A (en) | 1991-07-18 |
| JPH05111384A (ja) | 1993-05-07 |
| CH680448A5 (ru) | 1992-08-31 |
| EP0437710A1 (fr) | 1991-07-24 |
| NZ236537A (en) | 1991-11-26 |
| CA2032648A1 (en) | 1991-07-18 |
| PT96492A (pt) | 1991-10-15 |
| IE904512A1 (en) | 1991-07-17 |
| NO910018L (no) | 1991-07-18 |
| HU908018D0 (en) | 1991-06-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5244921A (en) | Eicosapentaenoic acids and methods for their production | |
| Zittelli et al. | Production of eicosapentaenoic acid by Nannochloropsis sp. cultures in outdoor tubular photobioreactors | |
| Haraldsson et al. | The preparation of triglycerides highly enriched with ω-3 polyunsaturated fatty acids via lipase catalyzed interesterification | |
| Cohen et al. | Production and partial purification of γ-linolenic acid and some pigments from Spirulina platensis | |
| US20050250190A1 (en) | Crypthecodinium cohnii biomass cultured to synthesize docosahexaenoic acid | |
| RU2346033C2 (ru) | Способ непрерывного культивирования водорослей | |
| JP6480187B2 (ja) | ニツシア（Ｎｉｔｚｓｃｈｉａ）による混合栄養モードでのドコサヘキサエン酸および／またはエイコサペンタエン酸および／またはカロテノイドの産生 | |
| JP2015509733A (ja) | シゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）による混合栄養モードでのドコサヘキサエン酸及びアスタキサンチンの産生 | |
| RU2038377C1 (ru) | Способ получения полиненасыщенных жирных кислот | |
| JPH0418838B2 (ru) | ||
| CN105132485B (zh) | 一种裂殖壶菌发酵生产dha的方法 | |
| JPH0527384B2 (ru) | ||
| JPH08168392A (ja) | フィトスフィンゴシン誘導体の製造法 | |
| US4485173A (en) | Preparation of fats and oils | |
| US4485172A (en) | Multistage process for the preparation of fats and oils | |
| Miura et al. | Production of γ-linolenic acid from the marine green alga Chlorella sp. NKG 042401 | |
| KR20050053594A (ko) | 해조류 양식에서 지질 및 오메가-3 지방산의 수율을증가시키는 방법 | |
| KOSUGI et al. | Glyceride production from high free fatty acid rice bran oil using immobilized lipase | |
| US20110089370A1 (en) | Lipophilic Preparations | |
| JPH0431671B2 (ru) | ||
| CN116496967B (zh) | 一种提高微藻活性物质含量的促进剂及其应用 | |
| JPS639835B2 (ru) | ||
| Kim et al. | Growth promotion of Taxus brevifolia cell suspension culture using conditioned medium | |
| JPH0787959A (ja) | 海洋性微細藻類の培養方法 | |
| Cooksey et al. | Triglyceride accumulation and the cell cycle in microalgae |