JPH05111384A - 多価不飽和脂肪酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 本発明の目的は苔のような天然資源から大量
の多価不飽和脂肪酸を供することである。 【構成】 多価不飽和脂肪酸を製造するため、種ユルヒ
ンチウム ストリアツム、ブラチセシウム ルタブル
ム、ブラチセシウム サレブロスム、リチジアデルフア
ス スクアロサス、スクレロポジウム プルムおよびリ
チジアデルフアストリクエトルスから成る群から選択さ
れた苔の細胞を培養し、所望の化合物を、それから抽出
する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、例えばアラキドン酸又
はエイコサペンタエン酸のような多価不飽和脂肪酸の製
造方法に関する。

【０００２】多価不飽和脂肪酸は特にそれ等の顕著な特
性により、食品又化粧品工業において使用が増加してい
る。

【０００３】例えばアラキドン酸は、或種の細胞と生理
的機能の調整のための基本的な成分である、ロイコトリ
エンおよびプロスタグランジンの前駆物質として重要な
役割を演じる。エイコサペンタエン酸は血栓症または動
脈硬化の危険を防止するのに重要な役割を演じると思わ
れる。

【０００４】

【従来の技術】例えば多価不飽和脂肪酸はモルテイエレ
ラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）型の微生物を使用する酵
素反応によって、又は欧州特許第２７６５４１号明細書
に記載のような炭化水素と脂肪酸の存在下で同種微生物
の培養によっても製造することができることは、欧州特
許第２７６９８２号明細書から公知である。

【０００５】欧州特許第３０４０４９号明細書に記載さ
れている、不飽和脂肪酸の他の製造方法は、炭素源とし
て不飽和脂肪酸を含有する培地でコニジオボルス（Ｃｏ
ｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）型の微生物を培養するものであ
る。更に欧州特許第２７７７４７号明細書に記載されて
いる他の方法はコラリナ（Ｃｏｒａｌｌｉｎａ）型に属
する藻類からエイコサペンタエン酸を製造するものであ
る。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は苔のよ
うな天然資源から大量の多価不飽和脂肪酸を製造する簡
単な方法を供することである。

【０００７】この目的のために、本発明の方法はユルヒ
ンチウム、ストリアツム、ブラチセシウム ルタブル
ム、ブラチセシウム サレブロスム、リチジアデルファ
ス スクアロサス、スクレロポジウム プルムおよびリ
チジアデルフアス トリクエトルスから成る群から選択
された苔の細胞を培養し、それ等から所望の多価不飽和
脂肪酸を抽出することを特徴とする。

【０００８】本発明の１つの利点は、選択された苔の細
胞の安定した培養を可能にし、その培養は一定した生殖
可能な方法が所望の多価不飽和脂肪酸を生産することで
ある。

【０００９】本発明の他の利点は、一般に化粧品製品へ
の使用に特に適する糖脂質に付属する多価不飽和脂肪酸
を得ることが可能なことである。

【００１０】苔は一般に２つの部分、即ち一倍体又は配
偶体期および二倍体又は芽胞体期から成る。一倍体の胞
子は、成熟分列後の芽胞体によってつくられる。これ等
の胞子は発芽によって発生し、配偶体を生ずる。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明の方法を実施する
ため、胞子を含む胞子嚢を、特に胞子が成熟期である時
に、集収することができる。集収した胞子嚢を、例えば
塩化ナトリウムの希薄溶液中に浸漬し、続いてエタノー
ル中に速やかに浸漬しそして蒸留水ですすぐか、又はそ
れ等の表面にある微生物を除去することができる他の手
段によって殺菌することができる。

【００１２】殺菌した胞子嚢を開放することができ、そ
れ等の中にある胞子を、胞子の培養に使用する代表的な
培地、例えば好ましくは８から１２重量％に希釈したＭ
ｕｒａｓｈｉｇｅおよびＳｋｏｏｇ培地（Ｍｕｒａｓｈ
ｉｇｅ Ｔ．およびＳｋｏｏｇ Ｆ．，１９６２年，Ｐ
ｈｙｓｉｏｌ． Ｐｌａｎｔ．１５巻４７３−４９７
頁）上に接種することができる。例えば１から２重量％
の寒天を含有し、生長ホルモンおよびビタミンのない半
固形の培地を使用するのが望ましい。胞子はその培地上
で１から４ケ月間、好ましくは１５から３０℃の温度に
おいて、２０００から７０００ルックスの照明下で１４
から１８時間、続いて暗闇中で６から１０時間培養する
ことができ、その結果胞子は細胞に分化する。

【００１３】このようにして得た細胞を回収し、例えば
ＭｕｒｓｈｉｇｅおよびＳｋｏｏｇ培地のような液体培
地に接種することができる。この培地はそのまま使用し
て全脂質画分を増大させることができ、又はバイオマス
の蓄積を改良するため８から１２重量％に希釈すること
ができる。培地は生長ホルモンおよびビタミンがないの
が好ましいが、培地ｌ当たり２５ｇまでのグルコースを
含有することができる。例えば培地mlあたり０．１から
０．８mgの固形物の細胞を接種することができる。

【００１４】液体培地のpH値は、例えば組織培養に一般
に使用される生物学的緩衝液を添加して、５．５から
７．０の数値に調節することができる。このpH値の安定
化は細胞の迅速な分化およびバイオマスのより多くを生
産する。例えば０．０５から０．２重量％の２−モルホ
リノエタンスルホン酸を添加することができる。細胞
は、１５から３０℃の温度において２０００から７００
０ルックスの照明下で約１４から１８時間、続いて暗闇
中で６から１０時間、２から６週間にわたって培養する
ことができる。培地は例えば毎分１００から１２０回転
で回転する回転式攪拌機で、培養の全期間中又はその一
部分だけ攪拌することができる。

【００１５】培養の後に、細胞を例えば濾過又は遠心分
離により集収することができる。

【００１６】ついで集収した細胞を、例えば１から３重
量部のクロロホルムと１重量部のメタノールを含有する
溶液中、ヘキサン溶液中、又はイソプロパノール溶液
中、又はこれ等の化合物の混合物中で均質化することが
できる。抽出の前に、細胞を沸騰しているイソプロパノ
ール溶液中に２から６分間浸漬してリパーゼの活性を阻
止することができる。得られた抽出物は濾過により清澄
化し、ついで例えば回転式蒸発器で３５から４０℃にお
いて減圧下で乾燥することができる。このようにして得
た脂質画分は、所望の多価不飽和脂肪酸その他の脂肪酸
も含有する。

【００１７】脂質画分中にある種々の多価不飽和脂肪酸
は分離することができる。例えば塩化アセチルを使用し
てエステル交換反応を行って所望の多価不飽和脂肪酸の
メチルエステルを得ることができ、このようにして得た
メチルエステルを例えばヘキサンで抽出することができ
る。このようにして得たエステルは、例えば標準化合物
の既知の特徴と比較して気相クロマトグラフィーによっ
て、又は質量分析によって同定することができる。

【００１８】このようにして得た多価不飽和脂肪酸は食
品および／又は化粧品製品に使用することができる。

【００１９】

【実施例】本発明を次例中で更に詳細に説明する。

【００２０】例１ １００mgの固形物のリチジアデルフアス スフアロサス
の細胞を、成長ホルモンおよびビタミンが無くかつｌ当
たり１０ｇのグルコースを含有する１０重量％に希釈し
た２００mlＭｕｒａｓｈｉｇｅおよびＳｋｏｏｇ液体培
地に接種する。培地のpHは０．１重量％の２−モルホリ
ノエタンスルホン酸を添加して６．５に調節する。細胞
を２０℃において、５０００ルックスの照明下で１６時
間、続いて暗闇で８時間、毎分１１０回転で絶えず攪拌
しつつ培養を続ける。３週間の培養の後、懸濁液を濾過
し、８２０mgの細胞固形物を得る。

【００２１】得た細胞を８０から９０℃のイソプロパノ
ールの溶液に２分間浸漬し、ついで取り出す。次に細胞
を２部のクロロホルムと１部のメタノールを含有する溶
液に懸濁する。得た抽出物を濾過し、ついで回転式蒸発
器で、４０℃において、減圧下乾燥し、０．８８重量％
のＫＣｌ溶液で抽出することによって精製する。５２．
５mgの脂質画分、即ち最初の細胞固形物の６．４重量％
の脂質画分を得る。

【００２２】５２．５mgの脂質画分を塩化アセチルでエ
ステル交換し、生成されたメチルエステルをヘキサンで
抽出する。得たエステルを気相クロマトグラフィーによ
って分離し、標準化合物の質量スペクトルとそれ等の質
量スペクトルの比較によって固定する。

【００２３】次表中で脂肪酸エステルは炭素原子の数お
よび塩基性脂肪酸の二重結合の数および位置によって表
示する。

【００２４】メチルエステルの抽出物は、全ての上記の
脂質画分の脂肪酸をエステル化した形態で含有し、次の
組成物を重量％で有する。

【表１】 脂肪酸 エステル化した脂肪酸の全量に対する特定の酸 のエステル％ １６：０ １７．０ １６：１ ２．２ １８：０ ０．８ １８：１ １．６ １８：２ １６．４ １８：３（ｎ−６） ２．０ １８：３（ｎ−３） １６．７ ２０：３（ｎ−６） ５．７ ２０：４（ｎ−６） ３２．４ ２０：５（ｎ−３） ５．２ ５．８mgのアラキドン酸メチル（２０：４ ｎ−６）お
よび０．９８mgのエイコサペンタエン酸メチル（２０：
５ ｎ−３）を得る。

【００２５】例２ 種々の苔の固形物１００mgの細胞を、例１に記載したよ
うにＭｕｒａｓｈｉｇｅおよびＳｋｏｏｇ液体培地に接
種し、この培地は任意に希釈することができ、且つpH値
を０．１重量％の２−モルホリノエタンスルホン酸（Ｍ
ＥＳ酸）を添加して６．５に調節することができる。

【００２６】存在するアラキドン酸（ＡＡ）とエイコサ
ペンタエン酸の量は脂肪酸の全量に対するその特定の酸
の重量％（Ｉ）および苔細胞の固形物ｇ当りのmg（II）
で測定する。

【００２７】次の結果が得られる。

【表２】 各苔に使用する液体培地は、 − Ｂ．ルタブルム，Ｒ．トリクエトリスおよびＲ．ス
クアロサスについては、１０重量％に希釈し、ＭＥＳ酸
を含有するＭｕｒａｓｈｉｇｅおよびＳｋｏｏｇ培地
（pH６．５）であり − Ｂ．サレブロスムについては、ＭＥＳ酸を含有する
希釈してないＭｕｒａｓｈｉｇｅおよびＳｋｏｏｇ培地
（pH６．５）であり、 − Ｓ．プルムについては、希釈してないＭｕｒａｓｈ
ｉｇｅおよびＳｋｏｏｇ培地（pH５．８）であり − Ｅ．ストリアツムについては、１０重量％に希釈し
たＭｕｒａｓｈｉｇｅおよびＳｋｏｏｇ培地（pH５．
８）である。

【００２８】例３ 固形物２０ｇのＲ．スクアロサス細胞を、ホルモンおよ
びビタミンのない、ｌ当り１０ｇのグルコースを含有
し、pH＝５．８のＭｕｒａｓｈｉｇｅおよびＳｋｏｏｇ
液体培地４０mlに接種する。細胞を２０℃において５０
００ルックスの照明下で１６時間、続いて暗闇中で８時
間、毎分１１０回転で一定に攪拌しながら培養する。３
週間の培養の後、懸濁液を濾過し、３０mgの細胞固形物
を得る。

【００２９】得られた細胞を８０から９０℃のイソプロ
パノールの溶液に２分間浸漬し、ついで取り出す。細胞
を２部のクロロホルムと１部のメタノールを含有する溶
液中で懸濁する。抽出物を濾過し、乾燥し、例１に記載
したと同様に精製し、４．７mgの脂質画分、即ち最初の
細胞の乾物量の１５．６重量％を得る脂質画分を塩化ア
セチルでエステル交換し、メチルエステルをヘキサンで
抽出する。分離の後、０．４０mgのアラキドン酸メチ
ル、即ち１３．２mg／ｇの細胞固形物および０．０６mg
のエイコサペンタエン酸メチル即ち２．１mg／ｇの細胞
固形物を得る。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 種ユルヒンチウム ストリアツム（Ｅｕ
   ｒｈｙｎｃｈｉｕｍＳｔｒｉａｔｕｍ）、ブラチセシウ
   ム ルタブラム（Ｂｒａｃｈｙｔｈｅｃｉｕｍ ｒｕｔ
   ａｂｕｌｕｍ）、ブラチセシウム サレブロスム（Ｂｒ
   ａｃｈｙｔｈｅｃｉｕｍ ｓａｌｅｂｒｏｓｕｍ）、リ
   チジアデルフアス スクアロサス（Ｒｈｙｔｉｄｉａｄ
   ｅｌｐｈｕｓ ｓｑｕａｒｒｏｓｕｓ）、スクレロポジ
   ウムプルム（Ｓｃｌｅｒｏｐｏｄｉｕｍ ｐｕｒｕｍ）
   およびリチジアデルフアストリクエトリス（Ｒｈｕｔｉ
   ｄｉａｄｅｌｐｈｕｓ ｔｒｉｑｕｅｔｒｕｓ）から成
   る群から選択された苔の細胞を培養し、ついで所望の多
   価不飽和脂肪酸をそこから抽出することを特徴とする、
   多価不飽和脂肪酸の製造方法。
2. 【請求項２】 胞子を１５から３０℃において２０００
   から７０００ルックスの照明下で１４から１８時間、続
   いて暗闇中で６から１０時間の繰返しで１から４ケ月間
   にわたって半固形培地上で培養して苔細胞を得る、請求
   項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 細胞を液体培地上で１５から３０℃にお
   いて２０００から７０００ルックスの照明下で１４から
   １８時間、続いて暗闇中で６から１０時間、２から６週
   間にわたって培養する、請求項１に記載の方法。
4. 【請求項４】 液体培地のpHを５．５から７．０に調節
   する、請求項３に記載の方法。
5. 【請求項５】 ｐＨを０．０５から０．２重量％の２−
   モルホリノエタンスルホン酸の添加によって調節する、
   請求項４に記載の方法。
6. 【請求項６】 培地は任意に８から１２重量％に希釈し
   たＭｕｒａｓｈｉｇｅおよびＳｋｏｏｇ培地である、請
   求項２または３に記載の方法。
7. 【請求項７】 液体培地は生長ホルモンおよびビタミン
   がなく、ｌ当たり０から２５ｇのグルコースを含有す
   る、請求項３に記載の方法。
8. 【請求項８】 クロロホルム、メタノール、イソプロパ
   ノール、ヘキサンまたはこれ等の化合物の混合物により
   多価不飽和脂肪酸を細胞から抽出する、請求項１に記載
   の方法。
9. 【請求項９】 食品および／又は化粧品製品中へ、請求
   項１に記載の方法によって得た多価不飽和脂肪酸の使
   用。