HUT61334A - Process for producing multiply unsaturated fatty acids - Google Patents
Process for producing multiply unsaturated fatty acids Download PDFInfo
- Publication number
- HUT61334A HUT61334A HU908018A HU801890A HUT61334A HU T61334 A HUT61334 A HU T61334A HU 908018 A HU908018 A HU 908018A HU 801890 A HU801890 A HU 801890A HU T61334 A HUT61334 A HU T61334A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- cells
- medium
- fatty acids
- hours
- weight
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 10
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 title description 3
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 title description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 claims description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 11
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 11
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 5
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 5
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 5
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 125000005313 fatty acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 12
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 8
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 description 7
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 description 7
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 7
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 6
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 6
- 241000518454 Rhytidiadelphus squarrosus Species 0.000 description 4
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 4
- 241000184277 Eurhynchium striatum Species 0.000 description 3
- 241001600662 Pseudoscleropodium purum Species 0.000 description 3
- 241001136234 Rhytidiadelphus triquetrus Species 0.000 description 3
- WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N acetyl chloride Chemical compound CC(Cl)=O WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012346 acetyl chloride Substances 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- -1 fatty acid esters Chemical class 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 241000518474 Brachythecium rutabulum Species 0.000 description 2
- 241001600678 Brachythecium salebrosum Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000712 G cell Anatomy 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QWDCYFDDFPWISL-UHFFFAOYSA-N UNPD207407 Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(=O)OC QWDCYFDDFPWISL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- OFIDNKMQBYGNIW-UHFFFAOYSA-N arachidonic acid methyl ester Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(=O)OC OFIDNKMQBYGNIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- QWDCYFDDFPWISL-JEBPEJKESA-N cis-5,8,11,14,17-eicosapentaenoic acid methyl ester Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)OC QWDCYFDDFPWISL-JEBPEJKESA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- OFIDNKMQBYGNIW-ZKWNWVNESA-N methyl arachidonate Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)OC OFIDNKMQBYGNIW-ZKWNWVNESA-N 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001480517 Conidiobolus Species 0.000 description 1
- 241001491638 Corallina Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 241000235575 Mortierella Species 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000006177 biological buffer Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6458—Glycerides by transesterification, e.g. interesterification, ester interchange, alcoholysis or acidolysis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás többszörösen telítetlen zsírsavak - például arachidonsav vagy ejkozapentaénsav - előállítására .
A többszörösen telítetlen zsírsavakat egyre szélesebb körben alkalmazzák az élelmiszer- és kozmetikai iparban, figyelemreméltó tulajdonságaiknak köszönhetően.
Az arachidonsav például a bizonyos sejtek és fiziológiai funkciók szabályozásában nélkülözhetetlen leukotriének és prosztaglandinok prekurzoraként játszik fontos szerepet. Az ejkozapentaénsav úgy tűnik, hogy jelentős szerepet játszik a trombózis vagy érelmeszesedés veszélyének elhárításában.
Többek között a 276 982 számú európai szabadalmi leírásból ismert, hogy a többszörösen telítetlen zsírsavakat enzimatikus reakcióval lehet előállítani, Mortierella tipusu mikroorganimusokat használva, és úgy is, hogy a fenti mikroorganizmust szénhidrogének vagy zsírsavak jelenlétében tenyésztik, amint azt a 276 541 számú európai szabadalmi leírásban ismertetik.
A telítetlen zsírsavak előállításának másik módja
- amelyet a 304 049 számú európai szabadalmi leírásban ismertetnek - az, hogy Conidiobolus tipusu mikroorganizmust szénforrásként telítetlen zsírsavat tartalmazó tápközegben tenyésztenek. A 277 747 számú európai szabadalmi leírásban ismertetett másik eljárás szerint az ejkozapentaénsavat Corallina tipusu algákból állítják elő.
A találmány célja olyan egyszerű eljárás kidolgozása, amely alkalmas többszörösen telítetlen zsírsavak nagy mennyiségeinek előállítására természetes forrásokból, például mohafélék
- 3 bői.
A találmány szerinti eljárásnak megfelelően, Eurhynchium striatum, Brachythecium rutabulum, Brachythecium salebrosum, Rhytidiadelphus squarrosus, Scleropodium purum vagy Rhytidiadelphus triquetrus speciesbe tartozó mohasejteket tenyésztünk, és a többszörösen telítetlen zsírsavakat a tenyészetből extraháljuk.
A találmány szerinti eljárás egyik előnye, hogy a választott mohaféle sejtjeiből stabil tenyészetek nyerhetők, amelyek állandó és reprodukálható módon termelik a kívánt többszörösen telítetlen zsírsavakat.
A találmány szerinti eljárás másik előnye, hogy azzal a többszörösen telítetlen zsírsavak általában glikolipidekhez kapcsolva állíthatók elő, ami különösen előnyös a kozmetikai ipari alkalmazásra.
A mohafélék általában két részből tevődnek össze, mégpedig egy haploid vagy gametofit szakaszból és egy diploid vagy sporofit szakaszból. A haploid spórákat a sporofit termeli a felező osztódást (meiosis) követően. Ezek a spórák csírázással fejlődhetenek gametofítté.
A találmány szerinti eljárás kivitelezésére a fenti spórákat tartalmazó kapszulákat összegyűjtjük, előnyösen akkor, amikor a spórák érett fázisban vannak. Az összegyűjtött kapszulákat sterilizálhatjuk, például híg nátrium-klorid-oldatba merítéssel, majd gyorsan etanolba merítéssel, és desztillált vizes mosással, vagy bármely egyéb módszerrel, amely a felületükön lévő csirák eltávolítására alkalmas.
A sterilizált kapszulákat felnyithatjuk, és a ben
- 4 nük lévő spórákat spóratenyésztésre szokásosan használt tápközegre helyezzük. A fenti tápközeg például Murashige és Skoog tápközeg lehet /Murashige T. és Skoog F. Physiol. Plánt 15, 473-497 (1962)7, előnyö sen 8-12 tömeg%-ra hígítva. Előnyösen félszilárd tápközeget használunk, amely például 1-2 tömeg% agart tartalmaz, és növekedési hormonoktól és vitaminoktól mentes. A spórákat 1-4 hónapon keresztül tenyésztjük a fenti tápközegen, előnyösen 15 - 30 °C-on, 14 - 18 órán keresztül 2000 -
- 7000 lux fénnyel megvilágítva, amelyet 6-10 órán keresztül tartó sötét periódus követ, igy a spórák sejtekké fejlődhetnek.
Az igy kapott sejteket összegyűjtjük és folyékony tápközegbe oltjuk, például Murashige és Skoog tápközegbe. A fenti tápközeget mint olyat használhatjuk az összlipid-frakció növelésére, vagy 8-12 tömeg%-ra hígítva növelhetjük a biomassza felhalmozódást. A tápközeg előnyösen nem tartalmaz növekedési hormonokat és vitaminokat, azonban literenként 0 - 25 g glükózt tartalmazhat. A tápközeg 1 ml-ét például 0,1 - 0,8 mg száraz tömegű sejttel olthatjuk be.
A folyékony tápközeg pH-értékét 5,5 és 7,0 közötti tartományba állíthatjuk, például a szövettenyészetekben szokásosan használt biológiai pufferoldatok hozzáadásával. A pH-érték stabilizálása biztosítja a sejtek gyors differenciálódását és nagyobb tömegű biomassza keletkezését. így például 0,05 -
- 0,2 tömeg% 2-morfolino-etánszulfonsavat adhatunk a tápközeghez. A sejteket 2-6 héten keresztül 15 - 30 °C-on inkubálhatjuk 14 - 18 órán keresztül 2000 - 7000 lux fénnyel megvilágítva, majd 6-10 órán keresztül sötétben. A tápközeget folyamatosan vagy időnként keverhetjük az inkubálás alatt, például tápközegbe oltunk, amely növekedési hormonoktól és vitaminoktól mentes, és literenként 10 g glükózt tartalmaz. A tápközeg pH-ját 0,1 tömeg% 2-morfolino-etánszulfonsav hozzáadásával 6,5-re állítjuk. A sejteket 20 °C-on inkubáljuk, 16 órán keresztül 5000 lux-szal megvilágítva, majd 8 órán kerersztül sötétben, 110 fordulat/perc állandó keverés közben.
A sejteket 3 héten keresztül inkubáljuk, majd a szuszpenziót szűrjük. 820 mg száraz tömegű sejtet kapunk.
A kapott sejteket 2 percen keresztül 80 - 90 °C-os izopropanolba merítjük, majd kivesszük. A sejteket ezután 2 tömegrész kloroform és 1 tömegrész metanol elegyében szuszpendáljuk. A kapott extraktumot szűrjük, majd rotációs bepárlóval 40 °C-on vákuumban szárítjuk, és 0,88 tömeg%-os káliun-klorid-oldattal extrahálva tisztítjuk. 52,5 mg lipid-frakciót kapunk, ami a kiindulási sejtek száraz tömegének 6,4 tömeg%-a.
Az 52,5 mg lipidet acetil-kloriddal átészterezzük, és az igy kapott metil-észtereket hexánnal extraháljuk. A kapott észtereket gázfázisú kromatográfiás eljárással elválasztjuk és többek között tömegspektrumuk alapján azonosítjuk, standard vegyületek tömegspektrumával összehasonlítva.
Az alábbi táblázatban a zsírsav-észtereket as alapzsírsav szénatomjainak számával, és a kettős-kötések számának és helyzetének megadásával jelöljük.
A metil-észter extraktum a lipid-frakció minden zsirsavját tartalmazza észterezett formában, és összetétele tömeg%-ban az alábbi.
• ·
- 5 100 - 200 fordulat/perc sebességgel forgó keverővei.
Az inkubálás befejeztével a sejteket például szűréssel vagy centrifugálással gyüjthetjük össze.
Az összegyűjtött sejteket ezután homogenizálhatjuk, például 1-3 tömegrész kloroform és 1 tömegrész metanol elegyében, vagy hexánban vagy izopropanolban, vagy ezek elegyeiben. Az extrahálás előtt a sejteket a lipázok aktivitásának gátlására 2 - 6 percen keresztül forró izopropanolba meríthetjük. A kapott extraktumot szűréssel deríthetjük, majd szárítjuk, például rotációs bepárló segítségével 35 - 40 °C-on, vákuumban. Az igy kapott lipid-frakció tartalmazza a kívánt többszörösen telítetlen zsírsavak mellett az egyéb zsírsavakat is.
A lipid-frakcióban lévő különféle többszörösen telítetlen zsírsavakat egymástól elválaszthatjuk. Például acetil-kloriddal átészterezést végezhetünk, és a többszörösen telítetlen zsírsavak igy kapott metil-észtereit például hexánnal extrahálhatjuk. A kapott észtereket például gázfázisú kromatográfiás eljárással azonosíthatjuk, megfelelő standard vegyületeket alkalmazva összehasonlító anyagként, vagy tömegspektrometriás eljárással .
Az igy kapott többszörösen telítetlen zsírsavakat az élelmiszer- és kozmetikai iparban használhatjuk.
A találmányt közelebbről az alábbi példákkal kívánjuk ismertetni.
1. példa
100 mg száraz tömegű Rhytidiadelphus squarrosus sejtet 200 ml, 10 tömegára hígított Murashige és Skoog folyékony
| Zsírsav | Zsirsav-észter mennyisége az összes zsírsav-észterhez viszonyítva (%) |
| 16:0 | 17,0 |
| 16:1 | 2,2 |
| 18:0 | 0,8 |
| 18:1 | 1,5 |
| 18:2 | 16,4 |
| 18:3 (n-6) | 2,0 |
| 18:3 (n-3) | 16,7 |
| 20:3 (n-6) | 5,7 |
| 20:4 (n-6) | 32,4 |
| 20:5 (n-3) | 5,2 |
5,8 mg metil-arachidonátot (20:4, n-6) és 0,98 mg metil-ejkozapentaénoátot (20:5, n-3) kapunk.
2. példa
Különféle mohafélék sejtjeiből 100 mg szárazanyagnak megfelelő mennyiségeket oltunk az 1. példa szerinti Murashige és Skoog folyékony tápközegbe, amelyet adott esetben hígítunk, és amelynek pH-értékét 0,1 tömegé 2-morfolino-etánszulfonsavval hozzáadásával 6,5-re állíthatjuk.
Az arachidonsav (AA) és ejkozapentaénsav (EPA) menynyiségét tömeg%-ban határozzuk meg az összes zsírsavakhoz viszonyítva (I), és mg/g mohasejt-szárazanyagban (II), az eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze.
• ·
| Mohaféle | I (%) | II (mg/g) | |||
| AA | EPA | AA | EPA | ||
| B. | rutabulum | 40,1 | 4,7 | 7,4 | 0,9 |
| B. | salebrosum | 32,2 | 4,1 | 16,7 | 2,1 |
| R. | triquetrus | 20,2 | 2,0 | 4,8 | 0,5 |
| R. | squarrosus | 32,4 | 5,2 | 7,1 | 1,2 |
| s. | purum | 41,5 | 2,6 | 16,5 | 1,0 |
| E. | striatum | 33,6 | 2,7 | 7,0 | 0,6 |
Az egyes mohaféléket az alábbi tápközegekben tenyésztettük:
- B. rutabulum, R. triquetrus és R.squarrosus: 10 tömeg%-ra hígított Murashige és Skoog tápközeg, amely 2-morfolino-etánszulfonsavat tartalmaz (pH 6,5)
- B. salebrosum: higitatlan Murashige és Skoog tápközeg, amely 2-morfolino-etánszulfonsavat tartalmaz (pH 6,5)
- S. purum: higitatlan Murashige és Skoog tápközeg (pH 5,8)
- E. striatum: 10 tömeg%-ra hígított Murashige és Skoog tápközeg (pH 5,8).
3. példa
R. squarrosus sejtekből 20 g szárazanyagot 40 ml, hormonoktól és vitaminoktól mentes, 10 g/1 glükózt tartalmazó Murashige és Skoogs tápközegbe (pH 5,8) oltunk. A sejteket 20 °C-on inkubáljuk, 16 órán keresztül 5000 lux-szal megvilágítva, majd 8 órán keresztül sötétben, 110 fordulat/perc állandó keverés közben, 3 héten keresztül. Ezután a szuszpenziót szürjük.
mg szárazanyagot tartalmazó sejttömeget kapunk.
- 9 A kapott sejteket 2 percre 80 - 90 °C-os izopropanololdatba merítjük, majd kivesszük. A sejteket 2 rész kloroform és 1 rész metanol elegyében szuszpendáljuk. Az extraktumot szűrjük, szárítjuk és az 1. példában leírt módon tisztítjuk. 4,7 mg lipid-frakciót kapunk, amely a kiindulási szárazanyagra vonatkoztatva 15,6 %.
A lipid-f rakciót acetil-kloilddal át észterezzük és a metil-észtereket hexánnal extraháljuk. 0,4 mg metil-arachidonátot (13,2 mg/g sejt-szárazanyag) és 0,06 mg metil-ejkozapentaénoátot (2,1 mg/g sejt-szárazanyag) kapunk, az észterek elválasztása után.
Claims (8)
- Szabadalmi igénypontok1. Eljárás többszörösen telítetlen zsírsavak előál- lítására, azzal jellemezve, hogy Eurhynchium striatum, Brachythecium rutabulum, Brachythecium salebrosum, Rhytidiadelphus squarrosus, Scleropodium purum vagy Rhytidiadelphus triquetrus fajba tartozó mohafélék sejtjeit tenyésztjük és a kívánt többszörösen telítetlen zsírsavakat a tenyészetből extraháljuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jel- lemezve , hogy a mohefélék sejtjeit 15 - 30 °C-on, 14-18 órán keresztül 2000 - 7000 lux megvilágítás mellett, majd 6-10 órán keresztül sötétben tenyésztjük, félszilárd tápközegen, 1-4 hónapon keresztül.
- 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy a sejteket folyékony tápközegben, 15 - 30 °C-on, 2000 - 7000 lux megvilágítás mellett 14 - 18 órán keresztül, majd sötétben 6-10 órán keresztül tenyésztjük, 2-6 héten át.
- 4. A 3· igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a folyékony tápközeg pH-ját 5,5 - 7,0 értékre állítjuk.
- 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy a pH-t 0,05 - 0,2 tömeg% 2-morfolino-etánszulfonsav hozzáadásával állítjuk be.«·«· ···* ·«·· • · · • ··· ··· · • « · · · · ·· ·· ··· ·
- 6. A 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tápközegként adott esetben S - 12 tömeg%-ra hígított Murashige és Skoog tápközeget használunk .es
- 7. A 3. igénypont mezve, hogy a folyékony vitaminoktól mentes, és 0 szerinti tápközeg25 g/1 eljárás, azzal jelnövekedési hormonoktól glükózt tartalmaz.
- 8. Az 1.igénypont szerinti eljárás, azzal mezve, hogy a többszörösen telítetlen zsírsavakat a sejtekből kloroformmal , metanollal, izopropanollal, hexánnal ezek elegyeivel extraháljuk.oldoLA meghatalmazott:
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH146/90A CH680448A5 (hu) | 1990-01-17 | 1990-01-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU908018D0 HU908018D0 (en) | 1991-06-28 |
| HUT61334A true HUT61334A (en) | 1992-12-28 |
Family
ID=4180300
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU908018A HUT61334A (en) | 1990-01-17 | 1990-11-30 | Process for producing multiply unsaturated fatty acids |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0437710A1 (hu) |
| JP (1) | JPH05111384A (hu) |
| AU (1) | AU622061B2 (hu) |
| CA (1) | CA2032648A1 (hu) |
| CH (1) | CH680448A5 (hu) |
| FI (1) | FI910175A (hu) |
| HU (1) | HUT61334A (hu) |
| IE (1) | IE904512A1 (hu) |
| IL (1) | IL96584A0 (hu) |
| NO (1) | NO910018L (hu) |
| NZ (1) | NZ236537A (hu) |
| PT (1) | PT96492A (hu) |
| RU (1) | RU2038377C1 (hu) |
| ZA (1) | ZA9151B (hu) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1284345B (de) * | 1961-07-14 | 1968-11-28 | Laeis Werke Ag | Verfahren zum Formen von als Ringabschnitte gestalteten Futtersteinen fuer Giesspfannen, OEfen od. dgl. und Presse zum Durchfuehren des Verfahrens |
| JP2700741B2 (ja) * | 1992-03-24 | 1998-01-21 | 財団法人平岡環境科学研究所 | 培養種を用いたコケ類の栽培方法 |
| ATE327340T1 (de) * | 1997-02-20 | 2006-06-15 | Dsm Ip Assets Bv | Fermentative herstellung von wertstoffen in industriellem umfang durch verwendung von chemisch definierten media |
| WO2001038541A1 (en) * | 1999-11-25 | 2001-05-31 | Basf Plant Science Gmbh | Moss genes from physcomitrella patents encoding proteins involved in the synthesis of polyunsaturated fatty acids and lipids |
| WO2010107070A1 (ja) * | 2009-03-18 | 2010-09-23 | サントリーホールディングス株式会社 | 新規なアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ |
| JP5374710B2 (ja) * | 2009-08-24 | 2013-12-25 | 北陸電力株式会社 | ゼニゴケの長鎖多不飽和脂肪酸の生産方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2061519T3 (es) * | 1986-12-26 | 1994-12-16 | Sagami Chem Res | Procedimiento para la produccion de acido eicosapentaenoico. |
| JPS63185390A (ja) * | 1987-01-27 | 1988-07-30 | Suntory Ltd | 藻類によるエイコサペンタエン酸の製造方法 |
| JPH01243993A (ja) * | 1988-03-24 | 1989-09-28 | Suntory Ltd | 苔類の細胞培養によるエイコサペンタエン酸及びそれを含有する脂質の製造方法 |
| JPH0324018A (ja) * | 1989-06-22 | 1991-02-01 | Tosoh Corp | 脂質代謝改善剤 |
-
1990
- 1990-01-17 CH CH146/90A patent/CH680448A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1990-11-30 HU HU908018A patent/HUT61334A/hu unknown
- 1990-11-30 EP EP90122936A patent/EP0437710A1/fr not_active Withdrawn
- 1990-12-06 IL IL96584A patent/IL96584A0/xx unknown
- 1990-12-14 IE IE451290A patent/IE904512A1/en unknown
- 1990-12-19 CA CA002032648A patent/CA2032648A1/en not_active Abandoned
- 1990-12-19 NZ NZ236537A patent/NZ236537A/xx unknown
- 1990-12-24 AU AU68456/90A patent/AU622061B2/en not_active Ceased
-
1991
- 1991-01-03 ZA ZA9151A patent/ZA9151B/xx unknown
- 1991-01-03 NO NO91910018A patent/NO910018L/no unknown
- 1991-01-14 FI FI910175A patent/FI910175A/fi not_active Application Discontinuation
- 1991-01-16 RU SU914894242A patent/RU2038377C1/ru active
- 1991-01-16 PT PT96492A patent/PT96492A/pt not_active Application Discontinuation
- 1991-01-16 JP JP3003160A patent/JPH05111384A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05111384A (ja) | 1993-05-07 |
| NZ236537A (en) | 1991-11-26 |
| NO910018D0 (no) | 1991-01-03 |
| IL96584A0 (en) | 1991-09-16 |
| AU6845690A (en) | 1991-07-18 |
| FI910175A0 (fi) | 1991-01-14 |
| EP0437710A1 (fr) | 1991-07-24 |
| FI910175A (fi) | 1991-07-18 |
| CA2032648A1 (en) | 1991-07-18 |
| HU908018D0 (en) | 1991-06-28 |
| ZA9151B (en) | 1991-10-30 |
| RU2038377C1 (ru) | 1995-06-27 |
| CH680448A5 (hu) | 1992-08-31 |
| NO910018L (no) | 1991-07-18 |
| PT96492A (pt) | 1991-10-15 |
| AU622061B2 (en) | 1992-03-26 |
| IE904512A1 (en) | 1991-07-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5244921A (en) | Eicosapentaenoic acids and methods for their production | |
| US5407957A (en) | Production of docosahexaenoic acid by dinoflagellates | |
| JP6226601B2 (ja) | 微生物油の調製 | |
| JPH08214893A (ja) | アラキドン酸の生成方法 | |
| KR20060097009A (ko) | 변형량의 염소 및 칼륨을 사용하는 미세조류 중에 고농도디에치에이의 생산 | |
| JP3354582B2 (ja) | オメガ９系高度不飽和脂肪酸およびこれを含有する脂質の製造方法 | |
| JPS59118090A (ja) | ロウ・エステル、高級脂肪アルコ−ルおよび高級脂肪酸の製造法 | |
| CN105132485B (zh) | 一种裂殖壶菌发酵生产dha的方法 | |
| JPH08168392A (ja) | フィトスフィンゴシン誘導体の製造法 | |
| HUT61334A (en) | Process for producing multiply unsaturated fatty acids | |
| JP2004519231A (ja) | 培養培地に適切な前駆体分子を加えることによる、繊毛虫培養物からのγ−リノレン酸の製造方法 | |
| JPH0527384B2 (hu) | ||
| Schindler | Terpenoids by microbial fermentation | |
| Yamada et al. | Biotechnological processes for production of poly-unsaturated fatty acids | |
| US8652814B2 (en) | Method for production of DHA-containing phospholipid through microbial fermentation | |
| US20110089370A1 (en) | Lipophilic Preparations | |
| JP3899397B2 (ja) | 微生物による標識高度不飽和脂肪酸の製造方法 | |
| EP0271432B1 (de) | Racematspaltung von 3-Acyloxy-Bicyclo[3.3.0]octan-7-on-2-carbonsäureestern durch stereospezifische enzymatische oder mikrobiologische Acylat-Hydrolyse | |
| KOSUGI et al. | Glyceride production from high free fatty acid rice bran oil using immobilized lipase | |
| Mangold | The common and unusual lipids of plant cell cultures | |
| JPH0775556A (ja) | ドコサヘキサエン酸含有藻類の培養法 | |
| JPH04248982A (ja) | 高度不飽和脂肪酸含有光合成細菌の製造法 | |
| GB2091285A (en) | Multistage process for the preparation of fats and oils | |
| JP2000014392A (ja) | 高度不飽和脂肪酸含有グリセリドの製造方法 | |
| JPH11243981A (ja) | アラキドン酸及び／又はエイコサペンタエン酸含有油脂の製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC4 | Cancellation of temporary protection due to refusal |