RU2017129598A - ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ФЕРМЕНТОВ, АКТИВНЫХ В ШИРОКОМ ДИАПАЗОНЕ ЗНАЧЕНИЙ pH, В КАЧЕСТВЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ ПИЩЕВАРЕНИЯ - Google Patents

Claims (27)

1. Комбинация двух или более ферментов липазы, отличающаяся тем, что по меньшей мере один фермент липазы имеет pH-оптимум при кислотном значении pH, тогда как по меньшей мере один другой фермент липазы имеет pH-оптимум при щелочном значении pH.

2. Комбинация двух или более ферментов липазы по п. 1, отличающаяся тем, что липолитическую активность по меньшей мере одного фермента липазы определяют с помощью теста Никсона или титриметрического теста.

3. Комбинация двух или более ферментов липазы по любому из пп. 1-2, отличающаяся тем, что по меньшей мере один фермент липазы представляет собой фермент липазы, кодируемый, экспрессируемый и/или продуцируемый организмом инфузории.

4. Комбинация двух или более ферментов липазы по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что по меньшей мере один фермент липазы представляет собой фермент липазы по п. 3, который модифицирован путем направленного или случайного мутагенеза и последующего отбора.

5. Комбинация двух или более ферментов липазы по любому из пп. 1-4, отличающаяся тем, что один фермент липазы имеет pH-оптимум при значении pH, которое возникает в желудке млекопитающего, тогда как по меньшей мере один другой фермент липазы имеет pH-оптимум при значении pH, которое возникает в нижнем отделе тонкого кишечника млекопитающего.

6. Комбинация двух или более ферментов липазы по любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что один фермент липазы имеет pH-оптимум при значении pH в диапазоне pH ≥ 1 и ≤ 6.

7. Комбинация двух или более ферментов липазы по любому из пп. 1-6, отличающаяся тем, что один фермент липазы имеет pH-оптимум при значении pH в диапазоне pH ≥ 8 и ≤ 11.

8. Комбинация двух или более ферментов липазы по любому из пп. 1-7, отличающаяся тем, что по меньшей мере две липазы содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из:

c) SEQ ID No 4-6 и/или их фракции, варианты, гомологи или производные,

d) аминокислотные последовательности, имеющие идентичность последовательности по меньшей мере 70%, предпочтительно 95% с любой из SEQ ID No 4-6.

9. Фармацевтический препарат, содержащий комбинацию двух или более ферментов липазы по любому из пп. 1-8.

10. Применение комбинации двух или более ферментов липазы по любому из пп. 1-8 или фармацевтического препарата по п. 9 для:

- лечения дефицита переваривания липидов и/или нарушения пищеварения, или

- изготовления лекарственного средства для лечения дефицита переваривания липидов и/или нарушения пищеварения.

11. Применение по п. 10, в котором нарушение пищеварения представляет собой экзокринную недостаточность поджелудочной железы.

12. Способ получения комбинации двух или более ферментов липазы по любому из пп. 1-8 или фармацевтического препарата по п. 9, который включает этапы:

c) экспрессии двух или более ферментов липазы в одной или более подходящих системах получения и

d) очистки двух или более ферментов липазы, экспрессированных на этапе а).

13. Способ по п. 12, в котором по меньшей мере один фермент липазы получается путем гомологичной экспрессии в организме инфузории.

14. Способ по любому из пп. 12-13, в котором по меньшей мере один фермент липазы получается путем сверхэкспрессии, предпочтительно путем гомологичной сверхэкспрессии.

15. Две или более молекулы нуклеиновой кислоты, выбранные из группы, состоящей из:

a) по меньшей мере одной молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, представленную как SEQ ID No 1-3,

b) по меньшей мере одной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID No 4-6,

c) по меньшей мере одной молекулы нуклеиновой кислоты, которая представляет собой фракцию, вариант, гомолог или производное молекул нуклеиновой кислоты из а)-b),

d) по меньшей мере одной молекулы нуклеиновой кислоты, которая является дополнением к любой из молекул нуклеиновой кислоты из а)-с) или способна гибридизоваться с ней в жестких условиях,

e) по меньшей мере одной молекулы нуклеиновой кислоты, которая содержит по сравнению с любой из молекул нуклеиновой кислоты из а)-d) по меньшей мере одно молчащее нуклеотидное замещение, молекулу нуклеиновой кислоты в соответствии с а) и с)-е), которая является кодом, оптимизированным для протозойного хозяина экспрессии, и/или

f) по меньшей мере одной молекулы нуклеиновой кислоты, имеющей идентичность последовательности, по меньшей мере, 70%, предпочтительно 95% с любой из молекул нуклеиновой кислоты из а)-f).