RU2017124909A - Способы и композиции для нацеленной генетической модификации посредством одноэтапного множественного нацеливания - Google Patents

Способы и композиции для нацеленной генетической модификации посредством одноэтапного множественного нацеливания Download PDF

Info

Publication number
RU2017124909A
RU2017124909A RU2017124909A RU2017124909A RU2017124909A RU 2017124909 A RU2017124909 A RU 2017124909A RU 2017124909 A RU2017124909 A RU 2017124909A RU 2017124909 A RU2017124909 A RU 2017124909A RU 2017124909 A RU2017124909 A RU 2017124909A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
polynucleotide insert
ltvec
cell
paragraphs
homologous
Prior art date
Application number
RU2017124909A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2707137C2 (ru
RU2017124909A3 (ru
Inventor
Вера ВОРОНИНА
Линн МАКДОНАЛЬД
Брайан ЗАМБРОВИЦ
Эндрю Дж. МЕРФИ
Original Assignee
Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Регенерон Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Publication of RU2017124909A publication Critical patent/RU2017124909A/ru
Publication of RU2017124909A3 publication Critical patent/RU2017124909A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2707137C2 publication Critical patent/RU2707137C2/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A01K67/0276—Knock-out vertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A01K67/0278—Knock-in vertebrates, e.g. humanised vertebrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
    • C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/072—Animals genetically altered by homologous recombination maintaining or altering function, i.e. knock in
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Claims (77)

1. Способ модификации целевого геномного локуса в клетке, включающий в себя:
(a) введение в клетку нуклеазного агента, который осуществляет одно- или двухцепочечный разрыв в пределах целевого геномного локуса;
(b) введение в клетку первого большого нацеливающего вектора (LTVEC), который имеет длину по меньшей мере 10 т.п.н. и содержит первую полинуклеотидную вставку, фланкированную первым 5' гомологичным плечом и первым 3' гомологичным плечом, и второго LTVEC, который имеет длину по меньшей мере 10 т.п.н. и содержит вторую полинуклеотидную вставку, фланкированную вторым 5' гомологичным плечом и вторым 3' гомологичным плечом,
причем первое 3' гомологичное плечо первого LTVEC имеет первую перекрывающуюся последовательность, гомологичную второму 5' гомологичному плечу второго LTVEC, и первое 5' гомологичное плечо первого LTVEC и второе 3' гомологичное плечо второго LTVEC гомологичны соответствующим геномным сегментам в пределах целевого геномного локуса,
при этом целевой геномный локус модифицирован путем интеграции первой полинуклеотидной вставки и второй полинуклеотидной вставки между соответствующими геномными сегментами; и
(c) отбор клетки с проведенным нацеливанием, содержащей первую полинуклеотидную вставку и вторую полинуклеотидную вставку, интегрированные в целевой геномный локус.
2. Способ по п. 1, в котором первая полинуклеотидная вставка и первое 3' гомологичное плечо и вторая полинуклеотидная вставка и второе 5' гомологичное плечо представляют собой перекрывающиеся фрагменты непрерывной нуклеиновой кислоты, которая подвергается реформированию путем интеграции первой полинуклеотидной вставки и второй полинуклеотидной вставки в целевой геномный локус.
3. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором первая полинуклеотидная вставка, вторая полинуклеотидная вставка или обе получены от вида, который отличается от вида, к которому относится клетка.
4. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором первая полинуклеотидная вставка, вторая полинуклеотидная вставка или обе представляют собой человеческие нуклеиновые кислоты.
5. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором суммарный размер первой полинуклеотидной вставки и второй полинуклеотидной вставки составляет от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 75 т.п.н., от приблизительно 75 т.п.н. до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до 125 т.п.н., от приблизительно 125 т.п.н. до приблизительно 150 т.п.н., от приблизительно 150 т.п.н. до приблизительно 175 т.п.н., от приблизительно 175 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н., от приблизительно 200 т.п.н. до приблизительно 225 т.п.н., от приблизительно 225 т.п.н. до приблизительно 250 т.п.н., от приблизительно 250 т.п.н. до приблизительно 275 т.п.н., от приблизительно 275 т.п.н. до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 300 т.п.н. до приблизительно 350 т.п.н., от приблизительно 350 т.п.н. до приблизительно 400 т.п.н., от приблизительно 400 т.п.н. до приблизительно 450 т.п.н. или от приблизительно 450 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н.
6. Способ по п. 5, в котором суммарный размер первой полинуклеотидной вставки и второй полинуклеотидной вставки составляет от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н.
7. Способ по п. 6, в котором суммарный размер первой полинуклеотидной вставки и второй полинуклеотидной вставки составляет приблизительно 300 т.п.н.
8. Способ по любому из пп. 1-4, в котором клетка с проведенным нацеливанием содержит геномную ДНК, содержащую вместе первую полинуклеотидную вставку и вторую полинуклеотидную вставку, которые имеют суммарный размер в диапазоне от приблизительно 5 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н.
9. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором первая перекрывающаяся последовательность первого LTVEC по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или 99,9% идентична первой перекрывающейся последовательности второго LTVEC.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором размер первой перекрывающейся последовательности составляет от приблизительно 1 т.п.н. до приблизительно 70 т.п.н.
11. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором размер первой перекрывающейся последовательности составляет по меньшей мере 10 т.п.н. или по меньшей мере 20 т.п.н.
12. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором интеграция первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки или обеих в целевой геномный локус приводит к одному или более из:
(a) добавления экзогенной последовательности в целевом геномном локусе;
(b) делеции эндогенной последовательности в целевом геномном локусе;
и
(c) нокина, нокаута, точечной мутации, перестановки доменов, перестановки экзонов, перестановки интронов, перестановки регуляторных последовательностей, перестановки генов или их комбинации.
13. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором комбинированное использование первого LTVEC и второго LTVEC приводит к повышению эффективности нацеливания по сравнению с использованием одиночного LTVEC.
14. Способ по п. 13, в котором повышение эффективности нацеливания составляет по меньшей мере 1,5 раза, 2 раза, 2,5 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 11 раз, 12 раз, 13 раз, 14 раз, 15 раз, 16 раз, 17 раз, 18 раз, 19 раз или 20 раз.
15. Способ по любому из пп. 1-14, в котором общая длина 5' и 3' гомологичных плеч первого LTVEC или второго LTVEC составляет от приблизительно 10 т.п.н. до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 т.п.н. до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 т.п.н. до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 т.п.н. до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 т.п.н. до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 120 т.п.н. или от приблизительно 120 т.п.н. до приблизительно 150 т.п.н.
16. Способ модификации целевого геномного локуса в клетке, включающий в себя:
(a) введение в клетку нуклеазного агента, который осуществляет одно- или двухцепочечный разрыв в пределах целевого геномного локуса;
(b) введение в клетку первого большого нацеливающего вектора (LTVEC), который имеет длину по меньшей мере 10 т.п.н. и содержит первую полинуклеотидную вставку, фланкированную первым 5' гомологичным плечом и первым 3' гомологичным плечом, второго LTVEC, который имеет длину по меньшей мере 10 т.п.н. и содержит вторую полинуклеотидную вставку, фланкированную вторым 5' гомологичным плечом и вторым 3' гомологичным плечом, и третьего LTVEC, который имеет длину по меньшей мере 10 т.п.н. и содержит третью полинуклеотидную вставку, фланкированную третьим 5' гомологичным плечом и третьим 3' гомологичным плечом,
причем первое 3' гомологичное плечо первого LTVEC имеет первую перекрывающуюся последовательность, гомологичную второму 5' гомологичному плечу второго LTVEC, второе 3' гомологичное плечо второго LTVEC имеет вторую перекрывающуюся последовательность, гомологичную третьему 5' гомологичному плечу третьего LTVEC, и первое 5' гомологичное плечо первого LTVEC и третье 3' гомологичное плечо третьего LTVEC гомологичны соответствующим геномным сегментам в пределах целевого геномного локуса,
при этом целевой геномный локус модифицирован путем интеграции первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки между соответствующими геномными сегментами; и
(с) отбор клетки с проведенным нацеливанием, содержащей первую полинуклеотидную вставку, вторую полинуклеотидную вставку и третью полинуклеотидную вставку, интегрированные в целевой геномный локус.
17. Способ по п. 16, в котором первая полинуклеотидная вставка и первое 3' гомологичное плечо и вторая полинуклеотидная вставка и второе 5' гомологичное плечо представляют собой перекрывающиеся фрагменты непрерывной нуклеиновой кислоты, а вторая полинуклеотидная вставка и второе 3' гомологичное плечо и третья полинуклеотидная вставка и третье 5' гомологичное плечо представляют собой перекрывающиеся фрагменты непрерывной нуклеиновой кислоты, которая подвергается реформированию путем интеграции первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки в целевой геномный локус.
18. Способ по п. 16 или 17, в котором одна или более из первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки получены от вида, который отличается от вида, к которому относится клетка.
19. Способ по любому из пп. 16-18, в котором одна или более из первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки представляют собой человеческие нуклеиновые кислоты.
20. Способ по любому из пп. 16-19, в котором суммарный размер первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки составляет от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 700 т.п.н., от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 75 т.п.н., от приблизительно 75 т.п.н. до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 125 т.п.н., от приблизительно 125 т.п.н. до приблизительно 150 т.п.н., от приблизительно 150 т.п.н. до приблизительно 175 т.п.н., от приблизительно 175 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н., от приблизительно 200 т.п.н. до приблизительно 225 т.п.н., от приблизительно 225 т.п.н. до приблизительно 250 т.п.н., от приблизительно 250 т.п.н. до приблизительно 275 т.п.н., от приблизительно 275 т.п.н. до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 300 т.п.н. до приблизительно 350 т.п.н., от приблизительно 350 т.п.н. до приблизительно 400 т.п.н., от приблизительно 400 т.п.н. до приблизительно 450 т.п.н., от приблизительно 450 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 500 т.п.н. до приблизительно 550 т.п.н., от приблизительно 550 т.п.н. до приблизительно 600 т.п.н., от приблизительно 600 т.п.н. до приблизительно 650 т.п.н. или от приблизительно 650 т.п.н. до приблизительно 700 т.п.н.
21. Способ по п. 20, в котором суммарный размер первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки составляет от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 700 т.п.н.
22. Способ по п. 21, в котором суммарный размер первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки составляет приблизительно 400 т.п.н.
23. Способ по любому из пп. 16-19, в котором клетка с проведенным нацеливанием содержит геномную ДНК, содержащую вместе первую полинуклеотидную вставку, вторую полинуклеотидную вставку и третью полинуклеотидную вставку, которые имеют суммарный размер в диапазоне от приблизительно 5 т.п.н. до приблизительно 700 т.п.н.
24. Способ по любому из пп. 16-23, в котором первая перекрывающаяся последовательность первого LTVEC по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или 99,9% идентична первой перекрывающейся последовательности второго LTVEC и/или вторая перекрывающаяся последовательность второго LTVEC по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или 99,9% идентична второй перекрывающейся последовательности третьего LTVEC.
25. Способ по любому из пп. 16-24, в котором размер первой перекрывающейся последовательности составляет от приблизительно 1 т.п.н. до приблизительно 70 т.п.н. и/или размер второй перекрывающейся последовательности составляет от приблизительно 1 т.п.н. до приблизительно 70 т.п.н.
26. Способ по любому из пп. 16-25, в котором размер первой перекрывающейся последовательности составляет по меньшей мере 10 т.п.н. или по меньшей мере 20 т.п.н. и/или размер второй перекрывающейся последовательности составляет по меньшей мере 10 т.п.н. или по меньшей мере 20 т.п.н.
27. Способ по любому из пп. 16-26, в котором интеграция одной или более из первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки или третьей полинуклеотидной вставки в целевой геномный локус приводит к одному или более из:
(a) добавления экзогенной последовательности в целевом геномном локусе;
(b) делеции эндогенной последовательности в целевом геномном локусе;
или
(c) нокина, нокаута, точечной мутации, перестановки доменов, перестановки экзонов, перестановки интронов, перестановки регуляторных последовательностей, перестановки генов или их комбинации.
28. Способ по любому из пп. 16-27, в котором общая длина 5' и 3' гомологичных плеч первого LTVEC, второго LTVEC или третьего LTVEC составляет от приблизительно 10 т.п.н. до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 т.п.н. до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 т.п.н. до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 т.п.н. до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 т.п.н. до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 120 т.п.н. или от приблизительно 120 т.п.н. до приблизительно 150 т.п.н.
29. Способ по п. 12 или 27, в котором делеция эндогенной последовательности в целевом геномном локусе составляет от приблизительно 5 т.п.н. до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 т.п.н. до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 т.п.н. до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 т.п.н. до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 т.п.н. до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 т.п.н. до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 150 т.п.н., от приблизительно 150 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н., от приблизительно 200 т.п.н. до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 300 т.п.н. до приблизительно 400 т.п.н., от приблизительно 400 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 500 т.п.н. до приблизительно 600 т.п.н., от приблизительно 600 т.п.н. до приблизительно 700 т.п.н. или от приблизительно 700 т.п.н. до приблизительно 800 т.п.н.
30. Способ усиления гомологичной рекомбинации в целевом геномном локусе в клетке, включающий в себя введение в клетку первого нацеливающего вектора и второго нацеливающего вектора, причем первый нацеливающий вектор содержит первую полинуклеотидную вставку, фланкированную первым 5' гомологичным плечом и первым 3' гомологичным плечом, а второй нацеливающий вектор содержит вторую полинуклеотидную вставку, фланкированную вторым 5' гомологичным плечом и вторым 3' гомологичным плечом,
при этом первое 3' гомологичное плечо и второе 5' гомологичное плечо содержат перекрывающуюся нуклеотидную последовательность; и
при этом первое 5' гомологичное плечо и второе 3' гомологичное плечо гомологичны соответствующим сегментам в целевом геномном локусе.
31. Способ по п. 30, в котором гомологичная рекомбинация усиливается в целевом геномном локусе без использования нуклеазного агента.
32. Способ по п. 30, дополнительно включающий в себя введение в клетку нуклеазного агента, который осуществляет одно- или двухцепочечный разрыв в целевом геномном локусе или вблизи него.
33. Способ по любому из пп. 1-29 и 32, в котором нуклеазный агент представляет собой нуклеазу с «цинковыми пальцами» (ZFN), эффекторную нуклеазу, подобную активатору транскрипции (TALEN), или мегануклеазу.
34. Способ по любому из пп. 1-29 и 32, в котором нуклеазный агент содержит белок (Cas), ассоциированный с короткими палиндромными повторами, регулярно расположенными группами (CRISPR), и гидовую РНК (гРНК).
35. Способ по п. 34, в котором белок Cas представляет собой Cas9.
36. Способ по любому из пп. 30-35, усиливающий гомологичную рекомбинацию первого нацеливающего вектора, второго нацеливающего вектора или обоих в целевом геномном локусе.
37. Способ по п. 36, в котором усиление гомологичной рекомбинации составляет по меньшей мере 1,5 раза, 2 раза, 2,5 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 11 раз, 12 раз, 13 раз, 14 раз, 15 раз, 16 раз, 17 раз, 18 раз, 19 раз или 20 раз.
38. Способ по любому из пп. 30-37, в котором перекрывающаяся последовательность первого нацеливающего вектора по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или 99,9% идентична перекрывающейся последовательности второго нацеливающего вектора.
39. Способ по любому из пп. 30-38, в котором перекрывающаяся последовательность составляет от приблизительно 1 т.п.н. до приблизительно 70 т.п.н.
40. Способ по любому из пп. 30-39, в котором перекрывающаяся последовательность составляет по меньшей мере 20 т.п.н.
41. Способ по любому из пп. 30-40, в котором первый нацеливающий вектор представляет собой первый большой нацеливающий вектор (LTVEC) в диапазоне от приблизительно 20 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н.
42. Способ по любому из пп. 30-41, в котором второй нацеливающий вектор представляет собой второй большой нацеливающий вектор (LTVEC) в диапазоне от приблизительно 20 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н.
43. Способ по п. 41 или 42, в котором общая длина 5' и 3' гомологичных плеч первого LTVEC составляет от 10 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н.
44. Способ по п. 42 или 43, в котором общая длина 5' и 3' гомологичных плеч второго LTVEC составляет от 10 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н.
45. Способ по любому из пп. 30-44, в котором перекрывающаяся нуклеотидная последовательность облегчает рекрутирование механизмов рекомбинации в целевой геномный локус.
46. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором клетка представляет собой человеческую клетку.
47. Способ по любому из пп. 1-45, в котором клетка представляет собой нечеловеческую клетку.
48. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором клетка представляет собой плюрипотентную клетку, гемопоэтическую стволовую клетку, нейрональную стволовую клетку или фибробластную клетку.
49. Способ по п. 48, в котором плюрипотентная клетка представляет собой эмбриональную стволовую (ЭС) клетку или индуцированную плюрипотентную стволовую (ИПС) клетку.
50. Способ по любому из пп. 47-49, в котором клетка представляет собой клетку млекопитающих.
51. Способ по п. 50, в котором клетка млекопитающих представляет собой клетку грызуна.
52. Способ по п. 51, в котором грызун представляет собой мышь или крысу.
53. Способ получения не относящихся к человеку животных поколения F0, включающий в себя:
(a) введение нечеловеческой ЭС-клетки в нечеловеческий эмбрион-хозяин, причем нечеловеческая ЭС-клетка получена способом по любому из пп. 1-45 и 47-52; и
(b) вынашивание нечеловеческого эмбриона-хозяина в теле суррогатной матери,
при этом суррогатная мать производит поколение F0 не относящегося к человеку животного, содержащего модификацию.
54. Способ по п. 53, в котором не относящееся к человеку животное представляет собой мышь или крысу.
RU2017124909A 2014-12-19 2015-12-18 Способы и композиции для нацеленной генетической модификации посредством одноэтапного множественного нацеливания RU2707137C2 (ru)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462094104P 2014-12-19 2014-12-19
US62/094,104 2014-12-19
US201562167408P 2015-05-28 2015-05-28
US62/167,408 2015-05-28
US201562205524P 2015-08-14 2015-08-14
US62/205,524 2015-08-14
PCT/US2015/066681 WO2016100819A1 (en) 2014-12-19 2015-12-18 Methods and compositions for targeted genetic modification through single-step multiple targeting

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2017124909A true RU2017124909A (ru) 2019-01-21
RU2017124909A3 RU2017124909A3 (ru) 2019-06-05
RU2707137C2 RU2707137C2 (ru) 2019-11-22

Family

ID=55229831

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017124909A RU2707137C2 (ru) 2014-12-19 2015-12-18 Способы и композиции для нацеленной генетической модификации посредством одноэтапного множественного нацеливания

Country Status (15)

Country Link
US (2) US11326184B2 (ru)
EP (2) EP3653048B9 (ru)
JP (2) JP6840077B2 (ru)
KR (1) KR102530821B1 (ru)
CN (1) CN107208113A (ru)
AU (1) AU2015364427B2 (ru)
BR (1) BR112017013104A2 (ru)
CA (1) CA2971213C (ru)
ES (2) ES2760508T3 (ru)
IL (1) IL252755B (ru)
MX (1) MX2017008190A (ru)
NZ (1) NZ732895A (ru)
RU (1) RU2707137C2 (ru)
SG (1) SG11201704646YA (ru)
WO (1) WO2016100819A1 (ru)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2847335B1 (en) 2012-04-25 2018-06-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nuclease-mediated targeting with large targeting vectors
PT3456831T (pt) 2013-04-16 2021-09-10 Regeneron Pharma Modificação alvejada do genoma de rato
CN105980568B (zh) 2013-12-11 2019-12-03 瑞泽恩制药公司 用于靶向修饰基因组的方法和组合物
LT3152312T (lt) 2014-06-06 2020-04-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Tikslinio lokuso modifikavimo būdai ir kompozicijos
RU2771532C2 (ru) 2014-06-26 2022-05-05 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Способы и композиции для нацеленных генетических модификаций и способы их применения
SG11201702309RA (en) 2014-10-15 2017-04-27 Regeneron Pharma Methods and compositions for generating or maintaining pluripotent cells
CA2963820A1 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Editas Medicine, Inc. Methods for improving crispr/cas-mediated genome-editing
KR20230070319A (ko) 2014-11-21 2023-05-22 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 쌍 형성된 가이드 rna를 사용하는 표적화된 유전자 변형을 위한 방법 및 조성물
BR112017013104A2 (pt) 2014-12-19 2018-05-15 Regeneron Pharma métodos para modificar um locus genômico alvo em uma célula, para intensificar a recombinação homóloga em um locus genômico alvo em uma célula e para produzir uma geração f0 de um animal não humano.
EP3302048B1 (en) 2015-05-29 2020-02-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a disruption in a c9orf72 locus
EP3786294A1 (en) 2015-09-24 2021-03-03 Editas Medicine, Inc. Use of exonucleases to improve crispr/cas-mediated genome editing
KR102482103B1 (ko) 2016-01-13 2022-12-28 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 조작된 중쇄 다양성 영역을 갖는 설치류
US11597924B2 (en) 2016-03-25 2023-03-07 Editas Medicine, Inc. Genome editing systems comprising repair-modulating enzyme molecules and methods of their use
EP3443086B1 (en) 2016-04-13 2021-11-24 Editas Medicine, Inc. Cas9 fusion molecules, gene editing systems, and methods of use thereof
SG10202102997UA (en) 2016-09-30 2021-04-29 Regeneron Pharma Non-human animals having a hexanucleotide repeat expansion in a c9orf72 locus
LT3407709T (lt) 2016-11-04 2020-10-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Gyvūnai, išskyrus žmogų, turintys sukonstruotą imunoglobulino lambda lengvosios grandinės lokusą
AU2018208463A1 (en) * 2017-01-10 2019-08-01 Christina Care Gene Editing Institute, Inc. Methods for in vitro site-directed mutagenesis using gene editing technologies
EP3652312A1 (en) 2017-07-14 2020-05-20 Editas Medicine, Inc. Systems and methods for targeted integration and genome editing and detection thereof using integrated priming sites
AU2018309708A1 (en) * 2017-07-31 2020-02-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. CRISPR reporter non-human animals and uses thereof
CA3084049A1 (en) 2017-12-05 2019-06-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having an engineered immunoglobulin lambda light chain and uses thereof
KR102617284B1 (ko) 2018-06-14 2023-12-27 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 면역글로불린 중쇄 암호화 서열에서 dh-dh 재배열 가능한 비인간 동물
CN111321171A (zh) * 2018-12-14 2020-06-23 江苏集萃药康生物科技有限公司 一种应用CRISPR/Cas9介导ES打靶技术制备基因打靶动物模型的方法
JP7449291B2 (ja) 2018-12-20 2024-03-13 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ヌクレアーゼ媒介リピート伸長
KR102487901B1 (ko) * 2019-04-04 2023-01-12 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 표적화된 변형의 표적화 벡터로의 무흔적 도입을 위한 방법
AU2020289554A1 (en) 2019-06-05 2021-11-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a limited lambda light chain repertoire expressed from the kappa locus and uses thereof
US20220195014A1 (en) 2020-12-23 2022-06-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acids encoding anchor modified antibodies and uses thereof

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE352612T1 (de) 1990-08-29 2007-02-15 Pharming Intellectual Pty Bv Homologe rekombination in säugetier-zellen
US5830729A (en) 1996-04-18 1998-11-03 Institut Pasteur I Sce I-induced gene replacement and gene conversion in embryonic stem cells
WO1999005266A2 (en) 1997-07-26 1999-02-04 Wisconsin Alumni Research Foundation Trans-species nuclear transfer
JP2002533130A (ja) 1998-12-31 2002-10-08 ザ ジェイ． デビッド グラッドストーン インスティテューツ Ｈｉｖ共受容体を発現するトランスジェニック齧歯類動物および齧歯類細胞株
US6599692B1 (en) 1999-09-14 2003-07-29 Sangamo Bioscience, Inc. Functional genomics using zinc finger proteins
US20030104526A1 (en) 1999-03-24 2003-06-05 Qiang Liu Position dependent recognition of GNN nucleotide triplets by zinc fingers
DE60023936T2 (de) 1999-12-06 2006-05-24 Sangamo Biosciences Inc., Richmond Methoden zur verwendung von randomisierten zinkfingerprotein-bibliotheken zur identifizierung von genfunktionen
US7105348B2 (en) 2000-10-31 2006-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US6586251B2 (en) 2000-10-31 2003-07-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20050144655A1 (en) 2000-10-31 2005-06-30 Economides Aris N. Methods of modifying eukaryotic cells
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
CA2431308C (en) 2000-12-07 2010-04-13 Sangamo Biosciences, Inc. Regulation of angiogenesis with zinc finger proteins
AU2002241946B2 (en) 2001-01-22 2007-04-26 Sangamo Therapeutics, Inc. Modified zinc finger binding proteins
US7947469B2 (en) 2001-01-22 2011-05-24 Gendaq, Ltd. Modulation of HIV infection
AUPR451401A0 (en) 2001-04-20 2001-05-24 Monash University A method of nuclear transfer
CN100575485C (zh) 2002-01-23 2009-12-30 犹他大学研究基金会 使用锌指核酸酶的定向染色体诱变
DK1485475T3 (da) 2002-03-15 2008-01-21 Cellectis Hybrid meganuklease og enkeltkædet maganuklease og brug deraf
EP2368982A3 (en) 2002-03-21 2011-10-12 Sangamo BioSciences, Inc. Methods and compositions for using zinc finger endonucleases to enhance homologous recombination
US7612250B2 (en) 2002-07-29 2009-11-03 Trustees Of Tufts College Nuclear transfer embryo formation method
US9447434B2 (en) 2002-09-05 2016-09-20 California Institute Of Technology Use of chimeric nucleases to stimulate gene targeting
WO2004031346A2 (en) 2002-09-06 2004-04-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods and compositions concerning designed highly-specific nucleic acid binding proteins
US20030175968A1 (en) 2002-10-30 2003-09-18 Golic Kent G. Gene targeting method
KR20060002745A (ko) 2003-01-13 2006-01-09 마헨드라 에스 라오 치료적 생성물의 전달을 위한 증식성 줄기세포 및전구세포에서의 후보 분자의 지속적 발현
US7888121B2 (en) 2003-08-08 2011-02-15 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for targeted cleavage and recombination
US8409861B2 (en) 2003-08-08 2013-04-02 Sangamo Biosciences, Inc. Targeted deletion of cellular DNA sequences
EP1591521A1 (en) 2004-04-30 2005-11-02 Cellectis I-Dmo I derivatives with enhanced activity at 37 degrees C and use thereof
KR20070060115A (ko) 2004-09-16 2007-06-12 상가모 바이오사이언스 인코포레이티드 단백질 생산을 위한 조성물 및 방법
PT1802193E (pt) 2004-10-19 2014-06-23 Regeneron Pharma Método para gerar um murganho homozigótico para uma modificação genética
FR2879622B1 (fr) 2004-12-17 2008-02-01 Agronomique Inst Nat Rech Procede in vitro de production d'ovocytes ou d'oeufs presentant une modification genomique ciblee
WO2006097784A1 (en) 2005-03-15 2006-09-21 Cellectis I-crei meganuclease variants with modified specificity, method of preparation and uses thereof
EP1863909B2 (en) 2005-03-15 2014-09-10 Cellectis I-crei meganuclease variants with modified specificity, method of preparation and uses thereof
GB0615327D0 (en) 2006-03-30 2006-09-13 Univ Edinburgh Culture medium containing kinase inhibitors and uses thereof
US7910798B2 (en) 2006-03-31 2011-03-22 Medarex, Inc. Transgenic animals expressing chimeric antibodies for use in preparing human antibodies
CN101117633B (zh) 2006-08-03 2011-07-20 上海交通大学附属儿童医院 一种细胞核移植方法
WO2008076290A2 (en) 2006-12-14 2008-06-26 Dow Agrosciences Llc Optimized non-canonical zinc finger proteins
US7771967B2 (en) 2006-12-22 2010-08-10 The J. David Gladstone Institutes Nucleic acid encoding apolipoprotein E-I3
US8110379B2 (en) 2007-04-26 2012-02-07 Sangamo Biosciences, Inc. Targeted integration into the PPP1R12C locus
WO2008151081A1 (en) 2007-06-01 2008-12-11 Omt, Inc. Compositions and methods for inhibiting endogenous immunoglobulin genes and producing transgenic human idiotype antibodies
GB0803109D0 (en) 2008-02-20 2008-03-26 Gene Bridges Gmbh Method of nucleic acid recombination
WO2010065123A1 (en) 2008-12-04 2010-06-10 Sangamo Biosciences, Inc. Genome editing in rats using zinc-finger nucleases
US20110239315A1 (en) 2009-01-12 2011-09-29 Ulla Bonas Modular dna-binding domains and methods of use
EP2206723A1 (en) 2009-01-12 2010-07-14 Bonas, Ulla Modular DNA-binding domains
AU2010226313B2 (en) 2009-03-20 2014-10-09 Sangamo Therapeutics, Inc. Modification of CXCR4 using engineered zinc finger proteins
US8772008B2 (en) 2009-05-18 2014-07-08 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for increasing nuclease activity
US20120178647A1 (en) 2009-08-03 2012-07-12 The General Hospital Corporation Engineering of zinc finger arrays by context-dependent assembly
EP2493288B1 (en) 2009-10-28 2015-02-18 Helmholtz Zentrum München Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Homologous recombination in the oocyte
DK3147362T3 (en) 2009-10-29 2019-04-08 Regeneron Pharma Multifunctional alleles
WO2011053957A2 (en) 2009-11-02 2011-05-05 Gen9, Inc. Compositions and methods for the regulation of multiple genes of interest in a cell
CA2782596A1 (en) 2009-12-01 2011-06-09 National Cancer Center Method for constructing chimeric rat using rat embryonic stem cells
EP2510096B2 (en) 2009-12-10 2018-02-07 Regents of the University of Minnesota Tal effector-mediated dna modification
EP2516652B1 (en) 2009-12-21 2014-11-05 Keygene N.V. Improved techniques for transfecting protoplasts
WO2011100058A1 (en) 2010-02-09 2011-08-18 Sangamo Biosciences, Inc. Targeted genomic modification with partially single-stranded donor molecules
GB201009732D0 (en) * 2010-06-10 2010-07-21 Gene Bridges Gmbh Direct cloning
MY172702A (en) 2010-06-11 2019-12-10 Regeneron Pharma Production of fertile xy female animals from xy es cells
JP6050230B2 (ja) 2010-07-21 2016-12-21 サンガモ バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｈｌａ遺伝子座の修飾のための方法及び組成物
EP3489359A1 (en) 2010-07-23 2019-05-29 Sigma Aldrich Co. LLC Genome editing using targeting endonucleases and single-stranded nucleic acids
WO2012018726A1 (en) 2010-08-02 2012-02-09 Cellectis Sa Method for increasing double-strand break-induced gene targeting
WO2012129198A1 (en) 2011-03-23 2012-09-27 Transposagen Biopharmaceuticals, Inc. Genetically modified rat models for obesity and diabetes
DK3424947T3 (da) 2011-10-28 2021-02-22 Regeneron Pharma Genmodificerede t-celle-receptor-mus
WO2013141680A1 (en) 2012-03-20 2013-09-26 Vilnius University RNA-DIRECTED DNA CLEAVAGE BY THE Cas9-crRNA COMPLEX
US9637739B2 (en) 2012-03-20 2017-05-02 Vilnius University RNA-directed DNA cleavage by the Cas9-crRNA complex
EP2847335B1 (en) 2012-04-25 2018-06-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nuclease-mediated targeting with large targeting vectors
WO2013169802A1 (en) 2012-05-07 2013-11-14 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for nuclease-mediated targeted integration of transgenes
PE20150336A1 (es) 2012-05-25 2015-03-25 Univ California Metodos y composiciones para la modificacion de adn objetivo dirigida por arn y para la modulacion de la transcripcion dirigida por arn
CN116064533A (zh) 2012-10-23 2023-05-05 基因工具股份有限公司 用于切割靶dna的组合物及其用途
KR101844123B1 (ko) 2012-12-06 2018-04-02 시그마-알드리치 컴퍼니., 엘엘씨 Crispr-기초된 유전체 변형과 조절
ES2786193T3 (es) 2012-12-12 2020-10-09 Broad Inst Inc Modificación por tecnología genética y optimización de sistemas, métodos y composiciones enzimáticas mejorados para la manipulación de secuencias
MX2015007550A (es) 2012-12-12 2017-02-02 Broad Inst Inc Suministro, modificación y optimización de sistemas, métodos y composiciones para la manipulación de secuencias y aplicaciones terapéuticas.
US8697359B1 (en) 2012-12-12 2014-04-15 The Broad Institute, Inc. CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products
KR102239125B1 (ko) * 2012-12-14 2021-04-12 오픈 모노클로날 테크놀로지, 인코포레이티드 인간 이디오타입을 갖는 설치류 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 이를 포함하는 동물
RU2699523C2 (ru) 2012-12-17 2019-09-05 Президент Энд Фэллоуз Оф Харвард Коллидж Рнк-направляемая инженерия генома человека
ES2705033T3 (es) 2012-12-27 2019-03-21 Keygene Nv Método para eliminar un ligamiento genético en una planta
ES2904803T3 (es) 2013-02-20 2022-04-06 Regeneron Pharma Modificación genética de ratas
EP2922393B2 (en) 2013-02-27 2022-12-28 Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Gene editing in the oocyte by cas9 nucleases
US10612043B2 (en) 2013-03-09 2020-04-07 Agilent Technologies, Inc. Methods of in vivo engineering of large sequences using multiple CRISPR/cas selections of recombineering events
US9234213B2 (en) 2013-03-15 2016-01-12 System Biosciences, Llc Compositions and methods directed to CRISPR/Cas genomic engineering systems
JP6346266B2 (ja) 2013-03-21 2018-06-20 サンガモ セラピューティクス， インコーポレイテッド 操作されたジンクフィンガータンパク質ヌクレアーゼを使用するｔ細胞受容体遺伝子の標的化された破壊
PT3456831T (pt) * 2013-04-16 2021-09-10 Regeneron Pharma Modificação alvejada do genoma de rato
CN105637087A (zh) 2013-09-18 2016-06-01 科马布有限公司 方法、细胞与生物体
US10787684B2 (en) 2013-11-19 2020-09-29 President And Fellows Of Harvard College Large gene excision and insertion
CN105980568B (zh) 2013-12-11 2019-12-03 瑞泽恩制药公司 用于靶向修饰基因组的方法和组合物
MX2016007797A (es) 2013-12-19 2016-09-07 Amyris Inc Metodos para integracion genomica.
KR101823661B1 (ko) 2014-04-24 2018-01-30 기초과학연구원 마이크로 상동 기반의 유전자 녹아웃을 위한 뉴클레아제 표적 서열을 확인하는 방법
GB201407852D0 (en) 2014-05-02 2014-06-18 Iontas Ltd Preparation of libraries od protein variants expressed in eukaryotic cells and use for selecting binding molecules
LT3152312T (lt) 2014-06-06 2020-04-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Tikslinio lokuso modifikavimo būdai ir kompozicijos
RU2771532C2 (ru) 2014-06-26 2022-05-05 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Способы и композиции для нацеленных генетических модификаций и способы их применения
AU2015317370A1 (en) * 2014-09-19 2017-03-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Chimeric antigen receptors
WO2016061073A1 (en) 2014-10-14 2016-04-21 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Composition and method for in vivo engineering of chromosomal rearrangements
SG11201702309RA (en) 2014-10-15 2017-04-27 Regeneron Pharma Methods and compositions for generating or maintaining pluripotent cells
WO2016080399A1 (ja) 2014-11-20 2016-05-26 国立大学法人京都大学 哺乳動物の標的ゲノム領域にｄｎａをノックインする方法及び細胞
KR20230070319A (ko) 2014-11-21 2023-05-22 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 쌍 형성된 가이드 rna를 사용하는 표적화된 유전자 변형을 위한 방법 및 조성물
WO2016089866A1 (en) 2014-12-01 2016-06-09 President And Fellows Of Harvard College Rna-guided systems for in vivo gene editing
BR112017013104A2 (pt) 2014-12-19 2018-05-15 Regeneron Pharma métodos para modificar um locus genômico alvo em uma célula, para intensificar a recombinação homóloga em um locus genômico alvo em uma célula e para produzir uma geração f0 de um animal não humano.
US9790490B2 (en) 2015-06-18 2017-10-17 The Broad Institute Inc. CRISPR enzymes and systems

Also Published As

Publication number Publication date
IL252755A0 (en) 2017-08-31
CN107208113A (zh) 2017-09-26
BR112017013104A2 (pt) 2018-05-15
JP7095066B2 (ja) 2022-07-04
JP6840077B2 (ja) 2021-03-10
EP3653048B1 (en) 2023-06-07
ES2760508T3 (es) 2020-05-14
US20220235381A1 (en) 2022-07-28
RU2707137C2 (ru) 2019-11-22
WO2016100819A1 (en) 2016-06-23
MX2017008190A (es) 2018-03-23
ES2947714T3 (es) 2023-08-17
JP2021045174A (ja) 2021-03-25
EP3653048B9 (en) 2023-10-04
EP3232774A1 (en) 2017-10-25
KR20170093246A (ko) 2017-08-14
CA2971213A1 (en) 2016-06-23
US11326184B2 (en) 2022-05-10
KR102530821B1 (ko) 2023-05-10
CA2971213C (en) 2023-09-26
IL252755B (en) 2021-10-31
US20160177339A1 (en) 2016-06-23
AU2015364427A1 (en) 2017-07-06
AU2015364427B2 (en) 2021-05-27
ES2947714T9 (es) 2024-03-14
EP3653048A1 (en) 2020-05-20
JP2017538428A (ja) 2017-12-28
NZ732895A (en) 2022-05-27
SG11201704646YA (en) 2017-07-28
EP3653048C0 (en) 2023-06-07
EP3232774B1 (en) 2019-10-09
RU2017124909A3 (ru) 2019-06-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2017124909A (ru) Способы и композиции для нацеленной генетической модификации посредством одноэтапного множественного нацеливания
JP2017538428A5 (ru)
JP7101211B2 (ja) ガイドｒｎａのペアを使用したターゲティングによる遺伝子改変の方法及び組成物
US20220015342A1 (en) Gene editing of reproductive hormones to reduce fertility in ictalurus punctatus
JP2021045174A5 (ru)
RU2019143133A (ru) Способы и композиции для нацеленных генетических модификаций и способы их применения
Chakrapani et al. Establishing targeted carp TLR22 gene disruption via homologous recombination using CRISPR/Cas9
Cooper et al. Generation of gene edited birds in one generation using sperm transfection assisted gene editing (STAGE)
Abe et al. Pronuclear microinjection during S-phase increases the efficiency of CRISPR-Cas9-assisted knockin of large DNA donors in mouse zygotes
RU2016126989A (ru) Способы и композиции для направленной модификации генома
Shrock et al. CRISPR in animals and animal models
RU2016110827A (ru) Эффективная немейотическая интрогрессия аллелей
JP2015533284A5 (ru)
JP2017520243A5 (ru)
RU2016101246A (ru) Направленная интеграция
Remy et al. Efficient gene targeting by homology-directed repair in rat zygotes using TALE nucleases
US20170251647A1 (en) Method for knock-in of dna into target region of mammalian genome, and cell
RU2016150168A (ru) Способы и композиции для модификации целевого локуса
RU2015120467A (ru) Контроль полового созревания у животных
Menchaca et al. New insights and current tools for genetically engineered (GE) sheep and goats
WO2020077930A1 (zh) 一种应用Cas9技术制备CKO/KI动物模型的方法
Sun et al. Disruption of mstna and mstnb gene through CRISPR/Cas9 leads to elevated muscle mass in blunt snout bream (Megalobrama amblycephala)
Barman et al. Gene editing tools: state-of-the-art and the road ahead for the model and non-model fishes
US20200029538A1 (en) Genome editing method
Lee et al. Conditional targeting of Ispd using paired Cas9 nickase and a single DNA template in mice