RU2017119403A - Способы получения двуцепочечных белков в бактериях - Google Patents

Способы получения двуцепочечных белков в бактериях Download PDF

Info

Publication number
RU2017119403A
RU2017119403A RU2017119403A RU2017119403A RU2017119403A RU 2017119403 A RU2017119403 A RU 2017119403A RU 2017119403 A RU2017119403 A RU 2017119403A RU 2017119403 A RU2017119403 A RU 2017119403A RU 2017119403 A RU2017119403 A RU 2017119403A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
specified
antibody
host cell
semi
phase
Prior art date
Application number
RU2017119403A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2705274C2 (ru
RU2017119403A3 (ru
Inventor
Доротея РЕЙЛЛИ
Джеймс ДЖУЛЬЯНОТТИ
Original Assignee
Дженентек, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дженентек, Инк. filed Critical Дженентек, Инк.
Publication of RU2017119403A publication Critical patent/RU2017119403A/ru
Publication of RU2017119403A3 publication Critical patent/RU2017119403A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2705274C2 publication Critical patent/RU2705274C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Claims (147)

1. Способ получения полипептида, содержащего две цепи, в прокариотической клетке-хозяине, причем указанный способ включает:
(а) культивирование указанной клетки-хозяина для экспрессии двух цепей указанного полипептида в культуральной среде в условиях, предусматривающих:
температуру при фазе роста и скорость перемешивания при фазе роста, и
температуру при фазе образования продукта и скорость перемешивания при фазе образования продукта, причем после экспрессии происходит фолдинг и сборка указанных двух цепей с образованием биологически активного полипептида в указанной клетке-хозяине;
при этом указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, содержащий
(1) первую единицу трансляции, кодирующую первую цепь указанного полипептида;
(2) вторую единицу трансляции, кодирующую вторую цепь указанного полипептида; и
(3) третью единицу трансляции, кодирующую по меньшей мере один белок-шаперон, выбранный из группы, состоящей из пептидил-пролил-изомераз, протеин-дисульфид-оксидоредуктаз и их комбинаций;
причем указанная температура при фазе роста на 2-10 °С превышает указанную температуру при фазе образования продукта, и указанная скорость перемешивания при фазе роста на 50-250 об/мин превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта; и
(b) выделение указанного биологически активного полипептида из указанной клетки-хозяина.
2. Способ получения полипептида, содержащего две цепи, в прокариотической клетке-хозяине, причем указанный способ включает:
(а) культивирование указанной клетки-хозяина для экспрессии двух цепей указанного полипептида в культуральной среде в условиях, предусматривающих:
температуру при фазе роста и скорость перемешивания при фазе роста, и
температуру при фазе образования продукта и скорость перемешивания при фазе образования продукта, причем после экспрессии происходит фолдинг и сборка указанных двух цепей с образованием биологически активного полипептида в указанной клетке-хозяине;
при этом указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, содержащий:
(1) первую единицу трансляции, кодирующую первую цепь указанного полипептида;
(2) вторую единицу трансляции, кодирующую вторую цепь указанного полипептида;
(3) третью единицу трансляции, кодирующую первый белок-шаперон;
(4) четвертую единицу трансляции, кодирующую второй белок-шаперон; и
(5) пятую единицу трансляции, кодирующую третий белок-шаперон,
при этом указанные первый, второй и третий белки-шапероны выбраны из группы, состоящей из пептидил-пролил-изомераз, протеин-дисульфид-оксидоредуктаз и их комбинаций;
при этом указанная температура при фазе роста на 2-10 °С превышает указанную температуру при фазе образования продукта, и указанная скорость перемешивания при фазе роста на 50-250 об/мин превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта; и
(b) выделение указанного биологически активного полипептида из указанной клетки-хозяина.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид дополнительно содержит три копии промотора, причем первая копия функциональным образом объединена с указанной первой единицей трансляции, вторая копия функциональным образом объединена с указанной второй единицей трансляции, и третья копия функциональным образом объединена с указанной третьей единицей трансляции для запуска транскрипции указанной первой цепи, указанной второй цепи и указанного белка-шаперона.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанный промотор представляет собой индуцибельный промотор.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанный индуцибельный промотор представляет собой промотор, индуцируемый IPTG, который запускает транскрипцию указанной первой цепи, указанной второй цепи и указанного белка-шаперона в отсутствие IPTG-индукции.
6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанный индуцибельный промотор представляет собой Pho-промотор, который запускает транскрипцию указанной первой цепи, указанной второй цепи и указанного белка-шаперона при исчерпании фосфата в указанной культуральной среде.
7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид дополнительно содержит селективный маркер, и указанная культуральная среда содержит селективный агент, состоящий из одиночного антибиотика, вызывающий сохранение указанного полинуклеотида в указанной клетке-хозяине.
8. Способ по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что указанная первая единица трансляции содержит первую область инициации трансляции (TIR), которая функциональным образом объединена с кодирующей областью указанной первой цепи, и указанная вторая единица трансляции содержит вторую область инициации трансляции (TIR), которая функциональным образом объединена с кодирующей областью второй цепи, причем относительная интенсивность трансляции первой и второй TIR составляет от приблизительно 1,0 до приблизительно 3,0.
9. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один белок-шаперон или указанный первый белок-шаперон содержит пептидил-пролил-изомеразу.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что указанная пептидил-пролил-изомераза представляет собой белок FkpA.
11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что FkpA представляет собой FkpA E. coli.
12. Способ по любому из пп. 9-11, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один белок-шаперон дополнительно содержит или один или оба из указанных второго белка-шаперона и третьего белка-шаперона содержат протеин-дисульфид-оксидоредуктазу.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что указанная протеин-дисульфид-оксидоредуктаза представляет собой один или оба из белка DsbA и белка DsbC.
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна протеин-дисульфид-оксидоредуктаза представляет собой один или оба из DsbA E. coli и DsbC E. coli.
15. Способ по любому из пп. 1-14, отличающийся тем, что указанная прокариотическая клетка-хозяин представляет собой грамотрицательную бактерию.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что указанная грамотрицательная бактерия представляет собой E. coli.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что указанная E. coli принадлежит к штамму с мутацией degpS210A.
18. Способ по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что указанная E. coli представляет собой штамм с генотипом W3110 ΔfhuA ΔphoA ilvG2096 (Valr ) Δprc spr43H1 ΔdegP ΔmanA lacI Q ΔompT ΔmenE degpS210A.
19. Способ по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что указанный полипептид представляет собой мономер или гетеродимер.
20. Способ по любому из пп. 1-19, отличающийся тем, что указанные две цепи полипептида связаны друг с другом по меньшей мере одной дисульфидной связью.
21. Способ по любому из пп. 1-20, отличающийся тем, что указанный полипептид представляет собой одновалентное антитело, причем указанная первая цепь и указанная вторая цепь содержат тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина.
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что указанное одновалентное антитело способно специфически связывать антиген.
23. Способ по любому из пп. 1-22, отличающийся тем, что указанный полипептид представляет собой секреторный белок.
24. Способ по п. 24, отличающийся тем, что указанный секреторный белок выделяют из периплазмы указанной клетки-хозяина.
25. Способ по любому из пп. 1-24, отличающийся тем, что указанная температура при фазе роста находится в диапазоне от приблизительно 30°C до приблизительно 34 °C в течение указанной фазы роста, и указанная температура при фазе образования продукта находится в диапазоне от приблизительно 25 °С до приблизительно 29 °C в течение указанной фазы образования продукта.
26. Способ по любому из пп. 1-25, отличающийся тем, что указанная скорость перемешивания при росте достаточна для достижения указанной клеткой-хозяином в течение фазы роста скорости поглощения кислорода, которая на 0,5-2,5 ммоль/л/мин превышает пиковую скорость поглощения кислорода указанной клеткой-хозяином в течение фазы образования продукта.
27. Способ по любому из пп. 1-25, отличающийся тем, что пиковая скорость поглощения кислорода указанной клеткой-хозяином в течение указанной фазы роста находится в диапазоне от 3,5 до 4,5 ммоль/л/мин, и скорость поглощения кислорода указанной клеткой-хозяином в течение указанной фазы образования продукта находится в диапазоне от 1,0 до 3,0 ммоль/л/мин.
28. Способ получения полуантитела, содержащего тяжелую цепь и легкую цепь, в прокариотической клетке-хозяине, причем указанный способ включает:
(а) культивирование указанной клетки-хозяина для экспрессии указанной тяжелой цепи и указанной легкой цепи в культуральной среде в условиях, предусматривающих:
температуру при фазе роста и скорость перемешивания при фазе роста, и
температуру при фазе образования продукта и скорость перемешивания при фазе образования продукта, причем после экспрессии происходит фолдинг и сборка указанной тяжелой цепи и указанной легкой цепи с образованием полуантитела в указанной клетке-хозяине;
при этом указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, содержащий:
(1) первую единицу трансляции, кодирующую тяжелую цепь указанного полуантитела;
(2) вторую единицу трансляции, кодирующую легкую цепь указанного полуантитела;
(3) третью единицу трансляции, кодирующую первый белок-шаперон;
(4) четвертую единицу трансляции, кодирующую второй белок-шаперон; и
(5) пятую единицу трансляции, кодирующую третий белок-шаперон,
при этом указанные первый, второй и третий белки-шапероны выбраны из группы, состоящей из пептидил-пролил-изомераз, протеин-дисульфид-оксидоредуктаз и их комбинаций;
при этом указанная температура при фазе роста на 2-10 °С превышает указанную температуру при фазе образования продукта, и указанная скорость перемешивания при фазе роста на 50-250 об/мин превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта; и
(b) выделение указанного полуантитела из указанной клетки-хозяина.
29. Способ по п. 28, отличающийся тем, что указанное полуантитело содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию впадины, или по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию выступа.
30. Способ получения полуантитела против ИЛ-13, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, в прокариотической клетке-хозяине, причем указанный способ включает:
(а) культивирование указанной клетки-хозяина для экспрессии указанной тяжелой цепи и указанной легкой цепи в культуральной среде в условиях, предусматривающих:
температуру при фазе роста и скорость перемешивания при фазе роста, и
температуру при фазе образования продукта и скорость перемешивания при фазе образования продукта, при этом (i) указанная тяжелая цепь содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий HVR-H1 согласно SEQ ID NO:9, HVR-H2 согласно SEQ ID NO:10 и HVR-H3 согласно SEQ ID NO:11; и (ii) указанная легкая цепь содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий HVR-L1 согласно SEQ ID NO:12, HVR-L2 согласно SEQ ID NO:13 и HVR-L3 согласно SEQ ID NO:14, причем, после экспрессии происходит сборка указанной тяжелой цепи и указанной легкой цепи с образованием полуантитела против ИЛ-13 в указанной клетке-хозяине;
при этом указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, содержащий:
(1) первую единицу трансляции, кодирующую указанную тяжелую цепь указанного полуантитела;
(2) вторую единицу трансляции, кодирующую указанную легкую цепь указанного полуантитела;
(3) третью единицу трансляции, кодирующую первый белок-шаперон;
(4) четвертую единицу трансляции, кодирующую второй белок-шаперон; и
(5) пятую единицу трансляции, кодирующую третий белок-шаперон,
при этом указанные первый, второй и третий белки-шапероны выбраны из группы, состоящей из пептидил-пролил-изомераз, протеин-дисульфид-оксидоредуктаз и их комбинаций;
при этом указанная температура при фазе роста на 2-10 °С превышает указанную температуру при фазе образования продукта, и указанная скорость перемешивания при фазе роста на 50-250 об/мин превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта; и
(b) выделение указанного полуантитела против ИЛ-13 из указанной клетки-хозяина.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что указанное полуантитело против ИЛ-13 содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию выступа.
32. Способ получения полуантитела против ИЛ-17, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, в прокариотической клетке-хозяине, причем указанный способ включает:
(а) культивирование указанной клетки-хозяина для экспрессии указанной тяжелой цепи и указанной легкой цепи в культуральной среде в условиях, предусматривающих:
температуру при фазе роста и скорость перемешивания при фазе роста, и
температуру при фазе образования продукта и скорость перемешивания при фазе образования продукта,
при этом (i) указанная тяжелая цепь содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий HVR-H1 согласно SEQ ID NO:20, HVR-H2 согласно SEQ ID NO:21 и HVR-H3 согласно SEQ ID NO:22; и (ii) указанная легкая цепь содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий HVR-L1 согласно SEQ ID NO:23, HVR-L2 согласно SEQ ID NO:24 и HVR-L3 согласно SEQ ID NO:25, причем, после экспрессии происходит сборка указанной тяжелой цепи и указанной легкой цепи с образованием полуантитела против ИЛ-17 в указанной клетке-хозяине;
при этом указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, содержащий:
(1) первую единицу трансляции, кодирующую тяжелую цепь указанного полуантитела;
(2) вторую единицу трансляции, кодирующую легкую цепь указанного полуантитела;
(3) третью единицу трансляции, кодирующую первый белок-шаперон;
(4) четвертую единицу трансляции, кодирующую второй белок-шаперон; и
(5) пятую единицу трансляции, кодирующую третий белок-шаперон,
при этом указанные первый, второй и третий белки-шапероны выбраны из группы, состоящей из пептидил-пролил-изомераз, протеин-дисульфид-оксидоредуктаз и их комбинаций;
при этом указанная температура при фазе роста на 2-10 °С превышает указанную температуру при фазе образования продукта, и указанная скорость перемешивания при фазе роста на 50-250 об/мин превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта; и
(b) выделение указанного полуантитела против ИЛ-17 из указанной клетки-хозяина.
33. Способ по п. 32, отличающийся тем, что указанное полуантитело против ИЛ-17 содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию впадины.
34. Способ по любому из пп. 28-33, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид дополнительно содержит три копии промотора, причем первая копия функциональным образом объединена с указанной первой единицей трансляции, вторая копия функциональным образом объединена с указанной второй единицей трансляции, и третья копия функциональным образом объединена с указанной третьей единицей трансляции для запуска транскрипции указанной тяжелой цепи, указанной легкой цепи и указанного белка-шаперона.
35. Способ по п. 34, отличающийся тем, что указанный промотор представляет собой индуцибельный промотор.
36. Способ по п. 35, отличающийся тем, что указанный индуцибельный промотор представляет собой промотор, индуцируемый IPTG, запускающий транскрипцию указанной тяжелой цепи, указанной легкой цепи и указанного белка-шаперона в отсутствие IPTG-индукции.
37. Способ по п. 35, отличающийся тем, что указанный индуцибельный промотор представляет собой pho-промотор, запускающий транскрипцию указанной тяжелой цепи, указанной легкой цепи и указанного белка-шаперона при исчерпании фосфата в культуральной среде.
38. Способ по любому из пп. 28-37, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид дополнительно содержит селективный маркер, и указанная культуральная среда содержит селективный агент, состоящий из одиночного антибиотика, вызывающий сохранение указанного одновалентного антитела в клетке-хозяине.
39. Способ по любому из пп. 28-38, отличающийся тем, что указанная первая единица трансляции содержит первую область инициации трансляции (TIR), которая функциональным образом объединена с кодирующей областью указанного вариабельного домена тяжелой цепи, и указанная вторая единица трансляции содержит вторую область инициации трансляции (TIR), которая функциональным образом объединена с кодирующей областью указанного вариабельного домена легкой цепи, причем относительная интенсивность трансляции первой и второй TIR составляет от приблизительно 1,0 до приблизительно 3,0.
40. Способ по любому из пп. 28-39, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один белок-шаперон или указанный первый белок-шаперон содержит пептидил-пролил-изомеразу.
41. Способ по п. 40, отличающийся тем, что указанная пептидил-пролил-изомераза представляет собой белок FkpA.
42. Способ по п. 41, отличающийся тем, что FkpA представляет собой FkpA E. coli.
43. Способ по любому из пп. 40-42, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один белок-шаперон дополнительно содержит или один или оба из указанного второго белка-шаперона и указанного третьего белка-шаперона содержат протеин-дисульфид-оксидоредуктазу.
44. Способ по п. 43, отличающийся тем, что указанная протеин-дисульфид-оксидоредуктаза представляет собой один или оба из белка DsbA и белка DsbC.
45. Способ по любому из пп. 28-44, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна протеин-дисульфид-оксидоредуктаза представляет собой один или оба из DsbA E. coli и DsbC E. coli.
46. Способ по любому из пп. 28-45, отличающийся тем, что указанная прокариотическая клетка-хозяин представляет собой грамотрицательную бактерию.
47. Способ по п. 46, отличающийся тем, что указанная грамотрицательная бактерия представляет собой E. coli.
48. Способ по п. 47, отличающийся тем, что указанная E. coli принадлежит к штамму, дефектному по активности эндогенных протеазы.
49. Способ по любому из пп. 28-48, отличающийся тем, что указанная температура при фазе роста находится в диапазоне от приблизительно 30°C до приблизительно 34 °C в течение указанной фазы роста, и указанная температура при фазе образования продукта находится в диапазоне от приблизительно 25 °С до приблизительно 29 °C в течение указанной фазы образования продукта.
50. Способ по любому из пп. 28-49, отличающийся тем, что указанная скорость перемешивания при фазе роста достаточна для достижения указанной клеткой-хозяином в течение указанной фазы роста скорости поглощения кислорода, которая на 0,5-2,5 ммоль/л/мин превышает пиковую скорость поглощения кислорода указанной клеткой-хозяином в течение фазы образования продукта.
51. Способ по любому из пп. 28-49, отличающийся тем, что пиковая скорость поглощения кислорода указанной клеткой-хозяином в течение указанной фазы роста находится в диапазоне от 3,5 до 4,5 ммоль/л/мин, и скорость поглощения кислорода указанной клеткой-хозяином в течение указанной фазы образования продукта находится в диапазоне от 1,0 до 3,0 ммоль/л/мин.
52. Способ получения биспецифического антитела, содержащего первое полуантитело, способное связывать первый антиген, и второе полуантитело, способное связывать второй антиген, причем указанный способ включает: объединение указанного первого полуантитела с указанным вторым полуантителом при восстанавливающих условиях с получением биспецифического антитела, причем указаное первое полуантитело содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию выступа, и второе полуантитело содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию впадины, и при этом как указанное первое полуантитело, так и указанное второе полуантитело получают способом по любому из пп. 28-51.
53. Способ по п. 52, отличающийся тем, что указанный антиген первой половины и указанный антиген второй половины представляют собой различные антигены.
54. Способ по п. 52, отличающийся тем, что указанное первое полуантитело способно связывать ИЛ-13
55. Способ по п. 52, отличающийся тем, что указанное второе полуантитело способно связывать ИЛ-17.
56. Способ по любому из пп. 52-55, дополнительно включающий этап добавления восстанавливающего агента с целью достижения восстановительных условий.
57. Способ по п. 56, отличающийся тем, что указанный восстанавливающий агент представляет собой глутатион.
58. Способ получения биспецифического антитела, содержащего первое полуантитело, способное связывать ИЛ-13, и второе полуантитело, способное связывать ИЛ-17, причем указанный способ включает:
(а) культивирование первой прокариотической клетки-хозяина для экспрессии первой тяжелой цепи и первой легкой цепи указанного первого полуантитела, причем (i) указанная первая тяжелая цепь содержит вариабельный домен первой тяжелой цепи, содержащий HVR-H1 согласно SEQ ID NO:9, HVR-H2 согласно SEQ ID NO:10 и HVR-H3 согласно SEQ ID NO:11; и (ii) указанная первая легкая цепь содержит вариабельный домен первой легкой цепи, содержащий HVR-L1 согласно SEQ ID NO:12, HVR-L2 согласно SEQ ID NO:13 и HVR-L3 согласно SEQ ID NO:14, при этом после экспрессии происходит сборка указанной первой тяжелой цепи и указанной первой легкой цепи с образованием указанного первого полуантитела в указанной клетке-хозяине; и
(а') культивирование второй прокариотической клетки-хозяина для экспрессии второй тяжелой цепи и второй легкой цепи указанного второго полуантитела, причем (i) указанная вторая тяжелая цепь содержит вариабельный домен второй тяжелой цепи, содержащий HVR-H1 согласно SEQ ID NO:20, HVR-H2 согласно SEQ ID NO:21 и HVR-H3 согласно SEQ ID NO:22; и (ii) указанная вторая легкая цепь содержит вариабельный домен второй легкой цепи, содержащий HVR-L1 согласно SEQ ID NO:23, HVR-L2 согласно SEQ ID NO:24 и HVR-L3 согласно SEQ ID NO:25, при этом после экспрессии происходит сборка указанной второй тяжелой цепи и указанной второй легкой цепи с образованием указанного второго полуантитела в указанной клетке-хозяине;
причем указанная первая клетка-хозяин содержит первый полинуклеотид, содержащий:
(1) первую единицу трансляции, кодирующую указанную первую тяжелую цепь;
(2) вторую единицу трансляции, кодирующую указанную первую легкую цепь; и
указанная вторая клетка-хозяин содержит второй полинуклеотид, содержащий:
(1') третью единицу трансляции, кодирующую указанную вторую тяжелую цепь;
(2') четвертую единицу трансляции, кодирующую указанную вторую легкую цепь;
причем как указанный первый полинуклеотид, так и указанный второй полинуклеотид дополнительно содержат:
(3) пятую единицу трансляции, кодирующую первый белок-шаперон;
(4) шестую единицу трансляции, кодирующую второй белок-шаперон; и
(5) седьмую единицу трансляции, кодирующую третий белок-шаперон,
при этом указанные первый, второй и третий белки-шапероны выбраны из группы, состоящей из пептидил-пролил-изомераз, протеин-дисульфид-оксидоредуктаз и их комбинаций;
при этом как указанную первую клетку-хозяина, так и указанную вторую клетку-хозяина по отдельности культивируют в культуральной среде в условиях, предусматривающих:
температуру при фазе роста и скорость перемешивания при фазе роста, и
температуру при фазе образования продукта и скорость перемешивания при фазеобразования продукта,
при этом указанная температура при фазе роста на 2-10 °С превышает указанную температуру при фазе образования продукта, и указанная скорость перемешивания при фазе роста на 50-250 об/мин превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта;
(b) выделение указанного первого полуантитела из указанной первой клетки-хозяина;
(b') выделение указанного второго полуантитела из указанной второй клетки-хозяина; и
(с) объединение указанного первого полуантитела с указанным вторым полуантителом при восстановительных условиях для получения биспецифического антитела, способного связываться как с ИЛ-13, так и с ИЛ-17.
59. Способ по п. 58, отличающийся тем, что указанное первое полуантитело содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию выступа, и второе полуантитело содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию впадины.
60. Способ по любому из пп. 58-59, дополнительно включающий этап добавления восстанавливающего агента с целью достижения восстановительных условий.
61. Способ по п. 60, отличающийся тем, что указанный восстанавливающий агент представляет собой глутатион.
62. Композиция, содержащая биспецифическое антитело по любому из пп. 52-61.
63. Способ по любому из пп. 30-62, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен тяжелой цепи указанного полуантитела против ИЛ-13 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7; и указанный вариабельный домен легкой цепи указанного антитела против ИЛ-13 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8.
64. Способ по любому из пп. 30-62, отличающийся тем, что указанная тяжелая цепь указанного полуантитела против ИЛ-13 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:15 или SEQ ID NO:16.
65. Способ по любому из пп. 30-62, отличающийся тем, что указанная легкая цепь указанного полуантитела против ИЛ-13 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:17.
66. Способ по любому из пп. 32-62, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен тяжелой цепи указанного полуантитела против ИЛ-17 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:18; и указанный вариабельный домен легкой цепи указанного антитела против ИЛ-17 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:19.
67. Способ по любому из пп. 32-62, отличающийся тем, что указанная тяжелая цепь указанного полуантитела против ИЛ-17 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:26 или SEQ ID NO:27.
68. Способ по любому из пп. 32-62, отличающийся тем, что указанная легкая цепь указанного полуантитела против ИЛ-17 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:28.
69. Способ по любому из пп. 1-68, отличающийся тем, что указанная скорость перемешивания при фазе роста превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта на приблизительно 10-40%.
RU2017119403A 2014-11-05 2015-11-05 Способы получения двуцепочечных белков в бактериях RU2705274C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462075792P 2014-11-05 2014-11-05
US62/075,792 2014-11-05
US201562207882P 2015-08-20 2015-08-20
US62/207,882 2015-08-20
PCT/US2015/059339 WO2016073791A1 (en) 2014-11-05 2015-11-05 Methods of producing two chain proteins in bacteria

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2017119403A true RU2017119403A (ru) 2018-12-05
RU2017119403A3 RU2017119403A3 (ru) 2019-03-27
RU2705274C2 RU2705274C2 (ru) 2019-11-06

Family

ID=54754738

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017119403A RU2705274C2 (ru) 2014-11-05 2015-11-05 Способы получения двуцепочечных белков в бактериях

Country Status (13)

Country Link
US (2) US10112994B2 (ru)
EP (1) EP3215526A1 (ru)
JP (3) JP6875276B2 (ru)
KR (1) KR20170075793A (ru)
CN (1) CN108064308B (ru)
AU (1) AU2015342961B2 (ru)
BR (1) BR112017009152A2 (ru)
CA (1) CA2966558C (ru)
HK (1) HK1255201A1 (ru)
IL (1) IL252027B (ru)
MX (1) MX2017005930A (ru)
RU (1) RU2705274C2 (ru)
WO (1) WO2016073791A1 (ru)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20170075793A (ko) 2014-11-05 2017-07-03 제넨테크, 인크. 박테리아 내 2쇄 단백질을 생산하는 방법
AU2015342964B2 (en) 2014-11-05 2021-06-24 Genentech, Inc. Methods of producing two chain proteins in bacteria
CA3117051A1 (en) 2018-11-05 2020-05-14 Genentech, Inc. Methods of producing two chain proteins in prokaryotic host cells
AU2020211976A1 (en) * 2019-01-23 2021-07-15 Genentech, Inc. Methods of producing multimeric proteins in eukaryotic host cells

Family Cites Families (87)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE266710C (ru)
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
ATE108068T1 (de) 1987-09-23 1994-07-15 Bristol Myers Squibb Co Antikörper-heterokonjugate zur töting von hiv- infizierten zellen.
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
JP2919890B2 (ja) 1988-11-11 1999-07-19 メディカル リサーチ カウンスル 単一ドメインリガンド、そのリガンドからなる受容体、その製造方法、ならびにそのリガンドおよび受容体の使用
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
EP0739904A1 (en) 1989-06-29 1996-10-30 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
DE69133566T2 (de) 1990-01-12 2007-12-06 Amgen Fremont Inc. Bildung von xenogenen Antikörpern
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
KR100272077B1 (ko) 1990-08-29 2000-11-15 젠팜인터내셔날,인코포레이티드 이종 항체를 생산할 수 있는 전이유전자를 가진 인간이외의 동물
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
CA2405246A1 (en) 1990-12-03 1992-06-11 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with alterred binding properties
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
EP0586505A1 (en) 1991-05-14 1994-03-16 Repligen Corporation Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection
CA2103059C (en) 1991-06-14 2005-03-22 Paul J. Carter Method for making humanized antibodies
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
CA2116774C (en) 1991-09-19 2003-11-11 Paul J. Carter Expression in e. coli antibody fragments having at least a cysteine present as a free thiol. use for the production of bifunctional f(ab') 2 antibodies
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
CA2129663C (en) 1992-02-06 2005-07-05 James S. Huston Biosynthetic binding protein for cancer marker
ATE149570T1 (de) 1992-08-17 1997-03-15 Genentech Inc Bispezifische immunoadhesine
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
KR20050085971A (ko) 1995-04-27 2005-08-29 아브게닉스, 인크. 면역화된 제노마우스 유래의 인간 항체
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
EP2314625B1 (en) 1996-12-03 2014-05-07 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and Vkappa regions and antibodies produced therefrom
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
DK1034298T3 (da) 1997-12-05 2012-01-30 Scripps Research Inst Humanisering af murint antistof
JP2002510481A (ja) 1998-04-02 2002-04-09 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗体変異体及びその断片
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ES2694002T3 (es) 1999-01-15 2018-12-17 Genentech, Inc. Polipéptido que comprende una región Fc de IgG1 humana variante
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
CA2364568A1 (en) 1999-03-17 2000-09-21 Adrian Woolfson Method for refolding molecules of polypeptides containing ig domains
GB9911569D0 (en) * 1999-05-18 1999-07-21 Oxford Biomedica Ltd Antibodies
US20030180714A1 (en) 1999-12-15 2003-09-25 Genentech, Inc. Shotgun scanning
DE60138127D1 (de) * 2000-11-03 2009-05-07 Genentech Inc Stoffwechseländerungen in gärungen zur produktion rekombinanter proteine
WO2002061090A2 (en) * 2000-12-14 2002-08-08 Genentech, Inc. Prokaryotically produced antibodies and uses thereof
MXPA04001566A (es) 2001-08-27 2004-05-17 Genentech Inc Un sistema para expresion y ensamblado de anticuerpos.
ATE290020T1 (de) 2001-08-31 2005-03-15 Avidex Ltd Löslicher t zell rezeptor
EP1513879B1 (en) 2002-06-03 2018-08-22 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
MXPA05000815A (es) * 2002-07-19 2005-04-28 Abbott Biotech Ltd Tratamiento de trastornos relacionados con tnfa.
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
TWI335821B (en) 2002-12-16 2011-01-11 Genentech Inc Immunoglobulin variants and uses thereof
US20050079574A1 (en) 2003-01-16 2005-04-14 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
WO2004106381A1 (en) 2003-05-31 2004-12-09 Micromet Ag Pharmaceutical compositions comprising bispecific anti-cd3, anti-cd19 antibody constructs for the treatment of b-cell related disorders
SI2784084T2 (sl) 2003-07-08 2024-02-29 Novartis Pharma Ag Antagonistična protitelesa proti IL-17 A/F heterolognim polipeptidom
PT1691833E (pt) 2003-11-28 2010-06-08 Micromet Ag Composições compreendendo polipéptidos
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
EP1703893B1 (en) * 2003-12-23 2012-04-11 Genentech, Inc. Novel anti-il 13 antibodies and uses thereof
JP4501451B2 (ja) 2004-02-18 2010-07-14 株式会社豊田自動織機 塗料組成物、塗料組成物を用いた透明性保護膜の製造方法および透明性保護膜を有する有機ガラス
AU2005230848B9 (en) 2004-03-31 2011-06-02 Genentech, Inc. Humanized anti-TGF-beta antibodies
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
ES2403055T3 (es) 2004-04-13 2013-05-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticuerpos anti-P-selectina
JP2008511337A (ja) 2004-09-02 2008-04-17 ジェネンテック・インコーポレーテッド ヘテロ多量体分子
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
AU2006301492B2 (en) 2005-10-11 2011-06-09 Amgen Research (Munich) Gmbh Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof
EP2465870A1 (en) 2005-11-07 2012-06-20 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences
US20070237764A1 (en) 2005-12-02 2007-10-11 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
CA2651567A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
RS53008B2 (sr) 2007-04-03 2022-12-30 Amgen Res Munich Gmbh Interspecijski specifičan cd3-epsilon vezujući domen
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
US20090317400A1 (en) 2008-05-05 2009-12-24 Krzysztof Masternak Anti-IL 17A/IL-17F Cross-Reactive Antibodies and Methods of Use Thereof
WO2010127284A2 (en) 2009-05-01 2010-11-04 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
BR112012010153B1 (pt) 2009-11-05 2022-05-03 Genentech, Inc Método de produção de um anticorpo
WO2011133886A2 (en) 2010-04-23 2011-10-27 Genentech, Inc. Production of heteromultimeric proteins
DK2670847T3 (en) * 2011-02-03 2017-01-16 Xoma Technology Ltd Methods and Materials for Improving Functional Protein Expression in Bacteria
US9158890B2 (en) 2011-07-27 2015-10-13 At&T Mobility Ii Llc Mobile applications and methods for conveying performance information of a cardiac pacemaker
KR102106002B1 (ko) * 2011-10-11 2020-05-07 제넨테크, 인크. 이중특이적 항체의 개선된 어셈블리
BR112015024553A2 (pt) * 2013-04-05 2017-10-24 Genentech Inc anticorpo multiespecífico, anticorpo isolado, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método de produção de anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, uso de anticorpo e método de tratamento de indivíduos com distúrbio
US10190145B2 (en) 2013-04-19 2019-01-29 Sutro Biopharma, Inc. Expression of biologically active proteins in a bacterial cell-free synthesis system using bacterial cells transformed to exhibit elevated levels of chaperone expression
CA2937556A1 (en) * 2014-02-21 2015-08-27 Genentech, Inc. Anti-il-13/il-17 bispecific antibodies and uses thereof
KR20170075793A (ko) 2014-11-05 2017-07-03 제넨테크, 인크. 박테리아 내 2쇄 단백질을 생산하는 방법
AU2015342964B2 (en) 2014-11-05 2021-06-24 Genentech, Inc. Methods of producing two chain proteins in bacteria

Also Published As

Publication number Publication date
US20190112368A1 (en) 2019-04-18
US20160159898A1 (en) 2016-06-09
CA2966558C (en) 2024-03-12
KR20170075793A (ko) 2017-07-03
WO2016073791A1 (en) 2016-05-12
RU2705274C2 (ru) 2019-11-06
HK1255201A1 (zh) 2019-08-09
BR112017009152A2 (pt) 2018-03-06
US10112994B2 (en) 2018-10-30
MX2017005930A (es) 2017-06-30
JP6875276B2 (ja) 2021-05-19
AU2015342961A1 (en) 2017-06-15
JP2018500008A (ja) 2018-01-11
EP3215526A1 (en) 2017-09-13
CN108064308B (zh) 2023-06-09
US11299539B2 (en) 2022-04-12
JP2023088935A (ja) 2023-06-27
IL252027B (en) 2021-10-31
RU2017119403A3 (ru) 2019-03-27
CA2966558A1 (en) 2016-05-12
JP2021119777A (ja) 2021-08-19
IL252027A0 (en) 2017-06-29
AU2015342961B2 (en) 2021-08-12
CN108064308A (zh) 2018-05-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2017119396A (ru) Способы получения двуцепочечных белков в бактериях
JP2022177090A5 (ru)
RU2017119403A (ru) Способы получения двуцепочечных белков в бактериях
JP2017533730A5 (ru)
RU2020124623A (ru) Антитела, специфичные к гетеродимеру cd3-дельта/эпсилон
PE20211498A1 (es) Anticuerpos dirigidos contra il-11
US10358460B2 (en) Protein manufacture
PE20240218A1 (es) Anticuerpos madurados por afinidad y humanizados para fcrh5
JP2011510654A5 (ru)
RU2016101137A (ru) Гуманизированные антитела, которые распознают альфа-синуклеин
RU2014136103A (ru) Антагонистические антитела против рецептора IL-7 и способы
AR040046A1 (es) Anticuerpo neutralizante humano anti-igfr
PE20240802A1 (es) Anticuerpos multiespecificos con especificidad para il-4r e il-31
JP2014515598A (ja) 二重特異性三鎖抗体様分子
RU2019129917A (ru) Химерный антигенный рецептор
RU2017134043A (ru) Модифицированные антитела igg, которые связываются с трансформирующим фактором роста бета-1 с высокой аффинностью, авидностью и специфичностью
JP2018500008A5 (ru)
JP2012523221A5 (ru)
JP6854342B2 (ja) ファージ表面上での二重特異性抗体の提示
JP2021501157A5 (ru)
RU2016129198A (ru) Новое антитело против adam 17 и его применения для лечения рака
AR126009A1 (es) Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que se dirigen a epcam
JP2022525332A (ja) 免疫抑制の方法
JP2022108389A (ja) 目的のヘテロダイマータンパク質を製造する方法
RU2022107387A (ru) Межвидовые антитела к латентному tgf-бeta 1 и способы их применения