RU2017119403A - Способы получения двуцепочечных белков в бактериях - Google Patents

Способы получения двуцепочечных белков в бактериях Download PDF

Info

Publication number
RU2017119403A
RU2017119403A RU2017119403A RU2017119403A RU2017119403A RU 2017119403 A RU2017119403 A RU 2017119403A RU 2017119403 A RU2017119403 A RU 2017119403A RU 2017119403 A RU2017119403 A RU 2017119403A RU 2017119403 A RU2017119403 A RU 2017119403A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
specified
antibody
host cell
semi
phase
Prior art date
Application number
RU2017119403A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2017119403A3 (ru
RU2705274C2 (ru
Inventor
Доротея РЕЙЛЛИ
Джеймс ДЖУЛЬЯНОТТИ
Original Assignee
Дженентек, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дженентек, Инк. filed Critical Дженентек, Инк.
Publication of RU2017119403A publication Critical patent/RU2017119403A/ru
Publication of RU2017119403A3 publication Critical patent/RU2017119403A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2705274C2 publication Critical patent/RU2705274C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Claims (147)

1. Способ получения полипептида, содержащего две цепи, в прокариотической клетке-хозяине, причем указанный способ включает:
(а) культивирование указанной клетки-хозяина для экспрессии двух цепей указанного полипептида в культуральной среде в условиях, предусматривающих:
температуру при фазе роста и скорость перемешивания при фазе роста, и
температуру при фазе образования продукта и скорость перемешивания при фазе образования продукта, причем после экспрессии происходит фолдинг и сборка указанных двух цепей с образованием биологически активного полипептида в указанной клетке-хозяине;
при этом указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, содержащий
(1) первую единицу трансляции, кодирующую первую цепь указанного полипептида;
(2) вторую единицу трансляции, кодирующую вторую цепь указанного полипептида; и
(3) третью единицу трансляции, кодирующую по меньшей мере один белок-шаперон, выбранный из группы, состоящей из пептидил-пролил-изомераз, протеин-дисульфид-оксидоредуктаз и их комбинаций;
причем указанная температура при фазе роста на 2-10 °С превышает указанную температуру при фазе образования продукта, и указанная скорость перемешивания при фазе роста на 50-250 об/мин превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта; и
(b) выделение указанного биологически активного полипептида из указанной клетки-хозяина.
2. Способ получения полипептида, содержащего две цепи, в прокариотической клетке-хозяине, причем указанный способ включает:
(а) культивирование указанной клетки-хозяина для экспрессии двух цепей указанного полипептида в культуральной среде в условиях, предусматривающих:
температуру при фазе роста и скорость перемешивания при фазе роста, и
температуру при фазе образования продукта и скорость перемешивания при фазе образования продукта, причем после экспрессии происходит фолдинг и сборка указанных двух цепей с образованием биологически активного полипептида в указанной клетке-хозяине;
при этом указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, содержащий:
(1) первую единицу трансляции, кодирующую первую цепь указанного полипептида;
(2) вторую единицу трансляции, кодирующую вторую цепь указанного полипептида;
(3) третью единицу трансляции, кодирующую первый белок-шаперон;
(4) четвертую единицу трансляции, кодирующую второй белок-шаперон; и
(5) пятую единицу трансляции, кодирующую третий белок-шаперон,
при этом указанные первый, второй и третий белки-шапероны выбраны из группы, состоящей из пептидил-пролил-изомераз, протеин-дисульфид-оксидоредуктаз и их комбинаций;
при этом указанная температура при фазе роста на 2-10 °С превышает указанную температуру при фазе образования продукта, и указанная скорость перемешивания при фазе роста на 50-250 об/мин превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта; и
(b) выделение указанного биологически активного полипептида из указанной клетки-хозяина.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид дополнительно содержит три копии промотора, причем первая копия функциональным образом объединена с указанной первой единицей трансляции, вторая копия функциональным образом объединена с указанной второй единицей трансляции, и третья копия функциональным образом объединена с указанной третьей единицей трансляции для запуска транскрипции указанной первой цепи, указанной второй цепи и указанного белка-шаперона.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанный промотор представляет собой индуцибельный промотор.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанный индуцибельный промотор представляет собой промотор, индуцируемый IPTG, который запускает транскрипцию указанной первой цепи, указанной второй цепи и указанного белка-шаперона в отсутствие IPTG-индукции.
6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанный индуцибельный промотор представляет собой Pho-промотор, который запускает транскрипцию указанной первой цепи, указанной второй цепи и указанного белка-шаперона при исчерпании фосфата в указанной культуральной среде.
7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид дополнительно содержит селективный маркер, и указанная культуральная среда содержит селективный агент, состоящий из одиночного антибиотика, вызывающий сохранение указанного полинуклеотида в указанной клетке-хозяине.
8. Способ по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что указанная первая единица трансляции содержит первую область инициации трансляции (TIR), которая функциональным образом объединена с кодирующей областью указанной первой цепи, и указанная вторая единица трансляции содержит вторую область инициации трансляции (TIR), которая функциональным образом объединена с кодирующей областью второй цепи, причем относительная интенсивность трансляции первой и второй TIR составляет от приблизительно 1,0 до приблизительно 3,0.
9. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один белок-шаперон или указанный первый белок-шаперон содержит пептидил-пролил-изомеразу.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что указанная пептидил-пролил-изомераза представляет собой белок FkpA.
11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что FkpA представляет собой FkpA E. coli.
12. Способ по любому из пп. 9-11, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один белок-шаперон дополнительно содержит или один или оба из указанных второго белка-шаперона и третьего белка-шаперона содержат протеин-дисульфид-оксидоредуктазу.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что указанная протеин-дисульфид-оксидоредуктаза представляет собой один или оба из белка DsbA и белка DsbC.
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна протеин-дисульфид-оксидоредуктаза представляет собой один или оба из DsbA E. coli и DsbC E. coli.
15. Способ по любому из пп. 1-14, отличающийся тем, что указанная прокариотическая клетка-хозяин представляет собой грамотрицательную бактерию.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что указанная грамотрицательная бактерия представляет собой E. coli.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что указанная E. coli принадлежит к штамму с мутацией degpS210A.
18. Способ по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что указанная E. coli представляет собой штамм с генотипом W3110 ΔfhuA ΔphoA ilvG2096 (Valr ) Δprc spr43H1 ΔdegP ΔmanA lacI Q ΔompT ΔmenE degpS210A.
19. Способ по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что указанный полипептид представляет собой мономер или гетеродимер.
20. Способ по любому из пп. 1-19, отличающийся тем, что указанные две цепи полипептида связаны друг с другом по меньшей мере одной дисульфидной связью.
21. Способ по любому из пп. 1-20, отличающийся тем, что указанный полипептид представляет собой одновалентное антитело, причем указанная первая цепь и указанная вторая цепь содержат тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина.
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что указанное одновалентное антитело способно специфически связывать антиген.
23. Способ по любому из пп. 1-22, отличающийся тем, что указанный полипептид представляет собой секреторный белок.
24. Способ по п. 24, отличающийся тем, что указанный секреторный белок выделяют из периплазмы указанной клетки-хозяина.
25. Способ по любому из пп. 1-24, отличающийся тем, что указанная температура при фазе роста находится в диапазоне от приблизительно 30°C до приблизительно 34 °C в течение указанной фазы роста, и указанная температура при фазе образования продукта находится в диапазоне от приблизительно 25 °С до приблизительно 29 °C в течение указанной фазы образования продукта.
26. Способ по любому из пп. 1-25, отличающийся тем, что указанная скорость перемешивания при росте достаточна для достижения указанной клеткой-хозяином в течение фазы роста скорости поглощения кислорода, которая на 0,5-2,5 ммоль/л/мин превышает пиковую скорость поглощения кислорода указанной клеткой-хозяином в течение фазы образования продукта.
27. Способ по любому из пп. 1-25, отличающийся тем, что пиковая скорость поглощения кислорода указанной клеткой-хозяином в течение указанной фазы роста находится в диапазоне от 3,5 до 4,5 ммоль/л/мин, и скорость поглощения кислорода указанной клеткой-хозяином в течение указанной фазы образования продукта находится в диапазоне от 1,0 до 3,0 ммоль/л/мин.
28. Способ получения полуантитела, содержащего тяжелую цепь и легкую цепь, в прокариотической клетке-хозяине, причем указанный способ включает:
(а) культивирование указанной клетки-хозяина для экспрессии указанной тяжелой цепи и указанной легкой цепи в культуральной среде в условиях, предусматривающих:
температуру при фазе роста и скорость перемешивания при фазе роста, и
температуру при фазе образования продукта и скорость перемешивания при фазе образования продукта, причем после экспрессии происходит фолдинг и сборка указанной тяжелой цепи и указанной легкой цепи с образованием полуантитела в указанной клетке-хозяине;
при этом указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, содержащий:
(1) первую единицу трансляции, кодирующую тяжелую цепь указанного полуантитела;
(2) вторую единицу трансляции, кодирующую легкую цепь указанного полуантитела;
(3) третью единицу трансляции, кодирующую первый белок-шаперон;
(4) четвертую единицу трансляции, кодирующую второй белок-шаперон; и
(5) пятую единицу трансляции, кодирующую третий белок-шаперон,
при этом указанные первый, второй и третий белки-шапероны выбраны из группы, состоящей из пептидил-пролил-изомераз, протеин-дисульфид-оксидоредуктаз и их комбинаций;
при этом указанная температура при фазе роста на 2-10 °С превышает указанную температуру при фазе образования продукта, и указанная скорость перемешивания при фазе роста на 50-250 об/мин превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта; и
(b) выделение указанного полуантитела из указанной клетки-хозяина.
29. Способ по п. 28, отличающийся тем, что указанное полуантитело содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию впадины, или по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию выступа.
30. Способ получения полуантитела против ИЛ-13, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, в прокариотической клетке-хозяине, причем указанный способ включает:
(а) культивирование указанной клетки-хозяина для экспрессии указанной тяжелой цепи и указанной легкой цепи в культуральной среде в условиях, предусматривающих:
температуру при фазе роста и скорость перемешивания при фазе роста, и
температуру при фазе образования продукта и скорость перемешивания при фазе образования продукта, при этом (i) указанная тяжелая цепь содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий HVR-H1 согласно SEQ ID NO:9, HVR-H2 согласно SEQ ID NO:10 и HVR-H3 согласно SEQ ID NO:11; и (ii) указанная легкая цепь содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий HVR-L1 согласно SEQ ID NO:12, HVR-L2 согласно SEQ ID NO:13 и HVR-L3 согласно SEQ ID NO:14, причем, после экспрессии происходит сборка указанной тяжелой цепи и указанной легкой цепи с образованием полуантитела против ИЛ-13 в указанной клетке-хозяине;
при этом указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, содержащий:
(1) первую единицу трансляции, кодирующую указанную тяжелую цепь указанного полуантитела;
(2) вторую единицу трансляции, кодирующую указанную легкую цепь указанного полуантитела;
(3) третью единицу трансляции, кодирующую первый белок-шаперон;
(4) четвертую единицу трансляции, кодирующую второй белок-шаперон; и
(5) пятую единицу трансляции, кодирующую третий белок-шаперон,
при этом указанные первый, второй и третий белки-шапероны выбраны из группы, состоящей из пептидил-пролил-изомераз, протеин-дисульфид-оксидоредуктаз и их комбинаций;
при этом указанная температура при фазе роста на 2-10 °С превышает указанную температуру при фазе образования продукта, и указанная скорость перемешивания при фазе роста на 50-250 об/мин превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта; и
(b) выделение указанного полуантитела против ИЛ-13 из указанной клетки-хозяина.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что указанное полуантитело против ИЛ-13 содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию выступа.
32. Способ получения полуантитела против ИЛ-17, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, в прокариотической клетке-хозяине, причем указанный способ включает:
(а) культивирование указанной клетки-хозяина для экспрессии указанной тяжелой цепи и указанной легкой цепи в культуральной среде в условиях, предусматривающих:
температуру при фазе роста и скорость перемешивания при фазе роста, и
температуру при фазе образования продукта и скорость перемешивания при фазе образования продукта,
при этом (i) указанная тяжелая цепь содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий HVR-H1 согласно SEQ ID NO:20, HVR-H2 согласно SEQ ID NO:21 и HVR-H3 согласно SEQ ID NO:22; и (ii) указанная легкая цепь содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий HVR-L1 согласно SEQ ID NO:23, HVR-L2 согласно SEQ ID NO:24 и HVR-L3 согласно SEQ ID NO:25, причем, после экспрессии происходит сборка указанной тяжелой цепи и указанной легкой цепи с образованием полуантитела против ИЛ-17 в указанной клетке-хозяине;
при этом указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, содержащий:
(1) первую единицу трансляции, кодирующую тяжелую цепь указанного полуантитела;
(2) вторую единицу трансляции, кодирующую легкую цепь указанного полуантитела;
(3) третью единицу трансляции, кодирующую первый белок-шаперон;
(4) четвертую единицу трансляции, кодирующую второй белок-шаперон; и
(5) пятую единицу трансляции, кодирующую третий белок-шаперон,
при этом указанные первый, второй и третий белки-шапероны выбраны из группы, состоящей из пептидил-пролил-изомераз, протеин-дисульфид-оксидоредуктаз и их комбинаций;
при этом указанная температура при фазе роста на 2-10 °С превышает указанную температуру при фазе образования продукта, и указанная скорость перемешивания при фазе роста на 50-250 об/мин превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта; и
(b) выделение указанного полуантитела против ИЛ-17 из указанной клетки-хозяина.
33. Способ по п. 32, отличающийся тем, что указанное полуантитело против ИЛ-17 содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию впадины.
34. Способ по любому из пп. 28-33, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид дополнительно содержит три копии промотора, причем первая копия функциональным образом объединена с указанной первой единицей трансляции, вторая копия функциональным образом объединена с указанной второй единицей трансляции, и третья копия функциональным образом объединена с указанной третьей единицей трансляции для запуска транскрипции указанной тяжелой цепи, указанной легкой цепи и указанного белка-шаперона.
35. Способ по п. 34, отличающийся тем, что указанный промотор представляет собой индуцибельный промотор.
36. Способ по п. 35, отличающийся тем, что указанный индуцибельный промотор представляет собой промотор, индуцируемый IPTG, запускающий транскрипцию указанной тяжелой цепи, указанной легкой цепи и указанного белка-шаперона в отсутствие IPTG-индукции.
37. Способ по п. 35, отличающийся тем, что указанный индуцибельный промотор представляет собой pho-промотор, запускающий транскрипцию указанной тяжелой цепи, указанной легкой цепи и указанного белка-шаперона при исчерпании фосфата в культуральной среде.
38. Способ по любому из пп. 28-37, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид дополнительно содержит селективный маркер, и указанная культуральная среда содержит селективный агент, состоящий из одиночного антибиотика, вызывающий сохранение указанного одновалентного антитела в клетке-хозяине.
39. Способ по любому из пп. 28-38, отличающийся тем, что указанная первая единица трансляции содержит первую область инициации трансляции (TIR), которая функциональным образом объединена с кодирующей областью указанного вариабельного домена тяжелой цепи, и указанная вторая единица трансляции содержит вторую область инициации трансляции (TIR), которая функциональным образом объединена с кодирующей областью указанного вариабельного домена легкой цепи, причем относительная интенсивность трансляции первой и второй TIR составляет от приблизительно 1,0 до приблизительно 3,0.
40. Способ по любому из пп. 28-39, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один белок-шаперон или указанный первый белок-шаперон содержит пептидил-пролил-изомеразу.
41. Способ по п. 40, отличающийся тем, что указанная пептидил-пролил-изомераза представляет собой белок FkpA.
42. Способ по п. 41, отличающийся тем, что FkpA представляет собой FkpA E. coli.
43. Способ по любому из пп. 40-42, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один белок-шаперон дополнительно содержит или один или оба из указанного второго белка-шаперона и указанного третьего белка-шаперона содержат протеин-дисульфид-оксидоредуктазу.
44. Способ по п. 43, отличающийся тем, что указанная протеин-дисульфид-оксидоредуктаза представляет собой один или оба из белка DsbA и белка DsbC.
45. Способ по любому из пп. 28-44, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна протеин-дисульфид-оксидоредуктаза представляет собой один или оба из DsbA E. coli и DsbC E. coli.
46. Способ по любому из пп. 28-45, отличающийся тем, что указанная прокариотическая клетка-хозяин представляет собой грамотрицательную бактерию.
47. Способ по п. 46, отличающийся тем, что указанная грамотрицательная бактерия представляет собой E. coli.
48. Способ по п. 47, отличающийся тем, что указанная E. coli принадлежит к штамму, дефектному по активности эндогенных протеазы.
49. Способ по любому из пп. 28-48, отличающийся тем, что указанная температура при фазе роста находится в диапазоне от приблизительно 30°C до приблизительно 34 °C в течение указанной фазы роста, и указанная температура при фазе образования продукта находится в диапазоне от приблизительно 25 °С до приблизительно 29 °C в течение указанной фазы образования продукта.
50. Способ по любому из пп. 28-49, отличающийся тем, что указанная скорость перемешивания при фазе роста достаточна для достижения указанной клеткой-хозяином в течение указанной фазы роста скорости поглощения кислорода, которая на 0,5-2,5 ммоль/л/мин превышает пиковую скорость поглощения кислорода указанной клеткой-хозяином в течение фазы образования продукта.
51. Способ по любому из пп. 28-49, отличающийся тем, что пиковая скорость поглощения кислорода указанной клеткой-хозяином в течение указанной фазы роста находится в диапазоне от 3,5 до 4,5 ммоль/л/мин, и скорость поглощения кислорода указанной клеткой-хозяином в течение указанной фазы образования продукта находится в диапазоне от 1,0 до 3,0 ммоль/л/мин.
52. Способ получения биспецифического антитела, содержащего первое полуантитело, способное связывать первый антиген, и второе полуантитело, способное связывать второй антиген, причем указанный способ включает: объединение указанного первого полуантитела с указанным вторым полуантителом при восстанавливающих условиях с получением биспецифического антитела, причем указаное первое полуантитело содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию выступа, и второе полуантитело содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию впадины, и при этом как указанное первое полуантитело, так и указанное второе полуантитело получают способом по любому из пп. 28-51.
53. Способ по п. 52, отличающийся тем, что указанный антиген первой половины и указанный антиген второй половины представляют собой различные антигены.
54. Способ по п. 52, отличающийся тем, что указанное первое полуантитело способно связывать ИЛ-13
55. Способ по п. 52, отличающийся тем, что указанное второе полуантитело способно связывать ИЛ-17.
56. Способ по любому из пп. 52-55, дополнительно включающий этап добавления восстанавливающего агента с целью достижения восстановительных условий.
57. Способ по п. 56, отличающийся тем, что указанный восстанавливающий агент представляет собой глутатион.
58. Способ получения биспецифического антитела, содержащего первое полуантитело, способное связывать ИЛ-13, и второе полуантитело, способное связывать ИЛ-17, причем указанный способ включает:
(а) культивирование первой прокариотической клетки-хозяина для экспрессии первой тяжелой цепи и первой легкой цепи указанного первого полуантитела, причем (i) указанная первая тяжелая цепь содержит вариабельный домен первой тяжелой цепи, содержащий HVR-H1 согласно SEQ ID NO:9, HVR-H2 согласно SEQ ID NO:10 и HVR-H3 согласно SEQ ID NO:11; и (ii) указанная первая легкая цепь содержит вариабельный домен первой легкой цепи, содержащий HVR-L1 согласно SEQ ID NO:12, HVR-L2 согласно SEQ ID NO:13 и HVR-L3 согласно SEQ ID NO:14, при этом после экспрессии происходит сборка указанной первой тяжелой цепи и указанной первой легкой цепи с образованием указанного первого полуантитела в указанной клетке-хозяине; и
(а') культивирование второй прокариотической клетки-хозяина для экспрессии второй тяжелой цепи и второй легкой цепи указанного второго полуантитела, причем (i) указанная вторая тяжелая цепь содержит вариабельный домен второй тяжелой цепи, содержащий HVR-H1 согласно SEQ ID NO:20, HVR-H2 согласно SEQ ID NO:21 и HVR-H3 согласно SEQ ID NO:22; и (ii) указанная вторая легкая цепь содержит вариабельный домен второй легкой цепи, содержащий HVR-L1 согласно SEQ ID NO:23, HVR-L2 согласно SEQ ID NO:24 и HVR-L3 согласно SEQ ID NO:25, при этом после экспрессии происходит сборка указанной второй тяжелой цепи и указанной второй легкой цепи с образованием указанного второго полуантитела в указанной клетке-хозяине;
причем указанная первая клетка-хозяин содержит первый полинуклеотид, содержащий:
(1) первую единицу трансляции, кодирующую указанную первую тяжелую цепь;
(2) вторую единицу трансляции, кодирующую указанную первую легкую цепь; и
указанная вторая клетка-хозяин содержит второй полинуклеотид, содержащий:
(1') третью единицу трансляции, кодирующую указанную вторую тяжелую цепь;
(2') четвертую единицу трансляции, кодирующую указанную вторую легкую цепь;
причем как указанный первый полинуклеотид, так и указанный второй полинуклеотид дополнительно содержат:
(3) пятую единицу трансляции, кодирующую первый белок-шаперон;
(4) шестую единицу трансляции, кодирующую второй белок-шаперон; и
(5) седьмую единицу трансляции, кодирующую третий белок-шаперон,
при этом указанные первый, второй и третий белки-шапероны выбраны из группы, состоящей из пептидил-пролил-изомераз, протеин-дисульфид-оксидоредуктаз и их комбинаций;
при этом как указанную первую клетку-хозяина, так и указанную вторую клетку-хозяина по отдельности культивируют в культуральной среде в условиях, предусматривающих:
температуру при фазе роста и скорость перемешивания при фазе роста, и
температуру при фазе образования продукта и скорость перемешивания при фазеобразования продукта,
при этом указанная температура при фазе роста на 2-10 °С превышает указанную температуру при фазе образования продукта, и указанная скорость перемешивания при фазе роста на 50-250 об/мин превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта;
(b) выделение указанного первого полуантитела из указанной первой клетки-хозяина;
(b') выделение указанного второго полуантитела из указанной второй клетки-хозяина; и
(с) объединение указанного первого полуантитела с указанным вторым полуантителом при восстановительных условиях для получения биспецифического антитела, способного связываться как с ИЛ-13, так и с ИЛ-17.
59. Способ по п. 58, отличающийся тем, что указанное первое полуантитело содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию выступа, и второе полуантитело содержит по меньшей мере одну мутацию, приводящую к образованию впадины.
60. Способ по любому из пп. 58-59, дополнительно включающий этап добавления восстанавливающего агента с целью достижения восстановительных условий.
61. Способ по п. 60, отличающийся тем, что указанный восстанавливающий агент представляет собой глутатион.
62. Композиция, содержащая биспецифическое антитело по любому из пп. 52-61.
63. Способ по любому из пп. 30-62, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен тяжелой цепи указанного полуантитела против ИЛ-13 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7; и указанный вариабельный домен легкой цепи указанного антитела против ИЛ-13 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8.
64. Способ по любому из пп. 30-62, отличающийся тем, что указанная тяжелая цепь указанного полуантитела против ИЛ-13 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:15 или SEQ ID NO:16.
65. Способ по любому из пп. 30-62, отличающийся тем, что указанная легкая цепь указанного полуантитела против ИЛ-13 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:17.
66. Способ по любому из пп. 32-62, отличающийся тем, что указанный вариабельный домен тяжелой цепи указанного полуантитела против ИЛ-17 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:18; и указанный вариабельный домен легкой цепи указанного антитела против ИЛ-17 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:19.
67. Способ по любому из пп. 32-62, отличающийся тем, что указанная тяжелая цепь указанного полуантитела против ИЛ-17 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:26 или SEQ ID NO:27.
68. Способ по любому из пп. 32-62, отличающийся тем, что указанная легкая цепь указанного полуантитела против ИЛ-17 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:28.
69. Способ по любому из пп. 1-68, отличающийся тем, что указанная скорость перемешивания при фазе роста превышает указанную скорость перемешивания при фазе образования продукта на приблизительно 10-40%.
RU2017119403A 2014-11-05 2015-11-05 Способы получения двуцепочечных белков в бактериях RU2705274C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462075792P 2014-11-05 2014-11-05
US62/075,792 2014-11-05
US201562207882P 2015-08-20 2015-08-20
US62/207,882 2015-08-20
PCT/US2015/059339 WO2016073791A1 (en) 2014-11-05 2015-11-05 Methods of producing two chain proteins in bacteria

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2017119403A true RU2017119403A (ru) 2018-12-05
RU2017119403A3 RU2017119403A3 (ru) 2019-03-27
RU2705274C2 RU2705274C2 (ru) 2019-11-06

Family

ID=54754738

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017119403A RU2705274C2 (ru) 2014-11-05 2015-11-05 Способы получения двуцепочечных белков в бактериях

Country Status (13)

Country Link
US (2) US10112994B2 (ru)
EP (1) EP3215526A1 (ru)
JP (3) JP6875276B2 (ru)
KR (1) KR20170075793A (ru)
CN (1) CN108064308B (ru)
AU (1) AU2015342961B2 (ru)
BR (1) BR112017009152A2 (ru)
CA (1) CA2966558C (ru)
HK (1) HK1255201A1 (ru)
IL (1) IL252027B (ru)
MX (1) MX2017005930A (ru)
RU (1) RU2705274C2 (ru)
WO (1) WO2016073791A1 (ru)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016073791A1 (en) 2014-11-05 2016-05-12 Genentech, Inc. Methods of producing two chain proteins in bacteria
KR102544705B1 (ko) 2014-11-05 2023-06-15 제넨테크, 인크. 박테리아 내 2쇄 단백질을 생산하는 방법
JP2022506156A (ja) 2018-11-05 2022-01-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 原核宿主細胞における２鎖タンパク質の産生方法
CA3124515A1 (en) * 2019-01-23 2020-07-30 Genentech, Inc. Methods of producing multimeric proteins in eukaryotic host cells

Family Cites Families (87)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE266710C (ru)
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
DE3850542T2 (de) 1987-09-23 1994-11-24 Bristol Myers Squibb Co Antikörper-Heterokonjugate zur Töting von HIV-infizierten Zellen.
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5750373A (en) 1990-12-03 1998-05-12 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants
AU634186B2 (en) 1988-11-11 1993-02-18 Medical Research Council Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
CA2062795A1 (en) 1989-06-29 1990-12-30 Michael W. Fanger Bispecific reagents for aids therapy
DK0463151T3 (da) 1990-01-12 1996-07-01 Cell Genesys Inc Frembringelse af xenogene antistoffer
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
DE69133476T2 (de) 1990-08-29 2006-01-05 GenPharm International, Inc., Palo Alto Transgene Mäuse fähig zur Produktion heterologer Antikörper
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
WO1992020373A1 (en) 1991-05-14 1992-11-26 Repligen Corporation Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection
ATE255131T1 (de) 1991-06-14 2003-12-15 Genentech Inc Humanisierter heregulin antikörper
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
CA2116774C (en) 1991-09-19 2003-11-11 Paul J. Carter Expression in e. coli antibody fragments having at least a cysteine present as a free thiol. use for the production of bifunctional f(ab') 2 antibodies
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
DE69333807T2 (de) 1992-02-06 2006-02-02 Chiron Corp., Emeryville Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür
CA2140280A1 (en) 1992-08-17 1994-03-03 Avi J. Ashkenazi Bispecific immunoadhesins
WO1994029351A2 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Celltech Limited Antibodies
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
EP1978033A3 (en) 1995-04-27 2008-12-24 Amgen Fremont Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
WO1996034096A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
JP4215172B2 (ja) 1996-12-03 2009-01-28 アムジェン フレモント インク． 複数のＶ▲下Ｈ▼およびＶ▲下κ▼領域を含むヒトＩｇ遺伝子座を有するトランスジェニック哺乳動物、ならびにそれから産生される抗体
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
ES2375931T3 (es) 1997-12-05 2012-03-07 The Scripps Research Institute Humanización de anticuerpo murino.
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
PL220113B1 (pl) 1999-01-15 2015-08-31 Genentech Inc Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc
AU3305100A (en) 1999-03-17 2000-10-04 Medical Research Council Method for refolding molecules of polypeptides containing ig domains
GB9911569D0 (en) * 1999-05-18 1999-07-21 Oxford Biomedica Ltd Antibodies
CA2393869A1 (en) 1999-12-15 2001-06-21 Genetech,Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
AU3944002A (en) * 2000-11-03 2002-05-27 Genentech Inc Metabolic rate shifts in fermentations expressing recombinant proteins
ATE405650T1 (de) * 2000-12-14 2008-09-15 Genentech Inc Produktion von ganzen antikörpern in prokaryontischen zellen
WO2003018771A2 (en) 2001-08-27 2003-03-06 Genentech, Inc. A system for antibody expression and assembly
AU2002321581C1 (en) 2001-08-31 2008-09-18 Adaptimmune Limited Soluble T cell receptor
WO2003102157A2 (en) 2002-06-03 2003-12-11 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
CN102764436A (zh) * 2002-07-19 2012-11-07 艾博特生物技术有限公司 TNF α相关疾病的治疗
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
BRPI0316779B8 (pt) 2002-12-16 2023-02-28 Genentech Inc Anticorpo anti-cd20 humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, seus usos, composição, artigo manufaturado e formulação líquida
WO2004065416A2 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
AU2004242846A1 (en) 2003-05-31 2004-12-09 Micromet Ag Pharmaceutical compositions comprising bispecific anti-CD3, anti-CD19 antibody constructs for the treatment of B-cell related disorders
MXPA06000347A (es) 2003-07-08 2006-03-28 Genentech Inc Polipeptidos heterologos il-17 a/f y usos terapeuticos de los mismos.
ES2341252T3 (es) 2003-11-28 2010-06-17 Micromet Ag Composiciones que comprenden polipeptidos.
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
US7674459B2 (en) 2003-12-23 2010-03-09 Genentech, Inc. Treatment of cancer with a novel anti-IL13 monoclonal antibody
JP4501451B2 (ja) 2004-02-18 2010-07-14 株式会社豊田自動織機 塗料組成物、塗料組成物を用いた透明性保護膜の製造方法および透明性保護膜を有する有機ガラス
MXPA06011199A (es) 2004-03-31 2007-04-16 Genentech Inc Anticuerpos anti-tgf-beta humanizados.
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
WO2005100402A1 (en) 2004-04-13 2005-10-27 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
CA2577082A1 (en) 2004-09-02 2006-03-16 Genentech, Inc. Heteromultimeric molecules
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
ES2856451T3 (es) 2005-10-11 2021-09-27 Amgen Res Munich Gmbh Composiciones que comprenden anticuerpos específicos para diferentes especies, y usos de las mismas
ES2577292T3 (es) 2005-11-07 2016-07-14 Genentech, Inc. Polipéptidos de unión con secuencias hipervariables de VH/VL diversificadas y consenso
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
AU2007249408A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
EP3461842A1 (en) 2007-04-03 2019-04-03 Amgen Research (Munich) GmbH Cross-species-specific binding domain
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
JP2011519911A (ja) * 2008-05-05 2011-07-14 ノヴィミュンヌ エスア 抗ｉｌ１７ａ／ｉｌ−１７ｆ交差反応抗体及びその使用方法
RU2011148913A (ru) 2009-05-01 2013-06-10 Эбботт Лэборетриз Иммуноглобулин с двумя вариабельными доменами и его применение
NZ598901A (en) 2009-11-05 2014-08-29 Genentech Inc Methods and composition for secretion of heterologous polypeptides
TWI586806B (zh) 2010-04-23 2017-06-11 建南德克公司 異多聚體蛋白質之製造
DK2670847T3 (en) * 2011-02-03 2017-01-16 Xoma Technology Ltd Methods and Materials for Improving Functional Protein Expression in Bacteria
US9158890B2 (en) 2011-07-27 2015-10-13 At&T Mobility Ii Llc Mobile applications and methods for conveying performance information of a cardiac pacemaker
JP6216321B2 (ja) * 2011-10-11 2017-10-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド 二重特異性抗体の構築の改善
MX2015013901A (es) * 2013-04-05 2015-12-11 Genentech Inc Anticuerpos anti-il-4 y anticuerpos biespecificos y sus usos.
DK2986731T3 (da) 2013-04-19 2022-08-01 Sutro Biopharma Inc Ekspression af biologisk aktive proteiner i et bakteriecellefrit syntesesystem ved hjælp af celleekstrakter med forhøjede niveauer af exogene chaperoner
CA2937556A1 (en) * 2014-02-21 2015-08-27 Genentech, Inc. Anti-il-13/il-17 bispecific antibodies and uses thereof
KR102544705B1 (ko) 2014-11-05 2023-06-15 제넨테크, 인크. 박테리아 내 2쇄 단백질을 생산하는 방법
WO2016073791A1 (en) 2014-11-05 2016-05-12 Genentech, Inc. Methods of producing two chain proteins in bacteria

Also Published As

Publication number Publication date
JP2023088935A (ja) 2023-06-27
CA2966558A1 (en) 2016-05-12
KR20170075793A (ko) 2017-07-03
HK1255201A1 (zh) 2019-08-09
IL252027B (en) 2021-10-31
US20160159898A1 (en) 2016-06-09
JP6875276B2 (ja) 2021-05-19
CA2966558C (en) 2024-03-12
US20190112368A1 (en) 2019-04-18
IL252027A0 (en) 2017-06-29
WO2016073791A1 (en) 2016-05-12
EP3215526A1 (en) 2017-09-13
US11299539B2 (en) 2022-04-12
CN108064308B (zh) 2023-06-09
JP2018500008A (ja) 2018-01-11
CN108064308A (zh) 2018-05-22
BR112017009152A2 (pt) 2018-03-06
JP2021119777A (ja) 2021-08-19
MX2017005930A (es) 2017-06-30
RU2017119403A3 (ru) 2019-03-27
RU2705274C2 (ru) 2019-11-06
AU2015342961B2 (en) 2021-08-12
AU2015342961A1 (en) 2017-06-15
US10112994B2 (en) 2018-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2017119396A (ru) Способы получения двуцепочечных белков в бактериях
JP2022177090A5 (ru)
RU2017119403A (ru) Способы получения двуцепочечных белков в бактериях
JP2017533730A5 (ru)
RU2020124623A (ru) Антитела, специфичные к гетеродимеру cd3-дельта/эпсилон
PE20211498A1 (es) Anticuerpos dirigidos contra il-11
US10358460B2 (en) Protein manufacture
PE20240218A1 (es) Anticuerpos madurados por afinidad y humanizados para fcrh5
HRP20221538T1 (hr) Anti-transtiretinska antitijela
JP2011510654A5 (ru)
RU2016101137A (ru) Гуманизированные антитела, которые распознают альфа-синуклеин
RU2014136103A (ru) Антагонистические антитела против рецептора IL-7 и способы
PE20240802A1 (es) Anticuerpos multiespecificos con especificidad para il-4r e il-31
JP2014515598A (ja) 二重特異性三鎖抗体様分子
RU2019129917A (ru) Химерный антигенный рецептор
RU2017134043A (ru) Модифицированные антитела igg, которые связываются с трансформирующим фактором роста бета-1 с высокой аффинностью, авидностью и специфичностью
JP2018500008A5 (ru)
JP2012523221A5 (ru)
RU2019143742A (ru) Способы культивирования клеток
JP6854342B2 (ja) ファージ表面上での二重特異性抗体の提示
JP2021501157A5 (ru)
AR126009A1 (es) Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que se dirigen a epcam
JPWO2020183245A5 (ru)
JP2022525332A (ja) 免疫抑制の方法
RU2017111044A (ru) Антитела к гепатиту с и их антигенсвязывающие фрагменты