RU2012146368A - Выделение нерастворимых искомых белков - Google Patents

Выделение нерастворимых искомых белков Download PDF

Info

Publication number
RU2012146368A
RU2012146368A RU2012146368/10A RU2012146368A RU2012146368A RU 2012146368 A RU2012146368 A RU 2012146368A RU 2012146368/10 A RU2012146368/10 A RU 2012146368/10A RU 2012146368 A RU2012146368 A RU 2012146368A RU 2012146368 A RU2012146368 A RU 2012146368A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
insoluble
host cells
seq
desired protein
module
Prior art date
Application number
RU2012146368/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2570625C2 (ru
Inventor
Мартин Шмидт
Аксель ЛАЙМЕР
Лин РЁМЕР
Original Assignee
Амсилк Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Амсилк Гмбх filed Critical Амсилк Гмбх
Publication of RU2012146368A publication Critical patent/RU2012146368A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2570625C2 publication Critical patent/RU2570625C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/145—Extraction; Separation; Purification by extraction or solubilisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

1. Способ выделения нерастворимого искомого белка из суспензии целых или разрушенных клеток хозяев, включающий стадии:a) получение суспензии целых или разрушенных клеток хозяев, содержащих нерастворимый искомый белок и нерастворимые части клеток хозяев,b) добавление водного раствора по меньшей мере одного основания к данной суспензии в количестве, достаточном для разрушения данных клеток хозяев и/или солюбилизации нерастворимых частей клеток хозяев, иc) отделение нерастворимого искомого белка от солюбилизированных нерастворимых частей клеток хозяев,причем на стадии b) искомый белок остается нерастворимым, а по меньшей мере 80% нерастворимых частей клеток хозяев подвергаются солюбилизации.2. Способ по п.1, в котором клетками хозяевами являются бактериальные, дрожжевые, растительные клетки хозяева или клетки-хозяева насекомых.3. Способ по п.1, в котором выделенный нерастворимый искомый белок имеет чистоту по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 90% и более предпочтительно по меньшей мере 95%.4. Способ по п.1, в котором основанием является гидроокись металла и/или аммония.5. Способ по п.4, в котором гидроокись металла выбрана из группы, состоящей из гидроокиси натрия (NaOH), гидроокиси калия (KOH) и гидроокиси кальция (СаОН) или их комбинаций.6. Способ по п.1, в котором конечная концентрация основания на стадии (b) составляет от 0,005 М до 1 М, предпочтительно от 0,01 М до 0,6 М, более предпочтительно от 0,02 М до 0,2 М и наиболее предпочтительно от 0,04 М до 0,06 М.7. Способ по п.1, в котором способ дополнительно включает добавление по меньшей мере одного реагента (i) перед стадией b), (ii) на стадии b) и/или (iii) после стадии b).8. Способ по п.7, в к�

Claims (25)

1. Способ выделения нерастворимого искомого белка из суспензии целых или разрушенных клеток хозяев, включающий стадии:
a) получение суспензии целых или разрушенных клеток хозяев, содержащих нерастворимый искомый белок и нерастворимые части клеток хозяев,
b) добавление водного раствора по меньшей мере одного основания к данной суспензии в количестве, достаточном для разрушения данных клеток хозяев и/или солюбилизации нерастворимых частей клеток хозяев, и
c) отделение нерастворимого искомого белка от солюбилизированных нерастворимых частей клеток хозяев,
причем на стадии b) искомый белок остается нерастворимым, а по меньшей мере 80% нерастворимых частей клеток хозяев подвергаются солюбилизации.
2. Способ по п.1, в котором клетками хозяевами являются бактериальные, дрожжевые, растительные клетки хозяева или клетки-хозяева насекомых.
3. Способ по п.1, в котором выделенный нерастворимый искомый белок имеет чистоту по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 90% и более предпочтительно по меньшей мере 95%.
4. Способ по п.1, в котором основанием является гидроокись металла и/или аммония.
5. Способ по п.4, в котором гидроокись металла выбрана из группы, состоящей из гидроокиси натрия (NaOH), гидроокиси калия (KOH) и гидроокиси кальция (СаОН) или их комбинаций.
6. Способ по п.1, в котором конечная концентрация основания на стадии (b) составляет от 0,005 М до 1 М, предпочтительно от 0,01 М до 0,6 М, более предпочтительно от 0,02 М до 0,2 М и наиболее предпочтительно от 0,04 М до 0,06 М.
7. Способ по п.1, в котором способ дополнительно включает добавление по меньшей мере одного реагента (i) перед стадией b), (ii) на стадии b) и/или (iii) после стадии b).
8. Способ по п.7, в котором реагент выбран из группы, состоящей из денатурирующего средства, космотропного средства и детергента или их комбинаций.
9. Способ по п.8, в котором:
(i) денатурирующим средством является мочевина (CH4N2O) или гуанидиний гидрохлорид (CH5N3·HCl),
(ii) космотропным средством является соль фосфата или соль сульфата, а
(iii) детергентом является Tween 20, Triton X-100, SDS или Brij.
10. Способ по п.9, в котором конечная концентрация:
(i) мочевины составляет от 0,1 М до 10 М, предпочтительно от 1 М до 5 М, а
(ii) гуанидиния гидрохлорида составляет от 0,01 М до 3 М, предпочтительно от 0,1 М до 2 М.
11. Способ по п.1, в котором отделение нерастворимого искомого белка от солюбилизированных нерастворимых частей клеток хозяев на стадии с) осуществляется центрифугированием, седиментацией и/или фильтрацией.
12. Способ по п.1, в котором способ после стадии b) и перед стадией с) дополнительно включает стадию b') гомогенизации данной суспензии.
13. Способ по п.1, в котором способ после стадии с) дополнительно включает стадию d) промывки отделенного нерастворимого искомого белка, предпочтительно центрифугата, выпавшего осадка или ретентата, водным раствором, органическим раствором и/или мочевиной.
14. Способ по п.1, в котором искомый белок остается нерастворимым по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95% после добавления на стадии b) водного раствора, содержащего по меньшей мере одно основание, в течение периода времени от 10 до 40 мин при температуре от 15°С до 25°С.
15. Способ по п.1, в котором нерастворимый искомый белок образует белковый агрегат, который включает по меньшей мере 85% данного искомого белка.
16. Способ по п.1, в котором нерастворимый искомый белок выбран из группы, состоящей из белка шелка, содержащего по меньшей мере два идентичных повторяющихся звена, коллагена и кератина.
17. Способ по п.16, в котором белок шелка включает по меньшей мере два идентичных повторяющихся звена, каждое из которых содержит по меньшей мере одну консенсусную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
i) GPGXX (SEQ ID NO:3), где X - любая аминокислота, предпочтительно в каждом случае выбранная независимо из числа A, S, G, Y, Р и Q;
ii) GGX, где Х - любая аминокислота, предпочтительно в каждом случае выбранная независимо из числа Y, Р, R, S, А, Т, N и Q; и
iii) Ax, где x - целое число от 5 до 10.
18. Способ по п.17, в котором повторяющиеся звенья выбраны независимо из модуля A (SEQ ID NO:20), модуля С (SEQ ID NO:21), модуля Q (SEQ ID NO:22), модуля K (SEQ ID NO:23), модуля sp (SEQ ID NO:24), модуля S (SEQ ID NO:25), модуля R (SEQ ID NO:26), модуля X (SEQ ID NO:27) или модуля Y (SEQ ID NO:28) либо их вариантов.
19. Способ по п.16, в котором белок шелка дополнительно содержит по меньшей мере одно неповторяющееся (NR) звено.
20. Способ по п.19, в котором NR-звеном является NR3 (SEQ ID NO:41) или его варианты либо NR4 (SEQ ID NO:42) или его варианты.
21. Способ по п.16, в котором белок шелка выбран из группы, состоящей из ADF-3 (SEQ ID NO:1) или его вариантов, ADF-4 (SEQ ID NO:2) или его вариантов, MaSp I (SEQ ID NO:43) или его вариантов, MaSp II (SEQ ID NO:44) или его вариантов, (С)m, (C)mNRz, NRz(C)m, NRz(C)mNRz, (AQ)n, (AQ)nNRz, NRz(AQ)n, NRz(AQ)nNRz, (QAQ)o, NRz(QAQ)o, (QAQ)oNRz, Yp, Xp и Kp, где m - целое число от 2 до 64, n - целое число от 6 до 24, o - целое число от 8 до 16, p - целое число от 8 до 16 и z - целое число от 1 до 3, а NR означает неповторяющееся звено.
22. Способ по п.21, в котором белок шелка представляет собой C16NR4, C32NR4, (AQ)12NR3, (AQ)24NR3, (AQ)12, (AQ)24, C16, C32, NR4C16NR4, NR4C32NR4, NR3C16NR3, NR3C32NR3, NR4(AQ)12NR4, NR4(AQ)24NR4, NR3(AQ)12NR3, NR3(AQ)24NR3, (QAQ)8 или (QAQ)16.
23. Способ по п.1, в котором способ выполняется при температуре от 4°С до 60°С, предпочтительно от 15°С до 40°С.
24. Способ по п.1, в котором способ выполняется при давлении от 10 кПа до 1000 кПа, предпочтительно от 50 кПа до 150 кПа.
25. Нерастворимый искомый белок, получаемый способом по пп.1-24.
RU2012146368/10A 2010-03-31 2011-03-30 Выделение нерастворимых искомых белков RU2570625C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US31954210P 2010-03-31 2010-03-31
US61/319,542 2010-03-31
PCT/EP2011/001605 WO2011120690A2 (en) 2010-03-31 2011-03-30 Separation of insoluble target proteins

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2012146368A true RU2012146368A (ru) 2014-05-10
RU2570625C2 RU2570625C2 (ru) 2015-12-10

Family

ID=44581814

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012146368/10A RU2570625C2 (ru) 2010-03-31 2011-03-30 Выделение нерастворимых искомых белков

Country Status (8)

Country Link
US (1) US8877903B2 (ru)
EP (1) EP2552935B1 (ru)
JP (1) JP6081908B2 (ru)
CN (1) CN102844326B (ru)
CA (1) CA2790186C (ru)
ES (1) ES2799431T3 (ru)
RU (1) RU2570625C2 (ru)
WO (1) WO2011120690A2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2631004C2 (ru) * 2015-09-16 2017-09-15 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича" (ИБМХ) Способ получения рекомбинантного эластомерного домена Trib-2mut, генно-инженерная конструкция pGDTrib2mut, определяющая биосинтез Trib-2mut в клетках E.coli, штамм-продуцент E.coli M15/pGDTrib2mut и способ получения полимерного материала на основе данного белка

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE202013011693U1 (de) 2012-08-17 2014-02-26 Amsilk Gmbh Verwendung selbst-assemblierender Polypeptide als Gewebekleber
CN104918950B (zh) * 2012-12-27 2018-10-12 丝芭博株式会社 亲水性重组蛋白的部分精制方法
CN103265615B (zh) * 2013-05-09 2015-05-13 广州天赐福音生物科技有限公司 一种人发中生物活性肽提取物及提取方法和应用
EP3475296A1 (en) 2016-06-22 2019-05-01 AMSilk GmbH Articles comprising a silk polypeptide for antigen delivery
AU2017310785B9 (en) 2016-08-10 2022-07-21 Spiber Inc. Production method for insoluble recombinant protein aggregate
JPWO2018066558A1 (ja) 2016-10-03 2019-09-05 Ｓｐｉｂｅｒ株式会社 組換えタンパク質の精製方法
MX2020004675A (es) 2017-11-10 2020-08-13 Givaudan Sa Formulaciones de alcohol de seda.
WO2020035361A1 (en) 2018-08-17 2020-02-20 Amsilk Gmbh Use of a structural polypeptide for plant coating
CN114401844A (zh) * 2018-11-28 2022-04-26 保尔特纺织品公司 蛛丝蛋白的碱性纯化
CN113512574A (zh) * 2021-07-15 2021-10-19 海默斯（重庆）医学生物技术有限公司 一种重组角蛋白生产方法
WO2023104752A1 (en) 2021-12-07 2023-06-15 Amsilk Gmbh Use of a structural polypeptide for treating or finishing textiles
WO2023152202A1 (en) 2022-02-10 2023-08-17 Amsilk Gmbh Gradient printing reservoir and printing method

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5332805A (en) 1984-02-03 1994-07-26 Celltech Limited Process for the recovery of recombinantly produced chymosin from insoluble aggregate
US5523215A (en) * 1985-03-28 1996-06-04 Chiron Corporation Enhanced purification and expression of insoluble recombinant proteins
DE3685424D1 (de) * 1985-06-26 1992-06-25 Upjohn Co Solubilisation und oxidation von somatotropin aus transformierten mikroorganismen.
CN1156481A (zh) * 1994-06-22 1997-08-06 先灵公司 从细菌中提取异源不溶性蛋白质
US5437986A (en) * 1994-06-22 1995-08-01 Schering Corporation Extraction of heterologous insoluble proteins from bacteria
US6068993A (en) * 1997-07-02 2000-05-30 Biobras Sa Vector for expression of heterologous protein and methods for extracting recombinant protein and for purifying isolated recombinant insulin
US6121421A (en) * 1998-08-21 2000-09-19 Abbott Laboratories Methods for isolating recombinant β-casein
US6936437B2 (en) 2001-02-23 2005-08-30 Lucia Irene Gonzalez-Villasenor Methods and compositions for production of recombinant peptides
EP1427742A1 (en) * 2001-08-29 2004-06-16 University of Wyoming Spider silk protein encoding nucleic acids, polypeptides, antibodies and method of use thereof
AU2003201513A1 (en) 2002-01-11 2003-07-24 Nexia Biotechnologies, Inc. Methods of producing silk polypeptides and products thereof
AU2003202330A1 (en) * 2002-01-11 2003-07-24 Nexia Biotechnologies, Inc. Recovery of biofilament proteins from biological fluids
CN1259333C (zh) 2003-05-08 2006-06-14 福建师范大学 制备性基因重组蜘蛛拖丝蛋白的分离纯化方法
CN102532295B (zh) 2004-07-22 2014-10-15 Am丝绸有限责任公司 重组蜘蛛丝蛋白
EP1919938B1 (en) * 2005-08-29 2012-06-06 AMSilk GmbH Modified spider silk proteins
WO2008155304A1 (de) 2007-06-20 2008-12-24 Basf Se Synthetische repetitive proteine, deren herstellung und verwendung
BRPI0914982B1 (pt) * 2008-06-09 2019-09-24 Danisco Us Inc. Métodos para produção de uma formulação granular contendo enzima e grãnulo contendo enzima

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2631004C2 (ru) * 2015-09-16 2017-09-15 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича" (ИБМХ) Способ получения рекомбинантного эластомерного домена Trib-2mut, генно-инженерная конструкция pGDTrib2mut, определяющая биосинтез Trib-2mut в клетках E.coli, штамм-продуцент E.coli M15/pGDTrib2mut и способ получения полимерного материала на основе данного белка

Also Published As

Publication number Publication date
EP2552935A2 (en) 2013-02-06
RU2570625C2 (ru) 2015-12-10
US20130338346A1 (en) 2013-12-19
CN102844326B (zh) 2017-09-29
CA2790186C (en) 2016-11-01
EP2552935B1 (en) 2020-05-27
JP2013523665A (ja) 2013-06-17
US8877903B2 (en) 2014-11-04
CN102844326A (zh) 2012-12-26
WO2011120690A2 (en) 2011-10-06
WO2011120690A3 (en) 2012-04-05
ES2799431T3 (es) 2020-12-17
CA2790186A1 (en) 2011-10-06
JP6081908B2 (ja) 2017-02-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2012146368A (ru) Выделение нерастворимых искомых белков
RU2011146132A (ru) Композиции без приона на основе наночастиц и способы их получения
CN102079777A (zh) 一种人工合成抗菌肽、制备方法及其应用
DK215685A (da) Sulfoadenosyl-l-methioninsalt, fremgangsmaade til fremstilling derafsamt farmaceutisk praeparat indeholdende et eller flere saadanne salte
CN113061173B (zh) 一种分离αs1-酪蛋白的方法
RU2004114218A (ru) Белковый изолят из семян льна и способ его получения
CN110627896B (zh) 一种钙螯合肽及其制备方法和应用
CN104926924A (zh) 一种利用手性锍盐侧链稳定多肽α-螺旋二级结构的方法
CN105218666A (zh) 一种采用阳离子多糖制备高生物活性卵黄抗体的方法
CN103127847B (zh) 抗蛋白质污染聚丙烯腈水解改性超滤膜及其制备方法
CN108707083B (zh) 一种从发酵液中分离纯化支链氨基酸的方法
CN103951622B (zh) 一种利用甲壳素类生物质制备含氮杂环化合物的方法
Yang et al. Synthesis and anti-HIV-1 activity of the conjugates of gossypol with oligopeptides and D-glucosamine
CN107109436A (zh) 病毒载体、细胞及构建体
CN101255126B (zh) 牛磺酸及其衍生物的制备
JP2001172296A (ja) 軟骨型プロテオグリカンの精製方法
CN103172542B (zh) 一种分离纯化l-瓜氨酸的方法
US20130197190A1 (en) Method for producing surfactin and salt thereof
CN115611971A (zh) 一种富含支链氨基酸的蛋白肽及其制备方法与应用
Dzimbova et al. Sulfo-and oxy-analogues of arginine: synthesis, analysis and preliminary biological screening
CN103539845B (zh) 一种环状的合成多肽e及其抗病毒应用
JP2005245394A (ja) 魚類白子からの二本鎖ｄｎａの抽出・精製方法
CN103539846A (zh) 一种环状的合成多肽f及其抗菌抗病毒应用
RU2013111676A (ru) Способ получения тетранектин-аполипопротеин а-i частицы, полученная таким образом липидная частица и ее применение
CN114032271B (zh) 具有降尿酸功效的牡蛎多肽、多肽粉及制备方法和应用