RU2010153864A - Композиции и способы, включающие в себя применение вариантных микробных протеаз - Google Patents
Композиции и способы, включающие в себя применение вариантных микробных протеаз Download PDFInfo
- Publication number
- RU2010153864A RU2010153864A RU2010153864/10A RU2010153864A RU2010153864A RU 2010153864 A RU2010153864 A RU 2010153864A RU 2010153864/10 A RU2010153864/10 A RU 2010153864/10A RU 2010153864 A RU2010153864 A RU 2010153864A RU 2010153864 A RU2010153864 A RU 2010153864A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- subtilisin
- variant
- property
- positions
- amino acid
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims 21
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 title claims 10
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 title claims 10
- 239000004365 Protease Substances 0.000 title claims 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims 7
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title 1
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 claims abstract 35
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 12
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 claims abstract 10
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 claims abstract 10
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 claims abstract 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract 9
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims abstract 6
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims 8
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 5
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 claims 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims 4
- 101100052669 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) N118 gene Proteins 0.000 claims 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims 2
- 102220062227 rs775515332 Human genes 0.000 claims 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 2
- 102220479724 B-cell lymphoma 6 protein_S260A_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims 1
- 102220566677 Cellular tumor antigen p53_D259S_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 102220566656 Cellular tumor antigen p53_L257V_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 102220591061 Cellular tumor antigen p53_S183A_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 102220591062 Cellular tumor antigen p53_S183E_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 102220566672 Cellular tumor antigen p53_S260F_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 102220566680 Cellular tumor antigen p53_S260P_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 102220563868 Cellular tumor antigen p53_T253S_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 102220573351 Cellular tumor antigen p53_V143A_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 102220573349 Cellular tumor antigen p53_V143E_mutation Human genes 0.000 claims 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102220565077 N-acetyltransferase 9_G266T_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 102220530276 Tumor suppressor ARF_S260D_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 102220532205 Zinc finger protein ZFPM2_D259A_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 102220360952 c.219G>A Human genes 0.000 claims 1
- 102200104322 c.775G>T Human genes 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims 1
- 102200133427 rs1053077 Human genes 0.000 claims 1
- 102200103808 rs1057519990 Human genes 0.000 claims 1
- 102200108969 rs1555526241 Human genes 0.000 claims 1
- 102200103811 rs193920774 Human genes 0.000 claims 1
- 102220024290 rs267607439 Human genes 0.000 claims 1
- 102200104236 rs28934577 Human genes 0.000 claims 1
- 102200004603 rs58343600 Human genes 0.000 claims 1
- 102200108973 rs587782620 Human genes 0.000 claims 1
- 102200053892 rs59851104 Human genes 0.000 claims 1
- 102200104323 rs745425759 Human genes 0.000 claims 1
- 102220262946 rs777286241 Human genes 0.000 claims 1
- 102200104320 rs876658916 Human genes 0.000 claims 1
- 102220102262 rs878853843 Human genes 0.000 claims 1
- 241000894007 species Species 0.000 claims 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
- C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/189—Enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
- C11D3/38681—Chemically modified or immobilised enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D2111/00—Cleaning compositions characterised by the objects to be cleaned; Cleaning compositions characterised by non-standard cleaning or washing processes
- C11D2111/10—Objects to be cleaned
- C11D2111/12—Soft surfaces, e.g. textile
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21062—Subtilisin (3.4.21.62)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
1. Выделенный вариант субтилизина Bacillus, где указанный вариант субтилизина представляет собой зрелую форму, обладающую протеолитической активностью и содержащую замену по одному или более положениям, выбранным из: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 33, 35, 36, 37, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 64, 65, 66, 67, 71, 72, 73, 76, 77, 78, 79, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 122, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 139, 141, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 156, 157, 158, 159, 160, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 203, 204, 206, 207, 209, 210, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 222, 223, 224, 225, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273 и 274, где указанные положения соответствуют аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной в SEQ ID NO:2. ! 2. Выделенный вариант субтилизина по п.1, где указанные одно или более положений выбраны из: 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 28, 29, 30, 31, 33, 35, 36, 37, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 64, 65, 66, 67, 71, 72, 73, 77, 78, 79, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 118, 119, 122, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 131, 133, 134, 135, 136, 137, 139, 141, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 156, 157, 158, 159, 160, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 203, 204, 206, 207, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 222, 223, 224, 225, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273 и 274, где указа
Claims (34)
1. Выделенный вариант субтилизина Bacillus, где указанный вариант субтилизина представляет собой зрелую форму, обладающую протеолитической активностью и содержащую замену по одному или более положениям, выбранным из: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 33, 35, 36, 37, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 64, 65, 66, 67, 71, 72, 73, 76, 77, 78, 79, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 122, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 139, 141, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 156, 157, 158, 159, 160, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 203, 204, 206, 207, 209, 210, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 222, 223, 224, 225, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273 и 274, где указанные положения соответствуют аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной в SEQ ID NO:2.
2. Выделенный вариант субтилизина по п.1, где указанные одно или более положений выбраны из: 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 28, 29, 30, 31, 33, 35, 36, 37, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 64, 65, 66, 67, 71, 72, 73, 77, 78, 79, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 118, 119, 122, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 131, 133, 134, 135, 136, 137, 139, 141, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 156, 157, 158, 159, 160, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 203, 204, 206, 207, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 222, 223, 224, 225, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273 и 274, где указанные положения соответствуют аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной в SEQ ID NO:2.
3. Вариант субтилизина по п.1, где указанные одно или более положений выбраны из: 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 19, 20, 21, 21, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 30, 31, 33, 35, 36, 37, 39, 40, 41, 42, 44, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 64, 65, 66, 67, 71, 73, 77, 78, 79, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 102, 105, 106, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 122, 124, 125, 128, 129, 131, 133, 134, 135, 136, 137, 139, 141, 143, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 156, 157, 158, 159, 160, 162, 165, 166, 167, 169, 170, 171, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 186, 187, 189, 190, 191, 192, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 203, 204, 206, 207, 212, 214, 216, 217, 218, 219, 220, 222, 223, 224, 225, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 249, 250, 251, 253, 254, 255, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273 и 274, где указанные положения соответствуют аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной в SEQ ID NO:2.
4. Вариант субтилизина по п.1, где указанный вариант субтилизина дополнительно содержит замену по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из: 18, 52, 72, 117, 119, 127, 144, 185, 209 и 213, где указанные положения соответствуют аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной в SEQ ID NO:2.
5. Вариант субтилизина по п.1, где указанная замена включает одну или несколько из: A001C, A001D, A001E, A001F, A001G, A001H, A001I, A001K, A001L, A001M, A001N, A001Q, A001R, A001S, A001V, A001W, Q002A, Q002D, Q002E, Q002G, Q002S, S003A, S003D, S003F, S003G, S003I, S003K, S003L, S003M, S003N, S003P, S003Q, S003R, S003T, S003V, S003W, S003Y, P005C, P005E, P005G, P005N, P005Q, P005T, Y006A, Y006C, Y006E, Y006F, Y006G, Y006K, Y006M, Y006N, Y006P, Y006Q, Y006R, Y006T, Y006V, Y006W, S009A, S009C, S009E, S009F, S009G, S009H, S009K, S009L, S009M, S009P, S009Q, S009R, S009T, S009V, S009W, Q010A, Q010C, Q010E, Q010F, Q010G, Q010H, Q010I, Q010K, Q010L, Q010M, Q010R, Q010S, Q010T, Q010V, Q010W, I011C, I011L, I011T, I011V, I011Y, K012A, K012C, K012D, K012E, K012F, K012G, K012H, K012I, K012N, K012Q, K012S, K012T, K012V, K012W, K012Y, A013C, A013F, A013G, A013H, A013L, A013R, A013S, A013T, A013V, P014A, P014C, P014D, P014E, P014F, P014G, P014I, P014K, P014L, P014M, P014N, P014Q, P014R, P014S, P014T, P014V, P014W, P014Y, A015C, A015D, A015E, A015F, A015G, A015H, A015I, A015K, A015L, A015M, A015P, A015Q, A015R, A015T, A015V, A015Y, L016A, L016C, L016I, L016M, L016Q, L016S, L016T, H017F, H017I, H017L, H017M, H017V, H017W, H017Y, S018A, S018E, S018F, S018G, S018H, S018I, S018K, S018L, S018M, S018N, S018P, S018Q, S018R, S018T, S018V, S018W, S018Y, Q019A, Q019C, Q019D, Q019E, Q019G, Q019I, Q019K, Q019M, Q019R, Q019T, Q019V, G020A, G020C, G020D, G020E, G020F, G020H, G020K, G020M, G020N, G020P, G020Q, G020R, G020S, G020W, Y021A, Y021C, Y021D, Y021E, Y021F, Y021G, Y021H, Y021K, Y021M, Y021R, Y021S, Y021T, Y021V, Y021W, T022A, T022C, T022E, T022F, T022G, T022H, T022I, T022K, T022L, T022M, T022N, T022Q, T022S, T022V, T022W, T022Y, S024C, S024F, S024G, S024H, S024I, S024K , S024L, S024M, S024N, S024Q, S024R, S024T, S024W, S024Y, N025C, N025E, N025F, N025G, N025H, N025I, N025K, N025L, N025M, N025P, N025R, N025S, N025T, N025V, N025W, K027A, K027D, K027E, K027F, K027G, K027H, K027L, K027M, K027P, K027R, K027S, K027W, K027Y, D032A, D032C, D032E, D032G, D032I, D032K, D032L, D032M, D032N, D032R, D032S, D032T, D032V, D032Y, S033A, S033F, S033G, S033H, S033P, S033T, S033W, I035A, I035C, I035D, I035R, I035S, I035T, I035V, D036A, D036C, D036E, D036Q, D036S, D036W, S037A, S037C, S037E, S037F, S037G , S037H, S037K, S037L, S037M, S037P, S037Q, S037R, S037T, S037W, H039C, H039Q, H039T, H039V, P040A, P040C, P040E, P040F, P040G, P040G, P040H, P040I, P040K, P040L , P040M, P040N, P040Q, P040R, P040S, P040T, P040V, P040W, D041E, L042I, L042M, L042V, K043A, K043C, K043D, K043E, K043F, K043G, K043I, K043L, K043M, K043N, K043R, K043S, K043T, K043V, K043W, K043Y, V044A, V044C, V044I, V044L, V044M, V044P, V044S, V044T, A045C, A045E, A045F, A045H, A045I, A045K, A045L, A045M, A045N, A045P, A045Q, A045S, A045T, A045V, A045Y, G046A, G046C, G046E, G046H, G046K, G046M, G046N, G046Q, G046T, G046W, G046Y, A048C, A048D, A048E, A048F, A048H, A048I, A048K, A048L, A048M, A048Q, A048R, A048S, A048T, A048V, A048W, A048Y, M050A, M050C, M050F, M050H, M050I, M050K, M050L, M050Q, M050R, M050S, M050T, M050V, M050W, M050Y, V051A, V051C, V051D, V051E, V051H, V051I , V051L, V051P, V051Q, P052C, P052D, P052E, P052F, P052H, P052I, P052K, P052L, P052Q, P052R, P052S, P052T, P052V, P052W, P052Y, S053E, S053F, S053G, S053H, S053I, S053K, S053L, S053M, S053N, S053Q, S053R, S053T, S053V, S053W, E054A, E054N, E054Q, E054S, T055A, T055C, T055D, T055F, T055G, T055H, T055I, T055K, T055M, T055P, T055Q, T055R, T055S, T055V, T055W, T055Y, N056D, N056M, N056P, N056Q, N056S, N056T, N056V, P057N, P057Q, P057T, P057V, P057W, F058C, F058E, F058G, F058H, F058L, F058M, F058N, F058Q, F058S, F058V, F058Y, Q059A, Q059C, Q059D, Q059E, Q059F, Q059G, Q059H, Q059K, Q059L, Q059M, Q059N, Q059P, Q059R, Q059S, Q059T, Q059V, Q059W, Q059Y, D060E, D060G, H064C, H064D, H064F , H064I, H064L, H064M, H064Q, H064R, H064S, H064T, H064V, H064Y, T066S, T066W, T066Y, H067A, H067C, H067F, H067I, H067L, H067M, H067N, H067P, H067R, H067S, H067T, T071I, T071Y, N077S, S078A, S078C, S078D, S078F, S078G, S078I, S078K, S078L, S078M, S078N, S078P, S078Q, S078R, S078T, S078V, S078W, S078Y, I079A, I079C, I079E, I079F, I079G, I079H, I079K, I079L, I079N, I079Q, I079R, I079S, I079T, I079V, I079W, I079Y, V081F, V081I, V081L, V081M, V081T, G083F, G083P, Q084A, Q084C, Q084H, Q084I, Q084N, Q084T, A085C, A085F, A085G, A085R, A085S, P086A, P086D, P086E, P086G, P086M, P086N, P086Q, P086R, P086S, P086T, P086W, P086Y, S089C, S089D, S089E, S089F, S089G, S089H, S089K, S089L, S089V, S089W, S089Y, L090A, L090D, L090E, L090G, L090H, L090M, L090Q, L090T, L090V, Y091A, Y091C, Y091D, Y091E, Y091F, Y091H, Y091I, Y091L, Y091M, Y091Q, Y091S, Y091T, Y091V, L096F, L096H, L096I, L096K, L096M, L096T, L096V, G097A, G097C, G097D, G097E, G097H, G097K, G097L, G097M, G097P, G097Q, G097R, G097S, G097T, G097V, A098C, A098D, A098F, A098G, A098H, A098I, A098L, A098P, A098Q, A098R, A098S, A098T, A098V, A098Y, D099C, D099E, D099I, D099K, D099L, D099N, D099P, D099Q, D099R, D099S, D099T, S101A, S101C, S101E, S101F, S101G, S101I, S101K, S101L, S101M, S101N, S101P, S101Q, S101R, S101T, S101V, S101Y, G102A, G102C, G102E, G102F, G102I, G102N, G102S, G102V, G102Y, Q103A, Q103C, Q103E, Q103F, Q103G, Q103I, Q103K, Q103L, Q103M, Q103N, Q103R, Q103S, Q103T, Q103V, Q103W, S105A, S105C, S105D, S105E, S105F, S105G, S105I, S105K, S105L, S105M, S105N, S105P, S105R, S105V, S105W, W106A, W106C, W106E, W106F, W106G, W106H, W106I, W106L, W106M, W106N, W106R, W106S, W106T, W106V, W106Y, N109A, N109C, N109E, N109F, N109G, N109H, N109L, N109M, N109P, N109Q, N109R, N109S, N109T, N109V, N109W, N109Y, I111C, I111F, I111L, I111M, I111N, I111P, I111T, I111V, I111W, E112A, E112C, E112D, E112F, E112G, E112I, E112L, E112M, E112N, E112Q, E112R, E112S, E112T, E112V, E112W, E112Y, W113D, W113E, W113F, W113N, W113P, W113Q, W113S, W113V, W113Y, I115E, I115H, I115N, I115R, I115T, I115V, I115W, I115Y, A116C, A116D, A116E, A116F, A116G, A116H, A116I, A116K, A116L, A116M, A116N, A116P, A116Q, A116R, A116S, A116T, A116V, A116W, A116Y, N118A, N118C, N118D, N118E, N118F, N118G, N118H, N118I, N118K, N118L, N118M, N118Q, N118R, N118S, N118T, N118V, N118W, N118Y, I122A, I122C, I122H, I122K, I122L, I122M, I122N, I122P, M124C, M124D, M124I, M124L, M124S, M124T, M124V, M124W, S125A, S125C, S125E, S125F, S125I, S125K, S125M, S125N, S125P, S125Q, S125R, S125T, S125W, L126A, L126C, L126I, L126K, L126N, L126R, L126S, L126T, L126V, L126W, L126Y, G127A, G127C, G127E, G127F, G127I, G127K, G127M, G127N, G127P, G127Q, G127S, G127T, G127V, G127W, G127Y, G128A, G128D, G128F, G128H, G128L, G128N, G128P, G128S, G128T, G128V, G128W, G128Y, P129A, P129C, P129D, P129E, P129F, P129G, P129I, P129K, P129L, P129M, P129N, P129Q, P129S, P129T, P129V, P129Y, G131A, G131C, G131E, G131F, G131K, G131L, G131M, G131N, G131P, G131Q, G131R, G131S, G131T, G131V, G131W, G131Y, A133C, A133D, A133E, A133F, A133G, A133I, A133K, A133L, A133M, A133P, A133R, A133S, A133T, A133V, A133W, A133Y, A134D, A134E, A134F, A134G, A134I, A134K, A134L, A134M, A134P, A134Q, A134R, A134S, A134T, A134V, A134W, L135D, L135E, L135M, L135R, L135W, L135Y, K136E, K136H, K136L, K136M, K136N, K136R, K136S, K136T, K136V, K136W, K136Y, A137C, A137E, A137F, A137H, A137K, A137L, A137M, A137N, A137P, A137Q, A137R, A137S, A137T, A137V, A137W, A137Y, V139C, V139I, V139L, V139N, V139S, V139T, K141A, K141C, K141D, K141E, K141F, K141G, K141H, K141I, K141L, K141M, K141N , K141Q, K141R, K141S, K141V, K141W, K141Y, V143A, V143C, V143D, V143E, V143F, V143G, V143K, V143L, V143M, V143N, V143Q, V143R, V143S, V143T, V143W, A144C, A144D, A144E, A144G, A144I, A144K, A144L, A144M, A144R, A144S, A144T, A144V, A144W, S145A, S145C, S145D, S145E, S145F, S145G, S145H, S145I, S145L, S145M, S145Q, S145R, S145T, S145V, S145W, S145Y, G146A, G146C, G146D, G146E, G146M, G146Q, G146R, G146S, G146T, G146Y, A153S, G154L, G154P, G154T, E156A, E156C, E156F, E156K, E156L, E156N, E156Q, E156R, E156S, E156T, E156V, E156W, E156Y, T158A, T158D, T158E, T158G, T158H, T158I, T158K, T158L, T158M, T158N, T158Q, T158S, T158V, T158Y, S159A, S159C, S159D, S159E, S159G, S159H, S159I, S159K, S159M, S159Q, S159R, S159T, G160D, G160E, G160K, G160N, G160P, G160Q, G160S, G160T, S162A, S162C, S162E, S162H, S162K, S162L, S162M, S162N, S162Q, S162R, S162T, S162V, S163G, S163P, Y167A, Y167F, Y167H, Y167I, P168D, P168G, P168I, P168M, P168S, P168Y, G169A, G169E, G169F, G169H, G169I, G169M, G169N, G169R, G169T, G169V, G169Y, K170A, K170C, K170F, K170G, K170H, K170R, K170V, K170W, K170Y, Y171G, Y171K, Y171P, P172A, P172C, P172E, P172K, P172L, P172M, P172N, P172Q, P172R, P172S, P172T, P172V, P172Y, S173A, S173C, S173E, S173I, S173T, S173V, V174C, V174F, V174H, V174R, V174T, I175G, I175L, I175M, I175R, I175T, I175V, A176C, A176E, A176F, A176K, A176M, A176S, A176Y, A179G , V180A, V180C, V180L, V180N, V180S, V180T, D181C, D181E, D181G, D181H, D181M, D181N, D181S, D181T, D181W, S182A, S182C, S182D, S182F, S182G, S182H, S182I, S182K, S182M, S182P, S182Q, S182R, S182V, S182Y, S183A, S183C, S183E, S183F, S183G, S183H, S183I, S183K, S183L, S183M, S183N, S183Q, S183R, S183T, S183V, S183W, S183Y, N184C, N184D, N184E, N184G, N184H, N184K, N184L, N184M, N184Q, N184S, N184T, N184V, N184W, Q185A, Q185C, Q185E, Q185F, Q185G, Q185H, Q185I, Q185K, Q185L, Q185M, Q185N, Q185S, Q185T, Q185V, Q185W, R186I, R186L, R186W, A187C, A187D, A187E, A187F, A187G, A187P, A187S, A187W, A187Y, S188A, S188C, S188D, S188E, S188F, S188G, S188H, S188I, S188K, S188L, S188M, S188P, S188Q, S188T, S188V, S188W, S188Y, S190F, S190H, S190I, S190K, S191A, S191G, S191N, S191P, V192A, V192S, V192T, V192Y, G193F, G193H, G193I, G193N, G193P, G193R , G193T, P194C, P194E, P194H, P194I, P194K, P194L, P194M, P194Q, P194T, P194V, P194W, L196A, M199P, M199S, A200C, A200G, A200K, A200Y, G202D, G202E, G202F, G202L, G202P, G202V, G202Y, Q206A, Q206C, Q206D, Q206E, Q206F, Q206G, Q206H, Q206I, Q206L, Q206M, Q206N, Q206P, Q206R, Q206S, Q206T, Q206V, Q206W, Q206Y, S207D, S207E, S207K, S207Q, S207T, S207V, P210A, P210C, P210S, P210T, N212A, N212C, N212E, N212F, N212G, N212H, N212K, N212L, N212M, N212P, N212Q, N212R, N212S, N212V, K213A, K213C, K213D, K213E, K213F, K213H, K213I , K213L, K213M, K213N, K213Q, K213R, K213S, K213T, K213V, K213Y, Y214W, G215A, G215C, G215D, G215E, G215I, G215M, G215N, G215Q, G215S, G215T, G215V, A216C, A216D, A216E, A216G, A216K, A216L, A216M, A216N, A216P, A216Q, A216R, A216S, A216V, A216W, Y217A, Y217C, Y217D, Y217E, Y217F, Y217G, Y217H, Y217I, Y217K, Y217L, Y217M, Y217N, Y217Q, Y217R, Y217S, Y217T, Y217V, Y217W, N218A, N218C, N218E, N218F, N218G, N218H, N218K, N218M, N218R, N218S, N218T, N218W, N218Y, G219A, G219C, G219D, G219H, G219I, G219M, G219P, G219Q, G219R, G219S, G219T, G219V, G219W, T220D, T220E, T220F, T220G, T220K, T220M, T220S, T220Y, A223E, A223F, A223L, A223M, A223R, A223S, A223V, A223W, A223Y, S224A, S224C, S224F, S224G, S224H, S224M, S224N, S224Q, S224R, S224T, P225A, P225C, P225F, P225G, P225H, P225I, P225K, P225L, P225M, P225R, P225S, P225T, P225V, P225Y, A228P, A228R, A228S, A228T, A228W, G229A, G229H, G229I, G229S, A230C, A230E, A230G , A230Q, A230R, A230S, A230T, A230V, A231C, A231I, A231P, A231R, I234A, I234C, I234L, I234M, I234N, I234P, I234Q, I234S, I234T, I234V, L235A, L235C, L235G, L235I , L235K, L235M, L235N, L235Q, L235R, L235S, L235T, L235V, L235W, L235Y, S236A, S236C, S236D, S236E, S236G, S236H, S236N, S236Q, S236T, S236V, S236Y, K237A, K237E , K237F, K237G, K237H, K237I, K237L, K237M, K237N, K237Q, K237R, K237S, K237T, K237V, K237W, K237Y, H238C, H238D, H238E, H238F, H238M, H238R, H238S, P239C, P239D, P239E, P239F, P239H, P239L, P239M, P239N, P239Q, P239R, P239S, P239T, P239V, P239W, P239Y, N240A, N240C, N240D, N240F, N240G, N240K, N240L, N240Q, N240R, N240S, N240T, N240V, N240W, N240Y, W241A, W241F, W241G, W241H, W241I, W241K, W241M, W241Q, W241T, W241V, T242A, T242C, T242E, T242F, T242G, T242K, T242M, T242N, T242P, T242R, T242S, T242W, T242Y, N243C, N243E, N243F, N243G, N243I, N243Q, N243S, N243T, N243V, N243W, N243Y, T244A, T244D, T244F, T244G, T244H, T244K, T244L, T244M, T244N, T244P, T244Q, T244R, T244S, T244V, T244W, T244Y, Q245A, Q245C, Q245D, Q245E, Q245H, Q245I, Q245K, Q245L, Q245M, Q245R, Q245T, Q245V, Q245Y, R247W, S248A, S248E, S248F, S248G, S248H, S248I, S248L, S248M, S248N, S248Q, S248R, S248T, S248V, S248W, S248Y, S249C, S249D, S249H, S249I, S249K, S249L, S249M, S249N, S249Q, S249R, S249T, S249V, S249W, S249Y, L250D, L250F, L250H, L250I, L250M, L250T, L250V, E251A, E251T, E251W, N252A, N252C, N252E, N252G, N252H, N252I, N252L, N252M, N252Q, N252R, N252S, N252T, N252V, N252Y, T253A, T253C, T253E, T253G, T253H, T253K, T253M, T253S, T253V, T254A, T254C, T254L, T254M, T254R, T254S, T254V, T255A, T255C, T255D, T255E, T255F, T255G, T255H, T255I, T255K, T255L, T255M, T255R, T255S, T255V, K256A, K256C, K256D, K256E, K256F, K256H, K256I, K256L, K256M, K256N, K256P, K256Q, K256R, K256S, K256T, K256V, K256W, K256Y, L257A, L257C, L257F, L257G, L257H, L257I, L257K, L257M, L257N, L257R, L257S, L257T, L257V, L257W, L257Y, G258Q, D259A, D259E, D259F, D259G, D259L, D259N, D259P, D259Q, D259R, D259S, D259T, D259V, D259W, D259Y, S260A, S260C, S260D, S260E, S260F, S260G, S260H, S260L, S260M, S260N, S260P, S260R, S260V, S260W, S260Y, F261H, F261W, Y262A, Y262C, Y262E, Y262F, Y262H, Y262L, Y262M, Y262N, Y263F, Y263M, Y263T, G264F, G264I, G264L, K265A, K265C, K265E, K265G, K265H, K265L, K265M, K265N, K265Q, K265R, K265S, K265W, K265Y, G266C, G266F, G266L, G266M, G266P, G266R, G266V, G266W, G266Y, L267A, L267C, L267E, L267G, L267H, L267I, L267M, L267N, L267Q, L267S, L267T, L267V, I268A, I268C, I268K, I268L, I268M, I268P, I268R, I268V, N269D, N269E, N269K, N269L, N269P, N269Q, N269S, Q271A, Q271C, Q271D, Q271E, Q271F, Q271G, Q271H, Q271I, Q271K, Q271L, Q271M, Q271N, Q271P, Q271R, Q271S, Q271T, Q271V, Q271W, Q271Y, A272E, A272F, A272G, A272H, A272K, A272L, A272M, A272N, A272Q, A272R, A272S, A272T, A272V, A272W, A272Y, A274C, A274D, A274F, A274G, A274H, A274I, A274K, A274L, A274Q, A274S, A274T и A274V, где указанные положения соответствуют аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной в SEQ ID NO:2.
6. Вариант субтилизина по п.1, где указанная замена включает в себя сочетание замен, выбранное из: Y021H-Y217E, Y021H-Y217Q, S101E-Y217L, Y021H-Y217L, K213I-Y217Q, A045I-Y217Q, M119F-Y217Q, A045V-Y217L, Y021H-Y217L, K213I-Y217E, A092G-A114G, Y021W-S101E, V26Q-K213I и Y021H-S101N, где указанные положения соответствуют аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной в SEQ ID NO:2.
7. Вариант субтилизина по п.1, где указанная замена включает в себя сочетание, выбранное из: S101N-K213I, S101N-M119H, K213L, M119N-K213N, K213N, K213I-Y217E, M119N-K213I, K213N-Y217Q, M119H-K213N, S101P-K213N, M119H-Y217Q, K213I-Y217Q, M119F-K213L, Y217Q, M119F-Y217Q, A048E-K213L, A048H-K213L, K213N, V026N-K213L, V026N-K213L, V026Y-K213N, A048D-K213N, A048H-K213N, A048H-K213L, K213L, K213N, V147D-K213L, K213I, A048E-K213L, A048D-K213N, K213I, A048H-K213N, V147D-K213N, Y021H-Y217L, Y021H-Y217Q, A045V-Y217L, S101E-Y217L, Y021H-Y217E, A045I-Y217Q, Y021H-Y217L, Y021H-Y217E, где указанные положения соответствуют аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной в SEQ ID NO:2.
8. Вариант субтилизина по п.1, где указанная замена включает в себя сочетание, выбранное из: S101N-M119H, Y217L, M119N-K213N, S101E-Y217L, A045I-Y217Q, где указанные положения соответствуют аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной в SEQ ID NO:2.
9. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариант субтилизина по п.1.
10. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.9.
11. Клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п.10.
12. Чистящая композиция, содержащая вариант субтилизина по п.1.
13. Чистящая композиция по п.12, где указанная чистящая композиция представляет собой стиральное средство.
14. Чистящая композиция по п.13, где указанное стиральное средство представляет собой детергент для стирки в холодной воде, детергент с низким pH или компактный детергент.
15. Способы получения варианта субтилизина Bacillus, включающие следующие стадии:
a) трансформация клетки-хозяина вектором экспрессии, содержащим нуклеиновую кислоту, кодирующую вариант субтилизина по п.1; и
b) культивирование трансформированной клетки-хозяина в условиях, подходящих для получения варианта субтилизина, с получением варианта субтилизина.
16. Способ по п.15, дополнительно включающий стадию сбора полученного варианта субтилизина.
17. Способ по п.15, где указанная клетка-хозяин представляет собой вид Bacillus.
18. Способ по п.17, где указанный вид Bacillus представляет собой B. subtilis.
19. Способ чистки, который включает стадию приведения поверхности и/или изделия, содержащего ткань, в контакт с чистящей композицией, содержащей выделенный вариант субтилизина по любому из пп.1-8.
20. Способ получения рекомбинантной протеазы, включающий:
a) получение совокупности сайт-определяющих библиотек (SEL), каждая из которых содержит множество вариантов протеазы, имеющих разные замены по одному аминокислотному положению указанной протеазы;
b) тестирование указанных вариантов протеазы из указанных SEL и стандартной протеазы путем анализа представляющего интерес свойства;
c) определение показателя функционирования (PI) для каждого из указанных вариантов протеазы в указанном тесте;
d) идентификация двух или более указанных аминокислотных положений как неограничивающих положений, где, по меньшей мере, один из указанной совокупности вариантов протеазы в каждой из двух указанных SEL имеет PI больше, чем 0,5; и
f) получение библиотеки множественных мутаций, содержащей совокупность вариантов протеазы с множественными заменами, каждый из которых содержит замены в указанных двух или более неограничивающих положениях.
21. Способ по п.20, где указанный анализ включает два или более разных анализов, выбранных из группы, состоящей из анализов удаления пятен (с использованием микрообразцов тканей), устойчивости к LAS, устойчивости к EDTA, анализы устойчивости к детергенту и анализы специфической активности.
22. Способ по любому из пп.20 или 21, где указанная протеаза представляет собой бактериальный субтилизин.
23. Способ получения варианта субтилизина Bacillus с множественными заменами, включающий:
a) тестирование множества монозамещенных вариантов субтилизина с помощью первого анализа первого свойства и второго анализа второго свойства, где в каждом анализе свойству исходного субтилизина присваивают значение 1,0, благоприятное первое или второе свойство имеет значение больше 1,0, а чрезмерно неблагоприятное первое или второе свойство имеет значение меньше, чем примерно 0,80, или, в некоторых предпочтительных воплощениях, меньше, чем примерно 0,60;
b) идентификацию замены, по меньшей мере, в одном монозамещенном варианте субтилизина, которая связана с благоприятным первым свойством и не связана с чрезмерно неблагоприятным вторым свойством;
c) идентификацию замены, по меньшей мере, в одном монозамещенном варианте субтилизина, которая связана с благоприятным вторым свойством и не связана с чрезмерно неблагоприятным первым свойством;
d) введение замены, идентифицированной на предыдущих стадиях, в субтилизин с получением варианта субтилизина с множественными заменами.
24. Способ по п.23, дополнительно включающий тестирование варианта субтилизина с множественными заменами с помощью первого анализа и второго анализа, где улучшенный вариант субтилизина имеет значение больше 1,0 в обоих указанных первом и втором анализах, или значение больше 1,0 в первом анализе и значение от 0,80 до 1,0 во втором анализе.
25. Способ по п.24, дополнительно включающий получение улучшенного варианта (вариантов) субтилизина.
26. Способ по п.25, где указанные первое и второе свойства имеют отрицательную корреляцию.
27. Способ по п.26, где благоприятное первое или второе свойство имеет значение больше, чем примерно 1,2.
28. Способ по п.24, где чрезмерно неблагоприятное первое или второе свойство имеет значение меньше, чем примерно 0,40.
29. Способ по п.24, где первое свойство представляет собой стабильность, а второе свойство представляет собой эффективность стирки.
30. Способ по п.29, где указанная стабильность включает устойчивость к детергенту, а указанная эффективность стирки включает в себя эффективность отмывания крови-молока-чернил (BMI) в детергенте.
31. Способ по п.24, где эффективность стирки тестируют в порошкообразной или жидкой композиции детергента, имеющей pH от 5 до 12,0.
32. Способ по п.24, где исходный бактериальный субтилизин представляет собой зрелую форму субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens дикого типа, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2.
33. Способ по п.24, где положения представляют собой положения исходного субтилизина, которые имеют доступную для растворителя поверхность (SAS), составляющую более чем примерно 50%.
34. Способ по п.33, где указанные одно или более положений исходного субтилизина представляют собой положения, которые имеют доступную для растворителя поверхность (SAS), составляющую более чем примерно 65%.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US5969508P | 2008-06-06 | 2008-06-06 | |
| US61/059,695 | 2008-06-06 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2010153864A true RU2010153864A (ru) | 2012-07-20 |
| RU2575073C2 RU2575073C2 (ru) | 2016-02-10 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2710720C2 (ru) * | 2014-12-04 | 2020-01-10 | Новозимс А/С | Варианты субтилазы и кодирующие их полинуклеотиды |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2710720C2 (ru) * | 2014-12-04 | 2020-01-10 | Новозимс А/С | Варианты субтилазы и кодирующие их полинуклеотиды |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2004236308B2 (en) | Variant subtilisin enzymes (subtilases) | |
| CN101899428B (zh) | 枯草杆菌酶变体 | |
| Rosenbloom | Elastin: relation of protein and gene structure to disease. | |
| US8785172B2 (en) | Savinase variants having an improved wash performance on egg stains | |
| CN102648277B (zh) | 蛋白酶变体的用途 | |
| CA2355574C (en) | Subtilase enzymes of the i-s1 and i-s2 sub-groups having an additional amino acid residue in an active site loop region | |
| AU2009250976B2 (en) | Serine Proteases, Nucleic Acids Encoding Serine Enzymes and Vectors and Host Cells Incorporating Same | |
| JP2016041077A (ja) | サブチラーゼ変異体 | |
| EP1313846A2 (en) | Subtilase enzymes | |
| CN106795507A (zh) | 蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 | |
| NZ541095A (en) | Subtilase variants | |
| EP1590454A2 (en) | Subtilases | |
| BR112017000102B1 (pt) | Variantes de subtilase de uma subtilase progenitora, composição detergente, uso da mesma e método para a produção de uma variante de subtilase que tem atividade de protease | |
| CN107002058A (zh) | 枯草杆菌酶变体 | |
| RU2009149660A (ru) | Способы улучшения множественных свойств белка | |
| JP2016537011A (ja) | Ｌｇ１２−系統群プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法 | |
| CN107835855A (zh) | AprL‑进化枝蛋白酶变体及其用途 | |
| US20070161531A1 (en) | Subtilase variants | |
| CN109563498A (zh) | 包含黄原胶裂解酶变体i的洗涤剂组合物 | |
| DE60116605D1 (de) | Neue subtilase enzyme mit verbesserter waschleistung bei eierflecken | |
| Benayahu et al. | Differentiation of bone marrow stroma-derived mesenchymal cells | |
| CN109312322A (zh) | 热稳定的蛋白酶及其制备和使用方法 | |
| RU2010153864A (ru) | Композиции и способы, включающие в себя применение вариантных микробных протеаз | |
| CA2424434A1 (en) | Subtilase variants | |
| CN109456957A (zh) | 蛋白酶变体、液体洗涤剂组合物及其应用 |