RU2006134285A - Способ получения очищенных, безопасных с вирусологической точки зрения препаратов антител - Google Patents

Abstract

1. Способ получения очищенных, вирусологически безопасных и инактивированных с вирусологической точки зрения препаратов антител из исходного раствора, содержащего антитела и примеси, включающий в себя следующие стадии:(a) доведение рН исходного раствора приблизительно до 4,6-4,95, в частности, приблизительно до 4,8-4,95, для получения промежуточного раствора;(b) добавление каприлат- и/или гептаноат-ионов к промежуточному раствору при поддержании рН на уровне приблизительно 4,8-4,95, что приводит к образованию преципитата, при этом антитела главным образом присутствуют в супернатанте;(c) инкубирование раствора супернатанта в условиях, включающих в себя определенные концентрации каприлат- и/или гептаноат-ионов, время, рН и температуру; необязательно концентрирование и диафильтрацию раствора до доведения рН;(d) нанесение фильтрованного раствора с использованием по меньшей мере одной анионообменной смолы при рН приблизительно от 5,0 до 5,2, и необязательно - на две различные анионообменные смолы в условиях, обеспечивающих связывание загрязняющих примесей со смолой в отсутствие значительного связывания антител со смолой, с получением очищенных, вирусологически безопасных и инактивированных с вирусологической точки зрения препаратов антител.2. Способ по п.1, в котором вторую анионообменную хроматографию выполняют при рН в диапазоне от 6,7 до 6,9.3. Способ по п.1 и/или 2, в котором стадии (b) и (с) повторяют по меньшей мере один раз.4. Способ по п.3, в котором исходный раствор содержит антитела, полученные из плазмы.5. Способ по п.4, в котором на стадии (d) инактивированный раствор приводят в контакт с двумя различными анионообменными смола�

Claims (22)

1. Способ получения очищенных, вирусологически безопасных и инактивированных с вирусологической точки зрения препаратов антител из исходного раствора, содержащего антитела и примеси, включающий в себя следующие стадии:

(a) доведение рН исходного раствора приблизительно до 4,6-4,95, в частности, приблизительно до 4,8-4,95, для получения промежуточного раствора;

(b) добавление каприлат- и/или гептаноат-ионов к промежуточному раствору при поддержании рН на уровне приблизительно 4,8-4,95, что приводит к образованию преципитата, при этом антитела главным образом присутствуют в супернатанте;

(c) инкубирование раствора супернатанта в условиях, включающих в себя определенные концентрации каприлат- и/или гептаноат-ионов, время, рН и температуру; необязательно концентрирование и диафильтрацию раствора до доведения рН;

(d) нанесение фильтрованного раствора с использованием по меньшей мере одной анионообменной смолы при рН приблизительно от 5,0 до 5,2, и необязательно - на две различные анионообменные смолы в условиях, обеспечивающих связывание загрязняющих примесей со смолой в отсутствие значительного связывания антител со смолой, с получением очищенных, вирусологически безопасных и инактивированных с вирусологической точки зрения препаратов антител.

2. Способ по п.1, в котором вторую анионообменную хроматографию выполняют при рН в диапазоне от 6,7 до 6,9.

3. Способ по п.1 и/или 2, в котором стадии (b) и (с) повторяют по меньшей мере один раз.

4. Способ по п.3, в котором исходный раствор содержит антитела, полученные из плазмы.

5. Способ по п.4, в котором на стадии (d) инактивированный раствор приводят в контакт с двумя различными анионообменными смолами в условиях, при которых загрязняющие примеси селективно связываются со смолой, в то время как антитела в значительной степени со смолой не связываются.

6. Способ по п.5, в котором антитела представляют собой иммуноглобулин G.

7. Способ по п.6, в котором рН доводят до значений 6,8±0,1 перед выполнением второй анионообменной хроматографии.

8. Способ по п.7, в котором раствор, сошедший с колонки в результате анионообменной хроматографии, концентрируют до 60-90 мг/мл и подвергают диафильтрации против буферного раствора, предпочтительно фосфатного буфера.

9. Способ по п.8, в котором раствор, прошедший через колонку в ходе первой анионообменной хроматографии, обрабатывают растворителем/детергентом, предпочтительно Triton X-100 и TnBP, наиболее предпочтительно в концентрации 1% Triton X-100 и 0,3% TnBP в течение 4,5-8 часов для инактивации покрытых липидами вирусов.

10. Способ по п.9, в котором детергент инкубационной смеси удаляют экстракцией твердой и жидкой фаз.

11. Способ по п.10, в котором по меньшей мере один из способов, выбранных из группы, состоящей из обработки УФ-С, тепловой обработки, фильтрации вирусов и удаления или инактивации прионов, комбинируют с обработкой каприлатом согласно п.1.

12. Способ по п.10, в котором в ходе экстракции твердой фазы значение рН доводят до 6,7-6,9.

13. Способ по п.12, в котором раствор подвергают второй анионообменной хроматографии.

14. Способ по п.13, в котором значение рН раствора, сошедшего с колонки с анионообменником, доводят до 3,5-4,5, предпочтительно до рН 4,0±0,1.

15. Способ по п.14, в котором раствор IgG приводят в контакт с фильтром [для удаления] вирусов.

16. Способ по п.14, в котором раствор IgG приводят в контакт с нанофильтром.

17. Способ по п.14, в котором раствор IgG инкубируют по меньшей мере 24 ч, предпочтительно при 37°С±1.

18. Способ по п.14, в котором раствор IgG концентрируют до 5 или 10%.

19. Способ по п.18, в котором осмолярность концентрата доводят до 200-400 мОсмоль/кг подходящей добавкой.

20. Способ по п.19, в котором рН раствора IgG доводят до 3,5-6,0, предпочтительно до значения рН от 4,0 до 5,5.

21. Способ по п.20, в котором раствор IgG стерильно фильтруют и разливают в стеклянные бутыли или пластиковые контейнеры.

22. Фракция, содержащая IgG, которая может быть получена согласно любому из пп.1-21.