RU2003119075A

RU2003119075A - Способ пространственной упаковки химически синтезированных полипептидов

Info

Publication number: RU2003119075A
Application number: RU2003119075/04A
Authority: RU
Inventors: Антонио ВЕРДИНИ; Джампьетро КОРРАДИН; Марио РОДЖЕРО
Original assignee: РМФ Диктажен С.А.
Priority date: 2000-11-27
Filing date: 2001-11-27
Publication date: 2004-12-27

Claims

1. Способ пространственной упаковки (сворачивания) химически синтезированных полипептидов, включающий в себя обработку полипептида и/или белка, который содержит два или более производных остатков цистеина, восстанавливающим агентом в буфере для сворачивания, имеющем заданные значения рН и температуры.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что производное цистеинового остатка соответствует S-бутил-тиоцистеиновому отстатку.

3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что восстанавливающий агент представляет собой цистеин.

4. Способ по п.1, 2 или 3, отличающийся тем, что указанный буфер для сворачивания включает в себя одну или более хаотропных солей.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что указанные хаотропные соли выбраны из группы, состоящей из хлорида гуанидиния и мочевины.

6. Способ по п.4 или 5, отличающийся тем, что хаотропные соли присутствуют в буфере для сворачивания в концентрации 0,1–1 М.

7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что указанный буфер для сворачивания имеет щелочное значение рН.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что значение рН составляет от 7 до 9.

9. Способ по п.7 или 8, отличающийся тем, что значение рН составляет от 7 до 8,5.

10. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что температура буфера для сворачивания составляет от 25°С до 40°С.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что температура составляет от 27°С до 38°С.

12. Способ по п.10 или 11, отличающийся тем, что температура составляет примерно 37°С.

13. Способ получения биологически активного пептида, включающий в себя

(а) химический синтез полипептида, содержащего два или более производных остатков цистеина;

(b) обработку указанного полипептида восстанавливающим агентом в буфере для сворачивания, имеющем заданное значение рН и температуры; и

(с) очистку полученных свернутых полипептидов и/или белков.

14. Способ по п.13, отличающийся тем, что производное цистеинового остатка соответствует S-бутил-тиоцистеиновому остатку.

15. Способ по п.13 или 14, отличающийся тем, что восстанавливающий агент представляет собой цистеин.

16. Способ по п.13, 14 или 15, отличающийся тем, что буфер для сворачивания включает в себя одну или более хаотропных солей.

17. Способ по п.16, отличающийся тем, что хаотропные соли выбраны из группы, состоящей из хлорида гуанидиния и мочевины.

18. Способ по п.15 или 16, отличающийся тем, что хаотропные соли присутствуют в буфере для сворачивания в концентрации 0,1–1 М.

19. Способ по любому из пп.13-18, отличающийся тем, что буфер для сворачивания имеет щелочное значение рН.

20. Способ по п.19, отличающийся тем, что значение рН буфера для сворачивания составляет от 7 до 9.

21. Способ по п.7 или 8, отличающийся тем, что значение рН составляет от 7 до 8,5.

22. Способ по любому из пп.13-21, отличающийся тем, что температура буфера для сворачивания составляет от 25°С до 40°С.

23. Способ по п.22, отличающийся тем, что температура составляет от 27°С до 38°С.

24. Способ по п.22 или 23, отличающийся тем, что температура составляет примерно 37°С.

25. Способ по любому из пп.13-24, включающий в себя стадии

(а) сборки S-трет-бутил-тиоцистеинового полипептида на нерастворимой полимерной подложке посредством пошаговой элонгации цепи;

(b) отщепления указанной S-трет-бутил-тиоцистеиновой полипептидной цепи от указанной подложки посредством ацидолизиса;

(с) очистки полученного S-трет-бутил-тиоцистеинового полипептида;

(d) сворачивания очищенного S-трет-бутил-тиоцистеинового полипептида посредством обработки указанных полипептидных производных молярным избытком цистеина в буфере для сворачивания, содержащем хаотропную соль и имеющем щелочное значение рН и температуру примерно 37°С; и

(е) очистки полученных свернутых белков посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой.

26. Способ по п.25, отличающийся тем, что указанная хаотропная соль представляет собой хлорид гуанидиния.

27. Способ по п.25 или 26, отличающийся тем, что указанная полимерная подложка представляет собой полиамид или смолу на основе полистирола, функционализированную кислотолабильным линкером в виде гидроксиметилфеноксиуксусной кислоты.