RU2002123058A - Новые производные рекомбинантной стафилокиназы, их получение и применение - Google Patents
Новые производные рекомбинантной стафилокиназы, их получение и применениеInfo
- Publication number
- RU2002123058A RU2002123058A RU2002123058/13A RU2002123058A RU2002123058A RU 2002123058 A RU2002123058 A RU 2002123058A RU 2002123058/13 A RU2002123058/13 A RU 2002123058/13A RU 2002123058 A RU2002123058 A RU 2002123058A RU 2002123058 A RU2002123058 A RU 2002123058A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- staphylokinase
- seq
- derivative
- sequence
- amino acid
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/305—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Micrococcaceae (F)
- C07K14/31—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Micrococcaceae (F) from Staphylococcus (G)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Claims (28)
1. Рекомбинантное производное стафилокиназы, характеризующееся тем, что его полимеризующая способность, а также клеточная и гуморальная иммуногенность существенно понижена по сравнению со стафилокиназой естественного типа.
2. Производное стафилокиназы по п.1, отличающееся тем, что его получают путем замещения одного или нескольких остатков аминокислот в основной гидрофобной области стафилокиназы естественного типа одной или несколькими аминокислотами.
3. Производное стафилокиназы по п.2, в котором указанное замещение имеет место между аминокислотным остатком 104 и 113 (ГО2) стафилокиназы естественного типа.
4. Производное стафилокиназы по п.3, в котором указанное замещение имеет место внутри коровой области ГО2.
5. Производное стафилокиназы по п.1, отличающееся бифункциональностью тромболитического и антикоагулирующего агента.
6. Производное стафилокиназы по п.5, отличающееся тем, что оно содержит последовательность Arg-Gly-Asp (RGD) или Lys-Gly-Asp (KGD) в их последовательности аминокислот.
7. Производное стафилокиназы по п.6, в котором указанную последовательность RGD или последовательность KGD получают путем замещения одного или нескольких остатков аминокислот стафилокиназы естественного типа.
8. Производное стафилокиназы по п.1, отличающееся тем, что фенилаланин в положении 111 (Phe111) стафилокиназы естественного типа заменяют на аспарагиновую кислоту (Asp111), а остальная последовательность остается без изменений.
9. Производное стафилокиназы по п.1, отличающее тем, что фенилаланин в положении (Phe111) стафилокиназы естественного типа заменяют на аспарагиновую кислоту (Asp111), лизин 109 (Lysl09) заменяют на аргинин (Argl09), а остальная последовательность остается без изменений.
10. Производное стафилокиназы с бифункциональностью тромболитического и антикоагулирующего агента, отличающееся тем, что оно включает в себя аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из следующих последовательностей: a) последовательность, приведенная в SEQ ID №1, b) последовательность, приведенная в SEQ ID №3, и c) NH2-терминальные усечения SEQ ID №1 или SEQ ID №3.
11. Производное стафилокиназы по п.10, отличающееся тем, что оно включает в себя последовательность, в которой удалены 1-16 аминокислот, NH2-конца SEQ ID №1 или SEQ ID №3.
12. Производное стафилокиназы по п.10, отличающееся тем, что оно включает в себя последовательность, в которой удалены 1-10 аминокислот, NH2-конца SEQ ID №1 или SEQ ID №3.
13. Производное стафилокиназы по п.10, отличающееся тем, что оно включает в себя последовательность, в которой удалены 1-6 аминокислот, NH2-конца SEQ ID №1 или SEQ ID №3.
14. Производное стафилокиназы с бифункциональностью тромболитического и антикоагулирующего агента, отличающееся тем, что оно включает в себя аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID №1.
15. Производное стафилокиназы с бифункциональностью тромболитического и антикоагулирующего агента, отличающееся тем, что оно включает в себя аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID №3.
16. Способ получения производного стафилокиназы с бифункциональностью тромболитического и антикоагулирующего агента, включающий в себя получение новой рекомбинантной стафилокиназы, отличающийся тем, что он включает в себя следующие стадии: a) получение фрагмента ДНК, содержащего, по меньшей мере, кодирующую последовательность биологически активной стафилокиназы, b) осуществление in vitro целенаправленного мутагенеза фрагмента ДНК, чтобы заместить один или более кодонов аминокислоты естественного типа на кодон другой аминокислоты, c) клонирование мутированного фрагмента ДНК в подходящий вектор, d) трансформация или трансфекция подходящей клетки хозяина рекомбинантным вектором, и e) культивирование клетки хозяина в условиях, подходящих для экспрессии фрагмента ДНК, и f) извлечение и очистка желаемых производных стафилокиназы.
17. Способ по п.16, в котором целенаправленный мутагенез может быть осуществлен путем трехкратной амплификации путем цепной полимеразной реакции, с плазмидой pST-Sak в качестве матрицы при использовании прямого праймера, обращенного праймера и мутирующего праймера.
18. Способ по п.16, в котором используемый вектор представляет собой прокариотический вектор экспрессии pLY-4.
19. Способ по п.16, в котором используемая клетка-хозяина представляет собой Е. Coli K802.
20. Способ по п.16, в котором клетки-хозяина культивируют при 30-42°С и значении рН приблизительно 6-8, с уменьшением скорости перемешивания при увеличении оптической плотности.
21. Способ по п.16, в котором конечный продукт рекомбинантной стафилокиназы получают путем разрушения клеток при высоком давлении после ферментации, сбора тел включения при центрифугировании, с последующим выделением и очисткой двустадийным способом.
22. Конструкция ДНК, которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую производное стафилокиназы по любому одному из пп.1-15.
23. Конструкция ДНК по п.22, которая включают в себя нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID №2.
24. Конструкция ДНК по п.22, которая включают в себя нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID №4.
25. Рекомбинантный вектор, содержащий конструкцию ДНК по любому одному из пп.22-24.
26. Клетка-хозяина, включающая в себя рекомбинантный вектор по п.25.
27. Фармацевтическая композиция, включающая в себя терапевтически эффективное количество производной стафилокиназы по любому одному из пп.1-15 и фармакологически приемлемый носитель.
28. Способ лечения артериального тромбоза, внутриглазной кровяной опухоли и кровотечения, который включает в себя введение пациенту фармацевтической композиции по п.27.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN00111627.4 | 2000-01-28 | ||
| CNB001116274A CN100342007C (zh) | 2000-01-28 | 2000-01-28 | 一种新型重组葡激酶及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2002123058A true RU2002123058A (ru) | 2004-01-27 |
| RU2283863C2 RU2283863C2 (ru) | 2006-09-20 |
Family
ID=4581536
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2002123058/13A RU2283863C2 (ru) | 2000-01-28 | 2001-01-23 | Рекомбинантное производное стафилокиназы, его получение и применение |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7407789B2 (ru) |
| CN (1) | CN100342007C (ru) |
| AU (1) | AU2001233576A1 (ru) |
| RU (1) | RU2283863C2 (ru) |
| WO (1) | WO2001055359A1 (ru) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100342007C (zh) * | 2000-01-28 | 2007-10-10 | 复旦大学 | 一种新型重组葡激酶及其制备方法 |
| CN100400656C (zh) * | 2004-10-22 | 2008-07-09 | 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 | 一种新型rgd葡激酶双功能分子，其制备方法及用途 |
| CN1970746B (zh) * | 2005-07-18 | 2012-09-05 | 百奥泰生物科技(广州)有限公司 | 具有抗血小板聚集活性的重组组织型纤溶酶原激活物的双功能变异体 |
| CN100445390C (zh) * | 2005-10-14 | 2008-12-24 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | 一种高活性、低抗原性葡激酶衍生体及制备方法 |
| CN100445389C (zh) * | 2005-10-14 | 2008-12-24 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | 一种低抗原性重组葡激酶突变体及制备方法 |
| CN101139578B (zh) * | 2007-08-24 | 2010-09-15 | 河北师范大学 | 具有抗血小板聚集和纤溶活性的双功能葡激酶突变体、应用及其制备方法 |
| CN102439142B (zh) * | 2009-04-24 | 2015-11-25 | DPx控股有限公司 | 改进的猪肝酯酶 |
| CN102199585B (zh) * | 2011-04-13 | 2012-08-22 | 中国科学院过程工程研究所 | 重组葡激酶二聚体的制备及聚乙二醇定点修饰 |
| CN117643621B (zh) * | 2023-10-27 | 2024-07-02 | 江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院） | 一种溶栓药PLT-r-SAK及其制备方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5475089A (en) * | 1990-12-17 | 1995-12-12 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Thrombolytic peptide, production thereof, and thrombolytic agent |
| CN1035192C (zh) * | 1994-04-04 | 1997-06-18 | 上海医科大学 | 一种重组葡激酶的制备方法 |
| JPH08289790A (ja) * | 1995-01-06 | 1996-11-05 | Leuven Res & Dev Vzw | 新規なスタフィロキナーゼ誘導体 |
| US6383483B1 (en) * | 1995-01-06 | 2002-05-07 | Désiré José Collen | Staphylokinase derivatives with cysteine substitutions |
| CN1109508A (zh) * | 1995-01-23 | 1995-10-04 | 成都世新药物技术开发中心 | 重组葡激酶的全dna序列 |
| CN1196391A (zh) * | 1997-04-16 | 1998-10-21 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | 新型葡激酶及其生产方法 |
| ATE294865T1 (de) * | 1998-02-04 | 2005-05-15 | Thromb X N V | Identifizierung, produktion und verwendung von staphylokinase derivaten mit reduzierter immunogenizität und/oder reduzierter 'clearance' |
| CN1064406C (zh) * | 1998-05-11 | 2001-04-11 | 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 | 利用基因工程技术生产葡激酶的方法 |
| CN100342007C (zh) * | 2000-01-28 | 2007-10-10 | 复旦大学 | 一种新型重组葡激酶及其制备方法 |
-
2000
- 2000-01-28 CN CNB001116274A patent/CN100342007C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-01-23 WO PCT/CN2001/000102 patent/WO2001055359A1/zh active Application Filing
- 2001-01-23 AU AU2001233576A patent/AU2001233576A1/en not_active Abandoned
- 2001-01-23 RU RU2002123058/13A patent/RU2283863C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-01-23 US US10/182,160 patent/US7407789B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-08-04 US US12/185,601 patent/US20090087421A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20090087421A1 (en) | 2009-04-02 |
| WO2001055359A1 (fr) | 2001-08-02 |
| CN100342007C (zh) | 2007-10-10 |
| US7407789B2 (en) | 2008-08-05 |
| RU2283863C2 (ru) | 2006-09-20 |
| US20050202000A1 (en) | 2005-09-15 |
| CN1264736A (zh) | 2000-08-30 |
| AU2001233576A1 (en) | 2001-08-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112552393B (zh) | 一种重组人源iii型胶原蛋白及其毕赤酵母重组表达系统 | |
| FI104985B (fi) | Hiivan muokkausjärjestelmä, joka käsittää muokkauskohdan vieressä negatiivisesti varautuneen aminohapon | |
| US5962267A (en) | Proinsulin derivative and process for producing human insulin | |
| US5888506A (en) | Methioninase formulations | |
| US6475764B1 (en) | Recombinant collagenase type I from clostridium histolyticum and its use for isolating cells and groups of cells | |
| WO1989005824A1 (en) | Site-specific homogeneous modification of polypeptides to facilitate covalent linkages to a hydrophilic moiety | |
| CN109498815B (zh) | 重组人激肽释放酶的化学修饰物及其应用 | |
| CN110845603A (zh) | 人胶原蛋白17型多肽、其生产方法和用途 | |
| HU217103B (hu) | Fúziós fehérje, eljárás fúziós fehérjék IgA-proteázok alkalmazásával történő enzimes hasítására | |
| ES2279510T5 (es) | Generación de insulina humana. | |
| JPH0829086B2 (ja) | ポリクリングルプラスミノ−ゲン活性化因子 | |
| JPS61219395A (ja) | ＴＧＦ‐βをコードしている核酸およびその用途 | |
| RU2002123058A (ru) | Новые производные рекомбинантной стафилокиназы, их получение и применение | |
| RU2010127232A (ru) | Рекомбинантные белки эластазы и способы их получения и применения | |
| CN111378027A (zh) | 一种索玛鲁肽前体的制备方法 | |
| NZ231997A (en) | Motilin-like polypeptides, their use as pharmaceuticals and production by cyanogen bromide cleavage of fusion proteins | |
| JP2023531168A (ja) | インスリンデグルデク誘導体およびその製造方法と使用 | |
| CN113801233B (zh) | 一种索玛鲁肽的制备方法 | |
| WO1988010299A1 (en) | A process for preparing a protein or polypeptide, a dna sequence coding for the polypeptide, a microorganism containing the dna sequence as well as the polypeptide and its use as a pharmaceutical preparation | |
| EP3950719A1 (en) | Fusion protein containing fluorescent protein fragments and uses thereof | |
| EP0437544A1 (en) | Recombinant pdgf and methods for production | |
| KR100358948B1 (ko) | 인체 과립성 백혈구의 콜로니 자극인자를 분비하는 대장균 | |
| JP6667432B2 (ja) | 遺伝子移入促進因子プロトランスズジン（Ｐｒｏｔｒａｎｓｄｕｚｉｎ）Ｂ | |
| JP2983997B2 (ja) | 脱―表皮細胞成長因子プラスミノーゲンアクチベーター | |
| EA005586B1 (ru) | Гибридный белок проинсулина и способ получения из него рекомбинантного инсулина |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170124 |