JP6667432B2 - 遺伝子移入促進因子プロトランスズジン(Protransduzin)B - Google Patents
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Description
X−Glu−Cys−Lys−Ile−Lys−Gln−Ile−Ile−Asn−Met−Trp−Gln(配列番号1)
を有するN末端保護ペプチドであって、Xが前記ペプチドのN末端を保護する基であるN末端保護ペプチドが本発明の目的を達成することがわかった。特に、Xはメチル基、エチル基、プロピル基、又はブチル基などの1つ又は2つのアルキル基であるか、アセチル基若しくはプロピオニル基などのアシル基であるか、又はX−Glu基はアミノ酸であるピログルタミン酸である。
−有機溶媒に溶解した請求項1に記載のペプチドを提供するステップ、
−上記ペプチドを水性液体に添加して、上記ペプチドの不溶性凝集体を形成するステップ、
−直前のステップの上記液体を混合するステップ、及び
−上記細胞を培養するステップ
を含む上記方法にも関する。
Fmoc−L−Asn(Trt)、Fmoc−L−Cys(Trt)、L−pGlu、Fmoc−L−Gln(Trt)、Fmoc−L−Ile、Fmoc−L−Lys(Boc)、Fmoc−L−Met及びFmoc−L−Trp(Boc)。
予備的分離:
Gilson社のHPLC上で精製を実施する。UV/VIS検出器はKronwald社のものであり、230nmの波長で分離を検出する。流速は40ml/分である。
凍結乾燥:
Christ社のEpsilon 1/45ユニットの技術データを次のように設定して凍結乾燥のために使用する:棚面積、3.78m2;氷収容能、約60kg;最大アイスコンデンサ能力、45kg/24時間;真空ポンプの最終分圧、ガスバラスト有り/無しで1×10−3/10−4mbar;凍結乾燥データ(ガスバラスト有りでユニットを手動操作):最終分圧、1×10−2mbar;アイスコンデンサ温度、−50℃;棚温度、+15℃;棚加熱の動作起点、0.5mbar;凍結乾燥時間、最大で3日。
0.5mgのプロトランスズジンBを50μlのDMSOに溶解する。次に450μlのPBSをこの溶液に添加し、原線維が3分以内に形成する。このストック溶液(1mg/ml)をベクターに添加して25μg/mlの濃度のプロトランスズジンBを得る。その溶液を1分間ボルテックス混合し、その後に5000gで5分間遠心分離する。上清を除去し、ペレットを少量のPBSに懸濁して細胞に添加する。これらの細胞を恒温器の中で2日間培養する。
Claims (7)
- 下記の配列:
X−Glu−Cys−Lys−Ile−Lys−Gln−Ile−Ile−Asn−Met−Trp−Gln
からなるN末端保護ペプチドであって、X−Glu基がアミノ酸であるピログルタミン酸であるN末端保護ペプチド。 - 水性液体中に存在している、請求項1に記載のN末端保護ペプチド。
- 請求項1に記載のペプチドを含有する医薬品。
- 遺伝子治療で治療可能な疾患を治療するための遺伝子治療において使用される、請求項3に記載の医薬品。
- ウイルスベクターによる細胞の感染を促進するための方法であって、
有機溶媒に溶解した請求項1に記載のペプチドを提供する工程、
前記ペプチドを水性液体に添加して前記ペプチドの不溶性凝集体を形成する工程、及び
前記ウイルスベクター及び前記不溶性凝集体の存在下で前記細胞を培養する工程を含み、前記ペプチドを酵素が存在しない前記水性液体中で保存する工程を更に含む、方法。 - 請求項1に記載のペプチドを含む、ウイルスによる細胞感染の促進剤。
- 請求項1に記載のペプチドを含むキット。
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