JP2003289871A - ペプチド核酸およびオリゴペプチドからなる化合物、その製造法ならびにその用途 - Google Patents
ペプチド核酸およびオリゴペプチドからなる化合物、その製造法ならびにその用途Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 複雑な合成経路なしに合成でき、細胞内、さ
らには核内に効率よく導入できるペプチド核酸含有化合
物を提供する。 【解決手段】 ペプチド核酸、および特定配列の核移行
シグナル（ＮＬＳ）のＮ末端および／またはＣ末端にリ
ジン残基および／またはアルギニン残基が２〜７個結合
したペプチド配列からなるオリゴペプチドからなる化合
物。
らには核内に効率よく導入できるペプチド核酸含有化合
物を提供する。 【解決手段】 ペプチド核酸、および特定配列の核移行
シグナル（ＮＬＳ）のＮ末端および／またはＣ末端にリ
ジン残基および／またはアルギニン残基が２〜７個結合
したペプチド配列からなるオリゴペプチドからなる化合
物。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ペプチド核酸（以
下、ＰＮＡという）およびオリゴペプチドからなる生体
膜透過性に優れた新規化合物に関する。
下、ＰＮＡという）およびオリゴペプチドからなる生体
膜透過性に優れた新規化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＰＮＡは、ＤＮＡ類似構造を有する非天
然の化合物である。その構造は、ＤＮＡやＲＮＡとは異
なり、ペプチド結合で骨格部分を形成し、側鎖がＤＮＡ
構造を有する。ＰＮＡは、ＤＮＡ、ＲＮＡまたは二本鎖
ＤＮＡと強くハイブリダイズし、また、ヌクレアーゼな
どの分解酵素の作用を受けないことから、従来のオリゴ
ＤＮＡより、強力なアンチセンス作用を有するものと期
待されている（ベッツら、Science、第２７０巻、１８
３８〜１８４１頁、１９９５年；コルテスら、Drug Dis
cov. Today、第６巻、８９３〜９０４頁、２００１
年）。
然の化合物である。その構造は、ＤＮＡやＲＮＡとは異
なり、ペプチド結合で骨格部分を形成し、側鎖がＤＮＡ
構造を有する。ＰＮＡは、ＤＮＡ、ＲＮＡまたは二本鎖
ＤＮＡと強くハイブリダイズし、また、ヌクレアーゼな
どの分解酵素の作用を受けないことから、従来のオリゴ
ＤＮＡより、強力なアンチセンス作用を有するものと期
待されている（ベッツら、Science、第２７０巻、１８
３８〜１８４１頁、１９９５年；コルテスら、Drug Dis
cov. Today、第６巻、８９３〜９０４頁、２００１
年）。
【０００３】しかしながら、ＰＮＡは、溶解性および細
胞膜透過性が低く、実際に細胞の中に導入し、アンチセ
ンス・アンチジーンとして作用させることは困難であっ
た（コルテスら、Drug Discov. Today、第６巻、８９３
〜９０４頁、２００１年）。実際にＰＮＡを単独で投与
する場合、非常に高濃度、たとえば１０μＭ以上のＰＮ
Ａを使用することにより核内への導入は可能であった
が、この濃度では細胞毒性が認められ、生体に使用でき
る濃度ではなかった。
胞膜透過性が低く、実際に細胞の中に導入し、アンチセ
ンス・アンチジーンとして作用させることは困難であっ
た（コルテスら、Drug Discov. Today、第６巻、８９３
〜９０４頁、２００１年）。実際にＰＮＡを単独で投与
する場合、非常に高濃度、たとえば１０μＭ以上のＰＮ
Ａを使用することにより核内への導入は可能であった
が、この濃度では細胞毒性が認められ、生体に使用でき
る濃度ではなかった。
【０００４】この問題点を改良するため、ＳＶ４０のＰ
ＮＡに核移行シグナル（ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号１：
以下、ＮＬＳという））を付加し、さらにポリエチレン
イミン（ＰＥＩ）とインキュベーションすることにより
正電荷を付加すると、細胞内とくに核への導入効率がよ
くなったとの報告がある（ブランデンら、Nature Biote
chnology、第１７巻、７８４〜７８７頁、１９９９年；
カトロナら、Nature Biotechnology、第１８巻、３００
〜３０３頁、２０００年）。しかし、核移行シグナルを
付加しただけでは、ＰＮＡを細胞膜透過させることは困
難であるとの報告もある。またＰＥＩは、その細胞毒性
が指摘されており、そのうえ、この方法だと、細胞核内
に導入するために２ステップ必要となり煩雑であるなど
の欠点がある。さらに、この方法でＰＮＡと核移行シグ
ナルを連結するために使用された二価性架橋剤はＰＮＡ
と核移行シグナルとを堅く固定してしまうため、ＰＮＡ
の標的配列へのハイブリダイズを核移行シグナル部位が
妨害すると考えられている。
ＮＡに核移行シグナル（ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号１：
以下、ＮＬＳという））を付加し、さらにポリエチレン
イミン（ＰＥＩ）とインキュベーションすることにより
正電荷を付加すると、細胞内とくに核への導入効率がよ
くなったとの報告がある（ブランデンら、Nature Biote
chnology、第１７巻、７８４〜７８７頁、１９９９年；
カトロナら、Nature Biotechnology、第１８巻、３００
〜３０３頁、２０００年）。しかし、核移行シグナルを
付加しただけでは、ＰＮＡを細胞膜透過させることは困
難であるとの報告もある。またＰＥＩは、その細胞毒性
が指摘されており、そのうえ、この方法だと、細胞核内
に導入するために２ステップ必要となり煩雑であるなど
の欠点がある。さらに、この方法でＰＮＡと核移行シグ
ナルを連結するために使用された二価性架橋剤はＰＮＡ
と核移行シグナルとを堅く固定してしまうため、ＰＮＡ
の標的配列へのハイブリダイズを核移行シグナル部位が
妨害すると考えられている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明はかかる従来の
問題点を解決し、複雑な合成経路なしに合成でき、細胞
内、さらには核内に効率よく導入できるＰＮＡ含有化合
物を提供することを目的とする。また、本発明は、標的
配列へのハイブリダイズが有効に達成できるＰＮＡ含有
化合物を提供することを目的とする。
問題点を解決し、複雑な合成経路なしに合成でき、細胞
内、さらには核内に効率よく導入できるＰＮＡ含有化合
物を提供することを目的とする。また、本発明は、標的
配列へのハイブリダイズが有効に達成できるＰＮＡ含有
化合物を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】前記課題を解決するため
に鋭意検討を重ねた結果、ＰＮＡと特定の修飾核移行シ
グナルとを連結することにより、得られた化合物は核内
に効率よく導入されることを見出した。さらに、特定の
二価性架橋剤を用いることでＰＮＡの標的配列へのハイ
ブリダイズが有効に達成できることを見いだした。
に鋭意検討を重ねた結果、ＰＮＡと特定の修飾核移行シ
グナルとを連結することにより、得られた化合物は核内
に効率よく導入されることを見出した。さらに、特定の
二価性架橋剤を用いることでＰＮＡの標的配列へのハイ
ブリダイズが有効に達成できることを見いだした。
【０００７】すなわち本発明は、ＰＮＡ、および配列番
号１に記載した核移行シグナルのＮ末端および／または
Ｃ末端にリジン残基および／またはアルギニン残基が両
端合わせて２〜７個結合したペプチド配列からなるオリ
ゴペプチドからなる化合物に関する。
号１に記載した核移行シグナルのＮ末端および／または
Ｃ末端にリジン残基および／またはアルギニン残基が両
端合わせて２〜７個結合したペプチド配列からなるオリ
ゴペプチドからなる化合物に関する。
【０００８】前記化合物において、ＰＮＡとオリゴペプ
チドとが、二価性架橋剤によって架橋されていることが
好ましい。
チドとが、二価性架橋剤によって架橋されていることが
好ましい。
【０００９】前記二価性架橋剤が、式：
【００１０】
【化２】
【００１１】（式中、ｎ＝３〜１１）で表わされる化合
物であることが好ましい。
物であることが好ましい。
【００１２】前記化合物において、オリゴペプチドがＲ
ＲＰＫＫＫＲＫＶＲＲ（配列番号２：以下、２Ｒ−ＮＬ
Ｓ−２Ｒという）であることが好ましい。
ＲＰＫＫＫＲＫＶＲＲ（配列番号２：以下、２Ｒ−ＮＬ
Ｓ−２Ｒという）であることが好ましい。
【００１３】また、本発明は、（Ａ）ペプチド核酸を合
成し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を連結させる工
程、（Ｂ）末端にシステイン残基を導入したオリゴペプ
チドを合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）ペプチド核酸
に連結した二価性架橋剤とオリゴペプチドのシステイン
残基とを連結させる工程からなる前記化合物の製造方法
に関する。
成し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を連結させる工
程、（Ｂ）末端にシステイン残基を導入したオリゴペプ
チドを合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）ペプチド核酸
に連結した二価性架橋剤とオリゴペプチドのシステイン
残基とを連結させる工程からなる前記化合物の製造方法
に関する。
【００１４】本発明は、（Ａ）オリゴペプチドを合成
し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を連結させる工
程、（Ｂ）末端にシステイン残基を導入したペプチド核
酸を合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）オリゴペプチド
に連結した二価性架橋剤とペプチド核酸のシステイン残
基とを連結させる工程からなる前記化合物の製造方法に
関する。
し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を連結させる工
程、（Ｂ）末端にシステイン残基を導入したペプチド核
酸を合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）オリゴペプチド
に連結した二価性架橋剤とペプチド核酸のシステイン残
基とを連結させる工程からなる前記化合物の製造方法に
関する。
【００１５】さらに本発明は、前記化合物からなるＤＮ
Ａ転写調節剤に関する。
Ａ転写調節剤に関する。
【００１６】また本発明は、前記化合物からなる医薬化
合物に関する。
合物に関する。
【００１７】本発明は、前記化合物からなる抗癌剤に関
する。
する。
【００１８】また、本発明は、前記化合物をインビトロ
にて培養細胞に接触させることにより、該化合物を細胞
の核内に導入する方法に関する。
にて培養細胞に接触させることにより、該化合物を細胞
の核内に導入する方法に関する。
【００１９】本発明は、前記化合物を培養細胞に導入
し、該化合物中のペプチド核酸を標的配列にハイブリダ
イズさせ、該標的配列がコードするまたは該標的配列が
転写調節する遺伝子の発現を抑制することからなる遺伝
子の機能解析方法に関する。
し、該化合物中のペプチド核酸を標的配列にハイブリダ
イズさせ、該標的配列がコードするまたは該標的配列が
転写調節する遺伝子の発現を抑制することからなる遺伝
子の機能解析方法に関する。
【００２０】本発明は、プラスミドベクターＤＮＡの配
列とハイブリダイズする前記化合物を、該プラスミドベ
クターＤＮＡと反応させたのち培養細胞に添加すること
からなる、外来遺伝子を細胞内に導入する方法に関す
る。
列とハイブリダイズする前記化合物を、該プラスミドベ
クターＤＮＡと反応させたのち培養細胞に添加すること
からなる、外来遺伝子を細胞内に導入する方法に関す
る。
【００２１】
【発明の実施の形態】本発明のＰＮＡ、および配列番号
１に記載した核移行シグナルのＮ末端および／またはＣ
末端にリジン残基および／またはアルギニン残基が２〜
７個結合したペプチド配列からなるオリゴペプチドから
なる化合物（以下、ペプチドＰＮＡという）を、以下詳
細に説明する。
１に記載した核移行シグナルのＮ末端および／またはＣ
末端にリジン残基および／またはアルギニン残基が２〜
７個結合したペプチド配列からなるオリゴペプチドから
なる化合物（以下、ペプチドＰＮＡという）を、以下詳
細に説明する。
【００２２】本発明のペプチドＰＮＡは、この構成によ
り容易にＰＮＡを核内へ導入することができる。
り容易にＰＮＡを核内へ導入することができる。
【００２３】本発明のペプチドＰＮＡにおいてＰＮＡと
オリゴペプチドを連結させる方法としては、とくに限定
されることなく、二化性架橋剤を用いる方法など、周知
の方法を利用することができる。
オリゴペプチドを連結させる方法としては、とくに限定
されることなく、二化性架橋剤を用いる方法など、周知
の方法を利用することができる。
【００２４】本発明に用いられる二価性架橋剤として
は、ＰＮＡとオリゴペプチドとを連結できるものであれ
ばどのようなものを使用してもよく、それぞれ、ＰＮＡ
またはオリゴペプチドの反応させようとする部位によっ
て、それに応じた二価性架橋剤を選択することができ
る。また、得られるペプチドＰＮＡに構造的自由度を付
加し得るものが好ましい。
は、ＰＮＡとオリゴペプチドとを連結できるものであれ
ばどのようなものを使用してもよく、それぞれ、ＰＮＡ
またはオリゴペプチドの反応させようとする部位によっ
て、それに応じた二価性架橋剤を選択することができ
る。また、得られるペプチドＰＮＡに構造的自由度を付
加し得るものが好ましい。
【００２５】たとえば、ＰＮＡまたはオリゴペプチドど
ちらかのアミノ基と、それ以外のＰＮＡまたはオリゴペ
プチドに結合させたシステイン残基のスルフィド基とを
連結する場合には、式：
ちらかのアミノ基と、それ以外のＰＮＡまたはオリゴペ
プチドに結合させたシステイン残基のスルフィド基とを
連結する場合には、式：
【００２６】
【化３】
【００２７】（式中、ｎ＝３〜１１）で表わされる構造
を有するものが好ましい。ｎの数は４〜８がより好まし
く、ｎの数が３より小さくなると得られるペプチドＰＮ
Ａの構造的自由度が減少する傾向があり、１１より大き
くなると自由度は増大するが、水溶液中での溶解度が減
少する傾向がある。このような二価性架橋剤具体例とし
ては、好ましくはＮ−（４−マレイミドブチリルオキ
シ）スクシニミド（ＧＭＣＳ）、ＥＭＣＳ、Ｎ−（８−
マレイミドカプリルオキシ）スクシニミド（ＨＭＣ
Ｓ）、Ｎ−（１１−マレイミドウンデカノイルオキシ）
スクシニミド（ＫＭＵＳ）などがあげられ、ＥＭＣＳが
最も好ましい。
を有するものが好ましい。ｎの数は４〜８がより好まし
く、ｎの数が３より小さくなると得られるペプチドＰＮ
Ａの構造的自由度が減少する傾向があり、１１より大き
くなると自由度は増大するが、水溶液中での溶解度が減
少する傾向がある。このような二価性架橋剤具体例とし
ては、好ましくはＮ−（４−マレイミドブチリルオキ
シ）スクシニミド（ＧＭＣＳ）、ＥＭＣＳ、Ｎ−（８−
マレイミドカプリルオキシ）スクシニミド（ＨＭＣ
Ｓ）、Ｎ−（１１−マレイミドウンデカノイルオキシ）
スクシニミド（ＫＭＵＳ）などがあげられ、ＥＭＣＳが
最も好ましい。
【００２８】このように二価性架橋剤として構造的自由
度の高いスペーサーを有するものを使用すると、ＰＮＡ
とオリゴペプチドとの架橋が容易で、高収率で生成物を
得られるのみならず、ＰＮＡが標的配列とハイブリダイ
ズする際にも、オリゴヌクレオチド部分が該ハイブリダ
イズを妨害することなく、効率的に標的配列の発現を阻
害することができる。
度の高いスペーサーを有するものを使用すると、ＰＮＡ
とオリゴペプチドとの架橋が容易で、高収率で生成物を
得られるのみならず、ＰＮＡが標的配列とハイブリダイ
ズする際にも、オリゴヌクレオチド部分が該ハイブリダ
イズを妨害することなく、効率的に標的配列の発現を阻
害することができる。
【００２９】本発明に用いるＰＮＡは、合成可能なもの
であればどのようなものでも使用することができ、特定
ＤＮＡまたはｍＲＮＡへのハイブリダイズの特異性およ
びＤＮＡまたはｍＲＮＡへの親和性・結合性の点から塩
基数６〜２０が好ましく、７〜１４がさらに好ましい。
塩基数が６より少なくなると、目的のＤＮＡまたはｍＲ
ＮＡのみにハイブリダイズしなくなる傾向があり、２０
より多くなるとＤＮＡまたはｍＲＮＡへの結合力が弱く
なる傾向がある。
であればどのようなものでも使用することができ、特定
ＤＮＡまたはｍＲＮＡへのハイブリダイズの特異性およ
びＤＮＡまたはｍＲＮＡへの親和性・結合性の点から塩
基数６〜２０が好ましく、７〜１４がさらに好ましい。
塩基数が６より少なくなると、目的のＤＮＡまたはｍＲ
ＮＡのみにハイブリダイズしなくなる傾向があり、２０
より多くなるとＤＮＡまたはｍＲＮＡへの結合力が弱く
なる傾向がある。
【００３０】本発明のオリゴペプチドは、配列番号１に
記載した核移行シグナルＮＬＳのＮ末端および／または
Ｃ末端にリジン残基および／またはアルギニン残基が両
末端合わせて２〜７個結合したペプチド配列からなるこ
とが必要である。核移行シグナルに結合するリジン残基
およびアルギニン残基の総数としては、２〜７個が好ま
しく、２〜４個が最も好ましい。核移行シグナルに結合
するアルギニン残基およびリジン残基の総数は、２より
少ないと細胞膜透過性が減少する傾向にあり、７以上に
なるとＰＮＡの塩基ＧまたはＣと水素結合し凝集するこ
とから、ＰＮＡのアンチセンス効果を阻害する傾向があ
る。
記載した核移行シグナルＮＬＳのＮ末端および／または
Ｃ末端にリジン残基および／またはアルギニン残基が両
末端合わせて２〜７個結合したペプチド配列からなるこ
とが必要である。核移行シグナルに結合するリジン残基
およびアルギニン残基の総数としては、２〜７個が好ま
しく、２〜４個が最も好ましい。核移行シグナルに結合
するアルギニン残基およびリジン残基の総数は、２より
少ないと細胞膜透過性が減少する傾向にあり、７以上に
なるとＰＮＡの塩基ＧまたはＣと水素結合し凝集するこ
とから、ＰＮＡのアンチセンス効果を阻害する傾向があ
る。
【００３１】このようなオリゴヌクレオチドとしては、
具体的には、２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒ（配列番号２）、ＲＲ
ＲＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号３：以下、３Ｒ−ＮＬＳと
いう）またはＰＫＫＫＲＫＶＲＲＲ（配列表４：以下、
ＮＬＳ−３Ｒという）があげられ、細胞膜透過性と、Ｐ
ＮＡとの相互作用の点から２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒが最も好
ましい。
具体的には、２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒ（配列番号２）、ＲＲ
ＲＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号３：以下、３Ｒ−ＮＬＳと
いう）またはＰＫＫＫＲＫＶＲＲＲ（配列表４：以下、
ＮＬＳ−３Ｒという）があげられ、細胞膜透過性と、Ｐ
ＮＡとの相互作用の点から２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒが最も好
ましい。
【００３２】本発明のペプチドＰＮＡは、ＰＮＡのＮ末
端とオリゴペプチドのＣ末端を連結する場合、（Ａ）Ｐ
ＮＡを合成し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を連結
させる工程、（Ｂ）末端にシステイン残基を導入したオ
リゴペプチドを合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）で得
られたＰＮＡに連結した二価性架橋剤と（Ｂ）で得られ
たオリゴペプチドのシステイン残基とを連結させる工程
から製造することができる。また、オリゴペプチドのＮ
末端とＰＮＡのＣ末端を連結する場合は、（Ａ）オリゴ
ペプチドを合成し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を
連結させる工程、（Ｂ）末端にシステイン残基を導入し
たＰＮＡを合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）で得られ
たオリゴペプチドに連結した二価性架橋剤と（Ｂ）で得
られたＰＮＡ二結合したシステイン残基とを連結させる
工程から製造することができる。
端とオリゴペプチドのＣ末端を連結する場合、（Ａ）Ｐ
ＮＡを合成し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を連結
させる工程、（Ｂ）末端にシステイン残基を導入したオ
リゴペプチドを合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）で得
られたＰＮＡに連結した二価性架橋剤と（Ｂ）で得られ
たオリゴペプチドのシステイン残基とを連結させる工程
から製造することができる。また、オリゴペプチドのＮ
末端とＰＮＡのＣ末端を連結する場合は、（Ａ）オリゴ
ペプチドを合成し、脱保護したＮ末端に二価性架橋剤を
連結させる工程、（Ｂ）末端にシステイン残基を導入し
たＰＮＡを合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）で得られ
たオリゴペプチドに連結した二価性架橋剤と（Ｂ）で得
られたＰＮＡ二結合したシステイン残基とを連結させる
工程から製造することができる。
【００３３】たとえば、本発明のペプチドＰＮＡは、固
相合成して樹脂に結合した状態のＮ末端にアミノ基を有
するＰＮＡに対し、溶媒中に溶解した二価性架橋剤を約
１．５当量添加し室温にて約３時間撹拌し、これを前記
溶媒にて数回洗浄し、未反応の二価性架橋剤を除去し、
溶媒中に溶解したＳＨ基を有するペプチドを約１．５当
量添加し、室温にて約５時間撹拌し、得られた生成物を
溶媒で数回洗浄し、未反応のペプチドを除去し、常法に
より側鎖の脱保護を行ない、さらに樹脂から切り出し、
得られた生成物をエーテルで沈殿させＨＰＬＣで精製す
ることから製造できる。
相合成して樹脂に結合した状態のＮ末端にアミノ基を有
するＰＮＡに対し、溶媒中に溶解した二価性架橋剤を約
１．５当量添加し室温にて約３時間撹拌し、これを前記
溶媒にて数回洗浄し、未反応の二価性架橋剤を除去し、
溶媒中に溶解したＳＨ基を有するペプチドを約１．５当
量添加し、室温にて約５時間撹拌し、得られた生成物を
溶媒で数回洗浄し、未反応のペプチドを除去し、常法に
より側鎖の脱保護を行ない、さらに樹脂から切り出し、
得られた生成物をエーテルで沈殿させＨＰＬＣで精製す
ることから製造できる。
【００３４】本発明のペプチドＰＮＡは、核に導入され
ると、核内の標的配列とハイブリダイズすることによ
り、ＤＮＡの転写調節をしたり、ｍＲＮＡの翻訳を阻害
したり、リボザイムの活性を阻害したりすることができ
る。
ると、核内の標的配列とハイブリダイズすることによ
り、ＤＮＡの転写調節をしたり、ｍＲＮＡの翻訳を阻害
したり、リボザイムの活性を阻害したりすることができ
る。
【００３５】本発明における「ＤＮＡの転写調節」と
は、ＤＮＡの転写の促進または抑制を意味し、ＤＮＡの
転写領域にハイブリダイズして転写を抑制することのみ
ならず、ＤＮＡの転写調節領域にハイブリダイズして転
写調節因子の機能を阻害することにより転写を促進また
は抑制することをも意味する。
は、ＤＮＡの転写の促進または抑制を意味し、ＤＮＡの
転写領域にハイブリダイズして転写を抑制することのみ
ならず、ＤＮＡの転写調節領域にハイブリダイズして転
写調節因子の機能を阻害することにより転写を促進また
は抑制することをも意味する。
【００３６】したがって、本発明のペプチドＰＮＡは、
用いるＰＮＡを適宜選択することによって、遺伝子変異
に起因して起こる疾患、または遺伝子もしくはタンパク
質が異常に高発現して起こる疾患など様々な疾患の治療
剤となり得る。具体的には、癌、アルツハイマー病、心
肥大、高血圧症、動脈硬化症などがあげられる。
用いるＰＮＡを適宜選択することによって、遺伝子変異
に起因して起こる疾患、または遺伝子もしくはタンパク
質が異常に高発現して起こる疾患など様々な疾患の治療
剤となり得る。具体的には、癌、アルツハイマー病、心
肥大、高血圧症、動脈硬化症などがあげられる。
【００３７】本発明のＤＮＡ転写阻害剤および抗癌剤の
投与経路としては、患部への直接投与、経口投与、経静
脈的投与、直腸投与などが考えられる。患者への負担、
副作用の点から、患部への直接投与、経口投与がより好
ましい。
投与経路としては、患部への直接投与、経口投与、経静
脈的投与、直腸投与などが考えられる。患者への負担、
副作用の点から、患部への直接投与、経口投与がより好
ましい。
【００３８】本発明のＤＮＡ転写阻害剤および抗癌剤の
剤形は投与方法によって適宜設定することができる。具
体的には、水溶液、乳剤、懸濁液などの液剤、軟膏剤、
錠剤、カプセル剤などがあげられる。患部への直接投与
の場合、液剤または軟膏剤が好ましく、経口投与の場
合、錠剤またはカプセル剤が好ましい。
剤形は投与方法によって適宜設定することができる。具
体的には、水溶液、乳剤、懸濁液などの液剤、軟膏剤、
錠剤、カプセル剤などがあげられる。患部への直接投与
の場合、液剤または軟膏剤が好ましく、経口投与の場
合、錠剤またはカプセル剤が好ましい。
【００３９】投与量は、投与方法、適用する患者の年
齢、体重、病状などによって適宜設定することができる
が、ペプチドＰＮＡに換算して１日に０．１〜２００ｍ
ｇ／ｋｇが好ましい。投与量が０．１ｍｇ／ｋｇより少
ないとペプチドＰＮＡとしての効果が半減する傾向があ
る。投与量の下限は０．１ｍｇ／ｋｇであるが１ｍｇ／
ｋｇがより好ましい。投与量の上限は２００ｍｇ／ｋｇ
であるが５０ｍｇ／ｋｇがより好ましい。投与は単回ま
たは複数回のどちらで行なっても良い。
齢、体重、病状などによって適宜設定することができる
が、ペプチドＰＮＡに換算して１日に０．１〜２００ｍ
ｇ／ｋｇが好ましい。投与量が０．１ｍｇ／ｋｇより少
ないとペプチドＰＮＡとしての効果が半減する傾向があ
る。投与量の下限は０．１ｍｇ／ｋｇであるが１ｍｇ／
ｋｇがより好ましい。投与量の上限は２００ｍｇ／ｋｇ
であるが５０ｍｇ／ｋｇがより好ましい。投与は単回ま
たは複数回のどちらで行なっても良い。
【００４０】本発明の医薬化合物の製剤化には、その剤
形に合わせて通常当業者により使用される様々な添加物
を使用することができる。たとえば、酸化防止剤、ｐＨ
調整剤、防腐剤などがあげられる。
形に合わせて通常当業者により使用される様々な添加物
を使用することができる。たとえば、酸化防止剤、ｐＨ
調整剤、防腐剤などがあげられる。
【００４１】また、本発明のペプチドＰＮＡは、培養細
胞に適用し所望のＰＮＡを細胞核内に効率的に導入する
こともできる。
胞に適用し所望のＰＮＡを細胞核内に効率的に導入する
こともできる。
【００４２】さらに、培養細胞において、標的配列のア
ンチセンスＰＮＡからなるペプチドＰＮＡを導入し、標
的配列にハイブリダイズさせ、その標的配列がコードす
るまたは転写調節する遺伝子の発現を促進または抑制す
ることにより、その遺伝子の機能を解析することができ
る。
ンチセンスＰＮＡからなるペプチドＰＮＡを導入し、標
的配列にハイブリダイズさせ、その標的配列がコードす
るまたは転写調節する遺伝子の発現を促進または抑制す
ることにより、その遺伝子の機能を解析することができ
る。
【００４３】本発明のペプチドＰＮＡは、プラスミドベ
クターＤＮＡの配列とハイブリダイズするＰＮＡを用い
ることによって、該プラスミドベクターＤＮＡとハイブ
リダイズさせたのち培養細胞に添加することにより、外
来遺伝子を細胞内に導入することができる。
クターＤＮＡの配列とハイブリダイズするＰＮＡを用い
ることによって、該プラスミドベクターＤＮＡとハイブ
リダイズさせたのち培養細胞に添加することにより、外
来遺伝子を細胞内に導入することができる。
【００４４】培養細胞に適用する場合、本発明のペプチ
ドＰＮＡの添加量としては、細胞濃度５×１０4cells／
ｍｌの培養液に０．０１〜５００ｎｍｏｌ／ｍｌが好ま
しく、０．１〜１００ｎｍｏｌ／ｍｌがより好ましい。
添加量が０．０１ｎｍｏｌ／ｍｌより少ないと、ＰＮＡ
の効果が半減する傾向があり、５００ｎｍｏｌ／ｍｌよ
り多いと細胞毒性を示す傾向がある。
ドＰＮＡの添加量としては、細胞濃度５×１０4cells／
ｍｌの培養液に０．０１〜５００ｎｍｏｌ／ｍｌが好ま
しく、０．１〜１００ｎｍｏｌ／ｍｌがより好ましい。
添加量が０．０１ｎｍｏｌ／ｍｌより少ないと、ＰＮＡ
の効果が半減する傾向があり、５００ｎｍｏｌ／ｍｌよ
り多いと細胞毒性を示す傾向がある。
【００４５】
【実施例】ここで、本発明を実施例にもとづいて、詳細
に説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定される
ものではない。
に説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定される
ものではない。
【００４６】以下の実施例中、固相合成用装置、ＰＮＡ
およびオリゴペプチド合成用モノマーおよび樹脂はアッ
プライド・バイオシステム社製を、ＥＭＣＳは同人堂製
を使用した。
およびオリゴペプチド合成用モノマーおよび樹脂はアッ
プライド・バイオシステム社製を、ＥＭＣＳは同人堂製
を使用した。
【００４７】実施例１
転写因子の１つであるヒトｐ５３遺伝子のアミノ酸６番
〜１０番に相当するアンチセンス鎖と同様の核酸配列
（５′−ＧＡＣ ＧＣＴ ＡＧＧ ＡＴＣ ＴＧＡ−
３′（配列番号５））を有するＰＮＡは、固相ペプチド
合成法であるＢｏｃ法により、通常の方法で末端まで合
成したのち、脱保護し、末端にフリーのアミノ基を露出
させた。得られたＰＮＡ７．５μｍｏｌに二価性架橋剤
ＥＭＣＳ（Ｎ−（６−マレイミドカプロイルオキシ）ス
クシニイミド）１２μｍｏｌを添加し、３時間撹拌し、
アミノ基とＥＭＣＳを連結した。さらに、ジクロロメタ
ン／ジメチルホルムアミド（１：１）溶液１ｍｌで洗浄
し、未反応のＥＭＣＳを除去した。洗浄を２回繰り返し
たのち、Ｃ末端にシステイン残基を導入したオリゴペプ
チド２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒ（配列番号２）（ペプチド研究
所製）１２μｍｏｌを添加し、１０時間撹拌した。得ら
れたペプチドＰＮＡの側鎖を定法により脱保護し、樹脂
より切り出した。これをエタノール沈澱により粗精製し
たのち、ＨＰＬＣで精製した（収率２５％）。すべての
操作は、室温で、ジクロロメタン／ジメチルホルムアミ
ド（１：１）溶液中で行なった。
〜１０番に相当するアンチセンス鎖と同様の核酸配列
（５′−ＧＡＣ ＧＣＴ ＡＧＧ ＡＴＣ ＴＧＡ−
３′（配列番号５））を有するＰＮＡは、固相ペプチド
合成法であるＢｏｃ法により、通常の方法で末端まで合
成したのち、脱保護し、末端にフリーのアミノ基を露出
させた。得られたＰＮＡ７．５μｍｏｌに二価性架橋剤
ＥＭＣＳ（Ｎ−（６−マレイミドカプロイルオキシ）ス
クシニイミド）１２μｍｏｌを添加し、３時間撹拌し、
アミノ基とＥＭＣＳを連結した。さらに、ジクロロメタ
ン／ジメチルホルムアミド（１：１）溶液１ｍｌで洗浄
し、未反応のＥＭＣＳを除去した。洗浄を２回繰り返し
たのち、Ｃ末端にシステイン残基を導入したオリゴペプ
チド２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒ（配列番号２）（ペプチド研究
所製）１２μｍｏｌを添加し、１０時間撹拌した。得ら
れたペプチドＰＮＡの側鎖を定法により脱保護し、樹脂
より切り出した。これをエタノール沈澱により粗精製し
たのち、ＨＰＬＣで精製した（収率２５％）。すべての
操作は、室温で、ジクロロメタン／ジメチルホルムアミ
ド（１：１）溶液中で行なった。
【００４８】実施例２
転写因子の１つであるヒトｐ５３遺伝子のアミノ酸６番
〜１０番に相当するアンチセンス鎖と同様の核酸配列
（５′−ＧＡＣ ＧＣＴ ＡＧＧ ＡＴＣ ＴＧＡ−
３′）を有するＰＮＡを、固相ペプチド合成法であるＢ
ｏｃ法により合成した。Ｃ末端に架橋点としてのＳＨ基
を導入するために、システイン残基を１残基目に導入し
た。末端まで合成したのち、定法通りにＮ末端を脱保護
し、樹脂から切り出した。
〜１０番に相当するアンチセンス鎖と同様の核酸配列
（５′−ＧＡＣ ＧＣＴ ＡＧＧ ＡＴＣ ＴＧＡ−
３′）を有するＰＮＡを、固相ペプチド合成法であるＢ
ｏｃ法により合成した。Ｃ末端に架橋点としてのＳＨ基
を導入するために、システイン残基を１残基目に導入し
た。末端まで合成したのち、定法通りにＮ末端を脱保護
し、樹脂から切り出した。
【００４９】オリゴペプチド２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒ（配列
番号２）も固相ペプチド合成法であるＦｍｏｃ法により
末端まで合成したのち、脱保護し、末端にフリーのアミ
ド基を露出させた。得られたオリゴペプチド１２μｍｏ
ｌに二価性架橋剤ＥＭＣＳ１２μｍｏｌを添加し、３時
間撹拌し、アミド基とＥＭＣＳを連結した。さらに、ジ
クロロメタン／ジメチルホルムアミド（１：１）溶液１
ｍｌで洗浄し、未反応のＥＭＣＳを除去した。洗浄を２
回繰り返したのち、システイン結合ＰＮＡ７．５μｍｏ
ｌを添加し、１０時間撹拌した。得られたペプチドＰＮ
Ａを定法により側鎖を脱保護し、樹脂より切り出した。
これをエタノール沈澱により粗精製したのち、ＨＰＬＣ
で精製した（収率２５％）。すべての操作は、室温で、
ジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（１：１）溶液
中で行なった。
番号２）も固相ペプチド合成法であるＦｍｏｃ法により
末端まで合成したのち、脱保護し、末端にフリーのアミ
ド基を露出させた。得られたオリゴペプチド１２μｍｏ
ｌに二価性架橋剤ＥＭＣＳ１２μｍｏｌを添加し、３時
間撹拌し、アミド基とＥＭＣＳを連結した。さらに、ジ
クロロメタン／ジメチルホルムアミド（１：１）溶液１
ｍｌで洗浄し、未反応のＥＭＣＳを除去した。洗浄を２
回繰り返したのち、システイン結合ＰＮＡ７．５μｍｏ
ｌを添加し、１０時間撹拌した。得られたペプチドＰＮ
Ａを定法により側鎖を脱保護し、樹脂より切り出した。
これをエタノール沈澱により粗精製したのち、ＨＰＬＣ
で精製した（収率２５％）。すべての操作は、室温で、
ジクロロメタン／ジメチルホルムアミド（１：１）溶液
中で行なった。
【００５０】実施例３
＜ＮＯＳ−１細胞の調製＞ヒト口腔癌由来の扁平上皮癌
細胞でｐ５３遺伝子に変異が認められるＮＯＳ−１細胞
５×１０4を、ポリ−Ｄ−リシンでコーティングした直
径１０ｍｍカバーガラス上にて、７０％コンフルエント
になるまで培養した。培養は、培地としてペニシリン
（インビトロジェン株式会社製）およびストレプトマイ
シン（インビトロジェン株式会社製）を添加したＧＩＴ
培地（日本製薬株式会社製）（ペニシリンの最終濃度１
００単位／ｍｌ、ストレプトマイシンの最終濃度１００
μｇ／ｍｌ）１ｍｌを使用し、炭酸ガスインキュベータ
ー（５％ＣＯ2、３７℃）中で行なった。
細胞でｐ５３遺伝子に変異が認められるＮＯＳ−１細胞
５×１０4を、ポリ−Ｄ−リシンでコーティングした直
径１０ｍｍカバーガラス上にて、７０％コンフルエント
になるまで培養した。培養は、培地としてペニシリン
（インビトロジェン株式会社製）およびストレプトマイ
シン（インビトロジェン株式会社製）を添加したＧＩＴ
培地（日本製薬株式会社製）（ペニシリンの最終濃度１
００単位／ｍｌ、ストレプトマイシンの最終濃度１００
μｇ／ｍｌ）１ｍｌを使用し、炭酸ガスインキュベータ
ー（５％ＣＯ2、３７℃）中で行なった。
【００５１】＜ペプチドＰＮＡへのＦＩＴＣの接合＞Ｎ
末端のアミノ基に架橋剤としてＥＭＣＳを用いてＦＩＴ
Ｃを接合したオリゴペプチドを用いた以外は、実施例１
と同様にしてペプチドＰＮＡを合成し、樹脂から切り出
しＦＩＴＣ接合ペプチドＰＮＡを得た。
末端のアミノ基に架橋剤としてＥＭＣＳを用いてＦＩＴ
Ｃを接合したオリゴペプチドを用いた以外は、実施例１
と同様にしてペプチドＰＮＡを合成し、樹脂から切り出
しＦＩＴＣ接合ペプチドＰＮＡを得た。
【００５２】＜細胞内への導入＞得られたＦＩＴＣ接合
ペプチドＰＮＡを培地内に最終濃度が１μＭとなるよう
添加した。３時間後、培地を完全に除去し、細胞をＰＢ
Ｓ（ｐＨ７．４）で３回洗浄後、新鮮なペニシリン・ス
トレプトマイシンを添加したＧＩＴ培地を添加し、さら
に４時間培養した。
ペプチドＰＮＡを培地内に最終濃度が１μＭとなるよう
添加した。３時間後、培地を完全に除去し、細胞をＰＢ
Ｓ（ｐＨ７．４）で３回洗浄後、新鮮なペニシリン・ス
トレプトマイシンを添加したＧＩＴ培地を添加し、さら
に４時間培養した。
【００５３】細胞を４％パラフィルムアルデヒドにて固
定後、１μｇ／ｍｌローダミンを接合したファロイジン
（Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ）０．５ｍｌと１時間インキュ
ベーションした。４回ＰＢＳで洗浄したのちスライドグ
ラスにマウントし、共焦点レーザー顕微鏡（Ｚｗｅｉｓ
ｓ社製）にて、ＦＩＴＣシグナル（緑）とローダミンシ
グナル（赤）を観察した。ファロイジンはＦ−アクチン
に特異的に結合するため、細胞骨格を判別することを可
能にする化合物である。
定後、１μｇ／ｍｌローダミンを接合したファロイジン
（Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ）０．５ｍｌと１時間インキュ
ベーションした。４回ＰＢＳで洗浄したのちスライドグ
ラスにマウントし、共焦点レーザー顕微鏡（Ｚｗｅｉｓ
ｓ社製）にて、ＦＩＴＣシグナル（緑）とローダミンシ
グナル（赤）を観察した。ファロイジンはＦ−アクチン
に特異的に結合するため、細胞骨格を判別することを可
能にする化合物である。
【００５４】図１に示すようにペプチドＰＮＡが核内に
導入、局在できることが確認できた。
導入、局在できることが確認できた。
【００５５】比較例１
オリゴペプチドとして、ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＰＫＫ
ＫＲＫＶＲＫ（配列番号６：以下、１１Ｒ−ＮＬＳ−Ｒ
−Ｋという）を用いた以外は、実施例３と同様にしてＦ
ＩＴＣ接合ペプチドＰＮＡを製造し、細胞内への導入を
観察した。
ＫＲＫＶＲＫ（配列番号６：以下、１１Ｒ−ＮＬＳ−Ｒ
−Ｋという）を用いた以外は、実施例３と同様にしてＦ
ＩＴＣ接合ペプチドＰＮＡを製造し、細胞内への導入を
観察した。
【００５６】１１Ｒ−ＮＬＳ−Ｒ−Ｋを用いたペプチド
ＰＮＡは、細胞内に導入されているが（緑のシグナ
ル）、核の中に移行せず、細胞質に留まっている（図２
（ｂ））。一方、実施例３の２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒを用い
たペプチドＰＮＡは、核内に移行している（緑のシグナ
ル）（図２（ａ））。
ＰＮＡは、細胞内に導入されているが（緑のシグナ
ル）、核の中に移行せず、細胞質に留まっている（図２
（ｂ））。一方、実施例３の２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒを用い
たペプチドＰＮＡは、核内に移行している（緑のシグナ
ル）（図２（ａ））。
【００５７】
【発明の効果】本発明によるペプチドＰＮＡは、ＰＮＡ
を効率よく核内に導入することを可能とする。本発明に
よれば、低濃度のＰＮＡでも充分に核内に移行され効果
を発揮することができるため、高濃度のＰＮＡによる細
胞毒性および生体に対する毒性などの副作用を受けるこ
となく使用できる。
を効率よく核内に導入することを可能とする。本発明に
よれば、低濃度のＰＮＡでも充分に核内に移行され効果
を発揮することができるため、高濃度のＰＮＡによる細
胞毒性および生体に対する毒性などの副作用を受けるこ
となく使用できる。
【００５８】
配列番号２：２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒのアミノ酸配列
配列番号３：３Ｒ−ＮＬＳのアミノ酸配列
配列番号４：ＮＬＳ−３Ｒのアミノ酸配列
配列番号６：１１Ｒ−ＮＬＳ−Ｒ−Ｋのアミノ酸配列
【００５９】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> Tomizawa, Kazuhito
Matsui, Hideki
Sugimoto, Naoki
<120> Compound comprising peptide nucleic acid and
oligopeputide, and preparing process and use thereof
<130> JP-13287
<160> 6
<210> 1
<211> 7
<212> PRT
<213> simian virus
<400> 1
Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val
1 5
<210> 2
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: amino acid sequence of 2R-NLS-
2R
<400> 2
Arg Arg Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Arg Arg
1 5 10
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: amino acid sequence of R3-NLS
<400> 3
Arg Arg Arg Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val
1 5 10
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: amino acid sequence of NLS-R3
<400> 4
Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Arg Arg Arg
1 5 10
<210> 5
<211> 15
<212> DNA
<213> human
<400> 5
gacgctagga tctga 15
<210> 6
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: amino acid sequence of 11R-NLS
-R-K
<400> 6
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Lys Lys Lys Arg
1 5 10 15
Lys Val Arg Lys
20
【図１】オリゴペプチドとして、２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒ
（配列番号２）を用いた場合の、細胞および核内へのペ
プチドＰＮＡの導入を示す蛍光顕微鏡写真のデータであ
る。（ａ）は、ローダミンによるＦ−アクチンを示し、
（ｂ）はＦＩＴＣによるペプチドを示し、（ｃ）は
（ａ）および（ｂ）を重ね合わせデータである。
（配列番号２）を用いた場合の、細胞および核内へのペ
プチドＰＮＡの導入を示す蛍光顕微鏡写真のデータであ
る。（ａ）は、ローダミンによるＦ−アクチンを示し、
（ｂ）はＦＩＴＣによるペプチドを示し、（ｃ）は
（ａ）および（ｂ）を重ね合わせデータである。
【図２】オリゴペプチドとして、２Ｒ−ＮＬＳ−２Ｒ
（配列番号２）を用いたペプチドＰＮＡ（ａ）と、オリ
ゴペプチドとして１１Ｒ−ＮＬＳ−Ｒ−Ｋ（配列番号
６）を用いたペプチドＰＮＡ（ｂ）の細胞内への導入を
示す蛍光顕微鏡写真のデータである。
（配列番号２）を用いたペプチドＰＮＡ（ａ）と、オリ
ゴペプチドとして１１Ｒ−ＮＬＳ−Ｒ−Ｋ（配列番号
６）を用いたペプチドＰＮＡ（ｂ）の細胞内への導入を
示す蛍光顕微鏡写真のデータである。
１ 細胞骨格
２ 核
３ 細胞質
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 富澤 一仁
岡山市東古松一丁目14−７−604
(72)発明者 松井 秀樹
岡山市東畦139−11−501
(72)発明者 杉本 直己
神戸市東灘区魚崎北町４−14−18−108
Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA80 CA01 GA11 GA30
HA11
4B063 QA08 QA19 QA20 QQ42 QQ79
QR77 QS24 QS40 QX01
4C084 AA01 AA02 AA06 BA01 BA08
BA17 BA23 CA17 DA27 NA03
ZB26
4H045 AA10 BA54 EA20 EA65 FA33
FA61 FA83
Claims (12)
- 【請求項１】 ペプチド核酸、および配列番号１に記載
した核移行シグナルのＮ末端および／またはＣ末端にリ
ジン残基および／またはアルギニン残基が両端合わせて
２〜７個結合したペプチド配列からなるオリゴペプチド
からなる化合物。 - 【請求項２】 前記ペプチド核酸とオリゴペプチドと
が、二価性架橋剤によって架橋されている請求項１記載
の化合物。 - 【請求項３】 前記二価性架橋剤が、式： 【化１】 （式中、ｎ＝３〜１１）で表わされる化合物である請求
項２記載の化合物。 - 【請求項４】 前記オリゴペプチドがＲＲＰＫＫＫＲＫ
ＶＲＲ（配列番号２）である請求項１記載の化合物。 - 【請求項５】 （Ａ）ペプチド核酸を合成し、脱保護し
たＮ末端に二価性架橋剤を連結させる工程、（Ｂ）Ｃま
たはＮ末端にシステイン残基を導入したオリゴペプチド
を合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）ペプチド核酸に連
結した二価性架橋剤と（Ｂ）オリゴペプチドのシステイ
ン残基とを連結させる工程からなる請求項２記載の化合
物の製造方法。 - 【請求項６】 （Ａ）オリゴペプチドを合成し、脱保護
したＮ末端に二価性架橋剤を連結させる工程、（Ｂ）Ｃ
またはＮ末端にシステイン残基を導入したペプチド核酸
を合成する工程、および（Ｃ）（Ａ）オリゴペプチドに
連結した二価性架橋剤と（Ａ）ペプチド核酸のシステイ
ン残基とを連結させる工程からなる請求項１記載の化合
物の製造方法。 - 【請求項７】 請求項１、２、３または４記載の化合物
からなるＤＮＡ転写調節剤。 - 【請求項８】 請求項１、２、３または４記載の化合物
からなる医薬化合物。 - 【請求項９】 請求項１、２、３または４記載の化合物
からなる抗癌剤。 - 【請求項１０】 請求項１、２、３または４記載の化合
物を、インビトロにて培養細胞に接触させることによ
り、該化合物を細胞の核内に導入する方法。 - 【請求項１１】 請求項１、２、３または４記載の化合
物を培養細胞に導入し、該化合物中のペプチド核酸を標
的配列にハイブリダイズさせ、該標的配列がコードする
または該標的配列が転写調節する遺伝子の発現を抑制す
ることからなる遺伝子の機能解析方法。 - 【請求項１２】 プラスミドベクターＤＮＡの配列とハ
イブリダイズする請求項１、２、３または４記載の化合
物を、該プラスミドベクターＤＮＡとハイブリダイズさ
せたのち培養細胞に添加することからなる、外来遺伝子
を細胞内に導入する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002100475A JP3806059B2 (ja) | 2002-04-02 | 2002-04-02 | ペプチド核酸およびオリゴペプチドからなる化合物、その製造法ならびにその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002100475A JP3806059B2 (ja) | 2002-04-02 | 2002-04-02 | ペプチド核酸およびオリゴペプチドからなる化合物、その製造法ならびにその用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003289871A true JP2003289871A (ja) | 2003-10-14 |
| JP3806059B2 JP3806059B2 (ja) | 2006-08-09 |
Family
ID=29241390
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002100475A Expired - Fee Related JP3806059B2 (ja) | 2002-04-02 | 2002-04-02 | ペプチド核酸およびオリゴペプチドからなる化合物、その製造法ならびにその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3806059B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10765761B2 (en) | 2016-11-22 | 2020-09-08 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Nucleic acid condensing peptide, nucleic acid condensing peptide set, nucleic acid delivery carrier, nucleic acid delivery method, cell production method, cell detection method and kit |
-
2002
- 2002-04-02 JP JP2002100475A patent/JP3806059B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10765761B2 (en) | 2016-11-22 | 2020-09-08 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Nucleic acid condensing peptide, nucleic acid condensing peptide set, nucleic acid delivery carrier, nucleic acid delivery method, cell production method, cell detection method and kit |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3806059B2 (ja) | 2006-08-09 |
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