JP2003504417A - 活性物質の細胞特異的、区画特異的、または膜特異的輸送媒介用コンジュゲート - Google Patents

活性物質の細胞特異的、区画特異的、または膜特異的輸送媒介用コンジュゲート

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JP2003504417A
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ドイチェス クレブスフォルシュンクスツェントルム スチフトゥング デス エッフェントリヒェン レヒツ
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、活性物質の細胞特異的、区画特異的または膜特異的輸送媒介用コンジュゲートに関する。また、本発明は、該コンジュゲートの製造方法およびその使用に関する。前記コンジュゲートは、細胞膜用輸送メディエーター、細胞特異的、区画特異的または膜特異的なアドレスタンパク質またはペプチド、および輸送対象の活性物質を含有する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、活性物質の細胞特異的、区画特異的、または膜特異的輸送媒介用コ
ンジュゲートに関する。本発明は、該コンジュゲートの製造方法およびその使用
にも関する。
【０００２】 公知のように、細胞膜系は、外部から細胞内へ導入されるべき多くの物質（例
えば、核酸、タンパク質、化学物質）に対して広く不透過性である。核酸の導入
については、物理的手段（真核生物の場合はトランスフェクション、原核生物の
場合は形質転換）や生物学的手段（感染）により細胞膜を透過させることができ
る。形質転換、即ち細胞によるむきだしの核酸の直接的な取り込みの場合、細胞
は予め処理される。種々の方法が、これらの「コンピテント細胞」を作製するの
に利用できる。大部分の方法は、マンデル（Mandel) とヒガ(Higa)によりなされ
た観察に基づいており（Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ５３，１５９−１６３頁
（１９７０））、彼らは、ラムダＤＮＡが塩化カルシウムの存在下で細菌により
取り込まれる際に生じる収量を実質的に増加することができることを示した最初
の人々である。この方法はプラスミドＤＮＡに関してコーエン（Cohen)らにより
初めてうまく使用され（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．
Ｓ．Ａ． ６９、２２１０−２１１４頁（１９７２））、多くの改変法によって
改良されている。他の形質転換法は、高周波の交流場が細胞膜を破壊することが
できるという観察（エレクトロポレーション）に基づいている。この技術はむき
だしのＤＮＡを、原核細胞系だけでなく、真核細胞系にも挿入するのに利用する
ことができる（ウィーバー(Weaver)ら、Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ． ５
１、４２６−４３５頁（１９９３））。ＤＮＡを真核細胞に導入する２つの非常
に穏やかな方法が、シクス（Sikes)ら（Ｈｕｍ． Ｇｅｎ． Ｔｈｅｒａｐ．
５、８３７−８４０頁（１９９４））とヤング(Yang)ら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ
． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ． ８７、９５６８−９５７２頁（１９９
０））により開発された。これらは、ＤＮＡの単細胞への直接注入（マイクロイ
ンジェクション）および表面に対応する核酸が結合されているタングステンのマ
イクロプロジェクタイルを用いる細胞群の打ち込み（遺伝子銃）にそれぞれ基づ
いている。細胞の物理的な形質転換と並行して普及しつつある、生物学的な感染
法がそれらの有効性を証明している。これらは、特に細胞への核酸のウイルス性
導入（チャタージー(Chatterjee)ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８、１４８５−１４
８６頁（１９９２）、コセット（Cossett)とルセル(Rusell)、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅ
ｒａｐｙ ３、９４６−９５６頁（１９９６）、ビルバオ(Bilbao)ら、ＦＡＳＥ
Ｂ Ｊ． １１、６２４−６３４頁（１９９７））およびリポソーム媒介リポフ
ェクション（ベネット(Bennett) ら、Ｊ． Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ５
、１４９−１６２頁（１９９７））を包含している。リポソーム輸送の標準法（
ガオ(Gao) とホワン(Huang) 、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２、７１０−７２２
頁（１９９５）、アフタール(Akhtar)ら、Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄ． Ｒｅｓ．
１９、５５５１−５５５９頁（１９９１））およびそれらの細胞への輸送を可能
にするため、活性物質のポリ−Ｌ−リジン形成（レオネッティ(Leonetti)ら、Ｂ
ｉｏｃｏｎｊ． Ｃｈｅｍ． １（２）、１４９頁（１９９０））についても著
されている。
【０００３】 上記に挙げた複数の細胞膜系透過法にもかかわらず、種々の活性物質を細胞内
へ導入するのに役立つ普遍的な方法はない。上記物理的および生物学的な方法は
、細胞内在的な機構を使用しないかぎり、すべて人工的かつ非生理的なものであ
る。まだ現在でも、輸送媒介物として用いられるウイルスに毒性がないことは確
かめられていない。それらは効力がないことが多く、さらに免疫系によって看破
される。
【０００４】 従って、本発明の目的は、細胞や区画へ活性物質を部位指向的かつ特異的に導
入することができる可能性を提供することにある。以下の要求は、これに関連し
た条件に従うものでなければならない： −普遍的な適用 −細胞特異的、区画特異的かつ膜特異的な導入挙動 −高度な有効性 −低い免疫原性 −感染リスクの最小化 −十分に長い持続期間
【０００５】 この目的は、特許請求の範囲に規定される主題により達成される。
【０００６】 本発明者らは、以下の成分： −細胞膜用輸送メディエーター（「Ｐ」） −細胞特異的、区画特異的もしくは膜特異的なアドレスタンパク質またはペプ チド（「ＡＰ」）、および −輸送対象の活性物質（「Ｗ」） を含有してなるコンジュゲートを開発した。
【０００７】 本発明のコンジュゲートは、以下のように構成されるのが好ましい。 Ｐ−ＡＰ−Ｗ
【０００８】 スペーサー（「ＳＰ」）を有することがより好ましい。 Ｐ−ＡＰ−ＳＰ−Ｗ
【０００９】 細胞膜用輸送メディエーター（上記の略語「Ｐ」）は、形質膜を透過すること
ができるペプチドまたはタンパク質である。このペプチドまたはタンパク質の長
さは、上記特性を有するものであれば限定されるものではない。「Ｐ」の例とし
ては、好ましくはペネトラチン（Penetratin) ファミリー由来のもの（デロシィ
(Derossi) ら、１９９８、Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． ８、８４−８
７頁）またはそのトランスポータン（Transportan)もしくはその一部（プーガ(P
ooga) ら、Ｔｈｅ Ｆａｓｅｂ Ｊｏｕｒｎａｌ（１９９８）、１２巻、６８頁
、以下参照）であり、ペネトラチンファミリーが好ましい。「Ｐ」の例は、以下
の配列を有するペネトラチンである：
【００１０】 輸送タンパク質「Ｐ」のさらなる例としては、以下のものがある： ウイルス性輸送タンパク質 ＰＴＤタンパク質形質導入ドメイン （ＴＡＴ／ＨＩＶ−１） １文字コード ３文字コード 細菌性輸送分子 ＴＰタンパク質輸送ドメイン ＴＰ（Ｅｃｏ） １文字コード ３文字コード
【００１１】 選択「Ｐ」配列は、生物学的に（天然の輸送メディエータータンパク質の精製
または真核生物発現系もしくは原核生物発現系における配列のクローニングと発
現）、好ましくは合成的に、例えば確立されているメリフィールド法（メリフィ
ールド(Merrifield)、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ８５：２１４９、
１９６３）に従って製造される。
【００１２】 アドレスタンパク質またはペプチド（上記の略語「ＡＰ」）の選択は、透過さ
れなければならない膜もしくは膜系、および細胞の標的区画（細胞質、核、ミト
コンドリア、葉緑体、小胞体）または到達すべき細胞小器官に依存する。このア
ドレスペプチドまたはタンパク質の長さは、細胞特異的、区画特異的または膜特
異的な輸送を確実にする特性を有するものであれば、限定されるものではない。
活性物質、特に核酸の導入について、細胞特異的、区画特異的または膜特異的な
認識シグナルを含有する「ＡＰ」が一般に使用され、結合した活性物質をその作
用部位に指向する。膜電位の存在下または非存在下で活性物質を輸送することが
できるものから選ぶべき「ＡＰ」がある。純粋なアドレス配列は、通常、細胞区
画内への輸送に十分である。しかしながら、細胞特異的または区画特異的なペプ
チダーゼ切断部位を有する「ＡＰ」を選ぶこともできる。最も好ましい場合、こ
の切断部位は、シグナル配列内に位置するが、標的区画に到達した後、アドレス
配列の切断を確実にするために、さらなるアミノ酸を、そこに付加することもで
きる。選択「ＡＰ」配列は、生物学的に（天然の輸送メディエータータンパク質
の精製または真核生物発現系もしくは原核生物発現系における配列のクローニン
グと発現）、好ましくは合成的に、例えば確立されているメリフィールド法（メ
リフィールド(Merrifield)、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ８５：２１
４９、１９６３）に従って作製される。アドレスタンパク質またはペプチドの例
としては、以下のものがある：
【００１３】 ＥＲ内に移行
【００１４】 ＥＲ内に再移行
【００１５】 ミトコンドリア内に移行
【００１６】 核内に移行 （＝ＳＶ４０−Ｔ抗原由来の核局在化配列）
【００１７】 ペルオキシソーム内に移行
【００１８】 細胞膜と結合
【００１９】 さらに、コンジュゲートは、任意に、好ましくはアドレスタンパク質／ペプチ
ドと輸送対象の活性物質との間に位置するスペーサー（上記の略語「ＳＰ」）を
含みうる。しかしながら、それはまた、追加的または代替的に、輸送メディエー
ターとアドレスタンパク質との間に位置しうる。スペーサーは、任意に存在する
、成分間の立体相互作用を抑制したり、積極的に影響を及ぼしたりするのに役立
つ。例えば、スペーサーは、ポリリジン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、
ポリメタクリル酸誘導体またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）から選ばれうる
。
【００２０】 レドックス切断部位、例えば、−システイン−Ｓ−Ｓ−システイン−Ｏ−Ｎ−
Ｈ−は、好ましくは輸送メディエーターとアドレスタンパク質／ペプチドとの間
に存在する。輸送メディエーターとアドレスタンパク質との間に形成される結合
は、レドックス結合（ＤＭＳＯによる中等度の細胞内在結合；Ｒｉｅｔｓｃｈお
よびＢｅｃｋｗｉｔｈ，１９９８，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｔ ３２，１６３
〜８４頁）： システイン−ＳＨ ＳＨ−システイン−−＞ シスチン−Ｓ−Ｓ−シスチン である。
【００２１】 活性物質または活性剤（上記の略語「Ｗ」）は限定されない。それは、細胞内
で生じるべき効果に応じて自由に選択しうる。活性物質は、診断剤および／また
は治療剤でありうる。コンジュゲートは、また、１種を超える活性物質を含有し
得る。また、活性物質を、任意に例えば放射活性物質、色素、ビオチン／アビジ
ンなどにより標識してもよい。活性物質は核酸、タンパク質もしくはペプチド、
化学物質などであってもよい。次のもの：ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、完全な遺伝
子、調節因子、転写因子、分子プローブ、オリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡ、ｍＴ
ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、プラスミド、
ウイルスＤＮＡ、合成ヌクレオチド、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、単独のアミノ酸
およびその誘導体、ペプチド、タンパク質、モノクローナルおよび／またはポリ
クローナル抗体、医薬用活性物質、化学療法剤、色素、感作剤（Sensibilisator
en）、粒子を例示として挙げる。
【００２２】 コンジュゲートの成分である「Ｐ」および「ＡＰ」は、メリフィールド法（Ｍ
ｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５： ２１４９，１９６
３）に従って合成的に作製される。他の構成成分（例えば、スペーサーおよび／
または活性物質）との結合は、共有的化学結合により形成される。レドックス切
断部位を、上述のレドックス結合により「Ｐ」と「ＡＰ」との間に化学的に挿入
する。また、任意に存在するスペーサーと活性物質またはアドレスタンパク質と
活性物質との間にも、共有結合、好ましくは酸アミド結合がある。可能な代替例
は、コンジュゲート形成の対象である物質内に存在する１つまたは複数の官能基
に応じた、エーテル結合またはエステル結合である。
【００２３】 コンジュゲートは、好ましくは以下の工程で合成される。
【００２４】 １）「Ｐ」、「ＡＰ」および、場合によっては（ｇｇｆ．）、スペーサーの分
離ペプチド合成工程（例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ法により） ２）「ＡＰ」と活性物質との間、場合によっては（ｇｇｆ．）、中間でのスペ
ーサーとの共有結合工程、 ３）レドックス結合を用いる、工程２）からの生成物と「Ｐ」とのレドックス
結合工程（例えば、水／ＤＭＳＯ中） ４）精製工程（例えば、ＨＰＬＣによる）
【００２５】 本発明のコンジュゲートは、活性物質の種類および大きさとは無関係に、それ
らが活性物質を細胞内に導入し、所望の細胞区画内に輸送することができるとい
う利点を有する。したがって、ヒト医学および獣医学における診断法と治療の改
善ならびに科学的研究における適用を予期することができる。特に、調節因子を
含む完全な遺伝子が輸送可能となるため、本発明のコンジュゲートによって遺伝
子治療の急激な発展が期待できる。しかしながら、他の活性物質もすべて、本発
明のコンジュゲートによってより特異的に作用部位に輸送することができ、これ
は、望ましくない副作用の発生を低減する。２５ＭＤａまでのコンジュゲートを
細胞内部に導入しうることがわかった。さらに、アポトーシスがしばしば誘発さ
れ、これは所望の効果でありうる。本発明のコンジュゲートは、自身の細胞特異
的、区画特異的および膜特異的導入挙動による普遍的な有用性を特徴とする。
【００２６】 本発明を添付の図面により、さらに詳細に説明する。
【００２７】 本発明を以下の実施例により、さらに詳細に説明する。
【００２８】 実施例１： ペネトラチン成分とＮＬＳとポリリジンスペーサーとローダミンと を含有したコンジュゲート 前記コンジュゲートの組成に関して、図１が参照される。
【００２９】 標準Ｆｍｏｃ法（「ペプチド」、エイチ．−ディー ヤクフケ（Ｈ．−Ｄ．
Ｊａｋｕｂｋｅ），Ｃｈｅｍｉｅ ｕｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｅ Ｓｐｅｋｔｒｕ
ｍ，Ａｋａｄ．Ｖｅｒｌ．１９９６，ＩＳＢＮ ３−８２７４−００００−７）
に従い、ペネトラチン配列、ＮＬＳおよびスペーサーを、別々に合成した。Ｆｍ
ｏｃ合成の概略図を図２に示す。異なる構成成分配列を合成するために、酸不安
定リンカー（ｓａｅｕｒｅｌａｂｉｌｅｎ Ｌｉｎｋｅｒ）（＝パラ−ベンジル
−オキシベンジル−アルコール−ハンドル（ｈａｎｄｌｅ））を介して、最初に
、第１Ｆｍｏｃアミノ酸（カルビオヒェム ゲーエムベーハー（Ｃａｌｂｉｏｃ
ｈｅｍ ＧｍｂＨ），デー６５７９６ バット ゾーデン ドイツより購入可能
）を不溶性ポリスチレン担体樹脂に結合させる。２０％ピペリジン含有ジメチル
ホルムアミド液を用いて前記樹脂を処理することにより、保護基の切断を行なう
。前活性化種（Ｓｐｅｚｉｅｓ）（例えば、アミノ酸構成成分中に存在するスク
シンイミド、ペンタフルオロフェニルエステルまたはｐ−ニトロフェニルエステ
ル基）を用いてまたはイン サイチュ活性化を用いて、第２Ｆｍｏｃアミノ酸を
結合させるが、これは、塩基処理により、前記のアミノ酸から前記保護基を除去
した後、各ケースで行なわれた。続く各アミノ酸を、同様に結合させる。所望の
ペプチドを合成した後、９５％ トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）＋５％ スカベン
ジャー（例えば、トリエチルシランなど）を用いて、所望のペプチドを処理する
ことにより担体から該ペプチドを離し、保護基を分離する。得られた粗ペプチド
を、水中に０．１％トリフルオロ酢酸を含む溶出試薬（Ａ）または６０％アセト
ニトリル水溶液中に０．１％トリフルオロ酢酸（Ｂ）を含む溶出試薬を用いて、
ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ ７Ａ Ｓ−５μｍ逆相カラム（２０×２５０ｍｍ）での分
離用ＨＰＬＣにより精製する。ペプチドを、２５％Ｂ〜６０％Ｂの連続直線グラ
ジェントで、４０分間、流速１０ｍｌ／分で溶出した。精製ペプチドに対応する
画分を凍結乾燥させた。
【００３０】 精製ペプチド成分を、室温で５時間、２０％ＤＭＳＯ水溶液とともに処理し、
該成分の酸化的結合を生じる。例えば、ローダミン１１０を輸送対象の活性物質
としてスペーサーに結合させる。これは、リジンスペーサーの遊離α−アミノ基
における酸アミド結合により行なわれる。ついで、完全なコンジュゲートを逆相
ＨＰＬＣにより精製する。
【００３１】 本発明のさらなるコンジュゲートは、同様に生産された：
【００３２】 実施例２： 細胞への本発明のコンジュゲートの導入 ＡＴ−１（ラット精巣癌）細胞およびＤＵ−１４５（ヒト精巣癌、ＡＴＣＣ
ＨＴＢ−８１）細胞を、１０％ ＦＣＳと２ｍＭ グルタミンと１００Ｕ／分
ペニシリンと１００μｇ／ｍｌ ストレプトマイシンとを補ったＲＰＭＩ １６
４０で培養した。
【００３３】 蛍光相関分光法（ＦＣＳ）のために、ＡＴ−１またはＤＵ−１４５細胞を２４
時間スライド上で生育させる。色素を含まないＲＰＭＩ １６４０（フェノール
レッドなし）を用いて培地を交換し、実施例１の含ペネトラチン コンジュゲー
ト（１００ｎＭ）をＲＰＭＩを用いて細胞に設置し、３７°C 、５％ ＣＯ2 で
５、２４、または４８時間インキュベートする。その後、含コンジュゲート培地
を除去し、色素を含まないＲＰＭＩ ２００μｌで２回洗浄し、ついで、ＦＣＳ
で測定する。レーザー励起は、４８８ｎｍで生じ、発光は、５３８ｎｍで生じる
。
【００３４】 コンジュゲートは、核内への該コンジュゲートの経路について追跡される。例
えば、細胞を選択し、光学顕微鏡下で焦点をあわせる。焦点をあわせてレーザー
をセットし、細胞を通過させるために、１００μｍステップを用い、蛍光を、光
電子増倍管によりフラッシュの形態で測定する。ここで、大きい分子と小さい分
子とは異なるスピードで移動する。１００μｍあたりのエリアで拡散する分子数
を検出する。このようにして、シグナルの持続時間により、拡散した分子の大き
さを測定することができる。付随するダイアグラムを図３に示す。
【００３５】 他の実験において、同じ方法により、コンジュゲートが細胞質に到達する速度
論を決定する。再度、ＡＴ−１細胞を２４時間結合させる。コンジュゲートを含
む培地を上記のように用いた。しかしながら、この場合、直ちに、ＦＣＳにより
蛍光シグナルを測定した。
【００３６】 ＦＣＳは、５時間のインキュベーション時間の後の細胞膜における顕著な蓄積
を明らかに示した。拡散は、検出できなかった。わずかに少量のコンジュゲート
が２４時間のインキュベーション時間の後の細胞膜において見出され得た。つい
で、４８時間の観察時間内により一層強くなる核における蓄積に注意をひいた。
【００３７】 対照の目的のために、ローダミン１１０をペネトラチンまたはＮＬＳのいずれ
かに結合させただけであるコンジュゲートを用いた。前記コンジュゲートは、前
記作用の核蓄積を示さなかった。細胞浸透において全て成功した場合、コンジュ
ゲートが蓄積した核外殻の細胞膜にコンジュゲートが留まった。
【００３８】 前記と同様に、実施例１で生産されたコンジュゲートの全てが、細胞質（Ｚ）
または核（Ｎ）へのそれらの時間依存性細胞内輸送に関して調べられた。しかし
ながら、前記インキュベーション時間とは異なり、インキュベーション時間は、
１、３、６、１０および２４時間であった。結果を表１に示す。
【００３９】 実施例３： 濃度依存性輸送 本研究の目的は、輸送ペプチド Rhodamine110（Ｌ）−ペネトラチン／ＲＰＭ
Ｉ培地の濃度がどの程度、時間に関して、細胞指向性輸送および核指向性輸送に
よく影響を及ぼすかを決定することにあった。終濃度２０μＭおよび１００ｐＭ
Rhodamine110（Ｌ）−ペネトラチン／ＲＰＭＩ培地の蛍光間で比較を行なった
。この目的のために、ＤＵ−１４５細胞を、示された濃度で、１、６、１２、２
４および４８時間インキュベートした。その後、ＲＰＭＩ（ペネトラチンなし）
を用いて３回、ＰＢＳで１回、再度ＲＰＭＩで洗浄を行なった。スライドカバー
を細胞に供し、以下、ＣＬＳＭ（共焦点レーザー走査顕微鏡）により直接的に蛍
光を決定した。結果を図４に示す。かかる図から、２０μＭを超える高濃度で、
非特異的輸送が生じることがわかり、これは細胞毒性を示唆する。しかしながら
、低濃度では、細胞質への特異的輸送がある。
【００４０】 実施例４： アンチセンス構築物の導入によるＡＴ−１細胞の増殖の阻害 実施例１に記載の方法を用いて、同様に、図６のペプチドコンジュゲート構築
物を生産した。ここで、活性物質は、ある場合、NH2-TAC TGC GAC TCC GG-COOH
を有するＰＮＡ（ラットＰ２プロモーターｃ−ｍｙｃに関するアンチセンス＝Ｐ
ＮＡAS）であり、また、ヌクレオチド配列NH2-TTA AGG AGG CTC-COOH（＝ＰＮＡ NS ）を有するノンセンス（ランダム）配列であった。
【００４１】 １０％ ＦＣＳと２ｍＭ グルタミンと１００Ｕ／分 ペニシリンと１００μ
ｇ／ｍｌ ストレプトマイシンとを補ったＲＰＭＩ １６４０中においてＡＴ−
１細胞を培養した。
【００４２】 ＡＴ−１細胞を、２４時間スライド上で生育させる。色素を含まないＲＰＭＩ
１６４０（フェノールレッドなし）を用いて、培地を交換し、コンジュゲート
（１００ｎＭ）をＲＰＭＩとともに各細胞上に置き、３７°C 、５％ ＣＯ2 で
２４、４８、７２または９６時間インキュベートした。その後、含コンジュゲー
ト培地を除去し、色素を含まないＲＰＭＩ ２００μｌで２回洗浄した。ＡＴ−
１細胞の細胞数をコルターカウント法により測定する。
【００４３】 未処理ＡＴ−１細胞を対照として用いた。非連結ＰＮＡASは、他の対照を表す
。前記と同様に、これらの対照をＡＴ−１細胞とともにインキュベートした。
【００４４】 この実験の結果を図７に示す。ＡＴ−１の増殖は、アンチセンス構築物の投与
後に阻害されただけであり、すなわち、これは、アンチセンス配列が所望の作用
を示しうる核の浸透が、本発明の構築物によってのみ生じることを明示する。非
連結アンチセンス配列は、対照またはＡＴ−１配列の１つとハイブリダイズでき
ない構築物と同様に効果がない。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、本発明のコンジュゲートを示す。
【図２】 図２は、Ｆｍｏｃ合成の概略図を示す。
【図３】 図３は、ＡＴ１細胞を用いた蛍光相関分光測定の結果を示す。 Ａ）コンジュゲート濃度： ５０ｎＭ インキュベーション期間： ５時間 Ｂ）コンジュゲート濃度： ５ｎＭ インキュベーション期間： ５時間 Ｃ）コンジュゲート濃度： ５０ｎＭ インキュベーション期間： ２４時間 Ｄ）コンジュゲート濃度： ５ｎＭ インキュベーション期間： ２４時間
【図４】 図４は、Rhodamin110 （Ｌ）−ペネトラチン／ＲＰＭＩ培地の濃度依存性およ
び時間依存性輸送を示す。 ＤＵ１４５細胞：２０μＭおよび１００ｐＭ終濃度でのインキュベーション
【図５】 図５は、本発明のコンジュゲートの例を示す。
【図６】 図６は、ＰＮＡ構築物の作製を示す。
【図７】 図７は、アンチセンス構築物の導入によるＡＴ−１細胞の増殖の阻害を示す。
【図８】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ， ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，Ｋ Ｇ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ， ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，Ｓ Ｄ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ， ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ペシュケ，ペーター ドイツ連邦共和国 ベール−イッゲルハイ ム デー−67459 マクシミリアンシュト ラーセ 16 (72)発明者 フリードリヒ，エッカート ドイツ連邦共和国 ランダウ−イルベシャ イム デー−76831 アン デン ホフヴ ィーゼン ６ (72)発明者 ピプコーン，リュディガー ドイツ連邦共和国 ハイデルベルク デー −69120 アードルフ−ラウッフ−シュト ラーセ ３ (72)発明者 ヴァルデック，ヴァルデマル ドイツ連邦共和国 ラウデンバッハ デー −69514 ティルジター シュトラーセ 49 (72)発明者 デーブス，ユールゲン ドイツ連邦共和国 シュテットフェルト デー−76698 クロイツシュトラーセ 11 Ｆターム(参考） 4C076 EE59

Claims (18)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 以下の成分： −細胞膜用輸送メディエーター −細胞特異的、区画特異的または膜特異的なアドレスタンパク質またはペプチ ド、および −輸送対象の活性物質 を含有してなる、細胞特異的、区画特異的または膜特異的輸送媒介用コンジュゲ
    ート。
  2. 【請求項２】 輸送メディエーターが細胞質膜を透過することができるペプ
    チドまたはタンパク質である、請求項１記載のコンジュゲート。
  3. 【請求項３】 輸送メディエーターがペネトラチン（Penetratin) ファミリ
    ー由来のものまたはトランスポータン(Transportan) もしくはその一部または細
    菌性もしくはウイルス性輸送タンパク質である、請求項１または２記載のコンジ
    ュゲート。
  4. 【請求項４】 ペネトラチンの一つが以下の配列： を有する、請求項３記載のコンジュゲート。
  5. 【請求項５】 細胞特異的、区画特異的もしくは膜特異的なアドレスタンパ
    ク質またはペプチドが 小胞体内への移行について 小胞体内への再移行について ミトコンドリア内への移行について 核内への移行について （＝ＳＶ４０−Ｔ抗原由来の核局在化配列） ペルオキシソーム内への移行について 細胞膜への結合について からなる群より選ばれる、前記請求項いずれかに記載のコンジュゲート。
  6. 【請求項６】 核内への移行用配列が以下の配列： を有する、請求項５記載のコンジュゲート。
  7. 【請求項７】 活性物質が、核酸、タンパク質／ペプチドおよび／または化
    学物質からなる群より選ばれる、前記請求項いずれかに記載のコンジュゲート。
  8. 【請求項８】 コンジュゲートが以下の構造： 輸送メディエーター−アドレスタンパク質−活性物質 を有する、前記請求項いずれかに記載のコンジュゲート。
  9. 【請求項９】 場合によっては（ｇｇｆ．）、スペーサーも存在する、前記
    請求項いずれかに記載のコンジュゲート。
  10. 【請求項１０】 スペーサーがアドレスタンパク質と活性物質との間に局在
    されてなる、請求項９記載のコンジュゲート。
  11. 【請求項１１】 スペーサーがポリリジン、ポリエチレングリコールまたは
    ポリビニルピロリドンである、請求項９または１０記載のコンジュゲート。
  12. 【請求項１２】 １）「Ｐ」、「ＡＰ」および場合によっては（ｇｇｆ．）
    、スペーサーの分離ペプチド合成工程、 ２）「ＡＰ」と活性物質との間、場合によっては（ｇｇｆ．）、中間でのスペー
    サーとの共有結合工程、 ３）レドックス結合を用いる、工程２）からの生成物と「Ｐ」とのレドックス結
    合工程 を有する、請求項１〜１１いずれかに記載のコンジュゲートを製造する方法。
  13. 【請求項１３】 ペプチド合成が公知のメリフィールド法に従って行われる
    、請求項１２記載の方法。
  14. 【請求項１４】 レドックス結合がＤＭＳＯ水溶液中で行われる、請求項１
    ２または１３記載の方法。
  15. 【請求項１５】 さらなる精製工程が続く、請求項１２〜１４いずれかに記
    載の方法。
  16. 【請求項１６】 精製がＨＰＬＣを用いて行われる、請求項１５記載の方法
    。
  17. 【請求項１７】 所望の活性物質の細胞特異的、区画特異的または膜特異的
    な輸送のための、請求項１〜１１いずれかに記載のコンジュゲートの使用。
  18. 【請求項１８】 診断および／または治療での使用のための請求項１７記載
    の使用。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014515762A (ja) * 2011-05-05 2014-07-03 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド ペプチドオリゴヌクレオチドコンジュゲート
US9862946B2 (en) 2011-05-05 2018-01-09 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
US11236329B2 (en) 2007-06-29 2022-02-01 Sarepta Therapeutics, Inc. Compound and method for treating myotonic dystrophy

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10133307A1 (de) * 2001-07-12 2003-02-06 Deutsches Krebsforsch PNA-Konjugat zur Therapie von mit HIV in Zusammenhang stehenden Erkrankungen
US7682669B1 (en) * 2001-07-30 2010-03-23 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Methods for covalently immobilizing anti-thrombogenic material into a coating on a medical device
DE10154827A1 (de) * 2001-11-08 2003-05-28 Deutsches Krebsforsch PNA-Konjugat zur Therapie der chronischen myeloischen Leukämie (CML)
DE10154831A1 (de) * 2001-11-08 2003-06-05 Deutsches Krebsforsch PNA-Konjugat oder PNA-Konjugat-Gemisch zur Therapie von mit HPV in Zusammenhang stehenden Erkrankungen
DE10154830A1 (de) * 2001-11-08 2003-06-12 Deutsches Krebsforsch Konjugat zur BNC-Therapie von strahlenresistenten Tumoren
DE10158331A1 (de) * 2001-11-28 2003-06-12 Deutsches Krebsforsch Klammer-PNA-Konjugat zum spezifischen Transport thermisch aktivierbarer Nukleinsäuren
DE10201862A1 (de) * 2002-01-18 2003-08-07 Deutsches Krebsforsch Konjugat zur Behandlung prokaryontischer Infektionen
EP1329227A1 (en) * 2002-01-22 2003-07-23 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Diagnostic conjugate useful for intercellular imaging and for differentiating between tumor- and non-tumor cells
EP1424343A1 (en) * 2002-11-29 2004-06-02 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Peptide Conjugate useful for cell nucleus molecular imaging and tumor therapy
WO2005042560A2 (en) * 2003-10-24 2005-05-12 Wake Forest University Health Sciences Non-viral delivery of compounds to mitochondria
JP2009536821A (ja) * 2006-05-12 2009-10-22 バハラ バイオテック インターナショナル リミテッド 新規血栓溶解分子及びその製造法
JP6189829B2 (ja) 2011-05-13 2017-08-30 ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ・アズ・リプリゼンティド・バイ・ザ・セクレタリー・フォー・ザ・デパートメント・オブ・ヘルス・アンド・ヒューマン・サービシズ Ｚｓｃａｎ４とｚｓｃａｎ４依存性遺伝子を利用した体細胞の直接的な再プログラム化
US9095624B2 (en) 2011-05-23 2015-08-04 Contango Partners Group, Inc. Modular transport platform for targeted delivery of therapeutic agents
SG11201507334VA (en) 2013-03-15 2015-10-29 Elixirgen Llc Methods of using zscan4 for rejuvenating human cells

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5674977A (en) * 1993-02-05 1997-10-07 The Ontario Cancer Institute Branched synthetic peptide conjugate
US5677274A (en) * 1993-02-12 1997-10-14 The Government Of The United States As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Anthrax toxin fusion proteins and related methods
US5877282A (en) * 1996-09-20 1999-03-02 Bristol-Myers Squibb Company Peptide inhibitors of nuclear protein translocation having nuclear localization sequences and methods of use thereof
WO1999045126A2 (en) * 1998-03-06 1999-09-10 Oxford Biomedica (Uk) Limited Enhanced prodrug activation
WO2000058488A2 (en) * 1999-03-31 2000-10-05 Invitrogen Corporation Delivery of functional protein sequences by translocating polypeptides
WO2000061617A2 (en) * 1999-04-12 2000-10-19 Modex Therapeutiques, S.A. Transiently immortalized cells for use in gene therapy
US6500800B1 (en) * 1996-02-12 2002-12-31 Alexander Sergeevich Sobolev Composition and method for causing photodynamic damage to target cells

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6113946A (en) * 1992-04-03 2000-09-05 The Regents Of The University Of California Self-assembling polynucleotide delivery system comprising dendrimer polycations
US5670347A (en) * 1994-05-11 1997-09-23 Amba Biosciences Llc Peptide-mediated gene transfer
FR2739621B1 (fr) * 1995-10-05 1997-12-05 Centre Nat Rech Scient Peptides utilisables comme vecteurs pour l'adressage intracellulaire de molecules actives
US5962415A (en) * 1996-09-20 1999-10-05 Bristol-Myers Squibb Co. Compositions comprising a peptide inhibitor of nuclear protein translocation and an immunosuppressant and methods of use thereof
GB9814527D0 (en) 1998-07-03 1998-09-02 Cyclacel Ltd Delivery system
FR2786397B1 (fr) * 1998-11-30 2003-01-10 Synt Em Vecteurs peptidiques de substances a travers la barriere hematoencephalique pour etre utilises dans le diagnostic ou la therapie d'une affection du snc
FR2787793B1 (fr) * 1998-12-24 2001-03-23 Inst Nat Sante Rech Med Composes pseudopeptidiques dotes d'une activite inhibitrice a l'egard des voies activees par les proteines a activite tyrosine kinase et les compositions pharmaceutiques les contenant
US6303576B1 (en) * 1999-04-21 2001-10-16 Adherex Technologies Inc. Compounds and methods for modulating β-catenin mediated gene expression

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5674977A (en) * 1993-02-05 1997-10-07 The Ontario Cancer Institute Branched synthetic peptide conjugate
US5677274A (en) * 1993-02-12 1997-10-14 The Government Of The United States As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Anthrax toxin fusion proteins and related methods
US6500800B1 (en) * 1996-02-12 2002-12-31 Alexander Sergeevich Sobolev Composition and method for causing photodynamic damage to target cells
US5877282A (en) * 1996-09-20 1999-03-02 Bristol-Myers Squibb Company Peptide inhibitors of nuclear protein translocation having nuclear localization sequences and methods of use thereof
WO1999045126A2 (en) * 1998-03-06 1999-09-10 Oxford Biomedica (Uk) Limited Enhanced prodrug activation
WO2000058488A2 (en) * 1999-03-31 2000-10-05 Invitrogen Corporation Delivery of functional protein sequences by translocating polypeptides
WO2000061617A2 (en) * 1999-04-12 2000-10-19 Modex Therapeutiques, S.A. Transiently immortalized cells for use in gene therapy

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11236329B2 (en) 2007-06-29 2022-02-01 Sarepta Therapeutics, Inc. Compound and method for treating myotonic dystrophy
JP2014515762A (ja) * 2011-05-05 2014-07-03 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド ペプチドオリゴヌクレオチドコンジュゲート
US9862946B2 (en) 2011-05-05 2018-01-09 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
US10487326B2 (en) 2011-05-05 2019-11-26 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
US11225662B2 (en) 2011-05-05 2022-01-18 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
US11732259B2 (en) 2011-05-05 2023-08-22 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates

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