RU2001104893A

RU2001104893A - Гибридное антитело IgG человека/грызуна против CD3 и способы его конструирования

Info

Publication number: RU2001104893A
Application number: RU2001104893/13A
Authority: RU
Inventors: Герман ВОЛДМАНН; Марк ФРЕВИН
Original assignee: Би Ти Джи Интернэшнл Лимитед
Priority date: 1998-07-21
Filing date: 1999-07-21
Publication date: 2003-07-20

Claims

1. Антитело IgG с аффинностью связывания в отношении антигенного комплекса CD3, где тяжелая цепь содержит каркас вариабельной области вместе, по меньшей мере, с одним CDR, выбранным среди аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 2, 4 и 6 и их соответствующих консервативно модифицированных вариантов, и легкая цепь содержит каркас вариабельной области вместе, по меньшей мере, с одним CDR, выбранным среди аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 8, 10 и 12 и их соответствующих консервативно модифицированных вариантов, отличающееся тем, что последовательность каркаса вариабельной области тяжелой цепи соответствует последовательности, типичной для человека, и каркас вариабельной области легкой цепи содержит одну или несколько аминокислот, характерных для последовательности, типичной для грызуна.

2. Антитело IgG по п.1, отличающееся тем, что вариабельная область легкой цепи включает достаточное количество аминокислот, характерных для последовательности, типичной для грызуна, для того, чтобы легкая и тяжелая цепи связаны прочнее, чем в том случае, когда вариабельная область легкой цепи полностью соответствует области, типичной для человека.

3. Антитело IgG по п.1 или 2, отличающееся тем, что вариабельная область легкой цепи включает достаточное количество аминокислот, характерных для последовательности, типичной для грызуна, для того, чтобы, когда ДНК, кодирующая антитело, экспрессируется в клетках РЕЕ12, получают выход антител, превышающий 50 мкг/мл.

4. Антитело по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что вариабельная область легкой цепи полностью соответствует последовательности крысы.

5. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что вариабельная область легкой цепи соответствует SEQ ID NO: 14 или указанной последовательности, измененной таким образом, что одна или несколько, но не все, аминокислоты из ряда Gln-1, Ala-2, Val-3, Val-4, Ala-7, Asn-8, Thr-12, Leu-14, Ser-16, Lys-19, Leu-20, Leu-39, Tyr-40, Glu-41, Ser-44, Met-48, Tyr-50, Phe-75, His-79, Asn-80, Val-81 Ala-82, Ile-83, Ile-88 и Phe-90 заменены на соответствующие аминокислоты человека, выбранные из ряда Asp-1, Phe-2, Met-3, Leu-4, Pro-7, His-8, Glu-12, Pro-14, Lys-15, Ile-19, Ile-20, Gln-39, Arg-40, Pro-41, Ala-44, Val-48, Phe-50, Ser-75, Ser-79, Gly-80, Leu-81, Gln-82, Thr-83, Asp-88 и Tyr-90.

6. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что каждая из тяжелой цепи и/или легкой цепи содержит все три свои соответствующие CDR с SEQ ID NO: 2, 4 и 6 и SEQ ID NO: 8, 10 и 12.

7. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что антитело является агликозилированным.

8. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что CDR в тяжелой цепи располагаются в последовательности в следующем порядке: каркасный участок антитела человека 1/SEQ ID NO: 2/каркасный участок антитела человека 2/SEQ ID NO: 4/каркасный участок антитела человека 3/SEQ ID NO: 6/каркасный участок антитела человека 4 в лидерном положении к направлению константного домена от N-конца к С-концу, а в легкой цепи в последовательности каркасный участок антитела грызуна 1/SEQ ID NO: 8/каркасный участок антитела грызуна 2/SEQ ID NO: 10/каркасный участок антитела грызуна 3/SEQ ID NO: 12/каркасный участок антитела грызуна 4 в лидерном положении к направлению константного домена.

9. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что каркасные участки антитела человека содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 21, 22, 23 и/или 24.

10. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что один или несколько предпочтительных CDR тяжелой цепи антитела против CD3 крысы присутствуют в каркасе вариабельного домена человека, имеющего аминокислотную последовательность, считываемую в направлении от лидерной к константной области, содержащую SEQ ID NO: 21/CDR/SEQ ID NO: 22/CDR/SEQ ID NO: 23/CDR/SEQ ID NO: 24.

11. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что константная область антитела является типичной для человека.

12. Антитело по п.11, отличающееся тем, что константная область антитела соответствует константной области, происходящей от человека.

13. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что константная область антитела содержит константную область лямбда, типичную для человека.

14. Антитело по любому из предшествующего пунктов, отличающееся тем, что вариабельная область легкой цепи грызуна связана с константной области лямбда, типичной для человека.

15. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что содержит каркасный участок вариабельного домена легкой цепи крысы с SEQ ID NO: 14.

16. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что содержит химерную легкую цепь человека/крысы и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18 константной области лямбда.

17. Агликозилированное антитело по любому из пп.1-16, где константная область тяжелой цепи относится к изотипу IgGI.

18. Агликозилированное антитело по любому из предшествующих пунктов, где аспарагиновый остаток в положении 297 тяжелой цепи константной области заменен на другой аминокислотный остаток.

19. Агликозилированное антитело по п.18, где аспарагиновый остаток заменен на остаток аланина.

20. Агликозилированное антитело по любому из предшествующих пунктов, где только одно из плеч обладает аффинностью в отношении CD3-антигена.

21. Агликозилированное антитело по п.20, являющееся моновалентным.

22. Агликозилированное антитело по п.21, где одна половина антитела состоит из полной тяжелой цепи и легкой цепи, а другая половина состоит из подобной, но укороченной тяжелой цепи, утратившей сайт связывания для легкой цепи.

23. Агликозилированное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что находится в форме фармацевтической композиции, содержащей физиологически приемлемый разбавитель или носитель.

24. Агликозилированное антитело по любому из пп.1-23 для применения в терапии.

25. Агликозилированное антитело по любому из пп.1-24, применимое для изготовления лекарственного средства для применения в иммуносупрессии или лечении злокачественных опухолей.

26. Рекомбинатная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело, по любому из предшествующих пунктов.

27. Рекомбинатная нуклеиновая кислота по п.26, отличающаяся тем, что содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 13.

28. Рекомбинатная нуклеиновая кислота по п.26 или 21, отличающаяся тем, что содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17.

29. Рекомбинатная нуклеиновая кислота по любому из пп.26-28, отличающаяся тем, что кодирует пептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 20.

30. Рекомбинатная нуклеиновая кислота по любому из пп.26-29, отличающаяся тем, что кодирует аминокислотную последовательность, считываемую в направлении от лидерной к константной области SEQ ID NO: 25/CDR/SEQ ID NO: 26/CDR/SEQ ID NO: 27/CDR/SEQ ID NO: 28.

31. Рекомбинатная нуклеиновая кислота по любому из пп.22-26, отличающаяся тем, что кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.

32. Рекомбинатная нуклеиновая кислота по любому из пп.22-27, отличающаяся тем, что представляет собой ДНК.

33. Рекомбинатная нуклеиновая кислота, отличающаяся тем, что кодирует белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18.

34. Рекомбинантная ДНК SEQ ID NO: 17.

35. Система, экспрессирующая белок, отличающаяся тем, что содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту по любому из пп.26-34.

36. Система по п.35, отличающаяся тем, что содержит вектор, включающий нуклеиновую кислоту по любому из пп.26-34.

37. Система по п.35 или 36, отличающаяся тем, что содержит отдельные конструкции рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую и легкую цепи, соответственно.

38. Система по п.37, где указанные конструкции кодируют цепи с константными областями.

39. Способ получения антитела по любому из пп.1-24, отличающийся тем, что включает культивирование прокариотической или эукариотической клетки, экспрессирующей антитело по любому из пп.1-24, отличающейся тем, что указанная клетка содержит рекомбинантный конструкт по п.37.

40. Способ лечения пациента, страдающего злокачественной опухолью или нуждающегося в иммуносупрессии, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества лиганда или антитела или его фрагмента по любому из пп.1-24.