RU96115107A - "очеловеченные" антитела и их использование - Google Patents

Claims (13)

1. "Очеловеченное" антитело или его связывающий белок, имеющие аминокислотную последовательность, включающую в себя все гипервариабельные участки (CDR) или и часть, в основном, происходящие от моноклонального антитела, которое обладает специфичностью к выбранным субпопуляциям T-клеток, экспрессирующих вариабельную область V_β5,2 или V_β5,3 бета-цепи T-клеточного рецептора антигена, в сочетании с выбранными вариабельными каркасными остатками, также происходящими от указанного моноклонального антитела, причем указанное "очеловеченное" антитело или его связывающий белок способны связываться с указанными выбранными субпопуляциями T-клеток с аффинностью связывания, по крайней мере сравнимой с аффинностью связывания, которой обладает указанное моноклональное антитело, где "очеловеченное" антитело или его связывающий белок содержат аминокислотную последовательность ТМ27 V_k:
1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQGISNYLNWYQQTPGKAPKLLIYY 50
51 TSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQYSKLPRTFGQ 100
100 GTKLQIT 107
и, кроме того, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей в себя аминокислотную последовательность TM27 VH.

1 QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGFSLTAYGVNWVRQPPGRGLEWLGM 50
51 IWGDGNTDYNSALKSRVTMLKDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARDRV 100
101 TATLYAMDYWGQGSLTVVSS 120;
последовательность TM27 VH, где аминокислотный остаток 48 заменен на изолейцин (1);
последовательность TM27 VH, где аминокислотные остатки 78 и 79 представляют собой валин (V) и фенилаланин (F);
последовательность TM27 VH, где аминокислотные остатки 67-70, имеющие последовательность VT ML, заменены на LSIS соответственно, а аминокислотный остаток 73 представляет собой аспарагин (N), и
последовательность TM27 VH, где аминокислотный остаток 92 представляет собой аргинин (R).

2. "Очеловеченное" антитело или его связывающий белок, имеющие аминокислотную последовательность, включающую в себя все гипервариабельные участки (CDR) или их часть, в основном, происходящие от моноклонального антитела, которое обладает специфичностью к выбранным субпопуляциям T-клеток, экспрессирующих вариабельную область V_β 8.1 бетацепи T-клеточного рецептора антигена, в сочетании с выбранными вариабельными каркасными остатками, также происходящими от указанного моноклонального антитела, причем указанное "очеловеченное" антитело или его связывающий белок способны связываться с указанными выбранными субпопуляциями T-клеток, с аффинностью связывания, по крайней мере сравнимой с аффинностью связывания, которой обладает указанное моноклональное антитело, где "очеловеченное" антитело или его связывающий белок содержат аминокислотную последовательность TM29 V_k:
1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVNYIYWYQQTPGKAPKLLIYYT 50
51 SNLAPGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQFTSSPFTFGQG 100
101 TKLQIT 106;
и, кроме того, содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей в себя последовательность TM29 VH:
1 EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSSSGFTFSNFGMHWVRQAPGKGLEWVAY 50
51 ISSGSSTIYYADTLKGRFTISRDNSKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARRG 100
101 EGAMDYWGQGTPVTVSS 117;
последовательность TM29 VH, где оба аминокислотных остатка 23 и 24 заменены на аланин (A);
последовательность TM29 VH, где аминокислотный остаток 75 заменен на пролин (P), и
последовательность TM29 VH, где аминокислотные остатки 92 и 93 заменены на аланин (A) и метионин (M) соответственно, а аминокислотный остаток 95 заменен на тирозин (Y).

3. "Очеловеченное" антитело по п. 1 или 2, представляющее собой изотип IgG2a.

4. "Очеловеченное" антитело по п. 3, где один или несколько остатков в константных доменах Ig были заменены в целях изменения эффективной функции указанного константного домена.

5. "Очеловеченное" антитело или его связывающая часть по п. 1 или 2, продуцируемые с помощью техники рекомбинантных ДНК.

6. Способ продуцирования "очеловеченного" антитела
или его связывающего белка по п. 1 или 2, предусматривающий: a) выделение первой ДНК-последовательности, кодирующей, по крайней мере, один гипервариабельный участок (CDR), в основном, происходящий от мышиного моноклонального антитела против V_β5,2/V_β5,3 или V_β8,1, обладающего специфичностью к выбранным субпопуляциям T-клеток; b) клонирование указанной первой ДНК-последовательности в соответствующий вектор; c) введение выбранных каркасных аминокислот человека посредством мутагенеза с последующим образованием конструкции со встроенными чужеродными CDR; o) трансформацию клетки-хозяина с использованием указанной конструкции стадии c) и e) культивирование трансформированных таким образом клеток-хозяев с получением указанного "очеловеченного" антитела или его связывающего белка.

7. Способ по п. 6, в котором указанной клеткой-хозяином является клетка CHO.

8. "Очеловеченное" антитело или его связывающий белок по п. 1 или 2 для использования в терапевтических целях.

9. Фармацевтическая композиция, включающая в себя "очеловеченное" антитело или его связывающий белок по п. 1 или 2 в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем.

10. Способ лечения болезни Крона, предусматривающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества "очеловеченного" антитела или его связывающего белка по п. 1 или 2.

11. Способ лечения рассеянного склероза, предусматривающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества "очеловеченного" антитела или его связывающего белка по п. 1 или 2.

12. Использование "очеловеченного" антитела или его связывающего белка по п. 1 или 2 в производстве лекарственного средства, предназначенного для лечения болезни Крона.

13. Использование "очеловеченного" антитела или его связывающего белка по п. 1 или 2 в производстве лекарственного средства, предназначенного для лечения рассеянного склероза.