RU1836102C - Способ получени синтетической вакцины против щура - Google Patents
Способ получени синтетической вакцины против щураInfo
- Publication number
- RU1836102C RU1836102C SU894613910A SU4613910A RU1836102C RU 1836102 C RU1836102 C RU 1836102C SU 894613910 A SU894613910 A SU 894613910A SU 4613910 A SU4613910 A SU 4613910A RU 1836102 C RU1836102 C RU 1836102C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- membrane
- virus
- compound
- obtaining
- mixture
- Prior art date
Links
- 229940126577 synthetic vaccine Drugs 0.000 title claims description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 20
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 16
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 11
- -1 β-propyl-cysteinyl-seryl-serine Chemical compound 0.000 claims abstract description 6
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical compound O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 3
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 claims abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 4-ethylmorpholine Chemical compound CCN1CCOCC1 HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- KPDAMFFXBHBNLB-CIUDSAMLSA-N (2S)-3-hydroxy-2-[[(2S)-3-hydroxy-2-[[(2R)-2-(propylamino)-3-sulfanylpropanoyl]amino]propanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound C(CC)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O KPDAMFFXBHBNLB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PZFZLRNAOHUQPH-DJBVYZKNSA-N (2r)-3-[(2r)-2,3-di(hexadecanoyloxy)propyl]sulfanyl-2-(hexadecanoylamino)propanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CSC[C@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZFZLRNAOHUQPH-DJBVYZKNSA-N 0.000 description 1
- VXGGBPQPMISJCA-STQMWFEESA-N (2s)-2-[[(2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 VXGGBPQPMISJCA-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 235000021537 Beetroot Nutrition 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N Butanol Natural products CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 1
- YNJBLTDKTMKEET-ZLUOBGJFSA-N Cys-Ser-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YNJBLTDKTMKEET-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000002788 anti-peptide Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000823 artificial membrane Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- CLZTVBHOOQTDNP-UHFFFAOYSA-N butanoic acid;dichloromethane Chemical compound ClCCl.CCCC(O)=O CLZTVBHOOQTDNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229940028435 intralipid Drugs 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32111—Aphthovirus, e.g. footandmouth disease virus
- C12N2770/32122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Abstract
Использование: ветеринари , получение вакцин против щура. Сущность изобретени : Осуществл ют взаимодействие парциальной последовательности вируса щура VPi (135-154) серотипа О с корным соединением - мембранным липопротеио- ном. Якорное соединение выбирают из группы R.S, - или смеси R,S - и, R.R диасте- реомеров N - пэльмитоил-5-{2,3-(биспаль- митоилокси(-пропил -цистеинил-серил-сери на или его сукци-нимидного эфира. 1 з.п. ф-лы.
Description
Изобретение касаетс способа получени вакцины против щура.
Несмотр на наличие различных средств дл прививки, щур в животноводстве приводит к большим потер м. Одной из I причин заболевани щуром в насто щее врем вл етс ненадежность классических | прививочных средств (вакцин), которые содержат умерщвленные или же инактивиро- ванные вирусы щура (MKS-вирусы). Инактивирование вирусов иногда происхо- I дит неполностью что может служить причи- |ной пост-вакцинной вспышки щура. | Этой опасности нет у синтетических j MKS - вакцин, так как в них будут приме- н тьс только частичные последовательно- )сти определенных вирусных протеинов, I которые не обладают функци ми интактных вирусов.
Было найдено, что при применении | мембранных корных соединений и опреде- ; ленных парциальных последовательностей
MKS - вируса могут быть получены особенно активные MKS -вакцины. В немецкой выложенной за вке ДЕ 35 45 150 AL в качестве одной из многих возможностей применени мембранно- корных коньюгатов активных веществ упоминаетс и получение синтетических вакцин, однако, при этом не следует ожидать, что коньюгаты мембранных корных соединений и парциальных последовательностей MKS - вируса (коньюгаты мембранно корных и активных веществ) будут показывать необыкновенную эффективность при применении относительно, небольших количеств вакцины.,
Далее оказалось, что указанные вакцины неожиданным образом отличаютс тем что они уже после одноразового применеЛ ни обеспечивают достаточную вакцинацию . По сравнению с обычными (традиционными) вакцинами их преимущество к тому же заключаетс в том, что они могут сохран тьс практически неограниченное врем без охлаждени .
(Л
С
00 00
Os
о
ю
со
Следовательно, цель изобретени - это синтетическа вакцина от щура, отличающа с тем, что вакцина состоит из конь- югата по крайней мере одного мембранно- корного соединени и по крайней мере одной парциальной последовательности протеина вируса щура.
Мембранные корные соединени - это соединени , которые включены в биологические или искусственные мембраны.
Наиболее предпочтительными мемб- ранно- корными коньюгатами активных веществ будут те, у которых мембранно- корное соединение и активное вещество, то-есть парциальна последовательность MKS - вируса, ковалентно св заны друг с другом.
В качестве наиболее пригодных вл ютс такие мембранно- корные коныога- ты активного вещества, у которых мембранио- корное соединение липопро- теин.
Эти липопентапептиды могут быть представлены также как мембранные корные соединени в сокращенной форме (ли- поди-, липотри- или липотетрапептиды). Наиболее предпочтительными вл ютс N- пэльмитоил-5- 2,3/биспальмитоилокси/ пропил-цистеинил-серин- серии (Ратз Cys - Ser-Ser (М-пальмитоил-S 2,3-/биспаль- митоилокси/- пропил - цистеинилсе- рил-глицин и М-пальмитоил-5-{2,3- /биспальмитоилокси/ пропил цисте- инил-аланил--Д-изоглутамин.
В качестве парциальных последовательностей MKS-вируса, которые св заны с мембранными корными соединени ми, могут быть представлены самые различные парциальные последовательности
парциальна
последовательность-(134-154)
-(135-154) -(134-158) -(134-160) -(141-160) -(200-213) -(200-210) -(161-130)
причем могут примен тьс последовательности всех известных серотипов и субтипов .
Наиболее пригодны синтетические вакцины , которые состо т из смеси пептидов различных серо-и/или субтипов щурного вируса, которые смотр по обсто тельствам ковалентно св заны с мембранными.соединени ми .
Наиболее предпочтительны такие синтетические вакцины, которые состо т из смеси последовательностей VP I 134-160
серотипов 0,А,С,св занных с мембранным корным соединением 1М-пальмитоил-5- 2,3- биспальмитоилокси/пропил -цистеинил-се рил-серин.
При применении последовательности 134-154 серотипа 0 и последовательности 134-155 серотипа А, поскольку они содержат С - терминальный лизин, они могут через Ј- аминогруппы ковалентно св зыватьс с мембранными корными соединени ми ,
Наиболее пригодными показывают себ синтетические вакцины, изготовленные согласно изобретению, которые содержат парциальную последовательность MKS- вируса VP/1/135-154/.
Особенно предпочтительной вл етс вакцина, состо ща из М-пальмитоил-S- 2,3- биспальмитоилокси/- пропил - цисте- инил -серил -серил-VP 1/135-154/, то есть соединение ниже следующей формулы.
0
5
0
Мембранные корные соединени могут принципиально существовать как R, S.-, R, R - диастереомеры или как смесь диасте- реомеров. Однако, во вс ком случае, было установлено, что вакцины, которые содержат R, R - диастереомерное мембранное корное соединение, показывают наиболее высокую эффективность.
Согласно изобретению предмет изобретени - это способ изготовлени синтетической вакцины, отличающийс тем, что парциальные последовательности MKS - вируса посредством конъюгационной реакции будут св заны с мембранным корным соединением. Коньюгационной реакцией
может быть конденсаци , присоединение, замещение, окисление или образование дисульфида .
Предпочтительные коньюгационные методы отмечены в примере 1.
П р и м е р 1. Конъюгаци пептидов (протеинов с Ратз CYS - Ser-Ser-OSu - или же PamsCys Ser - Ser-OH
1. Пептиды и протеины (2 ммоль пептид/протеин ) раствор ют в 0,5-1 мл DMF, и
ввод т 8 моль (9,2 мг) твердого РатзСуз ser-Ser-Osu . Посредством легкого нагрева- 4и и облучени ультразвуком получают го- |огенную смесь в виде раствора и эбавл ют 4 ммоль органического основа- ч (N-этилморфолин). После перемешива- н и в течение 12 ч. добавл ют 1-2 мл смеси хюроформ: метанол (1:1), после чего проис- х|эдит охлаждение в лед ной ванне в течение 2ч,
Осадок промывают в 1 мл холодного хлороформ: метанола (1:1), помещают в с иесь третбутанол (вода (3:1), (возможна обработка ультразвуком) и лиофилизуют.
2. Пептиды и протеины (2 ммоль пептид (фротеин) раствор ют в 0,8 мл воды и сме- иивают с 4 ммоль (4,5 мг) PamsCus-Ser- §ег-ОН, Как правило осуществл етс основательна обработка ультразвуком до пор, пока не образуетс эмульси и не установитс значение рН в пределах от 5,0 до 5,5. После добавлени 5 мг ЕДС (1-(3-ди- мэтиламино-пропил)-3-этил-карбодиимид- Нщрохлорид) раствор етс в 100 мл НаО, затем в течение 18 часов при комнатной температуре осуществл етс перемешива- и в заключение дважды осуществл етс диализ каждый с 1 л дистиллированной Н20. Содержание диализного продукта лиофилизуют .
П р и м е р 2. Разделение диастереоме- Р0в от М-пальмитоил-5- 2,3-(бис-пальмитои- л(жси/пропил -цистеин-третич. -бутилэфир ( РатзСуз-ОВ ut):
2 г PamaCys-OB ut раствор ют в 10 мл растворител , дихлорметан (уксусный эфир) 20:1 (и помещают на колонну (длиной 120 см, диаметром 4 см) с М N-силигагелем 60, 0,063-0,2 мм (70-230 mesh ASTM.
При скорости каплепадени 2 капли /Сек собирают 350 фракций по 10 мл кажда а/иквоты каждой фракции провер ют хро- кфтографией на силикагель - 60 - пластинах вдихлорметан /уксусном эфире(20:1), а также на окрашивание с помощью хлор-ТДМ рфактива на РатзСиз - OBut.
Фракции 280-315 содержат R, R-ди- астереомеры. Фракции 316-335 -этосмесь из R, R - uR, S, а фракции 336-354 Это R, 3- диастереомеры от РатзСуз-ОВит.После выпаривани растворител на ротационном испарителе и помещени остатка в теплый третич. - бутанол и лиофилизации получают 6СО мг R, R -, 370 мг смеси из R, R- и R, S- и 540мг R, S-PamaCys-OBut.
П р и м е р 3. Синтез М-пальмитоил-S- 2,3-биспальмитоилокси)-пропил -цистеин - ил-серил-серил-VP (145-154) VPI пептидна пс следовательность MKS - вируса серотипа О К синтезируют через синтез пептида в твердой фазе. Дл этого используют Fmoc.
аминокислоты и следующие защитные группы боковых цепей:лизин (Вое), гистидин (Fmoc), аргинин (Mtr) серии (tBul. аспараги- нова кислота (OtBu), тирозин (tBu).
Исход из 1 г п-бензоилоксибензиловой спиртовой смолы и добавлени F мое - Lys (Вое) - ОН (0,47 ммоль/г), провод т следующие циклы синтеза, описанные ниже. N- активаци с 55% пиперидина в N-метилпирролидоне (1x2 мин, 1x5 мин), преактиваци Fmoc -A-A-OH (1,5 ммоль) в N-метилпирролидоне(б мл) с диизопропил- карбодиимидом (1,5 ммоль) и 1-гидрокси- бензотриазолом (1,5 ммоль) с последующим соединением в течение 1,5 часов. После промывки N-этилморфолином (5% N-метилпирролидоне ) преактивацию и соединение повтор ют. Блокирование не замещенных аминогрупп провод т посредством ацето- ангидрида (2,5 ммоль) и диизопропиламина (1,2 ммоль) в N-метилпирролидоне.
После каждого этапа пептидна смола многократно промываетс N-метилпирро- лидоном, дих лорметаном и снова N-метил- пирролидоном.
После синтеза смолообразной MRS-ви- рус-последовательности часть пептида получают посредством расщеплени трифторуксусной кислоты и провер ют с помощью HPL С, MS, аминокислотного анализа , а также анализа последовательности. После того как 2 группы серина св зывают в смолообразный пептид, осуществл етс соединение трипальмитоил S-глицерилци- стеина. После 4 часов производитс добав- ление1 эквивалента N-метилморфолина, а после следующего часа осуществл етс промывка липопептидной смолы. Липопеп- тид отдел етс от смолы с помощью 2 мл трифторуксусной кислоты (со 100 мл тиоани- зола) в течение 4,5 часов. Фильтрат выпаривают , остаток раствор ют в уксусной кислоте и ввод т в охлажденный эфир. Выпадающий липопептид трехкратно промывают эфиром. Следующую очистку провод т с помощью перекристаллизации из трифто- рэтанол/ хлороформа в соотношении 1:3 с холодным ацетоном и несколькими капл ми воды. Липопептид лиофилизую из трет.-бутанол /воды в соотношении 3:1.
П р и м е р 4. Тест на эффективность.
Случайно выбранные морские свинки, имеющие вес от 450 до 500 г вакцинируют внутримышечно или подкожно. 0,5 мг лиофилизированной вакцины (N-паль- митоил-5- 2, R/ - 1,2-(бис пальмитио- илокси)пропил -цистеинил-серил-сери- л4(135-154) преобразовывают в эмульсию в 500 мл смеси в соотношении 1:1 из 0,05 М фосфатного буфера и интралипида (R).
Смесь в течение 10, секунд подвергаетс обработке ультразвуком.
Четыре животных заражают MKS-виру- сом, в течение 21 дн после вакцинации им подкожно инъекцируютс 500 единиц вирулентного OiK ГМД-вируса, вводимого в левую заднюю лапку. В качестве контрольных животных привлекают тех, у которых вместо вакцины было инъецировано мембранно- корное соединение или же фосфатный буфер.
У всех зараженных (привитых) животных был найден высокий титр нейтрзлизирующих антител, составл ющий logioSNso 0,36.
Контрольные животные не имели титра антител (слепое значение 0,17).
Титр нейтрализующих антител определ лс как логарифм разведени сыворотки, которое необходимо дл того, чтобы нейтрализовать на 50% клетки вируса в одном слое ВНК - Baby Hamster Kodney - клеток. У зараженных животных антитела могут быть обнаружены посредством антипептидной пробы ELISA(A492), что невозможно в случае незараженных животных.
Привитые животные не показывают вторичного расстройства функций, в то врем как все непривитые животные показывают полную картину щурной инфекции.
Claims (2)
1.Способ получени синтетической вакцины против щура, включающий ковалентное
св зывание парциальной последовательности вируса щура VPi серотипа 0 с корным соединением, отличающийс тем, что в качестве парциальной последовательности берут последовательность вируса щура
VP 1(135-154), а в качестве корного соединени - мембранный липопротеин, выбранный из группы R,S, R,R -или смеси R.S - и R.R-ди- астереомеров М-пальмитоил-5-{2,3-(биспаль- митоилокси)-пропилЗ-цистеинил-серил-еерина
или его сукцинимидного эфира.
2.Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и и с тем, что, с целью повышени эффективности вакцины, мембранный липопротеин вл етс R.R-диастереомером.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3813821A DE3813821A1 (de) | 1988-04-22 | 1988-04-22 | Synthetische vakzine gegen die maul- und klauenseuche und verfahren zu deren herstellung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU1836102C true RU1836102C (ru) | 1993-08-23 |
Family
ID=6352780
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU894613910A RU1836102C (ru) | 1988-04-22 | 1989-04-21 | Способ получени синтетической вакцины против щура |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0338437B1 (ru) |
| JP (1) | JP2837866B2 (ru) |
| AR (1) | AR243081A1 (ru) |
| AT (1) | ATE118507T1 (ru) |
| AU (1) | AU619826B2 (ru) |
| CA (1) | CA1333563C (ru) |
| DE (2) | DE3813821A1 (ru) |
| DK (1) | DK175629B1 (ru) |
| ES (1) | ES2068215T3 (ru) |
| GR (1) | GR3015358T3 (ru) |
| IE (1) | IE67124B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ228824A (ru) |
| PT (1) | PT90333B (ru) |
| RU (1) | RU1836102C (ru) |
| ZA (1) | ZA892954B (ru) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6024964A (en) * | 1985-06-24 | 2000-02-15 | Hoechst Aktiengesellschaft | Membrane anchor/active compound conjugate, its preparation and its uses |
| DE3937412A1 (de) * | 1989-11-10 | 1991-05-16 | Hoechst Ag | Synthetische vakzine zur spezifischen induktion zytotoxischer t-lymphozyten |
| US6074650A (en) * | 1985-06-24 | 2000-06-13 | Hoechst Aktiengesellschaft | Membrane anchor/active compound conjugate, its preparation and its uses |
| GB9915074D0 (en) * | 1999-06-28 | 1999-08-25 | Cortecs Plc | Ligand-binding composition |
| EP2549990A1 (en) * | 2010-03-23 | 2013-01-30 | Irm Llc | Compounds (cystein based lipopeptides) and compositions as tlr2 agonists used for treating infections, inflammations, respiratory diseases etc. |
| CN105555756B (zh) | 2013-06-28 | 2018-12-07 | 奥克兰联合服务有限公司 | 氨基酸缀合物和肽缀合物及缀合方法 |
| KR20170094449A (ko) | 2014-12-23 | 2017-08-17 | 마가렛 앤 브림블 | 아미노산 및 펩타이드 접합체 및 이들의 용도 |
| CA3014515A1 (en) | 2016-02-26 | 2017-08-31 | Auckland Uniservices Limited | Amino acid and peptide conjugates and conjugation process |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA824174B (en) * | 1981-06-16 | 1983-04-27 | Genentech Inc | Production of foot and mouth disease vaccine from microbially expressed antigens thereof |
| ZA831854B (en) * | 1982-03-26 | 1984-01-25 | Biogen Nv | Small peptides with the specificity of foot and mouth disease viral antigens |
| AU573574B2 (en) * | 1983-03-08 | 1988-06-16 | Chiron Mimotopes Pty Ltd | Immunogenic deteminants of foot and mouth disease virus |
| JPS60500673A (ja) * | 1983-03-08 | 1985-05-09 | コモンウエルス セラム ラボラトリ−ズ コミツシヨン | 抗原活性を有するアミノ酸配列 |
| JPS59500719A (ja) * | 1983-04-06 | 1984-04-26 | ビトル ジエイムズ エル | 合成ピコルナビ−ルス抗原 |
| EP0142192A1 (en) * | 1983-10-22 | 1985-05-22 | Akzo N.V. | Preparation of immunogens consisting of antigenic determinates bound to glycoside-containing carriers |
| JPS61292398A (ja) * | 1985-06-19 | 1986-12-23 | 富士通株式会社 | 多層回路基板の製造方法 |
| DE3546150A1 (de) * | 1985-06-24 | 1987-01-22 | Hoechst Ag | Membrananker-wirkstoffkonjugat, seine herstellung sowie seine verwendung |
-
1988
- 1988-04-22 DE DE3813821A patent/DE3813821A1/de not_active Withdrawn
-
1989
- 1989-04-12 AR AR89313718A patent/AR243081A1/es active
- 1989-04-13 AT AT89106628T patent/ATE118507T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-04-13 DE DE58908990T patent/DE58908990D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-04-13 EP EP89106628A patent/EP0338437B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-04-13 ES ES89106628T patent/ES2068215T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-04-20 NZ NZ228824A patent/NZ228824A/en unknown
- 1989-04-20 DK DK198901928A patent/DK175629B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-04-20 PT PT90333A patent/PT90333B/pt not_active IP Right Cessation
- 1989-04-21 JP JP1100345A patent/JP2837866B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1989-04-21 RU SU894613910A patent/RU1836102C/ru active
- 1989-04-21 CA CA000597445A patent/CA1333563C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-04-21 AU AU33265/89A patent/AU619826B2/en not_active Ceased
- 1989-04-21 IE IE129689A patent/IE67124B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-04-21 ZA ZA892954A patent/ZA892954B/xx unknown
-
1995
- 1995-03-10 GR GR950400516T patent/GR3015358T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT90333B (pt) | 1994-08-31 |
| IE891296L (en) | 1989-10-22 |
| ATE118507T1 (de) | 1995-03-15 |
| EP0338437B1 (de) | 1995-02-15 |
| DK192889A (da) | 1989-10-23 |
| ZA892954B (en) | 1989-12-27 |
| DK175629B1 (da) | 2004-12-27 |
| AR243081A1 (es) | 1993-07-30 |
| EP0338437A2 (de) | 1989-10-25 |
| PT90333A (pt) | 1989-11-10 |
| GR3015358T3 (en) | 1995-06-30 |
| AU619826B2 (en) | 1992-02-06 |
| DE3813821A1 (de) | 1989-11-02 |
| JPH026410A (ja) | 1990-01-10 |
| NZ228824A (en) | 1992-05-26 |
| EP0338437A3 (de) | 1991-05-08 |
| JP2837866B2 (ja) | 1998-12-16 |
| IE67124B1 (en) | 1996-03-06 |
| DK192889D0 (da) | 1989-04-20 |
| AU3326589A (en) | 1989-10-26 |
| ES2068215T3 (es) | 1995-04-16 |
| CA1333563C (en) | 1994-12-20 |
| DE58908990D1 (de) | 1995-03-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3825041B2 (ja) | 外来ｔ−細胞エピトープを補助として用いた、自己タンパク質に対する抗体応答の誘発 | |
| US4605512A (en) | Small peptides with the specificity of foot and mouth disease viral antigens | |
| US5019383A (en) | Fatty acid carriers for synthetic peptides | |
| EA006308B1 (ru) | Пептиды вич, антигены, вакцинные композиции, набор для иммуноанализа и способ обнаружения антител, индуцируемых вич | |
| JPH09503489A (ja) | リピドａの毒性を中和するためのペプチド | |
| RU1836102C (ru) | Способ получени синтетической вакцины против щура | |
| JPH08504090A (ja) | 抗−ネコ免疫不全ウイルス（ｆｉｖ）ワクチン | |
| US20050053616A1 (en) | Hiv regulatory and auxiliary peptides, antigens, vaccine compositions, immunoassay kit and a method of detecting antibodies induced by hiv | |
| JP2002536384A (ja) | Ｔヘルパー細胞エピトープ | |
| EP0402088A2 (en) | Conjugate immunogen for aids | |
| CA1271717A (en) | Polypeptides useful in vaccination against enteroviruses | |
| JPS61111695A (ja) | Ｂ型肝炎ビールス又はｂ型肝炎ビールス成分からのｄｎａフラグメント、ポリペプチド及びオリゴペプチド、組み換えｄｎａ分子、ｄｎａベクター、エシエリヒア・コリｋ１２変異体、ポリペプチドの製法、ｂ型肝炎ビールス疾患に対する接種物質、モノクロナール抗体ｍａ１８／７、マウス雑種細胞ｇｏ１ａ１８／７‐１並びにモノクロナール抗体ｍａ１８／７の製法 | |
| CN114057850B (zh) | 一种预防新型冠状病毒covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114213509A (zh) | 基于SARS-CoV-2的S蛋白的疫苗及其用途 | |
| CN114057846B (zh) | 一种预防新型冠状病毒感染covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057847B (zh) | 一种预防新型冠状病毒covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057848B (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057851B (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057843A (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057853A (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057844A (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057842A (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057849A (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057845A (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114053400A (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的疫苗及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| REG | Reference to a code of a succession state |
Ref country code: RU Ref legal event code: MM4A Effective date: 20060422 |