PT90333B

PT90333B - Processo para a preparacao de uma vacina sintetica contra a febre aftosa

Info

Publication number: PT90333B
Application number: PT90333A
Authority: PT
Inventors: Guenter Jung; Karl-Heinz Wiesmuller; Gunter Hess
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1988-04-22
Filing date: 1989-04-20
Publication date: 1994-08-31
Also published as: ZA892954B; IE67124B1; AR243081A1; JP2837866B2; PT90333A; AU619826B2; EP0338437B1; DE58908990D1; DE3813821A1; RU1836102C; DK192889D0; IE891296L; ATE118507T1; NZ228824A; DK192889A; DK175629B1; CA1333563C; AU3326589A; JPH026410A; GR3015358T3

Description

PATENTE DE INVENÇÃO

N.° 90 333

REQUERENTE: HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT, alemã, com sede em D-6230 Frankfurt am Main 80, RepúbM ca Federal Alemã.

EPÍGRAFE: » PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA VACINA

SINTÉTICA CONTRA A FEBRA AFTOSA .

INVENTORES: Karl-Heinz Wiesmuller, Dr.Dr. Gunter Hess e

Prof,Dr. Gunther Jung.

Reivindicação do direito de prioridade ao abrigo do artigo 4.° da Convenção de Paris de 20 de Março de 1883. República Federal Alemã, em 22 de Abril de 1988, sob o ns. P 38 13.821.2.

INPI. MOD. 113 RF 10732

Descrição referente à patente de invenção de HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT , alemã, industrial e comercial, com sede em D-6250 Frankfurt am Main 80, República Federal Alemã, (inventores: Karl-Heinz Wiesmuller, Dr. Dr. Gíínter Hess e Prof. Dr. Gunther Jung, residentes na Alemanha Ocidental), para PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA

VACINA SINTÉTICA CONTRA A FEBRE AFTOSA

DESCRIÇÃO

A presente invenção refere-se a uma vacina contra a febre aftosa, bem como a processos para a sua preparação.

A febre aftosa (FA) causa grandes perdas na criação de gado apesar das vacinas desde há muito existentes. Uma razão para a ocorrência da febre aftosa actua]. mente é a insegurança das vacinas clássicas que contém virus da FA mortos ou inactivados: a inactivação dos virus não é às vezes completa, podendo por isso originar um aparecimento pos-vaccinal da FA (vide Bõhm, Stromaier, Tierãrztl. Umschau, 59 ,

5-8 (1984)). Este perigo não existe no caso das vacinas sintéticas contra a FA, pois nelas apenas se utilizam sequências parciais de determinadas proteínas de virus, que não têm a fun4 ção de um virus intacto.

Existem já contudo vacinas sintéticas contra a PA (vide registo de patente europeu 0 204 480), nas oue precisam ainda de ser melhorado.

Descobriu-se então que, utilizando compostos com capacidade de ligação a membranas e certas sequências parciais do virus da FA, se podem preparar vacinas contra a FA especialmente activas. No pedido alemão DE 35 46 150 Al refere-se a preparação de vacinas sintéticas como uma das muitas possibilidades de aplicação dos conjugados de compostos com. propriedades de ligação a membranas, mas não era de esperar que os conjugados de compostos com propriedades de ligação a membranas e de sequências parciais do virus da FA (conjugados de ingrediente activo ligado a membranas) apresentassem a extraordinária eficácia descoberta na aplicação em relação a pequenas quantidades em vacinas.

As vacinas mencionadas distinguem-se ainda surpreendentemente por proporcionarem uma protecçao suficiente logo após uma única aplicação. Em relação às vacinas habituais , têm ainda a vantagem de se conservarem praticamente sem limite de tempo sem arrefecimento.

objectivo da invenção é por isso uma vacina sintética contra a febre aftosa, caracterizada por a vacina ser constituída por um conjugado de pelo menos um composto com propriedades de ligação a membranas e pelo menos uma sequência parcial de uma proteína do virus da febre aftosa.

Os compostos com propriedades de ligação a membranas são compostos que têm a propriedade de se ligar a membranas biológicas ou sintéticas .

Outros esclarecimentos sobre os compostos com propriedades de ligação a membranas podem encontrar·· -se no já referido pedido de patente alemão 35 46 150 e em G.

- 2 Jung et al. em Peptides, Structure and Function, V.J. Hruby íi and D.H. Rich, pags. 179 a 182, Pierce Chem. Co . Rockford, I

Illinois, (1983).

Os conjugados de ingrediente activo-composto com propriedades de ligação a membranas preferidos são aqueles em que um composto com propriedade de ligação a membranas e um ingrediente activo, isto é, unia sequência parcial, de um virus da FA se encontram ligadoe entre si de modo covalen te.

Revelaram-se como particularmente a! propriados os conjugados de composto com propriedade de ligação a membranas-ingrediente activo aqueles em que o composto com propriedades de ligação a membranas é uma lipoproteína. Muito especialmente apropriados são compostos com propriedades de ligação a membranas com as seguintes fórmulas,

R -C0-0-CH₂

I

R'-CO-O-CH*

I (°^H2)_n

A

I (Ç^m

R-CO-NH-CH*-CO-X

I.

R -0-CH₂

R'-O-CH*

I <^σΗ2>η

A

I !

R -CO-NH-CH*-CO-X

II.

R -0-C0-CH₂

I

R'_O-CO-CH* t

(CH₂)_n

I

A

I (¾

I

R”-CO-NH-CH*-CO-X

III .

R -NH-C0-CH₂

R'-NH-CO-CH*

I t

A ι

t

R-CO-KH-CH*-CO-X

R -C0-GH₂

I

R^f-OO-CH

I <^CH2>n

I

A ι

<^0H2’_m

I

R-CO-NH-CH*-CO-X

B

I

A

I <^CHA

I

R-NH-CO-CH*-CO-X

IV. V. VI.

r₁~ch₂ r₂-ch*

I <^CH2h

I

A

I <^CH2\

I

R-CO-NH-CH*-CO-X

VII.

nas quais

A pode ser enxofre, oxigénio, dissulfureto (-S-S-), metileno (-CH₂-) ou -NH-; n=0a5,m=lou2;

C representa um átomo de carbono assimétrico com a configuração R ou 8,

—1' R,R¹ e R são iguais ou diferentes e representam hidrogeI ¹ nio ou um grupo alquilo , alcenilo ou alcinilo com 7 θ· 25 átomos de carbono, que podem estar substituídos por gru_H pos hidroxilo, amino, oxo, acilo, alquilo ou cicloalquilo, ji 3, na fórmula VI, podem ter o significado de qualquer grupo <1 ^_^^2^n“ C3-1 quil—sniost;ituído) indicado nas fórmulas I a _; V; e e são iguais ou diferentes e tem os mesmos signifií cados que R, R' e R, e ainda podem ser -OR, -O-GOR, i’ -COOR, -NHCOR ou -CONHR, e em que

X é uma cadeia de até 10 aminoácidos, à qual se encontra ligada a sequência parcial do virus.

1' De entre estes compostos ressaltam, como exemplo, os seguintes:

_;í

Extremos azotados existentes em lipoproteínas bacterianas, como por exemplo:

I, i' v Y-Ser-Ser-Ser-Asn, Y-Ile-Leu-Leu-Ala, Y-Ala-Asn-Asn-Gln, Y-Asn-Ser-Asn-Ser, Y-Gly-Ala-Met-Ser, Y-Eln-Ala-Asn-Tyr, Y-Gln-Val-Asn-Asn, Y-Asp-Asn-Ser-3er, em que Y pode ser um dos grupos indicados para as fórmulas I a VII. Estes lipo| pentapéptidos podem também aplicar-se numa forma encurtada ¹ (lipodi-, lipotri- ou lipotetrapéptidos) como compostos com , propriedades de ligação a membranas. Rreferem-se muito em especial a N-palmitoil-S-^/2,5-(bispaimitoiloxi)propil7-cisjj teinil-seril-serina (PamzCys-3er-Ser) , a K-palmitoil-S-/2,3-(οΐ3ρ3ΐππ.ΐοϋοχϊ)-ρηορ117-σΐ3ΐβΐηί1-36Γΐ1-£ΐΐοΐηΗ e a N-palmitol-S-^/2,5-(bispalmitoiloxi )propil7-cis teinil-alanil-D-isoglutamina. Podem encontrar-se exemplos de outros compostos com propriedades de ligação a membranas preferidos na DE-QS 55 46 150.

j Como sequências parciais do virus da . EA, que se ligam ao composto com capacidade de ligação a membranas, podem ter-se muitas sequências parciais diferentes.

Preferem-se as sequências seguintes:

Sequência parcial

11

-(134 - 154) -(155 - 154) -(154 - 158) -(154 - 160) -(141 - 160) -(200 - 213) -(200 - 210) -(161 - 180), podendo utilizar-se as sequências de todos os serotipos e subtipos conhecidos. Como exemplos do serotipos referem-se neste contexto os seguintes:

Serotipo A: 134

160

Westerwald

NKYSTGGP—RRGDMGSAAARÂAKQL?

161 180 ASFNYGAIRAITIHELLVRM

200 213

RHKQKHAPARQ)LL

A₁₂ USA 134 160

NKYSASGSG-VRGDFGSKAPRVARQLP

161 180 ASFNYGAIKAETIHELLVBJVI

200 212 RHKQKIIAPGKQL

Serotipo C:

C·^ Oberbayern

134	160
TTY TAST	----RGDLAHLTAT RAGHLP
161	180
TSFNFGAUKAETITGLLVAM
200	213

RHKQPLVAPAKQLL

Serotipo 0:

Kau.fbeu.reη

Lausanne

C>2 Normandie 0 Wuppertal

Israel

0^ Kaufbaueren

0^ Kaufbeuren

134 160

ORYURNAVPKLRGOLQVLAQKYARTIP CRYSRKAVPNLRGDLQVLAQKVARTLP RRYSRNAVPNVRGDLQALGQKARTLP CLYSDARVSWRGDLQVLAQKAERAL

ORYGUVAVYNVRGDLQVLAQKAERALP

200 213

RHKQKIVAPVKQTL

161 180 TSPNYGAIKATRVTELLYRM

São particularmente adequadas as vacinas sintéticas constituídas por uma mistura de péptidos de vários serotipos e/ou subtipos do virus da febre aftosa, ligados covalentemente ao composto (ou compostos) com propriedades de ligação a membranas.

Preferem-se em especial as vacinas sintéticas constituídas por uma mistura de sequências VP1 134 - 160 dos serotipos 0, A, C, ligadas ao composto com propriedades de ligação a membranas N-palmitoil-S-/2,3-bispalmitoiloxi)propil7~cisteinil-seril-serina.

Utilizando a sequência 134 - 154 do serotipo 0 ou a sequência 134 - 155 d.° serotipo A, pode-se ligá-la, desde que contenha uma lisina C-terminal, através do grupo £-amino, de modo covalente, ao composto com propriedades de ligação a membranas.

Revelaram-se particularmente adequadas as vacinas sintéticas de acordo com a invenção que contêm a sequência parcial do virus da PA VP 1 (135 - 154).

Prefere-se ainda em especial uma vacina constituída por N-palmitoil-S-/2,3-(bispalmitoiloxi)propil7·-cisteinil-seril-seril-VPl (135-154), isto é o composto da fór- 7 mula seguinte

135

Os compostos com propriedades de ligação a membranas podem existir essencialmente como diastereómeros R, S ou E,R ou como misturas de diastereómeros. Verificou-se aliás que as vacinas que contêm um composto com propriedades de ligaçao a membranas diastereomérico R,R são mais eficazes.

É ainda objectivo da invenção um processo para a preparação de uma vacina sintética, caracterizado por se ligarem sequências parciais do virus da FA, por meio de uma reacção de conjugação, ao composto com propriedades de ligação a membranas. A reacção de conjugação pode ser por exemplo uma condensação, uma adição, uma substituição, uma oxidação ou uma formação de dissulfureto. Os métodos de conjugação preferidos indicam-se no exemplo 1. Outros métodos de conjugação encontram-se descritos no pedido de patente alemão 35 ^6 15 já mencionado.

A preparação dos compostos com propriedades de ligação a membranas encontra-se também descrita no pe dido de patente alemão atrás referido.

A eventualmente necessária separação dos diastereómeros pode efectuar-se por meio de vários métodos, co mo por exemplo, se descreve em Hoppe-Seylei^ Z. Physiolog. Chem. 369- (1985) 593· No exemplo 2 descreve-se um processo de separação preferencial.

A construção das sequências parciais das proteíbas da FA pode efectuar-se por vários processos conhecidos da literatura, vide por exemplo Wunsch et al. em Houben-Weyl, vol 15/1,2, Stuttgart, Thiemeed. ou Wusch em Angew. Chem. 83/(1971), 773, E. Gross e J. Meiehhofer (edj, The Pepti dos, Vol. 1 (1979), 2 (1979), 3 (1981) θ 5 (1983) Academic Pre New York ou o registo de patente alemão 3$ 9-6 150. No exemplo 3 ilustra-se detalhadamente um processo preferencial para a preparação de uma sequência parcial de um conjugado.

São ainda objectivo da invenção composições farmacêuticas ou veterinárias que contenham um conjugado de um composto com propriedades de ligação a membranas e uma sequência parcial de um virus da FA. Normalmente, para além de um solvente, não se utilizam quaisquer veículos e aditivos ou adjuvantes nas composições de acordo com a invenção.

Em muitos casos pode contudo ser necessá rio adicionar veículos e/ou aditivos bem como eventuais adjucvantes às composições de acordo com a invenção. A mistura e manuseamento dos ingredientes efectua-se por processos conhecidos do especialista.

A quantidade de vacina necessária para uma imunização segura de um animal depende do tipo de animal do composto, ou compostos, com propriedades de ligação a mem- 9 tiranas e da sequência, ou sequências, parciais do virus da FA, e determina-se empiricamente caso a caso. Para a imunização segura de um porquinho da índia contra o virus da FA - serotipo O^K, basta por exemplo uma administração única de cerca de 100 - 500 ^ig da vacina de acordo com a invenção, sem veículos ou aditivos.

É ainda um objectivo da invenção a utilização das vacinas descritas para a produção de anticorpos em mamíferos.

Exemplo 1

Conjugação de péptidos/proteínas com Pam^Cys-Ser-Ser-OSu ou Pam^Cys-Ser-Ser-OH

1. Péptidos e proteínas solúveis em DMF

Dissolvem-se 2yuMol de péptido/proteína em 0,5-l2il de DMF e adicionam-se 8yiMol (9,2 mg) de Pam^Cys-Ser-Ser-OSu sólido. Após ligeiro aquecimento e tratamento com ultrassons obtém-se uma solução homogéneo e adicio. nam-se 4 jjMol de base orgânica (N-etilmorfolina) . Após 12 horas de agitação adicionam-se 1-2 ml de uma mistura de clorofórmio:metanol (1:1) e arrefece-se durante 2 horas em gelo.

Lava-se o precipitado com 1 ml de clorofórmio :metanol (1:1) frio, toma-se em butanol terciário/água (3:1) (eventualmente com ultrassons) e liofiliza-se.

2. Péptidos e proteínas solúveis em água

Dissolvem-se 2 ptlol de péptido/proteína em 0 ,8 ml de água e adicionam-se 4 71M0I (4,5 mg) do Pam^Oys-Ser-Ser-OH. Trata-se com ultrassons até se obter uma emulsão e ajusta-se o pH a 5«0-5,5· Após adição de

mg de EDO (l-( 3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (cloridrato)), dissolvido em 100 jil de H-p, agita-se durante 28 horas à temperatura ambiente e diolisa-se em seguida 2 vezes com 1 1 de água destilada de cada vez. diq ί

tiliza-se o conteúdo do dialisado.

i t

Exemplo 2 (

Separação dos ' diastereómeros do éster-ter-butílico da N-palmig tol-S-/2,3-(bispalmitoiloxi)propil7cisteína (Pam^Cys-OBu^)

Dissolvem-se 2 g de Pam^Cys-OBu^ em 10 ml de eluente, diclorometano/acetato de etilo (20:1), e aplicam.-se a uma coluna (comprimento 120 cm, diâmetro e cm) cheia com silica gel IvíN 60, 0,063-0,2 mm/70 - 230 mesh ASTM. A uma velocidade de fluxo de 2 gotas/segundo recolhem-se 350 fracções de 10 ml e tenta-se uma aliquota de cada fracçao em relaçao ao Pam^Cys-OBu por cromatografia em placas de sílica gel 60 com diclorometano/acetato de etilo (20:1) seguida de coloração [com reagentes de cloro/TDM.

As fracções 280-315 contêm o diastereó'mero R,R; as fracções 316-335 uma mistura de R,R e R,S e as [fracções 336-35^ θ diastereómero R,S do Pam^Cys-QBu^. Após evaporação do solvente num evaporador rotativo, dissolução do resíduo em ter-butanol quente e liofilização obtêm-se 600 mg do diastereómero, R,R, 370 mg da mistura dos diastereómeros R ,R e R,S e 5^ ^mS do diastereómero R,S do Pam^Oys-OBu^.

Exemplo 3 t

I Síntese de E-palmitoil-S-/2,3-(bispalmitoiloxi)propil7cistei[nil-seril-seril-VP 1 (135-15^) l

A sequência peptídica VP 1 do virus da FA serotipo O^K sintetizou-se pelo método da síntese peptíuica em fase sólida. Utilizaram-se aminoácidos Fmoc. Utilizaram11 ,

-se ainda os seguintes grupos protectores da cadeia lateral : ί ) Lys(Boc), His(Fmoc), Arg(Mtr), Ser(tBu), Asp(OtBu), Tyr(tBu). ; jí A partir de 1 g de resina de álcool p-benzoiloxibenzílico, j ;j carregada com Fmoc-Lys(Boc)-OH (0,47 mivlol/g) eíectuaram-se os '! seguintesciclos de síntese: N-activação com 55% de piperidina ¹( em N-metilpirrolidona (1x2 minutos, 1x5 minutos), pré-activa- : ( ção de Fmoc-A-A-0H(l ,5 miioi) em N-metilpirrolidona (6 ml) , com diisopropilcarbodiimida (l,5milol) e 1-hidroxibenzotria- j ) zoie (1,5 mivíol) seguida de acoplamento durante 1,5 horas. ί ;{ Após lavagem com N-etilmorfolina (5% em N-me tilpirrolidona) re l' petiram-se a pré-octivação e o acoplamento. 0 bloqueamento I dos grupos amino não transformados efectuou-se com anidrido _; acético (2,5 milol) e diisopropilamina (1,2 mMol) em N-metilpirrolidona. Após cada passo, lavou-se a resina peptídica í várias vezes com N-metilpirrolidona, diclorometano e novameni te com N-metilpirroiidona.

Após a síntese da sequência do virus da FA ligada à resina, obteve-se uma parte do péptido por cisão com ácido trifluoroacético e testou-se por meio de HPLC, ii-íS (espectrometria de massa), análise de aminoácidos, análise sobre uma fase quiral e ainda por análise sequencial. Após se terem ligado 2 grupos serina ao péptido acoplado à resina, e efectuou-se o acoplamento da tripalmitoil-S-glicerilcisteína Após 4 horas, adicionou-se 1 equivalente de N-metilmorfolina a após mais 1 hora lavou-se a resina lipopeptídica. Separou-se o lipopéptido da resina com 2 ml de ácido trifluoroacético (com 100 ul ie tioamisole), durante 4 horas e meia. Evaporou-se o filtrado, tomou-se o residuo em ácido acético e deitou-se em éuer frio. 0 lipopéptido precipitado lavou-se 3 vezes com éuer. A purificação posterior efectuou-se por recristalização de trifluoroeranol/clorofórmio na proporção de 1:3 com acetona fria e algumas gotas de água. Liofilizou-se o lipopéptido em ter-butanol/água na proporção 3:1·

Exemplo 4

Teste de eficácia

Vacinaram-se porquinhos da índia escolhih dos ao acaso com um peso de 4p0 a g, por via intramuscular ¹¹ |l ou subcutânea. Emulsionaram-se 0,5 mg da vacina liofilizada 1 (I\^T-palmitoil-S-/C2R ,R)-2,3-(bi smalmitoil) -oxi )propil7cisteinil-seril-seril-(135~154)) em 500 μΐ de uma mistura 1:1 de tampão

ram-se 4 animais com o virus da FA, injectando-lhes na pata

I posterior esquerda, por via subcutânea, pelo menos 500 unidades para porquinho da índia de um virus 0^K FMD virulento, 21 ι dias após a vacinação. Utilizaram-se como controle alguns ani ι

ί mais aos quais, em vez da vacina, se tinha injectado o compos ii to com capacidade de ligação a membranas ou o tampão de fosfaj to. Em todos os animais vacinados se encontrou uma elevada i

i concentração de anticorpos neutralizantes (log^Q SN^q = 0,36). íOs animais de controle não apresentavam qualquer concentração : de anticorpos (valor base = 0 ,17) · A concentração dos anticor • pos neutralizantes determinou-se como o logaritmo da diluição I de soro necessária para neutralizar 50% das células virais nu, ma monocamada de células BHK (rin de hanster bebé) . Nos animais vacinados conseguiu-se identificar anticorpos por meio do teste ELISA anti-péptido (A ρ, o que não foi possível no caso dos animais não vacinados. 0s animais vacinados não 'apresentavam lesões secundárias, enquanto que todos os animais não vacinados apresentavam a sintomatologia completa da infecção da febre aftosa.

Claims

R Ξ I V I H D G A Ç 5 E S i Processo para a preparação de uma vacina • sintética contra a febre aftosa, caracterizado por se ligar pe- 13 io menos um composto com capacidade de ligação a membranas atra ! vés de uma reacção de conjugação com pelo menos uma sequência t

parcial de uma proteína do virús da febre aftosa.

- 2& Processo para a preparação de uma vacina sintética, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se ligarem entre si de modo covalente um composto com capacidade de ligação a membranas e uma sequência parcial do virús da febre aftosa.

- 3a í | Processo para a preparação de uma vacina ' sintética, de acordo com as reivindicações 1 ou 2, caracteri! zado por o composto com capacidade de ligação a membranas ser ! uma lipoproteína de membrana, bacteriana.

- 4â Processo para a preparação de uma vacinnà sintética, de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 3, caracterizado por o composto com papacidade de ligação a membranas ter uma das fórmula seguintes r -oo-o-ch₂ r -o-ch₂ 3 -o-co-ch₂

I I I

R'-CO-O-CH* R’-O-CH* R'-O-CO-CH*

I t 1 (CH₂)_n (CH₂)_n (CH₂)_n

I I I

A A A (CH_O) ^k 2'm

R¹¹ -CO -NH-CH *-C0 -X

I.

I

R -CO -NH-CH*-CO -X II.

C^CH24 t

R -CO -NH-CH*-CO-X

III

R -NH-CO-CH,

3 -CQ-CH, t

R'-NH-CO-CH

I

Η'-ΟΟ-σΗ¹

I (CH₂)_n (0Η₂)_η r

A

B

I

A

I <^0HA <^0H2\

S-CO-NH-CH*-CO-X R-CO-NH-CH”-CO-X K'4H-CO-CH“-CO-X

IV.

V.

VI.

R₂-CR*

I <^CH2%

I

A <^CH2%

R-CO-NH-CH*-CO-X

VII.

^:nas quais i’A representa enxofre, oxigénio, dissulfureto (-S-S-) , metileno (-CH₂-) ou -KH-;

, n = 0a5,n = lou2;

G representa um átomo de carbono assimétrico com a configuração R ou S;

|iR, R' e R, são iguais oudiferentes, e representam hidrogénio ou um grupo alquilo, alcenilo ou alcinilo com ? a 2; átomos í de carbono, o qual se pode encontrar substituído por grupos ί

ji hi droxi lo , amino, oxo, alquilo ou cicloalquilo;

! 3, na fórmula VI, pode ter o significado de qualquer grupo ! -(CB^)^ (alquil-substituído) indicado nas fórmulas I a V;

e

R^ e R£, que podem ser iguais ou diferentes, têm o mesmo significado que R, R’ e R, podendo ainda significar -OR, j -O-COR, -COOR, -NHCOR ou -COIKiR;

| e representado X uma cadeia de até 10 aminoácidos, á qual se í encontra ligada a sequência parcial do virus.

i ! - ₅ã _ j Processo para a preparação de uma vacina íj sintética, de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 4,

J caracterizado por a sequência parcial do virús da febre aftosa,

1 que se encontra ligada ao composto com capacidade de ligação ι a membrana, ser uma sequência do grupo:

Sequência-(154-154) 11 -(155-154) II -(154-153) 11 -(154-160) II -(141-160) ft -(141-158) 11 -(200-215) 11 -(200-210) II -(161-180) ,

í ou as respectivas formas amidadas ou alquilamidadas C-terminais, j podendo utilizar-se as sequências de todos os serotipos e h subtipos conhecidos.

í j - 6ã , Processo para a preparação de uma vacina . ! sintética, de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 5,

I caracterizado por a sequencia oarcial ào virus da febre aftosa si !| VP1 (135-154) se encontrar ligaàa ao composto com capacidade ί

de ligação a membranas.

ί; Processo para a preparação de uma vacina sintética, de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 6, caracterizado por se ligar de modo covalente uma mistura de pêptidos de vários serotipos e/ou subtipos do virus da febre aftosa ao composto ou aos compostos com capacidade de ligação ί

' a membranas.

i

- 8â ! Processo para a preparação de uma vacina í sintética, de acordo com uma ou mais reivindicações 1 a 7i caI _Λ racterizado por se ligar uma mistura de sequencia VP1 134-160

I dos serotipos 0, A ou C ao composto com capacidade de ligação ! a membranas N-palmitoil-S-/2,3-(bispalmitoiloxi)-propil7-cisteinil-seril-serina.

il - 9- j Processo para a preparação de uma vacina ' sintética, de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 8, j caracterizado oor se constituir a estrutura N-palmitoil-S-/2,3_ ji

1' -(bispalmitoiloxi)-propilJ7-cisteinil-seril-serina VP1 (135-15^-), ί na aual o composto com capacidade de ligação a membranas se

I encontra na forma dos diastereómeros R,3,R, R ou como uma mistura de diastereómeros.

[¹

1' - 10* i Processo para a preparação de uma vacina sintética, de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 9, caracterizado por o composto com capacidade de ligação a mem! tiranas se encontrar na forma do diastereómero R,R.

llã

Processo para a preparação de uma composição farmacêutica ou veterinária, caracterizado por se iníj corporar como ingrediente activo uma vacina sintética, preparada de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 10, com veiculos e/ou suportes habituais, adjuvantes e/ou vacinas, de j modo em si conhecido, a fim de se obter uma forma de adminisI : tração adequada.

A requerente reivindica a prioridade do ! pedido alemão apresentado em 22 de Abril de 1988, sob o n2 ί P 38 13 821.2.

Lisboa, 20 de Abril de 1989