PT683792E

PT683792E - Antagonistas de lhrh possuindo residuos aminoacilo modificados nas posicoes 5 e 6

Info

Publication number: PT683792E
Application number: PT94905391T
Authority: PT
Inventors: Fortuna Haviv; Jonathan Greer; Rolf E Swenson; Daryl R Sauer
Original assignee: Abbott Lab
Priority date: 1992-12-18
Filing date: 1993-12-14
Publication date: 2002-03-28
Also published as: ES2164096T3; JP3568952B2; ATE206136T1; DE69330838T2; WO1994014841A1; US5491217A; DK0683792T3; MX9308014A; EP0683792B1; EP0683792A4; DE69330838D1; EP0683792A1; JPH08505611A; CA2136079A1

Description

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DESCRICÃO

"Antagonistas de LHRH Possuindo Resíduos aminoacilo modificados nas posições 5 e 6"

Campo Técnico A presente invenção refere-se a compostos orgânicos possuindo actividade biológica, a composições farmacêuticas contendo estes compostos, e a um método médico de tratamento. Mais particularmente, a presente invenção refere-se a determinados péptidos possuindo actividade antagonista de LHRH, a composições contendo estes péptidos, e a um método de inibição da actividade de LHRH num mamífero com necessidade de tal tratamento.

Antecedentes da invenção

As gonadotropinas, a hormona estimulante de folículos (FSH), a hormona luteinizante (LH), e a gonadotropina coriónica (CG) são necessárias para a ovulação, a espermatogénese, e a biossíntese de esteróides sexuais. Uma única hormona hipotalâmica, a hormona de libertação de gonadotropina (GnRH, também conhecida como hormona de libertação da hormona luteinizante, LHRH) é responsável pela regulação da secreção tanto de FSH como de LH em mamíferos. A LHRH tem a estrutura 5-OxoPro-His Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-GlyNH2

Em anos recentes foram despendidos esforços de pesquisa consideráveis para encontrar análogos sintéticos de LHRH possuindo uma potência igual ou superior. Estes esforços produziram vários agonistas e antagonistas de LHRH. A atenção focou-se particularmente na modificação de várias posições para obter maior potência e nas posições 5 e 6 para reduzir a tendência destes análogos de LHRH para estimular a libertação de histamina.

Ljungqvist, Anders et aí. descrevem em Naturforsch., B: Chem. Sei. (1991), 46(9), 1231-6, o desenho, a síntese e a avaliação biológica de alguns antagonistas de LHRH que são análogos de Antide possuindo substituições nas posições 1, 5 ou 6 com resíduos hidrófilos.

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Também se conhece de Rivier, Jean et a/., J. Med. Chem. (1992), 35(23), 4270-8, um grupo de antagonistas da hormona de libertação de gonadotropina possuindo resíduos N-omega-triazolilornitina, lisina ou p-aminofenilalanina nas posições 5 e 6 com modificações adicionais nas posições 7 e 10.

Sumário da invenção

Verificou-se, de acordo com a presente invenção, que uma classe de potentes antagonistas de LHRH decapeptídicos possui resíduos aminoacilo nas posições 5 e 6 onde a porção cadeia lateral do resíduo é um grupo 4-(amino substituído)fenilalanilo, 4-(amino substituído)ciclo-hexilalanilo, ou Q-(amino substituído)alquilo. Adicionalmente, os resíduos aminoacilo na posição 5 dos péptidos da presente invenção são N-alquilados no átomo de azoto do esqueleto do péptido.

Em particular, a presente invenção proporciona uma classe de péptidos antagonistas de LHRH que se caracterizam pela presença de resíduos N-alquilaminoacilo e com resíduos N-alquil-4-(amino substituído)fenilalanilo ou N-alquil-4(amino substituído)ciclo-hexilalanilo modificados na posição 5 ou 6 em análogos de LHRH decapeptídicos. Em particular, os novos péptidos da presente invenção têm a estrutura: A1-B2-C3-D4-E5-F6-G7-H8-l9-J10 em que cada uma das letras designa um resíduo aminoacilo. A é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em N-acetil-D-3-(2-naftil)alanilo; N-acetilsarcosilo; N-acetil-D-fenilalanilo; N-acetil-D-(4-clorofenil)alanilo; N-acetil-D-3-(3-quinolinil)alanilo; e N-acetilazaglicilo. B é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em D-fenilalanilo; D-3-(4-clorofenil)alanilo; D-3-(4-fluorofenil)alanilo; e D3-(2-naftil)alanilo.

86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 3 C é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em D-3-(3-piridil)alanilo; D-3-(1-naftil)alanilo; D-3-(2-tiazolil)alanilo; e D-3-(2-benzo[ò]tienil)alanilo. D é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em L-serilo; e N-(R’)-L-serilo onde R1 alquilo linear ou ramificado de um a quatro átomos de carbono. E é um resíduo L-aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em

R1 O Ri 0 I li l II

onde R1 é definido como atrás, e R2 e R9 têm os valores que se lhes atribuem adiante. R2 é seleccionado de entre (1) -N02; (2) -CH2CI; (3) -CH2OH; (4) -CH2OCH3; (5) -CH2N3; (6) -CH2CN; (7) -(CH2)mNR3R4 (onde m é 1 ou 2, R3 e R4 são seleccionados, independentemente, de entre hidrogénio, alquilo de um a quatro átomos de carbono, fenilo, e benzilo, ou R3 e R4, tomados juntamente com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um anel pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, ou N'-acetilpiperazinilo; com a condição de que, quando um de R3 e R4 é fenilo ou benzilo, o outro é hidrogénio); H R5

π II N- NH2 (8) 4 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ onde η é Ο, 1 ou 2, e R5 é hidrogénio ou alquilo de um a quatro átomos de carbono;

Η H

N (9) onde n é 0, 1 ou 2, R6 e R7 são, independentemente, hidrogénio ou alquilo de um a quatro átomos de carbono, ou R6 e R7, em conjunto, são -CH2CH2- ou -CH2CH2CH2-; (8)

H

0 onde m é como definido atrás e R8 é seleccionado de entre 2-, 3- e 4-piridinilo, 2- e 3-furilo, 2- e 3-tienilo, e 2-, 3- e 4-quinolinilo. X é 1,4-ciclo-hexileno ou alquileno de um a quatro átomos de carbono, e R9 é seleccionado de entre (1) -(CH2)mNR3R4 onde m, R3 e R4 são definidos como atrás; (2) H Rs

onde n, e R5 são definidos como atrás;

Η H

N (3) 5 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ onde η, R6 e R7 são definidos como atrás; e (4) h

v(o«, S

O onde m e R8 são definidos como atrás. F é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em (a) D-triptofanilo; (b) D-3-(3-piridil)alanilo; (c) D-serilo; (d) D-[eps//o/7-N-(N' morfolinilcarbonil)]lisilo; (e) D-[eps//or7-N-(2-pirazolinilcarbonil)]lisilo; (f) D-[eps//oA7-N-(N'-piperidinilcarbonil)]lisilo; (g) D-[eps/7o/7-N-(3- quinolinilcarbonil)]lisilo; (h) D-(eps/7on-N-nicotinil)isilo; (i) D-citrulilo; (j) D-homocitrulilo; e (k) resíduos aminoacilo com as estruturas

onde R2 e R9 são definidos como atrás. G é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em (a) L-leucilo; (b) N-(R1)-L-leucilo; (c) L-valilo; (d) L-cicIo-hexilalanilo; (e) N-(R^-L-ciclo-hexilalanilo; (f) L-iso-leucilo; e (g) terc-butilglicilo. H é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em (a) L-(N-eps/7oA7-isopropil)lisilo; (b) L-arginilo; (c) L-homoarginilo; e (d) L-homoarginilo(NG,NG-dietilo). I é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em (a) L-prolilo; e (b) N-(R1)-L-alanilo. J é -NHC2H5 ou um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em (A) D-alaninamida; (B) N-ÍR^-D-alaninamida; (C) N-(R1)-L-

86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 6 alaninamida; (D) sarcosamida; (e) α-aza-glicinamida; e (e) D-serinamida; onde R1 é como definido atrás; com a condição de que quando J é -NHC2H5> então I é L-prolilo.

Estão também contemplados dentro do âmbito da invenção os sais de adição farmaceuticamente aceitáveis dos péptidos atrás definidos.

Descricão detalhada Definições

Tal como se utiliza em toda esta descrição e reivindicações emendadas, o termo "halogeneto" refere-se a bromo (Br), cloro (Cl), fluoro (F) ou iodo (I).

Os termos "resina" ou "resina peptídica" tal como aqui utilizados referem-se a resinas do tipo vulgarmente utilizado na arte da preparação sintética de péptidos. Os exemplos destas resinas incluem, mas não se lhes limitam, metilbenzidrilamina (MBHA) ou benzidrilamina (BHA). O termo "alquilo" tal como aqui utilizado refere-se a um grupo bivalente linear ou ramificado derivado de um hidrocarboneto saturado por remoção de um único átomo de hidrogénio. Os exemplos de alquilo incluem, mas não se lhes limitam, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, iso-butilo, terc-butilo, pentilo, hexilo, e semelhantes. O termo "alquileno" refere-se a um grupo bivalente linear ou ramificado derivado de um hidrocarboneto saturado por remoção de dois átomos de hidrogénio. Os exemplos de alquileno incluem -CH2-, -CH2CH2-, -CH(CH3)CH2- e semelhantes. O termo "cicloalquilo" refere-se a um grupo hidrocarboneto cíclico monovalente derivado de um grupo hidrocarboneto cíclico saturado por remoção de um único átomo de hidrogénio. Os exemplos de grupos cicloalquilo incluem ciclopropilo, ciclobutilo, ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, biciclo[2.2.2]octano, e semelhantes. O termo "cicloalquileno" refere-se a um grupo bivalente derivado de um hidrocarboneto cíclico saturado por remoção de dois hidrogénios. Os exemplos incluem ciclopentileno, ciclo-hexileno, e semelhantes. 7 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Na sua maior parte, os nomes de resíduos aminoacilo de ocorrência natural ou não, aqui utilizados, seguem as convenções de nomenclatura sugeridas pela IUPAC - Commission on the Nomenclature of Organic Chemistry and the IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature, como estabelecidas em "Nomenclature of^Amino Acids (Recommendations, 1974)," Biochemistrv. 14(2): 1975), que é aqui incorporado por referência. Na medida em que os nomes e abreviaturas empregues nesta descrição e reivindicações anexas diferem destas sugestões, será tornado claro ao leitor na tabela seguinte. Abreviaturas de Resíduos Aminoacilo Abreviatura Definição Alanilo & Derivados Ala L-Alanilo D-Ala D-Alanilo L-AlaNH2 D-AlaNH2 N-Ac-Ala L-Alanilamida D-Alanilamida N-Acetil-L-alanilo N-Ac-D-Ala N-Acetil-D-alanilo 2-Bal L-3-(Benzo[õ]tien-2-il)alanilo 3-Bal L-3-(Benzo[õ]tien-3-il)alanilo D-2-Bal D-3-(Benzo[õ]tien-2-il)alanilo D-3-Bal D-3-(Benzo[õ]tien-3-il)alanilo N-Ac-2-Bal Ν-ΑοβΙϊΙ-Ι_“3-(Ββηζο[0]Ιϊβη-2-ϊΙ)3ΐ3ηϊΙο N-Ac-3-Bal N-Acetil-L-3-(Benzo[õ]tien-3-il)alanilo N-Ac-D-2-Bal N-Acetil-D-3-(Benzo[ò]tien-2-il)alanilo N-Ac-D-3-Bal N-Acetil-D-3-(Benzo[õ]tien-3-il)alanilo Cha L-Ciclo-hexilalanilo N-Ac-Cha N-Acetil-L-Ciclo-hexilalanilo D-Cha D-Ciclo-hexilalanilo N-Ac-D-Cha N-Acetil-D-ciclo-hexilalanilo 1-Nal L-3-(Naft-1 -il)alanilo 2-Nal L-3-(Naft-2-il)alanilo D-1-Nal D-3-(Naft-1 -il)alanilo D-2-Nal D-3-(Naft-2-il)alanilo N-Ac-1 -Nal N-Acetil-L-3-(Naft-1 -il)alanilo N-Ac-2-Nal N-Ac-D-1 -Nal N-Acetil-L-3-(Naft-2-il)alanilo N-Acetil-D-3-(Naft-1 -il)alanilo 8 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ N-Ac-D-2-Nal 2- Pal 3- Pal 4- Pal D-2-Pal D-3-Pal D4-Pal N-Ac-2-Pal N-Ac-3-Pal N-Ac-4-Pal N-Ac-D-2-Pal N-Ac-D-3-Pal N-Ac-D-4-Pal 2- Qual 3- Qual 4- Qual D-2-Qual D-3-Qual D-4-Qual N-Ac-2-Qual N-Ac-3-Qual N-Ac-4-Qual N-Ac-D-2-Qual N-Ac-D-3-Qual N-Ac-D-4-Qual D-Thia ou D-Thial D-Thiaz D-(4-Atza)Phe NMe(4-Atza)Phe NMe(4-Morphme)Phe D-(4-Morphme)Phe D-(4-Atzame)Phe NMe(4-Atzame)Phe N-Acetil-D-3-(Naft-2-il)alanilo L-3-(Pirid-2-il)alanilo L-3-{Pirid-3-il)alanilo L-3-(Pirid-4-il)alanilo D-3-(Pirid-2-il)alanilo D-3-(Pirid-3-il)alanilo D-3-(Pirid-4-il)alanilo N-Acetil-L-3-(Pirid-2-il)alanilo N-Acetil-L-3-(Pirid-3-il)alanilo N-Acetil-L-3-(Pirid-4-il)alanilo N-Acetil-D-3-(Pirid-2-il)alanilo N-Acetil-D-3-(Pirid-3-il)alanilo N-Acetil-D-3-(Pirid-4-il)alanilo L-3-(Quinolin-2-il)alanilo L-3-(Quinolin-3-il)alanilo L-3-(Quinolin-4-il)alanilo D-3-(Quinolin-2-il)alanilo D-3-(Quinolin-3-il)alanilo D-3-(Quinolin-4-il)alanilo N-Acetil-L-3-(Quinolin-2-il)alanilo N-Acetil-L-3-(Quinolin-3-il)alanilo N-Acetil-L-3-(Quinolin-4-il)alanilo N-Acetil-D-3-(Quinolin-2-il)alanilo N-Acetil-D-3-(Quinolin-3-il)alanilo N-Acetil-D-3-(Quinolin-4-il)alanilo D-3-Tien-2-il)alanilo D-3-(Tiazol-4-il)alanilo D-4-[5’(3'-amino-1 H-1 ',2'A'rb'- triazolil)amino]-fenilalanina N-a//a-metil-4-[5'(3'-amino-1 H-1 ,,2,<4,,-5·- triazolil)amino]fenilalanina N-a/fe-metil-A-lmorfolino-N^metilJamino- fenilalanina D-4-(morfolino-N'-metil)aminofenilalanina D-4-[5'(3'-amino-1 H-1 '^'^'^'-triazoliDmetil] aminofenilalanina N-a/fa-metil-4-[5'(3'-amino-1 H-1' ,2'A’,-5'-triazolil)metil]amino]fenilalanina 86 585 EP 0 683 792/PT 9 ^C D-(4-Atzaeth)Phe D-4-[5'(3'-amino-1 H-1 '^'^VB^triazoliDetil]-aminofenilalanina NMe(4-Atzaeth)Phe N-a//a-metil-4-[5' (3'-amino-1 H-1 triazolil)etil]amino]fenilalanina D-(4-lmame)Phe NMe(4-lmame)Phe D-(4-Nicame)Phe NMe(4-Nicame)Phe D-(4-Nicaeth)Phe NMe(4-Nicaeth)Phe D-(4-Etcng)Phe NMe(4-Etcng)Phe D-4-(imidazolin-2-il)aminometilfenilalanina N-a/fa-4-(imidazolin-2-il)amÍnometilfenilalanina D-4-(nicotinil)aminometilfenilalanina N-a/fa-4-(nicotinil)aminometilfenilalanina D-4-(nicotinil)aminoetilfenilalanina N-a/fa-4-(nicotinil)aminoetilfenilalanina D-4-(NGciano, NG'etilguanidino)fenilalanina N-a//a-metil-4-(NGciano,NG etilguanidino)- fenilalanina D-4-N-(Nic)Cha D-4-N-(Guan)Cha D-[4-(aminonicotinil)ciclo-hexil]alanilo D-[4-(guanidino)ciclo-hexilalanilo Arg D-Arg Harg Arginilo & Derivados L-Arginilo D-Arginilo L-Homoarginilo (I .e. L-2-Amino-6-guanidino-hexanoil) D-Harg D-Homoarginilo (I .e. D-2-Amino-6-guanidino-hexanoil) Harg(Et) L-2-Amino-6-NG-etilguanidino-hexanoil)

Harg(Et2) ou Harg(Dietilo) L-2-Amino-6-NG,NG-dietilguanidino-hexanoil) N-MeHarg N-Metil-L-homoarginilo Gly N-Ac-Gly Aza-Gly N-Ac-azaGly Glicilo & Derivados Glicilo N-Acetilglicilo Azagiicilo N-Acetilazaglicilo Ácido a/fa-aminobutírico t-Bugly a-terc-Butilglicilo lleu Leucilo, Isoleucilo & Derivados L-lsoleucilo D-lleu D-lsoleucilo 10 10 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ Leu D-Leu

Lys D-Lys Lys(lsp) ou Lys(Nisp) D-Lys(lsp) ou D-Lys(Nisp) D-Lys(MePip)CO D-Lys(Morph)CO Lys(Nic) D-Lys(Nic) Lys(Pic) Lys(chex) NMeLys(Nic)

Sar NAcSar

Orn D-Orn Cit D-Cit Hcit D-HCit

Phe D-Phe 4-CI-Phe D-4-CI-Phe 4-F-Phe L-Leucilo D-Leucilo

Lisilo & Derivados L-Lisilo D-Lisilo L-(N'-eps/7o/7-isopropil)lisilo D-(N'-eps//o/?-isopropil)lisilo D-(N’-eps/7o/7-(N"-metil-N-piperidinil)-carbonil)lisilo D-(N'-eps//oA7-(N"-Morfolino)carbonil)lisilo L-(N'-eps/7oA7-Nicotinil)lisilo D-(N'-eps//o/?-Nicotinil)lisilo L-(N '-eps//o/7-Picolil)lisilo L-(N-eps/7o/?-Ciclo-hexil)lisilo N-Metil-(N’-eps/7o/?-nicotinil)lisilo

Miscelâneos

Sarcosilo (l.e. N-Metilglicilo) N-Acetil-sarcosilo

Ornitilo & Derivados

Ornitilo (l.e. α,δ-Diaminovalerilo) D-Ornitilo

Citrulilo (l.e. Ν'-ί/e/fa-Aminocarbonil-L-omitilo) D-Citrulilo

Homocitrulilo (l.e. L-2-Amino-(6-aminocarbonilamino)hexanoílo D-Homocitrulilo

Fenilalanilo & Derivados L-Fenilalanilo D-Fenilalanilo L-3-(4-Clorofenil)alanilo D-3-(4-Clorofenil)alanilo L-3-(4-Fluorofenil)alanilo 11 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ D-4-F-Phe D-3-(4-Fluorofenil)alanilo 4-N02-Phe L-3-(4-Nitrofenil)alanilo D-4-N02-Phe D-3-(4-Nitrofenil)alanilo N-Ac-Phe N-Acetil-L-fenilalanilo N-Ac-D-Phe N-Acetil-D-fenilalanilo N-Ac-4-CI-Phe N-Acetil-L-3-(4-Clorofenil)alanilo N-Ac-D-4-CI-Phe N-Acetil-D-3-(4-Clorofenil)alanilo N-Ac-4-F-Phe N-Acetil-L-3-(4-Fluorofenil)alanilo N-Ac-D4-F-Phe N'Acetil-D-3-(4-Fluorofenil)alanilo NMe(lsp)Phe N-Metil-3-[(4-lsopropilamino)]fenil]alanilo NMePhe(Atz) N-Metil-{4-[5’-(3'-amino-1 H-1', 2',4'-triazolil) fenil]}alanilo Prolilo & Derivados Pro L-Prolilo D-Pro D-Prolilo Serilo & Derivados Ser L-Serilo D-Ser D-Serilo NMehlser N-Metil-Flomo-serilo Triptofilo & Derivados Trp L-T riptilo D-Trp D-T riptilo Tirosilo & Derivados Tyr L-Tirosilo N-Ac-Tyr N-Acetil-L-tirosilo D-Tyr D-Tirosilo Tyr(OBz) O-Benzil-L-tirosilo Tyr(OMe) O-Metil-L-tirosilo D-Tyr(OBz) O-Benzil-D-tirosilo D-Tyr(OMe) O-Metil-D-tirosilo 12 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Os compostos contemplados como caindo dentro do âmbito da presente invenção incluem, mas não se lhes limitam, os seguintes exemplos representativos: NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe(4-N02) Phe-D-Cit-Leu-Arg-Pro-DAIaNH2 NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe(4-N02)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-D-

AlaNH2; NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-

Pro-D-AlaNH2; NAc-D-2Nal-D-CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Arg-Pro- DAIaNH2; NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMeTyr-D-(4'-Atza)Phe-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2; NAc-D2Nal-D-4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Arg-Pro- DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D1Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-AzaGly-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Morphme)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-

Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Morphme)Phe-D-(4-Morphme)Phe-Leu-

Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-Tyr-D(4-Morphme)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Morphme)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-Pro- DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4(piperidino-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-

Arg-Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4(pirrolidino-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-

Arg-Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(N'-acetil-N"-piperazino-N'-metil)Phe- DLys(Nic)-Leu-Arg-Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal'Ser-NMe-4-(dietil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-

Pro-DAIaNH2; 13 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(di-t-butil-N'-metil)Phe-DI_ys(Nic)-Leu-

Arg-Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(dimetil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-

Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-{diisopropil-N,-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-Pro-DAIaNH2 ; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(dipropil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-

Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(propil-N’-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-

Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(etil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-Pro- DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(fenil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-

Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(benzil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-

Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(p-clorobenzil-N’-metil)Phe-DLys{Nic)-

Leu-Arg-Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(p-fluorobenzil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-

Leu-Arg-Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(p-nitrobenzil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu

Arg-Pro-DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D1Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(ls'p)-Pro- DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-DLys(Nic)-Leu-Harg(Et2)-Pro- DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Harg(Et2)-

Pro-DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; ; NAc-Sar-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; 14 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ NAc-Sar-D4CIPhe-D-1 Nal-Ser-NMe-(4-Atzame)Phe-D-(4-Atzame)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIal\IH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D-1 Nal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D-1 Nal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atzame)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D-3Bal-Ser-NMe-(4-Atzame)Phe-D-(4-Atzame)Phe-Leu-

Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D-3Bal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-D-l_ys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAcAzaGly-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-

Pro-DAIaNH2; NAcAzaGly-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DMaNH2; NAcAzaGly-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAcAzaGly-D4CIPhe-D-1 Nal-Ser-NMe-(4-Atzame)Phe-D-(4-Atzame)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAcAzaGly-D4CIPhe-D-1 Nal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAcAzaGly-D4CIPhe-D-1 Nal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atzame)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAcAzaGly-D4CIPhe-D-3Bal-Ser-NMe-(4-Atzame)Phe-D-(4-Atzame)Phe-Leu-

Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAcAzaGly-D4CIPhe-D-3Bal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-

Pro-DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D-3Bal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atzame)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMeTyr-D-(4-lmame)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-(4-lmame)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)

Pro-DAIaNH2; NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-(4-lmame)Phe-D-(4-lmame)Phe-Leu-

Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-Tyr-D-(4-Nicme) Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; 15 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-Tyr-D-(4-Niceth)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-(4-Nicme)Phe-D-(4-Nicme)Phe-Leu-

Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-(4-Niceth)Phe-D-(4-Niceth)Phe-Leu-

Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Etcng)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMeTyr-D-(4-Etcng)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-D-AlaNH2; e NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe-(4-Etcng)Phe-D-(4-Etcng)Phe-Leu-

Lys(lsp)-Pro-D-AlaNH2.

Os compostos preferidos da presente invenção são aqueles em que R2 é seleccionado de entre o grupo que consiste em (a) -N02, (b) -CH2OH, (c) -CH2OCH3, e grupos com a estrutura

N* \ N—CH2CH3 H

I H

H

N-CN e

N—CH2CH5 H

O (i) e R9 é seleccionado de entre o grupo que consiste em 16 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ Η

N^N-CN \ Ν—CH2CH3 Η

Os compostos particularmente preferidos da invenção incluem NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe(4-N02)Phe-D-Cit-Leu-Arg-Pro-DAIaNH2; NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-D-AlaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-D-

AlaNH2;

NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe(4-N02)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-D

AlaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Morphme)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-

Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-DLys(Nic)-Leu-Harg(Et2)-Pro- DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D1Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Azagly-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Azagly-D4CIPhe-D1Nal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-Azagly-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; 17 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ NAc-Sar-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-D-2-Nal-D-4Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-Tyr-D-(4-Nicme)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; e NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMeTyr-D-(4-Etcng)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-D-

AlaNH2.

Actividade antagonista de LHRH

Os compostos representativos da presente invenção foram avaliados em testes in vitro quanto à ligação ao receptor (pK,) e quanto à potência antagonista de LHRH (pA2). Os testes empregaram os métodos detalhados em F. Haviv, et ai J. Med. Chem.. 32: 2340-2344 (1989). As afinidades de ligação ao receptor (pK,) são o simétrico dos logaritmos das constantes de equilíbrio de dissociação, e os valores de pA2 são os simétricos dos logaritmos da concentração de antagonista que desvia a curva de resposta produzida pelo agonista leuprolida para uma concentração duas vezes mais elevada. (Leuprolida é o agonista de LHRH possuindo a estrutura õ-oxo-Pro^His^Trp^Se^-Ty^-D-Leu6-Leu7-Arg8-Pro9-NHEt -Sequência ID N°.2 - e é descrita e reivindicada na Patente US 4,005,063.) Tipicamente, valores de pA2 de 9,5 ou superiores são indicativos de boa potência antagonista de LHRH.

Os resultados destes testes para compostos representativos de acordo com a presente invenção estão apresentados na Tabela 2.

Tabela 2

Exemplo CM < Q. 1 11,26 3 11,22 4 10,35 5 10,68

Os antagonistas de LHRH da invenção são também úteis para o controlo da reprodução tanto em fêmeas como em machos. Os compostos da invenção são úteis para suprimir os níveis de gonadotropinas e androgénios. 18 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Na prática do método da presente invenção uma quantidade eficaz de um composto da invenção ou de uma composição farmacêutica contendo os antagonistas, é administrada ao humano ou animal com necessidade de, ou desejando, tal tratamento. Estes compostos ou composições podem ser administrados por qualquer uma de várias vias dependendo da utilização final específica, incluindo as vias oral, parentérica (incluindo administração subcutânea, intramuscular e intravenosa), vaginal (particularmente para contracepção), rectal, bucal (incluindo sublingual), transdérmica ou intranasal. A via mais adequada em qualquer caso particular dependerá da utilização, do ingrediente activo em particular, do indivíduo envolvido, e da opinião do médico assistente. O composto ou a composição podem também ser administradas por meio de formulações de libertação lenta, de depósito ou de implante como descrito com mais detalhe adiante.

Em geral, para modular os níveis de hormonas sexuais em mamíferos machos ou fêmeas para as utilizações atrás descritas, é expedito administrar o ingrediente activo em quantidades entre cerca de 0,01 e 10 mg/kg de peso corporal por dia, preferivelmente entre cerca de 0,1 e 5,0 mg/kg de peso corporal por dia. Esta administração pode ser conseguida através de uma única administração diária, por distribuição ao longo de várias aplicações ou por libertação lenta de modo a conseguir os resultados mais eficazes. A dose e o regime de administração exactos destes compostos e -composições dependerão necessariamente das necessidades do indivíduo a tratar, do tipo de tratamento, do grau de gravidade ou necessidade e da opinião do médico assistente. Em geral, a administração parentérica requer dosagens inferiores às dos outros métodos de administração que dependem mais da absorção.

Um aspecto adicional da presente invenção refere-se a composições farmacêuticas contendo como ingrediente activo um composto da presente invenção, composições estas que compreendem um tal composto em mistura com um transportador não tóxico farmaceuticamente aceitável. Tal como atrás mencionado, estas composições podem ser preparadas para utilização para administração parentérica (subcutânea, intramuscular ou intravenosa), particularmente na forma de soluções ou suspensões líquidas; para utilização em administração vaginal ou rectal, particularmente em formas semi-sólidas 19 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ como cremes e supositórios; para administração oral ou bucal, particularmente na forma de comprimidos ou cápsulas, ou intranasal, particularmente na forma de pós, gotas nasais ou aerossóis.

As composições podem convenientemente ser administradas numa forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por qualquer dos métodos bem conhecidos na arte farmacêutica, por exemplo como descrito em Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA., 1970. As formulações para administração parentérica podem conter como excipientes comuns água estéril ou solução salina, polialquilenoglicóis tais como polietilenoglicol, óleos de origem vegetal, naftalenos hidrogenados e semelhantes. As formulações para administração por inalação podem ser sólidas e conter como excipientes, por exemplo, lactose, ou podem ser soluções aquosas ou oleosas para administração na forma de gotas nasais. Para administração bucal, os excipientes típicos incluem açúcares, estearato de cálcio, estearato de magnésio, amido pré-gelatinizado, e semelhantes. É particularmente desejável a entrega dos compostos da presente invenção ao indivíduo ao longo de períodos de tempo prolongados, por exemplo, durante períodos de uma semana a um ano a partir de uma única administração. Podem-se utilizar várias formas de dosagem de libertação lenta, de depósito ou de implante. Por exemplo, uma forma de dosagem pode conter um sal não tóxico, farmaceuticamente aceitável, de um composto da invenção que tenha um baixo grau de solubilidade nos fluidos corporais, por exemplo, (a) um sal de adição de ácido com um ácido polibásico tal como ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido tânico, ácido pamóico, ácido algínico, polilácido glutâmico), ácidos monossulfónicos ou dissulfónicos de naftaleno, polilácido galacturónico), e semelhantes; (b) um sal com um catião metálico polivalente tal como zinco, cálcio, bismuto, bário, magnésio, alumínio, cobre, cobalto, níquel, cádmio e semelhantes, ou com um catião orgânico formado a partir de e.g., Ν,Ν’-dibenziletilenodiamina ou etilenodiamina; ou (c) combinações de (a) e (b) e.g. um sal tanato de zinco. Adicionalmente, os compostos da presente invenção ou, preferivelmente, um sal relativamente insolúvel tal como os que se descreveram acima, podem ser formulados num gel, por exemplo, um gel de monoestearato de alumínio com, e.g. óleo de sésamo, adequado para injecção. São sais particularmente preferidos os sais de zinco, os sais tanato de zinco, os sais pamoato, e semelhantes. Outro tipo de 20 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ formulação de depósito de libertação lenta para injecção conterá o composto ou o sal disperso ou encapsulado num polímero não tóxico, não antigénico, de degradação lenta, tal como um polímero de poli(ácido láctico)/poli(ácido glicólico) por exemplo como descrito na Patente US No. 3,773,919. Os compostos da invenção ou, preferivelmente, sais relativamente insolúveis tais como os descritos acima, podem também ser formulados em peletes de matriz de colesterol, particularmente para utilização em animais. São bem conhecidas da literatura formulações adicionais de libertação lenta, de depósito ou de implante, e.g. lipossomas. Veja-se, por exemplo, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson ed.. Mareei Dekker, Inc., New York, 1978. Uma referência particular a compostos do tipo LHRH pode ser encontrada, por exemplo, na Patente US No. 4,010,125. Síntese dos Compostos da Invenção

Em geral, os compostos da presente invenção são sintetizados por técnicas conhecidas dos peritos na arte como, por exemplo, pela denominada síntese peptídica em "fase sólida" ou por métodos usuais de química em fase de solução. Pode encontrar-se uma resumo de técnicas de síntese peptídica em fase sólida em J.M. Stewart e J.D. Young, So/id Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, 1963 e J. Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides, Vol. 2., p.46, Academic Press (New York), 1973. Para a síntese clássica em solução veja-se G. Schroder e K. Lupke, The Peptides, vol. 1, Academic Pres (New York), 1965.

Em geral, estes métodos compreendem a adição sequencial de um ou mais aminoácidos ou aminoácidos adequadamente protegidos a uma cadeia peptídica em crescimento ligada a uma resina adequada. Os aminoácidos de partida estão comercialmente disponíveis ou, quando novos nos compostos da presente invenção, são sintetizados por métodos detalhados adiante a partir dos materiais de partida prontamente disponíveis.

Normalmente, o grupo amino ou carboxilo do primeiro aminoácido é protegido por um grupo protector adequado. O aminoácido protegido ou derivatizado pode ser fixado a um suporte sólido inerte (resina) ou utilizado em solução por adição do aminoácido seguinte na sequência possuindo o grupo complementar (amino ou carboxilo) adequadamente protegido, sob condições que conducentes à formação da ligação peptídica. 0 grupo protector é então

86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 21 removido deste resíduo de aminoácido recentemente adicionado e é adicionado o aminoácido seguinte (adequadamente protegido), e assim por diante. Após todos os aminoácidos desejados estarem ligados na sequência correcta, são removidos quaisquer grupos protectores remanescentes, sequencial ou concurrentemente, e a cadeia peptídica, se sintetizada pelo método em fase sólida, é clivada do suporte sólido para produzir o polipéptido final. Por simples modificação deste procedimento geral, é possível adicionar mais do que um aminoácido de cada vez a uma cadeia em crescimento, por exemplo, por acoplamento (sob condições que não recemizam centros quirais) um tripéptido protegido com um dipéptido correctamente protegido para formar, após desprotecção, um pentapéptido.

Um método particularmente preferido para a preparação de péptidos envolve síntese peptídica em fase sólida. Neste método de preparação péptidos, a função a/fa-amino dos aminoácidos é protegida por um grupo sensível a ácidos ou bases. Estes grupos protectores devem ter as propriedades se serem estáveis nas condições de formação da ligação peptídica, sendo ao mesmo tempo prontamente removíveis sem destruição da cadeia peptídica em crescimento ou racemização de quaisquer dos centros quirais neles contidos. Os grupos protectores adequados são t-butiloxicarbonilo (BOC), benziloxicarbonilo (Cbz), bifenilisopropiloxicarbonilo, t-amiloxicarbonilo, isoborniloxicarbonilo, (a//a,a//a)-dimetil-3,5-dimetoxibenziloxicarbonilo, o-nitrofenilsulfenilo, 2-ciano-t-butiloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo e semelhantes. O grupo protector t-butiloxicarbonilo ("BOC" ou "t-BOC") é preferido.

Os grupos protectores das cadeias laterais particularmente preferidos são, para os grupos amino de cadeias laterais como na lisina e na arginina: nitro, p-toluenossulfonilo, 4-metoxibenzenossulfonilo, Cbz, BOC e adamantiloxicarbonilo; para a tirosina: benzilo, o-bromobenziloxicarbonilo, 2,6-diclorobenzilo, isopropilo, ciclo-hexilo, ciclopentilo e acetilo; para a serina: benzilo e tetra-hidropiranilo; para a histidina: benzilo, Cbz, p-toluenossulfonilo e 2,4-dinitrofenilo; para o triptofano: formilo.

No método de síntese peptídica em fase sólida, o aminoácido C-terminal é fixado a um suporte sólido adequado. Os suportes sólidos adequados úteis para a síntese anterior são os materiais que são inertes para os reagentes e nas condições reaccionais das reacções de condensação-desprotecção por passos. 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 22

bem como são insolúveis nos meios solventes utilizados. Os suportes sólidos adequados são polímero de clorometilpoliestireno-divinilbenzeno, polímero de hidroximetilpoliestireno-divinilbenzeno, e semelhantes. O polímero de clorometilpoliestireno-1 % de divinilbenzeno é especialmente preferido. Para o caso especial em que o terminal C do composto é glicinamida, um suporte particularmente útil é o polímero de benzidrilaminopoliestireno-divinilbenzeno descrito por P. Rivaille, et al, Helv. Chim. Acta.. 54, 2772 (1971). O acoplamento à resina do tipo clorometilpoliestireno-divinilbenzeno é feito por meio da reacção do aminoácido a//a-N-protegido, especialmente o BOC-aminoácido, na forma do seu sal de césio, tetrametilamónio, trietilamónio, 1,5-diazabiciclo-[5.4.0]undec-5-eno, ou similar. A reacção de acoplamento é realizada num solvente tal como etanol, acetonitrilo, N,N-dimetilformamida (DMF), e semelhantes, com a resina de clorometilo a uma temperatura elevada, por exemplo entre cerca de 40° e 60°C, durante de cerca de 1 2 a 48 horas. Os reagentes e condições reaccionais preferidos envolvem o acoplamento do sal de césio de um a/fa-N-BOC-aminoácido com a resina em DMF a cerca de 50°C durante cerca de 24 horas. 0 a/fa-N-BOC-aminoácido é fixado à resina de benzidrilamina por meio de Ν,Ν'-diciclo-hexilcarbodiimida (DCC) ou N,N'-diisopropilcarbodiimida (DIC) com ou sem 1 -hidroxibenzotriazolo (HOBt), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetilamino)fosfónio (BOP) ou cloreto de bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfina (BOPCI), acoplamento mediado durante de cerca de 1 a cerca de 24 horas, preferivelmente cerca de 1 2 horas, a uma temperatura de entre cerca de 10° e 50°C, mais preferivelmente 25°C num solvente tal como diclorometano ou DMF, preferivelmente diclorometano. O acoplamento do grupo carboxilo ao N-metil-Ser(OBzl) fixado à resina peptídica requer catálise por 4-dimetilaminopiridina (DMAP), em adição ao reagente de carbodiimida. O acoplamento de aminoácidos sucessivos protegidos pode ser realizado num sintetizador automático de polipéptidos como é bem conhecido na arte. A remoção dos grupos a/7a-N-protectores pode ser realizada na presença de, por exemplo, uma solução de ácido trifluoroacético em cloreto de metileno, cloreto de hidrogénio em dioxano, cloreto de hidrogénio em ácido acético, ou outra solução de ácido forte, preferivelmente ácido trifluoroacético a 50% em diclorometano próximo da temperatura ambiente. Cada aminoácido protegido é preferivelmente introduzido numa concentração de 0,4 M e excesso molar de aproximadamente 3,5 e o acoplamento pode ser realizado em diclorometano,

86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ misturas de diclorometano/DMF, DMF e semelhantes, especialmente em cloreto de metileno próximo da temperatura ambiente. O agente de acoplamento é normalmente DCC em diclorometano mas pode ser Ν,Ν’-diisopropilcarbodiimida (DIC) ou outra carbodiimida quer sozinha quer na presença de HOBt, N-hidroxissuccinimida, outras N-hidroxiimidas ou oximas. Alternativamente, podem-se utilizar, um éster activo do aminoácido protegido (e.g. p-nitrofenilo, pentafluorofenilo e semelhantes) ou anidridos simétricos.

As modificações na cadeia lateral nas posições 5 e 6 dos péptidos da presente invenção são realizadas por métodos detalhados abaixo nas Preparações A-G.

Preparação A N-(t-Butoxicarbonil)-N-Metil-[4-(Morfolino-N'-metil)1Fenilalanina

Sintetiza-se BOC-N-Me-(4-clorometil)fenilalanina a partir de BOC-N-Me-Phe utilizando um procedimento sintético análogo ao descrito em U.S. 4,026,887 para a 4-(clorometil)fenilalanina.

Aquece-se uma mistura de N-trifluoroacetil-N-metilfenilalanina (1 equivalente) e cloreto de zinco (0,9 a 2,2 equivalentes) em éter clorometflico, a 65°C durante 10-24 h. O excesso de reagente é removido in vacuo e o resíduo é dissolvido em CH2CI2, lavado com solução saturada de NaHC03, depois com solução saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica é seca (Na2S04) e concentrada. O produto em bruto é purificado por cromatografia em coluna para originar o éster metílico de 4-(clorometil)fenilalanina. Este é tratado com ácido clorídrico aquoso para clivar o éster metílico. O cloridrato de N-metil-(4-clorometil)fenilalanina é tratado com carbonato de di-t-butilo (1,2 equivalentes) na presença de trietilamina (1 equivalente) em THF a 0°C durante 1 h. Após tratamento e purificação obtém-se BOC-N-metil-(4-clorometil)fenilalanina. Esta é dissolvida em etanol na presença de excesso de morfolina e aquecida a 60-100°C durante 2 h. Após tratamento e purificação obtém-se BOC-N-metil-(4-morfolinometil)fenilalanina. Esta é tratada com um equivalente de ácido p-toluenossulfónico para obter o sal p-toluenossulfonato de BOC-NMe-4-(Morfolinometil)fenilalanina, que é subsequentemente utilizado na síntese peptídica em fase sólida. 24 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Preparação Β

Quando é utilizado ο procedimento descrito em Preparação A mas a morfolina é substituída pelas aminas ou aminas secundárias apropriadas, obtêm-se os aminoácidos seguintes na forma dos sais tosilato que são subsequentemente utilizados na síntese de antagonistas de LHRH da presente invenção: N-(t-Butoxicarbonil)-N-met N-(t-Butoxicarbonil)-N-met N-(t-Butoxicarbonil)-N-met N-(t-Butoxicarbonil)-N-met N-(t-Butoxicarbonil)-N-met N-(t-Butoxicarbonil)-N-met N-(t-Butoxicarbonil)-N-met N-(t-Butoxicarbonil)-N-met l-[4-(piperidino)N'-metil]fenilalanina. l-[4-(N-pirrolidino)N'-metil]fenilalanina. l-[4-(N'-acetilpiperazino-N"-metil))fenilalanina. l-[4-(dietilamino)-N’-metil]fenilalanina. l-[4-(di-t-butilamino)-N’-metil]fenilalanÍna. l-[4-(dimetilamino)-N'-metil]fenilalanina. l-[4-(diisopropilamino)N’-metil]fenilalanina. l-[4-(N-propilamino)N'-metil]fenilalanina.

Preparação C N-(t-Butoxicarbonil)-D-í4-(Morfolino)-N-metil1Fenilalanina

Utiliza-se o procedimento descrito em Preparação B mas substituindo BOC-N-Me-Phe por BOC-N-D-Phe. Após tratamento e purificação obtém-se N-(t-butoxicarbonil)-N-D-[4-(morfolino)-N'-metil]fenilalanina na forma do sal tosilato.

Preparação D

Quando se utiliza o procedimento descrito em Preparação C mas a morfolina é substituída pelas aminas primárias e secundárias apropriadas, obtêm-se os D-aminoácidos seguintes na forma de sais tosilato, que subsequentemente são utilizados na síntese de antagonistas de LHRH: N-(t-Butoxicarbonil)-D-(4-(piperidino-N'-metil))fenilalanina. N-(t-Butoxicarbonil)-D-(4-(pirrolidino-N'-metil))fenilalanina. N-(t-Butoxicarbonil)-D-(4-(N'-acetil)-N"-piperazinometil))fenilalanina. N-(t-Butoxicarbonil)-D-(4-(dietil)-N'-metil))fenilalanina. N-(t-Butoxicarbonil)-D-(4-(di-t-butil)-N'-metil))fenilalanina. N-(t-Butoxicarbonil)-D-(4-(dimetil)-N'-metil))fenilalanina. 25 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ N-(t-Butoxicarbonil)-D-(4-(diisopropil)-N'-metil))fenilalanina. N-(t-Butoxicarbonil)-D-(4-(propil)metil)-N'-fenilalanina. N-(t-Butoxicarbonil)-D-(4-(etil)metil)-N’-fenilalanina. N-(t-Butoxicarbonil)-D-(4-(fenil)metil)-N'-fenilalanina. N-(t-Butoxicarbonil)-D-(4-(benzil)metil)-N'-fenilalanina. N-(t-Butoxicarbonil)-D-{4-[p-clorobenzil]-N'-metil}fenilalanina. N-(t-Butoxicarbonil)-D-{4-[p-fluorobenzil]-N'-metil}fenilalanina. N-(t-Butoxicarbonil)-D-{4-[p-nitrobenzil]-N'-metil}fenilalanina.

Preparação E N-(t-Butoxicarbonil)-N-Metil-(4-FMOC-aminometil)Fenilalanina BOC-N-Me-(4-clorometil)fenilalanina, obtida de acordo com o procedimento descrito em Preparação A, é aquecida sob refluxo durante 4 a 24 h com excesso de azida de sódio e uma quantidade catalítica de iodeto de sódio em metanol. O resíduo é tratado com ácido clorídrico diluído até pH 6 e extraído com acetato de etilo. Os extractos orgânicos são secos e concentrados para obter B0C-N-metil(4-azidometi!)fenilalanina. Esta é hidrogenada sobre catalisador Pd/C em metanol para produzir B0C-N-metil-(4-aminometil)fenilalanina. Este último composto é tratado com clorocarbonato de 9-fluorenilmetilo sob condições básicas como descrito na página 24 de "The Practice of Peptide Synthesis" por M. Bodanszky e A. Bodanszky. Após tratamento e purificação obtém-se N-(t-butoxicarbonil)-N-metil-(4-FM0C-aminometil)fenilalanina (veja-se o Esquema 1). 26 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Me Ο

NaCN

Me Ο

Esquema 1 Me O

NaBH3C03CCF3 ou Ni Raney/Hj

Me O

27 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Preparação F N-(t-Butoxicarbonil)-D-(4-FMOC-aminometil)Fenilalanina

Sintetiza-se BOC-D-(4-clorometil)fenilalanina de acordo com Preparação C atrás descrita. O produto é primeiro tratado com azida de sódio em metanol, utilizando condições análogas às descritas em Preparação E, e depois é hidrogenado para obter N-BOC-D-(4-aminometil)fenilalanina que é substituída com FMCC, como descrito anteriormente, para produzir N-(t-Butoxicarbonil)D-(4-FMOC-aminometil)Fenilalanina.

Preparação G N-(t-Butoxicarbonil)-N-Metil-(4-FMOC-aminoetil)Fenilalanina BOC-N-Me-(4-clorometil)fenilalanina, obtida de acordo com o procedimento descrito em Preparação A, é aquecida sob refluxo durante 4 a 24 h com excesso de cianeto de sódio e uma quantidade catalítica de iodeto de sódio em metanol. O resíduo é tratado com ácido clorídrico diluído até pH 6, e extraído com acetato de etilo. Os extractos orgânicos são secos e concentrados para obter BOC-N-metil(4-cianometil)fenilalanina. Esta é hidrogenada sobre catalisador Ni de Raney em metanol ou tratada com trifluoroacetoxiboro-hidreto de sódio em THF [N. Umino et. al, Tetrahedron Letters 2875-2826 (1976)] para produzir BOC-N-metil-(4-aminoetil)fenilalanina. Este último composto é tratado com clorocarbonato de 9-fluorenilmetilo sob condições básicas como descrito na página 24 de "The Practice of Peptide Synthesis" por M. Bodanszky e A. Bodanszky. Após tratamento e purificação obtém-se N-(t-butoxicarbonil)-N-metil-(4-FMOC-aminoetil)fenilalanina. Veja-se o Esquema 2.

Exemplo 1 NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe(4-NOo)Phe-D-Cit-Leu-Arq-Pro-DalaNH?

No vaso reaccional de um sintetizador de péptidos Milligen-Biosearch 9500 colocou-se 1 g (0,6 mmol) de D-Ala-NH-resina (resina 4-metil-benzidrilamina). Os aminoácidos foram adicionados sequencialmente de acordo com o ciclo sintético seguinte: 1. O desbloqueio, para remover o grupo t-BOC da função alfa-amino do péptido, foi realizado utilizando uma solução de ácido trifluoroacético a 45% (TFA), 28 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ anisolo a 2,5%, dimetilfosfito a 2,0%, e cloreto de metileno a 50,5%. A resina foi pré-lavada com a solução de desbloqueio durante um minuto e depois correu-se a reacção de desbloqueio durante 20 minutos. 2. A lavagem com base, para remover e neutralizar o TFA utilizado para a desprotecção, foi realizada utilizando uma solução de Ν,Ν'-diisopropiletilamina a 10% em cloreto de metileno. A resina foi lavada com base três vezes durante um minuto de cada vez após um passo de desbloqueio. 3. A reaccão de acoplamento foi realizada utilizando um excesso molar de 3 vezes de solução 0,3 M de DMF de um derivado de aminoácido protegido com t-BOC juntamente com um excesso molar de 3 vezes de solução de cloreto de metileno 0,3 M de diisopropilcarbodiimida como activador. O aminoácido activado foi então acoplado ao grupo alfa-amino livre do péptido-resina. O tempo da reacção foi como descrito no protocolo de síntese. 4. Lavagem, cada passo reaccional foi seguido por três lavagens de um minuto cada: uma com cloreto de metileno, uma com cloreto de metileno/DMF (1:1), e uma com DMF.

Protocolo de síntese: Os aminoácidos amino-protegidos foram acoplados à resina com # a seguinte ordem, número, e duração de acoplamentos: Aminoácido Acoplamento 1. BOC-Pro dois-1 h 2. BOC-Arg(Tos) dois-1 h 3. BOC-Leu dois-1 h 4. BOC-D-Cit dois-1 h 5. B0C-NMe-(4-N02)Phe dois-1 h 6. BOC-Ser(OBzl) dois-1 h 7. BOC-D-3Pal dois-6h 8. B0C-D-4CIPhe dois-2h 9. B0C-D-2Nal dois-2h 10. Ácido acético dois-2h de acordo 29 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Depois de completa a síntese, o péptido-resina foi então seco durante a noite sobre P205 sob vácuo e depois tratado com HF seco na presença de anisolo a 0°C durante 1,25 h para clivar o péptido da resina. O excesso de reagente foi removido in vacuo. A resina foi lavada primeiro com éter, depois foi agitada à temperatura ambiente com uma solução de água/acetonitrilo/ácido acético (1:1:0,1) (50 ml) durante 15 minutos, e filtrada. O filtrado foi liofilizado para obter o péptido em bruto na forma de um pó fofo. Este foi purificado por HPLC utilizando uma coluna Dynamax C-18 (25 x 2,5 cm) (8 micra) com misturas de solventes variando num gradiente a partir de 89% de H20/11 % de CH3CN/0,1 % de TFA ao longo de um período de 20 minutos. 0 detector de UV foi regulado para 260 nm. 0 produto foi eluído a 40,40 min como um único pico, recolhido e liofilizado para originar NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4N02)Phe-DCit-Leu-Arg-Pro-DAIaNH2 puro na forma do sal trifluoroacetato. Espec. de massa FAB m/e 1473.(M + H) + . Anal. de aminoácidos: 1,01 Ala; 1,03 Pro; 0,95 Arg; 1,01 Leu; 1,00 Cit; 0,42 Ser; 1,05 3 Pal; 1,09 4CIPhe.

Exemplo 2 NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe(4-N0,)Phe-D-Lvs(Nic)-Leu-Lvs(lsp)-Pro-D-

AlaNHo

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 1 mas substituindo o BOC-D-Cit por BOC-DLys(Nic) e o BOC-Arg(Tos) por BOC-Lys(lsp,Cbz). Depois de completa a síntese, o péptido-resina é seco sobre P205 durante a noite e subsequentemente é tratado com HF/anisolo utilizando as condições descritas atrás. Após tratamento e liofilização, o péptido é purificado por HPLC para obter NAc-D2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe(4-N02)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-D-AlaNH2 na forma do sal trifluoroacetato.

Exemplo 3 NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-DLvs(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 2 mas substituindo o BOC-NMe-(4-N02)Phe por BOC-NMe-(4-FMOC-amino)Phe. Depois de completa a síntese, o péptido-resina é tratado com piperidina a 30%/DMF durante 2 a 24 h, para clivar o grupo FMOC da posição Ν-4-amino do resíduo N-Me-Phe5. O péptido-resina é lavado, 3 vezes com cloreto de metileno, 3 vezes com DMF, e

86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 30 é feito reagir com um excesso de 10 a 20 vezes de difenilcianocarboimidato em DMF durante a noite (veja-se o Esquema 2 adiante), é lavado, 3 vezes com cloreto de metileno, 3 vezes com DMF, e depois é feito reagir um excesso de 20 a 100 vezes de hidrazina em DMF durante a noite. O péptido-resina é lavado, como anteriormente descrito, seco sobre P205 durante a noite, e tratado com HF/anisolo como anteriormente. Após tratamento e liofilização obtém-se o produto em bruto. Este produto é purificado por HPLC para produzir Nac-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2 na forma do sal trifluoroacetato.

Rt= 20,56 min; Espec. de massa FAB m/e 1615 (M + H). Anal. de aminoácidos: 1,03 Ala; 0,98 Pro; 1,02 Lys(lsp); 0,98 Leu; 1,00 Lys; 0,51 Ser.

Esquema 2

31 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Exemplo 4 NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMeTvr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lvs(lsp)-Pro-D-

AlaNHo

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 3 mas substituindo o BOC-NMe-(4-N-FM0C)Phe por B0C-N-Me-Tyr(0-3-Br-Cbz), e o BOC-DLys(Nic) por BOC-D-(4-N-FMOC)Phe. Depois de completa a síntese, o péptido-resina é tratado com piperidina a 30%/DMF durante 2 a 24 h, para clivar o grupo protector FMOC do grupo 4-amino no resíduo NMe-D-Phe6. O péptido-resina é lavado, 3 vezes com cloreto de metileno, 3 vezes com DMF, e feito reagir com um excesso de 10 a 20 vezes de difenilcianocarboimidato em DMF durante a noite, lavado, 3 vezes com cloreto de metileno, 3 vezes com DMF, e depois feito reagir um excesso de 20 a 100 vezes de hidrazina em DMF durante a noite. 0 péptido-resina é novamente lavado, como descrito anteriormente, seco sobre P205 durante a noite, e tratado com HF/anisolo como atrás. Após tratamento e liofilização obtém-se o produto em bruto. Este produto é purificado por HPLC para obter NAc-D-2Nal-D-CIPhe-D-3Pal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Rt= 17,61 min; Espect. de massa FAB m/e 1545 (M + H). Anal. de aminoácidos: 1,01 Ala; 1,00 Pro; 0,91 Lys(lsp); 1,00 Leu; 1,05 NMeTyr; 0,50 Ser; 0,98 3Pal; 1.00 4CIPhe.

Exemplo 5 NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lvs(lsp)-

Pro-P-AlalMH,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 4 mas substituindo o BOC-NMeTyr(0-3Br-Cbz) por BOC-NMe(4-FMOC-amino)Phe. Depois de completa a síntese, o péptido-resina é tratado com piperidina a 30%/DMF durante 2 a 24 h, para clivar os grupos protectores FMOC dos grupos 4-amino dos resíduos Nme-Phe5 e D-Phe6. O péptido-resina é lavado 3 vezes com cloreto de metileno, 3 vezes com DMF, e feito reagir com um excesso de 10 a 20 vezes de difenilcianocarboimidato em DMF durante a noite, lavado 3 vezes com cloreto de metileno, 3 vezes com DMF, e depois feito reagir com um excesso de 20 a 100 vezes de hidrazina em DMF durante a noite. O péptido-resina é novamente lavado, como anteriormente descrito, seco sobre P205 durante a noite, e tratado com HF/anisolo como atrás. Após tratamento e liofilização obtém-se o produto 32 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ em bruto. Este produto é purificado por HPLC para obter NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Rt= 14,83 min; Espect. de massa FAB m/e 1626 (M + H). Anal. de aminoácidos: 1,01 Ala; 1,00 Pro; 0,89 Lys(lsp); 1,00 Leu; 1,00 Lys; 0,5 Ser; 1,02 3Pal; 0,92 4CIPhe.

Exemplo 6 NAc-D-2Nal-D-CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-Lvs(Nic)-Leu-Arq-Pro- DAIaNH,

Utilizou-se o procedimento descrito no Exemplo 3 mas substituindo o BOC-Lys(lsp,Cbz) por BOC-Arg(Tos). Depois de completa a síntese, a resina peptídica é seca sobre P205 durante a noite e depois tratada com HF/anisolo, como descrito atrás, para clivar o péptido da resina e os grupos protectores. Após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtém-se NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 7 NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMeTvr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Arq-Pro-D-AlaNH,

Utilizou-se o procedimento descrito no Exemplo 4 mas substituindo o BOC-Lys(lsp,Cbz) por BOC-Arg(Tos). Depois de completa a síntese, a resina peptídica é seca sobre P205 durante a noite e depois tratada com HF/anisolo, como descrito atrás, para clivar o péptido da resina e os grupo protectores. Após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtém-se NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Arg-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 8 NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Arq-Pro- DAIaNH,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 5 mas substituindo o BOC-Lys(lsp,Cbz) por BOC-Arg(Tos). Depois de completa a síntese, a resina peptídica é seca sobre P20)5 durante a noite e depois é tratada com HF/anisolo, como descrito atrás, para clivar o péptido da resina e os grupo protectores. Após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtém-se NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D(4-Atza)Phe-Leu-Arg-Pro-DAIaNH2. 33 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Exemplo 9 NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lvs(lsp)-Pro- DAIaNH,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 3 mas substituindo o BOC-D-2-Nal por BOC-Sar e o BOC-D-3-Pal por BOC-D-1-Nal. Depois de completa a síntese, a resina peptídica é seca sobre P205 durante a noite e depois é tratada com HF/anisolo, como descrito atrás, para clivar o péptido da resina e os grupos protectores. Após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtém-se NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 10 NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Morphme)Phe-DLvs(Nic)-Leu-Lvs(lsp)-

Pro-DAIaNHo

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 3 mas substituindo o BOC-N-Me-(4-N-FMOC)Phe por sal tosilato de BOC-N-Me(4-morfolinometil)Phe e prolongando o tempo do acoplamento no protocolo de síntese para dois-6h. Após tratamento com HF/anisolo, liofilização e purificação por HPLC, como descrito atrás, obtém-se Nac-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Morphme)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 11 NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Morphme)Phe-D-(4-Morphme)Phe-Leu-

Lvs(lsp)-Pro-DAIaNH2

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 10 mas substituindo o BOC-D-Lys(Nic) por BOC-D-(4-morfolinometil)Phe. Após tratamento do péptido-resina com HF/anisolo, tratamento da reacção, liofilização e purificação do produto, obtém-se NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Morphme)Phe-D-(4-Morphme)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2. 34 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Exemplo 12 NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-Tvr-D-(4-Morphme)Phe-Leu-Lvs(lsp)-Pro- DAIaNH,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 11 mas substituindo o tosilato de BOC-N-Me(4-morfolino-N'-metil)Phe por B0C-N-Me-Tyr(0-3-Br-Cbz). Após tratamento do péptido-resina com HF/anisolo, tratamento da reacção, liofilização e purificação do produto, obtém-se NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-D-(4-Morphme)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 13 NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Morphnie)Phe-DLvs(Nic)-Leu-Arg-Pro- DAIaNH-,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 10 mas substituindo o BOC-Lys(lsp,Cbz) por BOC-Arg(Tos). Após tratamento do péptido-resina com HF/anisolo, tratamento da reacção, liofilização e purificação do produto, obtém-se NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Morphme)Phe-DLys{Nic)-Leu-Arg-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 14

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 10 mas substituindo pelos BOC-aminoácidos apropriados descritos em Preparação D o tosilato de BOC-N-Me-4(morfolino-N'-metil)Phe. Após tratamento e purificação por HPLC, obtêm-se os seguintes compostos: NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe4(piperidino-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-

Arg-Pro-DAIaNH2. NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4(pirrolidino-N’-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-

Arg-Pro-DAIaNH2. NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe4-(N’-acetil-N"-piperazinometil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-Pro-DAIaNH2 . 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(dietil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-

Pro-DAIaNH2. NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(di-t-butil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-

Arg-Pro-DAIaNH2. NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(dimetil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-

Pro-DAIaNH2. NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(diisopropil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-

Arg-Pro-DAIaNH2. NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(dipropil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg

Pro-DAIaNH2. NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(propil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-

Pro-DAIaNH2. NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(etil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-Pro DAIaNH2. NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(fenil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-

Pro-DAIaNH2: NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(benzil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-Leu-Arg-

Pro-DAIaNH2. NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(p-clorobenzil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-

Leu-Arg-Pro-DAIaNH2. NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(p-fluorobenzil-N'-metil)Phe-DLys(Nic)-

Leu-Arg-Pro-DAIaNH2. NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe-4-(p-nitro-benzil-N’-metil)Phe-DLys(Nic)-

Leu-Arg-Pro-DAIaNH2. 36 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Exemplo 15 NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-Lvs(Nic)-Leu-Lvs(lsp)-Pro- DAIaNH-,.

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 9 mas substituindo o BOC-D-(4-Atza)Phe por BOC-Lys(Nic). Após tratamento do péptido-resina com HF/anisolo, tratamento da reacção, liofilização e purificação do produto, obtém-se NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-

Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2

Exemplo 16 NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-DLvs(Nic)-Leu-Lvs(lsp)-Pro- DAIaNH,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 3 mas substituindo o BOC-NMe-[4-FMOC-amino]Phe por BOC-NMe-[4(FMCC)aminometil)]Phe. Após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtém-se NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNFI2.

Exemplo 17 ΝΑο-Ρ2Ν3ΐ-Ρ40Ρ06-Ρ3Ρ3ΐ-36Γ-ΝΜθ(4-Αΐζ3ηη6)ΡΙΐ6-Ρίν3(Νΐο)-ί6υ-ίν5(ΐ5Ρ)-ΡΓθ- DAIaNH,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 16 mas substituindo o BOC-DLys(Nic) por BOC-D-[4-(FMOC)aminometil)]Phe. Após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtém-se NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-D-(4-Atzame)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 18 NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-DLvs(Nic)-Leu-Hara(Et2)-Pro- DAIaNH,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 3 mas substituindo o BOC-Lys(lsp,Cbz) por sal tosilato de BOC-Harg(Et2). Após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtém-se NAc-P2Nal-P4CIPhe-P3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-DLys(Nic)-Leu-Harg(Et2)-Pro-DAIaNH2. 37 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Exemplo 19 NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Hara(Et2)-

Pro-DAIaNHo

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 18 mas substituindo o BOC-D-Lys(Nic) por B0C-D-(4-Atza)Phe. Após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtém-se NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Harg(Et2)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 20

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 9 mas substituindo com os aminoácidos protegidos apropriados, que foram descritos atrás. Após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtém-se NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2 e, após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtém-se NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMeTyr-D-(4Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 21

Utilizam-se os procedimentos descritos nos Exemplos 9 e 20 mas substituindo o BOC-D-1-Nal por BOC-D-3-Bal. Após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtêm-se os seguintes compostos: NAc-Sar-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2. NAc-Sar-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2. NAc-Sar-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 22

Utilizam-se os procedimentos descritos nos Exemplos 21 mas substituindo o BOC-D-3-Bal por BOC-D-1-Nal, o B0C-NMe-(4-Atza)Phe por BOC-NMe-(4-Atzame)Phe, e o BOC-D-(4-Atza)Phe por B0C-D-(4-Atzame)Phe. Após 38 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtêm-se os seguintes compostos: NAc-Sar-D4CIPhe-D-1 Nal-Ser-NMe-(4-Atzame)Phe-D-(4-Atzame)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2 . NAc-Sar-D4CIPhe-D-1 Nal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2. NAc-Sar-D4CIPhe-D-1 Nal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atzame)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 23

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 22 mas substituindo o BOC-D-1-Nal por BOC-D-3-Bal. Após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtêm-se os seguintes compostos: NAc-Sar-D4CIPhe-D-3Bal-Ser-NMe-(4-Atzame)Phe-D-(4-Atzame)Phe-Leu-

Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2. NAc-Sar-D4CIPhe-D-3Bal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2. NAc-Sar-D4CIPhe-D-3Bal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atzame)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2.

Exemplo 24 NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMeTvr-D-(4-lmame)Phe-Leu-Lvs(lsp)-Prto- DAIaNHo

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 5 mas substituindo o BOC-D-(4-FMOC-amino)Phe por BOC-D-(4-FMOC-aminometil)Phe. Depois de completa a síntese, a resina é tratada durante a noite com piperidina a 30% para remover o grupo FMOC, lavada várias vezes com CH2CI2, depois tratada com um excesso de 1,1 '-tiocarbonildiimidazolo em DMF durante 1 h (veja-se o Esquema 3 adiante). A resina é lavada novamente e tratada com um excesso de 39 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ N-BOC-etilenodiamina em CH2CI2/DMF (1:1) durante 4-24 h. A solução é drenada, a resina é lavada várias vezes com CH2CI2 e depois é tratada com um excesso de CH3I em CH2CI2/DMF (1:1) durante 4-24 h. O grupo protector BOC é removido por desbloqueio Standard e lavagem em condições básicas e a resina é tratada com diisopropiletilamina a 10%/ CH2CI2 durante 24 h. A solução foi drenada, a resina é lavada, seca sobre P205 e tratada com HF/anisolo. Após tratamento, liofilização e purificação por HPLC, obtém-se NAc-D-2-Nal-D-4-CIPhe-D-3-Pal-Ser-NMeTyr-D-(4-lmame)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-D-AlaNH2.

Esquema 3

O

Resina

40 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Exemplo 25 NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-(4-lmame)Phe-D-Lvs(Nic)-Leu-Lvs(lsp)-

Pro-DAIaNH,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 24 mas substituindo o B0C-NMeTyr(0-3Br-Cbz) por BOC-NMe-(4-FMOC-aminometil)Phe e o BOC-D-(4-FMOC-amino)Phe por BOC-DLys(Nic). Depois de completa a síntese, o péptido é clivado com HF/anisolo, tratado, liofilizado, e purificado por FIPLC para obter NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-(4-lmame)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2,

Exemplo 26 NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-(4-lmame)Phe-D-(4-lmame)Phe-Leu-

Lvs(lsp)-Pro-DAIaNH-,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 25 mas substituindo o BOC-DLys(Nic) por B0C-D-(4-FM0C-amino)Phe. Depois de completa a síntese, o péptido é clivado com HF/anisolo, tratado, liofilizado, e purificado por HPLC para obter NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-(4-lmame)Phe-D-(4-lmame)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 27 NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-Tvr-D-(4-Nicme)Phe-Leu-Lvs(lsp)-Pro- DAIaNH-,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 4 mas substituindo o BOC-D-(4-FMOC-amino)Phe por BOC-D-(4-FMOC-aminometil)Phe. Depois de completa a síntese, o grupo FMOC é removido por tratamento com piperidina a 30%/DMF e o grupo amino livre do resíduo D-(4-aminometil)Phe6 da resina peptídica é acoplado com ácido nicotínico utilizando o protocolo dois-6 h. A resina é seca e tratada com HF/anisolo. Após tratamento, liofilização, e purificação por HPLC, obtém-se NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-Tyr-D-(4-Nicme)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2. 41 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ

Exemplo 28 NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-Tvr-D-(4-Niceth)Phe-Leu-Lvs(lsp)-Pro- DAIaNHo

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 27 mas substituindo o BOC-D-(4-FMOC-aminometil)Phe por B0C-D-(4-FM0C-aminoetil)Phe. Depois de completa a síntese, o grupo FMOC é removido por tratamento com piperidina a 30%/DMF e o grupo amino livre do resíduo D-(4-aminoetil)Phe6 da resina peptídica é acoplado com ácido nicotínico utilizando o protocolo dois-6 h. A resina é seca e tratada com HF/anisolo. Após tratamento, liofilização, e purificação por HPLC, obtém-se NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-Tyr-D-(4-Niceth)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 29 NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-(4-Nicme)Phe-D-(4-Nicme)Phe-Leu-

Lvsdsol-Pro-DAIaNH-,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 27 mas substituindo o B0C-NMe-Tyr(0-3-Br-Cbz) por BOC-NMe-(4-FMOC-aminometil)Phe. Depois de completa a síntese, o grupo FMOC é removido por tratamento com piperidina a 30%/DMF e o grupo amino livre do resíduo D-(4-aminometil)Phe6 da resina peptídica é acoplado com ácido nicotínico utilizando o protocolo dois-6 h. A resina é seca e tratada com HF/anisolo. Após tratamento, liofilização, e purificação por HPLC, obtém-se NAc-DNa-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-(4-Nicme)PheD-(4-Nicme)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 30 NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-(4-Niceth)Phe-D-(4-Niceth)Phe-Leu-

Lvs(lso)-Pro-DAIaNH,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 29 mas substituindo o BOC-NMe-(4-FMOC-aminometil)Phe por BOC-NMe-(4-FMOC-aminoetil)Phe e o BOC-D-(4-FMOC-aminometil)Phe por BOC-D-(4-FMOC-aminoetil)Phe. Depois de completa a síntese, o grupo FMOC é removido por tratamento com piperidina a 30%/DMF e o grupo amino livre do resíduo D-(4-aminometil)Phe6 da resina peptídica é acoplado com ácido nicotínico utilizando o protocolo doís-6 h. A resina é seca e tratada com HF/anisolo. Após tratamento, liofilização, e 42 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ purificação por HPLC, obtém-se NAc-D-2-Nal-D-4-CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-(4-Niceth)Phe-D-{4-Niceth)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 31 NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Etcnq)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lvs(lsp)-Pro- DAIaNH,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 3 mas substituindo a hidrazina por etilamina e prolongando o tempo da reacção de 24 para 72 h. A resina é seca e tratada com HF/anisolo. Após tratamento, liofilização, e purificação por HPLC, obtém-se NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe{4-Etcng)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2.

Exemplo 32 NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMeTvr-D-(4-Etcng)Phe-Leu-Lvs(lsp)-Pro-D-

AlaNHo

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 4 mas substituindo a hidrazina por etilamina e prolongando o tempo de reacção de 24 para 72 h. O péptido-resina é seco sobre P205 durante a noite, e tratado com HF/anisolo como atrás. Após tratamento e liofilização obtém-se o produto em bruto. Este produto é purificado por HPLC para obter NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMeTyr-D-(4-'Etcng)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-D-AlaNH2.

Exemplo 33 NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe-(4-Etcnq)Phe-D-(4-Etcnq)Phe-Leu-

Lvs(lsp)-Pro-D-AlaNH,

Utiliza-se o procedimento descrito no Exemplo 5 mas substituindo a hidrazina por etilamina e prolongando o tempo de reacção de 24 para 72 h. O péptido-resina é seco sobre P205 durante a noite, e tratado com HF/anisolo como atrás. Após tratamento e liofilização obtém-se o produto em bruto. Este produto é purificado por HPLC para obter NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe-(4-Etcng)Phe-D-(4-Etcng)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-D-AlaNH2.

86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 43

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS (1) INFORMAÇÃO GERAL:

(i) REQUERENTE: ABBOTT LABORATORIES (ii) TÍTULO DO INVENTO: Antagonistas de LHRH possuindo resíduos aminoacilo modificados nas posições 5 e 6 (iii) NÚMERO DE SEQUÊNCIAS: 2 (iv) ENDEREÇO PARA CORRESPONDÊNCIA:

(A) DESTINATÁRIO: MODIANO JOSIF PISANTY & STAUB LTD (B) RUA: Baaderstr. 3

(C) CIDADE: MUNICH (D) ESTADO: (E) PAÍS: Alemanha (F) ZIP: 80469 (v) FORMA LEGÍVEL EM COMPUTADOR: (A) TIPO DE MEIO: Disquete

(B) COMPUTADOR: Compatível com PC da IBM

(C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) SUPORTE LÓGICO:Patentln Release #1.0, Versão #1.30

DADOS DO PEDIDO ACTUAL: (A) NÚMERO DO PEDIDO: EP 94905391.3 (B) DATA DE APRESENTAÇÃO: 14-DEZ-1993 (C) CLASSIFICAÇÃO: C07K 7/00 C07K 7/06 A61K 37/00 A61K 37/02 A61K 37/24 A61K 37/38 (vii) DADOS DE PEDIDO ANTERIOR: (A) NÚMERO DO PEDIDO: WO 94/14841 (B) DATA DE APRESENTAÇÃ0:14-DEZ-1 993 44 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ (vii) DADOS DE PEDIDO ANTERIOR: (A) NÚMERO DO PEDIDO: US 07/993,202 (B) DATA DE APRESENTAÇÃO: 18-DEZ-1 992 (viii) INFORMAÇÃO SOBRE REPRESENTANTE/AGENTE: (A) NOME: MODIANO Guido et ai (B) NÚMERO DE REGISTO: (C) NÚMERO DE REFERÊNCIA/CERTIFICADO: 387/GM/ms (ix) INFORMAÇÃO PARA TELECOMUNICAÇÕES: (A) TELEFONE: (0039-2) 86 92 442 (B) TELEFAX: (0049-89) 22 58 09 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N0:1: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 11 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOME/CHAVE: local modificado (B) LOCALIZAÇÃO: 1 (D) OUTRA INFORMAÇÃO:/produto = "5-Oxoprolina" (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO:1:

Xaa Pro His Trp Ser Tyr Gly Leu Arg Pro Gly 1 5 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO:2: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 9 aminoácidos 45 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ (Β) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOME/CHAVE: local modificado (B) LOCALIZAÇÃO: 1 (D) OUTRA INFORMAÇÃO: /produto = "5-Oxoprolina" (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO:2:

Xaa His Trp Ser 1

Tyr Leu Leu Arg Pro 5

Lisboa, -7 DEI 2G0t

Por ABBOTT LABORATORIES - O AGENTE OFICIAL -

Eng.° ANTÓNIO JOÃO DA CUNHA FERREIRA Ag. Of. Pr. Ind, Rua das Flores, 74-4.° 1200-195 LISBOA

Claims

86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 1/11 REIVINDICAÇÕES 1. Péptido possuindo a estrutura a1-b2-c3-d4-e5-f6-g7-h8-i9-j10 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que A é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em N-acetil-D-3-(2-naftil)alanilo; N-acetilsarcosilo; N-acetil-D-fenilalanilo; N-acetil-D-(4-clorofenil)alanilo; N-acetil-D-3-(3-quinolinil)alanilo; e N-acetilazaglicilo. B é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em D-fenilalanilo, D-3-(4-clorofenil)alanilo, D-3-(4-fluorofenil)alanilo, e D-3-(2-naftil)alanilo; C é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em D-3-(3-piridil)alanilo, D-3-(1 -naftil)alanilo, D-3-(2-tiazolil)alanilo, e D-3-(2-benzo[b]tienil)alanilo; D é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em L-serilo; e N-IR^-L-serilo onde R1 é alquilo linear ou ramificado de um a quatro átomos de carbono; E é um resíduo aminoacilo com configuração L seleccionado de entre 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 2/11 (a)

onde R1 é como definido atrás, e R2 é seleccionado de entre (1) -N02; (2) -CH2CI; (3) -CH2OH; (4) -CH2OCH3; (5) -CH2N3; (6) -CH2CN; ; (7) -(CH2)mNR3R4 onde m é 1 ou 2, R3 e R4 são seleccionados, independentemente, de entre hidrogénio, alquilo de um a quatro átomos de carbono, fenilo, opcionalmente substituído com halogéneo, alquilo de um a quatro átomos de carbono ou alcoxi de um a quatro átomos de carbono, e benzilo, opcionalmente substituído com halogéneo, alquilo de um a quatro átomos de carbono ou alcoxi de um a quatro átomos de carbono, ou R3 e R4, tomados em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um anel pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo ou N'-acetilpiperazinilo; com a condição de que quando um de R3 e R4 é fenilo ou benzilo, o outro é hidrogénio; 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 3/11 (8) Η I

νη2 onde η é 0, 1 ou 2, e R5 é hidrogénio ou alquilo de um a quatro átomos de carbono; (9) Η H

onde n é 0, 1 ou 2, R6 e R7 são, independentemente, hidrogénio, ciano, ou alquilo de um a quatro átomos de carbono, ou R6 e R7, juntos, são -CH2CH2- ou -CH2CH2CH2-, com a condição de que R6 e R7 não possam ser ambos ciano. (9) H

onde m é como definido atrás e R8 é seleccionado de entre 2-, 3- e 4-piridinilo, 2-pirazinilo, 2-, 4- ou 5-pirimidinilo, 2-purinilo, 2- e 3-furilo, 2- e 3-tienilo, e 2-, 3-, e 4-quinolinilo; e 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 4/11 (b) R1

R9

onde X é 1,4-ciclo-hexileno ou alquileno de um a quatro átomos de carbono, e R9 é seleccionado de entre (1) -(CH2)mNR3R4 onde m, R3 e R4 são como definidos atrás; (2)

(CH2)n

R5 NH2 onde n, e R5 são definidos como atrás; (3)

H I (CH2)n

N R6 onde n, R6 e R7 são definidos como atrás; e (4)

(CH2)m Ο Ι! O R8 onde m e R8 são definidos como atrás; F é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em D-triptofanilo, 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 5/11 D-3-(3-piridil)alanilo, D-serilo, D-[eps/7o/7-N-(N'-morfolinilcarbonil)]lisilo, D-[eps/7oA7-N-(2-pyrazolinylcarbonil)]lisilo, D-[eps/7or7-N-(N'-piperidinilcarbonil)]lisilo, D-[eps/7oA7-N-(3-quinolinilcarbonil)]lisilo, D-(eps/7o/7-N-nicotinil)isilo; e um resíduo aminoacilo com configuração D possuindo a estrutura (a) H 0 I II ,N^ .C. CH onde R1 é como definido atrás, e R2 é seleccionado de entre (1) -N02; (2) -CH2CI; (3) -CH2N3; (4) -CH2CN; (5) -(CH2)mNR3R4 onde m é 1 ou 2, R3 e R4 são, independentemente, seleccionados de entre hidrogénio, alquilo de um a quatro átomos de carbono; fenilo, e benzilo, ou R3 e R4, tomados em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um anel pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo ou Ν'-acetilpiperazinilo; com a condição de que quando um de R3 e R4 é fenilo ou benzilo, o outro é hidrogénio; (6) 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 6/11

onde η é Ο, 1 ou 2, e R5 é hidrogénio ou alquilo de um a quatro átomos de carbono; (7)

N (CH2)n H R7 R6 onde n é 0, 1 ou 2, R6 e R7 são, independentemente, hidrogénio, ciano, ou alquilo de um a quatro átomos de carbono, ou R6 e R7, juntos, são -CH2CH2- ou -CH2CH2CH2- com a condição de que R6 e R7 não possam ser ambos ciano; (8)

(CH2)m

Ra onde m é como definido atrás e R8 é seleccionado de entre 2-, 3- e 4-piridinilo, 2-pirazinilo, 2-, 4- ou 5-pirimidinilo, 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 7/11 2-purinilo, 2- e 3-furilo, 2- e 3-tienilo, e 2-, 3- e 4-quinolinilo; e (b) Η O I 11

X onde X é 1 ,4-ciclo-hexileno ou alquileno de um a quatro átomos de carbono, e R9 é seleccionado de entre (1) -(CH2)mNR3R4 onde m, R3 e R4 são como definidos atrás; (2) H

onde n, e R5 são definidos como atrás; (3) Η H

onde n, R6 e R7 são definidos como atrás; e H Ra π 0 (CH2)m (4) I 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 8/11 onde meR8 são definidos como atrás; G é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em L-leucilo; N-(R1)-L-leucilo; L-valilo; L-ciclo-hexilalanilo; N-(R1)-L-ciclo-hexilalanilo; L-/so-leucilo; e íe/r-butilglicilo; H é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em L-(eps/7on-N-isopropil)lisilo; e N-ÍR^-L-arginilo onde R1 é como definido atrás; I é um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em L-prolilo, e N-(R1)-L-alanilo; J é -NHC2H5 ou um resíduo aminoacilo seleccionado de entre o grupo que consiste em D-alaninamida, N-ÍR^-D-alaninamida, N-(R1)-L-alaninamida, sarcosamida, α-aza-glicinamida, e · D-serinamida, onde R1 é como definido atrás; com a condição de que quando J é -NHC2H5, então I é L-prolilo.
2. Péptido ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como definido na reivindicação 1 em que E é um resíduo aminoacilo de configuração L seleccionado de entre resíduos possuindo a estrutura 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 9/11 R1 Ο I 11

Η I

Ν Τ νη2 em que η, R1 e R5 são como aqui definidos
3. Péptido ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como definido na reivindicação 1 em que F é um resíduo aminoacilo de configuração D seleccionado de entre resíduos possuindo a estrutura H 0 I II N. .C

NH, em que n e R5 são como aqui definidos.
4. Composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável seleccionado de entre o grupo que consiste em NAc-D-2Nal-D4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe(4-N02)Phe-D-Cit-Leu-Arg-Pro-DAIaNH2; NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)- Pro-D-AlaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 10/11 NAc-D-2Nal-D4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-D- AlaNH2; NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMe(4-N02)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-D- AlaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Morphme)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)- Pro-DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atzame)Phe-DLys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-D2Nal-D4CIPhe-D3Pal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-DLys(Nic)-Leu-Harg(Et2)-Pro- DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Azagly-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe-(4-Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Azagly-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMe(4-Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Azagly-D4CIPhe-D1 Nal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMe-(4Atza)Phe-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D3Bal-SerNMe(4Atza)Phe-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(lsp)-Pro- DAIaNH2; NAc-Sar-D4CIPhe-D3Bal-Ser-NMeTyr-D-(4-Atza)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; NAc-D-2-Nal-D-4CI-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-Tyr-D-(4-Nicme)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-DAIaNH2; e NAc-D-2Nal-D-4CIPhe-D-3Pal-Ser-NMeTyr-D-(4-Etcng)Phe-Leu-Lys(lsp)-Pro-D- AlaNH2.
5. Composição farmacêutica para suprimir níveis de hormonas sexuais num mamífero compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um 86 585 ΕΡ Ο 683 792/ΡΤ 11/11 composto como definido na reivindicação 1 em combinação com um transportador farmaceuticamente aceitável.
6. Utilização de um composto tal como definido na reivindicação λ para o fabrico de um medicamento para a supressão de níveis de hormonas sexuais num mamífero com necessidade de tal tratamento. Lisboa,
-7. DEI 2031 Por ABBOTT LABORATORIES - O AGENTE OFICIAL -

Eng.° ANTÓNIO JOÃO DA CUNHA FERREIRA Ag. Of. Pr. Ind. Rua das Flores, 74--4,° 1200-195 LISBOA