JPH0454131A - 細胞毒性ｔリンパ球の特異的誘導用合成ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は細胞毒性１９２２球の特異的誘導用の合成ワク
チンに関する。

細胞毒性１９２２球（キラーＴ細胞）は細胞内感染に対
する温血動物の免疫応答の重要な部分である。細胞毒性
１９２２球は正常には感染性病原体のインビボワクチン
投与によってのみ誘導される（Ｊ、　Ｂａ５ｔｉｎ　ｅ
ｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、。

Ｖｏｌ　１６５．　Ｊｕｎｅ　１９８７）　、これには
危険が伴うため、細胞毒性Ｔりンパ球特異的誘導用合成
ワクチンは実質的な改良となるであろう。驚くべきこと
に、細胞毒性１９２２球の特異的インビボ誘導は、キラ
ーＴ細胞エピトープを含むある種の膜アンカー／活性化
合物結合体の使用により可能であることを見出した。

膜アンカー／活性化合物結合体が中和抗体の生成に適し
ていることは既に知られているか（Ａｎｇｅｗ、　Ｃｈ
ｅｍ、　９７（１９８５）、　Ｎｏ、　１０．　ｐ　８
８３　ｆｆ）、細胞毒性１９７３球特異的誘導のための
膜アンカー／活性化合物結合体を含む合成ワクチンは未
だ報告されていない。

従って、本発明は少なくとも１つの膜アンカー化合物と
、ウィルス、細菌、寄生虫又は腫瘍抗原の少なくとも１
つのキラーＴ細胞エピトープを含むタンパク質、もしく
はウィルス、細菌、寄生虫タンパク質又は腫瘍抗原の少
なくとも１つのキラーＴ細胞エピトープを含む少なくと
も１つの部分配列との結合体からなる細胞毒性Ｔリンパ
球誘導用合成ワクチンに関する。

前記膜アンカー化合物は好ましくは細菌リポタンパク質
である。下の式 ％式％ （式中、Ａは硫黄、酸素、ジスルフィド（−Ｓ−Ｓ−）
、メチレン（−ＣＨ２−）又は−ＮＨ−であることがで
き；ｎは０〜５、ｍはｌ又は２であり； Ｃ末はＲ又はＳ配置の不斉炭素原子であり、Ｒ，Ｒ’及
びＲ＃は同一か又は異なり、水素又はヒドロキシル、ア
ミノ、オキソ、アシル、アルキル又はシクロアルキル基
で置換されることができる炭素原子数７〜２５のアルキ
ル、アルケニル又はアルキニル基であり、式■のＥは水
素又は天然もしくは合成アミノ酸の任意の所望の側鎖で
あることができ、式■のＢは式Ｉ−Ｖに示す各々の−（
ｃＨｚ）ｎ−（置換されたアルキル）基の意味を持ち、
Ｒ，とＲ７は同一か又は異なりＲ，Ｒ’及びＲ“と同じ
意味を持つのみならず、−ＯＲ。

０−ＣＯＲ，−ＣＯＯＲ，−ＮＨＣＯＲ又バーＣ０ＮＨ
Ｒテあるコトもでき、Ｘはウィルス、細菌又は寄生虫タ
ンパク質又は腫瘍抗原のタンパク質又は部分配列が結合
している１０までのアミノ酸の鎖であるか、もしくはタ
ンパク質又は部分配列自身である）の化合物が膜アンカ
ー化合物として特に好ましい。

特に指摘することができるこれらの例は細菌リポタンパ
ク質に存在するＮ末端であり、例えばＹ−Ｓｅｒ−５ｅ
ｒ−Ｓｅｒ−ＡｓｎＳＹ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａ
ｌａ、　ＹＡｌａ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−ＧｉｎｌＹ−Ａｓ
ｎ−５ｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ、　Ｙ−ＧｌｙＡｌａ−Ｍ
ｅｔ−Ｓｅｒ、　Ｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｔｇｒ
、　Ｙ−Ｇｉｎ−ＶａｌＡｓｎ−Ａｓｎ、　Ｙ−Ａｓｐ
−Ａｓｎ−５ｅｒ−５ｅｒ　（式中、Ｙは式Ｉ〜■で示
した基の１つである）である。これらのりボペンタペブ
チドの短い形体（リポジペプチド、リポトリペプチド又
はリポテトラペプチド）も膜アンカー化合物として使用
することができる。Ｎ−バルミトイル−５−［２，３（
ビスパルミトイルオキシ）プロピルツーシステイニル−
セリル−セリン（Ｐａｍ、Ｃｙｓ−５ｅｒ−５ｅｒ）、
Ｎ−バルミトイル−３−（２，３（ビスパルミトイルオ
キシ）プロピル〕−システイニルーセリルーグリシン及
びＮ−バルミトイル−５−Ｃ２，３（ビスパルミトイル
オキシ）プロピルクーシステイニル−アラニル−〇−イ
ソグルタミンが特に好ましい。

特に好ましい別な化合物は式ｌと■の化合物であり、と
りわけ式Ｉの化合物が好ましい。

置換基Ａは硫黄又はメチレンが好ましく、硫黄が特に好
ましい。

置換基Ｒ，Ｒ’及びＲ“は炭素原子数１４〜１８のアル
キル基が好ましく、炭素原子数１６のアルキル基が特に
好ましい。

置換基Ｘは１〜２の極性アミノ酸残基から構成されるの
が好ましく、セリン残基が特に好ましい。

キラーＴ細胞により認識される細胞内に現れる病原体、
もしくはウィルス、細菌又は寄生虫タンパク質もしくは
腫瘍抗原の種々なタンパク質又は部分的タンパク質配列
は本発明のワタチン用として膜アンカー化合物と結合さ
せるのに適している。

そのようなタンパク質又は部分配列（キラーＴ細胞エピ
トープとも称する）は、ＭＨＣ分子（主要組織適合遺伝
子複合体）と共に、それらが細胞毒性１９７３球により
認識されるという事実により区別される。

本発明のワクチンはＴ細胞エピトープを持つすべての病
原体例えばアゾノウ、イルス、ＨＩＶ。

インフルエンザウィルス、ＬＣＭＶＳＭＣＭＶ、　肝炎
ウィルス、ＨＴＬＶＳＦＥＬＶ、　　トレポネマ・パリ
ダム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｐａｌｌｉｄｕｍ）、ゴノ
コッカス（ｇｏｎｏｃｏ−ｃｃｕｓ）　、ボルデテラ・
パーツシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ
）　、プラスモジア（Ｐｌａｓｍｏｄｉａ）　、リステ
リア（ｌ１ｓｔｅｒｉａ）　、ミコバクテリア（ｍｙｃ
。

ｂａｃｔｅｒｉａ）又はリーシュマニア（Ｉｅｉｓｈｍ
ａｎｉａ）に対する免疫Ｊこ適当である。従来から知ら
れているキラーＴ細胞エピトープは下表に示す部分配列
であり、インフルエンザ核タンパク質Ｐ３Ｃ５Ｓ−ＮＰ
　１４７−１５８（Ｒ−）とＨＩＶエピトープが特別な
位置を占めている。

リボトリペプチド Ｐａ＋ａ２Ｃｙｓ−５ｅｒ−５ｅｒ 本発明のワクチンの助けを借りて、特定の標的に最適に
適応したワクチンを得るため、更に種々な部分配列に結
合した種々な膜アンカー化合物を混合することが可能で
ある。更に、相当する混合物は体液性免疫応答を刺激し
、付加的に中和抗体の生成につながる膜アンカー／活性
化合物複合体を付加的に含むことができる（Ｖａｃｃｉ
ｎｅ　７．２Ｌ３３（１９８９）、　Ａｎｇｅｗ、　Ｃ
ｈｅｍ、、　Ｉｎｔ。

Ｅｄ、　２４．８７２−８７３（１９８９））。更に、
種々な配列を共有結合させ、それらを膜アンカー化合物
と結合させることも可能である。

更に、本発明は膜アンカー化合物に結合反応により病原
体のタンパク質又は部分配列を結合させることからなる
合成ワクチンの製造法に関する。結合反応は、例えば縮
合、付加、置換、酸化又はジスルフィド形成であること
ができる。好ましい結合法は実施例に示す。別の結合法
は上で引用したドイツ特許公開明細書第３．５４６．１
５０に記述されている。

膜アンカー化合物の調製も同様に上で述べたドイツ特許
公開明細書に詳細に記述されている。

必要となり得るジアステレオマーの分離は種種な方法、
例えばＨｏｐｐｅ−５ｅｙｌｅｒ　ｓ　Ｚ、　Ｐｈｙｓ
ｉ。

ｌｏｇ、　　Ｃｈｅｍ、　　３６４　（１９８３）　５
９３に記述の方法で実行することができる。

膜ア゛ンカー／活性化合物結合体に使用する部分配列の
合成は文献に記述された種々な方法で実行することがで
き、前記文献は例えばＷｕｎｓｃｈｅｔ　ａｌ、、　Ｈ
ｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ、　Ｖｏｌ、　１５／１．２．　
Ｓｔｕｔｔ−ｇａｒｔ、　Ｔｈｉｅｍｅ−Ｖｅｒｌａｇ
又はＷＧｎｓｃｈ、　Ａｎｇｅｗ、　Ｃｈｅｍ。

８３（１９７１）、　Ｅ、　Ｇｒｏｓｓ　ａｎｄ　Ｊ、
　Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ（ａｄｓ、）。

Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、　Ｖｏｌ、　１（１９７９
）、　２（１９７９）、　３（１９８１）及び５（１９
８３）　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙ
ｏｒｋ７７１３又はドイツ特許公開明細書第３，５４６
，１５０である。部分配列と結合体の好ましい製造法は
実流側１により詳細に示す。

更に、本発明は少なくとも１つの膜アンカー化合物と上
述のタンパク質又は生物の１つの少なくとも１つの部分
配列との結合体を含む医薬製剤と動物薬製剤に関する。

通常は本発明の製剤は溶媒の外に追加の助剤と賦形剤、
又はアジュバントを必要としない。しかしながら、場合
により本発明の製剤にこの種の助剤及び／又は賦形剤、
及び所望によりアジュバントを添加するのが賢明である
（Ａｎｔｏｎ　Ｍａｙｒ、　Ｇｅｒｈａｒｄ　Ｅｉβｎ
ａｎ、　Ｂａｒｂａｒａ　Ｍａｙｒ−Ｂｉｂｒａｃｋ、
　Ｈａｎｄｂｕｃｈ　６ｅｒＳｃｈｕｔｚｉｍｐｆｕｎ
ｇｅｎ　ｉｎ　ｄｅｒ　Ｔｉｅｒｍｅｄｉｚｉｎ　（Ｈ
ａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｉｎ　Ｖｅ
ｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）　。

１９８４、　Ｖｅｒｌａｇ　Ｐａｕｌ　Ｐａｒｅｙ、　
Ｂｅｒｌｉｎ−Ｈａｍｂｕｒｇ）。

温血動物の免疫に必要なワクチンの量は温血動物の種、
膜アンカー化合物（１つ又は複数）と生物のタンパク質
又は部分配列（１つ又は複数）、意図する免疫に依存し
、個々の場合につき経験的に決めなければならない。

次の実施例は更にこの発明を例証しようとするものであ
る。

合　　成 実施例　Ｉ Ｎ−バルミトイル−５−［：２．３（ビスバルミトイル
オキシ）−プロピルクーシステイニル−セリル−セリル
−ＮＰ　１４７−１５８の合成インフルエンザＡウィル
ス核タンパク質ペグチド配列を固相ペプチド法により合
成した。

Ｆｍｏｃ−アミノ酸を使用した。次の側鎖保護基、Ｔｈ
ｒ（ｔＢｕ）、Ｔｙｒ（ｔＢｕ）、Ａｒｇ（Ｐｍｃ）を
使用した。

０　、５ｍｍｏＱのＦｍｏｃ−Ｇｌｙを結合した１ｇの
バラ−ヘンシルオキシベンジルアルコール樹脂を使用し
、次の合成ヅイクルによりペプチド配列を合成した。Ｄ
ＭＦ中５０％ピペリジンによるＮ−活性化（ＩＸＩＯ分
）。後続アミノ酸をＤＭＦ中ＢＯＰ／ＨＯＢＴ　（ベン
ゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチル
アミノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート／
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール〕とジイソプロピル
エチルアミンを使用して３０分間結合。二重結合反応は
各々の場合３倍過剰のＦｍｏｃ−アミノ酸と４．５倍過
剰のジイソプロピルエチルアミン（各々の場合、樹脂上
の遊離アミノ酸に対して）を使用して実行した。

各々の二重結合反応の後、ペプチド樹脂を各々の場合、
Ｎ−メチルピロリジン、ジクロヮメタン及びＮ−メチル
ピロリジンで３回洗浄した。

樹脂結合インフルエンザＡウィルス核タンパク質配列を
合成した後、トリフルオロ酢酸で分解してペプチドの一
部分を分離し、ＨＰＬＣ，ＭＳ。

アミノ酸分析、キラル相の分析（ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏ
ｎｃｈｉｒａｌ　ｐｈａｓｅ）及び配列分析により純度
を試験した。ＨＰＬＣ分析により９０％以上の純度であ
ることが明らかになった。２つのセリン残基（Ｆｍｏｃ
−５ｅｒ（ｔＢｕ））を樹脂結合ペプチドに結合した後
、トリバルミトイル−５−グリセロールシスティンの結
合をＤＩＣ／ＨＯＢＴ法で実行した。４時間後１当量の
Ｎ−メチルモルホリンを添加し、更に１時間後リポペプ
チド樹脂を洗浄した。リポペプチドを２ｍ＋２のトリフ
ルオロ酢酸（１００μＱのチオアニソールとｌ　ＯＯｔ
ｔｇのチオクレゾールを含む）を使用して１時間かけて
１００＋＋＋ｇの樹脂がら分離した。Ａｒｇ（Ｐｍｃ）
保護基を完全に除くためトリフルオロ酢酸による追加の
引き続く処理を５０°Ｃで３０分間行った。炉液を蒸発
し、残留物を酢酸に取り、冷エーテルに添加した。沈殿
したりポペプチドをエーテルで３回洗浄し、３：１の比
率のｔｅｒｔ、−ブタノール／水から凍結乾燥した。

実施例　２ Ｎ−バルミトイル−ｓ　−（２，３（ビスパルミトイル
オキシ）−プロピルクーシステイニル−セリル−セリル
−ＮＰ　（３６５−３８０）の合成実施例１と同様の方
法で合成を実行した。次の側鎖保護基、５ｅｒ（ｔＢｕ
）、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）、Ｔｈｒ（ｔＢｕ）を持つＦｍ
ｏｃ−アミノ酸を使用した。Ａｓｎは側鎖保護基を使用
することなくジイソプロピルカルボジイミド／　ＨＯＢ
Ｔを使用して結合させた。使用した最初の樹脂は１％ジ
ビニルベンゼンを架橋したＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ
）−ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール−ポリスチ
レンであった。見出されたＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ
）の量は０．４５ｒｎｔｎｏＱ／　ｇであった。

ペプチドとＰａｍ３Ｃｙｓ−５ｅｒ−５ｅｒペプチドを
、それぞれの場合０．１ｍＱのチオアニソールと１１０
０ｕのチオクレゾールを添加した２ｍＱのトリフルオロ
酢酸を使用して９０分間かけて１００ｍＱの樹脂から分
離した。配列を遊離ペプチドの配列分析により確認し、
９０％以上を含む均一なピークがＨＰＬＣ分析により測
定された。アミノ酸分析とキラル相のエナンチオマー純
度の試験は予期した値を示す結果が得られた。

活性試験 Ａ） 特殊無菌条件（ＳＰＦ）下で飼育した３月令のＢＡＬＢ
／ｃ近親交配マウスをＩ００μｉ＋のＰａｍ３Ｃｙｓ−
３ｅｒ−３ｅｒ−［ＮＰ　１４７−１５８：ｌ（ｌｏＯ
ＩｌｇのＰａｍ３Ｃｙｓ−３ｅｒ−３ｅｒ［ＮＰ　１４
７−１５８）を３００μＱのＰＢＳに取り、１分間超音
波処理した）で静脈内投与により免疫した。

２８日後イン７ルエンザウイルス 又は帆４ヘマグルチニン単位を鼻内感染させた。

同様に３００μＱのＰＢＳを静脈内投与したマウスを対
照として感染させた。感染の経過を毎日の体重管理と生
存率により監視した。０、４ヘマグルチニン単位を感染
させた１２匹の対照区動物中１１匹がウィルス感染後１
１日に死亡したが、免疫した動物は１２匹中４匹が死亡
したのみであった。

別の対照群とＰａｍ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−［ＮＰ
　１４７−１５８）免疫群に０．２へマグルチニン単位
のインフルエンザウィルスを感染させた。１８日後、対
照動物の４０％（１０匹中４匹）はなお生き残り、一方
免疫した動物の７５％が生き残った。１８日口の免疫し
た動物と対照動物との間の体重差は４ｇであった。対照
群の生き残った動物は体重が減少し続けたが、一方免疫
した動物は感染からゆっくり回復した。

Ｂ） 遊離ペプチド、ウィルス又はＰａｍ，Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−
Ｓｅｒ−ペプチドで免疫した後のＢＡＬＢ／ｃマウスの
肺臓細胞の細胞毒性Ｔ細胞活性（第１図）ＢＡＬＢ／ｃ
マウスが３００１１のＰＢＳ中ａ）　　１．６１の核タ
ンパク質ペプチド１４７−１５８（Ｒ−）と共に予めイ
ンキュベートした８Ｘ１０’先天性牌臓細胞ｉ　（Ａ，
Ｄ，Ｇ）、 ｂ）　　１６０μＭのＰａｍ．Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ
−［ＮＰ　１４７−１５８（Ｒ−））リポペプチドと共
に予めインキュベートした８ＸｌＯ’先天性牌臓細胞；
　（Ｃ，Ｆ）、ｃ）　　５０ヘマグルチニン単位のイン
フルエンザウィルスＰＲ／８／３４；　　（Ｂ，Ｅ，Ｈ
）、ｄ）　　１００μ９のＰａｍｓＣｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓ
ｅｒ−［ＮＰ　　１４７−１５８（Ｒ−））；　（　Ｉ
　） の静脈内投与を受けた。６日後、免疫又は感染しｔ；動
物から肺臓を除き、これらの肺臓細胞をペプチド（Ａ−
Ｆ）又はウィルスＰＲ８（Ｇ％Ｈ１１）を感染させた先
天性刺激体細胞（　ｓｙｎｇｅｎｉｃｓｔｉｍｕｌａｔ
ｏｒ　ｃｅｌｌｓ）で５日間再刺激した。この目的のた
め各々の場合、１０％ウシ胎児血清、２−メルカプトエ
タノール、グルタミン及び抗生物質を補添し、８０％Ｍ
のＮＰ　１４７−１５８（Ｒ−）ペプチド（Ａ，Ｆ）又
は２０Ｇｙで照射した５ＸＩＯ＠ウイルスＰＲ８感染先
天性牌臓細胞（Ｇ，Ｈ，Ｉ）のいずれかを添加した１０
ｍ（ｌのａ−ＭＥＭ培地（メーカー：Ｇｉｂｃｏ）中で
２．５Ｘ　１０’細胞を培養した。刺激体と標的細胞の
感染は（Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　７．　６
３０−６３５（１９７７））に記述のように実行した。

細胞毒性Ｔ細胞の活性は５　１　Ｃ　ｒ放出標準試験（
Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　１３７，　２．６
７６−２．６８１（１９８６））により求めた。Ａ、Ｂ
、Ｃ及びＧ％Ｈ，、Ｉは未処理（△）及びＰＲ８感染（
ム）Ｐ８１５（ＭＨＣ：　）（−２”）標的細胞に対す
るＣＴＬ活性を示す。

Ｄ、Ｅ及びＦは種々な濃度の遊離ペプチドで３７℃で３
０分間処理したＰ８１５細胞に対するＣＴＬ活性を示す
。この場合二７エクター（ｅｆｆｅｃｔｏｒ）の標的細
胞に対する比率は３０：ｌを使用した。

Ｃ） Ｐａｍ３Ｃｙｓ−５ｅｒ’−５ｅｒ−（ＮＰ　１４７−
１５８）又はＰａｍ３ＣｙｓＳｅｒ−Ｓｅｒ−［ＮＰ　
３６５−３８０）でマウスを免疫した後の細胞毒性Ｔ細
胞の活性（第２図） ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ａ％Ｂ）又は（Ｂ６ｘ　ＤＢＡ／
　２　’）Ｆｌ−マウス（Ｃ，Ｄ）　をインフルエンザ
Ａウィルス（Ａ、Ｃ）又はｌｏＯμｆのＰａｍ５Ｃｙｓ
−５ｅｒ−３ｅｒ−ＣＮＰ　１４７−１５８）　（Ｂ）
又は１００ｐｙのＰａｍ、Ｃｙｓ−３ｅｒＳｅｒ−（Ｎ
Ｐ　３６５−３８０）　ＣＤ　）で免疫した。６日後、
肺臓を除き、肺臓細胞をＢ）で記述したように０．８μ
ＭのＮＰ　１４７−１５８ペプチド（Ａ、Ｂ）又は０．
８μＭのＮＰ　３６５−３８０ペプチド（Ｃ，Ｄ）で刺
激した。次いで未処理のＰ８１５標的細胞（△）、ＰＲ
８感染感染１５標的細胞（ム）及びＮＰ　１４７ｉ５８
ペプチドと共に３７°Ｃで９０分間予めインキュベート
したＰ８１５標的細胞（―）に対する細胞毒性Ｔ細胞の
活性を試験し、未処理のＥＬ−４−（Ｍ）ＩＣＨ−２’
）細胞（○）、Ｐｌ’ｌ’８感染ＥＬ−４標的細胞（・
）及びＮＰ　３６５−３８０ペズチドと共に３７°Ｃで
９０分間予めインキュベートしたＥＬ−４細胞（◆）に
対する同様の活性を試験した。

Ｄ） ＭＨＣクラスＩレストリクジョン及びリポペプチドによ
る免疫の特異性に関する試験（第３図） ＢＡＬＢ／ｃマウスＣＡＳ　Ｂ、Ｃ）又は（Ｂ６Ｘ　Ｄ
ＢＡ／２）Ｆｌ−マウス（Ｄ−１）は３００μＱのＰＢ
Ｓ中１００μｙのＰａｍ、Ｃｙｓ−８ｅｒ−５ｅｒ−Ｃ
ＮＰ　１４７−］５８（Ｒ−））（Ａ％Ｅ、Ｈ）又は ５０μ９の５ｅｒ−３ｅｒ−［ＮＰ　１４７−１５８（
Ｒ−））（Ｂ　）又は５０μ９の（ＮＰ　１４７−１５
８（Ｒ−））　（Ｃ）又は５０ヘマグルチニン単位のイ
ンフルエンサＰＲ８ウィルス（Ｄ％Ｇ）又はｌ　ＯＯｕ
ｇのＰａｍ、Ｃｙｓ−５ｅｒＳｅｒ−（ＮＰ　３６５−
３８０）　（Ｆ　、　　Ｉ　）の静脈内投与を受けた。

注射後６日目に、肺臓細胞を実施例２に記述のように核
タンパク質１４７−１５８（Ｒ−）ペプチド（Ａ−Ｆ）
、又は核タンパク質３６５−３８０ペプチド（Ｇ−１）
を添加して培養した。生成する細胞毒性Ｔ細胞の活性を 未処理Ｐ８１５標的細胞（△） ＮＰ　１４７−１５８（Ｒ−）と共に３７℃で９０分間
予めインキュベートしたＰ８１５．標的細胞（■）ＮＰ
　３６５−３８０と共に３７℃で９０分間予めインキュ
ベートしたＰ８１５標的細胞（ロ） 未処理のＥＬ−４標的細胞（○） ＮＰ　１４７−１５８（Ｒ−）と共に３７℃で９０分間
予めインキュベートしたＥＬ−４標的細胞（◇）ＮＰ　
３６５−３８０と共に３７°Ｃで９０分間予めインキュ
ベートしたＥＬ−４ｉ的細胞（◆） に対して求めた。

【図面の簡単な説明】

第１ｒｇＪは遊離ペプチド、ウィルス又はＰａｍ、Ｃｙ
ｓ−５ｅｒ−３ｅｒ−ペプチドで免疫した後のＢＡＬＢ
／Ｃマウスの肺臓細胞の細胞毒性Ｔ細胞活性を表し、Ａ
はペプチド、Ｂはウィルス、Ｃはリポペプチドでそれぞ
れ免疫した後、ペプチドで刺激した後の、ウィルス感染
標的細胞に対する活性、Ｄはペプチド、Ｅはウィルス、
Ｆはリポペプチドでそれぞれ免疫した後、ペプチドで刺
激した後の、種々な濃度のペプチドで処理した標的細胞
に対する活性、Ｇはペプチド、Ｅはウィルス、Ｆはリポ
ペプチドでそれぞれ免疫した後、ウィルスで刺激した後
の、ウィルス感染標的細胞に対する活性を表す。 第２図は２種類のりポベプチド（Ｐ３ＣＳＳ−ＮＰ１４
７−１５８、Ｐ　３Ｃ５Ｓ−ＮＰ　３６５−３８０：）
　テマウス’ｋ　免疫Ｌた後の肺臓細胞の細胞毒性Ｔ細
胞活性を表し、Ａはウィルス、ＢはリポペプチドＰ、Ｃ
５５−ＮＰ　１４７１５８でそれぞれＢＡＬＢ／ｃマウ
スを免疫した後、ペプチドＮＰ　１４７−１５８で刺激
した後の、ウィルス感染及びペプチド処理標的細胞に対
する活性、Ｃはウィルス、ＤはリポペプチドＰ、Ｃ５５
−ＮＰ　３６５３８０でそれぞれ（Ｂ６ｘ　ＤＢＡ／　
２　）　Ｆｌマウスを免疫した後、ペプチドＮＰ　３６
５−３８０で刺激した後の、ウィルス感染及びペプチド
処理標的細胞に対する活性を表す。 第３図はＭＨＣクラスＩレストリクジョン及びリポペプ
チドによる免疫の特異性に関する試験結果を表し、Ａは
リポペプチドＰ３Ｃ５Ｓ−ＮＰ　　１４７１５８、　Ｒ
−１Ｂはペプチド５Ｓ−ＮＰ　１４７−１５８．　Ｒ−
１ＣはペプチドＮＰ　　１４７−１５８．　　Ｒ−でそ
れぞれＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫した後、ペプチドＮＰ
　１４７−１５８．　Ｒで刺激した後の、ペプチド処理
標的細胞に対する活性、Ｄはウィルス、Ｅはリポペプチ
ドＰ、Ｃ５５−ＮＰ　　１４７−１５８．　　Ｒ−Ｆは
リポペプチドＰ、Ｃ５５−ＮＰ　３６５−３８０で（Ｂ
６　Ｘ　ＤＢＡ／　２　）Ｆｌマウスを免疫した後、ペ
プチドＮＰ　１４７−１５８．　Ｒ−で刺激した後の、
ペプチドＮＰ　１４７−１５８．　　Ｒ−及びＮＰ　３
６５−３８０処理標的細胞に対する活性、Ｇはウィルス
、ＨはりボペプチドＰ、Ｃ５５−Ｎ’Ｐ　１４７−１５
８．　Ｒ−１Ｉ　ハリポベプチドＰ、Ｃ５５−ＮＰ　３
６５−３８０で（Ｂ６　Ｘ　ＤＢＡ／２）Ｆｌマウスを
免疫した後、ペプチドＮＰ　３６５−３８０で刺激した
後の、ペプチドＮＰ　　１４７−１５８．　　Ｒ及びＮ
Ｐ３６５−３８０処理標的細胞に対する活性を表す。 特許出願人　　ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト外
２名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）少なくとも１つの膜アンカー化合物と、ウィルス、
   細菌、寄生虫又は腫瘍抗原の少なくとも１つのキラーＴ
   細胞エピトープを含むタンパク質、もしくはウィルス、
   細菌又は寄生虫タンパク質又は腫瘍抗原の少なくとも１
   つのキラーＴ細胞エピトープを含む少なくとも１つの部
   分配列との結合体からなる細胞毒Ｔ−リンパ球の特異的
   誘導用合成ワクチン。２）膜アンカー化合物は細菌膜リ
   ポタンパク質である請求項１記載の合成ワクチン。 ３）膜アンカー化合物は次の式 ▲数式、化学式、表等があります▼ I 、▲数式、化学
   式、表等があります▼II、▲数式、化学式、表等があり
   ます▼III、 ▲数式、化学式、表等があります▼IV、▲数式、化学式
   、表等があります▼Ｖ、▲数式、化学式、表等がありま
   す▼VI、 ▲数式、化学式、表等があります▼VII、▲数式、化学
   式、表等があります▼VIII、▲数式、化学式、表等があ
   ります▼IX、 （式中、Ａは硫黄、酸素、ジスルフィド （−Ｓ−Ｓ−）、メチレン（−ＣＨ＿２−）又は−ＮＨ
   −であることができ； ｎは０〜５、ｍは１又は２であり； Ｃ＾＊はＲ又はＳ配置の不斉炭素原子であり、Ｒ、Ｒ′
   及びＲ″は同一か又は異なり、水素又はヒドロキシル、
   アミノ、オキソ、アシル、アルキル又はシクロアルキル
   基で置換されることができる炭素原子数７〜２５のアル
   キル、アルケニル又はアルキニル基であり、式IXのＥは
   水素又は天然もしくは合成アミノ酸の任意の所望の側鎖
   であることができ、式VIのＢは式 I 〜Ｖに示す各々の
   −（ＣＨ＿２）＿ｎ−（置換されたアルキル）基の意味
   を持ち、Ｒ＿１とＲ＿２は同一か又は異なりＲ、Ｒ′及
   びＲ″と同じ意味を持つのみならず、−ＯＲ、−Ｏ−Ｃ
   ＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＮＨＣＯＲ又は−ＣＯＮＨＲであ
   ることもでき、Ｘはウィルス、細菌又は寄生虫タンパク
   質又は腫瘍抗原のタンパク質もしくは部分配列が結合し
   ている１０までのアミノ酸の鎖であるか、又はタンパク
   質もしくは部分配列自身である）の１つを持つ請求項１
   記載の合成ワクチン。 ４）膜アンカー化合物はＮ−パルミトイル−Ｓ−２，３
   （ビスパルミトイルオキシ）−プロピル−システイニル
   −セリル−セリンであり、部分配列は末端セリン残基に
   結合している請求項１記載の合成ワクチン。 ５）タンパク質又は部分配列はキラーＴ細胞エピトープ
   を含むアデノウィルス、ＨＩＶ、インフルエンザウイル
   ス、ＬＣＭＶ、ＭＣＭＶ、肝炎ウィルス、ＨＴＬＶ、Ｆ
   ＥＬＶ、トレポネマ・パリダム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｐ
   ａｌｌｉｄｕｍ）、ゴノコッカス（ｇｏｎｏ−ｃｏｃｃ
   ｕｓ）、ボルデテラ・パーツシス（Ｂｏｒｄｅ−ｔｅｌ
   ｌａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）又はプラスモジウム・スペッ
   ク（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｓｐｅｃ．）又は他の病原体
   から得られる請求項１〜４の１つ又は複数に記載の合成
   ワクチン。 ６）膜アンカー／活性化合物結合体と種々な部分配列と
   の混合物が存在する請求項１〜５の１つ又は複数に記載
   の合成ワクチン。 ７）細胞毒性Ｔリンパ球誘導用膜アンカー／活性化合物
   結合体のほかに、中和抗体生成用膜アンカー／活性化合
   物結合体も存在する請求項１記載の合成ワクチン。 ８）膜アンカー／活性化合物結合体を公知の方法で合成
   することからなる請求項１〜７の１つ又は複数に記載の
   合成ワクチンの製造法。 ９）請求項１〜７の１つ又は複数に記載の合成ワクチン
   と、所望により慣用の助剤又は賦形剤と、及び所望によ
   り別のワクチンとを含む細胞毒性Ｔリンパ球誘導用医薬
   製剤又は動物薬製剤。 １０）請求項１〜７の１つ又は複数に記載のワクチンも
   しくは請求項９記載の医薬製剤又は動物薬製剤を投与す
   ることからなるヒト又は哺乳動物の免疫方法。