JPH06199894A - Ｃ型肝炎ウイルスのコア蛋白質領域に存在するｔ細胞エピトープ - Google Patents
Ｃ型肝炎ウイルスのコア蛋白質領域に存在するｔ細胞エピトープInfo
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- JPH06199894A JPH06199894A JP7679193A JP7679193A JPH06199894A JP H06199894 A JPH06199894 A JP H06199894A JP 7679193 A JP7679193 A JP 7679193A JP 7679193 A JP7679193 A JP 7679193A JP H06199894 A JPH06199894 A JP H06199894A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 Ｃ型ウイルス肝炎を、予防または処置するた
めの効果的なワクチン及び免疫療法剤を開発するために
必要であって、ウイルス感染細胞を直接に障害しその中
に潜むウイルスを排除し得るような、ウイルス特異的キ
ラーＴ細胞（ＣＴＬ）を含むヒトの細胞性免疫機構を賦
活し得る抗原基（Ｔ細胞エピトープ）を得るものであ
る。 【構成】 Ｃ型肝炎患者由来ＣＴＬが認識するＴ細胞エ
ピトープとしてＣ型肝炎ウイルスコア蛋白質領域のアミ
ノ酸配列の一部で、２０個のアミノ酸からなるＴ細胞刺
激ペプチドを、Tyr Pro Trp Pro Leu Tyr Gly Asn Glu
Gly Leu(or Met)Gly Trp Ala Gly Trp Leu Leu Ser Pro
もしくは Asp Pro Arg Arg Arg Ser ArgAsn Leu Gly L
ys Val Ile Asp Thr Phe Thr Cys Gly Leu または Ser
Val AsnTyr Ala Thr Gly Asn Leu Pro Gly Cys Ser Phe
Ser Ile Phe Leu Leu Ala の配列とすることにより、
Ｃ型肝炎ウイルスの感染を処置及び予防するためのワク
チンに利用できる。
めの効果的なワクチン及び免疫療法剤を開発するために
必要であって、ウイルス感染細胞を直接に障害しその中
に潜むウイルスを排除し得るような、ウイルス特異的キ
ラーＴ細胞（ＣＴＬ）を含むヒトの細胞性免疫機構を賦
活し得る抗原基（Ｔ細胞エピトープ）を得るものであ
る。 【構成】 Ｃ型肝炎患者由来ＣＴＬが認識するＴ細胞エ
ピトープとしてＣ型肝炎ウイルスコア蛋白質領域のアミ
ノ酸配列の一部で、２０個のアミノ酸からなるＴ細胞刺
激ペプチドを、Tyr Pro Trp Pro Leu Tyr Gly Asn Glu
Gly Leu(or Met)Gly Trp Ala Gly Trp Leu Leu Ser Pro
もしくは Asp Pro Arg Arg Arg Ser ArgAsn Leu Gly L
ys Val Ile Asp Thr Phe Thr Cys Gly Leu または Ser
Val AsnTyr Ala Thr Gly Asn Leu Pro Gly Cys Ser Phe
Ser Ile Phe Leu Leu Ala の配列とすることにより、
Ｃ型肝炎ウイルスの感染を処置及び予防するためのワク
チンに利用できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、Ｃ型肝炎の原因ウイル
ス（以下、ＨＣＶという）にあってＴ細胞との反応部位
（以下、Ｔ細胞エピトープという）であるペプチド抗
原、及びＨＣＶに対するＴ細胞の反応性を高める処置及
び予防に使われるワクチンに関する。尚、ここでいうＴ
細胞エピトープは、Ｔ細胞抗原受容体と免疫的に結合す
る実際の構造部分であり、ウイルス感染細胞を直接に障
害しその中に潜むウイルスを排除し得るウイルス特異的
キラーＴ細胞（以下、キラーＴ細胞をＣＴＬと表す）な
どのヒトの細胞性免疫機構を賦活し得る抗原基である。
ス（以下、ＨＣＶという）にあってＴ細胞との反応部位
（以下、Ｔ細胞エピトープという）であるペプチド抗
原、及びＨＣＶに対するＴ細胞の反応性を高める処置及
び予防に使われるワクチンに関する。尚、ここでいうＴ
細胞エピトープは、Ｔ細胞抗原受容体と免疫的に結合す
る実際の構造部分であり、ウイルス感染細胞を直接に障
害しその中に潜むウイルスを排除し得るウイルス特異的
キラーＴ細胞（以下、キラーＴ細胞をＣＴＬと表す）な
どのヒトの細胞性免疫機構を賦活し得る抗原基である。
【０００２】
【従来の技術】Ｃ型肝炎は、ＨＣＶにより引き起こされ
る肝炎であり、血液により感染することを特徴とする肝
炎である。特に、輸血後非Ａ非Ｂ型肝炎の大半を占め
る。そして、ＨＣＶの感染に対しては、宿主が免疫反応
を起こす程度が弱いため慢性化しやすく、その多くは更
に肝癌へと病状が進行することが知られている。１９８
８年、輸血後非Ａ非Ｂ型肝炎を起こした患者の血清をも
とに、ＨＣＶの遺伝子の一部がクローニングされ、これ
が米国カイロン社のホートン等によりサイエンスに報告
された［Science, Vol.244,pp359-362,(1989):Science,
Vol.244,pp362-364,(1989) ］。更に、彼らはＨＣＶの
非構造蛋白質領域をコードする遺伝子の一部を、酵母の
発現ベクターに挿入し、酵母でこの遺伝子を発現させる
ことに成功した。この方法により生産される非構造蛋白
質の一部分は、Ｃ型肝炎患者血清中に存在する、抗ＨＣ
Ｖ抗体に対して抗原性を有する［The Lancet, Vol.335,
pp1-3,(1990)］。この性質により、この蛋白質はＣ型肝
炎の診断用抗原として利用された。
る肝炎であり、血液により感染することを特徴とする肝
炎である。特に、輸血後非Ａ非Ｂ型肝炎の大半を占め
る。そして、ＨＣＶの感染に対しては、宿主が免疫反応
を起こす程度が弱いため慢性化しやすく、その多くは更
に肝癌へと病状が進行することが知られている。１９８
８年、輸血後非Ａ非Ｂ型肝炎を起こした患者の血清をも
とに、ＨＣＶの遺伝子の一部がクローニングされ、これ
が米国カイロン社のホートン等によりサイエンスに報告
された［Science, Vol.244,pp359-362,(1989):Science,
Vol.244,pp362-364,(1989) ］。更に、彼らはＨＣＶの
非構造蛋白質領域をコードする遺伝子の一部を、酵母の
発現ベクターに挿入し、酵母でこの遺伝子を発現させる
ことに成功した。この方法により生産される非構造蛋白
質の一部分は、Ｃ型肝炎患者血清中に存在する、抗ＨＣ
Ｖ抗体に対して抗原性を有する［The Lancet, Vol.335,
pp1-3,(1990)］。この性質により、この蛋白質はＣ型肝
炎の診断用抗原として利用された。
【０００３】しかし、ホートン等が示した上記抗原性蛋
白質は、Ｃ型肝炎患者血清中に存在する抗ＨＣＶ抗体と
反応するものの、この抗ＨＣＶ抗体はＣ型肝炎が発症し
てなお６カ月程度を経て、はじめて陽性となり、また擬
陽性も多いなどの問題点が指摘された。そこで、現在で
は第二世代と呼ばれる、ＨＣＶの構造蛋白質領域の一部
であるコア蛋白質領域の抗原基を含む抗体測定系が導入
され、Ｃ型肝炎の診断に利用されている。
白質は、Ｃ型肝炎患者血清中に存在する抗ＨＣＶ抗体と
反応するものの、この抗ＨＣＶ抗体はＣ型肝炎が発症し
てなお６カ月程度を経て、はじめて陽性となり、また擬
陽性も多いなどの問題点が指摘された。そこで、現在で
は第二世代と呼ばれる、ＨＣＶの構造蛋白質領域の一部
であるコア蛋白質領域の抗原基を含む抗体測定系が導入
され、Ｃ型肝炎の診断に利用されている。
【０００４】一方、ＨＣＶにより引き起こされるＣ型肝
炎を、予防または処置するための効果的なワクチン及び
免疫療法剤はいまだ開発されておらず、こうした薬剤が
待ち望まれている。一般に、ウイルス感染に対しては、
体液性免疫機構を賦活し抗体を誘発すると同時に、ウイ
ルス感染細胞を直接に障害しその中に潜むウイルスを排
除し得るような、ウイルス特異的ＣＴＬなどの細胞性免
疫機構を賦活し得るワクチンを開発してゆく必要があ
る。Ｃ型肝炎はＨＣＶに感染した肝細胞に対して、ＨＣ
Ｖ特異的ＣＴＬなどの細胞性免疫機構が働き、感染肝細
胞が破壊されることで発症すると考えられている。Ｃ型
肝炎の特徴は、このＨＣＶ特異的ＣＴＬの感染肝細胞除
去が不十分で、炎症が長期化することである。
炎を、予防または処置するための効果的なワクチン及び
免疫療法剤はいまだ開発されておらず、こうした薬剤が
待ち望まれている。一般に、ウイルス感染に対しては、
体液性免疫機構を賦活し抗体を誘発すると同時に、ウイ
ルス感染細胞を直接に障害しその中に潜むウイルスを排
除し得るような、ウイルス特異的ＣＴＬなどの細胞性免
疫機構を賦活し得るワクチンを開発してゆく必要があ
る。Ｃ型肝炎はＨＣＶに感染した肝細胞に対して、ＨＣ
Ｖ特異的ＣＴＬなどの細胞性免疫機構が働き、感染肝細
胞が破壊されることで発症すると考えられている。Ｃ型
肝炎の特徴は、このＨＣＶ特異的ＣＴＬの感染肝細胞除
去が不十分で、炎症が長期化することである。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら従来の技
術では、前述の抗体測定系で示されたように、Ｃ型肝炎
患者体内の抗ＨＣＶ抗体が反応する抗原基であって、抗
体または細胞表面に抗体分子を表出しているＢ細胞と免
疫的に結合する実際の構造部分（以下、Ｂ細胞エピトー
プという）は明らかにされているが、Ｔ細胞エピトープ
はいまだ明らかになっていない。
術では、前述の抗体測定系で示されたように、Ｃ型肝炎
患者体内の抗ＨＣＶ抗体が反応する抗原基であって、抗
体または細胞表面に抗体分子を表出しているＢ細胞と免
疫的に結合する実際の構造部分（以下、Ｂ細胞エピトー
プという）は明らかにされているが、Ｔ細胞エピトープ
はいまだ明らかになっていない。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明はＨＣＶにより引
き起こされるＣ型肝炎を、予防または処置するための効
果的なワクチン及び免疫療法剤を開発するために必要で
あって、いまだ明らかになっていない、Ｔ細胞エピトー
プを明らかにし、提供することを目的とする。ＨＣＶは
遺伝子の長さ約１０kb（１万ヌクレオチド）のＲＮＡウ
イルスと考えられ、フラビウイルスの仲間であると推定
されている。このことから考えると、５’末端側から約
１．５kb（約１５００ヌクレオチド）の部分が構造蛋白
質遺伝子部分に相当し、残りが非構造蛋白質遺伝子部分
に相当する。また約１．５kbの構造蛋白質遺伝子部分
は、フラビウイルスの遺伝子構造との比較により、コア
蛋白質遺伝子領域、膜蛋白質遺伝子領域、外皮蛋白質遺
伝子領域の３部分に機能的に分かれるものと考えられて
いる。
き起こされるＣ型肝炎を、予防または処置するための効
果的なワクチン及び免疫療法剤を開発するために必要で
あって、いまだ明らかになっていない、Ｔ細胞エピトー
プを明らかにし、提供することを目的とする。ＨＣＶは
遺伝子の長さ約１０kb（１万ヌクレオチド）のＲＮＡウ
イルスと考えられ、フラビウイルスの仲間であると推定
されている。このことから考えると、５’末端側から約
１．５kb（約１５００ヌクレオチド）の部分が構造蛋白
質遺伝子部分に相当し、残りが非構造蛋白質遺伝子部分
に相当する。また約１．５kbの構造蛋白質遺伝子部分
は、フラビウイルスの遺伝子構造との比較により、コア
蛋白質遺伝子領域、膜蛋白質遺伝子領域、外皮蛋白質遺
伝子領域の３部分に機能的に分かれるものと考えられて
いる。
【０００７】ＨＣＶにおいては、アミノ酸配列の変異が
高頻度に見られ、それによりグループ分類されている
が、特にコア蛋白質領域は、グループ内においてもグル
ープ間においてもアミノ酸配列がよく保存されているこ
とが知られている［Proc.Natl.Acad.Sci.USA, Vol.88,p
p10292-10296,(1991) ］。そこで本発明者らは、ＨＣＶ
のコア蛋白質領域に対して特異的に反応するＨＣＶ特異
的ＣＴＬが患者の体内に存在し、このＣＴＬがＣ型肝炎
の発症やＨＣＶ排除において重要な役割を果たしている
に違いないと考えた。
高頻度に見られ、それによりグループ分類されている
が、特にコア蛋白質領域は、グループ内においてもグル
ープ間においてもアミノ酸配列がよく保存されているこ
とが知られている［Proc.Natl.Acad.Sci.USA, Vol.88,p
p10292-10296,(1991) ］。そこで本発明者らは、ＨＣＶ
のコア蛋白質領域に対して特異的に反応するＨＣＶ特異
的ＣＴＬが患者の体内に存在し、このＣＴＬがＣ型肝炎
の発症やＨＣＶ排除において重要な役割を果たしている
に違いないと考えた。
【０００８】このＣＴＬこそ、ウイルス感染細胞を直接
に障害しその中に潜むウイルスを排除し得るウイルス特
異的キラーＴ細胞であり、本発明の目的とするヒトの細
胞性免疫機構を賦活し得るＴ細胞エピトープを認識する
ものである。Ｃ型肝炎患者の体内のリンパ球に含まれる
ＨＣＶ特異的ＣＴＬの、ＨＣＶコア蛋白質領域に対する
反応性の検討から、ＨＣＶにより引き起こされるＣ型肝
炎を、予防または処置するための効果的なワクチン及び
免疫療法剤を開発するために必要であって、いまだ明ら
かになっていない、Ｔ細胞エピトープを明らかにし、提
供することに成功した。
に障害しその中に潜むウイルスを排除し得るウイルス特
異的キラーＴ細胞であり、本発明の目的とするヒトの細
胞性免疫機構を賦活し得るＴ細胞エピトープを認識する
ものである。Ｃ型肝炎患者の体内のリンパ球に含まれる
ＨＣＶ特異的ＣＴＬの、ＨＣＶコア蛋白質領域に対する
反応性の検討から、ＨＣＶにより引き起こされるＣ型肝
炎を、予防または処置するための効果的なワクチン及び
免疫療法剤を開発するために必要であって、いまだ明ら
かになっていない、Ｔ細胞エピトープを明らかにし、提
供することに成功した。
【０００９】すなわち、本発明は、次の構成を含むもの
である。 （１）Ｃ型肝炎ウイルスコア蛋白質領域の一部である約
５〜２０残基のアミノ酸配列を含有し、Ｔ細胞に認識さ
れ、かつそのＴ細胞に対して刺激を与えることを特徴と
するＴ細胞刺激ペプチド。 （２）上記（１）に記載のアミノ酸配列が下記化５式で
表されるＣＤ８陽性Ｔ細胞刺激ペプチド。
である。 （１）Ｃ型肝炎ウイルスコア蛋白質領域の一部である約
５〜２０残基のアミノ酸配列を含有し、Ｔ細胞に認識さ
れ、かつそのＴ細胞に対して刺激を与えることを特徴と
するＴ細胞刺激ペプチド。 （２）上記（１）に記載のアミノ酸配列が下記化５式で
表されるＣＤ８陽性Ｔ細胞刺激ペプチド。
【００１０】
【化５】 （３）上記（１）に記載のアミノ酸配列が下記化６式で
表されるＣＤ８陽性Ｔ細胞刺激ペプチド。
表されるＣＤ８陽性Ｔ細胞刺激ペプチド。
【００１１】
【化６】 （４）上記（１）に記載のアミノ酸配列が下記化７式で
表されるＣＤ４陽性Ｔ細胞刺激ペプチド。
表されるＣＤ４陽性Ｔ細胞刺激ペプチド。
【００１２】
【化７】 （５）上記（１）に記載のアミノ酸配列が下記化８式で
表されるＣＤ４陽性Ｔ細胞刺激ペプチド。
表されるＣＤ４陽性Ｔ細胞刺激ペプチド。
【００１３】
【化８】 （６）上記（１）に記載のＴ細胞刺激ペプチドが、ペプ
チド免疫原に作用可能に結合していることを特徴とする
複合ペプチド免疫原。 （７）上記（２）に記載のＣＤ８陽性Ｔ細胞刺激ペプチ
ドが、Ｃ型肝炎ウイルス蛋白質のコア蛋白質領域以外の
ものよりなるペプチド免疫原に作用可能に結合してなる
（６）に記載の複合免疫原。 （８）上記（３）に記載のＣＤ８陽性Ｔ細胞刺激ペプチ
ドが、Ｃ型肝炎ウイルス蛋白質のコア蛋白質領域以外の
ものよりなるペプチド免疫原に作用可能に結合してなる
（６）に記載の複合免疫原。
チド免疫原に作用可能に結合していることを特徴とする
複合ペプチド免疫原。 （７）上記（２）に記載のＣＤ８陽性Ｔ細胞刺激ペプチ
ドが、Ｃ型肝炎ウイルス蛋白質のコア蛋白質領域以外の
ものよりなるペプチド免疫原に作用可能に結合してなる
（６）に記載の複合免疫原。 （８）上記（３）に記載のＣＤ８陽性Ｔ細胞刺激ペプチ
ドが、Ｃ型肝炎ウイルス蛋白質のコア蛋白質領域以外の
ものよりなるペプチド免疫原に作用可能に結合してなる
（６）に記載の複合免疫原。
【００１４】（９）上記（４）に記載のＣＤ４陽性Ｔ細
胞刺激ペプチドが、Ｃ型肝炎ウイルス蛋白質のコア蛋白
質領域以外のものよりなるペプチド免疫原に作用可能に
結合してなる（６）に記載の複合免疫原。 （１０）上記（５）に記載のＣＤ４陽性Ｔ細胞刺激ペプ
チドが、Ｃ型肝炎ウイルス蛋白質のコア蛋白質領域以外
のものよりなるペプチド免疫原に作用可能に結合してな
る（６）に記載の複合免疫原。 （１１）Ｃ型肝炎ウイルスの感染を処置及び、または予
防するためのワクチンであって、前記（１）に記載のＴ
細胞刺激ペプチドを含有し、あるいは（６）に記載の複
合ペプチド免疫原を含有し、該ペプチドが薬学的に容認
し得る賦形剤中に、薬学的に効果的な用量で存在する、
Ｃ型肝炎用薬剤。
胞刺激ペプチドが、Ｃ型肝炎ウイルス蛋白質のコア蛋白
質領域以外のものよりなるペプチド免疫原に作用可能に
結合してなる（６）に記載の複合免疫原。 （１０）上記（５）に記載のＣＤ４陽性Ｔ細胞刺激ペプ
チドが、Ｃ型肝炎ウイルス蛋白質のコア蛋白質領域以外
のものよりなるペプチド免疫原に作用可能に結合してな
る（６）に記載の複合免疫原。 （１１）Ｃ型肝炎ウイルスの感染を処置及び、または予
防するためのワクチンであって、前記（１）に記載のＴ
細胞刺激ペプチドを含有し、あるいは（６）に記載の複
合ペプチド免疫原を含有し、該ペプチドが薬学的に容認
し得る賦形剤中に、薬学的に効果的な用量で存在する、
Ｃ型肝炎用薬剤。
【００１５】本発明でいう用語「ペプチド」は、隣接す
るアミノ酸残基のα−アミノ基とカルボキシル基間でペ
プチド結合により相互に結合された線状の一連のアミノ
酸を表す。ペプチドは種々の長さであり得、中性状態
（無電荷）または塩のいずれであっても、またグルコシ
ル化、側鎖の酸化あるいはホスホリル化などの変性を受
けていても、いなくてもよい。当分野では、アミノ酸配
列が酸性基及び塩基性基を含み、かつ該ペプチドにより
示される特定のイオン化状態が、取り巻いている媒質の
ｐＨに依存することは十分に理解されている。また、付
随的にアミノ酸側鎖に付加された置換基、例えばグルコ
シル単位、脂質あるいは無機イオンによって変性された
ペプチド、並びにスルフヒドリル基の酸化などの、鎖の
化学転化に関連する変性物もこの定義に含まれる。かく
して用語「ペプチド」は化１または化２または化３また
は化４で示されるアミノ酸配列を含むことを意図し、機
能を損なわない上記変性を受けたものも意図している。
るアミノ酸残基のα−アミノ基とカルボキシル基間でペ
プチド結合により相互に結合された線状の一連のアミノ
酸を表す。ペプチドは種々の長さであり得、中性状態
（無電荷）または塩のいずれであっても、またグルコシ
ル化、側鎖の酸化あるいはホスホリル化などの変性を受
けていても、いなくてもよい。当分野では、アミノ酸配
列が酸性基及び塩基性基を含み、かつ該ペプチドにより
示される特定のイオン化状態が、取り巻いている媒質の
ｐＨに依存することは十分に理解されている。また、付
随的にアミノ酸側鎖に付加された置換基、例えばグルコ
シル単位、脂質あるいは無機イオンによって変性された
ペプチド、並びにスルフヒドリル基の酸化などの、鎖の
化学転化に関連する変性物もこの定義に含まれる。かく
して用語「ペプチド」は化１または化２または化３また
は化４で示されるアミノ酸配列を含むことを意図し、機
能を損なわない上記変性を受けたものも意図している。
【００１６】本発明でいう用語「Ｔ細胞刺激ペプチド」
は、Ｔ細胞エピトープを持つペプチドを意図しており、
Ｂ細胞エピトープは意図していない。当分野では、「Ｔ
細胞に対する刺激」の結果、刺激を受けたＴ細胞におい
て活性化（正の刺激）が起こるか、不活性化（負の刺
激）が起こるかは、その刺激を与える際の環境（２次的
刺激）によることが十分理解されている。
は、Ｔ細胞エピトープを持つペプチドを意図しており、
Ｂ細胞エピトープは意図していない。当分野では、「Ｔ
細胞に対する刺激」の結果、刺激を受けたＴ細胞におい
て活性化（正の刺激）が起こるか、不活性化（負の刺
激）が起こるかは、その刺激を与える際の環境（２次的
刺激）によることが十分理解されている。
【００１７】本発明でいう用語「ＣＤ８陽性Ｔ細胞」と
は、リンパ球細胞表面抗原の一つであるＣＤ８を発現し
ているＴ細胞のことで、正常ヒト末梢血リンパ球の約３
０％を占める。市販の抗ＣＤ８抗体を使えばフローサイ
トメトリーなどの手法を用いて容易に発現が確認でき
る。（太田和雄，野村和弘編集；フローサイトメトリー
手技と実際，蟹書房(1984)などに詳述されている） 同様に用語「ＣＤ４陽性Ｔ細胞」とは、リンパ球細胞表
面抗原の一つであるＣＤ４を発現しているＴ細胞のこと
で、正常ヒト末梢血リンパ球の約５０％を占める。これ
も市販の抗ＣＤ４抗体を使えばフローサイトメトリーな
どの手法を用いて容易に発現が確認できる。
は、リンパ球細胞表面抗原の一つであるＣＤ８を発現し
ているＴ細胞のことで、正常ヒト末梢血リンパ球の約３
０％を占める。市販の抗ＣＤ８抗体を使えばフローサイ
トメトリーなどの手法を用いて容易に発現が確認でき
る。（太田和雄，野村和弘編集；フローサイトメトリー
手技と実際，蟹書房(1984)などに詳述されている） 同様に用語「ＣＤ４陽性Ｔ細胞」とは、リンパ球細胞表
面抗原の一つであるＣＤ４を発現しているＴ細胞のこと
で、正常ヒト末梢血リンパ球の約５０％を占める。これ
も市販の抗ＣＤ４抗体を使えばフローサイトメトリーな
どの手法を用いて容易に発現が確認できる。
【００１８】本明細書で用いる「作用可能に結合」と
は、該結合が結合したＴ細胞エピトープとして機能する
能力を妨害しないことを意味する。本発明でいう「ＨＣ
Ｖコア蛋白質領域のアミノ酸配列」は、図１に示す１９
１アミノ酸の配列を意図するが、ウイルス変異に伴う一
部のアミノ酸の置換が公知であり［J.General Virolog
y, Vol.73,pp673-679,(1992)］、このアミノ酸置換によ
って得られるペプチドの性質が、本発明に示されるもの
と実質的に同等である場合は、本発明に含まれる。
は、該結合が結合したＴ細胞エピトープとして機能する
能力を妨害しないことを意味する。本発明でいう「ＨＣ
Ｖコア蛋白質領域のアミノ酸配列」は、図１に示す１９
１アミノ酸の配列を意図するが、ウイルス変異に伴う一
部のアミノ酸の置換が公知であり［J.General Virolog
y, Vol.73,pp673-679,(1992)］、このアミノ酸置換によ
って得られるペプチドの性質が、本発明に示されるもの
と実質的に同等である場合は、本発明に含まれる。
【００１９】図１に示す１９１アミノ酸の配列は、日本
人のＣ型肝炎の患者血清よりクローニングして得られた
塩基配列をもとに、対応するアミノ酸へ翻訳した結果の
配列である。クローニングは当業者によく知られた方法
で行った。（Sambrook,Fritsch, Maniatis; Molecular
Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring HarborLa
boratory, New York(1982)などに詳述されている）すな
わち、すでに公知のＨＣＶの塩基配列、例えば下遠野ら
［Proc.Natl.Acad.Sci.USA, Vol.87,pp9524-9528,(199
0) ］をもとにプライマーを合成し（ＡＢＩ社 ３４０
Ａ型機）、患者血清中のＲＮＡから合成したｃＤＮＡを
テンプレートにＰＣＲで増幅した。増幅したフラグメン
トを単離、精製し、ベクターであるｐＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔ（Stratagene）に挿入してクローニングを行った。
これをもとに蛍光シークエンサー（ＡＢＩ社 ３７３Ａ
型機）により塩基配列を決定し、対応するアミノ酸へ翻
訳した。
人のＣ型肝炎の患者血清よりクローニングして得られた
塩基配列をもとに、対応するアミノ酸へ翻訳した結果の
配列である。クローニングは当業者によく知られた方法
で行った。（Sambrook,Fritsch, Maniatis; Molecular
Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring HarborLa
boratory, New York(1982)などに詳述されている）すな
わち、すでに公知のＨＣＶの塩基配列、例えば下遠野ら
［Proc.Natl.Acad.Sci.USA, Vol.87,pp9524-9528,(199
0) ］をもとにプライマーを合成し（ＡＢＩ社 ３４０
Ａ型機）、患者血清中のＲＮＡから合成したｃＤＮＡを
テンプレートにＰＣＲで増幅した。増幅したフラグメン
トを単離、精製し、ベクターであるｐＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔ（Stratagene）に挿入してクローニングを行った。
これをもとに蛍光シークエンサー（ＡＢＩ社 ３７３Ａ
型機）により塩基配列を決定し、対応するアミノ酸へ翻
訳した。
【００２０】翻訳したＨＣＶコア蛋白質領域のアミノ酸
配列を基にして、図２および図３に示すように、２０ｍ
ｅｒもしくは２１ｍｅｒのオーバーラップするペプチド
を合成した（ＡＢＩ社 ４３０Ａ型機）。患者の体内か
ら分離したリンパ球に対して、実施例１及び実施例４に
示すように合成ペプチド刺激を与えることにより、標的
細胞（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスで形質転換し
た患者自身のＢ細胞株（ＢＣＬ）に合成ペプチドの一つ
を張りつけた細胞）を殺すキラーＴ細胞が誘導された。
これらキラーＴ細胞を使った詳細な検討の結果、ＨＣＶ
特異的キラーＴ細胞の認識するＴ細胞エピトープは化１
式または化２式または化３式または化４式に示したペプ
チドに含まれることが明かとなった。
配列を基にして、図２および図３に示すように、２０ｍ
ｅｒもしくは２１ｍｅｒのオーバーラップするペプチド
を合成した（ＡＢＩ社 ４３０Ａ型機）。患者の体内か
ら分離したリンパ球に対して、実施例１及び実施例４に
示すように合成ペプチド刺激を与えることにより、標的
細胞（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスで形質転換し
た患者自身のＢ細胞株（ＢＣＬ）に合成ペプチドの一つ
を張りつけた細胞）を殺すキラーＴ細胞が誘導された。
これらキラーＴ細胞を使った詳細な検討の結果、ＨＣＶ
特異的キラーＴ細胞の認識するＴ細胞エピトープは化１
式または化２式または化３式または化４式に示したペプ
チドに含まれることが明かとなった。
【００２１】本発明のＴ細胞刺激ペプチドは、多数の従
来の方法で調製できる。例えば、公知の固相ペプチド合
成方法により合成され得る。基になるアミノ酸の配列に
はない１〜２個のアミノ酸を本ペプチドのアミノ末端、
あるいはカルボキシル末端に付加して合成してもよい。
このようなアミノ酸の付加により、キャリヤー蛋白、支
持体、または他の免疫原と本ペプチドとを作用可能に結
合することができる。こうした目的のために有用なアミ
ノ酸には、チロシン、リジン、グルタミン酸、アスパラ
ギン酸、システイン及びこれらの誘導体がある。
来の方法で調製できる。例えば、公知の固相ペプチド合
成方法により合成され得る。基になるアミノ酸の配列に
はない１〜２個のアミノ酸を本ペプチドのアミノ末端、
あるいはカルボキシル末端に付加して合成してもよい。
このようなアミノ酸の付加により、キャリヤー蛋白、支
持体、または他の免疫原と本ペプチドとを作用可能に結
合することができる。こうした目的のために有用なアミ
ノ酸には、チロシン、リジン、グルタミン酸、アスパラ
ギン酸、システイン及びこれらの誘導体がある。
【００２２】さらに通常の蛋白質修飾法により、例えば
アミノ末端のアセチル化や、カルボキシル末端のアミド
化などにより、本ペプチドが他のペプチド免疫原あるい
は支持体と作用可能に結合する手段を付加することも可
能である。合成された所望のペプチドはまた、通常の精
製手段により精製され、回収される。例えば、一般には
これらの合成ペプチドを合成ペプチド精製用カラムを用
いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で精製
し、回収して凍結乾燥法により乾燥する。
アミノ末端のアセチル化や、カルボキシル末端のアミド
化などにより、本ペプチドが他のペプチド免疫原あるい
は支持体と作用可能に結合する手段を付加することも可
能である。合成された所望のペプチドはまた、通常の精
製手段により精製され、回収される。例えば、一般には
これらの合成ペプチドを合成ペプチド精製用カラムを用
いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で精製
し、回収して凍結乾燥法により乾燥する。
【００２３】また、他の免疫原に作用可能に結合した、
本発明のＴ細胞刺激ペプチドは、ヘルパ−Ｔ細胞を含む
Ｔ細胞を刺激する効果を利用して、該免疫原と免疫反応
する抗体産生を増強するためにも使用できる。活性成分
として、ペプチド配列を含むワクチンの調製も当分野で
よく知られている。典型的には、かかるワクチンは注射
剤（液状溶液または懸濁液）、溶液または懸濁液に適し
た固体形状として調製される。注入前の液体も調製でき
る。調剤は乳化してもよい。活性免疫原性成分は製薬上
許容されかつ該活性成分と相容性の賦形剤としばしば混
合される。適当な賦形剤は、例えば水、塩水、デキスト
ロース、グリセロール、エタノールなど及びこれらの組
み合わせである。さらに必要ならば、このワクチンは少
量の補助物質、例えば湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤
またはこのワクチンの有効性を増強する薬剤を含むこと
ができる。
本発明のＴ細胞刺激ペプチドは、ヘルパ−Ｔ細胞を含む
Ｔ細胞を刺激する効果を利用して、該免疫原と免疫反応
する抗体産生を増強するためにも使用できる。活性成分
として、ペプチド配列を含むワクチンの調製も当分野で
よく知られている。典型的には、かかるワクチンは注射
剤（液状溶液または懸濁液）、溶液または懸濁液に適し
た固体形状として調製される。注入前の液体も調製でき
る。調剤は乳化してもよい。活性免疫原性成分は製薬上
許容されかつ該活性成分と相容性の賦形剤としばしば混
合される。適当な賦形剤は、例えば水、塩水、デキスト
ロース、グリセロール、エタノールなど及びこれらの組
み合わせである。さらに必要ならば、このワクチンは少
量の補助物質、例えば湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤
またはこのワクチンの有効性を増強する薬剤を含むこと
ができる。
【００２４】このワクチンは、注射例えば皮下または筋
肉内注射により非経口投与するのが有利である。他の投
与様式に適した付随的な処方は坐薬及びいくつかの場合
には経口処方物をも含む。坐薬の場合、伝統的なバイン
ダ及び担体は、例えばポリアルカレングリコ（polyalka
lene glycos ）またはトリグリセリドを含み、かかる坐
薬は０．５〜１０％、好ましくは１〜２％の範囲で活性
成分を含む混合物から形成できる。経口処方物は通常使
用される賦形剤、例えば薬剤用等級のマンニトール、ラ
クトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、蔗糖
ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含
む。この組成物は溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル
剤、持続放出型処方物または粉末の形状をとり、かつ
１．０〜９５％、好ましくは２．５％〜７０％の活性成
分を含む。
肉内注射により非経口投与するのが有利である。他の投
与様式に適した付随的な処方は坐薬及びいくつかの場合
には経口処方物をも含む。坐薬の場合、伝統的なバイン
ダ及び担体は、例えばポリアルカレングリコ（polyalka
lene glycos ）またはトリグリセリドを含み、かかる坐
薬は０．５〜１０％、好ましくは１〜２％の範囲で活性
成分を含む混合物から形成できる。経口処方物は通常使
用される賦形剤、例えば薬剤用等級のマンニトール、ラ
クトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、蔗糖
ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含
む。この組成物は溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル
剤、持続放出型処方物または粉末の形状をとり、かつ
１．０〜９５％、好ましくは２．５％〜７０％の活性成
分を含む。
【００２５】ペプチドは、中性または塩の形でワクチン
に処方できる。製薬上許容される塩は酸付加塩類（ペプ
チドの遊離アミノ基とともに形成される）、すなわち、
無機塩、例えば塩酸または燐酸あるいは有機酸、例えば
酢酸、酒石酸、マンデル酸などとの塩を含む。遊離カル
ボン酸基とともに形成される塩も、無機塩基例えばナト
リウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または
鉄水酸化物及び有機塩基、例えばイソプロピルアミン、
トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒス
チジン、プロカインなどから誘導できる。
に処方できる。製薬上許容される塩は酸付加塩類（ペプ
チドの遊離アミノ基とともに形成される）、すなわち、
無機塩、例えば塩酸または燐酸あるいは有機酸、例えば
酢酸、酒石酸、マンデル酸などとの塩を含む。遊離カル
ボン酸基とともに形成される塩も、無機塩基例えばナト
リウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または
鉄水酸化物及び有機塩基、例えばイソプロピルアミン、
トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒス
チジン、プロカインなどから誘導できる。
【００２６】本発明のワクチンは、投与処方物と一致す
る様式で、治療上有効かつ免疫原性であるような量で投
与される。投与すべき量は、治療すべき対象、抗体を合
成する該対象の免疫系の容量及び所定の保護の程度に依
存する。投与すべきことが要求される活性成分の正確な
量は臨床医の判断に依存し、各個体に特異的である。し
かしながら、適当な用量範囲は個体一人あたり数μｇ〜
数１００μｇ程度の活性成分である。最初の投与に対す
る適当な管理及びブースタ注射も有効であるが、最初の
投与後１〜２週間隔で後の注射または他の投与を行うこ
とが典型的である。
る様式で、治療上有効かつ免疫原性であるような量で投
与される。投与すべき量は、治療すべき対象、抗体を合
成する該対象の免疫系の容量及び所定の保護の程度に依
存する。投与すべきことが要求される活性成分の正確な
量は臨床医の判断に依存し、各個体に特異的である。し
かしながら、適当な用量範囲は個体一人あたり数μｇ〜
数１００μｇ程度の活性成分である。最初の投与に対す
る適当な管理及びブースタ注射も有効であるが、最初の
投与後１〜２週間隔で後の注射または他の投与を行うこ
とが典型的である。
【００２７】
【発明の効果】本発明は、ＨＣＶにより引き起こされる
Ｃ型肝炎を、予防または処置するための効果的なワクチ
ン及び免疫療法剤を開発するために必要であって、いま
だ明らかになっていない、ＨＣＶのＴ細胞エピトープを
明らかにしかつ提供し得る。本発明によって提供される
Ｔ細胞刺激ペプチドを利用すれば、例えばＨＣＶ特異的
ＣＴＬなどのヒトの細胞性免疫機構を賦活し、生体内の
ＨＣＶ除去を促すことができ、あるいはＨＣＶのＢ細胞
エピトープを含む免疫原に作用可能に結合することによ
って、抗ＨＣＶ抗体の産生を増強することもできる。
Ｃ型肝炎を、予防または処置するための効果的なワクチ
ン及び免疫療法剤を開発するために必要であって、いま
だ明らかになっていない、ＨＣＶのＴ細胞エピトープを
明らかにしかつ提供し得る。本発明によって提供される
Ｔ細胞刺激ペプチドを利用すれば、例えばＨＣＶ特異的
ＣＴＬなどのヒトの細胞性免疫機構を賦活し、生体内の
ＨＣＶ除去を促すことができ、あるいはＨＣＶのＢ細胞
エピトープを含む免疫原に作用可能に結合することによ
って、抗ＨＣＶ抗体の産生を増強することもできる。
【００２８】
【実施例】以下、本発明の特徴を明らかにするために、
実施例に沿って記述するが、これらの実施例は本発明の
種々の具体例を説明するものであって、本発明はこれら
の実施例に限定されるものではない。
実施例に沿って記述するが、これらの実施例は本発明の
種々の具体例を説明するものであって、本発明はこれら
の実施例に限定されるものではない。
【００２９】実施例 １ 図１に示す１９１アミノ酸の配列は、日本人のＣ型肝炎
の患者血清よりクローニングして得られた塩基配列をも
とに、対応するアミノ酸へ翻訳した結果の配列である。
クローニングは当業者によく知られた方法で行った。
（Sambrook,Fritsch, Maniatis; Molecular Cloning, A
Laboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory,
New York (1982) などに詳述されている）すなわち、す
でに公知のＨＣＶの塩基配列、例えば下遠野ら［Proc.N
atl.Acad.Sci.USA, Vol.87,pp9524-9528,(1990) ］をも
とにプライマーを合成し（ＡＢＩ社 ３４０Ａ型機）、
患者血清中のＲＮＡから合成したｃＤＮＡをテンプレー
トにＰＣＲで増幅した。
の患者血清よりクローニングして得られた塩基配列をも
とに、対応するアミノ酸へ翻訳した結果の配列である。
クローニングは当業者によく知られた方法で行った。
（Sambrook,Fritsch, Maniatis; Molecular Cloning, A
Laboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory,
New York (1982) などに詳述されている）すなわち、す
でに公知のＨＣＶの塩基配列、例えば下遠野ら［Proc.N
atl.Acad.Sci.USA, Vol.87,pp9524-9528,(1990) ］をも
とにプライマーを合成し（ＡＢＩ社 ３４０Ａ型機）、
患者血清中のＲＮＡから合成したｃＤＮＡをテンプレー
トにＰＣＲで増幅した。
【００３０】増幅したフラグメントを単離、精製し、ベ
クターであるｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（Stratagene）に
挿入してクローニングを行った。これをもとに蛍光シー
クエンサー（ＡＢＩ社 ３７３Ａ型機）により塩基配列
を決定し、対応するアミノ酸へ翻訳した。翻訳したＨＣ
Ｖコア蛋白質領域のアミノ酸配列を基にして、図２およ
び図３に示すように、２０ｍｅｒもしくは２１ｍｅｒの
オーバーラップするペプチドを化学的に合成した（ＮＰ
−１〜ＮＰ−１８；ＡＢＩ社 ４３０Ａ型機による）。
クターであるｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（Stratagene）に
挿入してクローニングを行った。これをもとに蛍光シー
クエンサー（ＡＢＩ社 ３７３Ａ型機）により塩基配列
を決定し、対応するアミノ酸へ翻訳した。翻訳したＨＣ
Ｖコア蛋白質領域のアミノ酸配列を基にして、図２およ
び図３に示すように、２０ｍｅｒもしくは２１ｍｅｒの
オーバーラップするペプチドを化学的に合成した（ＮＰ
−１〜ＮＰ−１８；ＡＢＩ社 ４３０Ａ型機による）。
【００３１】インターフェロン療法が有効であることを
特徴とする慢性Ｃ型肝炎患者患者の末梢血から文献［Pr
oc.Natl.Acad.Sci.USA, Vol.86,pp2883-2887,(1989) ］
に記載されている方法で末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を分
離した。すなわち、たとえば６週にわたり毎日６００万
単位のインターフェロンβを静注した後、ＡＬＴ（alan
ine aminotransferase）が５２４IU/Iから３８IU/Iに速
やかに減少したような患者のＰＢＬである。回収した患
者リンパ球を、１０％ヒトＡＢ型血清入りのＲＰＭＩ１
６４０培地（RPMI Medium 1640, #320-1875AJ, GIBCO,
U.S.A.）で１×１０6 個／ｍｌの細胞濃度に懸濁した
後、合成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ａ：ＮＰ−１〜Ｎ
Ｐ−５，ＭＩＸ Ｂ：ＮＰ−６〜ＮＰ−１０，ＭＩＸ
Ｃ：ＮＰ−１１〜ＮＰ−１４，ＭＩＸ Ｄ：ＮＰ−１５
〜ＮＰ−１８）を、各々が１０μｇ／ｍｌになるように
加えた。
特徴とする慢性Ｃ型肝炎患者患者の末梢血から文献［Pr
oc.Natl.Acad.Sci.USA, Vol.86,pp2883-2887,(1989) ］
に記載されている方法で末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を分
離した。すなわち、たとえば６週にわたり毎日６００万
単位のインターフェロンβを静注した後、ＡＬＴ（alan
ine aminotransferase）が５２４IU/Iから３８IU/Iに速
やかに減少したような患者のＰＢＬである。回収した患
者リンパ球を、１０％ヒトＡＢ型血清入りのＲＰＭＩ１
６４０培地（RPMI Medium 1640, #320-1875AJ, GIBCO,
U.S.A.）で１×１０6 個／ｍｌの細胞濃度に懸濁した
後、合成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ａ：ＮＰ−１〜Ｎ
Ｐ−５，ＭＩＸ Ｂ：ＮＰ−６〜ＮＰ−１０，ＭＩＸ
Ｃ：ＮＰ−１１〜ＮＰ−１４，ＭＩＸ Ｄ：ＮＰ−１５
〜ＮＰ−１８）を、各々が１０μｇ／ｍｌになるように
加えた。
【００３２】培養は、３７℃、５％ＣＯ2 の条件下で行
った。培養２日目に、リンホカルトＴ（Biotest Diagno
stics, FRG）を、その中の主成分であるインターロイキ
ン２の添加を目的として終濃度１０％になるように加え
た。さらに、培養７日目に、２回目の混合ペプチド刺激
のために、合成ペプチドの混合物を各々が１０μｇ／ｍ
ｌになるように加えた。このとき、抗原提示細胞として
４０Ｇｙの放射線照射した患者ＰＢＬを５×１０5 個／
ｍｌとなるように同時に加えた。培養１６日目に、２回
の混合ペプチド刺激を受けた患者リンパ球に対し、細胞
障害活性の評価を行った。
った。培養２日目に、リンホカルトＴ（Biotest Diagno
stics, FRG）を、その中の主成分であるインターロイキ
ン２の添加を目的として終濃度１０％になるように加え
た。さらに、培養７日目に、２回目の混合ペプチド刺激
のために、合成ペプチドの混合物を各々が１０μｇ／ｍ
ｌになるように加えた。このとき、抗原提示細胞として
４０Ｇｙの放射線照射した患者ＰＢＬを５×１０5 個／
ｍｌとなるように同時に加えた。培養１６日目に、２回
の混合ペプチド刺激を受けた患者リンパ球に対し、細胞
障害活性の評価を行った。
【００３３】この細胞障害活性の評価の方法は、当分野
ではよく知られており、例えば、Barbara B.Mishell,St
anley M.Shiigi; Selected Methods in Cellular Immun
ology, W.H.Freeman and Company(1980)などに詳しい。
細胞障害の標的細胞として、混合ペプチド（ＭＩＸ Ａ
またはＭＩＸ ＢまたはＭＩＸ ＣまたはＭＩＸ Ｄ）
を１０μｇ／ｍｌ加え、１８時間培養した後によく洗浄
したＢＣＬ（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスで形質
転換した患者自身のＢ細胞株）を用いた。
ではよく知られており、例えば、Barbara B.Mishell,St
anley M.Shiigi; Selected Methods in Cellular Immun
ology, W.H.Freeman and Company(1980)などに詳しい。
細胞障害の標的細胞として、混合ペプチド（ＭＩＸ Ａ
またはＭＩＸ ＢまたはＭＩＸ ＣまたはＭＩＸ Ｄ）
を１０μｇ／ｍｌ加え、１８時間培養した後によく洗浄
したＢＣＬ（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスで形質
転換した患者自身のＢ細胞株）を用いた。
【００３４】また、細胞障害活性の評価は５時間の反応
時間で行った。細胞障害活性の評価の結果を図４に示
す。ペプチドを張りつけていないＢＣＬに対する細胞障
害活性を陰性対照として比較すると、ＭＩＸ Ｂのペプ
チドを張りつけたＢＣＬに対して強い細胞障害活性が認
められる。同様の実験を、健常者（抗ＨＣＶ抗体陰性）
のＰＢＬを使って行ったが、陰性対照に対して有為な細
胞障害活性は認められなかった。
時間で行った。細胞障害活性の評価の結果を図４に示
す。ペプチドを張りつけていないＢＣＬに対する細胞障
害活性を陰性対照として比較すると、ＭＩＸ Ｂのペプ
チドを張りつけたＢＣＬに対して強い細胞障害活性が認
められる。同様の実験を、健常者（抗ＨＣＶ抗体陰性）
のＰＢＬを使って行ったが、陰性対照に対して有為な細
胞障害活性は認められなかった。
【００３５】実施例 ２ 実施例１と同様に患者の末梢血から末梢血リンパ球（Ｐ
ＢＬ）を分離した。回収した患者リンパ球に対して、合
成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ｂ：ＮＰ−６〜ＮＰ−１
０）を培養液に培養初日と培養７日目に加えることで刺
激を与えた。培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激
を受けた患者リンパ球に対し、細胞障害活性の評価を行
った。回収した患者リンパ球を、１０％ヒトＡＢ型血清
入りのＲＰＭＩ１６４０培地で１×１０6 個／ｍｌの細
胞濃度に懸濁した後、合成ペプチドの混合物（ＭＩＸ
Ｂ：ＮＰ−６〜ＮＰ−１０）を、各々が１０μｇ／ｍｌ
になるように加えた。
ＢＬ）を分離した。回収した患者リンパ球に対して、合
成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ｂ：ＮＰ−６〜ＮＰ−１
０）を培養液に培養初日と培養７日目に加えることで刺
激を与えた。培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激
を受けた患者リンパ球に対し、細胞障害活性の評価を行
った。回収した患者リンパ球を、１０％ヒトＡＢ型血清
入りのＲＰＭＩ１６４０培地で１×１０6 個／ｍｌの細
胞濃度に懸濁した後、合成ペプチドの混合物（ＭＩＸ
Ｂ：ＮＰ−６〜ＮＰ−１０）を、各々が１０μｇ／ｍｌ
になるように加えた。
【００３６】培養は、３７℃、５％ＣＯ2 の条件下で行
った。培養２日目に、リンホカルトＴを、その中の主成
分であるインターロイキン２の添加を目的として終濃度
１０％になるように加えた。さらに、培養７日目に、２
回目の混合ペプチド刺激のために、合成ペプチドの混合
物を各々が１０μｇ／ｍｌになるように加えた。このと
き、抗原提示細胞として４０Ｇｙの放射線照射した患者
ＰＢＬを５×１０5 個／ｍｌとなるように同時に加え
た。培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激を受けた
患者リンパ球に対し、細胞障害活性の評価を行った。
った。培養２日目に、リンホカルトＴを、その中の主成
分であるインターロイキン２の添加を目的として終濃度
１０％になるように加えた。さらに、培養７日目に、２
回目の混合ペプチド刺激のために、合成ペプチドの混合
物を各々が１０μｇ／ｍｌになるように加えた。このと
き、抗原提示細胞として４０Ｇｙの放射線照射した患者
ＰＢＬを５×１０5 個／ｍｌとなるように同時に加え
た。培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激を受けた
患者リンパ球に対し、細胞障害活性の評価を行った。
【００３７】細胞障害の標的細胞として、各ペプチド
（ＮＰ−６〜ＮＰ−１０）を１０μｇ／ｍｌ加え、１８
時間培養した後によく洗浄したＢＣＬを用いた。また、
細胞障害活性の評価は５時間の反応時間で行った。細胞
障害活性の評価の結果を図５に示す。Ｅ／Ｔ比（エフェ
クターである患者リンパ球の数とターゲットである標的
細胞の数の比）は２０である。この結果から、ＮＰ−９
に対して、特異的な細胞障害活性が認められる。ＮＰ−
９は、本発明の化１式に記載のペプチドと一致する。
（ＮＰ−６〜ＮＰ−１０）を１０μｇ／ｍｌ加え、１８
時間培養した後によく洗浄したＢＣＬを用いた。また、
細胞障害活性の評価は５時間の反応時間で行った。細胞
障害活性の評価の結果を図５に示す。Ｅ／Ｔ比（エフェ
クターである患者リンパ球の数とターゲットである標的
細胞の数の比）は２０である。この結果から、ＮＰ−９
に対して、特異的な細胞障害活性が認められる。ＮＰ−
９は、本発明の化１式に記載のペプチドと一致する。
【００３８】実施例 ３ 実施例１と同様に患者の末梢血から末梢血リンパ球（Ｐ
ＢＬ）を分離した。回収した患者リンパ球に対して、合
成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ｂ：ＮＰ−６〜ＮＰ−１
０）を培養液に培養初日と培養７日目に加えることで刺
激を与えた。培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激
を受けた患者リンパ球に対し、細胞障害活性の評価を行
った。回収した患者リンパ球を、１０％ヒトＡＢ型血清
入りのＲＰＭＩ１６４０培地で１×１０6 個／ｍｌの細
胞濃度に懸濁した後、合成ペプチドの混合物（ＭＩＸ
Ｂ：ＮＰ−６〜ＮＰ−１０）を、各々が１０μｇ／ｍｌ
になるように加えた。
ＢＬ）を分離した。回収した患者リンパ球に対して、合
成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ｂ：ＮＰ−６〜ＮＰ−１
０）を培養液に培養初日と培養７日目に加えることで刺
激を与えた。培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激
を受けた患者リンパ球に対し、細胞障害活性の評価を行
った。回収した患者リンパ球を、１０％ヒトＡＢ型血清
入りのＲＰＭＩ１６４０培地で１×１０6 個／ｍｌの細
胞濃度に懸濁した後、合成ペプチドの混合物（ＭＩＸ
Ｂ：ＮＰ−６〜ＮＰ−１０）を、各々が１０μｇ／ｍｌ
になるように加えた。
【００３９】培養は、３７℃、５％ＣＯ2 の条件下で行
った。培養２日目に、リンホカルトＴを、その中の主成
分であるインターロイキン２の添加を目的として終濃度
１０％になるように加えた。さらに、培養７日目に、２
回目の混合ペプチド刺激のために、合成ペプチドの混合
物を各々が１０μｇ／ｍｌになるように加えた。このと
き、抗原提示細胞として４０Ｇｙの放射線照射した患者
ＰＢＬを５×１０5 個／ｍｌとなるように同時に加え
た。培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激を受けた
患者リンパ球に対し、ＣＤ４陽性細胞を除去、あるいは
ＣＤ８陽性細胞除去の操作を施して細胞障害活性の評価
を行った。ＣＤ４陽性細胞の除去あるいはＣＤ８陽性細
胞の除去には、磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ４抗体
もしくは磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ８抗体、及び
磁気分離用永久磁石（ともにアドバンス・マグネティッ
ク社）を利用した。
った。培養２日目に、リンホカルトＴを、その中の主成
分であるインターロイキン２の添加を目的として終濃度
１０％になるように加えた。さらに、培養７日目に、２
回目の混合ペプチド刺激のために、合成ペプチドの混合
物を各々が１０μｇ／ｍｌになるように加えた。このと
き、抗原提示細胞として４０Ｇｙの放射線照射した患者
ＰＢＬを５×１０5 個／ｍｌとなるように同時に加え
た。培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激を受けた
患者リンパ球に対し、ＣＤ４陽性細胞を除去、あるいは
ＣＤ８陽性細胞除去の操作を施して細胞障害活性の評価
を行った。ＣＤ４陽性細胞の除去あるいはＣＤ８陽性細
胞の除去には、磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ４抗体
もしくは磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ８抗体、及び
磁気分離用永久磁石（ともにアドバンス・マグネティッ
ク社）を利用した。
【００４０】細胞障害の標的細胞として混合ペプチドの
ＭＩＸ Ｂ（ＮＰ−６〜ＮＰ−１０）を１０μｇ／ｍｌ
加え、１８時間培養した後によく洗浄したＢＣＬを用い
た。また、細胞障害活性の評価は５時間の反応時間で行
った。細胞障害活性の評価の結果を図６に示す。Ｅ／Ｔ
比（エフェクターである患者リンパ球の数とターゲット
である標的細胞の数の比）は２０である。この結果か
ら、実施例１及び実施例２における細胞障害活性はＣＤ
８陽性細胞によって示されていることが明かとなった。
ＭＩＸ Ｂ（ＮＰ−６〜ＮＰ−１０）を１０μｇ／ｍｌ
加え、１８時間培養した後によく洗浄したＢＣＬを用い
た。また、細胞障害活性の評価は５時間の反応時間で行
った。細胞障害活性の評価の結果を図６に示す。Ｅ／Ｔ
比（エフェクターである患者リンパ球の数とターゲット
である標的細胞の数の比）は２０である。この結果か
ら、実施例１及び実施例２における細胞障害活性はＣＤ
８陽性細胞によって示されていることが明かとなった。
【００４１】実施例 ４ 実施例１と同様にして図１に示す１９１アミノ酸の配列
を得、図２および図３に示すような、２０ｍｅｒもしく
は２１ｍｅｒのオーバーラップするペプチドを化学的に
合成した（ＮＰ−１〜ＮＰ−１８；ＡＢＩ社 ４３０Ａ
型機による）。インターフェロン療法が無効であること
を特徴とする慢性Ｃ型肝炎患者患者の末梢血から文献
［Proc.Natl.Acad.Sci.USA, Vol.86,pp2883-2887,(198
9) ］に記載されている方法で末梢血リンパ球（ＰＢ
Ｌ）を分離した。回収した患者リンパ球を、１０％ヒト
ＡＢ型血清入りのＲＰＭＩ１６４０培地（RPIM Medium
1640, #320-1875AJ, GIBCO, U.S.A.）で１×１０6 個／
ｍｌの細胞濃度に懸濁した後、合成ペプチドの混合物
（ＭＩＸ Ａ：ＮＰ−１〜ＮＰ−５，ＭＩＸ Ｂ：ＮＰ
−６〜ＮＰ−１０，ＭＩＸ Ｃ：ＮＰ−１１〜ＮＰ−１
４，ＭＩＸ Ｄ：ＮＰ−１５〜ＮＰ−１８）を、各々が
１０μｇ／ｍｌになるように加えた。
を得、図２および図３に示すような、２０ｍｅｒもしく
は２１ｍｅｒのオーバーラップするペプチドを化学的に
合成した（ＮＰ−１〜ＮＰ−１８；ＡＢＩ社 ４３０Ａ
型機による）。インターフェロン療法が無効であること
を特徴とする慢性Ｃ型肝炎患者患者の末梢血から文献
［Proc.Natl.Acad.Sci.USA, Vol.86,pp2883-2887,(198
9) ］に記載されている方法で末梢血リンパ球（ＰＢ
Ｌ）を分離した。回収した患者リンパ球を、１０％ヒト
ＡＢ型血清入りのＲＰＭＩ１６４０培地（RPIM Medium
1640, #320-1875AJ, GIBCO, U.S.A.）で１×１０6 個／
ｍｌの細胞濃度に懸濁した後、合成ペプチドの混合物
（ＭＩＸ Ａ：ＮＰ−１〜ＮＰ−５，ＭＩＸ Ｂ：ＮＰ
−６〜ＮＰ−１０，ＭＩＸ Ｃ：ＮＰ−１１〜ＮＰ−１
４，ＭＩＸ Ｄ：ＮＰ−１５〜ＮＰ−１８）を、各々が
１０μｇ／ｍｌになるように加えた。
【００４２】培養は、３７℃、５％ＣＯ2 の条件下で行
った。培養２日目に、リンホカルトＴ（Biotest Diagno
stics, FRG）を、その中の主成分であるインターロイキ
ン２の添加を目的として終濃度１０％になるように加え
た。さらに、培養７日目に、２回目の混合ペプチド刺激
のために、合成ペプチドの混合物を各々が１０μｇ／ｍ
ｌになるように加えた。このとき、抗原提示細胞として
４０Ｇｙの放射線照射した患者ＰＢＬを５×１０5 個／
ｍｌとなるように同時に加えた。培養１６日目に、２回
の混合ペプチド刺激を受けた患者リンパ球に対し、細胞
障害活性の評価を行った。
った。培養２日目に、リンホカルトＴ（Biotest Diagno
stics, FRG）を、その中の主成分であるインターロイキ
ン２の添加を目的として終濃度１０％になるように加え
た。さらに、培養７日目に、２回目の混合ペプチド刺激
のために、合成ペプチドの混合物を各々が１０μｇ／ｍ
ｌになるように加えた。このとき、抗原提示細胞として
４０Ｇｙの放射線照射した患者ＰＢＬを５×１０5 個／
ｍｌとなるように同時に加えた。培養１６日目に、２回
の混合ペプチド刺激を受けた患者リンパ球に対し、細胞
障害活性の評価を行った。
【００４３】この細胞障害活性の評価の方法は、当分野
ではよく知られており、例えば、Barbara B.Mishell,St
anley M.Shiigi; Selected Methods in Cellular Immun
ology, W.H.Freeman and Company(1980)などに詳しい。
細胞障害の標的細胞として、混合ペプチド（ＭＩＸ Ａ
またはＭＩＸ ＢまたはＭＩＸ ＣまたはＭＩＸ Ｄ）
を１０μｇ／ｍｌ加え、１８時間培養した後によく洗浄
したＢＣＬ（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスで形質
転換した患者自身のＢ細胞株）を用いた。
ではよく知られており、例えば、Barbara B.Mishell,St
anley M.Shiigi; Selected Methods in Cellular Immun
ology, W.H.Freeman and Company(1980)などに詳しい。
細胞障害の標的細胞として、混合ペプチド（ＭＩＸ Ａ
またはＭＩＸ ＢまたはＭＩＸ ＣまたはＭＩＸ Ｄ）
を１０μｇ／ｍｌ加え、１８時間培養した後によく洗浄
したＢＣＬ（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスで形質
転換した患者自身のＢ細胞株）を用いた。
【００４４】また、細胞障害活性の評価は５時間の反応
時間で行った。細胞障害活性の評価の結果を図７に示
す。ＭＩＸ ＡとＭＩＸ Ｂに対しては、Ｅ／Ｔ比（エ
フェクターである患者リンパ球の数とターゲットである
標的細胞の数の比）を２倍にすると、ペプチドを張りつ
けていないＢＣＬに対する細胞障害活性も、ペプチドを
張りつけたＢＣＬと同程度上昇していることから考え
て、非特異的な（Ｔ細胞抗原受容体を介さない）細胞障
害であると判断できる。一方、同様な考察からＭＩＸ
Ｃに対しては特異的な細胞障害活性が認められ、またＭ
ＩＸ Ｄに対しても特異的な細胞障害活性が認められ
る。同様の実験を、健常者（抗ＨＣＶ抗体陰性）のＰＢ
Ｌを使って行ったが、特異的な細胞障害活性は認められ
なかった。
時間で行った。細胞障害活性の評価の結果を図７に示
す。ＭＩＸ ＡとＭＩＸ Ｂに対しては、Ｅ／Ｔ比（エ
フェクターである患者リンパ球の数とターゲットである
標的細胞の数の比）を２倍にすると、ペプチドを張りつ
けていないＢＣＬに対する細胞障害活性も、ペプチドを
張りつけたＢＣＬと同程度上昇していることから考え
て、非特異的な（Ｔ細胞抗原受容体を介さない）細胞障
害であると判断できる。一方、同様な考察からＭＩＸ
Ｃに対しては特異的な細胞障害活性が認められ、またＭ
ＩＸ Ｄに対しても特異的な細胞障害活性が認められ
る。同様の実験を、健常者（抗ＨＣＶ抗体陰性）のＰＢ
Ｌを使って行ったが、特異的な細胞障害活性は認められ
なかった。
【００４５】実施例 ５ 実施例４と同様に患者の末梢血から末梢血リンパ球（Ｐ
ＢＬ）を分離した。回収した患者リンパ球に対して、合
成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ｃ：ＮＰ−１１〜ＮＰ−
１４，ＭＩＸ Ｄ：ＮＰ−１５〜ＮＰ−１８）を培養液
に培養初日と培養７日目に加えることで刺激を与えた。
培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激を受けた患者
リンパ球に対し、細胞障害活性の評価を行った。回収し
た患者リンパ球を、１０％ヒトＡＢ型血清入りのＲＰＭ
Ｉ１６４０培地で１×１０6 個／ｍｌの細胞濃度に懸濁
した後、合成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ｃ：ＮＰ−１
１〜ＮＰ−１４，ＭＩＸ Ｄ：ＮＰ−１５〜ＮＰ−１
８）を、各々が１０μｇ／ｍｌになるように加えた。
ＢＬ）を分離した。回収した患者リンパ球に対して、合
成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ｃ：ＮＰ−１１〜ＮＰ−
１４，ＭＩＸ Ｄ：ＮＰ−１５〜ＮＰ−１８）を培養液
に培養初日と培養７日目に加えることで刺激を与えた。
培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激を受けた患者
リンパ球に対し、細胞障害活性の評価を行った。回収し
た患者リンパ球を、１０％ヒトＡＢ型血清入りのＲＰＭ
Ｉ１６４０培地で１×１０6 個／ｍｌの細胞濃度に懸濁
した後、合成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ｃ：ＮＰ−１
１〜ＮＰ−１４，ＭＩＸ Ｄ：ＮＰ−１５〜ＮＰ−１
８）を、各々が１０μｇ／ｍｌになるように加えた。
【００４６】培養は、３７℃、５％ＣＯ2 の条件下で行
った。培養２日目に、リンホカルトＴを、その中の主成
分であるインターロイキン２の添加を目的として終濃度
１０％になるように加えた。さらに、培養７日目に、２
回目の混合ペプチド刺激のために、合成ペプチドの混合
物を各々が１０μｇ／ｍｌになるように加えた。このと
き、抗原提示細胞として４０Ｇｙの放射線照射した患者
ＰＢＬを５×１０5 個／ｍｌとなるように同時に加え
た。培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激を受けた
患者リンパ球に対し、細胞障害活性の評価を行った。
った。培養２日目に、リンホカルトＴを、その中の主成
分であるインターロイキン２の添加を目的として終濃度
１０％になるように加えた。さらに、培養７日目に、２
回目の混合ペプチド刺激のために、合成ペプチドの混合
物を各々が１０μｇ／ｍｌになるように加えた。このと
き、抗原提示細胞として４０Ｇｙの放射線照射した患者
ＰＢＬを５×１０5 個／ｍｌとなるように同時に加え
た。培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激を受けた
患者リンパ球に対し、細胞障害活性の評価を行った。
【００４７】細胞障害の標的細胞として、各ペプチド
（ＮＰ−１１〜ＮＰ−１８）を１０μｇ／ｍｌ加え、１
８時間培養した後によく洗浄したＢＣＬを用いた。ま
た、細胞障害活性の評価は５時間の反応時間で行った。
ただし、ＭＩＸ Ｃで刺激したリンパ球に対してはＮＰ
−１１〜ＮＰ−１４を標的にし、ＭＩＸ Ｄで刺激した
リンパ球に対してはＮＰ−１５〜ＮＰ−１８を標的にし
た。細胞障害活性の評価の結果を図８及び図９に示す。
前述のＥ／Ｔ比は４０である。この結果から、ＮＰ−１
２とＮＰ−１７に対して、特異的な細胞障害活性が認め
られる。ＮＰ−１２は、本発明の化３式に記載のペプチ
ドと一致する。また、ＮＰ−１７は、本発明の化４式に
記載のペプチドと一致する。
（ＮＰ−１１〜ＮＰ−１８）を１０μｇ／ｍｌ加え、１
８時間培養した後によく洗浄したＢＣＬを用いた。ま
た、細胞障害活性の評価は５時間の反応時間で行った。
ただし、ＭＩＸ Ｃで刺激したリンパ球に対してはＮＰ
−１１〜ＮＰ−１４を標的にし、ＭＩＸ Ｄで刺激した
リンパ球に対してはＮＰ−１５〜ＮＰ−１８を標的にし
た。細胞障害活性の評価の結果を図８及び図９に示す。
前述のＥ／Ｔ比は４０である。この結果から、ＮＰ−１
２とＮＰ−１７に対して、特異的な細胞障害活性が認め
られる。ＮＰ−１２は、本発明の化３式に記載のペプチ
ドと一致する。また、ＮＰ−１７は、本発明の化４式に
記載のペプチドと一致する。
【００４８】実施例 ６ 実施例４と同様に患者の末梢血から末梢血リンパ球（Ｐ
ＢＬ）を分離した。回収した患者リンパ球に対して、合
成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ｃ：ＮＰ−１１〜ＮＰ−
１４，ＭＩＸ Ｄ：ＮＰ−１５〜ＮＰ−１８）を培養液
に培養初日と培養７日目に加えることで刺激を与えた。
培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激を受けた患者
リンパ球に対し、細胞障害活性の評価を行った。回収し
た患者リンパ球を、１０％ヒトＡＢ型血清入りのＲＰＭ
Ｉ１６４０培地で１×１０6 個／ｍｌの細胞濃度に懸濁
した後、合成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ｃ：ＮＰ−１
１〜ＮＰ−１４，ＭＩＸ Ｄ：ＮＰ−１５〜ＮＰ−１
８）を、各々が１０μｇ／ｍｌになるように加えた。
ＢＬ）を分離した。回収した患者リンパ球に対して、合
成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ｃ：ＮＰ−１１〜ＮＰ−
１４，ＭＩＸ Ｄ：ＮＰ−１５〜ＮＰ−１８）を培養液
に培養初日と培養７日目に加えることで刺激を与えた。
培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激を受けた患者
リンパ球に対し、細胞障害活性の評価を行った。回収し
た患者リンパ球を、１０％ヒトＡＢ型血清入りのＲＰＭ
Ｉ１６４０培地で１×１０6 個／ｍｌの細胞濃度に懸濁
した後、合成ペプチドの混合物（ＭＩＸ Ｃ：ＮＰ−１
１〜ＮＰ−１４，ＭＩＸ Ｄ：ＮＰ−１５〜ＮＰ−１
８）を、各々が１０μｇ／ｍｌになるように加えた。
【００４９】培養は、３７℃、５％ＣＯ2 の条件下で行
った。培養２日目に、リンホカルトＴを、その中の主成
分であるインターロイキン２の添加を目的として終濃度
１０％になるように加えた。さらに、培養７日目に、２
回目の混合ペプチド刺激のために、合成ペプチドの混合
物を各々が１０μｇ／ｍｌになるように加えた。このと
き、抗原提示細胞として４０Ｇｙの放射線照射した患者
ＰＢＬを５×１０5 個／ｍｌとなるように同時に加え
た。培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激を受けた
患者リンパ球に対し、ＣＤ４陽性細胞を除去、あるいは
ＣＤ８陽性細胞除去の操作を施して細胞障害活性の評価
を行った。ＣＤ４陽性細胞の除去あるいはＣＤ８陽性細
胞の除去には、磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ４抗体
もしくは磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ８抗体、及び
磁気分離用永久磁石（ともにアドバンス・マグネティッ
ク社）を利用した。
った。培養２日目に、リンホカルトＴを、その中の主成
分であるインターロイキン２の添加を目的として終濃度
１０％になるように加えた。さらに、培養７日目に、２
回目の混合ペプチド刺激のために、合成ペプチドの混合
物を各々が１０μｇ／ｍｌになるように加えた。このと
き、抗原提示細胞として４０Ｇｙの放射線照射した患者
ＰＢＬを５×１０5 個／ｍｌとなるように同時に加え
た。培養１６日目に、２回の混合ペプチド刺激を受けた
患者リンパ球に対し、ＣＤ４陽性細胞を除去、あるいは
ＣＤ８陽性細胞除去の操作を施して細胞障害活性の評価
を行った。ＣＤ４陽性細胞の除去あるいはＣＤ８陽性細
胞の除去には、磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ４抗体
もしくは磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ８抗体、及び
磁気分離用永久磁石（ともにアドバンス・マグネティッ
ク社）を利用した。
【００５０】細胞障害の標的細胞として、混合ペプチド
のＭＩＸ Ｃ（ＮＰ−１１〜ＮＰ−１４）もしくはＭＩ
Ｘ Ｄ（ＮＰ−１５〜ＮＰ−１８）を１０μｇ／ｍｌ加
え、１８時間培養した後によく洗浄したＢＣＬを用い
た。また、細胞障害活性の評価は５時間の反応時間で行
った。細胞障害活性の評価の結果を図１０に示す。Ｅ／
Ｔ比（エフェクターである患者リンパ球の数とターゲッ
トである標的細胞の数の比）は２０である。この結果か
ら、実施例４及び実施例５における細胞障害活性はＣＤ
４陽性細胞によって示されていることが明かとなった。
のＭＩＸ Ｃ（ＮＰ−１１〜ＮＰ−１４）もしくはＭＩ
Ｘ Ｄ（ＮＰ−１５〜ＮＰ−１８）を１０μｇ／ｍｌ加
え、１８時間培養した後によく洗浄したＢＣＬを用い
た。また、細胞障害活性の評価は５時間の反応時間で行
った。細胞障害活性の評価の結果を図１０に示す。Ｅ／
Ｔ比（エフェクターである患者リンパ球の数とターゲッ
トである標的細胞の数の比）は２０である。この結果か
ら、実施例４及び実施例５における細胞障害活性はＣＤ
４陽性細胞によって示されていることが明かとなった。
【００５１】実施例 ７ ＮＰ−９に対応する領域（ＨＣＶコア領域アミノ酸配列
８１−１００）には、ウイルス変異に伴うアミノ酸変化
が知られている［J.General Virology, Vol.73,pp673-6
79,(1992)］。そこで、このアミノ酸変化の影響を調べ
るために図１１に示すように、４種のペプチドを合成し
た。そして、実施例１と同様に患者の末梢血から末梢血
リンパ球（ＰＢＬ）を分離した。回収した患者リンパ球
に対して、合成ペプチドＮＰ−９を培養液に培養初日と
培養７日目に加えることで刺激を与えた。培養１６日目
に、２回の合成ペプチド刺激を受けた患者リンパ球に対
し、細胞障害活性の評価を行った。回収した患者リンパ
球を、１０％ヒトＡＢ型血清入りのＲＰＭＩ１６４０培
地で１×１０6 個／ｍｌの細胞濃度に懸濁した後、合成
ペプチドＮＰ−９が１０μｇ／ｍｌになるように加え
た。
８１−１００）には、ウイルス変異に伴うアミノ酸変化
が知られている［J.General Virology, Vol.73,pp673-6
79,(1992)］。そこで、このアミノ酸変化の影響を調べ
るために図１１に示すように、４種のペプチドを合成し
た。そして、実施例１と同様に患者の末梢血から末梢血
リンパ球（ＰＢＬ）を分離した。回収した患者リンパ球
に対して、合成ペプチドＮＰ−９を培養液に培養初日と
培養７日目に加えることで刺激を与えた。培養１６日目
に、２回の合成ペプチド刺激を受けた患者リンパ球に対
し、細胞障害活性の評価を行った。回収した患者リンパ
球を、１０％ヒトＡＢ型血清入りのＲＰＭＩ１６４０培
地で１×１０6 個／ｍｌの細胞濃度に懸濁した後、合成
ペプチドＮＰ−９が１０μｇ／ｍｌになるように加え
た。
【００５２】培養は、３７℃、５％ＣＯ2 の条件下で行
った。培養２日目に、リンホカルトＴを、その中の主成
分であるインターロイキン２の添加を目的として終濃度
１０％になるように加えた。さらに、培養７日目に、２
回目の合成ペプチド刺激のために、合成ペプチドを１０
μｇ／ｍｌになるように加えた。このとき、抗原提示細
胞として４０Ｇｙの放射線照射した患者ＰＢＬを５×１
０5 個／ｍｌとなるように同時に加えた。培養１６日目
に、２回の合成ペプチド刺激を受けた患者リンパ球に対
し、細胞障害活性の評価を行った。
った。培養２日目に、リンホカルトＴを、その中の主成
分であるインターロイキン２の添加を目的として終濃度
１０％になるように加えた。さらに、培養７日目に、２
回目の合成ペプチド刺激のために、合成ペプチドを１０
μｇ／ｍｌになるように加えた。このとき、抗原提示細
胞として４０Ｇｙの放射線照射した患者ＰＢＬを５×１
０5 個／ｍｌとなるように同時に加えた。培養１６日目
に、２回の合成ペプチド刺激を受けた患者リンパ球に対
し、細胞障害活性の評価を行った。
【００５３】細胞障害の標的細胞として、図１１に示す
各ペプチド（ＮＰ−９、９ＭＡ、９ＣＭ、９ＣＡ）を１
０μｇ／ｍｌ加え、１８時間培養した後によく洗浄した
ＢＣＬを用いた。また、細胞障害活性の評価は５時間の
反応時間で行った。細胞障害活性の評価の結果を図１２
に示す。Ｅ／Ｔ比（エフェクターである患者リンパ球の
数とターゲットである標的細胞の数の比）は２０であ
る。この結果から、９ＭＡは、ＮＰ−９と同等に細胞障
害活性の標的となることが示された。
各ペプチド（ＮＰ−９、９ＭＡ、９ＣＭ、９ＣＡ）を１
０μｇ／ｍｌ加え、１８時間培養した後によく洗浄した
ＢＣＬを用いた。また、細胞障害活性の評価は５時間の
反応時間で行った。細胞障害活性の評価の結果を図１２
に示す。Ｅ／Ｔ比（エフェクターである患者リンパ球の
数とターゲットである標的細胞の数の比）は２０であ
る。この結果から、９ＭＡは、ＮＰ−９と同等に細胞障
害活性の標的となることが示された。
【００５４】一方、実施例１と同様に患者の末梢血から
末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を分離し、回収した患者リン
パ球に対して、合成ペプチド９ＭＡを培養液に培養初日
と培養７日目に加えることで刺激を与え、培養１６日目
に、２回の合成ペプチド刺激を受けた患者リンパ球に対
し、細胞障害活性の評価を行った。回収した患者リンパ
球を、１０％ヒトＡＢ型血清入りのＲＰＭＩ１６４０培
地で１×１０6 個／ｍｌの細胞濃度に懸濁した後、合成
ペプチド９ＭＡが１０μｇ／ｍｌになるように加えた。
末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を分離し、回収した患者リン
パ球に対して、合成ペプチド９ＭＡを培養液に培養初日
と培養７日目に加えることで刺激を与え、培養１６日目
に、２回の合成ペプチド刺激を受けた患者リンパ球に対
し、細胞障害活性の評価を行った。回収した患者リンパ
球を、１０％ヒトＡＢ型血清入りのＲＰＭＩ１６４０培
地で１×１０6 個／ｍｌの細胞濃度に懸濁した後、合成
ペプチド９ＭＡが１０μｇ／ｍｌになるように加えた。
【００５５】培養は、３７℃、５％ＣＯ2 の条件下で行
った。培養２日目に、リンホカルトＴを、その中の主成
分であるインターロイキン２の添加を目的として終濃度
１０％になるように加えた。さらに、培養７日目に、２
回目の合成ペプチド刺激のために、合成ペプチドを１０
μｇ／ｍｌになるように加えた。このとき、抗原提示細
胞として４０Ｇｙの放射線照射した患者ＰＢＬを５×１
０5 個／ｍｌとなるように同時に加えた。培養１６日目
に、２回の合成ペプチド刺激を受けた患者リンパ球に対
し、細胞障害活性の評価を行った。
った。培養２日目に、リンホカルトＴを、その中の主成
分であるインターロイキン２の添加を目的として終濃度
１０％になるように加えた。さらに、培養７日目に、２
回目の合成ペプチド刺激のために、合成ペプチドを１０
μｇ／ｍｌになるように加えた。このとき、抗原提示細
胞として４０Ｇｙの放射線照射した患者ＰＢＬを５×１
０5 個／ｍｌとなるように同時に加えた。培養１６日目
に、２回の合成ペプチド刺激を受けた患者リンパ球に対
し、細胞障害活性の評価を行った。
【００５６】細胞障害の標的細胞として、図１１に示す
各ペプチド（ＮＰ−９、９ＭＡ）を１０μｇ／ｍｌ加
え、１８時間培養した後によく洗浄したＢＣＬを用い
た。また、細胞障害活性の評価は５時間の反応時間で行
った。細胞障害活性の評価の結果を図１３に示す。Ｅ／
Ｔ比（エフェクターである患者リンパ球の数とターゲッ
トである標的細胞の数の比）は２０である。この結果か
ら、９ＭＡで刺激した場合もＮＰ−９を細胞障害活性の
標的とすることができることが示された。従って、ＮＰ
−９と９ＭＡはＴ細胞エピトープとして同等の活性を持
っていると判断される。９ＭＡは、本発明の化２式に記
載のペプチドと一致する。
各ペプチド（ＮＰ−９、９ＭＡ）を１０μｇ／ｍｌ加
え、１８時間培養した後によく洗浄したＢＣＬを用い
た。また、細胞障害活性の評価は５時間の反応時間で行
った。細胞障害活性の評価の結果を図１３に示す。Ｅ／
Ｔ比（エフェクターである患者リンパ球の数とターゲッ
トである標的細胞の数の比）は２０である。この結果か
ら、９ＭＡで刺激した場合もＮＰ−９を細胞障害活性の
標的とすることができることが示された。従って、ＮＰ
−９と９ＭＡはＴ細胞エピトープとして同等の活性を持
っていると判断される。９ＭＡは、本発明の化２式に記
載のペプチドと一致する。
【００５７】配列番号：１ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Tyr Pro Trp Pro Leu Tyr Gly Asn Glu Gly Leu Gly Trp Ala Gly Trp Leu Leu 1 5 10 15 Ser Pro 20
【００５８】配列番号：２ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Tyr Pro Trp Pro Leu Tyr Gly Asn Glu Gly Met Gly Trp Ala Gly Trp Leu Leu 1 5 10 15 Ser Pro 20
【００５９】配列番号：３ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Asp Pro Arg Arg Arg Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Ile Asp Thr Phe Thr Cys 1 5 10 15 Gly Leu 20
【００６０】配列番号：４ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ser Val Asn Tyr Ala Thr Gly Asn Leu Pro Gly Cys Ser Phe Ser Ile Phe Leu 1 5 10 15 Leu Ala 20
【図１】日本人のＣ型肝炎の患者血清よりクローニング
して得られた塩基配列をもとに、対応するアミノ酸へ翻
訳したＨＣＶコア蛋白質領域のアミノ酸配列を示すもの
である。
して得られた塩基配列をもとに、対応するアミノ酸へ翻
訳したＨＣＶコア蛋白質領域のアミノ酸配列を示すもの
である。
【図２】翻訳したＨＣＶコア蛋白質領域のアミノ酸配列
を基にして化学的に合成した、２０ｍｅｒのオーバラツ
プする混合ペプチド（ＭＩＸ ＡおよびＭＩＸ Ｂ）を
示すものである。
を基にして化学的に合成した、２０ｍｅｒのオーバラツ
プする混合ペプチド（ＭＩＸ ＡおよびＭＩＸ Ｂ）を
示すものである。
【図３】翻訳したＨＣＶコア蛋白質領域のアミノ酸配列
を基にして化学的に合成した、２０ｍｅｒおよび２１ｍ
ｅｒのオーバラツプする混合ペプチド（ＭＩＸ Ｃおよ
びＭＩＸ Ｄ）を示すものである。
を基にして化学的に合成した、２０ｍｅｒおよび２１ｍ
ｅｒのオーバラツプする混合ペプチド（ＭＩＸ Ｃおよ
びＭＩＸ Ｄ）を示すものである。
【図４】ペプチド刺激を受けた患者リンパ球の、混合ペ
プチドを張りつけたＢＣＬ（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ
ウイルスで形質転換した患者自身のＢ細胞株）と、何も
張りつけていないＢＣＬに対する、Ｅ／Ｔ比（エフェク
ターである患者リンパ球の数とターゲットである標的細
胞の数の比）＝２０での細胞障害活性を示すものであ
る。
プチドを張りつけたＢＣＬ（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ
ウイルスで形質転換した患者自身のＢ細胞株）と、何も
張りつけていないＢＣＬに対する、Ｅ／Ｔ比（エフェク
ターである患者リンパ球の数とターゲットである標的細
胞の数の比）＝２０での細胞障害活性を示すものであ
る。
【図５】混合ペプチド（ＭＩＸ Ｂ）で刺激をした患者
リンパ球の、ＭＩＸ Ｂ構成ペプチド（ＮＰ−６〜ＮＰ
−１０）個々を張りつけたＢＣＬに対する、もしくはＭ
ＩＸ Ｂを張りつけたＢＣＬに対する、Ｅ／Ｔ比＝２０
での細胞障害活性を示すものである。細胞障害活性は、
何も張りつけていないＢＣＬに対する活性を差し引いて
表してある。
リンパ球の、ＭＩＸ Ｂ構成ペプチド（ＮＰ−６〜ＮＰ
−１０）個々を張りつけたＢＣＬに対する、もしくはＭ
ＩＸ Ｂを張りつけたＢＣＬに対する、Ｅ／Ｔ比＝２０
での細胞障害活性を示すものである。細胞障害活性は、
何も張りつけていないＢＣＬに対する活性を差し引いて
表してある。
【図６】混合ペプチド（ＭＩＸ Ｂ）で刺激をした患者
リンパ球に対し、ＣＤ４陽性細胞除去、あるいはＣＤ８
陽性細胞除去の操作を施しての、細胞障害活性を示すも
のである。標的細胞は混合ペプチド（ＭＩＸ Ｂ）を張
りつけたＢＣＬであり、細胞障害活性は、何も張りつけ
ていないＢＣＬに対する活性を差し引いて表してある。
対照として、除去操作なしでの細胞障害活性を併せて示
してある。ＣＤ４陽性細胞の除去あるいはＣＤ８陽性細
胞の除去には、磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ４抗体
もしくは磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ８抗体、及び
磁気分離用永久磁石（ともにアドバンス・マグネティッ
ク社）を利用した。
リンパ球に対し、ＣＤ４陽性細胞除去、あるいはＣＤ８
陽性細胞除去の操作を施しての、細胞障害活性を示すも
のである。標的細胞は混合ペプチド（ＭＩＸ Ｂ）を張
りつけたＢＣＬであり、細胞障害活性は、何も張りつけ
ていないＢＣＬに対する活性を差し引いて表してある。
対照として、除去操作なしでの細胞障害活性を併せて示
してある。ＣＤ４陽性細胞の除去あるいはＣＤ８陽性細
胞の除去には、磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ４抗体
もしくは磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ８抗体、及び
磁気分離用永久磁石（ともにアドバンス・マグネティッ
ク社）を利用した。
【図７】ペプチド刺激を受けた患者リンパ球の、混合ペ
プチドを張りつけたＢＣＬ（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ
ウイルスで形質転換した患者自身のＢ細胞株）と、何も
張りつけていないＢＣＬに対する、Ｅ／Ｔ比（エフェク
ターである患者リンパ球の数とターゲットである標的細
胞の数の比）＝２０及び４０での細胞障害活性を示すも
のである。
プチドを張りつけたＢＣＬ（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ
ウイルスで形質転換した患者自身のＢ細胞株）と、何も
張りつけていないＢＣＬに対する、Ｅ／Ｔ比（エフェク
ターである患者リンパ球の数とターゲットである標的細
胞の数の比）＝２０及び４０での細胞障害活性を示すも
のである。
【図８】混合ペプチド（ＭＩＸ Ｃ）で刺激をした患者
リンパ球の、ＭＩＸ Ｃ構成ペプチド（ＮＰ−１１〜Ｎ
Ｐ−１４）個々を張りつけたＢＣＬに対する、もしくは
ＭＩＸ Ｃを張りつけたＢＣＬに対する、もしくは何も
張りつけていないＢＣＬに対する、Ｅ／Ｔ比＝４０での
細胞障害活性を示すものである。
リンパ球の、ＭＩＸ Ｃ構成ペプチド（ＮＰ−１１〜Ｎ
Ｐ−１４）個々を張りつけたＢＣＬに対する、もしくは
ＭＩＸ Ｃを張りつけたＢＣＬに対する、もしくは何も
張りつけていないＢＣＬに対する、Ｅ／Ｔ比＝４０での
細胞障害活性を示すものである。
【図９】混合ペプチド（ＭＩＸ Ｄ）で刺激をした患者
リンパ球の、ＭＩＸ Ｄ構成ペプチド（ＮＰ−１５〜Ｎ
Ｐ−１８）個々を張りつけたＢＣＬに対する、もしくは
ＭＩＸ Ｄを張りつけたＢＣＬに対する、もしくは何も
張りつけていないＢＣＬに対する、Ｅ／Ｔ比＝４０での
細胞障害活性を示すものである。
リンパ球の、ＭＩＸ Ｄ構成ペプチド（ＮＰ−１５〜Ｎ
Ｐ−１８）個々を張りつけたＢＣＬに対する、もしくは
ＭＩＸ Ｄを張りつけたＢＣＬに対する、もしくは何も
張りつけていないＢＣＬに対する、Ｅ／Ｔ比＝４０での
細胞障害活性を示すものである。
【図１０】混合ペプチド（ＭＩＸ ＣもしくはＭＩＸ
Ｄ）で刺激をした患者リンパ球に対し、ＣＤ４陽性細胞
除去、あるいはＣＤ８陽性細胞除去の操作を施しての、
細胞障害活性を示すものである。標的細胞はそれぞれの
刺激に用いた混合ペプチド（ＭＩＸ ＣもしくはＭＩＸ
Ｄ）を張りつけたＢＣＬであり、細胞障害活性は、何
も張りつけていないＢＣＬに対する活性を差し引いて表
してある。対照として、除去操作なしでの細胞障害活性
を併せて示してある。ＣＤ４陽性細胞の除去あるいはＣ
Ｄ８陽性細胞の除去には、磁気（磁性酸化鉄）標識の抗
ＣＤ４抗体もしくは磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ８
抗体、及び磁気分離用永久磁石（ともにアドバンス・マ
グネティック社）を利用した。
Ｄ）で刺激をした患者リンパ球に対し、ＣＤ４陽性細胞
除去、あるいはＣＤ８陽性細胞除去の操作を施しての、
細胞障害活性を示すものである。標的細胞はそれぞれの
刺激に用いた混合ペプチド（ＭＩＸ ＣもしくはＭＩＸ
Ｄ）を張りつけたＢＣＬであり、細胞障害活性は、何
も張りつけていないＢＣＬに対する活性を差し引いて表
してある。対照として、除去操作なしでの細胞障害活性
を併せて示してある。ＣＤ４陽性細胞の除去あるいはＣ
Ｄ８陽性細胞の除去には、磁気（磁性酸化鉄）標識の抗
ＣＤ４抗体もしくは磁気（磁性酸化鉄）標識の抗ＣＤ８
抗体、及び磁気分離用永久磁石（ともにアドバンス・マ
グネティック社）を利用した。
【図１１】ＮＰ−９に対応する領域（ＨＣＶコア領域ア
ミノ酸配列８１−１００）に知られている、ウイルス変
異に伴うアミノ酸変化を示す。４種のペプチドに分類で
きる。
ミノ酸配列８１−１００）に知られている、ウイルス変
異に伴うアミノ酸変化を示す。４種のペプチドに分類で
きる。
【図１２】ＮＰ−９ペプチドによって刺激を受けた患者
リンパ球の、図１１に示す４種の合成ペプチドを張りつ
けたＢＣＬ（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスで形質
転換した患者自身のＢ細胞株）に対する、Ｅ／Ｔ比（エ
フェクターである患者リンパ球の数とターゲットである
標的細胞の数の比）＝２０での細胞障害活性を示すもの
である。
リンパ球の、図１１に示す４種の合成ペプチドを張りつ
けたＢＣＬ（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスで形質
転換した患者自身のＢ細胞株）に対する、Ｅ／Ｔ比（エ
フェクターである患者リンパ球の数とターゲットである
標的細胞の数の比）＝２０での細胞障害活性を示すもの
である。
【図１３】９ＭＡペプチドによって刺激を受けた患者リ
ンパ球の、合成ペプチドを張りつけたＢＣＬ（Ｅｐｓｔ
ｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスで形質転換した患者自身のＢ
細胞株）に対する、Ｅ／Ｔ比（エフェクターである患者
リンパ球の数とターゲットである標的細胞の数の比）＝
２０での細胞障害活性を示すものである。
ンパ球の、合成ペプチドを張りつけたＢＣＬ（Ｅｐｓｔ
ｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスで形質転換した患者自身のＢ
細胞株）に対する、Ｅ／Ｔ比（エフェクターである患者
リンパ球の数とターゲットである標的細胞の数の比）＝
２０での細胞障害活性を示すものである。
Claims (11)
- 【請求項１】 Ｃ型肝炎ウイルスコア蛋白質領域の一部
である約５〜２０残基のアミノ酸配列を含有し、Ｔ細胞
に認識され、かつそのＴ細胞に対して刺激を与えること
を特徴とするＴ細胞刺激ペプチド。 - 【請求項２】 請求項１に記載のアミノ酸配列が下記化
１式で表されるＣＤ８陽性Ｔ細胞刺激ペプチド。 【化１】 - 【請求項３】 請求項１に記載のアミノ酸配列が下記化
２式で表されるＣＤ８陽性Ｔ細胞刺激ペプチド。 【化２】 - 【請求項４】 請求項１に記載のアミノ酸配列が下記化
３式で表されるＣＤ４陽性Ｔ細胞刺激ペプチド。 【化３】 - 【請求項５】 請求項１に記載のアミノ酸配列が下記化
４式で表されるＣＤ４陽性Ｔ細胞刺激ペプチド。 【化４】 - 【請求項６】 請求項１に記載のＴ細胞刺激ペプチド
が、ペプチド免疫原に作用可能に結合していることを特
徴とする複合ペプチド免疫原。 - 【請求項７】 請求項２に記載のＣＤ８陽性Ｔ細胞刺激
ペプチドが、Ｃ型肝炎ウイルス蛋白質のコア蛋白質領域
以外のものよりなるペプチド免疫原に作用可能に結合し
てなる請求項６に記載の複合免疫原。 - 【請求項８】 請求項３に記載のＣＤ８陽性Ｔ細胞刺激
ペプチドが、Ｃ型肝炎ウイルス蛋白質のコア蛋白質領域
以外のものよりなるペプチド免疫原に作用可能に結合し
てなる請求項６に記載の複合免疫原。 - 【請求項９】 請求項４に記載のＣＤ４陽性Ｔ細胞刺激
ペプチドが、Ｃ型肝炎ウイルス蛋白質のコア蛋白質領域
以外のものよりなるペプチド免疫原に作用可能に結合し
てなる請求項６に記載の複合免疫原。 - 【請求項１０】 請求項５に記載のＣＤ４陽性Ｔ細胞刺
激ペプチドが、Ｃ型肝炎ウイルス蛋白質のコア蛋白質領
域以外のものよりなるペプチド免疫原に作用可能に結合
してなる請求項６に記載の複合免疫原。 - 【請求項１１】 Ｃ型肝炎ウイルスの感染を処置及び、
または予防するためのワクチンであって、請求項１に記
載のＴ細胞刺激ペプチドを含有し、あるいは請求項６に
記載の複合ペプチド免疫原を含有し、該ペプチドが薬学
的に容認し得る賦形剤中に、薬学的に効果的な用量で存
在する、Ｃ型肝炎用薬剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7679193A JPH06199894A (ja) | 1992-08-27 | 1993-04-02 | Ｃ型肝炎ウイルスのコア蛋白質領域に存在するｔ細胞エピトープ |
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22896592 | 1992-08-27 | ||
| JP29969192 | 1992-11-10 | ||
| JP4-299691 | 1992-11-10 | ||
| JP4-228965 | 1992-11-10 | ||
| JP7679193A JPH06199894A (ja) | 1992-08-27 | 1993-04-02 | Ｃ型肝炎ウイルスのコア蛋白質領域に存在するｔ細胞エピトープ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06199894A true JPH06199894A (ja) | 1994-07-19 |
Family
ID=27302255
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7679193A Withdrawn JPH06199894A (ja) | 1992-08-27 | 1993-04-02 | Ｃ型肝炎ウイルスのコア蛋白質領域に存在するｔ細胞エピトープ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06199894A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003064096A (ja) * | 2001-08-29 | 2003-03-05 | Mitsubishi Kagaku Bio-Clinical Laboratories Inc | Ｃ型肝炎ウイルス特異的細胞障害性ｔ細胞認識エピトープ |
| EP2269641A3 (en) * | 1999-10-01 | 2011-05-04 | Intercell AG | Hcv vaccine compositions |
| JPWO2013089252A1 (ja) * | 2011-12-14 | 2015-04-27 | 国立大学法人高知大学 | ヘルパーｔ細胞誘導性ポリペプチドの改変 |
| WO2016079143A1 (de) | 2014-11-17 | 2016-05-26 | Pharis Biotec Gmbh | Inhibitor der viralen hepatitis c infektion |
-
1993
- 1993-04-02 JP JP7679193A patent/JPH06199894A/ja not_active Withdrawn
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2269641A3 (en) * | 1999-10-01 | 2011-05-04 | Intercell AG | Hcv vaccine compositions |
| JP2003064096A (ja) * | 2001-08-29 | 2003-03-05 | Mitsubishi Kagaku Bio-Clinical Laboratories Inc | Ｃ型肝炎ウイルス特異的細胞障害性ｔ細胞認識エピトープ |
| JPWO2013089252A1 (ja) * | 2011-12-14 | 2015-04-27 | 国立大学法人高知大学 | ヘルパーｔ細胞誘導性ポリペプチドの改変 |
| WO2016079143A1 (de) | 2014-11-17 | 2016-05-26 | Pharis Biotec Gmbh | Inhibitor der viralen hepatitis c infektion |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
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