EA006308B1 - Пептиды вич, антигены, вакцинные композиции, набор для иммуноанализа и способ обнаружения антител, индуцируемых вич - Google Patents

Пептиды вич, антигены, вакцинные композиции, набор для иммуноанализа и способ обнаружения антител, индуцируемых вич Download PDF

Info

Publication number
EA006308B1
EA006308B1 EA200300336A EA200300336A EA006308B1 EA 006308 B1 EA006308 B1 EA 006308B1 EA 200300336 A EA200300336 A EA 200300336A EA 200300336 A EA200300336 A EA 200300336A EA 006308 B1 EA006308 B1 EA 006308B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
xaa
haa
peptide
hiv
peptides
Prior art date
Application number
EA200300336A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200300336A1 (ru
Inventor
Биргер Сёренсен
Original Assignee
Бионор Иммуно Ас
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Бионор Иммуно Ас filed Critical Бионор Иммуно Ас
Publication of EA200300336A1 publication Critical patent/EA200300336A1/ru
Publication of EA006308B1 publication Critical patent/EA006308B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
    • C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Extraction Or Liquid Replacement (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение охватывает новые и модифицированные пептиды, способные индуцировать специфический иммунный ответ к ВИЧ-1, не подавляя активность цитотоксических Т-клеток, с целью получения эффективной профилактической и терапевтической вакцины против ВИЧ. В основе пептидов лежат консервативные участки белков gag p17 и р24 вируса ВИЧ. Описаны антигены в свободной или связанной с носителем форме, включающие по меньшей мере один из указанных пептидов, вакцинные композиции, содержащие по меньшей мере один из антигенов, наборы для иммуноанализа и способ обнаружения антител, индуцируемых ВИЧ или ВИЧ-специфичными пептидами, с помощью таких антигенов.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к новым пептидам на основе консервативных участков белков ВИЧ дад р17 и р24, антигенам в свободной или связанной с носителем форме, включающим, по меньшей мере, один из этих пептидов, вакцинным композициям, содержащим по меньшей мере один из этих антигенов, наборам для иммуноанализа и способу обнаружения антител, индуцируемых вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) или ВИЧ-специфичными пептидами, с помощью таких антигенов.
Уровень техники
Существует острая необходимость в контролировании глобальной эпидемии ВИЧ-инфекции, и разработка вакцины против ВИЧ является одной из главных целей исследований СПИДа. В общем, вакцины должны активировать антигенпрезентирующие клетки, преодолевать генетический механизм рестрикции Т-клеточных ответов и приводить к образованию Т- и В-клеток памяти. Вариабельность вирусной популяции представляет еще одно препятствие к получению эффективной вакцины против ВИЧ. Пока еще не произошло прорыва в предпринимаемых попытках разработки вакцин против СПИДа. Сейчас считается общепринятым, что индукция антиген-специфического гуморального и клеточного иммунитета имеет решающее значение для разработки эффективной профилактической и терапевтической вакцины. Для защитного иммунитета против ВИЧ могут потребоваться все три ветви иммунной системы, включая нейтрализующие антитела, цитотоксические лимфоциты (СТЬ) СЭ8+ и Т1-хелперные (ТН1) клетки. Известно, что СТЬ могут устранять другие вирусные инфекции (Л4а. 1ттипо1. Се11 ΒίοΙ., 72: 447-454, 1994) и что СТЬ могут лизировать инфицированные мишени на ранней стадии инфекции до образования и высвобождения нового поколения вируса при лизисе клеток: А4а е! а1., кирга. Исследования были сосредоточены на выборе антигенов, а также на разработке и оценке различных адъювантов. Антигены, использовавшиеся в различных работах ίη νίνο и ίη νίίτο, представляли собой весь спектр, от неочищенных белков до синтетических пептидов, из нескольких белков ВИЧ. Большое число работ проводилось на петле У3 белка др 120. Наблюдалась индукция В- и Т-клеточных ответов, однако, в исследовании ίη νίίτο сообщалось, что пептид из консервативного участка др41 вызывал усиление инфекции (Ве11 8.1. е! а1., С11п Ехр. 1ттипо1., 87(1): 37-45, 1апиагу 1992).
Встречающиеся в природе последовательности ВИЧ в составе вакцин-кандидатов не способны обеспечить устойчивый иммунный ответ вследствие того, что вирусам присуща способность к маскировке путем изменения структуры эпитопа, презентируемого на клеточной поверхности инфицированных клеток. Иммунная система обманывается, полагая, что данная аминокислотная последовательность значима, в то время как важные аминокислоты на самом деле спрятаны.
В недавнем исследовании титра антител против белка дад р24 было показано, что медленное развитие СПИДа связано с высокими титрами, в то время как быстрое развитие СПИДа сопровождается низкими титрами. Показано, что СПИД у больных с низким титром антител к р24 развивается значительно быстрее, чем у пациентов с высокими титрами антител к р24 (Ζ\ν;·ιι1 С. е! а1., Уйо1о§у, 201, р. 285-93, 1ипе 1994), что указывает на ключевую роль дад и р24 в контроле развития СПИДа.
Новые пептиды ВИЧ р24 описаны в XVО 91/13360, в котором пептиды применяются в способе выявления отличий между ложными и действительно ВИЧ-положительными образцами сыворотки.
1ойп8оп К..Р. е! а1., Тйе 1оитпа1 о£ 1ттипо1о§у, Уо1. 147, р. 1512-1521, Ио.5, 8ер1етЬег 1, 1991 описывают анализ тонкой специфичности дад-специфичных ответов СТЬ у трех сероположительных на ВИЧ-1 индивидов, при этом оказалось, что дад-специфичные ответы СТЬ опосредованы лимфоцитами СИ3+ и СЭ8+, которые подвергаются рестрикции по НЬА класса I. Сои1дег РД.К е! а1., 1оитпа1 о£ У1то1оду, Уо1.74, р. 5679-5690, Ио. 12, 1ипе 2000 исследовали ответы СТЬ на различные участки р17 и р24 в различных популяциях ВИЧ. Результаты показали, что существуют определенные иммунодоминантные участки, однако, небольшие отличия в аминокислотном составе могут вызывать значительные различия в ответах.
В ЕР-А-0 356 007 раскрыты антигенные детерминанты, в частности, это касается последовательностей синтетических полипептидов, родственных белкам, представленным в ВИЧ-1, которые могут послужить основой для возможной вакцины против СПИД.
ВокепЬетд Е.8. е! а1., 8с1епсе, Уо1. 278, 21 ИосешЬег 1997, р. 1447-1450 описывают, что вирусспецифичные Т-хелперные лимфоциты СЭ4+ играют важную роль в поддержании эффективного иммунитета при ряде хронических вирусных инфекций, но характерно, что они не обнаруживаются при хронической инфекции вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1). Специфичные к ВИЧ-1 пролиферативные ответы на р24 были обратно пропорциональны вирусной нагрузке. Они делают вывод, что специфичные к ВИЧ-1 хелперные клетки, видимо, имеют важное значение для иммунотерапии и разработки вакцин.
ЕР 0 230 222, ЕР 0 270 114, ΌΕ 37 11 016 и СВ 2 188 639, выданные на имя Б. Нойшапп-Ьа-Косйе & Со. АкБепдекеШсйай, касаются рекомбинантной экспрессии и очистки белка - продукта гена Сад/Επν НТЬУШ или слитых белков. Состоящие из нативных последовательностей белки можно очистить до гомогенного состояния и использовать в качестве основы для диагностических тестов для определения антител против вирусов, связанных со СПИД. Белок дад/епс также может быть включен в состав вакцины для защиты против СПИД путем профилактической иммунизации.
- 1 006308
С диагностической и терапевтической точки зрения основные проблемы при применении р24 в диагностике или терапии связаны с большим числом эпитопов на р24, стимулирующих образование большого числа антител с низкой специфичностью, что при повторной иммунизации потенциально мутантными последовательностями может приводить к образованию аутоантител (ЛЩоапйЬосйем ίο ΐΐκ а1£а/Ье1а Т-се11 гееер1ог8 ΐη Ηΐν шРесйоп: (1у8гещ|1аПоп аш1 т1т1сгу. Каке Ώ.Ρ. е! а1., Ргос. Мч1. АсаФ 8εΐ. ϋ8Ά (23): 10849-53, №у. 8, 1994). Кроме того, сообщалось, что титр антител к р24 не достигает такого же высокого уровня, как против белков оболочки (др120 и др41). Обычно антитела к р24 образуются на очень ранней стадии инфекции, но их титр достаточно быстро стабилизируется после начального периода инфекции. В дальнейшем титр р24 постепенно снижается, тогда как с др160 происходит обратное. Эти результаты можно также рассматривать в связи с недавними сообщениями о том, что активность цитотоксических Тклеток подавляется естественно возникающими вариантами щщ ВИЧ-1 (К1епегтап Р. е! а1., МИшех 2: 369 (6479), р. 355, 2 ,1ипе' 1994). Это может быть одной из причин, почему наблюдается быстрая стабилизация титра р24 и почему позднее титр начинает снижаться.
На основании вышеуказанных исходных данных мы решили исследовать возможность разработки новых синтетических пептидов, которые могут имитировать эпитопы р17 и р24 без подавления активности цитотоксических Т-клеток, с целью удовлетворения потребности в эффективной профилактической и терапевтической вакцине.
Последовательность р17, выбранную в качестве возможного прототипа для разработки пептидов, индуцирующих СТЬ и антительный ответ, опубликована в КогЬег В. е! а1., Нитап КеПоунизез аш1 ΑΙΏ8 1999 Εάδ. Тйеоге11са1 Вю1о§у аш1 Вюркузюз Огоир., Ьоз Л1атоз М1Попа1 ЬаЬога1огу, Ьоз Л1атоз, ΝΜ. Выбранная аминокислотная последовательность находится между аминокислотными остатками 33 и 53, см. табл. 1.
Таблица 1
№ АК АК последовал ельность Природные варианты АК
33 Н
34 I Ь V М
35 I V
36 XV
37 А
38 8 N К
39 К 8
40 Е
41 Ь М
42 Е ϋ к О
43 К К о N
44 Е 8 Υ
45 А Т 8
46 V Ь I С
47 N ϋ 8
48 Р К. 8 Т
49 Ст 8 А ϋ N
50 ь Р
51 ь М
52 Е О ϋ
53 Т 8 А
Однобуквенные и трехбуквенные обозначения аминокислот в последовательностях, приведенных в настоящем описании, соответствуют международным стандартам, изложенным в учебниках, например, Ьейптдег Л.Ь., Ргтс1р1е8 ок Вюсйет181гу, УУоНЬ РиЬНзИегз 1пс., Νον Уогк, 1982. Аминокислоты, приведенные справа от второй колонки, представляют природные варианты последовательности. Изменение суммарного заряда эпитопа путем модификации аминокислот может привести к значительному повыше
- 2 006308 нию иммуногенности. Модификации могут вызывать изменения конформации от исходной спиральной структуры до складчатой, предъявляя эпитоп иммунной системе другим образом и, как ожидается, в большей степени.
Для того чтобы еще более увеличить число эпитопов для Т-клеток и уменьшить вероятность возникновения мутантов белка дад, избегающих узнавания, были разработаны три дополнительные пептидные последовательности на основе следующих трех последовательностей р24 между остатками 133-158, 178-199 и 233-251, соответственно, которые опубликованы в Нитап Ке1гоу1ги8е8 апб ΑΙΌ8 1999; А СотрПайоп апб Лпа1у818 о£ Хискне Ас1б апб Лтто Ас1б 8ециепсе8. Еб8. ТЕеогеПса 1 Вю1оду апб В1орйу81С8 Огоир, Ьо8 Л1ато8 Хабопа! I .аЬогакиу, Ьо8 Л1ато8, см. табл. 2-4.
Таблица 2
- 3 006308
Таблица 3
АК АК
178 последователь ность О
179 А
180 Т
181 Р
182 Ω
183 ϋ
184 ь
185 N
186 Т
187 м
188 ь
189 N
190 т
191 V
192 о
193 о
194 н
Природные варианты АК в данном положении
А I V
НОТ
195 Ω
196 А
197 А
198 М
199 Ω
Таблица 4
№ АК АК последователь ность Природные варианты АК в данном положении
233 О
234 8 А
235 ϋ
236 I
237 А
238 О
239 Т А 8
240 т 8
241 8 Т
242 Т N 8
243 ь Р V Ω
244 Ω А Н
245 Е
246 Ω Н
247 I Ь V м
248 О А Ω т N К Н I
249 XV
250 м Т
251 т 8
- 4 006308
Было синтезировано несколько модифицированных пептидов, чтобы определить уникальные последовательности, обладающие как специфичностью, так и чувствительностью в отношении ВИЧ-1.
Сущность изобретения
Пептиды по изобретению происходят из четырех различных консервативных участков белков ВИЧ1 дад р17 и р24, описанных выше, которые обладают свойством поддержания уникальности эпитопов ВИЧ-1. Кроме того, новые пептиды по изобретению не обладают заметным антагонистическим эффектом по отношению к цитотоксическим Т-лимфоцитам (СТЬ) и имеют, по меньшей мере, один потенциальный эпитоп для СТЬ.
Пептиды по изобретению, удовлетворяющие указанным выше критериям, выбирают из следующих групп:
Хаа1 Хаа2 Хаа3 Хаа4 Хаа5 Хааб Хаа7 С1п Ьеи С1п Хаа11 Хаа12 Хаа13 Хаа14 Хаа15 Хаа16 Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 (8ЕС ГО N0. 1), где аминокислоты (Хаа) цепи принимают следующие значения:
Хаа в положении 1 производного - Н1к, Ьук или Агд,
Хаа в положении 2 - 11е, Ьеи, Уа1 или Ме1,
Хаа в положении 3 - 11е или Уа1,
Хаа в положении 4 - Тгр или Туг,
Хаа в положении 5 - А1а или Ьеи,
Хаа в положении 6 - 8ег, ТЬг, Агд или Акп,
Хаа в положении 7 - Агд или 8ег,
Хаа в положении 11
Хаа в положении 12
Хаа в положении 13
Хаа в положении 14
Хаа в положении 15
Хаа в положении 16
Хаа в положении 17
Хаа в положении 18
Хаа в положении 19
Хаа в положении 20
Хаа в положении 21
Агд, Бук, С1у или Аки
РЬе, 8ег или Туг,
А1а, ТЬг или 8ет,
Уа1, Ьеи, 11е или Сук,
Аки, Акр или 8ет,
Рго, Агд или 8ет,
С1у, 8ет, А1а, Акр или Акп,
Ьеи или РЬе,
Ьеи или Ме1,
С1и, С1у, Акр или 11е,
ТЬг, 8ет или А1а, причем пептид содержит, по меньшей мере, шесть следующих друг за другом аминокислот из последовательности 8ЕО ГО N0 1;
Хаа1 Хаа2 Хаа3 РЬе Хаа5 Хаа6 Хаа7 С1у Хаа9 Ьеи Уа1 -Ζ- Туг Хаав Хаа!4 Хаа!5 Хаа!6 Хаап Хаа18 Хаа!9 Хаа20 Хаа21 А1а Хаа23 Хаа24 Хаа25 Хаа26 (8ЕС ГО N0. 4), где аминокислоты цепи принимают следующие значения: Хаа в положении 1 - Рго, Туг или РЬе,
Хаа в положении 2 - 11е, Уа1 или Ьеи,
Хаа в положении 3 - 11е, А1а, Уа1, Ме! или Ьеи,
Хаа в положении 4 - С1п, 8ег, ТЬг или Уа1,
Хаа в положении 5 - Акп, Акр или ТЬг,
Хаа в положении 6 - 11е, А1а, Ьеи или Ме!,
Хаа в положении 7 - С1п, С1и, Ьук или С1у,
Хаа в положении 9 - С1п или 11е,
Хаа в положении 13 Хаа в положении 14 Хаа в положении 15 Хаа в положении 16 Хаа в положении 17 Хаа в положении 18 Хаа в положении 19 Хаа в положении 20 Хаа в положении 21 Хаа в положении 23 Хаа в положении 24 Хаа в положении 25 Хаа в положении 26 отсутствует, А1а, 8ег, Акп, Уа1 или Рго, 11е, Ьеи, Ме! или Уа1, 8ег или ТЬг, Рго или А1а, Агд или Ьук, ТЬг или 8ег, Ьеи или 8ег, Акп, РЬе или Уа1, Тгр, Туг, С1у или отсутствует, Уа1, Ьеи, С1у или отсутствует, Ьук, Агд, С1у или отсутствует, Уа1, А1а, Сук, С1у или отсутствует,
причем пептид содержит, по меньшей мере, шесть следующих друг за другом аминокислот из последовательности 8Е0 ГО N0 4, а -Ζ- обозначает необязательный линкер, которым может быть РЕС, модифицированный РЕС и/или [С1у]п, где п = 1, 2 или 3;
Хаа1 А1а Хаа3 Хаа4 Хаа5 А1а Хаа7 Хаа8 Хаа9 Ьеи Ьеи Хаа!2 Хаа!3 Хаа!4 -Ζ- Хаа!5 Хаа,6 Н1к С1п Хаа!9 А1а Хаа21 Хаа22 (81Т) ГО N0 9),
- 5 006308 где Хаа в положении 1 - это Туг, Тгр, РНе или С1у,
Хаа в положении 3 - ТНг, А1а, Уа1, 11е или Ьеи,
Хаа в положении 4 - Рго или 8ег,
Хаа в положении 5 - С1и, Ηίκ, С1у, ТНг, 8ег или Туг,
Хаа в положении 7 - Ьеи, 11е или Уа1,
Хаа в положении 8 - Акп или Туг,
Хаа в положении 9 - ТНг, Ме1, Ьеи или А1а,
Хаа в положении 12 - 8ег, ТНг или Акп,
Хаа в положении 13 - ТНг, Не, Уа1 или А1а,
Хаа в положении 14 - Уа1 или Не,
Хаа в положении 15 - С1у или отсутствует,
Хаа в положении 16 - С1у или отсутствует,
Хаа в положении 19 - А1а или С1у,
Хаа в положении 21 - Ме1, Ьеи, Сук или отсутствует,
Хаа в положении 22 - С1п, С1и, ΗΗ, С1у или отсутствует, причем пептид содержит, по меньшей мере, шесть следующих друг за другом аминокислот из последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0 9, а -Ζ- обозначает необязательный линкер, которым может быть РЕС, модифицированный РЕС и/или [С1у]п, где п = 1, 2 или 3;
Хаа1 Хаа2 А1а Ьеи А1а С1у Хаа7 Хаа8 Хаа9 Ьеи Хаац Хаа!2 Хаац, Хаа!4 Хаа!5 Хаа!6 Хаап Хаа!8 Хаа!9 Хаа20 Хаа21 (8ЕЦ ΙΌ N0 15), где Хаа в положении 1 - это Тгр или Туг,
Хаа в положении 2 - 8ет или А1а,
Хаа в положении 7 - ТНг, А1а или 8ет,
Хаа в положении 8 - 8ет или ТНг,
Хаа в положении 9 - 8ет или ТНг,
Хаа в положении 11
Хаа в положении 12
Хаа в положении 13
Хаа в положении 14
Хаа в положении 15
Хаа в положении 16
Хаа в положении 17
Хаа в положении 18
Хаа в положении 19
Хаа в положении 20
Хаа в положении 21 причем пептид содержит, по меньшей мере, шесть следующих друг за другом аминокислот из последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0 15;
Ьеи, Рго, Уа1 или С1и,
С1и, А1а или Шк,
С1и или С1у,
С1и или Ηίκ,
Не, Ьеи, Уа1 или Ме1.
С1у, А1а, С1п, ТНг, Аки, Агд, Ηίκ или Не,
Тгр или Туг,
ТНг, Ме1, Ьеи или Не,
ТНг или 8ег,
Сук, С1у или отсутствует,
С1у или отсутствует, кроме того, терминальные концы этих последовательностей могут быть представлены свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями, два или более остатков Сук могут быть составной частью межцепочечного дисульфидного связывания, либо мостиков -8-(СИ2)р-8- или -(СИ2)р-, где р = 1-8, необязательно с одним или более внедренными гетероатомами типа О, N или 8, и/или указанные пептидные последовательности иммобилизованы на твердой подложке.
Новые пептидные последовательности способны служить хорошими антигенами, причем такой антиген содержит, по меньшей мере, один пептид, выбранный из группы последовательностей, представленных 8ЕЦ ΙΌ N0 1, 8ЕЦ ΙΌ N0 4, 8ЕЦ ΙΌ N0 9 или 8ЕЦ ΙΌ N0 15. Антигенность можно адаптировать, подбирая соотношения или концентрации различных пептидов или размер пептидов путем, например, димеризации или полимеризации и/или иммобилизации на твердой фазе. Антиген включает две или несколько полипептидных последовательностей по изобретению, которые могут быть связаны через мостик, к примеру, дисульфидный мостик между остатками Сук этих цепей или мостик типа С1-С8 алкиленов, возможно, с одним или несколькими внедренными гетероатомами О, 8 или N но, предпочтительно, они не связаны. Цепи могут быть иммобилизованы на твердой фазе в мономерной, димерной или олигомерной форме. На концах могут быть добавлены дополнительные аминокислоты, чтобы получить ножку для лучшей иммобилизации.
ПЭГ - это полиэтиленгликоль НО(СН2СН2О)тН, который может входить в состав линкера -Ζ-, причем ПЭГ необязательно модифицирован дикарбоновой кислотой (НО(СН2СН20)тСО(СН2)оСООН) или терминальной карбоксильной группой (Η0ΉΗ^Η20)ιη-ΉΗ^00Η), где т=1-10 и о=2-6, до присоединения линкера.
Линкер -Ζ- может состоять из ПЭГ, модифицированного ПЭГ или их комбинации и/или в сочетании с одним или несколькими остатками С1у. Альтернативно, линкер -Ζ- может состоять из глицинового мостика [С1у]п, где п=1, 2 или 3.
- 6 006308
Все аминокислоты в пептидах изобретения могут находиться в виде как Ό-, так и Ь-форм, хотя предпочтительна природная Ь-форма.
С- и Ν-терминальные концы пептидных последовательностей могут отличаться от природных последовательностей модификацией терминальной NН2-группы и/или СООН-группы, например, они могут быть ацилированы, ацетилированы, амидированы или модифицированы с целью получения сайта связывания для носителя или другой молекулы.
Пептиды по изобретению состоят как минимум из 6 аминокислот, предпочтительно, от 10 до 30 аминокислот. Они охватывают все естественные вариации аминокислот по обозначенным положениям.
Полипептидный антиген, согласно изобретению, может быть как в свободной, так и в связанной с носителем форме. Носитель или твердую фазу, с которой пептид необязательно связан, можно выбирать из широкого круга известных носителей. Его следует выбирать с учетом намеченного применения иммобилизованного полипептида в качестве диагностического антигена или иммунизирующего компонента вакцины.
Примеры носителей, которые могут применяться, к примеру, в диагностических целях, - это магнитные бусины или латекс из сополимеров типа стирол-дивинилбензол, гидроксилированный стиролдивинилбензол, полистирол, карбоксилированный полистирол, бусины из технического углерода, неактивированного или активированного полистиролом или поливинилхлоридом стекла, эпоксиактивированного пористого магнитного стекла, частицы из желатина или полисахаридов либо другие белковые частицы, эритроциты, моно- или поликлональные антитела или £аЬ-фрагменты таких антител.
Согласно следующему воплощению настоящего изобретения, антигены могут входить в состав вакцины, возможно, в сочетании с носителями, адъювантами или в комбинации с другими иммуностимулирующими элементами, такими как вирус оспы канареек, несущий ген епу. Примерами носителей и/или адъювантов для вакцин служат такие белки, как бычий или человеческий сывороточный альбумин, гемоцианин из брюхоногого моллюска. Морское блюдечко (кеуйо1е 11тре!) и жирные кислоты.
Иммуностимулирующие вещества можно подразделить на три группы: адъюванты, носители для антигенов и наполнители. Примеры адъювантов включают гидроксид алюминия, соли алюминия, сапонин, мурамило-ди- и трипептиды, монофосфорилированный липид А, пальмитиновая кислота, В. рег1и8818 и различные цитокины, включая цитокин 1Ь-12 и ГС-1 класса ТЫ. Для переноса белков-пассажиров через клеточные мембраны в цитозоль может служить целый ряд белковых токсинов, которые полезны при разработке вакцин СТЬ. Носители включают бактериальные токсоиды, такие как инактивированные столбнячный и холерный токсины, генетически детоксифицированные бактериальные токсины, такие как термолабильный энтеротоксин из Е. со11, жирные кислоты, живые вектора типа химерного полиовируса и гибридные белки, образующие частицы, например, частицы гибридного, ретроранспозона ΤΥ дрожжей и НЬеАд-частицы. Часто применяемые наполнители в современных вакцинах состоят из эмульсии минерального масла, полного и неполного адъюванта Фрейнда, эмульсий растительных масел, неионных поверхностно-активных блоксополимеров, сквалена или сквалана, липопептидов, липосом и биодеградируемых микросфер. Два новых адъюванта, обладающие значительным потенциалом для разработки новых вакцин, включают микроэмульсию масло-в-воде МЕ59 и полимерные микрочастицы. Можно использовать любые вещества, усиливающие иммуногенность антигена, и в Фармакопее США и Европейской Фармакопее приведены еще несколько других альтернативных носителей или адъювантов.
В состав композиции антигена для применения в качестве иммуностимулятора также могут входить интерфероны типа γ-ΙΕΝ, антивирусные хемокины или гемопоэтические факторы роста, такие как (колониестимулирующий) фактор роста гранулоцитов/макрофагов.
Другой подход для усиления стимуляции и всасывания, к примеру, в кишечнике, состоит во введение пептидов изобретения вместе с небольшими пептидами, такими как ди-, три- или тетрапептиды. Эти пептиды можно вводить в дополнение к пептидам изобретения или в комбинации с ними. Предпочтительно, пептиды вводят вместе с трипептидом ΥΟΟ. состоящим из аминокислот в Ό- или Ь-форме, предпочтительно в Ό-форме.
Последние подходы к непарентеральному введению вакцин, к примеру, через слизистую оболочку, включают: технологию слияния генов для создания нетоксичных производных мукозных адъювантов, генетически инактивированные антигены, содержащие делецию в основном гене, коэкспрессию антигена и специфического цитокина, играющего важную роль в модуляции и контроле иммунного ответа в слизистой оболочке, и, собственно, генетический материал, допускающих введение ДНК или РНК и эндогенную экспрессию их в клетках хозяина.
Один из подходов к получению продолжительных ответов, когда требуется клеточный иммунитет, заключается в вакцинации при помощи плазмидной ДНК, кодирующей один или более специфических антигенов.
Для защиты против ВИЧ-инфекции вакцина должна индуцировать как мукозный, так и системный иммунные ответы, и может вводиться любым общепринятым способом, парентерально или непарентерально, например, подкожно, внутрикожно, внутривенно, внутримышечно, перорально, в слизистую оболочку или интраназально.
- 7 006308
В предпочтительном воплощении вакцина согласно настоящему изобретению включает антигены, содержащие по меньшей мере один из пептидов, выбранных из групп, представленных 8ЕО ΙΌ N0 1, 4, 9 и 15, более предпочтительно различные пептиды находятся в равном количестве.
В следующем предпочтительном воплощении вакцинная композиция содержит следующие антигены:
КЫУАТК0Ь0КРАУКРОЬЬ1Т-ЦН2(8Ер1ОЦОЗ)
Р1ЕРЦ1ЕОРЬУОООУА18РК.ТЬУАОСОО (ЗЕО ГО N0 6)
ΥΑΙΡ(2ΑΕΝΤΕΕΝΤνσθΗ<2Α Α-ΝΗ2 (ЗЕО ГО ΝΟ 11)
Х¥8АЕАОТТ8ЕЕОООЬОХУ1 Τ-ΝΗ2 (8ЕЦ ГО ΝΟ 14)
Эти последовательности привносят эпитопы для СТЬ и могут активировать клеточную иммунную систему. Аминокислотные замены, введенные в границах эпитопов для СТЬ, предназначены для усиления связывания. Другие аминокислотные замены вводились для облегчения синтеза пептида и/или увеличения растворимости пептида.
Способ обнаружения антител, индуцируемых ВИЧ-1 или специфическими пептидами или белками ВИЧ-1, в образце жидкой среды организма при помощи данных антигенов составляет следующее воплощение изобретения. Настоящее изобретение также охватывает набор для иммуноанализа, предназначенный для такого обнаружения, и антитела, способные избирательно реагировать с указанными антигенами.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Описание получения пептидов
Пептиды изобретения можно получить любым известным способом получения линейных аминокислотных последовательностей, таким как методы рекомбинантной ДНК. Нуклеотидную последовательность, кодирующую пептид изобретения или мультимер из таких пептидов, вводят в экспрессионный вектор. Подходящими экспрессионными векторами могут служить, к примеру, плазмиды, космиды, вирусы и УАС (искусственные хромосомы дрожжей), содержащие необходимые элементы для контроля репликации и экспрессии. Экспрессионный вектор может подвергаться стимуляции для экспрессии в клетках хозяина. Подходящими клетками хозяина являются, к примеру, бактерии, дрожжевые клетки и клетки млекопитающих. Такие методы хорошо известны в данной области и описаны, к примеру, в 8атЬгоок е! а1., Мо1еси1аг С1ошид: А ЬаЬотакогу Мапиа1, Со1б 8рппд НагЬог ЬаЬота1огу Ргекк, Со1б 8рппд НагЬог, 1989. Другие хорошо известные методы - это деградация или синтез путем присоединения одного аминокислотного остатка к следующему в жидкой фазе или предпочтительно, в твердой фазе (смола), например, при помощи так называемого синтеза по МегпПе1б. См., к примеру, Вагапу апб МегпПе1б ίη 111е РерОбек, Апа1ук1к, 8уп1йек1к, Вю1оду, Уо1. 2, Е. Отокк апб Ме1пЬоЕет, Еб. (Асаб. Ргекк, Ν.Υ., 1980), Кпе1ЬСотошет апб Ми11еп, 1пЕ ί. Рер11бе Рто1еш Век., 30, р. 705-739 (1987) и Е1е1бк апб №Ь1е, 1пЕ ί. Рерйбе Рго1еш Век., 35, р. 161-214 (1990).
В случае, когда нужен связанный или циклический пептид, аминокислотная последовательность подвергается стадии химического окисления для циклизации или соединения двух остатков цистеина между двумя пептидными последовательностями, когда синтезируют соответствующие линейные аминокислотные последовательности, см. Акар е! а1., Те1гаЬебгоп Ьейет, 33, 8, р. 1073-1076, 1992.
Общее описание синтеза
Все пептидные производные, полученные в описанных ниже Примерах, были синтезированы с использованием синтезатора Мййдеп 9050 Рер!1бе 8уп111ек1/ег по стандартной программе. Использовали смолу Теп!а Ое1 Р ВАМ с теоретической емкостью 0,20 МЭКВ/г (ВАРР Ро1утеге ОтЬН, ТиЬшдеп). Конечный продукт синтеза высушивали под вакуумом в течение ночи. Затем пептид отделяли от смолы путем обработки 90% трифторуксусной кислотой в присутствии этандитиола (5%) и воды (5%) в качестве ловушек (1,5 ч при комнатной температуре). Затем смолу фильтровали и промывали на фильтре дополнительным объемом трифторуксусной кислоты (100%) (2х20 мл). Фильтраты объединяли и упаривали под вакуумом (водяная баня при комнатной температуре), а остаток затирали в этиловом эфире (200 мл) и отфильтровывали осажденный продукт. Твердое вещество сразу растворяли на фильтре в ледяной уксусной кислоте (100 мл ), вносили в 1,5 л 20% уксусной кислоты в метаноле и обрабатывали 0,1 М раствором йода в метаноле до сохранения бледно-коричневой окраски. Затем добавляли ионообменник Эо\\'ех 1х8 в ацетатной форме (15 г) (Вю-Ваб, ВюЬтопб, СА) и смесь фильтровали. Фильтрат упаривали, а остаток лиофилизировали из уксусной кислоты. Затем продукт очищали методом обращеннофазовой жидкостной хроматографии на колонке, заполненной Ктотакб® 100-5 С8 (ЕКА №Ье1, 8ийе, 8\тебеп) в соответствующей системе, содержащей ацетонитрил в 0,1% водном растворе трифторуксусной кислоты. Образцы собирали с колонки и анализировали методом аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (Весктап 8ук1ет Оо1б, И8А), оснащенной колонкой Кготакб® 100-5 С8 (ЕКА №Ье1, 8ийе. 8\тебеп). Фракции, содержащие чистое вещество, объединяли, растворитель выпаривали и продукт лиофилизировали из уксусной кислоты. Конечный продукт подвергали анализу ВЭЖХ и структуру пептида проверяли при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии с лазерной десорпцией-ионизацией (ЕО1-М8).
- 8 006308
Для синтеза использовали только Б-аминокислоты, которые были защищены фторенилметоксикарбонильной группой по α-аминогруппе. Боковые цепи были защищены следующим образом:
Сук(Тй), О1п(Тй), С1и(0®и), ТЬт(1Ви), где сокращения в скобках означают:
Тй = трифенилметил ΐ-Ви = трет-бутил
0(Ви = трет-бутиловый эфир.
Производные аминокислоты были получены от фирмы ВасЬет АС, Швейцария.
Пример 1. Получение НЬ1УЬТКрЬрКЕАЬПР6ЬЬГГ-ПН2 (ЗЕС ГО N0 2).
Пептид синтезировали в амидной форме из соответствующих исходных материалов согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии (БОГ-МЗ).
Пример 2. Получение Β^ГΥАТЙ^^^ΚЕАУNРС^^ГГ-NН2 (ЗЕС ГО N0 3). Пептид синтезировали в амидной форме из соответствующих исходных материалов согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и массспектрометрии (БОГ-МЗ).
Чистота (ВЭЖХ): более 97% (отдельные примеси менее 1%). Молекулярный вес (свободное основание): 2442,9.
Пример 3. Получение ¥1Е0\11%(Х\%С1С1¥А18РНТЕ\А¥ЕН С-ЫН2 (ЗЕС Ш N0 5). Пептид синтезировали в амидной форме из соответствующих исходных материалов согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии (БОГ-МЗ).
Пример 4. Получение ЕШСМЕСОБУСССУА^РЙТБУАСССС (ЗЕС ГО N0 6). Пептид синтезировали из соответствующих исходных материалов, согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии (БОГ-МЗ).
Чистота (ВЭЖХ): более 94%. Молекулярный вес (свободное основание): 2745. Брутто формула: С123Н 198037^4
Пример 5. Контрольный пример.
Получение нативной последовательности р24: Р1У0Х1ЕС0МУНСА1ЗРЙ ТБХАХУУКУ (ЗЕС ГО N0 7).
Пептид синтезировали из соответствующих исходных материалов, согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии (БОГ-МЗ).
Чистота (ВЭЖХ): прибл. 85%. Молекулярный вес (свободное основание): 2929. Брутто формула: С131 Η2|,|036,Ν 38 З.
Пример 6. Получение ЕГБрГОрбрБУССЮУАГЗРКТБУЛб-ад (ЗЕС ГО N0 8).
Пептид синтезировали в амидной форме из соответствующих исходных материалов, согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии (БОГ-МЗ).
Чистота (ВЭЖХ): более 97% (отдельные примеси менее 1%). Молекулярный вес (свободное основание): 2572,0.
Пример 7. Ссылочный пример.
Получение нативной последовательности р24: САТР^^^NТМ^NГУССН^АА-NН2 (ЗЕС ГО N0 10).
Пептид синтезировали в амидной форме из соответствующих исходных материалов, согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии (БОГ-МЗ).
Чистота (ВЭЖХ): 98%. Молекулярный вес (свободное основание): 1995,2. Брутто формула: С82Н135029N27З.
Пример 8. Получение ¥А11¥7АЕУ1БЕУ1Л%С1 ЮАА-МБ (ЗЕСГО N0 11).
Пептид синтезировали в амидной форме из соответствующих исходных материалов, согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии (БОГ-МЗ).
Чистота (ВЭЖХ): 98%. Молекулярный вес (свободное основание): 2051,4. Брутто формула: С91Н147027N27.
Пример 9. Получение ЕА11¥7АЕУ1БЕУ1Л%СС1С111(МАСС-МБ (ЗЕСГО N0 12).
Пептид синтезировали в амидной форме из соответствующих исходных материалов, согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии (БОГ-МЗ).
Пример 10. Ссылочный пример.
Получение нативной последовательности р24: СЗО^СТТЗТБОЕОЮХУ МТ-NН2 (ЗЕС ГО N0 13).
- 9 006308
Пептид синтезировали в амидной форме из соответствующих исходных материалов, согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии (ΤΌΙ-Μ8).
Чистота (ВЭЖХ): 90%. Молекулярный вес (свободное основание): 1995,2. Брутто формула: С84Н 1з5Оз1Х2з8.
Пример 11. Получение \\УАЕАС1ТТ8ЕЕОС1ОЕС1\\Т1'-МЕ (8ЕО ΙΌ N0 14).
Пептид синтезировали в амидной форме из соответствующих исходных материалов, согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии (ΤΌΙ-Μ8).
Чистота (ВЭЖХ): более 97% (отдельные примеси менее 1%). Молекулярный вес (свободное основание): 2007,3.
Пример 12. Ссылочный пример.
Получение нативной последовательности р17: Н[У\\А8ВЕЕЕРЕАУ^СЕЕЕУТМН2 (8ЕО ΙΌ N0 16).
Пептид синтезировали в амидной форме из соответствующих исходных материалов, согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии (БЭ1-М8).
Чистота (ВЭЖХ): более 95%. Молекулярный вес (свободное основание): 2436,8.
Пример 1з. Ссылочный пример.
Получение нативной последовательности р24: Р1УСМССОМУНСА18РВ ΓΕΝΑ\ν-ΝΗ2 (8Е0 Ό) N0 17).
Пептид синтезировали в амидной форме из соответствующих исходных материалов, согласно общему описанию синтеза. Чистоту определяли методом ВЭЖХ и проверяли структуру при помощи аминокислотного анализа и масс-спектрометрии (БЭ1-М8).
Чистота (ВЭЖХ): приблизительно 9з%.
Молекулярный вес (свободное основание): 2601,0.
Пример 14. Димеризация через дисульфидный мостик.
Пептидные последовательности соединяют путем окисления с образованием двухцепочечного пептида, в котором цистеиновые остатки образуют дисульфидный мостик. Например, мостик может образоваться путем окисления с помощью Ι2 следующим образом. Равные количества пептидов растворяют в смеси уксусная кислота/метанол (1:4) и добавляют 0,1 М 1г в метаноле, получая смесь димера.
Пример 15. Получение вакцины, содержащей пептиды 8Е0 ΙΌ N0 3, 6, 11 и 14.
Лиофилизованные пептиды растворяли в стерильной воде до конечной концентрации 4 мг/мл. Конечная концентрация соли в растворе является физиологически приемлемой. Также готовили препарат колониестимулирующего фактора гранулоцитов/ макрофагов (ОМ-С8Е), согласно инструкции производителя, в конечной концентрации 0,3 мг/мл. Два раствора вводили внутрикожно. Обычная доза для инъекции составляла 100 мкл.
Пример 16. Раствор или суспензию антигена смешивали с равным количеством адъюванта Фрейнда фирмы ВсЕппд. полного или неполного, а затем тщательно эмульгировали, набирая в шприц для инъекций и энергично выпуская из него, или при помощи гомогенизатора. Эмульсия должна оставаться стабильной не менее 30 мин. Эмульсии антиген-адъювант как депо лучше всего вводить подкожно.
Пример 17. Иммуноанализ для обнаружения антител, индуцируемых ВИЧ-1.
Реагенты для магнитных частиц следует готовить по методике, рекомендованной производителем. Использовали частицы ЭупаЬсаЛ фирмы Эупа1 А8. Покрытые лигандом магнитные частицы обозначают как реагент 1. Пептид, согласно изобретению ковалентно связывается с преактивированной поверхностью магнитных частиц. Также возможно физически абсорбировать пептид на поверхности магнитных частиц. Концентрация частиц в реагенте 1 находится в пределах от 1 мг/мл до 15 мг/мг. Размер частиц варьирует от 0,2 мкм до 15 мкм. Концентрация пептидов находится в пределах от 0,01 мг/мг частиц до 1 мг/мг частиц.
Реагент конъюгированного с щелочной фосфатазой (АР) антитела против Ι§ человека готовили по методике, рекомендованной фирмой Элко А8. Эта методика является стандартной в данной области. Данный реагент обозначают как реагент 2.
Раствор субстрата - фенолфталеинмонофосфата готовили согласно методике, рекомендованной фирмой Е1ика АО. Эта методика является стандартной в данной области. Данный реагент обозначают как реагент 3.
Используемый для отмывки и инкубации буфер представляет собой стандартный 0,05 М трисбуфер со следующими дополнительными компонентами: Твин20 (от 0,01% до 0,1%), глицерин (от 0,1% до 10%) и хлористый натрий (от 0,2% до 0,1%).
Процедура анализа включает стадию инкубации, на которой 1 каплю реагента 1 смешивают с 2 каплями отмывочного буфера в каждой лунке. После перемешивания добавляют 30 мкл образца и раствор инкубируют 5 мин. Магнитные частицы удерживают магнитом и удаляют жидкость, а затем убирают магнит. Затем ячейки дважды отмывают 4 каплями отмывочного буфера перед инкубацией с реагентом
2. Вносят 1 каплю реагента 2 вместе с 2 каплями отмывочного буфера и раствор инкубируют 5 мин. Магнитные частицы удерживают магнитом и удаляют жидкость, а затем убирают магнит. Затем стадию
- 10 006308 отмывки повторяют перед инкубацией с реагентом 3. Вносят 2 капли реагента 3 в каждую ячейку и раствор инкубируют 3 мин. Результат оценивают против белого фона. Положительный результат - красный раствор (3+ = интенсивно красный), тогда как отрицательный результат - светло-желтый/коричневый раствор, как в отрицательном контроле.
Набор для иммуноанализа может применяться для обнаружения антител, индуцируемых или вирусом ВИЧ, или ВИЧ-специфичными пептидами или белками, например, пептидами настоящего изобретения.
Пример 18. Терапевтическая или профилактическая вакцина.
По меньшей мере, один из полипептидов изобретения, выбранный из группы последовательностей 8ЕО Ш N0 1, 8Е0 Ш N0 4, 8Е0 Ш N0 9 и 8Е0 Ш N0 15, могут служить в качестве антигена и составлять действующее начало профилактической или терапевтической вакцины, предназначенной для защиты от вируса иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1). Вакцина может включать соединения, обладающие благотворным эффектом защиты или стимуляции иммунной системы хозяина (человека или позвоночных животных), например, интерлейкины, интерфероны, факторы роста гранулоцитов/макрофагов, гемопоэтические факторы роста или др. Предпочтительно, вакцинная композиция дополнительно содержит адъювант или носитель, более предпочтительно адъювантом или носителем служит монофосфорилированный липид А (МРЬ®), возможно, вместе с квасцами, адъювантом Фрейнда (полным или неполным) или гидроксидом алюминия. Оптимальное количество адъюванта/носителя зависит от выбранного типа.
Пептиды изобретения могут быть модифицированы добавлением к С-концу одного остатка жирной кислоты, например, цепи пальмитоила, для получения липопептидной вакцины. Затем липопептиды могут быть введены в мембраны липосом методом замораживания-оттаивания, в результате чего образуются липосомы, несущие пептидные лиганды на своей поверхности.
Пептидная или вакцинная композиция может быть лиофилизирована перед хранением. Лиофилизованные пептиды можно растворять в стерильной воде до конечной концентрации 0,1-100 мг/мл. Вакцину можно хранить, предпочтительно, при низкой температуре, в ампулах, содержащих одну или несколько разовых доз, готовых к употреблению. Обычная разовая доза пептида, согласно изобретению, находится в пределах от 0,05 мкг до 1 мг на кг веса тела, предпочтительно, в пределах от 0,15 мкг до 0,15 мг на кг веса тела. Специалисты в данной области знают, что разовая доза подбирается в зависимости от веса тела пациента, типа заболевания, степени тяжести заболевания, способа введения и некоторых других факторов. При применении в качестве терапевтической вакцины в типичном случае ее можно вводить до 12 раз, путем инъекций. Можно назначать дополнительные инъекции (бустеры) для иммунизации и в особых случаях продолжать их в течение всей жизни пациента. При приготовлении раствора для инъекции пептиды растворяют в стерильной воде до конечной концентрации пептида 1 мг/мл. Обычно объем раствора для инъекции составляет от 100 мкл до 200 мкл (2х100 мкл). Пептид предпочтительно вводят вместе с подходящим адьювантом и/или фактором роста гранулоцитов/макрофагов, к примеру, Ьеисошах® фирмы Зйегшд Р1оидй, приготовленным в диапазоне концентраций от 0,1 мг/мл до 1 мг/мл, или в соответствии с рекомендациями производителя. Особенно предпочтительно комбинированное лечение, когда данные пептиды вводятся вместе с пептидами, описанными в опубликованной международной патентной заявке РСТЖ0 00/00075 от 2 марта 2000 г. и/или находящейся на рассмотрении патентной заявке Норвегии № 2000 4412. Эти пептиды можно вводить одновременно или последовательно. К подходящим способам введения относятся внутрикожный, подкожный, внутривенный, пероральный, внутримышечный, интраназальный, мукозальный и др. Для сохранения защитного эффекта могут потребоваться бустерные инъекции. Специалистам в данной области понятно, что вакцинные композиции по изобретению применимы не только для предупреждения инфекции, но также для лечения инфекции.
Не наблюдалось токсических эффектов пептидов по изобретению при введении мышам в дозе 100 мкг на кг веса тела.
Вышеприведенные примеры предназначаются только для иллюстрации. Предусматривается, что специалист в данной области может модифицировать описанные здесь пептиды, антигены и вакцины, не отклоняясь от замысла и границ данного изобретения, как изложено в формуле изобретения.

Claims (16)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Пептид, происходящий из белков дад р17 и р24 вируса ВИЧ-1, отличающийся тем, что он включает по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, которая содержит модификации по сравнению с нативной последовательностью и выбрана из следующих групп аминокислотных последовательностей:
    Хаа, Хаа2 Хаа3 Хаа4 Хаа5 Хаа6 Хаа7 О1и Ьеи О1и Хаац Хаак2 Хаак3 Хаак4 Хаак5 Хаа16 Хаа, - Хаа,8 Хаак9 Хаа20 Хаа21 (8ЕО Ш N0 1), где аминокислоты цепи принимают значения
    Хаа в положении 1 производного пептида - НЕ, Ьук или Агд,
    Хаа в положении 2 - 11е, Ьеи, Уа1 или Ме1,
    - 11 006308
    Агд, Ьук, С1у или Аки
    РЬе, 8ег или Туг,
    А1а, ТЬг или 8ег,
    Уа1, Ьеи, 11е или Сук,
    Аки, Акр или 8ег,
    Рго, Агд или 8ег,
    С1у, 8ег, А1а, Акр или Акп,
    Ьеи или РЬе,
    Ьеи или МеЕ
    С1и, С1у, Акр или 11е,
    ТЬг, 8ег или А1а, отсутствует,
    А1а, 8ег, Акп, Уа1 или Рго,
    11е, Ьеи, Ме! или Уа1,
    8ег или ТЬг,
    Рго или А1а,
    Агд или Ьук,
    ТЬг или 8ег,
    Ьеи или 8ег,
    Акп, РЬе или Уа1,
    Тгр, Туг, С1у или отсутствует,
    Уа1, Ьеи, С1у или отсутствует, Ьук, Агд, С1у или отсутствует,
    Уа1, А1а, Сук, С1у или отсутствует,
    Хаа в положении 3 - 11е или Уа1,
    Хаа в положении 4 - Тгр или Туг,
    Хаа в положении 5 - А1а или Ьеи,
    Хаа в положении 6 - 8ег, ТЬг, Агд или Акп,
    Хаа в положении 7 - Агд или 8ег,
    Хаа в положении 11
    Хаа в положении 12
    Хаа в положении 13
    Хаа в положении 14
    Хаа в положении 15
    Хаа в положении 16
    Хаа в положении 17
    Хаа в положении 18
    Хаа в положении 19
    Хаа в положении 20
    Хаа в положении 21 причем пептид содержит по меньшей мере шесть следующих друг за другом аминокислот из последовательности 8ЕЦ ГО N0 1;
    Хаа1 Хаа2 Хаа3 РЬе Хаа5 Хаа6 Хаа7 С1у Хаа9 Ьеи Уа1 -Ζ- Туг Хаа!3 Хаа!4 Хаа!5 Хаа]6 Хааг Хаа]8 Хаа!9 Хаа20 Хаа21 А1а Хаа2з Хаа24 Хаа25 Хаа2б (8ЕЦ ГО N0 4), где аминокислоты цепи принимают следующие значения:
    Хаа в положении 1 - Рго, Туг или РЬе,
    Хаа в положении 2 - 11е, Уа1 или Ьеи,
    Хаа в положении 3 - 11е, А1а, Уа1, Ме! или Ьеи,
    Хаа в положении 4 - С1п, 8ег, ТЬг или Уа1,
    Хаа в положении 5 - Акп, Акр или ТЬг,
    Хаа в положении 6 - 11е, А1а, Ьеи или МеЕ
    Хаа в положении 7 - С1п, С1и, Ьук или С1у,
    Хаа в положении 9 - С1п или 11е,
    Хаа в положении 13
    Хаа в положении 14
    Хаа в положении 15
    Хаа в положении 16
    Хаа в положении 17
    Хаа в положении 18
    Хаа в положении 19
    Хаа в положении 20
    Хаа в положении 21
    Хаа в положении 23
    Хаа в положении 24
    Хаа в положении 25
    Хаа в положении 26 причем пептид содержит по меньшей мере шесть следующих друг за другом аминокислот из последовательности 8ЕЦ ГО N0 4, а -Ζ- обозначает необязательный линкер, которым может быть РЕС, модифицированный РЕС и/или [С1у]п, где п = 1, 2 или 3;
    Хаа1 А1а Хаа3 Хаа4 Хаа5 А1а Хаа7 Хаа8 Хаа9 Ьеи Ьеи Хаа!2 Хаа в Хаа!4 -Ζ- Хаа]5 Хаа]6 Н1к С1п Хаа!9 А1а Хаа21 Хаа22 (8ЕС ГО N0 9), где Хаа в положении 1 - это Туг, Тгр, РЬе или С1у,
    Хаа в положении 3 - ТЬг, А1а, Уа1, 11е или Ьеи,
    Хаа в положении 4 - Рго или 8ег,
    Хаа в положении 5 - С1п, Н1к, С1у, ТЬг, 8ег или Туг,
    Хаа в положении 7 - Ьеи, 11е или Уа1,
    Хаа в положении 8 - Акп или Туг,
    Хаа в положении 9 - ТЬг, МеЕ Ьеи или А1а,
    Хаа в положении 12 - 8ег, ТЬг или Акп,
    Хаа в положении 13 - ТЬг, 11е, Уа1 или А1а,
    Хаа в положении 14 - Уа1 или 11е,
    Хаа в положении 15 - С1у или отсутствует,
    Хаа в положении 16 - С1у или отсутствует,
    Хаа в положении 19 - А1а или С1у,
    Хаа в положении 21 - Ме!, Ьеи, Сук или отсутствует,
    Хаа в положении 22 - С1п, С1и, Н1к, С1у или отсутствует,
    - 12 006308
    Ьеи, Рго, Уа1 или С1и,
    С1и, А1а или Ηίκ,
    С1и или С1у,
    С1и или Н1К,
    Не, Ьеи, Уа1 или Ме1.
    С1у, А1а, С1п, Тйг, Аки, Агд, Ηίκ или Не,
    Тгр или Туг,
    Т11Г, МеЕ Ьеи или Не,
    Тйг или 8ег,
    Сук, С1у или отсутствует,
    С1у или отсутствует, причем пептид содержит по меньшей мере шесть следующих друг за другом аминокислот из последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0 9, а -Ζ- обозначает необязательный линкер, которым может быть РЕС, модифицированный РЕС и/или [С1у]п, где η = 1, 2 или 3;
    Хаа1 Хаа2 А1а Ьеи А1а С1у Хаа7 Хаа8 Хаа9 Ьеи Хаа11 Хаа12 Хаа13 Хаа14 Хаа15 Хаа16 Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 (8ЕС ΙΌ N0 15), где Хаа в положении 1 - это Тгр или Туг,
    Хаа в положении 2 - 8ег или А1а,
    Хаа в положении 7 - ТЬг, А1а или 8ег,
    Хаа в положении 8 - 8ег или ТЬг,
    Хаа в положении 9 - 8ег или ТЬг,
    Хаа в положении 11
    Хаа в положении 12
    Хаа в положении 13
    Хаа в положении 14
    Хаа в положении 15
    Хаа в положении 16
    Хаа в положении 17
    Хаа в положении 18
    Хаа в положении 19
    Хаа в положении 20
    Хаа в положении 21 причем пептид содержит по меньшей мере шесть следующих друг за другом аминокислот из последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0 15;
    кроме того, терминальные концы этих последовательностей могут быть представлены свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями, два или более остатков Сук могут быть составной частью межцепочечного дисульфидного связывания либо мостиков -8-(СН2)р-8- или -(СН2)р-, где р=1-8, необязательно с одним или более внедренными гетероатомами типа О, N или 8, и/или указанные пептидные последовательности иммобилизованы на твердой подложке.
  2. 2. Пептид по п.1, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность 8ЕЦ ΙΌ N0 1 выбрана из группы, состоящей из 8ЕЦ ΙΌ N0 2 и 8ЕЦ ΙΌ N0 3.
  3. 3. Пептид по п.1, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность 8ЕЦ ΙΌ N0 4 выбрана из группы, состоящей из 8ЕЦ ΙΌ N0 5, 8ЕЦ ΙΌ N0 6 и 8ЕЦ ΙΌ N0 8.
  4. 4. Пептид по п.1, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность 8ЕЦ ΙΌ NО 9 выбрана из группы, состоящей из 8ЕЦ ΙΌ N0 11 и 8ЕЦ ΙΌ N0 12.
  5. 5. Пептид по п.1, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность 8ЕЦ ΙΌ N0 15 представляет собой 8ЕЦ ΙΌ N0 14.
  6. 6. Антиген, отличающийся тем, что он включает по меньшей мере один пептид по п.1.
  7. 7. Антиген по п.6, отличающийся тем, что он включает по меньшей мере один пептид, выбранный по меньшей мере из одной из групп 8ЕЦ ΙΌ N0 1, 8ЕЦ ΙΌ N0 4, 8ЕЦ ΙΌ N0 9 и 8ЕЦ ΙΌ N0 15.
  8. 8. Вакцинная композиция, отличающаяся тем, что она включает антиген по п.6 вместе с фармацевтически приемлемым растворителем и необязательно адъювантом, носителем и/или наполнителем и необязательно дополнительными иммуностимуляторным(и) соединением(ями).
  9. 9. Вакцинная композиция по п.8, отличающаяся тем, что она включает по меньшей мере один пептид, выбранный из групп 8ЕЦ ΙΌ N0 1, 8ЕЦ ΙΌ N0 4, 8ЕЦ ΙΌ N0 9 и 8ЕЦ ΙΌ N0 15.
  10. 10. Вакцинная композиция по п.8, отличающаяся тем, что она включает пептиды 8ЕЦ ΙΌ N0 3, 8ЕЦ ΙΌ N0 6, 8ЕС ΙΌ N0 11 и 8ЕС ΙΌ N0 14.
  11. 11. Вакцинная композиция по пп.8-10, отличающаяся тем, что пептиды растворены в стерильном водном растворе, а необязательным иммуностимуляторным соединением является колониестимулирующий фактор гранулоцитов/макрофагов.
  12. 12. Вакцинная композиция по пп.8-11, отличающаяся тем, что она включает адъювант, выбранный из числа монофосфорилированного липида А (МРЬ®), полного или неполного адъюванта Фрейнда или гидроксида алюминия.
  13. 13. Вакцинная композиция, отличающаяся тем, что антиген по п.6 включен в состав липопептида и/или липосомы.
  14. 14. Способ обнаружения антител, индуцируемых ВИЧ или ВИЧ-специфичными пептидом(ами) или белком(ами), в образце жидкой среды организма, отличающийся тем, что указанный образец подвергают иммуноанализу, причем антиген(ы) выбирают из пептидов по пп.1-5.
  15. 15. Набор для иммуноанализа для обнаружения антител, индуцируемых ВИЧ или ВИЧспецифичными пептидами или белками, в образце жидкой среды организма, отличающийся тем, что диагностическим антигеном является пептид по любому из предыдущих пп.1-5.
  16. 16. Антитело, отличающееся тем, что оно способно избирательно реагировать с антигеном по пп.6 и 7.
EA200300336A 2000-09-04 2001-09-03 Пептиды вич, антигены, вакцинные композиции, набор для иммуноанализа и способ обнаружения антител, индуцируемых вич EA006308B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NO20004413A NO314588B1 (no) 2000-09-04 2000-09-04 HIV-peptider, antigener, vaksinesammensetning, immunoassay- testsett og en fremgangsmåte for å påvise antistoffer indusert av HIV
PCT/NO2001/000362 WO2002020554A2 (en) 2000-09-04 2001-09-03 Hiv peptides from conserved regions in gag p17 and 924 and their application in e.g. vaccines

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200300336A1 EA200300336A1 (ru) 2003-08-28
EA006308B1 true EA006308B1 (ru) 2005-10-27

Family

ID=19911533

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200300336A EA006308B1 (ru) 2000-09-04 2001-09-03 Пептиды вич, антигены, вакцинные композиции, набор для иммуноанализа и способ обнаружения антител, индуцируемых вич

Country Status (20)

Country Link
US (2) US7009037B2 (ru)
EP (2) EP1878742A3 (ru)
JP (2) JP2004508381A (ru)
CN (2) CN101104636A (ru)
AR (2) AR033998A1 (ru)
AT (1) ATE406380T1 (ru)
AU (3) AU2001282706B2 (ru)
BR (1) BR0114036A (ru)
CA (1) CA2421193A1 (ru)
DE (1) DE60135564D1 (ru)
EA (1) EA006308B1 (ru)
ES (1) ES2312465T3 (ru)
HK (1) HK1059940A1 (ru)
HU (1) HUP0303134A3 (ru)
MY (1) MY136081A (ru)
NO (1) NO314588B1 (ru)
NZ (2) NZ524556A (ru)
SK (1) SK287917B6 (ru)
WO (1) WO2002020554A2 (ru)
ZA (1) ZA200301740B (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2542440C2 (ru) * 2010-03-24 2015-02-20 Сосьете Д'Эксплуатасьон Де Продюи Пур Ле Эндюстри Шимик Сеппик Живая вакцина против заболеваний птиц
RU2727673C1 (ru) * 2019-08-09 2020-07-22 Федеральное государственное унитарное предприятие «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» Федерального медико-биологического агентства Антитела против белка р17 ВИЧ-1 субтипа А

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001056355A2 (en) 2000-02-04 2001-08-09 Duke University Human immunodeficiency virus vaccine
JP5021649B2 (ja) * 2005-08-26 2012-09-12 ノヴォ ノルディスク アクティーゼルスカブ 高分子システムを変性する方法
FI120376B (fi) * 2007-01-17 2009-09-30 Next Biomed Technologies Nbt O Menetelmä biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin valmistamiseksi
FI120349B (fi) 2007-03-07 2009-09-30 Next Biomed Technologies Nbt O Menetelmä fuusiopolypeptidin valmistamiseksi
EP2344143A1 (en) 2008-09-09 2011-07-20 Mukesh Harilal Shukla Bioactive composition for the treatment of the hiv/aids, method for manufacturing and using the same
WO2010045659A1 (en) 2008-10-17 2010-04-22 American Gene Technologies International Inc. Safe lentiviral vectors for targeted delivery of multiple therapeutic molecules
US9910040B2 (en) 2012-07-09 2018-03-06 Sevident, Inc. Molecular nets comprising capture agents and linking agents
US9733242B2 (en) 2012-10-07 2017-08-15 Sevident, Inc. Devices for capturing analyte
CA2793959C (en) 2010-03-25 2019-06-04 Oregon Health & Science University Cmv glycoproteins and recombinant vectors
MX346475B (es) 2011-01-06 2017-03-22 Bionor Immuno As Peptidos inmunogenicos monomericos y multimericos.
HUE037408T2 (hu) 2011-06-10 2018-08-28 Univ Oregon Health & Science CMV glikoproteinek és rekombináns vektorok
AU2012216792A1 (en) 2011-09-12 2013-03-28 International Aids Vaccine Initiative Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing HIV-1 proteins by broadly neutralizing antibodies
EP2586461A1 (en) 2011-10-27 2013-05-01 Christopher L. Parks Viral particles derived from an enveloped virus
MX2014014683A (es) * 2012-06-06 2015-02-24 Bionor Immuno As Peptidos derivados de proteinas virales para usarse como inmunogenos y reactivos de dosificacion.
ES2631608T3 (es) 2012-06-27 2017-09-01 International Aids Vaccine Initiative Variante de la glicoproteína Env del VIH-1
HUE034308T2 (en) 2013-03-21 2018-02-28 Sanofi Aventis Deutschland Preparation of hydantoin-containing peptide products
US10450343B2 (en) 2013-03-21 2019-10-22 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Synthesis of cyclic imide containing peptide products
US20150065381A1 (en) 2013-09-05 2015-03-05 International Aids Vaccine Initiative Methods of identifying novel hiv-1 immunogens
US10058604B2 (en) 2013-10-07 2018-08-28 International Aids Vaccine Initiative Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers
EP3069730A3 (en) 2015-03-20 2017-03-15 International Aids Vaccine Initiative Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers
EP3072901A1 (en) 2015-03-23 2016-09-28 International Aids Vaccine Initiative Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers
WO2017007994A1 (en) 2015-07-08 2017-01-12 American Gene Technologies International Inc. Hiv pre-immunization and immunotherapy
IL310925A (en) 2016-01-15 2024-04-01 American Gene Tech Int Inc Methods and preparations for activating GAMMA-DELTA T cells
US10137144B2 (en) 2016-01-15 2018-11-27 American Gene Technologies International Inc. Methods and compositions for the activation of gamma-delta T-cells
US10888613B2 (en) 2016-02-08 2021-01-12 American Gene Technologies International Inc. Method of producing cells resistant to HIV infection
EP4036231A1 (en) 2016-03-09 2022-08-03 American Gene Technologies International Inc. Combination vectors and methods for treating cancer
EP3468617A4 (en) 2016-06-08 2020-01-22 American Gene Technologies International Inc. INTEGRATED VIRAL ADMINISTRATION SYSTEM AND RELATED METHODS
EP3481418A4 (en) 2016-07-08 2020-03-11 American Gene Technologies International Inc. HIV PRE-IMMUNIZATION AND IMMUNOTHERAPY
US11583562B2 (en) 2016-07-21 2023-02-21 American Gene Technologies International Inc. Viral vectors for treating Parkinson's disease
US11820999B2 (en) 2017-04-03 2023-11-21 American Gene Technologies International Inc. Compositions and methods for treating phenylketonuria
US11352646B2 (en) 2018-11-05 2022-06-07 American Gene Technologies International Inc. Vector system for expressing regulatory RNA
GB2610556A (en) * 2021-09-02 2023-03-15 113 Botanicals Ltd Extraction

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ235538A (en) * 1989-10-12 1992-06-25 Viral Technologies Inc Peptides immunoreactive with antibodies to hiv p17; carrier-bound peptides, vaccines, immunoassay and a method for forming antibody enriched sera
SE468168B (sv) 1990-02-20 1992-11-16 Replico Medical Ab Hiv-1, p24 peptider, diagnostiska antigener och foerfarande foer saerskiljande diagnostik av preliminaert hiv-1 positiva serumprov
DE4039925A1 (de) 1990-12-14 1992-06-17 Behringwerke Ag Ausgewaehlte peptide des gruppenspezifischen antigens (gag) von humanem immundefizienzvirus (hiv), ihre herstellung und verwendung
SE9101863D0 (sv) * 1991-06-13 1991-06-13 Replico Medical Ab Peptider, diagnostiskt antigen, vaccinkomposition och foerfarande foer selektering av hiv-stammar
US6525173B1 (en) 1997-01-02 2003-02-25 Universidade Federal De Minas Gerais Process for expression and production of recombinant protein hybrid protein (p24/p17) derived from human immunodeficiency viruses (HIV-1)
GB9703802D0 (en) * 1997-02-24 1997-04-16 Kingsman Susan M Anti-hiv peptides and proteins
US5972339A (en) 1997-11-13 1999-10-26 The General Hospital Corporation Method of eliciting anti-HIV-1 helper T cell responses
CA2685270C (en) 1998-05-13 2014-07-29 Pharmexa Inc. Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same
NO311807B1 (no) 1999-03-04 2002-01-28 Bionor Immuno As HIV-peptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay- testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkalt av HIV

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2542440C2 (ru) * 2010-03-24 2015-02-20 Сосьете Д'Эксплуатасьон Де Продюи Пур Ле Эндюстри Шимик Сеппик Живая вакцина против заболеваний птиц
RU2727673C1 (ru) * 2019-08-09 2020-07-22 Федеральное государственное унитарное предприятие «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» Федерального медико-биологического агентства Антитела против белка р17 ВИЧ-1 субтипа А

Also Published As

Publication number Publication date
EP1878742A3 (en) 2008-04-30
EP1322665B1 (en) 2008-08-27
WO2002020554A2 (en) 2002-03-14
BR0114036A (pt) 2003-07-22
CA2421193A1 (en) 2002-03-14
NO20004413L (no) 2002-03-05
NZ535148A (en) 2007-06-29
WO2002020554A3 (en) 2002-06-13
AU2001282706B2 (en) 2007-03-22
NO20004413D0 (no) 2000-09-04
HUP0303134A3 (en) 2012-09-28
JP2004508381A (ja) 2004-03-18
ES2312465T3 (es) 2009-03-01
CN1460111A (zh) 2003-12-03
MY136081A (en) 2008-08-29
US20070237783A1 (en) 2007-10-11
AR033998A1 (es) 2004-01-21
US20040115615A1 (en) 2004-06-17
SK4022003A3 (en) 2003-09-11
AU2007202739A1 (en) 2007-07-05
US7009037B2 (en) 2006-03-07
SK287917B6 (sk) 2012-03-02
AU8270601A (en) 2002-03-22
AU2007202739B2 (en) 2009-12-03
HK1059940A1 (en) 2004-07-23
HUP0303134A2 (hu) 2005-03-29
CN1282656C (zh) 2006-11-01
DE60135564D1 (de) 2008-10-09
ATE406380T1 (de) 2008-09-15
AR071262A2 (es) 2010-06-09
EP1322665A2 (en) 2003-07-02
JP2011219481A (ja) 2011-11-04
EP1878742A2 (en) 2008-01-16
CN101104636A (zh) 2008-01-16
US7612168B2 (en) 2009-11-03
ZA200301740B (en) 2004-06-21
EA200300336A1 (ru) 2003-08-28
NO314588B1 (no) 2003-04-14
NZ524556A (en) 2005-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA006308B1 (ru) Пептиды вич, антигены, вакцинные композиции, набор для иммуноанализа и способ обнаружения антител, индуцируемых вич
US7709003B2 (en) Method of producing an HIV-1 immune response
AU2001282706A1 (en) HIV peptides from conserved in gag p17 and 924 and their application in E.G. vaccines
US7097971B2 (en) HIV-1 peptide, antigen, immunogenic composition, diagnostic method and immunoassay kit
AU2001286336A1 (en) HIV peptides from Tat, Rev and Wef conserved and their application as E.G. vaccine components

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU