ES2312465T3 - Peptidos de vih de regiones conservadas en gag p17 y sus aplicaciones, tales como vacunas. - Google Patents
Peptidos de vih de regiones conservadas en gag p17 y sus aplicaciones, tales como vacunas. Download PDFInfo
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Abstract
Péptido derivado de la proteína gap p17 de VIH-1 en el que dicho péptido comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 en el que: los extremos terminales de la secuencia pueden ser grupos carboxilo o amino libres, amidas, acilos, acetilos o sales de los mismos, dos o más de los residuos de Cys pueden formar parte de un puente disulfuro entre cadenas, un puente -S-(CH 2) p-S- o -(CH 2) p- en el que p = 1-8 opcionalmente con uno o más heteroátomos tales como 0, N y S interpuestos y/o dicha secuencia peptídica está inmovilizada a un soporte sólido.
Description
Péptidos de VIH de regiones conservadas en gag
p17 y sus aplicaciones, tales como vacunas.
La presente invención se refiere a péptidos
novedosos basados en regiones conservadas de antígenos de gag p17
de VIH en forma libre o unida a soporte que comprenden al menos uno
de dichos péptidos, a composiciones de vacuna que contienen al
menos uno de los antígenos, a kits de inmunoensayo y a un método de
detección de anticuerpos, inducidos por el virus de la
inmunodeficiencia humana (VIH) o péptidos específicos de VIH,
usando tales antígenos.
Existe una urgente necesidad de controlar la
epidemia global de infección por VIH y el desarrollo de una vacuna
frente a VIH es uno de los principales objetivos en la
investigación del SIDA. En general, las vacunas deben activar
células presentadoras de antígeno, superar la limitación genética
en respuestas de células T y generar células T y B de memoria. La
variabilidad de la población viral presenta una dificultad
adicional para obtener una vacuna eficaz contra el VIH. Hasta ahora
no se ha notificado ningún gran avance en los intentos en curso de
desarrollar una vacuna frente al SIDA. Ahora se acepta generalmente
que una inducción de inmunidad mediada por células y humoral
específica de antígeno es crucial para el desarrollo de una vacuna
terapéutica y profiláctica eficaz. Podrían requerirse las tres
ramas del sistema inmunitario incluyendo anticuerpos neutralizantes;
células CD8+CTL y células T cooperadoras tipo 1 (TH1) para la
inmunidad protectora frente a VIH. Se sabe que los CTL pueden
eliminar otras infecciones virales (Ada, Immunol. Cell Biol., 72:
447-454, 1994) y que los CTL pueden lisar dianas
infectadas de manera temprana en la infección antes de que pueda
producirse y liberarse la progenie viral mediante lisis celular,
Ada et al., citado anteriormente. El enfoque se ha centrado
en la selección de antígenos así como en el diseño y la evaluación
de diferentes adyuvantes. Los antígenos usados en diferentes
estudios in vitro y in vivo han sido todos desde
proteínas en bruto hasta diversos péptidos sintéticos de varias de
las proteínas del VIH. Se ha realizado un gran número de estudios
en el bucle V3 de gp120. Se ha observado la inducción de respuestas
de células tanto B como T, sin embargo, se ha notificado en un
estudio in vitro que un péptido de la región conservada de
gp4l ha indicado una potenciación de la infección (Bell S.J., et
al., Clin. Exp. Immunol., 87 (1): 37-45, (enero
de 1992).
Las secuencias de VIH que se producen
naturalmente en candidatos de vacuna no pueden estimular una
respuesta inmunitaria estable debido a la capacidad inherente de
los virus de esconderse cambiando el aspecto de los epítopos
presentados sobre la superficie celular de células infectadas. Se
engaña al sistema inmunitario para que crea que una secuencia de
aminoácidos particular es relevante cuando de hecho los aminoácidos
importantes están escondidos.
Un estudio reciente de títulos de anticuerpos
frente a la proteína gag p24 ha mostrado que el avance lento hacia
el desarrollo del SIDA está asociado con altos títulos, mientras
que el avance rápido hacia el desarrollo del SIDA está asociado con
títulos bajos. Se muestra que personas con un título bajo de
anticuerpos frente a p24 desarrollan el SIDA de manera
significativamente más rápida que personas con títulos altos de
anticuerpos frente a p24 (Zwart G., et al. Virology, 201,
pág. 285-93, junio de 1994), lo que indica que gag
y p24 en particular pueden desempeñar un papel clave para controlar
el desarrollo del SIDA.
En el documento WO91/13360 se describen nuevos
péptidos p24 de VIH, en el que los péptidos se usan en un método de
distinción entre una muestra de suero positiva para VIH con
diagnóstico falso y verdadero.
Johnson R.P., et al., The Journal of
Immunology, Viol. 147, pág. 1512-1521, Nº 5, 1 de
septiembre de 1991 describe un análisis de la especificidad fina de
respuestas de CTL específicas de gag en tres individuos
seropositivos para VIH-1, se encontró que las
respuestas de CTL específicas de gag estaban mediadas por
linfocitos CD3+ CD8+ que están limitados a la clase I de HLA.
Goulder P. J. R. et al., Journal of Virology, Vol. 74, pág.
5679-5690, Nº 12, junio de 2000 ha estudiado la
respuesta de CTL de diferentes partes de p17 y p24 de VIH en
diferentes poblaciones. Los hallazgos muestran que existen ciertas
regiones inmunodominantes, sin embargo, diferencias minoritarias
en la composición de aminoácidos pueden provocar grandes
diferencias en la respuesta.
El documento
EP-A-O 356 007 da a conocer
determinantes antigénicos, en particular se refiere a secuencias
polipeptídicas sintéticas que están relacionadas con proteínas
presentes en el VIH-1 y que pueden usarse como base
para una posible vacuna frente al SIDA.
Rosenberg E.S. et al., Science, Vol. 278,
21 de noviembre de 1997, pág. 1447-1450 describe
que los linfocitos T cooperadores CD4+ específicos del virus son
críticos para el mantenimiento de la inmunidad eficaz en varias
infecciones virales crónicas, pero de manera característica no
pueden detectarse en la infección crónica por el virus de la
inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1). Las
respuestas proliferativas específicas de VIH-1
frente a p24 estaban inversamente relacionadas con la carga viral.
Concluyen que es probable que las células cooperadoras específicas
de VIH-1 sean importantes en intervenciones
inmunoterápicas y el desarrollo de vacunas.
Los documentos EP 0 230 222, EP 0 270 114, DE 37
11 016 y GB 2 188 639 todos a nombre de F.
Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft se
refieren a la expresión recombinante y a la purificación de una
proteína del gen HTLVIII Gag/Env o proteínas de fusión. Las
proteínas que consisten en secuencias nativas pueden purificarse
hasta la homogeneidad y usarse como base para pruebas de
diagnóstico para la detección de anticuerpos frente a virus
asociados con el SIDA. La proteína gag/env también puede formularse
para su uso como una vacuna para la protección frente al SIDA
mediante inmunización profiláctica.
Desde un punto de vista diagnóstico y
terapéutico, los principales problemas con el uso de p24 como parte
de un ensayo o terapia están asociados con el alto número de
epítopos en p24 lo que estimula producción de un gran número de
anticuerpos con poca especificidad, lo que mediante el refuerzo
repetido con secuencias mutadas potenciales puede crear
autoanticuerpos (Autoantibodies to the alfa/beta
T-cell receptors in HIV infection; dysregulation
and mimicry. Lake D.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
(23): 10849-53, 8 de noviembre de 1994). Además se
notifica que el título de anticuerpos frente a p24 no alcanza los
mismos niveles altos que para las proteínas de envuelta (gpl2O y
gp41). Normalmente los anticuerpos frente a p24 se desarrollan en
la fase muy temprana de la infección, pero el título se estabiliza
bastante rápidamente tras el periodo de infección inicial.
Posteriormente, el título de p24 se reduce gradualmente al tiempo
que ocurre lo contrario con gp160. Estos hallazgos también se han
observado en relación con recientes informes que mencionan que
variantes de gag de VIH-1 que se producen de manera
natural actúan como antagonistas de la actividad de células T
citotóxicas (Klenerman P., et al., Nature, 2: 369 (6479),
pág. 355, 2 de junio de 1994). Esto puede ser uno de los motivos
por los que se observa una rápida estabilización del título de p24
y por qué posteriormente comienza a reducirse. Basándose en los
datos de la técnica anterior citados previamente, se decidió
investigar la posibilidad de diseñar péptidos sintéticos novedosos
que puedan imitar los epítopos de p17 y p24 sin actuar como
antagonistas de la actividad de células T citotóxicas, con el fin
de satisfacer la necesidad de una vacuna profiláctica y
terapéutica eficaz.
La secuencia de p17 identificada como posible
molde para el desarrollo de péptidos que pueden provocar respuesta
de CTL y de anticuerpos está publicada por Korber B., et
al., Human Retroviruses and AIDS 1999 Eds. Theoretical Biology
and Biophysics Group, Los Alamos National Laboratory, Los Alamos,
NM. La secuencia de aminoácidos identificada está situada entre
los aminoácidos 33 y 53, véase la tabla 1:
\vskip1.000000\baselineskip
Los códigos de una letra así como los de tres
letras que definen los aminoácidos en la secuencias dada a lo largo
de esta memoria descriptiva son de acuerdo con las normas
internacionales y se facilitan en libros de texto, por ejemplo
Lehninger A.L., "Principles of Biochemistry", Worth Publishers
Inc., Nueva York, 1982. Los aminoácidos dados a la derecha de la
segunda columna representan la variación natural de la secuencia.
Un cambio en la carga global del epítopo mediante modificación de
aminoácidos puede implicar una mejora significativa de la
inmunogenicidad. Las modificaciones implican un posible cambio de la
conformación desde la estructura helicoidal original hasta una de
lámina, exponiendo el epítopo al sistema inmunitario de una manera
diferente y se espera que en un mayor grado. El documento GB
2336754 describió el uso de fragmentos de p17 para formar
diagnósticos y vacunas para la detección o el tratamiento del SIDA.
Para aumentar adicionalmente el número de epítopos de células T y
reducir la probabilidad del desarrollo de mutantes de escape dentro
de la proteína gag se basaron tres secuencias peptídicas
adicionales de p24 en las siguientes tres secuencias de los
residuos 133-158, 178-199 y
233-251, respectivamente publicadas en Human
Retroviruses and AIDS 1999; A Compilation and Analysis of Nucleic
Acid and Amino Acid Sequences. Eds. Theoretical Biology and
Biophysics Group, Los Alamos National Laboratory, Los Alamos,
véanse las tablas 2-4:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
y
Se han sintetizado varios péptidos modificados
con el fin de determinar secuencias únicas que son tanto
específicas como sensibles frente al VIH-1.
Los péptidos según la invención tienen su origen
en el área conservada de la proteína gag p17 de
VIH-1 que se describió anteriormente, que tiene las
propiedades de mantener la singularidad del epítopo de
VIH-1. Además, los nuevos péptidos según la
invención no presentan un efecto antagonista de linfocitos
citotóxicos (CTL) reconocido y tendrán al menos un posible epítopo
de CTL.
Los péptidos, según la invención, que cumplen
los criterios anteriores son péptidos que comprenden la secuencia
de aminoácidos de SEQ ID NO 3:
RLIYATRQLQRFAVNPGLLIT
en la
que
los extremos terminales de las secuencias pueden
ser grupos carboxilo o amino libres, amidas, acilos, acetilos o
sales de los mismos,
dos o más de los residuos de Cys pueden formar
parte de un puente disulfuro entre cadenas, un puente
-S-(CH_{2})_{p}-S- o uno
-(CH_{2})_{p}- en el que p = 1-8,
opcionalmente con uno o más heteroátomos tales como O, N o S
interpuestos y/o dichas secuencias peptídicas están inmovilizadas a
un soporte sólido.
Las nuevas secuencias peptídicas tienen el
potencial de servir como un buen antígeno en el que el antígeno
comprende al menos un péptido de secuencia SEQ ID NO 3. La
antigenicidad puede adaptarse ajustando la razón o concentración de
diferentes péptidos o el tamaño de los péptidos por ejemplo mediante
dimerización o polimerización y/o inmovilización a una fase sólida.
El antígeno comprende secuencias polipeptídicas, según la
invención, que están unidas o bien mediante un puente por ejemplo
un puente disulfuro entre los residuos de Cys de las cadenas o bien
puentes tales como alquileno C_{1}-C_{8}
posiblemente con uno o más heteroátomos tales como O, S o N
interpuestos o preferiblemente no están unidas. Las cadenas pueden
inmovilizarse a una fase sólida en forma monomérica, dimérica u
oligomérica. Pueden añadirse aminoácidos adicionales a los extremos
con el fin de lograr un "brazo" para facilitar la
inmovilización.
PEG es polietilenglicol
(HO(CH_{2}CH_{2}O)_{m}H y puede ser parte del
ligador -Z-, opcionalmente PEG está modificado por un ácido
dicarboxílico
(HO(CH_{2}CH_{2}O)_{m}CO(CH_{2})_{o}COOH)
o un grupo carboxílico terminal
(HO(CH_{2}CH_{2}O)_{m-1}
CH_{2}COOH) en el que m = 1-10 y o = 2-6, antes de la unión.
CH_{2}COOH) en el que m = 1-10 y o = 2-6, antes de la unión.
El ligador -Z- puede consistir o bien en PEG, en
PEG modificado o bien en una combinación de los mismos y/o uno o
más residuos de Gly combinados. Alternativamente, el ligador -Z-
puede consistir en un 1 puente de Gly [Gly]_{n} en el que
n = 1, 2 ó 3.
Todos aminoácidos en los péptidos de la
invención pueden ser de forma tanto D como L, aunque se prefiere
la forma L que se produce de manera natural.
Los extremos terminales C y N de las secuencias
peptídicas pueden desviarse de las secuencias naturales mediante
modificación del grupo NH_{2} y/o el grupo COOH terminales, por
ejemplo pueden estar acilados, acetilados, amidados o modificados
para proporcionar un sitio de unión para un soporte u otra
molécula.
El antígeno polipeptídico según la invención
está en forma o bien libre o bien unido a un soporte. El soporte o
fase sólida al que está opcionalmente unido el péptido puede
seleccionarse de una amplia variedad de soportes conocidos. Debe
seleccionarse con respecto al uso previsto del polipéptido
inmovilizado tal como un antígeno de diagnóstico o un componente de
inmunización en una vacuna.
Ejemplos de soportes que pueden usarse por
ejemplo para fines diagnósticos son perlas magnéticas o látex de
copolímeros tales como estireno-divinilbenceno,
estireno-divinilbenceno hidroxilado, poliestireno,
poliestireno carboxilado, perlas de negro de carbón, vidrio no
activado o activado con poliestireno o con poli(cloruro de
vinilo), vidrio magnético poroso activado con epoxi, partículas de
gelatina o de polisacárido u otras partículas de proteínas, glóbulos
rojos, anticuerpos mono o policlonales o fragmentos fab de tales
anticuerpos.
Según una realización adicional de la presente
invención, los antígenos pueden formar parte de una vacuna
posiblemente combinada con soportes, adyuvantes o combinada con
otros elementos inmunoestimulantes tales como virus de la viruela
del canario que lleva el gen env. Ejemplos de soportes y/o
adyuvantes para fines de vacuna son otras proteínas tales como
albúmina sérica humana o bovina y hemocianina de lapa californiana
y ácidos grasos. Los materiales inmunoestimulantes pueden dividirse
en tres grupos; adyuvantes, soportes para antígenos y vehículos.
Ejemplos de adyuvantes incluyen hidróxido de aluminio, sales de
aluminio, saponina, di y tripéptidos de muramilo, Monofosforil
lípido A, ácido palmítico, B. pertussis y diversas citocinas
incluyendo la citocina IL-12 e IL-1
de Th1. Pueden usarse varias toxinas proteicas para transportar
proteínas pasajeras a través de membranas celulares al interior del
citosol, que son útiles para desarrollar vacunas de CTL. Los
soportes incluyen toxoides bacterianos tales como toxinas de
cólera y de tétanos inactivadas, toxinas bacterianas genéticamente
destoxificadas tales como enterotoxina termolábil de E.
coli, ácidos grasos, vectores vivos tales como quimeras de la
polio y proteínas híbridas que forman materiales particulados por
ejemplo partículas TY híbridas de retrotransposón de levadura y
partículas HBcAg. Los vehículos que son componentes que se producen
con frecuencia en las vacunas modernas consisten en emulsión de
aceite mineral, adyuvante completo e incompleto de Freund,
emulsiones de aceite vegetal, tensioactivos de copolímeros de
bloque no iónicos, escualeno o escualano, lipopéptidos, liposomas
y microesferas biodegradables. Dos adyuvantes recientes que
presentan un potencial significativo para el desarrollo de nuevas
vacunas incluyen una microemulsión de aceite en agua (MF59) y
micropartículas poliméricas. Puede usarse cualquier sustancia que
pueda potenciar la inmunogenicidad del antígeno y
se proporcionan varias alternativas adicionales de soportes o adyuvantes en la farmacopea estadounidense o europea.
se proporcionan varias alternativas adicionales de soportes o adyuvantes en la farmacopea estadounidense o europea.
Una formulación adecuada del antígeno para usos
inmunoestimulantes también puede comprender interferones tales como
INF-\gamma, quimiocinas antivirales o factores de
crecimiento hematopoyéticos tales como factor de crecimiento de
granulocitos - macrófagos (estimulante de colonias).
Otro enfoque con el fin de potenciar la
estimulación y la absorción por ejemplo en el intestino es
administrar los péptidos de la invención, con pequeños péptidos
tales como di, tri o tetrapéptidos. Estos péptidos pueden
administrarse además de o en combinación con los péptidos de la
invención. Preferiblemente, los péptidos se administran junto con el
tripéptido YGG, que consiste en aminoácidos en las formas D o L,
preferiblemente en la forma D. Enfoques recientes de administración
no parenteral de vacunas, por ejemplo a través de la mucosa,
incluyen; tecnología de fusión génica para crear derivados no
tóxicos de adyuvantes mucosos, antígenos genéticamente inactivados
con una deleción en un gen esencial, coexpresión de un antígeno y
una citocina específica que es importante en la modulación y el
control de una respuesta inmunitaria mucosa, y el propio material
genético que permitirá la captación de ADN o ARN y su expresión
endógena en las células huésped.
Un enfoque para desarrollar respuestas duraderas
en las que se requiere inmunidad mediada por células es vacunar
con ADN de plásmido que codifica para uno o más antígeno(s)
específico(s).
Con el fin de proteger frente a la infección por
VIH, las vacunas deben inducir respuestas inmunitarias tanto
mucosa como sistémica y pueden administrarse mediante cualquier vía
conveniente, por vía parenteral o por vía no parenteral, tal como
por vía subcutánea, por vía intracutánea, por vía intravenosa, por
vía intramuscular, por vía oral, por vía mucosa o por vía
intranasal, por ejemplo.
En una realización preferida, la composición de
vacuna contiene el antígeno;
RLIYATRQLQRFAVNPGLLIT-NH_{2} (SEQ ID NO: 3)
Las secuencias contribuyen con epítopos de CTL y
pueden activar el sistema inmunitario celular. Los cambios de
aminoácidos realizados dentro del marco de los epítopos de CTL se
diseñan para lograr una unión potenciada. Se han realizado otros
cambios de aminoácidos con el fin de facilitar la síntesis del
péptido y/o aumentar la solubilidad del péptido.
Un método para detectar anticuerpos, inducidos
por VIH-1 o proteínas o péptidos específicos de
VIH-1, en una muestra de fluido corporal usando los
presentes antígenos es una realización adicional de la invención.
La presente invención también abarca un kit de inmunoensayo
diseñado para esta detección y anticuerpos que pueden reaccionar
selectivamente con dichos antígenos.
\vskip1.000000\baselineskip
Los péptidos de la invención pueden producirse
mediante cualquier método conocido de producción de una secuencia
de aminoácidos lineal, tal como técnicas de ADN recombinante. Se
introduce una secuencia de ácido nucleico que codifica para un
péptido de la invención o un multímero de dichos péptidos en un
vector de expresión. Vectores de expresión adecuados son por
ejemplo plásmidos, cósmidos, virus y YAC (cromosoma artificial de
levadura) que comprenden regiones de control necesarias para la
replicación y la expresión. El vector de expresión puede
estimularse para su expresión en una célula huésped. Células
huésped adecuadas son por ejemplo bacterias, células de levaduras
y células de mamíferos. Tales técnicas se conocen en la técnica y
se describen por ejemplo por Sambrook et al., Molecular
Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press,
Cold Spring Harbor, 1989. Otras técnicas bien conocidas son la
degradación o la síntesis mediante acoplamiento de un residuo de
aminoácido al siguiente en una fase líquida o preferiblemente en una
fase sólida (resina) por ejemplo mediante la síntesis denominada de
Merrifield. Véase por ejemplo Barany y Merrifield en The Peptids,
Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 2, E. Gross y Meinhofer, Ed.
(Acad. Press, N. Y., 1980), Kneib-Coronier y Mullen
Int. J. Peptid Protein Res., 30, pág. 705-739
(1987) y Fields y Noble Int. J. Peptid Protein Res., 35, pág.
161-214 (1990).
En caso de que se desee un péptido ligado o
cíclico, se somete la secuencia de aminoácidos a una etapa de
oxidación química con el fin de ciclar o unir los dos residuos de
cisteína entre dos secuencias peptídicas, cuando se sintetizan las
secuencias de aminoácidos lineales apropiadas, véase Akaji et
al., Tetrahedron Letter, 33, 8, pág. 1073-1076,
1992.
\vskip1.000000\baselineskip
Todos los derivados peptídicos preparados en los
ejemplos facilitados a continuación se sintetizaron en un
sintetizador de péptidos Milligen 9050 usando un programa
convencional. La resina usada fue Tenta Gel P RAM con una carga
teórica de 0,20 meq/g (RAPP POLYMERE GmbH, Tobingen). El producto
final de la síntesis se secó a vacío durante la noche. Después se
escindió el péptido de la resina mediante tratamiento con ácido
trifluoroacético al 90% en presencia de etanoditiol (5%) y agua
(5%) como eliminadores (1,5 horas a TA). Después se filtró la
resina y se lavó sobre el filtro con ácido trifluoroacético (100%)
adicional (2 x 20 ml). Se evaporaron a vacío los filtrados
combinados (baño de agua a TA) y se trituró el residuo con etil
éter (200 ml) y se separó el producto precipitado por filtración.
Se disolvió rápidamente el sólido sobre el filtro con ácido acético
glacial (100 ml) y se añadió a 1,5 l de ácido acético al 20% en
metanol y se trató con una disolución 0,1 M de yodo en metanol
hasta que permaneció un color marrón claro. Después se añadió
Dowex 1 x 8 de intercambio fónico en forma de acetato (15 g)
(Bio-Rad, Richmond, CA) y se filtró la mezcla. Se
evaporó el filtrado y se liofilizó el residuo en ácido acético.
Después se purificó el producto mediante cromatografía de líquidos
en fase inversa sobre una columna cargada con Kromasil® 100 - 5 C8
(EKA Nobel, Surte, Suecia) en un sistema adecuado que contenía
acetonitrilo en una disolución acuosa de ácido trifluoroacético al
0,1%. Se analizaron las muestras recogidas de la columna mediante
cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) analítica
(Beckman System Gold, EE.UU.) equipada con una columna Kromasil®
100 - 5 C8 (EKA Nobel, Surte, Suecia). Se combinaron las fracciones
que contenían sustancia pura, se evaporó el disolvente y se
liofilizó el producto en ácido acético. El análisis de HPLC final
se realizó sobre el producto final, y se confirmó la estructura del
péptido mediante análisis de aminoácidos y espectrometría de masas
(LDI-EM).
Todos los aminoácidos usados durante la síntesis
fueron aminoácidos L y se protegieron con un grupo
fluorenilmetoxicarbonilo en la función
\alpha-amino. Las cadenas laterales se protegieron
tal como sigue:
Cys (Trt), Gln (Trt), Glu (OtBu), Thr (tBu).
Las abreviaturas dentro de los corchetes
son:
Trt = trifenilmetilo
t-Bu =
terc-butilo
OtBu = éster terc-butílico
Bachem AG, Suiza, suministró los derivados de
aminoácidos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 1 - Ejemplo de
Referencia
Preparación de
HLIYLTRQLQRFALNPGLLIT-NH_{2} (SEQ ID NO: 2). Se
sintetiza el péptido en forma de amida, a partir de los materiales
de partida correspondientes según la descripción general de la
síntesis. Se determina la pureza mediante análisis de HPLC y se
confirma la estructura mediante análisis de aminoácidos y
espectrometría de masas (EM-LDI).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación de
RLIYATRQLQRFAVNPGLLIT-NH_{2} (SEQ ID NO: 3). Se
sintetizó el péptido en forma de amida, a partir de los materiales
de partida correspondientes según la descripción general de la
síntesis. Se determinó la pureza mediante análisis de HPLC y se
confirmó la estructura mediante análisis de aminoácidos y
espectrometría de masas (EM-LDI).
Pureza (HPLC): más del 97% (impurezas
individuales inferiores al 1%)
Peso molecular (base libre): 2442,9.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3 - Ejemplo de
Referencia
Preparación de
YILQNIEGQLVGGGYAISPRTLVAYLRG-NH_{2} (SEQ ID NO:
5). Se sintetiza el péptido en forma de amida, a partir de los
materiales de partida correspondientes según la descripción general
de la síntesis. Se determina la pureza mediante análisis de HPLC y
se confirma la estructura mediante análisis de aminoácidos y
espectrometría de masas (EM-LDI).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 4 - Ejemplo de
Referencia
Preparación de FILQNIEGQLVGGGYAISPRTLVAGGGG (SEQ
ID NO: 6). Se sintetizó el péptido a partir de los materiales de
partida correspondientes según la descripción general de la
síntesis. Se determinó la pureza mediante análisis de HPLC y se
confirmó la estructura mediante análisis de aminoácidos y
espectrometría de masas (EM-LDI).
Pureza (HPLC): más del 94%
Peso molecular (base libre): 2745
Fórmula molecular:
C_{123}H_{198}O_{37}N_{34}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 5 - Ejemplo de
Referencia
Preparación de una secuencia
PIVQNIEGQMVHQAISPRTLNAWV K V (SEQ ID NO: 7) de p24 nativa. Se
sintetizó el péptido a partir de los materiales de partida
correspondientes según la descripción general de la síntesis. Se
determinó la pureza mediante análisis de HPLC y se confirmó la
estructura mediante análisis de aminoácidos y espectrometría de
masas (EM-LDI).
Pureza (HPLC): aproximadamente el 85%
Peso molecular (base libre): 2929
Fórmula molecular:
C_{131}H_{214}O_{36}N_{38}S.
\newpage
Ejemplo 6 - Ejemplo de
Referencia
Preparación de
FILQNIQGQLVGGGYAISPRTLVAG-NH_{2} (SEQ ID NO: 8).
Se sintetizó el péptido en forma de amida, a partir de los
materiales de partida correspondientes según la descripción general
de la síntesis. Se determinó la pureza mediante análisis de HPLC y
se confirmó la estructura mediante análisis de aminoácidos y
espectrometría de masas (EM-LDI).
Pureza (HPLC): más del 97% (impurezas
individuales inferior al 1%)
Peso molecular (base libre): 2572,0.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 7 - Ejemplo de
Referencia
Preparación de una secuencia
GATPQDLNTMLNTVGGHQAA-NH_{2} (SEQ ID NO: 10) de
p24 nativa. Se sintetizó el péptido en forma de amida, a partir de
los materiales de partida correspondientes según la descripción 5
general de la síntesis. Se determinó la pureza mediante análisis de
HPLC y se confirmó la estructura mediante análisis de aminoácidos y
espectrometría de masas (EM-LDI).
Pureza (HPLC): 98%
Peso molecular (base libre): 1995,2
Fórmula molecular:
C_{82}H_{135}O_{29}N_{27}S.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 8 - Ejemplo de
Referencia
Preparación de
YAIPQALNTLLNTVGGHQAA-NH_{2} (SEQ ID NO: 11). Se
sintetizó el péptido en forma de amida, a partir de los materiales
de partida correspondientes según la descripción general de la
síntesis. Se determinó la pureza mediante análisis de HPLC y se
confirmó la estructura mediante análisis de aminoácidos y
espectrometría de masas (EM-LDI).
Pureza (HPLC): 98%
Peso molecular (base libre): 2051,4
Fórmula molecular:
C_{91}H_{147}O_{27}N_{27}.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 9 - Ejemplo de
Referencia
Preparación de
FAIPQALNTLLNTVGGGGHQAACG-NH_{2} (SEQ ID NO: 12).
Se sintetiza el péptido en forma de amida, a partir de los
materiales de partida correspondientes según la descripción general
de la síntesis. Se determina la pureza mediante análisis de HPLC y
se confirman las estructuras mediante análisis de aminoácidos y
espectrometría de masas (EM-LDI).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 10 - Ejemplo de
Referencia
Preparación de una secuencia
GSDIAGTTSTLQEQIGWMT-NH_{2} (SEQ ID NO: 13) de p24
nativa. Se sintetizó el péptido en forma de amida, a partir de los
materiales de partida correspondientes según la descripción general
de la síntesis. Se determinó la pureza mediante análisis de HPLC y
se confirmó la estructura mediante análisis de aminoácidos y
espectrometría de masas (EM-LDI).
Pureza (HPLC): 90%
Peso molecular (base libre): 1995,2
Fórmula molecular:
C_{84}H_{135}O_{31}N_{23}S.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 11 - Ejemplo de
Referencia
Preparación de
WSALAGTTSLLQGQLGWIT-NH_{2} (SEQ ID NO: 14). Se
sintetizó el péptido en forma de amida, a partir de los materiales
de partida correspondientes según la descripción general de la
síntesis. Se determinó la pureza mediante análisis de HPLC y se
confirmó la estructura mediante análisis de aminoácidos y
espectrometría de masas (EM-LDI).
Pureza (HPLC): más del 97% (impurezas
individuales inferiores al 1%)
Peso molecular (base libre): 2007,3.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 12 - Ejemplo de
Referencia
Preparación de una secuencia
HIVWASRELERFAVNPGLLEVT-NH_{2} (SEQ ID NO: 16) de
p17 nativa. Se sintetizó el péptido en forma de amida, a partir de
los materiales de partida correspondientes según la descripción
general de la síntesis. Se determinó la pureza mediante análisis de
HPLC y se confirmó la estructura mediante análisis de aminoácidos
y espectrometría de masas (EM-LDI).
Pureza (HPLC): más del 95%
Pureza (HPLC): más del 95%
Peso molecular (base libre): 2436,8.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 13 - Ejemplo de
Referencia
Preparación de una secuencia
PIVQNIQGQMVHQAISPRTLNAW-NH_{2} (SEQ ID NO: 17) de
p24 nativa. Se sintetizó el péptido en forma de amida, a partir de
los materiales de partida correspondientes según la descripción
general de la síntesis. Se determinó la pureza mediante análisis de
HPLC y se confirmó la estructura mediante análisis de aminoácidos
y espectrometría de masas (EM-LDI).
Pureza (HPLC): aproximadamente el 93%
Peso molecular (base libre): 2601,0.
\vskip1.000000\baselineskip
Se unen las secuencias peptídicas mediante una
etapa de oxidación para formar un dipéptido en el que los residuos
de cisteína forman un puente disulfuro. El puente puede formarse,
por ejemplo, mediante oxidación con I_{2} tal como sigue;
Se disuelven cantidades iguales de los péptidos
en ácido acético/metanol (1:4) y se añade I_{2} 0,1 M en metanol
dando una mezcla del dímero.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prepara una vacuna que comprende los péptidos
de las SEQ ID NO: 3, 6, 11 y 14. Se disuelven los péptidos
liofilizados en agua estéril a una concentración final de 4 mg/ml.
La concentración de sal final de la disolución es fisiológicamente
compatible. También se prepara una preparación de un factor
estimulante de colonias de granulocitos -
macrófagos (GM-CSF), según las indicaciones de los fabricantes para su uso, hasta una concentración final de 0,3 mg/ml. Se administran las dos disoluciones por vía intracutánea. Una dosis de inyección típica es de 100 \mul.
macrófagos (GM-CSF), según las indicaciones de los fabricantes para su uso, hasta una concentración final de 0,3 mg/ml. Se administran las dos disoluciones por vía intracutánea. Una dosis de inyección típica es de 100 \mul.
\vskip1.000000\baselineskip
Se mezcla una suspensión o disolución de
antígeno con partes iguales de adyuvante de Freund de Behring,
completo o incompleto, y después se emulsiona finamente tirando y
presionando vigorosamente una jeringuilla de inyección, o con un
homogeneizador. La emulsión debe permanecer estable durante al
menos 30 minutos. Las emulsiones de
antígeno-adyuvante se inyectan mejor por vía
subcutánea como un medicamento de absorción prolongada.
\vskip1.000000\baselineskip
Los reactivos de partículas magnéticas han de
prepararse según el protocolo recomendado por los fabricantes.
Dynal AS, es el fabricante de las Dynabeads, que van a emplearse.
Las partículas magnéticas recubiertas con ligando se denominan
reactivo 1. Se acopla covalentemente un péptido según la invención
a la superficie activada previamente de las partículas magnéticas.
También es posible absorber físicamente el péptido a la superficie
de las partículas magnéticas. La concentración de partículas en el
reactivo 1 está dentro del intervalo de desde 1 mg/ml hasta 15
mg/ml. El tamaño de partícula varía entre 0,2 \mum y 15 \mum. La
concentración de los péptidos está dentro del intervalo de desde
0,01 mg/mg de partícula hasta 1 mg/mg de partícula. Se prepara el
reactivo de anticuerpo anti-Ig humana conjugado con
fosfatasa alcalina (FA) según el protocolo recomendado de Dako AS.
Este protocolo es un procedimiento convencional en este campo. Este
reactivo se denomina reactivo 2. La disolución de sustrato
monofosfato de fenolftaleína debe prepararse según el protocolo
recomendado de Fluka AG. Este protocolo es un procedimiento
convencional en este campo. La disolución de sustrato se denomina
reactivo 3.
El tampón de lavado e incubación que se usa es
tampón Tris-base 0,05 M convencional con los
siguientes compuestos adicionales; Tween 20 (del 0,01% al 0,1%),
glicerol (del 0,1% al 10%) y cloruro de sodio (del 0,2% al 0,1%).
El procedimiento del ensayo comprende una etapa de incubación en la
que se mezcla 1 gota del reactivo 1 con 2 gotas de tampón de lavado
en cada pocillo. Tras el mezclado, se añaden 30 \mul de muestra y
se incuba la disolución durante 5 minutos. Las partículas
magnéticas pueden atraparse mediante un imán y eliminarse el
líquido, antes de separar el imán. Entonces se lavan los pocillos
dos veces en 4 gotas de disolución de lavado, antes de la
incubación con el reactivo 2. Se añade 1 gota de reactivo 2 con 2
gotas de tampón de lavado y se incuba la disolución durante 5
minutos. Las partículas magnéticas pueden atraparse mediante un
imán y eliminarse el líquido, antes de separar el imán. Entonces se
repite la etapa de lavado antes de la incubación con el reactivo 3.
Se añaden 2 gotas de reactivo 3 a cada pocillo y se incuba la
disolución durante 3 minutos. Los resultados pueden leerse frente a
un fondo blanco. Los resultados positivos son rojos (3+ = rojo
fuerte) mientras que los resultados negativos son claramente
disoluciones de color marrón/amarillo claro tal como se obtienen en
el control negativo.
Podría usarse el kit de inmunoensayo en la
detección de anticuerpos, inducidos o bien por el virus VIH o bien
por péptidos o proteínas específicos del VIH, por ejemplo, los
péptidos de la presente invención.
Puede usarse al menos uno de los polipéptidos de
la invención, seleccionado del grupo de secuencias, SEQ ID NO: 1,
SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 15 para formar antígenos y
ser el principio activo de una vacuna profiláctica o terapéutica
destinada a proporcionar protección frente al virus de la
inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1). La vacuna
puede incluir compuestos que tienen efectos beneficios en la
protección o estimulación del sistema inmunitario del huésped (ser
humano o animal vertebrado) por ejemplo, interleucinas,
interferones, factores de crecimiento de granulocitos y macrófagos,
factores de crecimiento hematopoyéticos o similares.
Preferiblemente, la composición de vacuna contiene además un
adyuvante o vehículo, más preferiblemente el adyuvante o vehículo
es Monofosforil lípido A (MPL®) posiblemente con alumbre, adyuvante
de Freund (completo o incompleto) o hidróxido de aluminio. La
cantidad óptima de adyuvante/vehículo dependerá del/de los
tipo(s) que se elija(n).
Los péptidos de la invención podrían modificarse
mediante la adición en el extremo C-terminal de un
único ácido graso tal como una única cadena de palmitoílo para
formar una vacuna de lipopéptido. Adicionalmente, los lipopéptidos
pueden introducirse en membranas de liposomas mediante el método
de congelación-descongelación dando como resultado
liposomas que portan los ligandos peptídicos en su superficie.
La formulación de vacuna o péptido puede
liofilizarse antes del almacenamiento. Los péptidos liofilizados
pueden disolverse en agua estéril hasta una concentración final de
desde 0,1 hasta 100 mg/ml. La vacuna puede almacenarse
preferiblemente a baja temperatura, en ampollas que contienen una o
más unidades de dosificación, listas para usar. Una unidad de
dosificación típica del péptido según la invención está dentro del
intervalo de concentración: 0,05 \mug -
1 mg por kg de peso corporal, preferiblemente dentro de 0,15 \mug - 0,15 mg por kg de peso corporal. Los expertos en la técnica apreciarán que una dosis adecuada dependerá del peso corporal del paciente, del tipo de enfermedad, de la gravedad del estado, de la vía de administración y de otros factores diversos. Cuando se usa como una vacuna terapéutica, normalmente la vacuna inicialmente se administrará aproximadamente 12 veces, a través de inyecciones. Podrían seguir administraciones de refuerzo adicionales y en casos extremos podría administrarse a lo largo de toda la vida del paciente. En la preparación de una disolución de inyección, los péptidos se disuelven en agua estéril hasta una concentración final de 1 mg/ml por péptido. Normalmente, un volumen de inyección es de 100 \mul a 200 \mul (2 x 100 \mul). El péptido se coadministra preferiblemente con un factor de crecimiento de granulocitos - macrófagos y/o adyuvante adecuado, por ejemplo, Leucomax® "Shering Plough" preparado dentro de un intervalo de concentración de desde 0,1 hasta 1 mg/ml, o según las recomendaciones del fabricante. Se prefiere particularmente una terapia de combinación en la que los presentes péptidos se administran junto con los péptidos descritos en la solicitud de patente internacional publicada número PCT/N000/00075 presentada el 2 de marzo de 2000 y/o la solicitud de patente noruega en tramitación junto con la presente número 2000 4412. Los péptidos pueden administrarse secuencial o simultáneamente. La administración adecuada puede ser por vía intracutánea, subcutánea, intravenosa, oral, intramuscular, intranasal, mucosa o cualquier otra vía adecuada. Pueden requerirse administraciones de refuerzo con el fin de mantener la protección. Los expertos en la técnica entenderán que las composiciones de vacuna según la invención son útiles no sólo en la prevención de infecciones, sino también en el tratamiento de la infección.
1 mg por kg de peso corporal, preferiblemente dentro de 0,15 \mug - 0,15 mg por kg de peso corporal. Los expertos en la técnica apreciarán que una dosis adecuada dependerá del peso corporal del paciente, del tipo de enfermedad, de la gravedad del estado, de la vía de administración y de otros factores diversos. Cuando se usa como una vacuna terapéutica, normalmente la vacuna inicialmente se administrará aproximadamente 12 veces, a través de inyecciones. Podrían seguir administraciones de refuerzo adicionales y en casos extremos podría administrarse a lo largo de toda la vida del paciente. En la preparación de una disolución de inyección, los péptidos se disuelven en agua estéril hasta una concentración final de 1 mg/ml por péptido. Normalmente, un volumen de inyección es de 100 \mul a 200 \mul (2 x 100 \mul). El péptido se coadministra preferiblemente con un factor de crecimiento de granulocitos - macrófagos y/o adyuvante adecuado, por ejemplo, Leucomax® "Shering Plough" preparado dentro de un intervalo de concentración de desde 0,1 hasta 1 mg/ml, o según las recomendaciones del fabricante. Se prefiere particularmente una terapia de combinación en la que los presentes péptidos se administran junto con los péptidos descritos en la solicitud de patente internacional publicada número PCT/N000/00075 presentada el 2 de marzo de 2000 y/o la solicitud de patente noruega en tramitación junto con la presente número 2000 4412. Los péptidos pueden administrarse secuencial o simultáneamente. La administración adecuada puede ser por vía intracutánea, subcutánea, intravenosa, oral, intramuscular, intranasal, mucosa o cualquier otra vía adecuada. Pueden requerirse administraciones de refuerzo con el fin de mantener la protección. Los expertos en la técnica entenderán que las composiciones de vacuna según la invención son útiles no sólo en la prevención de infecciones, sino también en el tratamiento de la infección.
No se observan efectos tóxicos de los péptidos
según la invención cuando se inyectan en ratones a una dosificación
de 100 \mug por kg de peso corporal.
Los ejemplos anteriores sólo pretenden ilustrar
la invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta lista de referencias citadas por el
solicitante se dirige únicamente a ayudar al lector y no forma
parte del documento de patente europea. Incluso si se ha procurado
el mayor cuidado en su concepción, no se pueden excluir errores u
omisiones y el OEB declina toda responsabilidad a este
respecto.
\vskip1.000000\baselineskip
- \bullet WO 9113360 A (0005)
- \bullet GB 2188639 A (0009)
- \bullet EP 0356007 A (0007)
- \bullet GB 2336754 A (0012)
- \bullet EP 0230222 A (0009)
- \bullet WO 0000075 W (0058)
- \bullet EP 0270114 A (0009)
- \bullet WO 20004412 A (0058)
\bullet DE 3711016 (0009)
\vskip1.000000\baselineskip
\bulletADA. Immunol. Cell
Biol., 1994, vol. 72, 447-454 [0002]
\bulletBELL S. J. et al.
Clin. Exp. Immunol., January 1992, vol. 87 (1),
37-45 [0002]
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Virology, June 1994, vol. 201, 285-93
[0004]
\bulletJOHNSON R.P. et al.
The Journal of Immunology, 01 September 1991, vol. 147
(5), 1512-1521 [0006]
\bulletGOULDER P. J. R. Journal of
Virology, June 2000, vol. 74 (12),
5679-5690 [0006]
\bulletROSENBERG E. S. et al.
Science, 21 November 1997, vol. 278,
1447-1450 [0008]
\bulletLAKE D. F. et al.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 08 November 1994, vol. 23,
10849-53 [0010]
\bulletKLENERMAN P. et al.
Nature, 02 June 1994, vol. 369 (6479), 355 [0010]
\bulletLEHNINGER A. L. Principles of
Biochemistry. Worth Publishers Inc, 1982 [0012]
\bulletSAMBROOK et al.
Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor
Laboratory Press, 1989 [0031]
\bullet Peptides, Analysis, Synthesis,
Biology. Acad. Press, 1980, vol. 2 [0031]
\bulletKNEIB-CORONIER; MULLEN. Int. J.
Peptide Protein Res., 1987, vol. 30,
705-739 [0031]
\bulletFIELDS; NOBLE. Int.
J. Peptide Protein Res., 1990, vol. 35,
161-214 [0031]
\bulletAKAJI et al.
Tetrahedron Letter, 1992, vol. 33 (8),
1073-1076 [0032]
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Bionor Immuno AS
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: Strømdalsjordet 4, Apdo. de correos 1893 Gulset
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: 3703 Skien
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Noruega
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (CP): N-3705
\vskip0.500000\baselineskip
- (G)
- TELÉFONO: +47 35 50 57 50
\vskip0.500000\baselineskip
- (H)
- FAX: + 47 35 50 57 01
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- INVENTOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Birger Sorensen
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: Meierlia 3
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: 3727 Skien
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- PAÍS: Noruega
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Composiciones de vacuna, antígenos, péptidos de VIH, inmunoensayo y un método de detección de anticuerpos inducidos por VIH
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 17
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: Disquete
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: compatible con IBM
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: Windows 2000
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: Word 7.0
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL:
\vskip0.800000\baselineskip
- NÚMERO DE SOLICITUD:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 1
\vskip0.800000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 1 es His, Lys o Arg
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 2
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 2 es Ile, Leu, Val o Met
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 3
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 3 es Ile o Val
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 4
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 4 es Trp o Tyr
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 5
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 5 es Ala o Leu
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 6
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 6 es Ser, Thr, Arg o Asn
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 7
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 7 es Arg o Ser
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 11
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 11 es Arg, Lys, Gly, o Asn
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 12
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 12 es Phe, Ser o Tyr
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 13
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 13 es Ala, Thr o Ser
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 14
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 14 es Val, Leu, Ile o Cys
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 15
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 15 es Asn, Ser o Asp
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 16
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 16 es Pro, Arg o Ser
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 17
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 17 es Gly, Ser, Ala, Asp o Asn
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 18
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 18 es Leu o Phe
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 19
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 19 es Leu o Met
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 20
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 20 es Glu, Gly, Asp o Ile
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 21
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 21 es Thr, Ser o Ala
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 25 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 1
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 1 es Pro, Tyr o Phe
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 2
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 2 es Ile, Val o Leu
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 3
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 3 es Ile, Leu, Val, Ala o Met
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 4
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 4 es Gln, Ser, Thr o Val
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 5
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 5 es Asn, Asp o Thr
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 6
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 6 es Ile, Ala, Leu o Met
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 7
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 7 es Gln, Glu, Lys o Gly
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 9
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 9 es Gin o Ile
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 13
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 13 se elimina
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 14
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 14 es Ala, Ser, Asn, Val o Pro
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 15
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 15 es Ile, Leu, Met o Val
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 16
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 16 es Ser o Thr
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 17
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 17 es Pro o Ala
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 18
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 18 es Arg o Lys
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 19
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 19 es Thr o Ser
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 20
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 20 es Leu o Ser
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 21
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 21 es Asn, Phe o Val
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 23
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 23 es Trp, Tyr, Gly o ninguno
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 24
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 24 es Val, Leu, Gly o ninguno
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 25
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 25 es Lys, Arg, Gly o ninguno
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 26
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 26 es Val, Ala, Cys, Gly o ninguno
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 11..12
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''insertado opcionalmente un ligador -Z- que es PEG, PEG modificado y/o [Gly]n en el que n = 1, 2 ó 3
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 28 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 28 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No, secuencia de p24 nativa
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 8
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 25 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 8
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 9
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 1
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 1 es Tyr, Trp, Phe o Gly
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 3
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 3 es Thr, Ala, Val, Ile o Leu
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 4
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 4 es Pro o Ser
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 5
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 5 es Gln, His, Gly, Thr, Ser o Tyr
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 7
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 7 es Leu, Ile o Val
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 8 es Asn o Tyr
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 9
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 9 es Thr, Met, Leu o Ala
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 12
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 12 es Ser, Thr o Asn
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 13
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 13 es Thr, Ile, Val o Ala
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 14
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 14 es Val o Ile
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 15
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 15 es Gly o ninguno
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 16
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 16 es Gly o ninguno
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 19
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 19 es Ala o Gly
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 21
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 21 es Met, Leu, Cys o ninguno
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 22
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 22 es Gln, Glu, His, Gly o ninguno
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 14..15
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''insertado opcionalmente ligador -Z- que es PEG, PEG modificado y/o [Gly]n en el que n = 1, 2 ó 3
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 21
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Cys en la posición 21 puede formar parte de un puente disulfuro
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 9
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 10
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No, secuencia de p24 nativa
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 10
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 11
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 11
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 12
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 23
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Cys en la posición 23 puede formar parte de un puente disulfuro
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 12
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 13
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No, secuencia de p24 nativa
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 13
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 14
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 14
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 15
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 1
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 1 es Trp, Tyr
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 2
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 2 es Ser o Ala
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 7
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 7 es Thr, Ala o Ser
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 8 es Ser o Thr
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 9
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 9 es Ser o Thr
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 11
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 11 es Leu, Pro, Val o Gin
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 12
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 12 es Gln, Ala o His
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 13
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 13 es Gly o Glu
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 14
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 14 es Gln o His
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 15
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 15 es Ile, Leu, Val o Met
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 16
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 16 es Gly, Ala, Gln, Thr, Asn, Arg, His o Ile
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 17
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 17 es Trp o Tyr
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 18
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 18 es Thr, Ile, Leu o Met
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 19
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 19 es Thr o Ser
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 20
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 20 es Cys, Gly o ninguno
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 21
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Xaa en la posición 21 es Gly o ninguno
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- UBICACIÓN: 20
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- OTRA INFORMACIÓN: /nota= ''Cys en la posición 20 puede formar parte de un puente disulfuro
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 15
\vskip1.000000\baselineskip
(2)INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 16
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No, secuencia de p17 nativa
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 17
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: No, secuencia de p24 nativa
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 17
Claims (13)
1. Péptido derivado de la proteína gap p17 de
VIH-1 en el que dicho péptido comprende la
secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 en el que:
los extremos terminales de la secuencia pueden
ser grupos carboxilo o amino libres, amidas, acilos, acetilos o
sales de los mismos, dos o más de los residuos de Cys pueden formar
parte de un puente disulfuro entre cadenas, un puente
-S-(CH_{2})_{p}-S- o
-(CH_{2})_{p}- en el que p = 1-8
opcionalmente con uno o más heteroátomos tales como 0, N y S
interpuestos y/o dicha secuencia peptídica está inmovilizada a un
soporte sólido.
2. Antígeno, que comprende el péptido según la
reivindicación 1.
3. Composición de vacuna que comprende un
antígeno según la reivindicación 2 con un diluyente
farmacéuticamente aceptable y opcionalmente un adyuvante, soporte
y/o vehículo y opcionalmente compuesto(s)
inmunoestimulante(s) adicional(es).
4. Composición de vacuna según la reivindicación
3, que comprende el péptido de SEQ ID NO: 3.
5. Composición de vacuna según la reivindicación
3 ó 4, en la que los péptidos se disuelven en una disolución
acuosa estéril y el compuesto inmunoestimulante opcional es un
factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos.
6. Composición de vacuna según una cualquiera
de las reivindicaciones 3 a 5, en la que la composición comprende
un adyuvante seleccionado del grupo Monofosforil lípido A (MPL®),
adyuvante completo o incompleto de Freund o hidróxido de
aluminio.
7. Composición de vacuna, en la que un antígeno
según la reivindicación 2 se formula como un lipopéptido y/o una
formulación de liposoma.
8. Anticuerpo que puede reaccionar
selectivamente con la SEQ ID NO 3 comprendida dentro del antígeno
según la reivindicación 2.
9. Ácido nucleico que codifica para el péptido
según la reivindicación 1.
10. Vector de expresión que comprende el ácido
nucleico según la reivindicación 9.
11. Célula huésped que contiene el vector de
expresión según la reivindicación 10.
12. Antígeno según la reivindicación 2 para su
uso en la protección frente al VIH-1.
13. Uso del antígeno según la reivindicación 2
para la fabricación de un medicamento para la protección frente al
VIH-1.
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2008
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