SK287917B6

SK287917B6 - Peptide derived from HIV-1gag p17, antigen comprising the peptide and use thereof, vaccine composition, antibody, nucleic acid, expression vector and host cell

Info

Publication number: SK287917B6
Application number: SK402-2003A
Authority: SK
Inventors: Birger Sorensen
Original assignee: Bionor Immuno As
Priority date: 2000-09-04
Filing date: 2001-09-03
Publication date: 2012-03-02
Also published as: CN101104636A; US7612168B2; AU2007202739A1; AU8270601A; NO314588B1; JP2011219481A; EA006308B1; JP2004508381A; AU2007202739B2; AR033998A1; CN1282656C; SK4022003A3; NO20004413D0; DE60135564D1; NO20004413L; HUP0303134A2; NZ535148A; ZA200301740B; HUP0303134A3; WO2002020554A2

Abstract

Described is modified peptide capable of inducing a HIV-1 specific immune response without antagonizing the cytotoxic T-cell activity in order to achieve an effective prophylactic and therapeutic vaccine against HIV. The peptide is based on conserved regions of HIV gag p17 proteins. Described are antigens in free- or carrier-bound form comprising said peptide, vaccine compositions containing the antigen, their use, their antigens, a nucleic acid coding the peptide, an expression vector comprising the nucleic acid and a host cell comprising the expression vector.

Description

Predložený vynález sa týka nových peptidov založených na konzervatívnych oblastiach HIV gag p 17, antigénov voľných alebo viazaných na nosiči, ktoré obsahujú aspoň jeden z uvedených peptidov, vakcínových kompozícií obsahujúcich aspoň jeden z antigénov, súprav na imunologickú skúšku a spôsobu detekcie protilátok vyvolaných ľudským vírusom imunitnej nedostatočnosti (HIV) alebo HlV-špecifickými peptidmi s použitím takýchto antigénov.

Doterajší stav techniky

Potreba udržiavať globálnu epidémiu infekcie HIV pod kontrolou je naliehavá a vývoj vakcíny proti HIV je jednou z hlavných úloh výskumu AIDS. Vakcíny by vo všeobecnosti mali aktivovať bunky tvoriace antigén, prekonať genetické obmedzenie v odozvách T buniek a vytvárať T a B pamäťové bunky. Variabilita vírusovej populácie predstavuje ďalší problém pri získavaní účinnej vakcíny HIV. Zásadný zlom v prebiehajúcich pokusoch o vyvinutie vakcíny proti AIDS zatiaľ nebol publikovaný. V súčasnosti sa vo všeobecnosti pripúšťa, že pre vývoj účinnej profylaktickej a terapeutickej vakcíny je rozhodujúce vyvolanie humorálnej a bunkami sprostredkovanej imunity špecifickej pre antigén. Všetky tri nástroje imunitného systému zahŕňajúce neutralizačné protilátky: bunky CD8+CTL a T-helper-1 (TH1) môžu byť potrebné na ochrannú imunitu proti HIV. Je známe, že CTL môžu účinkovať na iné vírusové infekcie (Ada, Immunol. Celí Biol., 72: 447 - 454, 1994) a že CTL môžu rozkladať infikované ciele v počiatkoch infekcie, skôr ako sa vírus rozmnoží a uvoľní rozkladom buniek, Ada a kol., pozri skôr. Ťažisko leží na výbere antigénov ako aj na návrhu a vyhodnotení rozličných adjuvantov. Antigénmi použitými v rozličných štúdiách in vitro a in vivo boli látky od surových proteínov až po rozličné syntetické peptidy z niektorých proteínov HIV. Veľký počet štúdií sa uskutočnil na slučke V3 v gpl20. Pozorovalo sa vyvolanie odozvy B aj T buniek, v štúdií in vitro sa však publikovalo, že peptid z konzervatívnej oblasti gp41 indikoval nárast infekcie (Bell S. J. a kol., Clin. Exp. Immunol., 87(1): 37-45, január 1992).

Prirodzene sa vyskytujúce sekvencie HIV v kandidátskych vakcínach nie sú schopné stimulovať stabilnú imunitnú odozvu kvôli základnej schopnosti vírusov ukryť sa zmenou vzhľadu epitopov prítomných na bunkovom povrchu infikovaných buniek. Imunitný systém je oklamaný tak, aby veril, že príslušná sekvencia aminokyselín je náležitá, kým v skutočnosti dôležité aminokyseliny sú ukryté.

Nedávna štúdia titrov protilátok proti proteínu gag p24 ukázala, že pomalá progresia vývoja AIDS je spojená s vysokými titrami, kým rýchla progresia vývoja AIDS je spojená s nízkymi titrami. Ukázalo sa, že u osôb s nízkym titrom protilátok p24 sa AIDS vyvíja podstatne rýchlejšie ako u osôb s vysokým titrom protilátok p24 (Zwart G. a kol., Virology, 201, s. 285 - 93, jún 1994), čo naznačuje, že gag a najmä p24 môžu hrať kľúčovú úlohu pri získaní kontroly nad vývojom AIDS.

Vo W091/13360 sú opísané nové peptidy HIV p24 a tieto peptidy sa tu používajú v metóde rozlišujúcej nepravdivo a pravdivo diagnostikovanú HIV- pozitívnu vzorku séra.

Johnson R. P, a kol., The Journal of Immunology, zv. 147, s. 1512 - 1521, č. 5, 1. septembra 1991 opisuje analýzu pozoruhodnej špecifickosti gag-špecifických CTL odoziev u troch HIV-1 sérovopozitívnych jedincov, pričom sa zistilo, že tieto gag-špecifické CTL odozvy boli sprostredkované CD3 + CD8+ lymfocytmi, ktoré sú obmedzené na HLA triedy I. Goulder P. J. R. a kol., Journal of Virology, zv. 74, s. 5679 - 5690, č. 12, jún 2000 študoval CTL odozvu z rozličných častí pl7 a p24 HIV v rozličných populáciách. Výsledky ukazujú, že existujú určité imunitno-dominantné oblasti, ale malé rozdiely v amino-kyselinovom zložení môžu spôsobiť veľké rozdiely v odozve.

EP-A-0 356 007 opisuje antigénové determinanty, konkrétne sa týka syntetických sekvencii polypeptidov, ktoré súvisia s proteínmi prítomnými v HIV-1 a ktoré sa môžu použiť ako základ pre potenciálnu vakcínu proti AIDS.

Rosenberg E. S. a kol., Science, zv. 278, 21. novembra 1997, s. 1447 - 1450 píše, že vírusovo špecifické CD4+ T-helper lymfocyty sú rozhodujúce na udržiavanie účinnej imunity pri mnohých chronických vírusových infekciách, ale sú príznačne nedetegovateľné pri chronickej infekcii vírusom ľudskej imunitnej nedostatočnosti typu 1 (HIV-1). HIV-1-špecifické proliferatívne odozvy na p24 boli nepriamo úmerné masívnosti vírusovej infekcie. Autori usúdili, že je pravdepodobné, že HIV-1-špecifické helper bunky sú dôležité pri imunitno-terapeutických intervenciách a vývoji vakcíny.

EP 0 230 222, EP 0 270 114, DE 37 11 016 and GB 2 188 639, všetky v mene F. Hoffmann-La Roche & Co. a. s., sa týkajú rekombinantnej expresie a čistenia génových proteínov HTLVIII Gag/Env alebo fuznych proteínov. Proteíny pozostávajúce z natívnych sekvencii sa môžu prečistiť z hľadiska homogenity a použiť ako základ pre diagnostické skúšky na detekciu protilátok proti vírusom spojeným s AIDS. Protein gag/env môže byť zložkou preparátu na použitie ako vakcíny na ochranu pred AIDS pomocou profylaktickej imunizácie.

Z diagnostického a terapeutického hľadiska je pri použití p24 ako súčasti testu alebo liečby najväčším problémom veľký počet epitopov na p24, čo stimuluje produkciu veľkého počtu protilátok so slabou špecifickosťou, ktoré opakovanou revakcináciou na potenciálne zmutovaných sekvenciách môže vytvoriť autoprotilátky (Autoprotilátky k alfa/beta receptorom T buniek pri infekcii HIV; dysregulácia a mimikry. Lake D. F. a kol., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, (23): 10849 - 53, 8. nov. 1994). Ďalej sa publikovalo, že titer protilátok p24 nedosahuje rovnako vysoké hladiny ako pre obalové proteíny (gpl20 a gp41). Obvykle sa protilátky k p24 vyvíjajú vo veľmi včasnej fáze infekcie, ale po tejto počiatočnej perióde infekcie sa titer dosť rýchlo stabilizuje. Neskôr sa titer p24 postupne znižuje, kým pre gpl60 dochádza k opačnej zmene. Tieto pozorovania je tiež možné dať do súvislosti s nedávnymi publikáciami tvrdiacimi, že aktivita cytotoxických T buniek sa antagonizuje prirodzene sa vyskytujúcimi variantmi HIV-1 gag (Klenerman P. a kol.. Náture, 2: 369 (6479), s. 355, 2. júna 1994). Toto môže byť jedným z dôvodov, prečo sa pozoruje rýchla stabilizácia titru p24 a prečo sa neskôr začína znižovať.

Na základe uvedených pôvodných údajov sme sa rozhodli vyšetriť možnosť návrhu nových syntetických peptidov, ktoré môžu napodobňovať epitopy p 17 a p24 bez antagonizujúcej aktivity cytotoxických T buniek, aby sa tým dosiahli požiadavky na účinnú profylaktickú a terapeutickú vakcínu.

Sekvenciu pl7 identifikovanú ako možnú predlohu pre vývoj peptidov, ktoré môžu vyvolať CTF a protilátkovú odozvu, zverejnili Korber a kol.. Human Retroviruses and AIDS (Ľudské retrovírusy a AIDS) 1999, red. Theoretical Biology and Biophysics Group (Skupina pre teoretickú biológiu a biofyziku), Los Alamos National Laboratory, Los Alamos, NM. Identifikovaná sekvencia aminokyselín je umiestnená medzi aminokyselinami 33 a 53, pozri tabuľku 1.

Tabuľka 1
Sekvencia
Čís. AK	AK	Prirodzene sa vyskytujúce aminokyseliny
33	H
34	I	L	V	M
35	I	V
36	W
37	A
38	S	N	R
39	R	S
40	E
41	L	M
42	E	D	K	G	Q
43	R	K	G	N
44	F	S	Y
45	A	T	S
46	V	L	I	C
47	N	D	s
48	P	R	s	T
49	G	S	A	D	N Q
50	L	F
51	L	M
52	E	G	D
53	T	S	A

Jednopísmenové rovnako ako trojpísmenové kódy definujúce aminokyseliny v sekvenciách uvedené v tejto špecifikácii sú v zhode s medzinárodnými normami a sú uvedené v učebniciach, napríklad Lehnínger A. L., «Principles of Biochemistry» (Základy biochémie), Worth Publishers Inc., New York, 1982. Aminokyseliny uvedené napravo od druhého stĺpca predstavujú prirodzenú variáciu sekvencie. Zmena v celkovom náboji epitopu modifikáciou aminokyselín môže viesť k významnému zlepšeniu imunogénnosti. Modifikáciami môžu byť pravdepodobné zmeny konformácie z pôvodnej špirálovitej na listovú štruktúru, čím sa vystaví epitop imunitnému systému iným spôsobom a v očakávanom zvýšenom rozsahu.

Na ďalšie zvýšenie počtu epitopov T buniek a zníženie pravdepodobnosti vývoja únikových mutantov v proteíne gag boli tri ďalšie sekvencie peptidov z p24 založené na nasledujúcich troch sekvenciách zo zvyškov 133 - 158, 178 - 199, resp. 233 - 251 publikovaných v knihe Human Retroviruses and AIDS 1999 (Ľudské retrovírusy a AIDS); A Compilation and Analysis of Nucleid Acid and Amino Acid Sequences (Prehľad a analýza sekvencií nukleových kyselín a aminokyselín). Red. Theoretical Biology and Biophysics Group (Skupina pre teoretickú biológiu a biofyziku), Los Alamos National Laboratory, Los Alamos, pozri tabuľky 2 až 4.

Tabuľka 2
Sekvencia
Čís. AK AK
133	P
134	I
135	V
136	Q
137	N
138	I
139	Q
140	G
141	Q
142	M
143	V
144	H
145	Q
146	A
147	I
148	S
149	P
150	R
151	T
152	L
153	N
154	A
155	W
156	V
157	K
158	v

Prirodzene sa vyskytujúce aminokyseliny pri každej polohe AK

V L

M A I

STV D T

A L M

EKG

H

S

L

T

A

Tabuľka 3
Sekvencia
Čís. AK	AK
178	G
179	A
180	T
181	P
182	Q
183	D
184	L
185	N
186	T
187	M
188	L
189	N
190	T
191	V
192	G
193	G
194	H
195	Q
196	A
197	A
198	M
199	Q

Prirodzene sa vyskytujúce aminokyseliny pri každej polohe AK

A I V L

S

H G T S Y

I V

Y

ML A

S T

I V A

I

D a

Tabuľka 4 Sekvencia

Čís. AK	AK	Prirodzene	sa vyskytujúce aminokyseliny pri každej polohe AK
233	G
234	S	A
235	D
236	I
237	A
238	G
239	T	A	S
240	T	S
241	S	T
242	T	N	S
243	L	P	v	Q
244	Q	A	H
245	E
246	Q	H
247	I	L	V	M
248	G	A	Q	T N R H I
249	W
250	M	T
251	T	S

Syntetizovali sa aj niektoré modifikované peptidy, aby sa určili unikátne sekvencie, ktoré sú špecifické a súčasne citlivé proti HIV-1.

Podstata vynálezu

Peptidy podľa tohto vynálezu pochádzajú z konzervatívnych oblastí proteínu HIV-1 gag pl7 opísaných skôr, ktoré majú vlastnosti uchovávajúce jedinečnosť epitopu HIV-1. Nové peptidy podľa tohto vynálezu ďalej nemajú pozorovateľný cytotoxický antagonistický účinok na T lymfocyty (CTL) a musia mať aspoň jeden potenciálny CTL epitop.

Peptidy podľa tohto vynálezu, ktoré spĺňali uvedené kritériá, sú peptidy zahŕňajúce sekvenciu aminokyselín SEQ ID NO:3:

RLIYATRQLQRFAVNPGLLIT, kde terminálnymi koncami sekvencie môžu byť voľné karboxylové skupiny alebo aminoskupiny, amidy, acyly, acetyly alebo ich soli, dva alebo viac Cys zvyškov môže tvoriť časť medzireťazcovej disulfidovej väzby, mostík -S- (CH₂)_P-S- alebo -(CH₂)_p-, v ktorom p = 1 - 8, prípadne s vloženým jedným alebo viacerými heteroatómami, ako je O, N alebo S, a/alebo je uvedená peptidová sekvencia imobilizovaná na tuhom nosiči.

Nové sekvencie peptidov majú schopnosť slúžiť ako dobrý antigén, kde tento antigén obsahuje aspoň jeden peptid zo sekvencie SEQ ID NO: 3. Antigenicita sa môže upravovať zmenou pomeru koncentrácie rozličných peptidov alebo veľkosti peptidov, napríklad dimérizáciou alebo polymerizáciou, a/alebo imobilizáciou na tuhej fáze. Antigén obsahuje sekvencie polypeptidov podľa tohto vynálezu, ktoré sú buď spojené mostíkom, napríklad disulfidovým mostíkom medzi Cys zvyškami reťazcov alebo mostíkmi, ako je C^Cg alkylén, prípadne s vloženým jedným alebo viacerými heteroatômami, ako sú O, S alebo N, alebo sú výhodne nespojené. Reťazce môžu byť imobilizované na tuhej fáze v monomémej, dimémej alebo oligomémej forme. Ku koncom sa môžu pridať ďalšie aminokyseliny, aby vzniklo «rameno» na uľahčenie imobilizácie.

PEG je polyetylénglykol (HO(CH₂CH₂O)_mH) a môže byť časťou spojky -Z-, prípadne je PEG modifikovaný dikarboxylovou skupinou (HO(CH₂CH₂O)_mCO(CH₂)_oCOOH) alebo koncovou karboxylovou skupinou (HO(CH₂CH₂O)n,.iCH₂COOH), kde pred spojením m=l-10ao = 2-6.

Spojka -Z- môže byť tvorená buď PEG, modifikovaným PEG, alebo ich kombináciou, a/alebo kombináciou jedného alebo viacerých Gly zvyškov. Spojka -Z- môže byť tiež tvorená Gly-mostíkom [Gly]_n, v ktorom n = 1, 2 alebo 3.

Všetky aminokyseliny v peptidoch podľa tohto vynálezu môžu byť v D-forme alebo v L-forme, hoci prirodzene sa vyskytujúca L-forma je výhodnejšia.

C- a N-terminálne konce sekvencii peptidov sa môžu odlišovať od prírodných sekvencii modifikáciou terminálnych NH₂ skupín a/alebo COOH skupín, môžu byť napríklad acylované, acetylované, amidované alebo modifikované tak, že poskytujú miesto naviazania pre nosič alebo inú molekulu.

SK 287917 Β6

Polypeptidový antigén podľa tohto vynálezu je buď voľný, alebo vo forme viazanej na nosiči. Nosič alebo tuhá fáza, na ktorú je peptid prípadne naviazaný, sa môže vybrať zo širokej palety známych nosičov. Mal by byť vybratý s ohľadom na zamýšľané použitie imobilizovaného polypeptidu ako diagnostického antigénu alebo ako imunizačnej zložky vo vakcíne.

Príkladmi nosičov, ktoré sa môžu použiť napríklad na diagnostické účely, sú magnetické guľôčky alebo živica z kopolymérov, ako je styrén-divinylbenzén, hydroxylovaný styrén-divinylbenzén, polystyrén, karboxylovaný polystyrén, guľôčky z uhlíkovej černe, neaktivované alebo polystyrénom, alebo polyvinylchloridom aktivované sklo, epoxidom aktivované pórovité magnetické sklo, želatínové alebo polysacharidové častice alebo iné proteínové častice, červené krvinky, monoklonálne a polyklonálne protilátky alebo fab fragmenty týchto protilátok.

Podľa ďalšieho praktického uskutočnenia tohto vynálezu môžu byť antigény súčasťou vakcíny s možnosťou kombinácie s nosičmi, adjuvantmi alebo kombinované s inými imunostimulačnými prvkami, ako je vírus kiahní obsahujúci env gén. Príkladmi nosičov a/alebo adjuvantov na účely vakcíny sú iné proteiny, ako je ľudský alebo hovädzí sérový albumín a limpetový hemocyanin a mastné kyseliny. Imunostimulačné materiály sa dajú rozdeliť do troch skupín: adjuvanty, nosiče pre antigény a vehikulá. Príkladmi adjuvantov sú hydroxid hlinitý, hlinité soli, saponín, muramyl di- a tripeptidy, monofosforyllipid A, kyselina palmitová, B. pertussis a rozličné cytokíny zahŕňajúce Thi cytokín IL-12 a IL-1. Rad proteínových toxínov sa môže použiť na dopravu prenášačových proteínov cez bunkové membrány do cytosolu, ktoré sú užitočné pri vývoji CTL vakcín. K nosičom patria bakteriálne toxoidy, ako je inaktivovaný toxín tetanu a cholery, geneticky detoxifíkované bakteriálne toxíny, ako je teplotné labilný enterotoxín z E. coli, mastné kyseliny, živé vektory, ako je polio chimeras, a hybridné proteiny, ktoré tvoria častice, napríklad častice kvasinkového retrotranspozónového hybridu TY a častice HbcAg. Vehikulá, ktoré sú často sa vyskytujúcimi zložkami v moderných vakcínach, obsahujú emulzie minerálnych olejov, Freundov úplný a neúplný adjuvant, emulzie rastlinných olejov, povrchovo aktívne látky na báze neiónových blokových kopolymérov, skvalén alebo skvalán, lipopeptidy, lipozómy a biologicky odbúrateľné mikroguľôčky. Dvoma najnovšími adjuvantmi, ktoré sú významné pri vývoji nových vakcín, sú mikroemulzia olej vo vode (MF59) a polymérne mikročastice. Môže sa použiť akákoľvek látka, ktorá môže zvýšiť imunogenicitu antigénu, a niektoré ďalšie alternatívy nosičov alebo adjuvantov sú uvedené v americkom alebo v európskom liekopise.

Vhodné prípravky obsahujúce antigén na imunostimulačné použitie môžu tiež obsahovať interferóny, ako je INF-γ, antivírusové chemokíny alebo hematopoetické rastové faktory, ako je rastový faktor (stimulujúci kolónie) granulocytových makrofágov.

Iným priblížením, ktorého cieľom je zvýšiť stimuláciu a absorpciu, napríklad v črevách, je podanie peptidov podľa tohto vynálezu s malými peptidmi, ako sú di-, tri- alebo tetrapeptidy. Tieto peptidy sa môžu podávať navyše alebo v kombinácii s peptidmi podľa tohto vynálezu. Výhodne sa tieto peptidy podávajú spolu s tripeptidom YGG, ktorý pozostáva z aminokyselín v D-forme alebo v L-forme, výhodne v D-forme.

Nedávne prístupy k neparenterálnemu podávaniu vakcíny, napríklad cez sliznicu, zahŕňajú: technológiu génovej fúzie na vytvorenie netoxických derivátov sliznicových adjuvantov, geneticky inaktivované antigény s deléciou v esenciálnom géne, koexpresiu antigénu a špecifického cytokínu, ktorý je dôležitý pri modulácii a riadení sliznicovej imunitnej odozvy, a samotný genetický materiál, ktorý by umožnil prijatie DNA alebo RNA a jeho endogénnu expresiu v hostiteľských bunkách.

Jedným prístupom k vývoju trvalých odoziev, keď sa vyžaduje bunkami sprostredkovaná imunita, je vakcinácia s plasmidom DNA kódujúcim jeden alebo viac špecifických antigénov.

Na ochranu proti infekcii HIV by mali vakcíny mať sliznicovú aj systémovú imunitnú odozvu a mohli by sa podávať akýmkoľvek vhodným spôsobom, parenterálne alebo neparenterálne, ako je napríklad subkutánne, intrakutánne, intravenózne, intramuskuláme, perorálne, mukózne alebo intranazálne.

Vo výhodnom uskutočnení vakcínová kompozícia podľa tohto vynálezu obsahuje antigén

RLIYATRQLQRFAVNPGLLIT-NH₂ (SEQ ID NO: 3).

Tieto sekvencie spolupracujú s CTL-epitopmi a môžu aktivovať bunkový imunitný systém. Zmeny v aminokyselinách zabudované v rámci CTL-epitopov sú navrhnuté tak, aby sa dosiahlo zlepšenie viazania. Vykonali sa aj ďalšie zmeny v aminokyselinách, aby sa uľahčila syntéza peptidu a/alebo sa zvýšila rozpustnosť peptidu.

Ďalším praktickým uskutočnením vynálezu je spôsob detekcie protilátok vyvolaných HIV-1 alebo HIV-1-špecifickými peptidmi alebo proteínmi vo vzorke telovej tekutiny pomocou uvedených antigénov. Tento vynález zahŕňa aj súpravu na imunologickú skúšku pri uvedenej detekcii a protilátky schopné selektívne reagovať s uvedenými antigénmi.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Opis prípravy peptidov

Peptidy podľa tohto vynálezu sa môžu pripraviť akoukoľvek známou metódou prípravy lineárnej sekvencie aminokyselín, ako sú rekombinantné DNA techniky. Sekvencia nukleových kyselín, ktorá kóduje peptid podľa tohto vynálezu alebo multimér uvedených peptidov, sa zavedie do expresného vektora. Vhodnými expresnými vektormi sú napríklad plazmidy, kozmidy, vírusy a YAC (kvasinkové umelé chromozómy), ktoré obsahujú potrebné kontrolné oblasti pre replikáciu a expresiu. Expresný vektor môže byť stimulovaný na expresiu v hostiteľskej bunke. Vhodnými hostiteľskými bunkami sú napríklad baktérie, bunky kvasiniek a bunky cicavcov. Takéto techniky sú dobre známe odborníkom v problematike a sú opísané napríklad Sambrookom a kol., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Molekulárne klonovanie: Laboratórna príručka), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, 1989. Inými dobre známymi technikami sú degradácia alebo syntéza pripojením aminokyselinového zvyšku k ďalšiemu zvyšku v kvapalnej fáze alebo výhodne na tuhej fáze (živica), napríklad takzvanou Merrifieldovou syntézou. Pozri napríklad Barany a Merrifield v knihe Peptides, Analysís, Synthesis, Biology (Peptidy, analýza, syntéza, biológia), zv. 2, red. E. Gross a Meinhofer (Acad. Press, N. Y., 1980), Kneib-Coronier a Mullen, Int. J. Peptide Proteín Res., 30, s. 705 - 739 (1987) aFields aNoble, Int. J. Peptide Proteín Res. 35, s. 161 - 214 (1990).

V prípade, že sa požaduje lineárny alebo cyklický peptid na sekvencií aminokyselín sa vykoná krok chemickej oxidácie, aby sa pri syntéze vhodných lineárnych sekvencií aminokyselín cyklizovali alebo spojili dva cysteínové zvyšky medzi dvoma sekvenciami peptidov, pozri Akaji a kol., Tetrahedron Letter, 33, 8, s. 1073 - 1076, 1992.

Všeobecný opis syntézy

Všetky deriváty peptidov pripravené v uvedených príkladoch sa syntetizovali na syntezátori peptidov Miliigen 9050 s použitím štandardného programu. Použitá živica bola Tenta Gel P RAM s teoretickým plnením 0,20 meq/g (RAPP POLYMERE GmBH, Tiibingen). Konečný produkt syntézy sa vysušil cez noc vo vákuu. Peptid sa potom oddelil od živice pôsobením 90 % kyseliny trifluóroctovej v prítomnosti etánditiolu (5 %) a vody (5 %) ako lapačov nečistôt (1,5-hodiny pri teplote miestnosti). Potom sa živica odfiltrovala a premyla na filtri ďalšou kyselinou trifluóroctovou (100 %) (2 x 20 ml). Spojené filtráty sa odparili vo vákuu (vodný kúpeľ pri teplote miestnosti) a zvyšok sa zmiešal s etyléterom (200 ml) a vyzrážaný produkt sa odfiltroval. Tuhá látka sa ihneď rozpustila na filtri v ľadovej kyseline octovej (100 ml) a pridala sa k 1,5 1 20 % kyseliny octovej v metanole a nechala sa reagovať s 0,1 M roztok jódu v metanole, až sústava získala svetlohnedú farbu. Potom sa pridal iónomenič Dowex 1 x 8 vo forme acetátu (15 g) (Bio-Rad, Richmond, CA, USA) a zmes sa prefiltrovala. Filtrát sa odparil a zvyšok sa lyofilizoval z kyseliny octovej. Produkt sa potom prečistil kvapalinovou chromatografiou s obrátenými fázami na stĺpci s Kromasilom® 100 - 5 C8 (EKA Nobel, Súrte, Švédsko) vo vhodnom systéme obsahujúcom acetonitril v 0,1 % vodnom roztoku kyseliny trifluóroctovej. Vzorky odobraté zo stĺpca sa analyzovali analytickou vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC) (Beckman System Gold, USA) s použitím stĺpca Kromasilu® 100 - 5 C8 (EKA Nobel, Súrte, Švédsko). Frakcie obsahujúce čistú látku sa spojili, rozpúšťadlo sa odparilo a produkt sa lyofilizoval z kyseliny octovej. Na výslednom produkte sa vykonala záverečná analýza HPLC a štruktúra peptidu sa potvrdila analýzou aminokyselín a hmotnostnou spektrometriou (LDI-MS).

Všetky aminokyseliny použité v syntéze boli L-aminokyseliny a ich funkčná α-aminoskupina bola chránená fluorenylmetoxykarbonylovou skupinou. Bočné reťazce boli chránené nasledujúcim spôsobom:

Cys (Trt), Gln(Trt), Glu(OtBu), Thr(tBu).

Skratky v zátvorkách znamenajú:

Trt = trifenylmetyl, t-Bu = fer/-butyl,

OtBu = tert-butylester

Deriváty aminokyselín dodala firma Bachem AG, Švajčiarsko.

Príklad 1 - referenčný príklad

Príprava HLIYLTRQLQRFALNPGLLIT- NH₂ (SEQ ID NO: 2).

Peptid sa syntetizoval vo forme amidu zo zodpovedajúcich východiskových materiálov podľa všeobecného opisu syntézy. Čistota sa stanovila analýzou HPLČ a štruktúra sa potvrdila analýzou aminokyselín a hmotnostnou spektrometriou (LDI-MS).

Príklad 2

Príprava RLI Y A TRQLQRF A VNPGLLI T-NH₂ (SEQ ID NO: 3).

Peptid sa syntetizoval vo forme amidu zo zodpovedajúcich východiskových materiálov podľa všeobecného opisu syntézy. Čistota sa stanovila analýzou HPLC a štruktúra sa potvrdila analýzou aminokyselín a hmotnostnou spektrometriou (LDI-MS).

Čistota (HPLC): viac ako 97 % (jednotlivé nečistoty menej než 1 %)

Mólová hmotnosť (voľná báza): 2442,9

Príklad 3 - referenčný príklad

Príprava Y I LQN I EGQL V G G G Y A I S PRTL V A YLRG - NH₂ (SEQ ID NO: 5).

Peptid sa syntetizuje vo forme amidu zo zodpovedajúcich východiskových materiálov podľa všeobecného opisu syntézy. Čistota sa stanoví analýzou HPLC a štruktúra sa potvrdí analýzou aminokyselín a hmotnostnou spektrometriou (LDI-MS).

Príklad 4 - referenčný príklad

Príprava F1LQN1EGQLVGGGYA1SPRTLVAGGGG (SEQ ID NO: 6).

Čistota (HPLC): viac než 94 %

Mólová hmotnosť (voľná báza): 2745 Molekulový vzorec: Ci₂₃Hi9₈O₃₇N₃₄Príklad 5 - referenčný príklad

Príprava prirodzenej sekvencie p24 P I V Q N IE G Q M V H Q AI S P R T L N A W V K V (SEQ ID NO: 7). Peptid sa syntetizoval zo zodpovedajúcich východiskových materiálov podľa všeobecného opisu syntézy.

Čistota sa stanovila analýzou HPLC a štruktúra sa potvrdila analýzou aminokyselín a hmotnostnou spektrometriou (LDI-MS).

Čistota (HPLC): približne 85 %

Mólová hmotnosť (voľná báza): 2929 Molekulový vzorec: Ci₃iH₂₁₄O₃₆N₃₈S Príklad 6 - referenčný príklad

Príprava FILQNIQGQLVGGGYA1SPRTLVAG - NH₂ (SEQ ID NO: 8).

Čistota (HPLC): viac než 97 % (jednotlivá nečistota menej než 1 %)

Mólová hmotnosť (voľná báza): 2572,0

Príklad 7 - referenčný príklad

Príprava prirodzenej sekvencie p24GATPQDLNTMLNTVGGHQAA -NH₂ (SEQ ID NO: 10). Peptid sa syntetizoval vo forme amidu zo zodpovedajúcich východiskových materiálov podľa všeobecného opisu syntézy. Čistota sa stanovila analýzou HPLC a štruktúra sa potvrdila analýzou aminokyselín a hmotnostnou spektrometriou (LDI-MS).

Čistota (HPLC): 98 %

Mólová hmotnosť (voľná báza): 1995,2

Molekulový vzorec: C₈₂Hi₃₅O₂9N₂₇S

Príklad 8 - referenčný príklad

Príprava YAIPQALNTLLNT VGGHQ A A -NH₂ (SEQID NO: 11).

Čistota (HPLC): 98 %

Mólová hmotnosť (voľná báza): 2051,4

Molekulový vzorec: C₉iHi₄₇O₂₇N₂₇

SK 287917 Β6

Príklad 9 - referenčný príklad

Príprava F AIPQALNTLLNTVGGGGHQ A ACG - NH₂ (SEQ ID NO: 12).

Príklad 10 - referenčný príklad

Príprava prirodzenej sekvencie p24 GSDIAGTTSTLQEQIG WMT - NH₂ (SEQ ID NO: 13).

Čistota (HPLC): 90 %

Mólová hmotnosť (voľná báza): 1995,2

Molekulový vzorec: C₈4Hi₃5O₃₁N23S

Príklad 11 - referenčný príklad

Príprava WSALAGTTSLLQGQLGWIT - NH₂ (SEQ ID NO: 14).

Čistota (HPLC): viac než 97 % jednotlivé nečistoty menej než 1 %) Mólová hmotnosť (voľná báza): 2007,3 Príklad 12 - referenčný príklad

Príprava prirodzenej sekvencie pl7HIVWASRELERFAVNPGLLEVT - NH₂ (SEQ ID NO: 16).

Čistota (HPLC): viac než 95 %

Mólová hmotnosť (voľná báza): 2436,8

Príklad 13 - referenčný príklad

Príprava prirodzenej sekvencie p24 PIV Q NIQ G Q M V H Q AI S P R T L N A W - NH₂ (SEQ ID NO: 17).

Čistota (HPLC): približne 93 %

Mólová hmotnosť (voľná báza): 2601,0

Príklad 14

Dimerizácia prostredníctvom disulfidového mostíka

Sekvencie peptidov sa spoja v oxidačnom kroku za vzniku dipeptidu, v ktorom cysteínové zvyšky vytvoria disulfidový mostík. Mostík sa môže napríklad vytvoriť oxidáciou I₂, ako je uvedené.

Rovnaké množstvá peptidov sa rozpustili v zmesi kyselina octová/metanol (1 : 4) a pridal sa 0,1 M I₂ v metanole za vzniku zmesi diméru.

Príklad 15

Pripravila sa vakcína obsahujúca peptidy SEQ ID NO: 3, 6, 11 a 14. Lyofilizované peptidy sa rozpustili v sterilnej vode na výslednú koncentráciu 4 mg/ml. Výsledná koncentrácia soli v roztoku je fyziologicky vhodná. Pripravil sa tiež faktor stimulujúci granulocytovo-makrofágové kolónie (GM-CSF) podľa návodu na použitie od výrobcu s výslednou koncentráciou 0,3 mg/ml. Tieto dva roztoky sa podali intrakutánne. Typická injekčná dávka je 100 μΐ.

Príklad 16

Roztok alebo suspenzia antigénu sa zmiešala s rovnakými množstvami Freundovho adjuvantu od Behringa, úplného alebo neúplného, a potom sa jemne emulgovala natiahnutím do injekčnej striekačky a ráznym vytlačením z nej, alebo homogenizátorom. Emulzia by mala ostať stabilná aspoň 30 minút. Emulzie antigén-adjuvant je najlepšie podávať injekčné subkutánne ako depot.

Príklad 17

Imunologická skúška na detekciu protilátok vyvolaných HIV-1

Činidlá s magnetickými časticami sa majú pripraviť podľa protokolu odporúčaného výrobcami. Dynal AS je výrobcom Dynabeads, ktoré sa použili. Magnetické častice pokryté ligandom sa nazývajú Činidlo 1. Peptid podľa tohto vynálezu je kovalentne spojený s predaktivovaným povrchom magnetických častíc. Je tiež možné absorbovať peptid fyzikálne na povrchu magnetických častíc. Koncentrácia častíc v Činidle 1 je v rozsahu od 1 mg/ml do 15 mg/ml. Veľkosť častíc sa mení v rozsahu 0,2 pm až 15 pm. Koncentrácia peptidov je v rozsahu od 0,01 mg/mg častíc do 1 mg/mg častíc.

Antihumánnou Ig alkalickou fosfatázou (AP) konjugované protilátkové činidlo sa pripraví podľa odporúčaného protokolu Dáko AS. Tento protokol je štandardným postupom v tomto odbore. Toto činidlo sa nazýva Činidlo 2.

Roztok substrátu fenolftaleínmonofosfátu sa má pripraviť podľa protokolu odporúčaného Fluka AG. Tento protokol je štandardným postupom v tomto odbore. Roztok substrátu sa nazýva Činidlo 3.

Použitý premývací a inkubačný tlmivý roztok je štandardný tlmivý roztok 0,05 M tris-zásady s nasledujúcimi prídavnými zlúčeninami: Tween 20 (0,01 % až 0,1 %), glycerol (0,1 % až 10 %) a chlorid sodný (0,2 % až 0,1 %).

Postup skúšky zahŕňa inkubačný krok, v ktorom sa v každej jamke zmieša 1 kvapka Činidla 1 s 2 kvapkami premývacieho tlmivého roztoku. Po zmiešaní sa pridá 30 μΐ vzorky a roztok sa inkubuje 5 minút. Magnetické častice sa môžu magnetom zachytiť a kvapalina sa môže odstrániť, po čom sa magnet oddiali. Potom sa jamky vypláchnu dvakrát 4 kvapkami premývacieho roztoku a nasleduje inkubácia Činidlom 2. Pridá sa 1 kvapka Činidla 2 s 2 kvapkami premývacieho tlmivého roztoku a roztok sa inkubuje 5 minút. Magnetické častice sa môžu magnetom zachytiť a kvapalina sa môže odstrániť, po čom sa magnet oddiali. Potom sa premývací krok opakuje a nasleduje inkubácia s Činidlom 3. Do každej jamky sa pridajú 2 kvapky Činidla 3 a roztok sa inkubuje 3 minúty. Výsledky sa môžu odčítať oproti bielemu pozadiu. Pozitívne výsledky sú červené (3+ = sýto červené), kým negatívne výsledky sú jasne svetložlté/svetlohnedé roztoky, aké sa získali pri negatívnej kontrole.

Súprava na imunologickú skúšku sa môže použiť pri detekcii protilátok vyvolaných buď vírusom HIV, alebo HlV-špecifickými peptidmi alebo proteínmi, napríklad peptidmi podľa tohto vynálezu.

Príklad 18

Terapeutická alebo profylaktická vakcína

Aspoň jeden z polypeptidov podľa tohto vynálezu vybratý zo skupiny sekvencii SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 9 a SEQ ID NO: 15 sa môže použiť na vytvorenie antigénov a môže byť aktívnou zložkou profylaktickej alebo terapeutickej vakcíny určenej na to, aby poskytovala ochranu proti vírusu ľudskej imunitnej nedostatočnosti typu 1 (HIV-1). Vakcína môže obsahovať zlúčeniny, ktoré majú priaznivé účinky pri ochrane alebo stimulácii imunitného systému hostiteľa (človeka alebo živočícha-stavovca), napríklad interleukíny, interferóny, rastové faktory granulocytových makrofágov, hematopoetické rastové faktory a podobne. Vakcíny ďalej výhodne obsahujú adjuvant alebo vehikulum, výhodnejšie je adjuvantom alebo vehikulom monofosforyllipid A (MPL ®), prípadne s alumom, Freundov adjuvant (úplný alebo neúplný) alebo hydroxid hlinitý. Optimálne množstvo adjuvantu/vehikula bude závisieť od vybratého typu (typov).

Peptidy podľa tohto vynálezu by sa mohli modifikovať C-koncovou adíciou jednoduchej mastnej kyseliny, ako je jednoduchý palmitoylový reťazec, za vzniku lipopeptidovej vakcíny. Lipopeptidy sa môžu ďalej zaviesť do lipozómových membrán metódou cyklov zmrazenia a roztopenia, čim sa získajú lipozómy, ktoré majú na svojom povrchu peptidové ligandy.

Preparát peptidu alebo vakcíny sa pred uskladnením môže lyofilizovať. Lyofilizované peptidy sa môžu rozpustiť v sterilnej vode na konečnú koncentráciu od 0,1 do 100 mg/ml. Vakcína sa môže skladovať výhodne pri nízkej teplote, v ampulách obsahujúcich jednu alebo viac jednotkových dávok použiteľných bez úpravy. Typická jednotková dávka peptidu podľa tohto vynálezu je v rozmedzí koncentrácií: 0,05 pg - 1 mg na kg telesnej hmotnosti, výhodne 0,15 pg - 0,15 mg na kg telesnej hmotnosti. Osoby s praxou v problematike ocenia, že vhodná dávka bude závisieť od telesnej hmotnosti pacienta, od typu ochorenia, závažnosti stavu, spôsobe podávania a niektorých ďalších faktorov. Keď sa používa vakcína ako terapeutická, bežne sa najprv podá asi dvanásťkrát injekčné. Za tým môže nasledovať revakcinácia a v mimoriadnych prípadoch sa môže vakcína podávať počas celého života pacienta. Pri príprave injekčného roztoku sa peptidy rozpustia v sterilnej vode na výslednú koncentráciu 1 mg/ml peptidu. Typický objem injekcie je 100 pl až 200 (2 x 100 pl). Peptid sa výhodne podáva spolu s vhodným adjuvantom a/alebo s rastovým faktorom granulocytových makrofágov, napríklad s prípravkom Leucomax® «Shering Plough» pripraveným v koncentračnom rozsahu od 0,1 mg/ml do 1 mg/ml alebo podľa návodov na použitie od ich výrobcov. Obzvlášť výhodnou je kombinovaná terapia, kde sa tieto peptidy podávajú spolu s peptidmi, ktoré sú opísané v publikovanej medzinárodnej prihláške patentu č. PCT/NO00/00075 podanej 2. marca 2000 a/alebo v spoločne prejednávanej prihláške nórskeho patentu č. 2000 4412. Tieto peptidy sa môžu podávať za sebou alebo súčasne. Vhodným spôsobom podania môže byť intrakutánne, subkutánne, intravenózne, perorálne, intramuskulárne, intranazálne, mukózne alebo inou vhodnou cestou. Na udržanie ochranného účinku sa môže vyžadovať revakcinácia. Pre odborníkov v problematike bude zrejmé, že vakcínové kompozície podľa tohto vynálezu sú prospešné nielen v prevencii infekcie, ale aj pri liečbe infekcie.

Žiadne toxické účinky peptidov podľa tohto vynálezu sa nepozorovali, keď sa podali injekčné myšiam v dávke 100 pg na kg telesnej hmotnosti.

Uvedené príklady sú mienené len ako ilustrácia vynálezu. Musí to byť chápané tak, že osoba s praxou v problematike môže modifikovať tu opísané peptidy, antigény a vakcíny tak, že sa neodchýlia od zmyslu a z rámca tohto vynálezu, ako je uvedené v nárokoch.

ZOZNAM SEKVENCIÍ (1) VŠEOBECNÉ INFORMÁCIE:

(i) PRIHLASOVATEĽ:

(A) MENO: Bionor Immuno AS (B) ULICA: Stromdalsjordet 4, P. O. Box 1893, Gulset (C) MESTO: 3703 Skien (E) ŠTÁT: Nórsko (R) POŠTOVÝ KÓD (ZIP): N-3705 (G) TELEFÓN: +47 35 50 57 50 (H) TELEFAX: + 47 35 50 57 01 (i) VYNÁLEZCA:

(A) MENO: Birger Sorensen (B) ULICA: Meierlia 3 (C) MESTO: 3727 Skien (D) ŠTÁT: Nórsko (ii) NÁZOV VYNÁLEZU: Peptidy HIV, antigény, vakcínové kompozície, súprava na imunologickú skúšku a spôsob detekcie protilátok vyvolaných HIV (iii) POČET SEKVENCIÍ: 17 (iv) POČÍTAČOVÁ ČÍTACIA FORMA:

(A) TYP MÉDIA: Pružný disk (B) POČÍTAČ: IBM-kompatibilný (C) OPERAČNÝ SYSTÉM: Windows 2000 (D) SOFTWARE: Word 7.0 (v) ÚDAJE O SÚČASNEJ PRIHLÁŠKE:

ČÍSLO PRIHLÁŠKY:

(2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 1:

(i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 21 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie (v) TYP FRAGMENTU: vnútorný (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 1 _ (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 1 je His, Lys alebo Arg (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 2 , (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 2 je íle, Leu, Val alebo Met (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 3 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 3 je íle alebo Val (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 4 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 4 je Trp alebo Tyr (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 5 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 5 je Ala alebo Leu (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 6 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 6 je Ser, Thr, Arg alebo Asn (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 7 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /'poznámka= Xaa v polohe 7 je Arg alebo Ser (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 11 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 11 je Arg, Lys, Gly alebo Asn (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 12 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 12 je Phe, Ser alebo Tyr (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 13 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 13 je Ala, Thr alebo Ser (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 14 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 14 je Val, Leu, íle alebo Cys (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 15 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 15 je Asn, Ser alebo Asp (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 16 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 16 je Pro, Arg alebo Ser (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 17 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 17 je Gly, Ser, Ala, Asp alebo Asn (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 18 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 18 je Leu alebo Phe (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 19 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 19 je Leu alebo Met (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 20 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 20 je Glu, Gly, Asp alebo íle (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 21 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 21 je Thr, Ser alebo Ala (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO.:1:

Xaa, Xaa₂ Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Xaa<; Xaa₇ Gin Leu Gin Xaan Xaa₁₂ Xaa^ Xaa_]4 Xaai5 Xaa₁₆ Xaa_]71 5 10 15

Xaa_]8 Xaa₁₉ Xaa₂o Xaa₂j (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:2:

(i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 21 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO.:2:

His Leu íle Tyr Leu Thr Arg Gin Leu Gin Arg Phe Ala Leu Asn Pro Gly Leu Leu íle Thr 15 10 15 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO.:3:

(i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 21 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý

SK 287917 Β6 (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:3:

Arg Leu íle Tyr Ala Thr Arg Gin Leu Gin Arg Phe Ala Val Asn Pro Gly Leu Leu íle Thr 15 10 15 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 4:

(i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 25 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: I (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 1 je Pro, Tyr alebo Phe (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 2 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 2 je íle, Val alebo Leu (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 3 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 3 je íle, Leu, Val, Ala alebo Met (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 4 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 4 je Gin, Ser, Thr alebo Val (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 5 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 5 je Asn, Asp alebo Thr (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 6 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 6 je íle, Ala, Leu alebo Met (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 7 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 7 je Gin, Glu, Lys alebo Gly (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 9 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 9 je Gin alebo íle (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 13 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 13 je odstránená (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 14 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 14 je Ala, Ser, Asn, Val alebo Pro (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 15 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 15 je íle, Leu, Met alebo Val (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 16 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 16 je Ser alebo Thr (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 17 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 17 je Pro alebo Ala (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 18 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 18 je Arg alebo Lys (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 19 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 19 je Thr alebo Ser (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 20 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 20 je Leu alebo Ser (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 21 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 21 je Asn, Phe alebo Val (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 23 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 23 je Trp, Tyr, Gly alebo nič (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 24 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 24 je Val, Leu, Gly alebo nič (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto

SK 287917 Β6 (B) UMIESTNENIE: 25 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 25 je Lys, Arg, Gly alebo nič (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 26 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 26 je Val, Ala, Cys, Gly alebo nič (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 11..12 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= nepovinne vložená spojka -Z-, ktorá je PEG, modifikovaný PEG a/alebo [Gly]_n, v ktorom n = 1,2 alebo 3 (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:4:

Xaa! Xaa₂ Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Xaa₆ Xaa₇ Gly Xaa₉ Leu Val -Z- Tyr Xaa_]4 Xaa₁₅ Xaai₆ Xaa_[7

5 10 15

Xaa₁₈ Xaaig Xaa₂o Xaa₂j Ala Xaa₂₃ Xaa₂₄ Xaa₂5 Xaa₂6 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 5:

(i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 28 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:5:

Tyr íle Leu Gin Asn íle Glu Gly Gin Leu Val Gly Gly Gly Tyr Ala íle Ser Pro Arg Thr Leu

10 15 20

Val Ala Tyr Leu Arg Gly-NH₂25 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 6:

(i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 28 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 6:

Phe íle Leu Gin Asn íle Glu Gly Gin Leu Val Gly Gly Gly Tyr Ala íle Ser Pro Arg Thr Leu

10 15 20

Val Ala Gly Gly Gly Gly-OH 25 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 7:

(i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 26 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie, prirodzená sekvencia p24 (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 7:

Pro íle Val Gin Asn íle Glu Gly Gin Met Val His Gin Ala íle Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala 15 10 15 20

Trp Val Lys Val (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 8 (i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 25 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:8

Phe íle Leu Gin Asn íle Gin Gly Gin Leu Val Gly Gly Gly Tyr Ala íle Ser Pro Arg Thr Leu 15 10 15 20

Val Ala Gly (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 9 (i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGLíA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 1 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 1 je Tyr, Trp, Phe alebo Gly (ix)(A) ZNAKY:

(B) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (C) UMIESTNENIE: 3 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 3 je Thr, Ala, Val, íle alebo Leu (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 4 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 4 je Pro alebo Ser (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 5 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 5 je Gin, His, Gly, Thr, Ser alebo Tyr (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 7 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 7 je Leu, íle alebo Val (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 8 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 8 je Asn alebo Tyr (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 9 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 9 je Thr, Met, Leu alebo Ala (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 12 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 12 je Ser, Thr alebo Asn (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 13 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 13 je Thr, íle, Val alebo Ala (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 14 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 14 je Val alebo íle (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 15 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 15 je Gly alebo nič (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 16 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 16 je Gly alebo nič (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 19 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 19 je Ala alebo Gly (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 21 (C) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 21 je Met, Leu, Cys alebo nič (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 22 (C) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 22 je Gin, Glu, His, Gly alebo nič (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 14..15 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= nepovinne vložená spojka -Z-, ktorá je PEG, modifiko vaný PEG a/alebo [Gly]_n, v ktorom n = 1, 2 alebo 3 (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 21 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Cys v polohe 21 môže tvoriť časť disulfidovej väzby (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:9

Xaal Ala Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Ala Xaa₇ Xaa₈ Xaa₉ Leu Leu Xaa^ Xaa_t3 Xaa₁₄ -Z- Xaa₁₅

5 10 15

Xaa₁₆ His Gin Xaa^₉ Ala Xaa₂i Xaa₂₂20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 10 (i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie, prirodzená sekvencia p24 (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 10

Gly Ala Thr Pro Gin Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gin Ala Ala

10 15 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 11 (i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 11

Tyr Ala íle Pro Gin Ala Leu Asn Thr Leu Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gin Ala Ala

10 15 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 12 (i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 24 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 23 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Cys v polohe 23 môže tvoriť časť disulfidovej väzby (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 12

Phe Ala íle Pro Gin Ala Leu Asn Thr Leu Leu Asn Thr Val Gly Gly Gly Gly His Gin Ala

10 15 20

Ala Cys Gly (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 13 (i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 19 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie, prirodzená sekvencia p24 (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 13

Gly Ser Asp íle Ala Gly Thr Thr Ser Thr Leu Gin Glu Gin íle Gly Trp Met Thr

10 15 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 14 (i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 19 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 14

Trp Ser Ala Leu Ala Gly Thr Thr Ser Leu Leu Gin Gly Gin Leu Gly Trp íle Thr

10 15 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 15 (i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 21 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 1 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 1 je Trp, Tyr (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 2 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 2 je Ser alebo Ala (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 7 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 7 je Thr, Ala alebo Ser (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 8 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 8 Ser alebo Thr (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 9 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 9 je Ser alebo Thr (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 11 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 11 je Leu, Pro, Val alebo Gin (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 12 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 12 je Gin, Ala alebo His (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 13 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 13 je Gly alebo Glu (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 14 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 14 je Gin alebo His (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 15 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 15 je íle, Leu,Val alebo Met (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 16 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 16 je Gly, Ala, Gin, Thr, Asn, Arg, His alebo íle (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto

SK 287917 Β6 (B) UMIESTNENIE: 17 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 17 je Trp alebo Tyr (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 18 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 18 je Thr, íle, Leu alebo Met (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 20 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 20 je Cys, Gly alebo nič (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 21 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Xaa v polohe 21 je Gly alebo nič (ix) ZNAKY:

(A) MENO/KĽÚČ: Modifikované miesto (B) UMIESTNENIE: 20 (D) ĎALŠIE INFORMÁCIE: /poznámka= Cys v polohe 20 môže tvoriť časť disulfidovej väzby (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ IDNO: 15

Xaaj Xaa₂ Ala Leu Ala Gly Xaa₇ Xaa_g Xaa₉ Leu Xaan Xaa₁₂ Xaaj₃ Xaa₁₄ Xaa^ Xaai₆ Xaa,₇1 5 10 15

Xaa_t8 Xaa_]9 Xaa₂₉ Xaa₂] (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 16 (i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 21 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie, prirodzená sekvencia p 17 (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 16

His íle Val Trp Ala Ser Arg Glu Leu Glu Arg Phe Ala Val Asn Pro Gly Leu Leu Glu Thr

5 10 15 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 17 (i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 23 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: obe (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) HYPOTETICKÁ: Nie, prirodzená sekvencia p24 (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 17

Pro íle Val Gin Asn íle Gin Gly Gin Met Val His Gin Ala íle Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Peptid odvodený od proteínu HIV-1 gag p 17, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa sekvenciu aminokyselín SEQ ID NO:3, kde terminálnymi koncami sekvencie môžu byť voľné karboxylové skupiny alebo aminoskupiny, amidy, acyly, acetyly alebo ich soli, dva alebo viac Cys zvyškov môže tvoriť časť medzireťazcovej disulfidovej väzby, mostík -S-(CH₂)_P-S- alebo -(CH2)_P-, v ktorom p = 1 - 8, prípadne s vloženým jedným alebo viacerými heteroatómami, ako je O, N alebo S, a/alebo je uvedená peptidová sekvencia imobilizovaná na tuhom nosiči.
2. Antigén, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa peptid podľa nároku 1.
3. Vakcínová kompozícia, vyznačujúca sa tým, že zahŕňa antigén podľa nároku 2 s farmaceutický prijateľným riedidlom a prípadne adjuvantom, nosičom a/alebo vehikulom a prípadne s prídavnou imunostimulačnou zlúčeninou (zlúčeninami).
4. Vakcínová kompozícia podľa nároku 3, vyznačujúca sa tým, že zahŕňa peptid SEQ ID NO: 3.
5. Vakcínová kompozícia podľa nároku 3 alebo 4, vyznačujúca sa tým, že peptidy sú rozpustené v sterilnom vodnom roztoku a prípadná imunostimulačná zlúčenina je rastový faktor kolónie granulocytových makrofágov.
6. Vakcínová kompozícia podľa ktoréhokoľvek z nárokov 3 až 5, vyznačujúca sa tým, že zahŕňa adjuvant vybratý zo skupiny monofosforyllipid A, Freundov úplný alebo neúplný adjuvant alebo hydroxid hlinitý.
7. Vakcínová kompozícia, vyznačujúca vený ako lipopeptídový a/alebo lipozómový prípravok.
8. Protilátka, vyznačujúca sa tým, zahrnutou v antigéne podľa nároku 2.
9. Nukleová kyselina, vyznačujúca sa sa tým, že antigén podľa nároku 2 je pripraže je schopná selektívne reagovať s SEQ ID NO: 3 t ý m tým, , že kóduje peptid podľa nároku L že obsahuje nukleovú kyselinu podľa nároku
10.
11.
12.
13.

Expresný vektor, vyznačujúci sa Hostiteľská bunka, vyznačujúca sa tým, že obsahuje expresný vektor podľa nároku

Antigén podľa nároku 2 na použitie na ochranu proti HIV-1.

Použitie antigénu podľa nároku 2 na prípravu liečiva na ochranu proti HIV-1.