CN114053400A - 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的疫苗及其制备方法 - Google Patents
一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的疫苗及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114053400A CN114053400A CN202010789851.4A CN202010789851A CN114053400A CN 114053400 A CN114053400 A CN 114053400A CN 202010789851 A CN202010789851 A CN 202010789851A CN 114053400 A CN114053400 A CN 114053400A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- conjugate
- seq
- amino acid
- acid sequence
- crm197
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 72
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 title claims abstract description 20
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 18
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 47
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 32
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims abstract description 7
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 195
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 168
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 161
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 103
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 claims description 86
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 61
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 13
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 9
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 8
- 102100033620 Calponin-1 Human genes 0.000 claims description 7
- 101000945318 Homo sapiens Calponin-1 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000652736 Homo sapiens Transgelin Proteins 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 7
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 claims description 4
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 claims description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 3
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 3
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 10
- 238000012827 research and development Methods 0.000 abstract description 7
- 206010064091 Iatrogenic infection Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 4
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 abstract description 4
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 abstract description 3
- 238000010923 batch production Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 40
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 24
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 22
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 16
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 13
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 11
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 9
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 7
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 6
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 6
- MXRIRQGCELJRSN-UHFFFAOYSA-N O.O.O.[Al] Chemical compound O.O.O.[Al] MXRIRQGCELJRSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940022962 COVID-19 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 3
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 3
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- IXIWEFWRKIUMQX-DCAQKATOSA-N Asp-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O IXIWEFWRKIUMQX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000127282 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 2
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 2
- 101000629318 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 229940126580 vector vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- BQRXMLXVGQMIBO-UHFFFAOYSA-N 1,1-bis(sulfanyl)ethanol Chemical compound CC(O)(S)S BQRXMLXVGQMIBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LMFXXZPPZDCPTA-ZKWXMUAHSA-N Ala-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N LMFXXZPPZDCPTA-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- AJBVYEYZVYPFCF-CIUDSAMLSA-N Ala-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AJBVYEYZVYPFCF-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UHFUZWSZQKMDSX-DCAQKATOSA-N Arg-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N UHFUZWSZQKMDSX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- LXMKTIZAGIBQRX-HRCADAONSA-N Arg-Phe-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O LXMKTIZAGIBQRX-HRCADAONSA-N 0.000 description 1
- IARGXWMWRFOQPG-GCJQMDKQSA-N Asn-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IARGXWMWRFOQPG-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- XVAPVJNJGLWGCS-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Asn Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N XVAPVJNJGLWGCS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- UBKOVSLDWIHYSY-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UBKOVSLDWIHYSY-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- DMLSCRJBWUEALP-LAEOZQHASA-N Asn-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DMLSCRJBWUEALP-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- SUEIIIFUBHDCCS-PBCZWWQYSA-N Asn-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SUEIIIFUBHDCCS-PBCZWWQYSA-N 0.000 description 1
- PHJPKNUWWHRAOC-PEFMBERDSA-N Asn-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N PHJPKNUWWHRAOC-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- IBLAOXSULLECQZ-IUKAMOBKSA-N Asn-Ile-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O IBLAOXSULLECQZ-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- UHGUKCOQUNPSKK-CIUDSAMLSA-N Asn-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N UHGUKCOQUNPSKK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HRGGPWBIMIQANI-GUBZILKMSA-N Asp-Gln-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HRGGPWBIMIQANI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MYLZFUMPZCPJCJ-NHCYSSNCSA-N Asp-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MYLZFUMPZCPJCJ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000288673 Chiroptera Species 0.000 description 1
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- PRXCTTWKGJAPMT-ZLUOBGJFSA-N Cys-Ala-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PRXCTTWKGJAPMT-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- WDQXKVCQXRNOSI-GHCJXIJMSA-N Cys-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WDQXKVCQXRNOSI-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- MKMKILWCRQLDFJ-DCAQKATOSA-N Cys-Lys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MKMKILWCRQLDFJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- IDZDFWJNPOOOHE-KKUMJFAQSA-N Cys-Phe-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N IDZDFWJNPOOOHE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- YQEHNIKPAOPBNH-DCAQKATOSA-N Cys-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N YQEHNIKPAOPBNH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- YPMDZWPZFOZYFG-GUBZILKMSA-N Gln-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YPMDZWPZFOZYFG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LPIKVBWNNVFHCQ-GUBZILKMSA-N Gln-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LPIKVBWNNVFHCQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YLABFXCRQQMMHS-AVGNSLFASA-N Gln-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O YLABFXCRQQMMHS-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- LKDIBBOKUAASNP-FXQIFTODSA-N Glu-Ala-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LKDIBBOKUAASNP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- JVSBYEDSSRZQGV-GUBZILKMSA-N Glu-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JVSBYEDSSRZQGV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LGYCLOCORAEQSZ-PEFMBERDSA-N Glu-Ile-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LGYCLOCORAEQSZ-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N Glu-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- KIEICAOUSNYOLM-NRPADANISA-N Glu-Val-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KIEICAOUSNYOLM-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- FVGOGEGGQLNZGH-DZKIICNBSA-N Glu-Val-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 FVGOGEGGQLNZGH-DZKIICNBSA-N 0.000 description 1
- YMUFWNJHVPQNQD-ZKWXMUAHSA-N Gly-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN YMUFWNJHVPQNQD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- XBWMTPAIUQIWKA-BYULHYEWSA-N Gly-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CN XBWMTPAIUQIWKA-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- HUFUVTYGPOUCBN-MBLNEYKQSA-N Gly-Thr-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HUFUVTYGPOUCBN-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- 101710114810 Glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- JLWLMGADIQFKRD-QSFUFRPTSA-N Ile-His-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CN=CN1 JLWLMGADIQFKRD-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N Ile-Thr-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)O)N YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- ZRLUISBDKUWAIZ-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O ZRLUISBDKUWAIZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VCSBGUACOYUIGD-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O VCSBGUACOYUIGD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KOSWSHVQIVTVQF-ZPFDUUQYSA-N Leu-Ile-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KOSWSHVQIVTVQF-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- ONPJGOIVICHWBW-BZSNNMDCSA-N Leu-Lys-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 ONPJGOIVICHWBW-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- BIZNDKMFQHDOIE-KKUMJFAQSA-N Leu-Phe-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BIZNDKMFQHDOIE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- FACUGMGEFUEBTI-SRVKXCTJSA-N Lys-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FACUGMGEFUEBTI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LPAJOCKCPRZEAG-MNXVOIDGSA-N Lys-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN LPAJOCKCPRZEAG-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- XYLSGAWRCZECIQ-JYJNAYRXSA-N Lys-Tyr-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XYLSGAWRCZECIQ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- RIPJMCFGQHGHNP-RHYQMDGZSA-N Lys-Val-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O RIPJMCFGQHGHNP-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000025370 Middle East respiratory syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XYHMFGGWNOFUOU-QXEWZRGKSA-N Pro-Ile-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XYHMFGGWNOFUOU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- AJBQTGZIZQXBLT-STQMWFEESA-N Pro-Phe-Gly Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 AJBQTGZIZQXBLT-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- CNUIHOAISPKQPY-HSHDSVGOSA-N Pro-Thr-Trp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O CNUIHOAISPKQPY-HSHDSVGOSA-N 0.000 description 1
- XDKKMRPRRCOELJ-GUBZILKMSA-N Pro-Val-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XDKKMRPRRCOELJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 229940124680 SARS vaccine Drugs 0.000 description 1
- WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N Ser-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CCCN=C(N)N WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- KAAPNMOKUUPKOE-SRVKXCTJSA-N Ser-Asn-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KAAPNMOKUUPKOE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IOVHBRCQOGWAQH-ZKWXMUAHSA-N Ser-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O IOVHBRCQOGWAQH-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- KZPRPBLHYMZIMH-MXAVVETBSA-N Ser-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KZPRPBLHYMZIMH-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- PJIQEIFXZPCWOJ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PJIQEIFXZPCWOJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- QYBRQMLZDDJBSW-AVGNSLFASA-N Ser-Tyr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QYBRQMLZDDJBSW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- HSWXBJCBYSWBPT-GUBZILKMSA-N Ser-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)C(O)=O HSWXBJCBYSWBPT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 101710167605 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 1
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- LMMDEZPNUTZJAY-GCJQMDKQSA-N Thr-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O LMMDEZPNUTZJAY-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- BNGDYRRHRGOPHX-IFFSRLJSSA-N Thr-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C(O)=O BNGDYRRHRGOPHX-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- WYKJENSCCRJLRC-ZDLURKLDSA-N Thr-Gly-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O WYKJENSCCRJLRC-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- WNQJTLATMXYSEL-OEAJRASXSA-N Thr-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O WNQJTLATMXYSEL-OEAJRASXSA-N 0.000 description 1
- GVMXJJAJLIEASL-ZJDVBMNYSA-N Thr-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GVMXJJAJLIEASL-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- ICNFHVUVCNWUAB-SZMVWBNQSA-N Trp-Arg-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N ICNFHVUVCNWUAB-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- KXUKIBHIVRYOIP-ZKWXMUAHSA-N Val-Asp-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N KXUKIBHIVRYOIP-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- TZVUSFMQWPWHON-NHCYSSNCSA-N Val-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N TZVUSFMQWPWHON-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- CPTQYHDSVGVGDZ-UKJIMTQDSA-N Val-Gln-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N CPTQYHDSVGVGDZ-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 1
- IECQJCJNPJVUSB-IHRRRGAJSA-N Val-Tyr-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O IECQJCJNPJVUSB-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018265 Virus Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010066342 Virus Receptors Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 108010054812 diprotin A Proteins 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 108010057083 glutamyl-aspartyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010090037 glycyl-alanyl-isoleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 108010047926 leucyl-lysyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229940023146 nucleic acid vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000009521 phase II clinical trial Methods 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011020 pilot scale process Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 229940126583 recombinant protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及免疫学技术、生物技术及生物医药领域，具体涉及一种预防新型冠状病毒肺炎COVID‑19的疫苗及其制备方法。一种免疫原性偶联物的组合物包括含有相同载体蛋白的免疫原性偶联物至少两种组合或含有2种不同载体蛋白的免疫原性偶联物至少两种组合。所述免疫原性偶联物的组合物用于制备预防COVID‑19的疫苗。该疫苗相对于传统的弱毒苗和灭活苗以及其他几种新型的疫苗，能够快速应对病毒变异；降低疫苗生产所需的场地要求，易于大规模批量生产；减少研发成本及研发周期；安全、无毒、稳定；由于其分子结构小而简单，很少会出现严重的并发症及医源性感染问题。
Description
技术领域
本发明涉及免疫学技术、生物技术及生物医药领域，具体涉及一种预防新型冠状病毒肺炎COVID-19的疫苗及其制备方法。
背景技术
冠状病毒是一种带有RNA的正向包膜病毒，其基因组大小约为26～32kb，是已知基因组最大的RNA病毒。基因组RNA和磷酸化核衣壳(N)蛋白被埋在磷脂双层中并被刺突糖蛋白三聚体(S)覆盖，膜(M)蛋白(III型跨膜糖蛋白)和包膜(E)蛋白位于病毒包膜的S蛋白之间。冠状病毒具有多种宿主，包括禽类和哺乳动物，特别是蝙蝠。冠状病毒是在自然界中广泛存在的一类病毒，可引起包括呼吸道、消化道及神经系统在内的多系统疾病，高致病性冠状病毒感染已成为近10年来广受关注的公共卫生问题。2002年11月，首例严重急性呼吸系统综合症(SARS)发生在中国佛山。2012年，中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)是21世纪发现的第二种高致病性冠状病毒。MERS-CoV的死亡率很高，多达40％的患者死亡。2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)于2019年12月首次发现，其感染导致的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)正在影响全球上百万的患者。
COVID-19患者会出现不同程度的症状，从发烧或轻度咳嗽到肺炎，更严重者甚至死亡。目前COVID-19的致死率约为2％至4％，尽管死亡率低于SARS和MERS，但新型冠状病毒(SARS-CoV-2)具有潜伏期长、传染性强和重症率较高的特点，与引发非典型肺炎的SARS病毒不同，部分病例潜伏期具有传染性，另有一些病毒携带者没有表现出任何明显症状，这增加了疫情的防控难度。因此，快速研制出能够提升群体免疫水平并阻断病毒传播的预防疫苗已成为全球当前最为迫切的重大需求。
SARS-CoV-2的核衣壳由核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein，N)包裹单股正链RNA形成；外有包膜，嵌有三种糖蛋白：刺突蛋白(spikeprotein，S)、包膜蛋白(envelopeprotein，E)和膜蛋白(membrane protein，M)。S蛋白位于病毒最外层，在膜上规则排列成冠状结构，参与病毒与宿主细胞表面的病毒受体结合并介导病毒通过膜融合进入细胞的过程，在诱导宿主产生中和抗体过程中起重要作用。目前国内外COVID-19疫苗的研发均是以S蛋白作为首要目标抗原，但有报道称同属冠状病毒的SARS-CoV的S蛋白也可能诱发抗体依赖性免疫增强反应(ADE)，因此筛选S蛋白中特异性片段(即多肽)作为抗原，可以有效的预防COVID-19同时避免潜在ADE的发生。
自18世纪末期人类首次应用生物制品牛痘疫苗以来，疫苗已在消除多种传染病中发挥了不可替代的作用。在COVID-19被确认后，国内外多家机构开展了COVID-19疫苗的研究，目前有至少5条技术路线在同步开展，包括核酸疫苗、病毒载体疫苗、灭活疫苗、重组蛋白疫苗、减毒流感病毒载体疫苗等，但鉴于疫苗的自身特点，疫苗要严格按照国家规定的研发生产流程进行，在动物实验通过后，还必须完成中试研究、临床申报及I～III期的临床试验研究，获得批准后才有可能正式进入生产阶段。SARS疫苗被搁置至今，正是因为II期临床试验后，疫情已完全控制，无法再进行Ⅲ期试验。目前对COVID-19疫苗的后期临床实试验设计还不明确，需要制定其多国参与方案，以确定候选疫苗的安全有效。因此，全部在研疫苗尚未得到上市许可。
传统疫苗是将病原体灭活或减毒制成的，存在生物危害性和遗传变异致使原疫苗效力丧失等问题。表位疫苗是用抗原表位制备的疫苗，是目前研制感染性疾病疫苗的方向。相对于传统的弱毒苗和灭活苗及其他几种新型的疫苗，合成肽类疫苗安全、无毒、稳定，由于其分子结构小而简单，很少会出现严重的并发症及医源性感染问题。合成肽疫苗是按照病原体抗原基因中已知或者预测的某段抗原表位氨基酸序列，通过化学技术合成具有抗原性的短肽，与载体结合后加入佐剂所制成的疫苗，是最为理想和安全的新型疫苗，也是目前在研的用于预防、控制感染性疾病和治疗恶性肿瘤的新型疫苗。
发明内容
鉴于现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种预防新型冠状病毒肺炎COVID-19的疫苗及其制备方法。本发明提供的合成肽疫苗是基于COVID-19病毒S蛋白序列，筛选出具有特异性抗原性的序列，将其合成目标多肽，将合成的目标多肽通过与载体蛋白结合制备成多肽偶联物，向偶联物的组合物加入佐剂制备成疫苗，用于COVID-19病毒的预防，相对于传统的弱毒苗和灭活苗以及其他几种新型的疫苗，本发明提供的疫苗能够快速应对病毒变异；降低疫苗生产所需的场地要求，易于大规模批量生产；减少研发成本及研发周期；安全、无毒、稳定；由于其分子结构小而简单，很少会出现严重的并发症及医源性感染问题。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。
一种免疫原性偶联物的组合物包括含有相同载体蛋白的免疫原性偶联物至少两种组合或含有2种不同载体蛋白的免疫原性偶联物至少两种组合。
进一步地，所述的免疫原性偶联物，包括抗原性多肽，所述免疫原性偶联物是通过多肽偶联的方法将抗原性多肽与载体蛋白交联制得。
进一步地，所述抗原性多肽的氨基酸序列选自以下任意一种。
1)氨基酸序列是SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.11所示的多肽。
2)与SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.11所示氨基酸序列具有85％以上相同氨基酸序列的多肽。
3)将SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.11所示氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到具有相同功能的多肽。
进一步地，所述的载体蛋白为白喉无毒突变体CRM197、破伤风类毒素TT、白喉类毒素DT或脑膜炎球菌外膜蛋白M-OMP中的任意一种。
进一步地，所述抗原性多肽与所述载体蛋白的摩尔比为：1：1-1：30。
进一步地，所述抗原性多肽与所述载体蛋白的结合率为40％以上。
优选的，所述免疫原性偶联物的组合物选自以下任意一种。
(1)氨基酸序列是SEQ ID NO.4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ IDNO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.6所示多肽与CRM197的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO.7所示多肽与CRM197的偶联物组成。
(2)氨基酸序列是SEQ ID NO.4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ IDNO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.6所示多肽与TT的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO.7所示多肽与TT的偶联物组成。
(3)氨基酸序列是SEQ ID NO.4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ IDNO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.6所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.7所示多肽与CRM197的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示多肽与CRM197的偶联物组成。
(4)氨基酸序列是SEQ ID NO.4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ IDNO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.6所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.7所示多肽与CRM197的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示多肽与TT的偶联物组成。
(5)氨基酸序列是SEQ ID NO.4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ IDNO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.6所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.7所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示多肽与CRM197的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示多肽与CRM197的偶联物组成。
(6)氨基酸序列是SEQ ID NO.4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ IDNO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.6所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.7所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示多肽与CRM197的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示多肽与M-OMP的偶联物组成。
(7)氨基酸序列是SEQ ID NO.4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ IDNO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.6所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.7所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.10所示多肽与M-OMP的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO.11所示多肽与DT的偶联物组成。
(8)氨基酸序列是SEQ ID NO.4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ IDNO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.6所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.7所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.10所示多肽与TT的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO.11所示多肽与TT的偶联物组成。
(9)氨基酸序列是SEQ ID NO.1-11所有多肽与CRM197的偶联物组成。
一种预防新型冠状病毒肺炎COVID-19的疫苗，其活性成分包括上述免疫原性偶联物的组合物。
进一步地，所述疫苗还包括药学上可接受的佐剂。
进一步地，所述佐剂为氢氧化铝(Al(OH)3)、磷酸铝(AlPO4)、单磷酸脂质A(MPL)或寡核苷酸(CpG)的一种或多种组合。
进一步地，所述佐剂为给予人类，其含量为每剂量1μg-1000μg，优选每剂量10μg-500μg，更优选每剂量10μg-200μg，更优选每剂量10-100μg，最优选每剂量10-50μg。
进一步地，所述疫苗为任何药学上可接受的剂型，包括肌肉注射、皮下注射、皮内注射、微针注射的给药方式。
进一步地，所述疫苗为任何药学上可接受的剂量。
所述疫苗的制备方法，具体包括以下步。
步骤1、使用全自动微波多肽合成仪，采用Fmoc固相合成法，添加固相载体、不同的氨基酸、脱除剂和多肽缩合试剂等，进行目标多肽的全自动合成。
步骤2、将步骤1合成的多肽通过Linker分别与药学上可接受的载体蛋白(包括白喉无毒突变体CRM197、破伤风类毒素TT、白喉类毒素DT或脑膜炎球菌外膜蛋白中的任意一种)进行共缀结合，形成免疫原性偶联物。其中，所用Linker优选SMCC或DSAP。
步骤3、将步骤2制备免疫原性偶联物与药学上可接受的佐剂混合制备成疫苗。
进一步地，所述步骤3具体方法是取免疫原性偶联物与佐剂、PBS溶液混合，室温摇床1小时，30RPM，所得终浓度含多肽抗原100μg/ml、佐剂0.5mg/ml，即为最终样品；或者首先将免疫原性偶联物吸附到铝佐剂上，室温摇床1小时，30RPM，随后加入MPL或者CpG佐剂，室温摇床1小时，30RPM，所得终浓度含多肽抗原100μg/ml、铝佐剂0.5mg/ml、MPL或者CpG含量为0.5mg/ml，即为最终样品；或者将制备的单肽吸附疫苗，等量混合，摇匀，即得多肽疫苗。
所述免疫原性偶联物的组合物在制备用于预防或治疗新型冠状病毒肺炎COVID-19的药物中的应用。
进一步地，所述药物为任何药学上可接受的剂型。
进一步地，所述药物为任何药学上可接受的剂量。
与现有技术比，本发明的有益效果如下。
本发明提供的合成多肽是基于COVID-19病毒S蛋白序列中筛选出具有特异性抗原性的序列，将其合成目标多肽，降低疫苗生产所需的场地要求，易于大规模批量生产；将合成目标多肽通过与载体蛋白结合制备成多肽偶联物，加入佐剂制备成为合成肽疫苗，用于COVID-19病毒的预防，相对于传统的弱毒苗和灭活苗以及其他几种新型的疫苗，合成肽类疫苗安全、无毒、稳定，由于其分子结构小而简单，很少会出现严重的并发症及医源性感染问题。
本发明提供的多肽基于COVID-19病毒S蛋白序列中筛选出具有特异性抗原性的序列，并在体外合成短肽，将多种短肽组合，与全序列相比可以降低副作用发生风险；现有报道表明COVID-19病毒已发生变异，与本发明提供的多肽序列对比，未发生所有序列同时变异现象，有效的降低变异导致的抗原性损失，同时可以快速筛选出序列变异部分，增加新的短肽，合成制备新疫苗，能够快速应对病毒变异，减少研发成本及研发周期。
本发明提供预防COVID-19的疫苗，采用多肽与蛋白载体结合技术，增强了人体免疫反应，放大多肽抗原性，增加中和抗体产生，增强疫苗效力，同时采用不同佐剂及不同给药方式，具有普遍适用性，适应多年龄段人群使用。
附图说明
图1是SDS-PAGE检测偶联物中载体蛋白结合的电泳图。
图2是SDS-PAGE检测偶联物中载体蛋白结合的电泳图。
图3是SDS-PAGE检测偶联物中载体蛋白结合的电泳图。
图4是SDS-PAGE检测偶联物中载体蛋白结合的电泳图。
图5是SDS-PAGE检测偶联物中载体蛋白结合的电泳图。
图6是SDS-PAGE检测偶联物中载体蛋白结合的电泳图。
图7是SDS-PAGE检测偶联物中载体蛋白结合的电泳图。
图8是SDS-PAGE检测偶联物中载体蛋白结合的电泳图。
图9是两种四价肽疫苗与不同佐剂组合后抗体水平。
图10是两种五价肽疫苗与不同佐剂组合后抗体水平。
图11是两种六价肽疫苗与不同佐剂组合后抗体水平。
图12是两种七价肽疫苗与不同佐剂组合后抗体水平。
图13是十一价肽疫苗与不同佐剂组合后抗体水平。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步的阐述，以下实施例仅为本发明的优选实施例，并不限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
实施例1目标多肽的合成方法。
1、采用常规的固相合成多肽的方法，制备了氨基酸序列是SEQ ID NO.1-SEQNO.11所示的多肽，具体步骤如下。
(1)脱Fmoc保护。
将市售的Rink Amide AM resin装入一个有过滤器且耐有机溶剂的反应管中，并用一个耐有机溶剂的盖子盖紧。用DMF(二甲基甲酰胺)洗涤1分钟后，加入过量的20％哌啶/DMF(体积比)溶液，盖紧后轻轻摇晃反应管，使之混合均匀并保持脱除Fmoc保护15分钟。抽干后再用DMF洗涤三次。
(2)肽键缩合。
将经过预活化(预活化2-3分钟后)的3倍树脂氨基摩尔量的Fmoc保护的氨基酸、3倍树脂氨基摩尔等量的活化剂HBTU、以及6倍树脂氨基摩尔等量的DIPEA(N，N-二异丙基乙基胺)加入反应管中，使用DMF作为溶剂，并保证以上的试剂完全溶解，可完全覆盖树脂。每隔2-3分钟摇晃混匀树脂一次，反应20-30分钟。
然后，室温下加入50倍摩尔过量的乙酸酐DMF溶液后10分钟抽干，再在室温下加入过量的20％哌啶/DMF(体积比)溶液反应30分钟。过滤掉溶液，树脂用DMF洗涤5次。
以上步骤循环反复执行，直到拟合成多肽的全部Fmoc保护氨基酸按线性方式连接到树脂上。
(3)多肽裂解。
多肽裂解液选用强酸处理，比如TFA(三氟乙酸)。室温下用TFA\水\EDT二巯基乙醇\苯酚(体积比：92.5：2.5：2.5：2.5)处理树脂2小时。然后仔细收集裂解液到一个玻璃收集器中，并加入用冰预冷的乙醚，收集沉淀多肽，并继续用冷乙醚洗涤5-6次，得到粗品肽。
(4)多肽纯化。
粗品肽经过HPLC(高效液相色谱)纯化，收集，冻干，最终再经HPLC检验纯度(214nm波长)大于85％及质谱检验正确的分子量。
2.鉴定结果。
合成多肽化合物的纯度以及分子量结果见表1。
表1.氨基酸序列是SEQ ID NO.1-SEQ NO.11所示的多肽结果。
SEQ ID NO.1-SEQ NO.11所示的多肽经特异性抗原性实验测定具有较强的抗原性强，可在人体内诱导出中和抗体。
实施例2免疫原性偶联物的制备方法。
实施例1得到的合成肽(S1-S11)通过SMCC LINKER或DSAP LINKER分别与CRM197、TT、DT、M-M-OMP形成偶联物的列表见表2。
TT破伤风毒素蛋白、破伤风毒素，可以通过破伤风杆菌，经过发酵，裂解，离心，层析纯化获得。
DT白喉毒素蛋白、白喉毒素载体蛋白DT，可以通过白喉杆菌，经过发酵，裂解，离心，层析纯化获得。
CRM197重组白喉毒素蛋白，CRM197是基因序列重新构建的白喉杆菌，经过发酵，裂解，离心，层析纯化获得。
脑膜炎球菌外膜蛋白(M-OMP)，脑膜炎球菌，经过发酵，裂解，离心，层析纯化获得。
1.合成肽(S1-S11)通过SMCC LINKER或DSAP LINKER与CRM197结合成偶联物。
CRM197蛋白用含有2mM的EDTA的PBS溶液配制成浓度为1mg/ml溶液。取需要量的CRM197溶液，按照摩尔比1:2-1:40加入Sulfo-SMCC(10mg/ml)，室温反应1小时，反应液用超滤浓缩管于4℃，3500rpm离心浓缩。体积浓缩至反应液的1/10后加入PBS至原反应液体积，继续离心浓缩，连续离心浓缩5次以去除游离Sulfo-SMCC。最终获得的CRM197-SMCC储液浓度为10mg/ml。称取需要量的合成肽(S1-S4，S6，S8-11)，用PBS或含有10％DMSO PBS溶液溶解，按照摩尔比15:1-1:1加入CRM197-SMCC储液，可添加PBS至适宜的反应体积，室温反应1h，SDS-PAGE检测共缀情况，电泳图如图1和2所示。
称取需要量的合成肽(S5和S7)，用DMSO溶解，按照摩尔比1:2-1:30加入DSAP(10mg/ml DMSO溶液)混合，加入三乙胺(30倍摩尔比)，室温反应过夜，加入500μl NaPi(PH7.4，0.1M)，用1ml氯仿提取三次，离心后将水相加入到CRM197(2mg/ml NaPi(PH7.4，0.1M))溶液中，合成肽与CRM197蛋白的摩尔比为10:1-1:1，室温反应24小时，SDS-PAGE检测共缀情况，电泳图如图1和图2所示。
2.合成肽(S1-S11)通过SMCC LINKER或DSAP LINKER与TT蛋白结合成偶联物。
TT蛋白用含有2mM的EDTA的PBS溶液配制成浓度为1mg/ml溶液，取需要量的TT蛋白溶液按照摩尔比1:2-1:40加入Sulfo-SMCC(10mg/ml)，室温反应1小时，反应液用超滤浓缩管于4℃，3500rpm离心浓缩。体积浓缩至反应液的1/10后加入PBS至原反应液体积，继续离心浓缩，连续离心浓缩5次以去除游离Sulfo-SMCC。最终获得的TT-SMCC储液浓度为10mg/ml。称取需要量的合成肽(S1-S4，S6，S8-11)用PBS或含有10％DMSO PBS溶液溶解，按照摩尔比15:1-1:1加入TT-SMCC储液，可添加PBS至适宜的反应体积，室温反应1h，SDS-PAGE检测共缀情况，电泳图如图3和图4所示。
称取需要量的合成肽(S5和S7)用DMSO溶解，按照摩尔比1:2-1:30加入DSAP(10mg/mlDMSO溶液)混合，加入三乙胺(30倍摩尔比)，室温反应过夜，加入500μl NaPi(PH7.4，0.1M)，用1ml氯仿提取三次，离心后将水相加入到TT(2mg/ml NaPi(PH7.4，0.1M))溶液中，合成肽与TT蛋白的摩尔比为10:1-1:1，室温反应24小时，SDS-PAGE检测共缀情况，电泳图如图3和图4所示。
3.合成肽(S1-S11)通过SMCC LINKER或DSAP LINKER与DT结合成偶联物。
DT蛋白用含有2mM的EDTA的PBS溶液配制成浓度为1mg/ml溶液，取需要量的DT溶液，按照摩尔比1:2-1:40加入Sulfo-SMCC(10mg/ml)，室温反应1小时，反应液用超滤浓缩管于4℃，3500rpm离心浓缩。体积浓缩至反应液的1/10后加入PBS至原反应液体积，继续离心浓缩，连续离心浓缩5次以去除游离Sulfo-SMCC。最终获得的DT-SMCC储液浓度为10mg/ml。称取需要量的合成肽(S1-S4，S6，S8-11)用PBS或含有10％DMSO PBS溶液溶解，按照摩尔比15:1-1:1加入DT-SMCC储液，可添加PBS至适宜的反应体积，室温反应1h，SDS-PAGE检测共缀情况，电泳图如图5和图6所示。
称取需要量的合成肽(S5和S7)用DMSO溶解，按照摩尔比1:2-1:30加入DSAP(10mg/ml DMSO溶液)混合，加入三乙胺(30倍摩尔比)，室温反应过夜，加入500μl NaPi(PH7.4，0.1M)，用1ml氯仿提取三次，离心后将水相加入到DT(2mg/ml NaPi(PH7.4，0.1M))溶液中，合成肽与DT蛋白的摩尔比为10:1-1:1，室温反应24小时，SDS-PAGE检测共缀情况，电泳图如图5和图6所示。
4.合成肽(S1-S11)通过SMCC LINKER或DSAP LINKER与M-OMP结合成偶联物。
M-OMP蛋白用含有2mM的EDTA的PBS溶液配制成浓度为1mg/ml溶液.取需要量的M-OMP溶液，按照摩尔比1:2-1:40加入Sulfo-SMCC(10mg/ml)，室温反应1小时，反应液用用超滤浓缩管于4℃，3500rpm离心浓缩。体积浓缩至反应液的1/10后加入PBS至原反应液体积，继续离心浓缩，连续离心浓缩5次以去除游离Sulfo-SMCC。最终获得的M-OMP-SMCC储液浓度为10mg/ml。称取需要量的合成肽(S1-S4，S6，S8-11)，用PBS或含有10％DMSO PBS溶液溶解，按照摩尔比15:1-1:1加入M-OMP-SMCC储液，可添加PBS至适宜的反应体积，室温反应1h，SDS-PAGE检测共缀情况，电泳图如图7和图8所示。
称取需要量的合成肽(S5和S7)用DMSO溶解，按照摩尔比1:2-1:30加入DSAP(10mg/ml DMSO溶液)混合，加入三乙胺(30倍摩尔比)，室温反应过夜，加入500μlNaPi(PH7.4，0.1M)，用1ml氯仿提取三次，离心后将水相加入到M-OMP(2mg/ml NaPi(PH7.4，0.1M))溶液中，合成肽与M-OMP蛋白的摩尔比为10:1-1:1，室温反应24小时，SDS-PAGE检测共缀情况，电泳图如图7和图8所示。
表2.多肽与不同载体结合列表。
注：命名规则：“载体首字母”+“多肽编号”。
实施例3四价肽疫苗的制备及免疫效果。
一、疫苗制备。
1、材料。
实施例2中制备的多肽偶联物。
佐剂：氢氧化铝(Al(OH)3)、磷酸铝(AlPO4)、MPL、CpG。
2、制备方法。
选取实施例2中的合成肽与不同载体蛋白结合后的免疫原性偶联物，优选序列SEQID NO.4、5、6、7不同免疫原性偶联物，与不同佐剂组合，制备四价肽疫苗，四种多肽总浓度为100ug/ml，具体组合方案见表3。
表3.多肽偶联物与佐剂交叉组合方案。
注：组合序号命名规则：按照数字大小排列偶联物，“偶联物载体首字母”+“佐剂编号”。
二、免疫效果实验。
将表3中的疫苗免疫小鼠进行免疫原性的研究，将体重为12-14g的健康BALB/c小鼠随机分组，每组8-10只小鼠；将下表中的待测样品对小鼠后肢进行肌肉注射，于第0天、第14天、第28天各肌肉注射1次，每次给药体积为100uL/只，分别于第0天和第28天注射前采血1次，静置过夜后分离血清，将血清稀释后，采用酶联免疫吸附(ELISA)方法，测定第0天和第21天血清中的抗体水平，具体操作为。
(1)包被液(0.05M碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液)将多肽储备液稀释为终浓度为5μg/ml的工作液(DMSO含量不高于0.05％)，充分混匀后按100μl/孔加入酶标板，贴上封片纸，2～8℃过夜包被。
(2)吸掉上清，PBST洗5遍，加入100ul 1％BSA的PBS室温封闭1h。
(3)PBST洗5次。
(4)加样：加入100ul稀释后的血清样品，室温孵育2h，用PBST洗5次。
(5)加酶标抗体：加入100ul稀释后山羊抗小鼠IgG HRP酶标二抗，室温孵育1h。
(6)PBST洗5次。
(7)加底物液显色：加入100ul TMB显色。
(8)终止反应：加入50ul 1N硫酸终止反应。
(9)结果判定：测OD450值，结果见表4和图9。
表4.两种四肽疫苗与不同佐剂组合后抗体水平。
图9表明，两种四价肽疫苗的抗体滴度均能达到0.9以上，不同组合差异不明显，加入佐剂后能显著增加抗体水平，不同佐剂间差异不明显。
实施例4五价肽疫苗的制备及免疫效果。
一、疫苗制备。
1、材料。
实施例2中制备的多肽偶联物。
佐剂：氢氧化铝(Al(OH)3)、磷酸铝(AlPO4)、MPL、CpG。
2、制备方法。
选取实施例2中的合成肽与不同载体蛋白结合后的免疫原性偶联物，选取实施例3中四肽疫苗中C4+C5+C6+C7，选取增加序列SEQ ID NO.2免疫原性偶联物，与不同佐剂组合，制备五价肽疫苗，五种多肽的总浓度为100ug/ml，具体组合方案见表5。
表5.多肽偶联物与佐剂交叉组合方案。
注：组合序号命名规则：“四肽疫苗命名为4”+“偶联物载体首字母”+“佐剂编号”。
二、免疫效果实验。
参照实施例3中免疫效果检测方法，检测免疫效果，结果见表6和图10。
表6.两种五肽疫苗与不同佐剂组合后抗体水平。
图10表明，两种五价肽疫苗的抗体滴度均能达到0.9以上，不同组合差异不明显，加入佐剂后能显著增加抗体水平，不同佐剂间差异不明显。
实施例5六价肽疫苗的制备及免疫效果。
一、疫苗制备。
1、材料。
实施例2中制备的多肽偶联物。
佐剂：氢氧化铝(Al(OH)3)、磷酸铝(AlPO4)、MPL、CpG。
2、制备方法。
选取实施例2中的合成肽与不同载体蛋白结合后的免疫原性偶联物，选取实施例4中五肽疫苗中C4+C5+C6+C7+C2组合，增加序列SEQ ID NO.1免疫原性偶联物，与不同佐剂组合，制备六价肽疫苗，多肽的终总浓度为100ug/ml，具体组合方案见表7。
表7.多肽偶联物与佐剂交叉组合方案。
注：组合序号命名规则：“五肽疫苗命名为5”+“偶联物载体首字母”+“佐剂编号”。
二、免疫效果实验。
参照实施例3中免疫效果检测方法，检测免疫效果。结果见表8和图11。
表8.两种六肽疫苗与不同佐剂组合后抗体水平。
图11表明，两种六价肽疫苗的抗体滴度均能达到0.9以上，不同组合差异不明显，加入佐剂后能显著增加抗体水平，不同佐剂间差异不明显。
实施例6七价肽疫苗的制备及免疫效果。
一、疫苗制备。
1、材料。
实施例2中制备的多肽偶联物。
佐剂：氢氧化铝(Al(OH)3)、磷酸铝(AlPO4)、MPL、CpG。
2、制备方法。
选取实施例2中的合成肽与不同载体蛋白结合后的免疫原性偶联物，选取实施例5中五价肽疫苗中C4+C5+C6+C7+C2+C1组合，增加序列SEQ ID NO.10、11免疫原性偶联物，与不同佐剂组合，制备七价肽疫苗，多肽的终总浓度为100ug/ml，具体组合方案见表9。
表9.多肽偶联物与佐剂交叉组合方案。
注：组合序号命名规则：“五肽疫苗命名为5”+“偶联物载体首字母”+“佐剂编号”。
二、免疫效果实验。
参照实施例3中免疫效果检测方法，检测免疫效果结果见表10和图12。
表10.两种七价肽疫苗与不同佐剂组合后抗体水平。
图12表明，两种七价肽疫苗的抗体滴度均能达到0.9以上，不同组合差异不明显，加入佐剂后能显著增加抗体水平，不同佐剂间差异不明显。
实施例6十一价肽疫苗的制备及免疫效果。
一、疫苗制备。
1、材料。
实施例2中制备的多肽偶联物。
佐剂：氢氧化铝(Al(OH)3)、磷酸铝(AlPO4)、MPL、CpG。
2、制备方法。
选取实施例2中的所有合成肽与CRM197载体蛋白结合后的免疫原性偶联物，与不同佐剂组合，制备十一价肽疫苗，十一种多肽的终总浓度为100ug/ml的疫苗，具体组合方案见表11。
表11.多肽偶联物与佐剂交叉组合方案。
注：组合序号命名规则：“十一个多肽命名为11”+“偶联物载体首字母”+“佐剂编号”。
二、免疫效果实验。
参照实施例3中免疫效果检测方法，检测免疫效果结果见表12和图13。
表12.十一价肽疫苗与不同佐剂组合后抗体水平。
图13表明，十一价肽疫苗的抗体滴度能达到1以上，加入佐剂后能显著增加抗体水平，不同佐剂间差异不明显。
序列表
<110> 辽宁成大生物股份有限公司、清华大学
<120> 一种预防新型冠状病毒肺炎COVID-19的疫苗及其制备方法
<160> 11
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 1
Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr
1 5 10 15 20
Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly
25
<210> 2
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 2
Thr Glu Val Pro Val Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser
1 5 10 15 20
Thr Gly Cys
<210> 3
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 3
Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys
1 5
<210> 4
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 4
Cys Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala
1 5 10 15 20
Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn
25 30 35 40
<210> 5
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 5
Gly-Phe-Asn-Cys-Tyr-Phe-Pro-Leu-Gln-Ser-Tyr-Gly-Phe-Gln-Pro-Thr-Asn-Gly-Val-Gly-
1 5 10 15 20
Tyr-Gln-Pro-Tyr-Arg-Val-Val-Val-Leu-Ser-Phe-Glu-Leu
25 30
<210> 6
<211> 43
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 6
Cys Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu
1 5 10 15 20
Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu
25 30 35 40
Gln Ser Leu
<210> 7
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 7
Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln
1 5 10 15 20
Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Cys
25
<210> 8
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 8
Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys
1 5 10 15
<210> 9
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 9
Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr
1 5 10
<210> 10
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 10
Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala Ser Tyr
1 5 10 15
<210> 11
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 11
Cys Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
1 5 10 15 20
Phe
Claims (18)
1.一种免疫原性偶联物的组合物，其特征在于，包括含有相同载体蛋白的免疫原性偶联物至少两种组合或含有2种不同载体蛋白的免疫原性偶联物至少两种组合。
2.如权利要求1所述免疫原性偶联物的组合物，其特征在于，包括抗原性多肽，所述免疫原性偶联物是通过多肽偶联的方法将抗原性多肽与载体蛋白交联制得。
3.如权利要求1所述免疫原性偶联物的组合物，其特征在于，所述抗原性多肽的氨基酸序列选自以下任意一种：
1）氨基酸序列是SEQ ID NO .1- SEQ ID NO .11所示的多肽；
2）与SEQ ID NO .1- SEQ ID NO .11所示氨基酸序列具有85%以上相同氨基酸序列的多肽；
3）将SEQ ID NO .1- SEQ ID NO .11所示氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到具有相同功能的多肽。
4.如权利要求1所述免疫原性偶联物的组合物，其特征在于，所述载体蛋白为白喉无毒突变体CRM197、破伤风类毒素TT、白喉类毒素DT或脑膜炎球菌外膜蛋白M-OMP中的任意一种。
5.如权利要求1所述免疫原性偶联物的组合物，其特征在于，所述抗原性多肽与所述载体蛋白的摩尔比为：1：1-1：30。
6.如权利要求1所述免疫原性偶联物的组合物，其特征在于，所述抗原性多肽与所述载体蛋白的结合率为40%以上。
7.如权利要求1所述免疫原性偶联物的组合物，其特征在于，选自以下任意一种：
（1）氨基酸序列是SEQ ID NO .4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .6所示多肽与CRM197的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO .7所示多肽与CRM197的偶联物组成；
（2）氨基酸序列是SEQ ID NO .4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .6所示多肽与TT的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO .7所示多肽与TT的偶联物组成；
（3）氨基酸序列是SEQ ID NO .4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .6所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .7所示多肽与CRM197的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO .2所示多肽与CRM197的偶联物组成；
（4）氨基酸序列是SEQ ID NO .4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .6所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .7所示多肽与CRM197的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO .2所示多肽与TT的偶联物组成；
（5）氨基酸序列是SEQ ID NO .4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .6所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .7所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .2所示多肽与CRM197的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO .1所示多肽与CRM197的偶联物组成；
（6）氨基酸序列是SEQ ID NO .4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .6所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .7所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .2所示多肽与CRM197的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO .1所示多肽与M-OMP的偶联物组成；
（7）氨基酸序列是SEQ ID NO .4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .6所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .7所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .2所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .10所示多肽与M-OMP的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO .11所示多肽与DT的偶联物组成；
（8）氨基酸序列是SEQ ID NO .4所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO.5所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .6所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .7所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .2所示多肽与CRM197的偶联物、氨基酸序列是SEQ ID NO .10所示多肽与TT的偶联物和氨基酸序列是SEQ ID NO .11所示多肽与TT的偶联物组成；
（9）氨基酸序列是SEQ ID NO .1-11所有多肽与CRM197的偶联物组成。
8.一种预防新型冠状病毒肺炎COVID-19的疫苗，其活性成分包括如权利要求1-7任意一项所述的免疫原性偶联物的组合物。
9.如权利要求8所述的疫苗，其特征在于，还包括药学上可接受的佐剂。
10.如权利要求8所述的疫苗，其特征在于，所述佐剂为氢氧化铝Al(OH)3、磷酸铝AlPO4、单磷酸脂质A MPL或寡核苷酸CpG的一种或多种组合。
11.如权利要求8所述的疫苗，其特征在于，所述佐剂为给予人类，其含量为每剂量1μg-1000μg，优选每剂量10μg-500μg，更优选每剂量10μg-200μg，更优选每剂量10-100μg，最优选每剂量10-50μg。
12.如权利要求8所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗为任何药学上可接受的剂型，包括肌肉注射、皮下注射、皮内注射、微针注射的给药方式。
13.如权利要求8所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗为任何药学上可接受的剂量。
14.如权利要求8所述的疫苗的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
步骤1、使用全自动微波多肽合成仪，采用Fmoc固相合成法，添加固相载体、不同的氨基酸、脱除剂和多肽缩合试剂等，进行目标多肽的全自动合成；
步骤2、将步骤1合成的多肽通过Linker分别与药学上可接受的载体蛋白进行共缀结合，形成免疫原性偶联物，其中，优选SMCC或DSAP 作为linker；
步骤3、将步骤2制备免疫原性偶联物与药学上可接受的佐剂混合制备成疫苗。
15.如权利要求14所述的疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤3具体方法是取免疫原性偶联物与佐剂、PBS溶液混合，室温摇床1小时，30RPM，所得终浓度含多肽抗原100μg/ml、佐剂0.5mg/ml，即为最终样品；或者首先将免疫原性偶联物吸附到铝佐剂上，室温摇床1小时，30RPM，随后加入MPL或者CpG佐剂，室温摇床1小时，30RPM，所得终浓度含多肽抗原100μg/ml、铝佐剂0.5mg/ml、MPL或者CpG含量为0.5mg/ml，即为最终样品。
16.如权利要求1-7任意一项所述的免疫原性偶联物的组合物在制备用于预防或治疗新型冠状病毒肺炎COVID-19的药物中的应用。
17.如权利要求16所述的应用，其特征在于，所述药物为任何药学上可接受的剂量。
18.如权利要求16所述的应用，其特征在于，所述药物为任何药学上可接受的剂型。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010789851.4A CN114053400B (zh) | 2020-08-07 | 2020-08-07 | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的疫苗及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010789851.4A CN114053400B (zh) | 2020-08-07 | 2020-08-07 | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的疫苗及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114053400A true CN114053400A (zh) | 2022-02-18 |
| CN114053400B CN114053400B (zh) | 2023-12-26 |
Family
ID=80232888
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010789851.4A Active CN114053400B (zh) | 2020-08-07 | 2020-08-07 | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的疫苗及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114053400B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103209708A (zh) * | 2010-09-16 | 2013-07-17 | 诺华有限公司 | 免疫原性组合物 |
| CN107488218A (zh) * | 2017-09-13 | 2017-12-19 | 华兰生物疫苗有限公司 | 一种多肽、免疫原性偶联物和流感疫苗 |
-
2020
- 2020-08-07 CN CN202010789851.4A patent/CN114053400B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103209708A (zh) * | 2010-09-16 | 2013-07-17 | 诺华有限公司 | 免疫原性组合物 |
| CN107488218A (zh) * | 2017-09-13 | 2017-12-19 | 华兰生物疫苗有限公司 | 一种多肽、免疫原性偶联物和流感疫苗 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SYED FARAZ AHMED等: "Preliminary Identification of Potential Vaccine Targets for the COVID-19 Coronavirus (SARS-CoV-2) Based on SARS-CoV Immunological Studies", 《VIRUES》, vol. 12, no. 254, pages 1 - 15, XP055823903, DOI: 10.3390/v12030254 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114053400B (zh) | 2023-12-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU570929B2 (en) | Broad spectrum influenza antisera | |
| JP2003529319A (ja) | ＨＩＶ−１ｇｐ４１を標的化する広範に中和する抗体を誘発する方法 | |
| HU211548A9 (en) | Expression of specific immunogens using viral antigens | |
| KR100927221B1 (ko) | Ｅ형 간염 바이러스의 폴리펩티드 단편, 그를 이용한 백신조성물 및 진단용 키트 | |
| CN113769080B (zh) | 多肽免疫偶联物及其应用 | |
| EP0120906B1 (en) | Polypeptides useful in vaccination against enteroviruses | |
| CN114057850B (zh) | 一种预防新型冠状病毒covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| RU2181379C2 (ru) | Пептид (варианты) и способ его производства, фармацевтическое средство, антитело и способ его производства | |
| CN114053400B (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的疫苗及其制备方法 | |
| CN114057848B (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057847B (zh) | 一种预防新型冠状病毒covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057843B (zh) | 一种预防新型冠状病毒感染covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057851B (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057846B (zh) | 一种预防新型冠状病毒感染covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| GB2173504A (en) | Peptides useful in vaccination against enteroviruses | |
| JPH07503133A (ja) | 風疹ワクチン用合成ペプチド | |
| CN114057844A (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057853A (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057842A (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057849A (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| CN114057845A (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽、免疫原性偶联物及其用途 | |
| JP4099059B2 (ja) | 特定交叉反応性を高める抗原構造を得る方法 | |
| CN114057852B (zh) | 一种预防新型冠状病毒肺炎covid-19的多肽及其用途 | |
| WO2023060483A1 (zh) | 多肽-rbd免疫偶联物及其用途 | |
| JPH05271276A (ja) | 環式ｈｉｖ主要中和抗原決定基及びリポペプチドを含有する合成ペプチド |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |