JPH05271276A - 環式ｈｉｖ主要中和抗原決定基及びリポペプチドを含有する合成ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 環式ＨＩＶ主要中和抗原決定基、ｃＰＮＤ、
及びＥ．ｃｏｌｉ又はＳ．ｗｉｌｌｍｏｒｅｉリポペプ
チドの合成リポペプチド類似体を含有するハイブリッド
免疫原。 【効果】 付加アジュバントの非存在下で、哺乳類にお
ける高力価のＨＩＶ中和抗体となる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）
に対する免疫応答の産生のための免疫原は、全世界で活
発に開発中である。後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）
及びＨＩＶ感染に関連したその他の疾病は、全世界的に
見て、流行病的割合に達しつつある。本発明は、これら
の疾病の病因に対する免疫応答を誘発し得る有効な免疫
原の必要性に対してなされたものである。

【０００２】

【従来の技術】ｇｐ１２０又はｇｐ１６０のような完全
ウイルスタンパク質の使用は、サブユニットタンパク質
が多数の免疫学的反応を誘発すると考えられるので、ワ
クチン候補としてはあまり成功しておらず、これらのす
べてがＨＩＶ感染の防止に有益であるわけではない。

【０００３】無傷のウイルス又はそのサブユニットタン
パク質によって示されるペプチジルエピトープの提示も
試みられた。この際、ペプチドエピトープは担体タンパ
ク質に抱合されるか、担体タンパク質との融合タンパク
質として産生される。

【０００４】これに関して特に興味深いものは、ｇｐ１
２０のＶ３ドメインに由来するＨＩＶペプチジルエピト
ープであって、これは本明細書中では以後主要中和抗原
決定基（ＰＮＤ）ペプチドと呼ぶ。これらは、ＨＩＶ中
和抗体の対象となるペプチドエピトープである。ＰＮＤ
配列の好ましいサブセットは、配列Ｇｌｙ ＰｒｏＧｌ
ｙ又はＧｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｒｇ［配列番号：
１］を含有するものである。この配列は、ＨＩＶエンベ
ロープタンパク質ｇｐ１２０の三次変動領域中にあり、
ＨＩＶの多数の大きな単離物中に見いだされ、重要なエ
ピトープの一部であると考えられる。哺乳類免疫系にそ
れを適当に暴露すると、ＨＩＶ中和免疫反応が誘発され
る。

【０００５】上記のアプローチは見込があるが、免疫原
は産生するのが複雑であって、首尾よくＨＩＶワクチン
を手に入れることはできていない。臨床的研究における
ものは抱合体ワクチンではなく、再現可能な高レベルの
中和抗体を提供しない。実験的抱合体ワクチンは調製が
難しく、装填、無菌性及び発熱性のパラメーターは制御
が難しい。ハイブリッド分子を生成するために、担体タ
ンパク質を公知の構造及び組成を有する低分子部分に置
換すると、これらの問題がなくなる。ハイブリッドペプ
チドは調製が容易であって、担体タンパク質抱合体と同
じ法定要件を課せられない。

【０００６】有効な免疫原を産生する望ましい方法は、
免疫原性である低分子化合物を生じる完全合成経路であ
る。ＨＩＶは細胞−細胞融合（シンシチウム形成）によ
り増殖し、抗体がウイルスと結合し、それを中和する血
流中に存在することが公知であるため、合成免疫原がＢ
細胞及びＴ細胞媒介免疫反応を誘発し得ることも望まし
い。

【０００７】種々の種類のＴ細胞マイトジェンが知られ
ているが、しかし環式ＨＩＶ Ｖ₃−ループ配列を含有
する免疫学的に有効なハイブリッドペプチドは報告され
ていないし、小型環式ＨＩＶ主要中和抗原決定基及び大
腸菌外膜リポペプチドのＮ末端に関連したエピトープを
含有するハイブリッドペプチドも公知でない。

【０００８】大腸菌外膜のリポペプチドを研究する研究
者は、多年に亘って、その低分子類似体を合成し、特性
化してきた。したがって、Ｗｉｅｓｍｕｌｌｅｒ ｅｒ
ａｌ．，［Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ′ｓ Ｚ．Ｐｈ
ｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，３６４，５９３−６０６（１
９８３）］は、Ｓ−［２，３−ビス（パルミトイルオキ
シ）−（２ＲＳ）−プロピル］−Ｎ−パルミトイル−Ｒ
−システインをＯ−ｔｅｒｔ−ブチル−セリル−Ｏ−ｔ
ｅｒｔ−ブチル−セリル−アスパラギニル−アラニン
ｔｅｒｔ−ブチルエステルに結合し、その後トリフルオ
ロ酢酸で脱保護化することによる大腸菌リポタンパク質
のＮ−末端ペンタペプチドを記載し、合成した。

【０００９】Ｊｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，［Ｌｉｅｂｉｇ
ｓ．Ａｎｎ．Ｃｈｅｍ．，１６０８−１６２２（１９８
３）］は、マウス脾臓細胞モデルにおいて大腸菌リポタ
ンパク質Ｎ−末端合成類似体のマイトジェン活性を確証
した。Ｂｅｓｓｌｅｒ ｅｔａｌ．，［Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１３５，１９００−１９０５（１９８５）］は、
マイトジェン活性に関してＳ−［２，３−ビス（パルミ
トイルオキシ）−（２−Ｒ，Ｓ）−プロピル］−Ｎ−パ
ルミトイル−（Ｒ）−システイン、−システインメチル
エステル、−シルテイニル−セリン、−シルテイニル−
セリル−セリン、−シルテイニル−セリル−セリル−ア
スパラギン及び−シルテイニル−セリル−セリル−アス
パラギニル−アラニン類似体の能力を比較し、２〜５個
のアミノ酸を有する類似体はＢ−リンパ球に対して強刺
激活性を示すと結論づけた。

【００１０】Ｊｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，［Ａｎｇｅｗ．
Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，２４，８７２−
８７３（１９８５）］は、線状上皮成長因子受容体（Ｅ
ＧＦ−Ｒ）ペプチドがＮ−パルミトイル−Ｓ−［（２Ｒ
Ｓ）−２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル］
−システイニルセリン（本明細書中では以後（Ｐａｍ）
₃ Ｃｙｓ−Ｓｅｒと呼ぶ）と結合する場合のＥＧＦ−Ｒ
特異的抗体の産生増大に関して報告した。

【００１１】Ｒｅｉｔｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，
［Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ ３
７０，３４３−３５２（１９８９）］は、（Ｐａｍ）₃
Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ₄ 、（Ｐａｍ）₃ Ｃｙｓ−Ａｌ
ａ−Ｇｌｙを含めたＰａｍ₃ Ｃｙｓ−Ｓｅｒの別の類似
体に関して報告し、ハプテンジニトロフェノールに対す
る免疫反応を高めるこれらの類似体の能力に注目した。

【００１２】Ｄｅｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，［Ｎａｔｒｕ
ｅ ３４２，５６１−５６４（１９８９）］は、（Ｐａ
ｍ）₃ Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒと共有結合する線状合成
インフルエンザペプチドがその他のアジュバントの非存
在下でマウスにおけるインフルエンザウイルス特異性細
胞毒性リンパ球反応を有効に誘発し得ることを報告し
た。

【００１３】同様に、Ｗｉｅｓｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａ
ｌ．，［Ｖａｃｃｉｎｅ ７，２９−３３（１９８
９）］は、線状手足口病ウイルス（ＦＭＤＶ）配列と共
有的に結合する（Ｐａｍ）₃ Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒの
モルモットにおけるＦＭＤＶ特異性抗体を増大する能力
に関して報告した。

【００１４】Ｌｏｌｅｉｔ ｅｔ ａｌ．，［Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ ３７１，９
６７−９７５（１９９０）］は、（Ｐａｍ）₃ Ｃｙｓ−
Ｓｅｒ−Ｓｅｒとヒト免疫不全ウイルスの３つの異なる
単離体からの線状ペプチドの抱合体に関して報告した。
同様の開示は、Ｊｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，欧州特許出願
第０４３１ ３２７ Ａ１号に見いだされる。したがっ
て、（Ｐａｍ）₃ Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ抱合体の使用
は当業界で注目されてきたが、しかし環式ペプチドとの
（Ｐａｍ）₃ Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒハイブリッドは報
告されていない。

【００１５】リポペプチドのマイトジェン活性をさらに
増強するものとして、Ｋｕｒｉｍｕｒａ ｅｔ ａ
ｌ．，［Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３８
（４），１１１０−１１１２（１９９０）及びＰｅｐｔ
ｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９０：Ｙ．Ｓｈｉｍ
ｏｎｉｓｈｉ（Ｅｄ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｏｓａｋａ，３７−４２
（１９９１）］は、トリパルミトイルシステイニル−セ
リル−セリル−アスパラギニル−アラニン誘導体は、リ
ポペプチドがこの位置で２Ｓ又はラセミ立体化学的特異
性よりむしろ天然２Ｒ立体化学的特異性を有する場合
に、より分裂促進性であることに言及した。さらに、こ
れらの研究者達は、リポペプチドのシステイン上のパル
ミトイル残基がトリクロロエトキシカルボニル（Ｔｒｏ
ｃ）に置換される場合にリポペプチド誘発性マイトジェ
ン活性が増大することに注目した。さらに、Ｔｓｕｄａ
ｅｔ ａｌ．，［Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ １９９０：Ｙ．Ｓｈｉｍｏｎｉｓｈｉ（Ｅｄ．），
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉ
ｏｎ，Ｏｓａｋａ，１３１−１３４（１９９１）］は、
システイニル−アスパラギニル−セリル グリシル−グ
リシル−セリン構造を有する、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ ｗｉｌｌｍｏｒｅｉ由来のトリパルミトイルリポペ
プチドが骨髄細胞の刺激剤として活性であることを示し
た。

【００１６】これらの所見を本明細書に用いて、最適活
性リポペプチド−ＨＩＶ環式ＰＮＤ免疫原を提供する。

【００１７】

【課題を解決するための手段】Ｅ．ｃｏｌｉ又はＳ．ｗ
ｉｌｌｍｏｒｅｉリポペプチドＮ末端の類似体であるリ
ンパ球刺激エピトープと結合する環式ヒト免疫不全ウイ
ルス（ＨＩＶ）主要中和抗原決定基（ＰＮＤ）を含有す
る合成ハイブリッド免疫原は、免疫原の環部分により発
現されるエピトープに対するＢ及びＴ細胞免疫反応を誘
発するのに有用であり、ＨＩＶ感染の治療又は防止に有
用である。

【００１８】環式ＨＩＶ主要中和抗原決定基ペプチドと
結合するトリアシル−グリセロールシステイニル セリ
ル セリン又はシステイニル−アスパラギニル−セリル
−グリシル−グリシル−セリン部分を含有する合成ハイ
ブリッド免疫原は、ハイブリッドの各亜部分を別々に調
製し、次いで２つの亜部分をつないで調製し得る。トリ
パルミトイル−グリセロール結合システイン（Ｐａｍ）
₃ Ｃｙｓ−ＯＨ部分は、文献に開示された方法により調
製し得る。したがって、Ｗｉｅｓｍｕｌｌｅｒ ｅｔ
ａｌ．，［Ｈｏｐｐｅｒ−Ｓｅｙｌｅｒ′ｓ Ｚ．Ｐｈ
ｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．３６４，５９３−６０６（１９
８３）］、Ｊｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，［Ｌｉｅｂｉｇｓ
Ａｎｎ．Ｃｈｅｍ．１６０８−１６２２（１９８
３）］、Ｂｅｓｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，［Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．１３５，１９００−１９０５（１９８
５）］、Ｊｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，［Ａｎｇｅｗ．Ｃｈ
ｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅ．Ｅｎｇｌ．２４，８７２−８７３
（１９８５）］、及びＪｕｎｇ，欧州特許出願第０４３
１ ３２７ Ａ１号の方法を用いて、（Ｐａｍ）₃ Ｃｙ
ｓ−ＯＨを調製する。本物質は、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，ＦＲＧから市
販されてもいる。リポペプチドを含有する２Ｒ パルミ
トイル及びＴｒｏｃの合成のためには、Ｋｕｒｉｍｕｒ
ａ ｅｔ ａｌ．，［Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ １９９０：Ｙ．Ｓｈｉｍｏｎｉｓｈｉ（Ｅｄ）Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏ
ｎ，Ｏｓａｋａ，ｐ３７−４２及び１３１−１３４（１
９９１）］に従う。

【００１９】本発明によって、ＨＩＶ ＰＮＤを有する
線状ペプチドを固相ペプチド合成の標準方法（Ｓｏｌｉ
ｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ，１９８４，ｂｙ Ｓｔｅｗａｒｔ ａｎｄ Ｙｏｕ
ｎｇを参照）により調製する。次に、線状ペプチドをペ
プチドの遊離アミノ末端で（Ｐａｍ）₃ Ｃｙｓ−ＯＨで
アシル化する。ペプチド中の他の遊離アミノ基は適切に
保護化されるよう注意する。

【００２０】アシル化後、保護基をペプチドから切断
し、これを次に環化する。環化の簡単な一方法は、２個
のシステインを線状ペプチドの一次配列中に取り込み、
次いでペプチドを酸化させて環式ジスルフィドを形成す
ることである。しかしながら、環化の他の方法、例えば
環のチオエーテル結合又はアミド結合形成も同様に適用
できる。

【００２１】したがって、本発明の好ましい態様におい
ては、ハイブリッド免疫原は一般構造式［配列番号：１
９］：

【００２２】

【化４】

【００２３】（式中、Ｘ₁ は単結合、アミノ酸、又は２
〜５アミノ酸のペプチドであり；Ｘ₂ はＸ₅ と結合した
アミノ酸であり；Ｘ₃ は１〜２５アミノ酸長であって、
ＨＩＶｇｐ１２０，アミノ末端の任意の共通単離物中に
見いだされるアミノ酸配列から選択され、Ｇｌｙ Ｐｒ
ｏ ＧｌｙＡｒｇ［配列番号：１］配列に隣接し；Ｘ₄
は単結合又は１〜２５アミノ酸長であって、ＨＩＶｇｐ
１２０，カルボキシ末端の任意の共通単離物のアミノ酸
配列から選択され、Ｇｌｙ Ｐｒｏ ＧｌｙＡｒｇ［配
列番号：１］配列に隣接し；Ｘ₅ はＸ₂ と結合したアミ
ノ酸であり；Ｘ₆ はヒドロキシル、−ＮＨ₂ であるか、
又は１〜１０アミノ酸長間にあり；ｎは１〜２０であっ
て、好ましくは１４であり；そしてＲ¹ はＣＨ₃ （ＣＨ
₂ ）_n −又はＣｌ₃ ＣＣＨ₂ Ｏ−である。さらに、好ま
しい立体化学特性は２Ｒである）を有する。

【００２４】この免疫原は、ハイブリッド免疫原が、Ｘ
₁ はＮｌｅであり、Ｘ₂ 及びＸ₅ はシステインであり、
Ｘ₃ 、Ｘ₄ 及びＸ₆ は上記と同様であり、ｎ＝１４であ
るようなＨＩＶ ｃＰＮＤとしてさらに定義され、これ
は次式［配列番号：２０］：

【００２５】

【化５】

【００２６】Ｘ₃ 及びＸ₄ に関して好ましい配列のため
の指針は、２４５ＨＩＶ単離物の配列を検討したＬａＲ
ｏｓａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９，９３
２−９３５（１９９０）により提供されるが、Ｇｌｙ
Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｒｇを取り囲む任意の配列を本明細
書では用いる。

【００２７】Ｘ₃ 及びＸ₄ に関するコンセンサス配列
は、その研究から以下のように規定し得る： Ｘ₃ ：Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｓｎ Ａｓ
ｎ Ｔｈｒ ＡｒｇＬｙｓ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｈｉｓ
Ｉｌｅ［配列番号：１５］； Ｘ₄ ：Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｉｌ
ｅ Ｉｌｅ ＧｌｙＡｓｐ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇｌｎ
Ａｌａ Ｈｉｓ［配列番号：１６］。

【００２８】Ｘ₃ 及びＸ₄ に関する好ましい配列を以下
に示す： Ｘ₃ は：Ｉｌｅ，Ｈｉｓ Ｉｌｅ，Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｉ
ｌｅ，Ａｒｇ Ｉｌｅ ＨｉｓＩｌｅ［配列番号：
２］，Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｉｌｅ［配列
番号：３］，Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｈｉｓ
Ｉｌｅ［配列番号：４］，Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｉｌｅ［配列番号：５］，Ａ
ｓｎ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｈｉ
ｓ Ｉｌｅ［配列番号：６］，Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｌｙｓ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｉｌｅ ＨｉｓＩｌｅ［配
列番号：７］，Ａｒｇ及びＧｌｎ Ａｒｇから選択さ
れ； Ｘ₄ は：Ａｌａ，Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔ
ｙｒ，Ａｌａ Ｐｈｅ ＴｙｒＴｈｒ［配列番号：
８］，Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ［配列
番号：９］，Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｌｙｓ［配列番号：１０］，Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ａｓｎ［配列番号：１
１］，Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｌｙ
ｓ Ａｓｎ Ｉｌｅ［配列番号：１２］，Ａｌａ Ｐｈ
ｅ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｌｙｓ ＡｓｎＩｌｅ
Ｉｌｅ［配列番号：１３］，Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ
Ｔｈｒ ＴｈｒＬｙｓ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｇｌ
ｙ［配列番号：１４］から選択される。

【００２９】本発明の範囲内で、化合物ｃＰＮＤ［配列
番号：１７］：

【００３０】

【化６】

【００３１】を調製した。

【００３２】本発明のリポペプチド−ＨＩＶ ｃＰＮＤ
ハイブリッドは、易水溶性でない。したがって、この物
質は、Ｄｏｕｎｃｅ均質化、音波処理又はその他の任意
の有効な方法により、投与前に乳濁液として調製する。
約１μｇ〜１ｍｇ、好ましくは約１００〜３００μｇの
用量の乳化ハイブリッドを、筋肉内、皮下又は静脈内投
与する必要がある。

【００３３】この親脂性免疫原の別の投与方法は、リポ
ソーム又はミセルの一部としてである。当業界で公知の
脂質を形成する任意の多数のリポソームを、本発明のハ
イブリッドを有するという効果を伴ってこの目的のため
に生物系中に利用し得る。

【００３４】

【実施例】以下の実施例で本発明をさらに説明するが、
本発明を限定するものではないと解釈されるべきであ
る。

【００３５】実施例１ ｃＰＮＤ５７１の調製： Ａ．線状２８ｍｅｒの調製： ２８ｍｅｒ：

【００３６】

【化７】

【００３７】［配列番号：１８］をＭＩＬＬＩＧＥＮ
＃９０５０合成機で収集し、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｃｙｓ（Ｔ
ｒｔ）−ＯＰＫＡ樹脂（２．２７３ｇ、０．２ｍｍｏｌ
ｅ、ＭＩＬＬＩＧＥＮバッチ番号１００２３４、０．０
８８ｍｅｑ．／ｇ）を用いて開始した。

【００３８】樹脂を１×１０ｃｍカラム中に乾燥充填し
た。試薬はＦｍｏｃ−Ｌ−Ｐｆｐエステル（但しｄＨＢ
ＴエステルであるＳｅｒ及びＴｈｒは除く）であって、
ＮＭＰ溶液中に４倍過剰で用いた。側鎖保護は上記した
とおりである。二重カップリングは、Ｌｙｓ⁹ 、Ｉｌｅ
¹¹、Ｉｌｅ¹³、Ｇｌｙ¹⁴、Ｐｒｏ¹⁵、Ｇｌｙ¹⁶、Ａｒｇ
¹⁷、Ｐｈｅ¹⁹、Ｌｙｓ²³、Ｉｌｅ²⁵及びＩｌｅ²⁶に提供
された。

【００３９】メチレンクロリド及びエーテル洗浄及び脱
水後、遊離アミノ末端誘導化樹脂を淡黄褐色粉末（２．
８１５ｇ）として得た。誘導化樹脂のアリコート（１４
０ｍｇ、約０．０１ｍｅｑ．）を２４℃で９５％ＴＦＡ
／４％ジチオールエタン／１％チオアニソール（２．０
ｍＬ）に懸濁し、１６時間に亘って開裂させた。次に、
混合物を濾過し、不溶物を１００％ＴＦＡ（２×２ｍ
Ｌ）で洗浄し、併合濾液を蒸発させた。残留油状ゴムを
エーテル（３×２ｍＬ）で粉砕して、粗製２８ｍｅｒを
不溶性黄褐色粉末（２６．９ｍｇ）として得た。

【００４０】５０μＬの水性０．１％ＴＦＡ／２０％ア
セトニトリルに溶解し、２１５及び２６０ｎｍ，Ａ＝
０．０５，２．０ｍＬ／分でモニタリングした５０μｇ
試料４μｌの、水性０．１％ＴＦＡに溶解した２２％ア
セトニトリルで溶離した０．４６×２５ｃｍ ＶＹＤＡ
Ｃ Ｃ₁₈逆相カラム上での分析的ＨＰＬＣは、１７．２
８分に大きな生成物質ピークを示した。未注入アリコー
トを室温で２日間放置後、アリコートを上記と同様に分
析した結果、主ピークは８．１４分に認められたが、こ
れは線状ペプチドがジスルフィドに酸化されつつあった
ことを示す。

【００４１】Ｂ．（Ｐａｍ）₃ −ＯＨによる線状２８ｍ
ｅｒのアシル化：（Ｐａｍ）₃ Ｃｙｓ−ＯＨ（１７３ｍ
ｇ，０．１９ｍｍｏｌｅ）を２４℃でＮＭＰ（１．０ｍ
Ｌ）に徐々に溶解し、音波処理及び攪拌して、透明淡褐
色溶液を得た。４−メチルモルホリン（０．２８５ｍｍ
ｏｌｅ）を添加し、その後固体ＢＯＰ（８４ｍｇ，０．
１９ｍｍｏｌｅ）及びＨＯＢｔ（２５．７ｍｇ，０．１
９ｍｍｏｌｅ）を添加した。混合物を再び音波処理し、
攪拌して（２４℃で５分）透明溶液を得た。この粘性溶
液にさらにＮＭＰ（５ｍＬ）を加え、次いで上記で調製
した乾燥誘導化樹脂（１．３３７ｇ，約０．０９５ｍｅ
ｑ．）と混合した。

【００４２】濃反応スラリーを２４℃で１７時間攪拌し
た。２〜３個の樹脂粒子を取り出し、ＮＭＰ、メチレン
クロリドで順次洗浄し、次いで風乾した。Ｋａｉｓｅｒ
検定（ニンヒドリン試薬，Ｋａｉｓｅｒ ｅｔ ａ
ｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３４，５９５−５９
８（１９７０））による分析は青色を呈したが、これは
残留遊離アミノ基の存在を示す。アシル化反応をさらに
１８時間進行させて、この時点でＮＭＰ（１ｍＬ）に溶
解したＢＯＰ（４２ｍｇ，０．０９５ｍｍｏｌｅ）、Ｈ
ＯＢｔ（１２．８ｍｇ，０．０９５ｍｍｏｌｅ）及び４
−メチルモルホリン（０．１４３ｍｍｏｌｅ）の溶液を
添加し、反応をさらに進行させた。ｔ＝４１時間で、Ｋ
ａｉｓｅｒ検定は陰性となった。反応液を濾過し、樹脂
を、ＮＭＰ（４×１０ｍＬ）、メチレンクロリド（３×
１０ｍＬ）及びエーテル（３×１０ｍＬ）で徹底的に洗
浄した。次いで樹脂を乾燥して、淡褐色粉末（１．３６
９ｇ）を得た。

【００４３】Ｃ．樹脂からの開裂及び生成物質回収：誘
導化アシル化樹脂を２４℃で９５％ＴＦＡ／４％エタン
ジチオール／１％チオアニソール（１５ｍＬ）に懸濁し
て、明黄色溶液を生成した。開裂は、攪拌しながら２０
時間進行させた。

【００４４】黄色スラリーを濾過し、不溶性物質を１０
０％ＴＦＡ（３×１０ｍＬ）で抽出した。併合濾液を蒸
発すると無色油状ゴムが残留した。この物質をエーテル
（４×３ｍＬ）で粉砕し、不溶性物質を濾過して回収し
た。生成物質を乾燥して、淡い黄褐色粉末（２６５ｍ
ｇ）を得た。

【００４５】５０℃に電熱加熱した０．４６×２５ｃｍ
のＶＹＤＡＣ Ｃ₄ 逆相カラムを、水性０．１％ＴＦＡ
／６３％アセトニトリルで平衡させた。音波処理により
水性０．１％ＴＦＡ／７０％アセトニトリル（０．１ｍ
Ｌ）中に０．６５ｍｇの試料を溶解し、注入した。注入
試料を水性０．１％ＴＦＡ／６３％〜７０％アセトニト
リルで３０分に亘ってグラジエント溶離し、２１５ｎ
ｍ，Ａ＝３．００，２．０ｍＬ／分でモニタリングし
て、生成物質を単離した。１３．９３分で溶離する主ピ
ークを収集し、蒸発濃縮し、次いで凍結乾燥した。これ
と同じ手順を大量の試料を用いて繰り返し、約１４分で
溶離する物質を併合した。１．０×２５ｃｍカラム上で
の分取ＨＰＬＣは同様の結果を示し、ｃＰＮＤ５７１の
併合物質収量は、凍結乾燥後で１０．６ｍｇであった。

【００４６】０．４ｍｇの試料のＦＡＢ−ＭＳは［Ｍ＋
Ｈ］⁺ ＝４０８７及び［Ｍ＋Ｎａ］⁺ ＝４１０９を示し
たが、これはＣ₁₉₅ Ｈ₃₂₉ Ｎ₄₅Ｏ₄₃Ｓ₃ に関して算出さ
れた４０８８という質量によく対応し、これは環化物質
の質量である。アミノ酸分析結果を以下に示す： アミノ酸 理論値 実測値 Ｔｈｒ ２ ２．０５ Ｓｅｒ ２ １．９７ Ｐｒｏ １ １．０６ Ｇｌｙ ３ ３．２８ Ａｌａ １ １．０００ 1/2 システイン ２ −−−−− Ｉｌｅ ４ ３．７８ Ｔｙｒ ２ １．４９ Ｐｈｅ １ １．０２ Ｈｉｓ １ １．００ Ｌｙｓ ３ ３．０６ Ａｒｇ ３ ２．９４ Ａｓｎ ２ ２．２０ Ｎｌｅ １ ０．７１ 生成物質の質量は、脱保護化アシル化物質が加熱クロマ
トグラフィー中に環化されたことを示唆する。これは、
２１５ｎｍ，Ａ＝０．０５，２．０ｍＬ／分でモニタリ
ングし、１３．４９分で主ピークを生じる、水性０．１
％ＴＦＡ／６３％アセトニトリルによる０．２５×１ｃ
ｍＶＹＤＡＣ Ｃ₄ カラム上での分析的ＨＰＬＣにより
確証した。Ｅｌｌｍａｎ検定は、上記で得られたクロマ
トグラフィー後物質が遊離スルフィドリルを含有しない
ことを示した。クロマトグラフィー処理していない脱保
護化アシル化物質の上記と同様の分析用ＨＰＬＣは、１
５．２３分で溶離する主ピーク及びＥｌｌｍａｎ検定時
の強陽性結果を示した。

【００４７】実施例２ 本発明の（Ｐａｍ）₃ Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−ｃＰＮ
Ｄハイブリッドによる動物接種のためのプロトコール：
約３００μｇ／ｍｌの最終濃度で生理食塩水中に乳濁液
を作ることにより、接種物を調製した。あるいは、約３
００μｇ／ｍｌでハイブリッドを取り込むリポソームを
調製した。

【００４８】アフリカミドリザル又はウサギに別々に３
×３００μｇ用量又は３×１００μｇ用量のハイブリッ
ドを接種した。投与は１か月離して（０、４、８週目）
に実施した。血清試料を各採血ごとに調製し、以後の実
施例に記載されているような特異的抗体の発生に関して
検定した。

【００４９】実施例３ 抗ＨＩＶ ｃＰＮＤ ＩｇＧ抗体に関する血清の分析：
酵素結合免疫吸着剤検定（ＥＬＩＳＡ）により各血清試
料を分析した。ポリスチレンミクロ滴定プレートを、４
℃でリン酸塩緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解した
０．５μｇ／穴の合成ペプチドで被覆した。次に、各穴
を、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳ（Ｐ
ＢＳ−Ｔ）で洗浄した。ＰＢＳ−Ｔで段階的に希釈した
試験血清を、３６℃で１時間、吸着ペプチドと反応させ
た。ＰＢＳ−Ｔで洗浄後、アルカリ性ホスファターゼ抱
合ヤギ抗ヒトＩｇＧを試験穴に添加して、３６℃で１時
間反応させた。次に穴をＰＢＳ−Ｔで充分洗浄した。各
穴に、０．５ｍＭ ＭｇＣｌ₂ ・６Ｈ₂ Ｏを含有する１
０％ジエタノールアミン，ｐＨ９．８に溶解した０．１
％ｐ−ニトロフェニルホスフェートを入れた。最終反応
は室温で３０分進行させ、この時点で３．０Ｎ ＮａＯ
Ｈを添加して反応を終了させた。

【００５０】試験血清中の抗体とペプチド基質間の相互
作用が大きいほど、穴上の結合アルカリ性ホスファター
ゼの量は多くなる。このホスファターゼ酵素は、ｐ−ニ
トロフェニルホスフェートが４０５ｎｍの波長の光を吸
収するような分子物質に分解するのを媒介する。したが
って、ＥＬＩＳＡ反応終了時の４０５ｎｍでの光吸収と
ペプチド結合抗体の量との間には直接的関係が存在す
る。

【００５１】実施例４ ＨＩＶ感染性を特異的に中和する活性に関する血清の分
析：ウイルス中和活性を、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０：１９
５−２０２（１９８８）が記載した検定を用いて測定し
た。本検定は、試験血清中の特異的ＨＩＶ−中和活性を
測定する。検定は、ＭＴ−４細胞、ヒトＴ−リンパ様細
胞系がＨＩＶに感染し易く、ウイルス複製期間後に、感
染の結果として殺されるという観察に基づいている。

【００５２】試験血清を、検定前に５６℃で６０分処理
した。この処理は、ＨＩＶ複製の非特異的阻害物を排除
するために必要であった。ＲＰＭＩ−１６４０細胞培地
中で段階的に希釈した加熱処理血清を、標準感染量のＨ
ＩＶと混合した。用量は、検定前に測定して、７〜８日
の期間後に検定培養中の全ＭＴ−４細胞を殺すのに必要
な最少量のウイルスを含有するようにした。血清とウイ
ルスの混合物を、３７℃で１時間、相互作用させた。次
にそれを、１０％ウシ胎仔血清を補足したＲＰＭＩ−１
６４０成長培地に懸濁した１．０×１０⁵ 個のＭＴ−４
細胞に添加した。培養を、５％ＣＯ₂ 雰囲気中で７日
間、３７℃でインキュベートした。

【００５３】インキュベーション期間終了時に、代謝性
染料ＤＴＴを各培養に添加した。この染料は、肉眼検査
では黄色である。生細胞の存在下では、染料は代謝され
て肉眼的に青色に発色する分子となる。中和されたＨＩ
Ｖは標的ＭＴ−４細胞中で複製できず、したがって細胞
を殺さない。故に、代謝性染料の添加後に青色の発色が
生ずるか否かにより陽性中和を評価した。

【００５４】配列一覧

【００５５】

【配列表】配列番号：１ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Pro Gly Arg 1 配列番号：２ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Arg Ile His Ile 1 配列番号：３ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Lys Arg Ile His Ile 1 ５ 配列番号：４ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｉｌｅ １ 5 配列番号：５ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Lys Arg Lys Arg Ile His Ile 1 5 配列番号：６ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Asn Lys Arg Lys Arg Ile His Ile 1 5 配列番号：７ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Tyr Asn Lys Arg Lys Arg Ile His Ile 1 5 配列番号：８ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Ala Phe Tyr Thr 1 配列番号：９ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Ala Phe Tyr Thr Thr 1 5 配列番号：１０ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Ala Phe Tyr Thr Thr Lys 1 5 配列番号：１１ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Ala Phe Tyr Thr Thr Lys Asn 1 5 配列番号：１２ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Ala Phe Tyr Thr Thr Lys Asn Ile 1 5 配列番号：１３ 配列の長さ：９ 配列の種類：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Ala Phe Tyr Thr Thr Lys Asn Ile Ile 1 5 配列番号：１４ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Ala Phe Tyr Thr Thr Lys Asn Ile Ile Gly 1 5 10 配列番号：１５ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile His Ile 1 5 10 配列番号：１６ 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列 Tyr Thr Thr Gly Glu Ile Ile Gly Asp Ile Arg Gln Ala His 1 5 10 配列番号：１７ 配列の長さ：２９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表わす記号：disulfide-bonds 存在位置：５．．２９ 配列の特徴 特徴を表わす記号：modefied-site 存在位置：４ 他の情報：／標識＝ノルロイシン 配列の特徴 特徴を表わす記号：modefied-site 存在位置：１ 他の情報：／標識＝アシル化／注＝この部位のシステイ
ンはチオールエステル結合を介してジアシルグリセロー
ルと結合しており、遊離システインアミノ基でもアシル
化されている。

【００５６】配列の特徴 特徴を表わす記号：thiolester-bond 存在位置：１ 他の情報：／標識＝チオールエステル結合／注＝このシ
ステインは、システインのイオウ側鎖を含んだチオール
エステルを介してジアシルグリセロール部分と結合して
いる。

【００５７】配列 Cys Ser Ser Leu Cys Tyr Asn Lys Arg Lys Arg Ile His Ile Gly Pro 1 5 10 15 Gly Arg Ala Phe Tyr Thr Thr Lys Asn Ile Ile Gly Cys 20 25 配列番号：１８ 配列の長さ：２８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：両形態 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表わす記号：modefied-site 存在位置：３ 他の情報：／標識＝ノルロイシン 配列 Ser Ser Leu Cys Tyr Asn Lys Arg Lys Arg Ile His Ile Gly Pro Gly 1 5 10 15 Arg Ala Phe Tyr Thr Thr Lys Asn Ile Ile Gly Cys 20 25 配列番号：１９ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：環状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表わす記号：modified-site 存在位置：１ 他の情報：／標識＝アシル化／注＝アシル化部位 配列の特徴 特徴を表わす記号：peptide 存在位置：４ 他の情報：／標識＝Ｘ₁ ／注＝単結合、アミノ酸又はア
ミノ酸２〜５個のペプチド 配列の特徴 特徴を表わす記号：modified-site 存在位置：５ 他の情報：／標識＝Ｘ₂ ／注＝Ｘ₅ と結合したアミノ酸 配列の特徴 特徴を表わす記号：peptide 存在位置：６ 他の情報：／標識＝Ｘ₃ ／注＝アミノ酸又は２５アミノ
酸長までのペプチド 配列の特徴 特徴を表わす記号：peptide 存在位置：１１ 他の情報：／標識＝Ｘ₄ ／注＝単結合、アミノ酸又は２
５アミノ酸長までのペプチド 配列の特徴 特徴を表わす記号：modified-site 存在位置：１２ 他の情報：／標識＝Ｘ₅ ／注＝Ｘ₂ と結合したアミノ酸 配列の特徴 特徴を表わす記号：peptide 存在位置：１３ 他の情報：／標識＝Ｘ₆ ／注＝−ＯＨ、−ＮＨ₂ 、アミ
ノ酸又は２〜１０個のアミノ酸のペプチド 配列 Cys Ser Ser Xaa Xaa Xaa Gly Pro Gly Arg Xaa Xaa Xaa 1 5 10 配列番号：２０ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：環状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表わす記号：modified-site 存在位置：１ 他の情報：／標識＝アシル化／注＝システインがアシル
化されている 配列の特徴 特徴を表わす記号：modified-site 存在位置：４ 他の情報：／標識＝ノルロイシン 配列の特徴 特徴を表わす記号：ｄｅｓｕｌｆｉｄｅ−ｂｏｎｄｓ 存在位置：５．．１２ 配列の特徴 特徴を表わす記号：ｐｅｐｔｉｄｅ 存在位置：６ 他の情報：／標識＝Ｘ₃ ／注＝アミノ酸又は２５アミノ
酸長までのペプチド 配列の特徴 特徴を表わす記号：peptide 存在位置：１１ 他の情報：／標識＝Ｘ₄ ／注＝単結合、アミノ酸又は２
５アミノ酸長までのペプチド 配列 Cys Ser Ser Leu Cys Xaa Gly Pro Gly Arg Xaa Cys 1 5 １０

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ０７Ｋ 99:00 (72)発明者 ジヨン・ハンナ アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07747、マタワン、アイドルブルツク・レ ーン・155

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 環式ＨＩＶ主要中和抗原決定基、ｃＰＮ
   Ｄ、及びＥ．ｃｏｌｉ又はＳ．ｗｉｌｌｍｏｒｅｉリポ
   ペプチドの合成リポペプチド類似体を含有するハイブリ
   ッド免疫原。
2. 【請求項２】 合成リポペプチド類似体がトリアシル−
   システイニル−セリル−セリン，（ＰＡＭ） ₃Ｃｙｓ
   Ｓｅｒ Ｓｅｒである請求項１記載のハイブリッド免疫
   原。
3. 【請求項３】 トリアシル Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｓｅｒが
   配列Ｇｌｙ ＰｒｏＧｌｙ Ａｒｇ［配列番号：１］を
   含有するＨＩＶ ｃＰＮＤと結合している請求項２記載
   のハイブリッド免疫原。
4. 【請求項４】 次式［配列番号：１９］： 【化１】 （式中、Ｘ₁ は単結合、アミノ酸、又は２〜５アミノ酸
   のペプチドであり；Ｘ₂ はＸ₅ と結合したアミノ酸であ
   り；Ｘ₃ は１〜２５アミノ酸長であって、ＨＩＶｇｐ１
   ２０，アミノ末端の任意の共通単離物中に見いだされる
   アミノ酸配列から選択され、Ｇｌｙ Ｐｒｏ ＧｌｙＡ
   ｒｇ配列に隣接し；Ｘ₄ は単結合又は１〜２５アミノ酸
   長であって、ＨＩＶｇｐ１２０，カルボキシ末端の任意
   の共通単離物のアミノ酸配列から選択され、Ｇｌｙ Ｐ
   ｒｏ ＧｌｙＡｒｇ配列に隣接し；Ｘ₅ はＸ₂ と結合し
   たアミノ酸であり；Ｘ₆ はヒドロキシル、−ＮＨ₂ であ
   るか、又は１〜１０アミノ酸長間にあり；ｎは１〜２０
   であり；そしてＲ¹ はＣＨ₃ （ＣＨ₂ ）_n −又はＣｌ₃
   ＣＣＨ₂ Ｏ−である）を有する請求項３記載のハイブリ
   ッド免疫原。
5. 【請求項５】 次式［配列番号：２０］： 【化２】 （式中、Ｘ₃ 及びＸ₄ は請求項４で規定された通りであ
   る）を有する請求項４記載のハイブリッド免疫原。
6. 【請求項６】 Ｘ₃ が以下の：Ｉｌｅ，Ｈｉｓ Ｉｌ
   ｅ，Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｉｌｅ，Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｈｉｓ
   Ｉｌｅ［配列番号：２］，Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｈ
   ｉｓ Ｉｌｅ［配列番号：３］，Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒ
   ｇ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｉｌｅ［配列番号：４］，Ｌｙｓ
   Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｉｌｅ
   ［配列番号：５］，Ａｓｎ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ
   Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｉｌｅ［配列番号：６］，Ｔ
   ｙｒ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｉｌ
   ｅ ＨｉｓＩｌｅ［配列番号：７］，Ａｒｇ，Ｇｌｎ
   Ａｒｇ及びＴｈｒ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｓｎ
   Ａｓｎ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｈ
   ｉｓ Ｉｌｅ［配列番号：１５］から選択され；Ｘ₄ が
   以下の：Ａｌａ，Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔ
   ｙｒ，Ａｌａ Ｐｈｅ ＴｙｒＴｈｒ［配列番号：
   ８］，Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ［配列
   番号：９］，Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
   Ｌｙｓ［配列番号：１０］，Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ
   Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ａｓｎ［配列番号：１
   １］，Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｌｙ
   ｓ Ａｓｎ Ｉｌｅ［配列番号：１２］，Ａｌａ Ｐｈ
   ｅ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｌｙｓ ＡｓｎＩｌｅ
   Ｉｌｅ［配列番号：１３］，Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ
   Ｔｈｒ ＴｈｒＬｙｓ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｇｌ
   ｙ［配列番号：１４］及びＴｙｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇ
   ｌｙ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ａｒ
   ｇ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｈｉｓ［配列番号：１６］から選
   択され；並びにほぼ２−パルミトイル残基での立体化学
   配置が２Ｒである請求項５記載のハイブリッド免疫原。
7. 【請求項７】 次式［配列番号：１７］： 【化３】 を有する請求項１記載のハイブリッド免疫原。
8. 【請求項８】 化合物が純粋２Ｒ鏡像形態である請求項
   ７記載の免疫原。