RO120579B1 - Utilizarea ligandului flt3 - Google Patents
Utilizarea ligandului flt3 Download PDFInfo
- Publication number
- RO120579B1 RO120579B1 RO98-00824A RO9800824A RO120579B1 RO 120579 B1 RO120579 B1 RO 120579B1 RO 9800824 A RO9800824 A RO 9800824A RO 120579 B1 RO120579 B1 RO 120579B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- cells
- flt3 ligand
- ligand
- flt3
- patient
- Prior art date
Links
- 108700014844 flt3 ligand Proteins 0.000 title claims description 45
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 66
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 25
- 102100020715 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 101710162577 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 101
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 65
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 65
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 65
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 claims description 29
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 claims description 28
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 25
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 23
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 18
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 15
- 108010039445 Stem Cell Factor Proteins 0.000 claims description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 8
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims description 7
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 7
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 claims 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims 2
- 102000015215 Stem Cell Factor Human genes 0.000 claims 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 17
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 38
- 102100039064 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 26
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 24
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 22
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 20
- 102100020880 Kit ligand Human genes 0.000 description 18
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 18
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 101710177504 Kit ligand Proteins 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 12
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 10
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 10
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 10
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 9
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 8
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 210000002568 pbsc Anatomy 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 5
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 5
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 108010038379 sargramostim Proteins 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101001033279 Homo sapiens Interleukin-3 Proteins 0.000 description 4
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 102000055276 human IL3 Human genes 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- RANONBLIHMVXAJ-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxycyclophosphamide Chemical compound OC1CCOP(=O)(N(CCCl)CCCl)N1 RANONBLIHMVXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 CD86 + CD11c + Proteins 0.000 description 3
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 3
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 3
- 101000716729 Homo sapiens Kit ligand Proteins 0.000 description 3
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- ZAHQPTJLOCWVPG-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO ZAHQPTJLOCWVPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000002949 phytic acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 229960002530 sargramostim Drugs 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 3
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 3
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 2
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 2
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 2
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 101150052863 THY1 gene Proteins 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 102000046157 human CSF2 Human genes 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229940087875 leukine Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 210000001562 sternum Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 239000012808 vapor phase Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108010092408 Eosinophil Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 238000000729 Fisher's exact test Methods 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 102000016355 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010092372 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000932480 Homo sapiens Fms-related tyrosine kinase 3 ligand Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102100021592 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 102100033486 Lymphocyte antigen 75 Human genes 0.000 description 1
- 101710157884 Lymphocyte antigen 75 Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 238000005645 Mc Coy reaction Methods 0.000 description 1
- 102100039364 Metalloproteinase inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- PPQNQXQZIWHJRB-UHFFFAOYSA-N Methylcholanthrene Chemical compound C1=CC=C2C3=CC4=CC=C(C)C(CC5)=C4C5=C3C=CC2=C1 PPQNQXQZIWHJRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010048669 Terminal state Diseases 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940076264 interleukin-3 Drugs 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000001483 mobilizing effect Effects 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/125—Stem cell factor [SCF], c-kit ligand [KL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/22—Colony stimulating factors (G-CSF, GM-CSF)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/24—Interferons [IFN]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/26—Flt-3 ligand (CD135L, flk-2 ligand)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la utilizarea ligandului Flt3 în amplificarea unui răspuns imun la un pacient, utilizarea ligandului Flt3 în generarea in vivo sau in vitro şi la inducerea toleranţei faţă de grefa de ţesut, la o gazdă.
Description
Prezenta invenție se referă la utilizarea ligandului Flt3 în amplificarea unui răspuns imun la un pacient, la utilizarea ligandului Flt3 în generarea in vivo sau in vitro și la inducerea toleranței față de grefa de țesut la o gazdă.
în prezent este cunoscută administrarea in vivo a ligandului Flt3 ce determină diferențierea celulelor precursoare hematopoietice in vivo care devin celule dendritice (EP 0627487).
Pe de altă parte, se cunoaște că pentru a genera celule dendritice se utilizează GM-i
CSF, TNF α și/sau IL-4.
Problema pe care o rezolvă prezenta invenție este că ligandul Flt3 este utilizat înj combinație cu GM-CSF, TNF-α și/sau IL-3 și determină generarea unui număr mare deȘ celule dendritice comparativ cu alte substanțe utilizate în prezent.j
Avantajul utilizării ligandului Flt3 constă în determinarea celulelor stern și precursoarej hematopoietice să se diferențieze ca celule dendritice in vivo sau in vitro. Obiectivul vacci-j nării constă în asigurarea unei imunități eficace prin realizarea unor nivele adecvate dej anticorpi și a unei populații celulare sensibilizate, care se poate mări rapid la un nou contactî cu antigenul. Primul contact cu antigenul, care are loc în timpul vaccinării, nu trebuie să afecteze primitorul și, de aceea, acesta constă în antigen ineficace din punct de vedere al patogenității.
O dificultate frecventă în cadrul protocoalelor de imunizare activă este reprezentată de faptul că antigenul din vaccin nu este suficient de imunogen pentru a iniția un răspuns imun puternic și astfel un nivel suficient de protecție împotriva unui contact ulterior cu același antigen. în plus, anumite antigene pot provoca doar răspuns imun slab, fie prin anticorpi, fie mediat celular. Pentru multe antigene, este de dorit obținerea unui răspuns imun puternic, atât umoral, cât și mediat celular.
Timp de decenii, cercetătorii au experimentat diverși compuși pentru a crește caracterul imunogen al vaccinurilor.
Substanțe din vaccin care potențează răspunsul imun, cunoscute de asemenea și sub numele de adjuvanți, sunt compoziții care facilitează un răspuns imun puternic la un vaccin. în plus, datorită caracterului imunogen relativ slab al anumitor antigene recombinante noi, se cer adjuvanți mai puternici. Adjuvanții din vaccin au diferite moduri de acțiune, care afectează răspunsul imun atât din punct de vedere cantitativ, cât și calitativ. Astfel de moduri de acțiune sunt reprezentate de mobilizarea celulelor T, acțiunea ca depozit, și modificarea circulației limfocitelor, astfel încât aceste celule să rămână localizate în ganglionii limfatici de drenaj. în plus, ei pot fi capabili să concentreze antigenul în situl imunizării, permițând astfel celulelor T și celulelor B antigen-specifice să interacționeze mai eficient cu celulele prezentatoare de antigen. Ei pot, de asemenea, să stimuleze proliferarea și diferențierea celulelor T și să aibă efecte asupra celulelor B, precum creșterea producției de diverse izotipuri de Ig. în plus, adjuvanții pot stimula și influența comportamentul celulelor prezentatoare de antigen, în particular macrofagele, determinându-le să fie mai eficiente în prezentarea antigenului către celulele T și celulele B.
Celulele dendritice sunt o populație celulară rară și heterogenă, cu morfologie distinctivă și cu o distribuție tisulară largă. Steinman, R.M,, în Annu. Rev. Immunol., 9.:271296 (1991), realizează o discuție despre sistemul celulelor dendritice și rolul lui asupra caracterului imunogen. Celulele dendritice prezintă o suprafață celulară neobișnuită și pot fi caracterizate prin prezența markerilor celulari de suprafață CD1a+, CD4+, CD14 , CD86+ CD11c+, DEC-205*, CD14+ sau HLA-DR+. Celulele dendritice au o mare capacitate de a sensibiliza celulele T CMH-limitate și de a asigura o cale eficace pentru prezentarea antigenelor către celulele T in situ, atât antigenele seif în timpul dezvoltării celulei T, cât și
RO 120579 Β1 antigenii străini în timpul imunizării. Astfel, există un interes crescând pentru utilizarea 1 celulelor dendritice ex vivo, ca adjuvanți pentru vaccinurile antitumorale și pentru vaccinurile împotriva bolilor infecțioase. Vezi, de exemplu, Romani, și colab., J.Exp.Med., 180: 83 3 (1994). Utilizarea celulelor dendritice ca agenți imunostimulatori a fost limitată datorită frecvenței scăzute a celulelor dendritice în sângele periferic, a accesibilității limitate la nivelul 5 organelor limfoide și a stării terminale de diferențiere a celulelor dendritice. Celulele dendritice provin din precursorii CD34+ din măduva osoasă, iar proliferarea și maturarea 7 celulelor dendritice poate fi crescută de citokinele GM-CSF (sargramostim, l_eukine(R), Immunex Corporation, Seattle, Washington), TNF-α, ligandul c-Kit (cunoscut, de asemenea, 9 ca factor al celulei stern (SCF), SF (steel factor), sau MGF (mast cell growth factor)) și interleukina 4. De aceea, un agent care stimulează generarea de serii mari de celule den- 11 dritice mature din punct de vedere funcțional, in vivo sau in vitro, va fi de o mare importanță.
Ligandul fit 3 (ligand fit 3 sau fit 3-L) este cunoscut ca având influență asupra 13 celulelor stern și precursoare. în mod surprinzător, s-a descoperit că ligandul flt-3 poate, de asemenea, să stimuleze puternic și generarea de celule intermediare sau celule având un 15 grad mai mare de diferențiere, precum celule precursoare mieloide, celule monocite, macrofage, celule B și celule dendritice, din precursorii medulari CD 34* și celule stern. Sunt 17 caracteristice prezentei invenții, o metodă de mobilizare a celulelor dendritice expansive in vivo, cultivarea celulelor dendritice ex vivo și preparate purificate de celule dendritice. 19 Prepararea celulelor dendritice purificate în conformitate cu această invenție, își găsește o utilizare potențială ca adjuvant pentru vaccinuri. De asemenea, este inclusă în utilizarea 21 acestei invenții și o metodă de preparare a celulelor T antigen-specifice, folosind celulele dendritice mobilizate cu ligandul flt3. 23
Invenția are în vedere utilizarea unei cantități eficace de ligand flt3 pentru a crește sau a mobiliza seriile de celule intermediare in vivo, de exemplu în sângele periferic al 25 pacientului, în țesuturile sau în organele acestuia. Cu toate că invenția se referă la producerea de serii mari de astfel de celule intermediare și celule având un grad mai mare 27 de diferențiere (de exemplu, celule mieloide, celule monocite și macrofage), din celule CD 34+, folosind ligandul flt3, atenția este îndreptată în mod special spre celulele dendritice. Prin 29 creșterea cantității de celule dendritice ale pacientului, astfel de celule pot fi utilizate, ele însele, să prezinte antigenul către celulele T. De exemplu, antigenul poate fi unul care deja 31 există în organismul pacientului, precum un antigen tumoral, sau un antigen bacterian sau viral. Ligandul flt3 poate fi utilizat, prin urmare, pentru a crește seriile de celule dendritice in 33 vivo, cu scopul de a intensifica răspunsul imun al unui pacient împotriva unor antigene existente. în mod alternativ, ligandul flt3 poate fi administrat înainte, simultan sau după 35 administrarea unui antigen în scopul imunizării unui pacient. Astfel, ca adjuvant pentru vaccin, ligandul flt3 poate genera cantități mari de celule dendritice sau alte celule interme- 37 diare, in vivo, pentru o prezentare a antigenului mult mai eficace. Rezultatul global este un răspuns imun mai puternic și îmbunătățit, și o imunizare mai eficace la antigenul respectiv. 39 Invenția furnizează, de asemenea, și o metodă de generare a unor cantități mari de celule dendritice ex vivo. După recoltarea de precursori hematopoietici CD 34* și celule stern 41 de la pacient, se poate utiliza ligandul flt3 pentru a cultiva aceste celule in vitro (cunoscută de asemenea, și sub numele de cultivare ex vivo) și pentru a determina astfel de celule CD 43 34* să se diferențieze în celule dendritice, ale seriei limfoide sau mieloide. Colecția rezultată de celule dendritice poate fi administrată la un pacient pentru a asigura un răspuns imun 45 îmbunătățit și mai puternic, față de un antigen. în mod alternativ, celulele dendritice rezultate își găsesc utilizare ca adjuvant pentru vaccin și pot fi administrate înainte, simultan sau după 47 administrarea antigenului.
RO 120579 Β1
Invenția furnizează, de asemenea, o metodă de generare a unor cantități mari de celule dendritice prezentatoare, de antigen ex vivo. După recoltarea de precursori hematopoietici, CD34+ și de celule stern de la pacient, ligandul flt3 poate fi utilizat pentru cultivarea acestui tip de celule in vitro și pentru determinarea diferențierii acestor celule CD34+ în celule dendritice. Colecția rezultată de celule dendritice este apoi expusă la un antigen și lăsată apoi să proceseze și să prezinte antigenul in vitro (acest procedeu este menționat uneori în domeniu ca antigen-pulsing). O metodă alternativă pentru prepararea celulelor dendritice care prezintă antigen este transfectarea acestor celule dendritice cu o genă care codifică un polipeptid antigen-specific. De îndată ce aceste celule dendritice exprimă antigenul, celulele dendritice prezentatoare antigen pot fi administrate unui pacient.
Invenția are în vedere, de asemenea, și prepararea ex vivo de celule T antigenspecifice. Urmând procedeele descrise mai sus, pentru prepararea unor serii mari de celule dendritice prezentatoare de antigen ex vivo, celulele dendritice prezentatoare de antigen colectate sunt utilizate pentru producerea de celule T antigen-specifice din celule T naive, care au fost recoltate de la un pacient. După ce antigenul a fost prezentat în mod adecvat celulelor T generate celulele T antigen - specifice pot fi administrate unui pacient.
Invenția se referă, de asemenea, și la o metodă de amplificare a răspunsului imun la un pacient care are o boală infecțioasă, metoda fiind caracterizată prin aceea că cuprinde etapa de administrare unei cantități de ligand flt3, suficientă ca să crească numărul de celule dendritice ale pacientului.
Invenția furnizează, de asemenea, o metodă de amplificare a răspunsului imun al unui pacient care are o boală canceroasă sau neoplazică, metoda fiind caracterizată prin aceea că cuprinde etapa de administrare a unei cantități de ligand flt3, suficientă ca să crească numărul de celule dendritice ale pacientului. O astfel de metodă furnizează un mijloc de creștere a răspunsului imun specific antitumoral al pacientului.
Metoda pentru creșterea toleranței autoimune la un pacient este caracterizată prin aceea că, cuprinde etapa de administrare a unei cantități de ligand flt3, suficientă ca să crească numărul de celule dendritice ale pacientului. în continuare, sunt incluse metode care contribuie la susținerea duratei de viață a grefelor, țesuturilor și organelor transplantate.
Metodele invenției pot conține în plus, utilizarea unei cantități eficace dintr-o citokină în combinație succesivă sau simultană cu ligand flt3. Astfel de citokine includ următoarele și nu numai: interleukine (l-L), IL-3 și IL-4, un factor de stimulare a coloniilor (“CSF”), selectat din grupul format din factor de stimulare a coloniei de macrofage granulocite (GM-CSF) sau fuziuni de GM-CSF/IL-3, sau alte citokine, precum TNF-α sau ligandul c-kit.
Invenția include un mediu de cultură pentru dezvoltarea celulelor dendritice, conținând un mediu de creștere celulară, serautolog și ligand flt3, singur sau în combinație cu o citokină din grupul celor enumerate mai sus.
Invenția are ca obiect, utilizarea, ligandului fit 3 pentru producerea de serii mari de tipuri celulare intermediare, din celule precursoare hematopoietice CD34+ și celule stern. Astfel de tipuri celulare intermediare includ celule mieloide, celule monocite, macrofage, celule B și celule dendritice. Populații mari din aceste tipuri celulare nu există în mod natural in vivo și pot fi generate prin administrarea de ligand flt3. O astfel de creștere globală a numărului de celule poate intensifica răspunsul imun al gazdei față de antigen. O altă realizare a acestei invenții constă în izolarea și utilizarea acestor tipuri celulare intermediare sub formă de celule prezentatoare de antigen, și utilizarea acestora ca adjuvanți pentru vaccinuri. Deși este în mod special orientată spre utilizarea celulelor dendritice, invenția se aplică și celulelor mieloide, monocite și macrofage.
RO 120579 Β1
Așa cum este utilizat în invenție, termenul de ligand flt3 se referă la o clasă de poli- 1 peptide care sunt descrise în brevetul US 5554512, EP 0627487 A2 și în WO 94/28391. Un ADNC pentru ligand -flt3 uman a fost depus în American Type Culture Collection, Rockville, 3 Maryland, USA (ATCC), la data de 6 august 1993 și a primit numărul de acces ATCC 69382, Depozitul a fost făcut în termenii Tratatului de la Budapesta. Ligandul flt3 poate fi preparat 5 în conformitate cu metodele descrise în documentele citate mai sus.
Termenul de IL-3 se referă la o clasă de polipeptide de tip interleukină-3 așa cum 7 a fost descrisă în brevetul US 5108910, inclus în prezenta prin referință. Astfel de polipeptide includ analogi care au secvențe de aminoacizi care sunt în mod substanțial similare cu 9 secvențele de aminoacizi ale interleukinei-3 native umane, descrise, de exemplu, în publicația EP 275598 și EP 282185, fiecare fiind inclusă în prezenta prin referință. Termenul de IL- 11 3” include, de asemenea, analogi și alele ale moleculelor de IL-3 care prezintă cel puțin câteva din funcțiile biologice ale IL-3 native umane. Exemple de analogi ai IL-3 sunt descrise 13 în publicația EP 282185. Alte forme de IL-3 includ IL-3 [Pro8Asp15Asp70] umană, ILSfSe/Asp^Asp70] umană și IL-3[Seroumană. O secvență de ADN codificând o proteină de 15 tip IL-3 umană adecvată pentru utilizarea în cadrul acestei invenții, este disponibilă în mod public de la American Type Culture Collection (ATCC) având numărul de acces ATCC 17 67747. Nomenclatura utilizată în prezenta descriere, referitor la secvențele de aminoacizi notate în paranteze drepte, indică aminoacizii care diferă comparativ cu forma umană nativă. 19 De exemplu, IL-SjSer^Asp^’Asp70] umană se referă la o proteină de tip IL-3 umană în care aminoacidul 8 a fost înlocuit cu un rest de serină, aminoacidul 15 a fost -înlocuit cu un rest 21 de acid aspartic, iar aminoacidul 70 a fost înlocuit cu un rest de acid aspartic.
Termenul de IL-4 se referă, la un polipeptid așa cum a fost descris de Mosley și 23 colab., Cell 59:335 (1989), Idzerda și colab., J. Exp. Med. 171:861 (1990) și Galizzi și colab., Intl. Immunol. 2:669 (1990). Astfel de polipeptide de tip IL-4 includ analogi care au o sec- 25 vență de aminoacizi care este în mod substanțial similară cu secvențele de aminoacizi ale IL-4 native umane, descrise de Mosley și colab., Idzerda și colab., și Galizzi și colab., și care 27 sunt activi din punct de vedere biologic, astfel încât sunt capabili să se lege la un receptor IL-4, determinând transducția unui semnal biologic inițiat de legarea la receptorul IL-4, sau 29 au capacitatea de a reacționa încrucișat cu anticorpii anti IL-4. Termenul de IL-4 include, de asemenea, analogi ai moleculelor de IL-4 nativă umană care păstrează activitatea 31 biologică a IL-4 native umane.
Așa cum este utilizat în prezenta, GM-CSF se referă la o clasă de proteine așa cum 33 a fost descrisă în brevetele US 5108910 și US 5229496. Astfel de proteine includ analogi care au o secvență de aminoacizi care este în mod substanțial similară cu secvențele de 35 aminoacizi ale GM-CSF nativ uman (de exemplu, precum cei disponibili în mod public cu numerele de acces ATCC 53157 sau ATCC 39900), și care sunt activi din punct de vedere 37 biologic, astfel încât au capacitatea de legare la un receptor GM-GSF, determinând transducția unui semnal biologic inițiat de legarea la receptorul GM-CSF, sau au capacitatea de 39 a reacționa încrucișat cu anticorpi anti-GM-CSF. Secvențele de aminoacizi sunt descrise, de exemplu de Anderson, și colab., Proc.Natl. Acad. Sci., USA 82:6250 (1985). GM-CSF dispo- 41 nibil din punct de vedere comercial (Sargramostim, Leukine(R)) poate fi procurat de la Immunex Corp.,Seattle, WA). Termenul de GM-CSF include, de asemenea, analogi ai 43 moleculelor de GM-CSF nativ uman, descriși -în brevetele US 5108910 și US 5229496, care păstrează activitatea biologică a GM-CSF nativ uman. Exemple de analogi ai GM-CSF includ 45 de exemplu, pe acelea descrise în publicația EP 212 914 și WO 89/03881. Și alți analogi ai GM-CSF pot fi utilizați pentru a crea proteine de fuziune cu IL-3. O secvență de ADN care 47
RO 120579 Β1 codifică o proteină de tip GM-CSF în mod particular preferată, având situsuri de glicozilare potențială îndepărtate, este disponibilă din punct de vedere public de la ATCC cu numărul de acces ATCC 67231.
Termenul de proteină de fuziune GM-CSF/IL--3 semnifică o fuziune între C-terminal și N-terminal ale GM-CSF și IL-3. Proteinele de fuziune sunt cunoscute și descrise în brevetele US 5199942, US 5108910 și US 5073627, fiecare dintre acestea fiind inclus în prezenta prin referință. O fuziune preferată, este PIXY 321 așa cum a fost descrisă în brevetul US 5199942.
Termenul de “ligand c-Kit, cunoscut de asemenea și ca Mast Cell Growth Factor” (MGF), Steel Factor sau Stern Cell Factor (SCF), se referă la un polipeptid descris în EP 423980, care reclamă ca prioritate cererea de brevet US 589701, înregistrată în 1 octombrie 1990. Astfel de polipeptide de tip ligand c-Kit includ analogi care au o secvență de aminoacizi care este în mod substanțial similară cu secvențele de aminoacizi ale ligandului c-Kit nativ uman, descrise în EP 423980 și care sunt activi din punct de vedere biologic, astfel încât au capacitatea de legare la un receptor c-Kit, determinând transducția unui semnal biologic inițiat de legarea la receptorul c-Kit, sau au, capacitatea de a reacționa încrucișat cu anticorpi anti-ligand c-Kit. Termenul de ligand c-Kit, include de asemenea și analogi ai moleculelor de ligand c-Kit nativ uman, care păstrează activitatea biologică a ligandului c-Kit nativ uman.
Termenul de adjuvant se referă la o substanță care mărește, intensifică sau potențează răspunsul imun al gazdei la antigenul dintr-un vaccin.
Procedeul pentru cultivare ex vivo a celulelor hematopoietice precursoare și stern este descris în brevetul US 5199942, inclus în prezenta prin referință. Pe scurt, termenul semnifică o metodă care cuprinde: (1) recoltarea de celule hematopoietice stern și precursoare CD34+ de la un pacient, din sângele periferic sau prin puncția măduvei osoase; și (2) cultivarea acestui tip de celule ex vivo. în plus față de factorii de creștere celulară descriși în brevetul 5199942/ pot fi folosiți și alți factori precum ligandul flt3, IL-1, IL-3, ligandul c-kit.
Termenul de caracter imunogen semnifică eficacitatea relativă a unui imunogen sau antigen, în inducerea unui răspuns imun.
Termenul de similar în mod substanțial semnifică o variantă de secvență de aminoacizi care este, de preferat, identică în proporție de cel puțin 80% cu o secvență de aminoacizi nativă, și mai preferabil identică în proporție de cel puțin 90%. Identitatea procentuală poate fi determinată de exemplu, prin compararea: informației conținute de secvență folosind programul de computer GAP, versiunea 6.0, descris de Devereux și colab., (Nucl.Acids Res. 12:387,1984) disponibil de la University of Wisconsin Genetics Computer Group (UWGCG). Programul GAP utilizează metoda de aliniere a lui Needleman și Wunsch (J. Mol.Biol.·48:-443, 1970), așa cum a fost revizuită de Smith și Waterman (Adv.Appl.Math. 2:482, 1981).
Parametrii de eroare preferați pentru programul GAP includ: (1) o matrice de comparație unară (conținând o valoare de 1 pentru identități și 0 pentru non-identități) pentru nucleotide, și matricea de comparație a greutății a lui Gribskov și Burgess, Nucl.Acids Res.14: 6745; 1986, așa cum a fost descrisă în Schwartz și Dayhoff, eds., Atlas ofProtein Sequence and Structure, Național Biomedical Research Foundation, pag. 353 - 358,1-979; (2) o penalizare de 3,0 pentru fiecare loc liber și o penalizare suplimentară de 0,10 pentru fiecare simbol din fiecare loc liber; și (3) fără penalizare pentru locurile libere finale. Unele variante pot cuprinde secvențe substituite conservativ, și anume un rest de aminoacid dat este înlocuit cu un rest care are caracteristici fizicochimice similare. Exemple de substituții conservative includ, substituția unui rest alifatic în locul altuia, precum lle, Val, Leu sau Ala
RO 120579 Β1 în locul unui alt rest; sau substituțiile unui rest polar cu altul, așa cum sunt substituțiile între 1 Lys și Arg; Glu și Asp; sau Gin și Asn. Alte astfel de substituții conservate, de exemplu substituții de regiuni întregi care au caracteristici hidrofobe similare, sunt bine cunoscute. 3 Variante care apar în mod natural sunt de asemenea cuprinse în domeniul invenției. Exemple de astfel de variantesunt proteinele care rezultă din îmbinări alternante de ARNm 5 sau din scindare proteolitică a proteinei native, caracterizate prin păstrarea proprietăților biologice native. 7
Așa cum este utilizat în prezenta, termenul de “vaccin” semnifică un organism sau material care conține un antigen sub formă inofensivă. Vaccinul este creat să declanșeze un 9 răspuns imunoprotector. Vaccinul poate fi recombinant sau non-recombinant. Când se inoculează la o gazdă neimunizată, vaccinul provoacă apariția reacției imune față de organis- 11 mul sau materialul respectiv, dar nu produce boală. Vaccinurile se pot găsi sub formă de toxoid, de exemplu, și anume această formă este definită ca fiind o toxină care a fost detoxi- 13 fiată, dar care păstrează încă determinanții ei imunogeni majori, sau un organism omorât, cum arfi agentul febrei tifoide, al holerei sau poliomielitei; sau organisme atenuate, care sunt 15 vii, dar nevirulente, forme de patogeni, sau poate fi un antigen codificat de un astfel de organism, sau o celulă tumorală vie sau un antigen prezent pe o celulă tumorală. 17
Se cunosc tehnici variate de selecție celulară pentru identificarea și separarea celulelor hematopoietice precursoare și stern, dintr-o populație celulară. Se cunosc metode 19 și materiale pentru identificarea și selectarea acestor tipuri celulare. De exemplu, se pot utiliza anticorpii monoclonali pentru a se lega la o proteină marker sau o proteină antigenică 21 de suprafață, de pe celulele stern și precursoare. Astfel de markeri sau de antigene de suprafață celulară pentru celulele stern hematopoietice includ CD34 și Thy-1. într-una din 23 metode, anticorpii sunt fixați pe o suprafață, de exemplu bile de sticlă, și sunt puși în contact cu un amestec de celule care se presupune că ar conține celule stern. Acest lucru permite 25 anticorpilor să se lege și să fixeze celulele stern la bilele de sticlă. în mod alternativ, anticorpii pot fi incubați cu amestecul celular, iar combinația rezultată să fie pusă în contact cu o supra- 27 față ce are afinitate pentru complexul celulă-anticorp. Celulele nedorite și materia celulară sunt îndepărtate, rezultând o populație relativ pură de celule stern. Celulele stern sau 29 precursoare cu marker CD34, reprezintă doar aproximativ 1 % până la 3% din celulele mononucleare din măduva osoasă. Cantitatea de celule stern sau precursoare CD 34+ în sângele 31 periferic este de aproximativ 10 până la 100 de ori mai mică decât în măduva osoasă.
în ceea ce privește aspectele particulare ale invenției, alegerea unor mijloace de 33 selecție a celulelor stern sau precursoare adecvate, va depinde de fenotipul dorit al celulei care trebuie izolată. Celulele stern hematopoietice sunt selectabile în virtutea caracteristicilor 35 lor fizice, și anume exprimarea receptorului flt3 legat de membrană, sau posesia următorilor markeri celulari: CD 34 sau Thy-1. Anticorpii monoclonali care recunosc oricare dintre aceste 37 antigene au fost descriși în brevetul US 4714680 (anti-My-10), inclus în prezenta prin referință, anticorpii anti CD 34 fiind disponibili din punct de vedere comercial de la Becton 39 Dickinson, Franklin Lakes, NJ, iar anticorpii, monoclonali anti-Thy-1 pot fi rapid produși prin utilizarea metodelor descrise de Dalchau și colab., J. Exp. Med. 149: 576 (1979). Poate fi, 41 de asemenea, utilizată o proteină cu capacitate de legare la receptorul flt3, și anume anticorpi monoclonali anti-flt3 sau ligandul fit.3. Proteina cu capacitate de legare la celulă 43 este adusă în contact cu amestecul de celule recoltate și combinația este lăsată să fie incubată pentru o perioadă de timp suficientă, care să permită legarea celulelor dorite la 45 proteina cu capacitate de legare la celulă.
Un mijloc alternativ de selectare a celulelor stern pasive este reprezentat de 47 inducerea morții celulare la tipurile de celule în diviziune mai angajate în diferențiere,
RO 120579 Β1 utilizând un antimetabolit precum 5-fluoruracil 5-FU) sau un agent alchilant precum 4-hidroxiciclofosfamidă (4-HC). Celulele non-pasive sunt stimulate să prolifereze și să se diferențieze prin adăugare de factori de creștere care au efect mic sau nu au nici un efect asupra celulelor stern, determinând proliferarea și diferențierea celulelor non-stem, făcându-le astfel mai vulnerabile la efectele citotoxice ale 5-FU sau 4-HC. Vezi Berardi și colab., Science, 267:104 (1995).
Izolarea celulelor hematopoietice precursoare sau stern poate fi realizată prin utilizarea, de exemplu, a cromatografiei de afinitate, a bilelor magnetice învelite cu anticorpi, sau a anticorpilor fixați pe o matrice solidă, precum, bile de sticlă, flacoane etc. Anticorpii care recunosc un marker de suprafață al celulei stern sau precursoare, pot fi fuzionați sau conjugați cu alte fragmente chimice precum, biotina - care poate fi îndepărtată cu un fragment de avidină sau streptavidină, fixat pe un suport solid; fluorocromi utili în sortarea celulelor activate prin fluorescență (FACS) sau altele de acest fel. De preferat, izolarea se realizează printr-o coloană de imunoafinitate. Coloanele de imunoafinitate pot lua orice formă, dar de obicei cuprind un reactor cu pat împachetat. Patul împachetat din aceste bioreactoare este făcut, de preferat dintr-un material poros având o învelire în mod substanțial uniformă a substratului. Materialul poros, care asigură un raport mare al ariei suprafeței față de volum, permite amestecului celular să ia contact cu o suprafață largă și, în același timp, nu există riscul ca celulele să alunece în afara patului. Substraturile tipice includ avidină și streptavidină, cu toate că și alte substrate convenționale pot fi folosite. Substratul ar trebui să prezinte, fie datorită proprietăților lui, fie prin adăugarea unui fragment chimic, afinitate crescută pentru un fragment care se află pe proteina cu capacitate de legare la celulă, și anume un anticorp monoclonal. Anticorpii monoclonali recunosc un antigen de suprafață celulară, de pe celulele care trebuie separate, și sunt modificați mai departe,în mod caracteristic, pentru a prezenta un fragment de biotină. Se cunoaște bine faptul că biotina are afinitate înaltă pentru avidină și, datorită acestei afinități, a acestor substanțe, fixează reversibil anticorpul monoclonal la suprafața patului împachetat. Astfel de coloane sunt bine cunoscute în domeniu, vezi Beren-son, și colab., J. CellBiochem.. 10D: 239 (1986). Coloana este spălată cu soluție PBS pentru a se îndepărta materialul nelegat. Celulele țintă pot fi eliberate de pe suprafața bilelor, folosind metode convenționale. Coloane de imunoafinitate de tipul descris mai sus, care utilizează anticorpi monoclonali anti CD 34 biotinilați, fixați la un pat împachetat. învelit cu avidină, sunt descrise de exemplu, în PCT WO 93/08268. O variantă a acestei metode utilizează proteine cu capacitate de legare la celule, precum anticorpii monoclonali sau ligandul flt3 așa cum s-a descris mai sus, fixate reversibil la o suprafață fixată în mijlocul de izolare. Proteina cu capacitate de legare la celulă, după ce s-a legat, este pusă în contact cu amestecul celular recoltat și este lăsată să fie incubată pentru o perioadă de timp suficientă să permită izolarea celulelor dorite.
în mod alternativ, anticorpii monoclonali care recunosc antigenii de suprafață celulară pot fi marcați cu un marker fluorescent, de exemplu cromofor sau fluorofor, și sunt separați prin sortare celulară în funcție de prezența sau absența cantității de produs marcat.
Celulele CD34* colectate sunt apoi expuse fie la ligand flt3 singur, fie la o combinație simultană sau succesivă de ligand flt3 cu una sau mai multe din citokinele următoare: GMCSF, TNF-α, IL-3, IL-4, ligand c-kit sau proteine de fuziune GM-CSF/IL-3. Celulele CD34+ sunt lăsate apoi să se diferențieze, și să se angajeze în diferențiere spre celule din seria dendritică. Celulele dendritice sunt colective și pot fi apoi fie (a) administrate la un pacient cu scopul de a amplifica sistemul imun și răspunsurile imune mediate prin celule T sau prin celule B, față de antigen, fie pot fi (b) expuse la un antigen înainte de administrarea acestor celule dendritice la un pacient, fie pot fi (c) transferate cu o genă care codifică un polipeptid
RO 120579 Β1 antigen-specific, fie pot fi (d) expuse la un antigen și apoi lăsate să proceseze și să prezinte 1 antigenul, ex vivo, celulelor T recoltate de la pacient, după care celulele T antigen-specifice vor fi administrate pacientului. 3
Mai specific, invenția are în vedere utilizarea unei cantități eficace de ligand flt3 pentru creșterea numărului sau mobilizarea celulelor dendritice in vivo, de exemplu în 5 sângele periferic al pacientului sau în alte țesuturi sau organe, cum ar fi splina. Prin creșterea cantității de celule dendritice ale pacientului, aceste celule pot fi utilizate ele însele să 7 prezinte antigenul celulelor T. De exemplu, antigenul poate fi unul care există deja în organismul pacientului, cum ar fi un antigen tumoral, sau un antigen viral sau bacterian. Astfel, 9 se poate utiliza ligandul fit 3 pentru a intensifica răspunsul imun al pacientului, mediat limfocitar (de exemplu mediat prin celule T sau prin celule B) sau mediat mieloid față de antige- 11 nele deja prezente, fiind posibil să determine astfel o prezentare mai eficace a antigenului către celulele T. 13 în mod alternativ, ligandul flt3 poate fi administrat înainte, simultan sau după administrarea unui antigen la un pacient, în scopul imunizării. Astfel, în calitate de adjuvant 15 pentru vaccin, ligandul flt3 poate determina producerea de cantități mari de celule dendritice in vivo, pentru o prezentare mai eficace a antigenului. Răspunsul global este un răspuns 17 imun mai puternic și îmbunătățit, și o imunizare eficace față de antigen.
Administrarea sistemică de ligand flt3 este eficace nu numai ca adjuvant pentru 19 vaccin, dar și în amplificarea răspunsului imun la antigenii preexistenți, așa cum s-a discutat mai sus. De exemplu, inventatorii au arătat că administrarea ligandului flt3 la șoareci cu 21 tumori, determină cel puțin o scădere semnificativă a ritmului de creștere tumorală și poate determina rejecția tumorii la o mare parte dintre șoareci. Datele sunt prezentate mai detaliat 23 în exemplul 3. Ligandul fit 3 este deci o importantă citokină pentru generarea unui răspuns imun eficace față de antigen, in vivo. 25
Datorită capacității lui de a genera celule dendritice, ligandul flt3 își găsește de asemenea utilizare în prelungirea duratei de supraviețuire a țesuturilor sau organelor 27 transplantate. Când organe, alogene sau alte țesuturi sunt transplantate la o gazdă, ele pot transfera celule stern, celule dendritice imature, și celule dendritice mature, de la donator. 29 Aceste celule sunt denumite celule pasagere și astfel de celule se pot grefa în sistemul hematopoietic al gazdei. în plus, celule stern, celule dendritice imature, și celule dendritice 31 mature de la gazdă se pot grefa în organul sau țesutul provenit de la donator. Este posibilă atunci, stabilirea unei toleranțe între grefă și gazdă în momentul în care celulele dendritice 33 imature de la gazdă și de la țesutul donat interacționează cu celule T din cealaltă parte.
Astfel de interacțiune poate include deleția celulelor T care recunosc complexul major de 35 histocompatibilitate (CMH) pe care îl exprimă celulele dendritice. în acest fel, celulele țesutului donat sunt protejate, astfel încât să nu recunoască gazda și sa nu reacționeze împotriva 37 ei, și anume nu va apărea nici o afectare a gazdei datorită grefei), iar celulele T ale gazdei sunt protejate astfel, încât să nu recunoască grefa și să nu reacționeze împotriva ei (și 39 anume nu va apărea respingerea grefei). Astfel, se poate obține o toleranță reciprocă și se îmbunătățește acceptarea grefei. Administrarea de ligand flt3 donatorului sau gazdei înainte 41 de transplant, va genera cantități crescute de celule dendritice la gazda sau donatorul respectiv, și va permite o toleranță crescută și o durată de supraviețuire mai mare a grefei. 43 Pentru creșterea și cultivarea celulelor dendritice, se poate folosi o varietate de medii de creștere și de cultură, iar compoziția unor astfel de medii poare fi rapid determinată de 45 o persoană ce are cunoștințe de bază în domeniu. Medii de creștere adecvate sunt soluții ce conțin nutrienți sau aditivi metabolici și le includ pe acelea care sunt fără ser sau pe bază 47 de ser. Exemple reprezentative de medii de creștere sunt RPMI, TC 199, mediul Dulbecco
RO 120579 Β1 modificat Iscoves (Iscove., și colab., F.J. Exp.Med., 147: 923 (1978))., DMEM, Mediul alfa Fischer.NCTC, F-10, L-15 Leibovitz, MEM și Mc Coy's. Exemple particulare de nutrienți care vor fi rapid recunoscuți de specialiștii în domeniu sunt albumina serică, transferina, lipide, colesterol, un agent de reducere precum 2-mercaptoetanol sau monotioglicerol, piruvat, butirat, și un glucocorticoid precum 2-hemisuccinatde hidrocortizon. Mai particular, mediul standard include o sursă de energie, vitamine sau alți compuși organici de susținere a celulelor, o soluție tampon precum HEPES, Tris, care acționează în sensul stabilizării pH-ului mediului, sau diverse săruri anorganice. Se face o referire specială la Publ. PCT WO 95/00 632, în care sunt descrise mai multe tipuri de medii de creștere celulară, fără ser, această descriere fiind inclusă în prezenta prin referință.
Pentru oricare dintre metodele ex vivo ale invenției, sunt recoltate celule precursoare din sângele periferic (PBPC) și celule stern din sângele periferic (PBSC), utilizând procedee de afereză cunoscute în domeniu. Vezi, de exemplu, Bishop și colab., Blood, voi.83, Nr.2, paginile 610 - 616 (1994). Pe scurt, PBPC și PBSC sunt recoltate folosind dispozitive convenționale, de exemplu un dispozitiv de afereză, Model Y50 Haemonetics (Haemonetics, Braintree, MA). Recoltări la patru ore, se realizează în mod caracteristic nu mai mult de cinci ori pe săptămână până ce, de exemplu, se recoltează aproximativ 6,5 x 10® celule mononucleare (MNC)/Kg pacient. Celulele sunt suspendate în mediu standard, și sunt apoi centrifugate pentru a se îndepărta globulele roșii și neutrofilele. Celulele localizate la interfața dintre cele două faze (cunoscută de asemenea în domeniu ca strat tampon) sunt luate și resuspendate în HBSS. Celulele suspendate sunt în mod predominant mononucleare, și o parte substanțială din amestecul celular sunt celule stern tinere. Suspensia de celule stern rezultată poate fi apoi pusă în contact cu anticorpi monoclonali, anti-CD 34 biotinilați sau cu alte mijloace de legare a celulelor. Perioada de contact are o durată suficientă, astfel încât să permită o interacțiune substanțială intre anticorpii monoclonali anti-CD 34 și antigenele CD 34 de pe suprafața celulelor stern. în mod caracteristic, o perioadă de timp de cel puțin o oră este suficientă. Suspensia celulară este apoi adusă în contact cu mijloacele de izolare furnizate de kit. Mijloacele de izolare pot cuprinde o coloană împachetată cu bile învelite cu avidină. Astfel de coloane sunt bine cunoscute în domeniu, vezi Berenson, și colab., J.Cell Biochem, 10D: 239 (1986). Coloana se spală cu o soluție PBS pentru a îndepărta materialul nelegat. Celulele stern țintă pot fi eliberate de la nivelul bilelor și din legătura cu anticorpii monoclonali anti-CD 34, folosind metode convenționale. Celulele stern obținute în acest fel pot fi congelate într-un congelator cu viteza controlată (de exemplu, Cryo-Med, Mt.Clemens, Ml) și apoi păstrate în fază de vapori a azotului lichid. Se poate utiliza dimetilsulfoxid 10% ca crioprotector. După ce s-au făcut toate recoltările de la donator, celulele stern sunt dezghețate și amestecate. Se cultivă și se dezvoltă alicoturi ce conțin celule stern, mediu de creștere, cum ar fi mediul MC Coy's 5A, 0,3% agar, și cel puțin unul dintre factorii de dezvoltare: GM-CSF recombinant uman, IL-3, ligand fit 3 recombinant uman, molecule, de fuziune GM-CSF/IL-3 (PIXY 321) la concentrații de aproximativ 200 U/ml, la 37°C în aer cu CO2 2% complet umidificat, timp de 14 zile. în mod opțional, se poate adăuga în culturi IL-1 a sau IL-4. Cea mai preferată combinație de factori de dezvoltare conține ligand fit 3 cu IL-3 sau cu proteină de fuziune GM-CSF/IL-3.
Pentru administrarea in vivo la oameni, ligandul fit 3 poate fi formulat în conformitate cu metodele cunoscute, folosite pentru prepararea de compoziții utile din punct de vedere farmaceutic. Ligandul fit 3 poate fi combinat în amestec, fie ca singură substanța activă, fie împreună cu alte substanțe active cunoscute, în amestec cu diluanți adecvați din punct de vedere farmaceutic (de exemplu Tris-HCI, acetat, fosfat), conservanți (de exemplu Thimerosal, alcool benzilic, parabens), emulsifianți, agenți de solubilizare, adjuvanți și/sau
RO 120579 Β1 materiale, de suport. Materiale de suport adecvate și formulările lor sunt descrise în 1 Remington's Pharmaceutical Sciences, a 16-a ediție 1980/ Mack Publishing Co. în plus, acest fel de compoziții pot conține complexe de ligand fit 3 cu polietilen glicol (PEG), ioni 3 metalici, sau pot fi incluse în compuși polimerici precum acid poliacetic: acid poliglicolic, hidrogeluri etc., sau pot fi incluse în lipozomi, microemulsii, micele, vezicule unilamelare sau 5 multilamelare, fantome eritrocitare, sau sferoblaști. Astfel de compoziții vor influența starea fizică, solubilitatea, stabilitatea viteza eliberării in vivo și viteza clearence-ului de limpezire 7 in vivo al ligandului fit 3.
Ligandul fit 3 poate fi administrat local, parenteral, sau prin inhalare. Termenul de 9 “parenteral” include injecțiile subcutanate, injecțiile intravenoase, intramusculare, intracistemale sau tehnici de infuzie. Aceste compoziții vor conține în mod caracteristic o 11 cantitate eficace de ligand fit 3, singur sau în combinație cu o cantitate eficace din orice altă substanță activă. Acest fel de dozaje și concentrațiile dorite de medicament conținute în com- 13 poziții pot varia în funcție de mulți factori incluzând intenția utilizării, greutatea corporală a pacientului și vârsta lui, și calea de administrare. Doze preliminare pot fi determinate în 15 conformitate cu testele pe animale, iar schema de dozare pentru administrare la om poate fi realizată în conformitate cu metodele acceptate în domeniu. Ținând cont de descrierea de 17 mai sus, dozaje caracteristice de ligand fit 3 pot fi cuprinse între aproximativ 10 pg per metru pătrat și aproximativ 1000 pg per metru pătrat. Un interval preferat de doze este cuprins între 19 aproximativ 100 pg per metru pătrat și aproximativ 300 pg per metru pătrat.
în plus față de cele de mai sus, următoarele exemple au în vedere ilustrarea unor 21 concretizări particulare și nu limitează, domeniul invenției.
Exemplul 1. Producerea de celule dendritlce23
Acest exemplu descrie o metodă de utilizare a ligandului flt3 pentru a genera serii mari de celule dendritice ex vivo. Se izolează celule cu fenotip CD 34+ așa cum s-a descris25 mai sus, de exemplu, întâi generând un strat tampon de celule folosind un procedeu descris mai sus. Celulele din stratul tampon sunt apoi incubate cu un anticorp monoclonal specific27
CD 34. Celulele CD 34* care sunt selectate, sunt cultivate în mediu McCoy's îmbogățit cu câte 20 ng/ml de GM-CSF, IL-4, TNF-α sau cu 100 ng/ml de ligand flt3 sau ligand c-Kit.29
Cultura este continuată timp de aproximativ două săptămâni la 37°C în aer umed cu 10% CO2. Celulele sunt apoi sortate prin citometrie în flux pentru exprimare de CD 1a+ și HLA -31
DR+. Combinația de GM-CSF, IL-4 și TNF-α determină o creștere de șase până la șapte ori a numărului de celule obținute după două săptămâni de cultivare. Combinația de ligand flt3 33 și ligand c-Kit a determinat o creștere suplimentară de 12 - 13 ori a numărului absolut de celule. Aceasta semnifică o creștere de 18 ori în prezența fie a ligandului flt3, fie a ligandului 35 c-Kit sau o creștere de 34 de ori în prezența combinației de ligand flt3 cu ligand c-Kit. Analiza fenotipică a celulelor a arătat că 60 - 70% din celule au fost HLA-DR+, CD86*, cu 40 - 50% 37 din celule exprimând CD 1a în toate combinațiile de factori examinate. Adăugarea de ligand flt3 a crescut numărul absolut de celule CD1a* de 5 ori, ligandul c-Kit a crescut numărul 39 acestor celule de 6, 7 ori, iar combinația, de ligand flt3 cu ligand c-Kit a crescut numărul lor de 11 ori. Analiza funcțională a celulelor rezultante în MLR, a arătat că prezența de ligand 41 flt3 sau ligand c-Kit nu a afectat capacitatea de stimulare a celulelor dendritice rezultate, determinând însă creșterea numărului lor. 43
Exemplul 2. Utilizarea de flt3-L în cultivarea celulelor dendritice
Acest exemplu descrie o metodă de utilizare a ligandului flt3 pentru cultivarea 45 celulelor dendritice. înainte de recoltarea celulelor, ar fi de dorit să se mobilizeze sau să se crească numărul de PBPC și PBSC circulante. Mobilizarea poate îmbunătăți recoltarea de 47 PBPC și PBSC și se poate obține prin administrare intravenoasă de ligand flt3 sau
RO 120579 Β1 sargramostim (Leukine(R), Immunex Corporation, Seattle Washington) la pacienți, înainte de recoltarea acestui tip de celule. Se pot administra în același mod în combinație succesivă, sau simultană cu ligand flt3, și alți factori de creștere precum CSF-1, GM-CSF, ligand c-Kit, G-CSF, EPO, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, proteine de fuziune GM-CSF/IL-3, LIF, FGF și combinații ale acestora. PBPC și PBSC mobilizate sau nemobilizate, sunt recoltate folosind procedee de afereză cunoscute în domeniu. Vezi de exemplu, Bishop șicolab., Blood voi.83, Nr.2, paginile 610-616 (1994). Pe scurt, PBPC și PBSC sunt recoltate folosind dispozitive convenționale, de exemplu, un dispozitiv de afereză Model V50 Haemonetics (Haemonetics, Braintree, MA). Recoltări la patru ore, se realizează în mod caracteristic nu mai mult de cinci ori pe săptămână, până ce se recoltează aproximativ 6,5 x 108 celule mononucleare (MNC) /kg pacient. Se testează alicote de PBPC și PBSC recoltate pentru conținutul în CFU-GM (granulocyte-macrofage colony- forming unit) unități formatoare de colonii granulocite prin diluție de aproximativ 1:6 cu soluție salină echilibrată Hank fără calciu sau magneziu (HBSS) și prin așezare pe mediu de separație a limfocitelor (Organon Teknika, Durham, North Carol.ina). După centrifugare se colectează MNC de la interfață, se spală și se resuspendă în HBSS. Se cultivă, un mililitru de probe conținând, aproximativ 300.000 de MNC, mediu modificat McCoy's 5A, 0,3% agar, 200 μ/ml de GM-CSF recombinant uman, 200 μ/ml de IL-3 recombinantă umană, și 200 μ/ml de G-CSF recombinant uman, la 37°C în aer complet umidificat cu 5% CO2, timp de 14 zile, în mod opțional, se pot adăuga în culturi, ligand flt3 sau molecule, de fuziune GM-CS F/IL-3. (PIXY 321). Aceste culturi sunt colorate cu colorant Wright, iar coloniile GFU-M sunt înregistrate cu un microscop de disecție (Ward și colab. Exp. Hematol., 16:358 (19.8.8)). în mod alternativ, coloniile CFU-GM pot fi prelevate folosind metoda de citometrie în flux CD34/CD33 a lui Siena și colab., Blood, voi 77, Nr.2, pag. 400 - 409 (1991) sau orice altă metodă cunoscută în domeniu.
Culturile care conțin CFU-GM sunt congelate într-un congelator cu viteză controlată (de exemplu, Cryo-Med, Mt. Clemens, Ml) apoi sunt păstrate în azot lichid în fază de vapori. Se poate utiliza dimetilsulfoxid 10% ca crioprotector. După ce s-au efectuat toate recoltările de la pacient, culturile ce conțin CFTU-GM sunt dezghețate și amestecate. Colecția de celule dezghețată este pusă în contact cu ligand flt3, fie singur, fie în combinație succesivă sau simultană cu alte citokine enumerate mai sus. Această expunere la ligand flt3 va determina angajarea CFU-GM spre seria celulelor dendritice. Celulele dendritice sunt reinjectate intravenos la pacient.
Exemplul 3. Utilizarea flt3-L în amplificarea -răspunsurilor imune antitumorale
Acest exemplu descrie o metodă de utilizare a flt3-L pentru a intensifica răspunsurile imune antitumorale in vivo. Șoareci femele C57BL/10J (B10) (The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME), au fost injectați cu 5 x 105 celule tumorale de fibrosarcom, viabile, B102 sau B105, într-o poziție ventrală mediană, într-un volum total de 50 μΙ. Liniile celulare de fibrosarcom B102 și B105 sunt de origine B10 și au fost descrise anterior, vezi Lynch și colab., Euro J.lmmunol., 21:1403(1991). Linia ce lulară de fibrosarcom B10, 2 a fost indusă prin implantarea subcutanată a unei pelete de parafină conținând 5 mg de metilcolantren, iar linia celulară B105 a fost indusă prin expunere cronică la radiații ultraviolete. Liniile celulare tumorale au fost menținute in vitro în MEM α-modificat conținând 5% FBS, 2nM de L-glutamină, 50 μ/ml penicilină și 50 pg/ml de streptomicină. S-a administrat flt3-L recombinant uman (10 pg/injecție), zilnic, timp de 19 zile dacă nu se menționează altfel), prin injectare subcutanată, într-un volum total de 100 μΙ. Șoarecii martor au fost injectați în mod similar cu un volum similar de soluție tampon conținând 100 ng de MSA. Vitezele de creștere tumorală au fost determinate prin reprezentarea dimensiunii tumorii în funcție de timp după
RO 120579 Β1 declanșarea tumorii. Dimensiunea tumorii a fost calculată ca fiind produsul a două diametre 1 perpendiculare, măsurate cu compasul, și este exprimată ca dimensiune tumorală medie doar a șoarecilor care prezintă o tumoră, și fac parte dintr-un anumit grup de tratament. 3 Numărul de șoareci purtători de tumori, comparat cu numărul celor intrați în experiment pentru fiecare grup de tratament la finalul unui experiment, sunt arătate în datele de mai jos. 5 Din tabelul 1 se vede că datele reprezintă o compilație a șase experimente diferite în cadrul cărora șoarecii purtători de tumori au fost tratați fie cu ligand flt3, fie cu MSA. S-a 7 observat regresia completă a tumorii la 19 din 50 de șoareci tratați cu ligand flt3 comparativ cu 1 din 30 în cazul șoarecilor tratați cu MSA (p<0,0001 folosind testul Fishers Exact). 9 Observația că viteza de creștere tumorală la șoarecii tratați cu ligand flt3 (dimensiunea tumorală medie la șoarecii purtători de tumori, în a cincea săptămână de la declanșarea 11 tumorii, a fost de 60+/-8 mm1 2 3 4) a fost în mod semnificativ redusă comparativ cu șoarecii tratați cu MSA (dimensiunea tumorală medie în a cincea săptămână de la declanșarea tumorii, a 13 fost de 185+/-17 mm2) a fost de asemenea confirmată (p. 0,0001 prin Analiză Variantei).
Fibrosarcom+/-compozit Flt3-L în șase experimente Dimensiune tumorală (mm2)
Claims (7)
- RevendicăriDimensiunea tumorii a fost în mod evident micșorată cu ligand flt3 în comparație cu martorul. Astfel, datele arată că ligandul flt-3 este o citokină importantă în amplificarea răspunsului imun împotriva antigenelor străine și în special împotriva cancerului.
Săptămâni după declanșarea tumorii Martori MSA (100 ng/zi) Eroare Standard Flt3-L (10 pg/zi Eroare Standard 0 0 0 0 0 1 25 2,6 24 2,2 2 62 7,5 49 3,6 3 98 10,6 49 3,9 4 149 14,5 50 5 5 185 16,8 60 8,4 1. Utilizare a ligandului Flt3 în amplificarea unui răspuns imun la un pacient, în care 37 ligandul Flt3 generează o creștere a numărului de celule dendritice ale unui pacient. - 2. Utilizare a ligandului Flt3 , în conformitate cu revendicarea 1, în care ligandul Flt3 39 este administrat unui pacient care are o boală infecțioasă.
- 3. Utilizare a ligandului Flt3 , în conformitate cu revendicarea 2, în care boala 41 infecțioasă este HIV.
- 4. Utilizare a ligandului Flt3 , în conformitate cu revendicarea 1, în care ligandul Flt3 43 este administrat unui pacient care are cancer sau o boală neoplazică.RO 120579 Β11 5. Utilizare a ligandului Flt3 în amplificarea unui răspuns imun față de un antigen vaccinai la un pacient, în care ligandul Flt3 generează o creștere a numărului de celule3 dendritice ale pacientului.6. Utilizare a ligandului Flt3 , în conformitate cu revendicarea 5, în care ligandul Flt3
- 5 se administrează înainte sau în combinație simultană sau succesivă cu un antigen într-un vaccin pentru amplificarea răspunsului imun.1 7. Utilizare a ligandului Flt3 , în conformitate cu oricare dintre revendicările 1-6, în care ligandul Flt3 se administrează în combinație cu cel puțin una dintre moleculele selectate
- 9 din grupul format din GM-CSF, IL-4, TNF-α, IL-3, ligand c-kit și fuziuni de GM-CSF și IL-3. 8. Utilizare a ligandului Flt3 pentru generarea de celule dendritice in vitro.
- 11 9. Utilizare a ligandului Flt3 pentru inducerea toleranței față de grefa de țesut la o gazdă, în care ligandul Flt3 generează o creștere a numărului de celule dendrice ale gazdei.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US53914295A | 1995-10-04 | 1995-10-04 | |
| PCT/US1996/015990 WO1997012633A1 (en) | 1995-10-04 | 1996-10-03 | Dendritic cell stimulatory factor |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO120579B1 true RO120579B1 (ro) | 2006-04-28 |
Family
ID=24149974
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RO98-00824A RO120579B1 (ro) | 1995-10-04 | 1996-10-03 | Utilizarea ligandului flt3 |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0871487B1 (ro) |
| JP (1) | JP3631496B2 (ro) |
| KR (2) | KR100676792B1 (ro) |
| CN (1) | CN1172718C (ro) |
| AT (1) | ATE432085T1 (ro) |
| AU (1) | AU697539B2 (ro) |
| BR (1) | BR9610802A (ro) |
| CA (1) | CA2232865A1 (ro) |
| CZ (1) | CZ97798A3 (ro) |
| DE (1) | DE69637942D1 (ro) |
| EA (1) | EA199800272A1 (ro) |
| EE (1) | EE9800105A (ro) |
| ES (1) | ES2323818T3 (ro) |
| IS (1) | IS4703A (ro) |
| LV (1) | LV12085B (ro) |
| NO (1) | NO981374L (ro) |
| NZ (1) | NZ321039A (ro) |
| PL (1) | PL187329B1 (ro) |
| RO (1) | RO120579B1 (ro) |
| SI (1) | SI9620116A (ro) |
| SK (1) | SK40898A3 (ro) |
| TR (1) | TR199800607T1 (ro) |
| WO (1) | WO1997012633A1 (ro) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6207646B1 (en) | 1994-07-15 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
| US20030026782A1 (en) | 1995-02-07 | 2003-02-06 | Arthur M. Krieg | Immunomodulatory oligonucleotides |
| US6429199B1 (en) | 1994-07-15 | 2002-08-06 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells |
| US9068164B1 (en) * | 1995-02-02 | 2015-06-30 | Tristem Trading (Cyprus) Limited | Method of preparing an undifferentiated cell |
| AU705647B2 (en) * | 1996-07-10 | 1999-05-27 | Immunex Corporation | Method of activating dendritic cells |
| AUPO388396A0 (en) * | 1996-11-27 | 1996-12-19 | Ludwig Institute For Cancer Research | Cellular adjuvant |
| AU7835898A (en) * | 1997-06-17 | 1999-01-04 | Immunex Corporation | A method of enhancing antigen-specific peripheral immune tolerance |
| FR2782524B1 (fr) * | 1998-08-21 | 2002-07-19 | Roussy Inst Gustave | Methodes d'activation de cellules tueuses naturelles (nk) et moyens de mise en oeuvre |
| US6849452B1 (en) * | 1998-03-03 | 2005-02-01 | Institut Gustave Roussy | Methods for activating natural killer (NK) cells and means for carrying out said methods |
| FR2775692B1 (fr) * | 1998-03-03 | 2000-06-16 | Roussy Inst Gustave | Methodes d'activation de cellules tueuses naturelles (nk) et moyens de mise en oeuvre |
| DE69932717T2 (de) | 1998-05-22 | 2007-08-09 | Ottawa Health Research Institute, Ottawa | Methoden und produkte zur induzierung mukosaler immunität |
| WO1999062537A1 (en) * | 1998-06-04 | 1999-12-09 | The Rockefeller University | Methods and agents for modulating the immune response and inflammation involving monocyte and dendritic cell membrane proteins |
| US6291661B1 (en) * | 1998-07-02 | 2001-09-18 | Immunex Corporation | flt3-L mutants and method of use |
| WO2000012122A2 (de) * | 1998-08-27 | 2000-03-09 | Universitätsklinikum Freiburg | Niedermolekulare fragmente der hyaluronsäure zur herstellung von impfstoffen |
| GB9827604D0 (en) * | 1998-12-15 | 1999-02-10 | Lorantis Ltd | Methods of immunosuppression |
| WO2001009303A2 (en) * | 1999-07-30 | 2001-02-08 | Vical Inc. | Flt-3 LIGAND-ENCODING POLYNUCLEOTIDE AS A POLYNUCLEOTIDE-BASED VACCINE ENHANCER |
| AU1358501A (en) * | 1999-11-03 | 2001-05-14 | Powderject Vaccines, Inc. | Nucleic acid vaccine compositions having a mammalian cd80/cd86 gene promoter driving antigen expression |
| AU2001239873A1 (en) * | 2000-02-24 | 2001-09-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Adjuvant treatment by in vivo activation of dendritic cells |
| EP1276501B9 (en) * | 2000-04-25 | 2007-01-24 | Immunex Corporation | Method for treatment of tumors using photodynamic therapy |
| WO2002036141A2 (en) * | 2000-11-02 | 2002-05-10 | Immunex Corporation | Method of enhancing lymphocyte-mediated immune responses |
| AU2002225927A1 (en) * | 2000-11-17 | 2002-05-27 | Immunex Corporation | Chemoattractant recruitment of dendritic cells for enhancement of immunization |
| WO2003022215A2 (en) * | 2001-09-06 | 2003-03-20 | Northwest Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for priming monocytic dendritic cells and t cells for th-1 response |
| KR100490308B1 (ko) * | 2002-02-25 | 2005-05-17 | 크레아젠 주식회사 | 면역 치료용 성숙화된 수지상 세포 백신의 제조방법 |
| MXPA04009394A (es) * | 2002-03-26 | 2005-01-25 | Inmunex Corp | Metodos para utilizar ligando flt3 en procedimientos de inmunizacion. |
| US20050084967A1 (en) | 2002-06-28 | 2005-04-21 | Xcyte Therapies, Inc. | Compositions and methods for eliminating undesired subpopulations of T cells in patients with immunological defects related to autoimmunity and organ or hematopoietic stem cell transplantation |
| KR100522526B1 (ko) * | 2002-11-28 | 2005-10-19 | 주식회사 바이넥스 | 면역 치료용 수지상 세포의 제조방법 |
| KR100614220B1 (ko) * | 2004-11-08 | 2006-08-21 | 고려대학교 산학협력단 | Ｆｌｔ3 리간드 유전자를 발현하는 살모넬라 균주 및 이를함유하는 항암 치료용 조성물 |
| DE102005016234B4 (de) * | 2005-04-08 | 2008-05-15 | Tgc Biomics Gmbh | Verfahren zur Einschleusung von exogenem Antigen in den MHC I-Präsentationsweg von Zellen |
| KR100818215B1 (ko) | 2006-10-11 | 2008-04-01 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | Ｃｄ３４양성 줄기세포로부터 ｔ 임파구 전구체를 제조하는 방법 |
| KR101264811B1 (ko) | 2011-05-20 | 2013-05-15 | 충남대학교산학협력단 | 마이코박테리움 압세수스의 ＭＡＢ０９８１ｃ 단백질을 이용한 수지상 세포의 성숙방법 |
| EP3485002A4 (en) | 2016-07-13 | 2020-07-29 | Ohio State Innovation Foundation | PLATFORMS AND METHODS FOR THE OPTIMIZATION OF ANTIGEN PRESENTATION BY THE HOST, AND ANTI-TUMOR AND ANTI-INFECTIOUS IMMUNITY OF THE HOST |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US826250A (en) | 1905-12-20 | 1906-07-17 | Albert Huck | Switch for toy railways. |
| US4714680B1 (en) | 1984-02-06 | 1995-06-27 | Univ Johns Hopkins | Human stem cells |
| US5391485A (en) | 1985-08-06 | 1995-02-21 | Immunex Corporation | DNAs encoding analog GM-CSF molecules displaying resistance to proteases which cleave at adjacent dibasic residues |
| EP0275598B1 (en) | 1986-12-16 | 1998-01-07 | Gist-Brocades N.V. | Molecular cloning and expression of human IL-3 |
| OA09736A (en) | 1987-02-18 | 1993-11-30 | Schering Biotech Corp | "Human interleukin-3 and muteins thereof". |
| JPH03502322A (ja) | 1987-10-30 | 1991-05-30 | イミュネックス・コーポレーション | ヒトコロニー形成刺激因子の非グリコシル化類似体 |
| US5073627A (en) | 1989-08-22 | 1991-12-17 | Immunex Corporation | Fusion proteins comprising GM-CSF and IL-3 |
| US5108910A (en) | 1989-08-22 | 1992-04-28 | Immunex Corporation | DNA sequences encoding fusion proteins comprising GM-CSF and IL-3 |
| EP1241258A3 (en) | 1989-10-16 | 2003-12-10 | Amgen Inc. | Stem cell factor |
| US5199942A (en) | 1991-06-07 | 1993-04-06 | Immunex Corporation | Method for improving autologous transplantation |
| DE69232682T2 (de) | 1991-10-23 | 2003-03-13 | Nexell Therapeutics Inc | Verfahren zur selektiven vermehrung von cd34 positiven zellen |
| US5554512A (en) | 1993-05-24 | 1996-09-10 | Immunex Corporation | Ligands for flt3 receptors |
| NZ314644A (en) | 1993-05-24 | 2000-11-24 | Immunex Corp | Use of flt3-ligands as a growth stimulator of stem cells in the transplantation of tissue |
| US5405772A (en) * | 1993-06-18 | 1995-04-11 | Amgen Inc. | Medium for long-term proliferation and development of cells |
-
1996
- 1996-10-03 DE DE69637942T patent/DE69637942D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-10-03 BR BR9610802A patent/BR9610802A/pt unknown
- 1996-10-03 KR KR1020047011434A patent/KR100676792B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-10-03 KR KR10-1998-0702286A patent/KR100514957B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-10-03 CA CA002232865A patent/CA2232865A1/en not_active Abandoned
- 1996-10-03 EE EE9800105A patent/EE9800105A/xx unknown
- 1996-10-03 ES ES96936216T patent/ES2323818T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-10-03 NZ NZ321039A patent/NZ321039A/en unknown
- 1996-10-03 AT AT96936216T patent/ATE432085T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-10-03 CN CNB96197351XA patent/CN1172718C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-10-03 EA EA199800272A patent/EA199800272A1/ru unknown
- 1996-10-03 JP JP51449097A patent/JP3631496B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-10-03 PL PL96325964A patent/PL187329B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-10-03 WO PCT/US1996/015990 patent/WO1997012633A1/en not_active Application Discontinuation
- 1996-10-03 SI SI9620116A patent/SI9620116A/sl unknown
- 1996-10-03 SK SK408-98A patent/SK40898A3/sk unknown
- 1996-10-03 CZ CZ98977A patent/CZ97798A3/cs unknown
- 1996-10-03 RO RO98-00824A patent/RO120579B1/ro unknown
- 1996-10-03 AU AU73922/96A patent/AU697539B2/en not_active Ceased
- 1996-10-03 EP EP96936216A patent/EP0871487B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-10-03 TR TR1998/00607T patent/TR199800607T1/xx unknown
-
1998
- 1998-03-26 IS IS4703A patent/IS4703A/is unknown
- 1998-03-26 NO NO981374A patent/NO981374L/no unknown
- 1998-04-02 LV LVP-98-63A patent/LV12085B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2323818T3 (es) | 2009-07-24 |
| PL187329B1 (pl) | 2004-06-30 |
| JPH11513389A (ja) | 1999-11-16 |
| EP0871487B1 (en) | 2009-05-27 |
| ATE432085T1 (de) | 2009-06-15 |
| AU7392296A (en) | 1997-04-28 |
| EP0871487A1 (en) | 1998-10-21 |
| AU697539B2 (en) | 1998-10-08 |
| EE9800105A (et) | 1998-10-15 |
| CZ97798A3 (cs) | 1999-02-17 |
| JP3631496B2 (ja) | 2005-03-23 |
| EA199800272A1 (ru) | 1998-10-29 |
| PL325964A1 (en) | 1998-08-17 |
| KR100514957B1 (ko) | 2005-11-25 |
| NO981374L (no) | 1998-06-03 |
| IS4703A (is) | 1998-03-26 |
| CA2232865A1 (en) | 1997-04-10 |
| CN1172718C (zh) | 2004-10-27 |
| KR20040079421A (ko) | 2004-09-14 |
| WO1997012633A1 (en) | 1997-04-10 |
| NO981374D0 (no) | 1998-03-26 |
| NZ321039A (en) | 2001-03-30 |
| SI9620116A (sl) | 1999-08-31 |
| KR19990063818A (ko) | 1999-07-26 |
| EP0871487A4 (en) | 2004-09-01 |
| CN1229359A (zh) | 1999-09-22 |
| KR100676792B1 (ko) | 2007-02-02 |
| SK40898A3 (en) | 1999-04-13 |
| BR9610802A (pt) | 1999-07-13 |
| LV12085A (lv) | 1998-07-20 |
| TR199800607T1 (xx) | 1998-06-22 |
| DE69637942D1 (de) | 2009-07-09 |
| LV12085B (en) | 1998-09-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RO120579B1 (ro) | Utilizarea ligandului flt3 | |
| US20060292166A1 (en) | Vaccine composition comprising Flt3-ligand | |
| US20090075886A1 (en) | Dendritic cell stimulatory factor | |
| US20020155108A1 (en) | Method for ex vivo loading of antigen presenting cells with antigen, and a vaccine comprising the loaded cells | |
| CA2087525C (en) | Adoptive immunotherapy with interleukin-7 | |
| ES2535835T3 (es) | Composiciones para la preparación de células dendríticas maduras | |
| JP2008119004A (ja) | 樹状細胞を活性化する方法 | |
| AU758622B2 (en) | Method for activating natural killer (NK) cells | |
| JPH06508613A (ja) | 自己移植の改良法 | |
| WO1998006422A1 (fr) | Agents de proliferation des cellules souches hematopoietiques | |
| US20030124091A1 (en) | Endothelial cell derived hematopoietic growth factor | |
| BR112012019267B1 (pt) | Composição englobando célula dendrítica (dc) madura próinflamatória, e uso da dita célula | |
| US20030077263A1 (en) | Method of activating dendritic cells | |
| JP2004520033A (ja) | 分化拘束された成熟樹状細胞の調製用補助組成物 | |
| US7150992B1 (en) | Methods of preparing dendritic cells with flt3-ligand and antigen | |
| US20220378872A1 (en) | Composition for treatment and/or prevention of tumor | |
| MXPA98002464A (en) | Dendrit cellular stimulating factor | |
| US20020182231A1 (en) | Methods of stem cell manipulation for immunotherapy | |
| WO2002066053A2 (en) | Method of treating or preventing disease characterized by cryptococcus neoformans infection |