SI9620116A - Stimulatorni faktor dendritičnih celic - Google Patents
Stimulatorni faktor dendritičnih celic Download PDFInfo
- Publication number
- SI9620116A SI9620116A SI9620116A SI9620116A SI9620116A SI 9620116 A SI9620116 A SI 9620116A SI 9620116 A SI9620116 A SI 9620116A SI 9620116 A SI9620116 A SI 9620116A SI 9620116 A SI9620116 A SI 9620116A
- Authority
- SI
- Slovenia
- Prior art keywords
- cells
- dendritic cells
- antigen
- ligand
- flt3 ligand
- Prior art date
Links
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 95
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 title description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 86
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 86
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 85
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 24
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 102100020715 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 101710162577 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 108
- 108700014844 flt3 ligand Proteins 0.000 claims description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 48
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 claims description 31
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 claims description 29
- 102100039064 Interleukin-3 Human genes 0.000 claims description 27
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 25
- 108010039445 Stem Cell Factor Proteins 0.000 claims description 24
- 102100020880 Kit ligand Human genes 0.000 claims description 20
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 20
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 17
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 11
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 10
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 10
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 claims description 9
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000002607 hemopoietic effect Effects 0.000 claims description 9
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 8
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 7
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 6
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 5
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 claims description 4
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 claims description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims 4
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 abstract description 23
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 15
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 21
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 21
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- 101001033279 Homo sapiens Interleukin-3 Proteins 0.000 description 9
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 102000055276 human IL3 Human genes 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 102000046157 human CSF2 Human genes 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 108010038379 sargramostim Proteins 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 4
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 4
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101001002709 Homo sapiens Interleukin-4 Proteins 0.000 description 3
- 101000716729 Homo sapiens Kit ligand Proteins 0.000 description 3
- -1 TC 199 Substances 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 102000055229 human IL4 Human genes 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 229940087875 leukine Drugs 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 210000002568 pbsc Anatomy 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 3
- 229960002530 sargramostim Drugs 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000016355 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010092372 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptors Proteins 0.000 description 2
- 101000932480 Homo sapiens Fms-related tyrosine kinase 3 ligand Proteins 0.000 description 2
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 2
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 101150052863 THY1 gene Proteins 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 2
- 230000001483 mobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RANONBLIHMVXAJ-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxycyclophosphamide Chemical compound OC1CCOP(=O)(N(CCCl)CCCl)N1 RANONBLIHMVXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108010092408 Eosinophil Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000746367 Homo sapiens Granulocyte colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 239000007760 Iscove's Modified Dulbecco's Medium Substances 0.000 description 1
- 101710177504 Kit ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100033486 Lymphocyte antigen 75 Human genes 0.000 description 1
- 101710157884 Lymphocyte antigen 75 Proteins 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 102100039364 Metalloproteinase inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- PPQNQXQZIWHJRB-UHFFFAOYSA-N Methylcholanthrene Chemical compound C1=CC=C2C3=CC4=CC=C(C)C(CC5)=C4C5=C3C=CC2=C1 PPQNQXQZIWHJRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710146873 Receptor-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 206010038743 Restlessness Diseases 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/125—Stem cell factor [SCF], c-kit ligand [KL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/22—Colony stimulating factors (G-CSF, GM-CSF)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/24—Interferons [IFN]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/26—Flt-3 ligand (CD135L, flk-2 ligand)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
Abstract
Flt3-ligand se lahko uporablja, da proizvede veliko število dendritičnih celic iz hemopoetičnih predhodnih in matičnih celic. Flt3-ligand se lahko uporablja, da poveča imunske odzive in vivo, in širi dendritične celice ex vivo. Take dendritične celice se potem lahko uporabljajo zato, da predstavijo tumorske, virusne ali druge antigene naivnim celicam T, lahko so koristne kot adjuvanti vakcin.ŕ
Description
STIMULATORNI FAKTOR DENDRITIČNIH CELIC
PODROČJE IZUMA
Pričujoči izum se nanaša na stimulatorni faktor dendritičnih celic, na metode povečevanja imunskega odziva in vivo, metode širjenja dendritičnih celic ex vivo in na pripravke očiščenih dendritičnih ceiic, ter na populacije dendritičnih celic, ki so koristne pri manipulaciji s celico T posredovanimi in celico B posredovanimi imunskimi odzivi.
OZADJE IZUMA
Namen cepljenja je zagotoviti učinkovito imunost z vzpostavljanjem ustreznih nivojev protiteles in začetne populacije celic, ki se lahko ob ponovnem kontaktu z antigenom hitro širijo. Med cepljenjem prvi stik z antigenom ne sme biti škodljiv za recipienta in tako se običajno sestoji iz pomanjkljivo patogenega antigena.
Pogosta težava z aktivnimi imunizacijskimi protokoli je, da antigen cepiva (vakcine) ni dovolj imunogen, da bi sprožil močan imunski odziv, in zato zadosten nivo zaščite proti poznejšemu izzivu z istim antigenom. Poleg tega lahko določeni antigeni izvabijo samo šibak celično posredovan ali protitelesni odziv. Za mnoge antigene je zaželjen tako, močan humoralni odziv kakor močan celično posredovan odziv.
Že desetletja so raziskovalci eksperimentirali z različnimi spojinami, da bi povečali imunogenost vakcin. Imunopotenciatorji vakcin, poznani tudi kot adjuvanti, so sestavki snovi, ki omogočajo močan imunski odziv na cepivo. Poleg tega relativno šibka imunogenost določenih novih rekombinantnih
-2antigenov zahteva močnejše adjuvante. Adjuvanti vakcin imajo različne načine delovanja, ki na imunski odziv vplivajo tako kvantitativno kakor kvalitativno. Taki načini delovanja so lahko z mobiliziranjem T celic, da delujejo kot depoti in spreminjajo cirkulacijo limfocitov tako, da te celice ostanejo lokalizirane v odvajalnih limfnih vozlih. Lahko tudi služijo zato, da antigen osredotočijo na mesto imunizacije in s tem omogočajo, da antigen specifične celice T in celice B bolj učinkovito vzajemno delujejo z antigen predstavljajočimi celicami. Lahko tudi stimulirajo proliferacijo in diferenciacijo celic T in učinkujejo na celice B, kot povečujejo produkcijo različnih Ig izotipov. Nadalje adjuvanti lahko stimulirajo in vplivajo na obnašanje antigen predstavljajočih celic, posebno makrofagov, tako da jih naredijo bolj učinkovite za predstavljanje antigena celicam T in celicam B.
Dendritične celice so redka in heterogena populacija celic s posebno morfologijo in široko razširjeno razporeditvijo tkiva. Razpravo o dendritičnem celičnem sistemu in njegovi vlogi v imunogenosti je zagotovil Steinman, R.M., Annu. Rev. Immunol., 9:271-296 (1991), in je tu vključena z referenco. Dendritične celice kažejo neobičajno celično površino in se jih lahko karakterizira s prisotnostjo celičnih površinskih označevalcev, CD1a+, CD4+, CD14·, CD86+, CD11c+, DEC-205+, CD14+ ali HLA-DR+. Dendritične celice imajo veliko kapaciteto za senzibiliziranje PHK-omejenih celic T in zagotavljajo učinkovito pot za predstavljanje antigenov celicam T in situ, tako svojih antigenov med razvojem celic T, kakor tujih antigenov med imunostjo. Tako obstaja naraščajoči interes uporabljanja dendritičnih celic ex vivo, kot adjuvantov vakcin za tumorske ali infekcijske bolezni. Glej, na primer, Romani s sod., J. Exp. Med., 180:83 (1994). Uporaba dendritičnih celic kot imunostimulatornih sredstev je bila omejena zaradi majhne pogostosti dendritičnih celic v periferni krvi, omejene dostopnosti do limfoidnih organov in končnega stanja diferenciacije dendritičnih celic.
-3Dendritične celice izvirajo iz CD34+ prednikov v kostnem mozgu in proliferacija ter zorenje dendritičnih celic sta lahko povečana s citokini GMCSF (sargramostim, Leukine®, lmmunex Corporation, Seattle, VVashington), TNF-α, c-kit ligandom (poznanim tudi kot faktor matičnih celic (stem celi factor-SCF), Steel faktor (SF), ali mastocitni rastni faktor (MGF)) in interlevkinom-4. Zato bi bilo sredstvo, ki bi stimuliralo nastanek velikega števila funkcionalno zrelih dendritičnih celic in vivo ali in vitro velikega pomena.
POVZETEK IZUMA
Flt3-ligand (flt3-ligand ali *fit3-L) je poznan, da vpliva na hemopoetične matične in predhodne celice. Presenetljivo je bilo ugotovljeno, da flt3-ligand lahko tudi močno stimulira produkcijo nižje ležečih (angl. dovvnstream) ali vmesnih celic, kot mieioidnih prekurzorskih celic, monocitnih celic, makrofagov, celic B, in dendritičnih celic iz CD34+ prednikov v kostnem mozgu in matičnih celic. Pričujoči izum se nanaša na metodo mobiliziranja dendritičnih celic in vivo, širjenja dendritičnih celic ex vivo in na očiščene pripravke dendritičnih celic. Pripravek očiščenih dendritičnih celic bi glede na izum potencialno našel uporabo kot adjuvant vakcin. Znotraj izvedb izuma je vključena tudi metoda pripravljanja antigen specifičnih celic T, z uporabljanjem dendritičnih celic, mobiliziranih z flt3-ligandom.
Izum skrbi za uporabo učinkovite količine flt3-liganda, da se poveča ali mobilizira število vmesnih celic in vivo, na primer, v pacientovi periferni krvi, tkivih ali organih. Medtem ko se izum nanaša na pridobivanje velikega števila takih nižje ležečih in vmesnih celic (npr., mieioidnih celic, monocitnih celic in makrofagov) iz CD34+ celic z uporabljanjem flt3liganda, je osredotočen posebno na dendritične celice. S povečevanjem
-4kvantitete pacientovih dendritičnih celic, se lahko take celice same uporabijo, da predstavijo antigen celicam T. Na primer, antigen je lahko nek antigen, ki že obstaja v pacientu, kot tumorski antigen, ali bakterijski ali virusni antigen. Flt3-ligand se lahko uporabi zato, da poveča število dendritičnih celic in vivo, da okrepi pacientov imunski odziv proti obstoječim antigenom. Alternativno je flt3-ligand lahko dan pred, hkrati z ali po dajanju antigena pacientu za imunizacijske namene. Tako, kot adjuvant vakcine, flt3-ligand lahko producira velike množine dendritičnih celic in drugih intermediarnih celic in vivo, da bolj učinkovito predstavijo antigen. Celoten odziv je močnejši in izboljšan je imunski odziv in bolj učinkovita je imunizacija na antigen.
Izum tudi zagotavlja metodo pridobivanja velikih množin dendritičnih celic ex vivo. Po zbiranju pacientovih CD34+ hemopoetičnih prednikov in matičnih celic, se flt3-ligand lahko uporablja, da širi take celice in vitro (poznano tudi kot ex vivo ekspanzija), in da vodi take CD34+ celice, da se diferencirajo v dendritične celice limfoidnega ali mieloidnega porekla. Nastala zbirka dendritičnih celic se lahko da pacientu, da zagotovi močnejši in izboljšan imunski odziv na antigen. Alternativno se nastale dendritične celice lahko uporabljajo kot adjuvant vakcine in so lahko dane pred, hkrati z ali po dajanju antigena.
Izum tudi zagotavlja metodo pridobivanja velikih množin antigen predstavljajočih dendritičnih celic ex vivo. Po zbiranju pacientovih CD34+ hemopoetičnih prednikov in matičnih celic se flt3-ligand lahko uporablja, da širi take celice in vitro, in da vodi take CD34+ celice, da se diferencirajo v dendritične celice. Nastala zbirka dendritičnih celic je potem izpostavljena antigenu in omogoči se, da procesira in predstavi antigen in vitro (ta postopek je v stroki včasih naveden kot antigen-pulsing). Nadomestna
-5metoda za pripravo dendritičnih celic, da predstavijo antigen je transfektiranje dendritičnih celic z genom, ki ima nakodiran za antigen specifičen polipeptid. Takoj ko dendritične celice izrazijo antigen se antigen predstavljajoče dendritične celice lahko dajo pacientu.
Izum tudi zagotavlja ex vivo pripravo antigen specifičnih celic T. Po zgoraj opisanih postopkih za pripravo velikega števila antigen predstavljajočih dendritičnih celic ex vivo, se zbrane antigen predstavljajoče dendritične celice uporabijo, da proizvajajo antigen specifične celice T iz naivnih celic T, ki so bile zbrane pri pacientu. Potem ko je bil antigen primerno predstavljen proizvedenim celicam T, se antigen specifične celice T lahko dajo pacientu.
Izum tudi zagotavlja metodo povečevanja imunskega odziva pri pacientu, ki ima infekcijsko bolezen, pri čemer metoda obsega stopnjo dajanja zadostne količine flt3-liganda, da poveča pacientovo število dendritičnih celic.
Izum tudi zagotavlja metodo povečevanja imunskega odziva pri pacientu, ki ima rakavo ali neoplastično bolezen, pri čemer metoda obsega stopnjo dajanja zadostne količine flt3-liganda, da poveča pacientovo število dendritičnih celic. Taka metoda zagotavlja načine, da se poveča pacientov tumor specifičen imunski odziv.
Metoda za zvišanje pacientove avtoimunske tolerance, pri čemer metoda obsega stopnjo dajanja zadostne količine flt3-liganda, da poveča pacientovo število dendritičnih celic. Nadalje so vključene metode za povečanje preživetja presadkov in transplantiranih tkiv in organov.
-6Metode izuma lahko dalje obsegajo uporabo učinkovite količine citokina v zaporedni ali hkratni kombinaciji z flt3-ligandom. Taki citokini vključujejo, toda niso omejeni na, interlevkina (IL-a) IL-3 in IL-4, kolonije spodbujevalni faktor (CSF) izbran iz skupine, ki je sestavljena iz granulocitno makrofagne kolonije spodbujevalnega faktorja (GM-CSF) ali GM-CSF/IL-3 združb, ali drugih citokinov, kot sta TNF-α (tumor nekrotizirajoči faktor-α) ali c-kit ligand.
Izum dalje vključuje ekspanzijski medij dendritičnih celic, ki obsega celični rastni medij, avtologni serum, in flt3-ligand sam ali v kombinaciji s citokinom iz skupine navedene zgoraj.
PODROBEN OPIS IZUMA
Izum je usmerjen v uporabo flt3-liganda za pridobivanje velikega števila intermediarnih celičnih tipov iz CD34+ hemopoetičnih predhodnih celic in matičnih celic. Taki vmesni celični tipi vključujejo mieloidne celice, monocitne celice, makrofage, celice B in dendritične celice. Velikega števila teh vmesnih celičnih tipov ni mogoče najti naravno in vivo in se ga lahko producira z dajanjem flt3-liganda. Tako povečanje celotnega števila celic lahko v gostitelju poveča imunski odziv na antigen. Druga izvedba izuma je izolacija in uporaba takih vmesnih celičnih tipov, kot antigen predstavljajočih celic ali njihova uporaba kot adjuvantov vakcin. Izum, medtem ko je osredotočen posebno na izvedbo, ki zadeva dendritične celice, je uporaben tudi za mieloidne, monocitne in makrofagne celične tipe.
Kot je tu uporabljen se izraz Hflt3-ligand nanaša na vrsto polipeptidov, ki so opisani v ameriškem patentu št. 5,554,512, EP 0627487 A2 in v WO
-794/28391, ki so tu vsi vključeni z referenco. cDNA humanega flt3-liganda je bila deponirana pri American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA (ATCC) 6. avgusta, 1993 in dodeljena ji je bila pristopna številka ATCC 69382. Depozit je bil narejen pod pogoji Budimpeštanskega sporazuma. Flt3-ligand se lahko izdela po metodah opisanih v zgoraj citiranih dokumentih.
Izraz IL-3 se nanaša na vrsto interlevkin-3 polipeptidov, kot so opisani v ameriškem patentu št. 5,108,910, tu vključenem z referenco. Taki polipeptidi vključujejo analoge, ki imajo aminokislinske sekvence, ki so precej podobne naravnim humanim interlevkin-3 aminokislinskim sekvencam razkritim, na primer v EP objavah št. 275,598 in 282,185, vsaka je tu vključena z referenco. Izraz IL-3 tudi vključuje analoge in alele IL-3 molekul, ki kažejo vsaj nekaj biološke aktivnosti natanko tako kot naravni humani IL-3. Ponazorilni analogi IL-3 molekul so razkriti v EP objavi št. 282,185. Druge oblike IL-3 vključujejo humani IL-3[Pro8Asp15Asp70], humani IL-3[Ser8Asp15Asp70], in humani IL-3[Ser8]. DNA sekvenca, ki ima nakodiran humani IL-3 protein, primeren za uporabo v izumu, je javno razpoložljiva iz American Type Culture Collection (ATCC) pod pristopno številko ATCC 67747. Tu uporabljena nomenklatura z ozirom na aminokislinske sekvence v oklepajih navaja katere aminokisline se razlikujejo od naravne humane oblike. Na primer, humani IL-3[Ser8Asp15Asp70J, se nanaša na humani IL-3 protein v katerem je bila aminokislina 8 spremenjena v serinski ostanek, aminokislina 15 je bila spremenjena v ostanek aspartinske kisline in aminokislina 70 je bila spremenjena v ostanek aspartinske kisline.
Izraz IL-4B se nanaša na polipeptid, kot je opisan v Mosley s sod., Celi 59:335 (1989), Idzerda s sod., J. Exp. Med. 171:861 (1990) in Galizzi s sod., Intl. Immunol. 2:669 (1990), vsaka od teh objav je tu vključena z
-8referenco. Tak IL-4 polipeptid vključuje analoge, ki imajo aminokislinsko sekvenco, ki je precej podobna naravnim humanim IL-4 aminokislinskim sekvencam opisanim v Mosley s sod., Idzerda s sod., in Galizzi s sod. in ki so biološko aktivne v tem, da so zmožne vezanja na IL-4 receptor, transduciranja biološkega signala povzročenega z vezanjem IL-4 receptorja, ali navzkrižnega reagiranja z anti-IL-4 protitelesi. Izraz IL-4 vključuje tudi analoge naravnih humanih IL-4 molekul zmožne obdržati biološko aktivnost naravnega humanega IL-4.
Kot je tu uporablen, se GM-CSF nanaša na vrsto proteinov, kot so opisani v U.S. patentih št. 5,108,910, in 5,229,496, vsak od njiju je tu vključen z referenco. Taki proteini vključujejo analoge, ki imajo aminokislinsko sekvenco, ki je precej podobna naravnim humanim GM-CSF aminokislinskim sekvencam (npr., kot javno razpoložljivi ATCC 53157 ali ATCC 39900), in ki so biološko aktivni v tem, da so zmožni vezanja na GM-CSF receptor, transduciranja biološkega signala iniciranega z vezanjem GM-CSF receptorja, ali navzkrižnega reagiranja z anti-GM-CSF protitelesi. Aminokislinske sekvence so razkrite, na primer v Anderson, s sod., Proč. Natl. Acad. Sci., USA 82:6250 (1985). Komercialno razpoložljiv GM-CSF (sargramostim, Leukine®) je dosegljiv iz lmmunex Corp., Seattle, WA). Izraz GM-CSF vključuje tudi analoge naravnih humanih GM-CSF molekul, opisanih v U.S. patentih št. 5,108,910 in 5,229,496, zmožne obdržati biološko aktivnost naravnega humanega GM-CSF. Ponazorilni analogi GMCSF vključujejo, na primer tiste opisane v EP objavi št. 212914 in WO 89/03881, vsaka od teh je tu vključena z referenco. Drugi analogi GM-CSF se tudi lahko uporabljajo, da konstruirajo fuzijske proteine z IL-3. DNA sekvenca, ki ima nakodiran posebno prednosten GM-CSF protein, ki ima odstranjena potencialna glikozilacijska mesta je javno razpoložljiva iz ATCC pod pristopno številko ATCC 67231.
-9Izraz GM-CSF/IL-3 fuzijski protein pomeni C-terminalno do N-terminalno združitev GM-CSF in IL-3. Fuzijski proteini so poznani in so opisani v U.S. patentih št. 5,199,942, 5,108,910 in 5,073,627, od katerih je vsak tu vključen z referenco. Prednostni fuzijski protein je ΡΙΧΥ321, kot je opisan v US patentu št. 5,199,942.
Izraz c-kit ligand, poznan tudi kot mastocitni rastni faktor (MGF), Steel faktor ali faktor matičnih celic (SCF), se nanaša na polipeptid opisan v EP 423,980, ki je tu vključen z referenco, in ki zahteva prioriteto iz U.S. patentne prijave serijska številka 589,701, vložene 1. oktobra, 1990. Tak polipeptid, c-kit ligand vključuje analoge, ki imajo aminokislinsko sekvenco, ki je precej podobna aminokislinskim sekvencam naravnega humanega c-kit liganda, opisanim v EP 423,980, in ki so biološko aktivni v tem, da so zmožni vezanja na c-kit receptor, transduciranja biološkega signala iniciranega z vezanjem c-kit receptorja ali navzkrižnega reagiranja s protitelesi anti-c-kit liganda. Izraz c-kit ligand vključuje tudi analoge molekul naravnega humanega c-kit liganda, zmožne obdržati biološko aktivnost naravnega humanega c-kit liganda.
Izraz adjuvant se nanaša na substanco, ki zvišuje, povečuje ali okrepi gostiteljev imunski odziv na antigen vakcine.
Postopek za ex vivo ekspanzijo hemopoetičnih matičnih in predhodnih celic je opisan v U.S. patentu št. 5,199,942, tu vključenem z referenco. Na kratko izraz pomeni metodo, ki obsega: (1) zbiranje CD34+ hemopoetičnih matičnih in predhodnih celic iz pacienta, iz dobljene periferne krvi ali presadkov kostnega mozga; in (2) širjenje takih celic ex vivo. Razen
-10celičnih rastnih faktorjev opisanih v patentu 5,199,942, se lahko uporabljajo tudi drugi faktorji, kot flt3-ligand, IL-1, IL-3, c-kit ligand.
Izraz imunogenost pomeni relativno učinkovitost imunogena ali antigena, da inducira imunski odziv.
Izraz precej podoben pomeni različico aminokislinske sekvence, da je prednostno vsaj 80% identična nativni aminokislinski sekvenci, najbolj prednostno vsaj 90% identična. Odstotek identičnosti je lahko določen, na primer s primerjanjem sekvenčne informacije z uporabljanjem GAP računalniškega programa, verzija 6.0, ki ga je opisal Devereux s sod., (Nucl. Acids Res. 12:387, 1984) in dostopnega pri University of VVisconsin Genetics Computer Group (UWGCG). GAP program uporablja metodo razvrščanja po Needlemanu in VVunschu (J. Mol. Biol. 48:443, 1970), kot sta jo revidirala Smith in VVaterman (Adv. Appl. Math 2:482, 1981). Prednostni predpostavljeni parametri za GAP program vključujejo: (1) enostavno primerjalno matriko (vsebujočo vrednost 1 za enakosti in 0 za ne-enakosti) za nukleotide, in obteženo primerjalno matriko Gribskova in Burgessa, Nucl. Acids Res. 14:6745, 1986, kot sta jo opisala Schvvartz in Dayhoff, eds., Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, str. 353-358, 1979; (2) kazen 3.0 za vsako praznino in dodatno 0.10 kazen za vsak simbol v vsaki praznini; in (3) nič kazni za končne praznine. Variante lahko obsegajo konzervativno substituirane sekvence, kar pomeni, da je dani aminokislinski ostanek zamenjan z ostankom, ki ima podobne fizikalnokemijske karakteristike. Primeri konzervativnih substitucij vključujejo substitucijo enega alifatskega ostanka za drugega, kot lle, Val, Leu, ali Ala za drug drugega, ali substitucije enega polarnega ostanka za drugega, kot med Lys in Arg; Glu in Asp; ali Gin in Asn. Druge take konzervativne substitucije, na primer substitucije
-11celotnih regij, ki imajo podobne hidrofobnostne karakteristike, so dobro poznane. Naravno pojavljajoče se variante so tudi zaobsežene z izumom. Primeri takih variant so proteini, ki izhajajo iz izmeničnih mRNA povezovalnih dogodkov ali iz proteolitične cepitve naravnega proteina, pri čemer se obdrži naravna biološka lastnost.
Kot se tu uporablja, vakcina pomeni organizem ali material, ki vsebuje antigen v neškodljivi obliki. Vakcina je namenjena temu, da sproži imunozaščitni odziv. Vakcina je lahko rekombinantna ali ne-rekombinantna. Ko bo inokulirana v ne-imunega gostitelja, bo vakcina izzvala aktivno imunost na organizem ali material, toda ne bo povzročila bolezni. Vakcine imajo lahko obliko, na primer toksoida, ki je definiran kot toksin, ki je bil detoksificiran, toda še vedno ohranja svoje glavne imunogene determinante; ali ubitega organizma, kot tifusu podobna kolera in poliomielitis; ali atenuiranih organizmov, ki so žive, toda nevirulentne oblike patogenov, ali je lahko antigen nakodiran s takim organizmom, ali je lahko živa tumorska celica ali antigen prisoten na tumorski celici.
Poznana je vrsta tehnik selekcije celic za identifikacijo in ločevanje CD34+ hemopoetičnih matičnih ali predhodnih celic iz populacije celic. Metode in materiali za identifikacijo in selekcijo takih celičnih tipov so poznani. Na primer, monoklonska protitelesa se lahko uporabljajo za vezavo na markerski protein ali površinski antigenski protein, ki so ga našli na matičnih ali predhodnih celicah. Taki označevalci ali celični površinski antigeni za hemopoetične matične celice vključujejo CD34 in Thy-1. Pri eni metodi so protitelesa pritrjena na površino, na primer steklene kroglice in v stiku z mešanico celic, za katero se domneva, da vsebuje matične celice. To dopušča protitelesom, da se vežejo in zavarujejo matične celice na steklene kroglice. Alternativno so protitelesa lahko inkubirana z mešanico
-12celic ίη nastala kombinacija v stiku s površino, ki ima afiniteto za kompleks protitelo-celica. Neželjene celice in celična snov se odstrani, da se zagotovi relativno čisto populacijo matičnih celic. Matične ali predhodne celice, ki imajo označevalec CD34, predstavljajo samo okoli 1% do 3% mononuklearnih celic v kostnem mozgu. Količina CD34+ matičnih ali predhodnih celic v periferalni krvi je približno 10- do 100-krat manjša, kot v kostnem mozgu.
Z ozirom na posamezne vidike izuma bo izbiranje primernih načinov selekcije matičnih ali predhodnih celic odvisno od želenega fenotipa celice, ki jo bo potrebno izolirati. Hemopoetične matične celice se lahko selektira na osnovi njihovih fizikalnih karakteristik, kot izražanja membransko vezanega flt3-receptorja, ali da imajo sledeča celična označevalca: CD34 ali Thy-1. Monoklonska protitelesa, ki prepoznajo kateregakoli od teh antigenov so bila opisana v U.S. patentu št. 4,714,680 (anti-My-10), tu vključenem z referenco, anti-CD34 je komercialno razpoložljiv iz Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), in anti-Thy-1 monoklonska protitelesa se lahko hitro izdelajo z uporabljanjem metod, ki jih je opisal Dalchau s sod., J. Exp. Med. 149:576 (1979), tu vključen z referenco. Uporablja se lahko tudi flt3 receptor povezovalni protein, kot anti-flt3 monoklonska protitelesa ali flt3ligand. Celice povezovalni protein je priveden v kontakt z zbrano mešanico celic in kombinacijo se pusti inkubirati določeno časovno obdobje, ki je dovolj dolgo, da dopušča povezovanje željene celice na celice povezovalni protein.
Alternativni način selektiranja mirujočih matičnih celic je, da se inducira smrt celic pri delitvi, bolj za poreklo usposobljenih celičnih tipov, z uporabljanjem antimetabolita, kot je 5-fluorouracil (5-FU) ali alkilirnega sredstva, kot je 4-hidroksiciklofosfamid (4-HC). Nemirujoče celice so
-13stimulirane, da proliferirajo in se diferencirajom ob dodatku rastnih faktorjev, ki imajo majhen ali pa nimajo učinka na matične celice, kar povzroča, da nematične celice proliferirajo in se diferencirajo in jih dela tudi bolj občutljive za citotoksične učinke 5-FU ali 4-HC. Glej Berardi s sod., Science, 267.104 (1995), ki je tu vključen z referenco.
Izolacija hemopoetičnih matičnih ali predhodnih celic se lahko izvede z uporabljanjem, na primer afinitetne kromatografije, s protitelesi prekritimi magnetnimi kroglicami ali protitelesi pritrjenimi na trdno matriko, kot steklene kroglice, stekleničke, itd.. Protitelesa, ki prepoznajo označevalca na površini matične ali predhodne celice so lahko združena ali konjugirana na druge kemijske dele, kot je biotin, ki je lahko odstranjen z avidinskim ali streptavidinskim delom, pritrjenim na trdno podlago; fluorokromi, koristni pri fluorescenčno aktiviranem sortiranju celic (FACS), ali podobni. Prednostno je izolacija izvršena z imunoafinitetno kolono. Imunoafinitetne kolone so lahko katerekoli oblike, toda običajno obsegajo reaktor s strnjenim slojem (angl. packed bed reactor). Strnjen sloj je pri teh reaktorjih prednostno narejen iz poroznega materiala, ki ima precej enakomeren nanos substrata. Porozen material, ki zagotavlja visoko razmerje površine proti volumnu omogoča, da mešanica celic teče preko velike kontaktne površine, medtem ko ne ovira toka celic izven sloja. Tipični substrati vključujejo avidin in streptavidin, medtem ko se lahko uporabljajo tudi drugi konvencionalni substrati. Substrat bi moral, bodisi s svojimi lastnimi lastnostmi ali z dodatkom kemijskega dela kazati visoko afiniteto za del, najden na celice povezujočem proteinu, kot je monoklonsko protitelo. Monoklonska protitelesa prepoznajo celični površinski antigen na celicah, ki jih je potrebno separirati in so tipično nadalje modificirana, da predstavijo biotinski del. Dobro je poznano, da ima biotin veliko afiniteto do avidina in afiniteta teh substanc s tem zamenljivo zavaruje monoklonsko protitelo na
-14površino strnjenega sloja. Take kolone so v stroki dobro poznane, glej Berenson, s sod. J. Celi Biochem., 10D:239 (1986). Kolona je sprana s PBS raztopino, da se odstrani nevezan material. Celice tarče se lahko iz kroglic sprostijo z uporabljanjem običajnih metod. Imunoafinitetne kolone zgoraj opisanega tipa, ki uporabljajo biotinirana anti-CD34 monoklonska protitelesa zavarovana na z avidinom prekriti strnjeni sloj so na primer opisane v PCT objavi št. WO 93/08268. Variacija te metode uporablja celice povezovalne proteine, kot monoklonska protitelesa ali flt3-ligand, kot je opisano zgoraj, odstranljivo zavarovane na fiksirano površino v izolirnih sredstvih. Povezan celice povezovalni protein potem kontaktira z zbrano mešanico celic in pusti se ga inkubirati določeno časovno obdobje, ki je dovolj dolgo, da dopušča izolacijo željenih celic.
Alternativno so monoklonska protitelesa, ki prepoznajo celične površinske antigene, lahko označena s fluorescentno oznako, npr., kromoforom ali fluoroforom, in separirana s sortiranjem celic glede na prisotnost odsotnosti ali količino označenega produkta.
Zbrane celice CD34+ so potem izpostavljene bodisi flt3-ligandu samemu ali flt3-ligandu v hkratni ali poznejši kombinaciji z enim ali več od sledečih citokinov: GM-CSF, TNF-α, IL-3, IL-4, c-kit-ligandom ali GM-CSF/IL-3 fuzijskimi proteini. Celice CD34+ se potem pusti diferencirati in preiti v celice dendritičnega porekla. Dendritične celice se zbere in so bodisi lahko (a) dane pacientu zato, da okrepijo imunski sistem in s T-celico in Bcelico posredovane imunske odzive na antigen, (b) izpostavljene na antigen pred dajanjem dendritičnih celic pacientu, (c) transfektirane z genom, ki ima nakodiran antigen specifičen polipeptid ali (d) izpostavljene antigenu in potem puščene, da procesirajo in predstavijo antigen ex vivo T-celicam, ki
-15so bile zbrane od pacienta, čemur sledi dajanje antigen-specifičnih T-celic pacientu.
Bolj specifično izum zagotavlja uporabo učinkovite količine flt3-liganda, da pomnoži ali mobilizira dendritične celice in vivo, na primer v pacientovi periferalni krvi ali drugem tkivu ali organih, kot je vranica. S povečanjem kvantitete pacientovih dendritičnih celic, se lahko take celice same uporabijo za predstavitev antigena T celicam. Na primer, antigen je lahko nek antigen, ki že obstoja v pacientu, kot tumorski antigen, ali bakterijski ali virusni antigen. Flt3-ligand se zato lahko uporablja, da dvigne pacientov limfocitno posredovan (npr., posredovan s celico T in celico B) ali mieloidno posredovan imunski odziv na že prisotne antigene in tako potencialno omogoča bolj učinkovito predstavitev antigena pacientovim celicam T. Alternativno je flt3-ligand lahko dan pred, hkrati z ali po dajanju antigena pacientu za imunizacijske namene. Tako adjuvant vakcine, flt3ligand lahko proizvaja velike množine dendritičnih celic in vivo, da bolj učinkovito predstavijo antigen. Celoten odziv je močnejši, in izboljšan je imunski odziv in bolj učinkovita je imunizacija na antigen.
Sistemsko dajanje flt3-liganda ni samo učinkovito kot adjuvant vakcin, ampak, kot je bilo razloženo zgoraj je učinkovito pri povečevanju imunskega odziva proti že obstoječim antigenom. Na primer, izumitelji so pokazali, da dajanje flt3-liganda tumor prenašajočim mišim, rezultira v vsaj precejšnjem zmanjšanju hitrosti rasti tumorja in lahko rezultira v zavrnitvi tumorja pri velikem deležu miši. Podatki so podrobneje predstavljeni v Primeru 3. Zato je flt3-ligand pomben citokin pri nastanku učinkovitega imunskega odziva in vivo proti antigenu.
-16Zaradi njegove zmožnosti, da proizvaja dendritične celice se flt3-ligand tudi lahko uporablja pri povečevanju preživetja transplantiranega tkiva ali organov. Kadar so alogenski organi ali ali drugo tkivo transplantirani v gostitelja, lahko od donorja prenesejo matične celice, nezrele dendritične celice in zrele dendritične celice. Te celice se imenujejo celice potnice in take celice se lahko presadijo v hemopoetični sistem gostitelja. Dodatno se matične celice, nezrele dendritične celice in zrele dendritične celice lahko iz gostitelja presadijo v organ ali tkivo donorja. Potem je možno, da se vzpostavi toleranca med presadkom in gostiteljem, ker nezrele dendritične celice iz tkiva gostitelja in donorja vzajemno delujejo s T-celicami od druge strani. Taka interakcija lahko vključuje delecijo T-celic, ki prepoznajo poglavitni histokompatibilnostni kompleks (PHK) (angl. major histocompatability complex, MHC), ki ga dendritične celice izražajo. Na ta način so donorne celice zastrte (angl. screened), tako da ne morejo prepoznati in reagirati proti gostitelju (npr., ni bolezni presadek proti gostitelju) in T-celice gostitelja so tako zastrte, da ne morejo prepoznati in reagirati proti presadku (npr. ni zavrnitve presadka). Tako je lahko dosežena medsebojna toleranca in izboljša se sprejem presadka. Dajanje flt3-liganda gostitelju ali donorju pred transplantacijo bi povzročilo povečano število dendritičnih celic v takem gostitelju ali donorju in omogočalo povečano toleranco in preživetje presadka.
Za rast in gojenje dendritičnih celic se lahko uporablja različne rastne medije ter medije za gojenje in oseba z običajnimi izkušnjami na tem področju bo hitro določila sestavo takih medijev. Primerni rastni mediji so raztopine, ki vsebujejo hranila ali metabolične dodatke in vključujejo tiste, ki nimajo seruma ali pa so osnovani na serumu. Reprezentativni primeri rastnih medijev so RPMI, TC 199, Iscovesov modificiran Dulbeccov medij (Iscove, s sod., F. J. Exp. Med., 147:923 (1978)), DMEM, Fisherjev alfa
-17medij, NCTC, F-10, Leibovitzov L-15, MEM in McCoyev. Posamezni primeri hranil, ki bodo izkušenemu strokovnjaku zlahka razvidni vključujejo serumski albumin, transferin, lipide, holesterol, reducent, kot 2-merkaptoetanol ali monotioglicerol, piruvat, butirat, in glukokortikoid, kot hidrokortizon 2hemisukcinat. Zlasti, standardni mediji vključujejo vir energije, vitamine ali druge organske spojine za vzdrževanje celic, pufer, kot HEPES, Tris, ki reagirata tako, da stabilizirata pH medijev, različne anorganske soli. Posebna referenca je narejena na PCT objavo št. WO 95/00632, v kateri so opisani različni seruma prosti celični rastni mediji, omenjeno razkritje je tu vključeno z referenco.
Za katerokoli od ex vivo metod izuma so predhodne celice periferne krvi (PBPC) in matične celice periferne krvi (PBSC) zbrane z uporabljanjem afereznih postopkov, ki so v stroki poznani. Glej, na primer Bishop s sod., Blood, vol. 83, št. 2, str. 610-616 (1994). Na kratko, PBPC in PBSC se zbere z uporabljanjem konvencionalnih naprav, na primer, aferezne naprave Haemonetics Model V50 (Haemonetics, Braintree, MA). Štiriurna zbiranja se tipično izvede ne več kot petkrat tedensko, na primer dokler ni zbranih približno 6.5 χ 108 mononuklearnih celic (MNC)/kg pacienta. Celice se suspendira v standardnem mediju in potem centrifugira, da se odstrani eritrocite in nevtrofile. Celice, locirane na vmesni ploskvi med dvema fazama (v stroki poznano tudi kot buffy coat) se odstrani in ponovno suspendira v HBSS. Suspendirane celice so prevladujoče mononuklearne in precejšen del celične mešanice so prvobitne matične celice. Rezultirajočo suspenzijo matičnih celic se potem lahko pusti kontaktirati z biotiniranimi anti-CD34 monoklonskimi protitelesi ali drugimi celice povezujočimi sredstvi. Kontaktna perioda se vzdržuje dovolj časa, da omogoča precejšnjo interakcijo med anti-CD34 monoklonskimi protitelesi in CD34 antigeni na površini matičnih celic. Tipično zadostujejo časi vsaj ene ure. Celično
-18suspenzijo se potem da v kontakt z izolacijskimi sredstvi zagotovljenimi v kitu. Izolacijska sredstva lahko obsegajo kolono napolnjeno z avidinom prekritimi kroglicani. Take kolone so v stroki dobro poznane, glej Berenson, s sod., J. Celi Biochem., 100:239 (1986). Kolono se spere s PBS raztopino, da se odstrani nevezan material. Ciljne matične celice se lahko od krogljic in od anti-CD34 monoklonskega protitelesa odstranijo z uporabljanjem običajnih metod. Na ta način dobljene matične celice se lahko zamrzne v kontrolirano reguliranem zamrzovalniku (npr., Cryo-Med, Mt. Clements, Ml), in potem shranijo v plinski fazi tekočega dušika. Kot zaščito pri zamrzovanju se lahko uporabi deset procentni dimetilsulfoksid. Ko so bile pri donorju narejene vse kolekcije se matične celice odtaja in združi. Alikvote, vsebujoče matične celice, rastni medij, kot McCoyev 5A medij, 0.3% agar, in vsaj enega od ekspanzijskih faktorjev: rekombinantni humani GM-CSF, IL-3, rekombinantni humani flt3-ligand, in rekombinantne humane GM-CSF/IL-3 fuzijske molekule (ΡΙΧΥ321) v koncentracijah približno 200 Enot/mL se goji in ekspandira pri 37°C v 5% CO2 v popolnoma navlaženem zraku 14 dni. Opcijsko se lahko kulturam doda humani IL-1a ali IL-4. Najbolj prednostna kombinacija ekspanzijskih faktorjev obsega flt3ligand in bodisi IL-3 ali GM-CSF/IL-3 fuzijski protein.
Za in vivo dajanje ljudem, je flt3-ligand lahko formuliran po poznanih metodah, ki se uporabljajo za pripravo farmacevtsko koristnih sestavkov. Flt3- ligand je lahko v dodatku kombiniran, bodisi kot edini aktivni material ali z drugimi poznanimi aktivnimi materiali, s farmacevtsko primernimi razredčili (npr., Tris-HCl, acetat, fosfat), konzervansi (npr., timerosal, benzil alkohol, parabeni), emulgatorji, sredstvi proti strjevanju, adjuvanti in/ali nosilci. Primerni nosilci in njihove formulacije so opisani v Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th ed. 1980, Mačk Publishing Co.. Poleg tega taki sestavki lahko vsebujejo flt3-ligand zakompleksiran s polietilen glikolom
-19(PEG), kovinskimi ioni, ali inkorporiran v polimerne spojine kot poliocetno kislino, poliglikolno kislino, hidrogele, itd,, ali inkorporiran v liposome, mikroemulzije, micele, enolamelarne ali multilamelarne mehurčke, sledi eritrocitov ali sferoblaste. Taki sestavki bodo vplivali na fizikalno stanje, topnost, stabilnost, hitrost in vivo sproščanja in hitrost in vivo izčiščenja flt3-liganda.
Flt3-ligand je lahko dan lokalno, parenteralno, ali z inhalacijo. Izraz parenteralen vključuje subkutane injekcije, intravenozno, intramuskularno, intracisternalno injekcijo, ali infuzijske tehnike. Ti sestavki bodo tipično vsebovali učinkovito količino flt3-liganda, samega ali v kombinaciji z učinkovito količino kateregakoli drugega aktivnega materiala. Taka doziranja in želene koncentracije zdravila vsebovane v sestavkih lahko variirajo odvisno od mnogih faktorjev, vključno nameravane uporabe, pacientove telesne teže in starosti ter poti dajanja. Predhodne doze se lahko dajo glede na teste pri živalih in dvigovanje odmerjenih količin za dajanje ljudem je lahko izvedeno po v stroki sprejetih postopkih. S tem, da upoštevamo zgornji opis, se tipične doze flt3-liganda lahko gibljejo od okoli 10 gg na kvadratni meter do okoli 1000 gg na kvadratni meter. Prednostno območje doze je nekako od okoli 100 gg na kvadratni meter do okoli 300 gg na kvadratni meter.
Razen zgornjega opisa so zagotovljeni sledeči primeri, da ilustrirajo specifične izvedbe in ne, da omejujejo obseg izuma.
PRIMER 1
Pridobivanje dendritičnih celic
-20Ta primer opisuje metodo uporabljanja flt3-iiganda, da producira veliko število dendritičnih celic ex vivo. Celice, ki imajo CD34+ fenotip se izolira kot je bilo opisano zgoraj, na primer najprej s tvorjenjem buffy coat-a celic z uporabljanjem postopka, opisanega zgoraj. Celice iz buffy coat-a se potem inkubira s CD34 specifičnim monoklonskim protitelesom. Celice CD34+, ki so selektirane, se potem goji na McCoy-evem mediju, izboljšanem z 20 ng/ml vsakega od GM-CSF, IL-4, TNF-α, ali 100 ng/ml flt3-liganda ali c-kit liganda. Gojenje se nadaljuje približno dva tedna pri 37°C v 10% CO2 v vlažnem zraku. Celice se potem sortira s pretočno citometrijo za CD1a+ in HLA-DR+ ekspresijo. Kombinacija GM-CSF, IL-4 in TNF-α je rezultirala v šest do sedemkratnem povečanju v številu celic dobljenih po dveh tednih gojenja. Kombinacija flt3-liganda in c-kit liganda je rezultirala v skupnem 12-13-kratnem povečanju v absolutnem številu celic. To je koreliralo z 18-kratno ekspanzijo z bodisi flt3-ligandom ali c-kit ligandom ali s 34-kratno ekspanzijo s kombinacijo flt3-liganda in c-kit liganda. Analize fenotipa celic so pokazale, da je bilo med 60-70% celic HLA-DR+, CD86+, s 40-50% celic, ki so izražale CD1a v vseh preiskanih kombinacijah faktorjev. Dodatek flt-3 liganda je povečal absolutno število CD1a+ celic za 5-krat. c-Kit ligand je povečal število teh celic za 6.7-krat in kombinacija flt3-liganda in c-kit liganda za 11-krat. Funkcionalna analiza rezultirajočih celic v MLR (reakciji pomešanih limfocitov) je odkrila, da prisotnost flt3-liganda ali c-kit liganda ni vplivala na stimulatorno kapaciteto rezultirajočih dendritičnih celic, medtem ko je bila dosežena porast števila.
PRIMER 2
Uporaba flt3-L pri ekspanziji dendritičnih celic
Ta primer opisuje metodo uporabe flt3-liganda za ekspanzijo dendritičnih celic. Pred zbiranjem celic je mogoče zaželeno, da se mobilizira ali
-21poveča število krožečih PBPC in PBSC. Mobilizacija lahko izboljša PBPC in PBSC zbiranje, in se jo lahko doseže preko intravenoznega dajanja flt3liganda ali sargramostima (Leukine®, lmmunex Corporation, Seattle, VVashington) pacientom pred zbiranjem takih celic. Drugi rastni faktorji, kot CSF-1, GM-CSF, c-kit ligand, G-CSF, EPO, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, GM-CSF/IL-3 fuzijski proteini, LIF, FGF in njihove kombinacije so lahko prav tako dani v zaporedni ali hkratni kombinaciji z flt3-ligandom. Mobilizirane ali nemobilizirane PBPC in PBSC se zbere z uporabljanjem afereznih postopkov, ki so v stroki poznani. Glej, na primer, Bishop s sod., Blood, vol. 83, št. 2, str. 610-616 (1994). Na kratko, PBPC in PBSC se zbere z uporabljanjem konvencionalnih naprav, na primer, aferezne naprave Haemonetics Model V50 (Haemonetics, Braintree, MA). Štiriurna zbiranja se tipično izvede ne več kot petkrat tedensko, dokler se ne zbere približno
6.5 χ 108 mononuklearnih celic (MNC)/kg pacienta. Alikvote zbranih PBPC in PBSC se testira za vsebnost granulocitno makrofagne kolonije formirajoče enote (CFU-GM) z razredčitvijo približno 1:6 s Hankovo uravnoteženo raztopino soli brez kalcija ali magnezija (HBSS) in nanašanjem preko medija za separacijo limfocitov (Organon Teknika, Durham, North Carolina). Po centrifugaciji se MNC na vmesni ploskvi zbere, spere in ponovno suspendira v HBSS. Eno mililiterske alikvote, ki vsebujejo približno 300,000 MNC, modificiran McCoyev 5A medij, 0.3% agar, 200 Enot/mL rekombinantnega humanega GM-CSF, 200 Enot/mL rekombinantnega humanega IL-3, in 200 Enot/mL rekombinantnega humanega G-CSF se goji pri 37 °C v 5% CO2 v popolnoma navlaženem zraku 14 dni. Opcijsko, se kulturam lahko doda flt3-ligand ali GM-CSF/IL-3 fuzijske molekule (ΡΙΧΥ 321). Te kulture se obarva z VVrightovim barvilom in prešteje CFU-GM kolonije z uporabljanjem disekcijskega mikroskopa (Ward s sod., Exp. Hematol., 16:358 (1988). Alternativno, se lahko CFU-GM
-22kolonije testira z uporabljanjem metode CD34/CD33 pretočne citometrije, Siena s sod., Blood, vol. 77, št. 2, str. 400-409 (1991), ali katerikoli druge v stroki poznane metode.
CFU-GM vsebujoče kulture se zamrzne v kontrolirano reguliranem zamrzovalniku (npr., Cryo-Med, Mt. Clements, Ml), in potem shrani v plinski fazi tekočega dušika. Kot zaščito pri zamrzovanju se lahko uporabi 10 procentni dimetilsulfoksid. Potem, ko so bile pri pacientih narejene vse zbirke se CFU-GM vsebujoče kulture odmrzne in združi. Odmrznjeno zbirko celic se da v stik z flt3-ligandom bodisi samim, zaporedno ali v hkratni kombinaciji z drugimi citokini navedenimi zgoraj. Taka izpostavitev flt3ligandu bo vodila CFU-GM v dendritično celično poreklo. Dendritične celice se ponovno intravenozno injicira v pacienta.
PRIMER 3
Uporaba flt3-L pri povečevanju anti-tumorsklh imunskih odzivov
Ta primer opisuje metodo uporabe flt3-L za povečanje ant-tumorskih imunskih odzivov in vivo. Mišim samicam C57BL/10J (B10) (The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) smo injicirali 5 χ 105 viabilnih B10.2 ali B10.5 fibrosarkomskih tumorskih celic z intradermalno injekcijo v srednjo linijo trebušne pozicije v celotnem volumnu 50 μΙ. Fibrosarkomski B10.2 in B10.5 liniji sta B10 izvora in sta bili že prej opisani, glej Lynch s sod., Euro. J. Immunol., 21:1403 (1991), ki je tu vključen z referenco. Fibrosarkomsko B10.2 linijo smo inducirali s subkutano implantacijo parafinskega peleta vsebujočega 5 mg metilholantrena in B10.5 linijo smo inducirali s kroničnim izpostavljanjem ultravijoličnemu sevanju. Tumorske celične linije smo ohranjali in vitro v α-modificiranem MEM, vsebujočem 5 % FBS, 2 nM Lglutamina, 50 Enot/ml penicilina in 50 gg/ml streptomicina. Rekombinantni
-23humani flt3-L (10 gg/injekcijo) smo dali vsak dan preko 19-dnevnega obdobja (razen, če ni zabeleženo drugače) s subkutano injekcijo v celotnem volumnu 100 gl. Kontrolne miši smo podobno injicirali s podobnim volumnom pufra vsebujočega 100 ng MSA. Hitrosti rasti tumorja smo določili z grafičnim prikazovanjem velikosti tumorja proti času po izzivu tumorja. Velikost tumorja smo izračunali kot produkt dveh pravokotnih premerov, izmerjenih z inštrumenti za merjenje širine (angl. calipers) in je izražena kot srednja vrednost velikosti tumorja samo tistih miši, ki so nosile tumor znotraj določene zdravljene skupine. V spodnjih podatkih je na koncu eksperimenta za vsako zdravljeno skupino prikazano število miši, ki so nosile tumorje, primerjano s številom izzvanih.
Podatek iz Tabele I je kompilacija šestih različnih eksperimentov, pri čemer smo tumor prenašujoče miši bodisi zdravili z flt3-ligandom ali MSA. Popolno regresijo tumorja smo opazili pri 19 od 50 z flt3-ligandom zdravljenih miših, primerjano z 1 od 30 pri z MSA zdravljenih miših (p<0.0001 z uporabljanjem Fisherjevega testa natančnosti). Opažanje, da je bila hitrost rasti tumorja pri z flt3-ligandom zdravljenih mišth (srednja velikost tumorja pri tumor prenašujočih miših peti teden po izzivu tumorja je bila 60 +/- 8 mm2) precej zmanjšana, primerjano z MSA zdravljenimi mišmi (srednja velikost tumorja peti teden po tumorskem izzivu je bila 185 +/- 17 mm2), je bilo tudi potrjeno (p.0001 z analizo variance).
-24TABELA I
Fibrosarkom +/- flt3-L kompozit šestih eksperimentov Velikost tumorja (mm2)
| Tedni po izzivu tumorja | MSA kontrola (100 ng/dan) | Standardna napaka | Flt3-L (10 pg/dan) | Standardna napaka |
| 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 1 | 25 | 2.6 | 24 | 2.2 |
| 2 | 62 | 7.5 | 49 | 3.6 |
| 3 | 98 | 10.6 | 49 | 3.9 |
| 4 | 149 | 14.5 | 50 | 5 |
| 5 | 185 | 16.8 | 60 | 8.4 |
Velikost tumorja je bila močno zmanjšana primerjano s kontrolo. Zato podatki kažejo, da je flt3-ligand pomemben citokin pri povečenju imunskega odziva proti tujim antigenom, in posebno proti raku.
Claims (23)
1. FIt3-ligand za povečanje imunskega odziva, pri čemer navedeni flt3-ligand zadošča za povzročitev povečanja števila dendritičnih celic.
2. Uporaba flt3-liganda pri izdelavi zdravila za povečanje imunskega odziva, pri čemer navedeni flt3-ligand zadošča za povzročitev povečanja števila dendritičnih celic.
3. Flt3-ligand za uporabo po zahtevku 1, pri čemer navedeni flt3-ligand damo pacientu, ki ima infekcijsko bolezen.
4. Flt3-ligand za uporabo po zahtevku 1, pri čemer navedeni flt3-ligand damo pacientu, ki ima rakavo ali neoplastično bolezen.
5. Flt3-ligand za uporabo po zahtevku 3, pri čemer je infekcijska bolezen AIDS.
6. Uporaba flt3-liganda po zahtevku 2, pri Čemer navedeno zdravilo damo pacientu, ki ima infekcijsko bolezen.
7. Uporaba flt3-liganda po zahtevku 2, pri čemer navedeno zdravilo damo pacientu, ki ima rakavo ali neoplastično bolezen.
8. Uporaba flt3-liganda po zahtevku 6, pri čemer je infekcijska bolezen AIDS.
9. Citokin v kombinaciji z flt3-ligandom.
10. Citokin po zahtevku 9, pri čemer je navedeni citokin katerikoli izmed GM-CSF, IL-4, TNF-α, IL-3, c-kit liganda, in združb GM-CSF in IL-3.
-2611. Dendritične celice, ki imajo vsaj dva celična površinska označevalca, pri čemer sta navedena površinska označevalca katerakoli izmed CD1a, HLA-DR in CD86.
12. Dendritične celice, ki imajo vsaj dva celična površinska označevalca, navedena površinska označevalca sta katerakoli izmed CD1a, HLA-DR in CD86, pri čemer navedene celice lahko pridobimo s kontaktiranjem hemopoetičnih matičnih ali predhodnih celic z flt3-ligandom.
13. Dendritične celice po zahtevku 11, ki jih lahko pridobimo s kontaktiranjem hemopoetičnih matičnih ali predhodnih celic s katerimkoli izmed GM-CSF, lL-4, TNF-a, IL-3, c-kit liganda, in združb GM-CSF in IL-3.
14. Antigen izražajoča populacija dendritičnih celic, ki jo lahko pridobimo s:
(a) kontaktiranjem hemopoetičnih matičnih aii predhodnih celic z flt3-ligandom v količini, ki zadošča za generiranje populacije dendritičnih celic;
(b) bodisi (i) izpostavljanjem dendritičnih celic antigen specifičnemu peptidu ali (ii) transfektiranjem dendritičnih celic z genom, ki ima nakodiran antigen specifičen peptid;
(c) dopuščanjem, da dendritične celice procesirajo in izrazijo antigen; in (d) čiščenjem antigen izražajočih denritičnih celic.
15. Populacija dendritičnih celic po zahtevku 14, pri čemer stopnja (a) postopka dalje obsega kontaktiranje hemopoetičnih matičnih ali predhodnih celic s katerimkoli izmed GMCSF, IL-4, TNF-α, c-kit liganda, in združb GM-CSF in IL-3.
16. Metoda, ki vodi hemopoetične matične ali predhodne celice v dendritično celično poreklo, obsegajoča kontaktiranje takih hemopoetičnih matičnih ali predhodnih celic z flt3ligandom.
17. Metoda pripravljanja antigen predstavljajoče populacije dendritičnih celic, ki obsega stopnje:
(a) kontaktiranje hemopoetičnih matičnih ali predhodnih celic z flt3-ligandom v količini, ki zadošča za generiranje populacije dendritičnih celic;
-27(b) bodisi (i) izpostavljanje dendritičnih celic antigen specifičnemu peptidu ali (ii) transfektiranje dendritičnih celic z genom, ki ima nakodiran antigen specifičen peptid;
(c) dopuščanje, da dendritične celice procesirajo in izrazijo antigen; in (d) čiščenje antigen izražajočih dendritičnih celic.
18. Metoda pripravljanja antigen specifičnih celic T, ki obsega stopnje;
(a) kontaktiranje hemopoetičnih matičnih ali predhodnih celic z flt3-ligandom v količini, ki zadošča za generiranje populacije dendritičnih celic;
(b) bodisi (i) izpostavljanje dendritičnih celic antigen specifičnemu peptidu ali (ii) transfektiranje dendritičnih celic z genom, ki ima nakodiran antigen specifičen peptid; in (c) dopuščanje, da dendritične celice procesirajo in izrazijo antigen; in (d) dopuščanje, da dendritične celice predstavijo antigen celicam T.
19. Antigen vakcine in flt3-ligand za hkratno ali zaporedno uporabo pri povečanju imunskega odziva sesalca.
20. Uporaba flt3-liganda pri izdelavi zdravila za dajanje pred, hkrati z ali po antigenu vakcine, za povečanje imunskega odziva sesalca.
21. Adjuvant vakcine, ki obsega kateregakoli izmed c-kit liganda in fit3-liganda.
22. Flt3-ligand za induciranje tolerance tkiva presadka v gostitelju, pri čemer količina flt3-liganda zadošča za povečanje števila dendritičnih celic.
23. Uporaba flt3-liganda pri izdelavi zdravila za induciranje tolerance tkiva presadka v gostitelju, pri čemer količina flt3-liganda zadošča za povečanje števila dendritičnih celic.
24. Ekspanzijski medij dendritičnih celic, ki obsega flt3-ligand in kateregakoli izmed citokinov IL-3, IL-4, GM-CSF, TNF-az c-kit liganda in GM-CSF/IL-3 fuzijskih proteinov.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US53914295A | 1995-10-04 | 1995-10-04 | |
| PCT/US1996/015990 WO1997012633A1 (en) | 1995-10-04 | 1996-10-03 | Dendritic cell stimulatory factor |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SI9620116A true SI9620116A (sl) | 1999-08-31 |
Family
ID=24149974
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SI9620116A SI9620116A (sl) | 1995-10-04 | 1996-10-03 | Stimulatorni faktor dendritičnih celic |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0871487B1 (sl) |
| JP (1) | JP3631496B2 (sl) |
| KR (2) | KR100514957B1 (sl) |
| CN (1) | CN1172718C (sl) |
| AT (1) | ATE432085T1 (sl) |
| AU (1) | AU697539B2 (sl) |
| BR (1) | BR9610802A (sl) |
| CA (1) | CA2232865A1 (sl) |
| CZ (1) | CZ97798A3 (sl) |
| DE (1) | DE69637942D1 (sl) |
| EA (1) | EA199800272A1 (sl) |
| EE (1) | EE9800105A (sl) |
| ES (1) | ES2323818T3 (sl) |
| IS (1) | IS4703A (sl) |
| LV (1) | LV12085B (sl) |
| NO (1) | NO981374L (sl) |
| NZ (1) | NZ321039A (sl) |
| PL (1) | PL187329B1 (sl) |
| RO (1) | RO120579B1 (sl) |
| SI (1) | SI9620116A (sl) |
| SK (1) | SK40898A3 (sl) |
| TR (1) | TR199800607T1 (sl) |
| WO (1) | WO1997012633A1 (sl) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030026782A1 (en) | 1995-02-07 | 2003-02-06 | Arthur M. Krieg | Immunomodulatory oligonucleotides |
| US6207646B1 (en) | 1994-07-15 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
| US6429199B1 (en) | 1994-07-15 | 2002-08-06 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells |
| US9068164B1 (en) * | 1995-02-02 | 2015-06-30 | Tristem Trading (Cyprus) Limited | Method of preparing an undifferentiated cell |
| NZ333607A (en) * | 1996-07-10 | 2000-08-25 | Immunex Corp | Method of stimulating the immune system by transfecting dendritic cells |
| AUPO388396A0 (en) * | 1996-11-27 | 1996-12-19 | Ludwig Institute For Cancer Research | Cellular adjuvant |
| WO1998057655A1 (en) * | 1997-06-17 | 1998-12-23 | Immunex Corporation | A method of enhancing antigen-specific peripheral immune tolerance |
| FR2775692B1 (fr) * | 1998-03-03 | 2000-06-16 | Roussy Inst Gustave | Methodes d'activation de cellules tueuses naturelles (nk) et moyens de mise en oeuvre |
| US6849452B1 (en) | 1998-03-03 | 2005-02-01 | Institut Gustave Roussy | Methods for activating natural killer (NK) cells and means for carrying out said methods |
| FR2782524B1 (fr) * | 1998-08-21 | 2002-07-19 | Roussy Inst Gustave | Methodes d'activation de cellules tueuses naturelles (nk) et moyens de mise en oeuvre |
| SI1077722T1 (sl) | 1998-05-22 | 2007-02-28 | Ottawa Health Research Inst | Metode in produkti za induciranje sluznicne imunosti |
| AU4423799A (en) * | 1998-06-04 | 1999-12-20 | Cornell Research Foundation Inc. | Methods and agents for modulating the immune response and inflammation involvingmonocyte and dendritic cell membrane proteins |
| US6291661B1 (en) | 1998-07-02 | 2001-09-18 | Immunex Corporation | flt3-L mutants and method of use |
| AU5741699A (en) * | 1998-08-27 | 2000-03-21 | Universitatsklinikum Freiburg | Low-molecular fragments of hyaluronic acid for the preparation of vaccines |
| GB9827604D0 (en) * | 1998-12-15 | 1999-02-10 | Lorantis Ltd | Methods of immunosuppression |
| WO2001009303A2 (en) * | 1999-07-30 | 2001-02-08 | Vical Inc. | Flt-3 LIGAND-ENCODING POLYNUCLEOTIDE AS A POLYNUCLEOTIDE-BASED VACCINE ENHANCER |
| WO2001032204A2 (en) * | 1999-11-03 | 2001-05-10 | Powderject Vaccines, Inc. | Nucleic acid vaccine compositions having a mammalian cd80/cd86 gene promoter driving antigen expression |
| US6423539B2 (en) * | 2000-02-24 | 2002-07-23 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Adjuvant treatment by in vivo activation of dendritic cells |
| AU5574001A (en) * | 2000-04-25 | 2001-11-07 | Immunex Corp | Method for treatment of tumors using photodynamic therapy |
| US20040247563A1 (en) * | 2000-11-02 | 2004-12-09 | Lynch David H. | Method of enhancing lymphocyte-mediated immune responses |
| AU2002225927A1 (en) * | 2000-11-17 | 2002-05-27 | Immunex Corporation | Chemoattractant recruitment of dendritic cells for enhancement of immunization |
| EP1441591B1 (en) * | 2001-09-06 | 2016-06-29 | NorthWest Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for priming monocytic dendritic cells and t cells for th-1 response |
| KR100490308B1 (ko) * | 2002-02-25 | 2005-05-17 | 크레아젠 주식회사 | 면역 치료용 성숙화된 수지상 세포 백신의 제조방법 |
| EP1487477A4 (en) * | 2002-03-26 | 2006-07-19 | Immunex Corp | METHOD OF USE OF FLT3 LIGAND IN IMMUNIZATION PROTOCOLS |
| US20050084967A1 (en) | 2002-06-28 | 2005-04-21 | Xcyte Therapies, Inc. | Compositions and methods for eliminating undesired subpopulations of T cells in patients with immunological defects related to autoimmunity and organ or hematopoietic stem cell transplantation |
| KR100522526B1 (ko) * | 2002-11-28 | 2005-10-19 | 주식회사 바이넥스 | 면역 치료용 수지상 세포의 제조방법 |
| KR100614220B1 (ko) * | 2004-11-08 | 2006-08-21 | 고려대학교 산학협력단 | Ｆｌｔ3 리간드 유전자를 발현하는 살모넬라 균주 및 이를함유하는 항암 치료용 조성물 |
| DE102005016234B4 (de) * | 2005-04-08 | 2008-05-15 | Tgc Biomics Gmbh | Verfahren zur Einschleusung von exogenem Antigen in den MHC I-Präsentationsweg von Zellen |
| KR100818215B1 (ko) | 2006-10-11 | 2008-04-01 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | Ｃｄ３４양성 줄기세포로부터 ｔ 임파구 전구체를 제조하는 방법 |
| KR101264811B1 (ko) | 2011-05-20 | 2013-05-15 | 충남대학교산학협력단 | 마이코박테리움 압세수스의 ＭＡＢ０９８１ｃ 단백질을 이용한 수지상 세포의 성숙방법 |
| US11850279B2 (en) | 2016-07-13 | 2023-12-26 | Ohio State Innovation Foundation | Platforms and methods for optimizing host antigen presentation and host antitumor and antipathogen immunity |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US826250A (en) | 1905-12-20 | 1906-07-17 | Albert Huck | Switch for toy railways. |
| US4714680B1 (en) | 1984-02-06 | 1995-06-27 | Univ Johns Hopkins | Human stem cells |
| US5391485A (en) | 1985-08-06 | 1995-02-21 | Immunex Corporation | DNAs encoding analog GM-CSF molecules displaying resistance to proteases which cleave at adjacent dibasic residues |
| EP0790307A1 (en) | 1986-12-16 | 1997-08-20 | Gist-Brocades B.V. | Molecular cloning and expression of human IL-3 |
| OA09736A (en) | 1987-02-18 | 1993-11-30 | Schering Biotech Corp | "Human interleukin-3 and muteins thereof". |
| JPH03502322A (ja) | 1987-10-30 | 1991-05-30 | イミュネックス・コーポレーション | ヒトコロニー形成刺激因子の非グリコシル化類似体 |
| US5073627A (en) | 1989-08-22 | 1991-12-17 | Immunex Corporation | Fusion proteins comprising GM-CSF and IL-3 |
| US5108910A (en) | 1989-08-22 | 1992-04-28 | Immunex Corporation | DNA sequences encoding fusion proteins comprising GM-CSF and IL-3 |
| EP0676470A1 (en) | 1989-10-16 | 1995-10-11 | Amgen Inc. | Stem cell factor |
| US5199942A (en) | 1991-06-07 | 1993-04-06 | Immunex Corporation | Method for improving autologous transplantation |
| DK0614485T3 (da) | 1991-10-23 | 2002-10-28 | Nexell Therapeutics Inc | Fremgangsmåde til selektiv formering af CD34 positive celler |
| US5554512A (en) | 1993-05-24 | 1996-09-10 | Immunex Corporation | Ligands for flt3 receptors |
| NZ314644A (en) * | 1993-05-24 | 2000-11-24 | Immunex Corp | Use of flt3-ligands as a growth stimulator of stem cells in the transplantation of tissue |
| US5405772A (en) * | 1993-06-18 | 1995-04-11 | Amgen Inc. | Medium for long-term proliferation and development of cells |
-
1996
- 1996-10-03 AT AT96936216T patent/ATE432085T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-10-03 WO PCT/US1996/015990 patent/WO1997012633A1/en not_active Application Discontinuation
- 1996-10-03 RO RO98-00824A patent/RO120579B1/ro unknown
- 1996-10-03 DE DE69637942T patent/DE69637942D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-10-03 CA CA002232865A patent/CA2232865A1/en not_active Abandoned
- 1996-10-03 ES ES96936216T patent/ES2323818T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-10-03 SI SI9620116A patent/SI9620116A/sl unknown
- 1996-10-03 AU AU73922/96A patent/AU697539B2/en not_active Ceased
- 1996-10-03 PL PL96325964A patent/PL187329B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-10-03 SK SK408-98A patent/SK40898A3/sk unknown
- 1996-10-03 CN CNB96197351XA patent/CN1172718C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-10-03 KR KR10-1998-0702286A patent/KR100514957B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-10-03 EA EA199800272A patent/EA199800272A1/ru unknown
- 1996-10-03 KR KR1020047011434A patent/KR100676792B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-10-03 EP EP96936216A patent/EP0871487B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-10-03 EE EE9800105A patent/EE9800105A/xx unknown
- 1996-10-03 NZ NZ321039A patent/NZ321039A/en unknown
- 1996-10-03 BR BR9610802A patent/BR9610802A/pt unknown
- 1996-10-03 CZ CZ98977A patent/CZ97798A3/cs unknown
- 1996-10-03 JP JP51449097A patent/JP3631496B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-10-03 TR TR1998/00607T patent/TR199800607T1/xx unknown
-
1998
- 1998-03-26 NO NO981374A patent/NO981374L/no unknown
- 1998-03-26 IS IS4703A patent/IS4703A/is unknown
- 1998-04-02 LV LVP-98-63A patent/LV12085B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BR9610802A (pt) | 1999-07-13 |
| ES2323818T3 (es) | 2009-07-24 |
| AU7392296A (en) | 1997-04-28 |
| IS4703A (is) | 1998-03-26 |
| CN1172718C (zh) | 2004-10-27 |
| TR199800607T1 (xx) | 1998-06-22 |
| EP0871487A1 (en) | 1998-10-21 |
| AU697539B2 (en) | 1998-10-08 |
| NZ321039A (en) | 2001-03-30 |
| CA2232865A1 (en) | 1997-04-10 |
| KR20040079421A (ko) | 2004-09-14 |
| NO981374D0 (no) | 1998-03-26 |
| SK40898A3 (en) | 1999-04-13 |
| JPH11513389A (ja) | 1999-11-16 |
| KR19990063818A (ko) | 1999-07-26 |
| RO120579B1 (ro) | 2006-04-28 |
| KR100676792B1 (ko) | 2007-02-02 |
| PL187329B1 (pl) | 2004-06-30 |
| EP0871487B1 (en) | 2009-05-27 |
| NO981374L (no) | 1998-06-03 |
| DE69637942D1 (de) | 2009-07-09 |
| PL325964A1 (en) | 1998-08-17 |
| ATE432085T1 (de) | 2009-06-15 |
| CN1229359A (zh) | 1999-09-22 |
| WO1997012633A1 (en) | 1997-04-10 |
| EA199800272A1 (ru) | 1998-10-29 |
| LV12085A (lv) | 1998-07-20 |
| LV12085B (en) | 1998-09-20 |
| CZ97798A3 (cs) | 1999-02-17 |
| EP0871487A4 (en) | 2004-09-01 |
| EE9800105A (et) | 1998-10-15 |
| KR100514957B1 (ko) | 2005-11-25 |
| JP3631496B2 (ja) | 2005-03-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SI9620116A (sl) | Stimulatorni faktor dendritičnih celic | |
| US20060292166A1 (en) | Vaccine composition comprising Flt3-ligand | |
| CA2259140C (en) | Method of activating dendritic cells | |
| CA2087525C (en) | Adoptive immunotherapy with interleukin-7 | |
| US20090075886A1 (en) | Dendritic cell stimulatory factor | |
| US20020155108A1 (en) | Method for ex vivo loading of antigen presenting cells with antigen, and a vaccine comprising the loaded cells | |
| WO1998006422A1 (fr) | Agents de proliferation des cellules souches hematopoietiques | |
| US20030124091A1 (en) | Endothelial cell derived hematopoietic growth factor | |
| US20030077263A1 (en) | Method of activating dendritic cells | |
| AU702179B2 (en) | Extracorporeal cell culture and transplantation kits | |
| EP2591798A1 (en) | Vaccine for tumor immunotherapy | |
| EP2147682B1 (en) | Vaccination with immuno-isolated cells producing an immunomodulator | |
| US7150992B1 (en) | Methods of preparing dendritic cells with flt3-ligand and antigen | |
| MXPA98002464A (en) | Dendrit cellular stimulating factor |