RO116459B1 - Compozitie imunogena - Google Patents
Compozitie imunogena Download PDFInfo
- Publication number
- RO116459B1 RO116459B1 RO94-00094A RO9400094A RO116459B1 RO 116459 B1 RO116459 B1 RO 116459B1 RO 9400094 A RO9400094 A RO 9400094A RO 116459 B1 RO116459 B1 RO 116459B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- antigens
- antigen
- virus
- protein
- ova
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 102
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 136
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 136
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 130
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims abstract description 35
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 18
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 10
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims abstract description 8
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims abstract description 6
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims abstract description 5
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 claims abstract description 5
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims abstract description 4
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 108
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 80
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 18
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 17
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 12
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 11
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 10
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 9
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 claims description 9
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 6
- -1 oxy-1,2-ethanediyl Chemical group 0.000 claims description 5
- KMXFZRSJMDYPPG-UHFFFAOYSA-N tetratetracontane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC KMXFZRSJMDYPPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 claims description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims description 2
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 claims description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims 3
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 claims 1
- 108010069621 Epstein-Barr virus EBV-associated membrane antigen Proteins 0.000 claims 1
- 108010083021 Epstein-Barr virus glycoprotein 85 Proteins 0.000 claims 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 claims 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 claims 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 claims 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 claims 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 claims 1
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 abstract description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 71
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 65
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 36
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 34
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 32
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 29
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 28
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 28
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 25
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 25
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 23
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 23
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 22
- YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N squalene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N 0.000 description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 description 19
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 18
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 18
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 18
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 18
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 17
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 17
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 16
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 15
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 15
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 14
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 13
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 13
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 11
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 11
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 8
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 8
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 7
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 7
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 5
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 4
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 3
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 3
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N triacontane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 2
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 2
- 101000957351 Homo sapiens Myc-associated zinc finger protein Proteins 0.000 description 2
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 2
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 2
- 102100038750 Myc-associated zinc finger protein Human genes 0.000 description 2
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 2
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002359 Tetronic® Polymers 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- CBFCDTFDPHXCNY-UHFFFAOYSA-N icosane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC CBFCDTFDPHXCNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 2
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 2
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 2
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-[(1r)-1-hydroxyethyl]oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]([C@@H](C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N 0.000 description 1
- YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N (4R)-4-[[(2S,3R)-2-[acetyl-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-4-[(1R)-1-carboxyethoxy]-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-amino-5-oxopentanoic acid Chemical compound C(C)(=O)N([C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](CCC(=O)O)C(N)=O)C1[C@H](N)[C@@H](O[C@@H](C(=O)O)C)[C@H](O)[C@H](O1)CO YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N 0.000 description 1
- XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N (4as,6as,6br,8ar,9r,10s,12ar,12br,14bs)-10-hydroxy-2,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-9-[(sulfooxy)methyl]-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-icosahydropicene-4a-carboxylic acid Chemical compound C1C[C@H](O)[C@@](C)(COS(O)(=O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical class OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 210000005236 CD8+ effector T cell Anatomy 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 101710160621 Fusion glycoprotein F0 Proteins 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 1
- 108700020354 N-acetylmuramyl-threonyl-isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000306 component Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- BWHLPLXXIDYSNW-UHFFFAOYSA-N ketorolac tromethamine Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)C1CCN2C1=CC=C2C(=O)C1=CC=CC=C1 BWHLPLXXIDYSNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 201000006512 mast cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000006971 mastocytoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 description 1
- 229940055036 mycobacterium phlei Drugs 0.000 description 1
- YDLYQMBWCWFRAI-UHFFFAOYSA-N n-Hexatriacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC YDLYQMBWCWFRAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N sodium chromate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Cr]([O-])(=O)=O PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- WGRULTCAYDOGQK-UHFFFAOYSA-M sodium;sodium;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na].[Na+] WGRULTCAYDOGQK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940038774 squalene oil Drugs 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- OLTHARGIAFTREU-UHFFFAOYSA-N triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(C)CCCCCCCC OLTHARGIAFTREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001103—Receptors for growth factors
- A61K39/001106—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ErbB4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001148—Regulators of development
- A61K39/00115—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin
- A61K39/001151—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin p53
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001154—Enzymes
- A61K39/001164—GTPases, e.g. Ras or Rho
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001169—Tumor associated carbohydrates
- A61K39/00117—Mucins, e.g. MUC-1
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00118—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
- A61K39/001182—Carcinoembryonic antigen [CEA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00119—Melanoma antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/002—Protozoa antigens
- A61K39/015—Hemosporidia antigens, e.g. Plasmodium antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Prezenta inventie se refera la o compozitie imunogena, constituita dintr-un antigen ales dintre portiunile antigenice ale antigenelor HIV, antigenelor malariei, antigenelor de suprafata a virusului hepatitei B, antigenelor virusului influenza, antigenelor de suprafata ale virusului hepatitei A, antigenelor Herpes virusului, antigenelor virusului sincitial respirator, antigenelor virusului papiloma Herpes, antigenelor tumorale si o formulare care consta din doi dintre urmatorii componenti: detergent de stabilizare 0,05...0,5%, agent de formare a miceliului 0,001...10% si ulei biodegradabil si biocompatibil 1...10%, aceasta compozitie fiind formulata ca o emulsie stabila de tip ulei in apa.
Description
Invenția se referă la o compoziție imunogenă, utilizată pentru inducerea răspunsurilor imune, mediate de limfocitele T citotoxice atât la om, cât și la animalele domestice.
Din lucrarea luiTakahashi și colab. 85, “Proc.Natl.Acad.Sci. US 3105, 1988, este cunoscută utilizarea virusului vaccinia recombinant, care exprimă gena proteinei de anvelopă gp160 a HIV ca un instrument potențial pentru inducerea răspunsului limfocitelor T citotoxice.
Se crede că limfocitele T citotoxice (CTL) intră în mecanismul de apărare major al gazdei, atât ca răspuns imun la o varietate de infecții virale, cât și în cazul dezvoltării neoplazice și canceroase. Aceste celule elimină celulele infectate sau transformate, prin identificarea fragmentelor antigenice în asociere cu diferite molecule (denumite molecule MHC din clasa I) de pe celulele infectate sau celulele transformate. Limfocitele T citotoxice pot fi induse experimental prin încărcarea citoplasmatică a unor anumiți antigeni solubili, în celule specifice. Imunizarea numai cu antigenul solubil este în general insuficientă pentru inducerea specifică a limfocitelor T citotoxice. O metodă prin care răspunsul limfocitelor T citotoxice poate fi indus, cuprinde utilizarea tehnicilor de inginerie recombinantă pentru încorporarea componentelor critice ale unui antigen în genomul unui agent infecțios benign. Scopul unei astfel de strategii este acela de a genera răspunsuri ale limfocitelor T citotoxice, specifice antigenului, la epitopul dorit, prin supunerea organismului gazdă la o infecție ușoară, cu autolimitare. Vectorii himerici au fost descriși utilizând vaccinuri pentru virusuri ca polio, adeno- și retrovirusuri, ca și bacterii ca, de exemplu, Listeria și BCG.
O a doua metodă, prin care un răspuns mediat de celule poate fi indus, cuprinde utilizarea adjuvanților. Deoarece în acest domeniu se pare că există foarte multe discuții privitoare la utilizarea adjuvanților, nu s-a clarificat încă dacă imunitatea mediată de celule este indusă și dacă o astfel de imunitate mediată de celule include un răspuns al limfocitelor T citotoxice. Din articolul lui Stover și colab., publicat în revista Nature 351, 456, 1991 (care nu se admite ca prioritate față de prezenta invenție), este, de asemenea, cunoscut un răspuns al limfocitelor T citotoxice la βgalactozidază, care utilizează BCG recombinant conținând gena de β-galactozidază. Nici un astfel de răspuns nu este detectat utilizând un adjuvant Freund incomplet și β-galactozidaza.
De asemenea, din articolul lui Mitchell și colab., publicat în revista J.CIinical Oncology 8, 856, 1990 (care nu se admite ca prioritate față de prezenta invenție), este cunoscut tratamentul pacienților cu melanom în metastază, cu un adjuvant denumit “DETOX” și lizate alogenice de melanom administrate de cinci ori, o perioadă de șase săptămâni. La o mică parte dintre pacienți s-a observat o creștere a celulelor T citotoxice. Autorii descriu necesitatea de a se crește nivelul de producere a limfocitelor T citotoxice și sugerează o terapie combinată a adjuvantului cu interleukina2, ca și un pretratament cu ciclofosfamidă, pentru diminuarea nivelului celulelor T supresoare, specifice tumorii, care ar mai putea exista. DETOX include endotoxina d/*etoxificată (monofosforil lipidul A) din Salmonella minnesota, scheletul pereților celulari de Mycobacterium phlei, uleiul de squalen și emulgatorul.
în revista Immunology Today 11, 427, 1990 (care nu se admite ca prioritate față de prezenta invenție), Allison și Gregoriadis notează că singurul adjuvant autorizat pentru utilizare” la vaccinurile umane este reprezentat de sărurile de aluminiu (alum)
RO 116459 Bl care nu elicitează consistent imunitatea mediată celular. Allison și Gregoriadis precizează că “există astfel o necesitate de a dezvolta adjuvanți cu eficacitatea adjuvantului Freund complet, dar fără variatele efecte secundare ale acestuia, cum ar fi, de exemplu, granuloamele. Autorii stabilesc în continuare că există trei strategii posi- 50 bile, ca, de exemplu, utilizarea lipozomilor, utilizarea adjuvanților denumiți complexe de imunostimulare (ISCOMs, care includ saponinele sau Quil A (un triterpenoid cu două catene de carbohidrați), colesterolul și fosfatidil colina) care sunt compuși autorizați pentru utilizarea în vaccinurile antigripale pentru cai (Morein și colab., “Imunological Adjuvants and Vaccines, Plenum Press, 153) și utilizarea unei emulsii (SAF) a 55 squalenului sau Squalenului (cu sau fără un agent Pluronic) și a muramil dipeptidei (MDP). SAF are deci rolul de a elicita imunitatea mediată de celule la șoarece, deși “s-a considerat mult timp că antigenii subunitari nu pot elicita răspunsurile celulelor T citotoxice (CTL) prin utilizarea ISCOMs conținând proteine HIV, iar aceste vaccinuri pe bază de ISCOMs pot găsi ținta și pot să inducă atât a răspunsul CTL, cât și pe cel 6 o al anticorpilor, printr-o proteină purificată.
în Vaccines 5, 223, 1987, Byars și Allison descriu utilizarea unui SAF-1, care include TWEEN 80, Pluronic L121 și squalen sau Squalen, cu sau fără muramil dipeptidă, și sugerează că datele lor arată că formula cu muramil dipeptidă va fi utilă pentru vaccinurile umane și pentru vaccinurile veterinare. Cercetările experimentale 65 cu adjuvanți prevăd produsul fără muramil dipeptidă. Muramil dipeptidă are rolul de a crește semnificativ producția de anticorpi față de utilizarea adjuvantului fără muramil dipeptidă. Imunitatea mediată celular este măsurată ca hipersensibilitate de tip întârziat, prin testele realizate pe piele, pentru a se determina inducerea răspunsului celulelor T helper. O astfel de hipersensibilitate este mai puternică și mult mai susți- 70 nută când muramil dipeptidă este prevăzută pentru a face parte din adjuvant. Adjuvanți similari sunt descriși de către Allison și colab., US 4770874 (unde aceștia precizează că, combinația de muramil dipeptidă și poliol P este esențială pentru elicitarea unui răspuns puternic mediat de celule și a unui răspuns umoral, față de albumina din ou); Allison și colab., în US 4772446; Murphy, Corb și colab., în 75
Science 246, 1293, 1989 (unde se stabilește că utilizarea adjuvanților combinați cu muramil dipeptidă ar putea crește inducerea atât a componentei umorale, cât și a componentei celulare a răspunsului imunitar); Allison și Byars, în Vaccines 87, 56, 1987, (unde se stabilește că imunitatea mediată de celule este elicitată de SAF (cu muramil dipeptidă) așa cum este arătat prin hipersensibilitate de tip întârziat, prin 8o răspunsuri de proliferare a celulelor T față de antigen, prin producerea de interleukină2 și prin liză restricționată genetic, specifică celulelor țintă care poartă antigenul de imunizare); Allison și Byars, în Immunopharmacology of Infectious Diseases: Vaccine Adjuvants and Modulators of Non-specific Resistance 191-201,1987; Morgan și colab., J. Medical Virology29, 74, 1989; Kenney și colab., J.lmmunologicalMethods 85 121, 157, 1989; Allison și Byars, J. Immunological Methods 95, 157,1986 (unde se arată că sărurile de aluminiu și emulsiile de uleiuri minerale cresc formarea de anticorpi, dar nu și imunitatea mediată de celule, iar formulele de muramil dipeptidă elicitează imunitatea mediată de celule); Byars și colab., Vaccine 8, 49, 1990 (nu se admite ca prioritate față de prezenta descriere, unde se precizează că formula lor cu 90 adjuvant crește marcant răspunsurile umorale și într-o măsură mai mică cresc reacțiile mediate celular față de antigenul hemaglutinină din virusul gripal (“influenzae
RO 116459 Bl haemagglutinin”); Allison și Byars, Molecular Immunology 28, 279, 1991, (nu se admite că are prioritate față de prezenta descriere) care precizează că funcția muramil dipeptidei este de a induce exprimarea citokinelor și creșterea exprimării majore a genelor de histocompatibilitate (MHC), că s-au obținut răspunsuri de anticorpi și celulare mai bune decât cu alți adjuvanți, și că se speră să existe o asigurare că strategii similare sunt eficiente la om); Allison și Byars, Technology Advances in Vaccine Development 401, 1988, (care descrie imunitatea mediată celular după folosirea SAF); Epstein și colab., Advance Drug Delivery Reviews 4, 223, 1990 (care oferă o trecere în revistă a variaților adjuvanți folosiți în prepararea vaccinurilor); Allison și Byars, J.lmmunological Methods 95, 157, 1986 (care stabilesc că adăugarea de muramil dipeptidă la adjuvant crește marcant răspunsurile mediate celular la o varietate de antigeni, incluzând imonoglobulinele monoclonale și antigenii virusurilor); și Morgan și colab., J. Medical Virulogy 29, 74, 1989 (care descriu utilizarea SAF-1 pentru prepararea vaccinului pentru virusul Epstein-Barr).
Kwak și colab., în Idiotype Networks in Biology and Medicine, Elsevier Science Publishers, p.163, 1990 (nu se admite ca având prioritate față de prezenta descriere), menționează utilizarea SAF fără muramil dipetidă ca un adjuvant pentru un idiotip de limfom cu celule B la om. în mod specific, o emulsie de P L121, Squalen și 0,4% TWEEN-8O în ser fiziologic tamponat cu fosfat se administrează cu acest idiotip. Autorii precizează că “adiția adjuvantului ar duce la creșterea suplimentară a răspunsurilor umorale și ar putea, de asemenea, facilita inducerea de răspunsuri celulare”.
Alte preparate imunologice includ lipozomii, Allison și colab., US 4053585 și 4117113, peptidele ciclice (Dressman și colab., US 4778785); adjuvantul Freund complet (Asherson și colab., Immunology 22, 465,1972; Berman și colab., Internațional J.Cancer 2, 539, 1967; Allison, Immunopotentiation 18, 73, 1973; și Allison, Non-Specific Factors Influencing Host Resistance 247, 1973); complexele ISCOM (Letvin și colab., Vaccines 87, 209, 1987); adjuvanții care conțin agenți polimerici de blocare neionică formați cu un ulei mineral, un agent activ de suprafață și TWEEN 80 (Hunter și Bennet, J. Immunology 133, 3167, 1984; și Hunter și colab., J.Immunology 127, 1244, 1981); adjuvanții compuși din ulei mineral și un agent de emulsionare cu sau fără microbacterii omorâte (Sanchez-Pescador și colab., J.Immunology 141, 1720, 1988) și alți adjuvanți cum ar fi, de exemplu, derivatul lipofilic de muramil tripeptidă și muramil dipeptidă covalent conjugate la proteina recombinantă (id.).
Problema pe care o rezolvă invenția constă într-o compoziție imunogenă care se administrează pacienților infectați cu virusuri ale căror antigene sunt prezente în compoziție.
Compoziția imunogenă, conform invenției, este constituită dintr-un antigen ales dintre porțiunile antigenice ale antigenilor HIV, antigenilor malariei, antigenilor de suprafață ai virusului Hepatitei B, antigenilor Herpes virusului, antigenilor virusului influenza, antigenilor de suprafață ai virusului Hepatitei A, antigenilor virusului sineitial respirator, antigenilor virusului papiloma herpes, antigenilor tumorali, și o formulare microfluidizată de antigen care constă din doi din următorii componenți:
- detergent de stabilizare 0,05. 0,5%;
- agent de formare a miceliului 0,001 ...10%;
RO 116459 Bl
140
- ulei biodegradabil și biocompatibil 1. 10%, această formulare microfluidizată de antigen fiind formulată ca o emulsie stabilă de ulei în apă.
Prin aplicarea invenției se obțin următoarele avantaje:
- metodologia de obținere a compoziției este simplă;
- nu sunt toxice pentru organism.
Prin această descriere se prezintă o metodă sigură și avantajoasă, precum și compozițiile prin care răspunsurile CTL pot fi induse la om și la animale domestice, în special cele utilizate în agricultură. Metoda cuprinde utilizarea unei formule de antigen care are o toxicitate slabă sau este total netoxic față de animale, și din care lipsesc peptide de imunostimulare (de exemplu muramil dipeptida); prin prezența acestora scade răspunsul celular dorit. în plus, metodologia este simplu de utilizat și nu necesită un lucru extensiv -in vitro- pentru a modifica celulele existente prin tehnici ADN recombinant, pentru a le face imunogene. Această descoperire este surprinzătoare, deoarece nu era de așteptat ca un astfel de răspuns CTL să poată fi indus prin utilizarea unor astfel de compoziții de antigen, cărora le lipsesc peptide de imunostimulare sau echivalenții acestora. Descoperirile autorilor permit utilizarea acestor compoziții de antigen într-o gamă largă a bolilor menționate sau ca agenți profilactici. De exemplu, această administrare a compoziției de antigen poate fi utilizată în tratamentul bolilor virale în care răspunsul CTL este important, de exemplu, în tratamentul infecției cu HIV sau în cazul gripei (infecția cu virusul influenza]; această utilizare se poate, de asemenea, extinde, în tratamentul infecțiilor bacteriene, al cancerului, al infecțiilor parazitare, și altele asemenea. Ca agent de profilaxie, compoziția de antigen cu un antigen convenabil este utilă pentru prevenirea infecției cu virusuri responsabile de infecțiile virale, menționate mai sus, în special în profilaxia infecțiilor cu HIV și, de asemenea, pentru profilaxia pacienților cu risc de îmbolnăvire de cancer, de exemplu, după rezecția unei tumori primare. Problema pe care o rezolvă invenția este o compoziție imunogenă pentru inducerea răspunsurilor imune mediate de limfocitele T citotoxice la om și animale domestice.
Astfel, se face referire la o metodă pentru inducerea unui răspuns CTL la om sau la animale domestice (ca, de exemplu, pisici sau câini) și pentru animale importante din agricultură (ca, de exemplu, calul, vaca sau porcul), la un antigen diferit de antigenul limfomului cu celule B sau albumina din ou. Metoda include etapele de furnizare a antigenului față de care răspunsul CTL este dorit și furnizarea unei compoziții antigenice netoxice, care cuprinde, în esență, un detergent de stabilizare, un agent de formare a miceliului și un ulei biodegradabil și biocompatibil. Această formulare de antigen este, de preferință, lipsită de orice component peptidic de imunostimulare sau are nivele suficient de scăzute dintr-un astfel de component care nu scade răspunsul celular dorit. Această compoziție de antigen este, de preferință, ca o emulsie stabilă, de tipul ulei în apă. Aceasta înseamnă că fiecare dintre componente este astfel aleasă, încât amestecul să rămână în stare de emulsie pe o perioadă de cel puțin o lună și, preferabil, pentru o perioadă de peste un an, fără separarea fazelor. în această metodă, compoziția de antigen și antigenul se amestecă la un loc, pentru a forma un amestec (de preferință prin microfluidizare), și acest amestec este administrat la un animal într-o cantitate suficientă pentru a induce răspunsul CTL. □ astfel de administrare este necesară numai o singură dată.
145
150
155
160
165
170
175
180
RO 116459 Bl
Prin “detergent de stabilizare se înțelege un detergent care permite componentelor din emulsie să rămână sub formă de emulsie stabilă. Astfel, detergenții includ, de exemplu, polisorbatul, TWEEN 80 (sorbitan-mono-9-octadecenoat-poli(oxi1,2-etandiil); fabricat de către I.C.I. Americas, Wilmington, DE), TWEEN 40, TWEEN 20, TWEEN 60, Zwittergent 3-12, TEEPOL HB7 și SPÂN 85. Acești detergenți sunt furnizați de obicei într-o cantitate de aproximativ 0,05 până la 0,5%, de preferință aproximativ 0,2%.
Prin “agent de formare a miceliului” se înțelege un agent care este capabil să stabilizeze emulsia formată cu celelalte componente astfel, încât să se formeze o structură miceliu-like. Astfel de agenți produc, de preferință, o oarecare iritare la locul de injectare, în scopul grupării celulelor macrofage pentru a se crește răspunsul celular. Exemplele de astfel de agenți includ surfactanții polimerici descriși în publicațiile BASF Wyandotte, de exemplu Schmolka, J.Am.Oii.Chem.Soc. 54, 110, 1997; și Hunter și colab., J.lmmunol. 129, 1244, 1981, ambele fiind încorporate ca referințe, P L62LF, L101, L64, L121, PEG1000 și TETRONIC 1501, 150R1, 701, 901, 1301, și 130R1. Structurile chimice ale acestor agenți sunt bine cunoscute în literatura de specialitate. De preferință, agentul este ales astfel, încât balanța hidrofilă-lipofilă (HLB) să fie cuprinsă între O și 2, așa cum a fost definită de către Hunter și Bennett, 133 Journal of Immunology 3167, 1984. Agentul este, de preferință, furnizat într-o cantitate cuprinsă între 0,001 și 10%, mult mai preferabil într-o cantitate cuprinsă între 0,001 și 5%.
Uleiul este ales pentru a fi promotor al retenției antigenului în emulsia de tipul ulei în apă, adică pentru a furniza purtătorul pentru antigenul dorit și, de preferință, are o temperatură de topire mai mică de 60°C, astfel ca emulsia să se formeze fie la temperatura camerei (circa 20°C până la 25°C), fie o dată ce temperatura emulsiei este coborâtă până la temperatura camerei. Exemple de astfel de uleiuri includ squalenul, Squalenul, eicosanul, tetratetracontanul, glicerolul și uleiul de arahide sau alte uleiuri vegetale. Uleiul este, de preferință, prevăzut într-o cantitate cuprinsă între 1 și 10%, mult mai preferabil între 2,5 și 5%. Este important ca uleiul să fie biodegradabil și biocompatibil, astfel ca organismul să poată asimila uleiul în timp și să nu apară nici un efect advers, ca, de exemplu, granuloamele, după utilizarea uleiului.
Este, de asemenea, important ca în formularea de mai sus să lipsească o componentă peptidică, în special o muramil dipeptidă (MDP). O astfel de peptidă va interfera cu inducerea unui răspuns CTL, dacă aceasta este prevăzută într-o cantitate mai mare de aproximativ 20 pg per formulare administrată la un om normal. Se preferă ca astfel de peptide să fie complet absente din compoziția de antigen, în ciuda stimulării aparente a compartimentului umoral al sistemului imunitar. Așadar, autorii au descoperit că, deși astfel de peptide pot crește răspunsul umoral, acestea sunt dezavantajoase atunci când se dorește un răspuns limfocitar T citotoxic.
Conform unor alte aspecte, compoziția antigenică este formată din numai două dintre cele trei componente de mai sus și utilizată cu orice antigen dorit (termen care include proteine, polipeptide, și fragmentele acestora care sunt imunogenice), cu excepția albuminei de ou (sau a altor albumine, cum ar fi HSA, BSA și ovalbumina), pentru a induce răspunsul CTL la oameni și la animalele menționate mai sus.
RO 116459 Bl
230
Autorii cred că compozițiile de mai sus sunt semnificativ mai avantajoase față de compozițiile precedente (incluzând complexele ISCOM, DETOX și SAF), pentru utilizare la oameni. în afară de astfel de compoziții, cea de față include un agent formator de miceliu și nu conține peptide, schelete de pereți celulari sau alte componente celulare bacteriene. Prezenta compoziție induce, de asemenea, un răspuns celular care, fie că nu se produce cu formulările mai vechi, fie că este semnificativ crescut comparativ cu acele formulări.
Prin “netoxic” se înțelege că nu s-a observat nici un efect secundar, sau doar un efect secundar foarte slab, la compoziția de antigen, în cazul tratamentului la om sau la animal. Persoanele cu specializare medicală sau veterinară vor recunoaște că acest termen are o semnificație largă. De exemplu, în cazul unui om sau al unui animal sănătos, poate fi tolerată numai o toxicitate foarte slabă, în timp ce la un om suferind de o boală terminală (cu o speranță de viață mai mică de trei ani), poate fi tolerată o toxicitate mult mai substanțială.
în cadrul prezentărilor preferate, compoziția de antigen constă în esență din doi sau trei componenți, detergent, agent și ulei; metoda constă în esență dintr-o singură administrare a amestecului (antigen plus formulare de antigen) la om sau la animal; omul sau animalul este infectat cu un virus și prezintă unul sau mai multe simptoame (care sunt în general definite de medici într-un domeniu relevant) ale infecției cu un virus; compoziția de antigen este netoxică la om sau la animal.
Conform unor alte prezentări preferate, antigenul este ales dintre porțiuni antigenice ale: antigenilor HIV: gp 160, gag, pol, Nef, Tat și Rev; antigenii malariei: proteina CS și proteina 2 de suprafață a Sporozoidului; antigenii de suprafață ai virusului Hepatitei B: Pre-S1, Pre-S2, HBc Ag și HBe Ag; antigenii virusul influenza (virusul gripal): HA, NP și NA; antigenii de suprafață ai virusului Hepatitei A; antigeni ai Herpes virusului: gp340 a EBV, gp85 a EBV, gB a HSV, gD a HSV, gH a HSV, produsul proteină timpurie a HSV, gB de citomegalovirus, gH de citomegalovirus și IE proteina gP72; antigenii virusului sincitial respirator: proteina F, proteina G și proteina N; și antigenii tumorali CEA de carcinom, mucina asociată carcinomului, P21 de carcinom, P53 de carcinom, MPG de melanom, p97 de melanom și produsul oncogenei Neu de carcinom, produsul genei carcimomului p53, antigenul melanomului numit MAGE și proteina ras p21 cu mutație, prezente într-o varietate de tumori maligne.
Conform aspectului relatat, compoziția din prezenta invenție constă, în esență, dintr-un antigen în amestec cu o formulare, pentru acesta, descrisă mai înainte, și antigenul se alege dintre porțiunile antigenice descrise mai sus. Conform altor aspecte menționate, prezenta invenție caracterizează metode de tratare a unui pacient infectat cu virusul HIV, suferind de malarie, de gripă, de hepatită, de cancer, infectat cu virusul Herpes sau infectat cu virusul sincitial respirator, prin administrarea unei compoziții care include un antigen corespunzător (de exemplu, dintre substanțele menționate mai înainte) amestecat cu una sau mai multe compoziții de antigen, descrise mai înainte.
Alte caracteristici și avantaje ale prezentei invenții se vor vedea în prezenta descriere, în prezentările preferate ale invenției și în revendicările acesteia.
Compoziția de antigen utilizată in prezenta descriere de invenție este în general descrisă mai înainte.
235
240
245
250
255
260
265
270
RO 116459 Bl
Cei specializați în domeniu vor recunoaște că formulări echivalente sunt rapid preparate și acestea pot avea proprietăți echivalente în inducerea răspunsului CTL. Astfel de componente sunt rapid testate pentru proprietățile lor, utilizându-se tehnici echivalente cu cele descrise în exemplele care urmează.
Vor urma exemple ale invenției cu utilizarea compoziției de antigen (AF) compusă din aproximativ 15% Squalen (0,6 % TWEEN 80) și (0,0045 - 3,75 % Pluronic) în ser fiziologic tamponat cu fosfat (Imed STP). în mod specific, o emulsie de AF include: 150 mg Squalen, 0,045-37,5 mg poloxamer 401 (Pluronic L 121 ), 6 mg de polisorbat 80 (TWEEN 80), 0,184 mg de clorură de potasiu, 0,552 mg de fosfat monobazic de potasiu, 7,36 mg de clorură de sodiu, 3,3 mg de fosfat de sodiu bibazic (anhidru], per 1 ml de apă, la pH 7,4. Această emulsie este microfluidizată utilizandu-se o tehnică standard (Model microfluidic M11OF) cu un modul de presiune de întoarcere la 11-14000 psi cu un retur gradat la presiunea atmosferică, cu răcire și împachetare în gheață umedă.
în alte exemple, antigenul este amestecat cu Squalen microfluidizat (S), Pluronic (P) și TWEEN 80 (T) în amestec pentru a se obține o concentrație finală de 5% Squalen, 0,2 % TWEEN 80 și 0,0015-1,25% Pluronic respectiv. Pentru determinarea subcomponentelor necesare pentru inducția răspunsului imunitar specific antigenului, se prepară Squalen - Tween 80, Pluronic - Tween 80 sau Squalen - Pluronic în aceleași concentrații ca și pentru amestecul cu trei componente. Pul, Squalenul sau TWEEN-ul 80 se prepară, de asemenea, individual pentru a se determina efectul unui component individual privind inducția CTL. Substituțiile de Tween 40 sau TWEEN 20 sau Zwittergent în loc de Tween 80 au fost efectuate, de asemenea, pentru determinarea efectului diferiților derivați de TWEEN privind inducția CTL în sistemul ova. Substituțiile de Squalen în formularea cu trei componente sunt efectuate cu Eicosane sau Triacontane și substituirea copolimerului Pluronic în aceeași formulă cu trei componente se efectuează cu PEG 1000, pleuronic L 62 LF, și Tetronics 1501 și 150 R1. Ca formule cu două componente, diferiți analogi în diferite combinații sunt amestecați și testați pentru inducerea răspunsului CTL specifică ova. Aceștia se amestecă sub forma de Colesterol -TWEEN 80, Squalen -TWEEN 20, Pristan TWEEN 80 sau ulei de măsline - TWEEN 80. Pentru un studiu de stabilitate, amestecul microfluidizat de Squalen - TWEEN 80 este amestecat cu dextroză până ce se obține o concentrație finală de 5%. în toate cazurile, combinațiile de excipienți sunt amestecate într-un microfluidizor, pentru a se forma o emulsie stabilă. în unele experimente, formulările cu două componente sunt amestecate cu diferite concentrații de MDP pentru inducerea răspunsurilor CTL și cel umoral. Tabelul 1 descrie o listă care cuprinde diferitele formule utilizate în acest studiu.
Tabelul 1
Efectul diferitelor substituiri în sistemele cu trei sau două componente
| Substituirea în formule cu trei componente | Experimentul nr. 1 | Experimentul nr. 2 -*· |
| STP | 88 | 10 |
| Tween 40 (T) | 66 | - |
| Tween 20 (T) | 48 | - |
RO 116459 Bl
325
Tabelul 1 (continuare)
| Substituirea în formule cu trei componente | Experimentul nr. 1 | Experimentul nr. 2 |
| T 1501 (P) | 39 | - |
| T150R1 (P) | 30 | - |
| P L62 LF (P) | 47 | - |
| Elicosane (S | - | 41 |
| PEG 1OOO (P) | - | 24 |
| Tricontane (S) | - | 30 |
| Zwittergent (T) | - | O |
| SUBSTITUIREA ÎN FORMULE CU DOUĂ COMPONENTE | ||
| ST | 82 | 44 |
| PT | 77 | |
| ST | 89 | |
| Colesterol (S)+Tween 80 | 38 | |
| Squalen +Tween 20 (T) | 65 | |
| Pristane (S)+Tween 80 | 60 | |
| Ulei de măsline(S)+ Tween 80 | 69 | |
| COMPOZIȚIE CU UN SINGUR ELEMENT | ||
| PL121 | O | - |
| Squalen | O | - |
| Tween 80 squalen+ | O | |
| Tween 80 + 5% dextroză | 86 | - |
330
335
340
345
350
Compoziția de adjuvant syntex este utilizată (microfluidizat; SAFm) ca adjuvant de control și constă din două părți. Partea I constă din ser fiziologic tamponat cu fosfat, care conține o concentrație finală de 5% Squalen, 1,25% P și 0,2%TWEEN 80 (vehicolul sau l-SAF). Partea a ll-a constă din N-acetilmuramil-L-treonil-D-izoglutamina (Thr-MDP), un derivat al componentei peretelui celular al micobacteriei.
în scopul imunizării, antigenul este amestecat cu un vehicul microfluidizat (partea I) pentru a obține o emulsie omogenă. Se adaugă MDP pentru a forma SAFm și se agită puțin. Concentrația de MDP în amestec este variată pentru a determina dacă există o concentrație optimă pentru inducerea răspunsului CTL. Ca adjuvant de control, sunt imunizați, de asemenea, șoareci cu antigeni solubili în amestec cu alum conform manualului de preparare (Pierce chemical, Rockford, IL) sau cu adjuvantul complet Freund (CFA).
355
360
RO 116459 Bl
Compoziția antigenică STP este utilizată pentru inducția răspunsurilor limfocitelor T citotoxice la șoareci. Specialiștii în domeniu vor recunoaște că un astfel de model, aplicat la șoarece, indică faptul că experimente echivalente vor induce în mod similar răspunsurile limfocitelor T citotoxice la oameni, la animale domestice sau la animale utilizate în agricultură. Cantitatea de antigen, ca și antigenul utilizat pentru producerea răspunsului celular dorit, poate fi determinată empiric, prin procedee standard, bine cunoscute în literatura de specialitate, fără a avea loc experimentări necorespunzătoare. Astfel, dacă se dorește minimalizarea efectelor secundare de tratament cu un astfel de amestec, cei specializați în domeniu pot determina nivelul minim dintr-un astfel de amestec, pentru administrare la om, la animale domestice sau la animale utilizate în agricultură, în vederea elicitării răspunsului CTL și prin aceasta inducerea imunizării la un antigen dorit. în utilizarea normală, un astfel de amestec va fi injectat prin unul dintr-un număr de procedee standard, dar se preferă în special injectarea intramusculară într-un loc care va permite ca emulsia care este lăsată să rămână în formă stabilă o perioadă de câteva zile sau săptămâni.
Celulele tumorale și transfectanțir. celulele tumorale utilizate au fost liniile la EL4 (C57BL/4, H-2b timom) și P815 (DBA/2, H-2d mastocitom). Derivația transfectantului EL4 care produce ova, EG7-ova, este descrisă mai înainte de către Moore și colab., în Cell54, 777, 1988. Transfectantul care produce β-gal, P 13.1 este derivat prin electroporarea a 1O7 P815 în 1 ml de soluție salină de fosfat tamponat (PBS) cu 10 mg de pCH110 linearizat Pstl (Pharmacia LKB Biotechnology, Inc. Piscataway, NJ) și 1 mg de neo pSV2 linearizat Pvul (Southern și colab., J.Mol.Genet. 1, 327, 1982] urmat de selecția în 400 pg/ml de antibiotic G418. Transfectantul C3-4 este derivat de la BALB/c hybridoma Igm 662 prin transfectarea cu o plasmidă care codifică gena β-gal fuzionată la al treilea și al patrulea exon al lanțului greu al IgM (Rammensee și colab., Immunigenetics 30, 296, 1989). Exprimarea gp160lllb de către fibroblast 3T3, 15-12, a fost prevăzută de către Dr. Germain de la NIH (Bethesda, MD). Linia celulară L transfectată Kb este prevăzută de Dr.Carbone, Monash University, Australia. Liniile celulare L transfectate Dd și Ld sunt prevăzute de către Dr. Ted Hensen, Washington University, St. Louis.
Imunizarea: șoarecii sunt imunizați intravenos, cu o suspensie de 200 pl de 25x10® splenocite, după o încărcare citoplasmatică, așa cum este descrisă de către Moore și colab., în publicațiile de mai sus și de Carbone și colab., în J.Exp.Med. 169: 603, 1989. Pentru compoziția antigen-ova sau compoziția antigen^-gal, pentru imunizare, 30 pg din fiecare antigen proteinic, sunt injectate fiecărui șoarece, în labă sau la baza cozii, subcutanat. Fiecare injectare care constă din 67 pl din formularea de antigen microfluidizat, (care se efectuează după procedeele standard) și 30 de pg de antigen proteinic într-un volum final de 20 pl. Volumul final este completat cu HBSS, vezi Whittaker manual (Welkersville, MD). MDP este furnizat în concentrații cuprinse între O și 300 pg. Așa cum este stabilit, șoarecii sunt imunizați cu antigeni solubili în CFA sau în alum, într-un volum total de 200 ml.
în continuare se prezintă 13 exemple de realizare a invenției, în legătură-cu fig.1A...10B, care reprezintă:
- fig. 1A...1C, grafice cu prezentarea datelor de comparație a inducerii răspunsului CTL prin diferite formule cu ovalbumină; E:T reprezintă raportul efector/țintă în toate figurile;
RO 116459 Bl
410
- fig.2A și 2B, reprezentări grafice ale datelor de comparație a inducerii răspunsului CTL prin diferite formule de β-galactozidaze;
- fig. 3, o reprezentare grafică a datelor de comparație în inducerea răspunsului CTL prin ovalbunină într-un lipozom și o formulă de antigen;
- fig. 4 și 5, reprezentări grafice ale datelor care reprezintă efectul depleției celulelor CD4 și CD8 în inducția CTL;
- fig. 6, o reprezentare grafică a datelor care arată o inducție CTL prin amestecul de P, TWEEN și antigen;
- fig. 7, o reprezentare a datelor care arată inducerea răspunsului CTL cu un amestec de Squalen, Tween și un antigen;
- fig. 8, o reprezentare grafică a datelor care arată inducerea răspunsului CTL printr-un amestec de Squalen, P și antigen;
-fig. 9, o reprezentare grafică a inducerii răspunsului anticorpilor anti-gp 120111b la maimuțele imunizate cu diferite compoziții de antigen și
-fig. 10A...10B, reprezentări grafice ale datelor de comparație a răspunsurilor CTL specifice gp120 la maimuțele imunizate cu gp12Ovaccinia și gp120-AF.
Exemplul 1. Stimularea in vitro a populației efectoare
Celulele splenice (30x106) de la șoareci normali sau imunizați sunt preparate cu cel puțin 14 zile mai înainte sunt incubate cu 1,5x106 EG7-ova (iradiate cu 20000 razi) pentru răspunsurile ova sau 1,5x1ο6 celule C3-4 (iradiate cu 20000 razi) pentru răspunsul β-gal în plăci cu 24 cavități la temperatura de 37°C într-un amestec de bioxid de carbon și aer în proporție de 7%. Toate culturile de țesuturi sunt pregătite într-un mediu complet, care constă din mediul IMDM, vezi Whittaker Manual (Welkersville, MD), suplimentat cu ser fetal de vițel de concentrație 10% (FCS), 2 mM glutamină, gentamicină și 2χ10·5Μ 2-mercaptoetanol. Pentru experimentele de sîngerare, în vitro, celulele splenice stimulate în vitro sau preparate in vivo, sunt tratate cu anticorpi monoclonali (mAbs) RL.172 (anti-CD4) sau mAbs 3168 (anti-CD8), pentru îndepărtarea celulelor T CD4+ sau a celulelor T CD8+ (Sarmiento et al., J.lmmunol. 125, 2665, 1980 și Ceredig și colab., Nature314, 98, 1985). Compușii mAb RL.172 și mAb 3168 sunt obținuți de către Dr. Jonathan Sperent la Scripps Clinic și Foundation Reserch, La Jolla, CA.
Celule splenice (30x106) de la șoareci normali sau de la șoareci imunizați au fost preparate cu cel puțin 21 de zile mai înainte și acestea sunt incubate cu 1,5x1ο6 celule 15-12 (tratate cu 200 pg de mitomicină C timp de 45 min per 108 celule) sau cu 500 pg de peptide 18lllb care conțin epitopul CTL dominant la șoareci Balb/c întrun mediu complet IMDM (Irvine Scientific., Santa Ana, CA), care conține FCS 10%, preexanimat (ICN Flow; ICN Biochemicals, Inc. Costa Mesa, CA), 2mM glutamină, gentamicină și 2x1ο-5 M 2-mercaptoetanol. Pentru stimulare in vitro cu peptide, celulele splenice sunt cultivate în IMDM care conține 5% ConA supernatant. Pentru experiențele de sângerare, celulele splenice sunt preparate in vivo sau stimulate in vitro, fiind tratate astfel cu mAbs RL.172 sau mAbs 3168 (anti-CD8) în prezenta unui complement de iepure cu toxicitate scăzută (Cederlane Laboratories, Ltd, Hornby □ntario Canada), pentru îndepărtarea celulelor T CD4+ sau CD8+ (22, 23). Compușii mAb RL.172 și mAb 3168 reprezintă o donație de la Dr. Joathan Sprent de la Scirpps Clinic and Reseach Foundation, La Jolla, CA.
415
420
425
430
435
440
445
450
RO 116459 Bl
Analize de citotoxicitate: Celulele luate în lucru (1x106), sunt marcate cu 100 pCi(51Cr) cromat de sodiu timp de 60 min. Pentru țintele peptidice pulsate, se adaugă 50 pl de soluție cu 1 mg/ml de soluție de peptidă în HBSS, în timpul marcării acestor celule cu 51Cr. După spălare, 104 din țintele marcate și celulele efectoare în serii de diluții, sunt incubate în 800 μΙ de RP1O pentru 4 h la temperatura de 37°C. 0 cantitate de 100 μΙ de supernatant se colecționeză și liza specifică a acestora este determinată astfel: Uza specifică procentuală =100x ((eliberarea prin CTL - eliberarea spontană) / (eliberarea maximă - eliberarea spontană)). Elibararea spontană în absența limfocitelor T citotoxice (CTL) este mai mică de 25% din eliberarea maximă prin detergent, în toate experimentele.
Determinarea răspunsurilor anticorpului la șoareci și maimuțe.
Fiecare cavitate din plăcile cu fund în formă de U care au 96 de cavități (Costar, Cambridge, MA) este acoperită cu 150 ng de ova sau gp120 în 50 μΙ de HBSS și se incubează până a doua zi la temperatura de 4°C. Pentru determinarea răspunsurilor anticorpilor anti-ova și anti-gp120 la șoareci, plăcile sunt blocate cu 1% BSA timp de 1 h. Seruri diluate seriat se adaugă în volume de 25 ml de cavitate și se incubează timp de 2 h. Plăcile sunt apoi spălate și apoi 1 μΙ din preparatul IgG antișoarece de capră în diluție de 1:1000, conjugate la HRPO (SBT, Alabama) în 1 % BSA se adaugă la fiecare cavitate din placă. După 1 h din incubație, plăcile sunt spălate, după care se adaugă la fiecare cavitate din placă, câte 100 μΙ de substrat. Valoarea 0D4O5 este luată după 10 până la 15 min. Pentru determinarea răspunsului anticorpului de maimuță anti-gp 120, toate fazele sunt aceleași, cu excepția blocării plăcilor și diluției serurilor, care sunt realizate cu ser normal de capră 5% în soluție salină echibrată, de tip Hank.
Exemplul 2. Sinteza peptidelor
Peptidele sintetice corespunzătoare secvențelor de amino acizi 253-276 (Secvențe ID nr. 1: EQLESIINFEKLTEWTSSNVMEER în care standardul de codificare cu o literă este utilizat pentru a reprezenta fiecare amino acid) din ovalbumină (ova 253-276), secvențele de amino acizi 84-102 de proteină bazică mielinică (MBP 84102) (Secvența ID nr.2: DENPWHFFKNIVTPRTPP) și peptidele sintetice corespunzătoare secvențelor de amino acizi 308-322 (Secvența 18111b) a gp120111b, se asamblează prin sinteza peptidei în fază solidă, utilizându-se un aparat de sintetizare de Applied Biosistems 430A. Aminoacizii sunt cuplați cu ajutorul anhidritelor sintetice performante, cu excepția asparaginei, glutaminei și argininei care sunt cuplate ca esteri de hidroxibenzotriazol. Eficiența de cuplare este monitorizată prin reacția ninhidrinei care este efectuată prin metoda Kaiser descrisă de acesta în lucrarea sa și a colab., în Anal.Biochem. 34, 595, 1970. Peptidele sunt eliberate din suport cu HF urmând procedeul “low-high” descrise de Tam și colaboratori, în J.Am. Chem.Soc. 21, 6442, 1983 și peptidele sunt extrase din rezină cu acid acetic de 10% concentrație. După liofilizare, peptidele sunt desalinizate pe o coloană de Sephadex G-25 și probele de peptide sunt apoi purificate HPLC prin cromatografie în fază reversă pe o coloană preparativă Vydac C-18. Peptidele purificate (98%) sunt solubilizate în HBSS la o concentrație finală de 10 mg/ml și apoi sunt diluate până la concentrația dorită într-un mediu complet.
Digestia CNBr: Probele cu proteine (de exemplu β-galactozidaza) sunt tratate cu un exces molar de 100 de ori de bromură de cianogen într-o soluție de 100 mM
RO 116459 Bl de acid trifluoroacetic. Amestecul de reacție este lăsat să reacționeze timp de 18 h la temperatura camerei (aproximativ 2O°C temperatură), cu rotație. Urmând timpul de reacție precis, fragmentele de peptidă sunt separate de reactanți utilizând un aparat SEP-PAK C-18 (Waters), după care urmează eluarea cu 95% acetronitil și liofilizarea.
Digestia alcalină. Probele de proteine (de exemplu β-galactozidaza) se tratează cu hidroxid de sodiu NaOH 1N și se fierb timp de 2 min și fragmentele de peptide rezultate astfel sunt separate din reactanți, utilizând un aparat C-18 SEP-PAK (Waters), după care se eludează cu acetonitril 95% și se liofilizează.
Exemplul 3. Pregătirea CTL restricționate clasa I în UCLA Symp. Moli. Cell. Biol. 113, 1989 și Carbone și Bevan J.Exp.Medicine 171, 377, 1990, Moore și colab. demonstrează că șoareci imunizați cu celule splenice, încărcate citoplasmatic cu ova solubilă, sunt pregătiți pentru răspunsul CTL restricționat clasa I specific ova.
Transfectantul EL4 cu exprimare ova, EG7-ova, se utilizează pentru stimulare in vitro a limfocitelor splenice păregătite in vivo și, de asemenea, este folosit ca țintă pentru distrugerea mediată prin CTL ova specifice. Acest studiu demonstrează că efectorii CD8+ induși prin trasfectantul EG 7-ova sau prin celule splenice încărcate citoplasmatic cu ova, recunosc un determinant reprezentat prin peptida ova 258-276 în context cu H-2Kb, lizează EG7-ova și, de asemenea, distrug celulele EL4 acoperite cu ova 258-276. Astfel, în vederea cercetării, dacă o grupă de celule T endogene restricționate clasa I CD8+, poate fi indusă printr-un antigen solubil, sistemul de mai sus este utilizat pentru a se determina dacă anumite formulări de antigen pot fi utilizate pentru a conduce antigenul solubil pe o cale restricționată către clasa I, cu activitate limitată
a) Ova. Șoarecii de tipul C57BL/6 sunt imunizați cu diferite cantități de ova (30 pg...1mg/șoarece) cu sau fără o formulare antigenică. Șoarecii sunt injectați subcutanat și la baza cozii. Celulele splenice sunt luate de la un șoarece imunizat la două săptămâni de la injectare și se stimulează in vitro cu transpectanții EG7-ova. O concentrație ova de 30pg este efctivă atunci când doza este de 1mg. De aceea, studiile pe CTL sunt de obicei efectuate pe celule splenice de la un șoarece pregătit cu 30pg ova. După 5 zile de cultivare in vitro cu EG7-ova, pregătirea este controlată prin prezența efectorilor specifici ova capabili de lizare, ai EG7-ova. Șoarecii injectați cu ova solubilă în HBSS, în cantitate de 1mg, nu prezintă nici un semn de pregătire CTL (fig. 1 A). Cu toate acestea, șoarecele imunizat cu 30 pg ova în formulă de antigen, după cum s-a descris mai sus, prezintă un răspuns CTL detectabil, specific, de transfectant (fig. 1C). în plus, extinderea distrugerii EG7-ova de celulele splenice imunizate ova-AF este comparabilă cu cea a celulelor splenice încărcate cu ova, la șoarecele imunizat (fig. 1B).
Faptul că pregătirile CTL in vivo sunt specifice antigenului este dovedit prin faptul că celulele splenice de la șoarecii imunizați cu β-galactozidază nu manifestă un răspuns CTL secundar in vitro, când stimularea se efectuează cu EG7-ova. Nu se observă nici o inducție CTL specifică ova.
b) β-galactozidaza
Rezultate similare sunt observate prin utilizarea unui alt antigen proteinic solubil, β-gal. Pentru analiza răspunsului CTL specific β-gal, ținta utilizată este transfectantul C3-4 derivat BALB/c care exprimă β-gal.
505
510
515
520
525
530
535
540
545
RO 116459 Bl
Imunizarea șoarecilor BALB/c cu β-gal solubilă, duce la răspunsul CTL de bază. De aceea, pentru determinarea răspunsului CTL specific, recoltarea este amânată cel puțin opt săptănâni înainte ca limfocitele splenice să fie recoltate și cultivate timp de cinci zile, în prezența transfectanților C3-4 iradiați.
Fig. 2B demonstrează că o cantitate de 30 pg de β-galactozidază în AF induce răspunsul CTL specific puternic față de transfectant. La o valoare a raportului dintre efector și țintă (E.T) de 3:1 la șoarecii imunizați cu β-gal-AF, se obține o valoare de distrugere specifică C3-4 de 80%. Cu toate acestea numai 20% de distrugere din aceeași țintă sunt obținute cu efectorii izolați de la șoarecii imunizați cu β-gal în HBSS la aceeași valoare a raportului E:T (fig. 2A). Deoarece nici EL4 și nici P815 nu exprimă produsele genelor MHC clasa II și liza prezintă o restricție singenetică, acești efectori specifici ova și β-gal sunt restricționați MHC clasa I.
Pentru a demonstra utilitatea compoziției de antigen, au fost imunizați șoareci cu ova solubilă încapsulată în două tipuri de lipozomi, din care unul a fost un lipozom pH sensibil. 0 săptămână mai târziu, celule splenice au fost stimulate in vitro, așa cum s-a descris mai sus, și testate împotriva EG7-ova sau EL4 marcate cu 51Cr. Fig. 3 arată un rezultat reprezentativ care demonstrează că ova în lipozom nu putea pregăti șoarecii pentru o inducție substanțială a CTL. Rezultate similare au fost observate atunci când ova a fost imunizată în alum.
Exemplul 4. Recunoașterea epitopului prin CTL
Carbone și Bevanîn J. Exp. Medicine 171, 377, 1990, au demonstrat că răspunsurile CTL induse la șoareci C57BL/6 prin transfectant EG7-ova și prin splenocite încărcate cu ova citoplasmatic recunosc celulele EL4 acoperite cu peptida ova 258276. Pentru a determina dacă ovalbumina solubilă în AF induce răspunsuri CTL similare, au fost preparate celule splenice de la șoareci imunizați și stimulate in vitro cu EG7-ova. Efectorii au fost testați împotriva celulelor EL4 acoperite cu peptida ova 253-276 sau cu o peptidă de control derivată de la proteina bazică mielinică (MBP 84-102). Rezultatele demonstrează că ova-AF a pregătit CTL cu o specificitate similară cu cea pregătită prin transfectanți sau prin ova încărcată citoplasmatic (fig. 1A, 1B și 1C). Celulele efectoare pregătite cu ova-AF lizează eficient EG7-ova și celule EL4 netransfectate acoperite cu 50 pg/108 celule de peptidă ova, dar nu lizează celule EL4 acoperite cu 50 pg/108 celule de peptidă MBP.
în sistemul β-galactozidază, Carbone și Bevan J. Exp. Medicine 171, 377, 1990, au indicat că transfectantul care expimă β-gal și splenicitele încărcate citoplasmatic cu β-galactozidază solubilă, au indus CTL care au lizat celule P815 care exprimă β-gal transfectante și netransfectante acoperite cu β-galactozidază digerată alcalin, β-galactozidaza solubilă induce CTL care are specificitate similară atunci când este imunizată în AF (fig. 2).
Exemplul 5. Efectorii CTL sunt celule T CD8+
Faptul că antigenii de proteine solubile în AF induc răspunsul celulelor T efectoare CD8+, s-a arătat după cum urmează. Splenocitele de la șoarecii imunizați au fost cultivate timp de cinci zile cu transfectanți iradiați in vitro. După aceea, celulele au fost recoltate și s-au îndepărtat celulele T CD4+ sau CD8+ prin utilizarea anticorpilor monoclonali anti-CD4 sau anti-CD8 plus complement. Populațiile rămase după îndepărtare au fost apoi testate împotriva 51Cr-EG7-ovaîn sistemul ova sau 51CrP13.1 în sistemul β-gal. Datele expuse în fig. 4 arată că, în sistemul ova, îndepărtarea
RO 116459 Bl celulelor T CD8+ a dus la dispariția activității citolitice conferite de întreaga populație de celule efectoare. Totuși, îndepărtarea populației de celule T CD4+ nu a avut nici un efect asupra lizei EG7-ova.
în mod similar, în sistemul β-gal, îndepărtarea celulelor T CD8+ a dus la dispariția activității citolitice a celulelor splenice imunizate cu formulare β-gal antigen (datele nu sunt expuse).
Exemplul B. Ova solubil în AF pregătește celule CD8+
Pentru a demonstra că ova-AF pregătește populațiile de celule T CD8+ in vivo și este critică pentru răspunsul secundar in vitro, populațiile de celule T CD8+ și CD4+ au fost îndepărtate din splină de la șoarecii imunizați cu ova-AF și de la șoarecii simpli. Aceste populații tratate au fost apoi stimulate in vitro cu EG7-ova singur sau în combinație cu celule T CD4+ sau CD8+ de la șoareci imunizați ova-AF, sau în variate combinații de celule T CD4+ sau CD8+ de la șoareci imunizați ova-AF cu celule T CD4+ sau CD8+ de șoareci simpli. Fig. 5 arată că celulele CD8+ pregătite sunt esențiale pentru manifestarea unui răspuns CTL secundar in vitro. Aceste date indică, de asemenea, faptul că, pentru răspunsul secundar eficient al CTL in vitro, sunt necesare celule T CD4+. Nu sunt necesare celule CD4+ pentru pregătire.
Exemplele de mai sus demonstrează efectul compoziției de antigen asupra inducției răspunsurilor CTL restricționate clasa I împotriva antigenilor proteine solubile. Compozițiile de antigen au mediat pregătirea CTL indusă prin antigen solubil și este similară ca activitate cu aceea indusă prin transfectanți și prin splenocite încărcate citoplasmatic cu ova sau β-gal solubile. în sistemul ovalbumină, EG7-ova, splenocite citoplasmatic încărcate ova și ova-AF au indus: (a) CTL CD8+ restricționat clasa I; (b) CTL care recunosc ținta sensibilizată cu peptida sintetică ova 253-276; și (c) CTL de durată îndelungată după numai o imunizare. în sistemul β-galactozidază, β-gal-AF a indus CTL care recunoaște transfectantul C3-4 care exprimă β-gal și, de asemenea, celulele P815 netransfectate sensibilizate cu β-gal digerată cu alcali. Aceasta este analog cu ceea ce a fost observat cu CTL induse prin imunizarea cu celule splenice încărcate citoplasmatic cu β-galactozidază. Inducerea CTL ova specific prin formularea de antigen este unică deoarece nici ova încapsulată într-un lipozom pH sensibil, nici în alum (datele nu sunt arătate), nu a putut induce pregătirea CTL in vivo.
Aceste exemple arată că compoziția de antigen, utilizată mai sus, și echivalenții săi sunt utili în terapie umană și în realizarea de vaccinuri pentru inducerea răspunsului CTL în diferite forme canceroase și boli virale.
Exemplul 7. Acesta este un exemplu specific pentru a arăta utilizarea AF de mai sus pentru pregătirea răspunsului CTL restricționat clasa I prin gp120 solubilă din HIV.
Linia celulară care exprimă gp160IIIB (15-12) a fost produsă în linia celulară 3T3 derivată de la fibroblastul Balb/c. Aceasta a fost obținută de la doctorii Ron Germain și Jay Berzovsky, de la Național Institute of Health, Bethesda, M.D. Linia celulară care exprimă gp160 a fost implicată în stimularea in vitro a limfocitelor splenice pregătite in vivo și, de asemenea, utilizată ca țintă pentru inducerea răspunsului CTL specific pe gp160. în multe experimente, peptida 18lllb care conține epitopul CTL dominant a fost utilizată pentru stimularea in vitro. Pentru restimularea peptidei din mediul de cultură a fost adăugată IL-2. Au fost imunizați șoareci Balb/c o dată cu 1 mg de gp120 per șoarece cu sau fără AF. Șoarecii au fost injectați subcutanat și
595
600
605
610
615
620
625
630
635
RO 116459 Bl la baza cozii. Au fost luate celule splenice de la șoarecii imunizați, la trei săptămâni după imunizare, și au fost stimulate in vitro cu transfectanți gp160 iradiați sau cu peptida 18lllb. După cinci zile de cultură in vitro, pregătirea a fost dovedită prin prezența de efectori specifici capabili de lizarea transfectanților gp160 și nu a liniilor celulare netransfectate. în unele experimente, au fost utilizate ca țintă celule P815 infectate cu vac:gp16O. Rezultatele sunt arătate în tabelul 4A, unde răspunsul CTL este potențat cu AF și gp120. Se poate observa că în sistemul gp120, formularea optimă pentru inducerea răspunsului CTL specific pe gp120 (după □ imunizare cu 1 mg de gp120 în AF) este aceea care nu conține sau conține P sau conține o cantitate minimă din acesta. Totuși, când șoarecii au fost imunizați de mai multe ori cu 5 mg de gp120în AF care conține concentrație mai mare de P (3,75%), s-a văzut o inducere a răspunsului CTL substanțială (datele nu sunt arătate).
Următorul exemplu demonstrează utilizarea formulării de antigen din această invenție, cu numai unul sau doi componenți. Aceste exemple demostrează că răspunsuri CTL pot fi induse cu numai două dintre cele trei componente de mai sus.
Exemplul 8. Determinarea componentelor critice necesare pentru inducerea răspunsului CTL
Pentru a determina dacă toate componentele notate mai sus sunt necesare pentru inducerea răspunsului specific CTL de antigen, au fost imunizați șoareci, cu ovalbumină într-o formulare microfluidizată, în variate combinații de doi din cei trei componenți din AF prezentată, și cu PBS în locul celui de-al treilea component. Combinațiile de doi componenți, utilizate, au fost după cum urmează: Squalen/TWEEN în PBS, Squalen/Pluronic în PBS sau Pluronic/TWEEN în PBS. Un alt set de grupe au fost incluse acolo unde șoarecii au fost imunizați cu ova formulată într-un sistem de un component, adică numai Squalen în PBS, Pluronic în PBS sau TWEEN în PBS.
Compoziția de antigen de trei componenți de mai sus constă din: 0,300 g TWEEN 80 (Aldrich, WI), 1,875 g Pluronic LI 21 (BASF, NJ) și 7,5 g Squalen (Aldrich, WI), completate până la 50 ml cu PBS.
Compozițiile de doi componenți au fost: Squalen/TWEEN: 0,300 g TWEEN 80, și 7,5 g Squalen, completate până la 50 ml cu PBS. Pluronic/TWEEN: 1,875 g Pluronic L121 și 0,300 g TWEEN 80, completate până la 50 ml cu PBS. Pluronic/Squalen: 1,875 g Pluronic L121 și 7,5 g Squalen, completate până la 50 ml cu PBS.
Compozițiile de trei componenți cu concentrații de Pluronic variate, au fost:
- concentrațiile de Squalen și TWEEN au fost păstrate ca mai înainte, dar concentrația de Pluronic a fost modificată.
Pentru volume de 50 ml:
| S (grame) | T (grame) | P (grame) | P |
| 7,5 | 0,300 | 0,75 | 1,5% |
| 0,15% | |||
| 0,015% | |||
| 0,0015% | |||
| 0,018% | |||
| 0,009% | |||
| 0,003% |
RO 116459 Bl
690
Probele au fost apoi procesate printr-un microfluidizator model 11OT, Microfluidics Corp, și puse în recipiente și păstrate la 4°C până la utilizare.
Ovalbumina (ova, Sigma, MO) a fost cântărită și dispusă într-o soluție de 0,3 mg/ml în HBSS (Whittaker, manual, Welkersville, MD). Soluția stoc 0,3 mg/ml a fost combinată cu formulările de doi componenți în cantitățile care urmează: 5 părți soluție de ovalbumină 0,3 mg/ml, 3,3 părți formulare de doi componenți și 1,7 părți HBSS. în mod similar, β-gal și gp120 a HIV au fost amestecate cu AF.
Compoziția este agitată și păstrată pe gheață până când este injectată. Toate soluțiile au fost combinate numai înainte de injectare.
Fiecare șoarece a primit 200 ml de ova prin injectare subcutanată și la baza cozii. Șoarecii au fost lăsați să se odihnească timp de cel puțin două până la patru săptămâni înainte de recoltarea splinei.
La două săptămâni după imunizare, celule de splină au fost preparate și stimulate in vitro cu EG7-ova iradiată. După cinci zile de cultură, prezența CTL ova specific a fost măsurată prin testare împotriva 51Cr-EG7-ova și 51Cr-EL4 într-un test de eliberare 51Cr de 4 h. Datele arătate în fig. 6...8 demonstrează că ovalbumina formulată în sistemul de doi componenți microfluidizat poate pregăti limfocite CTL ova specifice in vivo.
în plus, s-a evaluat contribuția relativă a componenților individuali pentru capacitatea lor de a induce răspunsul CTL atunci când sunt combinați cu antigeni proteici, în scopul imunizării antigenul solubil a fost amestecat cu excipienți microfluidizați pentru a obține o emulsie stabilă omogenă, cu mărimea particulei variind între 250 și 300 nm. Pentru a defini în plus componenții formulării de Squalen-TWEEN 80Pluronic (STP) responsabili pentru inducerea CTL, s-au imunizat șoareci cu ova în amestec Squalen-TWEEN 80 (ST), amestec Pluronic-TWEEN 80 (PT) sau amestec Squalen-Pluronic (SP) și, drept control (martor), în Squalen (S), TWEEN 80 (T) sau Pluronic (P). Șoarecii au fost imunizați, de asemenea, cu ova-SAFm (care conține 70 mg de MDP) sau ova-alum ca adjuvanți martor (control). Pentru un control pozitiv, șoarecii au fost imunizați cu celule splenice încărcate citoplasmatic cu ova solubil. Alte combinații și substituenți au fost, de asemenea, utilizate și rezultatele sunt prezentate în tabelul 1. Rezultatele demonstrează că 30 mg de ova în combinație cu STP sau ST pregătesc răspuns CTL restricționat clasa I, la șoareci.
Pregătirea CTL ova specifice de ova în STP sau de ova în ST apare ca fiind mai bună decât cea indusă de celulele splenice încărcate citoplasmatic cu ova solubilă. Ova în PT sau în SP induce răspunsuri CTL ova specifice la șoareci, dar aceste răspunsuri sunt slabe și neconcludente. Spre deosebire de SAFm, adăugarea de MDP la formularea ST nu a compromis inducerea CTL ova specifce la șoareci (tabelul 2). Nu apărut inducere CTL ova specifică atunci când șoarecii au fost imunizați cu ova amestecată cu componentele individuale, S, P sau T, nici când șoarecii au fost imunizați Cu ovaSAFm sau ova-alum. Șoarecii imunizați cu o cantitate de 1 mg ova în (a) HBSS, în (b) SAFm sau (c) absorbită la alum nu au pregătit CTL ova specific.
695
700
705
710
715
720
725
RO 116459 Bl
Tabelul 2
Inducerea răspunsului CTL specific ova nu este blocat de către ST+MDP % de citotoxicitate la șoareci imunizați cu *
| stimulator | Produs testat | E-T | ova-ST | ova-ST MDP 300 pg șoarece | ova-ST MDP 72 pg șoarece |
| EG-ova | EG-7-ova | 100:1 | 0 | 100 | 76 |
| 33:1 | 0 | 86 | 62 | ||
| 11:1 | 0 | 33 | 25 | ||
| 3:1 | 0 | 13 | 3 | ||
| 1:1 | 0 | 0 | 0 | ||
| 3:1 | 0 | 0 | 0 |
* șoarecii au fost imunizați cu 30 mg ova în diferite formulări % citotoxicitate sunt calculate prin scăderea procentului de distrugere la liniile celulare care nu exprimă antigenul.
Exemplul 9. Componentele necesare pentru producerea de anticorpi specifici pentru ova
Șoarecii au fost imunizați de trei ori, la intervale de 2 săptămâni, cu 30 mg de ova în HBSS, STP, ST, PT sau SP. Ca martor pozitiv, sunt imunizați, de asemenea, șoareci cu ova-SAFm, deoarece SAFm este cunoscut a induce un răspuns de anticorpi puternic. Șapte zile după imunizările a doua și a treia, șoarecii au fost sacrificați și serurile lor testate pentru răspunsul de anticorpi ova specifici. Rezultatele sunt arătate în tabelul 3. Acestea indică faptul că șoarecii imunizați cu ova în STP, ST sau în SAFm prezintă răspunsuri similare anti-ova după trei imunizări.
Tabelul 3
Inducerea răspunsului de anticorpi anti-ova
| Imunizat cu ova în | a Nr. de șoareci cu răspuns/Nr. de șoareci injectat | Titrul b anti-ova anticorp (diluția serică 1 /ser) |
| Experimentul 1 | ||
| HBSS | 0/3 | <1/20; <1/20; >15,360 |
| STP | 3/3 | >1/15; >1/15; >15/360 |
| ST | 3/3 | 1/3840; 1/15,360; 1/3840; |
| PT | 3/3 | >1/15,360; >1/15,360; >1/15,360 |
| SP | 3/3 | >1/15,360; >1/15,360; >1/15,360 |
| SAFm | 3/3 | >1/15,360; >1/15,360; >1/3840 |
RO 116459 Bl
770
Tabelul 3 (continuare) Inducerea răspunsului de anticorpi anti-ova
| Imunizat cu ova în | a Nr. de șoareci cu răspuns/Nr. de șoareci injectat | Titrul b anti-ova anticorp (diluția serică 1/ser] |
| EXPERIMENTUL 2 | ||
| STP.0015% | 3/3 | >1/4860; 1/4860; >4860 |
| STP.015% | 3/3 | >1/4860; 1/4860; >4860 |
| STP. 15% | 3/3 | >1/4860; 1/4860; >1620 |
| STP 1,5% | 3/3 | >1/4860; 1/4860; >1620 |
| HBSS | 1/3 | -<1/20; 1/180; ^1/20 |
| ST | 3/3 | >1/4860; 1/4860; >1620 |
| STP | 3/3 | >1/4860; 1/4860; >1620 |
a Șoarecii sunt imunizați de trei ori cu 30 mg de ova în diferite formulări b Titrul de anticorpi este calculat ca diluția serurilor care dau o valoare OD^ mai mare decât valoarea OD^+SSD obținută cu serurile pre-imune.
775
780
Exemplul 10. Inducerea răspunsului CTL specifică pe gp120 a HIV gp120IIIB a HIV a fost utilizată ca un al treilea sistem antigen, pentru a determina inducerea răspunsului CTL în STP sau alte variante de formulări, cu 2 și 3 componente. Șoarecii au fost imunizați cu 1 mg de gp120lllbîn HBSS, STP, PT sau în ST. Ca un control (martor), au fost imunizați șoareci cu 1 mg de gp120lllb în SAFm sau CFA (adjuvant Freund complet) (tabelul 4B). La trei săptămâni după imunizare, au fost preparate celule de splină și stimulate in vitro cu celule transfectante 15-12 tratate cu mitomicină sau cu peptida 18111b. După 5 zile de cultură, celulele rezultante efectoare au fost testate împotriva celulelor P815 infectate cu vaccinia:gp160lllb sau vaccinia original, ca ținte. Rezultatele demonstrează că amestecul gp12O-SqualenTWEEN 80 a indus consistent răspunsul CTL specific pe gp120 la șoareci (tabelele 4A și 4B). CFA sau SAFm au fost, totuși, incapabile să inducă răspunsul specific CTL pe gp120 (tabelul 4B). într-un studiu separat, gp120în ST cu variate doze de P de la 0,0015% până la 1,5% au fost testate pentru inducerea răspunsului CTL.
Tabelul 4A
785
790
795
800
Inducerea răspunsului CTL specific pe gp120 la șoareci cu *
| Stimulator | Produs testat* * | E-T | gp12O-HESS | gp120-ST | gp120-STP |
| 18lllb/ll.2 | vac:gp120 | 100:1 | 23 | 42 | NA*** |
| 33; 1 | 23 | 38 | NA | ||
| 11:1 | 0 | 0 | NA | ||
| 3:1 | 0 | 35 | NA |
RO 116459 Bl
Tabelul 4A (continuare)
Inducerea răspunsului CTL specific pe gp120 la șoareci cu *
| Stimulator | Produs testat* * | E-T | gp120-HESS | gp12GST | gp120-STP |
| 18lllb/ll.2 | 15-12 | 1ΟΟ.Ί | 0 | 50 | 0 |
| 33:1 | 0 | 35 | 0 | ||
| 11:1 | 0 | 27 | 0 | ||
| 3:1 | 0 | 18 | 0 | ||
| 18lllb/ll.2 | 3T3+18111b | 100:1 | 0 | 59 | 13 |
| 33:1 | 0 | 59 | 2 | ||
| 11:1 | 0 | 57 | 0 | ||
| 3:1 | 0 | 29 | 0 | ||
| 15-12 | vac:gp 120 | 100:1 | 35 | 84 | NA |
| 33:1 | 19 | 65 | NA | ||
| 11:1 | 12 | 37 | NA | ||
| 3:1 | 0 | 22 | NA | ||
| 1:1 | 0 | 0 | NA |
* șoarecii sunt imunizați cu 1 mg de gp12OIII în diferite formulări * * % citotoxicitate este calculată prin scăderea procentului de distrugere la liniile celulare care nu exprimă antigen * * * NA; nu este disponibilă.
Tabelul 4B
Inducerea gp120- răspuns CTL specific, la șoareci a, % citotoxicitate la șoareci imunizați cu b
| gp120-HBSS | gp120-ST | gp120-CFA | gp120Saf-M | ||||
| E:T | % | E:T | % | E:T | % | E:T | % |
| 100:1 | 16 | 67:1 | 94 | 17:1 | 0 | 100:1 | 3 |
| 33:1 | 14 | 22:1 | 91 | 6:1 | 0 | 33:1 | 2 |
| 11:1 | 2 | 7:1 | 58 | 2:1 | 0 | 11:1 | 0 |
| 3:1 | 0 | 2,5:1 | 57 | 0,7:1 | 0 | 3:1 | 0 |
| 1:1 | 0 | 0,8:1 | 12 | 0,2:1 | 0 | 1:1 | 0 |
| 0,3:1 | 0 | 0,3:1 | 7 | 0,07:c | 0 | 3:1 | 0 |
a șoarecii sunt imunizați cu 1 mg de gp120lllb în diferite formulări b Celulele de splină de la diferite grupe sunt stimulate in vitro cu peptida 1Slllb și IL-2 c Citotoxicitatea este testată față de celulele 3T3 sau 15-12 marcate cu 51Cr. Procentul de citotoxicitate specifică este calculat prin scăderea procentului de distrugere la liniile celulare care nu exprimă antigenul.
Exemplul 11. Inducerea răspunsului umoral specific pe gp120, la șoareci
Pentru inducerea răspunsurilor umorale specifice pe gp120, șoarecii au fost imunizați cu 1 mg de gp120lllb, de trei ori, la intervale de două săptămâni. Animalele au fost sacrificate și testate pentru prezența de anticorpi IgG care detectează
RO 116459 Bl gp120111b într-un test EUSAîn fază solidă. Rezultatele experimentului 1 demonstrează că gp-120 în ST sau PT prezintă o mai bună imunogenitate decât gp120-HBSS, gp120-SAFm (tabelul 5), sau gp120-STP. Totuși, rezultatele din experimentul 2 demonstrează că gp120în ST sau STP (care conține concentrații de P de 1,5% sau 3,75%) poate induce răspunsuri de anticorpi în titru înalt.
Tabelul 5
850
Inducerea răspunsului de anticorpi anti-gp120
| gp120 in, imunizat cu a | Nr. de șoareci cu răspuns/nr. de șoareci injectați | Titrul b anticorp antigp120(1/diluție serică) |
| Experimetrul 1 | ||
| HBSS | 2/3 | 1/160; <1/20; 1/60 |
| STP | 1/3 | <1/20; >1/4860; <1/20; |
| ST | 3/3 | >1/4860; >1/4860; >1/4860; |
| PT | 3/3 | >1/4860; >1/4860; >1/4860; |
| SP | 2/3 | <1/20; 1/540; 1/540; |
| SAFm | 3/3 | 1/180; >1/4860; 1/540; |
| Experimetrul 2 | ||
| STP O.OO15% | 2/3 | 1/180; 1/1620; <1/20; |
| STP 0,015% | 0/3 | <1/20; <1/20; <1/20; |
| STP 0,15% | 2/3 | >1/4860; 1/1620; <1/4860; |
| HBSS | 1/3 | <1/20; <1/20; 1/4860; |
| ST | 3/3 | >1/4860; >1/4860; >1/4860; |
| STP | 2/3 | >1/4860; >1/4860; 1/20 |
a Șoarecii sunt imunizați cu 1 mg de gp120lllb de trei ori în diferite formulări
855
860
865
870 b Titrul de anticorpi este calculat așa cum se descrie în tabelul 3.
Exemplul 12. Răspunsurile anticorpilor specifici gp120, la maimuțe
Maimuțele au fost imunizate (două per grup) cu gp120-SAFm, gp120-SPT, gp120-ST, sau gp120-HBSS. Drept control (martor), a fost imunizat un grup de maimuțe cu vaccinia recombinant conținând gp160lllb. Maimuțele au fost imunizate la interval de două săptămâni și sacrificate la două săptămâni și la trei săptămâni după a doua imunizare. Seruri pre-imune și imune de la fiecare maimuță au fost diluate serial și testate pentru activitatea anti-gp120 printr-un ELISA așa cum este descris la materiale și metode. Datele (fig. 9) indică faptul că maimuțele imunizate cu gp120-STP sau gp120-SAFm au indus răspunsuri similare la maimuțe. O maimuță imunizată cu gp120-ST, a indus răspuns anti-gp120 similar cu cel al grupului imunizat cu gp120-SAFm sau gp120-SPT. □ maimuță imunizată cu gp120-ST nu a indus un răspuns puternic anti-gp120 după două imunizări.
875
880
RO 116459 Bl
Exemplul 13. Răspunsurile CTL specifice pe gp120, la maimuțe
Maimuțele au fost imunizate cu 30-50 mg de gp120 a HIV în AF sau în HBSS, de mai multe ori. Drept un control (martor), maimuțele au fost imunizate, de asemenea, cu gp160 recombinantîn vaccinia. Rezultatele preliminare indică faptul că una din maimuțele imunizate cu gp12O-AF și 1 din maimuțele imunizate cu gp 160:vaccinia au arătat distrugerea preferențială a celulelor țintă autologe infectate cu vac:gp160 (fig. 1OA și 1OB).
Revendicări
Claims (6)
1. Compoziție imunogenă, caracterizată prin aceea că este constituită dintrun antigen ales dintre porțiunile antigenice ale antigenilor HIV, antigenilor malariei, antigenilor de suprafață ai virusului hepatitei B, antigenilor Herpes virusului, antigenilor virusului influenza, antigenilor de suprafață ai virusului hepatitei A, antigenilor virusului sincitial respirator, antigenilor virusului papiloma herpes, antigenilor tumorali, și o formulare microfluidizată de antigen care constă din doi dintre următorii componenți; 0,05...0,5% detergent de stabilizare, 0,001 ...10% agent de formare a miceliului și 1...10% ulei biodegradabil și biocompatibil, iar această formulare de antigen este realizată ca o emulsie stabilă de tip ulei în apă.
2. Compoziție, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că antigenul este ales din porțiuni antigenice ale antigenilor HIV: gp120, gp160, gag, pol, Nef, Tat și Rev; ale antigenilor malariei: proteina CS și proteina 2 de suprafață a Sporozoitulur, ale antigenilor de suprafață ai virusului hepatitei B: Pre-S1, Pre-S2, HBc Ag, și HBe Ag, ale antigenilor virusului influenza: HA, NP și NA; ale antigenilor de suprafață ai virusului hepatitei A, antigenilor Herpes virusului: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV produs cu proteina timpurie, citomegavirus gB, citomegavirus gH și IE, proteina gP72, ale antigenului virusului sincitial respirator: proteina F, proteina G și proteina N, ale antigenilor virusului papiloma herpes: E4, E6 și E7 ale antigenilor tumorilor: carcinomul P53, melanomul MPG, melanomul p97, antigenul MEGA, carcinomul produsului oncogen NEU, carcinomul produsului genetic p53, ale antigenilor specifici de prostată (PSA), ale antigenului asociat prostatei și ale proteinei ras p21 de mutație.
3. Compoziție conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că detergentul de stabilizare este (sorbitan-mono-9-octadecanoat-poli)oxi-1,2-etandiil.
4. Compoziție, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că agentul de formare a miceliului este un surfactant polimeric.
5. Compoziție conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că uleiul biodegradabil și biocompatibil este ales dintre squalen, eicosan, tetratetracontan, glicerol sau ulei de arahide și alte uleiuri vegetale.
6. Compoziție conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că' se administrează unui om sau unui animal infectat cu respectivul virus, pentru inducerea răspunsului limfocitului T citotoxic.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US73506991A | 1991-07-25 | 1991-07-25 | |
| PCT/US1992/006193 WO1993001831A1 (en) | 1991-07-25 | 1992-07-24 | Induction of cytotoxic t-lymphocyte responses |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO116459B1 true RO116459B1 (ro) | 2001-02-28 |
Family
ID=24954233
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RO94-00094A RO116459B1 (ro) | 1991-07-25 | 1992-07-24 | Compozitie imunogena |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5585103A (ro) |
| EP (1) | EP0596032B2 (ro) |
| JP (1) | JP3939746B2 (ro) |
| KR (1) | KR100198868B1 (ro) |
| AT (1) | ATE166578T1 (ro) |
| AU (1) | AU666127B2 (ro) |
| BG (1) | BG62240B1 (ro) |
| BR (1) | BR9206310A (ro) |
| CA (1) | CA2113720A1 (ro) |
| CZ (1) | CZ288048B6 (ro) |
| DE (1) | DE69225710T3 (ro) |
| DK (1) | DK0596032T4 (ro) |
| ES (1) | ES2117052T5 (ro) |
| FI (2) | FI108114B (ro) |
| HU (2) | HU220295B (ro) |
| IE (1) | IE922436A1 (ro) |
| IL (1) | IL102639A (ro) |
| MX (1) | MX9204376A (ro) |
| NO (1) | NO317203B1 (ro) |
| OA (1) | OA09880A (ro) |
| PH (1) | PH30906A (ro) |
| RO (1) | RO116459B1 (ro) |
| RU (1) | RU2129439C1 (ro) |
| SK (1) | SK282920B6 (ro) |
| TW (1) | TW349867B (ro) |
| WO (1) | WO1993001831A1 (ro) |
| ZA (1) | ZA925614B (ro) |
Families Citing this family (80)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5709860A (en) * | 1991-07-25 | 1998-01-20 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses |
| US6197311B1 (en) * | 1991-07-25 | 2001-03-06 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses |
| CA2158281A1 (en) * | 1993-03-15 | 1994-09-29 | Jay A. Berzofsky | Peptide coated dendritic cells as immunogens |
| GB9314623D0 (en) * | 1993-07-14 | 1993-08-25 | Nordion Int Inc | Localization and therapy with agents directed against prostate specific antigen in breast cancer |
| GB9326253D0 (en) * | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| AUPM446594A0 (en) * | 1994-03-16 | 1994-04-14 | Csl Limited | Cytotoxic t-cell epitopes identified within epstein-barr virus |
| GB9620795D0 (en) * | 1996-10-05 | 1996-11-20 | Smithkline Beecham Plc | Vaccines |
| US5820880A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-13 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Liposomal formulation |
| US6884435B1 (en) * | 1997-01-30 | 2005-04-26 | Chiron Corporation | Microparticles with adsorbent surfaces, methods of making same, and uses thereof |
| JP5037747B2 (ja) * | 1997-01-30 | 2012-10-03 | ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド | 免疫応答を刺激するための吸着された抗原を有するマイクロパーティクルの使用 |
| DE69838324T2 (de) * | 1997-02-05 | 2008-05-15 | Bystryn, Jean-Claude | Ph-sensitive liposomen und andere typen immunomodulatoren enthaltender gekapselter impfstoffe sowie herstellungs- und anwendungsverfahren dafür |
| AT405939B (de) * | 1997-02-24 | 1999-12-27 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von lipidumhüllten viren |
| US6632619B1 (en) * | 1997-05-16 | 2003-10-14 | The Governors Of The University Of Alberta | Microfluidic system and methods of use |
| DE69823347T2 (de) * | 1997-05-16 | 2005-05-12 | Alberta Research Council, Edmonton | Mikrofluidisches system und verfahren zu dessen betrieb |
| GB9718901D0 (en) | 1997-09-05 | 1997-11-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| DE69838992T2 (de) | 1997-09-05 | 2008-12-24 | Glaxosmithkline Biologicals S.A., Rixensart | Öl-in-Wasser Emulsionen mit Saponinen |
| MY131805A (en) * | 1997-09-18 | 2007-09-28 | Biogen Idec Inc | Synergistic composition and methods for treating neoplastic or cancerous growths and for restoring or boosting hematopoiesis. |
| US6949339B1 (en) | 1998-05-21 | 2005-09-27 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, and staging colon cancer |
| US6858386B1 (en) * | 1998-05-21 | 2005-02-22 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating colon cancer |
| CN1342085A (zh) * | 1998-10-30 | 2002-03-27 | 遗传研究所有限公司 | 通过p－选择素配体(psgl)拮抗剂抑制细胞素t细胞的分化 |
| WO2000028031A2 (en) * | 1998-11-10 | 2000-05-18 | Emory University | Mitogenic regulators |
| US7198920B1 (en) | 1999-01-29 | 2007-04-03 | Corika Corporation | HER-2/neu fusion proteins |
| US20050244434A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-11-03 | Cohen David I | Tat-based tolerogen compositions and methods of making and using same |
| US20050226890A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-10-13 | Cohen David I | Tat-based vaccine compositions and methods of making and using same |
| CA2394914A1 (en) * | 1999-11-22 | 2001-05-31 | Susana Salceda | A novel method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating cancer |
| US7238471B1 (en) | 1999-11-23 | 2007-07-03 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating breast cancer |
| US20020048777A1 (en) * | 1999-12-06 | 2002-04-25 | Shujath Ali | Method of diagnosing monitoring, staging, imaging and treating prostate cancer |
| AU6523901A (en) * | 2000-05-26 | 2001-12-11 | Diadexus Inc | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating colon cancer |
| US7229623B1 (en) * | 2000-08-03 | 2007-06-12 | Corixa Corporation | Her-2/neu fusion proteins |
| EP1343821A2 (en) | 2000-11-09 | 2003-09-17 | Immunolex Laboratories | Method of producing antibodies by immunization with conjugates of molecules coupled to charge-modified proteins |
| RU2303264C2 (ru) * | 2001-02-19 | 2007-07-20 | Мерк Патент Гмбх | Способ идентификации эпитопов т-клеток и его применение для получения молекул со сниженной иммуногенностью |
| AU2003253632A1 (en) * | 2002-06-10 | 2003-12-22 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Genes overexpressed by ovarian cancer and their use in developing novel therapeutics |
| JP2006516883A (ja) | 2002-09-19 | 2006-07-13 | アメリカ合衆国 | Ｐ．アリアシポリペプチド、ユウガイサシチョウバエポリペプチド、および使用法 |
| MXPA05004714A (es) | 2002-10-29 | 2006-03-17 | Us Gov Health & Human Serv | Polipeptidos de lutzomyia longipalpis y metodos de uso. |
| RU2005130646A (ru) * | 2003-04-04 | 2006-01-27 | Пфайзер Продактс Инк. (Us) | Микрофлюидизированные эмульсии масло в воде и композиции вакцины |
| UA84024C2 (ru) * | 2003-07-24 | 2008-09-10 | Мериал Лимитед | Новые вакцинные композиции, которые содержат эмульсию типа "масло в воде" |
| US20050208482A1 (en) * | 2004-03-16 | 2005-09-22 | Cohen David I | Tat-based immunomodulatory compositions and methods for their discovery and use |
| US8124397B2 (en) * | 2005-08-08 | 2012-02-28 | Oregon Health & Science University | Inactivating pathogens with oxidizing agents for vaccine production |
| US20100130425A1 (en) | 2005-09-09 | 2010-05-27 | Oregon Health & Science University | Use of toll-like receptor ligands in treating excitotoxic injury, ischemia and/or hypoxia |
| EP2253957B1 (en) | 2006-03-14 | 2013-05-15 | Oregon Health and Science University | Methods for producing an immune response to tuberculosis. |
| AU2007240614B2 (en) | 2006-04-20 | 2013-09-12 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Incorporated | Methods and compositions based on Shiga toxin type 1 protein |
| EP3403667B1 (en) | 2006-09-26 | 2020-07-22 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| TWI441648B (zh) * | 2007-01-03 | 2014-06-21 | Oncotherapy Science Inc | Ｆｏｘｐ３胜肽疫苗 |
| JP5596980B2 (ja) | 2007-02-28 | 2014-10-01 | アメリカ合衆国 | ブラキュリポリペプチドおよび使用方法 |
| RU2499606C2 (ru) * | 2007-10-18 | 2013-11-27 | Бавэариан Нордик Инк. | Применение mva (модифицированный вирус коровьей оспы анкара) для лечения рака простаты |
| US9005631B2 (en) | 2008-08-04 | 2015-04-14 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Membrane proximal region of HIV gp41 anchored to the lipid layer of a virus-like particle vaccine |
| US8664183B2 (en) | 2009-02-27 | 2014-03-04 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | SPANX-B polypeptides and their use |
| NZ595060A (en) | 2009-03-23 | 2013-05-31 | Pin Pharma Inc | Treatment of cancer with immunostimulatory hiv tat derivative polypeptides |
| SI2437753T1 (sl) | 2009-06-05 | 2016-12-30 | Infectious Disease Research Institute | Sintetični glukopiranozil-lipidni adjuvansi in cepivni sestavki, ki jih vsebujejo |
| HRP20161234T1 (hr) | 2009-10-07 | 2016-12-02 | Uvic Industry Partnerships Inc. | Cjepiva koja sadrže toplinski osjetljive transgene |
| US9181306B2 (en) | 2009-10-16 | 2015-11-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Insertion of foreign genes in rubella virus and their stable expression in a live, attenuated viral vaccine |
| EP3263124A1 (en) | 2009-11-20 | 2018-01-03 | Oregon Health & Science University | Methods for producing an immune response to tuberculosis |
| WO2011112599A2 (en) | 2010-03-12 | 2011-09-15 | The United States Of America, As Represented By The Secretary. Department Of Health & Human Services | Immunogenic pote peptides and methods of use |
| CA2793959C (en) | 2010-03-25 | 2019-06-04 | Oregon Health & Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
| BR112013025799A2 (pt) | 2011-04-08 | 2016-12-20 | Immune Design Corp | método para induzir uma resposta imune em um sujeito, e, preparação |
| CA2832109C (en) | 2011-06-10 | 2021-07-06 | Oregon Health & Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
| RS61594B1 (sr) | 2011-07-18 | 2021-04-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | Postupci i kompozicije za inhibiranje patologije povezane sa poliomavirusom |
| EP2568289A3 (en) | 2011-09-12 | 2013-04-03 | International AIDS Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| US9402894B2 (en) | 2011-10-27 | 2016-08-02 | International Aids Vaccine Initiative | Viral particles derived from an enveloped virus |
| WO2013152352A1 (en) | 2012-04-06 | 2013-10-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Servic | Live, attenuated rubella vector to express vaccine antigens |
| EP2850431B1 (en) | 2012-05-16 | 2018-04-18 | Immune Design Corp. | Vaccines for hsv-2 |
| EP2859011B1 (en) | 2012-06-06 | 2019-12-11 | Bionor Immuno AS | Peptides derived from viral proteins for use as immunogens and dosage reactants |
| ES2631608T3 (es) | 2012-06-27 | 2017-09-01 | International Aids Vaccine Initiative | Variante de la glicoproteína Env del VIH-1 |
| ES2752190T3 (es) | 2012-09-14 | 2020-04-03 | Us Health | Proteína Brachyury, vectores adenovirales que codifican proteína Brachyury y su uso |
| AU2013331328B2 (en) | 2012-10-19 | 2018-05-31 | Bavarian Nordic A/S | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| JP6426706B2 (ja) | 2013-04-18 | 2018-11-21 | イミューン デザイン コーポレイション | がん処置で使用するためのｇｌａ単剤療法 |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| US20150065381A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-05 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel hiv-1 immunogens |
| AU2014329393B2 (en) | 2013-10-04 | 2020-04-30 | Pin Pharma, Inc. | Immunostimulatory HIV Tat derivative polypeptides for use in cancer treatment |
| US10058604B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-08-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| WO2015089469A1 (en) | 2013-12-13 | 2015-06-18 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Multi-epitope tarp peptide vaccine and uses thereof |
| WO2015095770A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Immunogenic jc polyomavirus compositions and methods of use |
| US10174292B2 (en) | 2015-03-20 | 2019-01-08 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| US9931394B2 (en) | 2015-03-23 | 2018-04-03 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| KR20250107975A (ko) | 2015-08-03 | 2025-07-14 | 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 | 브라큐리 결실 돌연변이체, 브라큐리 결실 돌연변이체를 인코딩하는 비-효모 벡터, 및 이들의 용도 |
| EP3454894B1 (en) | 2016-05-10 | 2022-07-27 | Najit Technologies, Inc. | Inactivating pathogens and producing highly immunogenic inactivated vaccines using a dual oxidation process |
| WO2019090138A2 (en) | 2017-11-04 | 2019-05-09 | Board Of Regents Of The Nevada System Of Higher Education, On Behalf Of The University Of Nevada, Reno | Immunogenic conjugates and methods of use thereof |
| EP3891170B1 (en) | 2018-12-04 | 2024-07-31 | The Rockefeller University | Hiv vaccine immunogens |
| EP4103587A1 (en) | 2020-02-14 | 2022-12-21 | Immunor AS | Corona virus vaccine |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3083142A (en) * | 1958-02-27 | 1963-03-26 | Glaxo Group Ltd | Improved swine erysipelas vaccine |
| US3790665A (en) * | 1968-02-23 | 1974-02-05 | Haver Lockhart Labor Inc | Injectable adjuvant,method of preparing same and compositions including such adjuvant |
| US3919411A (en) * | 1972-01-31 | 1975-11-11 | Bayvet Corp | Injectable adjuvant and compositions including such adjuvant |
| GB1502774A (en) * | 1974-06-25 | 1978-03-01 | Nat Res Dev | Immunological preparations |
| US4117113A (en) * | 1974-06-25 | 1978-09-26 | National Research Development Corporation | Immunological preparations |
| US4772466A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-20 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Vaccines comprising polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| US4770874A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-13 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| JPS6147500A (ja) * | 1984-08-15 | 1986-03-07 | Res Dev Corp Of Japan | キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法 |
| US4707443A (en) * | 1985-04-19 | 1987-11-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Soluble interleukin-2 receptor as a disease indicator and a method of assaying the same |
| EP0289550B1 (en) * | 1986-10-20 | 1996-04-10 | Chiron Corporation | Vaccine for use in the therapeutic treatment of hsv |
| US4778784A (en) * | 1987-01-07 | 1988-10-18 | Baylor College Of Medicine | Cyclic peptide and method of use for inducing an immunological response to hepatitis B virus |
| US4963354A (en) * | 1987-01-21 | 1990-10-16 | Genentech, Inc. | Use of tumor necrosis factor (TNF) as an adjuvant |
| IL162181A (en) * | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
| JPH0832638B2 (ja) * | 1989-05-25 | 1996-03-29 | カイロン コーポレイション | サブミクロン油滴乳剤を含んで成るアジュバント製剤 |
| EP0405315B1 (en) * | 1989-06-30 | 1995-08-23 | American Cyanamid Company | Use of a phagocyte-activating agent : LPS or IL-2 for the manufacture of a medicament for treating staphylococcus aureus infection in cows |
| AU1025692A (en) * | 1991-02-06 | 1992-08-13 | Ciba-Geigy Ag | Novel chimeric antiidiotypic monoclonal antibodies |
-
1992
- 1992-07-24 IL IL102639A patent/IL102639A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 WO PCT/US1992/006193 patent/WO1993001831A1/en not_active Ceased
- 1992-07-24 US US07/919,787 patent/US5585103A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 CZ CZ1994150A patent/CZ288048B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 JP JP50307193A patent/JP3939746B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-24 AT AT92917479T patent/ATE166578T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 DK DK92917479T patent/DK0596032T4/da active
- 1992-07-24 DE DE69225710T patent/DE69225710T3/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-24 HU HU9400202A patent/HU220295B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 MX MX9204376A patent/MX9204376A/es not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 RO RO94-00094A patent/RO116459B1/ro unknown
- 1992-07-24 ES ES92917479T patent/ES2117052T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 RU RU94038046/14A patent/RU2129439C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 IE IE243692A patent/IE922436A1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 KR KR1019940700218A patent/KR100198868B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-24 SK SK89-94A patent/SK282920B6/sk unknown
- 1992-07-24 PH PH44711A patent/PH30906A/en unknown
- 1992-07-24 EP EP92917479A patent/EP0596032B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 CA CA002113720A patent/CA2113720A1/en not_active Abandoned
- 1992-07-24 AU AU24338/92A patent/AU666127B2/en not_active Ceased
- 1992-07-24 BR BR9206310A patent/BR9206310A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-07-27 ZA ZA925614A patent/ZA925614B/xx unknown
- 1992-08-27 TW TW081105966A patent/TW349867B/zh not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-01-21 NO NO19940218A patent/NO317203B1/no unknown
- 1994-01-24 BG BG98410A patent/BG62240B1/bg unknown
- 1994-01-24 FI FI940335A patent/FI108114B/fi active
- 1994-01-24 OA OA60461A patent/OA09880A/en unknown
-
1995
- 1995-05-24 US US08/449,728 patent/US6270769B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-22 HU HU95P/P00339P patent/HU211299A9/hu unknown
-
2001
- 2001-06-05 FI FI20011187A patent/FI109335B/fi active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RO116459B1 (ro) | Compozitie imunogena | |
| RU2201253C2 (ru) | Микрофлюидизированная композиция для индукции специфичного цитотоксического т-лимфоцитного иммунного ответа и ее использование для лечения заболеваний | |
| US6197311B1 (en) | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses | |
| KR100478617B1 (ko) | 세포독성t-림프구반응을유도하는방법 |