RU2499606C2 - Применение mva (модифицированный вирус коровьей оспы анкара) для лечения рака простаты - Google Patents
Применение mva (модифицированный вирус коровьей оспы анкара) для лечения рака простаты Download PDFInfo
- Publication number
- RU2499606C2 RU2499606C2 RU2010115220/15A RU2010115220A RU2499606C2 RU 2499606 C2 RU2499606 C2 RU 2499606C2 RU 2010115220/15 A RU2010115220/15 A RU 2010115220/15A RU 2010115220 A RU2010115220 A RU 2010115220A RU 2499606 C2 RU2499606 C2 RU 2499606C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mva
- seq
- pap
- psa
- antigen
- Prior art date
Links
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 title claims description 48
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 title claims description 48
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 title abstract 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 title abstract 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 160
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 138
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 138
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 138
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 claims abstract description 129
- 108010043671 prostatic acid phosphatase Proteins 0.000 claims abstract description 127
- 102100035703 Prostatic acid phosphatase Human genes 0.000 claims abstract description 126
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 61
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 claims abstract description 47
- DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N taxane Chemical class C([C@]1(C)CCC[C@@H](C)[C@H]1C1)C[C@H]2[C@H](C)CC[C@@H]1C2(C)C DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N 0.000 claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 19
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 claims abstract 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 80
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 72
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 67
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 61
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 32
- 241001183012 Modified Vaccinia Ankara virus Species 0.000 claims description 31
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 27
- 101001035654 Homo sapiens 28 kDa heat- and acid-stable phosphoprotein Proteins 0.000 claims description 25
- 101000785915 Homo sapiens Arf-GAP with SH3 domain, ANK repeat and PH domain-containing protein 2 Proteins 0.000 claims description 25
- 101000735427 Homo sapiens Poly(A) RNA polymerase, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 25
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 25
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 23
- 101000605534 Homo sapiens Prostate-specific antigen Proteins 0.000 claims description 22
- 101000592517 Homo sapiens Puromycin-sensitive aminopeptidase Proteins 0.000 claims description 21
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 20
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 14
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 12
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 8
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 claims description 7
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 7
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 claims description 7
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 7
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 7
- 108091029795 Intergenic region Proteins 0.000 claims description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 101001001272 Homo sapiens Prostatic acid phosphatase Proteins 0.000 claims description 3
- 108010071652 human kallikrein-related peptidase 3 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000007579 human kallikrein-related peptidase 3 Human genes 0.000 claims description 3
- 230000037452 priming Effects 0.000 claims description 3
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000010658 metastatic prostate carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 36
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 abstract description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 206010072219 Mevalonic aciduria Diseases 0.000 description 180
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 description 123
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 79
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 61
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 22
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 19
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 19
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 18
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 16
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 16
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 14
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 12
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 12
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 11
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 10
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 9
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 9
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 9
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 8
- -1 Dna78 Proteins 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 7
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 7
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 6
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 6
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 6
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 6
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 5
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 4
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 4
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 4
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 4
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 4
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 102100034540 Adenomatous polyposis coli protein Human genes 0.000 description 3
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 101000924577 Homo sapiens Adenomatous polyposis coli protein Proteins 0.000 description 3
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 3
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 3
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 3
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 201000008873 bone osteosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 206010001197 Adenocarcinoma of the cervix Diseases 0.000 description 2
- 208000034246 Adenocarcinoma of the cervix uteri Diseases 0.000 description 2
- 206010004446 Benign prostatic hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108090000368 Fibroblast growth factor 8 Proteins 0.000 description 2
- 102000003956 Fibroblast growth factor 8 Human genes 0.000 description 2
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 2
- 101001062222 Homo sapiens Receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 102100022430 Melanocyte protein PMEL Human genes 0.000 description 2
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 2
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 101710120463 Prostate stem cell antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100036735 Prostate stem cell antigen Human genes 0.000 description 2
- 208000004403 Prostatic Hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 206010056342 Pulmonary mass Diseases 0.000 description 2
- 101001035657 Rattus norvegicus 28 kDa heat- and acid-stable phosphoprotein Proteins 0.000 description 2
- 102100029165 Receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells Human genes 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 201000006662 cervical adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 108010002382 pilose antler peptide Proteins 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 208000026423 prostatic infection Diseases 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 3-[6-[4-(trifluoromethoxy)anilino]-4-pyrimidinyl]benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC(C=2N=CN=C(NC=3C=CC(OC(F)(F)F)=CC=3)C=2)=C1 WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800000504 3C-like protease Proteins 0.000 description 1
- 102100033350 ATP-dependent translocase ABCB1 Human genes 0.000 description 1
- 101100347635 Acanthamoeba castellanii MIC gene Proteins 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 102100036464 Activated RNA polymerase II transcriptional coactivator p15 Human genes 0.000 description 1
- 102100021305 Acyl-CoA:lysophosphatidylglycerol acyltransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 1
- 102000052587 Anaphase-Promoting Complex-Cyclosome Apc3 Subunit Human genes 0.000 description 1
- 108700004606 Anaphase-Promoting Complex-Cyclosome Apc3 Subunit Proteins 0.000 description 1
- 102100035526 B melanoma antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100021663 Baculoviral IAP repeat-containing protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 1
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100024217 CAMPATH-1 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010065524 CD52 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100022002 CD59 glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- 101150108242 CDC27 gene Proteins 0.000 description 1
- MUJJVOYNTCTXIC-UHFFFAOYSA-N CNC(=O)c1ccc2-c3c(C)c(nn3CCOc2c1)-c1ncnn1-c1ccc(F)cc1F Chemical compound CNC(=O)c1ccc2-c3c(C)c(nn3CCOc2c1)-c1ncnn1-c1ccc(F)cc1F MUJJVOYNTCTXIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150071146 COX2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100114534 Caenorhabditis elegans ctc-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 101100507655 Canis lupus familiaris HSPA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100024423 Carbonic anhydrase 9 Human genes 0.000 description 1
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 1
- 102000004091 Caspase-8 Human genes 0.000 description 1
- 102100026548 Caspase-8 Human genes 0.000 description 1
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 description 1
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 108010066551 Cholestenone 5 alpha-Reductase Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102100025680 Complement decay-accelerating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100030886 Complement receptor type 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100032768 Complement receptor type 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100037364 Craniofacial development protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010025464 Cyclin-Dependent Kinase 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000009508 Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor p16 Human genes 0.000 description 1
- 108010009392 Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor p16 Proteins 0.000 description 1
- 102100036252 Cyclin-dependent kinase 4 Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 101100216227 Dictyostelium discoideum anapc3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 101150049307 EEF1A2 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102400000102 Eosinophil granule major basic protein Human genes 0.000 description 1
- 102000007317 Farnesyltranstransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010007508 Farnesyltranstransferase Proteins 0.000 description 1
- 108091072337 GAGE family Proteins 0.000 description 1
- 102000040452 GAGE family Human genes 0.000 description 1
- 101710113436 GTPase KRas Proteins 0.000 description 1
- 102100039788 GTPase NRas Human genes 0.000 description 1
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 108010062347 HLA-DQ Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000018932 HSP70 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010027992 HSP70 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710165610 Heat-stable 19 kDa antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100024025 Heparanase Human genes 0.000 description 1
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 1
- 101001042227 Homo sapiens Acyl-CoA:lysophosphatidylglycerol acyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000874316 Homo sapiens B melanoma antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101100165850 Homo sapiens CA9 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000897400 Homo sapiens CD59 glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000856022 Homo sapiens Complement decay-accelerating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000727061 Homo sapiens Complement receptor type 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000941929 Homo sapiens Complement receptor type 2 Proteins 0.000 description 1
- 101100066427 Homo sapiens FCGR1A gene Proteins 0.000 description 1
- 101000744505 Homo sapiens GTPase NRas Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001014223 Homo sapiens MAPK/MAK/MRK overlapping kinase Proteins 0.000 description 1
- 101000620359 Homo sapiens Melanocyte protein PMEL Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000961414 Homo sapiens Membrane cofactor protein Proteins 0.000 description 1
- 101000628547 Homo sapiens Metalloreductase STEAP1 Proteins 0.000 description 1
- 101000623901 Homo sapiens Mucin-16 Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101000693231 Homo sapiens PDZK1-interacting protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001091365 Homo sapiens Plasma kallikrein Proteins 0.000 description 1
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000880770 Homo sapiens Protein SSX2 Proteins 0.000 description 1
- 101000877404 Homo sapiens Protein enabled homolog Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000934341 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD5 Proteins 0.000 description 1
- 101000626112 Homo sapiens Telomerase protein component 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000801433 Homo sapiens Trophoblast glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101000597785 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6B Proteins 0.000 description 1
- 241000681881 Human mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102100020793 Interleukin-13 receptor subunit alpha-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100034872 Kallikrein-4 Human genes 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 1
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100031520 MAPK/MAK/MRK overlapping kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010076557 Matrix Metalloproteinase 14 Proteins 0.000 description 1
- 102000051089 Melanotransferrin Human genes 0.000 description 1
- 108700038051 Melanotransferrin Proteins 0.000 description 1
- 108010047230 Member 1 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 1
- 102100039373 Membrane cofactor protein Human genes 0.000 description 1
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 description 1
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 description 1
- 102100026712 Metalloreductase STEAP1 Human genes 0.000 description 1
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 1
- 102100023123 Mucin-16 Human genes 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 101000616619 Mus musculus Puromycin-sensitive aminopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 241000186362 Mycobacterium leprae Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 102100029438 Nitric oxide synthase, inducible Human genes 0.000 description 1
- 101710089543 Nitric oxide synthase, inducible Proteins 0.000 description 1
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 1
- 108010077077 Osteonectin Proteins 0.000 description 1
- 102000009890 Osteonectin Human genes 0.000 description 1
- 101150073131 PAP gene Proteins 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 102100025648 PDZK1-interacting protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108060006580 PRAME Proteins 0.000 description 1
- 102000036673 PRAME Human genes 0.000 description 1
- 101150000187 PTGS2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150071808 PTHLH gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010022233 Plasminogen Activator Inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100039418 Plasminogen activator inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710194807 Protective antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100035093 Protein enabled homolog Human genes 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 108050003189 SH2B adapter protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 1
- 101710173694 Short transient receptor potential channel 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100024040 Signal transducer and activator of transcription 3 Human genes 0.000 description 1
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 1
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 102100025244 T-cell surface glycoprotein CD5 Human genes 0.000 description 1
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 1
- 101710109927 Tail assembly protein GT Proteins 0.000 description 1
- 102100024553 Telomerase protein component 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 102400001320 Transforming growth factor alpha Human genes 0.000 description 1
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 description 1
- 102100033579 Trophoblast glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- 102100035284 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6B Human genes 0.000 description 1
- 102100039094 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 102100027244 U4/U6.U5 tri-snRNP-associated protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710155955 U4/U6.U5 tri-snRNP-associated protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000008649 adaptation response Effects 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 238000011224 anti-cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008349 antigen-specific humoral response Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000009827 complement-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 1
- 108010048134 estramustine-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 108020005243 folate receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000006815 folate receptor Human genes 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 108010066264 gastrin 17 Proteins 0.000 description 1
- GKDWRERMBNGKCZ-RNXBIMIWSA-N gastrin-17 Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 GKDWRERMBNGKCZ-RNXBIMIWSA-N 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000007773 growth pattern Effects 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 108010037536 heparanase Proteins 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 108040003607 interleukin-13 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 244000000056 intracellular parasite Species 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 108010024383 kallikrein 4 Proteins 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 101800000607 p15 Proteins 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 230000020801 protein mannosylation Effects 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 230000033300 receptor internalization Effects 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 101150050955 stn gene Proteins 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 101150047061 tag-72 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001193—Prostate associated antigens e.g. Prostate stem cell antigen [PSCA]; Prostate carcinoma tumor antigen [PCTA]; PAP or PSGR
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001193—Prostate associated antigens e.g. Prostate stem cell antigen [PSCA]; Prostate carcinoma tumor antigen [PCTA]; PAP or PSGR
- A61K39/001194—Prostate specific antigen [PSA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/023—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a poxvirus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/04—Uses of viruses as vector in vivo
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/60—Vector systems having a special element relevant for transcription from viruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к композициям, наборам, способам профилактики и терапии рака с использованием рекомбинантных вирусов MVA (модифицированный вирус коровьей оспы Анкара), кодирующих антигены, ассоциированные с опухолью: PSA (простато-специфический антиген) и РАР (простатическая кислая фосфатаза). Данные рекомбинантные вирусы MVA способны индуцировать В- и Т-клеточные ответы. Заявленные рекомбинантые модифицированные вирусы эффективны в профилактике и терапии рака. Также рекомбинантные вирусы MVA можно применять в комбинации с таксаном. 5 н. и 18 з.п. ф-лы, 27 ил., 6 пр.
Description
Данное изобретение относится к профилактике и лечению раковых заболеваний, конкретно рака простаты, с использованием вирусов MVA, кодирующих антигены, ассоциированные с опухолью, конкретно простато-специфический антиген (PSA) и простатическую кислую фосфатазу (РАР).
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Модифицированный вирус коровьей оспы Анкара (MVA) является родственным вирусу коровьей оспы, члену рода Orthopoxvirus в семействе Poxviridae. MVA генерировали 516 последовательными пассажами вируса коровьей оспы (CVA) штамма Анкара на фибробластах куриного эмбриона (для обзора смотрите Mayr, A., et al. Infection 3:6-14 (1975)). В результате этих долговременных пассажей геном образующегося вируса MVA имел делеции примерно 31 т.п.о. его геномной последовательности и, следовательно, был описан как имеющий репликацию, в значительной степени органиченную клетками-хозяевами - клетками птиц (Meyer, H. et al., J. Gen. Virol. 72:1031-1038 (1991)). В целом ряде животных моделей было показано, что образующийся MVA был в значительной степени авирулентным (Meyr, А. & Danner, К., Dev. Biol. Stand. 41:225-34 (1978)). Кроме того, это штамм MVA протестировали в клинических испытаниях в качестве вакцины для иммунизации против человеческой натуральной оспы (Mayr et al., Zbl. Bakt. Hyg. I, Abt. Org. В 167:375-390 (1987); Stickl et al., Dtsch. med. Wschr. 99:2386-2392 (1974)). Эти исследования включали свыше 120000 человек, включая пациентов, подверженных высокому риску, и доказали, что по сравнению с вацинами на основе вируса коровьей оспы, MVA имел пониженную вирулентность или инфективность при индукции хорошего специфичного иммунного ответа. В следующие десятилетия MVA преобразовали при помощи генной инженерии для применения в качестве вирусного вектора для экспрессии рекомбинантных генов или в качестве рекомбинантной вакцины (Sutter, G. et al., Vaccine 12:1032-40 (1994)).
Даже несмотря на то, что Mayr et al. продемонстрировали на протяжении 1970 гг., что MVA является высокоаттенуированным и авирулентным у человека и млекопитающих, некоторые исследователи сообщали, что MVA не является полностью аттенуированным в линиях клеток млекопитающих и человека, так как в этих клетках может происходить остаточная репликация (Blanchard et al., J Gen Virol 79:1159-1167 (1998); Carroll & Moss, Virology 238:198-211 (1997); Altenberger, патент США №5185146; Ambrosini et al., J Neurosci Res 55(5);569 (1999)). Предполагается, что результаты, доложенные в этих публикациях, были получены с разными известными штаммами MVA, так как использованные вирусы существенно отличались по их свойствам, особенно по их характеру роста в разных линиях клеток. Такая остаточная репликация является нежелательной по разным причинам, включая соображения безопасности в связи с применением у людей.
Были описаны штаммы MVA, имеющие улучшенные профили безопасности, для разработки более безопасных продуктов, таких как вакцины или лекарственные средства. Смотрите патенты США №6761893 и 6193752. Такие штаммы способны к репродуктивной репликации в клетках и линиях клеток, не являющихся человеческими, особенно в фибробластах куриных эмбрионов (CEF), но не способны к репродуктивной репликации в определенных линиях клеток человека, которые, как известно, обеспечивают репликацию известных штаммов вируса коровьей оспы. Эти линии клеток включают линию клеток человеческих кератиноцитов, HaCat (Boukamp et al. J Cell Biol 106(3):761-71 (1988)), линию клеток человеческого рака шейки матки, HeLa (ATCC No. CCL-2), линию клеток почки человеческого эмбриона, 293 (ЕСАСС No. 85120602) и линию клеток человеческой остеосаркомы кости, 143В (ЕСАСС No. 91112502). Такие вирусные штаммы также не способны к репродуктивной репликации in vivo, например, в определенных мышиных штаммах, таких как трансгенная мышиная модель AGR 129, которая имеет сильно ослабленный иммунитет и является высокочувствительной к реплицирующемуся вирусу. Смотрите патент США №6761893. Был описан один такой штамм MVA и его производные и рекомбинанты, именуемые "MVA-BN®". Смотрите патенты США №6761893 и 6193752.
Каждый из MVA и MVA-BN® был сконструирован для применения в качестве вирусного вектора для экспрессии рекомбинантных генов или в качестве рекомбинантной вакцины. Смотрите, например, Sutter, G. et al., Vaccine 12:1032-40 (1994), патенты США №6761893 и 6193752.
Заболевания, связанные с раком, являются ведущей причинной смертности и заболеваемости во всем мире. Например, оценивается, что только в США один из шести мужчин будет страдать от рака простаты. Кроме того, аутопсические исследования показывают, что значительная доля мужского населения имеет данное заболевание, хотя и на его самых ранних, незлокачественных стадиях, уже к возрасту 30 лет. Смотрите, например, Taichman et al., JCI 117(9):2351-2361 (2007); Webster et al., J. Clin. Oncol. 23:8262-8269 (2005). Недавние подходы для иммунотерапии рака включали вакцинацию антигенами, ассоциированными с опухолью. В определенных случаях такие подходы включали применение системы доставки для стимуляции иммунных ответов хозяина на антигены, ассоциированные с опухолью. Такие системы доставки включали рекомбинантные вирусные векторы, а также клеточные терапии. Смотрите, например, Harrop et al., Front. Biosci. 11:804-817 (2006); Arlen et al., Semin. Oncol. 32:549-555 (2005); Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (suppl. 2): 14567-14571 (2004). MVA использовали в качестве носителя вакцины для онкофетального антигена 5Т4 в клинических испытаниях у пациентов с метастатическим раком прямой и ободочной кишки, метастатическим раком почки и раком простаты, невосприимчивым к гормонам. Amato, RJ., Expert Opin. Biol. Ther. 7(9):1463-1469 (2007).
К числу известных антигенов, ассоциированных с опухолью, относятся простато-специфический антиген (PSA) и простатическая кислая фосфатаза (РАР). Смотрите, например, Taichman et al., JCI 117(9):2351-23б1 (2007); Webster et al., J. Clin. Oncol. 23:8262-8269 (2005). PSA продуцируется простатой и обнаруживается в повышенном количестве в крови мужчин, которые имеют рак простаты, доброкачественную гиперплазию простаты, или инфекцию, или воспаление простаты. PSA был идентифицирован как мишень для подходов клеточно-опосредованной иммунотерапии для лечения рака. Смотрите, например, McNeel, D.G., Curr. Opin. Urol. 17:175-181 (2007); Nelson W.G., Curr. Opin. Urol. 17:.157-167 (2007). PAP является ферментом, измеряемым в крови, уровни которого могут быть повышенными у пациентов с раком простаты, который распространился или метастазировал где-либо. РАР не увеличивается, если опухоль не распространилась вовне анатомической капсулы простаты, либо путем локализованной инвазии, либо удаленного метастаза. Следовательно, этот простатический опухолевый антиген исследуется как антиген-мишень в нескольких испытаниях человеческой вакцины, причем некоторые из них имеют доказательство клинической пользы. Смотрите, например, McNeel, D.G., Curr. Opin. Urol. 17:175-181 (2007); Waeckerle-Men et al., Cancer Immunol. Immunother. 66:811-821 (2006); Machlenkin et al. Cancer Immunol Immunother. 56(2):217-226 (2007).
Вакцины, содержащие PAP, генерировали с использованием рекомбинантного вируса коровьей оспы, очищенной РАР, ДНК вакцин и дендритных клеток, загруженных антигенами. Valone et al., The Cancer Journal 7:
Suppl 2:S53-61 (2001); Fong et al., J. Immunol. 2001 Dec 15;167(12):7150-6; Fong et al., J. Immunol. 159(7):3,113-7 (1997); Johnson et al., Vaccine 24(3);293-303 (2006); Johnson et al., Cancer Immunol Immunother. 56(6):885-95 (2007). В одном исследовании, когда дендритные клетки, испульсно меченые PAP-GM-CSF, инъецировали крысам, не было обнаружено антител к PAP. (Valone et al. at S55). В другом исследовании введение рекомбинантного вируса коровьей оспы, содержащего гены, кодирующие крысиную РАР или человеческую РАР, не генерировало измеримый антительный ответ к крысиной или человеческой РАР (Fong et al. (1997) at 3116-7). В другом исследовании РАР-специфичный IgG мог быть определен в сыворотке животных, иммунизированных белком hPAP, а также у животных, которые получили вакцинацию вирусом коровьей оспы, кодирующим человеческую РАР, с последующим введением белка hPAP в качестве бустер-иммунизации, но не у животных, дважды иммунизированных вирусом коровьей оспы, кодирующим человеческую РАР (Johnson et al. (2007) at 890).
Активная иммунотерапия рака основана на индукции иммунного ответа против опухолевых клеток у раковых пациентов. Индукция как гуморальных, так и клеточных компонентов адаптивного иммунитета против широкого спектра антигенов, ассоциированных с опухолью (ТАА), и сопутствующая активация компонентов врожденного иммунитета являются существенными для максимальной эффективности активного иммунотерапевтического продукта. Конкретно считается, что адаптивный иммунитет Типа 1 или Th1, характеризующийся индукцией антигенспецифичных IFNγ-продуцирующих цитотоксичных Т-клеток (Т-клетки CD8), является важным для противораковой иммунотерапии.
Несмотря на недавние успехи в лечении рака, рак простаты остается второй ведущей причиной смерти среди раковых пациентов в Америке. Таким образом, необходимы терапевтические подходы, которые могли бы лучше ослабить данное заболевание путем нацеливания на многие аспекты роста опухоли и образования метастазов.
Таксаны, такие как паклитаксел и доцетаксел, использовали в качестве химиотерапевтических агентов для раковых пациентов. Смотрите, например, Tannock et al., N. Engl. J. Med. 351:1502-1512 (2004). Химиотерапию таксанами объединяли с разными обработками противоопухолевыми вакцинами, что приводило к разнообразным результатам. Смотрите Chu et al., J. Immunotherapy 29:367-380 (2006); Machiels et al., Cancer Res. 61:3689-3697 (2001); Prell et al., Cancer Immunol. Immunother. 55: 1285-1293 (2006); Arlen et al., Clinical Breast Cancer 7:176-179 (2006); и Arlen et al., Clinical Cancer Res. 12:1260-1269 (2006). Обзор комбинации противораковых вакцин с химиотерапиями сделан у Chong et al., Expert Opin. Pharmacother. 6:1-8 (2005); Emens et al., Endocrine-Related Cancer 12:1-17 (2005); и McNeel, D.G., Curr. Opin. Urol. 17:175-181 (2007).
Основываясь на вышеуказанном, в данной области существует потребность в реагентах и способах для противораковой терапии.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Данное изобретение охватывает способы, реагенты и наборы для профилактики рака и для лечения раковых пациентов как с первичными опухолями, так и с метастазами рака.
Данное изобретение охватывает способ лечения ракового пациента-человека, включающий введение данному пациенту рекомбинантного MVA, кодирующего полипептид, содержащий человеческий простато-специфический антиген (PSA), и полипептид, содержащий антиген человеческой простатической кислой фосфатазы (РАР). В одном воплощении MVA представляет собой MVA-BN. В одном воплощении вирус MVA содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2. В одном воплощении антиген PSA и антиген РАР вставлены в межгенную область 014L/015L MVA. В определенных воплощениях раковое заболевание представляет собой рак простаты или метастаз рака простаты.
В одном воплощении рекомбинантный MVA вводят перед введение дозы таксана, уничтожающей опухолевые клетки. В одном воплощении рекомбинантный MVA вводят в то же самое время, что и дозу таксана, уничтожающую опухолевые клетки. В одном воплощении рекомбинантный MVA вводят после дозы таксана, уничтожающей -опухолевые клетки. В предпочтительных воплощениях таксаном является доцетаксел или паклитаксел.
Данное изобретение охватывает наборы для профилактики рака простаты, содержащие рекомбинантный MVA, кодирующий полипептид, содержащий человеческий антиген PSA, и полипептид, содержащий человеческий антиген РАР, и инструкции по введению рекомбинантного MVA до определения рака простаты.
Данное изобретение охватывает наборы для лечения рака простаты, содержащие рекомбинантный MVA, кодирующий полипептид, содержащий человеческий антиген PSA, и полипептид, содержащий человеческий антиген РАР, и инструкции по введению рекомбинантного MVA пациенту с раком простаты.
Данное изобретение охватывает наборы для лечения ракового пациента, содержащие рекомбинантный MVA, кодирующий полипептид, содержащий человеческий антиген PSA, и полипептид, содержащий человеческий антиген РАР, и инструкции по введению рекомбинантного MVA до, в то же самое время или после лечения дозой таксана, уничтожающей опухолевые клетки.
Данное изобретение охватывает рекомбинантный вирус MVA, экспрессирующий полипептид, содержащий человеческий антиген РАР. В одном воплощении данный вирус MVA содержит SEQ ID NO:2. В одном воплощении MVA представляет собой MVA-BN.
Данное изобретение охватывает рекомбинантный вирус MVA, экспрессирующий полипептид, содержащий человеческий антиген PSA, и полипептид, содержащий человеческий антиген РАР. В одном воплощении данный вирус MVA содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1. В одном воплощении данный вирус MVA содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:2. В одном воплощении MVA представляет собой MVA-BN.
Данное изобретение охватывает иммуногенную композицию, содержащую рекомбинантный вирус MVA, кодирующий полипептид, содержащий человеческий антиген РАР, где данная иммуногенная композиция индуцирует В-клеточные и Т-клеточные иммунные ответы против РАР при введении хозяину.
Данное изобретение охватывает иммуногенную композицию, содержащую рекомбинантный вирус MVA, кодирующий полипептид, содержащий человеческий антиген РАР, где данная иммуногенная композиция индуцирует антитела против РАР при введении хозяину. В одном воплощении данный вирус MVA содержит SEQ ID NO:2.
Данное изобретение охватывает иммуногенную композицию, содержащую рекомбинантный вирус MVA, кодирующий полипептид, содержащий человеческий антиген PSA, и полипептид, содержащий человеческий антиген РАР, где данная иммуногенная композиция индуцирует В-клеточные и Т-клеточные иммунные ответы против PSA и РАР при введении хозяину.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Фиг.1А-Б. Схематические карты генома MVA-BN®. На 1А показаны положения шести сайтов делеции в геноме MVA-BN®: заштрихованные отрезки и буквы (от А до О) идентифицируют фрагменты расщепления рестрикционным ферментом HindIII, а положения и размеры последовательностей CVA, которые отсутствуют в MVA-BN®, показаны на стрелках. На 1Б показаны рестрикционные фрагменты Hindlll (буквы от А до О) и сайт IGR 014L/015L, используемый для генерации MVA-BN-PRO.
Фиг.2. Схематическое представление вируса MVA-BN-PRO. Карта генома MVA-BN® (карта рестрикции Hindlll, указано буквами А-O), описывающая рекомбинантную вставку, клонированную в межгенной области 014L/015L: гены PSA и РАР, каждый из которых находится под контролем промотора ATI вируса коровьей оспы (ATI).
Фиг.3А-Б. Определение РАР (А) и PSA (Б) в супернатанте культур клеток СТ26, инкубируемых с MVA-BN-PRO. Клетки СТ26 в плотности 6×105 клеток на лунку (темные квадраты и треугольники) или клетки 6Е4 (серые квадраты) инфицировали либо MVA-BN-PRO (квадраты), либо MVA-BN® (треугольники) при указанной множественности заражения (MOI). Через 24 часа супернатанты клеток собирали и уровни белков РАР и PSA измеряли ферментативным анализом РАР и ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ) PSA, соответственно.
Фиг.4А-Б. Антительные ответы против PSA (А) и против РАР (Б) у мышей, обработанных MVA-BN-PRO. Животных иммунизировали три раза (сутки 1, 15 и 29) либо MVA-BN-PRO (белые квадраты), либо MVA-BN® (черные квадраты). Пробы крови брали до обработки, в сутки 14, 28 и 42. Титры представляют собой обратную величину последнего разведения с ОП (оптическая плотность) по меньшей мере в 2 раза большей, чем фон (сыворотка в том же самом разведении от животных, обработанных TBS). Титры, показанные как ноль, были отрицательными при наименьшем протестированном разведении сыворотки (1:50).
Фиг.5А-Б. Т-клеточные ответы против PSA и против РАР у мышей, обработанных MVA-BN-PRO. Спленоциты от животных, иммунизированных MVA-BN-PRO (А) и контрольных животных, (иммунизированных) TBS (Б), инкубировали с последовательностями OPL из РАР (серые квадраты), PSA (белые квадраты) или HER2 (черные квадраты) в указанных концентрациях. Пятна, указывающие на IFN-γ-продуцирующие Т-клетки, подсчитывали с использованием ImmunoSpot Analyzer. Средние значения от лунок в тройной повторности и стандартное отклонение представлены для каждой протестированной концентрации OPL.
Фиг.6А-Б. Т-клеточный вклад CD4 и CD8 в MVA-BN-PRO-опосредованные Т-клеточные ответы. Животных иммунизировали MVA-BN-PRO четыре раза (сутки 1, 15, 29 и 49), и спленоциты собирали через шесть суток после последней обработки, спленоциты, обедненные CD8 (А), и спленоциты, обедненные CD4 (Б), инкубировали с последовательностями OPL из РАР (серые квадраты), PSA (белые квадраты) или HER2 (черные квадраты) в указанных концентрациях. Данный анализ проводили, как описано для Фиг.5.
Фиг.7А-Е. Профилактическое предупреждение роста опухоли у мышей, обработанных MVA-BN-PRO. Животных обрабатывали 3 раза с 3-х недельными интервалами указанными TCID50 (средняя цитопатогенная доза) вируса, разведенного в TBS. Через шесть недель после третьей обработки животных внутрикожно заражали 1×105 опухолевых клеток Е5, экспрессирующих PSA. Рост опухоли измеряли дважды в неделю, используя циркуль. Объем опухоли рассчитывали как: (L×W2)/2 (Длина × Ширину2)/2).
7А-7Д: рост опухоли у отдельных мышей представлен для каждой экспериментальной группы. 7Е: средние размеры опухолей и стандартное отклонение представляли для всех экспериментальных групп.
Фиг.8. Предупреждение роста опухоли у мышей, обработанных MVA-BN-PRO. Сравнение измерений в сутки 29 в двух отдельных экспериментах. Животных обрабатывали три раза с 2-недельными интервалами (серые символы) 2×106 TCID50 указанного вируса, разведенного в TBS. Через две недели после последней обработки животных внутрикожно заражали 1×105 опухолевых клеток Е5, экспрессирующих PSA. Рост опухоли измеряли дважды в неделю, используя циркуль. Объем опухоли рассчитывали как: (L×W2)/2. Точки показывают объемы опухолей для каждого животного в сутки 29 после имплантации опухоли. Для сравнения данные от соответствующих групп отдельного эксперимента, описанного на Фиг.7, представлены черными символами. Оба представленных здесь эксперимента проводили при аналогичных условиях за исключением длительности интервалов обработки (3-недельный интервал по сравнению с 2-недельным) и времени имплантации опухолевых клеток (шесть недель по сравнению с двумя неделями после третьей обработки).
Фиг.9А-Е. Терапевтическое подавление роста опухоли у мышей, обработанных MVA-BN-PRO. Мышей BALB/c (10 животных в каждой группе) заражали клетками Е6 (1×105 клеток, инъецированных внутрикожно) в сутки 1 и обрабатывали подкожно в сутки 1, 8 и 15 одним из TBS (Д), MVA-BN® (5×106 или 5×107 TCID50; А и Б) или MVA-BN-PRO (5×106 или 5×107 TCID50; В и Г). Мышей умерщвляли в сутки 22. Панели А-Д показывают размеры опухолей отдельных мышей. Средние размеры опухолей и стандартные отклонения для каждой группы показаны на панели Е. Рост опухоли измеряли дважды в неделю, используя циркуль. Объем опухоли рассчитывали как: (L×W2)/2. Указанные погрешности представляют стандартные отклонения (SD).
Фиг.10. Подавление РАР-позитивного опухолевого роста у мышей, обработанных MVA-BN-PRO. Мышей BALB/c (10 животных в каждой группе) заражали СТ26-РАР (5×105 клеток, инъецированных внутривенно) в сутки 1 и обрабатывали внутрибрюшинно в сутки 4 одним из TBS, MVA-BN (5×107 TCID50) или MVA-BN-PRO (2×106 и 5×107 TCID50). Мышей умерщвляли в сутки 14 и взвешивали их легкие. Точки на графике представляют массу легкого отдельных мышей. Горизонтальные отрезки показывают среднюю массу легкого для каждой группы.
Фиг.11. Ответы антител против PSA и против РАР, индуцированные у мышей BALB/c или C57BL/6. Самцов мышей BALB/c и C57BL/6 (5 животных в каждой группе) иммунизировали в сутки 1, 15 и 29 5×107 TCID50 MVA-BN-PRO. Пробы крови брали в сутки 42, и последовательные разведения объединенных сывороток анализировали на присутствие IgG против PSA или против РАР посредством ELISA. Титры рассчитывали как обратное значение последнего разведения с ОП по меньшей мере в 2 раза большей, чем фон (определенный как сыворотка в том же самом разведении от животных, обработанных TBS). Точки данных для сыворотки с титрами ниже наименьшего протестированного разведения (<125) были произвольно помещены на оси X, расположенной на одно разведение ниже первого разведения анализа (62,5) для графических целей.
Фиг.12. Ответы Т-клеток у пациентов, обработанных MVA-BN-PRO. РВМС (одноядерные клетки периферической крови) из крови пациента J-D-1001 отбирали до обработки (базовый уровень) или после обработки MVA-BN-PRO (ТС3). Клетки инкубировали в течение 40 часов с одним из белка PSA, пептидной библиотеки, перекрывающей PSA (OPL), белка РАР, РАР OPL, пулами пептидов ГКГ (главный комплекс гистосовместимости) Класса I и Класса II, происходящими из антигенов, ассоциированных с опухолью (ТАА), или MVA-BN в концентрации, указанной на графике. Активацию Т-клеток определяли ELISpot (иммуноферментный спот-анализ), измеряя секретируемый IFN-γ. Для каждого условия стимуляции результаты выражены как среднее число клеток, образующих пятна IFN-γ (SFC), на 2×105 РВМС. Значения SFC получали из среднего значения (сигнала) от черырех лунок за вычетом фона.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Рекомбинантный MVA, экспрессирующий человеческие антигены PSA и РАР (MVA-BN-PRO), тестировали в ряде анализов in vitro и in vivo. Экспрессию обоих простато-специфичных антигенов, кодируемых MVA-BN-PRO (PSA и РАР), в эукариотических клетках, инкубируемых с MVA-BN-PRO, оценивали с использованием набора для определения PSA и функционального анализа для фосфатазной активности, соответственно. Анализы ELISA и ELISpot использовали для мониторинга индукции антител против PSA и против РАР и Т-клеточных иммунных ответов у мышей, обработанных MVA-BN-PRO. Противоопухолевую активность MVA-BN-PRO оценивали в PSA-моделях опухоли как в профилактической постановке, так и в терапевтической постановке.
Эти исследования продемонстрировали, что (1) захват MVA-BN-PRO клетками in vitro приводит к экспрессии и РАР, и PSA в сходных количествах; (2) обработка мышей MVA-BN-PRO имеет результатом гуморальные анти-PSA и анти-РАР и Тh1 клеточные иммунные ответы, (3) обработка мышей MVA-BN-PRO ингибирует рост PSA (+) опухолей как в профилактических, так и в терапевтических постановках, (4) обработка мышей MVA-BN-PRO ингибирует рост РАР (+) опухолей в терапевтической постановке, (5) у человека обработка MVA-BN-PRO увеличивала уровни как анти-PSA Т-клеток, так и анти-РАР Т-клеток, и (6) обработка MVA-BN-PRO у человека приводила к распространению Т-клеточных ответов на другие опухолевые антигены. Таким образом, MVA-BN-PRO активирует иммунную систему путем запуска антигенспецифичных гуморальных и клеточных ответов ТМ-типа, что приводит к значительной терапевтической активности in vivo против опухолей, экспрессирующих PSA и РАР. Следовательно, MVA-BN-PRO является привлекательной вакциной-кандидатом для иммунотерапии рака простаты у людей.
MVA-BN-PRO является мощным иммуногеном, способным индуцировать защитный противоопухолевый иммунитет, который предотвращает рост опухоли в профилактической постановке и который также подавляет рост сформировавшихся опухолей. Профилактические и терапевтические противоопухолевые активности MVA-BN-PRO были опосредованы анти-PSA-специфичными адаптивными иммунными ответами. Однако адаптивные иммунные ответы были индуцированы против обоих простато-специфичных антигенов, PSA и РАР, кодируемых MVA-BN-PRO. Сопутствующая активация адаптивных ответов против многих опухолевых антигенов позволяет MVA-BN-PRO более эффективно бороться с опухолями и увеличивает потенциал успешного лечения раковых пациентов.
В одном воплощении данное изобретение охватывает применение рекомбинантных вирусов MVA для терапии рака простаты. Рекомбинантные MVA генерируют вставкой гетерологичных последовательностей в вирус MVA. Примерами штаммов вируса MVA, которые являются полезными в воплощении настоящего изобретение на практике, и которые были депонированы согласно требованиям Будапештского соглашения, являются штаммы MVA 572, депонированные в Европейской коллекции культур клеток животных (ЕСАСС), Salisbury (Великобритания) с депозитарным номером ЕСАСС 9401270727 января 1994, и MVA 575, депонированный с номером ЕСАСС 001207077 декабря 2000. MVA-BN®, депонированный 30 августа 2000 в Европейской коллекции культур клеток (ЕСАСС) под номером V00083008 и его производные, являются дополнительными показательными штаммами.
Несмотря на то, что MVA-BN® является предпочтительным из-за его большей безопасности (меньшей компетентности по репликации), все MVA являются подходящими для этого изобретения. Согласно одному воплощению настоящего изобретения штаммом MVA является MVA-BN® и его производные. Смотрите РСТ/ЕР01/13628, который, тем самым, является включенным посредством ссылки.
В определенных воплощениях рекомбинантный MVA экспрессирует антиген, ассоциированный с опухолью. В одном воплощении антигеном, ассоциированным с опухолью, является PSA. В одном воплощении антигеном, ассоциированным с опухолью, является РАР. В предпочтительном воплощении MVA экспрессирует два антигена, ассоциированных с опухолью, предпочтительно антиген PSA и РАР. В одном воплощении два данных антигена, ассоциированных с опухолью, содержат нуклеотидные последовательности SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2. В одном воплощении два данных антигена, ассоциированных с опухолью, экспрессируются из кассеты, содержащей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:3.
В других воплощениях антиген, ассоциированный с опухолью, модифицирован таким образом, чтобы он включал один или более чужеродных эпитопов ТН. Как здесь описано, такие противораковые иммунотерапевтические агенты являются полезными для профилактики и/или лечения рака, включая метастазы рака. Данное изобретение обеспечивает применение таких агентов в схемах первичной/бустерной вакцинации людей и других млекопитающих с иммунизацией, включая пациентов с ослабленным иммунитетом; и в индукции как гуморальных, так и клеточных иммунных ответов, такой как индукция Th1 иммунного ответа в предсуществующем Th2 окружении.
Термин «полипептид» относится к полимеру из двух или более аминокислот, связанных друг с другом пептидными или модифицированными пептидными связями. Данные аминокислоты могут быть встречающимися в природе, а также не встречающимися в природе или химическим аналогом встречающейся в природе аминокислоты. Данный термин также относится к белкам, т.е. к функциональным биомолекулам, содержащим по меньшей мере один полипептид; если они содержат по меньшей мере два полипептида, они могут образовывать комплексы, быть ковалентно связанными или могут быть нековалентно связанными. Полипептид(ы) в белке могут быть гликозилированными и/или липидированными, и/или могут содержать простетические группы.
Термин «неспособный к репродуктивной репликации» в линиях человеческих клеток, таких как линии клеток НаСАТ (Boukamp et al. 1988, J Cell Biol 106(3): 761-71) или HeLa, используется в настоящей заявке, как определено в WO 02/42480. Таким образом, вирус, который «не способен к репродуктивной репликации» в линии клеток, представляет собой вирус, который показывает степень амплификации меньше 1 в этой линии клеток. «Степень амплификации» вируса представляет собой отношение вируса, продуцированного из инфицированной клетки (выход), к количеству, исходно используемому для инфицирования клеток в первом месте (вход). Отношение «1» между выходом и входом определяет амплификационный статус, где количество вируса, продуцированного из инфицированных клеток, является таким же, что и количество, исходно используемое для инфицирования клеток. Согласно одному воплощению настоящего изобретения вирусы, которые «не способны к репродуктивной репликации» в человеческих клеточных линиях, могут иметь степень амплификации 1,0 (среднее значение) или менее, или даже 0,8 (среднее значение) или менее в любой из вышеуказанных человеческих клеточных линий HeLa, HaCat и 143В.
В определенных воплощениях MVA представляет собой MVA-BN®, депонированный 30 августа 2000 года в Европейской коллекции культур клеток (ЕСАСС) под номером V00083008, и описанный в патентах США №6761893 и 6193752. Как описано в этих публикациях патентов, MVA-BN® не подвергается репродуктивной репликации в линиях клеток 293, 143В, HeLa и HaCat. В частности MVA-BN® демонстрирует степень амплификации от 0,05 до 0,2 в линии клеток почки человеческого эмбриона 293. В линии клеток человеческой остеосаркомы кости 143В MVA-BN® демонстрирует степень амплификации от 0,0 до 0,6. MVA-BN® демонстрирует степень амплификации от 0,04 до 0,8 в линии клеток человеческой аденокарциномы шейки матки HeLa, и от 0,02 до 0,8 в линии клеток человеческих кератиноцитов HaCat. MVA-BN® имеет степень амплификации от 0,01 до 0,06 в клетках почки африканской зеленой мартышки (CV1: ATCC No.CCL-70).
Степень амплификации MVA-BN® составляет более 1 в фибробластах куриных эмбрионов (CEF: первичные культуры), как описано в патентах США №6761893 и 6193752. Данный вирус можно легко размножать и амплифицировать в первичных культурах CEF со степенью более 500.
В определенных воплощениях рекомбинантный MVA предсталяет собой производное MVA-BN®. Такие «производные» включают вирусы, демонстрирующие по существу те же самые характеристики репликации, что и депонированный штамм (ЕСАСС No. V00083008), но имеющие отличия в одной или в более чем одной частях его генома. Данные «производные» не обязательно происходят от MVA-BN®. Вирусы, имеющие те же самые «характеристики репликации», что и депонированный вирус, представляют собой вирусы, которые реплицируются с такими же степенями амплификации, что и депонированный штамм, в клетках CEF и в линиях клеток HeLa, HaCat и 143В; и которые показывают аналогичные характеристики репликации in vivo, определенные, например, в трансгенной мышиной модели AGR129.
Данное изобретение охватывает вирусы MVA, которые имеют одно или оба из следующих свойств MVA-BN:
- способность к репродуктивной репликации в фибробластах куриных эмбриона (CEF), но отсутствие способности к репродуктивной репликации в линии клеток человеческих кератиноцитов (НаСаТ), линии клеток почки человеческого эмбриона (293), линии клеток человеческой остеосаркомы кости (143В) и в линии клеток человеческой аденокарциномы шейки матки (HeLa); и
- неспособность реплицироваться в мышиной модели, которая способна продуцировать зрелые В- и Т-клетки, и, как таковая, имеет сильно ослабленный иммунитет и является высокочувствительной к реплицирующемуся вирусу.
В определенных воплощениях MVA представляет собой рекомбинантный вирус коровьей оспы, который содержит дополнительные нуклеотидные последовательности, которые являются гетерологичными по отношению к вирусу коровьей оспы. В некоторых таких воплощениях гетерологичные последовательности кодируют эпитопы, которые индуцируют ответ иммунной системы. Таким образом, в определенных воплощениях рекомбинантный MVA используют для вакцинации против белков или агентов, содержащих данный эпитоп. В предпочтительном воплощении данный эпитоп представляет собой антиген, ассоциированный с опухолью, предпочтительно PSA или РАР. В одном воплощении антиген PSA содержит последовательность SEQ ID NO:1. В одном воплощении антиген РАР содержит последовательность SEQ ID NO:2.
В определенных воплощениях гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты вставлена в несущественную область вирусного генома. В некоторых из этих воплощений гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты вставлена в природный сайт делеции генома MVA, как описано в РСТ/ЕР96/02926. Способы вставки гетерологичных последовательностей в геном вируса оспы известны квалифицированному специалисту в данной области. В определенных воплощениях гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты вставлена в межгенную область генома MVA, как описано в опубликованной заявке на патент США 20050244428. В одном воплощении данной межгенной областью является IGR 014L/015L.
В определенных воплощениях фармацевтические композиции содержат один или более чем один фармацевтически приемлемый и/или одобренный носитель, добавку, антибиотик, консервант, адъювант, разбавитель и/или стабилизатор. Такие добавки, например, включают, но не ограничиваются ими, воду, физиологический раствор, глицерин, этанол, увлажнители или эмульгаторы и забуферивающие рН вещества. Типичными носителями обычно являются большие, медленно метаболизируемые молекулы, такие как белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот, липидные агрегаты или тому подобное.
Для получения вакцин MVA может быть превращен в физиологически приемлемую форму. В определенных воплощениях такое получение основано на опыте в получении вакцин на основе поксвирусов, используемых для вакцинации против натуральной оспы, как описано, например, в Stickl, H. et al., Dtsch. med. Wschr. 99:2386-2392 (1974).
Типичное получение описано ниже. Очищенный вирус с титром 5×108 TCID50/мл, приготовленный в виде препарата в 10 мМ Tris, 140 мМ NaCl, pH 7,4, хранят при -80°С. Для получения доз вакцины, например, 102-108 частиц вируса можно лиофилизировать в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS) в присутствии 2% пептона и 1% человеческого альбумина в ампуле, предпочтительно в стеклянной ампуле. В качестве альтернативы, дозы вакцины можно получать путем ступенчатой сушки замораживанием вируса в препарате. В определенных воплощениях данный препарат содержит дополнительные добавки, такие как маннит, декстран, сахар, глицин, лактоза, поливинилпирролидон или другие добавки, такие как, например, без ограничения ими, антиоксиданты или инертный газ, стабилизаторы или рекомбинантные белки (например человеческий сывороточный альбумин), подходящими для введения in vivo. Ампулу затем запаивают, и ее можно хранить при подходящей температуре, например, от 4°С до комнатной температуры, в течение нескольких месяцев. Однако при отсутствии такой необходимости ампулу предпочтительно хранят при температурах ниже -20°С.
В разных воплощениях, включающих вакцинацию или терапию, лиофилизат растворяют в 0,1-0,5 мл водного раствора, предпочтительно физиологического раствора или Tris буфера, и вводят либо системно, либо местно, т.е. парентеральным, подкожным, внутривенным, внутримышечным, интраназальным, внутрикожным или любым другим путем введения, известным квалифицированному практику. Оптимизация способа введения, дозы и числа введений находится в пределах квалификации и знаний квалифицированного специалиста в данной области.
В определенных воплощениях штаммы ослабленного вируса коровьей оспы являются полезными для индукции иммунных ответов у животных с ослабленным иммунитетом, например, у обезьян (CD4<400/мкл крови), инфицированных SIV (вирус иммунодефицита обезьян), или у людей с ослабленным иммунитетом. Термин «с ослабленным иммунитетом» описывает статус иммунной системы индивидуума, которая демонстрирует лишь неполные иммунные ответы или имеет пониженную эффективность защиты против инфекционных агентов.
Некоторые типичные антигены, ассоциированные с опухолью
В определенных воплощениях у субъекта продуцируется иммунный ответ против полипептидного антигена, ассоциированного с клеткой. В некоторых таких воплощениях полипептидный антиген, ассоциированный с клеткой, представляет собой антиген, ассоциированный с опухолью.
В определенных воплощениях полипептидный антиген, ассоциированный с клеткой, представляет собой антиген на основе собственного белка, отличный от антигена, ассоциированного с опухолью, который относится к другим патологическим процессам, или вирусный антиген, или антигены, происходящие из внутриклеточного паразита или бактерии. В определенных случаях такие антигены, ассоциированные с патогенами, часто являются относительно слабыми иммуногенами (например антигены из микобактерий, таких как Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium leprae, а также из простейших, таких как Plasmodium spp.).
В данной области известны многочисленные антигены, ассоциированные с опухолью. Типичные антигены, ассоциированные с опухолью, включают, без ограничения ими, 5-альфа-редуктазу, альфа-фетопротеин, АМ-1, АРС, April, BAGE, бета-катенин, Всl12, bcr-abl, CA-125, CASP-8/FLICE, катепсины, CD19, CD20, CD21, CD23, CD22, CD33, CD35, CD44, CD45, CD46, CD5, CD52, CD55, CD59, CDC27, CDK4, СЕА, c-myc, Cox-2, DCC, DcR3, E6/E7, CGFR, ЕМВР, Dna78, фарнезилтрансферазу, FGF8b (фактор роста фибробластов 8b), FGF8a, FLK-1/KDR, рецептор фолиевой кислоты, G250, семейство GAGE, гастрин 17, гастрин-рилизинг гормон, GD2/GD3/GM2, GnRH, GnTV, GP1, gp100/Pmel17, gp-100-in4, gp15, gp75ЛРР-1, hCG, гепараназу, Her2/neu, HMTV, Hsp70 (белок теплового шока 70), hTERT, IGFR1, IL-13R (интерлейкин-13Р), iNOS, Ki67, KIAA0205, K-ras, H-ras, N-ras, KSA, LKLR-FUT, семейство MAGE, маммаглобин, MAP17, мелан-A/MART-1, мезотелин, MIC А/В, МТ-ММР, муцин, NY-ESO-1, остеонектин, р15, P170/MDR1, р53, р97/меланотрансферрин, PAI-1, PDGF (фактор роста тромбоцитов), uPA, PRAME, пробазин, прогенипоиентин, PSA, PAP, PSM, RAGE-1, Rb, RCAS1, RCAS1, SART-1, семейство SSX, STAT3, STn, TAG-72, TGF-альфа (фактор роста опухоли-альфа), TGF-бета, тимозин-бета-15, TNF-альфа (фактор некроза опухоли-альфа), ТР1, TRP-2, тирозиназу, VEGF (фактор роста эндотелия сосудов), ZAG, p16INK4 и глутатион-8-трансферазу. Конкретные примеры антигенов, ассоциированных с опухолью, при раке простаты включают, но не ограничиваются ими, PSA, простато-специфичный мембранный антиген (PSMA), РАР и антиген стволовых клеток простаты (PSCA).
Антигены PSA и РАР
Данное изобретение охватывает антигены PSA и РАР, которые являются полноразмерными или фрагментами PSA и РАР. Предпочтительно антигены PSA и РАР являются человеческими. В другом воплощении PSA и/или РАР является крысиным или мышиным. В предпочтительном воплощении антигены PSA и РАР кодируются, соответственно, нуклеотидными последовательностями SEQIDNO:1 и SEQIDNO:2.
В одном воплощении антиген РАР является фрагментом РАР. Предпочтительные фрагменты содержат аминокислоты 181-95, 112-120, 133-152, 155-163, 173-192, 199-213, 228-242, 248-257, 299-307 или 308-322 человеческого РАР. Смотрите Waeckerle-Men et al., Cancer Immunol. Immunother. 55:1524-1533 (2006); Klyushnenkova et al., Prostate 67(10):1019-28 (2007); Matsueda et al., Clin Cancer Res. 11(19 Pt 1):6933-43 (2005); Harada et al., Oncol Rep.12(3):601-7 (2004); Machlenkin et al., Cancer Res. 65(14):6435-6442 (2005); и McNeel et al., Cancer Res. 61(13):5161-7 (2001), которые тем самым являются включенными посредством ссылки. В одном воплощении полипептид содержит один из этих эпитопов. В других воплощениях полипептид содержит 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 этих эпитопов. Каждая из возможных комбинаций этих эпитопов специфически включена.
В определенных воплощениях фрагмент РАР содержит 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325 или 375 последовательных аминокислот человеческого РАР. Фрагменты РАР можно анализировать на сохранение эпитопов с использованием хорошо известных в данной области анализов. Смотрите, например, Klyushnenkova et al., Prostate 67(10):1019-28 (2007); Matsueda et al., Clin Cancer Res. 11(19 Pt 1):6933-43 (2005), которые тем самым являются включенными посредством ссылки.
ДНК, кодирующие эти фрагменты, можно генерировать посредством ПЦР (полимеразная цепная реакция) или другими обычными методиками молекулярной биологии.
В одном воплощении антиген PSA является фрагментом PSA. Предпочтительные фрагменты включают аминокислоты 16-24 или 154-163 человеческого PSA. Смотрите Waeckerle-Men et al., Cancer Immunol. Immunother. 55:1524-1533 (2006); Matsueda et al., Clin Cancer Res. 11(19 Pt 1):6933-43 (2005), которые тем самым являются включенными посредством ссылки. В одном воплощении полипептид содержит один из этих эпитопов. В других воплощениях полипептид содержит оба этих эпитопа.
Фрагменты PSA можно анализировать на сохранение эпитопов с использованием хорошо известных в данной области анализов, таких как сканирование эпитопов. В определенном воплощении фрагмент PSA содержит 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225 или 250 последовательных аминокислот человеческого PSA.
ДНК, кодирующие эти фрагменты, можно генерировать посредством ПЦР или другими обычными методиками молекулярной биологии.
Разные модифицированные полипептидные антигены РАР и PSA и способы можно получить способами, хорошо известными в данной области. Например, можно использовать способы, описанные в патенте США №7005498 и в публикациях заявок на патенты США №2004/0141958 и 2006/0008465, которые тем самым включены посредством ссылки.
Следует рассматривать следующие параметры:
1. Известные и предсказанные эпитопы CTL;
2. Гомологию с родственными белками;
3. Сохранение остатков цистеина;
4. Предсказанные структуры петель, α-спиралей и β-складчатых структур;
5. Потенциальные сайты N-гликозилирования;
6. Предсказание экспонированных и внутренних аминокислотных остатков;
7. Доменная организация.
Области с высокой степенью гомологии с другими родственными белками вероятно являются структурно важными для «общей» третичной структуры и, следовательно, для узнавания антителами, тогда как области с низкой гомологией возможно можно заменить лишь с местными изменениями структуры в качестве последствия.
Остатки цистеина часто участвуют в образовании внутримолекулярных дисульфидных мостиков и, таким образом, участвуют в третичной структуре и не должны заменяться. Областей, для которых предсказано образование альфа-спиральных или бета-складчатых структур, следует избегать в качестве точек вставки чужеродных эпитопов, так как считается, что эти области участвуют в сворачивании белка.
Потенциальные сайты N-гликозилирования следует сохранять, если маннозилирование белка является желательным.
Области, предсказанные (по их гидрофобным свойствам) как внутренние в молекуле, предпочтительно следует сохранять, так как они могли бы участвовать в сворачивании. Напротив, области, экспонированные в раствор, могли бы служить как положения-кандидаты для вставки модельных ТН эпитопов Р2 и Р30.
Наконец, следует принимать во внимание доменную организацию белка из-за ее релевантности для структуры и функции белка.
Эффект модификаций PSA и РАР можно анализировать иммунизациями животных, таких как мыши, для определения эффекта модификаций на гуморальный и клеточный иммунные ответы.
Модифицированные антигены, ассоциированные с опухолью
В определенных воплощениях полипептидный антиген, ассоциированный с клеткой, модифицируют так, что индуцируется ответ CTL (цитотоксический Т-лимфоцит) против клетки, которая презентирует эпитопы, происходящие из полипептидного антигена, на ее поверхности, при презентации в ассоциации с молекулой МНС I класса (главный комплекс гистосовметимости) на поверхности АРС (антигенпрезентирующая клетка). В некоторых таких воплощениях по меньшей мере один первый чужеродный ТН эпитоп при презентации ассоциирован с молекулой МНС II класса на поверхности АРС. В некоторых таких воплощениях антиген, ассоциированный с клеткой, представляет собой антиген, ассоциированный с опухолью.
Типичные АРС, способные к презентации эпитопов, включают дендритные клетки и макрофаги. Дополнительные типичные АРС включают пино- или фагоцитирующие АРС, которые способны одновременно представлять 1) эпитопы CTL, связанные с молекулами МНС I класса, и 2) ТН эпитопы, связанные с молекулами МНС II класса.
В определенных воплощениях модификации PSA и/или РАР осуществляют таким образом, что после введения субъекту индуцируются поликлональные антитела, которые предпочтительно реагируют с PSA и/или с PAP. Такие антитела могли бы атаковать и устранять опухолевые клетки, а также предупреждать развитие метастазов из метастатических клеток. Эффекторный механизм этого противоопухолевого эффекта был бы опосредован комплементом и зависимой от антител клеточной цитотоксичностью. Кроме того, индуцированные антитела также могли бы ингибировать рост раковых клеток посредством ингибирования зависимой от факторов роста олиго-димеризации и интернализации рецепторов. В определенных воплощениях такие модифицированные полипептидные антигены PSA и/или РАР могут индуцировать ответы CTL, направленные против известных и/или предсказанных эпитопов PSA и/или РАР, воспроизводимых опухолевыми клетками. В предпочтительном воплощении антигены PSA и РАР индуцируют В-клеточный и T-клеточный ответ против этих антигенов.
В определенных воплощениях модифицированный полипептидный антиген PSA и/или РАР содержит эпитоп CTL полипептидного антигена, ассоциированного с клеткой, и вариацию, где данная вариация содержит по меньшей мере один эпитоп CTL чужеродного ТН эпитопа. Такие отдельные модифицированные полипептидные антигены PSA и/или РАР, содержащие по меньшей мере один эпитоп CTL и вариацию, содержащую по меньшей мере один эпитоп CTL чужеродного ТН эпитопа, и способы их получения описаны в патенте США №7005498 и в публикациях заявок на патенты США №2004/0141958 и 2006/0008465.
В определенных воплощениях чужеродный ТН эпитоп представляет собой встречающийся в природе «случайный» Т-клеточный эпитоп. Такие случайные Т-клеточные эпитопы являются активными у большой доли индивидуумов видов животных или человеческого населения. В определенных воплощениях вакцина содержит такие случайные Т-клеточные эпитопы. В некоторых таких воплощениях применение случайных Т-клеточных эпитопов уменьшает потребность в очень большом числе разных эпитопов CTL в той же самой вакцине. Типичные случайные эпитопы Т-клеток включают, но не ограничиваются, эпитопами из столбнячного токсина, включая, но не ограничиваясь, эпитопами Р2 и Р30 (Panina-Bordignon et al., 1989), дифтерийного токсина, гемагглютинина (НА) вируса гриппа и антигена CS Р.falciparum.
Дополнительные случайные эпитопы Т-клеток включают пептиды, способные к связыванию большой доли молекул HLA-DR, кодируемых разными HLA-DR. Смотрите, например, WO 98/23635 (Frazer IH et al., assigned to The University of Queensland); Southwood S et al., J. Immunol. 160:3363-3373 (1998); Sinigaglia F et al., Nature 336:778 780 (1988); Rammensee HG et al., Immunogenetics 41(4):178-228 (1995); Chicz RM et al., J. Exp. Med 178:27-47 (1993); Hammer J et al., Cell 74:197-203 (1993); и Falk К et al., Immunogenetics 39:230-242 (1994). Последняя ссылка также касается лигандов HLA-DQ и -DP. Все эпитопы, перечисленные в этих ссылках, являются релевантными в качестве природных эпитопов-кандидатов, как здесь описано, как и эпитопы, которые имеют общие с ними мотивы.
В некоторых других воплощениях случайный эпитоп Т-клетки представляет собой искусственный эпитоп Т-клетки, который способен связываться с большей долей гаплотипов. В некоторых таких воплощениях искусственный эпитоп Т-клетки представляет собой общий эпитоп DR пептида ("PADRE"), как описано в WO 95/07707 и в соответствующей статье Alexander J etal., Immunity 1:751-761 (1994).
Рекомбинантный MVA
Данное изобретение охватывает рекомбинантный вирус MVA, экспрессирующий полипептид, содержащий антиген РАР. Предпочтительно вирус MVA экспрессирует человеческий антиген РАР. В одном воплощении вирус MVA экспрессирует крысиный или мышиный - антиген РАР. В одном воплощении вирус MVA кодирует полноразмерный антиген РАР. В предпочтительном воплощении данный MVA содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:2.
В другом воплощении MVA кодирует фрагмент РАР. Фрагменты РАР можно анализировать на сохранение эпитопов, используя хорошо известные в данной области анализы. Смотрите, например, Klyushnenkova et al., Prostate 67(10):1019-28 (2007); Matsueda et at., Clin Cancer Res. 11(19 Pt 1):6933-43 (2005); Machlenkin et al., Cancer Res. 65(14):6435-6442 (2005), которые тем самым являются включенными посредством ссылки. В определенном воплощении фрагмент РАР содержит 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325 или 375 последовательных аминокислот человеческого РАР.
В предпочтительных воплощениях MVA кодирует полипептид, содержащий аминокислоты 81-95, 112-120, 133-152, 155-163, 173-192, 199-213, 228-242, 248-257, 299-307 или 308-322 человеческого РАР. Смотрите Waeckerle-Men et al., Cancer Immunol. Immunother. 55:1524-1533 (2006); Klyushnenkova et al., Prostate 67(10): 1019-28 (2007); Matsueda et al., Clin Cancer Res. 11(19 Pt 1): 6933-43 (2005); Harada et al., Oncol Rep.12(3): 601-7 (2004); Machlenkin et al., Cancer Res. 65(14): 6435-6442 (2005); и McNeel et al., Cancer Res. 61(13): 5161-7 (2001), которые тем самым являются включенными посредством ссылки. В одном воплощении данный полипептид содержит один из этих эпитопов. В других воплощениях данный полипептид содержит 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 из этих эпитопов. Конкретно рассматривается каждая из возможных комбинаций этих эпитопов.
Данное изобретение охватывает рекомбинантный вирус MVA, экспрессирующий полипептид, содержащий антиген PSA, рекомбинантный вирус MVA, экспрессирующий полипептид, содержащий антиген PSA, и полипептид, содержащий антиген РАР. Предпочтительно вирус MVA экспрессирует человеческий антиген PSA. В одном воплощении вирус MVA экспрессирует крысиный или мышиный антиген PSA. В одном воплощении вирус MVA кодирует полноразмерный антиген PSA. В предпочтительном воплощении MVA содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1.
В другом воплощении MVA кодирует фрагмент PSA. Фрагменты PSA можно анализировать на сохранение эпитопов с использованием хорошо известных в данной области анализов. В определенном воплощении фрагмент PSA содержит 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225 или 250 последовательных аминокислот человеческого PSA.
В предпочтительных воплощениях MVA кодирует полипептид, содержащий аминокислоты 16-24 или 154-163 человеческого PSA. Смотрите Waeckerle-Men et al., Cancer Immunol. Immunother. 55:1524-1533 (2006); Matsueda et al., Clin Cancer Res. 11(19 Pt 1):6933-43 (2005), которые тем самым являются включенными посредством ссылки. В одном воплощении данный полипептид содержит один из этих эпитопов. В других воплощениях данный полипептид содержит оба из этих эпитопов.
Рекомбинантный вирус MVA можно использовать в иммуногенной композиции для индукции В-клеточных и Т-клеточных иммунных ответов против PAP и/или PSA при введении хозяину. В предпочтительном воплощении данная иммуногенная композиция индуцирует антитела против РАР и/или PSA при введении хозяину. Иммуногенная композиция может содержать адъюванты, разбавители и/или стабилизаторы. Такие добавки, например, включают, но не ограничиваются ими, воду, физиологический раствор, глицерин, этанол, увлажнители или эмульгаторы и вещества, забуферивающие рН.
В одном воплощении MVA представляет собой MVA-BN®.
В неограничивающем воплощении рекомбинантный MVA, содержащий антиген, ассоциированный с опухолью, например, MVA-BN-PRO, кодирующий оба антигена PSA и РАР, сконструирован слудующим образом. Исходный маточный раствор вируса генерируют рекомбинацией в культуре клеток с использованием типа клеток, пермиссивного для репликации, например, клеток CEF. Клетки инокулируют ослабленным вирусом коровьей оспы, например MVA-BN®, и трансфицируют плазмидой для рекомбинации (например pBN217), которая кодирует антиген, ассоциированный с опухолью, например PSA или РАР, последовательность и фланкирующие области вирусного генома. В одном неограничивающем воплощении плазмида pBN217 содержит последовательности, которые также присутствуют в MVA-BN® (открытые рамки считывания 014L и 015L). Последовательности кДНК PSA и РАР вставляют между последовательностями MVA-BN® для обеспечения рекомбинации в вирусный геном MVA-BN®. В определенных воплощениях данная плазмида также содержит кассету для селекции, содержащую один или более чем один ген селекции для обеспечения селекции рекомбинантных конструкций в клетках CEF.
Одновременная инфекция и трансфекция культур обеспечивает осуществление гомологичной рекомбинации между вирусным геномом и плазмидой для рекомбинации. Вирус, несущий вставку, затем выделяют, характеризуют и готовят маточный раствор вируса. В определенных воплощениях вирус пассируют в культурах клеток CEF в отсутствие селекции для обеспечения потери участков, кодирующих гены селекции, например gpt и гена красного флуоресцентного белка (RFP).
Способы лечения
Пациентов с раком, опосредованным клетками, сверхэкспрессирующими антигены, ассоциированные с опухолью, такие как PSA и/или РАР, можно лечить рекомбинантным MVA, кодирующим один или более чем один такой антиген. В предпочтительном воплощении MVA представляет собой MVA-BN®. В особо предпочтительном воплощении MVA кодирует полипептид, содержащий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, и второй полипептид, содержащий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:2.
Рак предпочтительно представляет собой рак простаты. В одном воплощении рак представляет собой метастатический рак простаты. Раковый пациент может быть любым млекопитающим, включая мышь или крысу. Предпочтительно раковый пациент является приматом, наиболее предпочтительно человеком.
Рекомбинантный MVA, кодирующий один или более чем один антиген, ассоциированный с опухолью (например PSA или РАР), можно вводить либо системно, либо местно, т.е. парентеральным, подкожным, внутривенным, внутримышечным, интраназальным, внутрикожным или любым другим путем введения, известным квалифицированному практику.
В одном воплощении пациенту вводят 105-1010 TCID50 рекомбинантного MVA. Предпочтительно пациенту вводят 107-1010 TCID50 рекомбинантного MVA. Более предпочтительно пациенту вводят 108-1010 TCID50 рекомбинантного MVA. Наиболее предпочтительно пациенту вводят 108-109 или 109-1010 TCID50 рекомбинантного MVA. Предпочтительно рекомбинантный MVA вводят пациенту в дозе 1×108, 2×108 или 4×108 TCID50.
Рекомбинантный MVA можно вводить один раз или многократно. В определенных воплощениях рекомбинантный MVA вводят два, три, четыре или пять раз. Предпочтительно рекомбинантный MVA дают три раза. Наиболее предпочтительно дают три раза с четырехнедельными интервалами. Интервал между введениями предпочтительно составляет 1-4 недели, 1-8 недель, 1-16 недель и 1-52 недели. В одном воплощении рекомбинантный MVA вводят в сутки 0 и вновь в сутки 8 и 15. В предпочтительном воплощении дозировку увеличивают для последующих введений.
В особенно предпочтительном воплощении 1×108, 2×108 и 4×108 TCID50 дают три раза с четырехнедельными интервалами. Объяснение многократного введенияз рекомбинантного MVA основано на доклинических данных по иммуногенности у мышей, показывающих, что бустерные обработки значительно увеличивали иммунные ответы против PSA и против РАР.
Принимая во внимание огромный иммунологический полиморфизм у людей, введение трех или более доз может обеспечить достижение максимального иммунного ответа каждыминдивидуумом.
В одном воплощении обработка рекомбинантным MVA индуцирует антительные ответы против PSA и/или против РАР.В одном воплощении обработка рекомбинантным MVA индуцирует анти-PSA и/или анти-РАР Т-клеточные иммунные ответы. В одном воплощении обработка рекомбинантным MVA индуцирует анти-PSA и/или анти-РАР антительные и Т-клеточные иммунные ответы.
В одном воплощении обработка рекомбинантным MVA индуцирует распространение Т-клеточных ответов на другие опухолевые антигены.
В одном воплощении обработка рекомбинантным MVA ингибирует рост PSA (+) опухолей в профилактической и/или терапевтической постановке. В одном воплощении обработка рекомбинантным MVA ингибирует рост РАР (+) опухолей в профилактической и/или терапевтической постановке. В одном воплощении обработка рекомбинантным MVA ингибирует рост PSA (+) и РАР (+) опухолей в профилактической и/или терапевтической постановке.
Комбинированная терапия с цитотоксическими агентами
Пациентов с раком, опосредованным клетками, сверхэкспрессирующими антигены, ассоциированные с опухолью, такие как PSA и/или РАР, можно лечить комбинацией рекомбинантного MVA, кодирующего один или более чем один такой антиген, с таксаном. Цитотоксические агенты демонстрируют иммуномодулирующие активности в дозах, близких к дозам, уничтожающим раковые клетки, которые могли бы быть полезными для эффективности вакцины. В дозах, уничтожающих раковые клетки (в высоких дозах), применение этих агентов одновременно, до или после обработки рекомбинантным MVA может иметь преимущества относительно любой обработки по отдельности.
В одном воплощении таксаном является доцетаксел. В другом воплощении таксаном является паклитаксел. Таксан предпочтительно вводят в дозе, уничтожающей раковые клетки. Доза доцетаксела, «уничтожающая раковые клетки», составляет по меньшей мере 50 мг/м2. Предпочтительно доза доцетаксела, уничтожающая раковые клетки, составляет 75-100 мг/м2, что соответствует дозировке приблизительно 25-33 мг/кг. Доза паклитаксела, «уничтожающая раковые клетки», составляет по меньшей мере 90 мг/м2. Предпочтительно доза паклитаксела, уничтожающая раковые клетки, составляет 135-175 мг/м2. «Доза таксана, близкая к дозе, уничтожающей раковые клетки», представляет собой дозировку, меньшую, чем дозировка, уничтожающая раковые клетки. Таксан можно вводить любыми способами, известными квалифицированному специалисту, например, внутривенно.
В одном воплощении таксан и MVA, кодирующий полипептид, содержащий антиген, специфичный для опухоли простаты, вводят в одно и то же самое время.
В одном воплощении таксан вводят до введения рекомбинантного MVA. В одном воплощении рекомбинантный MVA вводят в пределах 6 месяцев относительно введения таксана. В определенных воплощениях рекомбинантный MVA вводят в пределах 3 месяцев, в пределах 2 месяцев или в пределах 1 месяца после введения таксана. В одном воплощении рекомбинантный MVA вводят в пределах 21 суток после введения таксана. В одном воплощении рекомбинантный MVA вводят в пределах 14 суток после введения таксана. В одном воплощении рекомбинантный MVA вводят в пределах 7 суток после введения таксана. Обычно рекомбинантный MVA вводят по меньшей мере через 2 суток после лечения таксаном.
В одном воплощении таксан вводят после рекомбинантного MVA. Обычно рекомбинантный MVA вводят по меньшей мере за 1 неделю до лечения таксаном. В одном воплощении рекомбинантный MVA вводят менее чем за 2 года до таксана. В определенных воплощениях рекомбинантный MVA вводят менее чем за 1 год, менее чем за 6 месяцев или менее чем за 3 месяца до введения таксана. В одном воплощении рекомбинантный MVA вводят за 1-26 недель до введения таксана. В одном воплощении рекомбинантный MVA вводят за 1-9 недель до введения таксана. В одном воплощении рекомбинантный MVA вводят за 1-3 недели до введения таксана.
В определенных воплощениях таксан вводят как до, так и после введения рекомбинантного MVA. В других воплощениях рекомбинантный MVA вводят как до, так и после введения таксана. Введение рекомбинантного MVA и таксана может быть однократным введением или многократными введениями. Например, данные введения могут следоватеть с интервалами времени 1, 2, 3, 4, 5 или 6 недель.
Наборы
Данное изобретение охватывает наборы, содержащие рекомбинантный MVA. Рекомбинантный MVA может содержаться в сосуде или в контейнере. В одном воплощении рекомбинантный MVA кодирует антиген РАР. В одном воплощении рекомбинантный MVA кодирует полипептид, содержащий антиген PSA. В одном воплощении рекомбинантный MVA кодирует полипептид, содержащий антиген PSA и полипептид, содержащий антиген РАР. В разных воплощениях наборы для вакцинации содержат рекомбинантный MVA для первой вакцинации («примирования») в первом сосуде или контейнере и для второй или третьей вакцинации («бустер-иммунизации») - во втором или в третьем сосуде или контейнере.
В одном воплощении данный набор может содержать рекомбинантный MVA и инструкции для введения рекомбинантного MVA для профилактики рака простаты. В одном воплощении данный набор может содержать рекомбинантный MVA и инструкции для введения рекомбинантного MVA для профилактики рака простаты после определения увеличения уровня одного или более чем одного маркера, ассоциированного с опухолью простаты. В предпочтительном воплощении данные инструкции могут уведомлять о том, что MVA подлежит введению для профилактики рака простаты после определения увеличения уровней циркулирующего PSA. В одном воплощении данные инструкции могут уведомлять о том, что MVA подлежит введению для профилактики рака простаты пациенту-мужчине в возрасте старше 30 лет. В одном воплощении данные инструкции могут уведомлять о том, что MVA подлежит введению для профилактики рака простаты пациенту-мужчине в возрасте старше 30 лет и младше 40 лет. В одном воплощении данный набор может содержать рекомбинантный MVA и инструкции для введения рекомбинантного MVA для профилактики рака простаты в возрасте старше 40 лет.
В одном воплощении данный набор может содержать рекомбинантный MVA и инструкции для введения рекомбинантного MVA для профилактики метастазов рака простаты. В одном воплощении данный набор может содержать рекомбинантный MVA и инструкции для введения рекомбинантного MVA для профилактики метастазов рака простаты после определения увеличения уровня маркера, ассоциированного с клетками опухоли простаты. В предпочтительном воплощении данные инструкции могут предписывать, что MVA подлежит введению для профилактики метастазов рака простаты после определения того, что возросли уровни циркулирующего PSA, и несмотря на отсутствие определимой первичной опухоли. В одном воплощении данные инструкции могут предписывать, что MVA подлежит введению для профилактики метастазов рака простаты пациенту-мужчине в возрасте старше 30 лет. В одном воплощении данные инструкции могут уведомлять о том, что MVA подлежит введению для профилактики метастазов рака простаты пациенту-мужчине в возрасте старше 30 лет и младше 40 лет. В одном воплощении данный набор может содержать рекомбинантный MVA и инструкции для введения рекомбинантного MVA для профилактики метастазов рака простаты в возрасте старше 40 лет.
В одном воплощении данный набор может содержать рекомбинантный MVA и инструкции для введения рекомбинантного MVA для лечения рака простаты. В одном воплощении данный набор может содержать рекомбинантный MVA и инструкции для введения рекомбинантного MVA для лечения рака простаты после определения увеличения уровня одного или более чем одного маркера, ассоциированного с опухолью простаты. В предпочтительном воплощении данные инструкции могут предписывать, что MVA подлежит введению для лечения рака простаты после определения того, что возросли уровни циркулирующего PSA. В одном воплощении данные инструкции могут предписывать, что MVA подлежит введению для лечения рака простаты пациенту-мужчине в возрасте старше 30 лет. В одном воплощении данные инструкции могут уведомлять о том, что MVA подлежит введению для лечения рака простаты пациенту-мужчине в возрасте старше 30 лет и младше 40 лет. В одном воплощении данный набор может содержать рекомбинантный MVA и инструкции для введения рекомбинантного MVA для лечения рака простаты в возрасте старше 40 лет.
В одном воплощении данный набор может содержать рекомбинантный MVA и инструкции для введения рекомбинантного MVA перед введением дозы таксана, уничтожающей опухолевые клетки. Данные инструкции могут предписывать, что MVA подлежит введению в любой момент времени от 6 месяцев до 1 недели перед введением таксана. В предпочтительных воплощениях данные инструкции предписывают, что MVA подлежит введению в любой момент времени от 3 месяцев до 1 недели, от шести недель до 1 недели, от 1 месяца до 1 недели, от 3 недель до 1 недели и от 2 недель до 1 недели до введения таксана. В одном воплощении данные инструкции могут предписывать то, что MVA подлежит введению в любой момент времени от 1 недели до 0 суток до введения таксана.
Данный набор также может содержать рекомбинантный MVA и инструкции для введения рекомбинантного MVA в то же самое время, что и введение дозы таксана, уничтожающей опухолевые клетки.
Данный набор также может содержать рекомбинантный MVA и инструкции для введения рекомбинантного MVA после введение дозы таксана, уничтожающей опухолевые клетки. Данные инструкции могут предписывать, что MVA подлежит введению в любой момент времени от 1 суток до 6 месяцев после введения таксана. В предпочтительных воплощениях данные инструкции предписывают, что MVA подлежит введению в любой момент времени от 2 суток до 1 недели, от 2 суток до 2 недель, от 2 суток до 3 недель, от 2 суток до 1 месяца, от 2 суток до 2 месяцев, и от 2 суток до 3 месяцев, и от 2 суток до 6 месяцев после введения таксана. В одном воплощении данные инструкции могут предписывать, что MVA подлежит введению в любой момент времени от 0 суток до 2 суток после введения таксана.
Ниже приведены примеры и ссылки для иллюстрации настоящего изобретения с дополнительными подробностями, но объем настоящего изобретения не ограничивается этими примерами. Подразумевается, что любые изменения в деталях, приведенных в качестве примеров, которые приходят в голову квалифицированному специалисту, попадают в пределы объема настоящего изобретения. Кроме того, данное описание изобретения лучше всего понятно в свете процитированных ссылок, которые все тем самым включены посредством ссылки во всей их полноте.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Конструкция MVA-BN-PRO и анализ экспрессии белка в инфицированных клетках
Для разработки вакцины против рака простаты генерировали рекомбинантный вектор на основе вируса коровьей оспы, MVA-BN-PRO, который кодирует человеческий простато-специфический антиген (PSA) и простатическую кислую фосфатазу (PAP). Рекомбинантный вектор на основе вируса коровьей оспы MVA-BN-PRO был получен из высокоослабленного штамма вируса коровьей оспы MVA-BN® (модифицированный вирус коровьей оспы Анкара - Северо-Баварский). MVA-BN® высокоадаптирован для клеток первичных фибробластов куриных эмбрионов (CEF) и не подвергается репродуктивной репликации в человеческих клетках. В человеческих клетках вирусные гены экспрессируются, но не продуцируется инфекционный вирус.
Происхождение генов
кДНК генов PSA и РАР транскрибировали (обратная транскрипция) из общей РНК человеческой простаты, приобретенной у Clontech (каталожный №6410801), с использованием традиционных методик молекулярной биологии. PSA представляет собой простато-специфический антиген, продуцируемый простатой, и он обнаруживается в повышенном количестве в крови мужчин, которые имеют рак простаты, доброкачественную гиперплазию простаты либо инфекцию или воспаление простаты. PSA был идентифицирован как мишень для подходов клеточно-опосредованной иммунотерапии. РАР (простатическая кислая фосфатаза) является ферментом, измеряемым в крови, уровни которого могут быть повышенными у пациентов с раком простаты, который распространился или метастазировал еще где-либо. РАР не увеличивается, если опухоль не распространилась вовне анатомической капсулы простаты. Следовательно, этот простатичекий опухолевый антиген в настоящее время исследуется как антиген-мишень в нескольких испытаниях человеческой вакцины, причем некоторые из них имеют доказательство клинической пользы.
Подтвердили, что последовательности образующихся амплифицированных кДНК PSA и РАР соответствуют опубликованным последовательностям. Таким образом, кДНК PSA (например среди прочих GenBank M26663.1 GL618463; синонимы: калликреин 3; KLK3; 786 п.о.) и последовательность кДНК гена РАР (GenBank M34840.1 GI:189620; синонимы: РАР; АСР3; АСР-3; АСРР; 1161 п.о.) показаны ниже.
Человеческая последовательность кДНК PSA (99% идентичности с последовательностью GenBank M26663.1; жирный шрифт: три молчащие замены нуклеотидов в положениях 48, 54 и 237, которые не изменяют аминокислотную последовательность):
ATGTGGGTCCCGGTTGTCTTCCTCACCCTGTCCGTGACGTGGATTGGCGCTGCGCCCCTCAT CCTGTCTCGGATTGTGGGAGGCTGGGAGTGCGAGAAGCATTCCCAACCCTGGCAGGTGCTTG TGGCCTCTCGTGGCAGGGCAGTCTGCGGCGGTGTTCTGGTGCACCCCCAGTGGGTCCTCACA GCTGCCCACTGCATCAGGAACAAAAGCGTGATCTTGCTGGGTCGGCACAGTCTGTTTCATCC TGAAGACACAGGCCAGGTATTTCAGGTCAGCCACAGCTTCCCACACCCGCTCTACGATATGA GCCTCCTGAAGAATCGATTCCTCAGGCCAGGTGATGACTCCAGCCACGACCTCATGCTGCTC CGCCTGTCAGAGCCTGCCGAGCTCACGGATGCTGTGAAGGTCATGGACCTGCCCACCCAGGA GCCAGCACTGGGGACCACCTGCTACGCCTCAGGCTGGGGCAGCATTGAACCAGAGGAGTTCT TGACCCCAAAGAAACTTCAGTGTGTGGACCTCCATGTTATTTCCAATGACGTGTGTGCGCAA GTTCACCCTCAGAAGGTGACCAAGTTCATGCTGTGTGCTGGACGCTGGACAGGGGGCAAAAG CACCTGCTCGGGTGATTCTGGGGGCCCACTTGTCTGTAATGGTGTGCTTCAAGGTATCACGT CATGGGGCAGTGAACCATGTGCCCTGCCCGAAAGGCCTTCCCTGTACACCAAGGTGGTGCAT TACCGGAAGTGGATCAAGGACACCATCGTGGCCAACCCCTGA (SEQ ID NO:1)
Аминокислотная последовательность человеческого PSA является следующей:
MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVAS RGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYD MSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSI EPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLV CNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP (SEQ ID N0:3).
Последовательность кДНК человеческой РАР (100% идентичности с последовательностью GenBank M34840.1): ATGAGAGCTGCACCCCTCCTCCTGGCCAGGGCAGCAAGCCTTAGCCTTGGCTTCTTGTTTCT GCTTTTTTTCTGGCTAGACCGAAGTGTACTAGCCAAGGAGTTGAAGTTTGTGACTTTGGTGT TTCGGCATGGAGACCGAAGTCCCATTGACACCTTTCCCACTGACCCCATAAAGGAATCCTCA TGGCCACAAGGATTTGGCCAACTCACCCAGCTGGGCATGGAGCAGCATTATGAACTTGGAGA GTATATAAGAAAGAGATATAGAAAATTCTTGAATGAGTCCTATAAACATGAACAGGTTTATA TTCGAAGCACAGACGTTGACCGGACTTTGATGAGTGCTATGACAAACCTGGCAGCCCTGTTT CCCCCAGAAGGTGTCAGCATCTGGAATCCTATCCTACTCTGGCAGCCCATCCCGGTGCACAC AGTTCCTCTTTCTGAAGATCAGTTGCTATACCTGCCTTTCAGGAACTGCCCTCGTTTTCAAG AACTTGAGAGTGAGACTTTGAAATCAGAGGAATTCCAGAAGAGGCTGCACCCTTATAAGGAT TTTATAGCTACCTTGGGAAAACTTTCAGGATTACATGGCCAGGACCTTTTTGGAATTTGGAG TAAAGTCTACGACCCTTTATATTGTGAGAGTGTTCACAATTTCACTTTACCCTCCTGGGCCA CTGAGGACACCATGACTAAGTTGAGAGAATTGTCAGAATTGTCCCTCCTGTCCCTCTATGGA ATTCACAAGCAGAAAGAGAAATCTAGGCTCCAAGGGGGTGTCCTGGTCAATGAAATCCTCAA TCACATGAAGAGAGCAACTCAGATACCAAGCTACAAAAAACTTATCATGTATTCTGCGCATG ACACTACTGTGAGTGGCCTACAGATGGCGCTAGATGTTTACAACGGACTCCTTCCTCCCTAT GCTTCTTGCCACTTGACGGAATTGTACTTTGAGAAGGGGGAGTACTTTGTGGAGATGTACTA TCGGAATGAGACGCAGCACGAGCCGTATCCCCTCATGCTACCTGGCTGCAGCCCTAGCTGTC CTCTGGAGAGGTTTGCTGAGCTGGTTGGCCCTGTGATCCCTCAAGACTGGTCCACGGAGTGT ATGACCACAAACAGCCATCAAGGTACTGAGGACAGTACAGATTAG (SEQ ID NO:2)
Аминокислотная последовательность человеческой РАР является следующей:
MRAAPLLLARAASLSLGFLFLLFFWLDRSVLAKELKFVTLVFRH
GDRSPIDTFPTDPIKESSWPQGFGQLTQLGMEQHYELGEYIRKRYRKFLNESYKHEQV
YIRSTDVDRTLMSAMTNLAALFPPEGVSIWNPILLWQPIPVHTVPLSEDQLLYLPFRN
CPRFQELESETLKSEEFQKRLHPYKDFIATLGKLSGLHGQDLFGIWSKVYDPLYCESV HNFTLPSWATEDTMTKLRELSELSLLSLYGIHKQKEKSRLQGGVLVNEILNHMKRATQ IPSYKKLIMYSAHDTTVSGLQMALDVYNGLLPPYASCHLTELYFEKGEYFVEMYYRNE TQHEPYPLMLPGCSPSCPLERFAELVGPVIPQDWSTECMTTNSHQGTEDSTD (SEQ ID NO:4).
Происхождение промотора
Промотор включения А-типа вируса коровьей оспы (ATI), поздний промотор (показан ниже), генерировали синтетически в плазмиде pBluescript KS+ (Stratagene), вырезали и вставляли как перед последовательностью РАР, так и перед последовательностью PSA. Соответственно, белки PSA и РАР должны экспрессироваться с другими поздними генами после репликации ДНК.
Последовательность промотора ATI:
5'-GTTTTGAATAAAATTTTTTTATAATAAATC (SEQ ID NO:5)
Конструкция плазмиды для рекомбинации PSA/PAP-MVA-BN
Для вставки чужеродных генов в геном MVA-BN® можно использовать промежуточную плазмиду для рекомбинации, которая имеет в качестве мишени специфическую область генома MVA-BN®, а именно сайт делеции или межгенную (некодирующую область).
Промежуточная плазмида pBNX128 содержит последовательности ДНК MVA из областей, которые фланкируют межгенную (некодирующую) область (IGR) между открытыми рамками считывания (ORF) 014L и 015L. Последовательности, например кДНК PSA и РАР, можно вставить между этими фланкирующими последовательностями. Затем, когда и плазмида, и MVA-BN® присутствуют в той же самой клетке CEF, фланкирующие последовательности 014L/015L опосредуют гомологичную рекомбинацию, опосредующую вставку данных плазмидных последовательностей в межгенную область 014L/015L генома MVA-BN® (Фиг.1А-Б). Присутствие кассеты селекции во вставленных последовательностях обеспечивает позитивную селекцию рекомбинантных вирусов MVA-BN®.
Генерация MVA-BN-PRO
Одновременная инфекция и трансфекция культур обеспечивала прохождение гомологичной рекомбинации между вирусным геномом и плазмидой для рекомбинации. Образующийся рекомбинантный вектор на основе вируса коровьей оспы, обозначенный MVA-mBN106A, содержащий кодирующую область PSA и РАР и кассету селекции, получали после многократных очисток бляшек при селективных условиях. После амплификации и дополнительной очистки бляшек при неселективных условиях выделяли рекомбинантный вирус коровьей оспы MVA-BN-PRO, лишенный кассеты селекции.
Получали очищенный из бляшек вирус MVA-BN-PRO, лишенный кассеты селекции. Такое получение включало двенадцать (12) пассажей, включая четыре (4) очистки бляшек.
Присутствие последовательности промотор-PSA-промотор-РАР и отсутствие родительского вируса MVA-BN® в маточных растворах MVA-BN-PRO подтверждали секвенированием ДНК и ПЦР анализом, вложенную ПЦР использовали для подтверждения отсутствия кассеты селекции (гены gpt и RFP). Упрощенная схема генома MVA-BN-PRO показана на Фиг.2.
Пример 2
Соэкспрессия PSA и РАР в клетках, обработанных MVA-BN-PRO Одновременную экспрессию двух простато-специфичных антигенов, кодируемых MVA-BN-PRO, а именно человеческого PSA и человеческой РАР, продемонстрировали в клетках, инкубируемых с MVA-BN-PRO in vitro. Культуры СТ26, химически индуцированной колоректальной карциномы мышей BALB/c (Brattain et al., Cancer Research 40, 2142-2146 (1980)), инкубировали с MVA-BN-PRO, и супернатанты анализировали на присутствие рекомбинантных PSA и РАР. PSA измеряли с использованием диагоностического набора для PSA на основе ELISA, который обычно используется для скрининга образцов человеческой сыворотки (Human PSA ELISA Kit, Anogen, Ontario, Канада; диапазон детекции PSA: 2-80 нг/мл). РАР измеряли косвенно через ее ферментативные свойства, используя колориметрический анализ фосфатных активностей (анализ кислой фосфатазы; диапазон детекции РАР: 4-40 нг/мл). PSA и РАР анализировали в аликвотах тех же самых супернатантов культуры, собранных через 24 ч после добавления MVA-BN-PRO при множественности инфекции (MOI), варьирующей от 1 до 100.
Как показано на Фиг.3, оба антигена могли быть детектированы в супернатантах клеток, инкубируемых с MVA-BN-PRO. Количество рекомбинантных PSA и РАР, продуцируемых в культуре, зависело от количества MVA-BN-PRO (MOI) и числа клеток, используемых в данном эксперименте. Напротив, ни PSA, ни фосфатазная активность, указывающая на РАР, не могли быть детектированы в супернатантах контрольных культур, инкубируемых либо в одной среде, либо с соответствующей MOI MVA-BN®.
Титрование PSA и РАР при расчете с использованием графиков с эталонными стандартами выявило для каждого анализа, что клетками, инкубируемыми с MVA-BN-PRO, продуцировались сходные количества обоих антигенов. В самом деле, в культуральных супернатантах измерили 1043 нг/мл PSA и 209 нг/мл РАР при посеве 1×105 клеток СТ26 на лунку и инкубации с MVA-BN-PRO при MOI 10 в течение 48 ч. Последовательности PSA и РАР вставляли в одну и ту же область генома MVA-BN®, и их экспрессия независимо контролировалась промотором ATI, расположенным выше по течению от каждой последовательности. Эта конфигурация вставки, по-видимому, создает правильное окружение для оптимальной экспрессии обоих рекомбинантных антигенов. В целом, эти данные показывают, что MVA-BN® представляет собой адекватный носитель для хорошо сбалансированной и сопутствующей экспрессии многих трансгенных антигенов, подобных PSA и РАР.
Пример 3
Индукция иммунного ответа против РАР и против PSA у мышей, обработанных MVA-BN-PRO
Индукцию иммунных ответов против PSA и против РАР при обработке MVA-BN-PRO оценивали у мышей BALB/c. В этих исследованиях оценивали разные дозы MVA-BN-PRO, варьирующие от 2×106 до 5×107 TCID50. Образцы крови отбирали за одни сутки до каждой обработки и через две недели после конечной обработки и гуморальные ответы анализировали посредством ELISA. Спленоциты отбирали после конечной обработки и клеточные ответы анализировали посредством ELISpot (иммуноферментный спот-анализ).
Индукция антительных ответов против PSA и против РАР
Мышей BALB/c (5 животных в каждой группе) подкожно обрабатывали 5×107 TCID50 MVA-BN-PRO в сутки 1, 15 и 29 (обработки с интервалов 2 недели × 3). Контрольных животных обрабатывали MVA-BN® или буфером для препарата (TBS). Образцы крови забирали до обработки и в сутки 14, 28 и 42. Сыворотку от мышей из каждой тестируемой группы затем объединяли и анализировали посредством ELISA. Индукцию антительных ответов против PSA и против РАР оценивали с использованием имеющихся в продаже очищенных белков (Meridian Life Sciences, Inc., Saco, ME) в качестве антигенов-мишеней, которыми были покрыты лунки планшета для микротитрования. Как показано на Фиг.4А и 4В, антительные ответы против PSA и против РАР детектировали у мышей, обработанных MVA-BN-PRO. Определение титров антитела против PSA требовало по меньшей мере двух введений, и титры возрастали после третьей обработки MVA-BN-PRO. В общем, антительный ответ против РАР был более умеренным, так как титры всегда были ниже, чем титры, индуцированные против PSA. Слабый антительный ответ, наблюдающийся против РАР, верояно обусловлен слабыми антигенными свойствами этого белка для В-клеток.
Индукция Т-клеточных ответов против PSA и против РАР
Мышей BALB/c (5 животных в каждой группе) подкожно обрабатывали контролем (TBS), 2×106 или 5×107 TCID50 MVA-BN-PRO в сутки 1, 15, 31 (обработки с интервалом 2 недели × 3). Селезенки отбирали через 5 суток после последней иммунизации и суспензии клеток из каждой тестируемой группы объединяли для анализа. Индукцию Т-клеточных ответов оценивали посредством ELISpot, который измерял продукцию IFNγ после повторной антигенспецифичной стимуляции in vitro. Для повторной стимуляции использовали раздельно библиотеки 15-мерных пептидов с 11-мерными перекрываниями (OPL) и аминокислотные последовательности, покрывающие полноразмерное PSA или РАР. Как показано на Фиг.5, антигенспецифичные Т-клеточные ответы детектировали в клетках селезенки из группы, обработанной MVA-BN-PRO, при повторной стимуляции OPL как РАР, так и PSA, тогда как контрольная OPL, происходящая из человеческой последовательности HER-2 ecd, не имела эффекта (Фиг.5А). Т-клеточные ответы не детектировали у мышей в группах, обработанных MVA-BN® (данные не показаны) или TBS (Фиг.5), когда клетки повторно стимулировали OPL PSA, РАР или HER-2. Эти данные показывают, что MVA-BN-PRO является мощным индуктором Т-клеток, поскольку большие количества антигенспецифичных Т-клеток могли быть детектированы непосредственно в спленоцитах без роста ex vivo.
Содействие CD4 хелперных и CD8 цитотоксических Т-клеток Т-клеточным ответам против РАР и PSA, индуцированным у мышей при обработке MVA-BN-PRO, исследовали после обеднения подклассов популяций Т-клеток до повторной стимуляции клеток селезенки in vitro. Как показано на Фиг.6, ответы Т-клеток детектировали в подклассах Т-клеток, обедненных как CD4, так и CD8 при повторной стимуляции каждой из OPL PSA или РАР.
В целом эти исследования показывают, что неоднократная обработка мышей MVA-BN-PRO индуцирует широкий антигенспецифичный адаптивный иммунный ответ на два ТАА, который включает антитело и оба подтипа клеток-эффекторов, CD4 и CD8. Как и ожидалось, антительный ответ был направлен главным образом на PSA, тогда как РАР, известный слабый иммуноген В-клеток, запускал только умеренный антительный ответ. Поскольку PSA и РАР по существу представлены на поверхности опухолевых клеток как мишени Т-клеток в форме комплексов антигенпрезентирующая молекула/пептид, активация клеточных компонентов иммунной системы является критическим требованием для мощности MVA-BN-PRO. Сильные ответы Т-клеток CD4 и CD8 были индуцированы против обоих ТАА у животных, обработанных всеми протестированными дозами MVA-BN-PRO. Следовательно, MVA-BN-PRO имеет потенциал опосредовать устранение опухолевых клеток, презентирующих на их поверхности пептиды PSA и/или РАР.
Пример 4
Противоопухолевая активность у мышей, обработанных MVA-BN-PRO
Способность MVA-BN-PRO влиять на рост PSA-позитивных опухолевых клеток у мышей оценивали в профилактической, а также в терапевтической модели раковой опухоли. Данные показывают, что MVA-BN-PRO может ингибировать рост опухоли в обеих постановках. Также MVA-BN-PRO был способен ингибировать рост РАР-позитивных опухолевых клеток у мышей в терапевтической модели раковой опухоли.
Индукция защитного антигенспецифичного адаптивного иммунитета при обработке MVA-BN-PRO (профилактическая постановка)
Способность MVA-BN-PRO предупреждать рост опухоли оценивали с использованием трансплантированных клеток Е5 в качестве модели рака простаты. Е5 представляет собой субклон RM11, мышиной линии клеток опухоли простаты (Elzey et al., Int. J Cancer 15;94(6):842-9 (2001)), полученный после трансфекции RM11 рекомбинантной ДНК, кодирующей ген человеческого PSA. В этом исследовании эффективности мышей иммунизировали MVA-BN-PRO, как описано выше, т.е. три раза с 3-недельными интервалами TBS, MVA-BN® (5×107 TCID50) или MVA-BN-PRO (2×106, 1×107 или 5×107 TCID50). Затем мышей заражали опухолями путем внутрикожного инъецирования 1×105 клеток Е5 через шесть недель после последней обработки. Затем рост опухоли наблюдали дважды в неделю, и измеряли размер растущих солидных опухолей.
Как показано на Фиг.7В-7Д, у животных, предварительно обработанных всеми дозами MVA-BN-PRO, опухоли росли медленнее, чем опухоли в контрольной группе, обработанной TBS (Фиг.7А), и более 50% мышей оставались лишенными опухолей для всех протестированных доз в конце исследования (Сутки 29). Напротив, измеримые опухоли детектировали у 100% мышей в контрольных группах, обработанных TBS, уже в Сутки 12 после заражения опухолью. В эти сутки измеримые опухоли детектировали только у 20% мышей из всех групп, обработанных MVA-BN-PRO. Различие средних размеров опухолей было статистически значимым между всеми группами, обработанными MVA-BN-PRO, и контрольной группой, обработанной TBS, во все моменты времени с суток 12 и на всем протяжении данного исследования (Фиг.7Е).
Аналогично контрольной группе, обработанной TBS, измеримые опухоли детектировали почти у каждой мыши, обработанной MVA-BN® (90%) уже в Сутки 12 после заражения опухолью (Фиг.7Б). Однако 2 мыши в группе, обработанной MVA-BN® (20%), не имели опухоли в конце исследования (Сутки 29; одна мышь оставалась лишенной опухоли на всем протяжении данного исследования, и у другой мыши происходила регрессия опухоли). Также опухоли в группе, обработанной MVA-BN®, росли медленнее, чем опухоли в контрольной группе, обработанной TBS, до Суток 22, и в два момента времени достигались статистически значимые различия средних размеров опухолей между двумя этими группами (Сутки 19, р=0,034 и Сутки 22, р=0,019). Задержка роста опухоли у мышей, обработанных MVA-BN®, была лишь кратковременной, так как аналогичные средние размеры опухолей наблюдали у мышей, обработанных TBS и MVA-BN®, во все другие моменты времени (Фиг.7Е).
MVA-BN-PRO-опосредованную противоопухолевую активность, описанную выше, подтверждали в повторном эксперименте, где мышей обрабатывали 2×106 TCID50 MVA-BN-PRO с двухнедельными интервалами, затем заражали опухолевыми клетками через две недели после обработки. Данные в Сутки 29 после имплантации опухоли показаны на Фиг.8, наряду с соответствующими данными из Фиг.7 для тех же самых суток после имплантации. В обоих экспериментах наблюдали сопоставимую задержку роста опухоли у мышей, обработанных MVA-BN-PRO. Кроме того, статистически значимые различия средних размеров опухолей достигались между группами, обработанными MVA-BN-PRO и TBS, а также между группами, обработанными MVA-BN-PRO и MVA-BN® (р=0,03 и р=0,021, соответственно). Кратковременный эффект MVA-BN®, наблюдаемый в ранние моменты времени на Фиг.7, не детектировали в повторном эксперименте (данные не показаны). Эти данные показывают, что обработка мышей MVA-BN-PRO индуцирует антигенспецифичный адаптивный иммунный ответ и установление иммунной памяти. Когда мышей впоследствии заражали опухолевыми клетками через две-шесть недель, иммунная память активировалась и ингибировала рост опухолевых клеток.
Подавление опухолей при обработке MVA-BN-PRO (терапевтическая постановка)
Способность MVA-BN-PRO подавлять сформировавшиеся опухоли оценивали с использованием трансплантированных клеток Е6 в качестве модели рака простаты. Е6 представляет собой субклон RM11, мышиной линии клеток опухоли простаты (Elzey et al., 2001), полученный после трансфекции RM11 рекомбинантной ДНК, кодирующей человеческий ген PSA. Е6 является более слабым продуцентом PSA, чем Е5, который использовали в профилактической постановке, описанной выше. Мышей заражали опухолями путем внутрикожного инъецирования 1×105 клеток Е6 и обрабатывали в те же самые сутки, затем в сутки 8 и 15 TBS, MVA-BN® или MVA-BN-PRO (5×106 или 5×107 TCID50). Затем рост опухоли наблюдали дважды в неделю, и измеряли размер солидных опухолей под кожей.
Как показано на Фиг.9, опухоли у животных, обработанных MVA-BN-PRO (Фиг.9В и 9Г), росли значительно медленнее, чем опухоли у животных, обработанных MVA-BN® - (Фиг.9А и 9Б) или TBS (Фиг.9Д). В обеих группах, обработанных MVA-BN-PRO, наблюдали стабилизацию размера или регрессию опухоли у 50% животных. Фиг.9Е показывает различие среднего размера опухоли между группами. Средний объем опухоли статистически значимо различался между животными, обработанными 5х106 TCID50 MVA-BN-PRO и контрольными группами, обработанными TBS или MVA-BN® (р=0,014 и р=0,032, соответственно), тогда как статистическая значимость не достигалась между группой, обработанной 5х107 TCID50 MVA-BN-PRO, и контрольной группой, обработанной TBS (р=0,07). Эти данные показывают, что обработка мышей MVA-BN-PRO ингибирует рост опухолей простаты у мышей в терапевтической постановке.
Способность MVA-BN-PRO также, подавлять сформировавшиеся опухоли, экспрессирующие РАР, оценивали в экспериментальной модели метастазов в легком, используя клетки СТ26, стабильно экспрессирующие человеческую PAP. CT26 представляют собой клетки химически индуцированной колоректальной карциномы мышей BALB/c (Brattain et al., 1980). В этой модели клетки СТ26-РАР внутривенно инъецируют мышам BALB/c и опухолевую массу оценивают в легких, где растут узелки опухоли. Мышей заражали клетками СТ26-РАР (5×105), внутривенно инъецированными в Сутки 1, и внутрибрюшинно обрабатывали в Сутки 4 одной инъекцией TBS, MVA-BN (5×107 TCID50) или MVA-BN-PRO (2×106 или 5×107 TCID50). Мышей затем умерщвляли в Сутки 14, и их легкие взвешивали. Как показано на Фиг.10, опухолевая масса у мышей, обработанных 5×107 TCID50 MVA-BN-PRO, была значительно меньше, чем у контрольных мышей (р<0,024). Эта противоопухолевая активность зависела от дозы, так как меньшая доза MVA-BN-PRO не имела эффекта. Кроме того, эта противоопухолевая активность с наибольшей вероятностью была опосредована РАР-специфичным иммунным ответом, так как опухолевая масса у мышей контрольной и обработанной MVA-BN групп была неизменной.
Эти данные демонстрируют, что обработка мышей MVA-BN-PRO ингибирует рост сформировавшихся РАР-позитивных опухолей у мышей. Таким образом, как антигены простаты PSA, так и РАР, кодируемые MVA-BN-PRO, способствуют индукции защитного иммунного ответа, способного подавлять рост как PSA-, так и РАР-позитивных опухолей.
Пример 5
Иммуногенность MVA-BN-PRO при ограничении гаплотипа
Иммунные ответы происходят в результате взаимодействия эпитопов, происходящих из антигена, с полиморфными антигенпрезентирующими молекулами на иммунокомпетентных клетках. Польза двух опухолевых антигенов в MVA-BN-PRO состоит в том, что они потенциально увеличивают число эпитопов, происходящих из опухолевого антигена, которые взаимодействуют с антигенпрезентирующими молекулами разных гаплотипов. Следовательно, предполагается, что MVA-BN-PRO будет иммуногенным у индивидуумов с более широким диапазоном гаплотипов, чем вакцины, содержащие один антиген. Эту возможность оценили в доклинических моделях с использованием животных с разными гаплотипами. В этом примере вектор, описанный в Примере 1, модифицировали с заменой промотора ATI ранним/поздним синтетическим промотором (Ps; Chakrabarti S, Sisler JR, and Moss B, BioTechniques 23: 1094-1097 (December 1997)). Соответственно, белки PSA и PAP должны экспрессироваться с другими ранними и поздними генами на всем протяжении полной инфекционной фазы MVA.
Последовательность промотора Ps:
5'-AAAAAATTGAAATTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATAAT (SEQ ID NO:6).
Самцов мышей BALB/c и C57BL/6 (5 животных в каждой группе) иммунизировали в сутки 1, 15 и 29 5×107 TCID50 MVA-BN-PRO. Пробы крови брали в сутки 42, и последовательные разведения объединенных сывороток анализировали на присутствие IgG против PSA или против РАР посредством ELISA, как описано в Примере 3. Как показано на Фиг.11, высокие титры антител против PSA детектировали только в сыворотке от мышей BALB/c. Напротив, несмотря на то, что титры антител против РАР измеряли в сыворотках от обеих мышиных линиях, более высокие титры антител против РАР детектировали в сыворотке от мышей C57BL/6. Эти данные подчеркивают связь с гаплотипом иммунного ответа в отношении конкретных антигенов и поддерживают идею о том, что множество опухолевых антигенов в MVA-BN-PRO должно обеспечивать эффективный иммунитет у большего числа индивидов с разными гаплотипами.
Пример 6 Безопасность и иммуногенность MVA-BN-PRO у людей
MVA-BN-PRO в настоящее время исследуется для лечения пациентов с раком простаты. Ко времени подачи этой заявки 4 пациента получили от 1 до 3 обработок 1×108 TCID50 MVA-BN-PRO без сообщения о вредных эффектах. Иммуногенность MVA-BN-PRO у одного из этих пациентов оценивали сравнением ответов Т-клеток на PSA и РАР до и после обработки. Присутствие антигенспецифичных Т-клеток, секретирующих гамма-интерферон (IFN-γ), в одноядерных клетках периферической крови (РВМС) пациента определяли с использованием анализа ELISpot. Ответы определяли до обработки (базовый уровень) и через 2 недели после третьей подкожной вакцинации 108 TCID50 MVA-BN-PRO (ТС3). РВМС пациента (2×105) в 10% средах MATIS (RPMI, среда Клика, 10% человеческая АВ сыворотка, 0,5 М 2-β-меркаптоэтанол и 2% пенициллин/стрептомицин) переносили в гидратированные лунки 96-луночных PVDF планшетов Multiscreen (Millipore, Кат. № MSIPS4510), предварительно покрытые захватывающим антителом против человеческого IFN-γ (Mabtech, клон MAb 1D1K, Кат. №3420-3) в концентрации 10 мкг/мл. Затем РВМС стимулировали PSA в концентрации 5 мкг/мл (Biodesign Кат. № А86878Н), 11-мерной перекрывающейся библиотекой из 63 15-мерных пептидов (OPL), происходящих из полноразмерной последовательности PSA, в концентрации 63 мкМ (1 мкМ на пептид), РАР в концентрации 1 мкг/мл (Biodesign Кат. № А81277Н), 11-мерной OPL из 94 15-мерных пептидов, происходящих из полноразмерной последовательности РАР, в концентрации 94 мкМ (1 мкМ на пептид), пулом из 44 пептидов ГКГ класса I, происходящих из 10 антигенов, ассоциированных с опухолью рака простаты (ТАА), в концентрации 44 мкМ (1 мкМ на пептид), пулом из 15 пептидов ГКГ класса II, происходящих из 5 ТАА рака простаты, в концентрации 15 мкМ (1 мкМ на пептид) или MVA (Баварский Северный, MVA-BN-PROD05A06-C) при множественности инфекции (MOI) 10.
Последовательности 63 пептидов OPL PSA:
MWVPVVFLTLSVTWI (а.к. 1-15 SEQ ID NO:3)
VVFLTLSVTWIGAAP (а.к. 5-19 SEQ ID NO:3)
TLSVTWIGAAPLILS (а.к. 9-23 SEQ ID NO:3)
TWIGAAPLILSRIVG (а.к. 13-27 SEQ ID NO:3)
AAPLILSRIVGGWEC (a.к 17-31 SEQ ID NO:3)
ILSRIVGGWECEKHS (a.к. 21-35 SEQ ID NO:3)
IVGGWECEKHSQPWQ (а.к. 25-39 SEQ ID NO:3)
WECEKHSQPWQVLVA (а.к. 29-43 SEQ ID NO:3)
KHSQPWQVLVASRGR (a.к. 33-47 SEQ ID NO:3)
PWQVLVASRGRAVCG (a.к. 37-51 SEQ ID NO:3)
LVASRGRAVCGGVLV (a.к. 41-55 SEQ ID NO:3)
RGRAVCGGVLVHPQW (а.к. 45-59 SEQ ID NO:3)
VCGGVLHPOWVLTA (а.к. 49-63 SEQ ID NO:3)
VLVHPQWVLTAAHCI (а.к. 53-67 SEQ ID NO:3)
PQWVLTAAHCIRNKS (а.к. 57-71 SEQ ID NO:3)
LTAAHCIRNKSVILL (a.к. 61-75 SEQ ID NO:3)
HCIRNKSVILLGRHS (a.к. 65-79 SEQ ID NO:3)
NKSVILLGRHSLFHP (a.к. 69-83 SEQ ID NO:3)
ILLGRHSLFHPEDTG (a.к. 73-87 SEQ ID NO:3)
RHSLFHPEDTGQVFQ (a.к. 77-91 SEQ ID NO:3)
FHPEDTGQVFQVSHS (a.к. 81-95 SEQ ID NO:3)
DTGQVFQVSHSFPHP (а.к. 85-99 SEQ ID NO:3)
VFQVSHSFPHPLYDM (а.к. 89-103 SEQ ID NO:3)
SHSFPHPLYDMSLLK (а.к. 93-107 SEQ ID NO:3)
PHPLYDMSLLKNRFL (а.к. 97-111 SEQ ID NO:3)
YDMSLLKNRFLRPGD (а.к. 101-115 SEQ ID NO:3)
LLKNRFLRPGDDSSH (а.к. 105-119 SEQ ID NO:3)
RFLRPGDDSSHDLML (а.к. 109-123 SEQ ID NO:3)
PGDDSSHDLMLLRLS (а.к. 113-127 SEQ ID NO:3)
SSHDLMLLRLSEPAE (а.к. 117-131 SEQ ID NO:3)
LMLLRLSEPAELTDA (а.к. 121-135 SEQ ID NO:3)
RLSEPAELTDAVKVM (а.к. 125-139 SEQ ID NO:3)
PAELTDAVKVMDLPT (a.к. 129-143 SEQ ID NO:3)
TDAVKVMDLPTQEPA (a.к. 133-147 SEQ ID NO:3)
KVMDLPTQEPALGTT (а.к. 137-151 SEQ ID NO:3)
LPTQEPALGTTCYAS (а.к. 141-155 SEQ ID NO:3)
EPALGTTCYASGWGS (а.к. 145-159 SEQ ID NO:3)
GTTCYASGWGSIEPE (а.к. 149-163 SEQ ID NO:3)
YASGWGSIEPEEFLT (a.к. 153-167 SEQ ID NO:3)
WGSIEPEEFLTPKKL (а.к. 157-171 SEQ ID NO:3)
EPEEFLTPKKLQCVD (а.к. 161-175 SEQ ID NO:3)
FLTPKKLQCVDLHVI (а.к. 165-179 SEQ ID NO:3)
KKLQCVDLHVISNDV (а.к. 169-183 SEQ ID NO:3)
CVDLHVISNDVCAQV (а.к. 173-187 SEQ ID NO:3)
HVISNDVCAQVHPQK (а.к. 177-191 SEQ ID NO:3)
NDVCAQVHPQKVTKF (а.к. 181-195 SEQ ID NO:3)
AQVHPQKVTKFMLCA (а.к. 185-199 SEQ ID NO:3)
PQKVTKFMLCAGRWT (а.к. 189-203 SEQ ID NO:3)
TKFMLCAGRWTGGKS (а.к. 193-207 SEQ ID NO:3)
LCAGRWTGGKSTCSG (а.к. 197-211 SEQ ID NO:3)
RWTGGKSTCSGDSGG (а.к. 201-215 SEQ ID NO:3)
GKSTCSGDSGGPLVC (а.к. 205-219 SEQ ID NO:3)
CSGDSGGPLVCNGVL (а.к. 209-223 SEQ ID NO:3)
SGGPLVCNGVLQGIT (а.к. 213-227 SEQ ID NO:3)
LVCNGVLQGTTSWGS (а.к. 217-231 SEQ ID NO:3)
GVLQGITSWGSEPCA (а.к. 211-235 SEQ ID NO:3)
GITSWGSEPCALPER (а.к. 225-239 SEQ ID NO:3)
WGSEPCALPERPSLY (а.к. 229-243 SEQ ID NO:3)
PCALPERPSLYTKW (а.к. 233-247 SEQ ID NO:3)
PERPSLYTKWHYRK (а.к. 237-251 SEQ ID NO:3)
SLYTKVVHYRKWIKD (а.к. 241-255 SEQ ID NO:3)
KVVHYRKWIKDTIVA (а.к. 245-259 SEQ ID NO:3)
YRKWIKDTIVANP (а.к. 249-261 SEQ ID NO:3)
Последовательность из 94 пептидов OPL PAP:
MRAAPLLLARAASLS (а.к. 1-15 SEQ ID NO:4)
PLLLARAASLSLGFL (а.к. 5-19 SEQ ID NO:4)
ARAASLSLGFLFLLF (а.к. 9-23 SEQ ID NO:4)
SLSLGFLFLLFFWLD (а.к. 13-27 SEQ ID NO:4)
GFLFLLFFWLDRSVL (а.к. 17-31 SEQ ID NO:4)
LLFFWLDRSVLAKEL (а.к. 21-35 SEQ ID NO:4)
WLDRSVLAKELKFVT (а.к. 25-39 SEQ ID NO:4)
SVLAKELKFVTLVFR (а.к. 29-43 SEQ ID NO:4)
KELKFVTLVFRHGDR (а.к. 33-47 SEQ ID NO:4)
FVTLVFRHGDRSPID (а.к. 37-51 SEQ ID NO:4)
VFRHGDRSPIDTFPT (а.к. 41-55 SEQ ID NO:4)
GDRSPIDTFPTDPIK (а.к. 45-59 SEQ ID NO:4)
PIDTFPTDPIKESSW (а.к. 49-63 SEQ ID NO:4)
FPTDPIKESSWPQGF (а.к. 53-67 SEQ ID NO:4)
PIKESSWPQGFGQLT (а.к. 57-71 SEQ ID NO:4)
SSWPQGFGQLTQLGM (а.к. 61-75 SEQ ID NO:4)
QGFGQLTQLGMEQHY (а.к. 65-79 SEQ ID NO:4)
QLTQLGMEQHYELGE (а.к. 69-83 SEQ ID NO:4)
LGMEQHYELGEYIRK (а.к. 74-87 SEQ ID NO:4)
QHYELGEYIRKRYRK (а.к. 77-91 SEQ ID NO:4)
LGEYIRKRYRKFLNE (а.к. 81-95 SEQ ID NO:4)
IRKRYRKFLNESYKH (а.к. 85-99 SEQ ID NO:4)
YRKFLNESYKHEQVY (а.к. 89-103 SEQ ID NO:4)
LNESYKHEQVYIRST (а.к. 93-107 SEQ ID NO:4)
YKRHEQWTRSTOVDR (а.к. 97-111 SEQ ID NO:4)
QVYIRSTDVDRTLMS (а.к. 101-115 SEQ ID NO:4)
RSTDVDRTLMSAMTN (а.к. 105-119 SEQ ID NO:4)
VDRTLMSAMTNLAAL (а.к. 109-123 SEQ ID NO:4)
LMSAMTNLAALFPPE (а.к. 113-127 SEQ ID NO:4)
MTNLAALFPPEGVSI (а.к. 117-131 SEQ ID NO:4)
AALFPPEGVSIWNPI (а.к. 121-135 SEQ ID NO:4)
PPEGVSIWNPILLWQ (а.к. 125-139 SEQ ID NO:4)
VSIWNPILLWQPIPV (а.к. 129-143 SEQ ID NO:4)
NPILLWQPIPVHTVP (а.к. 133-147 SEQ ID NO:4)
LWQPIPVHTVPLSED (а.к. 137-151 SEQ ID NO:4)
IPVHTVPLSEDQLLY (а.к. 141-155 SEQ ID NO:4)
TVPLSEDQLLYLPFR (а.к. 145-159 SEQ ID NO:4)
SEDQLLYLPFRNCPR (а.к. 149-163 SEQ ID NO:4)
LLYLPFRNCPRFQEL (а.к. 153-167 SEQ ID NO:4)
PFRNCPRFQELESET (а.к. 157-171 SEQ ID NO:4)
CPRFQELESETLKSE (а.к. 161-175 SEQ ID NO:4)
QELESETLKSEEFQK (а.к. 165-179 SEQ ID NO:4)
SETLKSEEFQKRLHP (а.к. 169-183 SEQ ID NO:4)
KSEEFQKRLHPYKDF (а.к. 173-187 SEQ ID NO:4)
FQKRLHPYKDFIATL (а.к. 177-191 SEQ ID NO:4)
LHPYKDFIATLGKLS (а.к. 181-195 SEQ ID NO:4)
KDFIATLGKLSGLHG (а.к. 185-199 SEQ ID NO:4)
ATLGKLSGLHGQDLF (а.к. 189-203 SEQ ID NO:4)
KLSGLHGQDLFGIWS (а.к. 193-207 SEQ ID NO:4)
LHGQDLFGIWSKVYD (а.к. 197-211 SEQ ID NO:4)
DLFGIWSKVYDPLYC (а.к. 201-215 SEQ ID NO:4)
IWSKVYDPLYCESVH (а.к. 205-219 SEQ ID NO:4)
VYDPLYCESVHNFTL (а.к. 209-223 SEQ ID NO:4)
LYCESVHNFTLPSWA (а.к. 213-227 SEQ ID NO:4)
SVHNFTLPSWATEDT (а.к. 217-231 SEQ ID NO:4)
FTLPSWATEDTMTKL (а.к. 221-235 SEQ ID NO:4)
SWATEDTMTKLRELS (а.к. 225-239 SEQ ID NO:4)
EDTMTKLRELSELSL (а.к. 229-243 SEQ ID NO:4)
TKLRELSELSLLSLY. (а.к. 234-247 SEQ ID NO:4)
ELSELSLLSLYGIHK (а.к. 237-251 SEQ ID NO:4)
LSLLSLYGIHKQKEK (а.к. 241-255 SEQ ID NO:4)
SLYGIHKQKEKSRLQ (а.к. 245-259 SEQ ID NO:4)
IHKQKEKSRLQGGVL (а.к. 249-263 SEQ ID NO:4)
KEKSRLQGGVLVNEI (а.к. 253-267 SEQ ID NO:4)
RLQGGVLVNEILNHM (а.к. 257-271 SEQ ID NO:4)
GVLVNEILNHMKRAT (а.к. 261-275 SEQ ID NO:4)
NEILNHMKRATQIPS (а.к. 265-279 SEQ ID NO:4)
NHMKRATQIPSYKKL (а.к. 269-283 SEQ ID NO:4)
RATQIPSYKKLIMYS (а.к. 274-287 SEQ ID NO:4)
IPSYKKLIMYSAHDT (а.к. 277-291 SEQ ID NO:4)
KKLIMYSAHDTTVSG (а.к. 281-295 SEQ ID NO:4)
MYSAHDTTVSGLQMA (а.к. 285-299 SEQ ID NO:4)
HDTTVSGLQMALDVY (а.к. 289-303 SEQ ID NO:4)
VSGLQMALDVYNGLL (а.к. 293-307 SEQ ID NO:4)
QMALDVYNGLLPPYA (а.к. 297-311 SEQ ID NO:4)
DVYNGLLPPYASCHL (а.к. 301-315 SEQ ID NO:4)
GLLPPYASCHLTELY (а.к. 305-319 SEQ ID NO:4)
PYASCHLTELYFEKG (а.к. 309-323 SEQ ID NO:4)
CHLTELYFEKGEYFV (а.к. 313-327 SEQ ID NO:4)
ELYFEKGEYFVEMYY (а.к. 317-331 SEQ ID NO:4)
EKGEYFVEMYYRNET (а.к. 321-335 SEQ ID NO:4)
YFVEMYYRNETQHEP (а.к. 325-339 SEQ ID NO:4)
MYYRNETQHEPYPLM (а.к. 329-343 SEQ ID NO:4)
NETQHEPYPLMLPGC (а.к. 333-347 SEQ ID NO:4)
HEPYPLMLPGCSPSC (а.к. 337-351 SEQ ID NO:4)
PLMLPGCSPSCPLER (а.к. 341-355 SEQ ID NO:4)
PGCSPSCPLERFAEL (а.к. 345-359 SEQ ID NO:4)
PSCPLERFAELVGPV (а.к. 349-363 SEQ ID NO:4)
LERFAELVGPVIPQD (а.к. 353-367 SEQ ID NO:4)
AELVGPVIPQDWSTE (а.к. 357-371 SEQ ID NO:4)
GPVIPQDWSTECMTT (а.к. 361-375 SEQ ID NO:4)
PQDWSTECMTTNSHQ (а.к. 365-379 SEQ ID NO:4)
STECMTTNSHQGTED (а.к. 369-383 SEQ ID NO:4)
MTTNSHQGTEDSTD (а.к. 373-386 SEQ ID NO:4)
Последовательность 44 пептидов ТАА МНС класса I с соответствующими ТАА и положением в последовательности ТАА:
Пептиды: Последовательность
PSMA
4-12 LLHETDSAV (а.к. 4-12 SEQ ID NO:7)
109-117 ELAHYDVLL (а.к. 109-117 SEQ ID NO:7)
168-176 PSLYTKVVHY (а.к. 168-176 SEQ ID NO:7)
173-181 DLVYVNYAR (а.к. 173-181 SEQ ID NO:7)
178-186 NYARTEDFF (а.к. 178-186 SEQ ID NO:7)
199-207 KIVIARYGK (а.к. 199-207 SEQ ID NO:7)
207-215 KVFRGNKVK (а.к. 207-215 SEQ ID NO:7)
227-235 LYSDPADYF (а.к. 227-235 SEQ ID NO:7)
260-268 NLNGAGDPL (а.к. 260-268 SEQ ID NO:7)
347-356 HSTNGVTRIY (а.к. 347-356 SEQ ID NO:7)
354-363 RIYNVIGTLR (а.к. 354-363 SEQ ID NO:7)
403-411 GTLKKEGWR (а.к. 403-411 SEQ ID NO:7)
431-440 STEWAEENSR (а.к. 431-440 SEQ ID NO:7)
441-450 LLQERGVAYI (а.к. 441-450 SEQ ID NO:7)
461-469 TLRVDCTPL (а.к. 461-469 SEQ ID NO:7)
557-566 ETYELVEKFY (а.к. 557-566 SEQ ID NO:7)
641-649 EIASKFSER (а.к. 641-649 SEQ ID NO:7)
663-671 MMNDQLMFL (а.к. 663-671 SEQ ID NO:7)
680-688 GLPDRPFYR (а.к. 680-688 SEQ ID NO:7)
711-719 ALFDIESKV (а.к. 711-719 SEQ ID NO:7)
PSCA
7-15 ALLMAGLAL (а.к. 7-15 SEQ ID NO:8)
14-22 ALQPGTALL (а.к. 14-22 SEQ ID NO:8)
21-30 LLCYSCKAQV (а.к. 21-30 SEQ ID NO:8)
76-84 DYYVGKKNI (а.к. 76-84 SEQ ID NO:8)
108-116 ALLPALGLL (а.к. 108-116 SEQ ID NO:8)
109-117 LLPALGLLL (а.к. 109-117 SEQ ID NO:8)
115-123 LLLWGPGQ (а.к.:115-123 SEQ ID NO:8)
STEAP 1
86-94 FLYTLLREV (а.к. 86-94 SEQ ID NO:9)
HQQYFYKIPILVINK (a.к. 102-116 SEQ ID 102-116 NO:9)
262-270 LLLGTIHAL (а.к. 262-270 SEQ ID NO:9)
292-300 MIAVFLPIV (а.к. 292-300 SEQ ID NO:9)
PTHrp
42-51 QLLHDKGKS (а.к. 42-51 SEQ ID NO:10)
59-68 FLHHLIAEIH (а.к. 59-68 SEQ ID NO:10)
59-65 FLHHLIA (а.к. 59-65 SEQ ID NO:10)
165-173 TSTTSLELD (а.к. 165-173 SEQ ID NO:10)
TARP
4-13 FPPSPLFFFL (а.к. 4-13 SEQ ID NO:11)
27-35 FVFLRNFSL (а.к. 27-35 SEQ ID NO:11)
29-37 FLRNFSLML (а.к. 29-37 SEQ ID NO:11)
Простеин
31-39 CLAAGITYV (SEQ ID NO:12)
Eph
58-66 IMNDMPIYM(SEQ ID NO:13)
550-558 VLAGVGFFI (SEQ ID NO:14)
Сурвивин
96-104 LTLGEFLKL (SEQ ID NO:15)
hTERT
973-981 KLFGVLRLK (SEQ ID NO:16)
HER2
665-673 WLGWFGT-(SEQ ID NO:17)
Последовательность 15 пептидов ТАА МНС класса II с соответствующими ТАА и положением в последовательности ТАА.
Калликреин 4
125-139 SVSESDTIRSISIAS (SEQ ID NO:18)
155-169 LLANGRMPTVLQCVN (SEQ ID NO:19)
160-174 RMPTVLQCVNVSWS (SEQ ID NO:20)
Гистон Н4
GAKRHRKVLRDNIQG (a.K. 14-28 SEQ ID 14-28 NO:21)
KRHRKVLRDNIQGITKPAIRRLAR (а.к. 16-39 16-39 SEQ ID NO:21)
TKPAIRRLARRGGVK (а.к. 31-45 SEQ ID 31-45 NO:21)
LIYEETRGVLKVFLE (а.к. 49-63 SEQ ID 49-63 NO:21)
TYTEHAKRKTVTAMDVVYALKRQG (а.К. 71-94 71-94 SEQ ID NO:21)
TARP
1-14 MQMFPPSPLFFFLQ (SEQ ID NO:11) 14-27 QLLKQSSRRLEHTF (SEQ ID NO:11)
ENAH (hMena)
502-510 TMNGSKSPV(SEQ ID NO:22) PSMA
TGNFSTQKVKMHIHS (а.к. 334-348 SEQ ID
334-348 NO:7)
NYTLRVDCTPLMYSL (а.к. 459-473 SEQ ID
459-473 NO:7)
YRHVIYAPSSHNKYA (а.к. 687-701 SEQ ID
687-701 NO:7)
RQIYVAAFTVQAAAE (a.к. 730-744 SEQ ID
730-744 NO:7)
После 40 часов инкубации при 37°С, 5% CO2, секрецию IFN-γ детектировали с 1 мкг/мл биотинилированного антитела против человеческого IFN-γ (Mabtech, клон MAb 7-B6-1, Кат. №3420-6) с последующим добавлением комплекса стрептавидин-щелочная фосфатаза (BD Pharmingen, Кат. №554065), разведенного 1/5000. Планшеты ELISpot проявляли с Vector Blue Substrate (Vector Lab Inc., Кат. № SK-5300) и пятна подсчитывали автоматическим ридером пятен (Cellular Technology Ltd. ImmunoSpot S3B Analyzer и профессиональное программное обеспечение CTL ImmunoSpot 4.0). Как показано на Фиг.12, предсуществующий ответ Т-клеток на PSA детектировали до обработки MVA-BN-PRO у пациента J-D-1001. (Число) Т-клеток против PSA значительно возрастало после обработки, тогда как Т-клетки против РАР определялись только после обработки. Эти данные показывают, что MVA-BN-PRO является иммуногенным у людей, и что может достигаться одновременная индукция как ответов против PSA, так и против РАР. Обработка MVA-BN-PRO также приводила к сильному Т-клеточному ответу на вектор MVA-BN. Важнее всего то, что обработка MVA-BN-PRO также приводила к распространению Т-клеточных ответов на другие опухолевые антигены, что иллюстрируется продукцией IFN-γ Т-клетками, стимулированными пулами пептидов ТАА ГКГ 1 и II. Это указывает на то, что MVA-BN-PRO-индуцированные иммунные ответы приводили к умерщвлению опухолевых клеток с последующим усилением противоопухолевых ответов на другие опухолевые антигены. Распространение антигенов является важным событием в индукции противоопухолевого защитного иммунитета, так как оно предупреждает выход опухоли из под удара ответов, индуцированных вакциной. Следовательно, способность MVA-BN-PRO опосредовать иммунные ответы на два опухолевых антигена у людей является свойством, которое обеспечивает эффективную иммунотерапию.
Claims (23)
1. Способ лечения ракового пациента-человека, включающий введение данному пациенту рекомбинантного модифицированного вируса коровьей оспы Анкара (MVA), кодирующего полипептид, содержащий человеческий простато-специфический антиген (PSA), и полипептид, содержащий антиген человеческой простатической кислой фосфатазы (РАР).
2. Способ по п.1, где MVA представляет собой MVA-BN (модифицированный вирус коровьей оспы Анкара - баварский северный (Bavarian Nordic)).
3. Способ по п.1, где вирус MVA содержит нуклеотидные последовательности SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2.
4. Способ по п.1, где антиген PSA и антиген РАР вставлены в межгенную область 014L/015L MVA.
5. Способ по п.1, где рак представляет собой рак простаты.
6. Способ по п.1, где рак представляет собой метастатический рак простаты.
7. Способ по п.1, где рекомбинантный MVA вводят перед введением дозы таксана, уничтожающей опухолевые клетки.
8. Способ по п.1, где рекомбинантный MVA вводят в то же самое время, что и дозу таксана, уничтожающую опухолевые клетки.
9. Способ по п.1, где рекомбинантный MVA вводят после введения дозы таксана, уничтожающей опухолевые клетки.
10. Способ по п.7, где таксан представляет собой доцетаксел или паклитаксел.
11. Способ по п.9, где таксан представляет собой доцетаксел или паклитаксел.
12. Набор для профилактики рака простаты, содержащий:
(а) рекомбинантный MVA, кодирующий полипептид, содержащий человеческий антиген PSA, и полипептид, содержащий человеческий антиген РАР; и
(б) инструкции для введения данного рекомбинантного MVA до обнаружения рака простаты.
(а) рекомбинантный MVA, кодирующий полипептид, содержащий человеческий антиген PSA, и полипептид, содержащий человеческий антиген РАР; и
(б) инструкции для введения данного рекомбинантного MVA до обнаружения рака простаты.
13. Набор для лечения рака простаты, содержащий:
(а) рекомбинантный MVA, кодирующий полипептид, содержащий человеческий антиген PSA, и полипептид, содержащий человеческий антиген РАР; и
(б) инструкции для введения данного рекомбинантного MVA пациенту с раком простаты.
(а) рекомбинантный MVA, кодирующий полипептид, содержащий человеческий антиген PSA, и полипептид, содержащий человеческий антиген РАР; и
(б) инструкции для введения данного рекомбинантного MVA пациенту с раком простаты.
14. Набор по п.13, дополнительно содержащий инструкции для введения данного рекомбинантного MVA до, в то же самое время или после лечения дозой таксана, уничтожающей опухолевые клетки.
15. Иммуногенная композиция, содержащая рекомбинантный вирус MVA, кодирующий полипептид, содержащий человеческий антиген РАР, и полипептид, содержащий человеческий антиген PSA, где данная иммуногенная композиция индуцирует В-клеточные и Т-клеточные иммунные ответы против PSA и РАР при введении хозяину-человеку.
16. Иммуногенная композиция по п.15, индуцирующая антитела против PSA и РАР при введении хозяину-человеку.
17. Иммуногенная композиция по п.16, где данный рекомбинантный вирус MVA содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1.
18. Иммуногенная композиция по п.16, где данный рекомбинантный вирус MVA содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:2.
19. Иммуногенная композиция по п.16, где данный рекомбинантный вирус MVA содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 и нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:2.
20. Иммуногенная композиция по п.16, где вирус MVA представляет собой MVA-BN, депонированный в Европейской коллекции клеточных культур (ЕСАСС) под регистрационным номером V00083008.
21. Способ индукции В-клеточных и Т-клеточных иммунных ответов против РАР и PSA, включающий введение пациенту-человеку примирующей дозы рекомбинантного MVA, кодирующего полипептид, содержащий человеческий антиген РАР, и полипептид, содержащий человеческий антиген PSA, и введение одной или более бустер-дозы рекомбинантного MVA, кодирующего полипептид, содержащий антиген РАР, и полипептид, содержащий человеческий антиген PSA.
22. Способ по п.21, где пациенту вводят примирующую дозу 1·108 TCID50 (средняя цитопатогенная доза) и две бустер-дозы 2·108 и 4·108 TCID50.
23. Способ по п.22, где бустер-дозы дают через четыре и восемь недель после примирующей дозы.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US96089307P | 2007-10-18 | 2007-10-18 | |
US60/960,893 | 2007-10-18 | ||
PCT/US2008/080229 WO2009052328A1 (en) | 2007-10-18 | 2008-10-16 | Use of mva to treat prostate cancer |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2010115220A RU2010115220A (ru) | 2011-11-27 |
RU2499606C2 true RU2499606C2 (ru) | 2013-11-27 |
Family
ID=40342626
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010115220/15A RU2499606C2 (ru) | 2007-10-18 | 2008-10-16 | Применение mva (модифицированный вирус коровьей оспы анкара) для лечения рака простаты |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7867483B2 (ru) |
EP (1) | EP2207564B1 (ru) |
JP (1) | JP5669581B2 (ru) |
KR (2) | KR101648087B1 (ru) |
CN (1) | CN101888853B (ru) |
AU (1) | AU2008312444B2 (ru) |
CA (1) | CA2702586C (ru) |
DK (1) | DK2207564T3 (ru) |
ES (1) | ES2608604T3 (ru) |
HK (1) | HK1149709A1 (ru) |
IL (1) | IL204541A (ru) |
NZ (2) | NZ584042A (ru) |
RU (1) | RU2499606C2 (ru) |
WO (1) | WO2009052328A1 (ru) |
Families Citing this family (35)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6136311A (en) | 1996-05-06 | 2000-10-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Treatment and diagnosis of cancer |
NZ524661A (en) * | 2000-11-23 | 2005-03-24 | Bavarian Nordic As | Modified vaccinia ankara virus variant |
ATE509033T1 (de) | 2006-03-20 | 2011-05-15 | Univ California | Manipulierte anti-prostatastammzellenantigen (psca)-antikörper für krebs-targeting |
US8940298B2 (en) | 2007-09-04 | 2015-01-27 | The Regents Of The University Of California | High affinity anti-prostate stem cell antigen (PSCA) antibodies for cancer targeting and detection |
EP2740490A1 (en) * | 2007-10-03 | 2014-06-11 | Cornell University | Treatment of proliferative disorders using antibodies to PSMA |
DK2207564T3 (en) * | 2007-10-18 | 2017-01-16 | Bavarian Nordic As | USE OF VAT FOR TREATMENT OF PROSTATACANCES |
US20100069616A1 (en) * | 2008-08-06 | 2010-03-18 | The Regents Of The University Of California | Engineered antibody-nanoparticle conjugates |
EP3495000A1 (en) * | 2009-02-17 | 2019-06-12 | Cornell Research Foundation, Inc. | Methods and kits for diagnosis of cancer and prediction of therapeutic value |
GB2484058A (en) * | 2009-12-01 | 2012-04-04 | Uni Konstanz | Prostate cancer DNA vaccine |
MX354143B (es) | 2009-12-02 | 2018-02-14 | Imaginab Inc | Minicuerpos j591 y diacuerpos-cys para apuntar con especificidad de objetivo a un antígeno de membrana específico para próstata de humano (psma) y métodos para su uso. |
WO2013146997A1 (ja) | 2012-03-30 | 2013-10-03 | 国立大学法人京都大学 | 前立腺がん検査用尿中バイオマーカー |
DK3062815T3 (en) | 2013-11-01 | 2019-03-11 | Pfizer | Vectors for expression of prostate-associated antigens |
WO2016044745A1 (en) | 2014-09-19 | 2016-03-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric antigen receptors |
CN115300622A (zh) | 2015-02-25 | 2022-11-08 | 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 | 使用灭活的修饰的痘苗病毒安卡拉作为实体肿瘤的单一免疫疗法或与免疫检查点阻断剂组合 |
EP3283088A4 (en) | 2015-04-17 | 2018-10-24 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Use of mva or mvadeltae3l as immunotherapeutic agents against solid tumors |
KR20180050321A (ko) | 2015-08-07 | 2018-05-14 | 이미지냅 인코포레이티드 | 분자를 표적화하기 위한 항원 결합 구조체 |
FR3042121A1 (fr) | 2015-10-08 | 2017-04-14 | Jean-Marc Limacher | Composition anti-tumorale |
GB201520550D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | Immunocore Ltd & Adaptimmune Ltd | Peptides |
GB201520570D0 (en) * | 2015-11-23 | 2016-01-06 | Immunocore Ltd & Adaptimmune Ltd | Peptides |
GB201520568D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | Immunocore Ltd | Peptides |
WO2017139628A1 (en) * | 2016-02-12 | 2017-08-17 | Madison Vaccines Inc. | Cancer therapy |
JP7025339B2 (ja) | 2016-02-25 | 2022-02-24 | メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター | 癌免疫療法のための、チミジンキナーゼの欠失を伴い、ヒトflt3lまたはgm-csfの発現を伴うかまたは伴わない、複製可能な弱毒化ワクシニアウイルス |
SG11201807022XA (en) | 2016-02-25 | 2018-09-27 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Recombinant mva or mvadele3l expressing human flt3l and use thereof as immuno-therapeutic agents against solid tumors |
EP3450433B1 (en) * | 2016-04-26 | 2021-08-18 | Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. | Purine derivatives as tlr7 inhibitors for treating e.g. systemic lupus erythematosus |
KR20190034503A (ko) * | 2016-06-03 | 2019-04-02 | 이투빅스 코포레이션 | 전립선암-연관 항원을 사용한 종양 백신접종을 위한 조성물 및 방법 |
SI3462853T1 (sl) | 2016-06-03 | 2023-05-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Glodavci, ki izražajo eksogeno terminalno deoksinukleotidiltransferazo |
CN106119231A (zh) * | 2016-06-24 | 2016-11-16 | 安徽未名细胞治疗有限公司 | 一种肿瘤抗原psa的ctl识别表位肽及其应用 |
CN106084027A (zh) * | 2016-06-24 | 2016-11-09 | 安徽未名细胞治疗有限公司 | 特异性肿瘤抗原EphA2的CTL识别表位肽及其应用 |
WO2018147960A1 (en) | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Imaginab, Inc. | Extension sequences for diabodies |
WO2018209315A1 (en) | 2017-05-12 | 2018-11-15 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Vaccinia virus mutants useful for cancer immunotherapy |
US10925947B2 (en) * | 2018-06-29 | 2021-02-23 | Immatics Biotechnologies Gmbh | A*03 restricted peptides for use in immunotherapy against cancers and related methods |
TW202043256A (zh) | 2019-01-10 | 2020-12-01 | 美商健生生物科技公司 | 前列腺新抗原及其用途 |
WO2020247859A2 (en) * | 2019-06-07 | 2020-12-10 | Oregon Health & Science University | Tumor-associated antigen-specific t cell responses |
WO2021209897A1 (en) * | 2020-04-13 | 2021-10-21 | Janssen Biotech, Inc. | Psma and steap1 vaccines and their uses |
WO2022009052A2 (en) * | 2020-07-06 | 2022-01-13 | Janssen Biotech, Inc. | Prostate neoantigens and their uses |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995004548A1 (en) * | 1993-08-11 | 1995-02-16 | Jenner Technologies | Prostatic cancer vaccine |
RU94038046A (ru) * | 1991-07-25 | 1997-11-10 | Айдек Фармасьютикалс Корпорейшн | Антигенная композиция, способы индукции цитотоксических т-лимфоцитов, способы лечения |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
HU220295B (hu) * | 1991-07-25 | 2001-11-28 | Idec Pharmaceuticals Corp. | Antigénkészítmények és ezek alkalmazása citotoxikus T-limfocita reakciók indukálására |
US6045802A (en) * | 1994-10-03 | 2000-04-04 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Enhanced immune response to an antigen by a composition of a recombinant virus expressing the antigen with a recombinant virus expressing an immunostimulatory molecule |
US6165460A (en) * | 1995-07-10 | 2000-12-26 | Therion Biologics Corporation | Generation of immune responses to prostate-specific antigen (PSA) |
WO1998004689A1 (en) * | 1995-07-31 | 1998-02-05 | Urocor, Inc. | Biomarkers and targets for diagnosis, prognosis and management of prostate disease |
JP2001516226A (ja) | 1997-04-11 | 2001-09-25 | デンドレオン コーポレイション | 腫瘍関連性の抗原に対する免疫応答を誘導するための組成物および方法 |
TR200100936T2 (tr) | 1998-10-05 | 2001-08-21 | Pharmexa A/S | Terapötik aşılama |
ATE361988T1 (de) * | 1998-12-09 | 2007-06-15 | Us Gov Health & Human Serv | Recombinanter vector, welcher mehrere kostimulatorische moleküle exprimiert und dessen verwenden |
NZ524661A (en) | 2000-11-23 | 2005-03-24 | Bavarian Nordic As | Modified vaccinia ankara virus variant |
US7718166B2 (en) * | 2002-03-01 | 2010-05-18 | Applied Immune Technologies | Immunotherapy for prostate cancer using recombinant bacille Calmette-Guerin expressing prostate specific antigens |
CN101831411A (zh) * | 2002-05-16 | 2010-09-15 | 巴法里安诺迪克有限公司 | 表达插入痘病毒基因组中的同源基因的重组痘病毒 |
NZ545438A (en) | 2003-08-21 | 2008-08-29 | Virax Dev Pty Ltd | Poxvirus vector encoding prostate specific antigens for treatment of prostate cancer |
BRPI0401465A (pt) | 2004-04-20 | 2006-02-21 | Embria Informatica Ltda | sistema para administrar interações entre usuários e aplicações de software em um ambiente web |
DK2207564T3 (en) * | 2007-10-18 | 2017-01-16 | Bavarian Nordic As | USE OF VAT FOR TREATMENT OF PROSTATACANCES |
-
2008
- 2008-10-16 DK DK08839145.3T patent/DK2207564T3/en active
- 2008-10-16 KR KR1020107010873A patent/KR101648087B1/ko active IP Right Grant
- 2008-10-16 NZ NZ584042A patent/NZ584042A/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-10-16 WO PCT/US2008/080229 patent/WO2009052328A1/en active Application Filing
- 2008-10-16 ES ES08839145.3T patent/ES2608604T3/es active Active
- 2008-10-16 KR KR1020167013629A patent/KR20160065985A/ko not_active Application Discontinuation
- 2008-10-16 AU AU2008312444A patent/AU2008312444B2/en not_active Ceased
- 2008-10-16 EP EP08839145.3A patent/EP2207564B1/en not_active Not-in-force
- 2008-10-16 CN CN2008801193517A patent/CN101888853B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2008-10-16 JP JP2010530124A patent/JP5669581B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-10-16 CA CA2702586A patent/CA2702586C/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-10-16 US US12/253,094 patent/US7867483B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-10-16 RU RU2010115220/15A patent/RU2499606C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-10-16 NZ NZ601827A patent/NZ601827A/en not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-03-16 IL IL204541A patent/IL204541A/en active IP Right Grant
- 2010-08-30 US US12/871,017 patent/US8377688B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-04-19 HK HK11103921.5A patent/HK1149709A1/xx not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU94038046A (ru) * | 1991-07-25 | 1997-11-10 | Айдек Фармасьютикалс Корпорейшн | Антигенная композиция, способы индукции цитотоксических т-лимфоцитов, способы лечения |
WO1995004548A1 (en) * | 1993-08-11 | 1995-02-16 | Jenner Technologies | Prostatic cancer vaccine |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR101648087B1 (ko) | 2016-08-17 |
WO2009052328A8 (en) | 2009-07-02 |
EP2207564B1 (en) | 2016-10-05 |
KR20100109545A (ko) | 2010-10-08 |
CN101888853B (zh) | 2013-03-13 |
IL204541A (en) | 2015-02-26 |
ES2608604T3 (es) | 2017-04-12 |
CN101888853A (zh) | 2010-11-17 |
CA2702586C (en) | 2017-08-01 |
WO2009052328A1 (en) | 2009-04-23 |
US7867483B2 (en) | 2011-01-11 |
US20110008386A1 (en) | 2011-01-13 |
NZ584042A (en) | 2012-09-28 |
AU2008312444A1 (en) | 2009-04-23 |
JP5669581B2 (ja) | 2015-02-12 |
NZ601827A (en) | 2014-01-31 |
DK2207564T3 (en) | 2017-01-16 |
IL204541A0 (en) | 2010-11-30 |
CA2702586A1 (en) | 2009-04-23 |
JP2011500718A (ja) | 2011-01-06 |
US20090104225A1 (en) | 2009-04-23 |
KR20160065985A (ko) | 2016-06-09 |
US8377688B2 (en) | 2013-02-19 |
RU2010115220A (ru) | 2011-11-27 |
AU2008312444B2 (en) | 2014-02-06 |
HK1149709A1 (en) | 2011-10-14 |
EP2207564A1 (en) | 2010-07-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2499606C2 (ru) | Применение mva (модифицированный вирус коровьей оспы анкара) для лечения рака простаты | |
JP7368305B2 (ja) | 腫瘍抗原を発現するポックスウイルス及びtim-3に対するモノクローナル抗体を用いた癌治療のための併用療法 | |
JP6124822B2 (ja) | Mvaを使ってがんを処置する方法 | |
RU2724433C2 (ru) | Комбинированная терапия для лечения рака с помощью рекомбинантного поксвируса, экспрессирующего опухолевый антиген, и антагониста или агониста молекулы иммунной контрольной точки | |
US20200172926A1 (en) | Modified immunization vectors | |
US20150283220A1 (en) | Methods and compositions for the treatment of cancer |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant | ||
PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20160712 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191017 |