HU211299A9 - Induction of cytotoxic t-lymphocyte responses - Google Patents
Induction of cytotoxic t-lymphocyte responses Download PDFInfo
- Publication number
- HU211299A9 HU211299A9 HU95P/P00339P HU9500339P HU211299A9 HU 211299 A9 HU211299 A9 HU 211299A9 HU 9500339 P HU9500339 P HU 9500339P HU 211299 A9 HU211299 A9 HU 211299A9
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- antigen
- patient
- protein
- antigens
- carcinoma
- Prior art date
Links
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 title claims description 125
- 230000004044 response Effects 0.000 title claims description 67
- 230000006698 induction Effects 0.000 title description 41
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 243
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 243
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 236
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 169
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 80
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 64
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 43
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 36
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 31
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 30
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 29
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 29
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 26
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 21
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 19
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 18
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims description 17
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 15
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 14
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 14
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 13
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 13
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 12
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 claims description 12
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 claims description 7
- 108010069621 Epstein-Barr virus EBV-associated membrane antigen Proteins 0.000 claims description 7
- 108010083021 Epstein-Barr virus glycoprotein 85 Proteins 0.000 claims description 7
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims description 7
- 101710192036 Sporozoite surface protein 2 Proteins 0.000 claims description 7
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 7
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 7
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 claims description 7
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 claims description 7
- 241000175212 Herpesvirales Species 0.000 claims description 6
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 claims description 6
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 6
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 5
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 4
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 4
- 101710160621 Fusion glycoprotein F0 Proteins 0.000 claims description 4
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 claims description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 3
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 claims description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 claims 8
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 claims 8
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims 7
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 claims 4
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 claims 4
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 claims 4
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 claims 3
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 claims 3
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 claims 3
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 claims 3
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 claims 3
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 claims 3
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims 3
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 claims 2
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 claims 2
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 claims 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims 2
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 claims 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 claims 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 claims 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 75
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 57
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 36
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 33
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 32
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 30
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 28
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 27
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 25
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 25
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 23
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 23
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 23
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 23
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 22
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 21
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 20
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 18
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 15
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 15
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 15
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 15
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 14
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 14
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 11
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 10
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 9
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 9
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 7
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 7
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 6
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 5
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 5
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- -1 polyoxy-1,2-ethanediyl Polymers 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 3
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 3
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 3
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 3
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical group C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 2
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 2
- 101000957351 Homo sapiens Myc-associated zinc finger protein Proteins 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 102100038750 Myc-associated zinc finger protein Human genes 0.000 description 2
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002359 Tetronic® Polymers 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- CBFCDTFDPHXCNY-UHFFFAOYSA-N icosane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC CBFCDTFDPHXCNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- KMXFZRSJMDYPPG-UHFFFAOYSA-N tetratetracontane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC KMXFZRSJMDYPPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N (4as,6as,6br,8ar,9r,10s,12ar,12br,14bs)-10-hydroxy-2,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-9-[(sulfooxy)methyl]-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-icosahydropicene-4a-carboxylic acid Chemical compound C1C[C@H](O)[C@@](C)(COS(O)(=O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N 0.000 description 1
- KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N (4s)-5-[[(2s)-6-amino-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2r)-1-[[2-[[2-[[(1s)-3-amino-1-carboxy-3-oxopropyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]a Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN)CC1=CC=C(O)C=C1 KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical class OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPTYXJLOWLVCMU-UHFFFAOYSA-N 67252-82-8 Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2C2=C1C(C1OC1C(C1O)O)=C1C=C2 KPTYXJLOWLVCMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZJBUILVYSXQNSW-YTWAJWBKSA-N Arg-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O ZJBUILVYSXQNSW-YTWAJWBKSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- XJQRWGXKUSDEFI-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XJQRWGXKUSDEFI-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- QLSRHWQZZWAIGL-UHFFFAOYSA-N CC(C)[N]1(C)C(CC2CCC2)C1 Chemical compound CC(C)[N]1(C)C(CC2CCC2)C1 QLSRHWQZZWAIGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 208000006313 Delayed Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 101710142246 External core antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- SGLXGEDPYJPGIQ-ACRUOGEOSA-N His-Phe-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=CC=C2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N SGLXGEDPYJPGIQ-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- SVBAHOMTJRFSIC-SXTJYALSSA-N Ile-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N SVBAHOMTJRFSIC-SXTJYALSSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LFSQWRSVPNKJGP-WDCWCFNPSA-N Leu-Thr-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LFSQWRSVPNKJGP-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- GPAHWYRSHCKICP-GUBZILKMSA-N Met-Glu-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GPAHWYRSHCKICP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 101150076359 Mhc gene Proteins 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 1
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 1
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 1
- 108700020354 N-acetylmuramyl-threonyl-isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- PSKRILMFHNIUAO-JYJNAYRXSA-N Phe-Glu-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N PSKRILMFHNIUAO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 229920002046 Pluronic® L 62 LF Polymers 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 101710124413 Portal protein Proteins 0.000 description 1
- FHJQROWZEJFZPO-SRVKXCTJSA-N Pro-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FHJQROWZEJFZPO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 101710137389 Probable tail terminator protein Proteins 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108700027479 Syntex adjuvant formulation Proteins 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- DVLWZWNAQUBZBC-ZNSHCXBVSA-N Val-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O DVLWZWNAQUBZBC-ZNSHCXBVSA-N 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 0 [N+]*C1CCC1 Chemical compound [N+]*C1CCC1 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012984 antibiotic solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 108010056411 detox adjuvant Proteins 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 230000033687 granuloma formation Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 231100000171 higher toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000001483 mobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940111688 monobasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940055036 mycobacterium phlei Drugs 0.000 description 1
- YDLYQMBWCWFRAI-UHFFFAOYSA-N n-Hexatriacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC YDLYQMBWCWFRAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N sodium chromate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Cr]([O-])(=O)=O PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 1
- 229940038774 squalene oil Drugs 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- OLTHARGIAFTREU-UHFFFAOYSA-N triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(C)CCCCCCCC OLTHARGIAFTREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001103—Receptors for growth factors
- A61K39/001106—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ErbB4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001148—Regulators of development
- A61K39/00115—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin
- A61K39/001151—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin p53
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001154—Enzymes
- A61K39/001164—GTPases, e.g. Ras or Rho
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001169—Tumor associated carbohydrates
- A61K39/00117—Mucins, e.g. MUC-1
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00118—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
- A61K39/001182—Carcinoembryonic antigen [CEA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00119—Melanoma antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/002—Protozoa antigens
- A61K39/015—Hemosporidia antigens, e.g. Plasmodium antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
A találmány citotoxikus T-sejt közvetítette válaszreakciók redukálására (emberben illetve háziállatokban és mezőgazdasági haszonállatokban) alkalmazható eljárásokra és készítményekre vonatkozik.
A különféle vírusinfekciók, neoplasztok és rákos növekedések elleni válaszreakciókat illetően a citotoxikus T-limfocitákat (CTL) tartják a gazdaszervezet fő védekezési rendszerének. Ezen sejtek oly módon távolítják el a fertőzött vagy transzformált sejteket, hogy felismerik a különböző molekulákkal (úgynevezett I. osztályú MHC molekulákkal) asszociált az infektált vagy transzformált sejten lévő antigén fragmenseket. A citotoxikus T-limfociták kísérletesen indukálhatók bizonyos oldható (szolubilis) antigéneknek specifikus sejtek citoplazmájába történő juttatásával. A szolubilis antigénnel önmagában végzett immunizálás általában nem elégséges a specifikus citotoxikus T-limfocita indukcióhoz.
Egy eljárás - mellyel a CTL válaszreakció indukálható rekombinációs technikákat foglal magában, melyek segítségével a szóban forgó antigén kritikus komponenseit egy jóindulatú fertőző ágens genomjába juttatják be. Az ilyen stratégiának az a célja, hogy a gazdaszervezetet egy enyhe, önkorlátozó fertőzésnek alávetve a kívánt epitóp elleni antigén-specifikus, citotoxikus T-limfocita válaszreakciókat indukáljanak. Korábban vaccinia, polio-, adeno- és retrovírusok, illetve baktériumok (pl. Listeria, BCG) felhasználásával készült kiméra-vektorokat írtak le. Például Takahashi és mlsi. (Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 85, 3105, 1988) a HIB gplóO burok (envelope) gént expresszáló rekombináns vaccinia vírus felhasználását írták le a citotoxikus T-limfociták indukálásának potenciális eszközeként.
A celluláris immunválasz indukálásának egy másik módszere az adjuvánsok használatát foglalja magában. Bár a szakterület bővelkedik az adjuvánsok felhasználásának leírásában, nem világos, hogy indukálódott-e a sejtközvetítette immunválaszt illetve, hogy ezen sejtközvetítette immunválaszok citotoxikus T-limfocita válaszreakciókat foglalnak-e magukban. A következőkben e témakörben megjelent különböző leírások közül említünk meg néhány jellemzőt.
Stover és mtsi, (Natúré, 351, 456, 1991, mely nem tekinthető technika állásának találmányunk vonatkozásában) β-galaktozidáz gént tartalmazó rekombináns BCG felhasználásával β-galaktozidázzal szembeni CTL-válaszreakciót írtak le. Freund-féle inkomplett adjuváns és β-galaktozidáz felhasználásával a fenti reakciót nem tapasztalták.
Mitchell és mtsi (J. Clinical Oncology, 8, 856, 1990. mely nem tekinthető technika állásának találmányunk vonatkozásában) metasztatikus melanomában szenvedő betegek DETOX adjuvánssal és allogén melanoma lizátummal (melyeket hat héten keresztül öt alkalommal adagoltak) történő kezelését írták le. A páciensek egy kis hányadánál a citolitikus Τ-sejtek számának növekedését tapasztalták. A szerzők szükségesnek tartották a citotoxikus T-limfocita termelés szintjének növelését, és javasolták az adjuvánssal és Interleukin-2-vel végzett kombinált kezelést, valamint - az esetlegesen előforduló tumorspecifikus T-szuppresszor sejtek mennyiségének csökkentése érdekében - ciklofoszfamidos előkezelést javasoltak. A DETOX a következő összetevőkből áll: Salmonella minnesota-ból származó detoxikált endotoxin (monofoszforil lipid A), Mycobacterium phlei-ből származó sejtfalváz, szkvalén olaj és emulgeálószer.
Allison és Georgiadis (Immunology Today, 1, 427, 1990, mely nem tekinthető technika állásának találmányunk vonatkozásában) leírták, hogy a humán vakcinákban „felhasználásra jogosított” egyetlen adjuvánst az alumínium-sók (alum) képviselik, melyek nem következetesen váltanak ki sejtközvetítette immunitást. A szerzők megállapítják, hogy szükség van ezért „olyan adjuvánsok kifejlesztésére, amelyek rendelkeznek a Freund-féle komplett adjuváns hatékonyságával, anélkül, hogy annak különféle mellékhatásait (pl. granulomák kialakulása) mutatnák”. Arra a következtetésre jutottak, hogy három lehetséges stratégia létezik: így a liposzómák alkalmazása; adjuvánsok (pontos kifejezéssel immunstimuláló komplexek - ISCOM) felhasználása, ill. szkvalén v. Sqalane (pluronsav ágenssel vagy anélkül) és muramil-dipeptid (MDP) emulziójának (SAF) alkalmazása. Az ISCOM-ok közé tartozik a szaponin vagy a Quil A (két szénhidrát lánccal rendelkező triterpenoid), a koleszterin és a foszfatidil-kolin. Elfogadott ezek felhasználása influenza vakcinában lovak számára (Morein és mtsai, Immunological Adjuvants and Vaccines, Plenum Press, 153). A SAF-ról úgy tartják, hogy egerekben sejtközvetítette immunválaszt vált ki, bár „sokáig azt gondolták, hogy az antigén alegységek nem képesek citotoxikus T-sejtes (CTL) válaszreakciókat kiváltani”.
Takahashi és mtsi (Natúré, 344, 873, 1990) Π osztályú korlátozott helper és citotoxikus T-limfocita indukciót írtak le, melyet egereken egyszeri szubkután immunizálással, ISCOM-ok felhasználásával végeztek. Megállapították, hogy a Freund-féle adjuváns, a Freund-féle inkomplett adjuváns és a foszfát-pufferolt sóoldal nem indukálta az érdekelt célpontok ellen a citotoxikus T-limfocita aktivitást. Az exogén, szolubilis protein antigének más formáival elért eredményekkel ellentétben kimutatták, hogy exogén intakt proteinnel - ISCOM-ok felhasználásával - történő immunizálással lehetséges antigénspecifikus, I osztályú MHC-re korlátozott CD8+ CD4+ CTL redukálása. Megállapították továbbá, hogy a leírt kísérletek alapján lehetséges a humán CTL-ek redukálása HÍV proteineket tartalmazó ISCOM-ok felhasználásával, és hogy az ISCOM alapú vakcinákkal érhető el a régóta keresett cél, a CTL-ek és az antitestek egy tisztított fehérjével történő indukálása.
Byars és Allison (Vaccines, 5, 223, 1987) a SAF-1 felhasználását (mely TWEEN-80-at, PLURONIC L121 -et és szkvalént vagy Sqalane, - muramil-dipepliddel v. anélkül -- tartalmaz) írták le. Felvetették, hogy adataik értelmében a muramil-dipeptidet tartalmazó változat alkalmas lehet humán illetve állatgyógyászati vakcinák készítéséhez. Az adjuvánsok hatásfokozó adagjait muramil-dipeptid nélkül készítették ki. A muramil-dipeptidről azt tartják, hogy a muramil-peptid
HU 211 299 A9 nélküli adjuvánshoz képest lényegesen megnövekedett antitest termelést eredményez. A sejtközvetítette immunitást késleltetett típusú hiperszenitivitási bőrteszttel mérték, miáltal meghatározták a T-helper sejtek indukcióját. Abban az esetben, ha az adjuvánsban muramil-dipeptid is jelen volt, a hiperszenzitivitás erősebb és hosszabban tartó volt. Hasonló adjuvánsokat írtak le; Allison és mtsi (4 770 874 számú amerikai szabadalmi leírás, melyben megállapították, hogy a muramil-dipeptid és a pluronsav-poliol kombinációja lényeges a tojásalbumin elleni hatékony sejtközvetítette és humorális immunválasz kiváltásában); Allison és mtsi (4 772 466 számú amerikai szabadalmi leírás); Murphy-Corb és mtsi (Science, 246, 1293, 1989, ahol leírták, hogy muramil-dipeptidet tartalmazó kombinált adjuvánsok alkalmazása fokozhatja az immunválasz humorális és celluláris részét egyaránt); Allison és Byars, Vaccine 87, 56, 1987 (ahol megállapították, hogy a sejtközvetítette immunválaszt kiváltja a SAF (muramil-dipeptiddel) - amint azt késleltetett hiperszenzitivitással, továbbá a T-sejtek antigén elleni proliferatív válaszreakcióval, Interleukin-2 termeléssel és az immunizáló antigént hordozó célsejtek specifikus, genetikusán korlátozott lízisével kimutatták); Allison és Byars, (Immunopharmacology of Infectious Diseases: Vaccine Adjuvants and Modulators of Non-Specific Resistance 191-201, 1987); Morgan és mtsi (J. Medical Virology, 29, 74 1989); Kenney és mtsi (J. Immunological Methods, 727, 157, 1989); Allison és Byars (J. Immunological Methods, 95, 157, 1986 ahol alumínium sókról és ásványolaj emulziókról mutatták ki, hogy növelik az antitestek kialakulásának mértékét, miközben a sejtközvetítette immunválaszt nem serkentik, másrészről muramil-dipeptides készítményekről kimutatták, hogy kiváltják a sejtközvetítette immunválaszt); Byars és mtsi (Vaccine 8, 49 1990 - nem tekinthető találmányunk vonatkozásában technika állásának -) leírták, hogy adjuváns készítményük jelentősen fokozza a humorális immunreakciókat és kisebb mértékben az influenza hemagglutinin antigénnel szembeni sejtközvetítette immunreakciókat; Allison és Byars (Molecular Immunology, 28, 279 1991 - nem tekinthető találmányunk vonatkozásában technika állásának -, melyben leírták, hogy a muramil-dipeptid funkciója a citokinek expressziójának indukálása és a fő hisztokompatibilitási komplex (MHC) gének expressziójának fokozása; továbbá leírták, hogy hatékonyabb antitestes és celluláris válaszreakciókat kaptak, mint más adjuvánsok felhasználásával, s remélhető annak megállapítása, hogy hasonló stratégiák emberek esetében is hatékonyak-e; Allison és Byars (Technology Advances in Vaccine Development, 401, 1988, melyben sejtközvetítette immunitást írtak le SAF felhasználásával); Epstein és mtsi (Advance Drug Delivery Reviews 4, 223, 1990, melyben áttekintést nyújtottak a vakcinák előállításához használt különféle adjuvánsokról); Allison és Byars (J. Immunological Methods, 95, 157, 1986, melyben leírták, hogy az adjuvánshoz hozzáadott muramil-dipeptid jelentősen fokozza a különböző antigének elleni sejtközvetítetett immunreakciókat, ideértve a monoklonális immunglubolineket és vírusantigéneket); Morgan és mtsi (J. Medical Virology, 29, 74, 1989, melyben leírják a SAF-1 felhasználását a Epstein-Barr víruselleni vakcina készítéséhez).
Kwak és mtsi, (Idiotype Networks in Biology and Medicine, Elsevier Science Publishers, p, 163, 1990, mely nem tekithető találmányunk vonatkozásábak technika állásának) muramil-dipeptid nélküli SAF adjuvánsként való alkalmazását írták le egy humán B-sejt limfóma idiotípushoz. Konkréten Pluronic L121, Sqalane és 0,4%-os TWEEN-80 emulzióját (foszfát pufféról! sóoldatban) alkalmazták az idiotípus kezelésére. Megállapították, hogy „egy adjuváns hozzáadása tovább fokozhatja... a humorális válaszreakciók indukálását is.’’
Más immunológiai készítmények tartalmaznak liposzómákat (Allison és mtsi, 4 053 585 és 4 117 113 számú amerikai szabadalmi leírás), ciklikus peptideket (Dreesman és mtsi, 4 778 784 számú amerikai szabadalmi leírás), Freund-féle komplett adjuvánst (Asherson és mtsi. Immunology, 22, 465, 1972; Berman és mtsi, International I. Chancer, 2, 539, 1967; Allison, Immunopotentiation, 18, 73, 1973; és Allison, NonSpecific Factors Influencing Hőst Resistant, 247, 1973), ISCOM-okat (Letvin és mtsi, Vaccines 87, 209, 1987), ásványolajjal, felületaktív ágenssel és TWEEN80-nal készített nemionos blokkpolimer adalékot tartalmazó adjuvánsokat (Hunter és Bennett, J. Immunology, 133, 3167, 1984; Hunter és mtsi. J. Immunology, 727, 1244, 1981), ásványolaj és emulgeáló ágensből, jelölt mycobacteriummal vagy anélkül készített adjuvánsokat (Sanchez-Pescador és mtsi. J. Immunology, 747, 1720 1988) és egyéb adjuvánsokat, mint például a muramil-dipeptid lipofil származékát vagy a rekombináns proteinhez kovalensen kapcsolódó muramil-dipeptidet (ld. ugyanott).
Olyan, biztonságos és előnyös eljárást és készítményekkel dolgoztunk ki, melyek segítségével CTL válaszreakciók indukálhatók emberben és háziállatokban vagy mezőgazdasági haszonállatokban. Az eljárás olyan antigén-készítmény alkalmazását foglalja magában, mely állatok vonatkozásában kevéssé vagy egyáltalán nem mérgező, s amelyből hiányzik egy immunstimuláló peptid (pl. a muramil-dipeptid), melynek jelenléte csökkentené a kívánt celluláris válaszreakciót, Ezenkívül az eljárás módszertana egyszerű, s az élő sejteknek rekombináns DNS technikákkal történő megváltoztatásához - miáltal ezek immunogénné tehetők - nem kíván széleskörű in vivő munkát. Megállapításunk meglepő, mivel nem volt várható, hogy egy ilyen CTL válaszreakció indukálható olyan antigén-készítmény felhasználásával, melyből hiányzanak az immunstimuláló peptidek vagy azok ekvivalensei. A találmány értelmében az említett antigén-készítmények széleskörűen alkalmazhatók betegségek kezeléséhez vagy megelőzéséhez. így pl. az antigénkészítmények alkalmazhatók vírusos betegségek kezeléséhez - melyeknél a CTL válaszreakció nagy jelentőségű -, mint például HÍV vagy az influenza fertőzés kezeléséhez; továbbá felhasználhatók bakteriális fertőzések, rákos
HU 211 299 A9 betegségek, parazitafertőzések stb. kezeléséhez. Profilaktikus szerekként az antigén-készítmények - alkalmas antigénnel - hasznosak a korában említett vírusos betegségekért felelős vírusinfekciók, különösen a HIVfertőzés megelőzésében, továbbá rákos megbetegedés kockázatának kitett betegek esetében, például primer tumor eltávolítása után.
A találmány első vonatkozásaként eljárást ismertet CTL válaszreakciónak emberben, háziállatokban (pl. macska vagy kutya), vagy mezőgazdasági haszonállatokban (pl. 16, sertés, szarvasmarha) való indukálására antigén ellen (kivéve a B-sejt limfóma antigént és a tojásalbumint). Az eljárás első lépéseként biztosítani kell azt az antigént, amely ellen a CTL válaszreakciót indukálni kívánjuk, majd a nemtoxikus antigén-készítményt, mely stabilizáló detergenst, micellaképző ágenst és biológiailag lebontható, biokompatibilis olajat tartalmaz (vagy alapvetően ezen komponensekből áll). Ezen antigén-készítmény előnyösen nem tartalmaz semmiféle immunstimuláló peptidkomponenst, vagy ha mégis, olyan csekély mennyiségben, hogy az a megvalósítani kívánt celluláris válaszreakciót nem csökkenti. Fenti készítmény előnyösen stabil „olaj a vízben” emulzió, vagyis a komponenseket úgy választottuk ki, hogy az emulzió legalább egy hónapig, de lehetőleg több, mint egy évig fáziselkülönülés nélkül emulziós állapotban maradjon fenn. Az eljárás szerint az antigént és az antigén-készítményt összekeverjük (előnyösen mikrofluidizáciőval), majd az így kapott elegyet a CTL válaszreakció indukálásához elégséges dózisban juttatjuk az állatba. A kezelést csak egyszer kell elvégezni.
Stabilizáló detergensen olyan detergenst értünk, amely biztosítja, hogy az emulzió komponensei stabil emulziót képezhessenek, s ebben az állapotukban megmaradjanak. Ilyen detergensek a poliszorbát (TWEEN80. szorbitán-mono-9-oktadecenoát-polioxi-l,2-etándiil; gyártó: ICI Americas, Wilmington, DE), TWEEN 40, TWEEN 20, TWEEN 60, Zwittergent 3-12, TEEPOL HB7, SPAN 85. Ezeket a detergenseket kb. 0,050,5%-os, előnyösen 0,2%-os arányban alkalmazzuk.
Micella-képző ágensen olyan szert értünk, mely micellaszerű struktúrát létrehozva képes az egyéb komponensekkel kialakított emulziót stabilizálni és ennek során micellaszerű szerkezet alakul ki. Az ilyen szerek némi irritációt okoznak az injektálás környékén, hogy a makrofágokat összegyűjtsék, miáltal fokozzák a celluláris válaszreakciót. Ilyen szerekre példák a polimer felületaktív anyagok, (melyek leírása a BASF Wyandotte kiadványokban található, például Schmolka, J. Am. Oil. Chem. Soc., 54, 110, 1977; Hunter és mtsi, 1 Immunoi., 729, 1244; mindkét forrást e hivatkozással a leírás részévé tesszük); PLURONIC L62LF, L101 és L64, L121, PEG1000, TETRONIC 1501, 150R1701, 901, 1301 és 130R1. Ezen szerek kémiai szerkezete a szakember számára jól ismert. A kiválasztott ágensek hidrofil-lipofil egyensúlya (HLB) előnyösen 0-2, amint azt Hunter és Bennett (Journal of Immunology, 133, 3167,1984) meghatározták. Az ágenst előnyösen 0,001-10%-os arányban, leginkább 0,001-5%-os arányban alkalmazzuk.
Az olaj azért szükséges, hogy elősegítse az antigén rögzítését az olaj a vízben emulzióban, vagyis az adott antigén hordozójául szolgál. Olvadáspontja előnyösen 65 ’C alatti, mivel az emulzió kialakítása szobahőmérsékleten (20-25 ’C) történik, vagy oly módon, hogy az emulzió hőmérsékletét szobahőmérsékletre visszük le. Az ilyen olajokra példa a szkvalén, Sqalane, EICOSANE, tetratetrakontán, glicerin, mogyoróolaj és más növényi olajok. Az olajat előnyösen 1-10%, leginkább 2,5-5% mennyiségben alkalmazzuk. Lényeges, hogy az alkalmazott olaj biológiailag lebontható és biokompatibilis legyen, hogy a szervezet az olajat egy idő után lebonthassa, s hogy zavaró hatások (pl. granulómák kialakulása) ne léphessenek fel az olaj alkalmazása során.
Lényeges, hogy a fenti készítményből hiányzik a peptid komponens, különösen a muramil-dipeptid. Abban az esetben, ha ez a normál humán készítmény adagjában 20 gg-nál nagyobb mennyiségben van jelen, a peptid zavarja a CTL válaszreakció indukálását. Annak ellenére, hogy az ilyen peptidek nyilvánvalóan stimulálják az immunrendszer Immorális részét, előnyös, ha teljesen hiányoznak az antigén készítményből, így megállapítottuk, hogy a fenti peptidek - bár fokozhatják a humorális válaszreakciókat - károsak a citotoxikus T-limfocita válaszreakciók esetében.
Más vonatkozásban az antigén-készítmény a korábban említett három komponens közül csak kettőből készül, s a tojásalbuminon (vagy más albuminokon, pl. HSA-n, BSA-n és ovalbuminon) kívül bármilyen kívánt antigénnel használható a CTL válaszreakció emberben vagy állatokban történő indukálásához (ilyen antigének a proteinek, polipeptidek és ezek immunogén fragmentumai).
Azt találtuk, hogy a fenti készítmények a humán felhasználást illetően sokkal előnyösebbek a korábbi készítményeknél (ideértve az ISCOM-okat, DETOXot, SAF-t). Utóbbi készítményektől eltérően a találmány szerinti készítmény tartalmaz egy micella-képző ágenst, s nem tartalmaz peptideket, sejtfalvázat vagy baktérium sejt komponenseket. A találmány szerinti készítmények olyan CTL válaszreakciókat is indukálnak, amelyeket a korábbi készítmények nem, vagy összehasonlítva csak jelentősen kisebb mértékben indukáltak.
A „nem toxikus” kifejezésen azt értjük, hogy a kezelt emberben vagy állatban az antigén-készítménynek semmilyen mellékhatását nem tapasztaltuk, vagy ha igen, csak nagyon kis mértékben. A gyógyászatban vagy az állatgyógyászatban tájékozott szakember számára nyilvánvaló e kifejezés széleskörű tartalma. Például, míg egy alapvetően egészséges ember vagy állat esetében csak csekély mértékű toxicitás fogadható el, a betegség végső stádiumában szenvedő ember esetében (akinek kevesebb, mint három év a várható élettartama) lényegesen nagyobb toxicitás is elfogadható.
Az antigén-készítmény - előnyös kiviteli alakjaiban - két vagy három komponensből (detergensből, ágensből és olajból) áll; az eljárás alapvetően az antigén és az antigén-készítmény keverékének egyszeri 4
HU 211 299 A9 emberbe vagy állatba történő - bejuttatásából áll;· a kezelt ember vagy állat vírussal fertőzött, s egy vagy több, vírusfertőzésből eredő szimptómában (amelyet általában a szakterületen működő orvos határoz meg) szenved; és az antigén-készítmény emberre vagy állatra nézve nem toxikus.
Más előnyös kiviteli alakokban az antigént a következők közül választjuk ki: a HÍV antigének antigén-tulajdonságú részei: gplóO, gag, pol, Nef, Tat és Rév; a malária antigének: CS protein és sporozoit felületi protein 2; hepatitisz B felületi antigének: Pre-Sl, Pre-S2, HBcAg és HBeAg; influenza antigének: HA, NP, NA; hepatitisz A felületi antigének; herpesz vírus antigének: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV korai protein termék, citomegalovírus gB, citomegalovfrus gH és IE protein gP72; légzőszervi szincitiális vírus antigének: F protein, G protein és N protein; tumor antigének: karcinóma CEA, karcinómakapcsolt mucin, karcinóma P21, karcinóma P53, malanóma MPG, melanóma p97, karcinóma Neu onkogén tennék, karcinóma p53 géntermék, MAGÉ nevű melanóma antigén, és a különféle rosszindulatú daganatokban jelenlevő mutáns p21 ras protein.
Más vonatkozásban a találmány olyan készítményt ír le, mely a fentebb leírt antigén-készítmény és egy antigén keverékét tartalmazza vagy alapvetően abból áll. Az antigén a fentebb felsorolt antigén tulajdonságú részek közül való.
Egy következő vonatkozásban a találmány eljárást ír le olyan betegek kezelésére, akik HÍV vírussal fertőzöttek, maláriában, influenzában, hepatitiszben vagy rákos megbetegedésben szenvednek, vagy herpesz vírussal, légzőszervi szincitiális vírussal fertőzöttek. A kezelés alkalmas (pl. a fentebb felsoroltak közül kiválasztott) antigén és a korábban leírt antigén-készítmények egyikének keverékéből álló készítmény szervezetbe történő juttatásával történik.
A találmány egyéb jellegzetességei és előnyei a leírás és az igénypontok alapján lesznek nyilvánvalóak.
Az ábrák rövid leírása
Az l)a - l)c ábrák a különböző ovalbumin készítményekkel történő CTL indukciók összehasonlító adatainak grafikus megjelenítései. Az E:T valamennyi ábrán az effektor - cél (target) arányt fejezi ki.
A 2) a és 2) b ábrák a különféle β-galaktozidáz készítményekkel történő CTL indukciók összehasonlító adatainak grafikus megjelenítései.
A 3. ábra az ovalbuminnal liposzómában ill. egy antigén-készítményben végzett CTL indukció összehasonlító adatainak grafikus megjelenítése.
A 4. és 5. ábrák a CD4 és CD8 sejteknek a CTL indukcióra gyakorolt gyengítő hatását mutatják be grafikusan.
A 6. ábra a pluronsav, TWEEN és egy antigén elegyével végzett CTL indukció adatainak grafikus ábrázolása.
A 7. ábra grafikusan mutatja be a Sqalane, TWEEN és egy antigén elegyével végzett CTL indukció eredményét.
A 8. ábra grafikusan mutatja be a Sqalane, pluronsav és egy antigén elegyével végzett CTL indukció eredményét.
A 9. ábra grafikusan mutatja be az anti-gp 120111b antitesteknek különböző antigén-készítményekkel majmokban történő indukálását.
A 10A és 10B ábra grafikusan mutatja be a vacciniagpl20-szal és gpl20-AF-fel immunizált majmokban lejátszódó gpl20-specifikus CTL válaszreakciók adatainak összehasonlítását.
Antigén-készítmények
A találmány szerint alkalmazható antigén-készítményeket általánosan már korábban jellemeztük. A szakember számára nyilvánvaló, hogy a fentiekkel egyenértékű készítmények könnyen készíthetők, és várhatóan a CTL válaszreakciók indukálását illetően egyenértékű tulajdonságokkal rendelkeznek. Az ilyen készítmények tulajdonságai az alábbi példákban leírtaknak megfelelő módszerekkel egyszerűen tesztelhetők.
A találmány leírásának egyes példáiban alkalmazott antigénkészítmény (AF, antigén foimulation) foszfátpufferolt sóoldatban kb. 15% Squalane-t (0,6% TWEEN 80) és 0,0045-3,75% pluronsavat tartalmaz (Imed STP). Egy AF emulzió konkréten a következőkből áll: 150 mg Sqalane, 0,045-37,5 mg poloxamer 401 (PLURONIC L121). 6 mg poliszorbát 80 (TWEEN 80), 0,184 mg kálium-klorid, 0,552 mg egybázisos kálium-foszfát, 7,36 mg nátrium-klorid, 3,3 mg kétbázisos, vízmentes nátriumfoszfát, 1 ml víz; pH = 7,4. Ezen emulziót a szokásos módon mikrofluidizáltuk (Microfluidics Model M110F), 11 000-14 000 psi (1 psi = 6,88xl03 Pa) ellennyomás alkalmazásával, melyet fokozatosan légköri nyomásra csökkentettünk, majd az emulziót lehűtve nedves jégbe csomagoltunk be.
Más példákban az antigént a mikrofluidizált Sqalane (S), pluronsav (P) és TWEEN 80 (T) elegyével kevertük össze oly módon, hogy a végső koncentráció 5% Sqalane, 0,2% TWEEN 80 és 0,0015-1,25% pluronsav legyen. Annak érdekében, hogy meghatározhassuk, mely komponensek szükségesek az antigén-specifikus immun válaszreakció indukálásához. SqalaneTWEEN 80, pluronsav-TWEEN 80 és Sqalane-pluronsav elegyeket készítettünk a háromkomponensű változat koncentrációinak megfelelően. Pluronsavat, Sqalane-t és TWEEN 80-at külön-külön is készítettünk, hogy meghatározzuk az egyes komponensek CTL indukcióra gyakorolt hatását. Különböző TWEEN származékoknak az ova-rendszerben a CTL indukcióra gyakorolt hatása meghatározására a TWEEN 80-at TWEEN 20-szal, TWEEN 40-nel és Zwittergenttel helyettesítettük. A háromkomponensű készítményben a Sqalane-t eikozonnal és triakontonnal, a pluronsav kopolimert PEGlOO-rel, Pleuronic L62LF-fel és Tetronic 1501-gyel és 150 Rl-gyel helyettesítettük. Ami a kétkomponensű készítményeket illeti, különböző analógokat különböző kombinációkban elegyítettünk és ezeket az ovaspecifikus CTL indukcióra teszteltük. Ilyen párosítások voltak a koleszterin - TWEEN 80, Sqalane TWEEN 20, Pristane - TWEEN 80 vagy olíva olaj 5
HU 211 299 A9
TWEEN 80. A stabilizálási vizsgálatokhoz a Squlane TWEEN 80 mikrofluidizált elegyhez 5%-os végső koncentrációban dextrózt adagoltunk. Az adalékanyagok kombinációit valamennyi esetben mikrofluidizátorban elegyítettük stabil emulziók előállítására. Néhány kísérletben a CTL és a humorális válaszreakció indukálásához a kétkomponensű készítményeket különböző koncentrációkban MDP-vei elegyítettük. Az 1. táblázatban a kísérletekben használt különféle készítmények felsorolása található.
1. Táblázat
A különféle helyettesítések hatása a két- illetve háromkomponensű rendszerekben
| Helyettesítés a háromkomponensö készítményekben | 1. kísérlet százalékos pusztítás (E:T= 100:1) | 2. kísérlet százalékos pusztítás (E:T= 100:1) |
| STP | 88 | 10 |
| Tween 40 (T) | 66 | - |
| Tween 20 (T) | 48 | - |
| TI 501 (P) | 39 | - |
| T150R1 (P) | 30 | - |
| Pleuronic L62LF (P) | 47 | - |
| Eikozán (S) | - | 41 |
| PEGIOOO(P) | - | 24 |
| Triakontán (S) | - | 30 |
| Zwittergent (T) | - | 0 |
| Helyettesítés a kétkomponensű készítményekben | ||
| ST | 82 | 44 |
| PT | 77 | - |
| SP | 69 | - |
| Koleszterin (S) + Tween 80 | 38 | - |
| Sqalane + Tween 20 (T) | 65 | - |
| Prisiane (S) + Tween 80 | 60 | - |
| Olívaolaj (S) + Tween 80 | 69 | |
| Egykomponensű készítmény | ||
| Pluronic L121 | 0 | - |
| Sqalane | 0 | - |
| Tween 80 | 0 | - |
| Sqalane + Tween 80 + 5% dextróz | 86 | - |
. nem ál] rendelkezésre adat.
Kontroll adjuvánsként Syntex adjuvánst készítmény (mikrofluidizált; SAFm) alkalmaztunk, mely a következő két részből áll. Az I. rész 5% Sqalane-t, 1,25% pluronsavat és 0,2% TWEEN 80-at (hordozó v. I-SAF) tartalmazó foszfát-pufferolt sóoldatból áll. AII. rész egy mycobacterium sejtfalkomponens-származék, az N-(acetil-muramil)-L-treonil-D-izoglutamin (ThrMDP). Immunizáláshoz az antigént a mikrofluidizált hordozóval (I. rész) kevertük össze, miáltal homogén emulzióhoz jutottunk. A kapott SAFm-hoz MDP-t adtunk, s a keveréket rövid ideig vortexeztük. A CTL indukcióhoz optimális MDP koncentráció megállapítására a koncentráció értékeket variáltuk. Adjuváns kontrollként az egereket alum-mal (a gyártó útmutatása alapján; Pierce Chemical, Rockford, IL) illetve Freund-féle komplett adjuvánssal (CFA) elegyített szolubilis antigénekkel is immunizáltuk.
Az STP antigén-készítményt használtuk egerekben a citotoxikus T-limfocita válaszreakciók indukálásához. A szakember számára nyilvánvaló, hogy az ilyen egér modell következtetni enged arra, hogy egyenértékű kísérletek ill. kezelések emberben, háziállatokban vagy mezőgazdasági haszonállatok is hasonlóan indukálják-e a citotoxikus T-limfocita válaszreakciókat. A kívánt celluláris válaszreakció kiváltásához szükséges antigén-készítmény ill. antigén mennyiség tapasztalati úton, a szakember számára jól ismert, általános módszerekkel határozható meg, mindenféle indokolatlan kísérletezés nélkül. Az ilyen keverékkel végzett kezelés mellékhatásai minimálisra csökkentése érdekében a szakember ilyenformán meghatározhatja az említett készítmények minimális adagjait, melyek emberek, háziállatok, mezőgazdasági haszonállatok kezeléséhez alkalmazva elégségesek a CTL válaszreakció kiváltásához, és ezáltal a kívánt antigén elleni immunitás indukálásához. Általános esetben a fenti készítményeket bármely standard módon injektálhatjuk, de különösen előnyös az olyan helyre történő intramuszkuláris injektálás, amely lehetővé teszi, hogy az emulzió néhány napon vagy több héten keresztül stabil formában maradjon fenn.
Módszerek
Ha másként nem jeleztük, az alábbi példákban a következő anyagokat és módszereket alkalmaztuk:
Egerek
C57B1/6 (H-2b) és BALB/c (H-2d) nőstény egereket szereztünk be a Harlen Sprague-tól (San Diego, Kalifornia).
Antigének
Ovalbumint (óva, VII. osztály; Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) természetes formában használtunk. β-galaktozidázt (β-gal, VIII. osztály; BRL) egyrészt természetes formában, másrészt két perces, 1 M NaOH oldatban történő forralást (lúgos emésztés) követően alkalmaztunk. A rekombináns gpl20-at az American Biotechnology-tól szereztük be.
Tumorsejtek és transzfektánsok
Az la' sejtvonalba tartozó EL4 (C57B1/6, H-2b thymoma) és P815 (DBA/2, H-2d mastocytorna) tumorsejteket használtuk. Az ova-termelő EL4 transzfektáns származékát, az EG7-ova-t korábban Moore és mtsi (Cell, 54, ΤΠ, 1988) írták le. A β-gal-termelő P13.1 transzfektánst 107 darab P815 sejt elektroporáci6
HU 211 299 A9 ójával nyertük 1 ml foszfátpufferolt sóoldatban [PBS], 10 mg PstI linearizált pCHllO [Pharmacia LKB Biotechnology Inc., Piscattaway, NJ] és 1 mg Pvul linearizált pSV2 neo [Southern és mtsi, J. Mól. Appl. Génét., 1, 327, 1982] jelenlétében, majd 400 gg/ml koncentrációjú G418 antibiotikum oldattal szelektáltuk. A C3-4 transzfektánst a BALB/c Igm 662 hibridómából nyertük, oly módon, hogy azt az IgM nehéz láncának harmadik és negyedik exonjához fuzionált β-gal gént kódoló plazmiddal transzfektáltuk (Rammensee és mtsi, Immunogenetics, 30, 296, 1989). A gpl60nib-t kifejező 15.-12 3T3 fibroblasztot Dr. Germain (NIH, Bethesda, MD) bocsátotta rendelkezésre. A Kb transzfektált L sejtvonalat Dr. Carbone (Monash University, Ausztrália), míg a Dd és Ld transzfektált L sejtvonalat Dr. Ted Jensen (Washington University, St. Louis) bocsátotta rendelkezésre.
Immunizálás
A szplenociták antigénnel történő citoplazmikus feltöltését (ld. Moore és mtsi, supra, és Carbone és mtsi, J. Exp. Med., 169, 603, 1989) követően az egereket 25x106, szplenocita 200 gl-nyi szuszpenziójával intravénásán immunizáltuk. Az ova-antigén vagy a β-gal-antigén készítményekkel történő immunizálást úgy végeztük, hogy 30 gg protein antigént szubkután injektáltunk az egerek lábába és faroktövébe. Valamennyi injekció 200 gl össztérfogatban 67 gl standard módon előállított mikrofluidizált antigénkészítményt és 30 gg protein antigént tartalmazott. A 200 gl végtérfogatra történő kiegészítést HBSS (ld. Whittaker kézikönyv, Welkersville, MD) felhasználásával végeztük. Az MDP-t 0-300 gg mennyiségben alkalmaztuk. Ahol jeleztük, az egereket CFA-ban vagy alum-ban oldott szolubilis antigénekkel (200 gl össztérfogatban) immunizáltuk.
Az effektor populáció in vitro stimulálása
Normális, illetve legalább 14 nappal korábban beoltott, immunizált egerekből származó lépsejteket (30X106 darab) az óva válaszreakcióhoz 20 000 raddal besugárzott, 1,5 xlO6 EG7-ova sejttel, míg a β-gal válaszreakciókhoz szintén 20,000 rad-dal besugárzott, l,5xl06 C3-4 sejttel inkubáltuk (24 lyukas csészékben, 37 °C-on, 7%-os Coj/levegő atmoszférában). Valamennyi szövettenyésztést IMDM tápközeget (ld. Whittaker kézikönyv, Welkersville, MD) tartalmazó, s 10% borjúembrió-szérummal (FCS), 2 mM glutaminnal, gentamicinnel és 2x10'5 M 2-merkapto-etanollal kiegészített teljes tápközegben végeztük. Az in vitro gyengítéses kísérletekhez az in vivő immunizált vagy in vitro stimulált lépsejteket RL.172 (anti-CD4), illetve 3.618 (anti-CD8) monoklonális antitestekkel (mAb) kezeltük a CD4+ illetve CD8+ sejtek eltávolítására (Sarmiento és mtsi, J. Immunoi., 125, 2665, 1980; és Ceredig és mtsi, Natúré, 314, 98, 1985). Az RL.172 és 3.168 monoklonális antitesteket Dr. Jonathan Sprent (Scripps Clinic and Research Foundation, La Jolla, CA) bocsátotta rendelkezésünkre.
Normális, illetve legalább 21 nappal korábban immunizált egerekből származó lépsejteket (30xl06) 10% előosztályozott FCS-t (ICN Flow; ICN Biochemicals Inc., Cota Mesa, CA), 2 mM glutamint, gentamicint és 2xl05 M 2-merkaptoetanolt tartalmazó komplett IMDM tápközegben 1,5x1ο6 darab 15-12 sejttel (melyeket előzetesen 45 percig 200 gg/108 sejt mitomicin C-vel kezeltünk), illetve - a Balb/c egerekben á domináns CTL epitópot tartalmazó - 500 gg 18IIIb pepiiddel inkubáltunk. A peptides in vitro stimuláláshoz a lépsejteket 5% ConA felülúszót tartalmazó komplett IMDM tápközegben tenyésztettük.
A gyengítéses kísérletekhez az in vivő imunizált vagy in vitro stimulált lépsejteket alacsony toxicitású nyúl komplemens (Cederlane Laboratories Ltd., Hornby Ontario, Canada) jelenlétében RL.172 (antiCD4) illetve 3.168 (anti-CD8) monoklonális antitestekkel kezeltük a CD4+ illetve a CD8+ T sejtek (22, 23) eltávolítására. Az RL.172 és 3.168 monoklonális antitesteket Dr. Jonathan Sprent (Scripps Clinic and Research Foundation, La Jolla, CA) bocsátotta rendelkezésünkre.
Citotoxicitás meghatározás
A célsejteket (lxlO6 darab) 51Cr izotopot tartalmazó nátrium-kromáttal, 100 gCi-vel 60 percig jelöltük. A peptides célsejtkezeléshez a célsejtekhez a jelölés közben 50 gl 1 mg/ml koncentrációjú HBSS-es peptid-oldatot adtunk. A mosást követóen 104 darab jelölt célsejtet és az effektorsejtek sorozathígítását 200 gl RPlO-ben, 37 ’C-on 4 órán keresztül inkubáltuk. 100 gl felülúszót összegyűjtöttünk, s a specifikus lízist a következők szerint határoztuk meg; százalékos specifikus lízis = 100 x [(kibocsátás)/(maximális kibocsátás spontán kibocsátás)]. Citotoxikus T-limfociták távollétében a spontán kibocsátás valamennyi kísérletében alacsonyabb volt, mint a detergens általi maximális kibocsátás 25%-a.
Antitest válaszreakciók meghatározása egerekben és majmokban
A 96 lyukas U-alakú csészékben (Costar, Cambridge, MA) valamennyi lyukat 50 gl HBSS-ben oldott 150 ng ova-val vagy gpl20-szal vontuk be, s 4 C-on egy éjszakán keresztül inkubáltuk. Az egér anti-ova és anti-gpl20 antitest válaszreakciók meghatározásához a csészéket egy óra hosszat 1 %-os BSA-val blokkoltuk. A lyukakhoz 25 gl szérum sorozathígítást adtunk, majd két órás inkubálás következett. A csészék mosása után a lyukakhoz 50 gl, HRPO-hoz (SBT, Alabama) kapcsolt, 1:1000 hígítású kecske anü-egér IgG-t (1%-os BSA-ban) adagoltunk. Egy órás inkubálást követően mostuk a csészéket, majd a lyukak tartalmához 100 gl szubsztrátot adtunk. Az OD^-öt 10-15 perc múltán határoztuk meg. A majom anti-gpl20 antitest válaszreakciók meghatározásához ugyanezen lépéseket alkalmaztuk, azzal a különbséggel, hogy mind a csészék blokkolásához, mind a szérumhígításhoz 5%os, Hankféle egyensúlyi sóoldatos normál kecske-szérumot használtunk.
HU 211 299 A9
Peptidszintézis
Az ovalbumin 253-276 aminosavszekvenciájának (óva 253-276) megfelelő szintetikus peptideket (a szekvencialista 1. számú szekvenciája: EQLES1IFEKLTEWTSSNVMEER; melynél az aminosavak jelölésére a szokásos egybetűs kódot használtuk); a mielin bázisos protein 84-102 szekvenciájának (MBP 84-102) megfelelő szintetikus peptideket (a szekvencialista 2. számú szekvenciája: DENPWHFFKNIVTPRTPP) és a gpl20IIIb 308-322 szekvenciájának (18111b szekvencia) megfelelő szintetikus peptideket Applied Biosystem 430A szintetizátor felhasználásával - szilárd fázisú peptidszintézissel összekapcsoltuk. Az aminosavakat előre kialakított szimmetrikus anhidridek segítségével kapcsoltuk össze az aszparagin, glutamin és arginin kivételével, melyeket hidroxi-benztriazol-észterekként kapcsoltunk össze. Az összekapcsolás eredményességét Kaiser és mtsi (Anal. Biochem., 34, 595, 1970) módszere alapján, ninhidrin reakcióval ellenőriztük. A peptideket a hordozóról HF-dal választottuk le az ún. „lowhigh” eljárással (Tam és mtsi, J. Am. Chem. Soc., 21, 6442, 1983), és a gyantából a peptideket 10%-os ecetsavval vontuk ki. A liofilizálást követően a peptideket Sephadex G-25 oszopon sómentesítettük, és a peptid mintákat Vydac preparatív C-l8 oszlopon reverz fázisú HPLC-vel tisztítottuk. A tisztított peptideket (98%) HBSS-ben oldottuk 10 mg/ml végső kondentráció elérésére, s a teljes táptalajban a kívánt koncentrációra hígítottuk.
CNBr-os emésztés
A protein-mintákat (pl. a β-galaktozidás) százszoros moláris feleslegben lévő cián-bromiddal (100 ml trifluorecetsavban) kezeltük. A reakciót szobahőmérsékleten (kb. 20 ’C), keverés mellett 18 órán keresztül végeztük. Az előírt reakcióidő után a peptid-fragmenseket C-l8 SEP-PAK (Waters) készülékkel elkülönítettük a reaktánstól, majd 95%-os acetonitrillel eluáltuk és liofilizáltuk.
Lúgos emésztés
A protein-mintákat (pl. β-galaktozidás) I N NaOHval kezeltük, két percig forraltuk, s a kapott peptidfragmenseket C-18 SEP-PAK készülékkel (Waters) különítettük el a reaktánstól. Ezután 95%-os acetonitrillel eluáltunk, majd liofilizáltunk.
1. példa:
1. osztályú korlátozott CTL indukció
Moore és mtsi (UCLA Symp. Mól. Cell. Bioi., 113, [1989] és Carbone és Bevan (J. Exp. Medicine, 171, 377, 1990) kimutatták, hogy oldható óva-val citoplazmikusan kezelt lépsejtekkel immunizált egereket ovaspecifikus, 1 osztályú korlátozott CTL reakcióra mozgósítottak. Az ova-expresszáló EL4 transzfektánst (EG7-ova) alkalmaztuk az in vivő mozgósított lép limfociták in vitro stimulálásához, illetve célként az ovaspecifikus CTL válaszreakció állati elöléshez. Szintén kimutatták, hogy az EG7-ova transzfektánssal vagy az ova-val citoplazmikusan kezelt lépsejtekkel indukált
CD8+ effektorok a H-2Kb-veI összefüggésben felismernek egy determinánst (melyet az óva 258-276 peptid térképez), lizálják az EG7-ova-t, és elpusztítják az óva 258-276 peptiddel burkolt EL4 sejteket is. Ilyenformán annak megállapítására, hogy az endogén I. osztályú korlátozott CD8+ T sejtes út indukálható-e egy oldható antigénnel, a fenti módszert használtunk fel annak meghatározására, hogy bizonyos antigén-készítmények alkalmasak-e szolubilis antigének I. osztályú korlátozott reakcióútra történő irányítására.
a ) óva
C57BL/6 egereket - antigén-készítménnyel vagy anélkül - egy alkalommal különböző mennyisége (egerenként 30 pg-1 mg) ova-val immunizáltunk. Az egereket szubkután és faroktőbe oltottuk. Az immunizált egerektől legalább két héttel az immunizálás után lépsejteket vettünk, és ezeket EG7-ova transzfektánssal in vitro stimuláltuk. A 30 pg-os óva mennyiség ugyanolyan hatásosnak bizonyult, mint az 1 mg-os. Ennek megfelelően a CTL vizsgálatokat sorozatban a 30 pg ova-val injektált egerekből származó lépsejtekkel végeztük. Öt nap múlva az EG7-ova-t tartalmazó in vitro tenyészetben a mozgósítást az EG7-ova lízisére képes ova-specifikus effektorok jelenléte alapján határoztuk meg.
A HBSS-ben oldott 1 mg szolubilis ova-val beoltott egerek esetében a CTL mozgósításra nem találtunk bizonyítékot (1/a ábra). Ezzel szemben, a korábban leírt antigénkészítményben (az ábrákon AF) lévő 30 pg ova-val immunizált egerek esetében jelentős transzfektáns-specifikus CTL válaszreakciót tapasztaltunk (1/c ábra). Továbbá az ova-AF immunizált lépsejtek által elpusztított EG7-ova mennyisége összehasonlítható volt az ovalbuminnal kezelt lépsejtekkel immunizált egerek esetében tapasztalhatóval (1/b ábra).
Az in vivő CTL mozgósítás antigén-specifikus voltát a β-galaktozidázzal immunizált egerekből származó lépsejtek azon képességének hiányával mutattuk ki, hogy az EG7-ova-val történő stimulálás esetén másodlagos in vitro CTL válaszreakciót mutassanak. Ovaspecifikus CTL indukciót nem tapasztaltunk
b) β-galaktozidáz
Egy másik szolubilis protein antigén, a β-gal alkalmazásával hasonló eredményeket kaptunk. A β-galspecifikus CTL válaszreakció vizsgálatához célként BALB/c eredetű, β-gal expresszáló C3-4 transzfektánst használtunk. A BALB/c egerek szolubilis β-gal antigénnel történő immunizálása háttér CTL válaszreakciót eredményezett. Ilyenformán a specifikus CTL válaszreakció meghatározásához a begyűjtést legalább 8 héttel elhalasztottuk és azelőtt végeztük, hogy a lép limfocitákat begyűjtöttük, majd sugárkezelt C3-4 transzfektánsok jelenlétében öt napig tenyésztettünk.
A 2/b ábra azt mutatja, hogy 30 pg β-galaktozidáz (antigén-készítményben, AF) erőteljes specifikus CTL válaszreakciót indukált a transzfektáns ellen. 3:1 effektor - cél (E:T) arány mellett a β-gal-AF immunizált egerek esetében 80%-os, specifikus C3-4 pusztítást tapasztaltunk. Ezzel szemben, ugyanezen E:T arány
HU 211 299 A9 mellett, a β-gal-HBSS immunizált egerekből izolált effektorokkal ugyanezen, célpont vonatkozásában csak 20%-os C3-4 pusztítás volt elérhető (2/A ábra). Mivel sem az EL4, sem a P815 nem expresszál Π. osztályú MHC géntermékeket, és a lízis szingén korlátozottságot mutat, ezen óva- és β-gal-specifikus effektorok I. osztályú MHC korlátozott típusúak.
Hogy igazoljuk az antigén-készítmények hasznosságát, az egereket kétféle liposzómában (melyek egyike pH szenzitív) kapszulázott szolubilis ova-antigénnel immunizáltuk. Egy héttel később a lépsejteket a fentiek szerint in vitro stimuláltuk, s 51Cr izotóppal jelölt EG7ova vagy EL4 ellen teszteltük. A 3. ábra jellemző eredményként azt mutatja, hogy a liposzómában adott ovalbumin az egerekben nem váltott ki lényeges CTL mozgósítást. Az ovalbumin alum-mal történő alkalmazása esetén hasonló eredményeket tapasztaltunk.
2. példa:
CTL általi epitóp felismerés
Carbone és Bevan (supra) kimutatták, hogy az EG7-ova transzfektánssal és citoplazmikusan ovalbuminnal kezelt szplenocitákkal C57BL/6 egerekben indukált CTL felismeri az óva 258-276 peptiddel bevont EL4 sejteket. Annak meghatározására, hogy az antigén-készítményben (AF) alkalmazott szolubilis ovalbumin indukál-e hasonló CTL válaszreakciókat, immunizált egerekből vett lépsejteket in vitro EH7-ov-val stimuláltunk. Az effektorokat az óva 253-276 peptiddel, illetve a mielin bázikus proteinból (MBP 84-102) származó kontroll peptiddel bevont EL4 sejtek ellen teszteltük. Az eredmények azt mutatják, hogy az ovaAF hasonló specifitással mozgósította a CTL-t, mint a transzfektánsok vagy a citoplazmikusan bejuttatott ovalbumin (1/a, 1/b és 1/c ábrák). Az ova-AF által mozgósított effektor sejtek hatásosan lizálták az EG7-ova-t és az óva peptiddel (50 pg/108 darab sejt koncentrációban) bevont, transzfektálatlan EL4 sejteket, nem lizálták azonban az MBP peptiddel (50 pg/10® darab sejt koncentrációban) bevont EL4 sejteket.
A β-galaktozidáz rendszert illetően Carbone és Bevan, (supra), leírták, hogy a β-gal expresszáló transzfektáns és a szolubilis β-galaktozidázzal citoplazmikusan kezelt szplenociták indukálták a CTL-t, melyek lizálták a β-gal expresszáló transzfektáns és a alkáliemésztett β-galaktozidázzal bevont, nem transzfektáns P815 sejteket. A szolubilis β-galaktozidáz antigén-készítményben az immunizálás során hasoló specifitású CTL-t indukál (2. ábra).
3. példa:
A CD8* T sejtek CTL effektorok
Azt, hogy a szolubilis protein antigének antigén-készítményben alkalmazva CD8+ effektor T sejteket indukálnak, a következők szerint mutattuk ki. Immunizált egerekből származó szplenocitákat sugárkezelt transzfektánsokkal öt napig in vitro tenyésztettünk. Ezután a sejteket összegyűjtöttük és a CD4* ill. CD8+ T sejteket monoklonális anti-CD4 illetve anti-CDe antitestek és komplemens felhasználásával gyengítettük. Ezt követően a gyengített populációkat az óva rendszerben 5lCrEG7-ova ellen, míg a β-gal rendszerben 51Cr-P13.1 ellen teszteltük. A 4. ábrán bemutatott adatok azt jelzik, hogy a CD8+ T sejtek legyengítése megszüntette az egész effektor sejtpopuláció által biztosított citolitikus aktivitását. Ezzel szemben a CD4+ T sejtek legyengítése nem befolyásolta az EG7-ova lízisét.
Hasonlóan, a β-gal rendszerben a CDe+ T sejtek legyengítése megszüntette a β-galaktózt tartalmazó antigén-készítménnyel immunizált lépsejtek citolitikus aktivitását (adatokat nem közlünk).
4. példa:
Az antigén-készítményben (AF) alkalmazott ovalbumin mozgósítja a CDS* T sejteket Annak kimutatására, hogy az ova+antigén-készítmény in vivő mozgósítja a CD8+ T sejteket, és ez lényeges az in vitro másodlagos válaszreakciók lejátszódásához, ova+antigén-készítménnyel immunizált ill. kezeletlen egerek lépéből származó CD4+ ill. CD8+ populációkat legyengítettünk. Ezeket a kezelt populációkat azután in vitro stimuláltuk EG7-owal önmagában, vagy - ova+antigén-készítménnyel immunizált egerekből származó - CD4+ vagy CD8+ T sejtekkel együtt, vagy ova+antigén-készítménnyel immunizált egerekből származó CD4+ CDe+ T sejtekkel és immunizálatlan egerekből származó CD4+ v. CD8+ sejtekkel képzett különbözó kombinációkban. Az 5. ábra azt mutatja be, hogy a mozgósított CD8+ sejtek lényegesek a másodlagos CTL válaszreakció in vitro megnyilvánulásához. Ezek az adatok azt is mutatják, hogy'a hatásos másodlagos in vitro CTL reakcióhoz CD4+ T sejtek szükségesek. A mozgósításhoz CD4+ sejtekre nincs szükség.
A fenti példák az antigén-készítményeknek a szolubilis fehérjeantigének elleni I. osztályú korlátozott CTL válaszreakciók indukálására gyakorolt hatását mutatják be. Az antigén-készítmény által közvetített szolubilis antigén indukálta a CTL mozgósítást, s aktivitását illetően hasonló a transzfektánsok vagy a - szolubilis ovalbuminnal vagy β-galaktozidázzal citoplazmikusan kezelt - szplenociták által indukálthoz. Az ovalbumin rendszerben az EG7-ova, a citoplazmikusan kezelt óva szplenociták és az ova-antigén-készftmény mindössze egyetlen immunizálást követően indukálta: (a) az I. osztályú korlátozott CDe+ CTL-t; (b) az óva 253-276 szintetikus peptiddel érzékennyé tett célt felismerő CTL-t; (c) a hosszú életidejű CTL-t. A β-galaktozidáz rendszerben a β-gal-antigén-készítény indukálta a βgal-expresszáló C3-4 transzfektánst és a lúgos emésztésű β-galaktozidázzal érzékennyé tett, transzfektálatlan P815 sejteket is felismerő CTL-t. Ez analóg a β-galaktozidázzal citoplazmikusan kezelt lépsejtekkel történő immunizálással indukált CTL esetében tapasztaltakkal. Az ova-specifikus CTL antigén-készítménynyel történő indukálása egyedülálló, mivel sem a pH szenzitív liposzómába, sem az alum-ba enkapszulált ovalbumin (adatokat nem közöltünk) nem képes a CTL mozgósítás in vivő indukálására.
A fenti példák azt bizonyítják, hogy a bennük fel9
HU 211 299 A9 használt antigén-készítmény (és ekvivalensei) felhasználhatók a humán gyógyászaiban illetve vakcina kifejlesztésben (a különböző daganatos és vírusos betegségek leküzdéséhez szükséges CTL indukcióhoz).
5. példa
Ez a példa a fenti antigén-készítmény felhasználását mutatja be a HÍV vírusból származó szolubilis gpl20 által kiváltott I. osztályú korlátozott CTL előállításához.
A gplóO Illb expresszáló sejtvonalat (15-12) a BALB/c fibroblaszt eredetű 3T3 sejtvonalban állították elő, s ezt Dr. Ron Germain és Dr. Jay Berzofsky (National Institute of Health, Bethesda, M.D.) bocsátotta rendelkezésünkre. A gpl60-at expresszáló sejtvonalat az in vivő mozgósított lép limfociták in vitro stimulálásához alkalmaztuk, továbbá célként felhasználtuk a gplóO-specifikus CTL indukcióhoz is. Több kísérletben a domináns CTL epitopot tartalmazó 18 Hlb peptidet használtuk az in vitro stimuláláshoz. A tenyészetben történő peptid restimuláláshoz IL-2-t adtunk a tápközeghez. BALB/c egereket egy alkalommal, egyedenként 1 μg gpl20-szal (antigén-készítménnyel vagy anélkül) immunizáltunk. Az egereket szubkután és faroktőbe oltottuk. A lépsejteket három héttel az immunizálás után vettük le az immunizált egerekből és sugárkezelt gplóO transzfektánssal vagy a 28111b peptiddel in vitro stimuláltuk ezeket. Öt napos in vitro tenyésztést követően a mozgósítást a gplóO transzfektánsok lízisére (és nem a transzfektálatlan sejtvonalak lízisére) képes specifikus effektorok jelenléte alapján állapítottuk meg. Néhány kísérletben a vac:gp 160 által infektált P815 sejteket használtuk célsejtekként. Az eredményeket a 4/a ábrán mutatjuk be, ahol a CTL válaszreakciót antigén-készítménnyel és gpl20-szal segítettük elő. Meg kell jegyezni, hogy a gpl20 rendszerben a gpl20specifikus CTL indukcióhoz optimális antigén-készítmény (amellyel 1 pg gpl20 koncentráció mellett egy alkalommal végeztük az immunizálát) nem, vagy csak minimális mértékben tartalmaz pluronsavat. Ha azonban az egereket nagyobb mennyiségű (3,75%) pluronsavat tartalmazó antigén-készítményben lévő 5 pg gpl20-szal több alkalommal immunizáltuk, jelentős CTL indukciót tapasztaltunk (adatokat nem közöltünk).
A következő példák a találmány szerinti antigénkészítmények egy vagy két komponensű változatainak felhasználását mutatják be. Ezek a példák azt bizonyítják, hogy CTL válaszreakciók a korábban leírt három komponens közül csak kettő által is indukálhatók.
6. példa:
A CTL indukcióhoz nélkülözhetetlen komponensek meghatározása
Annak meghatározása érdekében, hogy a korábban leírt komponensek mindegyike lényeges-e az antigénspecifikus CTL indukcióhoz, az egereket olyan mikrofluidizált készítményben levő ovalbuminnal immunizáltuk, melyben a három komponens közül csak kettő volt jelen (különböző variációkban), s a harmadik komponenst PBS helyettesítette. A felhasznált kétkomponensű készítmények a következők voltak: Sqalane/TWEEN, PBS-ben; Sqalane/pluronsav, PBS-ben; pluronsav/TWEEN, PBS-ben. Egy másik csoportban az egereket egykomponensű készítményben adott ovalbuminnal immunizáltuk (Sqalane PBS-ben, pluronsav PBS-ben és TWEEN PBS-ben).
A háromkomponensű antigén-készítmények a következőkből állnak: 0,300 g TWEEN 80 (Aldrich, WI); 1,875 g Pluronic L121 (BASF, NJ) és 7,5 g Sqalane (Aldrich, WI), PBS-sel 50 ml-re kiegészítve.
A kétkomponensű készítmények: Sqalane/TWEEN: 0,300 g TWEEN 80 és 7,5 g Sqalane, PBS-sel 50 ml-re kiegészítve; pluronsav/TWEEN: 1,875 g Pluronic L121 és 0,300 g TWEEN 80, PBS-sel 50 ml-re kiegészítve; pluronsav/Sqalane: 1,875 g Pluronic L121 és 7,5 g Sqalane, PBS-sel 50 ml-re kiegészítve.
A háromkomponensű, változtatott pluronsav koncentrációjú készítményeket úgy készítettük, hogy a Sqalane és a TWEEN koncentrációját az előbb leírtaknak megfelelően hagytuk, míg a pluronsav koncentrációját a következők szerint változtattuk: (Az adatok 50 ml térfogatra vonatkoznak.)
| S (gramm) | T (gramm) | P (gramm) | P(%) |
| 7,5 | 0,300 | 0,75 | 1,5 |
| 0,075 | 0,15 | ||
| 0,0075 | 0,015 | ||
| 0,00075 | 0,0015 | ||
| 0,00091 | 0,018 | ||
| 0,00045 | 0,009 | ||
| 0,00017 | 0,003 |
A készítményeket 110T típusú készüléken (Microfluidics Corp.) mikrofluidizáltuk, palackoztuk és a felhasználásig 4 °C-on tároltuk.
Az ovalbumint (óva, Sigma, MO) kimértük és HBSS-ben (Whittaker, supra) 0,3 mg/ml koncentrációjú oldatot készítettünk belőle. A 0,3 mg/ml koncentrációjú törzsoldatot az alábbiak szerint kombináltuk a kétkomponensű készítményekkel: 5 rész 0,3 mg/ml-es ovalbumin oldat, 3,3 rész kétkomponensű készítmény, 1,7 rész HBSS. A β-galaktozidázt és a HÍV gpl20-at hasonló módon kevertük az antigén-készítménnyel.
A készítményt vortexeztük és az injektálásig jégen tartottuk. Az oldatokat közvetlenül az injektálás előtt kevertük össze.
Valamennyi egeret 30 μΐ ovalbumint tartalmazó 200 μ] antigén-készítménnyel oltottunk be (szubkután és faroktőbe). Az egereket legalább kettő-négy hétig pihentettük, s csak ezután gyűjtöttük össze a lépsejteket.
Az immunizálás után két héttel előkészítettük a lépsejteket, és sugárkezelt EG7-ov-val in vitro stimuláltuk azokat. Öt napos tenyésztést követően az ovaspecifikus CTL-ek jelenlétét 51Cr-EG7-ova illetve 51Cr-EL4 elleni teszteléssel mértük, négy órás 51Cr-kibocsátási vizsgálattal. A 6-8. ábrán látható adatok azt mutatják, hogy a mikrofluidizált kétkomponensű készítményben adott ovalbumin képes in vivő mozgósítani az ova-specifikus CTL-eket.
HU 211 299 A9
A továbbiakban az egyes komponenseknek - protein antigénekkel kombinálva - a CTL-ek indukálásához való relatív hozzájárulását értékeltük. Immunizálási célokra a szolubilis antigént mikrofluidizált adalékanyagokkal kevertük stabil, homogén emulzió előállítására, 5 melyben 250-300 nm a részecskenagyság. Továbbá annak meghatározására, hogy a Sqalane-TWEEN 80pluronsav (STP) készítmény komponensei közül melyek felelősek a CTL indukcióét, az egereket SqalaneTWEEN 80 (ST), pluronsav-TWEEN 80 (PT), Sqalane-pluronsav (SP) keverékben; illetve - kontrollként Sqalane (S), TWEEN 80-ban (T) és pluronsavban (P) beadott ovalbuminnal immunizáltuk. Adjuváns kontrollként az egereket 70 pg MDP-t tartalmazó ovaSAFm-mel illetve ova-alum-mal immunizáltuk. Pozitív kontrollként szolubilis ovalbuminnal citoplazmikusan kezelt lépsejtekkel végeztünk egerekben immunizálást. Más kombinációkat és komponenseket is felhasználtunk és az eredményeket az 1. Táblázatban mu10 tatjuk be. Etek arra mutatnak, hogy az STP-ben illetve az ST-ben alkalmazott 30 gg ovalbumin I. osztályú korlátozott CTL válaszreakciót vált ki egerekben. Az ovalbumuin STP-ben vagy ST-ben alkalmazva láthatóan jobban mozgósította az ova-specifikus CTL-t, mint amennyire a szolubilis ovalbumuinnal citoplazmikusan kezelt lépsejtek indukálták azt. A PT-ben vagy az SDben alkalmazott ovalbumin is képes volt az ova-specifikus CTL válaszreakciók redukálására (egerekben), de közvetlenül és kis mértékben. A SAFm-mel ellentétben MDP hozzáadása az ST-készítményhez egerekben nem gátolta az ova-specifikus CTL indukciót (2. Táblázat). Ha az egereket az S. P. T komponensekkel külön-külön kevert ovalbuminnal, illetve ova-SAFm-mel vagy ova-alum-mal immunizáltuk, ova-specifikus CTL indukció nem fordult elő. 1 mg ovalbuminnal (a) HBSS-ben, (b) SAFm-ben vagy (c) alum-ban immunizált egerekben nem tapasztaltunk ova-specifikus CTL mozgósítást.
2. Táblázat
Az ova-specifikus CTL válaszreakció indukálását nem gátolja azST + MDP
| Stimulátor | Cél” | E:T | ova-St | százalékos citotoxicitás az alábbi készítményekkel immunizált egerekben’ | ||
| ova-ST | ova-ST-MDP 300 gg egér | ova-ST-MDP 73 gg egér | ||||
| EG7-ova | EG7-ova | 100:1 | 0 | 100 | 82 | 76 |
| 33:1 | 0 | 86 | 67 | 62 | ||
| 11:1 | 0 | 33 | 39 | 25 | ||
| 3:10 | 0 | 6 | 13 | 3 | ||
| 1:1 | 0 | 0 | 0 | 0 | ||
| 3:1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
* az egereket különféle készítményekben lévő 30 mg ovalbuminnal immunizáltuk ** a százalékos citotoxicitást az antigént nem expresszáló sejtvonalak százalékos elpusztításának levonásával számítottuk
7. példa:
Az ova-specifikus antitest termeléshez szükséges komponensek
Egereket kéthetenként - összesen három alkalommal - 30 gg ovalbuminnal (HBSS-ben, STP-ben, STben, PT-ben vagy SP-ben alkalmazva) immunizáltunk. Pozitív kontrollként ovaSAFm-mel immunizált egereket használtunk, mivel ismert, hogy a SAFm erős anti40 test válaszreakciót indukál. A második és a harmadik immunizálást követően 7 nappal vért vettünk az egerektől, és a szérumot ova-specifikus antitest válaszreakcióra teszteltük. Az eredmények a 3. Táblázatban láthatók. Ezek azt mutatják, hogy háromszori immunizálás után az ovalbuminnal STP-ben, ST-ben ill. SAFm-ben immunizált egerek hasonló anti-ova válaszreakciókat mutattak.
3. Táblázat
Az anti-ova antitest válaszreakció irtdukálása
| Immunizálás ova-val, a következőkben3 | A reagáló egerek száma/beoltott egerek száma | anti-ova antitest titer0 (1/szérumhígítás) |
| 1. kísérlet | ||
| HBSS | 0/3 | <1/20; <1/20; >15,360 |
| STP | 3/3 | >1/15,360; >1/15,360; 1/15,360 |
| ST | 3/3 | 1/3840; 1/15,360; 1/3840 |
| PT | 3/3 | >1/15,360; >1/15,360; 1/15,360 |
| SP | 3/3 | >1/15,360; >1/15,360; 1/15,360 |
| SAFm | 3/3 | >1/15,360; >1/15,360; 1/3840 |
HU 211 299 A9
| Immunizálás ova-val, a következőkben3 | A reagáló egerek száma/beoltott egerek száma | anti-ova antitest υΐεί6 (1/szérumhígítás) |
| 2. kísérlet | ||
| STP 0,0015% | 3/3 | >1/4860; >1/4860; >1/4860 |
| STP 0,015% | 3/3 | >1/4860; >1/4860; >1/4860 |
| STP 0,15% | 3/3 | >1/4860; >1/4860; 1/1620 |
| STP 1,5% | 3/3 | >1/4860; >1/4860;1/1620 |
| HBSS | 1/3 | <1/20; 1/180; 1/20 |
| ST | 3/3 | >1/4860; >1/4860; >1/4860 |
| STP | 3/3 | >1/4860; >1/4860; >1/4860 |
a az egereket különböző készítményekben lévő 30 mg ovalbuminnal immunizáltuk b az antitest litert a preimmun szérum OD405+2SD értékénél nagyobb OD405 énéket mutató széntmhígitásként számítottuk
8. példa:
HÍV gpl 20-specifikus CTL indukció A HÍV gpl20 IIIB-t használtuk harmadik antigén rendszerként STP-vel, illetve az egyéb két és háromkomponensű készítményekkel végzett CTL indukció meghatározásához. Az egereket 1 pg gpl20 Illb-vel HBSS-ben, STP-ben, PT-ben vagy ST-ben immunizáltuk. Kontrollként SAFm-ben vagy Freund-féle komplett adjuvánsban (CFA) adott 1 pg gpl20 Illbval immunizált egereket használtunk (4/B Táblázat). Három héttel az immunizálást követően a lépsejteket előkészítettük és mitomicinnel kezelt 15-12 transz20 fektáns sejtekkel vagy 18 Illb pepiiddel in vitro stimuláltuk azokat. Ötnapos tenyésztés után a kapott effektor sejteket vaccinia: gplóO IIIB, vagy kiindulási vaccinia-fertőzött P815 sejtek - mint célsejtek ellen teszteltük. Az eredmények azt mutatják, hogy a gpl20-Squlane-TWEEN 80 egerekben következetesen indukálta a gpl20-specifikus CTL válaszreakciót (4/A és 4/B Táblázat). A CFA és a SAFm azonban nem tudta indukálni a gp 120-specifikus CTL-t (4/B Táblázat). Egy külön vizsgálatban a, gpl20-at STben, 0,0015-1,5% pluronsavtartalommal teszteltük a CTL indukcióra.
4/A Táblázat
A gpl20-speciftkus CTL válaszreakció indukálása egerekben
| Stimulátor | Cél’* | E:T | gpl20-HBSS | %-os citotoxicitás az alábbi készítményekkel immunizált egerekben | |
| gpl20-ST | gpl20-STP* | ||||
| 18IlIb/lL2 | vac;gpl20 | 100:1 | 23 | 42 | *** na |
| 33:1 | 23 | 38 | na | ||
| 11:1 | 0 | 0 | na | ||
| 3:1 | 0 | 35 | na | ||
| 18IIIb/IL2 | 15-20 | 100:1 | 0 | 50 | 0 |
| 33:1 | 0 | 35 | 0 | ||
| 11:1 | 0 | 27 | 0 | ||
| 3:1 | 0 | 18 | 0 | ||
| 18IIIb/IL2 | 3T3 + 18111b | 100:1 | 0 | 59 | 13 |
| 33:1 | 0 | 59 | 2 | ||
| 11:1 | 0 | 57 | 0 | ||
| 3:1 | 0 | 29 | 0 | ||
| 15-20 | vac:gpl20 | 100:1 | 35 | 84 | na |
| 33:1 | 19 | 65 | na | ||
| 11:1 | 12 | 37 | na | ||
| 3:1 | 0 | 22 | na | ||
| 1:1 | 0 | 0 | na |
az egerekei különféle készítményekben 1 mg gpl2011I-mal immunizáltuk a százalékos ciiotoxitást az antigént nem expresszáló sejtvonalak százalékos elpusztításának levonásával számítottuk ·** na: nincs adat
HU 211 299 A9
4/B Táblázat gpl 20-specifikus CTL válaszreakció indukálása egerekben0
| %-os citotoxitás az alábbi készítményekkel indukált egerekbenb | |||||||
| gp!20-HBSS | gpl20-ST | gpl20-CFA | gpl20-Saf-M | ||||
| E:T | % | E:T | % | E:T | % | E:T | % |
| 100:1 | 16 | 67:1 | 94 | 17:1 | 0 | 100:1 | 3 |
| 33:1 | 14 | 22:1 | 91 | 6:1 | 0 | 33:1 | 2 |
| 11:1 | 2 | 7:1 | 58 | 2:1 | 0 | 11:1 | 0 |
| 3:1 | 0 | 2,5:1 | 57 | 0,7:1 | 0 | 3:1 | 0 |
| 1:1 | 0 | 0,8:1 | 12 | 0,2:1 | 0 | 1:1 | 0 |
| 0,3:1 | 0 | 0,3:1 | 7 | 0,07:1 | 0 | 0,3:1 | 0 |
a az egereket különféle készítményekben 1 mg gpl20DIb-vel immunizáltuk b a különböző csoportokból származó lépsejteket I Sinb és IL-2 pepiiddel stimuláltuk, in vitro c a citotoxicitást az 51Cr izotóppal jelölt 3T3 v. 15-12 sejtek ellen teszteltük. A százalékos specifikus toxicitást az antigént nem expresszáló sejtvonalak százalékos elpusztulásának levonásával számítottuk.
9. példa:
A gp!20-specifikus humorális válaszreakció indukálása egerekben
A gpl20-specifikus humorális válaszreakciók redukálásához az egereket három alkalommal - két hetes időközönként - 1 gg gp 120111b-vei immunizáltuk. Az állatoktól vért vettünk és IgG antitestek jelenlétére teszteltünk; a gpl2OIIlb-t szilárd fázisú ELISA módszerrel detektáltuk. Az 1. kísérlet eredményei azt mutatják, hogy a gpl20-ST ill. a gpl20-PT hatékonyabb immunogén, mint a gpl2O-HBSS, a gpl20-SAFm vagy a gpl20-STP (5. Táblázat). A 2. kísérlet eredményei azonban azt mutatják, hogy a gpl20 ST-ben vagy - 1,5 v. 3,75% pluronsavat tartalmazó - STP-ben magas titerü antitest válaszreakciókat képes indukálni.
5. Táblázat anti-gp!20 antitest válaszreakció indukálása
| Immunizálás gpl20-szala kővetkezők- ben2 | A reagáló egerek száma/beollott egerek száma | anti -gp 120 antitest titer5 (1/szérumhígítás) |
| 1. kísérlet | ||
| HBSS | 2/3 | 1/60; <1/20; 1/60 |
| STP | 1/3 | <1/20; >1/4860; <1/20 |
| ST | 3/3 | >1/4860; >1/4860; >1/4860 |
| PT | 3/3 | >1/4860; >1/4860; >1/4860 |
| SP | 2/3 | <1/20; 1/540; 1/549 |
| SAFm | 3/3 | 1/180; >1/4860; 1/540 |
| 2. kísérlet | ||
| STP 0,0015% | 2/3 | 1/180; 1/1620; 1/120 |
| STP0,015% | 0/3 | <1/20; <1/20; <1/20 |
| Immunizálás gpl20-szal a következőkben2 | A reagáló egerek száma/beoltott egerek száma | anti-gpl 20 antitest titer5 (1/szérumhígítás) |
| STP 0,15% | 2/3 | >1/4860; 1/1620; 1/20 |
| STP 1,5% | 3/3 | >1/4860; >1/4860; >1/4860 |
| HBSS | 1/3 | <1/20; <1/20; >1/4860 |
| ST | 3/3 | >1/4860; >1/4860; >1/4860 |
| STP | 2/3 | >1/4860; >1/4860; 1/20 |
a az egereket három alkalommal különböző készítményekben lévő 1 mg gpl201II.b-vel immunizáltuk b az anti-gpl20 antitest titer a 3. táblázatban leírtaknak megfelelően számítottuk.
10. példa:
gpl 20-specifikus antitest válaszreakciók majmokban
Csoportonként két-két majmot gpl20-SAFm-mel, gpl20-SPT-vel, gp20-ST-vel illetve gpl20-HBSS-sei immunizáltunk. Kontrollként egy csoportot gpl 60 Illbt tartalmazó rekombináns vaccinia-val immunizáltunk. A majmokat kéthetenként immunizáltuk, és két illetve három héttel a második immunizálás után vettünk tőlük vért. Valamennyi majomtól preimmun és immun szérumot sorozathígítottunk és ELISA módszerrel 0d. Anyagok és Módszerek) meghatároztuk az anti-gpl20 aktivitást. Az adatok (9. ábra) azt mutatják, hogy a gp-120-STP-vel illetve a gpl20-SAFm-mel immunizált majmok hasonló válaszreakciókat indukáltak. Egy gpl20-ST-vel immunizált majom hasonló anti-gpll20 reakciót indukált, mint a gpl20-SAFm-mel vagy gpl20-SPT-vel immunizált csoport. Egy gpl20-ST-vel immunizált majom két immunizálást követően sem indukált erőteljes anti-gpl20 válaszreakciót.
11. példa:
gpl 20-specifikus CTL válaszreakciók majmokban
A majmokat több alkalommal 30-50 pg HÍV gpl20-szal (antigén-készítményben vagy HBSS-ben) immunizáltuk. Kontrollként rekombináns vaccinia gpl60-nal immunizált majmokat használtunk. Előzetes eredményeink azt mutatják, hogy a gpl20-AF-fel és a gpl60:vaccinia-val immunizált csoport felében a vac:gpl60 fertőzött autológ célsejtek kitüntetett pusztítása állapítható meg (10/a és 10/b ábra).
A találmány egyéb megvalósítási módjait a szabadalmi igénypontokban írtuk le.
SZEKVENCIA LISTA (1) ÁLTALÁNOS TUDNIVALÓK:
(i) BEJELENTŐK: SYAMAL RAYCHAUDHURI
Wn.T.IAM H. RASTETTER (ii) A TALÁLMÁNY
CÍME CITOTOXIKUS T-LIMFOCITA
VÁLASZREAKCIÓK INDUKÁLÁSA (iii) SZEKVENCIÁK SZÁMA: 2 (iv) LEVELEZÉSI CÍM:
(A) CÍMZETT: Lyon & Lyon
HU 211 299 A9 (B) UTCA: 611 West Sixth Street (C) VÁROS: Los Angeles (D) ÁLLAM: Kalifornia (E) ORSZÁG: USA (F) POSTAI IR. SZ. 90017 (v) SZÁMÍTÓGÉPPEL OLVASHATÓ ALAK:
(A) INFORMÁCIÓ
HORDOZÓ TÍPUSA: 1,44 Mb-os, 3,5” diszk (B) SZÁMÍTÓGÉP TÍPUS: IBM kompatibilis (C) MŰKÖDÉSI
RENDSZER: IBM P C. DOS 5.0 (D) SZOFTVER: WordPerfect 5.1 (2) TUDNIVALÓK AZ 1. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ:
(i) SZEKVENCIA JELLEMZŐK:
(A) HOSSZÚSÁG: 24 (B) TÍPUS: aminosav (C) SZÁL: egyszálú (D) ALAK: lineáris (ii) SZEKVENCIA
LEÍRÁS: 1. SZÁMÚ SZEKVENCIA
| Glu | Gin | Leu | Glu | Ser | lle | lle | Asn Phe |
| Glu | Lys | Leu | Thr | Glu | Trp | Thr 16 | |
| Ser | Ser | Asn | Val | Met | Glu | Glu | Arg 24 |
(2) TUDNIVALÓK A 2. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ:
(i) SZEKVENCIA JELLEMZŐK:
| (A) HOSSZÚSÁG; (B) TÍPUS: (C) SZÁL: (D) ALAK: | 19 aminosav egyszálú lineáris |
| (ii) SZEKVENCIA LEÍRÁS: | 2. SZÁMÚ SZEKVENCIA |
| Asp Glu Asn Pro | Val Val His Phe Phe |
| Lys Asn lle Val | Thr Pro Arg |
| Thr Pro Pro 19 | 16 |
SZABADALMI IGÉNYPONTOK
Claims (49)
1. Készítmény, amely egy antigént (albumin kivételével) egy antigén-készítménnyel alkotott keverékként tartalmaz, amely az alábbi három komponens közül kettőből áll:
(a) stabilizáló detergens, (b) micellaképző ágens és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olaj; amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki.
2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, amelyben az antigént a következők közül választjuk ki: a HÍV antigének antigén-tulajdonságú részei: gpl60, gag, pol,
Nef, Tat és Rév; a malária antigének: CS protein és sporozoit felületi protein 2; a hepatitisz B felületi antigének: Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag és HBe Ag; az influenza antigének: HA, NP, NA; a hepatitisz A felületi antigének; a herpesz vírus antigének: EBV gp340, EBV gp85, HSV, gB, HSV, gD, HSV gH, HSV korai protein termék, citomegalovírus gB, citomegalovírus gH és IE protein gp72; légzőszervi szincitiális vírus antigének: F protein, G protein és N protein; Herpes papillóma vírus antigének: E4, E6 és E7; tumor antigének: karcinóma CEA, karcinóma-kapcsolt mucin, karcinóma P21, karcinóma P53, melanóma MPG, melanóma g97, karcinóma Neu onkogén tennék, MAGÉ antigén, karcinóma p53 géntermék, prosztata-specifikus antigén (PSA), prosztata asszociált antigén és mutáns p21 ras protein.
3. Készítmény, amely egy antigént (B-sejt limfoma antigén illetve albumin kivételével) egy antigén-készítménnyel alkotott keverékként tartalmaz, amely az alábbi három komponenst tartalmazza:
(a) stabilizáló detergens, (b) micellaképző ágens és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olaj; amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki és ez nem tartalmaz immunstimuláló peptid komponenst.
4. A 3. igénypont szerinti készítmény, amelyben az antigén-készítmény a detergensből, ágensből és olajból áll.
5. A 3. igénypont szerinti készítmény, amelyben az antigén-készítmény emberre, háziállatokra vagy mezőgazdasági haszonállatokra nem toxikus.
6. A 3. igénypont szerinti készítmény, amelyben az antigént a következők közül választjuk ki: a HÍV antigének: gpl60, gag, pol, Nef, Tat és Rév; a malária antigének: CS protein és sporozoit felületi protein 2; a hepatitisz B felületi antigének: Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag és HBe Ag; az influenza antigének: HA, NP, NA; a hepatitisz A felületi antigének; a herpesz vírus antigének: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV korai protein tennék, citomegalovírus gB, citomegalovírus gH és IE protein gp72; Herpes papilloma vírus antigének: E4, E6 és E7; légzőszervi szincitiális vírus antigének: Fprotein, G protein és N protein; tumor antigének: karcinóma CEA, karcinóma-kapcsolt mucin, karcinóma P21, karcinóma P53, melanóma MPG, melanóma p97, karcinóma Neu onkogén termék, MAGÉ antigén, karcinóma p53 géntennék, prosztataspecifikus antigén (PSA), prosztata asszociált antigén és mutáns p21 ras protein.
7. Eljárás citotoxikus T-limfocita válaszreakció indukálására emberben, háziállatban vagy mezőgazdasági használatban, azzal jellemezye, hogy egy antigén (kivéve a B sejt limfóma antigént vagy egy albumint) és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be embernek vagy állatnak, amely készítmény (a) stabilizáló detergensből, (b) micellaképző ágensből és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olajból áll,
HU 211 299 A9 amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki, s nem tartalmaz immunstimuláló peptid komponenst olyan mennyiségben, mely elégséges a citotoxikus T-limfocita válaszreakció indukálásához az emberben vagy állatban.
8. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antigén-készítmény a detergensből, ágensből és olajból áll.
9. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a keveréket emberbe vagy állatba egyszeri bevitellel juttatjuk be.
10. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy azt vírussal fertőzött, vagy egy vagy több, vírusfertőzésből származó szimptomában szenvedő ember vagy állat esetében alkalmazzuk.
11. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antigén-készítmény emberre illetve állatra nem toxikus.
12. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antigént a következők közül választjuk ki: a HÍV antigének: gplóO, gag, pol, Nef, Tat és Rév; a malária antigének: CS protein és sporozoit felületi protein 2; a hepatitisz B felületi antigének: Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag és HBe Ag; az influenza antigének: HA, NP, NA; a hepatitisz A felületi antigének: a herpesz vírus antigének: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV korai protein termék, citomegalovírus gB, citomegalovírus gH és IE protein gp72; légzőszervi szincitiális vírus antigének: F protein, G protein és N protein; Herpes papilloma vírus antigének: E4, E6 és E7; tumor antigének: karcinóma CEA, karcinóma-kapcsolt mucin, karcinóma P21, karcinóma P53, melanóma MPG, melanóma p97, karcinóma Neu onkogén termék, MAGÉ antigén, karcinóma p53 géntermék, prosztata-specifikus antigén (PS), prosztata asszociált antigén és mutáns p21 ras protein.
13. Eljárás HÍV vírussal fetőzött beteg kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek HÍV antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely (a) stabilizáló detergensből, (b) micellaképző ágensből és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olajból áll, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki, s nem tartalmaz immunstimuláló peptid komponenst; s a készítményt olyan mennyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocita válaszreakció indukálásához.
14. A 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a HÍV antigént a gpl20, gplóO, gag, pol, Nef, Tat és Rév antigének közül választjuk ki.
15. Eljárás maláriában szenvedő beteg kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek malária-asszociált antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely (a) stabilizáló detergensből, (b) micellaképző ágensből és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olajból áll, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki, s nem tartalmaz immunstimuláló peptid komponenst; s a készítményt olyan mennyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocia válaszreakció indukálásához.
16. A 15. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a malária-asszociált antigént a CS protein és sporozoit felületi protein 2 közül választjuk ki.
17. Eljárás influenzában szenvedő betegek kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek influenza-aszszociált antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely (a) stabilizáló detergensből, (b) micellaképző ágensből és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olajból áll, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki, s nem tartalmaz immunstimuláló peptid komponenst; s a készítményt olyan mennyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocita válaszreakció indukálásához.
18.. A 17. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az influenza-asszociált antigént a HA, NP és NA antigének közül választjuk ki.
19. Eljárás hepatitiszben szenvedő betegek kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek hepatitisz-aszszociált antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely (a) stabilizáló detergensből, (b) micellaképző ágensből és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olajból áll, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki, s nem tartalmaz immunstimuláló peptid komponenst; s a készítményt olyan mennyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocita válaszreakció indukálásához.
20. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hepatitisz asszociált antigént a hepatitisz A felületi antigén, a Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag és HBe Ag antigének közül választjuk ki.
21. Eljárás rákos megbetegedésben szenvedő betegek kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek rákasszociált antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely készítmény (a) stabilizáló detergensből, (b) micellaképző ágensből, (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olajból áll, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki, s nem tartalmaz immunstimuláló peptid komponenst; s az említett keveréket olyan mennyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocia válaszreakció indukálásához.
22. A 21. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a rák-asszociált antigént a karcinóma CEA, karcinóma-kapcsolt mucin, karcinóma P21, karcinóma P53, melanóma MPG, melanóma p97, karcinóma Neu onkogén termék, karcinóma p53 géntermék és mutáns p21 ras protein antigének közül választjuk ki.
23. Eljárás herpesz vírussal fertőzött betegek keze15
HU 211 299 A9 lésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek a herpesz antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely (a) stabilizáló detergensből (b) micellaképző ágensből és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olajból áll, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki, s nem tartalmaz immunstimulálő peptid komponenst; s a készítményt olyan mennyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocita válaszreakció indukálásához.
24. A 23. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a herpesz vírus antigént az EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV korai protein tennék, citomegalovírus gB, citomegalovírus gH és IE protein g P72 antigének közül választjuk ki.
25. Eljárás légzőszervi szincitiális vírussal fertőzött betegek kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek egy légzőszervi szincitiális antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely (a) stabilizáló detergensből, (b) micellaképző ágensból és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olajból áll, amely antigén-készítményt stabil olaj/víz emulzióként készítjük ki, s nem tartalmaz immunstimuléló peptid komponenst; s a készítményt olyan mennyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocita válaszreakció indukálásához.
26. A 25. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a légzőszervi szincitiális vírus antigént az F, G és N proteinek közül választjuk ki.
27. Eljárás citotoxikus T-limfocita reakció redukálására emberben, háziállatban vagy mezőgazdasági haszonállatban, azzal jellemezve, hogy egy antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely a (a) stabilizáló detergens, (b) micellaképző ágens és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olaj komponensek közül kettőt tartalmaz, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítünk ki, s a készítményt olyan mennyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocia válaszreakció indukálásához.
28. A 27. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy azt vírussal fertőzött, és egy vagy több, vírusfertőzésből származó szimptómában szenvedó ember vagy háziállat illetve mezőgazdasági haszonállat esetében alkalmazzuk.
29. A 27. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antigén-készítmény emberre illetve háziállatokra és mezőgazdasági haszonállatokra nem toxikus.
30. A 27. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antigént a következők közül választjuk ki: a HÍV antigének antigén tulajdonságú részei: gpl60, gag, pol, Nef, Tat és Rév; a malária antigének: CS protein és sporozoit felületi protein 2; a hepatitisz B felületi antigének: PreSl, Pre-S2, HBc Ag és HBe Ag; az influenza antigének: HA, NP, NA; a hepatitisz A felületi antigének; a herpesz vírus antigének: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV g H, HSV korai protein termék, citomegalovírus gB, citomegalovírus gH és IE protein gp72; légzószervi szincitiális vírus antigének: F protein, G protein és N protein; Herpes papilloma vírus antigének: E4, E6 és E7; tumor antigének: karcinóma CEA, karcinóma-kapcsolt mucin, karcinóma P21, karcinóma P53, melanóma MPG, melanóma p97, karcinóma Neu onkogén termék, MAGÉ antigén, karcinóma p53 géntermék, prosztata-specifikus antigén (PSA), prosztata asszociált antigén és mutáns p21 ras protein.
31. Eljárás HÍV vírussal fertőzött beteg kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek HÍV antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely a (a) stabilizáló detergens, (b) micellaképző ágens és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olaj komponensek közül kettőt tartalmaz, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki; s a készítményt olyan mennyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus Tlimfocita válaszreakció indukálásához.
32. A 31. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a HÍV antigént a gpl60, gag, pol, Nef, Tat és Rév antigének közül választjuk ki.
33. Eljárás maláriában szenvedő beteg kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek malária-asszociált antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely a (a) stabilizáló detergens, (b) micellaképző ágens és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olaj komponensek közül kettőt tartalmaz, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki; s a készítményt olyan menynyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocita válaszreakció indukálásához.
34. A 33. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a malária-asszociált antigént a CS protein és sporozoit felületi protein 2 közül választjuk ki.
35. Eljárás influenzában szenvedó beteg kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek influenza-asszociált antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely a (a) stabilizáló detergens, (b) micellaképző ágens és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olaj komponensek közül kettőt tartalmaz, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki; s a készítményt olyan menynyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocita válaszreakció indukálásához.
36. A 35. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az influenza-asszociált antigént a HA, NP és NA antigének közül választjuk ki.
37. Eljárás hepatitiszben szenvedő beteg kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek hepatitisz-asszociált antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely a (a) stabilizáló detergens,
HU 211 299 A9 (b) micellaképző ágens és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olaj komponensek közül kettőt tartalmaz, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki; s a készítményt olyan menynyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocita válaszreakció redukálásához.
38. A 37. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hepatitisz-asszociált antigént a hepatitisz A felületi antigén, a Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag és HBe Ag antigének közül választjuk ki.
39. Eljárás rákos megbetegedésben szenvedő beteg kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek rák-aszszociált antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely (a) stabilizáló detergens, (b) micellaképző ágens és (c) biológiailag lebontható és biokompetibilis olaj komponensek közül kettőt tartalmaz, mely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki; s a készítményt olyan mennyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocita válaszreakció redukálásához.
40. A 39. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a rák-asszociált antigént a karcinóma CEA, karcinómakapcsolt mucin, karcinóma P21, karcinóma P53, MAGÉ, melanóma MPG, melanóma p97, karcinóma Neu onkogén termék, karcinóma p53 géntermék és mutáns p21 ras protein antigének közül választjuk ki.
41. Eljárás herpesz vírussal fertőzött beteg kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek herpesz antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely a (a) stabilizáló detergens, (b) micellaképző ágens és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olaj komponensek közül kettőt tartalmaz, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki; s a készítményt olyan menynyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocita válaszreakció redukálásához.
42. A 41. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett herpesz vírus antigént az EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV korai protein termék, citomegalovírus gB, citomegalovírus gH és IE protein gp72 antigének közül választjuk ki.
43. Eljárás légzőszervi szincitiális vírussal fertőzött beteg kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek légzőszervi szincitiális antigén és egy antigén-készítmény keverékét adjuk be, amely a (a) stabilizáló detergens, (b) micellaképző ágens és (c) biológiailag lebontható és biokompatibilis olaj komponensek közül kettőt tartalmaz, amely antigén-készítményt stabil olaj a vízben emulzióként készítjük ki; s a készítményt olyan menynyiségben adjuk a betegnek, mely elégséges a citotoxikus T-limfocita válaszreakció redukálásához.
44. A 43. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a légzőszervi szincitiális vírus antigént az F, G és N proteinek közül választjuk ki.
45. A 25-44. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antigén-készítmények a detergenst és a micellaképző ágenst tartalmazzák
46. A 25-44. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antigén-készítmények a detergenst és az olajat tartalmazzák.
47. A 25-44. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antigén-készítmények a micellaképző ágenst és az olajat tartalmazzák.
48. Eljárás profilaktikus kezelésre, azzal jellemezve, hogy az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti készítményt adjuk be a páciensnek.
49. Az 1. és 3. igénypont szerinti készítmény, amely az itt leírt tulajdonságokkal rendelkezik.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US73506991A | 1991-07-25 | 1991-07-25 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU211299A9 true HU211299A9 (en) | 1995-11-28 |
Family
ID=24954233
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9400202A HU220295B (hu) | 1991-07-25 | 1992-07-24 | Antigénkészítmények és ezek alkalmazása citotoxikus T-limfocita reakciók indukálására |
| HU95P/P00339P HU211299A9 (en) | 1991-07-25 | 1995-06-22 | Induction of cytotoxic t-lymphocyte responses |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9400202A HU220295B (hu) | 1991-07-25 | 1992-07-24 | Antigénkészítmények és ezek alkalmazása citotoxikus T-limfocita reakciók indukálására |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5585103A (hu) |
| EP (1) | EP0596032B2 (hu) |
| JP (1) | JP3939746B2 (hu) |
| KR (1) | KR100198868B1 (hu) |
| AT (1) | ATE166578T1 (hu) |
| AU (1) | AU666127B2 (hu) |
| BG (1) | BG62240B1 (hu) |
| BR (1) | BR9206310A (hu) |
| CA (1) | CA2113720A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ288048B6 (hu) |
| DE (1) | DE69225710T3 (hu) |
| DK (1) | DK0596032T4 (hu) |
| ES (1) | ES2117052T5 (hu) |
| FI (2) | FI108114B (hu) |
| HU (2) | HU220295B (hu) |
| IE (1) | IE922436A1 (hu) |
| IL (1) | IL102639A (hu) |
| MX (1) | MX9204376A (hu) |
| NO (1) | NO317203B1 (hu) |
| OA (1) | OA09880A (hu) |
| PH (1) | PH30906A (hu) |
| RO (1) | RO116459B1 (hu) |
| RU (1) | RU2129439C1 (hu) |
| SK (1) | SK282920B6 (hu) |
| TW (1) | TW349867B (hu) |
| WO (1) | WO1993001831A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA925614B (hu) |
Families Citing this family (79)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6197311B1 (en) * | 1991-07-25 | 2001-03-06 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses |
| US5709860A (en) * | 1991-07-25 | 1998-01-20 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses |
| AU6363094A (en) * | 1993-03-15 | 1994-10-11 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Peptide coated dendritic cells as immunogens |
| GB9314623D0 (en) * | 1993-07-14 | 1993-08-25 | Nordion Int Inc | Localization and therapy with agents directed against prostate specific antigen in breast cancer |
| GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| AUPM446594A0 (en) * | 1994-03-16 | 1994-04-14 | Csl Limited | Cytotoxic t-cell epitopes identified within epstein-barr virus |
| GB9620795D0 (en) * | 1996-10-05 | 1996-11-20 | Smithkline Beecham Plc | Vaccines |
| US5820880A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-13 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Liposomal formulation |
| NZ337054A (en) * | 1997-01-30 | 2001-03-30 | Chiron Corp | Microparticles PLA and PLG with adsorbed viral antigen to stimulate immune responses particularly for intracellular viruses such as HSV-1 or HSV-2, varicella zoster virus. epstein-barr virus or cytomegalovirus (CMV) |
| US6884435B1 (en) * | 1997-01-30 | 2005-04-26 | Chiron Corporation | Microparticles with adsorbent surfaces, methods of making same, and uses thereof |
| WO1998033520A1 (en) * | 1997-02-05 | 1998-08-06 | Bystryn Jean Claude | pH-SENSITIVE LIPOSOMES AND OTHER TYPES OF ENCAPSULATED VACCINES CONTAINING IMMUNOMODULATORS, AND METHODS FOR MAKING AND USING SAME |
| AT405939B (de) * | 1997-02-24 | 1999-12-27 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von lipidumhüllten viren |
| WO1998052691A1 (en) * | 1997-05-16 | 1998-11-26 | Alberta Research Council | Microfluidic system and methods of use |
| US6632619B1 (en) | 1997-05-16 | 2003-10-14 | The Governors Of The University Of Alberta | Microfluidic system and methods of use |
| DE69815692T2 (de) | 1997-09-05 | 2004-04-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Öl in wasser emulsionen mit saponinen |
| GB9718901D0 (en) | 1997-09-05 | 1997-11-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| ZA988461B (en) * | 1997-09-18 | 1999-03-30 | Idec Pharma Corp | Synergistic composition and methods for treating neoplastic or cancerous growths and for restoring or boosting hematopoiesis |
| US6858386B1 (en) | 1998-05-21 | 2005-02-22 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating colon cancer |
| US6949339B1 (en) * | 1998-05-21 | 2005-09-27 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, and staging colon cancer |
| CA2347119A1 (en) * | 1998-10-30 | 2000-05-11 | Genetics Institute, Inc. | Inhibition of differentiation of cytotoxic t-cells by p-selectin ligand (psgl) antagonists |
| ES2279647T3 (es) * | 1998-11-10 | 2007-08-16 | Emory University | Reguladores mitogenicos. |
| US7198920B1 (en) * | 1999-01-29 | 2007-04-03 | Corika Corporation | HER-2/neu fusion proteins |
| US20050244434A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-11-03 | Cohen David I | Tat-based tolerogen compositions and methods of making and using same |
| US20050226890A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-10-13 | Cohen David I | Tat-based vaccine compositions and methods of making and using same |
| CA2394914A1 (en) * | 1999-11-22 | 2001-05-31 | Susana Salceda | A novel method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating cancer |
| US7238471B1 (en) | 1999-11-23 | 2007-07-03 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating breast cancer |
| US20020048777A1 (en) * | 1999-12-06 | 2002-04-25 | Shujath Ali | Method of diagnosing monitoring, staging, imaging and treating prostate cancer |
| AU2001265239B2 (en) * | 2000-05-26 | 2006-05-25 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating colon cancer |
| US7229623B1 (en) * | 2000-08-03 | 2007-06-12 | Corixa Corporation | Her-2/neu fusion proteins |
| WO2006033665A1 (en) * | 2004-03-16 | 2006-03-30 | Inist Inc. | Tat-based vaccine compositions and methods of making and using same |
| AU2002231621A1 (en) | 2000-11-09 | 2002-05-21 | Immunolex Laboratories | Method of producing antibodies by immunization with conjugates of molecules coupled to charge-modified proteins |
| US20070073047A1 (en) * | 2002-06-10 | 2007-03-29 | Biogen Idec Ma Inc. | Genes overexpressed by ovarian cancer and their use in developing novel therapeutics |
| EP1545575A4 (en) | 2002-09-19 | 2006-04-05 | Us Gov Health & Human Serv | POLYPEPTIDES OF P. ARIASI POLYPEPTIDES P. PERNICIOSUS AND METHODS OF USE |
| MXPA05004714A (es) | 2002-10-29 | 2006-03-17 | Us Gov Health & Human Serv | Polipeptidos de lutzomyia longipalpis y metodos de uso. |
| WO2004087204A2 (en) * | 2003-04-04 | 2004-10-14 | Pfizer Products Inc. | Microfluidized oil-in-water emulsions and vaccine compositions |
| SI1651265T1 (sl) * | 2003-07-24 | 2008-10-31 | Merial Ltd | Formulacije cepiva, ki obsegajo emulzijo olje v vodi |
| US8124397B2 (en) * | 2005-08-08 | 2012-02-28 | Oregon Health & Science University | Inactivating pathogens with oxidizing agents for vaccine production |
| US20100130425A1 (en) | 2005-09-09 | 2010-05-27 | Oregon Health & Science University | Use of toll-like receptor ligands in treating excitotoxic injury, ischemia and/or hypoxia |
| BRPI0708865A8 (pt) | 2006-03-14 | 2019-01-22 | Univ Oregon Health & Science | métodos para produzir uma resposta imune à tuberculose |
| US8293245B2 (en) | 2006-04-20 | 2012-10-23 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Methods and compositions based on Shiga toxin type 1 protein |
| US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| SI2068918T1 (sl) | 2006-09-26 | 2012-09-28 | Infectious Disease Res Inst | Si - ep sestavek za cepljenje, ki vsebuje sintetiäśna pomagala |
| TWI441648B (zh) | 2007-01-03 | 2014-06-21 | Oncotherapy Science Inc | Ｆｏｘｐ３胜肽疫苗 |
| EP2125868B1 (en) | 2007-02-28 | 2015-06-10 | The Govt. Of U.S.A. As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Brachyury polypeptides and methods for use |
| NZ601827A (en) * | 2007-10-18 | 2014-01-31 | Bavarian Nordic Inc | Use of mva to treat prostate cancer |
| EP2324049B1 (en) | 2008-08-04 | 2016-05-25 | The Government of the U.S.A. as represented by The Secretary of the dept. of Health & Human Services | Membrane proximal region of hiv gp41 anchored to the lipid layer of a virus-like particle vaccine |
| WO2010099472A2 (en) | 2009-02-27 | 2010-09-02 | The U.S.A. Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Spanx-b polypeptides and their use |
| CA2755897C (en) | 2009-03-23 | 2020-01-28 | Nanirx, Inc. | Treatment of cancers with immunostimulatory hiv tat derivative polypeptides |
| RU2732574C2 (ru) | 2009-06-05 | 2020-09-21 | Инфекшес Дизиз Рисерч Инститьют | Синтетические глюкопиранозиллипидные адъюванты |
| WO2011041886A1 (en) | 2009-10-07 | 2011-04-14 | University Of Victoria Innovation And Development Corporation | Vaccines comprising heat-sensitive transgenes |
| WO2011047340A1 (en) | 2009-10-16 | 2011-04-21 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Insertion of foreign genes in rubella virus and their stable expression in a live, attenuated viral vaccine |
| US8961989B2 (en) | 2009-11-20 | 2015-02-24 | Oregon Health & Science University | Methods for producing an immune response to tuberculosis |
| WO2011112599A2 (en) | 2010-03-12 | 2011-09-15 | The United States Of America, As Represented By The Secretary. Department Of Health & Human Services | Immunogenic pote peptides and methods of use |
| ES2625406T3 (es) | 2010-03-25 | 2017-07-19 | Oregon Health & Science University | Glicoproteínas de CMV y vectores recombinantes |
| CA2832307A1 (en) | 2011-04-08 | 2012-10-18 | Immune Design Corp. | Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses |
| SI2691530T1 (en) | 2011-06-10 | 2018-08-31 | Oregon Health & Science University | CMV glycoproteins and recombinant vectors |
| CA2842180C (en) | 2011-07-18 | 2020-06-23 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Methods and compositions for inhibiting polyomavirus-associated pathology |
| US20130189754A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-07-25 | International Aids Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| US9402894B2 (en) | 2011-10-27 | 2016-08-02 | International Aids Vaccine Initiative | Viral particles derived from an enveloped virus |
| WO2013152352A1 (en) | 2012-04-06 | 2013-10-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Servic | Live, attenuated rubella vector to express vaccine antigens |
| NZ701881A (en) | 2012-05-16 | 2016-10-28 | Immune Design Corp | Vaccines for hsv-2 |
| IN2014KN02769A (hu) | 2012-06-06 | 2015-05-08 | Bionor Immuno As | |
| EP2679596B1 (en) | 2012-06-27 | 2017-04-12 | International Aids Vaccine Initiative | HIV-1 env glycoprotein variant |
| WO2014043518A1 (en) | 2012-09-14 | 2014-03-20 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Brachyury protein, non-poxvirus non-yeast vectors encoding brachyury protein, and their use |
| JP2016502507A (ja) | 2012-10-19 | 2016-01-28 | バヴァリアン・ノルディック・インコーポレイテッド | 癌治療のための組成物および方法 |
| AU2014253791B2 (en) | 2013-04-18 | 2019-05-02 | Immune Design Corp. | GLA monotherapy for use in cancer treatment |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| EP2848937A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-18 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel HIV-1 immunogens |
| US9663556B2 (en) | 2013-10-04 | 2017-05-30 | Pin Pharma, Inc. | Treatment of cancers with immunostimulatory HIV tat derivative polypeptides |
| US10058604B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-08-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| JP6758185B2 (ja) | 2013-12-13 | 2020-09-23 | ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ | マルチエピトープｔａｒｐペプチドワクチンおよびその使用 |
| WO2015095770A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Immunogenic jc polyomavirus compositions and methods of use |
| US10174292B2 (en) | 2015-03-20 | 2019-01-08 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| US9931394B2 (en) | 2015-03-23 | 2018-04-03 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| CN108289940B (zh) | 2015-08-03 | 2023-01-13 | 美国卫生和人力服务部 | Brachyury缺失突变体、编码brachyury缺失突变体的非酵母载体及其用途 |
| ES2929274T3 (es) | 2016-05-10 | 2022-11-28 | Najit Tech Inc | Inactivación de patógenos y producción de vacunas inactivadas altamente inmunógenas utilizando un proceso de oxidación dual |
| US11235046B2 (en) | 2017-11-04 | 2022-02-01 | Nevada Research & Innovation Corporation | Immunogenic conjugates and methods of use thereof |
| KR20210124205A (ko) | 2018-12-04 | 2021-10-14 | 더 락커펠러 유니버시티 | Hiv 백신 면역원 |
| WO2021160887A1 (en) | 2020-02-14 | 2021-08-19 | Immunor As | Corona virus vaccine |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3083142A (en) * | 1958-02-27 | 1963-03-26 | Glaxo Group Ltd | Improved swine erysipelas vaccine |
| US3790665A (en) * | 1968-02-23 | 1974-02-05 | Haver Lockhart Labor Inc | Injectable adjuvant,method of preparing same and compositions including such adjuvant |
| US3919411A (en) * | 1972-01-31 | 1975-11-11 | Bayvet Corp | Injectable adjuvant and compositions including such adjuvant |
| GB1502774A (en) * | 1974-06-25 | 1978-03-01 | Nat Res Dev | Immunological preparations |
| US4117113A (en) * | 1974-06-25 | 1978-09-26 | National Research Development Corporation | Immunological preparations |
| US4770874A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-13 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| US4772466A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-20 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Vaccines comprising polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| JPS6147500A (ja) * | 1984-08-15 | 1986-03-07 | Res Dev Corp Of Japan | キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法 |
| WO1988002634A1 (en) * | 1986-10-20 | 1988-04-21 | Chiron Corporation | Vaccine for use in the therapeutic treatment of hsv |
| US4778784A (en) * | 1987-01-07 | 1988-10-18 | Baylor College Of Medicine | Cyclic peptide and method of use for inducing an immunological response to hepatitis B virus |
| US4963354A (en) * | 1987-01-21 | 1990-10-16 | Genentech, Inc. | Use of tumor necrosis factor (TNF) as an adjuvant |
| IL162181A (en) * | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
| HU212924B (en) * | 1989-05-25 | 1996-12-30 | Chiron Corp | Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion |
| AU1025692A (en) * | 1991-02-06 | 1992-08-13 | Ciba-Geigy Ag | Novel chimeric antiidiotypic monoclonal antibodies |
-
1992
- 1992-07-24 IL IL102639A patent/IL102639A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 KR KR1019940700218A patent/KR100198868B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 MX MX9204376A patent/MX9204376A/es not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 WO PCT/US1992/006193 patent/WO1993001831A1/en active IP Right Grant
- 1992-07-24 EP EP92917479A patent/EP0596032B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 ES ES92917479T patent/ES2117052T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 CZ CZ1994150A patent/CZ288048B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 AU AU24338/92A patent/AU666127B2/en not_active Ceased
- 1992-07-24 CA CA002113720A patent/CA2113720A1/en not_active Abandoned
- 1992-07-24 JP JP50307193A patent/JP3939746B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-24 RO RO94-00094A patent/RO116459B1/ro unknown
- 1992-07-24 US US07/919,787 patent/US5585103A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 RU RU94038046/14A patent/RU2129439C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 PH PH44711A patent/PH30906A/en unknown
- 1992-07-24 BR BR9206310A patent/BR9206310A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-07-24 DK DK92917479T patent/DK0596032T4/da active
- 1992-07-24 DE DE69225710T patent/DE69225710T3/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-24 SK SK89-94A patent/SK282920B6/sk unknown
- 1992-07-24 IE IE243692A patent/IE922436A1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 HU HU9400202A patent/HU220295B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 AT AT92917479T patent/ATE166578T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-07-27 ZA ZA925614A patent/ZA925614B/xx unknown
- 1992-08-27 TW TW081105966A patent/TW349867B/zh not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-01-21 NO NO19940218A patent/NO317203B1/no unknown
- 1994-01-24 OA OA60461A patent/OA09880A/en unknown
- 1994-01-24 FI FI940335A patent/FI108114B/fi active
- 1994-01-24 BG BG98410A patent/BG62240B1/bg unknown
-
1995
- 1995-05-24 US US08/449,728 patent/US6270769B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-22 HU HU95P/P00339P patent/HU211299A9/hu unknown
-
2001
- 2001-06-05 FI FI20011187A patent/FI109335B/fi active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU211299A9 (en) | Induction of cytotoxic t-lymphocyte responses | |
| AP661A (en) | Induction of cytotoxic T- lymphocite responses. | |
| US20060057162A1 (en) | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses | |
| KR100478617B1 (ko) | 세포독성t-림프구반응을유도하는방법 |