PT86090B

PT86090B - Lipossoma de aerossol em particulas pequenas e preparacoes lipossoma-medicamento para utilizacao em medicina

Info

Publication number: PT86090B
Application number: PT86090A
Authority: PT
Inventors: Howard R Six; Brian E Gilbert; Samuel Z Wilson; Philip R Wyde
Original assignee: Clayton Found Res
Priority date: 1986-11-06
Filing date: 1987-11-06
Publication date: 1990-11-20
Also published as: FI874895A0; CA1263310A; EP0267050B1; KR880005921A; NO874600D0; DE3750537D1; DK582487D0; IL84360A0; IE872938L; EP0267050A3; AU8081987A; ES2058124T3; HK1006679A1; NO874600L; NZ222433A; JPS63211223A; ATE111352T1; JP2933931B2; IL84360A; DE3750537T2

Description

ÇLAYTON₌FQy^B£TLQ[i₌EQg₌gg§E£ggH

LIPOSSOMA DE AEROSSOL EM PARTÍCULAS PEQUENAS E PREPARAÇÕES

LIPOSSOMA-MEDICAMENTO PARA UTILIZAÇÃO EM MEDICINA¹¹

MEMÓRIA DESCRITIVA

Domínio da Invenção

O domínio da invenção compreende lipossomas de aerossol em partículas pequenas e preparações 1ipossoma-medicamento vantajosas para uso medi ci nal.

Antecedentes da Invenção aerossol em partículas pequenas define-se como um sistema coloidal no qual a fase contínua e um gas e a maioria das parti cuias tem um diâmetro inferior a 5 microns e possuem um diâmetro médio de massa aerodinâmica que varia entre 1 e 3 microns. A vantagem dessa população de partículas de diferentes dimensões deve-se ao facto de o pequeno tamanho das partículas e as baixas velocidades de fixação permitirem as partículas uma penetração fácil quando inaladas, pelo aparelho respiratório inferior em percentagens substanciais. Por exemplo, partículas de 1,5 microns depositam-se no pulmão numa percentagem de 46% do total inalado e no nariz e vias respiratÓrias superiores numa percentagem de 36%. Essa deposição uniforme permitira o tratamento de lesões a qualquer ní vel do aparelho respiratório (Gilbert, B. E., Wilson, S. Z., e

Knight, V., 1986, Ribavirin Aerosol Treatment of Influenza Virus

Infections. In: Options for the Control of Influenza. UCLA Sypo sium on Molecular and Cellular Biology. Alan R. Líss, Inc., New York, p. 343).

tratamento com um aerossol de partículas pequenas 1 iber. ta uma dose elevada de medicamento para o epitelio do aparelho re£ piratõrio em quantidades dificilmente atingíveis por outras vias de administração (Knight, V. 1973, Airborne Transmission and Pulmonary Deposition of Respiratory Viruses. In: Virai and Mycopla^ mal Infections of the Respiratory Tract. V. Knight, ed. Lea and Febiger, Phi1adelphia, Pennsylvania, p. 1). Ha subsequentemente, uma absorção do medicamento a uma velocidade uniforme, na circ£ lação sistémica.

Os fosfolípidos anidros colocados num meio aquoso associar-se-ão espontaneamente às estruturas mui ti 1 amei ares que funcionam como barreiras a permeabilidade. Estas vesículas de lípidos., designadas por lipossomas são constituídas por compartimentos aqu£ sos separados uns dos outros e do meio exterior por uma serie de camadas duplas concêntricas fechadas de lípidos. A composição dos compartimentos aquosos e a mesma do meio em que os lipossomas se formaram; isto torna possível fixar uma grande variedade de materiais entre as camadas duplas de lípidos. Os marcadores fixados podem ser libertados por uma variedade de agentes líticos, de um modo análogo às membranas naturais. Dado que os lipossomas podem preparar-se a partir das substancias encontradas nas membranas das células normais, consideram-se como não tóxicos para o mamíf£ ro hospedeiro, tendo alguns estudos 1aboratoriais recentes, em seres humanos e animais confirmado esta teoria.

A capacidade dos lipossomas para encapsular compostos s£ ltiveis na agua, conduziu ã especulação de que podiam ser clinica, mente eficazes como veículos transportadores de medicamentos. E£ ta expectativa não tem sido totalmente confirmada para medicameji tos solúveis na agua. Porem, estudos recentes com compostos anti-microbianos e anti-cancerígenos insolúveis na agua sugeriram que os lipossomas podem ser idealmente apropriados para libertarem es. te tipo de medicamento. As quantidades de medicamento associadas aos lipossomas são elevadas e a libertação não ocorre ate que as membranas sejam destruídas tanto por meios mecânicos como por bi£ degradação, o que permite deste modo, uma libertação mais controlada do medicamento durante um dado período de tempo. Alem disso, nos animais 1aboratoriais a utilização dos lipossomas reduziu presentemente, os efeitos tóxicos observados com o medicamento administrado isoladamente.

Os compostos 1ipossoma-medicamento são heterogéneos com o tamanho variando entre 1 micron ate 10 microns de diâmetro e tem sido administrados em doses orais ou intravenosas relativamente elevadas.

DESCRIÇÃO DO ESTADO DA TÉCNICA

Os requerentes desconhecem qualquer descrição, sugestão ou ensinamento anterior da técnica que refira que os lipossomas de aerossol de partículas pequenas e de preparações de lipossoma-medicamento tenham um uso medicinal ou que o tamanho heterogéneo de lipossomas pequenos e preparações 1ipossoma-medicamento possam ser reduzidos a uma população mais homogénea de partículas de lipossoma pequenas ( < 1 micron de diâmetro). 0 tamanho da par-4- ,/ tícula de aerossol é controlado pelas características operacionais do gerador ou nebulizador de aerossol sem qualquer perda na eficácia correspondente. Um ou vários lipossomas ou partículas medicamento-1ipossoma ( <1 micron de diâmetro) pode estar contido numa única gotícula de aerossol (diâmetro medico da massa aerodinâmica, 1-3 microns) dependendo da concentração do material de lipossoma na preparação a ser nebulizada.

Os lipossomas são veículos eficazes para a introdução de vários agentes nas células em experiências in vitro. Tem-se publicado um grande número de documentos científicos descrevendo lipossomas como veículos para os agentes solúveis na água e os ageji tes solúveis em lípidos. Várias centenas de substancias diferentes tem sido fixadas em lipossomas. Para uma melhor descrição dos lipossomas, sua preparação e aplicação faz-se referência ao American Laboratory, paginas 125-135, Outubro 1985.

Os seguintes artigos e patentes são representativos do estado da técnica:

AMA Drug Evaluation, 5^a. Edição, p. 1162-1166

Annals NYAS, Liposomes in Therapeutic and Preventive Medicine: The Development of the Drug-Carrier Concept, G. Gregoriadis , 308, 1978; 343-65

Clinicai Science and Moí. Med., Tissue and Hepatic Subcellular Distribution of Liposomes Containing Bleomycin after Intravenous Administration to Patients with Neopla^ ms, A. W. Segai, G. Gregoriadis, J. P. Lavender, D. Tarin, T. J. Peters, 1976 , 51; p. 421-425.

J. Infect Pis., Liposomal Amphotericiη B for the Treat ment Of Systemic Fungai Infections in Patients with Câncer: A Preliminary Study, G.

Berenstein-Lopez, V. Fainstein, R. Hopfer, K. Mehta, M. Sullivan, M. Keating, M. Rosenblum, R. Mehta, M. Luna, E. Hersh, J. Reuben, R. Juliano; G. Bodey, 1985, 151:704-10.

Infect. Immun., Effect of Liposomal Amphotericin B on Murine Macrophages and Lymphocytes, R. Mehta, K. Mehta , G. Lopez-Berenstein, R. Juliano, 1985, 47:429-33

The Lancet, Artificial Surfactant Therapy in Hialine-Membrane Disease, T. Fujiawara, H. Maeta, S. Chida, T. Morita, Y. Watabe, T. Abe, 1980, 1:55-59

Pediatri cs, Hyaline Membrane Disease Treated with Bovine Surfactant, J. A. Smyth, I. L. Metcalfe, P. Duftty, F. Possmayer, Μ. H. Bryan, G. Enhorning,' 1983, 71:913-17.

Pediatrics, Isolation of Human Surfactant from Amniotic

Fluid and a Pilot Study of its Efficacy in Respiratory Distress Syndrome, M. Hallman, T. A. Merritt, H. Schneider, B. Epstein, F. Mannino, D. Edwards, L. Gluck, 1983, 71:473-82.

Pediatric Res., Nebulization of Sonicated Phospholipids for Treatment of Respiratory Distress Syndrome of Infaji cy, Η. H. Ivey, J. Kattinwinkel, S. Roth, 1977, 11:301-14

The Lancet, Dry Artificial Lung Surfactant and its Effect on Very Premature Babies, C. J. Morley, A. D. Banham, N. Miller, J. A. Davis, 1981, 1:64-68.

The Lancet, Controlled Trial of Artificial Surfactant to Prevent Respiratory Distress Syndrome, H. L. Halliday, G. McClure, M. Reid, T. R. J. Lappin, C. Meban, P. S. Tho mas, 1984, 1:476-78.

A patente de invenção americana ηθ 4 370 349 descreve um processo para a preparação de uma mistura potencial de lipossomas 1 i ofi 1 i zadas .

A patente de invenção americana ηθ 3 873 720 descreve uma mistura aquosa de gorduras, hidratos de carbono e aminoãcidos emulsionados com a ajuda de ácidos gordos de cadeia longa ou os seus sais de aminoãcidos básicos e fosfolípidos de gema de ovo.

A patente de invenção americana ηθ 4 073 943 descreve a administração parentérica de agentes farmacologicamente activos insolúveis na ãgua na fase lipóide.

A patente de invenção americana ηθ 4 168 308 descreve a administração parentérica de agentes farmacologicamente activos, insolúveis na ãgua, na fase lipóide.

A patente de invenção americana ηθ 4 536 519 refere-se a

agentes emulsionantes e cosméticos emulsionadores.

A patente de invenção americana ηθ 4 563 354 descreve a administração parentérica de emulsões aquosas e oleosas.

RESUMO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a lipossomas de aerossol em partículas pequeanas e a preparações de medicamento-1ipossoma po£ suindo propriedades vantajosas para uma utilização medicinal.Aeros sol em partículas pequenas, como se utiliza aqui, e um sistema coloidal no qual a fase contínua Õ um gãs e a maioria das partícjj las tem um diâmetro inferior a 6 microns e têm um diâmetro médio de massa aerodinâmica variando entre 1 e 3 microns. Os lipossomas são heterogéneos no tamanho variando entre valores de diâmetro inferiores a 1 micron ate 10 microns. 0 tamanho da partícula dos lipossomas e das preparações 1ipossoma-medicamento são tr^ tados de modo vantajoso com o nebulizador de aerossol para se ob_ terem tamanhos inferiores a 1 micron de diâmetro, retendo estes lipossomas mais pequenos e as partículas 1ipossoma-medicamento a sua actividade farmacológica.

tratamento do aerossol de partículas pequenas por lipo_s somas isoladamente, é vantajoso, visto que os lipossomas podem funcionar como agentes tensioactivos pulmonares rigorosamente simulados e podem tratar insuficiências neste sistema que se dese_n volveram por variadíssimas razões.

Os medicamentos podem obter-se por combinações de medicamento-1 i possoma que variam dentro de uma gama larga tal como a da dosagem. Em geral, os medicamentos nas dosagens recomendadas pa-8-.

X < .· /

ra preparações de 1ipossoma-medicamento não aerossol da técnica anterior podem ser utilizados para preparações 1ipossoma-medicamento de aerossol em partículas pequenas sem as desvantagens das preparações 1ipossoma-medicamento da têcnica.anterior. A quantidade do medicamento no aerossol da preparação 1 ipossoma-medicameji to é controlada pela concentração do medicamento no recipiente ge rador de aerossol. A quantidade de medicamento utilizada depende também da duração do tratamento, do medicamento utilizado e de ou. tros factores análogos. Por exemplo, a dosagem para 24 horas pode variar entre uma quantidade inferior a um nanograma ate umas poucas gramas conforme a necessidade, toxicidade, propriedades biológicas e químicas do medicamento e de outros factores. As preparações 1ipossoma-medicamento podem incluir os medicamentos solúveis em lípidos e em agua.

Por consequência, e um objectivo da presente invenção pr£ porcionar um aerossol de partículas pequenas contendo lipossomas ou preparações de 1ipossoma-medicamento para utilização medicinal.

E ainda um objectivo da presente invenção descrever um método de trata.mento de lipossomas pelo nebulizador de aerossol desde tamanhos heterogéneos ate lipossomas em partíhulas pequenas substancialmente uniformes ( < 1 micron de diâmetro) sem perda de efi caci a.

Ainda um outro objectivo da presente invenção consiste na descrição de um método de tratamento de preparações 1ipossoma-medicamento nas quais os lipossomas formam preparações em partículas pequenas de 1ipossoma-medicamento desde tamanhos heterogéneos até tamanhos sensivelmente uniformes sem qualquer perda de eficácia.

Um outro objectivo da presente invenção consiste na descrição de um método de tratamento de um doente por meio de lipo£ somas que consiste na libertação de lipossomas de aerossol em par tículas pequenas para o epitêlio do aparelho respiratório.

Ainda um outro objectivo da presente invenção consiste na descrição de um método de tratamento de um doente por meio da libertação de preparações de 1ipossoma-medicamento de aerossol em partículas para o epitêlio do aparelho respiratorio.

Ainda um outro objectivo da presente invenção consiste em descrever preparações de 1ipossoma-medicamento nas quais uma gra£ de variedade de preparações de medicamento para uma grande variedade de doenças pode ser administrada efectivamente ao doente.

Ainda outros objectivos, aspectos e vantagens da presente invenção transparecem toda a descrição e são inerentes a ela.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

As Figuras 1 e IA mostram dois nebulizadores disponíveis comercialmente, o nebulizador de Puritan Bennett, sendo a Figura 1 o modelo N9 1920 e a Figura IA o modelo N9 1917 que são eficazes em gerar lipossomas de aerossol em partículas pequenas e preparações 1ipossoma-medicamento da presente invenção.

A Figura 2 é uma ampliação dos lipossomas no recipiente de aerossol no início da operação do gerador de aerossol.

A Figura 3 é semelhante a Figura 2 mas com 60 minutos de operaçao.

-10ί /

/ ______ /

A Figura 4 mostra (com a mesma ampliação) uma amostra de aerossol recolhida num AH Glass Impinger (AGI) após 15 minutos de operação.

A Figura 5, melhora de forma ampliada, a amostra da Figura 4 evidenciando que a formação de partículas de tamanhos pequenos não mudou a estrutura dos lipossomas.

DESCRIÇÃO DAS FORMAS DE REALIZAÇAO PREFERIDAS

Como se descreveu previamente, a presente invenção refere-se a lipossomas de aerossol em partículas pequenas e a preparações de 1ipossoma-medicamento, a métodos de formação de aerossóis e a métodos de tratamento de doentes com esses aerossóis. 0 termo aerossol de partículas pequenas é utilizado aqui como seji do um sistema coloidal no qual a fase contínua Ó um gas e a maioria das partículas tem um diâmetro inferior a 5 microns com um diâmetro médio de massa aerodinâmica variando entre 1 e 3 microns. As preparações 1ipossoma-medicamento da técnica anterior são het£ rogéneos com dimensões do tamanho das partículas variando entre valores inferiores a 1 micron até 10 microns de diâmetro e têm si_ do fornecidos a doentes em doses orais e intravenosas relatiyameji te elevadas. Estas dosagens dão origem a concentrações de plasma potencialmente tóxicas e elevadas dos medicamentos mas originam concentrações baixas no epitelio respiratório. Inesperadamente os lipossomas heterogéneos e as preparações 1ipossoma-medicamento podem ser.converti das prontamente em partículas pequenas mais ho_ mogeneas por um nebulizador de aerossol sem qualquer perda de eficácia dos lipossomas e das preparações 1ipossoma-medicamento.

711t \

Os lipossomas de aerossol de partículas pequenas e as preparações 1ipossoma-medicamento quando inaladas proporcionam uma concentração elevada no epitélio respiratório e uma velocidade uniforme de absorção na circulação, que ê vantajoso sem o perigo dos níveis dos picos poderem estar associados com doses elevadas do medicamento, orais ou intravenosas e libertar uma dose elevada de medicamento para o epitélio do aparelho respiratório em quantidades dificilmente inatingíveis por outras vias de administração. Como se mencionou previamente, a vantagem de uma tal população de partículas dimensionada de diferentes dimensões, deve-se ao facto de as suas pequenas dimensões e as baixas velocidades de fixação pejr mitirem uma melhor penetração, quando inaladas no aparelho respiratório inferior em percentagens substanciais. Por exemplo, partículas de 1,5 microns depositar-se-ão numa quantidade de 46% do total inalado no pulmão e numa quantidade de 36% no nariz nas vias respiratórias superiores. Essa deposição uniforme permite o tratamento de lesões a qualquer nível do aparelho respiratório e também proporciona uma interface nas células sem os problemas e as desvantagens associadas as injecções orais e intravenosas.

A Tabela I seguinte descreve exemplos representatiyos de medicamentos solúveis em lípidos e na agua, que podem ser adminis_ trados em aerossois de lipossomas de partículas pequenas.

ι

TABELA 1

Anti-asmati cos	Anti-arrítmi cos	Tranqui1i zantes
metaprotenerol	propanolol	clorpromazi na
ami nofi1i na	atenolol	benzodi azepi na
teofi1i na	verapami1	buti rofenonas
terbutalina	captopri1	hi droxi zi nas
Tegretol	i sossorbeto	meprobamato
efedri na		fenoti azi nas
isoproterenol		reserpi na
adrenali na		ti oxanti nas
norepi nefri na GlicÕsidos cardíacos	Hormonas	Es terói des
di gi tali cos	anti di ureti cos	predni sona
di gi toxi na	corti costerói des	tri anci nolona
lanatosido C	testosterona	hi drocorti sona
di goxi na	estrogéneo	dexametasona
	ti rói de	betametosona
	crescimento	prednisolona
Anti-hi pertensores	ACTH progesterona gonadotropi na mi neralocorti cói de Anti-di abeti cos	Anti-hi stamíni cos
apresoli na	Di abenese	pi ri benzami na
atenolol	insulina	clorofeni raroi na
Anti-parasi tas	Anti cancerígenos	di feni drami na Sedativos e analge-
praziquantel	azati opri na	si cos morfi na
metroni dazole	bleomi ci na	di1audi d
pentami di na	bi clofosfami da	codeína
	adri ami ci na	codeína-si nteti cos

semelhantes

TABELA 1 (Cont.) daunorrubi ci na vi ncri sti na demerol oxi morfona fenobarbi tal barbi turatos

-μV.

_z

Anti bi õti cos peni ci1i na tetraci cli na eri tromi ci na cefaloti na i mi penem cefofaxi ma carbeni ci1i na vancomi ci na gen tami ci na gentami ci na tobrami ci na pi peraci1i na moxalactama amoxi ci 1 i na ampi ci1i na cefazoli na cefadroxi1 céfoxi ti n a outros amino-glicosi dos

Imunoterapi as	Vacinas
i nterferon	crise do aparelho
i nterleuci na-2	respi ratori o
anticorpos monoclonais	; Vacina hemofilus
gamaglobuli na	i nfluenza
anti-fΰngicos
Anti-fΰngicos
	Anti νΐri cos
anfotericina B
mi conazol	aci ciovi r e deri va.
muramyl dipeptide	dos
clotri mazole	Wi nthrop-51711
clotri mazole	ri bavi ri na
	ri mantadi na/amanta.
Anti“hi potensores	di na
	azidotimidina e
dopami na	deri vados
dextroamfetami na	adenina arabinõsido
	inibi dores de prote
	ase do tipo amidina

Outros bloqueadores recepto res de superfícies de células ' -14-

PREPARAÇÃO DE LIPOSSOMAS

Os lipossomas e as preparações de 1ipossoma-medicamento podem preparar-se de qualquer maneira, apropriada, por exemplo, como esta descrito no American Laboratory, p. 125-135, Outubro , 1985 , e na patente de invenção americana ηθ 4 370 349, Evans et. al. 25 de Janeiro de 1983. Estas publicações documentam amplamente que uma variedade de lípidos anfipaticos são apropriados para a preparação de lipossomas a utilizar nesta invenção

Os iTpidos apropriados incluem fosfolTpidos, por exemplo, lecitinas naturais derivadas de gema de ovo ou da soja, esfingomi£ 1ina derivada dos miolos de boi ou lecitinas sintéticas, por exem pio dimiristoi1-fosfatidi1colina, dipalmitoTlo-fosfatidi1colina ou lecitinas sintéticas insaturadas, por exemplo, di ol ei 1 o-fosfati dij_ colina ou di1inolei 1o-fosfatidi1colina. Pode-se utilizar tanto fosfolípidos simples como uma mistura de fosfolTpidos. Podem-se adicionar esteróis, por exemplo, colesterol ou ergosterol, para aumentar a estabilidade das camadas duplas de lipossomas e podem-se utilizar iTpidos que possuem uma variação positiva ou negativa, por exemplo, fosfatidi1etanolamina, gangliosidos de miolos de boi ou acido fosfatídico para transmitir uma carga apropriada ao lipossoma e paraaumentar o tamanho dos compartimentos aquosos. As misturas de lipidos podem ser utilizadas para tornar os lipossomas mais fluidos ou mais rígidos e para aumentar ou diminuir as caracte rísticas de permeabilidade.

Os lipossomas podem preparar-se por meio de uma grande variedade de métodos. Estes processos tem em comum a dispersão de um fosfolípido ou de uma mistura de lípidos num veículo apropriado e a eliminação de um dissolvente orgânico, por exemplo, éter, clci rofÕrmio ou T-butanol, por métodos tais como a evaporação, a evaporação rotativa em vãcuo ou liofilização com equipamento de liofilização comereialmente disponível. A dispersão do filme de lípidos resultante ou do pÕ de lípido anidro num meio aquoso, por exemplo, agua destilada, solução salina isotonica ou soluções tam pao, darã origem ã formação de lipossomas. Por exemplo, dissolve-se a fosfatidi1colina no seio de T-butanol re-destilado e transfere-se para uma garrafa. Congela-se a solução e elimina-se o dissolvente em vãcuo, utilizando um equipamento de liofilização comercial. Adiciona-se agua destilada esterilizada, livre de pirogéneo ao põ liofilizado e agita-se a garrafa para dispersar o pÕ.

Pode-se examinar ao microscópio a suspensão leitosa resuj[ tante e verificar que a suspensão apresenta lipossomas que são he terogeneos, cujas dimensões yariam entre valores inferiores a 1 micron atê 10 microns.

Pode-se associar aos lipossomas qualquer composto biologi_ camente activo. Associa-se o composto a porção lípida dos lipossomas ou resíduos nos compartimentos aquosos de acordo com as pro priedades físicas e químicas do composto de interesse sob o ponto de vista biológico. Entende-se que os processos utilizados para a preparação de composições 1ipossoma-medicamento não são restritivos a esta invenção, podendo qualquer processo que de origem a lipossomas ser aplicável. Descrevem-se a seguir tres métodos de produção de lipossomas para esta invenção. Verifica-se que apesar das propriedades físicas e químicas se pode associar aos lipossomas uma grande lista de compostos biologicamente activos sendo es_

-le-

ses lipossomas aplicáveis a libertação de aerossol em partículas pequenas.

Método I - pode ser utilizado para incorporar compostos activos sob o ponto de vista biolõgico ligados a lípidos ou solúveis em lípidos. Por exemplo, a lecitina do ovo (fosfati di 1 col i na) ou fos. folípidos análogos dissolvidos em um dissolvente orgânico e transferida para um frasco ou garrafa apropriada adicionando-lhe o composto solúvel no lípido. Congela-se a solução congelada e elimina-se o dissolvente utilizando um equipamento de liofilização comercial. Os lipossomas formam-se por adição de um meio aquoso apropriado, por exemplo, agua destilada estéril, solução salina isotõnica ou uma solução tampão seguindo-se a agitação vigorosa do recj[ piente. Verifica-se que os fosfolípidos ou a mistura de fosfolípj, dos utilizadas para preparar os lipossomas podem ser alterados pa. ra aumentar ou diminuir a solubilidade dos lípidos do composto acti_ vo como se desejar e que os dissolventes tais como clorofórmio, n-butanol, t-butanol ou piridina podem utilizar-se para promover a interacção do composto como fosfolípido. 0 processo específico pode ser adoptado para se alcançar as propriedades individuais dos compostos específicos.

Método II - pode ser utilizado para incorporar compostos biologi_ camente activos solúveis na água. Por exemplo, transfere-se lecitina do ovo dissolvida em T-butanol re-destilado para um frasco ou garrafa apropriados, congela-se a solução e elimina-se o dissolvente utilizando um equipamento de liofilização comercial. Adicionam-se os compostos a fixar nos lipossomas ao pÕ seco num meio aquoso, formando-se os lipossomas por agitação vigorosa do yaso para dispersar o pÕ seco. Nestas condições, espera-se uma fixação

-17de 4-5% do composto solúvel na água, mas a adição de um esterol e/ou de anfifila carregada na mistura iTpida pode aumentar a eficiência da fixação aproximadamente até 30%. 0 composto anidro que permanece livre no meio exterior, pode separar-se por meio de uma grande variedade de processos, por exemplo, centrifugação , cromatografia de peneiro molecular ou dialise. A necessidade de eliminação ou não do composto liyre, depende da utilização médica pretendida, da actividade biologica do composto, da dose desejada e das quantidades incorporadas nos lipossomas.

Método III - pode ser utilizado para incorporar os compostos bioi logicamente activos sem atender ãs suas características de solubilidade. Neste processo o composto ê ligado covaíentemente a um lípido dando origem a que a porção de lípido se associe ao lipossoma e se fixe o composto ãs duplas camadas de lipossomas. A fosfati1etanolamina e o acido palmítico tem sido utilizados com este fim, podendo no entanto utilizar-se uma grande variedade de lípidos a este método. Neste processo mistura-se o composto e um derivado de lípidos capazes de originar o composto, por exemplo, o éster de N-hidroxisuccinimida do acido palmítico, N-succini1-fosfatidiletanolamina ou, alternativamente, fosfatidi1etanolamina na presença de um agente de desidratação tal como N-N ¹ -diciclohexi1 carbodi-imi da no seio de um dissolvente apropriado e deixam-se reagir. Purifica-se então o derivado lípidico do composto e incorpora-se nos lipossomas. Por exemplo, dissolve-se a 1iciti na do oyo ou fosfolípidos analogos e quantidades apropriadas de compostos derivados do lípido no seio de um dissolvente orgânico s adiciona-se a um frasco ou garrafa apropriados. Congela-se a solução e elimina-se o dissolvente num equipamente de 1 i o f i Ί i zação. Os lipossomas for.

-’⁸/ C mam-se a seguir por adição de um meio aquoso apropriado ao pó seco, seguindo-se a agitação vigorosa do recipiente. Verifica-se que uma grande variedade de reacções químicas podem ser utilizadas para preparar derivados de lípidos de compostos biologicamente activos e que serão apropriados processos alternativos se o derivado resultante puder ser associado a lipossomas e se a actividade biológica do composto não tiver sido irreversivelmente destruída pelo processo. Verifica-se também que os derivados de lípidos de alguns compostos, por exemplo, péptidos, proteínas ou hormonas poi dem ser incorporados, de modo eficiente, quando são adicionados ao meio aquoso em vez de serem associados ao dissolente orgânico.

PREPARAÇÃO LIPOSSOMA-MEDICAMENTO

EXEMPLO 1

Um dos aspectos da presente invenção e o presente exemplo referem-se a preparações de 1 ipossoma-medi camento onde o medicamer^ to e enviroxima e preparado de acordo com o método I.

I

Para enviroxima contendo lipossomas, adicionou-se fosfati_ dilcolina (450 mg) a um frasco de 500 ml com clorofórmio (30 ml) e adicionou-se 120 mg de enviroxima a solução. Eliminou-se o di£ solvente em vãcuo e dissolveu-se a mistura lípido-medicamento em 60 ml T-butanol. Congelou-se a solução e eliminou-se o dissolvente num equipamento de liofilização comercial. Preparam-se os lipossomas por agitação mecânica do resíduo seco em 30 rol de água estéril. Os lipossomas preparados por este processo foram examinados microsco picamente e verificou-se que eram heterogéneos com dimensões vari_ ando entre valores inferiores a 1 micron ate 10 microns de diâmetro. Colocou-se depois a preparação num gerador de aerossol de ’Ρ-

ί * partículas pequenas que utilizou um nebulizador de Collison para a formação de partículas pequenas. Durante a passagem através do nebulizador os lipossomas foram reduzidos no tamanho de tal forma que a maior parte dos lipossomas passaram a ter diâmetros inferi^ res a 1 micron e muitos diâmetros inferiores a 0,1 micron. 0 tamanho das partículas que contem enviroxima-1ipossomas libertadas para o doente controla-se pelas caracteristicas operacionais do gerador de aerossol. A maior parte destas partículas eram inferio res a 5 microns de diâmetro possuindo- um diâmetro médio de massa aerodinâmica variando entre cerca de 1 a 3 microns. Pode-se utilizar qualquer tipo de nebulizador de aerossol que reduza deste modo o tamanho lipossoma, havendo um grande numero deles disponível no mercado. Por exemplo, o nebulizador de Puritan das Figuras 1 e IA pode ser utilizado colocando os lipossomas ou as preparações 1ipossoma-medicamento nos recipientes destes nebulizadores. Por consequência não se farâ nenhuma outra descrição dos nebulizadores por parecer desnecessária.

A figura 2 e uma fotografia de lipossomas contendo enyiroxima tal como foram inicialmente preparados, apresentando-se muito heterogéneos no tamanho, variando os seus diâmetros entre 0,7 micron e valores inferiores a 0,03 micron. A seguir ao tratamento com o gerador de aerossol de partículas pequenas , os lipossomas tornam-se mais homogéneos no tamanho, como se mostra nas figuras 3 e 4 tendo os maiores diâmetros inferiores a 0,35 microns. A figura 5 ê uma ampliação dos lipossomas das figuras 3 e 4 mostrando que mantêm as suas características de lipossomas e que são liposso^ mas mui ti-1 ame 1 ares de estrutura clássica apos a formação de partículas pequenas do aerossol.

-20/

A enviroxima e um imidazol substituído com uma potência excepcional contra todos os rinovfrus ensaiados: as concentrações inibidoras variam geralmente entre 0,3 e 0,9 pg/ml. As concentr^ ções máximas toleradas pelas células em cultura variaram entre 4 e 100 jjg/ml, originando proporções terapêuticas que variaram entre 50 e 100. A enviroxima é também activa contra os poliovírus, ecovírus e cox-saquievírus. 0 medicamento foi descoberto por Eli LiJ_ ly and Company.

I A enviroxima é apenas levemente solúvel em água (1-2 jug/ml) o que tem levantado um problema na utilização medicinal do medicamento. Esta dificuldade e ultrapassada preparando lipossomas de enviroxima (1-8 mg/ml) e fosfatidi1colina (15 mg/ml) em partículas suficientemente pequenas para serem administradas como um aerossol de partículas pequenas. Com esta metodologia, podem administrar-se doses compreendidas entre 6 e 12 mg/h para o aparelho respiratori o.

Os períodos de tratamento compreendidos entre 1 e 4 horas

I por dia são satisfatórios. A dose diária é apresentada no quadro para um adulto de tamanho médio (70 Kg):

Quadro 2

Duração________Mg/Hr__Dose total (mg)_____________Mg/Kg/Dia

hr	6	6	0,08
hr	12	12	0,16
hr	6	24	0,16
hr	12	24	0,32
hr	6	24	0,32
hr	12	48	0,64

-21 -f quadro 2 revela que todas as doses propostas são substancialmente inferiores a Img/Kg/dia. Os estudos de tolerância em animais, resumidos a seguir, mostram falta de efeitos inconve nientes para doses muito maiores do que as propostas anteriormente .

Estudos de tolerância em animais: farmacocinética

Efeitos in vitro no músculo. 0 músculo de muitos órgãos de ratos foi ensaiado coro enviroxima em concentração compreendida

-5 -8 ~ entre 10 M e 10 M. Nao activou agentes adrenergicos, histaminas prostagl andi na E₂ e um número de outros receptores biológicos. Hojj ve algum antagonismo não competitivo de curvas dose-resposta anãlo go ou do cloreto de potássio.

Efeitos nos electrolis. Para doses de 25 mg/Kg e superlio res houve oligúria significativa nos ratos. A oligúria foi associada aos aumentos de potássio, no soro, mas não aos de sodio.

Efeitos nos ratos. As doses de 50 mg/Kg administradas oralmente não conduzem a efeitos detectãveis. Para doses mais elevadas, 100-400 mg/Kg, houve um aumento da fraqueza das pernas, descrescimento na actividade motora e perturbações na maneira de andar. 0 efeito de doses elevadas foi rápido ocorrendo apôs poucos minutos. Realizaram-se vários outros ensaios com doses orais e, de uma maneira geral, as doses ate 100 mg/Kg foram bem toleradas. De interesse particular foi a verificação de que não havia nenhuma actiyidade imuno-supressiya de enviroxima na resposta de anticorpos primários em ratos.

Efeitos nos gatos e nos cães. Não houve efeitos cardio-22?

.

Λ Τ vasculares significativos nos gatos. Houve uma diminuição gradjj al da pressão sanguínea diastolica nos cães apos a administração de doses de 1 ,3 e 10 mg/Kg I. V. As concentrações no plasma de enviroxima foram 3,0, 8,9 e 19 pg/ml após a administração IV das doses. 0 bioensaio (antivírico) e o ensaio bioquímico do sangue conduziu a resultados semelhantes.

Os estudos anteriores e outros são aceitáveis como prova de protecção adequada para utilização humana e estudos humanos.

EXEMPLO 2

Neste aspecto da invenção e exemplo a ribavirina é o medicamento na preparação 1ipossoma-medicamento, que e preparada pelo método II.

Para lipossomas contendo ribavirina adicionou-se 450 mg de fosfatidi1colina de ovo a um frasco de fundo redondo de 500 ml e eliminou-se o dissolvente orgânico em vácuo. Adicionou-se riba virina (600 ml) em 30 ml de um meio aquoso (solução salina tampão estéril de fosfato) e preparou-se o lipossoma por agitação mecânica. Os 1ipossomas-ribaviri na eram outra vez, heterogéneos no tamanho mas a passagem através de um nebulizador Collison reduziu os 1ipossomas-ríbaviri na aos tamanhos descritos no exemplo 1.

EXEMPLO 3

Neste aspecto da invenção e exemplo, utilizou-se o método III, o metotrexato foi o medicamento utilizado na preparação lipos_ soma-medicamento. (Hashimoto, K., Loadex, J. E. e Kinsky, S. C. Synthesis and Characterization of Methotrexate-dimyristoylphospha^

tidylathanolamíne Derivates and the Glycerophosphorylethanolamine Analogs. Biochim. Biophys. Acta, 816, 1985 , p. 163-168; Hashimjo to, K., Loader, J. E., Inhibition of Cell Proliferation and Dihydrofolate Reductase by Liposomes Containing Methotrexate-dimyristoylphosphatidylethanolamine Derivates and by the Glycerophosphor ylethanolamine Analogs. Biochim. Piophys. Acta, 816, 1985; p. 169-1 78) .

Dissolveu-se o metotrexato (40 jumole) em 0,8 rol de uma ₍ mistura de clorofórmio e metanol 1:1 em volume ( a seguir abrevia, do para C/M) contendo trietilamina (240 jjmole). Adicona-se a seguir a esta solução, sequencialmente, enquanto se agitava: dirimis toílo-fosfatidiletanolamina (120 jumole) dissolyido em 5,6 ml de C/M; N-hi droxi succi ni mi da (200 jumole) dissolvido em 0,8 ml de C/M;

N,N¹-diciclohexi1carbodi-imida (200 pmole) dissolvido em 0,8 ml de C/M. ApÕs incubação durante 3 horas à temperatura ambiente, tratou-se a mistura reaccional até a secagem, por evaporação rotativa a pressão reduzida a 40°C, e dissolveu-se novamente o resíduo em 2 ml de C/M.

I

A separação por cromatoggafia dos derivados de metatrexato de fosfatidi1etanolamina foi acompanhada por distribuição de 250 jul desta fracção por cada um dos 8 pratos analíticos de espe£ sura fina (gel de sílica 60F-254, 0,25 mm, Brinkmann Instruments, Inc., Westbury, New York). Estes pratos foram tratados num siste_ ma de solvente de clorofÓrmio/metanol/agua (65:30:5 em yol.). ApÓs o tratamento, foram yisíyeis quatro bandas amarelas (I-IV) que tam bém deram teste positivo coro fosfato quando pulverizadas com um reagente molibdato acido (Applied Science, Deerfield, Illinois) . Estas bandas tinham valores de R^ próximos de 0,18 (I), 0,28 (II),

-2.47^

0,39 (III) e 0,49 (IV) enquanto que o Rj- para a banda de metotrexato que não reagiu, que não manchou com fosfato, era de 0,06. A banda I que mostrou possuir uma actividade biológica total foi retirada dos pratos e fez-se uma suspensão em 5 ml de metanol . Após centrifugação (750 x g durante 10 minutos a 4°C) , recup£ rou-se a parte amarela sobrenadante e fez-se uma nova extracção das partículas de gel em sílica com mais 5 ml de metanol. Adici£ naram-se a seguir 10 ml de clorofórmio aos sobrenadantes combina* dos e esta solução foi depositada num leito de 50 mm de altura de Unisil (Clarkson Chemical Co., Wi 11 i amsport, Pennsyl vani a) no furi do de uma coluna de 1 x 20 cm. 0 leito de Unisil foi lavado previaroente com clorofórmio e depois com C/M. 0 composto amarelo (designado por MTX-CMPE) foi depois elutriado pela passagem de 20 ml de C/M. A substância elutriada foi tratada até a secagem e dissolveu-se novamente o resíduo em 5 ml de C/M e armazenou-se a -20°C.

Os lipossomas foram gerados no seio de filmes de lípidos

I anidros contendo dioleílo-fosfatidilcolina (DOPC), colesterol e fosfato de dicetilo, numa proporção molar de 2:1,5:0,2 respectiva. mente. 0 filme foi também complementado com 2,5 moles % de MTX-DMPE I com base no teor de fosfato. Fez-se uma dispersão dos filmes de lípidos por meio de agitação rotativa no seio de uma solução salina com o equilíbrio suficiente para se obter uma suspensão de lipossomas (DOPC) 10 mM. 0 MTX-DMPE I tinha uma propor ção de metotrexato-fosfato de 1. Por consequência a densidade de metotrexato final nos lipossomas 'preparados com o derivado foi de

2,5 rool % de metotrexato.

-,25-

J

Apresentam-se no Quadro 3 outros exemplos, numerados de 4 a 23 onde se representa a metodologia preferida para a preparação de lipossomas, a concentração do medicamento no reservatório do aerossol e a quantidade de medicamento libertada do aerossol num período específico de tempo. As doses libertadas aproximam-se de doses únicas de medicamento aos quais podem ser administrados por via oral ou parenteral.

Quadro 3

Dose libertada sugerida de compostos, contendo lipossomas, representativos quando libertados por meio de um aerossol de partí cuias pequenas

			Concentração	Duração	Dose liber-
Exemplo	Composto Método¹	no recipiente	do	tada estima
N9			(mg/mL)	tratameji	da²
				to	(mg)
4	Amantadi na	1	4	12 horas	172
5	Di gtoxi na	1	1	20 mi n	1
6	Isossorbeto	1	0,5	3 horas	5
7	Estrogenos	1	0,8	8 horas	23
8	Di abi nese	1	6	10 horas	216
9	Anfotericina B	1	20	30 min	36
10	Predni sona	1	_c 8	60 mi n	²⁹ 6
11	Interferon	1 5x10 unidades/mL	20 mi n	6x10°
12	Isoproterenol	2	2	20 mi n	2
13	Apresoli na	2	15	20 mi n	18
14	Gentami ci na	2	100	30 mi n	180
15	Propanolol	2	3	20 mi n	4
16	Dopami na	2	150	20 mi n	180
17	Clorpromazi na	2	60	20 mi n	72
18	Di feni drami na	2	' 15	20 mi n	18
19	Sulfato de mor. fi na	2	10	20 mi n	12
20	Demerol	2	75	20 mi n	90
21	Aci clovi r	2	20	12 horas	864
22	Amantadi na	2	20	12 horas	864
23	Vacina de gri pe	3	40 jig HA/mL	. 20 min	48 jjg HA

1. Métodos: 1) Utiliza-se o método I para compostos insolúveis em água;

2) Utiliza-se o método II para compostos solúveis na agua;

3) Utiliza-se o método III para ligação coyalente dos compostos à superfície da dupla camada de lípidos.

2. Dose estimada baseada em 60% de eficiência máxima de formação de aerossol e num yolume delOl/minuto para um adulto de 70 Kg e com base em dosagens administradas correntemente.

As preparações com mais de um medicamento podem também ser combinadas com aerossois de lipossomas de partículas pequenas.

tratamento com o aerossol de partículas pequenas com pre paração de 1ipossoma-medicamento conduz vantajosamente a deposição do medicamento e dos lipossomas através do aparelho respiratório em concentrações substanciais que podem tratar infecções localizadas no aparelho respiratório. No caso de viroses a infecção esta localizada nas células epiteliais respiratórias. No caso de bacté rias ou de fungos, as doenças estarão contidas nos exsudados inf1ά matorios, nos alvéolos e noutros espaços anatómicos do pulmão e entre tecidos do pulmão em vários locais. 0 preparado lipossoma-medicamento sob a forma de aerossol será depositado nestes locais.

No caso dos tumores as massas tumorais serão os do pulmão de primeiro ou segundo grau, locais de deposição dos medicamentos de lipossomas anti-cancerígenos sob a forma de um aerossol.

No caso da asma, os agentes bronco-dilatadores de lipossoma em aerossol seriam depositados em toda a zona bronquica em ní-

ί veis controlados, durante períodos de tempo prolongados para proporcionar um efeito terapêutico Óptimo.

No caso de medicamentos eficazes em psiquiatria, hormonas ou agentes cardioacti vos a absorção sistémica a seguir ã adi mini s_ tração de medicamento-1ipossoma de aerossol poderia ocorrer a uma velocidade uniforme, sem picos elevados na concentração do plasma, evitando deste modo uma toxicidade potencial e um efeito terapêutico prolongado.

Os lipossomas de aerossol podem, isoladamente, substituir agentes tensioactivos naturais no pulmão em vitimas de afogamento, envenenamento por inalação química e em crianças prematuras deficientes em agentes tensioactivos.

A vacina da gripe ou outras vacinas podem administrar-se convenientemente em lipossomas de aerossol de partículas pequenas depositadas directamente nas células imuno-reacti vas do pulmão p<i ra provocar localmente respostas imunes de protecção. 0 anticorpo humoral, pode também, deste modo ser estimulado.

A incorporação de alguns agentes tóxicos em lipossomas tais como anfotericina B, sob a forma de aerossol, retarda a sua absorção pelas células do aparelho respiratório e reduz o efeito tóxico dos agentes tóxicos, sem reduzir o seu efeito terapêutico.

A incorporação de polipéptidos, oligonucleotidos, enzimas ou outros compostos que podiam ser destruídos ou inactivados por enzimas localizados, pode também ser protegida deste efeito quando os compostos são incorporados sob a forma de lipossomas de aerossol de partículas pequenas aumentando, assim, o seu efeito tera_

-28/

-Λ peuti co.

Deste modo, enquanto exemplos específicos de uma grande variedade de lipossomas de partículas pequenas e preparações 1ip0£ soma-medicamento tem sido dados com o propósito de divulgação, a presente invenção ê aplicável a todos os medicamentos ou preparações de medicamentos que possam ser incorporados sob a forma de aerossois de lipossomas de partículas pequenas para uma grande variedade de doenças. Tal como previamente se mencionou, a dose das preparações medicamento-1ipossoma de partículas pequenas varia tam bêm largamente dependendo do medicamento, da duração de tratamento e de factores análogos.

Por consequência, a presente invenção e bem sucedida e adaji tada para atingir os fins e realizar os objectivos e tem as vantagens e os aspectos descritos bem como outros inerentes. Enquanto as formas de realização preferidas, utilizações e tratamentos de várias doenças foram descritas com o propósito de divulgação, podem ser feitas variações, modificações e outras aplicações e tratji mentos de doenças sem se sair do âmbito e espírito da presente int* venção como se define nas reivindicações.

Claims

Reivindicações

1. - Aerossol aquoso em partículas contendo partículas de lipossoma, caracterizado por a maior parte das partículas de aerossol possuirem um diâmetro inferior a 5 microns e por o diâmetro médio da massa aerodinâmico variar entre cerca de 1 e 3 microns.
2, - Aerossol aquoso em partículas contendo partículas de lipossoma combinadas e um ou mais medicamentos, caracterizado por a maior parte c.õ.s partículas de aerossol serem inferiores a 5 microns de diâmetro e por possuirem um diâmetro médio de massa aerodinâmica variando entre 1 e 3 microns. ^v
3. - Método de tratamento de um doente, caracterizado por compreender a introdução no tracto respiratório do doente de um aerossol em partículas de acordo com a reivindicação 1 em uma quantidade efectiva compreendida entre 0,14mg/hora e 5U0mg/hora.
4. - Método para a formação de um aerossol em partículas de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender a nebulização de partículas heterogéneas de lipossomas com ar através de nebulizador eficaz para produzir as partículas de aerossol.
5. - Método para a formação de um aerossol aquoso em partículas de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por compreender a nebulização de uma composição lipossoma-medicamento heterogénea com ar em um nebulizador eficaz para produzir as partículas de aerossol.
6. - Aerossol aquoso em partículas de acordo com a reivindica ção 2, caracterizado por o medicamento ser seleccionado de entre o grupo que consiste em medicamentos anti-asma, anti-arrítmicos, anti-fungicos, anti-hipertensivos, anti-câncer, antibióticos, anti-diabetes, anti-histaminas, anti-parasíticos, anti-virais, glicosidos cardíacos, hormonas, imunoterapias, anti-hipotensivos, esteroi des, sedativos e analgésicos, tranquilizantes, vacinas e bloqueadores de receptores de superfície da célula.
7. - Embalagem de aerossol, caracterizada por possuir um reservatório que contém partículas de lipossoma de acordo com a reivindicação 1 e por possuir meios de formação de aerossol que incluem uma fonte de ar em comunicação de fluido com o reservatório eficaz para produzir o aerossol em partículas.
8. - Embalagem de aerossol, caracterizada por possuir um reservatório que contém partículas de lipossoma combinadas e um ou mais medicamentos de acordo com a reivindicação 2 e por possuir meios de formação de aerossol que incluem uma fonte de ar em comunicação de fluido com o reservatório eficaz para produzir o aerossol em partículas.

* * ·

-31'
9. - Método para a produção de uma composição de aerossol em partículas de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender a colocação das partículas heterogéneas de lipossomas num reservatório de aerossol e por se submeter as partículas heterogéneas de lipossomas a atomização com ar.
10. - Método para a produção de uma composição de aerossol em partículas de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por compreender a colocação das partículas heterogéneas de lipossomas contendo um ou mais medicamentos num reservatório de aerossol e por se submeter as partículas heterogéneas contendo um ou mais medicamentos a atomização com ar.
11. - Método de tratamento de um paciente, caracterizado pelo facto de se introduzir no tracto respiratório do citado paciente um aerossol em partículas de acordo com a reivindicação 2 em uma quantidade efectiva compreendida entre 0,14mg/hora e 540mg/hora.
12. - Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo facto de se escolher o medicamento no grupo que consiste em medicamentos anti-asma,anti-arrítmicos, anti-fungicos, anti-hipertensivos, anti-câncer, antibióticos, anti-diabetes, anti-histaminas, anti-parasíticos, anti-virais, glicosidos cardíacos, hormonas, imunoterapias, anti-hipotensivos, esteroides, sedativos e analgési

12.- Método para a produção de uma composição de aerossol de acordo com as reivindicações 3 ou 4 caracterizado por compreender a colocação das partículas heterogéneas de lipossomas contendo um ou mais medicamentos num reservatório de aerossol e por se submeter as partículas heterogéneas contendo um ou mais medicamentos a atomização.
13,- Aerossol aquoso em partículas, caracterizado por conter lipossoma e um ou mais medicamentos que interactuaram com a membrana do lipossoma, tendo a maior parte das partículas de aerossol um diâmetro inferior a 5 jun, e tendo um diâmetro médio da massa aerodinâmica compreendido entre cerca de 1 e cerca de 3 Jim, sendo as partículas do fármaco de lipossoma substancialmente homogéneas quanto às dimensões e tendo um diâmetro menor do que 1 um.
14.- Aerossol aquoso em partículas, caracerizado por conter um ou mais lipossomas tendo compartimentos múltiplos aquosos e um ou mais medicamentos que interactuaram com as membranas dos lipossomas, tendo a maior parte das partículas de aerossol um diâmetro menor do que 5 ® tendo um diâmetro médio da massa aerodinâmica compreendido entre cerca de 1 e cerca de 3jam, sendo as partículas do fármaco de lipossoma substancialmente homogéneas quanto às dimensões e tendo um diâmetro menor do que 1 um.

32Α
15·- Processo para a produção de um aerossol aquoso de partículas de fármaco de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo facto de se neutralizar o lipossoma e um ou mais medicamentos com a membrana do limpossoma de dimensões heterogéneas no seio de um meio aquoso com ar ou ar enriquecido com oxigénio num nebulizador eficaz para produzir as partículas homogéneas de aerossol sem perda do medicamento e da sua actividade.
16.- Processo para produzir um aerossol aquoso de partículas de fármaco de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo facto de se nebulizar o lipossoma e um ou mais dos medicamentos que interactuaram com a membrana do lipossoma com dimensões heterogéneas no seio de um meio aquoso com ar ou com ar enriquecido com oxigénio num nebulizador eficaz para produzir partículas de aerossol com dimensões tais que produzam lipossomas de diâmetro menor e não tenham perda de medicamento nem a sua actividade.
17·- Embalagem de aerossol, caracterizada por possuir um reservatório que contém o lipossoma e partículas de medicamento de acordo com a reivindicação 13 no seio de um meio aquoso e por incluir meios de produção de aerossol incluindo uma fonte de ar ou de ar enriquecido com oxigénio em comunicação de fluido com o referido reservatório eficaz para produzir

32Β as partículas de aerossol.
18.- Embalagem de aerossol, caracterizada por possuir um reservatório que contém o lipossoma e partículas de medicamento de acordo com a reivindicação 14 no seio de um meio aquoso e por possuir meios de produção de aerossol incluindo uma fonte de ar ou de ar enriquecido com oxigénio em comunicação de fluido com o reservatório eficaz para produzir as partículas de aerossol.
19·- Processo para a produção de partículas de aerossol de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo facto de se colocar partículas heterogéneas dos lipossomas e do medicamento no seio de um meio aquoso num reservatório de aerossol e de se converter em aerossol as partículas heterogéneas de lipossomas e de medicamento com ar ou ar enriquecido com oxigénio de uma maneira eficaz para produzir as partículas de aerossol.
20.- Processo para a produção de partículas de aerossol de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo facto de se colocar as partículas de medicamento de lipossoma com dimensões heterogéneas no seio de um meio aquoso num reservatório de aerossol e de se converter as partículas heterogéneas de fármaco de lipossoma com ar ou com ar enriquecido com oxigénio de uma maneira eficaz para produzir as partículas de aerossol.