PT821690E

PT821690E - Análogos de nucleotídeos para tratamento de infeções virais

Info

Publication number: PT821690E
Application number: PT96909007T
Authority: PT
Inventors: Antonin Holy; Erik Desire Alice De Clercq
Original assignee: Ustav Organicke Chemie A Biochemie Akademie Ved Ceske Republiky; Rega Stichting
Priority date: 1995-04-21
Filing date: 1996-04-19
Publication date: 2012-09-17
Also published as: DK0821690T3; US5977061A; JP2007126473A; JPH11511114A; EP0821690A1; EP0821690B1; WO1996033200A1; AU5268696A; JP4233111B2; ES2392840T3

Description

1

DESCRIÇÃO "ANÁLOGOS DE NUCLEOTÍDEOS PARA TRATAMENTO DE INFEÇÕES VIRAIS"

Este pedido refere-se a análogos de nucleotídeo e à sua utilização no tratamento de infeções virais.

Análogos de nucleotídeo contendo grupos fosfonato são revelados, por exemplo, nas Patentes U.S. 4 659 825, 4 808 716, 4 724 233, 5 142 051, 5 302 585, 5 208 221, 5 352 786, 5 356 886, nos números de publicação EP 269 947, 481 214, 630 381, 369 409, 454 427, 618 214 e 398 231 e nos documentos WO 95/07920 e WO 94/03467. Os ensinamentos destas patentes incluem compostos nos quais um grupo fosfonato está ligado a uma base purina definida, geralmente na posição 9 da base, por um grupo 2-(metoxi)propilo, um grupo 2-(metoxi)etilo, um grupo 2-metoxi-3-hidroxipropilo, ou um grupo 2-metoxi-3-fluoropropilo, conhecidos, respetivamente, como compostos PMP, PME, HPMP e FPMP. As bases purina podem incluir os análogos aza e deaza dos mesmos. Bases purina típicas são adenina, 2,β-diaminopurina e guanina. A Patente U.S. 5 142 051 revela um composto (RS) HPMP no qual a base purina é N6-dimetiladenin-9-ilo. O documento EP 454 427 inclui revelação na qual as bases purina dos compostos FPMP são substituídas por amino substituído (alquilamino revelado). O documento EP 468 119 descreve certos agentes antivirais metoxifosfonato nos quais uma base purina heterocíclica é substituída na posição 6 com "NHR" e na posição 2 com H ou NH2, mas R é indefinido. O documento EP 481 214 revela certos compostos antivirais metoxifosfonato como agentes antivirais para virus de ARN ou ADN onde a base purina é independentemente substituída na sua posição 2 ou 6 com NHR5 ou N(R5)2, em que 2 R5 é C1-C20 alquilo, arilo ou aril-alquilo que podem ser substituídos ou não substituídos por substituintes independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidroxi, oxigénio, nitrogénio ou halogéneo. 0 documento WO 94/03467 revela compostos PMP para utilização em tratar retrovírus nos quais a base heterocí clica é uma purina ou seus análogos na qual a posição 2 e/ou 6 e/ou 8 é substituída por, entre outras coisas, alquilamino, aralquilamino, dialquilamino, heteroalquilamino, alquiloxiamino ou amino heterocíclico, em que o alquilo é um grupo hidrocarbilo saturado de cadeia ramificada ou linear contendo C1-C6, tal como metilo, etilo, 2-propilo, n-pentilo ou neopentilo; alquiloxi é 0-alquilo; aralquilo ou heteroaralquilo é -R-Ar onde -R- é o alquileno correspondente do alquilo (-R) e Ar é um grupo aromático substituído (com hidroxilo, halo, amino, sulfonilo, carbonilo ou C1-C3 alquilo substituído com hidroxilo, halo, amino, sulfonilo, ou carbonilo) ou não substituído tendo 6-10C e opcionalmente um heteroátomo selecionado do oxigénio ou nitrogénio, por exemplo, fenilo, naftilo, quinolilo ou benzilo; aralquilamino e heteroaralquilamino são definidos como grupos da fórmula -N (Z) 2 em que Z é independentemente H ou -R-Ar (mas pelo menos 1 Z é -R-Ar) ; amino heterocíclico é um anel heterocíclico saturado ou insaturado contendo pelo menos 1 átomo de N (normalmente 1) e opcionalmente além disso pelo menos 1 outro heteroátomo (exemplos sendo pirrolidina, morfolina ou piperidina). 0 documento WO 94/03467 revela que as estruturas cíclicas contêm de 3 a 6 átomos de anel e são monocíclicas, e em algumas modalidades os substituintes dos grupos β-amino purina são unidos com purina N1 para formar um N-heterociclo fundido com a fração purinilo, como em N1-N6-etenoadenina. O documento WO 94/03467 revela um número de compostos específicos N6-substituídos (R)-PMPDAP, incluindo 9—(R)—(2— 3 fosfonometoxipropil)-2-amino-6-ciclohexilaminopurina e 9-(R)-(2-fosfonometoxipropil)-2-amino-6-ciclopropilaminopurina. 0 documento WO 95/07920 revela vários compostos antivirais metoxifosfonato tendo bases heterociclicas protegidas nas quais os grupos amino são mono substituídos com C1-C20 alquilo, em que o alquilo inclui cadeia linear, ramificada ou resíduos cíclicos, incluindo metilo, etilo, propilo, ciclopropilo, isopropilo, n-, sec-, iso-, e tert-butilo, ciclobutilo e "N-, S- ou O-heterocarbonilo cíclico" (tal como piperidinilo ou morfolino). O documento EP 434 450 revela certos análogos de nucleosídeos não fosfonilo contendo 2,β-diaminopurina em que a posição 6 da base 2,β-diaminopurinilo é substituída com ciclopropilamino ou N-ciclopropil-N-metilamino. O documento EP 421 819 revela um análogo de nucleosídeo semelhante no qual a substituição é ciclopropilmetilamino. Daluge et al. (34a Conferência Interciência sobre Agentes Antimicrobianos e Quimioterapêutica, 4-7 de Outubro de 1994) revela derivados carbovir nos quais a posição 6 da purina é substituída com ciclopropilamino, N-ciclopropil-N-metilamino ou N-aziridinilo.

Cihlar et al., "Antimicrobial Agents and Chemotherapy" 39(1):117-124 (1995) revela N6-aminohexil-PME-DAP.

Holy et al., "ACS symposium series" 401:57-71 (1989) e Holy, "Kemija u industriji" 38(10):457-462 (1989) descrevem a atividade antiviral de certos análogos de nucleotídeo N6-substituído.

Sumário da invenção É um objeto desta invenção providenciar compostos antivirais tendo um índice de seletividade melhorado, isto é, que sejam menos tóxicos mas mais eficazes do que os análogos de nucleotídeo conhecidos até agora. É um outro objeto desta invenção providenciar compostos úteis no tratamento de vírus de ADN. 4

Os objetos desta invenção são conseguidos providenciando compostos tendo a estrutura (2)

4R

Z

z

*/ z

N

O (Y)2

O—E (2) em que Y é independentemente -OH, -0R3, -OCH (R16) OC (0) R3, um monofosfato, um difosfato, um amidato de aminoácido, um amidato de polipeptideo, -NHR3, ou -N(R3)2; R3 é independentemente C1-C15 alquilo, arilo, C2-Cis alcenilo, C2-C15 alcinilo, alcarilo, alcinilarilo ou alcenilarilo; sendo ditos grupos não substituídos ou substituídos por C1-C6 alcoxi, C1-C6 carboxilalquiléster, halo, carboxi, hidroxilo, ciano, nitro, N-morfolino, ou amino; e/ou ditos grupos tendo -CH2- substituído por NH, S, ou 0; R2 e R2, são independentemente halo, NH2, X ou H, mas pelo menos um de R2 e R2’ é X; R16 é H ou R3; e X é - (CH2) m(0) n (CH2) mN (R10) 2 em que m é 0-2, n é 0-1, e R10 é independentemente H; ou - ciclopropilo, C2-C15 alcenilo, C2-Ci5 alcinilo, ou C1-C6-alquilamino-Ci-C6 alquilo; ou - C2-Ci5 alquilo, C3-C15 alcenilo, C3-C15 alcinilo, Ci-C6-alquilamino- C1-C6 alquilo, C6-C15 heteroalquilo, ou C3-C6 heterocicloalquilo, em que o metileno na fração alquilo não adjacente a N6 foi substituído por -0-; opcionalmente um dos grupos R10 antecedentes é substituído 5 com 1 a 3 halo, CN ou N3 ; mas pelo menos um grupo R10 não é H; e Z é N ou CH, desde que o núcleo heterocíclico varie da purina por não mais de um Z; E é -(CH2)2-, -CH(CH3)CH2-, -CH(CH2F)CH2-,-CH(CH2OH)CH2-, -CH(CH=CH2)CH2-, -CH(C=CH)CH2-, -CH(CH2N3)CH2-, CH(R6)OCH(R6')-, -CH(R9)CH20- ou -CH(R8)0-, em que a ligação do lado direito está ligada à posição 9 da purina, monoazapurina ou monodeazapurina heterociclo e em que Y e o grupo hidroxilo de -CH (CH2OH) CH2-, ou um grupo hidroxilo presente em R6, R8, ou R9 são unidos para formar um anel com 6 membros; R6 e R6, são independentemente H, Ci-C6 alquilo, Ci-C6 hidroxialquilo, ou C2-C7 alcanoilo; R8 é H, Ci-C6 alquilo, C2-C6 hidroxialquilo ou Ci-C6 haloalquilo; e R9 é H, hidroximetilo ou aciloximetilo; e os sais terapeuticamente aceitáveis dos mesmos; com a ressalva de que, quando E é -CH(CH3)CH2- e R2 é NH2, então X não é ciclopropilamino.

Num grupo preferido de compostos, pelo menos um Y é OR3 e R3 é arilo, orto-(Ci-C6 alcoxiarilo) , -C6H4C (0) 0 (Ci-C6 alquilo), ou -0CH20C(0) (Ci-Cê alquilo ou arilo) . A invenção cobre ambos compostos tendo a configuração (R) ou a configuração (S) num átomo de carbono E quiral. R10 é preferencialmente C3-Cs alcinilo ou alcenilo que é não substituído ou é substituído com 1 a 3 halo, CN ou N3. Grupos específicos R10 são -CH2CH=CH2, -CH (CH3) CH=CH2, -CH2C (CH3) =CH2, e -CH2CH=CH(CH3) .

Os compostos de acordo com a presente invenção são particularmente úteis no tratamento de infeções virais, tais como HSV-1, HSV-2, CMV, VZV, vírus vaccinia, ou HHV-6.

Foi observado, de forma inesperada e surpreendente, que a substituição em N6 por adenina ou diaminopurina resulta na aquisição de potência extremamente elevada 6 contra vírus de ADN por parte dos compostos definidos. Tais compostos foram considerados, de outra maneira, ter pouca ou nenhuma atividade contra vírus de ADN. Além disso, surpreendentemente o enantiómero (S) enriquecido ou puro quiramente é ativo antiviralmente. Até agora, apenas o enantiómero (R) foi notavelmente ativo antiviralmente, e apenas contra retrovírus.

Descrição detalhada da invenção

Como utilizado aqui, e a menos que modificado pelo contexto imediato: 1. Alquilo significa C1-C15 hidrocarbonetos ramificados, normais ou cíclicos saturados e inclui metilo, etilo, propilo, ciclopropilo, ciclobutilo, isopropilo, n-, sec-, iso- e tert-butilo, pentilo, isopentilo, 1-metilbutilo, 1-etilpropilo, neopentilo, e t-pentilo. 2. Alcenilo significa C2-C15 hidrocarbonetos ramificados, normais ou cíclicos contendo pelo menos 1 (geralmente 1-3) ligações duplas orientadas cis ou trans conjugadas ou não conjugadas, incluindo alilo, etenilo, propenilo, isopropenilo, 1-, 2- e 3-butenilo, 1- e 2-isobutenilo e afins. 3. Alcinilo significa C2-Ci5 hidrocarboneto ramificado, normal, ou cíclico que transporta pelo menos 1 (geralmente 1-3) ligação tripla, por exemplo, 2-propinilo. 4. Arilo ou heteroarilo significa uma estrutura em anel policíclica fundida ou cíclica ressonante contendo pelo menos um anel com 3-6 membros contendo apenas átomos de anel de carbono ou de carbono e um ou dois heteroátomos N-, S- ou 0-, incluindo, por exemplo, fenilo, 2- e 4-imidazolilo, 2-, 4- e 5-oxazolilo, 2-, 3-, 4- ou 5-isoxazolilo, 2-, 3-, 4- ou 5-furazanilo, 2-, 4- e 5-tiazolilo, 3-, 4- e 5-isotiazolilo, 3- e 4-pirazolilo, 2-, 3- e 4-piridinilo ou 2-, 4- e 5-pirimidinilo, 1-, 2-, 3- ou 4- azetidina, 2-, 3-, 4-, ou 5-tiofeno, 2-, 3-, 4-, ou 5-furanilo, 1-, 2-, 3-, 4-, de 5-pirrolilo e análogos dos 4- 7 mesmos nos quais uma ligação dupla foi alterada, por exemplo, 2H-pirrolo, ou foi saturada, por exemplo, 2-pirrolinilo ou 3-pirazolinilo. Em geral, enquanto os precedentes são exemplos, qualquer átomo de anel sem ser o oxigénio ou nitrogénio serve como o local de ligação para o grupo amino N6, apesar de um anel nitrogénio também ser diretamente ligado ao carbono 6 da purina em circunstâncias quando dois R10 são unidos. 5. Alcarilo, alcenilarilo, alcinilarilo, arilalquilo, arilalcinilo, de aralcenilo significa alquilo, alcinilo ou alcenilo substituído com pelo menos 1 (geralmente 1-3) grupos arilo, ou arilo substituído com pelo menos 1 (geralmente 1-3) grupos alquilo, alcinilo ou alcenilo. Quando estes são um grupo R10 estão ligados através de um alifático (saturado ou insaturado) de carbono arilo a N6. 6. Heterocicloalquilo significa qualquer grupo alquilo inteiramente saturado formando um anel tendo C3-C6 no qual 1 a 3 grupos CH2 foram substituídos com NH, 0 ou S. Normalmente, apenas 1 ou 2 grupos metileno são substituídos por um heteroátomo. Heterocicloalquilo inclui os correspondentes saturados dos grupos heteroarilo definidos anteriormente, e inclui, por exemplo, piperazinilo, morfolino, aziridinilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, piperidinilo, tetrahidrofuranilo. Como no caso dos heterociclos insaturados descritos anteriormente, qualquer átomo de anel sem ser de oxigénio ou nitrogénio serve como o local de ligação para o grupo amino N6, apesar de um anel nitrogénio também estar diretamente ligado ao carbono 6 da purina em circunstâncias quando dois R10 são unidos. R2 e R2’ são normalmente X, H ou NH2, mas pelo menos um de R2’ de R2 é X. Em algumas modalidades, ambos R2 e R2 são X, que depois podem ser o mesmo ou diferente, mas em geral apenas 1 R2 ou R2’ é X. Modalidades incluem as seguintes substituições R2 e R2', respetivamente: Η, X; NH2, X; X, X; X, Η; X, ΝΗ2. Normalmente, X é encontrado na posição 6 e a posição 2 é substituída com NH2 ou HR2 ou R2' também são halo tal como cloro ou bromo, ao passo que em algumas modalidades os outros R2 ou R2’ é X. Os compostos halo são particularmente úteis como intermediários. R2 geralmente é H onde os compostos incluídos são para ser empregues para o tratamento ou profilaxia de infeções por vírus de ADN, mas compostos nos quais R2 é NH2 são satisfatórios. R3 não é uma funcionalidade crítica e pode variar amplamente. R3 inclui, por exemplo, C3-C6 arilo (incluindo fenilo, 2- e 3-pirrolilo, 2- e 3-tienilo, 2- e 4-imidazolilo, 2-, 4- e 5-oxazolilo, 3- e 4-isoxazolilo, 2-, 4- e 5-tiazolilo, 3-, 4-e 5-isotiazolilo, 3- e 4-piazolilo, 1-, 2-, 3- e 4-piridinilo, e 1-, 2-, 4- e 5-pirimidinilo) , C3-C6 arilo substituído com halo, Ci-Cê alcoxi, CN, N02, OH, carboxi, carboxiéster, C1-C12 haloalquilo (1-6 átomos de halogéneo) , C2-Ci2 alcenilo ou C2-Ci2 alcinilo [incluindo 2-, 3- e 4- alcoxifenilo (Ci-Ci2 alquilo), 2-, 3- e 4-metoxifenilo, 2-, 3- e 4-etoxif enilo, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- e 3,5- dietoxifenilo, 2- e 3-carboetoxi-4-hidroxifenilo, 2- e 3-etoxi-4-hidroxifenilo, 2- e 3-etoxi-5-hidroxifenilo, 2- e 3-etoxi-6-hidroxifenilo, 2-, 3- e 4-0-acetilfenilo, 2-, 3- e 4-dimetilaminofenilo, 2-, 3- e 4-halofenilo (incluindo 2-, 3- e 4-fluorofenilo e 2-, 3- e 4-clorofenilo], 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- e 3,5-dimetilfenilo, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2.6- , 3,4- e 3,5-biscarboxietilfenilo, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2.6- , 3,4- e 3,5-dimetoxifenilo, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3.4- e 3,5-dihalofenilo (incluindo 2,4-difluorofenilo e 3.5- difluorofenilo), 2-, 3- e 4-haloalquilfenilo (1 a 5 átomos de halogéneo, Ci-Ci2 alquilo incluindo 4- trifluorometilfenilo) , 2-, 3- e 4-cianofenilo, 2-, 3- e 4-nitrofenilo, 2-, 3- e 4-haloalquilbenzilo (1 a 5 átomos de halogéneo, Ci-Ci2 alquilo incluindo 4-trifluorometilbenzilo e 2-, 3- e 4-triclorometilfenilo e 2-, 3- e 4- 4-N-metilpiperidinilo triclorometilfenilo), 4-N-metilpiperidinilo, 3-N- 9 metilpiperidinilo, 1-etilpiperazinilo, benzilo, -C6H4-C(0)-C alquilo C1-C5, (C1-C4 alquilo, incluindo 2-, 3- e 4- etilsalicilfenilo), 2-,3- e 4-acetilfenilo, 1,8- dihidioxinaf t ilo (-O-Ci0H6-OH) e ariloxietilo [C6-C9 arilo (incluindo fenoxietilo)], 2,2'-dihidroxibifenilo, alcoxietilo [Ci-C6 alquilo incluindo -CH2-CH2-0-CH3 (2-metoxietilo)], alquilo substituído por OH ou por 1 a 3 átomos de halo (incluindo -CH3, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, -CH2CH3, -(CH2)2CH3, -(CH2)3CH3, -(CH2)4CH3, -(CH2)5CH3, -ch2ch2f, - CH2CH2C1, -CH2CF3, e -CH2CC13), 2-, 3- e 4-N,N- dialquilaminof enilo, -CgH4CH2-N (CH3) 2,

\

O

-Ν-2-propilmorfolino, trimetoxibenzilo, trietoxibenzilo, 2-alquilpidinilo (Ci_4 alquilo) ,

pirrolilo, -CH2-tienilo, -CH2-imidazolilo, -CH2-oxazolilo, -CH2-isoxazolilo, -CH2-tiazolilo, -CH2-isotiazolilo, -CH2-pirazolilo, -CH2-piridinilo e -CH2-pirimidinilo) substituído na fração arilo por 3 a 5 átomos de halogéneo ou 1 a 2 átomos ou grupos selecionados de halogéneo, Ci-Ci2 alcoxi (incluindo metoxi e etoxi), ciano, nitro, OH, Ci-Ci2 haloalquilo (1 a 6 átomos de halogéneo; incluindo -CH2-CC13), Ci-Ci2 alquilo (incluindo metilo e etilo) , C2-Ci2 alcenilo ou C2-Ci2 alcinilo, e outros compostos expostos no Quadro la a seguir. R6 e R6 geralmente são H ou metilo. Normalmente, R6 é H ou metilo enquanto R6 é H. R8 e R9 tipicamente são H, metilo ou hidroximetilo. Grupos R10 são uma funcionalidade 10 importante. São responsáveis pelo desenvolvimento inesperado de atividade de vírus anti-ADN nas séries PMP. Um ou mais destes grupos é outro sem ser H.

Tipicamente, os grupos R10 sao relativamente pequenos, na ordem dos 1 a 6 átomos de carbono e 0 a 1 N e opcionalmente um átomo S ou 0 em total para cada R10. Quando ambos R10 não são hidrogénio, um R10 é opcionalmente mais pequeno do que o outro, por exemplo, um pode conter 2-6 átomos de carbono, e o outro apenas 1.

Normalmente, os heteroátomos presentes em R10 não estão localizados terminalmente e são substituídos por CH2 ou CH. Nalgumas modalidades o heteroátomo é doado pelo grupo 6-amino da base heterocíclica, como acontece quando dois grupos R10 são ciclizados para formar um anel. Em tais casos, o N é ligado ao carbono 6 da purina. Contudo, não é necessário que um alquilo ou arilo heterocíclico que contém um anel de átomo N seja ligado a C-6 através do átomo N. Também está dentro do âmbito desta invenção ligar tais grupos através de anel de átomos de carbono diretamente ou através de grupos alquilo ou alcoxialquilo intervenientes. Tais grupos de ligação intervenientes geralmente serão pequenos (C1-C4) , tais como metileno, etileno ou etoxi.

Uma modalidade particularmente interessante é R10 alquilo, alqueno ou alcino que contém ainda átomos 0 intracadeia. Tais grupos R10 normalmente estão emparelhados com um R10=H ou C1-C4 alquilo. 0 intracadeia é utilizado em qualquer dos grupos alquilo descritos aqui, onde os heteroátomos são utilizados para substituir CH2. Estruturas R10 típicas incluem - (CH2) 2N (CH3) (CH2CH3) , (CH2) 2N (CH3) 2, (CH2) 3N(CH3) 2-CH2NHCH2CH2OCH2NH (CH3) 2, -CH2NHCH2OCH2N(CH3) 2, -CH(CH3)2, -ch2ch=ch2, -CH=CH2, -CH(CH3) (CH=CH2) , - (CH2 ) 2OCH3, -(CH2)20CH(CH3)2, 11

11 -(CH2)2N -(CH2)2N^>, -(CHjfcNU (CH2),N<1 , -ch2ch=chch3 e -ch2c=ch. Átomos de hidrogénio de grupos R10, particularmente aqueles descritos nos dois parágrafos precedentes, e especialmente alquilo ou alqueno, são por sua vez opcionalmente substituídos com 1 a 3 de qualquer dos halogéneos (especialmente F) , ciano ou azido, ou combinações dos mesmos. Modalidades típicas incluem -CH2F, -CH2CN, -(CH2)2N3, -(CH2)2CH2F, -ch2n3, CH2 (f luorociclopropilo) , -CHFCH3 ou - (CH2) 2NH (CH3) (CH2F) .

Em algumas modalidades quando um R e NH2 então R e Ci-C6-alquilamino-Ci-C6-alquilo.

Grupos R10 podem carregar átomos N ou C quirais. Estes são adequadamente utilizados como as misturas racémicas ou diastereoméricas, ou podem ser quiramente puras. Em geral, é preferido que sejam quiramente puras. Z normalmente é selecionado de maneira a produzir um núcleo de purina, apesar de opcionalmente ser escolhido de maneira a produzir um núcleo de uma aza ou deaza (monoaza ou monodeaza) purina tal como 1-deaza, 3-deaza, 8-aza ou 7-deaza.

Tipicamente, F é -(CH2)2-, -CH (CH3) CH2-, -CH (CH2OH) CH2-, -CH(CH=CH2)CH2 —, -CH(C=CH)CH2-, -CH (CH2N3) CH2-, -CH(R9)CH20- ou -CH(R8)0-, mais normalmente, -(CH2)2-, -CH(CH3)CH2- ou -CH(CH2OH)CH2. 0(s) átomo(s) de carbono quirais nos vários grupos E são diastereómeros ou racematos, ou são opcionalmente enantiomericamente puros ou enriquecidos. Em geral, alguém selecionará os enantiómeros ou diastereómeros que se mostraram mais ativos nos compostos parentais, por exemplo, o composto HPMP será o enantiómero (S), enquanto o composto PMP será o enantiómero (R). 12 0 grupo Υ tipicamente será OH ou convertivel para OH por meio químico ou biológico. Para a hidrólise in vivo Y normalmente é OR3 no qual R3 está descrito anteriormente ou Y é -OCH (R16) OC (0) R3.

Numa modalidade de compostos da estrutura (2), E é -(CH2)2-, Y é OH ou OR3 , R2 é NH2, R2 é X e X é qualquer um de -NH(CH3) (CH2CH3), -NH (CH2CH3) 2, -NHCH2CH=CH2, NH (CH2) 2CH=CH2, -NH (ciclopropilo) , -NH (CH2) 2NH (CH3) 2, NH(CH2)3NH(CH3)2, -NH (CH2) 2NH (CH3) (CH2CH3) , NH (CH2) 3NH (CH3) (CH2CH3) , -NH (CH2) 2NH (ciclopropilo) , NH (CH2) 3NH (ciclopropilo) , -NH (CH2) 2NHCH2 (ciclopropilo) , NH (CH2) 3NHCH2 (ciclopropilo) , -NH (CH2) 2NHCH2CH=CH2, NH(CH2) 3NHCH2CH=CH2, -NHCH2C=CH ou -NHCH2CH=CH (Phe) .

Noutra modalidade de compostos de estrutura (2), E é -CH (CH20H) CH2- Y é OH ou OR3 , R2 é H, R2 é X e X é qualquer um de -NH (CH3) (CH2CH3) , -NH (CH2CH3) 2, -NHCH2CH=CH2, NH (CH2) 2CH=CH2, -NH (ciclopropilo) , -NH (CH2) 2NH (CH3) 2, NH (CH2) 3NH (CH3) 2, -NH (CH2) 2NH (CH3) (CH2CH3), NH (CH2) 3NH (CH3) (CH2CH3) , -NH (CH2) 2NH (ciclopropilo) , NH (CH2) 3NH (ciclopropilo) , -NH (CH2) 2NHCH2 (ciclopropilo) , NH (CH2) 3NHCH2 (ciclopropilo) , -NH (CH2) 2NHCH2CH=CH2, NH (CH2) 3NHCH2CH=CH2 . -NHCH2C=CH ou -NHCH2CH=CH(Phe) . Utilidades

Os novos compostos desta invenção são úteis por si só ou como intermediários na preparação de polímeros tendo uma ampla variedade de utilidades de diagnóstico, terapêuticas e industriais.

Os compostos são úteis na preparação de retardadores de chama de polifosfonato. Os compostos desta invenção que contêm locais de insaturação não ressonantes, por exemplo, que contêm vinilo, alilo ou outros locais de insaturação alifática, são incorporados em polímeros de polivinilo por métodos até agora empregues para polimerizar vinilfosfonatos conhecidos, ou métodos claramente análogos a eles que serão aparentes ao artesão comum. Estes 13 monómeros são copolimerizados com resinas de vinilo por métodos de catálise de radical livre já conhecidos por si, por exemplo, pela utilização de persulfato ou feixe de eletrão. Os compostos desta invenção que ainda não contêm grupos vinilo são úteis na mesma como intermediários preparando monómeros de vinilfosfonato, ou podem ser polimerizados utilizando outros métodos.

Os compostos desta invenção também são adequados como intermediários para utilização na preparação de matrizes de absorção por afinidade que aproveitam as propriedades químicas dos grupos substituintes dos compostos. Por exemplo, os grupos fosfonato na forma de ligação à matriz são úteis na separação cromatográfica de moléculas carregadas positivamente. Outros exemplos imobilizados dos compostos aqui são úteis em purificar proteínas, por exemplo, enzimas envolvidas no reconhecimento dos compostos desta invenção, por exemplo, proteínas de transporte (ver Cihlar, supra). Métodos adequados de incorporação dos compostos desta invenção em resinas poliméricas serão prontamente aparentes para o artesão habilitado, por exemplo, os compostos são incorporados por reticulação dos grupos hidroxilo dos substituintes fosfonato ou hidroximetilo utilizando agentes de reticulação até agora conhecidos. A ligação através de um grupo que não seja a base heterocíclica produzirá uma resina útil na cromatografia hidrofóbica por afinidade. Outros métodos de ligação adequados estão descritos em Cihlar (supra).

Os compostos desta invenção são úteis como intermediários para preparar sondas de oligonucleotídeo rotuladas, por exemplo, onde Y se torna um oligonucleotídeo. Estes oligonucleotídeos são diretamente úteis em ensaios para sequências de ácido nucleico alvo. Tipicamente, o grupo fosfonato dos compostos desta invenção está covalentemente ligado ao terminal de um oligonucleotídeo tendo uma sequência pré-determinada, 14 apesar de qualquer grupo hidroxilo dos compostos da invenção ser útil para este fim. A estrutura ou sequência do oligonucleotideo não é importante exceto na medida em que seja competente na ligação com a sua sequência complementar. Muitos oligonucleotideos que têm esta propriedade são bem conhecidos, por exemplo oligonucleotideos fosfodiéster ou fosforotioato convencionais.

Os compostos desta invenção geralmente serão incorporados terminalmente no oligonucleotideo. Se contêm um grupo hidroxilo livre não fosfonilo, opcionalmente são incorporados internamente na sequência do oligonucleotideo. Compostos difosforilo desta invenção incorporados terminalmente que não contêm hidroxilo livre capaz de participar no prolongamento da cadeia também são úteis na sequenciação do ADN essencialmente da mesma maneira que os desoxiNTP foram utilizados no passado (ver exemplo 8 da Patente U.S. 5 276 143). Os análogos do nucleotideo da invenção (quando difosforilado) são úteis como terminadores de cadeia para protocolos de sequenciação do ADN tipo didesoxinucleotideo, desde que o análogo do nucleotideo careça de um grupo hidroxilo livre adequado para o prolongamento da cadeia mediado pela polimerase. Estes compostos não terão R=hidroximetilo e não possuem uma estrutura cíclica que incorpora o átomo de fósforo (apesar de que os compostos com tais estruturas excluídas podem ser intermediários). 0 análogo do nucleotideo está incluído num kit com outros reagentes (tais como polimerase Klenow ou T4 polimerase, dNTP, etc.) necessários para a sequenciação do ADN (Otvos, et al., "Nucl. Acids Res." 15:1763-1777 (1987).

Se o composto incorporado pelo oligonucleotideo desta invenção é competente na ligação com a sua sequência complementar, isto é, se é capaz de emparelhamento de base, então este monómero de nucleotideo participará na hibridização. Não é necessário, contudo, que o análogo de 15 nucleotídeo incorporado desta invenção emparelhe com uma base ou, de outra forma, participe na hibridização. Se está localizado no terminal do oligonucleotideo será útil como um local de reconhecimento imunológico, ou local de reconhecimento hapténico, para facilitar a deteção do oligonucleotídeo ou um anticorpo capaz de se ligar ao composto desta invenção.

Os compostos desta invenção também são úteis como ligantes ou espaçadores para preparar matrizes de absorção por afinidade (por oposição a funcionarem como frações de afinidade por si só como notado anteriormente), enzimas imobilizadas para controlo do processo, ou reagentes de imunoensaio. Os compostos anexos contêm uma multiplicidade de grupos funcionais que são adequados como locais para reticular substâncias desejadas. Por exemplo, é convencional ligar reagentes de afinidade tais como hormonas, péptidos, anticorpos, fármacos, e afins a substratos insolúveis. Estes reagentes insolubilizados são empregues de maneira conhecida para absorver parceiros de ligação para os reagentes de afinidade de preparações fabricadas, amostras para diagnóstico e outras misturas impuras. Da mesma forma, as enzimas imobilizadas são utilizadas para realizar conversões catalíticas com recuperação fácil da enzima. Compostos bifuncionais são normalmente utilizados para ligar analitos a grupos detetáveis para preparar reagentes diagnóstico.

Muitos grupos funcionais presentes nos compostos desta invenção são adequados para utilização na reticulação. Por exemplo, o ácido fosfónico é utilizado para formar ésteres com álcoois ou amidas com aminas. Os grupos R substituídos com OH, azido (que é reduzido a amino antes da reticulação se desejado) ou vinilo são locais adequados exemplares. Da mesma forma, o amino, halo, acilo e outros locais reativos encontrados no grupo B são adequados. A proteção adequada dos grupos reativos será utilizada onde necessário enquanto 16 se monta o reagente reticulado. Em geral, os compostos anexos são utilizados ligando-os através de ácido fosfónico aos grupos hidroxilo ou amino do parceiro de ligação da mesma maneira que mostrado aqui, e covalentemente ligado ao outro parceiro de ligação através de um grupo R. Por exemplo, um primeiro parceiro de ligação tal como uma hormona esteróide é esterificada ao ácido fosfónico desta invenção e depois este conjugado é reticulado através de hidroximetilo R a sefarose ativada pelo brometo de cianogénio, pela qual o esteróide imobilizado é obtido. Outras químicas para conjugação são bem conhecidas. Ver por exemplo Maggio, "Enzyme-Immunoassay" (CRC, 1988, pp 71-135) e referências nele citadas.

Os oligonucleotídeos desta invenção são rotulados com qualquer rótulo detetável convencional, por exemplo, uma fração fluorescente tal como fluoresceína, radioisótopos tais como Ci4 ou H3, radicais livres estáveis, avidina, biotina e afins todos os quais foram previamente utilizados como rótulos para sondas diagnóstico ou imunoensaios. 0 rótulo estará presente no oligonucleotídeo ou no resíduo do análogo do nucleotídeo desta invenção. Métodos adequados de rotulagem são bem conhecidos e são prontamente utilizados com grupos reativos tais como hidroxilo, alilo e afins. Um método simples é rotular o composto desta invenção com H3 por troca de protão. Os compostos também são biotinilados utilizando métodos convencionais. Ver, por exemplo, Patente U.S. 5 276 143 para estruturas análogas. Contudo, os oligonucleotídeos desta invenção também são úteis diretamente em ensaios de sonda diagnóstico sem um rótulo detetável exógeno. Numa modalidade desta alternativa, os anticorpos são criados contra os compostos desta invenção. Tais anticorpos (que, por sua vez, são rotulados ou utilizados numa configuração de anticorpo dupla) ligam-se ao análogo desta invenção e são, por isso, úteis para detetar a sua presença como rótulo para uma proteína ou 17 oligonucleotídeo.

Os compostos da invenção são úteis para tratamento de infeções microbianas, para tratamento de tumores ou para outras indicações descritas a seguir. As infeções microbianas tratáveis pelos compostos desta invenção incluem vírus, parasitas, leveduras e fungos, mas pensa-se que os compostos são mais eficazes contra vírus, que constitui a utilidade preferida. Infeções virais exemplares incluem infeções causadas por vírus de ADN ou ARN incluindo herpesvírus (CMV, HSV 1, HSV 2, EBV, vírus da varicela-zóster [VZV] certos compostos são excecionalmente potentes contra este vírus, e, por isso, serão úteis no tratamento de herpes-zóster e varicela, normalmente por aplicação tópica), herpesvírus bovino tipo 1, herpesvírus equino tipo 1, HHV-6, vírus do papiloma (HPV tipos 1-55 incluindo HPV carcinogénico), flavivírus (incluindo vírus da febre amarela, vírus da febre suína africana e vírus da encefalite japonesa), togavírus (incluindo vírus da encefalomielite equina venezuelana), vírus da influenza (tipos A-C), retrovírus (HIV-1, HIV-2, HTLV-I, HTLV-II, SIV, FeLV, FIV, MoMSV), adenovírus (tipos 1-8), poxvírus (vírus vaccinia), enterovírus (poliovírus tipos 1-3, Coxsackie, vírus da hepatite A, e vírus ECHO) , vírus da gastroenterite (vírus Norwalk, rotavírus), hantavírus (vírus Hantaan), poliomavírus, papovavírus, rinovírus, vírus da parainfluenza tipos 1-4, vírus da raiva, vírus sincicial respiratório (RSV), vírus da hepatite A, B, C e E, e afins. A atividade antiviral dos análogos de nucleotídeo individuais é determinada por ensaio de rotina de atividade antiviral (ou outra antimicrobiana) utilizando ensaios de inibição de enzima, ensaios de cultura de tecidos, ensaios em modelos animais e afins como será entendido por aqueles habilitados na arte.

Infeções por parasitas protozoários são tratadas 18 utilizando os compostos da invenção. 0 termo protozoários inclui aqueles membros do subfilo Sarcomastigophora e Sporozoa do filo Protozoa. Mais particularmente, o termo protozoa, como utilizado aqui, inclui géneros de protozoários parasitas que são importantes para o Homem porque ou causam doença no Homem ou nos seus animais domésticos. Estes géneros estão classificados na sua maior parte na superclasse Mastighphora do subfilo Sarcomastigophora e na classe Telosporea do subfilo Sporozoa na classificação de acordo com Baker (1969). Géneros ilustrativos destes protozoários parasitas incluem Histomonas, Pneumocystis, Trypanosoma, Giardia, Trichomonas, Eimeria, Isopora, Leishmania, Entamoeba, Toxoplasma e Plasmodium. Protozoários parasitas incluem Plasmodium falciparum, Plasmodium berghei, Plasmodium malariae, Plasmodium vivax, Leishmania braziliensis, Leishmania donovani, Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei, Trypanosoma rhodesiense, Pneumocystis carinii, Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis e afins (de Vries, E., et al., "Mol. Biochem. Parasitol" 47:43-50 (1991)) e tripanossomas (Kaminsky et al. "J. Parasitol." 80(6):1026-30 (1994) . Os compostos nos quais R é CH2OH e B é 3-deazaadenina são particularmente interessantes no tratamento de parasitas da malária.

Os análogos de nucleotídeo da invenção são utilizados para tratar infeções por leveduras ou fúngicas causadas por Candida glabrata, Candida ropicalis, Candida albicans, e outras espécies de Candida, espécies de Cryptococcus incluindo Cryptococcus neoformans, espécies de Blastomyces incluindo Blastomyces dermatidis, espécies de Torulopsis incluindo Torulopsis glabrata, espécies de Coccidioides incluindo Coccidioides immitis, espécies de Aspergillus e afins.

Os compostos terapeuticamente úteis desta invenção são úteis em formas de libertação orais ou de ação prolongada. 19

Nestas utilizações um grupo éster ou outro é removido in vivo, por exemplo, hidrolizado ou oxidado, de maneira a produzir, por exemplo, um grupo amino ou hidroxilo livre. Amidatos ou ésteres precursores ou protetores adequados são selecionados com base na especificidade do substrato das esterases e/ou carboxipeptidases que se esperam encontrar dentro das células onde a hidrólise precursora é desejada. Na medida em que a especificidade destas enzimas é desconhecida, uma pessoa classificará uma pluralidade de análogos de nucleotideo desta invenção até a especificidade do substrato desejada ser encontrada. Isto será aparente pelo aparecimento de fosfonato livre ou de atividade antimicrobiana. Selecionam-se geralmente compostos que (i) não são hidrolizados ou hidrolizados em comparação lentamente no intestino superior, (ii) permeável ao intestino e célula e (iii) hidrolizado no citoplasma da célula e/ou circulação sistémica. Telas com células de tecidos particulares são utilizadas para identificar precursores que são libertados em orgãos suscetíveis a um alvo virai ou infeção microbiana, por exemplo, no caso do fígado, fármacos precursores capazes de hidrólise no fígado. Outras infeções, por exemplo CMV ou HIV, são tratadas opcionalmente com um precursor que é hidrolizado substancialmente à mesma taxa e substancialmente ao mesmo grau em todos os tecidos. Ensaios conhecidos na arte são adequados para estes fins, incluindo ensaios de estabilidade do lúmen intestinal, permeação celular, estabilidade de homogeneizado do fígado e de estabilidade do plasma. Estes ensaios são utilizados para determinar as características de biodisponibilidade dos precursores. Contudo, mesmo se os derivados não são convertidos in vivo eles permanecem úteis como intermediários químicos.

Os análogos de nucleotideo da invenção também podem ser (1) aplicados a sistemas de cultura de tecidos para eliminar ou reduzir a disseminação ou crescimento virai 20 durante a produção de produtos biofarmacêuticos ou outros produtos (tais como proteínas ou vacinas), (2) utilizados para eliminar ou reduzir a disseminação ou crescimento virai em amostras clínicas (tais como sangue), e (3) utilizados para parar o crescimento da cultura de tecidos ou células bacterianas (utilizando quantidades tóxicas do composto) enquanto deixa que as células realizem a produção de proteína.

Foi observado que os compostos anexos suprimem a imunoestimulação. Em conformidade, podem suprimir atividades metabólicas de linfócitos T estimulados por diversos agentes, por exemplo concavalina A; eles encontrarão principalmente aplicação no tratamento de doenças autoimunes, por exemplo artrite, ou na supressão de rejeição de transplante. As suas concentrações terapeuticamente ativas estão no intervalo dos 5 mg/kg a 100 mg/kg de peso corporal.

Formulações farmacêuticas. Os compostos anexos e os seus sais fisiologicamente aceitáveis (doravante referidos coletivamente como os ingredientes ativos) são formulados para administração por qualquer via apropriada à condição patológica a ser tratada. Os compostos e formulações serão preferencialmente estéreis.

Os ingredientes ativos são colocados em formulações farmacêuticas. As formulações, tanto para uso veterinário e para uso humano, compreendem pelo menos um ingrediente ativo, como definido anteriormente, junto com um ou mais veículos por isso aceitáveis e opcionalmente outros ingredientes terapêuticos. 0(s) veículos(s) têm que ser "aceitáveis" no sentido de ser compatíveis com os outros ingredientes da formulação e não deletérios para o recetor.

As formulações são apresentadas convenientemente na forma de dose unitária e podem ser preparadas por qualquer um dos métodos bem conhecidos na arte da farmácia. Em geral, as formulações são preparadas associando 21 uniformemente e intimamente o ingrediente ativo com veiculos líquidos ou veículos sólidos finamente divididos ou ambos, e depois, se necessário, moldando o produto.

As formulações da presente invenção adequadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades discretas tais como cápsulas, hóstias ou comprimidos cada contendo uma quantidade pré-determinada do ingrediente ativo; como um pó ou grânulos; como uma solução ou uma suspensão num líquido aquoso ou líquido não aquoso; ou como uma emulsão líquida óleo-em-água ou uma emulsão líquida água-em-óleo. 0 ingrediente ativo também pode ser apresentado como um bolus, eleituário ou pasta.

Para infeções externas do olho ou outros tecidos externos, por exemplo, boca e pele, as formulações são preferencialmente aplicadas como uma pomada ou creme tópico contendo o(s) ingrediente(s) ativo(s) numa quantidade de, por exemplo, 0,075 a 20% p/p (incluindo ingrediente ativo (s) num intervalo entre 0,1% e 20% em incrementos de 0,1% p/p tais como 0,6% p/p, 0,7% p/p, etc), tipicamente 0,2 a 15% p/p e mais tipicamente 0,5 a 10% p/p. Quando formulados numa pomada, os ingredientes ativos podem ser empregues ou com uma base de pomada parafínica ou miscível em água. Em alternativa, os ingredientes ativos podem ser formulados num creme com uma base de creme óleo-em-água.

Se desejado, a fase aquosa da base do creme pode incluir, por exemplo, pelo menos 30% p/p de um álcool polihídrico, isto é, um álcool que tem dois ou mais grupos hidroxilo tais como propileno glicol, butano 1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol e polietileno glicol (incluindo PEG 400) e misturas dos mesmos. As formulações tópicas podem desejavelmente incluir um composto que potência a absorção ou penetração do ingrediente ativo através da pele ou outras áreas afetadas. Exemplos de tais potenciadores de penetração dérmicos incluem dimetilsulfóxido e análogos relacionados. 22 A fase oleosa das emulsões desta invenção pode ser constituída por ingredientes conhecidos numa maneira conhecida. Esta fase pode compreender um emulsificador sozinho, ou uma mistura de pelo menos um emulsificador com uma gordura ou um óleo ou com ambos gordura e óleo. Preferencialmente, um emulsificador hidrofílico é incluído junto com um emulsif icador lipofílico que atua como um estabilizador. Também é preferido incluir ambos óleo e gordura. Os estabilizadores da emulsão adequados para utilização na formulação da presente invenção incluem Tween ® 60, Span ® 80, álcool cetoestearílico, álcool benzílico, álcool miristílico, monoestearato de glicerilo e lauril sulfato de sódio. Óleos ou gorduras adequados incluem ésteres de alquilo de cadeia linear ou ramificada, mono ou dibásicos tais como di-isoadipato, estearato de isocetilo, diéster de propilenoglicol de ácidos gordos de coco, isopropil miristato, decil oleato, palmitato de isopropilo, butil estearato ou palmitato de 2-etilhexilo. Estes podem ser utilizados sozinhos ou em combinação dependendo das propriedades requeridas. Em alternativa, lípidos com ponto de fusão elevado tais como parafina branca suave e/ou parafina líquida ou outros óleos minerais podem ser utilizados.

Formulações adequadas para administração tópica no olho também incluem gotículas oculares em que o ingrediente ativo é dissolvido ou suspenso num veículo adequado, especialmente um solvente aquoso para o ingrediente ativo. O ingrediente ativo está tipicamente presente em tais formulações numa concentração de 0,01 a 20% por peso.

Formulações adequadas para administração nasal em que o veículo é um sólido incluem um pó grosseiro com um tamanho de partícula, por exemplo, no intervalo de 20 a 500 micróns (incluindo tamanhos de partícula num intervalo entre 20 e 500 micróns em incrementos de 5 micróns tais como 30 micróns, 35 micróns, etc.), que é administrado por 23 inalação rápida através da passagem nasal a partir de um recipiente do pó. Formulações adequadas para administração em que o veiculo é um liquido, como, por exemplo, um vaporizador nasal ou como gotículas nasais, incluem soluções aquosas ou oleosas do ingrediente ativo. Formulações adequadas para administração por aerosol podem ser preparadas de acordo com métodos convencionais e podem ser entregues com outros agentes terapêuticos tais como pentamidina para tratamento de pneumonia pneumocística.

Formulações adequadas para administração vaginal podem ser apresentadas como formulações pessárias, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou vaporizadores contendo além do ingrediente ativo tais veículos como são conhecidos na arte como apropriado.

Formulações adequadas para administração parentérica incluem soluções de injeção estéril aquosas e não aquosas que podem conter anti-oxidantes, tampões, bacteriostatos e solutos que fornecem à formulação isotónica o sangue do recetor pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes suspensores e agentes espessantes. As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose unitária ou multi-dose, por exemplo âmpolas e frascos selados, e podem ser armazenados em condição liofilizada requerendo apenas a adição do veículo líquido estéril, por exemplo água para injeções, imediatamente antes da utilização. Soluções e suspensões de injeção extemporâneas podem ser preparadas a partir de pós estéreis, grânulos e comprimidos do tipo previamente descrito. Formulações preferidas de dosagem unitária são aquelas contendo uma dose diária ou sub-dose unitária diária, como citado anteriormente aqui, ou uma fração apropriada da mesma, de um ingrediente ativo. A presente invenção providencia ainda composições veterinárias compreendendo pelo menos um ingrediente ativo, como definido anteriormente, junto com um veículo por isso 24 veterinário. Veículos veterinários são materiais para administrar a composição e podem ser materiais sólidos, líquidos ou gasosos que são, de outra forma, inertes ou aceitáveis na arte veterinária e são compatíveis com o ingrediente ativo. Estas composições veterinárias podem ser administradas por via oral, parentérica ou por qualquer outra via desejada.

Compostos anexos são utilizados opcionalmente em formulações farmacêuticas de libertação controlada contendo como ingrediente ativo um ou mais compostos ativos nos quais a libertação do ingrediente ativo é controlada e regulada para permitir dosagem menos frequente ou para melhorar o perfil farmacocinético ou toxicidade de um dado composto. Em geral, os compostos são administrados a partir de sistemas de libertação controlada tais como o implante intravítreo do documento WO 92/14450 ou Patente U.S. 5 098 443, ou as matrizes da Patente U.S. 4 740 365 ou Patente U.S. 5 141 752. Muitos outros são conhecidos e são adequados para utilização aqui.

Administração terapêutica. Vias adequadas para administração incluem via oral, retal, nasal, tópica (incluindo ocular, bucal e sublingual), vaginal e parentérica (incluindo subcutânea, intramuscular, intravítrea, intravenosa, intradérmica, intratecal e epidural). A via preferida de administração dependerá da condição patológica do paciente, da toxicidade do composto e do local de infeção, entre outras considerações conhecidas do clínico.

Para cada uma das indicações terapêuticas anteriormente mencionadas a quantidade requerida de um ingrediente ativo (como definido anteriormente) dependerá de um número de fatores incluindo a severidade da condição patológica a ser tratada, do agente infecioso, se a utilização é profilática ou para tratar uma infeção aguda, o local de infeção ou patologia (por exemplo a retinite CMV 25 é tratada sistemicamente ou por injeção intravítrea, ou no tratamento de HHV-6 em pacientes com esclerose múltipla, opcionalmente por administração intratecal) e outros fatores basicamente à descrição do clinico ou veterinário que atende. Em geral, contudo, uma dose adequada para consideração pelo clínico estará no intervalo de metoxifosfonatos análogos (ver supra), tomando em consideração diferenças na potência, geralmente 0,1 a 250 mg por quilograma de peso corporal do recetor por dose (incluindo ingrediente(s) ativo(s) num intervalo entre 0,1 mg e 250 mg/Kg/dose em incrementos de 0,5 mg/Kg/dose tais como 2,5 mg/Kg/dose, 3,0 mg/Kg/dose, 3,5 mg/Kg/dose, etc.), tipicamente no intervalo 0,5 a 50 mg por quilograma de peso corporal por dose e mais normalmente no intervalo 1 a 15 mg por quilograma de peso corporal por dose. A menos que indicado o contrário todos os pesos do ingrediente ativo são calculados como compostos em que Y não é polímero. A dose desejada é administrada em intervalos apropriados em formas de dosagem unitária, normalmente com uma dose de indução relativamente mais alta e doses de manutenção mais baixas, menos frequentes. Os compostos também são utilizados profilaticamente, por exemplo, por administração cerca de 1 a 7 dias antes da infeção virai. Tumores ou crescimentos por HPV e lesões por herpes são frequentemente tratadas topicamente, quer por injeção local ou por géis, pomadas tópicos, ou afins.

Compostos ciclizados internamente geralmente espera-se que tenham uma biodisponibilidade oral superior do que o análogo de nucleotídeo não ciclizado correspondente e/ou exibam toxicidade reduzida quando comparado com a mesma dose do análogo de nucleotídeo não ciclizado correspondente. Além disso, os compostos substituídos em N6 por si só possuem toxicidade mais baixa e são mais seletivos do que os derivados de guanina comparáveis. Assim, as doses serão ajustadas em conformidade. 26

Os compostos da invenção são empregues opcionalmente em combinação com outros agentes terapêuticos para o tratamento ou profilaxia das infeções ou condições patológicas indicadas anteriormente. Exemplos de tais agentes terapêuticos incluem ainda agentes gue são eficazes para o tratamento ou profilaxia de infeções virais, parasiticas ou bacterianas ou condições patológicas associadas ou para tratamento de tumores ou condições patológicas relacionadas. Estes incluem 3'-azido-3'-deoxitimidina (zidovudina, AZT), 2,-deoxi-3' tiacitidina (3TC), 2', 3'-dideoxi-2', 3'-didehidroadenosina (D4A), 2',3'-dideoxi-2',3'-didehidrotimidina (D4T) , carbovir (2',3'-dideoxi-2', 3'-didehidroguanosina carbociclica), 3'-azido-2', 3'-dideoxiuridina, 5-fluorotimidina, (E)-5-(2-bromovinilo)-2'-deoxiuridina (BVDU), 2-cloro-2'-deoxiadenosina, 2-deoxicoformicina, 5-fluorouracilo, 5-fluorouridina, 5-fluoro-2'-deoxiuridina, 5-trifluorometil-2'-deoxiuridina, 6-azauridina, ácido 5-fluororótico, metotrexato, triacetiluridina,1-(2'-deoxi-2'-fluoro-l-p-D-arabinosilo)-5-iodocitidina (FIAC),tetrahidroimidazo(4,5,1-jk)-(1,4)-benzodiazepin-2(1H)-tiona (TIBO), GMP 2'-nor-cíclica, 6-metoxipurina arabinosida (ara-M), 6-metoxipurina arabinosida 2'-O-valerato; citosina arabinosida (ara-C) , 2 ’,3’-dideoxinucleosídeos tais como 2',3'-dideoxicitidina (ddC), 2',3'-dideoxiadenosina (ddA) e 2',3'-dideoxiinosina (ddl), nucleosídeos aciclicos tais como aciclovir, valaciclovir, penciclovir, famciclovir, ganciclovir, nucleotideos aciclicos tais como HPMPC, PMEA, PMEG, PMPA, PMPDAP, FPMPA, HPMPA e HPMP-DAP, (2R, 5R)-9-[tetrahidro-5-(fosfonometoxi)-2-furanil]adenina, (2R, 5R)-l-[tetrahidro-5-(fosfonometoxi)-2-furanil]timina, outros antivirais incluindo ribavirina (adenina arabinosida), 2-tio-6-azauridina, tubercidina, ácio aurintricarboxilico, 3-deazaneoplanocina, neoplanocina, rimantidina, adamantina, e foscarnet (fosfonoformato de trissódio), agentes 27 antibacterianos incluindo fluoroquinolonas bactericidas (ciprofloxacina, pefloxacina e afins), aminoglicosida antibióticos bactericidas (estreptomicina, gentamicina, amicacina e afins), inibidores da β-lactamase (cefalosporinas, penicilinas e afins), outros antibacterianos incluindo tetraciclina, isoniazida, rifampicina, cefoperazona, claitromicina e azitromicina, agentes antiparasiticos ou antifúngicos incluindo pentamidina (1,5-bis(4'-aminofenoxi)pentano), 9-deazainosina, sulfametoxazol, sulfadiazina, quinapiramina, quinina, fluconazol, quetoconazol, itraconazol, Amfotericina B, 5-fluorocitosina, clotrimazol, hexadecilfosfocolina e nistatina, inibidores da excreção renal tais como probenecida, inibidores de transporte nucleosideo tais como dipiridamol, dilazep e nitrobenziltioinosina, imunomoduladores tais como FK506, ciclosporina A, timosina a-1, citocinas incluindo TNF e TGF-β, interferões incluindo IFN-a, IFN-β e IFN-γ, interleucinas incluindo interleucina 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, fatores estimuladores de colónia de macrófago/granulócito incluindo GM-CSF, G-CSF, M-CSF, antagonistas da citocina incluindo anticorpos anti-TNF, anticorpos anti-interleucina, recetores de interleucina solúveis, inibidores da proteína quinase C e, particularmente no tratamento de HIV, co-terapêutica com IFN-Oí, IL-2 ou IL-12.

Imunogenes e anticorpos. Os compostos desta invenção são utilizados como imunogenes para preparar anticorpos capazes de se ligarem especificamente aos compostos ou aos seus produtos metabólicos. As composições imunogénicas são úteis como intermediários na preparação de anticorpos para utilização em ensaios de diagnóstico ou de controlo da qualidade para os compostos ou os seus produtos metabólicos. Os anticorpos são úteis para medir a presença, ausência ou quantidades dos compostos por qualquer 28 procedimento homogéneo ou heterogéneo conveniente tal como imunoensaio de fluorescência por polarização, imunoensaio de fluorescência (utilizando rótulos fluorescentes tais como fluoresceina e afins), radioimunoensaio, imunoensaio de enzima (utilizando indicadores de enzima tais como fosfatase alcalina, peroxidase de raiz-forte, glicose oxidase, urease e afins) e ensaio de inibição nefelométrica por métodos descritos (documento WO 92/22639). Ensaios tipo competitivos normalmente requerem o anticorpo, e um traçador (tal como um rótulo fluorescente ou rádio) conjugado com o composto a ser testado. Os anticorpos dirigidos contra os compostos desta invenção desejavelmente não reagirão de forma cruzada com nucleotídeos ou nucleosideos que ocorrem naturalmente.

Os imunogenes desta invenção contêm o precursor ou produtos hidroliticos em associação com uma substância imunogénica tal como uma proteína ou péptido. Substâncias imunogénicas incluem adjuvantes tais como adjuvante de Freund, proteínas imunogénicas tais como polipeptídeos virais, bacterianos, de levedura, de planta e animal, em particular hemocianina de lapa, albumina do soro, tiroglobulina bovina ou inibidor da tripsina da soja, e polissacarídeos imunogénicos. Métodos para o fabrico de imunogenes hapteno são convencionais por si só, e são úteis aqui, tendo em consideração os grupos funcionais que estão disponíveis para reticulação. 0 imunogene polipeptídeo (ou um polipeptídeo que é desejado tornar-se imunogénico por reticulação a um composto desta invenção) pode ser conjugado a um local na base heterocíclica em vez de na fração fosfonato. Em geral, o local será um fosfonilo hidroxilo reticulado por amidação ou esterificação do fosfonato pelo próprio polipeptídeo ou por uma funcionalidade de reticulação covalentemente ligada ao polipeptídeo, em que Y é uma proteína imunogénica que tem 29 mais de 50 resíduos de aminoácido, normalmente menos de 1000. Os conjugados são preparados de maneira convencional. Por exemplo, N-hidroxissucinimida, anidrido sucínico ou carbodiimidas N,N-di-substituídas são úteis para preparar os conjugados desta invenção. Os animais são tipicamente imunizados contra os conjugados imunogénicos e os anticorpos monoclonais preparados de maneira convencional. Métodos sintéticos

Os compostos anexos são preparados por métodos conhecidos por si só. Ver, por exemplo, documentos WO 94/03467 e WO 95/07920, ou Esquemas 1 e 2 a seguir (notar que qualquer grupo protetor da OH-alquilação pode ser utilizado em lugar de isopropilo ou R3, e R3 e iPr podem ser utilizados alternadamente). Em geral, no Esquema 1, a 6-cloropurina é primeiro alquilada em DMF ou na presença de uma quantidade equivalente de hidreto de sódio ou carbonato de césio a 60-100°C. Os produtos são depois isolados por cromatografia de sílica e cristalizados a partir de acetato de etilo pela adição lenta de éter de petróleo até que a cristalização ocorra (os compostos 2-amino-6-cloropurinilo PME/PMP são cristalinos, mas os compostos 6-cloropurinilo PME/PMP são óleos). O composto 6-cloro obtido é tratado em solução de etanol com um excesso (5 a 10 vezes) da amina correspondente sob refluxo. A reação é seguida por análise TLC ou HPLC. A mistura é depois evaporada, desionizada numa coluna de troca de catiões (Dowex 50), lavada com 20% de metanol aquoso, e o composto libertado pela utilização de 2,5% de amónia em 20% de metanol aquoso. O eluato é evaporado e seco sobre pentóxido de fósforo, o resíduo tratado com 10% (v/v) de bromotrimetilsilano em acetonitrilo (5 ml por mM de composto) de maneira a desproteger os grupos hidroxilo. Deixa-se repousar a mistura durante a noite sendo esta reparada como descrito no documento WO 94/03467.

Num método alternativo de fabricar compostos desta 30 invenção, mostrado no Esquema 2, a 6-cloropurina (R2= H ou NH2) é tratada durante 3-12 horas com excesso (5-10 vezes) de amina primária ou secundária em etanol absoluto ou metanol à temperatura de refluxo ou numa autoclave a 100-120°C. O solvente é capturado in vacuo e o resíduo co-destilado com o mesmo solvente. O resíduo é purificado por cristalização, desionização ou uma resina de troca de catiões ou por cromatografia de sílica gel. O derivado então obtido da 6-(substituída-amina)purina (R2=H ou NH2) é pré-tratado em solução de dimetilformamida com um meio molar equivalente de carbonato de césio, um equivalente molar de hidreto de sódio durante 1 hora a 100°C e o sínton fósforo-orgânico apropriado utilizado, por exemplo, para a preparação de derivados PME-, (R)-PMP ou (S)-PMP (1,1-1,5 equivalentes molar é adicionado à mistura). A mistura é aquecida a 100-120°C durante 8-16 horas, arrancado o solvente e isolado o intermediário diéster por cromatografia de sílica gel. O tratamento adicional com bromotrimetilsilano e purificação é realizado como anteriormente. Não é essencial empregar o grupo protetor fosfonilo onde é esperado que o substituinte N6 possa ser lábil à desproteção da TMS, por exemplo, onde R10 é um éter de alquilo. Neste caso, o ácido livre é utilizado como o material de partida para adição da amina. sao

Nos Esquemas seguintes, halogéneo, OMS, 0-nitrobenzilsulfonilo, ou O-trifilo são opcionalmente utilizados em lugar de OT. 31 Esquema 1

P(0)(0iPr)2 OTs iÇr1 Õ^P(0}(0iPr)2

32

Esquema 2

Fosfonoamidatos, fosfonoésteres e ésteres internamente ciclizados (onde R=hidroximetilo e um Y são unidos) são todos preparados por métodos análogos àqueles descritos no documento WO 95/07920 ou outros métodos que serão aparentes ao artesão.

Compostos desta invenção onde Y é um oligonucleotídeo são preparados a partir de monómeros parentais nos quais Y é OH. Os monómeros são convertidos no intermediário reativo utilizando química convencional, por exemplo, o método de Uhlmann et al., "Chemical Reviews" 90(4):543 a 553, parte c e Figura 23 (1990) ou Mazur et al., "Tetrahedron Letters" 33 40(20):3949 no esquema (1) e página 3955 (1984). Por exemplo, uma cadeia de oligonucleotideo é sintetizada numa matriz tal como vidro de porosidade controlada na direção 3'-5' ou 5' a 3', pela qual as extremidades 3' ou 5', respetivamente, do oligonucleotideo são ligadas à matriz e o oligonucleotideo é protegido exceto para o terminal 5' ou 3' hidroxilo, respetivamente, do último nucleotídeo. O derivado o-clorofenilo protegido da estrutura 1 do composto é preparado, análogo ao material de partida mostrado na Figura 23 de Uhlmann et al. Este é covalentemente ligado a um terminal OH do oligonucleotídeo utilizando o método de Uhlmann et al..

Em alternativa, o composto desta invenção é convertido no intermediário que é análogo ao composto 12 de Mazur et al. Este análogo é adicionado ao oligonucleotídeo utilizando essencialmente a química preparativa do dinucleotideo mostrada na página 3955 de Mazur et al. O sal piridinio do composto desta invenção (sem grupos hidroxilo livres) é condensado com a extremidade 5' ou 3' livre do, de outra forma protegido, oligonucleotídeo da mesma maneira que Mazur et al. condensa fosfonato 12 com uma segunda unidade de nucleosídeo utilizando DCC em piridina seca na presença de Dowex 50. Após reação por qualquer um dos métodos, o oligonucleotídeo é separado da matriz (se presente durante a adição do composto desta invenção) e desprotegido.

Em alternativa, os compostos desta invenção são quimicamente convertidos em análogos trifosfato de nucleotídeo. Isto é conseguido utilizando reações conhecidas, por exemplo, reação do fosfonato ativado (por exemplo, o morfolidato o imidazolidato com tris(tri-n-butilamónio) pirofosfato em DMF. O Quadro 1 lista éster R3 e Y frações de amidato que podem ser ligadas através de oxigénio ou diretamente, respetivamente, ao átomo de fósforo. Ésteres das estruturas 34 1-5, 8-10 e 16, 17, 19-22 são sintetizados reagindo com um análogo de nucleotideo que tem um hidroxilo livre com o haleto correspondente (cloreto ou cloreto de acilo e afins) e carboxamidina N,N-dici-lohexil-N-morfolina (ou outra base tal como DBU, trietilamina, CS2CO3, N,N-dimetilanilina e afins) em DMF (ou outro solvente tal como acetonitrila ou N-metilpirrolidona). Ésteres das estruturas 5-7, 11, 12, 21, e 23-26 são sintetizados por reação do sal álcool ou alcóxido (ou as aminas correspondentes no caso de compostos tais como 13, 14 e 15) com o monoclorofosfonato ou diclorofosfonato ou outro fosfonato ativado. Estes métodos podem não ser ótimos para a preparação de todos os ésteres, particularmente aqueles nos quais a ligação éster é sensível, por exemplo, à hidrólise. Pode ser desejável prepará-los a partir de fosfonatos livres ou de outros intermediários diéster tais como hidroxialquilo, aminoalquilo, etc.

Quadro 1 1. -CH2-C(0)-N(R15)2* 10. -CH2-0-C(0)-C(CH3)3 2. -CH2-S(0) (R15) 11. -ch2-cci3 3. -CH2-S(0)2(R15) 12. -c6h5 4. -CH2-0-C(0)-ch2- 13. -NH-CH2-C(0)o-ch2ch3 c6h5 5. 3-colesterilo 14. -N (CH3) -CH2-C (0) 0-CH2-CH; 6. 3-piridilo 15. -nhr3 7. N-etilmorfolino 16. -CH2-O-C(O)-C10H15 8. -CH2-0-C(0) -c6h5 17. -CH2-0-C(0)-CH(CH3)2 9. -CH2-0-C(0) -ch2ch3 18. -CH2-C#H (0C (0) CH2R15) -ch2 (OC (0) CH2R15) * 35

OCH3 27. -(CH2)2Phe * - Cada R15 é o mesmo Ci-C6 alquilo ou diferente (inclui metilo, etilo, propilo, isopropilo e t-butilo). # - centro quiral é (R) , (S) ou racemato _

Outros ésteres que são adequados para utilização aqui estão descritos no documento EP 632 048.

Na medida em que qualquer composto desta invenção não pode ser produzido por um dos métodos precedentes, outros métodos serão aparentes ao artesão que se referem aos métodos convencionais (ver, por exemplo, Liotta et al. "Compendium of Organic Synthesis Methods" (John Wiley e filhos, Nova Iorque), Volume 1, Ian T. Harrison e Shuyen Harrison, 1971; Volume 2, Ian T. Harrison e Shuyen

Harrison, 1974; Volume 3, Louis S. Hegedus e Leroy Wade, 1977; Volume 4, Leroy G. Wade, Jr., 1980; Volume 5, Leroy G. Wade, Jr., 1984; e Volume 6, Michael B. Smith; March, J., "Advanced Organic Chemistry, 3a Edição", (John Wiley e filhos, Nova Iorque, 1985); bem como "Comprehensive Organic Synthesis. Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry. Em 9 Volumes", Barry M. Trost, Editor-chefe (Pergamon Press, Nova Iorque, 1993 prinking).

Exemplos

Compostos foram sintetizados como descrito e testados para atividade contra HSV-1, HSV-2, CMV, VZV, vírus vaccinia, MSV, HIV-1 e HIV-2 utilizando métodos 36 convencionais nos quais a inibição da citopaticidade induzida pelo vírus tanto em culturas de células E6SM ou HEL é testada (ver, por exemplo, De Clercq et al. "J. Infect. Dis." 141:563 (1981) e "Nature" 323:464 (1986), Snoeck et al. "Antiviral Res." 21:197 (1993), Snoeck et al. "J. Med. Vir." 42:338 (1994) e Baba et al. "Eur. J. Clin. Microbiol." 6:158 (1987)). Os seguintes vírus foram incluídos no estudo: vírus do herpes simples tipo 1 (HSV-1), estirpe KOS e estirpes B2006 e VMW 1837 deficientes em TK, HSV-2 (estirpe G), vírus vaccinia (W) e vírus da estomatite vesicular (VSV) em células E6SM; citomegalovírus estirpe AD-169 e estirpe Davis (células HEL), vírus da varicela-zóster (VZV) estirpe OKA (TK+) , YS (TK+) , 07/1 (ΤΚΓ ) e YS/R (TK-) em células HEL. As culturas celulares foram inoculadas com 100 CCID50, 1 hora de período de adsorpção do vírus. A inibição da citopaticidade induzida pelo HIV em células MT-4 ou CEM/O foi realizada como descrito em Balzarini et al., "Proc. Natl. Acad. Sei. USA" 86:332 (1989). As culturas celulares foram inoculadas com 100 CCID50 de HIV—1 (HTLV-III) ou HIV-2 (estirpe LAV-2). A inibição de transformação pelo MSV de fibroblastos C3H/3T3 murinos foi determinada de acordo com Balzarini et al., "Proc. Natl. Acad. Sei. USA" 86:332 (1989). As culturas celulares foram inoculadas com 80 unidades formadoras de foco de MSV (preparadas de acordo com De Clercq e Merigan, "Proc. Soc. Exp. Biol. Med." 137:590 (1971) .

Os resultados são apresentados nos Quadros 1-7. Nestes Quadros, 6-ciprNH-DAP, 6-cihexNH-DAP, 6-phenetNH-DAP, pirrolidina ou pirrol, pip ou piperidina, morfolino, benzhidrilamina e furfurilamina serão entendidos como, respetivamente, 2-amino-6-(N-ciclopropil)purina, 2-amino-6-(N-ciclohexil)purina, 2-amino-6-(N-[2-fenil]etil)purina, 6-(N-pirrolo)purina, 6-(N-piperidino)purina, 6-(N- 37 morfolino)purina, difenilmetilaminopurina e 6-((2-furil)metilamino)purina. As atividades antivirais são expressas como EC5o em mg/ml; NA=não ativa; ND=não determinada.

Além disso, a capacidade dos compostos selecionados para suprimirem ou inibirem a estimulação do sistema imune foi avaliada determinando a atividade metabólica dos linfócitos tratados. A suspensão em célula única dos esplenócitos foi preparada passando os baços de ratinho fragmentados em conjunto através de um crivo fino de nylon. Os eritrócitos foram removidos por meio de Tampão de lise de células sanguíneas vermelhas, da Sigma, contendo 0,83% cloreto de amónio em 0,01 M de Tris-HCl com pH 7,5. Após repetidas minuciosas lavagens (duas vezes em solução salina tamponada com fosfato, uma vez em meio RPMI-1640 incompleto), as células foram semeadas em poços triplicados de placas de cultura com fundo em U com 96 poços (Costar). O número de células foi 5xl0s/poço em 100 ml finais. Elas foram cultivadas durante 72 horas (37°C, 5% CO2, 100% humidade relativa; incubador Heraeus) tanto na ausência de qualquer mitógeno, ou na presença de PWM (1 mg/ml), ou ConA (4 mg/ml), ou LPS (5 mg/ml). Compostos teste foram adicionados 10 a 30 minutos após a aplicação de mitógenos (bem como para células não estimuladas por mitógenos) . A sua concentração final oscilou entre 0,0005 a 500 mM. Seis horas antes da colheita das células, estas foram pulsadas com 0,5 mCi de 3 H-timidina. As células foram colhidas em filtros de microfibra de vidro utilizando o Dynatech Multimash Harvestor 2000. A incorporação da timidina (cpm) foi determinada através de contagem por cintilação líquida.

Determinação de 50% de concentração inibitória (IC50). A relação entre a concentração do fármaco e a % de inibição da incorporação da timidina foi descrita pela equação de Hill na forma: % inibição = [CN/ (IC50+CN) ] xlmax (Equação 1), onde I max é a inibição máxima da incorporação da 38 timidina, IC50 a concentração induzindo 50% do máximo de inibição, e N é o designado fator "molde". O ajuste dos valores de inibição à Equação 1 e estimativa dos seus parâmetros a partir dos dados foi realizado num computador 86B da Hewlett-Packard utilizando um procedimento iterativo baseado na modificação por Levenberg-Marcquardt do algoritmo de minimização de Gauss-Newton. Estes dados, incluindo a variação observada em determinações duplicadas ou múltiplas ("m"), são reportados nos Quadros 6-8. 39

Quadro la

Atividade antiviral de 9-(R)-(2-fosfonometoxipropilo) adeninas Νβ-substituídas (derivados de PMP) 6-substítuínte HSV-l (KOS) HSV- 2 (G) HSV-l IK" B2006 HSV-l IK" VMW1831 CMV AD169 CMV Davis VZV IK+ OKA VZV IK+ YS VZV IK" 07/1 VZV IK" YS/R Vírus vaccinia Adeninas (R)-N6-substituídas Amino 150 70 >200 300 >100 >100 35 57,6 8 28 >200 Dimetilamino 2 2 2 2 0,9 0,9 0,006 0,013 0,02 0,016 20 Etilmetilamino o ,1 2 2 0,1 0,13 0,28 0,007 0,011 0,005 0,005 20 Dietilamino 7 20 20 20 3,3 3,6 0,045 0,126 0,107 0,112 20 Isobutilamino 4 20 20 20 3,6 3,6 0,021 0,079 0,083 0,041 40 Alilamino 2 2 7 2 0,9 0,8 0,016 0,032 0,011 0,015 70 Ciclopropilamino 2 2 2 0,1 0,6 0,35 0,009 0,013 0,004 0,007 20 Pírrolídíno 7 20 20 10 1,2 9 0,151 0,082 0,106 0,095 70 2- Dímetílamínoetílamíno 2 7 7 0,1 1,1 1 0,038 0,039 0,022 0,03 70 40

Quadro lb

Atividade antiviral de 9-(2-fosfonometoxipropil)-2, β-diaminopurinas N6-substituídas (Derivados de PMP) HSV- HSV-l HSV-l VZV VZV VZV VZV HSV-l CMV CMV 6-substítuínte (KOS) 2 TK" TK- AD169 Davis IK+ IK+ TK- TK- Vírus (G) B2006 VMM 83 7 OKA YS 07/1 YS/R vaccinia 2,6-Diaminopurinas (R)-N6-substituídas Amino 300 70 _ 150 NA NA NA NA NA NA 150 Dimetilamino 20 >100 >100 20 >50 >50 30 30 20 20 >100 1-Butilamino 70 >100 >100 70 >50 >50 30 50 30 35 >100 2-Butilamino 40 >100 >100 20 >50 >50 50 40 30 30 70 2-Metílpropílamíno NA NA NA NA >20 >20 >20 >20 >20 >20 NA 1-Pentilamino NA NA ND NA >50 ND >50 ND ND ND NA Ciclopropilamino 150 >400 10 150 >50 >50 15 30 37 45 300 Ciclopentilamino 150 >200 >200 >200 >50 >50 >50 >50 >50 >50 70 Ciclohexilamino 70 >100 20 20 >50 >50 30 12 40 25 >100 Pírrolídíno >200 >200 400 >200 >50 >50 5 40 >50 >50 150 Píperídíno 70 >100 >100 70 >50 >50 33 40 50 50 70 Morfolíno 70 >100 >100 70 >50 >50 >50 20 40 50 >100 Benzilamino 70 >100 70 40 >50 >50 35 25 20 20 70 Furfurilamino NA 300 ND 70 >50 ND ND ND ND ND NA 41 2- Dímetílamínoetílamíno 7 2 20 7 0,37 0,8 0,026 0,006 0,003 0,009 20 2, 6-Diaminopurinas (s)-N6-substituídas Amino 150 70 _ 150 NA NA 20 10 >40 25 _ Dimetilamino o ,1 2 2 4 1,2 0,9 0,01 0,017 0,026 0,023 20 Alilamino 7 20 20 20 6 7 0,026 0,13 0,12 0,1 70 Ciclopropilamino 2 2 2 2 1,3 0,92 0,007 0,014 0,013 0,011 20 Pírrolídíno 20 20 20 70 5 5 0,05 0,18 0,24 0,11 150 42

Quadro 2

Atividade antiviral de 9-(2-fosfonometoxietil)-2,β-diaminopurinas N6-substituídas HSV- HSV-1 HSV-1 VZV VZV HSV-1 2 TK' TK" CMV CMV vzv VZV TK" TK" Vírus 6-substituinte (KOS) (G) B2006 VMW1837 AD169 Davis TK+ TK+ 07/1 YSIR vaccinia OKA YS Amino 2 0,2 - 2 10 10 0,02 0,01 0,02 0,03 70 Dimetilamino 0,07 0,7 2 0,07 0,2 0,1 0,04 0,02 0,01 0,01 2 Etilmetilamino 0,7 0,4 2 2 0,3 0,5 0,14 0,06 0,025 0,03 7 Alilamino 0,7 0,7 4 0,7 0,2 0,3 0,17 0,11 0,1 0,06 7 1-Butilamino 2 40 2 2 6 1,5 U 1,3 2 1,3 7 2-Butilamino 7 70 7 7 9 3 1,2 3 2 4,3 10 2-Metilpropilamino 2 7 7 7 0,8 1,2 0,16 0,17 0,32 0,15 20 Ciclopropilamino 0,2 0,7 0,2 0,2 0,2 0,12 0,009 0,03 0,08 0,05 0,7 Ciclopentilamino 2 20 2 10 5 2 1 2,35 3 1,35 20 Ciclohexilamino 2 7 2 0,7 1 2,5 1 1,4 0,2 0,2 20 Pirrolidino 2 10 0,7 7 2 0,9 0,2 0,38 0,85 1 20 Piperidino 0,7 7 10 0,7 0,9 1 1,4 0,9 0,2 0,2 4 Morfolino 7 20 10 7 10 10 1,5 8 4 6 70 Benzilamino 2 40 70 2 5 10 4 2 3 >50 20 Fenetilamino 20 20 NA 20 10 15 7 10 7 3,3 70 Fenilamino 70 70 70 70 7 7 1,2 3 1 2 300 Benzhidrilamino 2 7 20 2 1,2 1 0,06 0,05 0,029 0,032 20 a-Naptilamino 150 150 NA NA >50 >50 20 50 25 ND 300 2- 7 2 10 7 0,2 0,3 0,03 0,026 0,02 0,022 20 Dimetilaminoetilamino 3- 7 7 20 20 1,3 1 0,1 0,068 0,028 0,03 70 Dimetilaminopropilamino 43

Quadro 3

Atividade antiviral de 9-(2-fosfonometoxietil)adeninas N6-substituídas 6-substituinte HSV-1 (KOS) HSV-2 (G) HSV-1 TK' B2006 HSV-1 TK" VMW1837 cm AD169 CMV Davis VZV TK+ OKA VZV TK+ YS VZV IR" 07/1 VZV TK" YSIR Vírus vaccinia Amino 20 2 _ 7 70 _ 6 10 6 10 100 Dimetilamino 7 20 70 7 9 9 1,6 3,2 0,9 4 300 Dietilamino 2 2 7 0,7 0,9 0,8 0,016 0,029 0,013 0,007 20 2-Metilpropilamino 20 70 20 20 25 13 0,65 0,9 0,27 0,2 NA Alilamino 2 7 7 2 0,5 0,5 0,032 0,02 0,016 0,01 20 Ciclopropilamino 40 150 ND 70 25 23 3,5 5 1,6 4 NA Ciclohexilamino 20 20 70 20 11 9 1,4 1,5 0,4 0,8 >400 Pirrolidino 20 70 ND 20 12 12 0,29 0,25 0,2 0,24 NA Piperidino 20 70 ND 20 15 11 0,3 0,5 0,2 0,2 NA 2- Dimetilaminoetilamino 20 70 70 20 13 13 1,5 5 2 0,2 >200 44

Quadro 4

Atividade anti-retroviral de 9-(2-fosfonometoxietil)purinas (derivados de PME) 6-Substituinte MSV HIV-1 HIV-2 MT-4 CEM MT-4 CEM Derivados de adenina N6-substituída Amino 1,14±0,04 >4 Dimetilamino >100 85+21,2 Dietilamino >4 >4 Alilamino 8 + 5, 7 5 + 1,4 Ciclohexilamino >100 >100 2-Dimetilaminoetilamino >100 75+35,4 Derivados de 2,6-diaminopurina N6-substituída Amino 0,60±0,33 2,67+1,53 ND ND ND Dimetilamino 0,24±0,07 0,4+0,01 0,7+0,1 0,4+0,05 0, 8 Etilmetilamino 0,26+0,17 0,19+0,16 0, 55 + 0,35 0,11+0,04 0, 2 + 0 Alilamino 0,14+0,11 >100 >0,032 >0,032 1-Butilamino 4,08+2,12 2,15+2,13 2 2,3+2,3 1,4+0,85 2-Butilamino 3, 2 1,97+0,08 3 2,0+0,2 3 2-Metilpropilamino NA >0, 16 0, 5 >0, 16 0, 3 Ciclopropilamino 0, 11 0,11+0,05 0, 16 0,1+0,03 0, 16 Ciclopentilamino 2,62+1,77 >0, 8 2 >0, 8 1,75+0,35 Ciclohexilamino 0,26+0,6 5, 7 + 4 20 4, 8 + 4 >20 Pirrolidino 0, 75 1,88+0,25 2,17 2 + 0, 3 1,65+1,2 Piperidino 0,75+0,6 3,0+1,3 >4 3,0+1,3 >4 Morfolino 3,4+2,3 15+0,2 >20 16+0,3 >20 Benzitamino 1,5+0,94 50 + 12 >20 49+21 >20 Fenetilamino 21,8+7,5 9,9+0,9 16+5,7 11,9+2,8 12,5+3,5 Fenilamino 4,68+0,79 56,3+14,1 63,3+32,1 35,1+22,3 35 + 7 α-Naptilamino 47,6+33,1 90,0+17,3 >100 68,5+2,5 80 + 28 2-Dimetilaminoetilamino 0,20+0,02 3,25+0,75 5,5+2,1 2,39+0,77 2 + 0, 7 3- Dimetilaminopropilamino 0,40+0,07 6,12+3,73 13,0+6,6 7,03+4,9 4 + 0 45

Quadro 5

Atividade anti—retroviral de 9-(R)-(2-fosfonometoxipropilo) purinas N6-substituidas (derivados de PMP) 6-Substituinte MSV HIV-1 HIV-2 MT-4 CEM MT-4 CEM Derivados da adenina N6-substituída Amino 0,95±0,23 1,91±0,41 1,69±0,35 Etilmetilamino 5,5±2,1 4 Alilamino 12±2,8 12 Ciclopropilamino 10±0 9,5±3,5 2- Dimetilaminoetilamino >4 >4 Derivados da 2,6-diaminopurina N6-substituida Amino 0,073±0,02 0,293±0 _ 0,236±0,03 _ Dimetilamino 3,25+1,44 2,3+0,2 10 4,2+2,8 9 + 1, 4 1-Butilamino 3,27±1,3 13.1±4,3 10 9,8±4,9 10 2-Butilamino 3,5±0,3 30±19 >100 25±15 >100 2-Metilpropilamino 22,7±12,7 57,4±17,8 5,5±2, 1 55,9±14 5,5±2,1 1-Pentilamino 5,14 37,4±13 20 33,7±5,8 15±7,1 Ciclopropilamino 1,09±0,24 4,15±3 2 3,2±1,6 2,5±0,7 Ciclopentilamino 3,78±0,08 3,4±0,4 4,5±3,5 5,8±2,3 8,5±2,1 Ciclohexilamino 1,4±1,2 8, 0±2 20±17 7±2,6 13±6 Pirrolidino 5,09±1,65 36,9±5,7 50±14 47,7±7 50 Piperidino 12,6±10 >100 >100 >100 >100 Morfolino 6,1±2,3 >100 >100 >100 >100 Benzilamino 0,3±0,11 10,3±1,4 11±6 8±2,9 12,5±3,5 Furfurilamino 2±1 10 7,0±4,2 7,74±1,33 6,0±5,7 2- Dimetilaminoetilamino 0,77±0,34 6,23±4,48 7 4,65±2,59 3,3±1,1 46

Quadro 6

Composto Atividade antiviral (pg/ml) Inibição da imunoestimulação HSV— 1 HSV— 2 CMV ADI 6 9 CMV Davis VZV+ OKA vzv- 07/1 ec50 (nM) EC50 (nM) PMEDAP 2 0,2 10 10 1 3 0,23±0,02 0, 23 PME-6- BuNH-DAP 2 40 6 1, 5 1,3 1,3 2, 5 PME-6-(2-bu)NH-DAP 7 70 9 3 1,2 2 1,07±0,20 1,07 PME-6- IsobuNH- DAP 2 7 0,8/1, 1 1,2/2,4 0, 16 0, 32 0,24±0,003 0,24 PME-6- alilNH-DAP 0, 7 0, 7 0,28/0,2 0, 3/0,85 0,17 0,1 0,0098±0,0011 0, 01 PME-6- ciprNH- DAP 0, 2 0, 7 0, 2 0, 12 0, 009 0, 08 0,048±0,001 0, 048 PME-6- cihexNH- DAP 2 7 1 2, 5 1 0,2 2,65±0,11 2,65 PME-6- FenetNH- DAP 20 20 10 15 7 7 7,52±0,34 7, 52 PME-6- Me2NEtNH- DAP 7 2 0, 2 0, 3 0, 03 0, 02 0,35±0,02 0,35 PME-6- Me2NPrNH- DAP 7 7 1,3 1 0, 1 0, 028 0,48±0,14 0, 48 PME-6- Me2N-DAP 0,07 0, 7 0, 2 0, 1 0, 04 0, 01 0,43±0,04 0, 43 47

Composto Atividade antiviral (pg/ml) Inibição da imunoestimulação HSV— 1 HSV- 2 CMV ADI 69 CMV Davis VZV+ OKA vzv- 07/1 ec50 (nM) EC50 (nM) PME-6-Et, MeN-DAP 0, 7 0,4 0,3 0, 5 0, 14 0, 025 0, 17±0,02 0,17 PME-6- pirrol-DAP 2 10 2 0, 9 0, 2 0, 85 0, 42±0,06 0, 42 PME-6- pipN-DAP 0, 7 7 0, 9 1 1, 4 0, 2 0,46±0,03 0, 46 PMEA 0,72+0,11 0, 72 PMEalilNHPu 2 7 0, 5 0, 5 0, 032 0, 016 1,56+0,13 1, 56 PME-6- ciprNHPu 40 150 25 23 3, 5 1,6 40 PME- Et2NPu 2 2 0, 9 0, 8 0, 016 0, 013 1,09+0,07 1, 09 PME-6- pirrolNPu 20 70 12 12 0, 25 0, 24 25 PME- PipNHPu 20 70 15 11 0, 3 0, 2 23,60+1,55 23, 6 BisPOM- PMEA 0,0020+0,0004 0, 002 48

Quadro 7

Composto Atividade antiviral (pg/ml) Inibição da imunoestimulação HSV— 1 HSV— 2 CMV ADI 6 9 CMV Davis VZV+ OKA vzv- 07/1 ec50 (nM) ec50 (nM) PMEMAP 70 >400 >100 >100 60 27 10,16±0,24 10, 16 (R)—PMPDAP 300 70 NA NA NA NA 8,00±0,24 8 (R)-PMP-6-ciprNH-DAP 150 >400 >50 >50 15 37 17,90+1,12 17, 9 (R)-PMP-6-Me2NEtNHDAP 7 2 0,37 0, 8 0, 026 0, 004 0,38±0,02 0, 38 (R)-PMP-6-BuNHDAP 70 >100 >50 >50 35 20 81,3±3,89 81,3 (R)—PMP— CiprNHPu 2 2 0,6 0,35 0, 009 0, 004 0,74±0,07 0, 74 (R)- PMPalilNHPu 2 2 0, 9 0, 8 0, 016 0, 011 1,26±0,09 1, 26 (R)-PMP-6-ÍBuNHPu 4 20 3,6 3, 6 0, 021 0, 083 10 (R)-PMP-6-pirrolNPu 7 400 7, 2 9 0, 151 0, 106 8 (R)-PMP-6-Et2N-Pu 7 20 3,3 3, 6 0, 045 0, 107 13 (R)-PMP-6-Me2N-Pu 2 20 0, 9 0, 9 0, 006 0, 02 2,2 (R)-PMP-EtMeNPu 0, 7 2 0, 13 0,28 0, 007 0, 005 0,51±0,09 0, 51 (R)—PMP— Me2EtNPu 2 7 1, 1 1 0, 038 0, 022 1,31±0,19 1, 31 (S)—PMPA NA NA >100 >100 >40 >40 496±15,6 496 49

Composto Atividade antiviral (pg/ml) Inibição da imunoestimulação HSV— 1 HSV- 2 CMV ADI 6 9 CMV Davis VZV+ OKA vzv- 07/1 ec50 (nM) ec50 (nM) (S)-PMP-DAP 150 70 NA NA 20 25 5 (S)-PMP-6-alilNH-DAP 7 20 6 7 0, 026 0, 12 7 (S)-PMP-6-ciprNH-DAP 2 2 1,3 0, 92 0, 007 0, 014 1, 7 (S)-PMP-6-Me2N-DAP 0, 7 2 1,2 0, 9 0, 01 0, 026 2 (S)-PMP-6-pirrolN-DAP 20 20 5 5 0, 05 0, 24 15

Quadro 8 VALORES MÉDIOS ESTATÍSTICOS DE SUPRESSÃO DE ATIVIDADE IMUNOESTIMULATÓRIA EM DIVERSOS GRUPOS ESTRUTURAIS DE ANÁLOGOS DE NUCLEOTÍDEO ACÍCLICOS GRUPO ESTRUTURAL n ECso (nM) Δ A 6 15,34±10,1 0,72-40 B 13 0,70±0,56 0,008-2,6 C 8 4,63±3,08 0,5-13 D 4 26,9±21,3 0,38-81 F 5 6,14±3,23 1,75-15 50

51

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição us 4659825 A [0002] us 4808716 A [0002] us 4724233 A [0002] us 5142051 A [0002] [0003] us 5302585 A [0002] us 5208221 A [0002] us 5352786 A [0002] us 5356886 A [0002] EP 269947 A [0002] EP 481214 A [0002] [0006] EP 630381 A [0002] EP 369409 A [0002] EP 454427 A [0002] [0004] EP 618214 A [0002] EP 398231 A [0002] WO 9507920 A [0002] [0009] wo 9403467 A [0002] [0007] EP 468119 A [0005] EP 434450 A [0010] EP 421819 A [0010] US 5276143 A [0039] [0043] WO 9214450 A [0063] US 5098443 A [0063] US 4740365 A [0063] US 5141752 A [0063] WO 9222639 A [0069] [0072] [0008] [0076] [0072] 52 • ΕΡ 632048 A [0081]

Literatura não relacionada com patentes, citada na descrição • Daluge et al. 34th Interscience Conference on An-timicrobial Agents and Chemotherapy, 04 October 1994 [0010] • Cihlar et al. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1995, vol. 39 (1), 117-124 [0011] • Holy et al. ACS symposium series, 1989, vol. 401, 57- 71 [0012] • Holy. Kemija u industriji, 1989, vol. 38 (10), 457-462 [0012] • Otvos et al. Nucl. Acids Res, 1987, vol. 15, 1763-1777 [0039] • Maggio. Enzyme-Immunoassay. CRC, 1988, 71-135 [0042] de Vries, E. et al. Mol. Biochem. Parasitol, vol. 47, 43-50 [0046] 1991, Kaminsky et al. J. Parasitol, 1994 30 [0046] , vol. 80 (6), 1026- Uhlmann et al. Chemical Reviews, 543-553 [0077] 1990, vol. 90 (4) , Mazur et al. Tetrahedron Letters, 1984, vol. 40 (20) , 3949-3945 [0077] • Liotta et al. Compendium of Organic Synthesis Methods. John Wiley & Sons, vol. 1 [0082]

• IanT.Harrison ;ShuyenHarrison.COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHESIS METHODS [0082]

• IanT.Harrison ;ShuyenHarrison.COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHESIS METHODS. 1974, vol. 2 [0082] • Louis S. Hegedus ; Leroy Wade. COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHESIS METHODS. 1977, vol. 3 [0082]

• Leroy G. Wade, Jr. COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHESIS METHODS. 1980, vol. 4 [0082]

• Leroy G. Wade, Jr. COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHESIS 53 METHODS. 1984, vol. 5 [0082] • Michael B. Srnith. COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHESIS METHODS. vol. 6 [0082] • March, J. Advanced Organic Chemistry. John Wiley &

Sons, 1985 [0082] • Barry M. Trost. Comprehensive Organic Synthesis. Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry. Pergamon Press, 1993, vol. 9 [0082] • De Clercq et al. J. Infect. Dis., 1981, vol. 141, 563 [0083] • Nature, 1986, vol. 323, 464 [0083] • Snoeck et al. Antiviral Res., 1993, vol. 21, 197 [0083] • Snoeck et al. J. Med. Vir., 1994, vol. 42, 338 [0083] • Baba et al. Eur. J. Clin. Microbiol., 1987, vol. 6, 158 [0083] • Balzarini et al. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1989, vol. 86, 332 [0084] [0085] • De Clercq ; Merigan. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 19 71, vol. 137, 590 [0085]

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto tendo a estrutura (2)

em que Y é independentemente -OH, -0R3, -OCH (R16) OC (0) R3, um monofosfato, um difosfato, um amidato de aminoácido, um amidato de polipeptídeo, -NHR3, ou -N(R3)2; R3 é independentemente C1-C15 alquilo, arilo, C2-C15 alcenilo, C2-C15 alcinilo, alcarilo, alcinilarilo ou alcenilarilo; sendo ditos qrupos não substituídos ou substituídos por C1-C6 alcoxi, Ci-Cô carboxilalquiléster, halo, carboxi, hidroxilo, ciano, nitro, N-morfolino, ou amino; e/ou tendo ditos grupos -CH2- substituído por NH, S, ou 0; R2 e R2 são independentemente halo, NH2, X ou H, mas pelo menos um de R2 e R2’ é X; R16 é H ou R3; e X é - (CH2)m(0) n(CH2)mN(R10) 2 em que m é 0-2, n é 0-1, e R10 independentemente é - H; ou - ciclopropilo, C2-C15 alcenilo, C2-C15 alcinilo, ou Ci-C6-alquilamino-Ci-C6 alquilo; ou -C2-C15 alquilo, C3-C15 alcenilo, C3-C15 alcinilo, Ci-C6-alquilamino- C1-C6 alquilo, C6-C15 heteroalquilo, ou C3-C6 heterocicloalquilo, em que o metileno na fração alquilo não adjacente a N6 foi substituída por -0-; opcionalmente um dos grupos R10 precedentes é substituído com 1 a 3 halo, CN ou N3; mas pelo menos um grupo R10 não é H; e Z é N ou CH, desde que o núcleo heterocíclico varie da 2 purina por nao mais de um Z; E é -(CH2)2-, -CH (CH3) CH2-, -CH (CH2F) CH2-, -CH (CH20) ch2-, - CH (CH=CH2) CH2-, -CH (C=CH) CH2-, -CH (CH2N3) CH2-, CH (R1 2) OCH (R1 )-, -CH(R9)CH20- ou -CH(R8)0-, em que a ligação do lado direito está ligada na posição 9 da purina, monoazapurina ou monodeazapurina heterociclo e em que Y e o grupo hidroxilo do -CH (CH2OH) CH2-, ou um grupo hidroxilo presente em R1, R8, ou R9 são unidos para formar um anel com 6 membros; R1 e R1 são independentemente H, Ci-C6 alquilo, Ci-C6 hidroxialquilo, ou C2-C7 alcanoil; R8 é H, Ci-Cô alquilo, Cx-Cê hidroxialquilo ou Ci-Cõ haloalquilo; e R9 é H, hidroximetilo ou aciloximetilo; e os sais terapeuticamente aceitáveis dos mesmos; com a ressalva de que, quando E é -CH(CH3)CH2- and R2 é NH2, então X não é ciclopropilamino. 2. 0 composto da reivindicação 1 em que pelo menos um Y é OR3 e R3 é arilo, orto-(Ci-C6 alcoxiarilo) , -C6H4C (0) 0 (C2-C6 alquilo), ou -0CH20C(0(Ci-C6 alquilo ou arilo). 3. 0 composto da reivindicação 1 que tem a configuração (R) num átomo de carbono quiral E. 4. 0 composto da reivindicação 1 que tem a configuração (S) num átomo de carbono quiral E. 5. 0 composto da reivindicação 1 em que R10 é C3-C8 alcinilo ou alcenilo que não é substituído ou é substituído com 1 a 3 halo, CN ou N3. 1 0 composto da reivindicação 1 em que R10 é -CH2CH=CH2, -CH(CH3)CH=CH2, -CH2C(CH3)=CH2, ou -CH2CH=CH(CH3) . 2 0 composto da reivindicação 1 em que um grupo R10 não é 3 Η. 8. Ο composto da reivindicação 1 em que ambos grupos R10 não são H.

9. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-8 para utilização no tratamento de infeções virais.

10. Um composto da reivindicação 9 em que a infeção virai é HSV-1, HSV-2, CMV, VZV, vírus vaccinia, ou HHV-6.