PT799037E - Métodos e composições para tratar da rinite alérgica e outros distúrbios usando descarboetoxiloratadina - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

MÉTODOS E COMPOSIÇÕES PARA TRATAR RINITE ALÉRGICA E OUTROS DISTÚRBIOS USANDO DESCARBOETOXILORATADINA

Os métodos da presente invenção compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um derivado metabólico da. loratadina. Quimicamente, este derivado é 8-cloro-6,11-dihidro-l1-(4-píperidilideno)-5H-benzo [5,6]ciclohepta[1,2-b] piridina e é conhecido como descarboetoxiloratadina (DCL). Este composto foi especificamente descrito em Quercia, et al., Hosp. Formul., 28: 137-53 (1993) e na Patente Estadunidense n° 4,659,716. A loratadina é um antagonista da proteína receptora da histamina H-l. Os receptores da histamina H-l e H-2 são duas formas bem identificadas. Os receptores H-lsão os que medeiam as respostas antagonizadas pelas antihistaminas convencionais. Os receptores H-l estão presentes, por exemplo, no íleo, na pele, e no músculo liso bronquial do homem e de outros mamíferos. h loratadina liga-se preferencialmente a receptores H-l periféricos em vez de receptores centrais. Quereis et al., Hosp. Formul. 28: 137-53 (1993). Verifícou-se que a loratadina é um inibidor maís potente de broncospasmos induzidos pela serotonina em cobaias do que a terf enadina. Id. 137-38. Verificou-se que a sua actividade anti-alergénica em modelos animais é comparável à da terfenadina e astemizole. Id. 138. No entanto, usando testes modelo em animais, num base de miligrama por miligrama, verificou-se que a loratadina é quatro vezes maís potente que a terfenadína na inibição de broncospasmos alérgicos. Id. Mais ainda, a actividade anti-histamínica da loratadina foi demonstrada em seres humanos pela avaliação da capacidade da droga de suprimir a formação de 'wheal'. id. Testes clínicos de eficácia indicaram que a loratadina tpOSSo: a o o e ; i7i átrios :l ϊ'βςϊο de a medi. arias ess.rio gástrico em η·'···;··'··· s e si ao os ae Kesifsrcs , d, i cr as aos; .ao ocsdiico r moas i si o pela ias da ir - .los átrios. o e 1 c íojaa SOm a H- A loratadína é bem absorvida mas é extensamente metabolizada. Hilbert et al., J. Clin. Pharmacol. 27: 694-98 (1987). 0 principal metabolito que foi identificado, DCL, é referido como farmacoloqícamente activo. Clissold, Drugs, 37: 42-57 (1989). A W085/03707 divulga que o DCL e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis têm propriedades anti-histamínicas em ratos e não têm substancialmente propriedades sedativas nestes animais. Também foi divulgada como tendo actividade anti-histaminica na Patente Estadunidense n° 4,659,716. esta patente recomenda uma dose oral no intervalo de 5 a 100 mg/dia e de preferência de 10 a 20 mg/dia. Estudos in vitro divulgados em Berthon et al., Biochem Pharmacol 47: n° 5 789-794 (1994) indicam que a inibição da libertação da histamina é dez vezes maior para o DCL que para a loratadína. A eficácia da loratadína no tratamento da rinite alérgica é comparável à da terfenadina. Querela et al., Hosp. Formul. 28: 137, 14 1 (1993) . A loratadína tem uma acção maís rápida que a acção do

Id.

Clissol et al., Drugs 37: 42, 50-54 (1989) descreve estudos que mostram a loratadína como sendo eficaz na utilização em rínites sazonais e perenes, constipações (com pseudoefedrina) e urticária 2 a?:;: na cod; :o n r-

Ui: 'icvimen -a aa a ar a a a. ) novíícenb o. a. s s o , ai acèta ;J L J. .1 I; i < t. .! ai i. 3 t u t b 1 0 3 J-: 5 Γ α aadU ] â a; 0-'')Ç\k:' 3 d :'.;OU troo peoue:i- a i a - a-a r ·. a pequenos distúrbios dos vasos associados à diabetes mellitus está divulgado na Patente Estadunidense n° 5,019,591.

Também foi sugerido que a loratadina, em combinação com agentes anti-inflamatórios não-esteróides ou outros analgésicos não narcóticos, é útil no tratamento da tosse, constipações, sintomas como os das constipações e/ou gripe e do desconforto, dores, cefaleias, febre e mal-estar geral associado a estas condições. Estas composições usadas nestes métodos de tratamento dos sintomas acima descritos podem cpcionalmente incluir um ou mais componentes activos incluindo um descongestionante (como a pseudoefedrina), um supressor da tosse/ anti-tússico (como o dextrometorfano) ou um expectorante (como o guaifenesina}. 3 pro""oca:v·. efe lios :s3..:ncá i ' - 5. o esta ’ - a a, rn en caie ra d J a cr:, a da radia.^, r, OCSO í. C'íu::. a ? : 13 '7 , í i .1 r. -a q -

Sribe-se aae a-a o seca tocos, in , aroro.r-a:: graves aar s a f e i o o s s e c a r. o ic QT prc Lo negado c Lrcr 1 ceie, a,-a a a- r ϊ t r r r. u I a. r e car r a r ai i. a s nrcs ve n ‘aci. ca )i ar ea ou ' toraarie u c s o I e, ; - ·. s ec anca a r ca aasoc iados com cão esc ao 1iniradoc a, e a r d i o c a s e ora e a s de píarue' , Knoaues, ui r ru::; a a a icrrnal Hosp. Gharu. ti: i], d'7 '133':); Crase, Br.G ish dedicai Jcc ord f 292; rrC í 1916] ; S:uroria et a2;.. , 2 anceo, 2; 324 (1988) e Desconhecido, Síde Effects of Druqs Annual, 12: 142 e 14: 135 .

Quercia et al., Hosp. Formul. 28: 137,142 (1993) notaram que foram divulgados efeitos secundários cardiovasculares graves, incluindo ' torsades de pointes' e outras arritmias ventriculares, em pacientes "saudáveis" que receberam terfenadina ao mesmo tempo que quetoconazole ou eritromiema.

Quercia et al,, também referem que se divulgaram arritmias com a administração concomitante de astemizole e entromicína ou eritromicina com quetoconazole, Assim, ele avisa contra a utilização concomitante de loratadina com quetonazole, itraconazole e rracrolidas como a eritromicina. 4 :1: .1 ¢: y es ai,, J. o: ?ecictK;3. Vol , ICO dm : ; ' bs::: ícm ss ra11 on , JA11A Vo ~ 5m : 0 0 5 o e h L.eo: leni-o i:oo: prov; oro ves pro j:o o-i: ::eo:o 5 ove:: :: opacò: 1:5::¾ alei. .3 - / I. O: 5 d j < .0 ;’ ( A ,,

Fora iléin bisam;, ::a5.be;:i se sabe uue o aieco 5.ro t nanicsns irocar:ero coo o cirocrooo P45C 5 '-is , : ::;5 t sbo0ene:' de ao::ι--1:1 o- Oar ’ J ?- - - 0 leciatr....... miam 1 _ , 0: ^eifenelioa. Devido · - ;c:L. o - : oraraacna, nó um grande to 5 1 -.--5 o ler05:::::5 ::: 05 oiiooo: ise: - m. o:: olo s se sabe inibirem o citocromo P450, como por exemplo mas nâo estando intraconazole e limitado ao, quetoconazole,

Err. Brandes et al., Câncer Res. (52) 3796-3800 (1992), Brandes, mostrou que a propensão das drogas para promover o crescimento de tumores in vivo está correlacionada com a capacidade para inibir a estimulação da concanavalina A da mi togénese dos linfócitos. Em Brandes et al. , J. Nat"l Câncer Inst. 86:(10) 771-775 (1994), Brandes estudou a loratadina num ensaio in vitro para predizer a potenciação do crescimento de tumores in vivo. Ele verificou que a loratadina e o astemizole foram associadas ao crescimento de tumores melanoma e fibrosarcoma. A dose para a loratadina neste estudo foi de 10 mg/día.

Nenhuma das referências anteriores ensina ou divulga os métodos da presente invenção que compreende a administração de DCL a um ser humano ao mesmo tempo que evita efeitos secundários adversos associados à administração de outros antí-histamínicos não sedativos; nem as referências por si só ou em combinação sugerem esses métodos. Assim, é particularmente desejável encontrar métodos 5 : : D CL é ....... · -C Ce ti.nize a.éreics em cucaγχϊ, eo mesmo ;:.e;-po ecitm ~ 3 coe secundários sove: er;a baerte a adc 11 e i s tr 3 c a o Ce cuÍrce ccíreoíecs ca c.b o e.ices rec seoar : vcs como e ’ο;? eei: , - emito! 3 les ui sitos socunoasios adversais ire: ’.ie:e das - - a / árri^iTiiea cm: rd jacas, ae s : urbe os Ce o and: ; :.·> ,· miga, ceiaicias, distúrbios qaaaea^eer ea; is, apeCate, amime n. to ae peco, bece seca, o oost j caçãc cu a i n i : e a lí-íjí ea ao oiesinc tampe aue 10-0. ta a proa ca t oss a .ioratddjna e ou: oo anti-hms - iccs

Também se verificou que o DCL é pelo menos vinte vezes mais potente no receptor da histamina que a loratadina. De acordo com a presente invenção, providencia-se a utilização do DCL ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável na preparação de um mecicamento para ser usado no tratamento da rínite alérgica em humanos, sendo que o referido medicamento deve ser administrado numa quantidade suficiente para providenciar uma dose diária de 0,2 mg a 1 mg de DCL ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Verificou-se que o DCL é cinco a sete vezes menos activo na promoção de tumores do que a loratadina. Assim, numa forma de realização da invenção, o medicamento é administrado a um ser humano que tenha uma propensão mais elevada que o normal para ou tenha incidência de cancro. 6 are ..... v Ι'Ί ‘ 1 1 Ο U oi 10.10;:; : , 's z z. n d c · ;., a , .., ,. - - e o u c r o .¾ . . i ' emiu e o retenda ar - · .arr cí aaacic concorrente de iorutaaina rn cie - cnn- ris .ocos não sesia svos co;c r .ceCorrae cioua . ãco.c:o coroe fere a de ~ ac ria i;'r e ra cr ca o eotio a e a que :,ac sl_ ..." i¥'··'·1 ' i.ndc, nas '' esonac - saco a, : lonacoJe, em ec e carros . conhecidos no oeío, A ioratadina e outros antx-histamínicos não sedativos têm actividade antí-histamíníca e providenciam terapia e uma redução dos sintomas numa variedade de condições e distúrbios relacionados com a rinite alérgica e outros distúrbios alérgicos, diabetes mellitus e outras condições; no entanto, estas drogas, ao mesmo tempo que oferecem a expectativa da eficáccia provocam graves efeitos secundários, A utilização do DCL tem como resultado uma definição ma is ciara da eficácia em relação à dose, diminuição dos efeitos secundários e assim sendo, um melhor índice terapêutico. E Assim, mais desejável usar o DCL do que a loratadina ou outros anti-hxstamínicos não sedativos. 0 termo "efeitos adversos" inclui, mas não está limitado a, cardíacas, distúrbios de condução cardíaca, estimulação do apetite, aumento de peso, sedação, cefaleias, distúrbios gastrointestinais, boca seca, e obstipação ou diarreia. 0 termo "arritmia cardíaca" inclui, mas não está limitado a, taquiarritmias 'torsades de pointes', e fibrilação ventricular. 7 Ο ·.s i 1 0 Ooibi c- C I- I d ; ; 0 sá -:0, í.)í“S;50dí: i COol mi.3. X 8 (ip: CX π \ Ί Ο .'.-5 , Ο ·.s i 1 0 Ooibi c- C I- I d ; ; 0 sá -:0, í.)í“S;50dí: i COol mi.3. X 8 (ip: CX π \ Ί Ο .'.-5 , is com a r unção n erários. ou remi ; . ! : 3 e c SDc! m mamam, s dosais ma i; aeru. e sei com e os 3.3 eesposa os com. ....o : salém ou ao, deve- conta que c guando • rrcerromper, ou terminar a o om a r e s p c s f 3. i n d i v i d u a i do pa cienre „ ra os i, 0 s,

Pode-se usar qualquer via de administração adequada pa fornecer ao paciente uma dose eficaz de DCL de acordo com métodos da presente invenção. Por exemplo, pode-se usar a via ora rectai, parenteral, transdérmica, subcutânea, intramuscular, outras. As formas de dosagem incluem comprimidos, dispersõe suspensões, soluções, cápsulas, adesivos, e outras.

As composições farmacêuticas usadas nos métodos da presente invenção compreendem DCL, o metabolito derivado da ioratadina como ingrediente activo, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e também pode conter um veículo farmaceuticamente aceitável, e opcionalmente, outros ingredientes terapêuticos. 0 termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a um sal preparado a partir de ácidos ou bases não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis incluindo ácidos ou bases inorgânicos ou ácidos ou bases orgânicos. Exemplos destes ácidos inorgânicos são o hidroclórico, hidrobrómico, hidroiódico, sulfúrico e fosfórico. Os ácidos orgânicos podem ser seleccionados, por exemplo, a partir das 8 . * 1 3ηι ίr =::, 1;<- /; so, 5 ’ - :.3/:, '3, 35 1333 3 3 33;:, S 3 5 5:5 5. I 3 "3 , 3 I 3:535.:.,33 3 , 5:33 3.3 tapem ; 15 Ο Í5 Ο 5 3 1 ·3 3 5· 1. 3 555 ,33 3 5.13 3 1 55.· .5: 3 555 5 6 :5-55555533.3 , 555533 3 0» ο: 5003, 3 5 Ç .3“53ί, Ο , 3 -, 3 Ο, .5 :,35 .5 \) 3 5 35,.·.: , 363 53.:00:05 0.3) 6 5 5 553 5 5.535 0 53::3 5 0 3 5 3)6 5-3.:5 5 6:3.5 seleccionadas, por exemplo, a paroír do N,N-dibenziletilenediamina, cloroprocaína, colina, dietanoiamina, etilenediamina, megiumaína (N-metilglucaminao), lísina e procaína.

As composições para serem usadas nos métodos da presente invenção incluem composições como suspensões, soluções e elixires; aerossóis; ou veículos como amidos, açúcares, celulose microcristalina, diluentes, agentes de granulação, lubrificantes, agentes de ligação, agentes desintegrantes, e outros, no caso de preparações sólidas orais (como pós, cápsulas e comprimidos), sendo que as preparações sólidas orais são preferíveis em relação às preparações liquidas orais. As preparações sólidas orais mais preferidas são os comprimidos.

Devido à sua facilidade de administração, os comprimidos e as cápsulas representam a forma unitária de dose oral mais vantajosas, sendo que neste caso se usam veículos farmacêuticos sólidos. Se se desejar, os comprimidos podem ser revestidos por técnicas padrão aquosas ou não aquosas.

Para além das fornas de dosagem comuns acima referidas, o composto a ser usado nos métodos da presente invenção também podem ser administrados por meios de libertação controlada e/ou aparelhos 9 ο ~ ι e s c r i i o 5 n 3 1 P 313 n c e s J , :;jc, 3 0 5 ; 1, 3 9 8 , í 2 3 o 4 , r i far^ocêuticâs a -_ · aa 3 00 0113 0 3 II3 3' II " Ο V" 3 I ’ III 3 3 3· 3 3 3IIII I c; GS. I . 131.,0 3 33 3 0.1 3 O 3 3 ;Oi 3 ,103·; i ia 3, 0 3 oomnr isoíc 3, 00 iioiys ae leoooàio, -o: · ori ccitooii una quantidade pré-ceterseiadi 00 ingrediente ao , ria faraa ao co co a tarai loa, ou cotio raia aoiacdo ou ama luapensác num iiqai.oo aquoso, oura J.i quedo nao aiuosc, riorua etiuisãc ítioo^-erra-aqoa 00 ooaa emulsão líquida água-em-óleo. Estas composições podem ser preparadas por qualquer um dos métodos farmacêuticos, mas todos os métodos incluem o passo de associar o ingrediente activo com o veiculo que é constituído por um ou mais ingredientes necessários. Em gerai, as composições são preparadas misturando uniformemente e infimamente o ingrediente activo com veículos líquidos ou com veículos sólidos finamente divididos ou ambos, e depois, se for necessário, moldando o produto de modo a obter a apresentação desejada.

Por exemplo, um comprimido pode ser preparado por compressão ou moldagem, opcionalmente com um mais ingredientes acessórios. Os comprimidos feitos por compressão podem ser preparados comprimindo numa máquina apropriada o ingrediente activa numa forma de fluxo livre como pós ou grânulos, opcionalmente misturados com um agente de ligação, lubrificante, diluente inerte, agente tensioactívo ou de dispersão. Os comprimidos feitos por moldagem podem ser preparados moldando numa máquina apropriada uma mistura do composto em ρο humedecido com um diluente liquido inerte. Desejavelmente, cada comprimido contém de cerca de 0,1 mg a menos de cerca de 10 mg do ingrediente activo, e cada hóstia ou cápsula contém de cerca de 0,1 mg a menos de cerca de 10 mg do ingrediente activo, isto é, DCL. 10 A invenção é em seguida definida por referência aos seguintes exemplos que descrevem detalnadamente a preparação do composto e as composições usadas na presente invenção, bem como a sua utilidade. IXEMP] 4.1 exemplo 1: Preparação da loratadina e dos seus metabolitos. A loratadina pode ser sintetizada pelos métodos divulgados na Patente Estadunidense n° 4,282,233. Os metabolitos são preparados de igual modo, pelos passos de reacção convencionais nestas técnicas, tal como descrito Patente Estadunidense n° 4,659,716. Um método comum para preparar DCL é fazer refluir loratadina na presença de hidróxido de sódio e etanol como está representado em seguida.

COj& H ΟΑΜΉΝΑΟΙΤ LORATADINA

DCL rxtracçao de Comprimidos de Claritína Comercialmente Disponíveis

Os comprimidos de loratadina foram diluídos com água e clorofórmio. A mistura foi agitada, depois filtrada através de celite, lavada com clorofórmio até o filtrado não conter 11

ic j 2Γ 31 acima . A camada aquo sa separa foi ex _ o r o f 6 rmio Ol ias vezes. A camada de i_ s se orgânica con íDiricidâ SOÍ- ± avada com ác ]ua, agua salgada e seco cr obre sulfato de sódio. 0 sol vente Θ ' mpo rado d e modo a obter 1 oratadina pu ra na forma de um só _ i d O :ao ai jratad: A loratadina (4,0 g) foi de sódio (5,9 g) em 280 mi de etano( agitada sob refluxo durante quatro dias. A mistura foi arrefecida e concentrada de modo a remover o etanoi. 0 resíduo foi diluído com água e a camada aquosa foi extraída com cloreto de metileno cinco vezes. A camada de fase orgânica combinada foi lavada com água, água salgada e seco sobre sulfato de sódio. O solvente foi .ciondoa a uma soa ibsoiuto ao cie moroxioo 3. :oi iporaoo d€ noot 8( de derivado (ou metabolito) loratadina puro na forma de um sólido pálido 4.2 Exemplo 2;

Activídade anti-histamínica

As actividades anti-histamínicas da loratadina e do DCL foram comparados em íleos de estirpes de cobaias isoladas com contracções devidas à histamína. Esta preparação é geralmente aceite pelos técnicos desta área como previsão da sua eficácia como receptores da histamína H-l periférica.

Chelmsford, MA) . Os tecidos foram suspensos em câmaras de tecidos 12 contendo 4u mi ae soiuçao de Tyrode arejado com 95% de oxigénio e 5% de dióxico de carbono a 35°C. A solução de Tyrode continha (em mM) 137 NaCl, 2,7 KC1, 2,2 CaCij, 0,025 MgCl:, 0,4 NaHP04,ll,9 NaHCOj e 5,5 de glicose. Registaram-se as contracções em respostas à hístamina com um transdutor isotónico (Modelo 357, Harvard Apparatur Company, South Natick, MA) usando um polígrafo de tinta (Modelo 7, Grass Instrumento Company, Quincy, MA) . Manteve-se a tensão de um grama em todos os tecidos em todos os momento. iaa exoerienc: removeram-se três ou quatro peças de lec .dos individuais um único animal, suspendeu-se em câmaras e deixou-se a equilibrar com a solução de banho durante uma hora antes da administração de qualquer droga. Nas primeiras quatro experiências em que os tecidos foram expostos à hístamina em concentrações de lxlCT1x10'° e lxlCT5 mol/1, a hístamina a 1x10“° mol/1 foi a que produziu mais contracções na porção linear da curva logarítmica concentraçao-efeito e escolheu-se esta concentração de histanina para ser usada em todas as experiências.

Para determinar os efeitos anti-histamínicos da loratadina e do DCL, os tecidos foram rapidamente expostos (cerca, de 15 segundos) a 1x10“° mol/1 de histamina em intervalos de 15 minutos. Após duas exposições sucessivas à histamina produziram-se contracções com aproximadamente a mesma magnitude e adicionou-se loratadina ou DCL, em concentrações finais que variaram de três a dez vezes, mas uma das câmaras de tecido, tecido não tratado, serviu de controlo para os tecidos tratados. Depois de cada exposição dos tecidos tratados

com as drc mas a histamina, o fluido ia cornara cic r 0 c 1 Q O C: foi subs tituída com 1: Lquído livr e de hista mi na contendo a rr lesma d roga com a mesma O o D f) en .tração. Os desa fios d e hrs tamina foram feitos aos 0, 35, 50, 6 5, 80, 95 110 i 0 X 2 5 mí π de exposição à drog a ou em m ornentos c omp a r âV61S HOS 0 0CÍd os con tr u p.v O 13 t\ subsequente snanss cios resul Lados de cada experiência envolveu (i) normalização dos dados de cada tecido para diferenças ena contracti1idade inerente exprimindo todas as contracções como dade relacionadas com iados para possíveis alterações da contract o tempo exprimindo as contracções registadas durante a exposição ã droga como percentagem do valor correspondente para os tecidos não tratados, e por fim, (íii) cálculo da redução da percentagem de cada contracção relacionada com a droga.

Os dados resultantes para a concentração da droga e a correspondente redução de percentagem na resposta à histamina foram depois usados para estimar para cada experiência a concentração da droga que produziria uma redução de 50% na resposta à histamina, o IC50· Isto foi feito ajustando re ctas aos dados usando 0 método dos mínimos quadrados e calculando 0 IC50 a partir da equação da recta. Calculou-se 0 erro padrão méd io + /- dos valores das experiências para cada droga, e examinaram-se as diferenças entre as drogas usando a análise de Kruskal Waliis 1-via da variância.

Nas tabelas seguintes está um resumo dos resultados. As percentagens de redução das contracções induzidas pela histamina do íleo isolado das cobaias produzidas durante 125 minutos a várias concentrações de cada droga são as seguintes: TABELA 1 - Redução das Contracções do íleo induzidas pela Histamina em Cobaias (Percentagem)

Exp. Concentração da droga (moi/i) N ° 3x1 CT10 1x1 CT9 3x10"9 lxlG~8 3xl(T8 1x10 14 2 - - - 28,32 54,42 98, 66 3 - - - 39,64 44,68 93,38 A s - - - 55,68 45,83 0 4 â £ d· 'W , -L W DCL 1 x x t 93 73,12 j 38, 91 38,81 5 6,71 3 40, 00 62,69 7 6,21 4 35, 4 J 4 4 ( 1 j 76,43 TABELA 2 - Redução das Contracções do íleo induzidas pela Histamina em Cobaia s (IC - 0) Droga Exp. Loratadína 1 1, 90x10-8 2 2,21x10~3 3 2 , 10x10~8 4 1 f 2 zí xí j- 0 Média 1, 8 6x10^8 S . E . 0,22 yCL 1 6,36x10 2 19,2 x 10 ^10 3 5,2 6x10~1C 4 8, 66xlO~iU Γ'4 ΘΟΙα 9, 78χ10~1υ S , E n 3,20 droga nos valores de IC50 (P=0,0209) . 15 testes resui maís potente no ados indicam que o DCL é aproximadamente receptor da histamina que a loratadina. 20 7 e z 0 s 3 ,xemp_ estudos de ligação ao receptor

Fizeram-se estudos de ligação ao receptor sobre as afinidades de ligação aos receptores da histamina H-l da loratadina e do DCL.

Usaram-se os métodos descritos por Dini et al., que são aqui incorporados por referência (Agents and Actions, 33:181-184, 1991), para a realização destes estudos de ligação. Incubaram-se membranas do cerebelo de cobaias com 0,5 nM 3H-piri lamina durante 10 minutos a 25°C. Depois da incubação, os ensaios foram rapidamente filtrados sob vácuo através de filtros de fibra de vidro (GF/B) (Whatman) e lavados várias vezes com tampão frio (gelado) usando um Brande! Cell Harvester. Determinou-se a radioactividade ligada com um contador de cintilações liquido (LS 6000 Beckman) usando um cocktail de cintilações liquido (Formula 989, DuPont NEN).

Determinaram-se os valores de IC5o para os compostos testados e para a pirilamina no receptor H-l da histamina:

Tabela 3 - Inibição da ligação da pirilamina no receptor H-l

Receptor H-l imposto iCS0 (nM) (nH)

16 a loratadina para os re ceptores da histamin a H-1. este s resultados são consistentes com as observações que dem onstram que a o DCL tem maior potência do que a loratadina para a í nibição das cont racções induzidas pela histamína no ileo das cobaias.

Estes estudos confirmam que o DCL tem uma maior potência para 4.4 Exemplo 4

Actividade de promoção de tumores

Usou-se a inibição da mitogénese dos linfócitos para testar as potências da loratadina e do DCL como agentes de promoção de tumores,

Estudos de mitogénese:

Suspenderam-se células frescas de baço (5xl06) obtidas a partir de ratos BALB/c com 5 semanas (Charles River, ST.Constant, PQ) em meio RPM1 1640 contendo 2% de soro fetal de vitela (Grand Island Biological Co., Grand Island, NY), semeadas paras obter réplicas em placas com micrropoços (Nunc) aos quais se adicionou concanavalina (Com) A (2 pg/ml; Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) e incubaram-se (37 °C, 95% ar, 5% C02) na ausência ou presença de concentrações crescentes dos agentes a testar dissolvidos em veículos salinos ou outros. Quarenta e três horas após a adição de Ccn A adicíonou-se a cada poço 0,25 nmol JH-timidina (6,7 Ci/nmol; ICN adicionais, as células foram lavadas dos poços para papel de filtro usando um retirador ( 'sorter') automático de células. Os filtros foram colocados em frascos contendo 5 ml de fluido de cintilação 17 (Readysafe; Beckman) e determinou-se a radioactívidade incorporada no ADN às 48 horas (n=3) . Determinara-se os valores de IC5C para a inibição da mitogénese numa variedade de concentrações (0,1 a 10

Tabela 4 - inibição da estimulação dos linrócitos induzida pela

Concanavalina A (IC50j

Loratadina 1,0 uM

l>cr o , 6 gM

Estes resultados indicam que o DCL é S-7vezes menos activo que a loratadina na promoção do crescimento de tumores. 4.5 Exemplo 5

Efeitos cardiovasculares

Estudaram-se os efeitos do DCL nas correntes cardíacas de potássio. Métodos; ie coelho por dispersão enzimática ixper. Ther., 1992, 262, 809-817 < :alidade por referência). Usou ;çâo simples, com uma resistência de 2 a da tensão (Axoclamp 200a) . Usou-s lares singulares d Θ CubâlâS (ver Carmelíet, J . Pharmaco U Θ Θ aqui incor rado na s 5 um eléctrodo Q0 ' p 3. L. C h 1 \ ciamp oara reo .star a analisar os dados. iça ie ΜΩ para manutenção o programa P-clamp )aarao .nha em ml .4 · f

Si C .onou-se aOH até A soiucao - d C 0 _ rir' ι μ π-r ι „ Λ ΚΟΗ até pi íC12 0,154, Na2ATP 5, EGTA 5 e HEPES 10, com a adição O protocolo de manutenção de voltagem (tensão) consistia em grampos com um potencial de -50 mV a +10 mV durante 4 seg. A alteração na corrente 'tail' foi medida em função da concentração da droga. Esta concentração variou de 1C~; a 10~5 em cinco passos. A exposição a cada concentração durou 15 minutos. No fim, lavou-se durante 30 minutos.

Efeito na corrente de rectíficação interna em mlócrtos de cobaias:

Mediu-se a rectíficação interna aplicando grampos de tensão de rampa ( ramp' ) começando em -50 mV e híperpolar1zando a membrana a -120 mV 3 u m 3 velocidade de 10 mV/seg . A concentração IΠ1C1di foi 3 concentr ação de 50% de eficiência determinada nas experiências precedentes . Aplicaram-se concentrações maís elevadas se a concentração iniciai não tivesse efeito.

Efeito na lO em míócítos ventriculares de cobaias:

Mediram-se as correntes '0άΐ1ί a seguir à oespolarizaçao com grampos durante 2 seg de potenciais de -30 mV a +60 mV; potencial de manutenção -50 mV.

Os resultados deste estudo indicaram que o DCL é menos actívo que a terfenadina na inibição da rectíficação cardíaca retardada e assim não tem potencia.1 para efeitos secundários cardíacos. Assim o, os métodos da presente ir venção são menos tóxicos que os dos ern que se i isam outros anti -histamínicc d s n a o sedativos. 19 6

Exemplo inibição do citocromo P45( que a ioratadina e o DCL inibem o citocromo humano Ρ4503Ά4 (CYP3A4}.0 CYP3A4 está envolvido em muitas interacções droga-droga e a quantificação da inibição do CYP3A4 pela ioratadina ou pelo DCL indica o potencial para as interacções droga-droga. A inibição é medida usando o modelo de substrato da testosterona e o cADN derivado do CYP3A4 em microssomas preparados a partir de uma linha celular de linfoblastóides humanos designada h3A4v3.

Concepção do estudo: 0 estudo de inibição consiste na determinação da concentração de inibição de 50% (IC50' para a substância teste. Testaram-se, em duplicado, uma única concentração de t estosterona (120 μΜ, aproximadamente 0 dobro da km aparente) e dez concentrações da substância teste, separadas por aproximadamente b log. 0 metabolismo da testosterona é testado pela produção do metabolito 6(β)-hidroxitestosterona. Este metabolito é rapidamente quantificado por separação por HPLC com detecção por absorvância.

Armazenamento/' Preparação das substâncias teste e adição às incubações:

As substâncias teste deverão ser armazenadas à temperatura ambiente. As substâncias teste serão dissolvidas em etanol para serem adicionadas às incubações. A concentração de solvente será constante para todas as concentrações das substâncias teste. 20

AS t-ϋΠ^-uti. aÇOcD finais das subs tânci as teste serão de 100, 3 i n a KJ f -J ! i no oi π π ο η π i n W / 12 -v / 'J f KJ ± f 'J 003 e 0 μΜ. Cada con centraç teste sera testaaa em incubações em d up ix cada de acorc io com método 31>3 i xο I )QO ί

Incuba-se 0,5 mi de uma mistura de reacção contendo 0,7 mg / mi de proteína, 1,3 mM NADPq 3,3 rtiM glucose-6-f os fato, 0,4 U/mi de desidrogenase giucose-6-fosfato, 3,3 mM de cloreto de magnésio e 120 μΜ de testosterona em 100 mM de fosfato de potássio (pH 7,4) a 37°C durante 30 minutos. Será adicionada em quantidade conhecida de 11(β)-hidroxítestosterona como procedimento para padrão interno para correcção da recuperação durante a extracção. A mistura de reacção será extraída com 1 ml de cloreto de etileno. 0 extracto será seco sobre sulfato de magnésio anidro e evaporado sob vácuo. A amo; 5 t T â será dissol vida em met anol e ingectada numa coluna de HPLC C18 4, 6 x 250 mm e separada d v (J 0 O in com uma fase móvel metanol/ <d Oj" Q d com uma velocidade de fluxo cie 1 rm L por mín. Os tempos de rete n ç â o são aproximadamente 6 min para o 11 (β)-hidroxí, 8 min para o 11 (-) - hidroxí e 12 min para a testosterona. O produto e o padrão interno são cetectados pela sua absorvância a 254 nm e quantificados corrigindo a eficiência de extracção usando a absorvância do pico de 11 (β)-hidroxí e comparando com a absorvância da curva padrão da 6 (β)-hidroxítestosterona. aaac

Para cada substância .abolito 6(β)-hidroxíte este, determina-se a concentração do sterona em cada réplica de incubação e 21

As formas de dosagem farmacêuticas úteis para administração compostos usados nos métodos da presente invenção podem ilustrados das secmmtes formas:

dos S Θ '£

Xxemplo

S li X 3. S

Preparou-se um grande cápsulas de gelatina dura com 0,1 a 10 miligramas de de lactose, 50 miligramas número de cápsulas unitárias enchendo de duas peças estandardizadas cada uma ingrediente activo em pó, 150 miligramas ie celulose e 6 miligramas de estearato de magnésio. 4.8 Exemplo 8 Cápsulas de gelatina mole

Preparou-se uma mistura de ingrediente activo num óleo digestivo como óleo de soja, lecitina, óleo de semente de algodão ou azeite e injectou-se com uma bomba de deslocamento positivo em gelatina de modo a formar cápsulas moles de gelatina contendo 0,1 a 10 miligramas de ingrediente activo. As cápsulas foram lavadas e secas.

Exemp'

Q

Comprimidos 22

Preparou-se um grande número de comprimidos pelos procedimentos convencionais de modo que a dose unitária fosse de 0,1 a 10 miligramas de ingrediente activo, 0,2 miligramas de dióxído de silicone coloidal, 5 miligramas de estearato de magnésio, 275 miligramas de celulose microcristalina, 11 miligramas de amido e 98,8 miligramas de lactose. Podem-se aplicar revestimentos apropriados para aumentar a palatibilidade ou retardar a absorção.

Lisboa, 13 de Novembro de 2006.

Pela Requerente O Agente Oficia

CJoiíçato da Canta Ferreuti

Adjumu ilo Agvu uiov da iriÇficditV duvom-Lv * iwohíví; mwue no lum d 1G 1(00-072 USBOA - PORTUGAL 23

Claims (3)

1. REIVINDICAÇÕES aceitável, na produção de um medicamente para ser usado no tratamento da rínite alérgica em humanos, caracterizada por o referido medicamento dever ser administrado numa quantidade de modo a fornecer uma dose diária de 0,2 mg a 1 mg de DCL ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável a um ser humano.
2. 2. Uma utilização tal como reivindicado na reivindicação 1, caracterizada por o medicamento também conter um veículo farmaceuticamente aceitável.
3. 3. Uma utilização tal anteriores caracterizada propensão mais elevada que como reivindicado nas reivindicações por o referido ser humano ter uma o normal para, por exemplo, cancro. 1. Uma utilização tal como reivindicado nas reivindicações anteriores caracterizada por se evitar a interacçâo entre o DCL e a droga que inibe o citocromo P450. Lisboa, 13 de Novembro de 2006. Leia Requerence