PT761669E - Compostos pentaciclicos intermediarios processos composicoes e metodos - Google Patents

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Description

-1 -
DESCRIÇÃO "COMPOSTOS PENT ACÍ CLICOS, INTERMEDIÁRIOS, PROCESSOS, COMPOSIÇÕES E MÉTODOS"
Esta invenção diz respeito às áreas da química farmacêutica e orgânica e fornece novos compostos pentacíclicos que são úteis para o tratamento de várias indicações médicas associadas com o síndroma pós-menopausa, e a doença fibróide uterina, endometriose, e proliferação de células musculares lisasda aorta. A presente invenção diz ainda respeito a compostos intermediários e processos úteis na preparação de compostos farmaceuticamente áctivos da presente invenção, e composições farmacêuticas. US 2.987.398A, US 2.884.427A e R. Conley et al. Journal of Organic Chemistry, 40(22), 3169-3173 divulgam derivados da cumarina com actividade estrogénica. O "síndroma pós-menopausa" é um termo usado para descrever vários estados fisiológicos que afectam frequentemente as mulheres que entraram ou completaram a metamorfose fisiológica conhecida como menopausa. Embora seja contempladas inúmeras patologias sob este termo, são três os principais efeitos do síndroma pós-menopausa que originam a maior preocupação médica a longo prazo: osteoporose, efeitos cardiovasculares tais como hiperlipidemia e cancro dependente do estrogénio, particularmente cancro da mama e uterino. A osteoporose descreve um grupo de doenças que têm origem em várias etiologias, mas que são caracterizadas pela perda líquida de massa óssea -2- por unidade de volume. A consequência desta perda de massa óssea e da resultante fractura óssea é a incapacidade do esqueleto proporcionar o suporte estrutural adequado para o corpo. Um dos tipo de osteoporose mais comum é o associado com a menopausa. A maioria da mulheres perda cerca de 20% a cerca de 60% da massa óssea no compartimento trabecular do osso no período de 3 a 6 anos após a cessação da menstruação. Esta perda rápida está normalmente associada com um aumento da reabsorção e formação óssea. No entanto, o ciclo de reabsorção tem maior dominância e o resultado é uma perda líquida de massa óssea. A osteoporose é uma doença grave e comum entre as mulheres pós-menopausa.
Existe uma estimativa de 25 milhões de mulheres nos Estados Unidos, sozinhos, que sofrem desta doença. Os resultados da osteoporose são pessoalmente prejudiciais e contribuem também para uma grande perda económica devido à sua cronicidade e à necessidade de um grande suporte a longo prazo (hospitalização e assistência domiciliária) resultante das sequelas da doença. Tal é especialmente verdadeiro para os pacientes mais idosos. Adicionalmente, embora a osteoporose não seja normalmente considerada como uma ameaça à vida, verifica-se uma relação entre uma taxa^de mortalidade de 20% a 30% e as fracturas da anca em mulheres idosas. Uma grande percentagem desta taxa de mortalidade pode ser directamente associada com a osteoporose pós-menopausa. O tecido mais vulnerável no osso aos efeitos da osteoporose pós-menopausa é o osso trabecular. Este tecido é normalmente referido como osso esponjoso e está particularmente concentrado perto das extremidades do osso (próximo das articulações) e nas vértebras da coluna vertebral. O tecido Uabecular c caracterizado por pequenas estruturas osteóides que se interligam umas com as outras, assim como o tecido cortical mais sólido e denso que perfaz -3-
a superfície exterior e a diáfise central do osso. Esta rede interligada de trabéculas fomece o suporte lateral à estrutura cortical exterior e é crítica para a força biomecânica da estrutura global. Na osteoporose pós-menopausa é, em primeiro lugar, a perda e reabsorção líquida da trabécula que conduz à falha e fractura do osso. Perante a perda da trabécula nas mulheres pós-menopausa, não é surpreendente que as fracturas mais comuns são as que estão associadas com ossos que são altamente dependentes do suporte trabecular, e.g., as vértebras, o colo dos ossos que suportam o peso tais como o fémur e o antebraço. Na realidade, a fractura da anca, fracturas de Colles, e fracturas de esmagamento vertebral são as principais marcas da osteoporose pós-menopausa.
Até à data, o único método globalmente aceite para o tratamento da osteoporose pós-menopausa é a terapia de substituição de estrogénio. Embora a terapia seja normalmente bem sucedida, a aceitação do paciente com a terapia é reduzida, principalmente porque a terapia de estrogénio produz frequentemente efeitos secundários indesejáveis.
Ao longo do tempo da menopausa, a maioria das mulheres têm menor incidência de doenças cardiovasculares què~os homens da mesma idade. Após a menopausa, no entanto, a taxa de doenças cardiovasculares nas mulheres aumenta lentamente até coincidir a taxa observada nos homens. Esta perda de protecção foi associada com a perda de estrogénio e, em particular, com a perda da capacidade do estrogénio de regulação dos níveis de lípidos no soro. A natureza da capacidade do estrogénio para regular os lípidos do soro não se encontra bem compreendida, mas as evidências até à data indicam que o estrogénio pode regular positivamente os receptores dos lípidos de baixa densidade (LDL) no fígado para removerem o excesso de colesterol. Adicionalmente, o estrogénio parece ter algum efeito na biossíntese do colesterol, e outros efeitos benéficos na saúde cardiovascular. -4-
Foi reportado na literatura que nas mulheres na pós-menopausa com uma terapia de substituição de estrogénio se verifica um retomo dos níveis de lípidos no soro às concentrações verificadas no estado pré-menopausa. Deste modo, o estrogénio pareceria ser um tratamento razoável para este estado. No eiitanlu, os efeitos secundários da terapia de substituição de estrogénio não são aceitáveis para muitas mulheres, limitando assim a utilização desta terapia. Uma terapia ideal para este estado seria um agente que regulasse os níveis de lípidos no soro tal como é efectuado pelo estrogénio, mas que fosse desprovido dos efeitos secundários e dos riscos associados com a terapia de estrogénio. A terceira maior patologia associada com o síndroma pós-menopausa é o cancro da mama dependente do estrogénio e, numa menor extensão, os cancros de outros órgãos dependentes do estrogénio, particularmente do útero. Embora esses neoplasmas não estejam apenas limitados às mulheres na pós-menopausa, eles são mais predominantes na população idosa na pós-menopausa. A quimioterapia corrente destes cancros tem sido fortemente baseada no uso de compostos anti-estrogénio tal como, por exemplo, tamoxifene. Embora essas misturas de agonistas-antagonistas tenham efeitos benéficos* no tratamento destes cancros, e os efeitos secundários estrogénicos sejam toleráveis em situações agudas com risco de vida, eles não são ideais. Por exemplo, estes agentes podem ter efeitos estimulatórios em certas populações de células cancerígenas do útero devido às suas propriedades estrogénicas (agonistas) e podem, deste modo, ser contra-produtivos em alguns casos. Uma melhor terapia para o tratamento deste cancros seria um agente que fosse um composto anti-estrogénio com propriedades agonistas de estrogénio negligenciáveis ou não existentes nos tecidos reprodutivos.
Em resposta à necessidade clara de novos agentes farmacêuticos / . Í/ίΜή -5-que sejam capazes de aliviar os sintomas do, entre outros, síndroma pós-menopausa, a presente invenção fornece novos compostos, suas composições farmacêuticas, e métodos para os utilizar no tratamento do síndroma pós-menopausa e outros estados patológicos relacionados com o estrogénio tais como os abaixo mencionados. A fibrose uterina (doença fibróide uterina) é um velho e sempre presente problema clínico que se apresenta sob uma grande variedade de nomes, incluindo doença fibróide uterina, hipertrofia uterina, lieomiomata uterina, hipertrofia miometrial, fibrose uterina, e metrite fibrótica. Essencialmente, a fibrose uterina é um estado onde existe uma deposição inapropriada de tecido fibróide na parede do útero.
Este estado é uma causa da dismenorreia e infertilidade nas mulheres. A causa exacta deste estado não é bem conhecida, mas as evidências sugerem que existe uma resposta inapropriada do tecido fibróide ao estrogénio. Tal estado foi produzido em coelhos através da administração diária de estrogénio durante 3 meses. Em cobaias, o estado foi produzido através da administração diária de estrogénio durante quatro meses. Adicionalmente, em ratos, o estrogénio provoca uma hipertrofia similar. O tratamento mais comum da fibrose uterina envolve procedimentos cirúrgicos, mas é dispendioso e é algumas vez uma fonte de complicações tais como a formação de infecções e adesões abdominais. Em alguns pacientes, a cirurgia inicial é apenas um tratamento temporário e os fibróides desenvolvem-se de novo. Nesses casos, é efectuada uma histerectomia a qual acaba efectivamente com os fibróides mas também com a vida reprodutiva da paciente. Adicionalmente, podem ser administradas antagonistas da hormona que liberta gonadotropina, sendo no entanto o seu uso moderado pelo facto de -6-
poderem conduzir à osteoporose. Deste modo, existe uma necessidade para novos métodos de tratamento da fibrose uterina, e os métodos da presente invenção satisfazem essa necessidade. A endometriose é um estado que dismenorreia grave, o qual é acompanhado por dores fortes, perda de sangue para as massas endometriais ou cavidade peritoneal e conduz muitas vezes á infertilidade. A causa dos sintomas deste estado parecem ser desenvolvimentos ectópicos endometriais, os quais respondem inapropriadamente ao controlo hormonal normal e estão localizados em tecidos inapropriados. Como resultado das localizações inapropríadas para o desenvolvimento endometrial, o tecido parece iniciar respostas locais do tipo inflamatório causando a infiltração de macrófagos e uma cascata de eventos que conduzem ao início de uma resposta dolorosa. A etiologia exacta desta doença não é bem conhecida e o seu tratamento por terapia hormonal é diverso, mal definido e marcado por inúmero efeitos secundários indesejados e talvez perigosos.
Um dos tratamentos para esta doença é o uso de uma pequena dose de estrogénio para suprimir o crescimento endometrial através de um efeito de retroalimentação negativa na libertação central de gonadotropina e subsequente produção de estrogénio nos ovários; no entanto, é por vezes necessário utilizar o estrogénio continuamente para controlar os sintomas. Este uso de estrogénio conduz muitas vezes a efeitos secundários indesejáveis e mesmo a um risco de cancro endometrial.
Um outro tratamento consiste na administração contínua de progestinas, as quais induzem amenorreia e, através da supressão da produção de estrogénio ovariano, podem provocar regressões nos desenvolvimentos endometriais. O uso da terapia crónica de progestina é muitas vezes -7- /, acompanhado por efeitos secundários desagradáveis no SNC e conduz muitas vezes à infertilidade devida à supressão da função ovariana.
Um terceiro tratamento consiste na administração de androgénios fracos, os quais são eficazes no controlo da endometriose; no entanto, eles induzem efeitos masculinizantes severos. Muitos destes tratamentos para a endometriose tem sido implicados como causa, num grau moderado, de perda óssea com a terapia continuada. Deste modo, são desejáveis novos métodos para o tratamento da endometriose. A proliferação das células musculares lisas da aorta tem um papel importante em doenças tais como a aterosclerose e restenose. A restenose vascular posterior à angioplastia coronária percutânea transluminal (ACPT) foi demonstrado ser uma resposta do tecido caracterizada por uma fase precoce e uma fase tardia. A fase precoce, ocorrendo horas a dias após a ACPT, é devida a uma trombose com alguns vaso-espasmos enquanto a fase tardia parece ser dominada pela proliferação e migração excessivas das células musculares lisas da aorta. Nesta doença, o aumento da motilidade celular e colonização por essas células musculares lisas e macrófagos contribuem significativamente para a patogénese da doença. A proliferação excessiva e a migração das células musculares lisas vasculares da aorta pode ser o mecanismo primário da reoclusão das artérias coronárias após ACPT, arteriectomia, angioplastia laser e cirurgia de prótese de anastomose arterial. Ver "Intimai Proliferation of Smooth Muscle Cells as an Explanation for Recurrent Coronary Arteiy Stenosis after Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty," Austin et. al., Journal of the American College of Cardiology 8: 369-375 (Aug. 1985). A restenose vascular permanece como a maior complicação a longo termo após a intervenção cirúrgica em artérias bloqueadas por angioplastia coronária percutânea transluminal (ACPT), arteriectomia, angioplastia laser e -8-
cirurgia de prótese de anastomose arterial. Em cerca de 35% dos pacientes submetidos a uma ACPT, a reoclusão ocorre entre três a seis meses após o procedimento. As estratégias correntes para o tratamento da restenose vascular incluem a intervenção mecânica com dispositivos como extensores ou terapias farmacológicas que incluem heparina, cumarina, aspirina, óleo de peixe, antagonista de cálcio, esteróides, e prostaciclina. Estas estratégias não refrearam a velocidade de reoclusão e têm sido ineficazes no tratamento e prevenção da restenose vascular. Ver "Prevention of Restenosis after Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty: The Search for a 'Magic Bullet', " Hermans et. al., American Heart Journal 122: 171-187 (July 1991).
Na patogénese da restenose ocorre a proliferação e a migração excessivas das células, como resultado dos factores de crescimento produzidos por constituintes celulares no sangue c da parede do vaso arterial danificado, os quais servem de intermediários à proliferação de células musculares lisas na restenose vascular.
Agentes que inibam a proliferação e/ou migração das células musculares lisas da aorta são úteis no tratamento e prevenção da restenose. A presente invenção proporciona a utilização de compostos como inibidores da proliferação de células musculares lisas da aorta, e deste modo inibidores da restenose. O factor de crescimento transformante-β (TGF-β) é um factor de crescimento peptídico que se refere a uma família genérica de peptídeos, muitas vezes chamados de isoformas, significando que os membros da família partilham a homologia aminoácida e/ou têm acções fisiológicas similares. Os TGF^'s, particularmente aqueles designados por TGF-βι, β2 e β3 estão particularmente associados com processos envolvendo a regenerAção tecidual e doenças associadas com processos de regeneração anormais {vide, Spom e Roberts, "The -9-
Transforming Growth Factor-P's", Peptide Growth Factors and their Receptors I, 419-472 (Berlin: Springer Verlag, 1990)).
Os agentes que induzam a produção de TGF-P's, e em particular TGF-P3, são úteis na promoção da regeneração tecidual e no tratamento de doenças que envolvam a regeneração tecidual anormal. Tais utilidades incluem, mas não estão limitados a cicatrização de feridas, redução de cicatrizes (vide, Ferguson, "Wound Healing, Scarring, TGF-β Antagonists, and Isoforms", Abst. NIH TGF-β Symposium, Bethesda MD, 3 Maio 1994), e mucosite ulcerativa induzida por quimioterapia e radioterapia (vide, Sonis e Haley, "Prevention of Chemotherapy-Induced Ulcerative Mucositis by Transforming Growth Factor-β3", Abst. NIH TGF-β Symposium, Bethesda MD, 3 Maio 1994). A presente invenção fomece o uso de compostos como promotores de processo de regeneração tecidual e para o tratamento de doenças que envolvam a regeneração tecidual anormal.
A presente invenção diz respeito a compostos de fórmula I ·· R*
em que X é -O-, -S-, ou -NR5-;
- ΙΟ Υ é -Ο-, -S-, -CHr, -CH2CH2-, -CH=CH-, ou -NR5-; R1, R2, e R3 são cada qual independentemente -H, -OH; -0(Ci-C4 alquilo), -OCOC6H5, -OCO(CrC6 alquilo), -0S02(C4-C6 alquilo), -0S02CF3, Cl, ou F; n é 1 ou 2; W é CH2 ou C=0; R4 é 1-piperidinilo, 2-oxo-l-piperidinilo, 1-pirrolidinilo, metil-1-pirrolidinilo, dimetil- 1-pirrolidinilo, 2-oxo-lpirrolidinilo, 4-morfolino, dimctilamino, dictilamino, ou 1-hexametilenoimino; R5 c C,-C3 alquilo, -COC6H5, -CO(CrC6 alquilo), -C(0)0C6H5, -C(0)0(C,-C6 alquilo), -S02C6H5 ou -S02CF3; ou um seu sal farmaccuticamente aceitável.
Também fornecido pela presente invenção são os compostos de fórmula II
B é -CH2- ou -CO- Y, R1, R2, R3, R4, n, e W são como acima definidos; ou um seu sal farmaceuticamcntc aceitável.
Uuq - u -
Também fornecido pela presente invenção são os compostos intermediários de fórmula III e IV que são úteis para preparar os compostos farmaceuticamente activos da presente invenção, e são apresentados de seguida
em que
Rla, R2a, e R3a são cada qual independentemente -H, -0(Ci-C4 alquilo), -Cl, -F, ou um hidroxilo adequadamente protegido; Z é -OH, -OCôH5, -0(Ci-C4 alquilo), ou 4-hidroxifenilo; X e Y são definidos como anteriormente;
em que R'\ R,a, e R3a e Y são definidos como anteriormente. -12-
é A presente invenção diz ainda respeito a composições farmacêuticas contendo os compostos de fórmula I ou fórmula II, contendo opcionalmente estrogénio ou progestina, e ao uso de tais compostos, sozinhos, ou em combinação com estrogénio ou progestina, para aliviar os sintomas do síndroma pós-menopausa, particularmente osteoporose, estados patológicos cardiovasculares relacionados, e cancro dependente do estrogénio. Como aqui utilizado, o termo "estrogénio" inclui compostos esteróides com actividade estrogénica tais como, por exemplo, 17p-estradiol, estrona, estrogénio conjugado (Premarin®), estrogénio equino, 17p-etinil estradiol, e similares. Como aqui utilizado, o termo "progestina" inclui compostos com actividade progestacional tais como, por exemplo, progesterona, noretilnodrel, nongestrel, acetato de megestrol, noretindrona, e similares.
Os compostos da presente invenção são também úteis na inibição da doença fibróide uterina e endometriose em mulheres e proliferação das células musculares lisas da aorta, particularmente restenose, em humanos.
Também fornecido pela presente invenção é um processo para preparar um composto de fórmula Ia R2*
Ia
G - 13- [A/à* em que
Rla, R2a, e R3a são cada qual independentemente -H, -0(Ci-C4 alquilo), -Cl, -F, ou um hidroxilo adequadamente protegido; X e Y são definidos como anteriormente: G é -OH ou -0(CH2)nWR4 em que n, W, e R4 são acima definidos; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, o qual compreende a) fazer reagir um composto de fórmula Illa R2®
em que
Rla, R2a, e R3a, X e Y são definidos como anteriormente;
Za é -OH, -OC6H5, -0(CrC4 alquilo), com um reagente de Grignard de fórmula IVa
em que
Ga é -OSi(CH3)3, um hidroxilo adequadamente protegido que pode -14 1/ί4/ίή ser selectivamente desprotegido na presença de Rla, R2a, e R3a, ou -0(CH2)nWR4 em que n, W e R4 são acima definidos; b) quando Ga é -OSi(CH3)3 ou outro grupo protector adequado, remover opcionalmente o referido grupo protector e de seguida tratar o resultante -OH com Q-(CH2)n-W-R4 em que Q é bromo, cloro, ou hidroxilo; e c) produzindo opcionalmente o sal do produto reaccional do passo a) ou b).
Um aspecto da presente invenção inclui compostos de fórmula I
I em que Xé-O-, -S-, ou -NR5-; Y é -O-, -S-, -CH2-, -CH2CH2-, -CH=CH-, ou -NR5-; R1, R2, e R3 são cada qual independentemente -H, -OH; -0(Ci-C4 alquilo), -OCOC6H5, -OCO(CrC6 alquilo), -0S02(C4-C6 alquilo), -0S02CF3, Cl, -15-
n é 1 ou 2; W é CH2 ou C=0; R4 é 1-piperidinilo, 2-oxo-l-piperidinilo, 1-pirrolidinilo, metil-1-pirrolidinilo, dimetil- 1-pirrolidinilo, 2-oxo-lpirrolidinilo, 4-morfolino, dimetilamino, dietilamino, ou 1-hexametilenoimino; R5 é C,-C3 alquilo, -COC6H5, -CO(CrC6 alquilo), -C(0)0C6H5, -C(0)0(C,-C6 alquilo), -S02C6H5 ou -S02CF3; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Os termos gerais usados na descrição dos compostos aqui descritos têm os seus significados habituais. Por exemplo, "CiC6 alquilo" refere-se a cadeias alifáticas lineares ou ramificadas de 1 a 6 átomos de carbono incluindo metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, n-butilo, pentilo, isopentilo, hexilo, iso-hexilo, e similares.
Os compostos de partida para uma rota de preparação de compostos da presente invenção são os compostos de fórmula V abaixo, R2a
em que
Rla, R2a, e R3a são cada qual independentemente -H, -0(Ci-C4 -16-
i
t / alquilo), -Cl, -F, ou um hidroxilo adequadamente protegido; X e Y são definidos como anteriormente;
Uma incorporação deste composto de partida, os compostos de
em que
Rla, R2â, e R3a são definidos como anteriormente; X' é -O-, -S-, ou -NH-; são feitos essencialmente como descrito no Journal of Organic Chemistry, 1975, 40, 3169. Preferivelmente, Rla e R2a são metoxilo ou um grupo protector de hidroxilo adequado, R3a é -H, e X' é -0-.
Em geral, um tioindoxilo facilmente disponível de fórmula
cm que R23 é como acima definido, é feito reagir com um benzaldeído de fórmula
em que Xb é *0H, -SH, ou -NH2, e Rla e R23 são como acima definidos. A reacção c geral mente efectuada na presença de uma base moderada tal como trietilamina c um solvente prótico tal como etanol, e é efectuada à temperatura ambiente ou abaixo. O produto desta condensação é então desidrogenado por vários métodos conhecidos na técnica, o mais preferivelmente por reacção com 2,3-dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona (DDQ) para se obter o composto de fórmula V.
Se tal for pretendido, um composto de fórmula V no qual Rlb, R2b, e/ou R3b é metoxilo pode ser desprotegido por reacção com tricloreto de alumínio e etanodiol e re-protegido com um grupo protector fenol alternativo nesta etapa. São preferidos grupos protectores que são removíveis sob condições moderadas tais como t-butildimetilsililo.
Compostos de partida alternativos de fórmula Vc
Vc em que
Rlc e R2c são hidroxilos adequadamente protegidos; estão disponíveis através de protecção convencional de coumestrol disponível comercialmente. São preferidos grupos protectores que são removíveis sob condições moderadas tais como t-butildimetilsililo.
Compostos de partida de fórmula Vd R2a
em que R,a, R2\ e R3a são definidos como anteriormente; X* é -O- ou -S-, Y* é -CH2-, -CH2-CH2-, ou -CH=CH-, são preparados através da reacção de von Pechman conforme descrito em Organic Reactions, 1953, 7, 1.
Em geral, uma tetralona ou indanona facilmente disponível de fórmula ÇC^Me cm que R2a é como acima definido, e yd é -CH2- ou CH2-CH2-, é condensado com um tiofcnal ou fenol apropriadamente substituído:
em que
Rla é -OH, -H, -0(Ci-C4 alquilo), -F, -Cl, ou um hidroxilo adequadamente protegido; R3a é como acima definido; e Xd é -OH ou -SH, sob a influência de um agente de condensação tal como oxicloreto de fósforo, pentóxido de fósforo, ácido sulfurico, cloreto de alumínio ou similares. Preferivelmente, R,a' é -OH, R3a é -H, Xd é OH, Y* é CH2CH2, e R2a é metoxilo e a reacção é efectuada em tolueno ou benzeno a 80-110 °C utilizando oxicloreto de fósforo como agente de condensação.
Se o produto de von Pechman contiver uma fracção fenólica ele poderá ser protegido nesta etapa, ou altemativamente se R é metoxilo, pode ser sujeito a uma sequência de desalquilação/reprotecção conforme acima descrito. Se for pretendido, a ligação dupla opcional pode então ser instalada por reacção com DDQ ou outro agente de desidrogenação.
Compostos de partida adicionais de fórmula Ve -20-
em que
Xe e Y6 são cada qual independentemente -0-, -S-, -NH-, ou -NR5; Rla, R2a, R3a, e R5 são definidos como anteriormente; são preparados essencialmente como descrito em Heterocycles, 1993, 35, 1425; patente dos Estados Unidos número 5.073.553 publicada em 17 de Dezembro, 1991; e Indian Journal of Chemistry, 1989, 24B, 556.
Outros compostos de partida de fórmula R2a
Rla, R2a, R3\ e R5 são definidos como anteriormente;
Xf é -NH-, ou -NR5-; e
Yf é -CH2-, -CH2-CH2-, ou -CH=CH-, são preparados essencialmentc conforme descrito em Indian Journal of Chemistry, 1974, 14B, 132 e em Journal of the Chemical Society, Perkin Trans. I, 1974, 1747. Se a -21 -
C ligação dupla (Yf = -CH=CH-) é pretendida, poderá ser obtida do modo acima descrito, utilizando DDQ.
Uma vez formado o composto de fórmula V, uma opção permite a redução do composto de fórmula V escolhido a um composto de fórmula Illb
em que
Rla, R2a, R3a, X e Y são definidos como anteriormente; por reacção com um agente redutor apropriado tal como hidreto de di-isobutilalumínio num solvente tal como tolueno, CH2CI2, ou THF. Geralmente esta redução é efectuada a uma temperatura abaixo de 0 °C e preferencialmente entre -50 °C e -100 °C. O composto de fórmula Illb pode então ser convertido, quer in situ quer num passo separado, em um composto de fórmula IIIc abaixo R2*
IIIC
-22-em que R6 é -C1-C4 alquilo ou -C6H5 ou
Rla, R2a, R3a, X e Y são definidos como anteriormente; por reaução com um álcool ou fenol R6OH e, opcionalmente um composto ácido ou agente desidratante tal como sulfato de magnésio. É preferível efectuar esta conversão num passo separado, em CH2CI2 ou clorobenzeno, entre a temperatura ambiente e refluxo. Preferencialmente, Rla e R2a são hidroxilos adequadamente protegidos, R3a é Η, X é -O-, Y é -O- ou -S-, e R6 é -CgHs.
Altemativamente, um composto de fórmula V no qual X é -NH-pode ser acilado no azoto e de seguida convertido directamente no composto de fórmula IIIc por reacção com NaBH4 ou com um agente redutor similar na presença de um composto acídico tal como HC1 e um solvente alcoólico. Nesta incorporação de IIIc é preferível que Rla e R2a sejam metoxilo, R3a seja Η, X seja -N(COC6H5)- ou -N(COC(CH3)4)-, Y seja -O-, e R6 seja preferivelmente -C2H5.
No passo seguinte, um composto de fórmula nib ou IIIc é feito reagir com um reagente de aril Grignard de fórmula
Ga em que
Ga é OSi(CH3)3, um hidroxilo adequadamente protegido que pode ser selectivamente desprotegido na presença de Rla e R2a, ou -(CH2)nWR4; em que n, W, e R4 são definidos como anteriormente; -23-
em um solvente tal como tolueno, THF, éter dietílico, CH2CI2, ou uma mistura destes e à temperatura ambiente ou abaixo. Opcionalmente, a reacção pode ser facilitada pela presença de um ácido de Lewis tal como eterato de trifluoreto de boro, tetracloreto de estanho, tetracloreto de titânico OU similares.
Quando Ga da fórmula IVa é -0(CH2)nWR4 esta reacção de Grignard origina um composto de fórmula Ib R2»
Ib O—(CHg)n—W-R4 em que
Rla, R2a, R3a cada qual independentemente -H, -0(Ci-C4 alquilo), -Cl, -F, ou um hidroxilo adequadamente protegido; X, Y, n, W, e R4 são definidos como anteriormente; o qual pode ser opcionalmente desprotegido e derivado como abaixo descrito para se obter o composto de fórmula I pretendido.
Altemativamente, quando Ga da fórmula IVa é -OSi(CH3)3 ou outro hidroxilo adequadamente protegido, o grupo protector é cindido nesta fase sob condições que deixam Rla, R2a, e R3a intactos, para se obter um composto de fórmula Ic
em que
Rla, R2a, R3a, X e Y são definidos como anteriormente.
Tais condições são dependentes da natureza dos grupos protectores e são conhecidas pelos especialistas na técnica (vide, e.g., Greene e Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 1991, 2a edição). Numa incorporação preferida, na qual Rla e R2a são t-butildimetilsililoxilo ou metoxilo, R3a é H, e Ga é -OSi(CH3)4, tal pode ser conseguido por exposição breve a uma pasta em metanol de carbonato de potássio à temperatura ambiente ou abaixo na presença de um co-solvente tal como THF ou éter dietílico.
Um composto de fórmula Ic pode ser convertido em um composto de fórmula Ib utilizando uma das rotas sintéticas apresentadas no Esquema I. No Esquema I, Rla, R2a, R3a, R4, W, X, Y e n são definidos como anteriormente.
Cada passo do Esquema I é efectuado através dos procedimentos bem conhecidos pelos especialistas na técnica.
Por exemplo, o composto de fórmula Ic pode ser feito reagir com um composto de fórmula
R4-W-(CH2)n-Q em que R4, W, e n são definidos como anteriormente e Q é uma fracção bromo ou, preferivelmente, cloro, para se obterem compostos de fórmula Ib. Esta alquilação é normalmente conseguida efectuando a reacção na presença de um excesso de carbonato de potássio pulverizado finamente dividido e usando de um equivalente a um ligeiro excesso do reagente Q-(CH2)-R3.
Um método mais preferido envolve a reacção de um composto de -26- -26- v: y\yCí fórmula Ic com um composto de fórmula
R4-W-(CH2)n-OH em que R4, W, e n são definidos como anteriormente na presença de trifenilfosfina, azodicarboxilato de dietilo (DEAD) e um solvente apropriado, resultando num composto de fórmula Ib. Este processo é conhecido na técnica como acoplamento de Mitsunobu. Preferencialmente, 2-4 equivalentes de l-(2-hidroxietil)pirrolidina são feitos reagir com um composto de fórmula Ic na presença de 2,5 equivalentes de trifenilfosfina e DEAD, num solvente inerte tal como tolueno à temperatura ambiente. A esta temperatura a reacção demora apenas cerca de 30 minutos a cerca de 3 horas, no entanto alterações nas condições reaccionais irão influenciar o tempo que esta reacção necessita para se ficar completa. Obviamente, o progresso deste passo reaccional pode ser monitorizado através de técnicas cromatográficas padrão.
Ainda em uma outra rota sintética, um composto de fórmula Ic é feito reagir com um excesso de um agente alquilante de fórmula J-W-(CH2)n-r em que J e J' são o mesmo ou diferentes grupos rejeitados, numa solução alcalina.
Grupos rejeitados adequados incluem, por exemplo, sulfonatos tais como metanossulfonato., 4-bromossulfonato, toluenossulfonato, etanossulfonato, isopropanossulfonato, 4-metoxibenzenossulfonato, 4-nitrobenzenossulfonato, 2-clorobenzenossulfonato, e similares, halogénios tais como cloro, iodo, e similares, e outros grupos relacionados. Um agente alquilante preferido é 1,2-dibromoetano, e com pelo menos 2 equivalentes, preferivelmente mais do que 2 equivalentes, de 1,2-dibromoetano a serem usados por equivalente de substrato.
Uma solução alcalina preferida para esta reacção de alquilação contém carbonato de potássio num solvente inerte tal como, por exemplo, metiletilcetona (MEK) ou DMF. Nesta solução, o grupo 4-hidroxilo da fracção benzoílo do composto de fórmula Illd existe como um ião fenóxido que substitui um dos grupos rejeitados do agente alquilante.
Esta reacção é melhor efectuada quando a solução alcalina contém todos os reagentes é refluxada e efectuada até estar completa. Quando se utiliza MEK como solvente preferido, os tempos reaccionais vão desde cerca de 6 horas a cerca de 20 horas.
Altemativamente, um composto de fórmula Id pode ser preparado pela reacção de um álcool de fórmula
J-W-(CH2)n-OH em que J é escolhido a partir de grupos rejeitados acima descritos, com um composto de fórmula Ic através do procedimento do acoplamento de Mitsunobu. Um álcool preferido é o 2-bromoetanol. O produto da reacção deste passo, um composto de fórmula Id, é então feito reagir com 1-piperidina, 1-pirrolidina, metil-l-pirrolidina, dimetil-1-pirrolidina, 4-morfolina, dimetilamina, ou 1-hexqametilenoimina, através de técnicas padrão, para formar compostos de fórmula Ib. Preferivelmente, o sal de cloridrato da piperidina é feito reagir com o composto de fórmula Ib num solvente inerte, tal como DMF anidro, c aquecido a uma temperatura na gama de cerca de 60 °C a cerca de 110 °C. Quando a mistura é aquecida a uma temperatura -28-
/ ^?/VC -í-.u.
preferida de cerca de 90 °C, a reacção demora apenas 30 minutos a cerca de 1 hora. No entanto, alterações nas condições reaccionais irão influenciar o tempo que esta reacção necessita para se ficar completa. Obviamente, o progresso deste passo reaccional pode ser monitorizado através de técnicas cromatográficas padrão. A desalquilação/desprotecção dos grupos hidroxilo terminais protegidos nos compostos de fórmula Ia pode ser efectuada, se desejado, para se obterem os compostos farmaceuticamente activos de fórmula I, através de procedimentos conhecidos pelos especialistas na técnica. Um método preferido para a desprotecção de t-butildimetilsililéteres, uma incorporação preferida de Rla e R2a, utiliza a agitação num solvente apropriado tal como THF com um fonte de fluoreto solúvel tal como fluoreto de tetran-butilamónio à temperatura ambiente.
Os procedimentos anteriores proporcionam novos compostos de fórmula I farmaceuticamente activos nos quais R1, R2 e R3 são cada qual hidrogénio, hidroxilo, Ci-C4 alcoxilo, cloro, ou flúor. Compostos de fórmula Ia preferidos são aqueles em que R1 e R2 são metoxilo, ou R1 e R2 são hidroxilo, R3 é H, R4 é piperidinilo ou pirrolidinilo, X é -O-, Y é -S-, W é -CH2-, e n é 1. Estes compostos preferidos, assim como outros compostos de fórmula Ia, podem ser usados como agentes farmacêuticos ou podem ser ainda mais derivados para se obterem outros compostos de fórmula I, os quais são também úteis para a prática dos métodos da presente invenção.
Pode também ser utilizado um método alternativo num só vaso reaccional para a preparação de um composto de fórmula I ou Ia a partir de um composto de fórmula V. Esta rota envolve: 1) A redução de um composto de fórmula V pelo hidreto de di-isobutilalumlnio ou ageute redutor similar em THF a uma temperatura abaixo de -60 °C. -29- -29-
2) Destruir o excesso de agente redutor com um equivalente molar de um solvente prótico tal como metanol ou isopropanol. 3) Adição de um reagente de aril Grignard com a fórmula
e aquecendo à temperatura ambiente. 4) Isolamento por extracção convencional da mistura reaccional e concentração. 5) Tratamento opcional de uma solução de THF do remanescente com um ácido forte, tal como HC1, por um período até 24 horas e subsequente isolamento básico.
Em alguns casos, o método num só vaso reaccional pode proporcionar produtos de fórmula Ia, os quais podem ser desprotegidos como acima descrito. Altemativamente, o tratamento ácido final pode induzir a concomitante desprotecção e resultar na preparação directa de compostos de fórmula I. Os compostos de fórmula I preferidos para esta reacção são os mesmos que os compostos de fórmula I preferidos acima descritos, e podem ser usados como agentes farmaceuticamente activos para os métodos aqui descritos, ou podem ser derivados para se obterem outros novos compostos de fórmula I os quais são também úteis para os presentes métodos (infra).
Um outro aspecto da presente invenção inclui os compostos de
fórmula II -30- •Wl
II em que B é -CH2- ou -CO- Y, R1, R2, R3, R4, n, e W são definidos como anteriormente; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Um intermediário chave na preparação dos compostos de fórmula II
vx
C A- -31 -em que
Rla, R2a, R3a, e Y são definidos como anteriormente. A síntese de uma incorporação preferida de VI, Via na qual Y é -CH2CH2- é descrita no Esquema II.
Esquema II
Deste modo, uma tetralona Vila facilmente disponível em que R2* é definido como anteriormente é condensada com um equivalente de 4-aminofenol, -32- -32- / , d A ÍMf
preferivelmente na ausência de solvente, a uma temperatura de modo a que a mistura funda, usualmente a ca. 180 °C, sob uma corrente de azoto. Durante o curso da reacção, pode ser adicionado 4-aminofenol adicional para substituir o material perdido por sublimação. A imina resultante de fórmula VlIIa solidifica após arrefecimento, e pode ser opcionalmente recristalizada. A protecção do grupo hidroxilo de VlIIa como o seu derivado sililo VlIIa' é efectuada sob condições padrão, e a imina +e convertida em uma enamida de fórmula IXa por acilação com um halogeneto de aroílo de fórmula R1a
em que Rla e R2a são definidos como anteriormente, geralmente na presença de uma base moderada tal como trietilamina e num solvente inerte tal comojCHaC^ a uma temperatura entre a ambiente e refluxo.
Um composto de fórmula IXa é então fotolizado num poço de imersão de quartzo, usando uma lâmpada de mercúrio Hanovia, num solvente tal como éter ou benzeno, por um período de 4 horas a 1 semana para se obter um composto de fórmula Via’. O procedimento é essencialmente como o descrito em Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1,1975,762. A desililação de um composto de fórmula Via' sob condições padrão origina então um composto de fórmula Via. Para uma listagem completa -33-Um /1 Ί
das condições adequadas ver, por exemplo, Greene e Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2a ed., p. 80, 161 (1991). Os compostos preferidos de fórmula VI são aqueles nos quais Rla e R2a são cada qual individualmente -H ou metoxilo, e R3a é -Η. O mais preferido é o composto no qual Rla e R2a são metoxilo.
Um composto de fórmula VI é convertido num composto de
em que
Rla, R2a, Rja, R4, Y, n e W são definidos como anteriormente; através dos métodos acima descritos para a conversão dos compostos de fórmula Ic nos compostos de fórmula Ib. Por exemplo, um método preferido é o acoplamento de Mitsunobu de um composto de fórmula VI com l-(2-hidroxietil)pirrolidina ou l-(2-hidroxietil)piperidina.
Uma vez obtido o composto de fórmula Hb, este pode ser opcionalmente desprotegido/desalquilado para se obter um composto de fórmula II ou, altemativamente, pode ser reduzido para se obter um composto de fórmula Hc -34-
c R2*
O-tCHjJn—W-R4 em que
Rla, R2a, R3\ R4, Y, n e W são definidos como anteriormente. Um método para efectuar esta redução envolve a reacção de um composto de fórmula lia com tetra-hidroaluminato de lítio num solvente inerte tal como THF. Se a reacção é efectuada à temperatura ambiente, pode ser isolado um produto intermediário o qual, após redução adicional com boro-hidreto de sódio em ácido acético, é convertido num composto de fórmula IIc. Altemativamente, se a redução é efectuada em refluxo, o composto de fórmula IIc pretendido pode ser isolado directamente. Os compostos de fórmula IIc podem ser opcionalmente desalquilados/desprotegidos para se obterem os compostos de fórmula Π.
No caso preferido onde Y é -CH2CH2-, i.e., fórmula lia
lia -35- -35- í
Utoj em que
Rla, R22, R3\ R4, Y, n e W são definidos como anteriormente; pode ser desejável efectuar uma reacção de desidrogenação, originando deste modo um composto de fórmula Ild
Rla, R2a, R3a, R4, Y, n e W são definidos como anteriormente. Esta desidrogenação pode ser efectuada por vários métodos conhecidos na técnica, o mais preferivelmente através da reacção com 2,3-dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona (DDQ).
Altemativamente, pode ser desejável efectuar a desidrogenação numa etapa anterior da síntese num composto de fórmula Via' para se obter um composto de fórmula VIb:
VIb lAsUs, -36-
Os compostos de fórmula VIb podem então ser convertidos em compostos de fórmula lie através dos métodos análogos à conversão de Via em Ha. O composto de fórmula Ild pode ser opcionalmente desprotegido/desalquilado para se obter um composto de fórmula II, ou altemativamente pode ser reduzido, como acima descrito, para se obter um composto de fórmula lie
em que
Rla, R2a, R3a, R4, Y, n e W são definidos como anteriormente. Um composto de fórmula He pode então ser opcionalmente desprotegido/ desalquilado para se obter um composto de fórmula II.
Colectivamente, os compostos de fórmula Ha-e com os seus vários substituintes definidos, e/ou os produtos da sua desprotecção como acima descrito, são representados como os compostos de fórmula II da presente invenção. -37-
/ f
Por exemplo, quando Rla, R2a, e/ou R3a de um composto de fórmula lie são grupos CrC4 alquilo protectores de hidroxilo, tais grupos podem ser removidos através de técnicas de desalquilação padrão para preparar um composto especialmente preferidos de fórmula lie. Nos exemplos mais preferidos dos compostos de fórmula II, R1 e R2 são individualmente -H, -OH, ou metoxilo, Y é -CH=CH-, B é -CH2-, n é 1, W é -CH2-, e R4 é 1-piperidinilo ou 1-pirrolidinilo.
Um método alternativo envolve a formação de compostos preferidos de fórmula I ou II por substituição dos grupos hidroxilo R1, R2, e/ou R3 de um composto de fórmula I ou fórmula II por metoxilo. Esta transformação é efectuada através de procedimentos bem conhecidos (ver, e.g., Greene e Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2a ed., p. 80, 161 (1991)). Um método especialmente preferido envolve a reacção de um composto mono- ou di-fenólico com diazometano em excesso.
Outros compostos preferidos de fórmula I ou II são preparados por substituição dos grupos hidroxilo recentemente formados R , R e/ou R de um composto de fórmula I ou fórmula Π com uma fracção de fórmula -0-C0-(Ci-Cô alquilo), ou -0-S02-(C4-C6 alquilo) através de procedimentos bem conhecidos. Ver, e.g., Pat. U.S. N° 4.358.593.
Por exemplo, quando é pretendido um grupo -0-C0-(CrC6 alquilo), o composto di-hidroxilo de fórmula I é feito reagir com um agente tal como cloreto, brometo, cianeto, ou azida de acilo, ou com um anidrido ou mistura de anidrido apropriada. As reacções são convenientemente efectuadas num solvente básico tal como piridina, lutidina, quinolina ou isoquinolina, ou num solvente de amiua terciária tal como trietilamina, tributilamina, metilpiperidina, e similares. A reacção pode também ser efectuada num solvente inerte tal como 4’ L'1/ΙΛή -38-acetato de etilo, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, dioxano, dimetoxielano, acetonitrilo, acetona, metiletilcetona, e similares, aos quais foi adicionado pelo menos um equivalente de eliminador de ácido (excepto como abaixo referido) tal como uma amina terciária. Se desejado, podem ser usados catalizadores de acilação tais como 4-dimetilaminopiridina ou 4-pirrolidinopiridina. Ver, e.g., Haslam ct al., Tetrahedron, 1980,36,2409-2433.
As rcacções de acilação que originam os grupos R1, R2 e R3 dos compostos dc fórmula I ou fórmula Π previamente mencionados são efectuadas a temperaturas moderadas, na gama de cerca de -25 °C a cerca de 100 °C, normalmcntc sob atmosfera inerte tal como gás azoto. No entanto, a temperatura ambiente é usualmente adequada para a reacção decorrer.
Tais acilações deste grupo hidroxilo podem também ser efectuadas através de reacções catalisadas por ácido dos ácidos carboxílicos adequados em solventes orgânicos inertes ou calor. São usados catalisadores ácidos tais como ácido sulfurico, ácido polifosfórico, ácido metanossulfónico, e similares.
Os grupos R1, R2 e/ou R3 dos compostos de fórmula I ou fórmula II previamente referidos podem também ser obtidos através da formação de um éster activo do ácido apropriado, tais como os ésteres formados pelos conhecidos reagentes diciclo-hexilcarbodiimida, acilimidazoles, nitrofenóis, pentaclorofenol, N-hidroxisuccinimida, e 1-hidroxibenzotriazole. Ver, e.g., Buli. Chem. Soc. Japan, 1965, 38, 1979, e Chem. Ber., 1970,788 e 2024.
Cada uma das técnicas anteriores que proporcionam fraeções -O-CO-(Ci-C6 alquilo) são efectuadas nos solventes acima discutidos. As técnicas que não produzem um produto ácido no curso da reacção não necessitam, obviamente, da utilização de um eliminador de ácido na mistura reaccional. (/\'Λ4ή -39-
Quando se pretende um composto de fórmula I ou fórmula Π nos quais o grupo R1, R2 e/ou R3 de um composto de fórmula I é convertido num grupo de fórmula -0-S02-(C4-C6 alquilo) ou -0-S02-CF3, o composto di-hidroxilo de fórmula I é feito reagir com, por exemplo, um anidrido sulfónico ou um derivado do ácido sulfónico apropriado tal como cloreto, brometo de sulfonilo, ou sal de sulfonil amónio, conforme referido por King e Monoir, J. Am. Chem. Soc., 1975, 97, 2566-2567, ou com um reagente tal como N-feniltrifluormetanosulfonimida, conforme referido por Hendrickson e Bergeron, Tetrahedron Letters, 1973, 4607. O composto di-hidroxilo pode também ser feito reagir com o anidrido sulfónico, misturas de anidridos sulfónicos, ou sulfonimidas apropriados. Estas reacções são efectuadas sob condições tais como as acima referidas na discussão da reacção com halogenetos de ácido e similares.
No caso em que R1, R2 e/ou R3 de um composto de fórmula I ou fórmula II tenha sido convertido em -0-S02-CF3, tal derivado pode ser adicionalmente convertido num composto de fórmula I ou fórmula II no qual os grupos -0-S02-CF3 tenham sido substituídos por H. Deste modo, o trifluormetanossulfonato de fórmula I ou fórmula II é reduzido sob as condições descritas no Exemplo 7, infra, conforme referido por Ritter, Synthesis, 1993, 735.
Embora as formas base livre dos compostos de fórmula I e fórmula II possam ser usadas nos métodos da presente invenção, é ocasionalmente vantajoso preparar e usar formas de sais farmaceuticamente aceitáveis. Deste modo, os compostos usados nos métodos desta invenção formam predominantemente sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis com uma variedade de ácidos orgânicos e inorgânicos, e incluem os sais fisiologicamente aceitáveis que são normalmente usados na química farmacêutica. Esses sais são também parte desta invenção. Ácidos inorgânicos I . •Jyvs, -40- típicos usados para foraiar tais sais incluem ácido clorídrico, bromídrico, iodídrico, nítrico, sulfurico, fosfórico, hipofosfórico, e similares. O sais derivados de ácidos orgânicos, tais como ácidos alifáticos mono e dicarboxílicos, ácidos alcanóicos fenil substiuídos, ácidos hidroxialcanóicos e hidroxialcandióicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos e aromáticos, podem também ser usados. Deste modo, os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, acetato, fenilacctato, trifluoracetato, acrilato, ascorbato, benzoato, clorobenzoato, dinitrobcnzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, metilbenzoato, o-acetoxibcnzoato, naftaleno-2-benzoato, brometo, isobutirato, fenilbutirato, β-hidroxibutirato, butino-l,4-dioato, hexino-l,4-dioato, caprato, caprilato, cloreto, cinamato, citrato, formato, fiimarato, glicolato, heptanoato, hipurato, lactato, matalo, maleato, hidroximaleato, malonato, mandelato, mesilato, nicotinato, isonicotinato, nitrato, oxalato, ftalato, tereftalato, fosfato, mono-hidrogenofosfato, di-hidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, propiolato, propionato, fenilpropionato, salicilato, sebaçato, succinato, suberato, sulfato, bissulfato, pirossulfato, sulfito, bissulfito, sulfonato, benzenossulfonato, p-bromofenilsulfonato, clorobenzenossulfonato, etanossulfonato, 2-hidroxietanossulfonato, metanossulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, p-toluenossulfonato, xilenossulfonato, tartarato, e similares. Um sal preferido é o sal de cloreto.
Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis são tipicamente formados por reacção de um composto de fórmula I ou fórmula II com uma quantidade equimolar ou excesso de ácido. Os reagentes são geralmente combinados num solvente comum tal como éter dietílico ou acetato de etilo. Normalmente, o sal precipita na solução ao fim de cerca de uma hora até 10 dias e pode ser isolado por filtração ou o solvente pode ser removido por meios convencionais.
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Os sais farmaceuticamente aceitáveis apresentam geralmente tuna melhor solubilidade quando comparados com os compostos dos quais eles são derivados, e ficam deste modo mais adequados para formulações como líquidos ou emulsões.
Os exemplos que se seguem são apresentados ara ilustrar adicionalmente a preparação dos compostos da presente invenção. Não se pretende que a invenção seja limitada no âmbito por qualquer um dos exemplos que se seguem.
Os dados de NMR para os Exemplos seguintes foram obtidos num instrumento NMR GE 300 MHz, e foi usado acetona-d^ anidra como solvente a não ser que de outro modo indicado.
Preparação la 6-Metoxitianaften-2-ona
A tetra-hidrofurano (200 ml) contendo 2-dimetilamino-6-metoxibenzo-[b]-tiofeno (cf U.S. 5.420.349) (20,00 g, 96,5 mmole) foi adicionado HC1 IN aquoso (200 ml) e a mistura resultante foi aquecida em refluxo durante 3 horas. A mistura foi arrefecida, as fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com diclorometano (300 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (250 ml), secas (MgSC>4), filtradas e concentradas para se obter o produto em bruto, o qual foi recristalizada a partir de -42-
A· etanol-3A, e seco em vácuo à temperatura ambiente para se obter o composto em título (13,89 g, 77,0 mmole, 80%): mp 80-82 °C; IV (KBr) 1713, 1605, 1485, 1287,1015, 865, 813 cm'1; *Η NMR (DMSO-dfi) δ 7,22 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 7,11 (s, 1 H), 6,78 (d, 1H, 18,4 Hz) , 4,06 (s, 2 H), 3,71 (s, 3 H); 13C NMR (DMSO-d6) δ 203,5, 159,0, 136,9, 125,6, 124,6, 112,3, 108,4, 55,3, 46,2. Anal. Calcd. para C9H802S: C, 59,98; H, 4,47; S, 17,78. Experim.: C, 60,19; H, 4,57; S, 18,03.
Preparação lb 6a, 11 a-Di-hidro-3,9-dimetoxi-6-//-[ 1 ]benzotieno[3,2-c] [ 1 ]benzopiran-6-ona
A uma solução em agitação de 6-metoxitianaften-2-ona (ver Docket B-9459) (20 g, 111 mmole) numa mistura de etanol (100 ml) e cloreto de metileno (50 ml) foi adicionado 4-metoxisalicilaldeído (17,5 g, 115 mmole) seguido por trietilamina (567 mg, 784 μΐ, 5,6 mmole) à temperatura ambiente Após 30 minutos, começou a precipitar um sólido e a agitação foi mantida durante a noite. A mistura foi então diluída com hexano frio (1 1) c filtrada para se obterem 28,7 g (82%)) do produto em título como um sólido esbranquiçado, puro por análise 'H-NMR. Uma amostra analítica foi obtida por recristalização a partir de tolueno como cristais amarelos claros, pf 157-165 °C: *H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,33 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 2,4 -43-
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Hz, 1H), 6,70 (m, 2H), 6,60 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,22 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,33 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 3 ,76 (s, 3H); IV (CHC13) 1759 cm·1; MS (FD) m/e 314 (M+); Anal. calcd. para C17H14O4S: C, 64,95; H, 4,50. Experim.: C, 65,01; H, 4,58.
Preparação 2 3,9-Dimetoxi-6-H-rilbenzotienor3.2-cimbenzopiran-6-ona
Uma mistura do produto da Preparação 2 (4,5 g, 14,3 mmole) e 2,3-dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona (DDQ) (3,4 g, 15 mmole) em dicloroetano (100 ml) foi rapidamente aquecida a 80 °C, induzindo a formação de um precipitado. A mistura foi filtrada quente, lavando o precipitado com cloreto^ de metileno, e as aguás-mães concentradas em vácuo. O remanescente foi dissolvido em cloreto de metileno quente, filtrado para remover hidroquinona residual, e reconcentrada. O produto foi recristalizado a partir de tolueno para se obterem 3,94 g (88&) do composto em título como agulhas brancas, pf 220-221 °C; *H-NMR (acetona-dé/DMSO-dô) δ 8,41 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,74 (d, J - 2,3 Hz, 1H), 7,20 (dd, J - 8,9, 2,4 Hz, 1H), 7,09 (d, J - 2,4 Hz, 1H), 7,03 (dd, J - 8,6, 2,4 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,91 (s, 3H) ; IV (KBr) 1717 cm'1; MS (FD+) m/e 312 (M+) ; Anal. calcul. para C17H12O4S: C, 65,37; H, 3,88. Experim.: C, 65,51; H, 3,90. -44- ί/L/iáj
Preparação 3 3.9-BislY ferc-butildimetilsililloxil-6-H- Γ1 Ibenzotieno í3.2-cirilbenzopiran-6-ona
A uma pasta em agitação mecânica do produto da Preparação 2 (12 g, 38,4 mmole) em cloreto de metileno (220 ml) foi adicionado etanotiol (11,9 g, 13,4 ml, 192 mmole) seguido por cloreto de alumínio (38,4 g, 288 mmole), em pequenas porções. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas, sendo então arrefecida a 0 °C e adicionando-se cuidadosamente tetra-hidrofurano (THF) (250 ml) seguido por bicarbonato de sódio (250 ml). A mistura foi diluída com THF (1 1), as fases separadas e a fase aquosa lavada com THF (200 ml). A fase orgânica combinada foi seca (sulfato de sódio) e concentrada para se obterem 11,1 g (102%) de difenol em bruto como um sólido amarelo, o qual foi utilizado sem purificação adicional. O produto em bruto foi misturado em cloreto de metileno (220 ml) e tratado com tríetilamina (20,2 g, 28 ml, 200 mmole) e cloreto de terc-butildimetilsililo (20,3 g, 134,4 mmole). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas, durante as quais se tomou homogénea. Após diluição com hexano (600 ml), a mistura foi lavada com salmoura (600 ml) e a fase aquosa foi extraída com hexano (300 ml). A fase orgânica combinada foi seca (sulfato de sódio), concentrada, e o resíduo recristalizado a partir de hexano para -45-l/Λΐη
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se obterem 18,0 g (91%) do composto em título com um sólido branco tipo penugem, pf 142-144 °C: 'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,50 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 8,7, 2,1 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 8,4,2,2 Hz, 1H), 1,01 (s, 9H), 1,00 (s, 9H), 0,27 (s, 6H), 0,25 (s, 6H); 13C-NMR (75 MHz, DMSO-dé) δ 158,4,157,0,154,6, 152,7, 149,6, 138,5,130,5,125,2,124,6,120,0,117,6,116,3, 112,7,111,3,108,0, 25,6, 25,6, 18,2, 18,2, -4,4, -4,4; IV (CHC13) 1717 cm·'; MS (FD) m/e 512 (M+); Anal. calc.. para C27H3604SSi2: C, 63,24; H, 7,08. Experim.: C, 63,45; H, 7,36.
Preparação 4 3.9-Bisf (rerobutildimetilsiliDoxil-ó-H-í 1 Ibenzotieno f 3,2-cl Γ11benzopiran-6-ol
Uma solução da Preparação 3 (2,0 g, 3,9 mmole) em tolueno (200 ml) foi arrefecida a -92 °C e tratada gota a gota com uma solução 1,0M em tolueno de hidreto de di-isobutilalumínio (11,3 ml, 11,3 mmole) a uma velocidade para manter a temperatura interna abaixo de -89 °C. A mistura foi agitada durante aproximadamente 3 horas, sendo a temperatura gradualmente elevada a -77 °C, sendo então terminada com metanol (5 ml) e ácido cítrico 10% aquoso (50 ml). Após diluição com cloreto de metileno (200 ml), a mistura foi lavada com solução saturada de tartarato de sódio e potássio (100 ml), e a fase
f Ζ^ν-'-ον? ! / -46-aquosa foi extraída com cloreto de metileno (2x200 ml). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (300 ml) e a lavagem de salmoura foi adicionalmente extraída com cloreto de metileno (100 ml). A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio), concentrada, e o remanescente cromatografado (sílica gel, 1-15% acetato de etilo/hexano) para se obterem 360 mg (18%) do composto de partida, 1,21 g (60%, 74% baseado na recuperação do composto de partida) do composto em título como um sólido cristalino branco (amostra analítica recristalizada a partir de hexano/acetato de etilo, pf 162-164 °C); 'H-NMR (300 MHz) δ 7,70 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 8,5, 1,8 Hz, 1H), 6,85 (br s, 1H), 6,6 (m, 2H), 6,39 (br s, 1H), 1,01 (s, 9H), 1,00 (s, 9H), 0, 25 (s, 6H), 0, 25 (s, 6H); 13C-NMR (125 MHz) δ 156,9,153,3, 151,7,139,9, 131,9,124,5, 123,9, 121,7, 118,8, 113,7, 113,1,112,7, 108,7, 90,7, 25,1, 25,1, 17,9, -5,2, -5,2; IV (CHC13) 3540 cm'1; MS (FD+) m/e 514 (M+); Anal. calcul. para C27H3804SSi2: C, 62,98; H, 7,45. Experim.: C, 63,25; H, 7,68, e 260 mg (13%, 16% baseado no composto de partida recuperado do diol abaixo
como um sólido amorfo: ’Η-NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,73 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,98 (dd, J = 8,7, 2,0 Hz, 1H), 6,5 (m, 3H), 6,30 (br s, 1H), 4,71 (s, 2H), 1,01 (s, 9H), 1,00 (s, 9H), 0,22 (s, 6H), 0,19 (s, 6H); IV (CHC13) 3600, 3510 cm'1; MS (FD+) m/e 516 (M+); Anal. calc.. para C27H40O4SS12: C, 62,73; H, 7,82. Experim.: C, 62,49; H, 7,83.
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Preparação 5 3,9-Bis Γ( fó/r-butildimetilsilil~)oxi]-6-fenoxi-6-H-r 1 ]henzotieno f 3,2-cl f 1 Ibenzopirano
A uma solução do produto da Preparação 4 (4,52 g, 8,78 mmole) e fenol (4,13 g, 43,9 mmole) em cloreto de metileno (100 ml) foi adicionado sulfato de magnésio anidro (4,5 g) e a pasta resultante foi agitada durante 4 horas à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada e concentrada e o resíduo dissolvido em clorobenzeno e reconcentrada em vácuo a aproximadamente 70 °C. O resíduo foi então dissolvido em cloreto de metileno (300 ml) e água (2x300 ml), seco (sulfato de sódio), e concentrado para se obterem 5,16 g (99%) do composto em título como um sólido amorfo o qual foi usado sem purificação adicional: ^-NMR (300 MHz) δ 7,67 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,4-7,5 (m, 4H), 7,23 (d, J = 8,4, 1H), 7,08 (t, J - 7,2 Hz, 1H), 6,99 (dd, J = 8.7, 2,1 Hz, 1H), 6,67 (dd, 8,4, 2,3 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 0,99 (s, 9H), 0,96 (s, 9H), 0, 24 (s, 6H), 0, 21 (s, 6H), 13C-NMR (125 MHz) δ 156,9, 153.3.151.7, 139,9, 131,9,124,5,123,9, 121,7,118,8, 113,7,113,1,112,7,108,7, 90.7, 25,1, 25,1, 17,9, -5,2, -5,2; MS (FD+) m/e 590 (M+).; Anal. calc. para C33H42O4SS12: C, 67,06; H, 7,18. Experim.: C, 66,78; H, 6,96.
Prepararão 6 3.9-Bisí(/erc-butildimetilsiliDoxi1-6-r4-f2-n-piperidinir>etoxilfeniH-6-H- ri1benzotienoí3.2-clfllbenzopirano
A uma solução do produto da Preparação 5 (4,0 g, 6,7 mmole) em tolueno (100 ml) a 0 °C foi adicionada uma solução 0,5M em THF de brometo de 4-[2-(l-piperidinil)etoxi]fenilmagnésio (preparado a partir do correspondente bromobenzeno e aparas de magnésio, catalizado por iodo em THF, 27 ml, 13,5 mmole). A mistura foi deixada aquecer à temperatura ambiente e agitada 1,5 horas. Após terminar a reacção com água (300 ml), a mistura foi extraída com acetato de etilon (2x300 ml), e a fase orgânica foi seca (sulfato de sódio) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia (sílica gel, 3:1 hexano : acetato de etilo, 0,1% hidróxido de amónio) para se obterem 3,85 g (82%) do composto em título como um sólido incolor gomoso: !H-NMR (300 MHz) δ 7,45 (s, 1H), 7,2-7,3 (m, 4H), 6,8-6,9 (m, 3H), 6,68 (s, 1H), 6,51 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 6,36 (s, 1H), 4,01 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,62 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,41 (m, 4H), 1,4-1,6 (m, 4H), 1,3-1,4 (m, 2H), 0,99 (s, 9H), 0,96 (s, 9H), 0,22 (s, 6H), 0,20 (s, 6H); 13C-NMR (125 MHz) δ 160,3, 157,9, 154,0, 153,5, 141,0, 132,8, 132,6, 130,1, 129,8, 126,1, 124,8,122’,7, 119,4, 115,3, 114,5, 114,2, 114,0, 109,4, 78,2, 66,9, 58,5, 55,6, 26,8, 26,0, 26,0, 25,0, 18,7, -4,3, -4,3; MS (FD) m/e 702 (M+); Anal. calc. para C40H55NO4SS12: C, 68,43; H, 7,90; N, 2,00. Experim.: C, 68,58; H, 8,00; N, 2,26. -49-[Asm
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Exemplo 1 3.9-Di-hidroxi-6-r4-r2-f l-piperidinilletoxilfenin-6-Η-Γ 1 lbenzotienor3.2- clfllbenzopirano
A uma solução do produto da Preparação 6 (3,85 g, 5,5 mmole) em THF (150 ml), foi adicionada uma solução 1,0M em THF de fluoreto de tetra-n-butilamónio (FTBA) (27,4 ml, 27,4 mmole). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas, sendo então diluída com acetato de etilo (300 ml) e lavada com solução saturada de cloreto de amónio (300 ml). A fase aquosa foi lavada com acetato de etilo (150 ml), e a fase orgânica combinada foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (300 ml), seca (sulfato de sódio) e concentrada. O remanescente foi purificado por purificado por cromatografia (sílica gel, 1:1 hexano : acetato de etilo, 10% metanol, 0,1% hidróxido de amónio) para se obterem 2,35 g (90%) do composto em título como uma espuma vermelha. Cristalização a partir de metanol originou um pó esbranquiçado, pf 242-245 °C; 'H-NMR (300 MHz) δ 8,58 (br s, 2H), 7,35 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,17 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,80 (m, J = 2,2 Hz, 1H), 6,63 (s, 1H), 6,46 (dd, J = 8,2,2,2 Hz, 1H), 6,35 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 4,02 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,63 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,42 -50- (m, 4H), 1,4-1,6 (m, 4H), 1,3-1,4 (m, 2H); nC-NMR (125 MHz, dimetilformamida-d7) δ 160,2, 159,9, 156,4, 153,2, 140,8, 132,8, 130,9, 129,6, 125.3, 124,6, 122,5, 115,2, 115,1, 112,2, 109,6, 108,8, 108,7, 104,5, 77,6, 66,6, 58.3, 55,3, 26,5, 24,8; HRMS (FAB+) m/e calc. para C28H27N04S 474,1739 (MH+), Experim. 474,1726; Anal. calc. para C28H27NO4S.0,8H20: C, 68,90; H, 5,92; N, 2,87. Experim.: C, 68,88; H, 5,76; N, 2,86.
Exemplo 2 3.9-Dimetoxi-6-r4-r2-( 1 -piperidinil)etoxilfenill-6-H-r 11benzotienor3.2- clfllbenzopirano
·# ................
Uma solução do produto do Exemplo 1 (300 mg, 0,633 mmole) em metanol (75 ml) foi tratada com uma solução de diazometano em éter/álcool (aproximadamente 16 mmole) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada até a evolução gasosa cessar, fez passar azoto através da solução durante 10 minutos para remover o excesso de diazometano, e a mistura foi concentrada. Cromatografía radial do resíduo (1:1 hexano:acetato de etilo, 2% metanol, sob atmosfera de amónia) originou 118 mg (37%) do composto em título como cristais brancos, pf 134-36: ‘H-NMR. (300 MHz) δ 7,51 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,2-7,4 (m, J = 8,6 Hz, 4H), 6,86 (m, 3H), 6,70 (s, 1H), 6,55 (dd, J = 8,4, 2,3 Hz, 1H), 6,41 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,01 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), -51 - -51 -
2,62 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,40 (m, 4H), 1,4-1,6 (m, 4H), 1,3-1,4 (,m, 2H); nC-NMR (125 MHz, CDC13) δ 160,8, 159,2, 157,1, 152,6, 140,3, 131,6, 131,3,
65,8, 57,8, 55,5, 55,2, 54,9, 25,9,24,1; MS (FD+) m/e 501 (M+); Anal. calc. para C3oH31N04S: C, 71,83; H, 6,23; N, 2,79. Experim.: C, 71,53; H, 6,20; N, 2,84.
Exemplo 3 3.9-Bis(benziloxiV6-r4-r2-f 1 -piperídinilletoxi1feni11-6-H-rilbenzotienof3.2- cirilbenzopirano
A uma solução do produto do Exemplo 1 (200 mg, 0,42 mmole) em cloreto de metileno (25 ml) à temperatura ambiente foi adicionada trietilamina (0,18 ml, 1,27 mmole) através de uma seringa ao longo de 10 minutos. A mistura reaccional foi agitada durante 16 horas, sendo então lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (25 ml) seguido por água (25 ml). A fase orgânica foi seca (sulfalu de sódio) e concentrada, e o resíduo foi purificado por cromatografia radial (sílica gel, 12:12:1 acetato de etilo: hexano: metanol, sob atmosfera de amónia) para se obterem 200 mg (69%) do composto em título como um sólido amarelo-acastanhado: *H-NMR (300 MHz, DMSO-dé) δ 8,1-8,2 (m, 5H), 7,5-7,8 (m, 8H), 7,2-7,3 (m, 3H), 6,9-7,0 (m, 5H), 4,00 (t, J = 5,5 Hz, -52-
i
2H), 2,60 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 2,38 (m, 4H), 1,4-1,5 (m, 4H), 1,3 1,4 (m, 2H). HRMS (FAB+) m/e calc.. para C42H36N06S 682,2263 (MH+), Experim. 682,2286.
Exemplo 4 3.{)-Bis(pivaloiloxi')-6-r4-r2-n-piperidinilletoxilfenill-6-H-rilbeiizotienor3.2- cirilbenzopirano
De acordo com o procedimento do Exemplo 2, o produto do Exemplo 1 (200 mg, 0,42 mmole) foi feito reagir com trietilamina (0,18 ml, 1,27 mmole) e cloreto de pivaloílo (0,16 ml, 1,27 mmole) em cloreto dé mètileno (25 ml) para se obterem 190 mg (70%) do composto e título como uma espuma branca: 'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,58 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 9,6 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 8,7 HZ, 1H), 6,93 (dd, J = 8,8, 2,1 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,70 (dd, J = 4,3, 2,1 Hz, 1H), 6,63 (s, 2H), 4,13 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 2,83 (m, 2H), 2,58 (m, 4H), 1,66 (m, 4H), 1,46 (m, 2H), 1,37 (s,9H), 1,33 (s, 9H); MS (FD+) m/e 641 (M+); HRMS (FAB+) m/e calc.. para C38H44NO6S 642,2889 (MH+), Experim. 642,2848; Anal. calc. para C38H44NO6S: C, 71,11; H, 6,75; N, 2,18. Experim.: C, 71,86; H, 6,49; N, 2,09.
~V..·
J -53-
Exemplo 5 3.9-Bis(l-butilsulfoniloxi)-6-r4-r2-(l-piperidinir)etoxilfenil1-6-H-Γ1 Ibenzotienof 3,2-cl Γ1 lbenzopirano
De acordo com o procedimento do Exemplo 2, o produto do Exemplo 1 (200 mg, 0,42 mmole) foi feito reagir com trietilamina (0,18 ml, 1,27 mmole) e cloreto de n-butanossulfonilo (0,17 ml, 1,27 mmole) em cloreto de metileno (25 ml) para se obterem 120 mg (40%) do composto e título como uma goma castanha límpida: 'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,77 (s, 1H), 7,38 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 9,5 Hz , 2 H), 7,11 (s , 2H), 6,8 - 6,9 (m, 4 H), 6,63 (s, 1H), 4,08 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,2-3,2 (m, 4H), 2,77 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 2,51 (m, 4H), 1,9-2,0 (m, 4H) 1,4-1,6 (m, 10H), 0,9-1,0 (m, 6H); HRMS (FAB+) mie calc.. para C38H44NO8S3 714,2229 (MH+), Experim. 714,2206.
Exemplo 6 3.9-Bisftrifluormetanossulfoniloxi)-6-[4-[2-(l-piperidini11etoxilfenil1-6-H-Γ11benzotienor3,2-cl Γ1 lbenzopirano
-54- -54-
ίΛ (yésl/lsis™· A lima solução do produto do Exemplo 1 (500 mg, 1,06 mmole) em THF (25 ml) contendo dimetilformamida (2 ml) à temperatura ambiente foi adicionada trietilamina (0,64 g, 0,69 ml, 6,36 mmole) seguido por N-fcniltrifluormctonossulfonimida (0,83 g, 2,33 mmole). A mistura reaccional foi agitada durante 12 horas, aquecida a 60 °C, e foi adicionado N-feniltriíluormetanossulfonimida (0,30 g, 0,85 mmole) adicional. Após 30 minutos, a mistura reaccional foi arrefecida à temperatura ambiente e concentrada, e o resíduo foi purificado por cromatografia radial (sílica gel, 1:1 hexano: acetato de etilo, 1% metanol sob atmosfera de amónia) para se obterem 780 mg (100%) do composto em título como uma espuma branca: 'H-NMR (300 MHz, metanol-d») Ô 7,63 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,13 (dd, J = 8,8, 2,7 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,80 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 6,49 (d, J - 2.5 Hz, 1H), 6,39 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,05 (dd, J = 8,7, 2,6 Hz, 1H), 4,00 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2,67 (m, 2H), 2,45 (m, 4H), 1,4-1,6 (m, 4H), 1,3-1,4 (m, 2H); 13C-NMR (125 MHz) δ 159,8, 152,8,150,2, 146,9,140,4,136,6, 130,5, 129,2, 127,3, 125,3, 123,4, 119,2, 118,9, 116,3, 114,7, 114,6, 110,4, 77,7, 66,0, 57,6, 54,7, 25,8, 24,0; MS (FD) m/e 737 (M+); Anal. calc. para C3oH25F6N08S3: C, 48,84; H, 3,42; N, 1,90. Experim.: C, 49,05; H, 3,71; N, 1,72.
Exemplo 7 6- Γ4- Γ2-Π -piperidinilletoxilfenill-6-Η-Γ 1 lbenzotienor3.2-cl Γ llbenzopirano
Uma solução do produto do Exemplo 6 (780 mg, 1,06 mmole), acetato de paládio (II) (42 mg, 0,19 mmole), 1,2-bis(difenilfosfino)propano (149 -55-
7 mg, 0,36 mniolc), ácido fórmico (0,6 ml), c trietilamina (3,0 ml) em dimetilformamida anidra (40 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 4 dias. Após concentração, o resíduo foi sujeito a cromatografia (sílica gel, 1:1 hexano:acetato de etilo, 2-10% metanol, 0,1% hidróxido de amónio). As fracções contendo o produto foram concentradas, extraídas com uma mistura de cloreto de metileno (100 ml) e solução saturada de bicarbonato de sódio (100 ml), e a fase aquosa foi extraída com cloreto de metileno (50 ml). Os extractos orgânicos combinados foram secos (sulfato de sódio), concentrados e o resíduo purificado por cromatografia (sílica gel, 1:1 hexano:acetato de etilo, 2-10% metanol, 0,1% hidróxido de amónio) para se obterem 267 mg (57%) do composto em título como um óleo que originou um sólido branco cristalino, pf 107°C, após trituração com éter/hexano: ‘H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,86 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,1-7,3 (m, 6H), 6,97 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,66 (s, 1H), 4,07 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 2,75 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 2,49 (m, 4H), 1,5-1,7 (m, 4H), 1,4-1,5 (m, 2H); 13C-NMR (125 MHz, CDC13) δ
(FD+) m/e 441 (M+) ; Anal. calc. para C28H27NO2S: C, 76,15; H, 6,17; N, 3,17.
Experim.: C, 75,93; H, 6,44; N, 3,01.
Preparação 7 3.9-Bisí(terc-butildimetilsilinoxil-6-r4-hidroxifenilol-6-H-rilbenzotienor3.2.- cinibenzopirano
A uma solução do Produto da Preparação 5 (3,0 g, 5,08 mmole) em tolueno (150 ml) a 0 °C foi adicionado uma solução 0,4M em THF de brometo de 4-(trimetilsililoxi)fenilmagnésio (preparada a partir do bromobenzeno correspondente e aparas de magnésio, catalizado por iodo em THF, 24,4 ml, 10,16 mmole). A mistura foi deixada aquecer à temperatura ambiente e agitada durante 1,5 horas. Após diluição com éter (250 ml), a reacção foi terminada com solução saturada de cloreto de amónio (250 ml) e a fase orgânica seca (sulfato de sódio) e concentrada. O resíduo foi dissolvido em metanol (100 ml) e foi adicionado éter até a mistura ficar homogénea. A solução foi arrefecida a 0 °C e tratada com carbonato de potássio anidro (3 g) durante 15 minutos. Após diluição com éter (250 ml), a mistura foi filtrada através de Celite, lavada com solução saturada de cloreto de amónio e a fase aquosa extraída com mais éter (100 ml). A fase orgânica combinada foi seca (sulfato de sódio), concentrada e o resíduo purificado por cromatografia (sílica gel, 10:1 hexano : acetato de etilo). Recristalização a partir de hexano originou 2,6 g (87%) do composto em título como um sólido rosa claro, pf 174-175 °C: 'H-NMR (300 MHz) δ 8,49 (s, 1H), 7,44 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,3-7,4 (m, 4H), 6,83 (dd, J = 8,7,2,2 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,65 (s, 1H), 6,50 (dd, J = 8,2, 2,3 Hz, 1H), 6,36 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 0,98 (s, 9H), 0,95 (s, 9H), 0,21 (s, 6H), 0,20 (s, 6H); 13C-NMR. (125 MHz) δ 158,7, 157,8, 153,9, 153,5, 140,9, 132,7, 131,6, 131,1, 129,9, 126,1, 124,7, 122,7, 119,3, 116,1, 114,4, 114,0, 113,9, 109,3, 78,3, 26,0, 25,9, 18,7, -4,3; IV (CHC13) 3590, 3310 cm*1; MS (FD+) m/e 590 (M+) ; Anal. calc. para C33H42O4SS12: C, 67,07; H, 7,16. Experim.: C, 66,79; H, 7,05.
Preparação 8 3,9-Bis IY terc-butildimetilsilil)oxil -6-Γ4- Γ2-Γ1 -pirroli dini 1 tetoxil fenill-6-Η-í 1 lbenzotienor3,2-ciri lbenzopirano -57-
Uma solução em tolueno do produto da Preparação 7 (400 mg, 0,68 mmole), trifenilfosfina (708 mg, 2,7 mmole), e l-(2-hidroxietil))pirrolidina (390 mg, 396 μΐ, 3,39 mmole) foi tratada com azodicarboxilato de dietilo (DEAD) (470 mg, 425 μΐ, 2,7 mmole) à temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. A mistura foi então diluída com éter (100 ml), lavada com solução saturada de cloreto de amónio (100 ml) e a fase aquosa lavada com mais éter (50 ml). A fase orgânica combinada foi seca (sulfato de sódio), concentrada e o óxido de trifenilfosfina residual precipitado a partir de hexano. As águas mães de hexano foram concentradas e o resíduo purificado por cromatografia (sílica gel, 1:1 hexano : acetato de etilo, 3-5% metanol, 0,1% hidróxido de amónio) para se obterem 359 mg (77%) do composto em título como um óleo incolor: ]H-NMR (300 MHz) δ 7,45 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,22 (m, 2H), 6,85 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,83 (dd, J = 8,6, 2,3 Hz, 1H), 6,68 (s, 1H), 6,50 (dd, J = 8,3, 2,2 Hz, 1H), 6,36 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 4,03 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,77 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,50 (m, 4H), 1,67 (m, 4H), 0,98 (s, 9H), 0,95 (s, 9H), 0,21 (s, 6H), 0,20 (s, 6H); 13C-NMR (125 MHz) δ 160,1, 157,8, 153,9, 153,4, 140,9, 132,7, 132,5, 131,1, 129,8, 125,9, 124,7, 122,6, 119,3, 115,1, 114,4, 114,1, 113,9, 109,4, 78,1, 67,7, 55,2, 54,9, 26,0, 25,9, 24,0, 18,6, -4,3; MS (FD+) mie 687 (M+) ; Anal. calc. para C39H53NO4SS12: C, 68,06; H, 7,78; N, 2,04. Experim.: C, 67,94; H, 7,61; N, 2,21. / ,
-58-
Exemplo 8 3.9-Di-hidroxi-6-r4-r2-(l-pirrolidinil)etoxilfenin-6-H-rilbenzotienor3.2- cirilbenzopirano
Através do procedimento descrito no Exemplo 1, o produto da Preparação 8 (331 mg, 0,48 mmole) foi feito reagir com FTBA 1,0M em THF (2,4 mmole) para se obter, após cromatografia radial (sílica gel, 1:1 hexano : acetato de etilo, 30% metanol, sob atmosfera de amónia), 200 mg (91%) do composto em título como um sólido branco: pf 237-240 °C: 'H-NMR (300 MHz, dimetilformamida-d7) δ 10,05 (br, 2H), 7,45 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,86 (dd, J = 8,9, 2,2 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,51 (dd, J = 8,2, 2,1 Hz, 1H), 6,40 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 4,14 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,96 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,6-2,8 (m, 4H), 1,6-1,8 (m, 4H); 13C-NMR (125 MHz, dimetilformamida-d7) δ 160,2, 159.6.156.4.153.2, 140,8,133,0,130,8,129,6,125,2,124,6,122,4, 115,3, 115,1, 112.2, 109,7, 108,8, 104,5, 77,6, 66,8, 54,8, 54,7, 23,8; IV (KBr) 3286 cm'1; HRMS (FAB+) m/e calc. para C27H26N04S 460,1583 (MH+), Experim. 460,1572; Anal. calc. para C27H25NO4S.0,5H2O: C, 69,20; H, 5,60; N, 2,99. Experim.: C, 69,13; H, 5,31; N, 2,58. -59-
j
Preparação 9 319-Bisf(terc-butildimetilsilil)oxi1-6-r4-(2-dimetilaminoetoyi)fpr.ii_^-w. ri1benzotienoí3.2-cinibenzopirann
Através do método descrito na Preparação 8, o produto da Preparação 7 (450 mg, 0,76 mmole), trifenilfosfina (799 mg, 3,1 mmole) e N,N-dimetiletanolamina (340 mg, 383 μΐ, 3,81 mmole) foi feito reagir com azodicarboxilato de dietilo (DEAD) (531 mg, 480 μΐ, 3,1 mmole) em toleuno (30 ml). Cromatografía (sílica gel, 1:1 hexano : acetato de etilo, 3% metanol, 0,1% hidróxido de amónio) originou 357 mg (71%) do composto em títuío como uma espuma branca: *H-NMR (300 MHz) δ 7,45 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,24 (m, 2H), 6,83 (m, 3H), 6,67 (s, 1H), 6,50 (dd, J = 8,2, 2,2 Hz, 1H), 6,36 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 4,00 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,60 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,20 (s, 6H), 0,98 (s, 9H), 0,95 (s, 9H), 0,21 (s, 6H), 0,20 (s, 6H); 13C-NMR (125 MHz) δ 160,1,157,8,153,9,153,4,141,0,132,7,132,6,131,2,129,8,126,0, 124,7, 122,7, 119,4, 115,2, 114,4, 114,1, 113,9, 109,4, 78,1, 67,0, 58,7, 46,0, 26,0, 25,9, 18,6, -4,3; MS (FD+) m/e 661,5 (M+); Anal. calc. para C37H51NO4SS12: C, 67,11; H, 7,78; N, 2,12. Experim.: C, 67,38; H, 7,52; N, 2,09. -60- l/y-y,
I
Exemplo 9 3.9-Di-hidroxi-6- Γ4-Γ2-Γ 2-dimetilaminoetoxi)fenill -6-Η-Γ1 lbenzotienor3,2- cinibenzopirano
Através do procedimento descrito no Exemplo 1, o produto da Preparação 9 (328 mg, 0,50 mmole) foi feito reagir com FTBA 1,0M em THF (2,5 mmole) para se obter, após cromatografia (sílica gel, 1:1 hexano : acetato de etilo, 30% metanol, sob atmosfera de amónia), 212 mg (99%) do composto em título, o qual cristalizou a partir de tetracloreto de carbono/acetona como um sólido rosa, pf 130-140d°C: ‘H-NMR (300 MHz) δ 7,34 (d, J = 2,1 Hz71H), 7,25 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,15 (m, 2H), 6,9-7,0 (m, 3H), 6,62 (s, 1H), 6,45 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 6,34 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 4,01 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,64 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,30 (s, 6H); 13C- NMR (125 MHz) δ 160,0, 159,8, 156,0, 153,5, 141,1, 133,0,131,4,130,2,129,8, 125,3, 124,8,122,6,115,3,115,2,112,7,109,7,109,0, 104,8, 78,0, 66,6, 58,6, 45,8; IV (KBr) 3300 cm'1; HRMS (FAB+) m/e calc. para C25H24NO4S 434,1426 (MH+), Experim. 434,1440; Anal. calc. para C25H23NO4S.0,4CCl4: C, 61,62; H, 4,69; N, 2,83. Experim.: C, 60,93; H, 4,73; N, 2,95. -61- -61-
Preparacâo 10 S^-Bisfíterc-butildimetilsilinoxil-ó-r^ri-^-oxo-l-pirroliHinilletoxilfenill-ó-H-Γ1 lbenzotienor3,2-cl Γ1 lbenzopírano
Através do método descrito na Preparação 8, o produto da Preparação 7 (450 mg, 0,76 mmole), trifenilfosfina (799 mg, 3,1 mmole) e l-(2-hidroxietil)-2-pirrolidinona (492 mg, 431 μΐ, 3,81 mmole) foi feito reagir com azodicarboxilato de dietilo (DEAD) (531 mg, 480 μΐ, 3,1 mmole) em tolueno (30 ml). Cromatografia (sílica gel, 1:1 hexano : acetato de etilo) originou 368 mg (71%) do composto em título como uma espuma branca: ^-NMR (300 MHz) δ 7,45 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,88 (m, 3H), 6,69 (s, 1H), 6,51 (dd, J = 8,5, 2,5 Hz, 1H), 6,36 (d, 2,3 Hz, 1H), 4,05 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,54 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,46 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,15 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 1,91 (m, 2H), 0,98 (s, 9H), 0,95 (s, 4H), 0,21 (s, 6H), 0,20 (s, 6H); 13C-NMR (125 MHz) δ 175,0, 160,1, 158,1, 154,2, 153,6,141,2,133,2,133,0, 131,4,130,1,126,2,125,0,122,9,119,6,115,5, 114,6, 114,4, 114,2, 109,6, 78,3, 67,0, 48,7, 42,7, 31A 26,2, 26,2, 18,9, -4,1; IV (CHC13) 1673 cm'1; HRMS (FAB+) m/e calc para C39H51N05SSÍ2 701,3027 (M+), Experim. 701,3039. -62-
J
Exemplo 10 3.9-Di-hidroxi-6-r4-r2-(2-oxo-l-piirolidinir)etoxilfenin-6-H-ri1benzotienor3.2- cl Γ1 lbenzopirano
Através do procedimento descrito no Exemplo 1, o produto da Preparação 10 (331 mg, 0,47 mmole) foi feito reagir com FTBA 1,0M em THF (2,4 mmole) para se obter, após cromatografia radial (sílica gel, 1:1 hexano : acetato de etilo, 20% metanol, sob atmosfera de amónia) e recristalização a partir de acetona, 161 mg (72%) do composto em título como um sólido vermelho, pf 150-160d°C: ‘H-NMR (300 MHz, metanol-dO δ 7,21 (m, 3H), 7,11 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,71 (dd, J = 8,6, 2,2 Hz, 1H), 6,51 (s, 1H), 6,37 (dd, J = 8,2, 2,3 Hz, 1H), 6,25 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 4,04 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,57 (t, J = 5,2,Hz, 2H), 3,48 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,28 (t, J = 8,1 Hz, 2H), 1,91 (quinteto, J = 7,5 Hz, 2H); 13C-NMR (125 MHz, metanol-d») δ 178,0, 160,2, 160,0, 156,2, 153,9, 141,7, 133,7, 131,9, 130,9, 130,3, 125,6, 125,0, 122,7, 115,6, 115,4, 113,4, 109,8, 109,0, 104,9, 78,6, 66,6, 43,4, 31,8, 30,7, 18,9; IV (CHC13) 1680 cm1; MS (FD+) m/e 474 (MH+); Anal. calc. para C27H23N05S.(CH3)2CO: C, 67,77; H, 5,51; N, 2,64. Experim.: C, 67,92; H, 5,56; N, 2,59. -63- -63-
Exemplo 10a 3.9-Di-hidroxi-6-r4-(,2-dietilaminoetoxilfenill-6-H-rilbenzotienor3.2- cinibenzopirano
Através do procedimento descrito no Exemplo 1, o produto da Preparação 11 (458 mg, 0,66 mmole) foi feito reagir com FTBA 1,0M em THF (3,3 mmole) para se obter, após cromatografia radial (sílica gel, 1:1 hexano : acetato de etilo, 10-20% metanol, sob atmosfera de amónia) e cristalização a partir de acetona/éter, 296 mg (72%) do composto em título como um sólido vermelho, pf 118-123 °C: Ή-NMR (300 MHz) δ 7,35 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,81 (m, 3 H), 6,62 (s, 1H), 6,45 (dd, J = 8,3,2,3 Hz, 1H), 6,35 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 3,98 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 2,78 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 2,56 (q, J = 7,1 Hz, 4H), 0,97 (t, J = 7,1 Hz, 6H); 13C-NMR (75 MHz) 160,2, 159,7, 155,9, 153,5, 141,1, 132,9, 131,5, 130,2, Í29,9, 125,4, 124,8, 122,7, 115,2, 112,8, 109,6, 108,9, 104,8, 78,1, 67,5, 52,6, 48,3, 12,4; IV (KBr) 3311 cm'1; MS (FD+) m/e 462 (MH+); Anal. calc. para C27H27N04S: C, 70,04; H, 6,13; N, 3,04. Experim.: C, 70,26; H, 5,90; N, 3,03. -64-
Exemplo 10b 3.9-Di-hidroxi-6-r4-r2-(l-morfolininetoxilfenill-6-H-íl1benzotienor3.2- clfllbenzopirano OH HO'
0
Através do procedimento descrito no Exemplo 1, o produto da
Preparação 12 (521 mg, 0,74 mmole) foi feito reagir com FTBA 1,0M em THF (3,7 mmole) para se obter, após cromatografia radial (sílica gel, 1:1 hexano : acetato de etilo, 15% metanol, sob atmosfera de amónia) e cristalização a partir de acetona/éter, 286 mg (81%) do composto em título como um sólido vermelho, pf 147-153d°C: 'H-NMR (300 MHz) δ 7,35 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 8,6
Hz, 2H), 7,16 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,81 (m, 3H), 6,62 (s, 1H), 6,46 (dd, J = 8,2, 2,2 Hz, 1H), 6,35 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 4,04 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,56 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 2,68 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,47 (t, J = 4,3 Hz, 4H); 13C-NMR (75 MHz) 160,0, 159,7, 155,9, 153,5, 141,1, 132,9, 131,4, 129,8, 129,7, 125,4, 124,8, 122,6, 115,2, 112,8, 109,6, 108,9, 104,7, 78,0, 67,2, 66,5, 58,1, 54,7; IV (KBr) 3471 cm'1; MS (FD+) m/e 475 (MH+); Anal. calc. para C27H25NO5S.0.25H2O: C, 67,54; H, 5,36; N, 2,92. Experim.: C, 67,58; H, 5,51; N, 2,57. -65-
f
Prcparacão 12a 6a.l la-Di-hidro-9-metoxi-6-H-ri1benzotienoí3.2-ciri1benzopiran-6-ona
OMe A uma solução em agitação de 6-metoxitianaften-2-ona (52,6 g, 290 mmole) numa mistura de etanol (260 ml) e cloreto de metileno (130 ml) foi adicionada trietilamina (2,0 ml, 14,8 mmole) seguido por salicilaldeído (32 ml, 300 mmole) à temperatura ambiente. Após 1 horas, começa a precipitar um sólido e a agitação é mantida durante 3,5 horas. A mistura foi então diluída com hexano frio e filtrada para se obterem 68,3 g (83%) do produto em título como um sólido branco pulverulento, puro por análise ’Η-NMR: 'H-NMR (300 MHz, CDCI3) 7,45 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,17 (m, 1H), 7,07 (d„ J = 8,1 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,69 (dd, J = 2,4, 8,5 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H); 13C-NMR (75 MHz, CDC13) 166,4, 160,7,
50,6, 49,6; IV (CDC13) 1766 cm'1; MS (FD) m/e 284 (M+); Anal. calc. para C16H1203S: C, 67,59; H, 4,26. Experim.: C, 67,77; H, 4,24.
Prenaracão 12b 9-Metoxi-6-H- Γ1 Ibenzotienof 3,2-cl Γ11benzopiran-6-ona
.OMe
Uma mistura do produto da Preparação 12a (14,0 g, 49 mmole) e 2,3-dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona (DDQ) (11,6 g, 51 mmole) em dicloroctano (350 ml) foi brevemente aquecida a refluxo, induzindo a formação de um precipitado. A mistura foi filtrada quente, lavando o precipitado com cloreto de metileno, e as águas mães concentradas em vácuo. O produto em bmto foi então lav ado várias vezes com acetona e seco em vácuo para se obterem 12,6 g (91%) do produto em título como um sólido tipo penugem: ^-NMR (300 MHz, CDC1.,) 8,55 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,70 (dd, J = 1,2, 8,0 Hz, 1H), 7,4-7,6 (m, 2H), 7,33 (m, 2H), 7,13 (dd, J = 2,3, 8,9 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H); IV (CHC13) 1722 cm'1; MS (FD) m/e 282 (M+); Anal. calc. para C16H10O3S: C, 68,07; H, 3,57. Experim.: C, 67,80; H, 3,53.
Preparação 12c 9-( r-ButildimetilsiliQoxi-6-Η-Γ 1 lbenzotienor3.2-cl Γ1 lbenzopiran-6-ona
A uma pasta em agitação mecânica do produto da Preparação 12b (9,0 g, 32 mmole) em cloreto de metileno (235 ml) foi adicionado etanotiol (5,9 ml, 80 mmole) seguido por cloreto de alumínio (15,8 g, 120 mmole), em pequenas porções. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, sendo então arrefecida a 0°C e terminada cuidadosamente com tetra-hidrofurano (THF) seguido por solução saturada de bicarbonato de sódio. A
-67-mistura foi diluída com THF, as fases separadas, e a fase aquosa lavada várias vezes com THF. A fase orgânica combinada foi seca (sulfato de sódio) e concentrada para se obterem 7,4 g (86%) de fenol em bruto como um sólido esbranquiçado, levemente rosado, o qual foi usado sem purificação adicional. O produto em bruto foi colocado em cloreto de metileno (200 ml) e tratado com trietilamina (19,1 ml, 140 mmole) e cloreto de íerc-butildimetilsililo. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, durante a qual se tomou homogénea.. Após diluição com hexano, a mistura foi lavada duas vezes com salmoura. A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio), concentrada e o resíduo recristalizado a partir de hexano para se obterem 9,8 g (80%) do composto em título como um sólido branco tipo penugem: *H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,55 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,4-7,6 (m, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,08 (dd, J = 2,2, 8,8 Hz, 1H), 1,02 (s, 9H) 0,26 (s, 6H); IV (CHC13) 1717 cm'1; MS (FD) m/e 382 (M+); Anal. calc. para C21H22O3SSÍ: C, 65,93; H, 5,80. Experim.: C, 66,23; H, 5,84. ··
Preparação 12d 9-(7-Butildimetilsilil)oxi-6-H-nibenzotienor3.2-ciri1benzopiran-6-ol
Uma solução do produto da Preparação 12c (3,5 g, 9,1 mmole) em tolueno (490 ml) foi arrefecida a -78 °C e tratada gota a gota com uma solução -68-
/, 7 1,0M em lolueno de hidrelu de di-isub utilalmiiínio (11,0 ml, 11 inmole) a uma velocidade de modo a manter a temperatura interna abaixo de -70 °C. A mistura foi agitada durante aproximadamente 4 horas, sendo então adicionado metnaol (14 ml), ácido cítrico 10% aquoso (140 ml) e água (315 ml). A fase aquosa foi extraída três vezes com cloreto de metileno (560 ml). A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio), concentrada e o remanescente cromatografado (sílica gel, gradiente de 2% acetato de etilo em hexano a 20% de acetato de etilo em hexano) para se obterem 1,7 g (49%) do composto em título como um sólido branco cristalino: 'H-NMR (300 MHz) δ 7,77 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,42 (m, 1H), 7, 2 8 (m, 1H), 7, 0 5 (m, 2 H), 6,8 9 (m, 1H), 6,46 (m, 1H), 1,02 (s, 9H), 0,26 (s, 6H); IV (CHC13) 2959, 2932, 2861, 1612, 1598 cm'1; MS (FD) m/e 384 (M+); Anal. calc. para C21H24O3SS1: C, 65.59; H, 6.29. Experim.: C, 65.51; H, 6.32.
Preparação 12e 9-('/-Buti1dimetilsililloxi-6-fenoxi-6-H-mbenzotienor3.2-cirilbenzopirano
O produto da Preparação 12d (1,5 g, 3,9 mmole) e fenol (2,7 g, 29 mmole) foram dissolvidos em clorobenzeno (50 ml) e a mistura foi agitada durante 3,5 horas a refluxo. A mistura foi concentrada e o resíduo foi novamente dissolvido em clorobenzeno e reconcentrado em vácuo a aproximadamente 70 °C. O resíduo foi então dissolvido em éter dietílico, lavado três vezes com solução -69-
J saturada dc carbonato de sódio, água e salmoura. A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio) e concentrada para se obterem 1,7 g (93%) do composto em título como um sólido branco tipo penugem, o qual foi utilizado sem purificação adicional· o espectro 'HNMR (300 MHz) foi consistente com a estrutura.
Exemplo 10c 9-Hidroxi-6-r4-r2(l-piperidinilletoxi1fenill-6-H-íllbenzotieno[3 9. cinibenzopirano
.OH
A uma solução do produto da Preparação 12 e (1,7 g, 3,6 mmole) em tolueno (50 ml) a 0 °C foi adicionada uma solução 0,2M em THF de brometo de 4-[2-(l-piperidinil)etoxi]fenilmagnésio (preparado a partir do correspondente bromobenzeno e aparas de magnésio, catalizado por iodo em THF, 45,3 ml, 9,1 mmole). A mistura foi deixada aquecer à temperatura ambiente e agitada 14 horas. Após terminar a reacção com água, a mistura foi extraída três vezes com cloreto de metileno, e a fase orgânica foi seca (sulfato de sódio) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia (sílica gel, 4:1 hexano : acetato de etilo) para se obterem 2,6 g (126%) de um produto sililado parcialmente purificado. A uma solução do produto parcialmente purificado (2,6 g, 3,6 -70- -70-
{/ίΜή ^ mmole) em THF (40 ml), foi adicionada uma solução 1,0M em THF de íluoreto de tetra-n-butilamónio (FTBA) (5,0 ml, 5,0 mmole). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos, sendo então diluída com acetato de etilo e lavada 5 vezes com solução saturada de cloreto de amónio e salmoura. A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio) e concentrada. O remanescente foi purificado por purificado por cromatografia (sílica gel, 1:1 hexano : acetato de etilo, 0-10% metanol, 0,1% hidróxido de amónio) para se obterem 0,93 g (56%) do composto em título como sólido branco tipo penugem: 'H-NMR (300 MHz) 6,7-7,4 (m, 12H), 4,02 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,63 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,41 (m, 4H), 1,49 (m, 4H), 1,37 (m, 2H); IV (KBr) 2934, 1609 cm'1; MS (FD) m/e 457 (M+); HRMS (FAB) m/e calc. para C28H28N03S (MH+): 458,1790. Experim.: 458,1798; Anal. calc. para C28H27NO3S.0,5H2O: C, 72,08; H, 6,05; N, 3,00. Experim.: C, 71,97; H, 6,04; N, 3,06.
Preparação 12f 3-( f-Butildimetilsilil)oxi-6-H- Γ1 Ibenzotienon ,2-cl Γ1 lbenzopiran-6-ona
A uma pasta em agitação mecânica de 3-metoxi-6-H-[l] benzotieno[3,2-c][l]benzopiran-6-ona (Journal of Organic Chemistry, 1975, 40, 3169) (1,0 g, 3,6 mmole) em cloreto de metileno (30 ml) foi adicionado etanotiol (1,4 ml, 18,0 mmole) seguido por cloreto de alumínio (1,6 g, 12 mmole), em pequenas porções. Λ mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente -71-
durante 1,5 horas, sendo então arrefecida a 0 °C e adicionando-se cuidadosainente tetra-hidrofurano (THF) seguido por bicarbonato de sódio. A mistura foi diluída com THF, as fases separadas e a fase aquosa lavada várias vezes com THF. A fase orgânica combinada foi seca (sulfato de sódio) e concentrada para se obter o fenol em bruto, o qual foi utilizado sem purificação adicional. O produto em bruto foi misturado em cloreto de metileno (30 ml) e tratado com trietilamina (2,5 ml, 18 mmole) e cloreto de fórc-butildimetilsililo (1,3 g, 9,0 mmole). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, durante a qual se tomou homogénea. Após diluição com hexano, a mistura foi lavada duas vezes com salmoura. A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio), concentrada, e o resíduo purificado por cromatografia (sílica gel, hexano-4:l hexano:acetato de etilo) para se obterem 0,95 g (69%) do composto em título com um sólido branco tipo penugem: 'H-NMR (300 MHz, acetona-d^) 8,57 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,10 (d, J - 8,0 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,5-7,7 (m, 2H), 6,99 (m, 2H), 1,03 (s, 9H), 0,33 (s, 6H); IV (CHC13) 1716 cm'1; MS (FD) m/e 382 (M+); Anal. calc. para C21H22O3SS1: C, 65,93; H, 5,80. Experim.: C, 66,11; H, 5,83.
Preparação 12g 3-( f-ButildimetilsiliPoxi-6-Η-Γ 11benzotienof3,2-cl Γ1 lbenzopiran-6-ol
Uma solução da Preparação 12f (5,0 g, 13 mmole) em tolueno (700 -72- / Ι/Μ^ι ml) foi arrefecida a -78 °C e tratada gota a gota com uma solução 1,0M em tolueno de hidreto de di-isobutilalumínio (15,7 ml, 15,7 mmole) a uma velocidade para manter a temperatura interna abaixo de -70 °C. A mistura foi agitada durante aproximadamente 4 horas, sendo então terminada com metanol (20 ml), ácido cítrico 10% aquoso (200 ml) e água (450 ml). A fase aquosa foi extraída três vezes com cloreto de metileno (800 ml). A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio), concentrada, e o remanescente cromatografado (sílica gel, gradiente de 2% acetato de etilo em hexano a 20% acetato de etilo em hexano) para se obterem 1,7 g (45%) do composto em título um sólido branco tipo penugem: 'H-NMR (300 MHz) δ 7,96 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,3-7,8 (m, 3H), 6,91 (m, 1H), 6,62 (m, 2H), 1,00 (s, 4H), 0,26 (s, 6H); IV (CHC13) 2958, 2932, 2861, 1616, 1594 cm1; MS (FD) m/e 384 (M+); Anal. calc. para C21H24O3SS1: C, 65,59; H, 6,29. Experim.: C, 65,31; H, 6,18.
Preparação 12h 3-( t-Butildimetilsilil)oxi-6-fenoxi-6-H-r 1 lbenzotienoB ,2-cl Γ1 lbenzooirano
O produto da Preparação 12g (0,09 g, 0,24 mmole) e fenol (0,25 g, 2,6 mmole) foram dissolvidos em clorobenzeno (10 ml) e a mistura foi agitada durante 3 horas a 100 °C. A mistura foi concentrada e o resíduo foi novamente dissolvido em clorobenzeno e reconcentrado em vácuo a aproximadamente 70 °C. O resíduo foi então dissolvido em éter dietílico, lavado cinco vezes com solução saturada de carbonato de sódio, água e salmoura. A fase orgânica foi seca (sulfato -73-
de sódio) e concentrada para se obterem 0,11 g (100%) do composto em título como um sólido branco tipo penugem, o qual foi utilizado sem purificação adicional: o espectro 1HNMR (300 MHz) foi consistente com a estrutura.
Exemplo lOd 3-Hidroxi-6-f4-r2-(l-piperidinil)etoxilfenin-6-H-rilbenzotieno[3-2- cinibenzopirano
O A uma solução do produto da Preparação 12h (0,28 g, 0,61 mmole) em tolueno (20 ml) a 0 °C foi adicionada uma solução 0,2M em THF de brometo de 4-[2-(l-piperidinil)etoxi]fenilmagnésio (preparado a partir do correspondente bromobenzeno e aparas de magnésio, catalizado por iodo em THF, 7,6 ml, 1,5 mmole). A mistura foi deixada aquecer à temperatura ambiente e agitada 1 hora. Após terminar a reacção com água, a mistura foi extraída seis vezes com cloreto de metileno, e a fase orgânica foi seca (sulfato de sódio) e concentrada. O remanescente foi purificado por cromatografia (sílica gel, 4:1-1:1 hexano : acetato de etilo) para se obterem 0,41 g (119%) de um produto sililado parcialmente purificado. A uma solução do produto parcialmente purificado (0,41 g, 0,72 mmole) em THF (10 ml), foi adicionada uma solução 1,0M em THF de fluoreto de tetra-n-butilamónio (FTBA) (0,67 ml, 0,67 mmole). A solução foi agitada à -74- temperatura ambiente durante 10 minutos, sendo então diluída com acetato de etilo e lavada três vezes com solução saturada de bicarbonato de sódio e salmoura. A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio) e concentrada. O remanescente foi triturado com cloreto de metileno e o precipitado filtrado e lavado com cloreto de metileno para se obterem 0,23 g (82%) do composto em título como sólido branco pulverulento. O sólido foi misturado em metanol e foi adicionado ácido trifluoracético gota a gota até todo o produto se dissolver, os materiais insolúveis foram filtrados e as águas mães concentradas em vácuo para se obterem 0,28 g (80%) do sal TFA como um sólido laranja tipo penugem: ’H-NMR (300 MHz) δ 7,95 (m, 1H), 7,38 (m, 1H), 7,2-7,3 (m, 5H), 6,90 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,76 (s, 1H), 6,51 (dd, J = 2,2, 8,2 Hz, 1H), 6,38 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 4,4 4 (t, J = 4, 9 Hz, 2H), 3,5 -3,7 (m, 4H), 3,0 - 3,2 (m, 2H), 1 7 -2,0 (m, 5H), 1,4 -1,7 (m, 1H); IV (CHC13) 3271, 3022, 3009, 1670, 1610 cm'1; MS (FD) m/e 457 (M'-) ; HRMS (FAB) m/e calc. para C28H28NO3S (MH+): 458,1790. Experim.: 458,1781; Anal. calc. para C28H28N03S.CF3C00H.1,2H20: C, 60,69; H, 5,12; N, 2,36. Experim.: C, 60,62; H, 4,82; N, 2,40.
Preparação 18a 2.8-BislY /erc-butildimetilsililloxi-5H-beiizorblnaftoí2.1 -dlpiran-5-ona
Uma mistura do produto da Preparação 10 (7,0 g, 13,8 mmole) e 2,3-dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona (DDQ) (3,3 g, 14,5 mmole) em dicloroetano (100 ml) foi aquecida a refluxo durante a noite, induzindo a formação de um precipitado. A mistura foi filtrada quente, lavando o precipitado -75-Ιλ ΊΛ*ή
7 com cloreto de metileno, e as aguás-mães concentradas em vácuo. O remanescente foi extraído com uma mistura de hexano:éter e água, e a fase orgânica foi seca (sulfato de magnésio), concentrada e reciistalizada a partir de hcxano para se obterem 5,5 g (79%) do composto em título como um sólido amarelo-acastanhado, pf 154-156 "C: 'H-NJVLR (300 MHz, CDC13) δ 9,69 (d, J = 9,4 Hz), 8,80 (s, 2H), 8,01 (d, J = 9,5 Hz), 7,34 (dd, J = 9,3,2,5 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 6,90 (m, 2H), 1,05 (s, 9H), 1,03 (s, 9H), 0,29 (s, 12H); IV (CHCI3) 1711, 1622, 1604 cm'1; MS (FD) m/e 506 (m+) ; Anal. calc. para C29H3804Si2: C, 68,72; H, 7,57. Experim.: C, 68,93; H, 7,36
Preparação 18b 2.8-Bisrífórc-butildimetilsililloxi-5H-benzo[b]naftor2.1-dlpiran-5-ol
Através do procedimento descntb para a Preparação 4, o produto da Preparação 18a (5,0 g, 9,9 mmole) foi feito reagir com uma solução 1,0M em tolueno de hidreto de di-isobutilalumínio (11,9 ml, 11,9 mmole) para se obter, após recristalização a partir de hexano:éter, 4,14 g (82%) do composto em título como um sólido branco, pf 188-190 °C: ’Η-NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,98 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,86 (d, J - 8,8 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7, 2 3 (d, J - 2, 3 Hz, 1H), 7,18 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,67 (m 2H), 3,24 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 1,04 (s, 9H), 1,02 (s, 9H), 0,27 (s, 6H) 0,27 (s, 6H); IV (CHC13) 3574 cm'1; MS (FD) m/e 508 (M+); Anal. calc. para C29H40O4S12: C, 68,44; H, 7,94. Experim.: C, 68,63; H, 8,11. -76-
ϊ
Preparação 18c 2.8-Bisr(/grc-butildimetilsilil)oxi1-5-fenoxi-5H-benzorblnaftoí2.1 -dlpirano
Através do procedimento descrito para a Preparação 5, o produto da Preparação 18b (3,5 g, 6,88 mmole) foi feito reagir com fenol (3,2 g, 34,3 mniole) para se obterem 3,82 g (95%) do composto em título como um sólido branco amorfo que foi utilizado sem purificação adicional: 'H-NMR (300 MHz) δ 7,9-8,1 (m, 4H), 7,61 (s, 1H), 7,3-7,5 (m, 3H), 7,2-7,3 (m, 3H), 7,11 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,74 (dd, J = 8,5, 2,3 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 1,03 (s, 4H), 0,99 (s, 9H), 0,29 (s, 6H), 0,24 (s, 6H); 13C-NMR (75 MHz) δ 157,9, 157,6, 154,3, 151,8,135,1,130,4,130,1,126,4, 125,8,125,1,124,9, 123,9, 123,6,123,1, 121,1, 118,5, 116,7, 116,2, 115,7, 110,0, 94,8, 26,0, 25,9, 18,8, 18,7, -4,3, -4,4; MS (FD) m/e 584 (M+). - —- --------
Preparação 18d 2.8-Bisr(ferc-butildimetilsilil)oxi1-5-r4-r2-(l-piperidinilletoxi1fenin-5H-benzorblnaftor2.1-dlpirano
-77-
Através do procedimento descrito para a Preparação 6, o produto da Preparação 18c (3,5 g, 6,0 mmole) foi feito reagir com uma solução 0,2M em THF de brometo de 4-[2-(l-piperidinil)etoxi]fenilmagnésio para se obterem, após cromatografia (sílica gel, 3:2 hexanoracetato de etilo, 0,1% hidróxido de amónio), 3,5 g (84%) do composto em título como um sólido gomoso incolor: 'H-NMR (300 MHz) δ 7,97 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,10 (m, 3H), 7,02 (s, 1H), 6,73 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,53 (dd, J = 8,3, 2,4 Hz, 1H), 6,37 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 3,95 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,58 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,38 (m, 4H), 1,4-1,5 (m, 4H), 1,3-1,4 (m, 2H), 1,00 (s, 9H), 0,94 (s, 9H), 0,25 (s, 6H), 0,19 (s, 6H); 13C-NMR (75 MHz) δ 159,8, 157,6, 154,1, 154,0,135,0, 132,2, 130,1, 128,6, 127,3, 126,3, 126,2, 125,6, 124,7, 123.4.121.6.118.0. 116.5, 115,0, 114,5, 110,3, 76,0, 66,8, 58,5, 55,6, 26,8, 26,0, 26.0, 25,0, 18,7, 18,7, -4,2, -4,3; MS (FD) m/e 696 (M+); Anal. calc. para C42H57NO4S12: C, 72,46; H, 8,27; N, 2,01. Experim.: C, 72,53; H, 8,49; N, 2,08.
Exemplo 1 lb 2.8-Di-hidroxi-5-f4-r2-(l-piperidininetoxi1fenill-5H-benzorb1naftor2.1-d1pirano
Através do procedimento descrito no Exemplo 1, o produto da Preparação 18d (3,4 g, 4,9 mmole) foi feito reagir com uma solução 1,0M em THF dc FTBA (24,4 mmole) para se obter, após cromatografia (sílica gel, 1:1
i (. -78-hexano:acetato de etilo, 10% metanol, 0,1% hidróxido de amónio) e trituração com éter, 2,2 g (96%) do composto em título como um sólido branco, pf 158-161 °C: 'H-NMR (300 MHz) δ 7,89 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,68 (m, 2H), 7,23 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,09 (m, 3H), 6,97 (s, 1H), 6,71 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,49 (dd, J = 8,3, 2,4 Hz, 1H), 6,36 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 3,95 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,60 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,40 (m, 4H), 1,4-1,5 (m, 4H), 1,3-1,4 (m, 2H); 13C-NMR (75 MHz) δ 159,5, 159,5, 155,8, 153,9, 135,0, 132,4, 130,1, 128,0, 126,7, 125,6, 125,4, 125,3, 124,7, 121,4, 119,9,116,1, 114,8, 111,0, 110,1, 105,5, 75,8, 66,1, 58,3, 55,3,26,3,24,7; IV (KBr) 2934 cm'1; MS (FD) m/e 468 (MH+); Anal. calc. para C30H29NO4.H2O: C, 74,19; H, 6,45; N, 2,88. Experim.: C, 74,13; H, 6,45; N, 2,88.
Preparação 22a 2.8-Dimetoxi-5-r4-[Yferc-butiIdimetilsilir>oxi]fenill-6H-benzo[c|fenantrid-6-ona
Uma mistura do produto da Preparação 22 (100 mg, 0,19 mmole) e 2,3-dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona (DDQ) (47 mg, 0,21 mmole) em dicloroetano (10 ml) foi brevemente aquecida a refluxo durante 2 horas, induzindo à formação de um precipitado. A mistura foi arrefecida à temperatura ambiente, filtrada e o filtrado diluído com CH2CI2 (70 ml), lavado com hidróxido de sódio IN (2x70 ml), seco (Na2S04) e concentrado para se obterem 98 mg -79-l/Ltei /,¾ / / (98%)do produto em título como um sólido branco cristalino, pf 211-213 °C: *H-NMR (300 MHz, CDC13) 8,21 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 9,0, 2,8 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,08 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,66 (dd, J = 9,7, 2,8 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 1,02 (s, 9H), 0,25 (s, 6H); 13C-NMR (75 MHz, CDC13) δ 163,1, 159,2, 156,9, 154,9, 137,3,136,3,133,8,129,8,128,3,127,4,126,4, 123,9,123,7, 122,9, 120,7,120,5, 119,5, 116,5, 115,7, 109,1, 106,9, 55,5, 55,1, 25,7, 18,3, -4,2; IV (CHC13) 1646, 1619 cm'1; MS (FD) m/e 511 (M+) ; Anal. calc. para C31H33NO4S1: C, 72,75; H, 6,51; N, 2,74. Experim.: C, 72,57; H, 6,50; N, 2,83.
Preparação 23a 2.8-Dimetoxi-5-(4-hidroxifenilV6H-benzorclfenantrid-6-ona
O produto da Preparação 22a (6,8 g, 13,3 mmole) foi dissolvido em acetonitrilo:cloreto de metileno 1:1 (200 ml) e tratado com fluoreto de hidrogénio - piridina (80 ml) durante 1 hora. A mistura foi diluída com salmoura (500 ml) e extraída com THF (3x300 ml). A fase orgânica combinada foi neutralizada com solução saturada de bicarbonato de sódio e a fase aquosa resultante foi lavada com THF (2x500 ml). As fases aquosas foram então combinadas e lavadas com THF (500 ml), e a fase orgânica combinada foi seca (sulfato de sódio), concentrada e 0 resíduo sólido foi lavado com acetona para se obterem 5,27 g -80- -80-
\y (100%) do composto em título como um pó esbranquiçado, pf 310 °C: 1 H-NMR (300 MHz, DMSO-d^) δ 9,79 (bs, 1H), 8,52 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,42 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,72 (m, 2H), 7,47 (dd, J = 8,7, 2,3 Hz, 1H), 7,31 (d, 2,1 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,82 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 6,68 (dd, J = 9,3, 2,6 Hz, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,79 (s, 3H); MS (FD) m/e 397 (m+).
Exemplo 12a 2.8-Hidroxi-5-r4-f2-( l-piperidiniDetoxilfenill-l 1.12-di-hidro-6H-benzof clfenantrid-6-ona
Através do procedimento descrito para o Exemplo 14, o produto do exemplo 12 (310 mg, 0,61 mmole) foi feito reagir com etanotiol (189 mg, 3,1 mmole) e cloreto de alumínio (611 mg, 4,6 mmole) para se obter, após cromatografía radial (sílica gel, 1:1 hexano:acetato de etilo, 10-20% metanol, sob atmosfera de amónia), 237 mg (81%) do composto em título como uma espuma amarela que cristalizou após trituração com éter, 174 d°C: 1 H-NMR (300 MHz, methanol-D4) δ 7,80 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 7,30 (dd, J = 8,9, 2,7 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,97 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 6,66 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,21 (dd, J = 8,7, 2,6 Hz, 1H), 4,16 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2,86 (s, 4H), 2,81 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,59 (m, 4H), 1,6-1,7 (m, 4H), 1,4-1,6 (m, 2H); IV (CHC13) 3673, 1637, 1602 cm1; MS (FD) m/e 482 (M+); Anal. calc. para C30H30N2O4.H2O: C, 71,96; H, 6,46; N, 5,60. Experim.: C, 71,68; H, 6,63; N, 5,46. -81- (/l*m í
Exemplo 12b 2.8-Dimetoxi-5-r4-f2-(l-piperidinil~)etoxi1fenil1-l 1.12-di-hidro-6H- benzofclfenantridina
Uma solução do produto do Exemplo 12 (350 mg, 0,69 mmole) em THF (25 ml) foi tratada com tetra-hidroaluminato de lítio (129 mg, 3,4 mmole) induzindo um aquecimento moderado. A mistura foi deixada arrefecer à temperatura ambiente e agitada durante 2 horas, sendo então aquecida brevemente a refluxo, arrefecida e terminada com a adição de acetato de etilo (50 ml) seguido por solução saturada de cloreto de amónio (50 ml). A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2x50 ml) e as fases orgânicas combinadas foram secas (sulfato de sódio), concentradas e purificadas por cromatografia radial (sílica gel, 1:1 hexano:acetato de etilo, 5% metanol, sob atmosfera de amónia) para se obterem 248 mg (64%) do composto em título como uma espuma amarela: ‘H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,28 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,79 (m, 3H), 6,72 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,65 (d, 9,0 Hz, 2H), 6,58 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,52 (dd, J = 8,6, 2,6 Hz, 1H), 4,65 (s, 2H), 3,94 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 2,96 (dd, J = 8,3, 5,6, 2H), 2,81 (dd, J = 8,3, 5,9 Hz, 2H), 2,66 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 2,43 (m, 4H), 1,5-1,6 (m, 4H), 1,3 -1,5 (m, 2H); 13C-NMR (75 MHz, CDC13) δ 158,5, 158,3, 153,3, 141,7, 138,4, 134,6, 132,3, 126,6, 126,2, 125,3, 122,9, 121,7, 120,5, 114,9, 113,4, 112,3, 111,2, 111,0, 65,8, -82-
57,8, 55,6, 55,2, 55,1, 54,8, 29,0, 25,7, 24,0, 22,2; IV (CHC13) 1610, 1506 cm1; MS (FD) m/e 496 (M+); Anal. calc. para C32H36N203: C, 77,37; H, 7,32; N, 5,64.
Experim.: C, 77,25; H, 7,12; N, 5,75.
Exemplo 12c 2.8-Dimetoxi-5-r4-r2-(l-piperidmil)etoxilfenil1-6H-benzo[c'|fenantridin-6-nna
OMe MeO'
Através do método descrito no Exemplo 12, o produto da
Preparação 23a (4,8 g, 12,1 mmole), triflenilfosfína (6,3 g, 24,2 mmole), e l-(2-hidroxietil)piperidina (3,9 g, 30,3 mmole) foi feitos reagir com diazodicarboxilato de dietilo (DEAD)) (4,2 g, 24,3 mmole) para se obter, após cromatografia (sílica gel, 1:1 hexano:acetato de etilo, 5-20% metanol,-0,1% hidróxido de amónio) e recristalização a partir de acetato de etilo, 5,14 g (84%) do composto em título como um sólido branco tipo penugem, pf 176 °C: lH- NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,25 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,40 (dd, J = 9,0, 2,8 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,10 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 6,70 (dd, J = 9,6, 2,7 Hz, 1H), 4,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 2,81 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,53 (m, 4H), 1,5-1,7 (m, 4H), 1,4 -1,5 (m, 2H); 13C-NMR (75 MHz, CDC13) δ 163,2, 159,2, 157,9, 156,9, 136,3, 135,7,133,7, 129,7, 128,3, 127,3, 126,4, 123,9, 123,7, 122,8, 120,5, 119,4, 116,6, -83-
115,7, 115,1, 109,1, 106,9, 66,2, 57,8, 55,5, 55,1, 55,0, 25,9, 24,1; IV (CHC13) 1647, 1619 cm'1; MS (FD) m/e 508 (m+); Anal. calc. para C32H32N2O4: C, 75,56; H, 6,35; N, 5,51. Experim.: C, 75,58; H, 6,28; N, 5,77.
Exemplo 12d 2.8-Hidroxi-5-r4-r2-n-piperidmi11etoxi1fenin-6H-benzorclfenantridin-6-ona
Através do procedimento descrito para o Exemplo 14, o produto do Exemplo 12a (500 mg, 0,98 mmole) foi feito reagir com etanotiol (304 mg, 4,9 mmole) e cloreto de alumínio (987 mg, 7,4 mmole) para se obter, após cromatografia (sílica gel, 1:1 hexano:acetato de etilo, 10-30% metanol, 0,1% hidróxido de amónio) e recristalização a partir de metanoFCHCl3, pf 227-232 °C: ^-NMR (300 MHz, DMSO-d*,) δ 10,15 (bs, 1H), 9,82 (bs, 1H), 8,43 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,63 (d, J = 9, 0 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8, 9 Hz, 1H), 7,0-7,3 (m, 6H), 6,58 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,13 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,69 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,46 (m, 4H) 1,3-1,6 (m, 6H); I3C-NMR (75 MHz, DMF-dy/acetona-tVCDCy δ 162,2, 158,4, 157,3, 155,9, 137,4, 137,2, 133,9, 130,8,127,6,127,5,126,9,125,0,124,0,123,1, 121,1,119,0, 117,3,115,7,115,5, 112,8, 110,6, 63,4, 55,8, 53,6, 23,2, 22,1; IV (KBr) 3303, 1643, 1602 cm1; MS (FD) m/e 480 (M+); Anal. calc. para C30H28N2O4O.5H2O: C, 73,59; H, 5,98; N, 5,72. Experim.: C, 73,72, H, 5,88; N, 5,71. 7 l/U/S;
St^· 7 - 84
Exemplo 13 2.8-Dimetoxi-5-r4-r2-(l-piperidinilletoxi1fenill-6H-benzorclfenantridina
Uma solução do produto do Exemplo 12 (3,82 g, 7,51 mmole) em THF (250 ml) foi tratada com tetra-hidroaluminato de lítio (1,43 g, 37,5 mmole) induzindo um aquecimento moderado. Após o aquecimento ter terminado, a mistura aquecida a refluxo durante a noite, arrefecida à temperatura ambiente e terminada cuidadosamente com a adição de acetato de etilo (200 ml) seguido por hidróxido de sódio IN (200 ml). As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2x200 ml) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (200 ml), secas (sulfato de sódio) e concentradas. O resíduo foi recristalizado a partir de hexano:acetato de etilo para se obterem 3,24 g (87%) do composto em título como um sólido esbranquiçado: pf 136-137 °C; 'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,91 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,61 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,95 (dd, J = 9,2,2,6,1H), 6,91 (dd, J = 8,5, 2,6 Hz, 1H), 6,6-6,8 (m, 5H), 4,75 (s, 2H), 3,95 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 2,68 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 2,44 (m, 4H), 1,5-1,7 (m, 4H), 1,4-1,5 (m, 2H); 13C-NMR(75 MHz, CDC13) δ 159,1, 157,3,153,4,143,5,137,9, 135,0,134,1,126,5, 125,6,124,9, 124,2, 123,8,123,7,122,4,121,7,118,1,114,9, 113,8,111A 106,4, 65,8, 57,8, 55,8, 55,2, 54,8,25,7,24,0; IV (CHCI3) 1506 cm' MS (FD) m/e 494 (M+); Anal. calc. para C32H34N203: C, 77,70; H, 6,94; N, 5,66. Experim.: C, 77,54; H, 6,99; N, 5,63.
[A/iásj -85-
Preparacão 11 3.9-Bisr(/grc-butildimetilsilil)oxi1-6-f4-(2-dietanolaminoetoxi)fenill-6-H-Γ11benzotienor3.2-c1 í llbenzopirano
Através do método descrito na Preparação 8, o produto da Preparação 7 (500 mg, 0,85 mmole), trifenilfosfina (892 mg, 3,4 mmole) e N,N-dietiletanolamina (496 mg, 438 μΐ, 4,23 mmole) foram feitos reagir com azodicarboxilato de dietilo (DEAD) (592 mg, 535 μΐ, 3,4 mmole) em tolueno (35 ml). Cromatografía (sílica gel, 3:1 hexano:acetato de etilo, 0,1% hidróxido de amónio) originou 540 mg (92%) do composto em título como um óleo incolor: ‘H-NMR (300 MHz) δ 7,46 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,3-7,4 (m, 4H), 6,86 (m, 3H), 6,69 (s, 1H), 6,51 (dd, J = 8,3,2,3 Hz, 1H), 6,37 (d, 2,2 Hz, 1H), 3,98 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 2,77 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 2,54 (q, J = 7,1 Hz, 4H) , 0,99 (s, 9H), 0,97 (t, J = 7,0 Hz, 6H), 0,96 (s, 9H), 0,22 (s, 6H), 0,21 (s, 6H) ; ,3C-NMR (125 MHz) δ 160,0,157,5,153,7, 153,3,140,8, 132,6, 132,3, 131,1, 129,7, 125,7, 124,6, 122,5, 119,2, 115,0, 114,2, 113,9, 113,7, 109,3, 78,1, 67,2, 52,3, 48,1, 26,0, 26,0, 18,6, 12,5, -4,3; MS (FD+) m/e 689 (M+). -86-
7
Preparação 12 3.9-Bisr('/grc-butildimetilsilil')oxil-6-[4-r2-('l-morfolininetoxi'>fenil]-6-fí- nibenzotienor3.2-cirilbenzopirano
Através do método descrito na Preparação 8, o produto da Preparação 7 (500 mg, 0,85 mmole), trifenilfosfma (892 mg, 3,4 mmole) e l-(2-hidroxietil)morfolina (555 mg, 512 μΐ, 4,23 mmole) foram feitos reagir com azodicarboxilato de dietilo (DEAD) (592 mg, 535 μΐ, 3,4 mmole) em tolueno (35 ml). Cromatografia (sílica gel, 3:1 hexano:acetato de etilo, 0,1% hidróxido de amónio) originou 569 mg (95%) do composto em título como uma espuma rosa: 'H-NMR (300 MHz) δ 7,46 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,2-7,3 (m, 4H), 6,86 (m, 3H), 6,70 (s, 1H), 6,51 (dd, J = 8,2, 2,3 Hz, 1H), 6,37 (d, 2,7 Hz, 1H), 4,04 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,57 (t, J = 4,5 Hz, 2H), 2,69 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,47 (m, 4H), 0,99 (s, 9H), 0,96 (s, 9H), 0,22 (s, 6H), 0,21 (s, 6H); 13C-NMR (125 MHz) δ 159,8, 157,6,153,7,153,2,140,8,132,5,132,5, 131,1, 129,7,125,8,124,6,122,5,119,2, 115,1, 114,2, 114,0, 113,8, 109,3, 78,2, 67,0, 66,2, 57,9, 54,6, 26,0, 25,9, 18,6, -4,3; MS (FD+) m/e 703 (M+). -87-
J
Preparação 13 S.Q-Bisíffórc-butildimetilsilinoxil-ó-H-benzofurofS^-cIflIbenzopirar^p^
Foi colocado coumestrol em cloreto de metileno (600 ml), arrefecido a 0 °C c tratado com trietilamina (24,9 ml, 34,3 ml, 246 mmole) e cloreto de /erc-butildimetilsililo (24,7 g, 164 mmole). A mistura foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite, durante a qual lentamente se tomou homogénea.. Após diluição com éter (800 ml), a mistura foi lavada com salmoura (800 ml) e a fase aquosa foi extraída com éter (500 ml). A fase orgânica combinada foi seca (sulfato de sódio), concentrada e o resíduo recristalizado a partir de hexano para se obterem 14,2 g (77%) do composto em título como um pó branco, pf 118-119 °C: 'H-NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,90 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,97 (m, 2H), 6,90 (dd, J = 8,5, 2,0 Hz, 1H), 1,03 (s, 9H), 1,02 (s, 9H), 0,28 (s, 6H), 0,25 (s, 6H); IV (CHÇ13). 1733 cm'1; MS (FD+) m/e 496 (m+); Anal. calc. para C27H3605SÍ2: C, 65,27; H, 7,32. Experim.: C, 65,57; H, 7,26.
Preparação 14 3,9-Bis IY /erc-butildimetilsililloxil -ó-H-benzofuroB ,2-cl í libe” ynpiran-6-ol
-88-
(SÍStfT'
Através do procedimento descrito para a Preparação 4, o produto da Preparação 13 (5,0 g, 10,0 mmole) foi feito reagir com uma solução 1,0M em tolueno de hidreto de di-isobutilalumínio (12,0 ml, 12,0 mmole) em tolueno (450 ml). A recristalização a partir de hexano originou 1,26 g do composto em título como uma mistura com o seu tautómero aldeído. Cromatografia (sílica gel, 2-15% acetato de etilo/hexano) das águas mães originou 1,37 g do composto de partida (aproximadamente 67% puro) e, após recristalização, 580 mg do composto em título para um total de 1,85 g (37%) da mistura tautomérica: 'H-NMR (300 MHz) δ 10,15 (s, 0,5H), 9,2 (br s, 0,5H), 7,99 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,50 (m, 0,5H), 7,09 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,96 (m, 1H), 6,6-6,7 (m, 2H), 6,55 (m, 0,5H), 1, 01 (s, 9H), 1,00 (s, 9H), 0,27 (s, 6H), 0,25 (s, 6H); IV (CHC13) 3550, 1663 cm1; MS (FD) m/e 499 (MH+); Anal. calc. para C27H3805Si2: C, 65,02; H, 7,69. Experim.: C, 65,32; H, 7,76.
Preparação 15 2.8-BislYrgrc-butildimetilsilil)oxil-6-fenoxi-6H-benzofuror3.2-cimbenzopirano
Através do procedimento descrito para a Preparação 5, o produto da Preparação 14 (464 mg, 0,93 mmole) foi feito reagir com fenol (1,05 g, 11,2 mmole) em clorobenzeno (25 ml) contendo sulfato de magnésio anidro (1,0 g) para se obterem 467 mg (87%) do composto em título bruto como uma espuma -89-
rosa instável que foi utilizada sem purificação: 'H-NMR (300 MHz) d 7,1-7,7 (m, 8H), 6,6-6,9 (m, 3H), 1,01 (s, 9H), 1,00 (s, 9H), 0,28 (s, 6H), 0,25 (s, 6H).
Preparação 16 3.9-Bisr(ferc-butíldimetilsilil)oxi1-6-r4-r2-n-piperidiniOetoxilfenil1-6H- benzofuror3.2-clíl1benzopirano
•9
Através do procedimento descrito para a Preparação 6, o produto da Preparação 15 (467 mg, 0,81 mmole) foi feito reagir com uma solução 0,5M em THF de brometo de 4-[2-(l-piperidinil)etoxi]fenilmagnésio (2,6 ml, 1,62 mmole) em tolueno (15 ml). A cromatografia (sílica gel, 2:1 hexano:acetato de etilo, 1% metanol sob atmosfera de amónia), originou 500 mg (90%) do composto em título como um sólido gomoso incolor: 'H-NMR (300 MHz) δ 7,39 (m, 3H), 7,04 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,78 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 6,68 (s, 1H), 6,53 (dd, J = 8,2,2,2 Hz, 1H), 6,38 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 4,05 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,64 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 2,42 (m, 4H), 1,4-1,6 (m, 4H), 1,3-1,4 (m, 2H) , 0,96 (s, 9H), 0,95 (s, 9H), 0,20 (s, 6H), 0,19 (s, 6H) ; ,3C-NMR (125 MHz) dô 160,3, 158,0, 156,8, 155,5, 154,0, 148,2, 132,7, 129,8, 121,6, 121,1, 119,8, 117,3, 115,3, 113,8, 110,6, 109,8, 109,1, 103,8, 79,0, 66,9, 58,5, 55,6, 26,8, 26,0, 26,0, 25,0, 18,7, -4,3, -4,3; MS (FD) m/e 686 (M+); Anal. calc.
fy i/"
/ H -90-para C40H55NO5S12: C, 70,03; H, 8,08; N, 2,04. Experim.: C, 70,28; H, 8,14; N, 2,08.
Exemplo 11 3.9-Di-hidroxi-6-r4-r2-n-piperidiniDetoxi1fenill-6H-benzofuror3.2- clíllbenzopirano
Através do procedimento descrito para o Exemplo 1, o produto da Preparação 16 (520 mg, 0,76 mmole) foi feito reagir com FTBA 1,0M em THF (4,5 mmole) para se obter, após cromatografia radial (sílica gel, 1:1 hexano:acetato de etilo, 10% metanol, sob atmosfera de amónia), 292 mg (72%) do composto em título como uma espuma vermelha brilhante, a qual foi recristalizada a partir de tetracloreto de carbono: *H-NMR (300 MHz, dimetilformamida-d7) δ 10,00 (br s, 1H), 9,83 (br s, 1H), 7,3-7,5 (m, 3H), 7,10 (s, 1H), 6,98 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,7-6,9 (m, 3H), 6,54 (dd, J = 8,1, 1,8 Hz, 1H), 6,42 (s, 1H), 4,10 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,67 (m, 2H), 2,44 (m, 4H), 1,4-1,6 (m, 4H), 1,3-1,4 (m, 2H); 13C-NMR (125 MHz, dimetilformamida-dy) δ 160,2, 159,9, 156,8,156,4,155,1,147,2,133,0,129,5,121,4,119,5,118,9, 115,1,112,9,109,2, 108,9,108,3, 104,3, 98,7, 78,5, 66,5, 58,2, 55,3, 26,4, 24,6; IV (KBr) 3220 cm1; HRMS (FAB+) m/e cale. para C28H28NO5 458,1967 (MH+), Experim. 458,1974; Anal. calc. para C28H27NO4S.0,25CC1,i: C, 68,40; H, 5,49; N, 2,82. Experim.: C,68,58; H, 5,81; N, 2,94. -91-
</
Preparação 17 2-Metoxi-8-hidroxi-11.12-di-hidro-5H-benzorb1naftor2.1 -dlpiran-5-ona OMe ··
A uma solução de l-carbometoxi-6-metoxi-2-tetralona (ver, Colvin, Martin e Shroot, Chemistry and Industry, 1966, 2130) (18,0 g, 76,8 mmole) e resorcinol (8,9 g, 80,7 mmole) em agitação à temperatura ambiente em tolueno (450 ml) foi adicionado oxicloreto de fósforo (12,0 g, 7,3 ml, 18,3 mmole) gota a gota, e a mistura foi aquecida a 80 °C durante 12 horas. Após arrefecer à temperatura ambiente, a mistura foi vertida sobre água (500 ml) e filtrada, lavando o precipitado com éter. As fases do filtrado foram separadas, a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (3x500 ml) é' a fase orgânica combinada foi seca (sulfato de sódio) e concentrada. A recristalização do resíduo a partir de metanol originou 16,0 g do composto em título como um sólido amarelo, pf 244-249 °C: ‘H-NMR (300 MHz, DMSO-do) δ 10,55 (br s, 1H), 8,24 (d, J = 8,6
Hz, 1H), 7,75 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,6-7,0 (m, 4H), 3,76 (s, 3H), 2,8-3,0 (m, 4H); 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d^) δ 170,3, 160,3, 158,3, 158,1, 153,3, 147,7, 137,5, 127,4,125,8, 122,5, 114,5,112,6,112,4,110,9, 101,4, 54,6, 26,3, 22,7; IV (KBr) 3250, 1676, 1618 cm"1; MS (FD+) m/e 294 (M+); Anal. calc. para C18H1404: C, 73,45; H, 4,80. Experim.: C, 73,15; H, 4,86. -92-
Preparação 18 2.8-Bisf(terc-butildimetilsiliDoxil-l 1.12-di-hiHrr>-5H-benzorblnaftor 2.1 -dlpíran-5-ona
Através do procedimento descrito na Preparação 3, o produto da Preparação 17 (4,17 g, 14,2 mmole) foi feito reagir com etanotiol (3,53 g, 3,95 ml, 56,8 mmole) e cloreto de alumínio (9,0 g, 67,5 mmole) em cloreto de metileno (100 ml). O produto em bruto foi adicionalmente reagido com trietilamina (8,6 g, 11,9 ml, 85,2 mmole) e cloreto de terc-butildimetilsililo (8,6 g„ 56,8 mmole) em cloreto de metileno (100 ml) para se obter, após recristalização a partir de hexano, o produto em título como um sólido amarelo, pf 145-147 °C: ’Η-NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,37 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 6,81 (m, 2H), 6,72 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 2,8-3,0 (m, 4H), 1,00 (s, 18H), 0, 27 (s, 6H), 0, 24 (s, 6H); 13C-NMR (125 MHz, CDC13) δ 159,8, 158,6,155,4, 153,9,147,1,137,7, 128,6, 125,0, 123,9,119,0, 118,1, 117,5, 117,3, 113,8, 107,5, 27,4, 25,7, 25,6, 23,9, 18,3, 18,2, -4,3, -4,4; IV (CHC13) 1708, 1612 cm'1; MS (FD) m/e 508 (M+).
Preparação 19 6-Metoxi-1 - IY 4-hi droxi) fenill imino-1.2.3.4-tetra-hidronaftaleno
-93- -93- / (y
l/ΛΜ
Uma solução de 6-metoxitetralona (25 g, 142 mmole) e 4-hidroxianilina (16,3 g, 149 mmole) foi aquecida a 180 °C sob uma corrente de azoto durante 2 horas. Âpós arrefecer à temperatura ambiente, a massa sólida foi recristalizada a partir de tolueno/metanol: 'H-NMR (300 MHz) δ 8,15 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 6,5-7,9 (m, 6H), 3,80 (s, 3H), 2,84 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,51 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,85 (m, 2H).
Preparação 20 6-Metoxi-1 -\( 4-hidroxDfenill imino-1.2.3.4-tetra-hidronaftaleno
O produto da Preparação 19 (36 g, 134,7 mmole) foi dissolvido em cloreto de metileno:THF 1:1 (300 ml) e tratado com trietilamina (28,6 g, 39,4 ml, 283 mmole) e cloreto de fôrc-butildimetilsililo (30,5 g, 202 mmole). A mistura foi agitada durante a noite e foram adicionadas porções adicionais de trietilamina (6,8 g, 9,4 ml, 67 mmole) e cloreto de fôrc-butildimetilsililo (10,2 g, 67 mmole) para que a reacção fosse completa. Após 5 horas, a mistura foi diluída com éter (500 ml), filtrada, concentrada e o resíduo lavado com hexano/éter. Os extractos foram filtrados, concentrados e o resíduo purificado por cromatografia rápida (sílica gel, 18:1-10:1 hexano:acetato de etilo) para se obterem 21,0 g (41%) do composto em título como uma espuma amarela clara: 'H-NMR (300 MHz, -94- -94-
á*
Uam CDCI3) δ 8,32 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 6,86 (m, 3H), 6,73 (m, 3H), 3,92 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,57 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,96 (m, 2H), 1,05 (s, 9H), 0,26 (s, 6H),
Preparação 21 6-Metoxi- 1-ΓΝ-ΙΥ4-terc-butildimetilsilil)oxilfenill-N-(2.5-dimetoxibenzoiDlamino-3.4-di-hidronaftaleno
O produto da Preparação 20 (10,2 g, 26,8 mmole) foi dissolvido em cloreto de metileno (100 ml), arrefecido a 0 °C e tratado com trietilamina (3,8 g, 5,2 ml, 37,5 mmole) seguido por uma solução de cloreto de 2,5-dimetoxibenzoílo (6,72 g, 33,5 mmole) em diclorometano (25 ml). A mistura foi aquecida em refluxo durante a noite, sendo então tratada com mais trietilamina (1,4 g, 1,9 ml, 13,4 mmole) e cloreto de ácido (2,7 g, 13,4 mmole) e o aquecimento foi mantido por mais 12 horas. Após concentração em vácuo, o resíduo foi dissolvido em éter (250 ml), lavado com salmoura (250 ml), seco (dulfato de sódio) e concentrado. A purificação do resíduo por cromatografia (sílica gel, 9:1-4:1 hexano:acetato de etilo) originou 10,3 g do composto cm título como uma espuma branca: 'H-NMR (300 MHz, CDCI3) Ô 6,4-7,6 (br m, 11H), 5,83 (br s, 1H), 3,4-3,8 (br m, 9H), 1,9-3,0 (br m, 4H), 0,95 (2 br s, 9H), 0,14 (2 br s, 6H) ; IV (CHC13) 1651, 1607, 1507 cm·'; MS (FD) m/e 545 (M+); Anal. calc. para C32H39NO5S1: C, 70,43; H, 7,20; N, 2,57. Experim.: C, 70,53; H, 7,26; N, 2,76. -95-
Preparação 22 2.8-Dimetoxi-5- Γ 4- Γ /terc-butildimetilsililloxil fenill -11. 12-di-hidro-6H- benzorclfenantrid-6-ona
Uma solução do produto da Preparação 21 (2,73 g, 5 mmole) em benzeno (250 ml) foi desgaseificada recorrendo a 3 ciclo de congelação/ vácuo/ descongelação e irradiada com uma lâmpada interna de mercúrio de 450 Watt num poço de imersão de quartzo sob azoto. Após 22 horas, a mistura foi concentrada e o resíduo purificado por cromatografia (sílica gel, 20:1 tolueno:éter) para se obterem 675 mg (26%) do composto em título como uma espuma amarela. Uma amostra analítica foi obtida por cristalização a partir de hexano/éter como cristais amarelos claros, pf 194-95 °C: *H-NMR, (300 MHz, CDC13) 7,94 (d, 2,8 Hz, 1H), 7,73 (d, 8,9 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 8,9,2,8 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,84 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,76 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,67, (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,35 (dd, J = 8,8, 2,7 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,90 (s, 4H), 0,99 (s, 9H), 0,21 (s, 6H); I3C-NMR (125 MHz, CDC13) δ 162,6, 158,3, 157,7,154,4,139,7,134,3, 133,6,129,9, 129,8,128,1,126,2,123,7,123,2,122,6, 119,8, 114,9, 112,7, 110,4, 108,6, 55,3, 54,8, 29,3, 25,5, 23,5, 18,1, -4,4; IV (CHCI3) 1640, 1615, 1507 cm'1; MS (FD+) m/e 513 (M+); Anal. calc. para C31H35NNNO4SÍ: C, 72,48; H, 6,87; N, 2,73. Experim.: C, 72,66; H, 6,95; N, 2,86. -96-
Prcparacão 23 2.8-Dimetoxi-5-[4-hidroxifenilV 11.12-di-hidro-6H-ben2or clfenantrid-6-ona
OMe Hbv O produto da Preparação 22 (790 mg, 1,5 mmole) foi dissolvido em acetonitriloxloreto de metileno 3:2 (50 ml) e tratado com fluoreto de hidrogénio-piridina (10 ml) em 2 porções com intervalos de 1 hora. Após agitar por mais 1 hora, a mistura foi diluída com THF (100 ml) e filtrada, lavando com metanol e éter. Os filtrados foram diluídos com THF (200 ml) e lavados com salmoura (200 ml) e solução saturada de bicarbonato de sódio (200 ml). A fase aquosa combinada foi extraída com THF (100 ml) e a fase orgânica combinada foi seca (sulfato de sódio) e concentrada para se obterem 340 mg (57%) de um pó amarelo, 'H-NMR (300 MHz, dimetilformamida-d7) δ 9,80 (br s, 1H), 7,91 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,44 (dd, J = 9,7, 1,9 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,8-7,0 (m, 4H), 6,47 (dd, J = 8,7, 1,9 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 2,89 (m, 4H); MS (FD+) m/e 399 (M+).
Exemplo 12 2.8-Dimetoxi-5-r4-r2-('l-piperidiniDetoxilfenill-11.12-di-hidro-6H-benzof clfenantrid-6-ona
MeO'
lyuiíA -97- A uma solução do produto da Preparação 23 (340 mg, 0,85 mmole), trifenilfosfina (446 mg, 1,7 mmole) e l-(2-hidroxietil)piperidina (275 mg, 282 μΐ, 2,1 mmole) em THF (20 ml) foi adicionado azodicarboxilato de dietilo (DEAD) (296 mg, 268 μΐ, 1,7 mmole) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Após concentração em vácuo, uma cromatografia (sílica gel, 1:1 hexano:acetato de etilo, 5-20% metanol, 0,1% hidróxido de amónio) originou 338 mg (66%) do composto em título como uma espuma amarela: !H-NMR (300 MHz) Ô 7.82 (m, 2H), 7.35 (dd, J = 9.7, 2.9 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 9.7 Hz, 2H) , 6.91 (d, J = 9.7 Hz, 2H), 6.82 (m, 1H), 6.70 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 6.38 (dd, J = 9.7, 1.9 Hz, 1H), 4.12 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 2.86 (m, 6H), 2.65 (m, 4H), 1.5-1.7 (m, 4H), 1.4-1.5 (m, 2H).
Exemplo 13 2.8-Dimetoxi-5-r4-r2-(l-PÍperidininetoxilfenill-6H-benzorclfenantridina
OMe A uma solução do produto do exemplo 12 (753 mg, 1,47 mmole) foi dissolvida em dicloroetano (20 ml), tratada com DDQ (352 mg, 1,55 mmole) e aquecida a 80 °C. Após várias horas, a mistura foi arrefecida à temperatura ambiente, diluída com cloreto de metileno (100 ml), lavada com solução saturada de carbonato de sódio e a fase orgânica foi seca (sulfato de sódio) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia (sílica gel, 1:1 hexano:acetato de etilo, 15% metanol) para se obterem 330 mg (44%) de um sólido amarelo. -98 O sólido acima obtido (309 mg, 0,61 mmole) foi dissolvido em THF (425 ml) e tratado com tetra-hidroaluminato de lítio (THAL) (115 mg, 3,05 mmole) à temperatura ambiente. Após 10 minutos, o excesso de THAL foi destruído com acetato de etilo (50 ml) e a mistura foi lavada com solução saturada de cloreto de amónio (25 ml). A fase aquosa foi lavada com acetato de etilo (25 ml) e a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (25 ml), seca (sulfato de sódio), concentrada e purificada por cromatografia radial (sílica gel, 1:1 hexanoracetato de etilo, 5% metanol, sob atmosfera de amónia). O produto foi então dissolvido em ácido acético glacial (10 ml) e tratado com boro-hidreto de sódio (69 mg, 1,82 mmole). Após 1 hora, a mistura foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio e extraída com uma mistura de cloreto de metileno e solução saturada de bicarbonato de sódio. A fase orgânica foi seca (sulfato de sódio), concentrada e o resíduo usado sem purificação adicional: !Η-NMR (300 MHz) δ 7,99 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,92 (m, 2H), 6,81 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 6,63 (d, J = 9,1,2H), 3,89 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,57 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 2,39 (m, M, 1,4-1,5 (m, 4H), 1,3-1,4 (m, 2H).
Exemplo 14 2.8-Di-hidroxi-5-r4-r2-n-piperidinir)etoxi1fenin-6H-benzofclfenantridina
-99-
Uma solução do produto do exemplo 13 (195 mg, 0,39 mmole) em cloreto de metileno (25 ml) foi tratada com etanotiol (200 mg, 220 ml, 3,2 mmole) e cloreto de alumínio (320 mg, 2,4 mmole). Após agitar 4 horas à temperatura ambiente foi cuidadosamente adicionado à mistura (THF) (25 ml) e solução saturada de bicarbonato de sódio (25 ml). As fases foram separadas, a fase aquosa foi extraída com THF (25 ml) e a fase orgânica combinada foi seca (sulfato de sódio) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia radial (sílica gel, 1:1 hexano:acetato de etilo, 10-20% metanol, sob atmosfera de amónia) para se obterem 110 mg (60%) do composto em título como uma espuma amarelo-acastanhada. Uma amostra analítica foi cristalizada a partir de metanol como um sólido vermelho claro: 'H-NMR (300 MHz, dimetilformamida-d7) δ 9,92 (br s, 1H), 9,74 (br s, 1H), 7,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,98 (dd, J = 9,0,2,1 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 8,4,2,1 Hz, 1H), 6,73 (m, SH), 3,92 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,57 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,38 (m, 4H), 1,4-1,5 (m, 4H), 1,3-1,4 (m, 2H); IV (KBr) 3560, 3490 cm'1; MS (FD+) m/e 466 (M+); Anal. calc. para C3oH3oN203.0,5H20: C, 75,75; H, 6,58; N, 5,89. Experim.: C, 75,82; H, 6,76; N, 5,95.
Exemplo 15 2.8-Ρχ-Μ<1γοχϊ-5-Γ4-Γ2-( 1 -piperídinilletoxilfenil1-5H-benzorb1naftor2.1 -dlpirano Este composto é preparado de acordo com as instruções e exemplso precedentes.
-100-
Nos exemplos que ilustram os métodos, foi usado um modelo pós-menopausa, pelo qual foram determinados os efeitos dos diferentes tratamentos nos lípidos circulantes.
Ratos Sprague Dawley com setenta e cinco dias de idade (pesos na gama de 200 a 225 g) foram adquiridos dos laboratórios Charles River (Portage, MI). Os animais foram ovariectomizados (OVX) bilateralmente ou expostos a um procedimento cirúrgico simulado nos Laboratórios Charles River, sendo então enviados após uma semana. Quando os ratos chegaram, foram alojados em gaiolas suspensas em grupos de 3 ou 4 por gaiola e foi-lhes permitido acesso livre a comida (conteúdo de cálcio aproximadamente 0,5%) e água durante uma semana. Foi mantida uma temperatura ambiente de 22,2 °C ± 1,7 °C com um mínimo de humidade relativa de 40 °C. O fotoperíodo na sala foi de 12 horas de luz e 12 horas de escuridão.
Colheita de Tecido em Regime de Dosagem. Após uma semana de período de aclimatação (e deste modo, duas semanas pós-OVX) é iniciado o doseamento diário com composto teste. 17a-etinil estradiol ou composto teste é administrado oralmente, a não ser que de outro modo indicado, como uma suspensão em carboximetilcelulose 1% ou dissolvido em ciclodextrina 20%. Os animais foram doseados diariamente durante 4 dias. Após o regímen de dosagem, os animais foram pesados e anestesiados com uma mistura de cetamina : xilazina (2:1, v:v) e uma amostra de sangue é recolhida por punção cardíaca. Os animais são então sacrificados por asfixia com CO2,0 útero é removido através de incisão na linha média, e é determinado o peso uterino húmido.
Análise de Colesterol. As amostras de sangue são deixadas -101 - -101 - l/í Ια coagular à temperatura ambiente durante 2 horas, e o soro é obtido após centrifugação durante 10 minutos a 3000 rpm. O colesterol no soro é determinado usando um ensaio de alta eficácia do colesterol da Boehringer Mannheim Diagnostics. Resumidamente, o colesterol é oxidado a colest-4-en-3-ona e peróxido dc hidrogénio. O peróxido de hidrogénio é então feito reagir com fenol e 4-aminofcna/ona na presença de peroxidase para produzir um corante p-quinona imina, o qual é lido espectrofotometricamente a 500 nm. A concentração de colesterol é calculada contra uma curva padrão. Todo o ensaio é automatizado usando um Biomek Automated Workstation.
Ensaio Uterino da Peroxidase do Eosinófilo. Os úteros são mantidos a 4 °C até ao momento da análise enzimática. Os úteros são então homogeneizados em 50 volumes de tampão Tris 50 mM (pH ~8,0) contendo 0,005% Triton X-100. Após a adição de peróxido de hidrogénio 0,01% e O-fenilenodiamina 10 mM (concentrações finais) ao tampão Tris, é monitorado o aumento da absorvância durante 1 minuto a 450 nm. A presença de eosonófilos no útero é uma indicação da actividade estrogénica de um composto. A velocidade máxima de um intervalo de 15 segundos é determinado ao longo da fracção inicial linear da curva reaccional.
Origem do Composto: 17a-etinil estradiol é obtido a partir da Sigma Chemical Co., St. Louis, MO.
Influência dos Compostos de Fórmula I e II no Colesterol do Soro e
Determinação da Actividade Agonista/Não-Agonista
Os dados apresentados na Tabela T abaixo mostram os resultados -102- UU* comparativos entre os ratos ovariectomizados, ratos tratados com 17a-etinil estradiol (EE2; uma forma de estrogénio disponível oralmente) e ratos tratados com determinados compostos da presente invenção. Embora ο EE2 provocasse uma diminuição no colesterol do soro quando administrado oralmente a 0,1 mg/kg/dia, é também exercida uma acção estimulatória no útero de modo a que o peso uterino com ο EE2 fosse substancialmente maior do que o peso uterino dos animais de teste ovariectomizados. Esta resposta uterina ao estrogénio é perfeitamente conhecida na técnica.
Os compostos da presente invenção não provocam apenas a redução do colesterol do soro quando comparados com os animais de controlo ovariectomizados, mas o peso uterino é também minimamente aumentado a ligeiramente diminuído com a maioria dos compostos testados. Comparados com os compostos estrogénicos conhecidos na técnica, o benefício da redução do colesterol do soro sem afectar adversamente o peso uterino é bastante raro e desejável.
Sendo também expressa na tabela de dados abaixo, a estro-genicidade foi também verificada através da avaliação da resposta adversa da infiltração eosinófila no útero. Os compostos da presente invenção não provocaram qualquer aumento no número de eosinófilos observados na camada estromal dos ratos ovariectomizados, enquanto que o estradiol provocou uma aumento substancial e esperado na infiltração eosinófila.
Os dados apresentados na Tabela 1 abaixo reflectem a resposta de 5 a 6 ratos por tratamento. ΙΑ^η -103-
/,
Tabela 1 Composto Dose mg/kg Peso Uterino (% aumento vs. OVX) EPO Uterino (V. max) Colesterol no Soro (% diminuição vs. OVX) ee2 0,1 86,3 116,4 81,4 Exemplo 1 0,1 25,3 7,8 72,8 1,0 9,2 3,0 51,0 10,0 5,9 2,1 54,6 Exemplo 3 0,1 32,5 4,2 51,5 1,0 7,4 3,0 50,8 Exemplo 4 0,1 10 3,3 62,6 1,0 15,3 3,3 48,2 Exemplo 5 0,1 -5,1 4,5 -9 1,0 18,6 4,8 61,3 Exemplo 6 0,1 23 4,2 -2,5 1,0 6,4 1,8 9,9 10,0 50,0 3,6 -11,4 Exemplo 7 0,1 28,9 4,8 39,8 1,0 31,2 6,6 65,5 10,0 14,7 3,6 54,0 Exemplo 8 0,01 10,2 2,1 50,5 0,1 27,4 4,8 38,5 1,0 27,2 4,8 68,0 Exemplo 9 0,1 77,8 52,2 40,1 109,1 83,1 54,7 94,6 75,0 65,2 Exemplo 11 0,1 -8,8 2,7 17,4 1,0 3 4,2 30,9 10,0 -12,6 4,2 36,3 Exemplo 14 0,01 -0,6 2,7 24,8 0,1 60,0 5,4 59,5 1,0 49,1 36,0 60,7
/
J -104-
Para além dos benefícios demonstrados pelos compostos da presente invenção, especialmente quando comparados com o estradiol, os dados anteriores demonstram claramente que os compostos de Fórmula I e II não imitam os do estrogénio. Adicionalmente, não foram observados efeitos toxicológicos deletérios (sobrevivência) com qualquer tratamento.
Procedimento para Teste à Osteoporose
Seguindo o Procedimento Geral de Preparação, infra, os ratos são diariamente tratados durante 35 dias (6 ratos por grupo de tratamento) e sacrificados por asfixia com dióxido de carbono no 36° dia. O período de tempo de 35 dias é suficiente para permitir uma redução máxima na densidade óssea, medida conforme aqui descrito. No momento do sacrifício, os úteros são removidos, dissecados e libertos de tecidos estranhos, e os fluidos nele contidos expelidos antes da determinação do peso húmido de modo a confirmar a deficiência de estrogénio associada com a ovariectomia completa. O peso uterino é normalmente reduzido cerca de 75% em resposta à ovariectomia. Os úteros são então colocados em 10% formalina tamponizada neutra para permitir a subsequente análise histológica. --------
Os fémures direitos foram retirados e foram gerados e analisados raios-X digitalizados através de um programa de análise de imagens (NIH image) na metáfise distai. O aspecto proximal das tíbias destes animais foi também varrido por tomografia quantitativa computorizada.
De acordo com os procedimentos anteriores, os compostos da presente invenção e o etinil eestradiol (EE2) em 20% hidroxipropil β-ciclodextrina foram administrados oralmente em animais de teste, os dados das ΙΛμ F 1S\ -105 -metáfises do fémur distai apresentados na Tabela 2 e 3 abaixo são os resultados dos tratamentos do composto de fórmula I comparados com animais de teste ovariectomizados e inalterados. Os resultados são repostados como percentagem de protecção relativamente à ovariectomia.
Tabela 2
Composto/T ratamento Dose/kg Metáfise do Fémur Distai (Análise da Imagem de Raios X - Resultados no Cinzento ee2 0,1 mg 62,4* Exemplo 1 0,01 mg 14,2 0,1 mg 49,8* 1,0 mg 51,7* 10,0 mg 48,2* *P <= 0,5 dois testes t de Student bicaudal dos dados não tratados.
Em resumo, a ovariectomia dos animais de teste causou uma redução significativa na densidade do fémur quando comparada com os controlos inalterados tratados com veículo. O etinil estradiol (EE2) administrado oralmente preveniu esta perda, mas 0 risco de estimulação uterina com este presente está sempre presente.
Os compostos da presente invenção previnem também a perda óssea de um modo geral, dependente da dose. Assim, os composto da presente invenção são úteis para o tratamento do síndroma pós-menopausa, particularmente a osteoporose. - 106.-
b*
Ensaio de Proliferação MCF-7 Células de adenocarcinoma da mama MCF-7 (ATCC HTB 22) são mantidas em MEM (meio essencial mínimo, livre de vermelho de fenol, Sigma, St. Louis, MO) suplementado com 10% soro fetal bovino (FBS) (v/v), L-glutamina (2 mM), piruvato de sódio (1 mM), HEPES {(N-[2-hidroxietil]piperazina-N'-[ácido 2-etanossulfónico] 10 mM}, aminoácidos não essencais e insulina bovina (1 pg/ml) (meio de manutenção). Dez dias antes do ensaio, as células MCF-7 são trocadas para um meio de manutenção suplementado com meio de ensaio soro fetal bovino extaído com carvão vegetal revestido com dextrano a 10% (DCC-FBS), em vez de FBS a 10% para esgotar as reservas internas de esteróides. As células MCF-7 são retiradas dos balões de manutenção usando meio de dissociação celulae (HBSS sem Ca2+/Mg2+ (sem vermelho de fenol) suplementado com 10 mM HEPES e 2 mM EDTA). As células são lavadas duas vezes com meio de ensaio e ajustadas a 80.000 células/ml. Cerca de 100 μΐ (8.000 células) são adicionadas a poços de microcultura com fundo plano (Costar 3596) e incubadas a 37 °C numa incubadora com 5% CO2 humedecido durante 48 horas para permitir a aderência e equilíbrio das células após a transferência. São preparadas diluições seriadas das drogas ou DMSO, como um diluente de controlo, em meio de ensaio para um volume final de 200 μΐ. Após 48 horas adicionais a 37 °C numa incubadora com 5% CO2 humedecido, as microculturas são pulsadas com timidina tritiada (1 μθ/poço) durante 4 horas. As culturas são terminadas por congelação a -70 °C durante 24 horas seguido por descongelação e recolha das microculturas usando um Colector de Células Semi-automático Skatron . As amostras são contadas por cintilação líquida usando um contador β Wallac BetaPlace. Os resultados na Tabela 3 abaixo mostram o IC5o para determinados compostos da presente invenção. -107 -
l^sísis·'.
Tabela 3
Composto (Exemplo Referencia) IC50 nM 1 0,2 2 100 3 3,0 4 5,0 5 1000 6 500 11 0,7 14 1
Inibição do Tumor Mamário Induzido por DMBA São produzidos tumores mamários dependentes de estrogénio em ratos Sprague-Dawley fêmea, os quais foram comprados na Harlan Industries, Indianápolis, Indiana. Com cerca de 55 dias de idade, os ratos recebem uma administração oral única de 20 mg de 7,12-dimetilbenz[a]antraceno (DMBA). Cerca de 6 semanas após a administração DMBA, as glândulas mamárias são apalpadas com intervalos semanais para averiguar o aparecimento de tumores. Sempre que um ou mais tumores apareçam, são medidos 0 maior e o menor diâmetro de cada tumor com um compasso de calibre métrico, as medidas são registadas, e esse animal é seleccionado para experimentação. É feita uma tentativa para distribuir os vários tamanhos dos tumores nos grupos tratados e de controlo, de modo a que os tumores de tamanho médio esteja distribuídos equivalentemente entre os grupos de teste. Os grupos de controlo e os grupos de teste para cada experiência contêm 5 a 9 animais.
Os compostos de fórmula I são administrados através de injecções intraperítoneais em 2% acácia ou oralmente. Os compostos administrados -108-
oralmente são dissolvidos ou suspensos em 0,2 ml de óleo de milho. Cada tratamento, incluindo os tratamentos com controlo de acácia e óleo de milho, é adaministrado uma vez por dia a cada animal em teste. Após as medidas do tumor iniciais e selecção dos animais teste, os tumores são medidos semanalmente pelo método acima indicado. O tratamento e medidas dos animais continuou durante 3 a 5 semanas, após as quais se determinam as áreas finais dos tumores. Para cada composto c tratamento de controlo, é determinada a alteração da área média do tumor.
Procedimentos Teste para a Fibrose Uterina
Teste 1
Entre 3 e 20 mulheres com fibrose uterina são administradas com um composto da presente invenção. A quantidade de composto administrado é de 0,1 a 1000 mg/dia, e o período de administração é 3 meses.
As mulheres são observadas durante o período de administração, e até três meses após a administração ser descontinuada, sobre os efeitos na fibrose uterina.
Teste 2 É usado o mesmo procedimento do Teste 1, excepto que o período de administração é 6 meses.
Teste 3 É usado o mesmo procedimento do Teste 1, excepto que o período de administração é 1 ano. -109-
TesLe 4 A. Indução de tumores fíbróides em cobaias É usado o estímulo prolongado de estrogénio para induzir leiomiomata em cobaias fêmea sexualmente desenvolvidas. Os animais são doseados com estradiol 3-5 vezes por semana por injecção, durante 2-4 meses ou até surgirem tumores. Os tratamentos que consistem num composto da invenção ou veículo são administrados diariamente durante 3-16 semanas, sendo então os animais sacrificados e os úteros recolhidos e analisados sobre a regressão do tumor. B. Implantação de tecido fibróide uetrino humano em ratos atí micos. São implantados tecidos de leiomiomas humanos na cavidade intraperitoncal c/ou miométrio uterino de ratos sexualmente desenvolvidos, castrados, fêmea, atímicos. E fornecido estrogénio exógeno para induzir o crescimento do tecido expantado. Em alguns casos, as células de tumor recolhidas são cultivadas in vitro antes da implantação. O tratamento que consiste num composto da presente invenção ou veículo é fornecido por lavagem gástrica numa base diária durante 3-16 semanas e os implantes são removidos e o seu crescimento ou regressão medido. No momento do sacrifício, os úteros são recolhidos para avaliar o estado do órgão.
Teste 5 A. Tecido de tumor fibróide uterino humano é recolhido e mantido, in vitro, como culturas primárias não transformadas. As amostras cirúrgicas são empurradas através de um peneiro ou malha esterilizada, ou altemativamente separadas do tecido circundante para produzir uma suspensão de células individuais. As células são mantidas num meio contendo 10% soro e antibiótico. As taxas de desenvolvimento na presença e na ausência de estrogénio são -110 - iyu&i í deierminadas. As células são ensaiadas para avaliar a sua capacidade em produzir componente C3 de complemento e a sua resposta aos factores de crescimento e hormona de crescimento. As culturas in vitro são avaliadas sobre a sua resposta proliferativa após tratamento com progestinas, GnRH, um composto da presente invenção e veículo. Os níveis de receptores da hormona esteróide são avaliados semanal mente para determinar se as características celulares importantes são mantidas in vitro. São utilizados tecidos de 5-25 pacientes.
Actividade em pelo menos um dos testes anteriores indica que os compostos da presente invenção têm potencial no tratamento da fíbrose uterina.
Procedimento Teste para a Endometriose
Nos Teste 1 e 2 podem ser examinados os efeitos no dia 14 e dia 21 de administração dos compostos da presente invenção no desenvolvimento do tecido endometrial explantado.
Teste 1
Doze a trinta ratos femea adultos estirpe CD são usados como animais teste. São divididos em três grupos de número igual. É monitorado o ciclo estral de todos os animais. No dia do proestro é efectuada uma cirurgia em cada femea. Foi removido o como uterino esquerdo às fêmeas de cada grupo, seccionado em pequenos quadrados, e os quadrados são suturados sem apertar em vários locais adjacentes ao fluxo de sangue mesentérico. Adicionalmente, foram removidos os ovários às fêmeas do Grupo 2.
No dia seguinte à cirurgia, os animais do Grupo 1 e 2 receberam injecções intraperitoneais de água durante 14 dias, enquanto que os animais do Grupo 3 receberam injecções intraperitoneais de 1,0 mg de um composto da -111- -111- s /
ΐΑΛή prcscntc invenção por quilograma de peso corporal, durante o mesmo tempo. A seguir aos dias de tratamento, cada fêmea foi sacrificada e foram removidos os explantes endometriais, adrenais, útero remanescente, e ovários, onde aplicável, e preparados para exame histológico. Os ovários e adrenais foram pesados.
Teste 2
Doze a trinta ratos fêmea adultos estirpe CD são usados como animais teste. São divididos em dois grupos iguais. É monitorado o ciclo estral de todos os animais. No dia do proestro é efectuada uma cirurgia em cada fêmea. Foi removido o como uterino esquerdo às fêmeas de cada grupo, seccionado em pequenos quadrados, e os quadrados são suturados sem apertar em vários locais adjacentes ao fluxo de sangue mesentérico.
Aproximadamente 50 dias após a cirurgia, os animais do Grupo 1 receberam injecções intraperitoneais de água durante 21 dias, enquanto que os animais do Grupo 2 receberam injecções intraperitoneais de 1,0 mg de um composto da presente invenção por quilograma de peso corporal, durante o mesmo tempo. A seguir aos 21 dias de tratamento, cada fêmea foi sacrificada e os explantes endometriais e adrenais foram removidos e pesados. Os explantes (são medidos como uma indicação de crescimento. Os ciclos estrais são monitorados.
Teste 3 A. Indução cirúrgica da endometriose São usados autógrafos do tecido endometrial para induzir endometriose em ratos e/ou coelhos. Os animais fêmea na idade da maturidade reprodutiva sofrem ooforectomia bilateral, e é fornecido estrogénio exogenamente, proporcionando assim um nível específico e constante de hormona. O tecido autólogo endometrial é implantado no peritoneu de 5-150 animais e é fornecido estrogénio para induzir o desenvolvimento do tecido -112 - (Μη explantado. É efectuado um tratamento consistindo num composto da presente invenção por lavagem gástrica numa base diária durante 3-16 semanas, e são removidos os implantes e medidos para averiguar o desenvolvimento ou regressão. No momento do sacrifício, o como intacto do útero é recolhido para avaliar o estado do endométrio. B. Implantação de tecido endometrial humano em ratos atómicos. É implantado tecido de lesões endometriais de humano no peritoneu de ratos atímicos sexualmente maduros, castrados, fêmeas. É fornecido estrogénio exógeno para induzir desenvolvimento do tecido explantado. Em alguns casos, as células endometriais recolhidas são cultivadas in vitro antes da implantação. É efectuado um tratamento consistindo num composto da presente invenção administrado por lavagem gástrica numa base diária durante 3-16 semana, e são removidos os implantes e medidos para averiguar o desenvolvimento ou regressão. No momento do sacrifício, os úteros são recolhidos para avaliar o estado do endométrio inalterado.
Teste 4 A. É recolhido tecido de lesões endometriais de humano e mantido in vitro como culturas primárias não transformadas. As amostras cirúrgicos são empurradas através de um peneiro ou malha esterilizada, ou altemativamente separadas do tecido circundante para produzir uma suspensão de células individuais. As células são mantidas num meio contendo 10% soro e antibiótico. São determinadas as taxas de desenvolvimento na presença e na ausência de estrogénio. As células são ensaiadas para avaliar a sua capacidade em produzir componente C3 de complemento e a sua resposta aos factores de crescimento e hormona de crescimento. As culturas in vitro são avaliadas sobre a sua resposta proliferativa após tratamento com progestinas, GnRH, um composto da presente invenção e veículo. Os níveis de receptores da hormona esteróide são avaliados -113- -113- 1/
1/vW
Ij scmanalmcntc para determinar se as características celulares importantes são mantidas in vitro. São utilizados tecidos de 5-25 pacientes.
Actividade em qualquer um dos testes anteriores indica que os compostos da presente invenção são úteis no tratamento da endometriose.
Procedimento para Teste da Inibição da Proliferação das Células Lisas da Aorta / Restenose
Os compostos da presente invenção têm a capacidade para inibir a proliferação das células lisas da aorta. Tal pode ser demonstrado utilizando células lisas cultivadas derivadas da aorta de coelho, sendo a proliferação determinada pela medição da síntese de ADN. As células são obtidas pelo método de explante conforme descrito em Ross, J. of Cell Bio., 1971,50,172. As células são colocadas em placas de microtitulação de 96 cavidades durante cinco dias. As culturas tomam-se confluentes e o desenvolvimento é interrompido. As células são então transferidas para Meio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) contendo 0,5-2% de plasma pobre em plaquetas, 2 mM L-glutamina, 100 U/ml penicilina, 100 mg/ml estreptomicina, 1 mC/ml 3H-timidina, 20 ng/ml factor de crescimento derivado de plaquetas, e concentrações várias os compostos da invenção. E preparada uma solução de estoque dos compostos em dimetilsulfóxido, sendo então diluída numa concentração apropriada (0,01-30 mM) no meio de ensaio anterior. As células são então incubadas a 37 °C durante 24 horas sob 5% C02 / 95% ar. No final das 24 horas as células são fixadas em metanol. A incorporação de 3H-timidina é então determinada por contagem por cintilação conforme descrito por Bonin et al., Exp. Cell. Res., 1989, 181, 475-782. A inibição da proliferação das células musculares lisas da aorta efectuada pelos compostos da presente invenção é adicionalmente demonstrada ί -114- ί -114-
“//is*' t pela determinação dos seus efeitos em células com desenvolvimento exponencial. Células do músculo liso de aorta de coelho são semeadas em placas de cultura de tecidos de 12 poços em DMEM contendo 10% soro fetal bovino, 2 mM L-glutamina, 100 U/ml penicilina, e 100 mg/ml estreptomicina. Após 24 horas, as células são ligadas e o meio é substituído por DMEM contendo 10% soro, 2 mM L-glutamina, 100 U/ml penicilina, 100 mg/ml estreptomicina, e as concentrações desejadas dos compostos. As células são deixadas em desenvolvimento durante quatro dias. As células são tratadas com tripsina e o número de células em cada cultura é determinado por contagem usando um contador ZM-Coulter. A actividade dos teste anteriores indica que os compostos da presente invenção têm potencial no tratamento da restenose. A presente invenção também fornece compostos de fórmula I e uma quantidade efectiva de estrogénio ou progestina para usar no alívio do síndroma pós-menopausa. Estes tratamento são particularmente úteis para tratar a osteoporose e baixar o colesterol do soro, uma vez que o paciente irá receber os benefícios de cada agente farmacêutico enquanto que os compostos da presente invenção iriam inibir os efeitos secundários indesejáveis do estrogénio e progestina. A actividade destes tratamentos de combinação em qualquer um dos testes pós-menopausa, infra, indica que os tratamentos de combinação são úteis para aliviar os sintomas da pós-menopausa em mulheres.
Estão comercialmente disponíveis várias formas de estrogénio e progestina. Os agentes baseados em estrogénio incluem, por exemplo, etinil estrogénio (0,01-0,03 mg/dia), mestranol (0,05-0,15 mg/dia) e hormonas estrogénicas conjugadas tais como Premarin® (Wyeth-Ayerst; 0,3-2,5 mg/dia) Os agentes baseadas na progestina incluem, por exemplo, medroxiprogesterona tal como Proverá® (Upjohn; 2,5-10 mg/dia), noretilnodrel (1,0-10,0 mg/dia), e -115-
/ noretindrona (0,5-2,0 mg/dia). Um composto preferido baseado em estrogénio é Premarin, e noretilnodrel e noretindrona são os agentes baseados em progestinas preferidos. O método de administração de cada agente baseado em estrogénio e progcstina c consistente com o que é conhecido na técnica. Para a maioria dos métodos da presente invenção, os compostos de fórmula I e II são administrados continuamcntc, de 1 a 3 vezes diariamente. No entanto, pode ser especialmente a terapia cíclica no tratamento da endometriose ou pode ser usada em situações agudas durante os ataques dolorosas da doença. No caso da restenose, a terapia pode ser limitada a intervalos curtos (1-6 meses) após procedimentos médicos tais como angioplastia.
Como aqui utilizado, o termo "quantidade efectiva" denomina uma quantidade de composto da presente invenção que é capaz de aliviar os sintomas de vários estados patológicos aqui descritos. A dose específica de um composto administrado de acordo com esta invenção irá, obviamente, ser determinada pelas circunstâncias específicas que rodeiam o caso, incluindo, por exemplo, o composto administrado, a via de administração, a condição do paciente, e a estado patológico a ser tratado. Uma dose diária típica irá conter um nível de dosagem não-tóxico de cerca de 5 mg a cerca de 600 mg/dia de um composto da presente invenção. As doses diárias preferidas serão geralmente de cerca de 15 mg a cerca de 80 mg/dia.
Os compostos desta invenção podem ser administrados por uma variedade de vias incluindo oral, rectal, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, e intranasal. Estes compostos são preferivelmente formulados antes da administração, cuja selecção será decidida pelo médico que cuida o paciente. Deste modo, um outro aspecto da invenção é uma composição -116- -116- I t/Mj
J farmacêutica compreendendo uma quantidade efectiva de um composto de fórmula I ou II, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, contendo opcionalmente uma quantidade efectiva de estrogénio ou progestina, e um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
Os ingredientes activos totais nestas formulações irão contribuir em 0,1% a 99,9% em peso da formulação. Por "farmaceuticamente aceitável" quer referir-se que o veículo, diluente, excipientes e sais têm de ser compatíveis com os outros ingredientes da formulação, e não são prejudiciais para o seu recipiente.
As formulações farmacêuticas da presente invenção podem ser preparadas através de procedimentos conhecidos na técnica, usando ingredientes bem conhecidos e prontamente disponíveis. Por exemplo, os compostos de fórmula I ou II, com ou sem um composto de estrogénio ou progestina, podem ser formulados com excipientes, diluentes ou veículos comuns, e formados em comprimidos, cápsulas, suspensões, pós, e similares. Exemplos de excipientes, diluentes e veículos que são adequados para tais formulações incluem os seguintes: agentes de enchimentos e agentes de volume tais como amido, açúcares, manitol, e derivados silícicos; agentes de ligação tais como carboximetilcelulose e outros derivados da celulose, alginatos, gelatina, e polivinilpirrolidona; agentes de humidificação tais como glicerol; agentes de dsintegração tais como carbonato de cálcio e bicarbonato de sódio; agentes para retradar a dissolução tais como parafina; aceleradores da reabsorção tais como compostos de amónio quaternários; agentes tensioactivos tais como álcool cetílico, monoestearato de glicerol; veículos de adsorção tais como caulino e bentonite; e lubrificantes tais como talco, estearato de cálcio e magnésio, e polietilglicóis sólidos.
Os compostos podem também ser formulados como elixires ou - 117 - / /í/lrSt i
f
J soluções para administração oral ou como soluções apropriadas para administração parenteral, por exemplo, por via intramuscular, subcutânea ou intravenosa. Adicionalmente, os compostos são bem adequados para formulação como formas de libertação prolongada e similares. As formulações podem ser constituídas de modo a que a libertação do ingrediente activo ocorra apenas ou prefcrcncialmente numa localização fisiológica específica, possivelmente ao longo de um período de tempo. Os revestimentos, invólucros, e matrizes protectoras podem ser feitas, por exemplo, de ceras ou substâncias poliméricas.
Os compostos de fórmula I e Π, sozinhos ou em combinação com um agente farmacêutico da presente invenção, serão geralmente administradas numa formulação conveniente. Não se pretende que os seguintes exemplos de formulações limitem o âmbito da presente invenção.
Formulações
Na formulação que se segue, "ingrediente activo" denomina um composto de fórmula I ou II, ou um seu sal ou solvato.
Formulação 1: Cápsulas de Gelatina São utilizadas cápsulas de gelatina dura usando o seguinte:
Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Ingrediente activo 0,1-1000 Amido, NF 0-650 Amido em pó fluente 0-50 Fluido silicone 350 centistokes 0-15
-118- I ΙΜ· .5/1
Α formulação anterior pode ser alterada de acordo com variações razoáveis fornecidas.
Uma formulação de comprimidos é preparada usando os seguintes ingredientes:
Formulação 2: Comprimidos
Ingrediente Quantidade (mg/comprimido) Ingrediente activo 2,5-1000 Celulose, microcristalina 200-650 Dióxido de silicone, fumado 10-650 Acido esteárico 5-15
Os componentes são misturados e prensados para se formarem comprimidos. ··
Altemativamente, os comprimidos, cada qual contendo 2,5-1000 mg de ingredientes activos, são feitos como se segue: Formulação 3: Comprimidos Ingrediente Quantidade (mg/comprimido) Ingrediente activo 25-1000 Amido 45 Celulose microcristalina 35 Polivinilpirrolidona (solução 10% em água) 4 Carboximetilcelulose sódica 4,5 Estearato de magnésio 0,5 Talco 1 -119-
f
Os ingredientes activos, amido e celulose são passados através de um peneiro de malha U.S. No. 45 e abundantemente misturados. A solução de polivinilpirrolidona é misturada com os pós resultantes, sendo então passados através de um peneiro de malha U.S. No. 14. Os grânulos assim produzidos são secos a 50 °C - 60 °C e passados através de um peneiro de malha U.S. No. 18. O carboximetilmetilamido de sódio, estearato de magnésio, e talco, previamente passados através de um peneiro de malha U.S. No. 60, são então adicionados aos grânulos e, após misturar, comprime-se num máquina de fazer comprimidos, obtendo-se então os comprimidos.
As suspensões, cada qual contendo 0,1-1000 mg de ingrediente activo por 5 ml de dose são feitas como se segue:
Formulação 4: Suspensões
Ingrediente Quantidade (mg/5 ml) Ingrediente activo 0,1-1000 mg Carboximetilcelulose sódica 50 mg Xarope 1,25 mg Solução de ácido benzóico 0,10 ml Aromatizante q.b. Corante q.b. Água purificada até 5 ml O ingrediente activo é passado através de um peneiro de malha U.S. No. 45 e misturado com a carboximetilcelulose sódica e xarope para formar uma pasta macia. A solução de ácido benzóico, aromatizante e corante são diluídos
-120-com alguma água e adicionados com agitação. É então adicionada água suficiente para se obter o volume requerido.
Uma solução de aerossol é preparada a partir dos seguintes ingredientes:
Formulação 5: Aerossol
Ingrediente Quantidade (% em peso) Ingrediente activo 0,25 Etanol 25,75 Propelente 22 (Clorodifluormetano) 70,00 O ingrediente activo é misturado com etanol e a mistura é adicionada a uma porção de propelente 22, arrefecendo-se então a 30 °C e transferindo-se para o dispositivo enchimento. Coloca-se então num recipiente de aço inoxidável com a quantidade necessária e dilui-se com o restante propelente. São então adaptadas as válvulas ao recipiente.
Os supositórios são preparados como se segue:
Formulação 6: Supositórios Ingrediente Quantidade (mg/supositório) Ingrediente activo 250 Glicéridos de ácidos gordos saturados 2.000
- 121 - O ingrediente activo é passado através de um peneiro de malha U.S. No. 60 e suspenso nos glicéridos de ácidos gordos saturados previamente fundidos, usando o menor aquecimento possível. A mistura é então colocada num molde de supositório de capacidade nominal de 2 g e deixa-se arrefecer.
Uma formulação intravenosa é preparada como se segue:
Formulação 7: Solução intravenosa
Ingrediente Quantidade Ingrediente activo 50 mg Agua salina isotónica 1.000 ml A solução dos ingredientes anteriores é administrada por via intravenosa num paciente, a uma velocidade de cerca de 1 ml por minuto.
Formulação 8: Cápsula Combinada I
Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Ingrediente activo 50 Premarin 1 Avicel pH 101 50 Amido 1500 117,50 Óleo de Silicone 2 Tween 80 0,50 Cab-O-Sil 0,25 -122- -122- Formulação 9: Cápsula Combinada II Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Ingrediente activo 50 Noretilnodrel 5 Aviccl pH I0l 82,50 Amido 1500 90 Óleo de Siliconc 2 Tween 80 0,50 Formulação 10: Comprimido Combinado
Ingrediente_Quantidade (mg/cápsula) Ingrediente activo 50 Premarin 1 Amido de Milho NF 50 Povidona, K29-32 6 AvicelpH 101 41,50 Avicel pH 102 136,50 Crospovidona XL10 2,50 Estearato de magnésio 0,50 Cab-O-Sil 0,50
Os compostos da presente invenção podem conter um ou mais centros assimétricos e, deste modo, podem existir como uma mistura de isómeros ou como isómeros individuais. Quer uma mistura quer os isómeros individuais serão úteis para os objectivos da presente invenção e podem assim ser utilizados.
Lisboa, 15 de Janeiro de 2001 LUIS SILVA CARVALHO '
RUA VICTOR CORDON, 14 i?nn LISBOA

Claims (12)

  1. - 1 -
    REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de fórmula I ou II:
    X é -O-, -S-, ou -NR5-; Y é -O-, -S-, -CH2-, -CH2CH2-, -CH=CH-, ou -NR5-; B é -CH2- ou -CO-; R1, R2, e R3 são cada qual independentemente -H, -OH; -0(Ci-C4 alquilo), -OCOCôHs, -OCO(Ci-Cô alquilo), -0S02(C4-C6 alquilo), -0S02CF3, Cl, ou F; n é 1 ou 2; W é CH2 ou C=0; R4 é 1-piperidinilo, 2-oxo-l-piperidinilo, l-pirrolidinilo, metil-1-pirrolidinilo, dimetil-l-pirrolidinilo, 2-oxo-lpirrolidinilo, 4-morfolino, dimetilamino, dietilamino, ou l-hexametilenoimino; R5 é CrC3 alquilo, -COCôHj, -CO(CrC6 alquilo), -C(0)0C£í5, -C(0)0(Ci-C6 alquilo), -S02C6H5 ou -S02CF3; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  2. 2. Um composto de acordo com a Reivindicação 1 o qual tem a Fórmula leem que X é -O- e Y é -S-.
  3. 3. Um composto de acordo com a Reivindicação 1 o qual tem a Fórmula II e em que Y é -CH=CH-.
  4. 4. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 em que -0-(CH2)n-W-R4 é 2-(l-piperidinil)etoxilo.
  5. 5. Um composto de acordo com a Reivindicação 1 o qual é escolhido a partir do grupo consistindo em: 3.9- di-hidroxi-6-[4-[2-(l-piperidinil)etoxi]fenil]-6-H-[I]benzotieno[3,2-c][l]benzopirano; 3.9- dimetoxi-6-[4-[2-(l-piperidinil)etoxi]fenil]-6-H-[l]benzotieno[3,2-c] [ 1 Jbenzopirano;
    -3- 3.9- bis(benzoiloxi)-6-[4-[2-(l-piperidinil)etoxi]fenil]-6-H-[l]benzotieno[3,2-c][l]benzopirano; 3.9- bis(pivaloiloxi)-6-[4-[2-(l-piperidinil)etoxi]fenil]-6-H-[l]benzotieno[3,2-c][l]benzopirano; 3.9- bis(l-butilsulfoniloxi)-6-[4-[2-(l-piperidiml)etoxi]fenil]-6-H-[ 1 ]benzoticno[3,2-c] [ 1 Jbenzopirano; 3.9- bi s(tri fl uormetanossulfoniloxi)-6-[4-[2-( 1 -piperidinil)etoxi]fenil]-6-H-[ 1 ]benzotieno[3,2-c] [ 1 ]benzopirano; 6-[4-[2-(l-piperidinil)etoxi]fenil]-6-H-[l]benzotieno[3,2-c][l]benzopirano; 3.9- di-hidroxi-6-[4-[2-(l-pirrolidinil)etoxi]fenil]-6-H-[l]benzotieno[3,2-c][l]benzopirano; 3.9- di-hidroxi-6-[4-(2-dimetilaminoetoxi)fenil]-6-H-[l]benzotieno[3,2-c][l]benzopirano; 3.9- di-hidroxi-6-[4-[2-(2-oxo-l-pirrolidinil)etoxi]fenil]-6-H-[l]benzotieno[3,2 c][l]benzopirano; 3.9- di-hidroxi-6-[4-[2-(l-piperidinil)etoxi]fenil]-6-H-benzofuro[3,2-cJ[lJbenzopirano; 2,8-dimetoxi-5-[4-[2-( 1 -piperidinil)etoxi]fenil]-11,12-di-hidro-6H-benzo[c]fenantrid-6-ona; -4- [/^ή 2.8- dimctoxi-5-[4-[2-(l-pipcridinil)ctoxi]fcnil]-6H-bcnzo[c]fcnantridina; 2,8 -di-hidroxi-5 - [4- [2-(1 -piperidinil)etoxi] fenil] -6H-benzo[c] fenantridina; e 2.8- di-hidroxi-5-[4-[2-(l-piperidmil)etoxi]fenil]-5H-benzo[b]nafto[2,l-d]pirano.
  6. 6. Um processo para preparar um composto de fórmula R2
    I 0-{CH2)n—W-R4 conforme definido na Reivindicação 1, o qual compreende: (1) fazer reagir um composto de fórmula
    III l/LMj -5-cm que Rla, R28, e R3a são cada qual independentemente H, -0(C]-C4 alquilo), -Cl, F, ou um -OH protegido; X e Y são definidos como anteriormente; e Za é -OH, -OC6H5, -0(Ci-C4 alquilo), com um reagente de Grignard de fórmula IVa BrMg \ / Ga em que Ga é -OSi(CH3)3, um hidroxilo protegido que pode ser selectivamente desprotegido na presença de Rla, R23, e R3a, ou -0(CH2)nWR1 2 3 para se obter um composto de fórmula R2»
    1 quando Ga é -OSi(CH3)3 ou um grupo OH protegido conforme 2 definido, (a) tratar o produto do passo (1) para o desproteger selectivamente a um 3 composto de fórmula U-w -6-
    e de seguida (b) alquilar este composto a um composto de fórmula
    (3) desproteger quaisquer grupos OH protegidos em Rla, R2a ou R3a no composto do passo 1 ou passo 2, para Se obter o composto de fórmula: -7- e
    R2
    (4) opcionalmente produzir um sal do produto do passo precedente.
  7. 7. Um processo para preparar um composto de fórmula R2
    0-(CH2)n-W- R4 conforme definido na reivindicação 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, o qual compreende (1) alquilar um composto de fórmula
    -8-
    em que Y é definido anteriormente, e cada Rla, R23, e R3a é independentemente H, -0(Ci-C4 alquilo), -Cl, F, ou um -OH protegido; (2) reduzindo opcionalmente o carbonilo; (3) desidrogenando opcionalmente o produto do passo precedente em que Y é -CH2-CH2;
    (4) desprotegendo quaisquer grupos OH protegidos em Rla, R2a, e R3a no produto de qualquer dos passos (1), (2) ou (3); e (5) produzir opcionalmente o sal do produto do passo precedente.
  8. 8. Um composto de fórmula
    Z -9- -9- u <,Λ-> em que Xé-O-, -S-, ou -NR5-; Y é -O-, -S-, -CH2-, -CH2CH2-, -CHCH-, ou -NR5-; cada Rla, R2a, e R3a é independentemente H, -0(Ci-C4 alquilo), -Cl, F, ou um -OH protegido; Z é -OH, -OCgHs, -0(CiC4 alquilo), ou 4-hidroxifenilo.
  9. 9. Um composto de fórmula
    em que Y é -O-, -S-, -CH2-, -CH2CH2-, -CH=CH-, ou -NR5-; cada Rla, R2a, e R3a é independentemente H, -0(Ci-C4 alquilo), -Cl, F, ou um -OH protegido; e cada Rla, R28, e R3a é independentemente H, -0(Cj-C4 alquilo), -Cl, F, ou um -OH protegido.
  10. 10. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com a Reivindicação 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, - 10- e opcionalmente uma quantidade efectiva de estrogénio ou progestina, em combinação com um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
  11. 11. Um composto de fórmula I conforme reivindicado na Reivindicação 1 para ser usado na inibição da perda óssea ou reabsorção óssea.
  12. 12. Um composto de fórmula I conforme reivindicado na Reivindicação 1 usado para diminuir os níveis de colesterol no soro. Lisboa, 15 de Janeiro de 2001
    LUIS SILVA CARVALHO Agente Oficial da Propriedade Industriai RUA VtCTOR CORDON. 14 1200 LISBOA
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