PT2958888T - Compostos bicíclicos - Google Patents

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PT2958888T PT147098222T PT14709822T PT2958888T PT 2958888 T PT2958888 T PT 2958888T PT 147098222 T PT147098222 T PT 147098222T PT 14709822 T PT14709822 T PT 14709822T PT 2958888 T PT2958888 T PT 2958888T
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Xiao Hai-Yun
J Dyckman Alaric
J Chan Eric
Richard Roberts Daniel
Dabros Marta
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Bristol Myers Squibb Co
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Description

DESCRIÇÃO
COMPOSTOS BICÍCLICOS A presente invenção refere-se em geral a compostos bicíclicos úteis como agonistas de SlPi. A presente invenção fornece compostos bicíclicos, composições que compreendem tais compostos e tais compostos para utilização em terapia. A invenção diz respeito ainda a composições farmacêuticas que compreendem pelo menos um composto de acordo com a invenção, as quais são úteis para o tratamento de afeções relacionadas com a modulação de SlPi, tais como doenças autoimunes e doença vascular. A esfingosina-l-fosfato (S1P) é um lisofosfolípido, metabólito zwitteriónico, da esfingosina (Sph), a qual, por sua vez, é derivada da clivagem enzimãtica de ceramidas. A fosforilação enzimática de Sph por duas quinases (SphKl e SphK2) leva à produção de S1P, em grande medida nos eritrõcitos, mas também numa fonte resistente à radiação, possivelmente o endotélio linfático (Pappu, R. et al., Science, 316:295-298 (2007)). Originalmente, acreditava-se
que operasse exclusivamente como uma molécula de sinalização intracelular, mas, subsequentemente, a S1P foi identificada como um ligante de alta afinidade por cinco membros da classe de genes de diferenciação endotelial (EDG) de recetores acoplados à proteína G (GPCRs) denominados SlPi ou S1P1, S1P2 ou S1P2, S1P3 ou S1P3, S1P4 ou S1P4 e S1P5 ou S1P5 (anteriormente conhecidos como EDG-1, EDG-5, EDG-3, EDG-6 e EDG-8, respetivamente) (Chun, J. et al. , Pharmacological Rev., 62:579 a 587 (2010)). A interação de SIP com os recetores de SIP desempenha uma função fisiológica fundamental num grande número de processos, incluindo proliferação celular, morfologia celular, invasão de células tumorais, angiogénese, tumorigénese, rearranjo citoesquelético, desenvolvimento vascular e trânsito de linfócitos (Olivera, A. et al., Adv. Exp. Med. Biol., 716:123 a 142 (2011)). Os recetores de S1P representam, portanto, bons alvos para uma grande variedade de aplicações terapêuticas, como inibição de crescimento tumoral, doença vascular e doenças autoimunes.
Entre os cinco recetores de S1P, o SlPi tem uma ampla distribuição. É o membro predominante da família expresso em linfócitos e executa uma importante função no trânsito dos linfócitos. É necessária a interação de SIP com o seu recetor SlPi para a saída de células imunitárias dos órgãos linfoides (como o timo e os linfonodos) e entrada nos vasos linfáticos. A regulação negativa do recetor SlPi (que pode ser obtida pelo tratamento com agonistas de SlPi via internalização do recetor) perturba a migração dos linfócitos e o alojamento em vários tecidos. Isso resulta no sequestro dos linfócitos em órgãos linfáticos, reduzindo, assim, o número de linfócitos circulantes que têm a capacidade de migração para os tecidos afetados. 0 desenvolvimento de um agente modulador do recetor SlPi que suprima a migração de linfócitos para sítios-alvo associados a processos autoimunes e inflamatórios anormais poderia ser eficaz numa série de estados de doença autoimune e inflamatória.
Os pedidos de patente a seguir descreveram compostos como agonistas de SlPi: WO 03/061567 (Publicação de Pedido de Patente U.S. N- 2005/0070506), WO 03/062248 (Patente U.S. N- 7 351 725), WO 03/062252 (Patente U.S. N- 7 479 504), WO 03/073986 (Patente U.S. N- 7 309 721), WO 03/105771, WO 05/058848, WO 05/000833, WO 05/082089 (Publicação de Pedido de Patente U.S. N- 2007/0203100), WO 06/047195, WO 06/100633, WO 06/115188, WO 06/131336, WO 2007/024922, WO 07/109330, WO 07/116866, WO 08/023783 (Publicação de Pedido de Patente N- U.S. 2008/0200535), WO 08/029370, WO 08/074820, WO 08/079382, WO 08/114157, WO 09/043889, WO 09/057079 e Patente N° U.S. N° 6 069 143.
Veja-se também Hale et al., J. Med. Chem., 47:6662 (2004). Hã ainda a necessidade de compostos úteis como agonistas de SlPi e que, no entanto, disponham de mais seletividade em relação ao S1P3. Além disso, há ainda necessidade de compostos úteis como agonistas de SlPi que disponham de mais seletividade em relação ao S1P3 e que também exerçam mínimos ou nenhum efeito pulmonar indesejãvel.
Os Requerentes descobriram compostos potentes com atividade como agonistas de SlPi. Adicionalmente, os Requerentes descobriram compostos com atividade como agonistas de SlPi e que são mais seletivos em relação ao S1P3. Além disso, os Requerentes descobriram compostos que dispõem de atividade como agonistas de SlPi, são mais seletivos em relação ao S1P3 e que exercem mínimos ou nenhum efeito pulmonar indesejável. Prevê-se que esses compostos sejam úteis como agentes farmacêuticos com valores desejáveis de estabilidade, de biodisponibilidade, do índice terapêutico e de toxicidade, fatores importantes para a capacidade de atuação dos mesmos como fármacos. SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção fornece compostos bicíclicos, que são úteis como moduladores da atividade de SlPi, incluindo os sais dos mesmos. A presente invenção também fornece composições farmacêuticas que compreendem um composto da Fórmula (I) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e um veículo farmaceuticamente aceitável. A presente invenção também fornece um composto de Fórmula (I) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para utilização no tratamento de uma doença ou transtorno associado à atividade do recetor SlPi acoplado à proteína G. A presente invenção também fornece processos e intermediários para produzir os compostos da Fórmula (I) e/ou dos sais dos mesmos. A presente invenção também fornece um composto da Fórmula (I) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para utilização em terapia. A presente invenção também fornece a utilização dos compostos da Fórmula (I) e/ou dos sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos no fabrico de um medicamento para o tratamento ou a profilaxia de afeções relacionadas com o recetor SlPi, tais como doenças autoimunes e vasculares.
Os compostos da Fórmula (I) e as composições que compreendem os compostos da Fórmula (I) podem ser utilizados no tratamento, na prevenção ou na cura de várias condições relacionadas com o SlPi. As composições farmacêuticas que compreendem esses compostos são úteis para tratar, prevenir ou retardar a progressão de doenças ou transtornos numa variedade de áreas terapêuticas, tais como doenças autoimunes e vasculares.
Estas e outras características da invenção serão apresentadas de forma ampliada à medida que for dada continuidade à descrição.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A invenção é ilustrada com referência aos desenhos anexos descritos abaixo. A Figura 1 mostra o padrão experimental e o simulado de PXRD (Cu Κα λ = 1,5418 A a aproximadamente 25 °C) da Forma N-l do composto do Exemplo 2. A Figura 2 mostra o padrão experimental e o simulado de PXRD (Cu Κα: λ = 1,5418 Ã a aproximadamente 25 °C) da Forma H-l monoidratada do sal de mono-HCl do composto do Exemplo 2. A Figura 3 mostra o padrão experimental e o simulado de PXRD (Cu Κα λ= 1,5418Ã a aproximadamente 25 °C) da Forma H-2 monoidratada do sal de mono-HCl do composto do Exemplo 2. A Figura 4 mostra o padrão experimental e o simulado de PXRD (Cu Κα λ = 1,5418 Â a aproximadamente 25 °C) da Forma N-3 do sal de mono-HCl do composto do Exemplo 2 . A Figura 5 mostra o padrão experimental e o simulado de PXRD (Cu Κα λ = 1,5418 Ã a aproximadamente 25 °C) da Forma N-4 do sal de mono-HCl do composto do Exemplo 2 . A Figura 6 mostra o padrão experimental e o simulado de PXRD (Cu Κα λ = 1,5418 Â a aproximadamente 25 °C) da Forma H-l monoidratada do sal de hemi-ácido L-mãlico do composto do Exemplo 2. A Figura 7 mostra o padrão experimental e o simulado de PXRD (Cu Κα λ = 1,5418 Ã a aproximadamente 25 °C) da Forma H-l monoidratada do sal de hemi-ácido malónico do composto do Exemplo 2. A Figura 8 mostra o padrão experimental e o simulado de PXRD (Cu Κα λ = 1,5418 Ã a aproximadamente 25 °C) da Forma H.33-1 1/3 hidratada do sal de 2/3 do ácido fosfórico do composto do Exemplo 2.
A Figura 9 mostra o padrão simulado de PXRD, calculado a -70 °C (Cu Κα λ = 1,5418 Ã) da Forma N-l do sal do ácido R-(+)-mandélico do composto do Exemplo 2. DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO 0 primeiro aspeto da presente invenção fornece pelo menos um composto da Fórmula (I):
(I) e/ou o sal do mesmo, em que R é -OH ou -0P(0)(0H)2.
Uma forma de realização fornece compostos da Fórmula (I) e/ou os sais dos mesmos, em que R é -0P(0) (0H)2. Os compostos dessa forma de realização têm a estrutura da Fórmula (II):
(II) .
Essa forma de realização inclui o composto da Fórmula
(lia) (11 a) e o composto da Fórmula (Ilb):
(Ilb).
Os compostos da Fórmula (II) e/ou os sais dos mesmos são úteis como agonistas seletivos de SlPi.
Uma forma de realização fornece compostos da Fórmula (I) e/ou os sais dos mesmos, em que R é -OH. Os compostos dessa forma de realização têm a estrutura da Fórmula (III):
(III) .
Essa forma de realização inclui o composto da Fórmula (Ilia) (111a) e o composto da Fórmula (Illb): (mb) .
Os compostos da Fórmula (III) e/ou os sais dos mesmos são úteis como pró-fãrmacos dos compostos da Fórmula (II). Os compostos da Fórmula (III) são ativados in vivo por fosforilação para fornecer os compostos da Fórmula (II). Os compostos da Fórmula (II) são ativos como agonistas seletivos de S1P:1.
Uma forma de realização fornece compostos da Fórmula (I) e/ou os sais dos mesmos, tendo a estrutura da Fórmula
(IV) : (IV) em que R é -OH ou -0P(0) (0H)2. Essa forma de realização inclui os compostos da Fórmula (Ila) e da Fórmula (Ilia).
Uma forma de realização fornece compostos da Fórmula (I) e/ou os sais dos mesmos, tendo a estrutura da Fórmula
(V) : (V) em que R é -OH ou -0P(0) (0H)2. Essa forma de realização inclui os compostos da Fórmula (Ilb) e da Fórmula (Illb),
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Ila) e/ou os sais do mesmo.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (lib) e/ou os sais do mesmo.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Ilia) e/ou os sais do mesmo.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Illb) e/ou os sais do mesmo.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (lia).
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Ilb).
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Ilia).
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Illb).
Uma forma de realização fornece um ou mais sais do composto da Fórmula (lia).
Uma forma de realização fornece um ou mais sais do composto da Fórmula (Ilb).
Uma forma de realização fornece um ou mais sais do composto da Fórmula (Ilia).
Uma forma de realização fornece um ou mais sais do composto da Fórmula (Illb).
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (III) em forma de sal de HC1.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Ilia) em forma de sal de HC1.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Illb) em forma de sal de HC1.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (III) em forma de sal do ácido fosfórico.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Ilia) em forma de sal do ácido fosfórico.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Illb) em forma de sal do ácido fosfórico.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Illb) em forma de sal do ácido L-málico.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (III) em forma de sal do ácido malónico.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Ilia) em forma de sal do ácido malónico.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Illb) em forma de sal do ácido malónico.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (Illb) em forma de sal do ácido R-(±)-mandélico.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (III) em forma de um sal selecionado a partir de sal de HC1, sal do ácido fosfórico e sal do ácido malónico.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (llla) em forma de um sal selecionado a partir de sal de HC1, sal do ácido fosfórico e sal do ácido malónico.
Uma forma de realização fornece o composto da Fórmula (lllb) em forma de um sal selecionado a partir de sal de HC1, sal do ácido fosfórico, sal do ácido L-málico, sal do ácido malónico e sal do ácido R-( + )-mandélico.
Uma forma de realização fornece um composto selecionado a partir de ((IR,3R)-l-amino-3-((R)-6-hexil- 5.6.7.8- tetra-hidronaf t.alen-2 -il) ciclopent.il) metanol e ((IR,3S)-1-amino-3 -((R)- 6-hexil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metanol; e os sais dos mesmos.
Uma forma de realização fornece um composto selecionado a partir de di-hidrogenofosfato de ((1R,3R)-1-amino-3-((R)-6-hexil-5,6,7,8 -tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metil e di-hidrogenofosfato de ((1R,3S)-1-amino-3-((R)-6-hexil- 5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metil; e os sais dos mesmos.
Uma forma de realização fornece um composto selecionado a partir de ((IR,3R)-l-amino-3-((R)-6-hexil- 5.6.7.8- tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metanol e di-hidrogenofosfato de ((IR,3R)-l-amino-3-((R)-6-hexil- 5.6.7.8- tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metil; e os sais dos mesmos.
Uma forma de realização fornece um composto selecionado a partir de ((IR,3S)-l-amino-3-((R)-6-hexil- 5,6,7,S-tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metanol e di-hidrogenofosfato de ((IR,3S)-l-amino-3-((R)-6-hexil- 5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2 -il)ciclopentil) metil; e os sais dos mesmos.
Sais e formas cristalinas do composto do Exemplo 2: TABELA 1
FORMA N-l DO EXEMPLO 2, BASE LIVRE
Em uma forma de realização, é fornecido o composto do Exemplo 2:
como material cristalino, compreendendo a primeira forma cristalina. A primeira forma cristalina do composto do Exemplo 2 compreende uma forma cristalina pura aqui designada como "Forma N-l" ou "N-l Forma" do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, a Forma N-l do Exemplo 2 é caracterizada por parâmetros da célula unitária que são aproximadamente iguais aos seguintes:
Dimensões da célula: a = 5,54 A b = 7,37 A c = 48,85 A a = 90,0° β = 90,0° γ = 90,0o
Grupo espacial: Ρ2χ2ι2ι
Moléculas do Exemplo 2/unidade assimétrica: 1 Volume/Número de moléculas na célula unitária = 499 Â3 Densidade (calculada) = 1,098 g/cm3, em que os parâmetros da célula unitária da Forma N-l do Exemplo 2 são aferidos a uma temperatura de aproximadamente -70 °C.
Em outra forma de realização, a Forma N-l do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão simulado de difração de raios-x em pó (PXRD) substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 1 e/ou por um padrão observado de PXRD substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 1.
Em ainda outra forma de realização, a Forma N-l do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão de PXRD (Cu Ka À = 1,5418 Â a uma temperatura de aproximadamente 25 °C) que compreende quatro ou mais, de preferência cinco ou mais valores de 2Θ selecionados a partir de: 3,6+0,2, 7,2+0,2, 12,5+0,2, 14,0+0,2, 15,0+0,2, 17,5+0,2, 19,4+0,2, 20,4+0,2 e 23,8+0,2, em que o padrão de PXRD da Forma N-l é aferido a uma temperatura de aproximadamente 25 °C.
Em ainda mais uma forma de realização adicional, a Forma N-l do Exemplo 2 é substancialmente pura.
Em ainda mais outra forma de realização, a Forma N-l do Exemplo 2 contém pelo menos aproximadamente 90% em peso, de preferência, pelo menos aproximadamente 95% em peso e, mais preferencialmente, pelo menos aproximadamente 99% em peso, com base no peso da Forma N-l do Exemplo 2.
Em ainda outra forma de realização, a Forma N-l substancialmente pura do Exemplo 2 tem homogeneidade de fase substancialmente pura com menos de aproximadamente 100 , de preferência menos de aproximadamente 50 e ams preferencialmente menos de aproximadamente 20 da ãea total do pico do padrão de PXRD aferido experimentalmente, resultante de picos que estão ausentes do padrão simulado de PXRD. Mais preferencialmente, a Forma N-l cristalina substancialmente pura do Exemplo 2 tem homogeneidade de fase substancialmente pura com menos de aproximadamente 10 da área total do pico do padrão de PXRD aferido experimentalmente, resultante de picos que estão ausentes do padrão simulado de PXRD.
Em outra forma de realização, a forma cristalina do Exemplo 2 consiste essencialmente na Forma N-l. A forma cristalina dessa forma de realização pode compreender pelo menos aproximadamente 900 em peso, de preferência, pelo menos aproximadamente 950 em peso e, mais preferencialmente, pelo menos aproximadamente 990 m peso, com base no peso da forma cristalina, Forma N-l do Exemplo 2 .
Em ainda outra forma de realização, é fornecida uma composição farmacêutica que compreende a Forma N-l do Exemplo 2; e pelo menos um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Em ainda outra forma de realização, uma composição farmacêutica compreende a Forma N-l substancialmente pura do Exemplo 2; e pelo menos um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Em ainda mais uma forma de realização adicional, uma quantidade terapeuticamente eficaz da Forma N-l do Exemplo 2 é combinada com pelo menos um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável para fornecer pelo menos uma composição farmacêutica.
Sais de HC1 do Exemplo 2
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em forma de sal de monoácido clorídrico.
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em forma de sal de monoácido clorídrico, que compreende um mol de HC1 para cada mol do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, é fornecido o sal de monoácido clorídrico do Exemplo 2 como material cristalino, que compreende uma ou mais formas cristalinas. Os exemplos de formas cristalinas adequadas do sal de monoácido clorídrico do Exemplo 2 incluem as Formas H-l, H-2, N-3 e N-4 .
Em uma forma de realização, é fornecido o sal de monoácido clorídrico do Exemplo 2 em forma de monoidratado.
Em uma forma de realização, é fornecido o sal monoidratado de monoácido clorídrico do Exemplo 2 como material cristalino, que compreende uma ou mais formas cristalinas. Os exemplos de formas cristalinas adequadas do sal monoidratado de monoácido clorídrico do Exemplo 2 incluem as Formas H-l e H-2.
Em uma forma de realização, é fornecido o sal monoidratado de monoácido clorídrico do Exemplo 2 como uma segunda forma cristalina aqui designada como "Forma H-l" ou "H-l Forma" do Exemplo 2, sal de HC1. A Forma H-l do Exemplo 2, sal de HC1 compreende uma molécula de água e uma molécula de HC1 para cada molécula do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, a Forma H-l do sal de monoácido clorídrico do Exemplo 2 é caracterizada por parâmetros da célula unitária que são aproximadamente iguais aos seguintes:
Dimensões da célula: a = 6,30 Â b = 6,42 A c = 55,28 Á α = 90,0° β = 90,0° γ = 90,0°
Grupo espacial: P212121
Moléculas do Exemplo 2/'unidade assimétrica: 1
Volume/número de moléculas na célula unitária = 560 ÃJ
Densidade (calculada) = 1,14 g/cmJ, em que os parâmetros da célula unitária da Forma H-l do sal de monoácido clorídrico do Exemplo 2 são aferidos a uma temperatura de aproximadamente -70 °C.
Em outra forma de realização, a Forma H-l do sal de monoácido clorídrico do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão simulado de difração de raios-x em pó (PXRD) substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 2 e/ou por um padrão observado de PXRD substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 2.
Em ainda outra forma de realização, a Forma H-l monoidratada do sal de mono-HCl do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão de PXRD (Cu Ka 2 = 1,5418 Â a uma temperatura de aproximadamente 25 °C) que compreende quatro ou mais, de preferência cinco ou mais valores de 2Θ selecionados a partir de: 3,2+0,2, 6,4+0,2, 9,6+0,2, 13,9+0,2, 14,6+0,2, 17,0+0,2, 19,0+0,2, 20,1±0,2, 21,3±0,2, 21,9 + 0,2 e 24,5 + 0,2, em que o padrão de PXRD é aferido a uma temperatura de aproximadamente 25 °C.
Em ainda mais uma forma de realização adicional, a Forma H-l do sal de monoácido clorídrico do Exemplo 2 é substancialmente pura.
Em ainda mais outra forma de realização, a Forma H-l do sal de monoácido clorídrico do Exemplo 2 contém pelo menos aproximadamente 900 em peso, de preferência pio menos aproximadamente 950 em peso e mais preferencàlmente pelo menos aproximadamente 990 em peso, com base nopeso da segunda forma cristalina, Forma H-l do Exemplo 2, sal de HC1.
Em ainda outra forma de realização, uma segunda forma cristalina substancialmente pura tem homogeneidade de fase substancialmente pura com menos de aproximadamente 100 , de preferência menos de aproximadamente 5õ e mais preferencialmente menos de aproximadamente 2ó da área total do pico do padrão de PXRD aferido experimentalmente, resultantes de picos que estão ausentes do padrão simulado de PXRD. Mais preferencialmente, uma segunda forma cristalina substancialmente pura tem homogeneidade de fase substancialmente pura, com menos de aproximadamente ló da área total do pico do padrão de PXRD aferido experimentalmente, resultante de picos que estão ausentes do padrão simulado de PXRD.
Em outra forma de realização, a segunda forma cristalina do sal de mono-HCl do Exemplo 2 consiste essencialmente na Forma H-l. A segunda forma cristalina dessa forma de realização pode compreender pelo menos aproximadamente 906 em peso, de preferência pelo menos aproximadamente 95ó em peso e mais preferencialmente pelo menos aproximadamente 9 9ó em peso, com base no peso da segunda forma cristalina, Forma H-l.
Em uma forma de realização, é fornecido o sal monoidratado de monoãcido clorídrico do Exemplo 2 em uma terceira forma cristalina, aqui designada como "Forma H-2" ou "H-2 Forma" do Exemplo 2, sal de HC1. A Forma H-2 do Exemplo 2, sal de HC1 compreende uma molécula de água e uma molécula de HC1 para cada molécula do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, a Forma H-2 do sal de monoácido clorídrico do Exemplo 2 é caracterizada por parâmetros da célula unitária que são aproximadamente iguais aos seguintes:
Dimensões da célula: a = 6,30 Â b = 6,43 A c = 27,88 Á α = 90,0° β = 96,0° γ = 90,0°
Grupo espacial: Ρ2Χ
Moléculas do Exemplo 2/unidade assimétrica: 1
Volume/número de moléculas na célula unitária = 562 Â3
Densidade (calculada) = 1,135 g/cm3, em que os parâmetros da célula unitária da Forma H-2 do Exemplo 2, sal de HC1 são aferidos a uma temperatura de aproximadamente -70 °C.
Em outra forma de realização, a Forma H-2 do Exemplo 2, sal de HC1 é caracterizada por um padrão simulado de difração de raios-x em pó (PXRD) substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 3 e/ou por um padrão observado de PXRD substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 3.
Em ainda outra forma de realização, a Forma H-2 monoidratada do sal de mono-HCl do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão de PXRD (Cu Ka 2 = 1,5418 Â a uma temperatura de aproximadamente 25 °C) que compreende quatro ou mais, de preferência cinco ou mais valores de 2Θ selecionados a partir de: 3,2+0,2, 6,4+0,2, 9,6+0,2, 14,1+0,2, 15,2+0,2, 16,8+0,2, 18,8+0,2, 20,2+0,2, 21,3±0,2, 22,6 + 0,2 e 26,6 + 0,2, em que o padrão de PXRD é aferido a uma temperatura de aproximadamente 25 °C.
Em ainda mais uma forma de realização adicional, a Forma H-2 do Exemplo 2, sal de HC1 é substancialmente pura.
Em ainda mais outra forma de realização, a Forma H-2 do Exemplo 2, sal de HC1 contém pelo menos aproximadamente 90ó em peso, de preferência pelo menos aproximadamente 95ó em peso e mais preferencialmente pelo menos aproximadamente 996 em peso, com base no peso da terceira forma cristalina.
Em ainda outra forma de realização, uma Forma H-2 substancialmente pura do Exemplo 2, sal de HC1 tem homogeneidade de fase substancialmente pura com menos de aproximadamente 10o, de preferência menos de aproximadamente 5ó e mais preferencialmente menos de aproximadamente 2ó da área total do pico do padrão de PXRD aferido experimentalmente, resultante de picos que estão ausentes do padrão simulado de PXRD. Mais preferencialmente, a Forma H-2 substancialmente cristalina do Exemplo 2, HC1 tem homogeneidade de fase substancialmente pura com menos de aproximadamente 16 da área total do pico do padrão de PXRD aferido experimentalmente, resultante de picos que estão ausentes do padrão simulado de PXRD.
Em outra forma de realização, a terceira forma cristalina do composto do Exemplo 2 consiste essencialmente na Forma H-2 do Exemplo 2, sal de HC1. A terceira forma cristalina dessa forma de realização pode compreender pelo menos aproximadamente 90ó em peso, de preferência pelo menos aproximadamente 95ó em peso e mais preferencialmente pelo menos aproximadamente 99ó em peso, com base no peso da terceira forma cristalina.
Em uma forma de realização, é fornecido o sal de monoãcido clorídrico do Exemplo 2 como material cristalino puro, compreendendo uma ou mais formas cristalinas. Os exemplos de formas cristalinas adequadas do sal de monoãcido clorídrico puro do Exemplo 2 incluem as Formas N-3 e N-4.
Em uma forma de realização, é fornecido o sal de monoãcido clorídrico puro do Exemplo 2 em uma quarta forma cristalina aqui designada como "Forma N-3" ou "N-3 Forma" do Exemplo 2, sal de HC1. A Forma N-3 do Exemplo 2, sal de HC1 compreende uma molécula de HC1 para cada molécula do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, a Forma N-3 do sal de HC1 do Exemplo 2 é caracterizada por parâmetros da célula unitária que são aproximadamente iguais aos seguintes: Dimensões da célula: a = 5,98 Ã b = 7,24 A C = 25,74 Â α: = 90,0° β = 91,7° γ = 90,0°
Grupo espacial: Ρ2χ
Moléculas do Exemplo 2/unidade assimétrica: 1 Volume/número de moléculas na célula unitária = 556 ÃJ Densidade (calculada) = 1,092 g/'cm‘‘, em que os parâmetros da célula unitária da Forma N-3 do sal de HC1 do Exemplo 2 sâo aferidos a uma temperatura de aproximadamente 27 °C.
Em uma forma de realização, a Forma N-3 do sal de HC1 do Exemplo 2 é caracterizada por parâmetros da célula unitária aproximadamente iguais aos seguintes:
Dimensões da célula: a = 5,93 Â b = 7,20 Ã c = 25,24 Â q: = 90,0° β - 90,2° γ = 90,0°
Grupo espacial: Ρ2Χ
Moléculas do Exemplo 2/unidade assimétrica: 1 Volume/número de moléculas na célula unitária = 538 ÃJ Densidade (calculada) = 1,128 g/'cm‘‘, em que os parâmetros da célula unitária da Forma N-3 do sal de HC1 do Exemplo 2 são aferidos a uma temperatura de aproximadamente -70 °C.
Em outra forma de realização, a Forma N-3 do Exemplo 2, sal de HC1 é caracterizada por um padrão simulado de difração de raios-x em pó (PXRD) substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 4 e/ou por um padrão observado de PXRD substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 4.
Em ainda outra forma de realização, a Forma N-3 do sal de mono-HCl do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão de PXRD (Cu Κα λ = 1,5418 Ã a uma temperatura de aproximadamente 25 °C) compreendendo quatro ou mais, de preferência cinco ou mais valores de 2Θ selecionados a partir de: 3,4+0,2, 6,9+0,2, 10,4+0,2, 12,7+0,2, 14,0+0,2, 16,1+0,2, 19,7+0,2, 20,6+0,2, 22,1+0,2 e 24,0+0,2, em que o padrão de PXRD é aferido a uma temperatura de aproximadamente 25 °C.
Em ainda mais uma forma de realização adicional, a
Forma N-3 do sal de HC1 do Exemplo 2 é substancialmente pura,
Em ainda mais outra forma de realização, a Forma N-3 do sal de HC1 do Exemplo 2 contém pelo menos aproximadamente 90ó em peso, de preferência pelo menos aproximadamente 95ó em peso e mais preferencialmente pelo menos aproximadamente 9 96 em peso, com base no peso da quarta forma cristalina, Forma N-3.
Em ainda outra forma de realização, uma Forma N-3 substancialmente pura do sal de HC1 do Exemplo 2 tem homogeneidade de fase substancialmente com menos de aproximadamente 106, de preferência menos de aproximadamente 5ó e mais preferencialmente menos de aproximadamente 20 da área total do pico do padrãode PXRD aferido experimentalmente, resultante de picos que estão ausentes do padrão simulado de PXRD. Mais preferencialmente, a Forma N-3 substancialmente cristalina do sal de HC1 do Exemplo 2 tem homogeneidade de fase substancialmente pura com menos de aproximadamente 10 da área total do pico do padrão de PXRD aferido experimentalmente, resultante de picos que estão ausentes do padrão simulado de PXRD.
Em ainda mais uma forma de realização adicional, a Forma N-3 do sal de HC1 do Exemplo 2 é substancialmente pura.
Em outra forma de realização, a forma cristalina do
Exemplo 2 consiste essencialmente na Forma N-3. A forma cristalina dessa forma de realização pode compreender pelo menos aproximadamente 900 em peso, de preferência pio menos aproximadamente 950 em peso e mais preferencàlmente pelo menos aproximadamente 990 em peso, com base nopeso da forma cristalina, Forma N-3 do Exemplo 2.
Em ainda outra forma de realização, é fornecida uma composição farmacêutica que compreende a Forma N-3 do Exemplo 2; e pelo menos um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Em ainda outra forma de realização, uma composição farmacêutica compreende a Forma N-3 substancialmente pura do Exemplo 2; e pelo menos um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Em ainda mais uma forma de realização adicional, uma quantidade terapeuticamente eficaz da Forma N-3 do Exemplo 2 é combinada com pelo menos um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável para fornecer pelo menos uma composição farmacêutica.
Em outra forma de realização, a quarta forma cristalina do sal de HC1 do Exemplo 2 consiste essencialmente na Forma N-3. A quarta forma cristalina dessa forma de realização pode compreender pelo menos aproximadamente 90ó em peso, de preferência pelo menos aproximadamente 95ó em peso e mais preferencialmente pelo menos aproximadamente 9 9ó em peso, com base no peso da quarta forma cristalina, Forma N-3.
Em uma forma de realização, é fornecido o sal de monoácido clorídrico puro do Exemplo 2 em uma quinta forma cristalina aqui designada como "Forma N-4" ou "N-4 Forma" do Exemplo 2, sal de HC1. A Forma N-4 do Exemplo 2, sal de HC1 compreende uma molécula de HC1 para cada molécula do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, a Forma N-4 do sal de HC1 do Exemplo 2 é caracterizada por parâmetros da célula unitária que são aproximadamente iguais aos seguintes: Dimensões da célula: a = 5,95 Â b = 7,27 À c = 51,60 A α = 90,0° β = 90,0° γ = 90,0o
Grupo espacial: P2i2i2i
Moléculas do Exemplo 2/unidade assimétrica: 1 Volume/número de moléculas na célula unitária = 558 Ã3 Densidade (calculada) = 1,088 g/cm3, em que os parâmetros da célula unitária da Forma N-4 do Exemplo 2, sal de HC1 são aferidos a uma temperatura de aproximadamente 27 °C.
Em uma forma de realização, a Forma N-4 do sal de HC1 do Exemplo 2 é caracterizada por parâmetros da célula unitária que são aproximadamente iguais aos seguintes: Dimensões da célula: a - 5,92 Â b = 7,25 A c = 50,61 A α = 90,0° β = 90,0° γ = 90,0o
Grupo espacial: P212121
Moléculas do Exemplo 2/unidade assimétrica: 1 Volume/número de moléculas na célula unitária = 543 Ã3 Densidade (calculada) = 1,119 g/cm3, em que os parâmetros da célula unitária da Forma N-4 do Exemplo 2, sal de HC1 são aferidos a uma temperatura de aproximadamente -70 °C.
Em outra forma de realização, a Forma N-4 do Exemplo 2, sal de HC1 é caracterizada por um padrão simulado de difração de raios-x em pó (PXRD) substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 5 e/ou por um padrão observado de PXRD substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 5.
Em ainda outra forma de realização, a Forma N-4 do sal de mono-HCl do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão de PXRD (Cu Κα λ 1,5418 Â a uma temperatura de aproximadamente 25 °C) compreendendo quatro ou mais, de preferência cinco ou mais valores de 2Θ selecionados a partir de: 3,4+0,2, 6,9+0,2, 10,3+0,2, 12,7+0,2, 13,3+0,2, 15,0+0,2, 19,7+0,2, 20,4+0,2, 21,2+0,2, 22,9±Q,2 e 24,9+0,2, em que o padrão de PXRD é aferido a uma temperatura de aproximadamente 25 °C.
Em ainda mais uma forma de realização adicional, a Forma N-4 do sal de HC1 do Exemplo 2 é substancialmente pura.
Em ainda mais outra forma de realização, a Forma N-4 do sal de HC1 do Exemplo 2 contém pelo menos aproximadamente 90ó em peso, de preferência pelo menos aproximadamente 95ó em peso e mais preferencialmente pelo menos aproximadamente 9 9ó em peso, com base no peso da quarta forma cristalina, Forma N-4.
Em ainda outra forma de realização, uma Forma N-4 substancialmente pura do sal de HC1 do Exemplo 2 tem homogeneidade de fase substancialmente pura com menos de aproximadamente 10ό, de preferência menos de aproximadamente 5ó e mais preferencialmente menos de aproximadamente 2ó da área total do pico do padrão de PXRD aferido experimentalmente, resultante de picos que estão ausentes do padrão simulado de PXRD. Mais preferencialmente, a Forma N-4 substancialmente cristalina do sal de HC1 do Exemplo 2 tem homogeneidade de fase substancialmente pura com menos de aproximadamente lõ da área total do pico do padrão de PXRD aferido experimentalmente, resultante de picos que estão ausentes do padrão simulado de PXRD.
Em ainda mais uma forma da realizaçao adicional, a Forma N-4 do sal de HC1 do Exemplo 2 é substancialmente pura.
Em outra forma de realização, a forma cristalina do Exemplo 2 consiste essencialmente na Forma N-4. A forma cristalina dessa forma de realização pode compreender pelo menos aproximadamente 90ó em peso, de preferência pelo menos aproximadamente 95ó em peso e mais preferencialmente pelo menos aproximadamente 99õ em peso, com base no peso da forma cristalina, Forma N-4 do Exemplo 2.
Em ainda outra forma de realização, é fornecida uma composição farmacêutica que compreende a Forma N-4 do Exemplo 2; e pelo menos um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Em ainda outra forma de realização, uma composição farmacêutica compreende a Forma N-4 substancialmente pura do Exemplo 2; e pelo menos um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Em ainda mais uma forma de realização adicional, uma quantidade terapeuticamente eficaz da Forma N-4 do Exemplo 2 é combinada com pelo menos um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável para fornecer pelo menos uma composição farmacêutica.
Em uma forma de realização, é fornecida uma composição compreendendo a Forma N-3, a Forma N-4, ou uma mistura destas, do sal de monoácido clorídrico puro do Exemplo 2. Sal do ácido L-málico
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em forma de sal do ácido L-málico.
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em sal de hemi-ãcido L-málico, que compreende 0,5 moles de ácido L-málico para cada mol do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em sal monoidratado de hemi-ácido L-málico, que compreende um mol de água e 0,5 moles de ácido L-málico para cada mol do
Exemplo 2.
Em uma forma de realização, é fornecido o sal monoidratado de hemi-ácido L-málico do Exemplo 2 numa sexta forma cristalina aqui designada como "Forma H-l" ou "H-l Forma" do Exemplo 2, sal de hemi-ácido L-mãlico, A Forma H-1 do Exemplo 2, sal de hemi-ácido L-mãlico compreende uma molécula de água e 0,5 moléculas de ácido L-málico para cada molécula do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, a Forma H-l do sal de hemi-ácido L-mãlico do Exemplo 2 é caracterizada por parâmetros da célula unitária que são aproximadamente iguais aos seguintes:
Dimensões da célula: a = 6,13 A b = 13,83 Â c = 28,75 Ã oí = 103,4° β = 94,0° γ = 92,6°
Grupo espacial: PI
Moléculas do Exemplo 2/unidade assimétrica: 4 Volume/número de moléculas na célula unitária = 591 Â3 Densidade (calculada) = 1,165 g/em3, em que os parâmetros da célula unitária da Forma H-l do sal de hemi-ácido L-málico do Exemplo 2 são aferidos a uma temperatura de aproximadamente -70 °C.
Em outra forma de realização, a Forma H-l do sal de hemi-ácido L-mãlico do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão simulado de difração de raios-x em pó (PXRD) substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 6 e/ou por um padrão observado de PXRD substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 6.
Em ainda outra forma de realização, a Forma H-l do sal de hemi-ácido L-málico do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão de PXRD (Cu Κα λ = 1,5418 Ã a uma temperatura de aproximadamente 25 °C) que compreende quatro ou mais, de preferência cinco ou mais valores de 2Θ selecionados a partir de: 3,2+0,2, 6,3±0,2, 9,5±0,2, 12,8+0,2, 14,3±0,2, 18,0 + 0,2, 22,4 + 0,2 e 24,8 + 0,2, em que o padrão de PXRD é aferido a uma temperatura de aproximadamente 25 °C,
Sal do ácido malõnico
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em forma de sal do ácido malónico.
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em forma de sal de hemi-ácido malónico, compreendendo 0,5 moles de ácido para cada mol do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em sal monoidratado de hemi-ácido malónico que compreende um mol de água e 0,5 moles de ácido malónico para cada mol do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, é fornecido o sal monoidratado de hemi-ácido malónico do Exemplo 2 numa sétima forma cristalina aqui designada como "Forma H-l" ou "H-l Forma" do Exemplo 2, sal de hemi-ácido malónico. A
Forma H-l do Exemplo 2, sal de hemi-ácido malónico compreende uma molécula de água e 0,5 molécula de ácido malónico para cada molécula do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, a Forma H-l do sal de hemi-ácido malónico do Exemplo 2 é caracterizada por parâmetros da célula unitária que são aproximadamente iguais aos seguintes:
Dimensões da célula: a ::: 14,73 A b = 6,27 A c = 25,36 Ã α = 90,0° β = 93,8° γ = 90,0°
Grupo espacial: P2:1
Moléculas do Exemplo 2/unidade assimétrica: 2
Volume/número de moléculas na célula unitária = 584 Ã3
Densidade (calculada) = 1,137 g/cm3, em que os parâmetros da célula unitária da Forma H-l são aferidos a uma temperatura de aproximadamente -70 °C.
Em outra forma de realização, a Forma H-l do sal de hemi-ácido malónico do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão simulado de difração de raios-x em pó (PXRD) substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 7 e./ou por um padrão observado de PXRD substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 7.
Em ainda outra forma de realizaçao, a Forma H-l do sal de hemi-ácido malónico do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão de PXRD (Cu Koí λ = 1,5418 Â a uma temperatura de aproximadamente 25 °C) que compreende quatro ou mais, de preferência cinco ou mais valores de 2Θ selecionados a partir de: 3,5+0,2, 7,1+0,2, 12,3±0,2, 13,5±0,2, 15,5±0,2, 17,6+0,2, 19,1+0,2, 20,2+0,2, 20,6+0,2, 21,7+0,2 e 23,8+0,2, em que o padrão de PXRD é aferido a uma temperatura de aproximadamente 25 °C.
Sal do ácido fosfórico
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em forma de sal do ácido fosfórico.
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em sal 1/3 hidratado do ácido fosfórico.
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em forma de sal do ácido fosfórico que compreende 0,67 moles de ácido fosfórico para cada mol do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em sal 1/3 hidratado do ácido fosfórico que compreende 0,33 moles de água e 0,67 moles de ácido fosfórico para cada mol do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, o sal 1/3 hidratado do ácido fosfórico do Exemplo 2 numa oitava forma cristalina aqui designada como "Forma H.33-1" ou "H.33-1 Forma" do Exemplo 2, sal do ácido fosfórico. A Forma H.33-1 do
Exemplo 2, sal do ácido fosfórico compreende 0,33 moléculas de água e 0,67 moléculas de ácido fosfórico para cada molécula do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, a Forma H.33-1 é caracterizada por parâmetros da célula unitária que são aproximadamente iguais aos seguintes:
Dimensões da célula: a = 59,12 Ã b = 6,89 Ã c = 16,62 Ã α = 90,0° β = 94,7° γ = 90,0°
Grupo espacial: C2
Moléculas do Exemplo 2/unidade assimétrica: 3 Volume/número de moléculas na célula unitária = 563 Â3 Densidade (calculada) = 1,181 g/cm3, em que os parâmetros da célula unitária da Forma H.33-1 são aferidos a uma temperatura de aproximadamente -70 °C.
Em outra forma de realização, a Forma H.33-1 do sal 1/3 do ácido fosfórico do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão simulado de difração de raios-x em pó (PXRD) substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 8 e/ou por um padrão observado de PXRD substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 8.
Em ainda outra forma de realização, a Forma H.33-1 do sal 1/3 do ácido fosfórico do Exemplo 2 é caracterizada por um padrão de PXRD (Cu Κα λ = 1,5418 Â a uma temperatura de aproximadamente 25 °C) que compreende quatro ou mais, de preferência cinco ou mais valores de 2Θ selecionados a partir de: 2,9±0,2, 5,9±0,2, 8,8±0,2, 13,9+0,2, 15,8+0,2, 16, / + 0,2, 1/,4 + 0,2, 18,4 + 0,2, 19,4 + 0,2 e 20,4 + 0,2, em que o padrão de PXRD é aferido a uma temperatura de aproximadamente 25 °C.
Sal do ácido R-(+)-mandélico
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em sal do ácido R-(+)-mandélico.
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em forma de monoidrato do ácido R-(+)-mandélico.
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em sal do ácido R-(+)-mandélico que compreende um mol de ácido R-(+)-mandélico para cada mol do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, é fornecido o Exemplo 2 em sal monoidratado do ácido R- ( + )-mandélico que compreende um mol de água e um mol de ácido R-(+)-mandélico para cada mol do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, é fornecido o sal monoidratado de ácido R-(+)-mandélico do Exemplo 2 numa nona forma cristalina aqui designada como "Forma N-l" ou "N-l Forma" do Exemplo 2, sal do ácido R-(+)-mandélico. A Forma N-l do Exemplo 2, sal do ácido R-(+)-mandélico compreende uma molécula de água e uma molécula de ácido R-(+)-mandélico para cada molécula do Exemplo 2.
Em uma forma de realização, a Forma N-l do Exemplo 2, sal do ácido R-(+)-mandélico é caracterizada por parâmetros da célula unitária que são aproximadamente iguais aos seguintes:
Dimensões da célula: a ::: 6,31 A b = 10,03 Á c = 21,79 Á α = 98,2° β = 91,3° γ = 91,7°
Grupo espacial: PI
Moléculas do Exemplo 2/unidade assimétrica: 2 Volume/número de moléculas na célula unitária = 683 Â3 Densidade (calculada) = 1,171 g/'cm3, em que os parâmetros da célula unitária da Forma N-l do Exemplo 2, sal do ácido R-(+)-mandélico são aferidos a uma temperatura de aproximadamente -70 °C.
Em outra forma de realização, a Forma N-l do Exemplo 2, sal do ácido R-(+)-mandélico é caracterizada por um padrão simulado de difração de raios-x em pó (PXRD) substancialmente de acordo com o padrão mostrado na Figura 9 .
Em ainda mais uma forma de realização adicional, a Forma N-l do Exemplo 2, sal do ácido R- ( + ) -mandélico é substancialmente pura.
Em ainda mais outra forma de realização, a Forma N-l do Exemplo 2, sal do ácido R-(+)-mandélico contém pelo menos aproximadamente 90S em peso, de preferência pio menos aproximadamente 950 em peso e mais preferencàlmente pelo menos aproximadamente 990 em peso, com base nopeso da Forma N-l do Exemplo 2, sal do ácido R-(+)-mandélico.
Em ainda outra forma de realização, uma Forma N-l substancialmente pura do Exemplo 2, sal do ácido R-(±)-mandélico tem homogeneidade de fase substancialmente pura com menos de aproximadamente 100 , de preferência msos de aproximadamente 50 e mais preferencialmente menos d aproximadamente 20 da área total do pico do padrãode PXRD aferido experimentalmente, resultante de picos que estão ausentes do padrão simulado de PXRD. Mais preferencialmente, a Forma N-l cristalina substancialmente pura do Exemplo 2, sal do ácido R-(±)-mandélico tem homogeneidade de fase substancialmente pura com menos de aproximadamente 10 da área total do pico do padrãode PXRD aferido experimentalmente, resultante de picos que estão ausentes do padrão simulado de PXRD.
Em outra forma de realização, a forma cristalina do Exemplo 2, sal do ácido R-(+)-mandélico consiste essencialmente na Forma N-l. A forma cristalina dessa forma de realização pode compreender pelo menos aproximadamente 900 em peso, de preferência pelo menos aproximadamete 950 em peso e mais preferencialmente pelo menos aproximadamente 99ó em peso, com base no peso da forma cristalina, Forma N-1 do Exemplo 2, sal do ácido R-(+)-mandélico.
Em ainda outra forma de realização, é fornecida uma composição farmacêutica que compreende a Forma N-l do Exemplo 2, sal do ácido R-(±)-mandélico; e pelo menos um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Em ainda outra forma de realização, uma composição farmacêutica compreende a Forma N-l substancialmente pura do Exemplo 2, sal do ácido R-(+)-mandélico; e pelo menos um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Em ainda mais uma forma de realização adicional, uma quantidade terapeuticamente eficaz da Forma N-l do Exemplo 2, sal do ácido R-(+)-mandélico é combinada com pelo menos um veículo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável para fornecer pelo menos uma composição farmacêutica.
DEFINIÇÕES
As características e vantagens da invenção podem ser mais rapidamente entendidas por aqueles de habilidade comum na especialidade aquando da leitura da descrição detalhada a seguir. Deverá reconhecer-se que, certas características da invenção, descritas acima e abaixo, para fins de clareza, no contexto de formas de realização separadas, podem também ser combinadas para formar uma única forma de realização. Por outro lado, várias características da invenção, descritas, para fins de concisão, no contexto de uma única forma de realização, podem também ser combinadas de modo a formar combinações secundárias destas. As formas de realização aqui identificadas como exemplares ou preferidas têm como finalidade servir de ilustração e não de limitação. A menos que especificado de outra forma neste relatório descritivo, referências feitas no singular podem também incluir o plural. Por exemplo, "um" e "uma" podem referir-se a qualquer um ou a um ou mais de um.
Neste relatório descritivo, a expressão "compostos e/ou os sais dos mesmos" refere-se pelo menos a um composto, pelo menos a um sal dos compostos ou a uma de suas combinações. Por exemplo, compostos da Fórmula (I) e/ou os sais dos mesmos incluem um composto da Fórmula (I); dois compostos da Fórmula (I) ,· um sal de um composto da Fórmula (I) ; um composto da Fórmula (I) e um ou mais sais do composto da Fórmula (I) ; e dois ou mais sais de um composto da Fórmula (I). A menos que indicado de outra forma, pressupõe-se que qualquer átomo com valências não satisfeitas disponha de átomos suficientes de hidrogénio para satisfazer as valências.
Abaixo, estão listadas as definições de vários termos utilizados para descrever a presente invenção. Essas definições aplicam-se aos termos na forma em que são utilizados por todo o relatório descritivo (a menos que sejam de outro modo limitados em casos específicos), seja individualmente ou como parte de um grupo maior.
Por todo o relatório descritivo, os grupos e substituintes dos mesmos podem ser escolhidos pelo perito na especialidade para fornecerem porções e compostos estáveis. A expressão "farmaceuticamente aceitável" é empregue neste relatório descritivo para indicar aqueles compostos, materiais, composições e/ou formas farmacêuticas que são, no âmbito da avaliação médica fundamentada, adequadas à utilização em contacto com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação, comensuradas com uma relação risco/benefício razoável.
Os compostos da Fórmula (I) podem formar sais que estão incluídos também no âmbito desta invenção. A menos que indicado de outra forma, entende-se que referência a um composto da invenção inclua referência a um ou mais de os sais dos mesmos. 0 termo "sal (sais)" indica sais ácidos e/ou básicos formados com ácidos e bases inorgânicas e/ou orgânicas. Adicionalmente, o termo "sal (sais)" pode incluir zwitteriões (sais internos), por exemplo, quando um composto da Fórmula (I) contém uma porção básica, como uma amina ou um anel piridina ou imidizol, e uma porção ácida, como um ácido carboxílico. Os sais farmaceuticamente aceitáveis ^ou seja, nao toxicos, fisiologicamente aceitáveis) são preferidos, como, por exemplo, sais aceitáveis de metais e aminas nos quais o catião não contribua significativamente para a toxicidade ou a atividade biológica do sal. Contudo, outros sais podem ser úteis, por exemplo, nas etapas de isolamento ou purificação, e que podem ser empregues durante a preparação e, assim, são contemplados no âmbito da invenção. Os sais dos compostos da Fórmula (I) podem ser formados, por exemplo, ao reagir um composto da Fórmula (I) com uma quantidade de ácido ou base, tal como uma quantidade equivalente, num meio tal como aquele no qual o sal se precipita ou num meio aquoso seguido por liofilização.
Os sais exemplares de adição de ácidos incluem acetatos (tais como aqueles formados com ácido acético ou ácido tri-haloacético, por exemplo, ácido trifluoroacético), adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzoatos, benzenossulfonatos, bissulfatos, boratos, butiratos, citratos, canforatos, canfossulfonatos, ciclopentanopropionatos, digluconatos, dodecilssulfatos, etanossulfonatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, hemissulfatos, heptanoatos, hexanoatos, cloridratos (formados com ácido clorídrico), bromidratos (formados com brometo de hidrogénio), iodidratos, maleatos (formados com ácido maleico), 2-hidroxietanossulfonatos, lactatos, metanossulfonatos (formados com ácido metanosulfónico), 2-naftalenossulfonatos, nicotinatos, nitratos, oxalatos, pectinatos, persulfatos, 3- fenilpropionatos, fosfatos, picratos, pivalatos, propionates, salicilatos, succinatos, sulfatos (como aqueles formados com ácido sulfúrico), sulfonatos (como aqueles aqui mencionados), tartaratos, tiocianatos, toluenossulfonatos tais como tosilatos, undecanoatos e os semelhantes.
Os sais básicos exemplares incluem sais de amónio, sais de metais alcalinos como os sais de sódio, lítio e potássio; sais de metais alcalinos terrosos como os sais de cálcio e magnésio; sais de bário, zinco e alumínio; sais com bases orgânicas (por exemplo, aminas orgânicas) tais como trialquilaminas, como trietilamina, procaína, dibenzilamina, N-benzil-β-fenetilamina, 1-efenamina, N,Nf-dibenziletileno-diamina, dehidroabietilamina, N-etiIpiperidina, benzilamina, diciclohexilamina ou aminas farmaceuticamente aceitáveis semelhantes e os sais com aminoãcidos como arginina, lisina e os semelhantes. Grupos básicos que contêm azoto podem ser quaternizados com agentes como halogenetos de alquilos inferiores (por exemplo, cloretos, brometos e iodetos de metil, etil, propil e butil), dialquil sulfatos (por exemplo, dimetil, dietil, dibutil e diamil sulfatos), halogenetos de cadeia longa (por exemplo, cloretos, brometos e iodetos de decil, lauril, miristil e estearil), halogenetos arilalquil (por exemplo, brometos de benzil e fenetil) e outros. Os sais preferidos incluem os sais de monocloridrato, hidrogenossulfato, metanossulfato, fosfato ou nitrato.
Os compostos da Fórmula (I) podem ser providos como sólidos amorfos ou sólidos cristalinos. Pode empregar-se liofilização para fornecer os compostos da Fórmula (I) em forma de sólido.
Deve ser entendido ainda que solvatos (por exemplo, hidratos) dos compostos da Fórmula (I) estão também incluídos no âmbito da presente invenção. 0 termo "solvato" significa uma associação física de um composto da Fórmula (I) com uma ou mais moléculas do solvente, seja este orgânico ou inorgânico. Essa associação física inclui ligação ao hidrogénio. Em certos casos, o solvato será capaz de isolamento, por exemplo, quando uma ou mais moléculas do solvente estão incorporadas na rede cristalina do sólido cristalino. "Solvato" abrange tanto solvatos em fase de solução como aqueles que podem ser isolados. Os solvatos exemplares incluem hidratos, solvatos de etanolatos, metanolatos, isopropanolatos, acetonitrilo e solvatos de acetato de etil. Métodos de solvatação são conhecidos na técnica. Várias formas de pró-fármacos são bem conhecidas na técnica e estão descritas em: a) Wermuth, C.G. et al. , The Practice of Medicinal Chemistry, Capítulo 31, Academic Press (1996); b) Bundgaard, H. ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985); c) Bundgaard, H., Capítulo 5, "Design and Application of Prodrugs", Krogsgaard-Larsen, P. et al. , eds., A Textbook of Drug Design and Development, pp. 113 a 191, Harwood Academic Publishers (1991); e d) Testa, B. et al. , Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Wiley-VCH (2003).
Além disso, os compostos da Formula (I) , subsequentemente à preparação dos mesmos, podem ser isolados e purificados para obter uma composição que contém uma quantidade em peso equivalente ou superior a 990 de um composto da Fórmula (I) ("substancialmente pura"), a qual é então utilizada ou formulada como descrito abaixo. Tais compostos "substancialmente puros" da Fórmula (I) são também contemplados como parte da presente invenção. "Composto estável" e "estrutura estável", neste relatório descritivo, indicam um composto que é suficientemente robusto para sobreviver ao isolamento até um grau útil de pureza de uma mistura de reação, e à formulação num agente terapêutico eficaz. A presente invenção destina-se a incorporar compostos estáveis. "Quantidade terapeuticamente eficaz" pretende incluir uma quantidade de um composto da presente invenção isoladamente ou uma quantidade da combinação de compostos reivindicados ou uma quantidade de um composto da presente invenção em combinação com outros ingredientes ativos, eficaz para atuar como agonista ao SlPi, ou eficaz para tratar ou prevenir estados de doença autoimune e/ou inflamatória, como esclerose múltipla e artrite reumatoide.
Neste relatório descritivo, "tratar" ou "tratamento" abrangem o tratamento de um estado de doença num mamífero, especialmente num humano, e incluem: (a) prevenir a ocorrência do estado de doença num mamífero, especialmente, quando tal mamífero é predisposto ao estado de doença, mas que, porém, não tenha sido ainda diagnosticado como portador; (b) inibir o estado de doença, ou seja, suster o desenvolvimento da mesma; e/ou (c) aliviar o estado de doença, ou seja, provocar a regressão do estado de doença.
Os compostos da presente invenção destinam-se a incluir todos os isótopos de átomos ocorridos nos presentes compostos. Isótopos incluem aqueles átomos com o mesmo número atómico, mas com números de massa diferentes. A título de exemplo geral e sem limitação, os isótopos de hidrogénio incluem deutério (D) e trítio (T) . Os isótopos de carbono incluem e 14C. Compostos isotopicamente marcados da invenção podem em geral ser preparados por técnicas convencionais conhecidas por aqueles de habilidade comum na especialidade, ou por processos análogos àqueles aqui descritos, utilizando um reagente apropriado marcado isotopicamente em vez do reagente não marcado do contrário empregue.
Os compostos de acordo com a Fórmula (I) e/ou os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis podem ser administrados por qualquer meio adequado para a afeção a ser tratada e pode depender da necessidade de tratamento sítio-específico ou da quantidade do composto da Fórmula (I) a ser libertada.
Esta invenção também abrange uma classe de composições farmacêuticas que compreendem um composto da Fórmula (I) e/ou os sais do mesmo farmaceuticamente aceitáveis; e um ou mais veículos e/ou diluentes e/ou adjuvantes não tóxicos, farmaceuticamente aceitáveis (coletivamente designados, neste relatório descritivo como materiais "transportadores") e, se desejado, ingredientes ativos. Os compostos da Fórmula (I) podem ser administrados por qualquer via adequada, de preferência na forma de uma composição farmacêutica adaptada para tal via, e numa dose eficaz para o tratamento pretendido. Os compostos e as composições da presente invenção podem, por exemplo, ser administrados por via oral, mucosa ou parentérica incluindo intravascular, intravenosa, intraperitoneal, subcutânea, intramuscular e intraesternal, em formulações de dose unitária que contêm transportadores, adjuvantes e veículos convencionais farmaceuticamente aceitáveis. Por exemplo, o veículo farmacêutico pode conter uma mistura de manitol ou lactose e celulose microcristalina. A mistura pode conter componentes adicionais como um agente lubrificante, por exemplo, estearato de magnésio, e um agente desintegrante, como crospovidona. A mistura transportadora pode ser introduzida numa cápsula gelatinosa ou ser prensada como um comprimido. A composição farmacêutica pode ser administrada como forma farmacêutica oral ou uma infusão, por exemplo.
Para administração oral, a composição farmacêutica pode estar na forma de, por exemplo, comprimido, cápsula, cápsula líquida, suspensão ou líquido. A composição farmacêutica é produzida de preferência na forma de dose unitária que contém uma determinada quantidade do ingrediente ativo. Por exemplo, a composição farmacêutica pode ser fornecida como comprimido ou cápsula contendo uma quantidade de ingrediente ativo na faixa de aproximadamente 0,1 a 1000 mg, de preferência de aproximadamente 0,25 a 250 mg e mais preferencialmente de aproximadamente 0,5 a 100 mg. Uma dose diária adequada para um humano ou outro mamífero pode variar bastante, dependendo da condição do paciente e de outros fatores, mas, pode ser determinada utilizando métodos rotineiros.
Qualquer composição farmacêutica aqui contemplada pode, por exemplo, ser libertada por via oral através de quaisquer preparados orais aceitáveis e adequados. Os preparados orais exemplares incluem, entre outros, comprimidos, pastilhas, drágeas, suspensões aquosas e oleosas, pós ou grânulos dispersáveis, emulsões, cápsulas duras e moles, cápsulas líquidas, xaropes e elixires. As composições farmacêuticas destinadas à administração oral podem ser preparadas de acordo com quaisquer métodos conhecidos na técnica para a fabrico de composições farmacêuticas destinadas à administração oral. A fim de fornecer preparados farmacêuticos de sabor agradável, uma composição farmacêutica de acordo com a invenção pode conter pelo menos um agente selecionado a partir de agentes adoçantes, agentes aromatizantes, agentes corantes, emolientes, antioxidantes e agentes conservantes.
Um comprimido pode, por exemplo, ser preparado misturado pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou pelo menos um de os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis com pelo menos um excipiente não tóxico farmaceuticamente aceitável para a produção de comprimidos. Os excipientes exemplares incluem, entre outros, por exemplo, diluentes inertes, como, por exemplo, carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio e fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegrantes, como, por exemplo, celulose microcristalina, croscarmelose sõdica, amido de milho e ácido algínico; agentes aglutinantes, como, por exemplo, amido, gelatina, polivinilpirrolidona e acacia; e agentes lubrificantes, como, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico e talco. Adicionalmente, um comprimido pode ser não revestido ou revestido por técnicas conhecidas para mascarar o paladar ruim de um fármaco com sabor desagradável, ou para retardar a desintegração e absorção do ingrediente ativo no trato gastrointestinal, sustentando, assim, os efeitos do ingrediente ativo por um período mais longo. Os materiais exemplares solúveis em água para mascarar o sabor incluem, entre outros, hidroxipropilmetilcelulose e hidropropilcelulose. Materiais exemplares retardadores do tempo incluem, entre outros, etilcelulose e acetato butirato de celulose. Cápsulas gelatinosas duras podem, por exemplo, ser preparadas misturando pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou pelo menos um de os sais dos mesmos com pelo menos um diluente sólido inerte, como, por exemplo, carbonato de cálcio,* fosfato de cálcio,* e caulim. Cápsulas gelatinosas moles podem, por exemplo, ser preparadas misturando pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou pelo menos um de os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis com pelo menos um veículo solúvel em água, como, por exemplo, polietilenoglicol; e pelo menos um meio oleoso, como, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida e azeite.
Uma suspensão aquosa pode ser preparada, por exemplo, ao misturar pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou pelo menos um de os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis com pelo menos um excipiente adequado para a fabrico de uma suspensão aquosa. Os excipientes exemplares adequados para a fabrico de uma suspensão aquosa incluem, entre outros, por exemplo, agentes de suspensão, como, por exemplo, carboximetilcelulose sõdica, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, alginato de sódio, ácido algínico, polivinilpirrolidona, goma tragacanta e goma acácia,* agentes dispersantes ou hidratantes, como, por exemplo, um fosfatrdeo natural, por exemplo, lecitina; produtos da condensação de óxido de alquileno com ácidos gordos, como, por exemplo, estearato de polioxietileno; produtos da condensação de óxido de etileno com álcoois alifãticos de cadeia longa, como, por exemplo, heptadecaetileno-oxicetanol; produtos da condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos gordos e hexitol, como, por exemplo, mono-oleato de polioxietileno sorbitol; e produtos da condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, como, por exemplo, mono-oleato de polietileno sorbitana. Uma suspensão aquosa pode também conter pelo menos um conservante, como, por exemplo, p-hidroxibenzoato de etil e n-propil; pelo menos um agente corante; pelo menos um agente aromatizante; e/ou pelo menos um agente adoçante, incluindo, entre outros, por exemplo, sacarose, sacarina e aspartame.
Suspensões oleosas podem, por exemplo, ser preparadas suspendendo pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou pelo menos um de os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis num óleo vegetal, como, por exemplo, óleo de amendoim; azeite; óleo de gergelim; e óleo de coco; ou em óleo mineral, como, por exemplo, parafina líquida. Uma suspensão oleosa pode também conter pelo menos um agente espessante, como, por exemplo, cera de abelha; parafina dura; e álcool cetílico. A fim de fornecer uma suspensão oleosa de sabor agradável, pelo menos um dos agentes adoçantes já descritos acima e/ou pelo menos um agente aromatizante podem ser adicionados à suspensão oleosa. Uma suspensão oleosa pode conter ainda pelo menos um conservante, incluindo, entre outros, por exemplo, um antioxidante, como, por exemplo, hidroxianisol butilado e alfa-tocoferol. Põs e grânulos dispersáveis podem, por exemplo, ser preparados misturando pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou pelo menos um de os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis com pelo menos um agente dispersante e/ou hidratante; pelo menos um agente de suspensão; e/ou pelo menos um conservante. Os agentes dispersantes, agentes hidratantes e agentes de suspensão adequados são como os jã descritos acima. Os conservantes exemplares incluem, entre outros, antioxidantes, por exemplo, ácido ascórbico. Adicionalmente, os pós e grânulos dispersáveis podem também conter pelo menos um excipiente, incluindo, entre outros, por exemplo, agentes adoçantes; agentes aromatizantes; e agentes corantes.
Uma emulsão de pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou pelo menos um de os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis pode, por exemplo, ser preparada como uma emulsão óleo em água. A fase oleosa das emulsões compreendendo compostos da Fórmula (I) pode ser constituída a partir de ingredientes conhecidas de maneira conhecida. A fase oleosa pode ser fornecida, entre outros, por exemplo, por um óleo vegetal, como, por exemplo, azeite e óleo de amendoim; um óleo mineral, como, por exemplo, parafina líquida; e suas misturas. Embora possa compreender simplesmente um emulsificante, a fase pode compreender uma mistura de pelo menos um emulsificante com uma gordura ou um óleo ou com ambos, uma gordura e um óleo. Os agentes emulsificantes adequados incluem, entre outros, por exemplo, fosfatídeos naturais, por exemplo, lecitina do grão de soja; ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, como, por exemplo, mono-oleato de sorbitana; e produtos da condensação de ésteres parciais com óxido de etileno, como, por exemplo, mono-oleato de polioxietileno sorbitana. De preferência, um emulsificante hidrofílico é incluído junto com um emulsificante lipofílico, que atua como estabilizante. Prefere-se também incluir um óleo e uma gordura. Em conjunto, o(s) emulsificante(s) com ou sem estabilizante(s) constitui/constituem a assim chamada cera emulsificante, e a cera junto com o óleo e a gordura constituem a assim chamada base de pomade emulsificante que forma a fase oleosa dispersa das formulações em creme. Uma emulsão pode também conter um agente adoçante, um agente aromatizante, um conservante e/ou um antioxidante. Os emulsificantes e estabilizantes de emulsão adequados para utilização na formulação da presente invenção incluem Tween 60, Span 80, álcool cetoestearílico, álcool miristílico, monoestearato de gliceril, lauril sulfato de sódio, diestearato de gliceril, isoladamente ou com uma cera ou outros materiais bem conhecidos na técnica.
Os compostos da Fórmula (I) e/ou pelo menos um de os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis podem também, por exemplo, ser liberados por via intravenosa, subcutânea e/ou intramuscular através de qualquer forma injetável farmaceuticamente aceitável e adequada. As formas injetáveis exemplares incluem, entre outras, por exemplo, soluções aquosas estéreis compreendendo veículos e solventes adequados, como, por exemplo, água, solução de Ringer e solução isotõnica de cloreto de sódio; microemulsões estéreis óleo em água; e suspensões aquosas ou oleaginosas.
As formulações para administração parentérica podem estar 11a forma de soluções ou suspensões injetáveis estéreis isotónicas não aquosas. Essas soluções e suspensões podem ser preparadas a partir de põs ou grânulos estéreis, utilizando um ou mais dos veículos ou diluentes mencionados para utilização nas formulações de administração oral ou utilizando outros agentes dispersantes ou hidratantes e agentes de suspensão adequados. Os compostos podem ser dissolvidos em água, polietilenoglicol, propilenoglicol, etanol, óleo de milho, óleo de semente de algodão, óleo de amendoim, óleo de gergelim, álcool benzílico, cloreto de sódio, goma tragacanta e/ou vários tampões. Outros adjuvantes e modos de administração bastante e amplamente conhecidos na técnica farmacêutica. 0 ingrediente ativo pode também ser administrado por injeção como uma composição com veículos adequados incluindo solução salina, dextrose ou água, ou com ciclodextrina (ou seja, CAPTISOL®), solubilização cossolvente (ou seja, propilenoglicol) ou solubilização micelar (ou seja, Tween 80). 0 preparado injetável estéril pode também ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente não tóxico, aceitável para via parentérica, por exemplo, uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregues encontram-se água, solução de Ringer e solução isotõnica de cloreto de sódio. Adicionalmente, óleos fixos estéreis são convencionalmente empregues como solvente ou meio de suspensão. Para essa finalidade, qualquer óleo fixo brando pode ser empregue, incluindo mono ou diglicéridos sintéticos. Além disso, ácidos gordos, como ácido oleico, encontram utilidade na preparação de injetáveis.
Uma microemulsão injetável estéril óleo em água pode, por exemplo, ser preparada 1) dissolvendo pelo menos um composto da Fórmula (I) em uma fase oleosa, como, por exemplo, uma mistura de óleo de soja e lecitina; 2) combinando a fase oleosa contendo o composto da Fórmula (I) com uma mistura de água e glicerol; e 3) processando a combinação para formar uma microemulsão.
Uma suspensão aquosa ou oleaginosa estéril pode ser preparada de acordo com métodos já conhecidos na técnica. Por exemplo, uma solução ou suspensão aquosa estéril pode ser preparada com um diluente ou solvente não tóxico aceitável para via parentérica, como, por exemplo, 1,3-butanodiol ,* e uma suspensão oleaginosa estéril pode ser preparada com um solvente ou meio de suspensão não tóxico aceitável, como, por exemplo, óleos fixos estéreis, por exemplo, mono ou diglicéridos sintéticos; e ácidos gordos, como, por exemplo, ácido oleico.
Os transportadores, adjuvantes e veículos farmaceuticamente aceitáveis que podem ser utilizados nas composições farmacêuticas desta invenção incluem, entre outros, trocadores iónicos, alumina, estearato de alumínio, lecitina, sistemas de libertação de fãrmacos autoemulsficantes (SEDDS) como succinato de d-alfa-tocoferol polietilenoglicol 1000, tensioativos utilizados em formas farmacêuticas como Tweens, óleo de rícino polietoxilado como o tensioativo CREMOPHOR® (BASF), ou outras matrizes poliméricas semelhantes para libertação, proteínas séricas, como albumina sérica humana, substâncias tamponizantes como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, misturas de glicêridos parciais de ácidos gordos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, como sulfato de protamina, hidrogenofosfato dissódico, hidrogenofosfato de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polivinilpirrolidona, substâncias à base de celulose, polietilenoglicol, carboximetilcelulose sõdica, poliacrilatos, ceras, polímeros em bloco de polietileno-polioxipropileno, polietilenoglicol e gordura de lã. Ciclodextrinas, como alfa, beta e gama-ciclodextrina, ou derivados quimicamente modificados, como hidroxiaquilciclodextrinas, incluindo 2- e 3-hidroxipropil-ciclodextrinas, ou outros derivados solubilizados podem também ser utilizados vantajosamente para intensificar a libertação de compostos das fórmulas aqui descritas.
Os compostos farmaceuticamente ativos desta invenção podem ser processados de acordo com métodos convencionais da Farmácia para produzir agentes medicinais que podem ser administrados a pacientes, incluindo humanos e outros mamíferos. As composições farmacêuticas podem ser submetidas a operações farmacêuticas convencionais, tais como esterilização, e/ou podem conter adjuvantes convencionais, como conservantes, estabilizantes, agentes hidratantes, emulsificantes, tampões, etc. Comprimidos e pílulas podem ser adicionalmente preparados com revestimentos entéricos. Tais composições podem também compreender adjuvantes, como agentes hidratantes, adoçantes, aromatizantes e perfumantes.
As quantidades de compostos que são administradas e o esquema de administração para tratar uma condição de doença com os compostos e/ou as composições desta invenção dependem de uma variedade de fatores, incluindo a idade, o peso, o sexo, a condição médica individual, o tipo de doença, a gravidade da doença, a via e a frequência de administração e o composto empregue em particular. Assim, o esquema de administração pode variar bastante, mas pode ser determinado rotineiramente utilizando métodos padrão. Uma dose diária de aproximadamente 0,001 a 100 mg/kg de peso corporal, de preferência entre aproximadamente 0,0025 e aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal e mais preferencialmente entre aproximadamente 0,005 e 10 mg/kg de peso corporal pode ser apropriada. A dose diária pode ser administrada em uma a quatro doses ao dia. Outros esquemas de administração incluem uma dose por semana e uma dose por ciclo de dois dias.
Para fins terapêuticos, os compostos ativos desta invenção são normalmente combinados com um ou mais adjuvantes apropriados à via de administração indicada. Se administrados por via oral, os compostos podem ser misturados com lactose, sacarose, pó de amido, ésteres de celulose de ácidos alcanoicos, ésteres de alquil celulose, talco, ácido esteárico, estearato de magnésio, óxido de magnésio, sais de sódio e cálcio de ácidos fosfóricos e sulfúricos, gelatina, goma acácia, alginato de sódio, polivinilpirrolidona e/ou álcool polivinílico, e depois prensados em comprimidos ou encapsulados para administração conveniente. Tais cápsulas ou comprimidos podem conter uma formulação de libertação controlada, pois podem ser fornecidos numa dispersão de composto ativo em hidroxipropilmetilcelulose.
As composições farmacêuticas desta invenção compreendem pelo menos um composto da Fórmula (I) e/ou pelo menos um de os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis e, opcionalmente um agente adicional selecionado a partir de qualquer transportador, adjuvante e veículo farmaceuticamente aceitável. Composições alternativas desta invenção podem compreender um composto da Fórmula (I) aqui descrita e um transportador, adjuvante ou veículo farmaceuticamente aceitável.
UTILIDADE 0 sistema imunitário humano evoluiu para defender o corpo de micro-organismos, vírus e parasitas que podem causar infeção, doença ou morte. Mecanismos reguladores complexos asseguram que os vários componentes celulares do sistema imunitário sejam direcionados contra as substâncias estranhas ou organismos, enquanto não causando dano permanente ou significativo ao indivíduo. Embora os eventos iniciadores não sejam bem entendidos neste momento, nos estados de doença autoimune, o sistema imunitário direciona a sua resposta a órgãos alvo no indivíduo acometido. Diferentes doenças autoimunes são tipicamente caracterizadas pelo órgão alvo ou pelos tecidos afetados predominantes ou iniciais; como a articulação no caso de artrite reumatoide, a glândula tiroide no caso de tiroidite de Hashimoto, o sistema nervoso central no caso de esclerose múltipla, o pâncreas no caso de diabetes tipo I e os intestinos no caso de doença intestinal inflamatória. Assim, foi observado que agentes terapêuticos que atuam sobre o sistema imunitário ou certos tipos de células do sistema imunitário (como linfõcitos B e linfócitos T, células T) podem ter utilidade em mais de uma doença autoimune. É bem reconhecido na técnica, inclusive nas referências da literatura ali citadas, que os recetores de S1P representam alvos bons para uma grande variedade das aplicações terapêuticas, inclusive nas doenças autoimunes. Os recetores de S1P são bons alvos para fãrmacos, pois recetores individuais são específicos para tecido e para resposta. A especificidade tecidual dos recetores de S1P é importante, jã que o desenvolvimento de um agonista ou antagonista seletivo para um recetor localizar a resposta celular a tecidos contendo aquele recetor, limitando efeitos secundários indesejados. A especificidade da resposta dos recetores de S1P é também importante porque permite o desenvolvimento de agonistas ou antagonistas que iniciam ou suprimem certas respostas celulares sem afetar outros processos. Portanto, compostos que atuem sobre alguns membros da família dos recetores de S1P enquanto dispondo de atividade diminuída ou nenhuma em outros membros da família são desejáveis, e prevê-se que proporcionem um efeito terapêutico com perfil melhorado de efeitos secundários (ou seja, redução ou eliminação de efeitos secundários indesejados).
Neste relatório descritivo, o termo "agonista", em referência a SlPi, diz respeito a um agente que exerce efeitos farmacológicos tais como reduzir a motilidade de células T, reduzir o tráfego de células T ou reduzir a saída de células T de tecidos linfoides (Rosen et al., Trends in Immunology, 28:102 (2007)) .
Em virtude da sua atividade em S1P:1 como agonistas, os compostos da presente invenção são agentes imunorreguladores úteis para tratar ou prevenir doenças autoimunes ou inflamatórias crónicas. Os compostos da presente invenção são úteis para suprimir o sistema imunitário em casos em que a imunossupressão é prevista, tais como na rejeição ao transplante de medula óssea, de órgãos ou do transplante, em doenças autoimunes e inflamatórias crónicas, incluindo lúpus eritematoso sistémico, artrite reumatoide, diabetes mellitus tipo I, doença intestinal inflamatória, cirrose biliar, uveíte, esclerose múltipla, doença de Crohn, colite ulcerativa, penfigoide bolhoso, sarcoidose, psoríase, miosite autoimune, granulomatose de Wegener, ictiose, oftalmopatia de Graves e asma.
Mais especificamente, os compostos da presente invenção são úteis para tratar ou prevenir uma doença ou transtorno selecionado a partir do grupo constituído por: transplantes de órgãos ou tecidos, doenças do enxerto contra o hospedeiro, ocasionadas pelo transplante, síndromes autoimunes incluindo artrite reumatoide, artrite idiopãtica juvenil, lúpus eritematoso sistémico, lúpus eritematoso cutâneo (lúpus eritematoso discoide, lúpus eritematoso subagudo) e nefrite lúpica, tiroidite de Hashimoto, esclerose múltipla, miastenia grave, diabetes tipo I, uveíte, uveíte posterior, encefalomielite alérgica, glomerulonefrite, doenças autoimunes pós-infeciosas incluindo febre reumática e glomerulonefrite pós-infeciosa, doenças cutâneas inflamatórias e hiperproliferativas, psoríase, artrite psoriãtica, dermatite atópica, dermatite de contacto, dermatite eczematosa, dermatite seborreica, líquen plano, pênfigo, penfigoide bolhoso, epidermõlise bolhosa, urticãria, angioedemas, vasculite incluindo vasculite associada ao ANCA, arterite das células gigantes, arterite de Takayasu, poliangeíte microscópica, vasculite do sistema nervoso central, síndrome de Churg-Strauss e vasculite reumatoide, eritema, eosinofilia cutânea, acne, alopecia areata, ceratoconjuntive, conjuntivite vernal, uveíte associada com a doença de Behcet, ceratite, ceratite herpética, córnea cónica, distrofia epitelial cornearia, leucoma corneano, pênfigo ocular, úlcera de Mooren, esclerite, oftalmopatia de Graves, síndrome de Vogt-Koyanagi-Harada, sarcoidose, alergia a pólen, doença obstrutiva reversível das vias aéreas, asma brônquica, asma alérgica, asma intrínseca, asma extrínseca, asma provocada por poeira, asma crónica ou inveterada, asma tardia e hiperresponsividade das vias aéreas, bronquite, úlceras gástricas, dano vascular causado por doenças isquémicas e trombose, doenças intestinais isquémicas, doença intestinal inflamatória, enterocolite necrotizante, lesões intestinais associadas a queimaduras térmicas, doenças celíacas, proctite, gastroenterite eosinofílica, mastocitose, doença de Crohn, colite ulcerativa, enxaqueca, rinite, eczema, nefrite intersticial, síndrome de Goodpasture, síndrome hemolítica-urémica, nefropatia diabética, miosite múltipla, síndrome de Guillain-Barre, doença de Meniere, polineurite, neurite múltipla, mononeurite, radiculopatia, hipertireoidismo, doença de Basedow, aplasia pura da série vermelha, anemia aplãsica, anemia hipolãsica, púrpura trombocitopénica idiopática, anemia hemolítica autoimune, agranulocitose, anemia perniciosa, anemia megaloblãsica, eritroplasia, osteoporose, sarcoidose, fibrose pulmonar, pneumonia intersticial idiopática, dermatomiosite, leucodermia vulgar, ictiose vulgar, sensibilidade fotoalérgica, linfoma cutâneo de células T, arteriosclerose, síndrome aórtica, poliarterite nodosa, miocardose, esclerodermia, granuloma de Wegener, síndrome de Sjogren, adipose, fascite eosinofílica, lesões da gengiva, do periodonto, do osso alveolar, da substância óssea dentária, glomerulonefrite, alopecia do padrão masculino ou alopecia senil ao evitar a depilação ou permitindo a germinação capilar e/ou promovendo a geração de cabelos e o crescimento capilar, distrofia muscular, piodermia e síndrome de Sezary, doença de Addison, lesão de isquemia-reperfusão de órgãos que ocorre quando da preservação, transplantes ou doença isquémica, choque provocado por endotoxinas, colite pseudomembranosa, colite causada por fãrmaco ou radiação, insuficiência renal aguda isquémica, insuficiência renal crónica, toxinose causada por baixo nível pulmonar de oxigénio ou fármacos, cancro pulmonar, enfisema pulmonar, catarata, siderose, retinite pigmentosa, degeneração macular senil, cicatrização vítrea, queimadura na córnea por substâncias alcalinas, dermatite eritematosa multiforme, dermatite linear bolhosa por IgA e dermatite por cimento, gengivite, periodontite, sepse, pancreatite, doenças causadas pela poluição ambiental, envelhecimento, carcinogénese, metástase de carcinoma e hipobaropatia, doença causada pela libertação de histamina ou leucotrieno-C4, doença de Behcet, hepatite autoimune, cirrose biliar primária, colangite esclerosante, ressecção hepática parcial, necrose hepática aguda, necrose causada por toxina, hepatite virai, choque ou anóxia, hepatite pelo vírus B, hepatite não A/não B, cirrose, cirrose alcoólica, insuficiência hepática, insuficiência hepática fulminante, insuficiência hepática de aparecimento tardio, insuficiência hepática "aguda sobre crónica", reforço de efeito quimioterápico, infeção pelo citomegalovírus, infeção pelo HCMV, AIDS, cancro, demência senil, trauma, dor neuropãtica, infeção bacteriana crónica, trombocitopenia, nefropatia por IgA, glomerulonefrite mesângio-proliferativa, doença relacionada a IgG4, espondilite anquilosante e policondrite recividante. Artrite idiopática juvenil inclui oligoartrite-artrite idiopática de aparecimento juvenil, poliartrite-artrite idiopática de aparecimento juvenil, artrite sistémica idiopática de aparecimento juvenil, artrite psoriática juvenil e artrite idiopática juvenil relacionada à entesite.
Uma forma de realização fornece os compostos da Fórmula (I), ou os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis, para utilização em terapia no tratamento de doenças autoimunes e/ou inflamatórias. Em outra forma de realização, é fornecida a utilização dos compostos da Fórmula (I) , ou dos sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis, no fabrico de um medicamento para o tratamento ou a profilaxia de doença autoimune e/ou inflamatória. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser empregue nessas formas de realização. De preferência, nessas formas de realização, as doenças autoimunes e inflamatórias são selecionadas a partir de esclerose múltipla, artrite reumatoide, doença intestinal inflamatória (inclusive doença de Crohn e colite ulcerativa) , psoríase, e como agente para prevenir a rejeição de órgãos transplantados.
Em outra forma de realização, é fornecido pelo menos um composto da Fórmula (I) ou o sal do mesmo farmaceuticamente aceitável para utilização no tratamento de uma doença vascular. Outra forma de realização fornece os compostos da Fórmula (I), ou os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis, para a utilização em terapia no tratamento de doença vascular. Em outra forma de realização, é fornecida a utilização dos compostos da Fórmula (I), ou dos sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis, no fabrico de um medicamento para o tratamento de doença vascular. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser empregue nessas formas de realização. De preferência, nessas formas de realização, a doença vascular é selecionada a partir de aterosclerose e lesão de isquemia-reperfusão.
Em outra forma de realização, é fornecido pelo menos um composto da Fórmula (I) ou o sal do mesmo farmaceuticamente aceitável para utilização no tratamento de doença inflamatória do intestino. Outra forma de realização fornece os compostos da Fórmula (I), ou os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis, para utilização em terapia no tratamento de doença intestinal inflamatória. Em outra forma de realização, é fornecida a utilização dos compostos da Fórmula (I) , ou dos sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis, no fabrico de um medicamento para o tratamento de doença intestinal inflamatória. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser empregue nessas formas de realização. De preferência, nessas formas de realização, a doença intestinal inflamatória é selecionada a partir de doença de Crohn, colite ulcerativa, colite colagenosa, colite linfocítica, colite isquémica, colite de derivação, doença de Behçet e colite indeterminada.
Em outra forma de realização, é fornecido pelo menos um composto da Fórmula (I) ou o sal do mesmo farmaceuticamente aceitável para utilização no tratamento de lúpus. Outra forma de realização fornece os compostos da Fórmula (I), ou os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis, para utilização em terapia no tratamento de lúpus. Em outra forma de realização, é fornecida a utilização dos compostos da Fórmula (I), ou dos sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis, no fabrico de um medicamento para o tratamento de lúpus. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser empregue nessas formas de realização. Lúpus inclui lúpus eritematoso sistémico, lúpus eritematoso cutâneo, lúpus eritematoso discoide, lúpus eritematoso subagudo e nefrite lúpica.
Em outra forma de realização, é fornecido pelo menos um composto da Fórmula (I) ou o sal do mesmo farmaceuticamente aceitável para utilização no tratamento de esclerose múltipla. Outra forma de realização fornece os compostos da Fórmula (I) , ou os sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis, para utilização em terapia no tratamento de esclerose múltipla. Em outra forma de realização, é fornecida a utilização dos compostos da Fórmula (I) , ou dos sais dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis, no fabrico de um medicamento para o tratamento de esclerose múltipla. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser empregue nessas formas de realização. De preferência, nessas formas de realização, a esclerose múltipla inclui esclerose múltipla remitente-recidivante, esclerose múltipla primária progressiva, esclerose múltipla secundária progressiva e esclerose múltipla progressiva recidivante.
Ao tratar afeções associadas a S1P1, os compostos da Fórmula (I) podem ser administrados isoladamente ou combinados entre si e/ou com outros agentes terapêuticos adequados úteis no tratamento de tais condições. Consequentemente, uma "quantidade terapeuticamente eficaz" destina-se também a incluir uma quantidade da combinação de compostos reivindicados que seja eficaz para atuar como um agonista do recetor S1P1. A combinação de compostos é de preferência sinergética. A sinergia, como descrita, por exemplo, por Chou et al. , Adv. Enzyme Regul., 22:27-55 (1984), ocorre quando o efeito dos compostos, ao serem administrados em combinação, é maior do que o efeito aditivo dos compostos quando administrados isoladamente ou como agente único. Em geral, um efeito sinérgico é demonstrado mais nitidamente a concentrações dos compostos abaixo da ideal. A sinergia pode ser em termos de citotoxicidade menor, eficácia aumentada ou algum outro efeito benéfico da combinação em comparação aos componentes individuais.
Os exemplos de tais outros agentes terapêuticos incluem corticosteroides ou glicocorticoides como dexametasona, metilprednisolona, prednisolona e prednisona; inibidores de PDE4 como rolipram, cilomilaste, roflumilaste e oglemilaste; fármacos anti-inflamatórios supressores de citocinas (CSAIDs) e inibidores de p38 quinase, [1,2-A]quinoxalinas 4-imidazo substituídas como descritas na Patente U.S. N° 4 200 750; anticorpos ou proteínas de fusão direcionados contra moléculas da superfície celular como CD2, CD3, CD4, CDS, CD2 0 tais como RITUXAN®, CD2 5, CD3 0, CD4 0, CD6 9, CD8 0 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90, CTLA, por exemplo, abatacepte (ORENCIA®), belatacepte ou seus ligantes incluindo CD154 (GP39 ou CD40L); anticorpos contra, proteínas de fusão ou recetores solúveis de citocinas ou fatores de crescimento humanos, por exemplo, TNF como, infliximabe (REMICADE®), etanercepte (Ernbrel), adalimumabe (HUMIRA®), LT, 11-1 como anakinra (KINERET®) (um antagonista do recetor de IL-1), IL-2, IL-4, IL-5, II- 6, como CNTO 328 (um anticorpo quimérico anti-IL-6) , 11-7, 11-8, 11-12, 11-15, 11-16, 11-17, 11-21, 11-23 como
Ustequinumabe (um anticorpo monoclonal ant.i-IL-12/23 humano) e interferões como interferon beta la (AVONEX®, REBIF®), interferon beta lb (BETASERON®); antagonistas do recetor de integrinas como TYSABRI®; agentes poliméricos como acetato de glatirâmero (COPAXONE®); sulfassalazina, mesalamina, hidroxicloroquina, fármacos anti-inflamatórios não esteroidais (NSAIDs) como salicilatos incluindo aspirina, salsalato e salicilato de magnésio, e não salicilatos como ibuprofeno, naproxeno, meloxicam, celecoxibe e rofecoxibe; agentes antivirais como abacavir; agentes antiproliferativos como metotrexato, mercaptopurina, leflunomida, ciclosporina, micofenololato, FK506 (tacrolimo, PROGRAF®); fármacos citotóxicos como azatioprina e ciclofosfamida; inibidores da translocação nuclear, como as desoxiespergualina (DSG); produtos contendo ouro como auronofina; penicilamina e rapamicina (sirolimo ou RAPAMUNE®) ou seus derivados.
Os outros agentes terapêuticos acima, quando empregues em combinação com os compostos da presente invenção, podem ser utilizados, por exemplo, naquelas quantidades indicadas no Physicians' Desk Reference (PDR) ou de outra forma como determinado pelo perito na especialidade. Tais outros agentes terapêuticos podem ser administrados antes, simultaneamente ou após a administração dos compostos da invenção.
EXEMPLOS A invenção é definida mais detalhadamente nos Exemplos a seguir. Deve ser entendido que os Exemplos são fornecidos a título de ilustração somente. A partir da descrição precedente e dos Exemplos, o perito na especialidade pode averiguar as características essenciais da invenção, e sem, contudo, se desviar do seu âmbito, pode efetuar várias mudanças e modificações para adaptar a invenção a vários usos e condições. Como resultado, a invenção não é limitada pelos exemplos ilustrativos apresentados abaixo, mas, em vez disso, é definida pelas reivindicações anexas que a acompanham.
Abreviações
Ac acetil aq. aquoso
Bn benzi1
Bu butil
Boc terc-butoxicarbonil CV Volumes da coluna DCM diclorometano DEA dietilamina DMA N,N-dimetilacetamida DMF dimetilformamida DM PU 1,3-dimetil-3,4,5,6 -tetra-hidro- 2(1H)-pirimidinona DMSO dimetilssulfóxido
EtOAc acetato de etil
Et et.il
Et3N trietilamina
EtOH etanol H ou H2 hidrogénio h hora(s) hex hexano Ϊ i 30 HOAc ácido acético HPLC Cromatografia líquida de alta eficiência LC Cromatografia líquida LDA di-isopropilamida da litio
LiHMDS bis(trimetilsilil) amida de litio M molar mM milimolar
Me metil
MeCN acetonitrilo
MeOH metanol MHz megahertz min. minuto(s) M11 (M+H)1 MS Espectrometria de massa n ou N normal nM nanomolar NMP N-metilpirrolidina
Pd/C paládio sustentado em carbono
Pd2 (dba)3 tris-(dibenzilidenoacetona)dipalãdio
Ph fenil
Pr propil PSI libras por polegada quadrada R-BINAP (R)-(±)-2,2'-bis(difenilfosfino)- 1,1'-binaftil RT ou tempo de ret. tempo de retenção sat. saturado S-BINAP (S) - (-)-2,2'-bis(difenilfosfino)- 1,1'-binaftil SFC Cromatografia em fluido supercrítico TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano
Condições de HPLC:
Condição C: Coluna: YMC COMBI SCREEN® S5 50 x 4,6 mm (Gradiente linear do Solvente B de 0 para 100% durante 4 minutos, depois 1-4 minutos de permanência em B 100%; Solvente A = água 90%/MeOH 10%/ H3P04, 0,2%; Solvente B =
MeOH 90%/água 10%/ H3P04 0,2%. Vazão: 4 mL/minuto; Produtos detetados a 220 nm.
Condição G: Coluna: Waters Acquity BEH C18 2,1 x 50 mm 1,7 μιη; Gradiente linear do Solvente B de 0 a 100o durante 3 minutos, então 0,75 minutos de permanência em B 100Ó; Vazão: 1,11 mL/minuto; Solvente A: acetonitrilo: água 5:95 com acetato de amónio 10 mM; Solvente B: acetonitrilo:água 95:5 com acetato de amónio 10 mM; Temperatura = 50 °C; Produtos detetados no comprimento de onda de 220 nm.
Condição H: Coluna: SunFire C18, (150 x 3,0 mm), 3,5
μιη; Gradiente linear do Solvente B de 10 para 10 06 durante 25 minutos, depois 5 minutos de permanência em B 100Ó; Vazão: 1 mL/minuto; Tampão: TFA 0,5ó, em água com pH ajustado para 2,5 utilizando amónia diluída; Solvente A: Tampão: acetonitrilo (95:5); Solvente B: Tampão: acetonitrilo (5:95); Produtos detetados a 220 nm.
Condição I: Coluna: Waters Acquity SD BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas 1,7 pm; Fase móvel A: H20 1006 com TFA 0,05ó; Fase móvel B: acetonitrilo 100ó com TFA 0,05ó; Temperatura: 50 °C; gradiente de 98:2 para 2:98 (Aó:Bó) durante 1 minuto e permanência em 2:98 por 0,5 minutos; Vazão: 0,800 mL/minuto. Produtos detetados a 220 nm.
Condição J: Coluna: CHROMOLITH® SpeedROD (4,6 x 50 mm); Gradiente linear do Solvente B de 0 para 100o durante 4 minutos com 1 minuto de permanência em B 100Ó; Solvente A: MeOH 10Õ, H20 90Ó, TFA 0,1Ó; Solvente B: MeOH 90Ó, H20 10Ó, TFA 0,ló; Vazão: 4 mL/minuto; Produtos detetados a 220 nm.
Intermediário 1 l-amino-3-(4-bromofenil)ciclopentanocarboxilato de
(1-1) Intermediário IA: (S)-3-(4-Bromofenil)ciclopentanona (IR,3S)-metil
(I-1A)
Uma solução de ácido 4-bromofenilborónico (20 g, 100 mmol) em 1,4-dioxano (120 mL) em um balão de 500 mL foi purgada com azoto por 5 minutos. S-BINAP (0,992 g, 1,593 mmol) e tetrafluoroborato de bis(norbornadieno)ródio (I) (0,559 g, 1,494 mmol) foram adicionados sequencialmente à solução sob uma pressão positiva de azoto. Após 2 horas de agitação à temperatura ambiente, adicionou-se água (20 mL) seguida por ciclopent-2-enona (8,06 mL, 100 mmol) e Et3N (13,88 mL, 100 mmol). A mistura foi deixada agitar à temperatura ambiente por 16 horas. Os sólidos escuros resultantes foram removidos por filtração, e o filtrado foi despejado em 250 mL de acetato de etil. A solução foi lavada duas vezes com água e a camada orgânica foi concentrada. 0 resíduo foi purificado por cromatografia ultrarrápida em coluna (separado em dois lotes, cada corrida em uma coluna com 330 g de sílica, acetato de etil 00 a 250 em hexano) para fornecer 12,1 gramas de XS3-(4-bromofenil) ciclopentanona. A pureza por HPLC era >980 e a análise por HPLC quiral indicou aproximadamente 900 ee. 0 material foi adicionado ainda mais sob as condições de SFC Quiral descritas abaixo. Detalhes experimentais:
Instrumento: Berger SFC MGIII; Condições preparativas:
Coluna: CHIRALPAK® AD-H 25 x 5 cm, 5 μπί; Temperatura da coluna: 40 °C; Vazão: 200 mL/minuto; Fase móvel: C02/Me0H = 80/20; Comprimento de onda do detetor: 225 nm; Volume de injeção: 1,0 mL; Preparação de amostra: 12,1 g em 210 mL de MeOH (Cone. 60 mg/mL); Condições analíticas: Coluna: CHIRALPAK® AD 25 x 0,46 cm, 10 pm; Temperatura da coluna: 40 °C; Vazão: 2,0 min; Fase móvel: C02/Me0H = 70/30;
Comprimento de onda do detetor: 220 nm; Volume de injeção: 5 pL. 0 enantiómero desejado (isómero principal) foi isolado e denominado as "PK2" com base na ordem de eluição. A pureza enantiomérica determinada para o isómero isolado era superior a 99,60 em 0 de área SFC/UV a 220 nm. Deps da evaporação, 105 gramas do enantiõmero desejado foram recuperados. Tempo de retenção na HPLC = LC/MS Μ*1 239/241. XH NMR (400 MHz, CD30D) δ ppm 7,43-7,51 (2 H, m) , 7,10-7,19 (2 H, m) , 3,32-3,46 (1 Η, m) , 2,67 (1 Η, dd, 0=18,27; 7,48 Hz), 2,39-2,54 (2 Η, m), 2,23-2,39 (2 Η, m), 1,97 (1 Η, ddd, J=12,98; 11,00; 9,02 Hz).
Intermediário IB: (7S)- 7 -(4-Bromofenil)-1,3 - diazaspiro[4.4]nonano-2,4-diona
(I-1B)
Utilizou-se, no total, 9,8 g de (S)-3-(4-bromofenil)ciclopentanona, divididos em 2 lotes, cada um contendo 4,9 g. Os dois lotes foram processados sob condições idênticas às descritas abaixo. A uma mistura de (S)-3 -(4-bromofenil)ciclopentanona (I-1A, 4,9 g, 20,49 mmol) e cianeto de potássio (1,935 g, 29,7 mmol) em EtOH (40 mL) e água (20 mL) num vaso de pressão em vidro, adicionou-se carbonato de amónio (4,92 g, 51,2 mmol) . O vaso de reação foi fechado com vedação e colocado num banho de óleo aquecido a 80 °C por 24 horas, resultando na formação de um sólido branco. Após arrefecimento do vaso de reação num banho gelado, o vaso foi aberto e 30 mL de água foram adicionados, resultando na formação de sólidos adicionais. Os sólidos foram recolhidos por filtração, lavados duas vezes com 5 mL de água e, depois, secos sob alto vácuo. Os dois lotes foram combinados para fornecer 13,9 g de (7S)-7-(4-bromofenil)-1,3-diazaspiro[4.4]nonano-2,4-diona) que foram utilizados para reações subsequentes sem purificação adicional. Tempo de retenção em HPLC = 0,82 minutos (Condição G) LC/MS M±Na = 331, 2M±h = 619.
Intermediário 1C: Ácido (3S)-l-Amino-3-(4- bromofenil)ciclopentanocarboxílico
(I-1C) A (7S)- 7-(4-bromofenil)-l,3-diazaspiro[4.4]nonano-2,4 -diona (I-1B, 13.9 g, 45,0 mmol) em 1,4-dioxano (40 mL) em um balão de fundo redondo, adicionou-se NaOH aquoso (2N, 100 mL, 200 mmol) . A mistura foi aquecida para 95 °C e agitada por 24 horas. Acrescentou-se mais NaOH (25 mL, 50 mmol), e o aquecimento prosseguiu por outros dois dias. A solução foi arrefecida com banho gelado, neutralizada com HC1 5N para aproximadamente pH 7, resultando na formação de um precipitado branco. Os sólidos foram recolhidos por filtração e secos sob alto vácuo por 2 dias para fornecer 14 g de ácido (3S)-l-amino-3-(4- bromofenil)ciclopentanocarboxílico em forma de sólido branco que foi utilizado tal e qual para a etapa subsequente sem purificação adicional. Tempo de retenção em HPLC = 0,64 minutos (Condição G) LC/MS M±L = 284/ 286. Intermediário 1D: l-amino-3-(4- bromofenil)ciclopentanocarboxilato de (3S)-metil
(I-1D) A uma mistura heterogénea de ácido (3S)-l-amino-3-(4-bromofenil)ciclopentanocarboxílico (I-1C, 14 g, 49,3 mmol) em MeOH (250 mL), adicionou-se cloreto de tionil (36,0 mL, 4 93 mmol) gota a gota durante um período de 2 0 minutos à temperatura ambiente através de um funil adicional (exotérmico). A mistura de reação foi colocada num banho de óleo e aquecida a 70 °C por 4 horas. 0 solvente foi removido sob vácuo, sendo o resíduo dissolvido em acetato de etil (200 mL) e lavado duas vezes com NaOH IN. A camada orgânica foi então seca com Na2S04 e concentrada para fornecer 10,8 g de 1-amino-3- (4- bromofenil)ciclopentanocarboxilato de(3S)-metil. Tempo de retenção em HPLC = 0,68 minutos (Condição G) ; LC/MS M±L = 298/300.
Intermediário 1: l-amino-3-(4-bromofenil) ciclopentanocarboxilato de (IR,3S)-metil
Pico 2 (SFC) Pico 1: (SFC) A mistura de diastereoisómeros (I-1D, 9,5 g) foi separada por SFC Quiral. A designação estereoquímica absoluta do Intermediário 1 e de seu diastereoisõmero foi previamente descrita (Wallace, G.A. et al. , J. Org. Chem., 74:4886-4889 (2009)). Detalhes experimentais: Instrumento:
Preparativa: Thar SFC350; Analítica: SFC analítica Berger; Condições preparativas: Coluna: Lux-Cellulose-4 25 x 3 cm, 5 μιη; Temperatura da coluna: 3 5 °C; Vazão: 2 00 mL/minuto; Fase móvel: C02/ (MeOH com DEA 0,10 ) = 87/13; Comprimento de onda do detetor: 220 nm; Volume de injeção: 0,6 mL; Preparação de amostra: 9,5 g em 400 mL de MeOH (Cone. 23,7 mg/mL). Condições analíticas: Coluna: Lux-Cellulose-4 25 x 0,4 6 cm, 5 μπί; Temperatura da coluna. 3 5 °C; Vazão: 3 mL/minuto; Fase móvel: C02/ (MeOH com DEA 0,10 ) = 85/15;
Comprimento de onda do detetor: 220 nm; Volume de injeção: 5 pL.
Intermediário 1: Pico 2: 4,06 g; tempo de retenção = 6,64 minutos nas condições analíticas acima de SFC quiral. Pureza ótica: 98.20 ; LC/MS Pt = 298/300; Pico 1: 3,96 g; tempo de retenção = 5,47 minutos nas condições analíticas acima de SFC quiral. Pureza ótica: 99,40 .
Preparação alternativo: Sal de HC1 do Intermediário 1
(I-1, sal de HC1)
Uma solução de ácido (3S)-l-amino-3-(4- bromofenil)ciclopentanocarboxílico (10,2 g, 35,9 mmol) em MeOH (100 mL) foi arrefecida num banho gelado, seguido pela adição de S0C12 (15,72 mL, 215 mmol) gota a gota. Depois de concluída a adição, a solução foi submetida ao refluxo por 3 horas, quando então se determinou por HPLC que a reação se havia concluído. A solução foi concentrada para remover o metanol e fornecer um sólido. 0 sólido foi levado a 50 mL de H20 30 em EtOAc e agitado bem por 30 minutos. 0 solid branco formado foi recolhido por filtração. 0 sólido branco húmido foi levado a 50 mL de H20 40 em 1,2-dimetoxietano e aquecido para 50 °C por 3 horas e depois agitado à temperatura ambiente durante a noite. 0 sólido branco resultante foi recolhido por filtração e seco para fornecer cloridrato do l-amino-3-(4- bromofenil)ciclopentanocarboxilato de (IR,3S)-metil (3,5 g, 10,35 mmol) . Tempo de retenção em HPLC = 6,6 minutos (Condição H) LC/MS M11 = 298/ 300. ΧΗ NMR (400 MHz, DMS0-d6) δ 8,95 (br. s,, 3H) 7,50-7,53 (m, 2H), 7,35-7,37 (m, 2H), 3,81 (s, 3H) 3,17-3,28 im, 1H), 2,57 (dd, <J = 14, 7 Hz, 1H), 2,0-2,28 (m, 5H).
Intermediário 2
(1-2) Intermediário 2A: (R)-3-(4-Bromofenil)ciclopentanona l-amino-3-(4-bromofenil)ciclopentanocarboxilato de (1R,3R)-metil
(I-2A)
Uma solução de ácido 4-bromofenilborónico (20 g, 100 mmol) em 1,4-dioxano (120 mL) foi purgada com azoto por 10 minutos. (R)-ΒΙΝΆΡ (0,992 g, 1,593 mmol) e tetrafluoroborato de bis(norbornadieno) ródio (I) (0,559 g, 1,494 mmol) foram adicionados sequencialmente, e a suspensão foi sonicada por 5 minutos. A mistura foi agitada por 20 minutos. Adicionou-se água (20 mL) , e a mistura de reação tornou-se homogénea. Depois de 10 minutos, ciclopent-2-enona (8,06 mL, 100 mmol) foi adicionada, e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A análise por HPLC e LCMS indicou que a reação havia prosseguido, mas que havia mais material de partida do que produto. A mistura de reação foi filtrada através de uma camada de CELITE®, e o CELITE® foi lavado com acetato de etil (100 mL) . 0 filtrado foi diluído com acetato de etil adicional (150 mL) , lavado com água (2x) , lavado com salmoura e seco com sulfato de sódio anidro. A mistura do produto foi purificada por cromatografia ultrarrápida em sílica-gel utilizando uma mistura de acetato de etil e hexano para fornecer (R)-3-(4-
bromofenil)ciclopentanona (6,09 g, 25,5 mmol) em forma de sólido branco. 0 produto era 980 puro por HPLC comtempo de retenção = 2,11 minutos (Condição J) . LC/MS IVP* = 241 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,57-7,39 (m, 2H), 7,22-7,06 (m, 2H) , 3,39 (ddd, J=10,9; 6,8; 4,1 Hz, 1H) , 2,67 (dd, J = 18,2; /,4 Hz, 1H), 2,57-2,38 (m, 2H), 2,38-2,21 (m, 2H), 1,99-1,85 (m, 1H). A análise por HPLC quiral indicou que o composto era 90-950 enantiomericamente puro. 0 composto (6.03 g) foi purificado mais por SFC quiral utilizando as condições listadas abaixo. 0 enantiómero desejado foi isolado e denominado como "PK1" na ordem de eluição. A pureza enantiomérica determinada do isómero isolado era superior a 9 9,90 em 0 de área de SFC/UV a 22 0 nm. 5,4 5 gr amasio enantiómero desejado foram recuperados após a concentração. Detalhes experimentais: Instrumento: Berger SFC MGIII;
Condições preparativas; Coluna: CHIRALPAK® AD-H 25 x 3 cm, 5 pm; Temperatura da coluna: 40 °C; Vazão: 180 mL/minuto; Fase móvel: C02/Me0H = 87/13; Comprimento de onda do detetor: 225 nm; Volume de injeção: 0,5 mL; Preparação de amostra: 6,03 g em 100 mL de MeOH (Cone, 6 0 mg/mL) .
Condições analíticas: Coluna: CHIRALPAK® AD 25 x 0,46 cm, 10 μιτί; Temperatura da coluna: 40 °C; Vazão: 2,0 min,; Fase móvel: C02/Me0H = 70/30; Comprimento de onda do detetor: 220 nm; Volume de injeção: 5 pL.
Intermediário 2B: (7R)-7 -(4-Bromofenil)-1,3 - diazaspiro[4,4]nonano-2,4-diona
(I-2B) A uma mistura de (R)-3 -(4-bromofenil)ciclopentanona (I-2A, 5,4 g, 22,58 mmol) e cianeto de potássio (2,132 g, 32,7 mmol) em EtOH (40 mL) e água (20 mL) num vaso de pressão em vidro, adicionou-se carbonato de amónio (5,42 g, 56,5 mmol) , O vaso de reação foi fechado com vedação e colocado num banho de óleo aquecido a 80 °C por 20 horas. Uma grande quantidade de sólido branco em fluxo livre formou-se na solução de cor amarelo claro. A análise por LCMS indicou material de partida restante, de modo que a reação foi continuada por 24 horas adicionais. A conversão era incompleta, portanto, elevou-se a temperatura do banho de óleo para 120 °C, 0 sólido branco dissolveu-se completamente na temperatura mais alta. Depois de 3 horas, a solução foi arrefecida para a temperatura ambiente. A solução foi arrefecida mais num banho gelado, adicionou-se água (30 mL) e o sólido branco resultante foi recolhido por filtração, lavado com água, seco ao ar, depois colocado sob alto vácuo para fornecer o composto alvo (6,9 g, 22,32 mmol) que foi utilizado para reação subsequente sem purificação adicional. Tempo de retenção em HPLC = 0,81 minutos (Condição G) ; LC/MS M!l = 30S/ 311; 2M±H = 61S. Intermediário 2C: Ácido (3R)-l-Amino-3-(4- bromofenil)ciclopentanocarboxílico
(I-2C)
Uma solução de (7R)-7-(4-bromofenil)-l,3- diazaspiro[4.4]nonano-2,4-diona (I-2B, 6,80 g, 22 mmol) em dioxano (20 mL) e NaOH (2N aq) (12 0 mL, 24 0 mmol) foi aquecida em banho de óleo definido para 95 °C, A solução clara resultante de cor amarelo claro foi deixada agitar durante o final de semana. A solução foi arrefecida num banho gelado e neutralizada para aproximadamente pH 7 com HC1 6 N resultando na formação de um precipitado. Os sólidos foram recolhidos e deixados ao ar para secarem durante a noite. 0 sólido branco foi transformado em pasta com etanol quente (-100 mL) , novamente recolhido por filtração, o sólido foi seco ao ar e colocado sob alto vácuo (5,8 g, 20,41 mmol). Tempo de retenção em HPLC = 0,64 minutos (Condição G) ; LC/MS M±L = 284/ 286. LH NMR (500 MHz, metanol-d4) δ 7,52-7,38 (m, 2H) , 7,31-7,17 (m, 2H) , 3,55- 3,40 (m, 1H) , 2,68 (dd, J=13,3; 6,7 Hz, 1H de diastereoisómero único), 2,58-2,39 (m, 1H) , 2,26-2,15 (m, 1H), 2,10-1,98 (m, 1H), 1,98-1,81 (m, 1H), 1,70 (dd, J=13,2; 11,8 Hz, 1H de diastereoisómero único). Intermediário 2D: l-amino-3-(4-bromofenil) ciclopentanocarboxilato de (3R)-metil
(I - 2D)
Num balão de fundo redondo de 500 mL contendo uma barra de agitação, ácido (3R)-l-amino-3-(4-bromofenil) ciclopentanocarboxílico (I-2C, 5,4 g, 19,00 mmol) foi suspenso em metanol (100 mL) para fornecer uma pasta branca. Um funil de gotejamento foi carregado com cloreto de tionil (13,87 mL, 190 mmol) e o reagente foi adicionado gota a gota a uma taxa na qual a mistura não atingisse a temperatura de refluxo. Depois de concluída a adição, a solução leitosa amarela clara foi colocada num banho de óleo definido para 70 °C, e um condensador de refluxo arrefecido a ar foi anexado. A solução foi aquecida por diversas horas e depois deixada resfriar para a temperatura ambiente durante a noite. 0 solvente foi evaporado sob vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em acetato de etil, lavado com NaOH IN (aq) , lavado com água, depois seco com MgS04 antes de ser filtrado e concentrado. 0 sólido amarelo resultante foi transformado em pasta com acetato de etil morno, acompanhado por sonicação e depois filtrado. 0 sólido foi seco ao ar e colocado sob vácuo, e o filtrado foi evaporado para fornecer o Sólido 1: sólido branco, 4,28 g. LCMS mostra >98B de AP. 0 filtrado foi evaporado para fornecer um sólido amarelo (1,89 g) . 0 sólido proveniente do filtrado foi transformado em pasta com uma quantidade mínima de acetato de etil quente, acompanhado por sonicação, depois arrefecido (banho gelado) e filtrado a frio. 0 sólido foi seco ao ar e colocado sob vácuo para fornecer o Sólido 2: 1,44 g de sólido branco. Sólidos combinados (5,7 g).
Intermediário 2: 1-amino-3- (4- bromofenil)ciclopentanocarboxilato de (IR,3R)-metil
Pico 1 (BFC) Π-2) Pico 2 (SFC)
Os sólidos combinados de i-amino-3-(4- bromofenil)ciclopentanocarboxilato de (3R)-metil (I-2D, 4 g) foram separados utilizando separação por SFC quiral dos diastereoisómeros. A designação estereoquímica absoluta do
Intermediário 2 e de seu diastereoisómero foi previamente descrita (Wallace, G.A. et al. , J. Organic Chem., 74:4886- 4889 (2009)). Detalhes experimentais: Instrumento:
Preparativa: Thar SFC350; Analítica: MDS analítica Thar. Condições preparativas: Coluna: CHIRALPAK® AD-H 25 x 5 cm, 5 pm; Temperatura da coluna: 35 °C; Vazão: 300 mL/minuto; Fase móvel: C02/ (MeOH com DEA 0,1%) = 82/18; Comprimento de onda do detetor: 230 nm; Volume de injeção: 0,4-0,5 mL; Preparação de amostra: 4 g em 120 mL de MeOH (Cone. 33 mg/mL). Condições analíticas: Coluna: CHIRALPAK® AD-H 25 x 0,46 cm, 5 pm; Temperatura da coluna: 35 °C; Vazão: 3 mL/minuto; Fase móvel: C02/ (MeOH com DEA 0,1%) = 80/20;
Comprimento de onda do detetor: 222 nm; Volume de injeção: 5 pL.
Intermediário 2 (Pico 1) : 1,56 g (99,3% de pureza
ótica a 222 nm) Tempo de retenção = 7,18 minutos em SFC quiral analítica. 1H NMR (500 MHz, metanol-d4) δ 7,45-7,39 (m, 2H) , 7,23-7,17 (m, 2H) , 3,78 (s, 3H) , 3,40-3,48 (m, 1H) , 2,40 (ddd, u = 13,0 ; 8,9; 3,6 Hz, 1H), 2,28-2,21 (m, 1H), 2,18 (dd, J=13,0; 11,7 Hz, 1H), 2,04 (dd, J=13,0; 7,2 Hz, 1H), 1,88-1,/9 (m, 1H), 1,79-1,70 (m, 1H).
Pico 2: 1,8 g (97,2% de pureza ótica a 222 nm). Tempo de retenção = 7,71 minutos em SFC quiral analítica. 1H NMR (500 MHz, metanol-d4) δ 7,45-7,38 (m, 2H) , 7,26-7,20 (m, 2H) , 3,78 is, 3H) , 3,28-3,20 (m, 1H), 2,66-2,57 (m, 1H), 2,25 (ddd, J=12,8 ; 11,0; 7,2 Hz, 1H), 2,10 (dt, J=12,2; 6,8 Hz, 1H), 2,03-1,93 (m, 1H), 1,84 (ddd, J=13,0; 7,8; 2,2 Hz, 1H), 1,65 (dd, J=13,3; 11,1 Hz, 1H).
Intermediário 3 (5R,7S)-7-(4-Bromofenil)-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-2-ona
(1-3)
Intermediário 3A: ((IR,3S)-l-Amino-3-(4- bromofenil)ciclopentil)metanol
(I-3A) A uma mistura de i-amino-3-(4- bromofenil)ciclopentanocarboxilato de (IR,3S)-metil, HC1 (1-1 HC1, 15 g, 44,8 mmol) em MeOH (100 mL) a 0 °C, adicionou-se boro-hidreto de sódio (4 g, 106 mmol) em porções. A mistura de reação foi aquecida para a temperatura ambiente, e boro-hidreto de sódio foi adicionado em porções até que determinado pela análise por HPLC que a reação estava concluída. Adicionou-se água para interromper a reação. A mistura de reação foi diluída com acetato de etil e lavada com NaCl saturado. A camada aquosa voltou a ser extraída várias vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secas com MgS04, filtradas e concentradas. 0 produto (11 g) foi recuperado após concentração. Tempo de retenção em HPLC = 0,65 minutos (Condição G) ; LC./MS M±L = 272: ΧΗ NMR (400 MHz, DMS0-ds) δ 7,51-7,40 (m, 2H) , 7,27 (d, J= 8,4 Hz, 2H) , 3,32-3,20 (m, 2H) , 3,09-2,92 (m, 1H) , 2,11 (dd, J=12,9; 8,7 Hz, 1H), 1,98-1,87 (m, 1H), 1,80 (qd, J=ll,l; 7,9 Hz, 1H), 1,69-1,58 (m, 1H), 1,48 (ddd, J=12,4; 7,9; 2,2 Hz, 1H) , 1,32 (dd, J=12,8, 10,1 Hz, 1H) . Intermediário 3: (5R,7S)-7-(4-Bromofenil)-3-oxa-l- azaspiro[4.4]nonan-2-ona A uma mistura de ((IR,3S)-l-amino-3-(4- bromofenil)ciclopentil)metanol (11 g, 40,7 mmol) e piridina (I-3A, 3,29 mL, 40,7 mmol) em dioxano (300 mL), adicionou-se 1,1'-carbonildi-imidazol (19,81 g, 122 mmol). A mistura de reação foi agitada por 4 horas. A mistura de reação foi diluída com acetato de etil e lavada com HC1 1M, salmoura e NaHC03 saturado. A mistura voltou a ser extraída diversas vezes. A camada orgânica foi seca com MgS04, filtrada e concentrada para fornecer 105 g do produto desejado em forma de sólido esbranquiçado. Tempo de retenção em HPLC = 0,87 minutos (Condição G) . LC/MS M±:L = 297,9; λΕ NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,45 (d, J= 8,6 Hz, 2H) , 7,12 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 6,42 (br. s., 1H) , 4,41-4,21 (m, 2H) , 3,17- 2,91 (m, 1H), 2,34 (dd, J=13,3; 7,4 Hz, 1H), 2,23-2,11 (m, 2H) , 2,01-1,90 (m, 2H) , 1,88-1,74 (m, 1H) .
Intermediário 4 (5R,7R)-7-(4-Bromofenil)-3-oxa-1-azaspiro[4.4] nonan-2-ona
(1-4)
Intermediário 4A: ((IR,3R)-1-Amino-3-(4- bromofenil)ciclopentil) metanol
(I-4A) 1-amino-3-(4-bromofenil)ciclopentanocarboxilato de (IR,3R)-metil (1-2, 3,88 g, 13,01 mmol) foi dissolvido em
MeOH (65.1 ml) e boro-hidreto de sódio (1,477 g, 39,0 mmol) foi adicionado em porções. Adicionou-se mais boro-hidreto de sódio (0,5 equivalentes a cada 1 hora) em porções até que foi determinado pela análise por HPLC que a reação estava concluída. A reação demonstrou ter-se concluído depois de 2 horas. A mistura de reação foi interrompida com água e diluída com acetato de etil. A camada aquosa voltou a ser extraída três vezes com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com NaCl saturado, secas com MgS04, filtradas e concentradas para fornecer ((1R,3R)-1- amino-3-(4-bromofenil)ciclopentil)metanol (3,19 g, 11,81 mmol). Tempo de retenção em HPLC = 0,68 minutos; LC/MS M+1 = 272: 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,42 (d, J=8,4 Hz, 2H) , 7,13 (d, J=8,4 Hz, 2H) , 3,49 (s, 2H), 3,32-3,41 (m, 1H), 2,19-2,25 (m, 1H) , 1,98-2,07 (m, 1H) , 1,90-1,95 (m, 1H) , 1,66-1,74 (m, 2H), 1,52-1,60 (m, 1H).
Intermediário 4: (5R,7R)-7-(4-Bromofenil)-3-oxa-l- azaspiro[4.4]nonan-2-ona ((IR,3R)-1-Amino-3-(4-bromofenil)ciclopentil)metanol (I-4A, 3,19 g, 11,81 mmol) foi dissolvido em THF (59.0 ml).
Adicionou-se piridina (0,955 ml, 11,81 mmol) e 1,1'- carbonildi-imidazol (5,74 g, 35,4 mmol) em porções. A mistura de reação foi agitada por 4 horas e foi seguido por LCMS. Após a conclusão, a mistura foi diluída com EtOAc e lavada com HC1 1M. A camada aquosa voltou a ser extraída duas vezes com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com NaCl saturado, secas com MgS04, filtradas e concentradas para fornecer (5R,7R)-7-(4-bromofenil)-3-oxa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-ona (2,5 g, 8,44 mmol) após cromatografia ultrarrápida (coluna com 24 g de sílica-gel; eluente: hexano 2 CV seguido por gradiente para EtOAc 100% ao longo de 15 CV). Tempo de retenção em HPLC = 0,91 minutos; LC/MS M11 = 2 98. ΧΗ NMR (4 00 MHz, CDC13) δ 7,46 (d, J=8,5 Hz, 2H), 7,09 (d, J=8,5 Hz, 2H), 5,72- 5,81 (m, 1H) , 4,35 (dd, J=13 Hz, 8 Hz, 2H) , 3,19-3,24 (m, 1H) , 2,38-2,44 (m, 1H) , 2,15-2,26 (m, 1H) , 2,11-2,14 (m, 1H) , 1,99-2,05 (m, 1H) , 1,79-1,85 (m, 1H) , 1,65-1,72 (m, 1H) . Intermediário 5 (5R,7S)-7-(6-Oxo-5,6,7,8 -tetra-hidronaftalen-2-il)-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-2-ona
(1-5)
Intermediário 5A: 2-(4-((5R,7S)-2-oxo-3-oxa-l- azaspiro[4.4]nonan-7-il)fenil)acetato de terc-butil
(I-5A) A uma mistura de (5R,7S)-7-(4-bromofenil)-3-oxa-l-azaspiro [4.4]nonan-2-ona (1-3, 1 g, 3,38 mmol) em dioxano (10 mL) à temperatura ambiente, adicionou-se bis(trimetilsilil)amida de lítio (3,71 mL, 3,71 mmol). A mistura foi agitada por 30 minutos, então 1,2,3,4,5- pentafenil-1'-(di-t-butilfosfino)ferrocene (0,121 g, 0,169 mmol), Pd2 (dba)3 (0,155 g, 0,169 mmol) e cloreto de (2- (terc-butoxi)-2-oxoetil)zinco (II) (8,10 mL, 4,05 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida a 80 °C por 2 horas, despois arrefecida para a temperatura ambiente, diluída com acetato de etil e lavada com HC1 1M. A camada orgânica foi seca com MgS04, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado num cartucho de sílica-gel (40 g) utilizando gradiente de EtOAc/hexano (EtOAc 0-100Ó durante 20 minutes) para fornecer 950 mg de 2 - (4 - ( (5R,7S)-2-oxo-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-7-il)fenil)acetato de terc-butil. Tempo de retenção em HPLC = 0,93 minutos (Condição G); LC/MS Μ±λ = 332.
Intermediário 5B : Ácido 2-(4-((5R,7S)-2-oxo-3-oxa-1- azaspiro[4.4]nonan-7-il)fenil)acético
(I-5B) A uma mistura de 2-(4-((5R,7S)-2-oxo-3-oxa-l-azaspiro[4.4]nonan-7-il)fenil)acetato de terc-butil (I-5A, 1 g, 3,02 mmol) em DCM (20 mL), adicionou-se TFA (10 mL). Depois de 2 horas, a solução foi concentrada a vácuo e utilizada tal e qual para a etapa subsequente sem purificação adicional. Tempo de retenção em HPLC = 0,65 minutos (Condição G) ; LC/MS M±:L = 276.
Intermediário 5: (5R,7S)-7-(6-Oxo-5,6,7,8-tetra- hidronaftalen-2-il)-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-2-ona A uma mistura de ácido 2-(4-((5R,7S)-2-oxo-3-oxa-l-azaspiro[4.4]nonan-7-il)fenil)acético (I-5B, 800 mg, 2,91 mmol) em DCM (20 mL), adicionou-se cloreto de oxalil (1 ml, 11,42 mmol) e algumas gotas de DMF. Depois de uma hora, a mistura de reação foi concentrada a vácuo. 0 resíduo foi novamente dissolvido em DCM (20 mL) num vaso de pressão de vidro. Adicionou-se cloreto de alumínio granular (1550 mg, 11,62 mmol), e a mistura de reação foi arrefecida para -78 °C. Etileno foi borbulhado através da solução por 5 minutos e depois o vaso de reação foi fechado com vedação. A mistura de reação foi deixada aquecer-se lentamente para a temperatura ambiente e agitada por 4 horas. A mistura foi despejada sobre gelo, diluída com diclorometano e lavada com HC1 1M. A camada orgânica foi seca com MgS04, filtrada e concentrada. 0 material bruto foi purificado num cartucho de sílica-gel (80 g) utilizando gradiente de MeOH/DCM (MeOH 0-lQõ ao longo de 13CV). As frações contendo o produto foram recolhidas e secas a vácuo para fornecer 770 mg de (5R,7S)-7-(6-oxo-5,6,7,8 -tetra-hidronaftalen-2-il)-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-2-ona. Tempo de retenção em HPLC = 0,74 minutos (Condição G) ; LC/MS M*1 = 286: ^ NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,20-7,00 (m, 3H) , 5,49 (br. s., 1H) , 4,45-4,25 (m, 2H) , 3,59 (s, 2H) , 3,08 (t, J=6,8 Hz, 3H) , 2,58 (t, J=6,7 Hz, 2H) , 2,38 (dd, J=13,2; 7,3 Hz, 1H) , 2,27-2,11 im, 2H), 2,05-1,92 im, 2H), 1,92-1,74 (m, 1H). Intermediário 6
Trifluorometanossulfonato de 6-((5R,7S)-2-oxo-3-oxa-l- azaspiro[4.4]nonan-7 -il)-3,4-di-hidronaftalen-2-ila
(1-6)
A uma mistura de (5R,7S)-7-(6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-2-ona (I- 5, 340 mg, 1,192 mmol) e DMPU (0,431 mL, 3,57 mmol) em THF (10 mL) a -78 °C, adicionou-se LDA (1,456 mL, 2,62 mmol) . A mistura de reação foi agitada por 30 minutos, então 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometil)sulfonil metanossulfonamida (639 mg, 1,787 mmol) em THF (10 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida para 0 °C.
Depois de 1 hora, a reação foi interrompida com água. A mistura de reação foi diluída com acetato de etil e lavada com NaCl aquoso saturado. A camada orgânica foi seca com MgS04, filtrada e concentrada. 0 material bruto foi purificado num cartucho de sílica-gel (40 g) utilizando gradiente de EtOAc/hexano (EtOAc 0-100Ó durante 20 minutos) para fornecer 400 mg de trifluorometanossulfonato de 6-((5R,7S)-2-oxo-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-7-il)-3,4-di-hidronaftalen-2-ila. Tempo de retenção em HPLC = 1,01 minutos (Condição G) ; LC/MS M11 = 418. ΧΗ NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,17-6,95 (m, 3H), 6,74 (s, 1H), 6,48 (s, 1H), 4,48-4,20 (m, 2H), 3,17-2,95 (m, 3H), 2,81-2,60 (m, 2H) , 2,33 (dd, J=13,3 ; 7,2 Hz, 1H) , 2,24-2,08 (m, 2H) , 2.05- 1,74 (m, 3H).
Intermediário 7 (5R,7R)-7-(6-Oxo-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)-3-oxa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-ona
(1-7)
Intermediário 7A: 2-(4-((5R,7R)-2-oxo-3-oxa-l- azaspiro[4.4]nonan-7-il)fenil)acetato de terc-butil
(I-7A) A uma solução de (5R,7R)-7-(4-bromofenil)-3-oxa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-ona (Intermediário 4, 2,1 g, 7,09 mmol) em THF (25.3 ml) à temperatura ambiente, adicionou-se LiHMDS (7,80 ml, 7,80 mmol) . A solução foi agitada por 15 minutos. Em seguida, Pd2(dba)3 (0,195 g, 0,213 mmol), 1.2.3.4.5- pentafenil-l'-(di-t-butilfosfino)ferroceno (0,151 g, 0,213 mmol), brometo de (2-(terc-butoxi)-2-oxoetil)zinco (II) e tetra-hidrofurano (7,07 g, 21,27 mmol) foram adicionados sequencialmente. A pasta foi agitada a 24 °C por 2 horas. A análise por LCMS mostrou consumo completo do material de partida. A mistura de reação foi diluída com acetato de etil e lavada com HC1 1M. A camada orgânica foi seca com MgS04, filtrada e concentrada. 0 material bruto foi purificado num. cartucho de sílica-gel (40 g) utilizando hexano: acetona 100:0 para 0:100 ao longo de 25 CV. 2-(4-((5R,7R)-2-oxo-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-7 -il)fenil)acetato de terc-buti! (2,35 g, 7,09 mmol) foi isolado. Tempo de retenção em HPLC = 0,95 minutos (Condição I) : LC/MS M*1 = 332: LH NMR (400 MHz, clorof órmio-d) δ 7,27-7,21 (m, 2H) , 7,21-7,15 (m, 2H) , 5,11 (br. s., 1H) , 4,40- 4,26 (m, 2H) , 3,53 (s, 2H) , 3,22-3,01 (m, 1H) , 2,36 (dd, J = 13,2; 7,3 Hz, 1H) , 2,25-2,10 (m, 2H) , 2,04-1,92 (m, 2H) , 1,91-1,76 i,m, 1H), 1,47 (s, 9H).
Intermediário 7: (5R,7R)-7-(6-Oxo-5,6,7,8-tetra- hidronaftalen-2-il)-3-oxa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-ona 0 2-(4-((5R,7R)-2-oxo-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-7 - il)fenil)acetato de terc-butil em forma de líquido castanho (I-7A, 2,35 g, 7,09 mmol) foi dissolvido em DCM (60 mL) , seguido pela adição de ácido trifluoroacético (20 mL, 260 mmol) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora, quando então o solvente foi removido sob pressão reduzida. 0 material resultante foi diluído em DCM (60 mL) , purificado por extração ácido/base e colocado sob vácuo por 1 hora. 0 ácido 2-(4-((5R,7R)-2-oxo-3-oxa-l-azaspiro[4.4]nonan-7 -il)fenil)acético resultante, em forma de goma castanho (1,952 g, 7,09 mmol) foi dissolvido em DCM (60 mL) , seguido pela adição de cloreto de oxalil (1,862 mL, 21,27 mmol) e DMF (0,027 mL, 0,355 mmol). A solução resultante foi agitada até que a evolução de gás cessasse (cerca de 30 minutos) à temperatura ambiente. A LCMS de uma alíquota interrompida com MeOH mostrou o consumo completo do ácido (RT = 0,65 minutos, Condição I) e o aparecimento do pressuposto éster metílico em decorrência da extinção com metanol (RT = 0,77 minutos, Condição I) como o único produto. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi colocado sob vácuo. A goma castanha foi transferida para um tubo fechado com vedação contendo DCM (60 mL) (não se dissolve completamente, uma suspensão castanho é obtida). A mistura de reação foi arrefecida para -78 °C seguido pela adição de cloreto de alumínio granular (2,84 g, 21,27 mmol). Etileno foi borbulhado através da solução por 7 minutos, e o tubo foi fechado com vedação. Um precipitado formou-se e a mistura de reação foi agitada a -78 °C por 15 minutos e então deixada que atingisse a temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada por 2 horas à temperatura ambiente e depois despressurizada. A análise por LCMS mostrou o desaparecimento do material de partida e o aparecimento do produto tetralona, A mistura de reação foi despejada sobre gelo, diluída com DCM e agitada até que o gelo derretesse. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca e concentrada sob pressão reduzida. A purificação em sílica-gel forneceu (5R,7R)-7-(6-oxo- 5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)-3-oxa-l- azaspiro[4.4]nonan-2-ona (1,05 g, 3,68 mmol). Tempo de retenção em HPLC = 0,74 minutos (Condição I); LC./MS M11* =286; ΧΗ NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,23-7,11 (m, 3H), 5,68 (br. s., 1H), 4,45-4,30 (m, 2H), 3,59 (s, 2H), 3,31- 3,18 (m, 1H) , 3,08 (t, J=6,8 Hz, 2H) , 2,58 (t, J=6,7 Hz, 2H) , 2,42-2,39 (m, 1H) , 2,32-2,15 (m, 2H) , 2,09-1,99 (m, 1H), 1,91-1,83 (m, 1H), 1,82-1,72 (m, 1H).
Intermediário 8 (1-Amino-3 -((R)- 6-hexil- 5,6,7,8 -tetra-hidronaftalen-2-il) ciclopentil)metanol
(8)
Intermediario 8A: 6 -1odo- 3,4 -di -hidronaf tsiθπ- 1 (2H) -ona
(I-8A) A uma solução clara agitada de 6-amino-3,4-di- hidronaftalen-1(2H)-ona (15 g, 93 mmol) em ácido acético (150 mL) e água (150 mL), adicionou-se ácido sulfúrico (5,5 mL, 101 mmol) gota a gota a 0 °C. Uma solução de nitreto de sódio (12,90 g, 187 mmol) em água (100 mL) foi então adicionada gota a gota durante 4 0 minutos à mesma temperatura. A mistura foi agitada a 0 °C por 10 minutos antes de ser adicionada uma solução agitada de iodeto de sódio (55,8 g, 372 mmol) em água (600 mL) lentamente ao longo de 2 horas a 0 °C. A suspensão castanho resultante foi agitada a 0 °C por 30 minutos e à temperatura ambiente por 1 hora. A mistura foi extraída com acetato de etil (400 mL, 2 x 100 mL). Os extratos combinados de acetato de etil foram lavados com água (60 mL), solução aquosa saturada de Na2S203 até que a cor castanha desaparecesse, e solução aquosa saturada de K3P04 (60 mL) , secos com sulfato de sódio anidro e concentrados sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia ultrarrápida (coluna com 330 g de sílica-gel, eluição com gradiente de acetato de etil de 5 para 15% em hexanos) forneceu 6-iodo-3,4-di-hidronaftalen-1(2H)-ona (17,3 g, 63,6 mmol) em forma de sólido. LC/MS M*1 = 273.
Intermediário 8B: (S)-N-(6-Iodo-3,4-di-hidronaftalen-1(2H)- ilideno)-2-(metoximetil) pirrolidin-1-amina
(I-8B) A uma mistura agitada de 6-iodo-3,4-di-hidronaftalen- l(2H)-ona (I-8A, 20,90 g, 77 mmol), ácido p- toluenossulfónico monoidratado (0,584 g, 3,07 mmol) e ciclohexano (40 mL) , adicionou-se (3)-2- (metoximetil)pirrolidin-l-amina (10 g, 77 mmol) gota a gota à temperatura ambiente sob azoto. A mistura foi aquecida com remoção azeotrópica de água por 5 horas. A mistura de reação foi diluída com acetato de etil (20 mL) e misturada com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (15 mL). A camada aquosa foi separada e extraída com acetato de etil (2 x 30 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram secas com sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia ultrarrápida (coluna com 330 g de sílica-gel, eluiçâo com gradiente de EtOAc de 0% para 20% em hexanos) forneceu (S)-N-(6-iodo-3,4-di-hidronaftalen-1(2H)-ilideno)-2-(metoximetil)pirrolidin-l-amina (29,1 g, 76 mmol) em forma de líquido amarelo. LC/MS Μ*1 = 385.
Intermediário 8C: (R)-2-hexil-6-iodo-3,4-di-hidronaftalen-
1(2H)-ona (I-8C) A uma solução agitada de di-isopropilamina (19,43 mL, 136 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (250 mL) , adicionou-se uma solução de butil-lítio (2,5 M em hexanos, 3 9,4 mL, 98 mmol) gota a gota a 0 °C sob azoto. A solução resultante foi agitada à mesma temperatura por 15 minutos antes que uma solução de (S)-N-(6-iodo-3,4-di-hidronaftalen-1(2H)-ilideno)-2-(metoximetil)pirrolidin-l-amina (I-8B, 29,1 g, 76 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (100 mL) fosse adicionada gota a gota. A solução de reação foi agitada a 0 °C por 2 horas. Uma solução de 1-iodohexano (22,35 mL, 151 mmol) em tetra-hidrofurano (50 mL) foi adicionada gota a gota a -78 °C, e a mistura foi agitada à mesma temperatura por 2 horas. A temperatura foi elevada para a temperatura ambiente ao longo de 1,5 horas. A mistura de reação foi interrompida com solução aquosa saturada de cloreto de amónio (50 mL) e água (50 mL). A mistura foi extraída com hexanos (200 mL) e acetato de etil (3 x 50 mL). Os extratos combinados foram secos com sulfato de sódio anidro e concentrados sob pressão reduzida para fornecer um óleo. 0 óleo foi dissolvido em THF (200 mL). Uma solução de cloreto cúprico, di-hidratado (52 g) em água (220 mL), foi adicionada a 0 °C gota a gota, e a mistura foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante a noite. Uma solução aquosa de amónia foi adicionada para subir o pH para aproximadamente 9. A mistura foi extraída com hexano (100 mL) e éter dietílico (2 x 100 mL) . Os extratos combinados foram secos com sulfato de sódio anidro e concentrados. A purificação por cromatografia ultrarrãpida (coluna com 330 g de sílica-gel, eluição com gradiente de EtOAc de 0 para 150 em hexanos) forneceu (R)-2-hexl-6 -iodo-3,4-di-hidronaftalen-i(2H)-ona (21,6 g, 60,6 mmol) em forma de sólido branco, contendo algum do isõmero (S), que foi removido na etapa subsequente. LC/MS M±L = 357. Intermediário 8D: (R)-2-hexil-6-iodo-1,2,3,4 -tetra-
hidronaf taleno (I-8D) A uma solução agitada de (R)-2-hexil-6-iodo-3,4-di-hidronaftalen-1(2H)-ona (I-8C, 21,6 g, 60,6 mmol) em diclorometano (10 mL) e EtOH 1000 (100 mL) , adicioou-se boro-hidreto de sódio (4,59 g, 121 mmol) em porções. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas antes de ser interrompida pela adição de acetona lentamente (arrefecida com banho-maria). A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi misturado com solução aquosa saturada de cloreto de amónio (100 mL) e água (50 mL) e extraído com acetato de etil (100 mL, 2 x 50 mL) . Os extratos combinados de acetato de etil foram secos com sulfato de sódio anidro e concentrados sob pressão reduzida para fornecer um óleo. 0 óleo foi dissolvido em trietilsilano (70 mL, 438 mmol) . TFA (100 mL, 1298 mmol) foi adicionado com agitação vigorosa. A mistura foi agitada à temperatura ambiente sob azoto por 2,5 horas. Depois, adicionou-se água (150 mL) e a mistura foi extraída com hexanos (100 mL, 2 x 50 mL) . Os extratos combinados foram lavados com água (50 mL) e então solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) , secos com sulfato de sódio anidro e concentrados para fornecer um líquido amarelo. A purificação por cromatografia ultrarrápida (coluna com 330 g de sílica-gel, eluição com gradiente de EtOAc de 0 para 120 em hexanos) forneceu (R)-2-hexil-6-iodo-1,2,3,4tetra-hidronaftaleno (18,4 g, 53,8 mmol) em forma de líquido incolor. 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,41 (s, 1H) , 7,3 8 (dd, 7, 9; 1,8 Hz, 1H), 6, /9 (d, u = 8,1 Hz, 1H), 2,82- 2,71 (m, 3H), 2,31 (dd, J=16,5; 10,6 Hz, 1H), 1,93-1,85 (m, 1H), 1,72-1,60 (m, 1H), 1,41-1,24 (m, 11H), 0,92-0,85 (m, 3H) . A separação por SFC quiral (CHIRALPAK® AS-H 25 x 3,0 cm, 5 pm, C02/Me0H =95/5, 180 mL/minuto, 230 nm) forneceu (R)-2-hexil- 6 -iodo-1,2,3,4 -tetra-hidronaftaleno (11.8 g, PK2) e seu isómero (S) (1,4 g, PK1) em forma de líquido.
Intermediário 8E: 3-((R)-6-hexil-5,6,7,8-tetra- hidronaftalen-2 -il)ciclopentanona
(I-8E) Gás azoto foi borbulhado através de uma mistura de (R)-2-hexil-6 - iodo-1,2,3,4-tetra-hidronaftaleno (I-8D, 11,8 g, 34,5 mmol), cloreto de tetrabutilamónio (9,58 g, 34,5 mmol), acetato de potássio (10,15 g, 103 mmol), acetato de paládio (II) (0,774 g, 3,45 mmol) e DMF anidro (100 mL) por 3 minutos antes que ciclopent-2-enol (6,8 g, 81 mmol, preparado de acordo com Larock, R.C. et al., Tetrahedron, 50(2):305-321 (1994)) fosse adicionado. Gãs azoto foi borbulhado através da solução por 2 minutos adicionais. A mistura foi agitada a 80 °C sob azoto por 2,5 horas e então concentrada para remover o DMF. 0 resíduo foi misturado com água (150 ml) e extraído com acetato de etil (4 x 50 mL) . As soluções combinadas de acetato de etil foram lavadas com água (30 mL), secas com sulfato de sódio anidro, filtradas através de uma camada de sílica-gel e concentradas sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia ultrarrãpida (coluna com 220 g de sílica-gel, eluiçâo com gradiente de acetato de etil de 5 para 50% em hexanos) forneceu 3 -((R)- 6-hexil- 5,6,7,8 -tetra-hidronaftalen-2-il) ciclopentanona (5,96 g, 19,97 mmol) LC/MS M*1 = 299. Intermediário SF: 1-amino-3-((R)-6-hexil-5,6,7,S-tetra- hidronaftalen-2-il) ciclopentanocarboxilato de metil
(I-8F)
Uma mistura de 3- ( (R)-6-hexil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentanona (I-8E, 5,96 g, 19,97 mmol), cloreto de amónio (5,34 g, 100 mmol), cianeto de sódio (4,89 g, 100 mmol), solução de amónia em metanol 7 M (28,5 ml, 200 mmol) e diclorometano (15 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 1 dia. Adicionou-se mais solução de amónia em metanol 7 M (15 mL) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 1 dia e então concentrada. 0 resíduo foi particionado entre acetato de etil (70 mL) e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (100 mL). A camada aquosa foi separada e extraída com acetato de etil (3 x 50 mL) . As soluções combinadas de acetato de etil foram secas com sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para fornecer l-amino-3-((R)-6-hexil- 5,6,7,8 -tetra-hidronaftalen-2-il) ciclopentanocarbonitrilo em forma de semissólido. 0 material semissólido foi misturado com uma mistura de ácido clorídrico concentrado (56 mL, 1843 mmol), água (28 mL, 1554 mmol), ácido acético (35 mL) e dioxano (35 mL). A mistura foi agitada a 100 °C sob azoto por 10 horas e então concentrada para fornecer um sólido. 0 sólido foi dissolvido em metanol (20 mL) e misturado com tolueno (20 mL) . A mistura foi concentrada até a dessecação completa. Esse procedimento de secagem foi repetido uma vez mais para fornecer um sólido seco. 0 sólido foi dissolvido em metanol anidro (300 mL) . Cloreto de tionil (11,66 mL, 160 mmol) foi adicionado gota a gota a 0 °C sob azoto. A mistura de reação foi agitada a 70 °C por 7 horas antes de ser concentrada. 0 resíduo foi basificado com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (100 mL) e algum carbonato de potássio sólido e extraído com acetato de etil (100 mL, 3 x 30 mL). Os extratos combinados de acetato de etil foram secos com sulfato de sódio anidro e concentrados sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia ultrarrápida (coluna com 80 g de sílica-gel, eluição com gradiente de acetato de etil de 20 para 1000 em hexanos) forneceu l-amino-3-((R)-6-hexil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentanocarboxilato de metil (5,7 g, 15,94 mmol) em forma de líquido. LC/MS M±L = 358. Intermediário 8: l-amino-3-((R)- 6-hexil-5,6,7,8 -tetra-hidronaftalen-2-il) ciclopentanocarboxilato de metil (I-8F, 5,7 g, 16 mmol) foi dissolvido em EtOH (60 mL) e cloreto de metileno (15 mL). Boro-hidreto de sódio (2,5 g, 67 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Ácido clorídrico (6 N aquoso, 40 mL) foi adicionado lentamente a 0 °C para tornar o pH igual a aproximadamente 1. Depois, a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 60 minutos e hidróxido de sódio (10 g em 20 mL de água) foi adicionado para fazer com que o pH fosse de aproximadamente 12. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 40 minutos antes de ser concentrada para remover os solventes orgânicos. 0 resíduo aquoso foi diluído com água (20 mL) e extraído com EtOAc (100 mL, 2 x 50 mL) . Os extratos combinados de acetato de etil foram secos com sulfato de sódio anidro, descoloridos por carvão, filtrados através de camada de CELITE® e concentrados sob pressão reduzida para fornecer (1-amino-3 -((R)- 6-hexil-5,6,7,8-tetra- hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metanol (5,0 g, 15 mmol) em forma de sólido branco.
Exemplos 1 e 2 e compostos 3 e 4 0 Intermediário 8 foi separado em 3 frações: F1 (Pico 1), F2 (Pico 2 e Pico 3), F3 (Pico 4)) utilizando SFC quiral (Coluna: CHIRALPAK® AD-H 25 x 3 cm, 5 μπί; Fase móvel: C02/ (MeOH ± DEA 0,10 ) = 88/12; Vazão: 200 mL/minuto; Comprimento de onda do detetor: 22 0 nm; Temperatura da coluna: 35 °C). A segunda fração (F2) foi separada mais uma vez utilizando SFC quiral (Coluna: CHIRALPAK® AS-H 25 x 3 cm, 5 pm; Fase móvel:C02/ [MeOH-MeCN (1:1) ± DEA 0,50 ] - 88/12; Vazão:180 mL/minuto; Comprimento de onda do detetor: 220 nm; Temperatura da coluna: 35 °C) para fornecer o Pico 2 e o Pico 3. Todos os quatro isómeros são sólidos brancos com LC/MS Μ±λ = 33 0.
Exemplo 1 (Pico 2) : 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,07-6,95 (m, 3H), 3,54-3,44 (m, 2H), 3,34 (tt, J=11,0; 7,0 Hz, 1H), 2,92-2,74 (m, 3H), 2,39 (dd, J=16,4; 10,7 Hz, 1H), 2,29-2,14 (m, 1H), 2,08-1,84 (m, 3H), 1,76-1,65 (m, 3H), 1,46-1,26 (m, 12H), 0,99-0,85 (m, 3H).
Exemplo 2 (Pico 4) : 1H NMR (400 MHz, clorof órmio-d) δ 7,06-6,92 (m, 3H), 3,52-3,37 (m, 2H), 3,09-2,93 (m, 1H), 2,88-2,72 (m, 3H), 2,35 (dd, J= 15,8; 10,6 Hz, 1H), 2,26 (dd, J=12 ,7; 7,8 Hz, 1H) , 2,11-2,00 (m, 1H) , 1,97-1,84 (m, 2H), 1,78-1,60 (m, 3H), 1,43-1,22 (m, 12H), 0,95-0,83 (m, 3H) .
Composto 3 (Pico 1): LH NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,03-6,92 (m, 3H), 3,46 (s, 2H), 3,39-3,24 (m, 1H), 2,88- 2,72 (m, 3H), 2,36 (dd, J=16,3. 10,8 Hz, 1H), 2,27-2,13 (m, 1H) , 2,08-1,82 (m, 3H) , 1,76-1,63 (m, 3H) , 1,43-1,20 (m, 12H), 0,94-0,85 (m, 3H).
Composto 4 (Pico 3): 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,02-6,92 (m, 3H) , 3,51-3,37 (m, 2H) , 3,08-2,94 (m, 1H) , 2,87-2,71 (m, 3H), 2,35 (dd, J= 16,2 ; 11,1 Hz, 1H) , 2,25 (dd, J=13,l; 7,8 Hz, 1H), 2,12-1,97 (m, 1H), 1,97-1,83 (m, 2H), 1,81-1,59 (m, 3H), 1,43-1,21 (m, 12H), 0,96-0,74 (m, 3H) .
Os Compostos 5-8 foram preparados de acordo com os procedimentos gerais de síntese e separação do Intermediário 8, Exemplos 1-2 e Compostos 3-4, utilizando o enantiómero (S) (PK1) do iodeto Intermediário I-8D. Todos os quatro isõmeros (Compostos 5-8) apresentavam MM = 329,5; LC/MS Μ±λ = 330; Condição da HPLC: C. TABELA 1
TABELA 2
Preparação alternativa do exemplo 2
Preparação 2Ά: (5R,7S)-7-(6-hexil-7,8-di-hidronaftalen-2- il)-3-oxa-1-azaspiro[4,4]nonan-2-ona
(2A) A uma mistura de trifluorometanossulfonato de 6-((5R,7S)-2-oxo-3-oxa-l-azaspiro[4,4]nonan-7-il)-3,4-di-hidronaftalen-2-il (Intermediário 6, 1 g, 2,396 mmol) e NMP (2,306 mL, 23,96 mmol) em THF (20 mL) a -40 °C, adicionou-se uma solução de bis(trimetilsilil) amida de lítio em THF (2,396 mL, 2,396 mmol). A mistura de reação foi agitada por 15 minutos, depois acetilacetonato férrico (0,042 g, 0,120 mmol) e brometo de hexilmagnésio em éter (2,3 96 mL, 4,7 9 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada por 30 minutos e interrompida com água. A mistura de reação foi diluída com acetato de etil e lavada com HC1 1M. A camada orgânica foi seca com MgS04, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado num cartucho de sílica-gel (40 g) utilizando gradiente de EtOAc/hexano (EtoAc 0-100Ó ao longo de 12 CV) para fornecer 662 mg de (5R, 7S)-7-(6-hexil-7,8-di-hidronaftalen-2-il)-3-oxa-l- azaspiro[4.4]nonan-2-ona em forma de sólido branco. Tempo de retenção em HPLC = 1,28 minutos (Condição G) ; LC/MS Μ±_ί = 354: NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,03-6,88 (m, 3H), 6,21 (s, 1H) , 5,16 (br. s., 1H) , 4,44-4,15 (m, 2H) , 3,13- 2,96 (m, 1H), 2,80 (t, J= 8,0 Hz, 2H), 2,47-2,08 (m, 6H), 2,05-1,93 (m, 2H) , 1,90-1,73 (m, 1H) , 1,68-1,43 (m, 4H) , 1,41-1,22 (m, 5H), 1,01-0,83 (m, 3H).
Preparação 2B: (5R,7S)- 7 -((R)- 6-hexil-5,6,7,8-tetra- hidronaftalen-2-il)-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-2-ona
(2B)
Uma mistura de (5R,7S)-7-(6-hexil-7,8-di- hidronaftalen-2-il)-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-2-ona (2A, 760 mg, 2,15 mmol) e tetrafluoroborato de (-)-2,3-bis[(2R,5R)-2,5-dimetilfosfolanil]-N-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]maleicimida(1,5-ciclo-octadieno)ródio (I) (273 mg, 0,43 mmol) em MeOH (27 mL) foi hidrogenada a 8 50 PSI por 1000 minutos utilizando uma autoclave HEL de 100 mL. A mistura de reação foi filtrada e concentrada a vácuo. 0 material bruto foi purificado num cartucho de sílica-gel (40 g) utilizando gradiente de EtOAc/hexano (EtOAc 0-100Ó durante 20 minutos) para fornecer 640 mg de (5R,7S)- 7 -(6-hexil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-2-ona em proporção!:2 dos dois isómeros. 0 isómero principal desejado foi separado utilizando uma coluna CHIRALPAK® AS-H sob as condições de SFC (MeOH 3 5õ em C02) . Tempo de retenção = 5,14 minutos. 400 mg recuperados de (5R,7S)-7-((R)- 6-hexil-5,6,7,8 -tetra-hidronaftalen-2-il)-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-2-ona. 1H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7,02-6,91 (m, 3H), 4,47-4,20 (m, 2H), 3,02 (tt, J=11,0; 7,2 Hz, 1H), 2,87-2,74 (m, 3H), 2,41-2,24 (m, 2H), 2,17-2,03 (m, 2H) , 2,00-1,89 (m, 3H), 1,86-1,74 (m, 1H), 1,73-1,61 (m, 1H), 1,51-1,28 (m, 11H), 0,99-0,88 (m, 3H).
Preparação alternativo do preparação 2B:
Uma mistura de (5R,7S)-7-(6-hexil-7,8-di- hidronaftalen-2-il)-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-2-ona (2A, 2,lg, 5,94 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de ((IR,25,3R,5R)-2,6,6- trimetilbiciclo[3.1.1]heptan-3-il)borano em DCM (30 mL) a -35 °C sob azoto (0 reagente borano foi preparado como segue: A uma mistura de S-Alpine-Boramina (8,4 g, 20,18 mmol) em THF (35 mL), adicionou-se etereato de BF3 (5,!lml, 40,4 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 1,5 horas, filtrada sob azoto, e o bolo foi lavado com THF frio (2x6 mL) . 0 filtrado e as lavagens foram combinados e concentrados sob vácuo. Ao resíduo, adicionou-se DCM (20 mL) e a solução foi concentrada mais uma vez. 0 reagente obtido foi redissolvido em DCM (30 mL) e utilizado diretamente para a etapa de hidroboração). Após agitação a -35 °C para -30 °C por 4 horas e a -25 °C para -20 °C por 2 horas, MeOH (3,6 mL) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a -10 °C por 10 minutos e a 0 °C por 10 minutos. A mistura foi diluída com THF (25 mL) , depois uma solução de NaOH (6N, 9,9 mL, 59,4 mmol) foi adicionada gota a gota, seguida por H202 (30ó, 6,07 mL, 59,4 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. À mistura, adicionou-se DCM (100 mL) e água (50 mL) . A solução total foi filtrada através de uma camada de CELITE® e o bolo foi lavado com DCM. As duas camadas foram separadas, a camada aquosa foi extraída com DCM (50 mL) e foi combinada com a camada orgânica. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (100 mL) e salmoura (100 mL) , secas com Na2S04 anidro e foram concentradas a vácuo. 0 material bruto foi purificado num cartucho de sílica-gel (40 g) utilizando gradiente de EtOAc/hexano (EtOAc 0-50Ó durante 55 minutos) para fornecer 1,9 g (86ó) de (5R,7S)-7-(6-hexil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)-3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-2-ona em proporção 8:1 de dois isS meros. A mistura foi leada à etapa seguinte sem separar os diastereoisUS meros. A (5R,7S)-7-(6-hexil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)-3-oxa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-ona (3,2 g, 8,61 mmol) em MeOH (30 mL), adicionou-se Pd/C (10o, 1,1 g). Um leve vácuo foi aplicado ao balão de reação, voltando em seguida a ser preenchido com hidrogénio proveniente de um balão de hidrogénio. Depois de agitação à temperatura ambiente por 6 horas, EtOAc (20 mL) foi adicionado para dissolver o precipitado. Um leve vácuo foi aplicado ao balão de reação, voltando em seguida a ser preenchido com hidrogénio proveniente de um balão de hidrogénio, e o conteúdo foi agitado à temperatura ambiente por 16 horas. A mistura foi filtrada através de uma camada de CELITE® e o bolo foi lavado com EtOAc, DCM, MeOH e EtOAc. Os solventes combinados foram concentrados a vácuo para fornecer a mistura bruta (3,06 g) em forma de mistura diastereoisomérica 8:1. 0 isS mero principal foi seprado utilizando uma coluna CHIRALPAK® AS-H sob as condições de SFC (MeOH 35õ em C02) . Tempo de retenção = 4,64 minutos. 2,35 g recuperados (77o) de (5R,7S)-7-((R)-6-hexil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)-3-oxa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-ona. Exemplo 2: A uma mistura de (5R,7S)-7-((R)-6-hexil-5,6,7,S-tetra-hidronaftalen-2-il)-3-oxa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-ona (400 mg, 1,125 mmol) em dioxano (30 mL) , adicionou-se NaOH aquoso (IN, 20 mL) . A mistura de reação foi aquecida a 100 °C por 3 dias, arrefecida para a temperatura ambiente, diluída com acetato de etil e lavada com água. A camada orgânica foi seca com MgS04, filtrada e concentrada. 0 material bruto foi purificado num cartucho de sílica-gel (24 g) utilizando gradiente de (NH3 2N/MeOH) 20ó em DCM/DCM (0-75Ó de (NH3 2N/MeOH) 2 0ó em DCM ao longo de 13 CV) para fornecer 290 mg de ((1R,3S)-l-amino-3-((R)-6-hexil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metanol. Tempo de retenção em HPLC = 10,09 minutos (Condição H); LC/MS M±L = 33 0; 1H NMR (4 00 MHz, metanol -d4) δ 7,03-6,91 (m, 3H) , 3,54-3,41 (m, 2H), 3,01 (tt, J=ll,l; 7,2 Hz, 1H), 2,87-2,69 (m, 3H) , 2,34 (dd, J=16,2; 10,5 Hz, 1H) , 2,20 (dd, J=13,0; 7,5 Hz, 1H), 2,07-1,84 (m, 3H), 1,83-1,60 (m, 3H), 1,60- 1,48 (m, 1H), 1,47-1,25 (m, 11H), 1,00-0,88 (m, 3H). EXEMPLO 2, BASE LIVRE, FORMA N-l: O Exemplo 2, base livre, Forma N-l foi obtido preparando uma solução-mãe contendo 385 mg do Exemplo 2 dissolvidos em uma mistura de 18 mL de THF e 1,25 mL de H20 (20 mg/mL). Em seguida, 52 pL da solução-mãe foram evaporados até a dessecação completa. Ao material seco, adicionou-se 52 pL de uma solução de etanol:heptano em proporção 50:50. A solução resultante foi evaporada para produzir placas de material cristalino. EXEMPLO 2, SAL MONOIDRATADO DE M0N0-HC1, FORMA H-l: 0 sal monoidratado de mono-HCl do Exemplo 2, Forma H-l foi obtido preparando uma solução aquosa 50:50 de metanol (200 pL) contendo 3,2 mg do Exemplo 2. Em seguida, 400 pL de uma solução aquosa de HC1 0,025M foram adicionados gota a gota com agitação. A solução resultante foi evaporada para produzir placas de material cristalino. EXEMPLO 2, SAL MONOIDRATADO DE MONO-HCL, FORMA H-2: 0 sal monoidratado de mono-HCl do Exemplo 2, Forma H-2 foi obtido preparando uma solução aquosa 50:50 de THF (200 pL) contendo 3,2 mg do Exemplo 2. Em seguida, 400 μΕ de uma solução aquosa de HC1 0,025M foram adicionados gota a gota com agitação. A solução foi então evaporada para produzir placas da Forma H-2 monoidratada do sal de mono-HCl do Exemplo 2. EXEMPLO 2, SAL DE MONO-HCL, FORMA N-3: O sal de mono-HCl do Exemplo 2, Forma N-3 foi obtido preparando 200 pL de uma solução de álcool isopropílico contendo 3,2 mg do Exemplo 2. Em seguida, 4 00 pL de uma solução de HC1 alcoólico 0,025 M foram adicionados gota a gota com agitação. A solução foi evaporada para produzir placas da Forma N-3 do sal de mono-HCl do Exemplo 2. EXEMPLO 2, SAL DE MONO-HCL, FORMA N-4: 0 sal de mono-HCl do Exemplo 2, Forma N-3 foi obtido preparando 200 pL de uma solução 50:50 de metanol/THF contendo 3,2 mg do Exemplo 2. Em seguida, 400 pL de uma solução de HC1 alcoólica 0,025 M foram adicionados gota a gota com agitação. A solução resultante foi evaporada para produzir placas da Forma N-4 do sal de mono-HCl do Exemplo 2 . EXEMPLO 2, SAL MONOIDRATADO DE HEMI-ÁCIDO L-MÁLICO, FORMA H-l : O sal monoidratado de hemi-ácido L-málico, Forma H-l foi obtido preparando 200 pL de uma solução aquosa 50:50 de THF contendo 3,2 mg do Exemplo 2. Em seguida, 240 pL de uma solução alcoólica de ácido L-málico 0,042 M foram adicionados gota a gota com agitação. A solução resultante foi evaporada para produzir placas da Forma H-l do sal de hemi-ácido L-málico do Exemplo 2. EXEMPLO 2, SAL MONOIDRATADO DE HEMI-ÁCIDO MALÓNICO, FORMA H-l : O sal monoidratado de hemi-ácido malónico, Forma H-l foi obtido preparando 200 pL de uma solução aquosa 50:50 de THF contendo 3,2 mg do Exemplo 2. Em seguida, 193 pL de uma solução alcoólica de ácido malónico 0,052 M foram adicionados gota a gota com agitação. A solução resultante foi evaporada para produzir placas da Forma H-l do sal de hemi-ácido malónico do Exemplo 2. EXEMPLO 2, SAL 1/3 HIDRATADO DE ÁCIDO FOSFÓRICO, FORMA H . 3 3 -1 : 0 sal 1/3 hidratado de ácido fosfórico, Forma H.33-1 foi obtido preparando 200 pL de uma solução aquosa 50:50 de metanol contendo 3,2 mg do Exemplo 2. Em seguida, 136 pL de uma solução alcoólica de ácido fosfórico 0,073 M foram adicionados gota a gota com agitação. A solução resultante foi evaporada para produzir placas da H.33-1 do sal de ácido fosfórico do Exemplo 2. EXEMPLO 2, SAL DE ÁCIDO R-(+)-MANDÉLICO, FORMA N-l: 0 sal de ácido R-(±)-mandélico, Forma N-l foi preparado adicionando o Exemplo 2 e uma quantidade equimolar de ácido R-(+)-mandélico a uma mistura de metanol e acetonitrilo. A solução foi evaporada para produzir placas da Forma N-l do sal de mono-ácido R-(±)-mandélico do Exemplo 2.
Exemplo 9
Di-hidrogenofosfato de ((IR,3R)-l-amino-3-((R)-6-hexil- 5,6,7,8 -tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metil
(9) A uma solução agitada de ((IR,3R)-l-amino-3-((R)-6-hexil- 5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il) ciclopentil)metanol (Exemplo 1, 10 mg, 0,030 mmol) em acetonitrilo anidro (1 mL) a 0 °C, adicionou-se cloreto de pirofosforil (0,042 mL, 0,303 mmol). A solução clara obtida foi agitada à mesma temperatura por 5 minutos e a RT durante a noite. Depois, adicionou-se água (0,4 mL) e a mistura foi agitada a RT por 1 hora. A purificação, utilizando HPLC de fase reversa (Luna Axia 5μ cl8 30 x 100 mm, gradiente por 10 minutos de 40ó para 100ό do Solvente B, Solvente A: TFA 0,ló em água, Solvente B: TFA 0,16 em MeCN), concentração e liofilização forneceram di-hidrogenofosfato de ( (IR,3R)-l-amino-3-((R)- 6-hexil- 5,6,7,8 -tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metil (2 mg, 4,15 pmol, 13,680 de rendimento) em forma de sB lido branco. Tempo de retenção em HPLC = 3,94 minutos (Condição C) ; LC/MS M*1 = 410; ‘Ή NMR (500 MHz, metanol-d4 + KOH) δ 6,97-6,87 (m, 3H), 3,77-3,71 (m, 1H), 3,71-3,66 (m, 1H), 2,83-2,70 (m, 3H) , 2,32 (dd, J=16,2; 10,7 Hz, 1H) , 2,14-1,98 (m, 2H), 1,96-1,83 (m, 2H), 1,74-1,60 (m, 3H), 1,59-1,49 (m, 1H) , 1,45-1,26 (m, 11H) , 0,94-0,87 (m, 3H) , um protão sob o pico do solvente metanol (-3,3 ppm).
Exemplo 10
Di-hidrogenofosfato de ((IR,3S)-l-Amino-3-((R)-6-hexil- 5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il) ciclopentil)metil
(10)
Uma mistura de pent® xido de fS sforo (150 mg, 0,528 mmol) e ácido fosfB rico 85ó (0,15 mL, 10,01 pmol) f>i agitada a 100 °C sob azoto por 1 hora antes que ((1R,3S)-1-amino-3-((R)-6-hexil-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metanol (Exemplo 1, 6 mg, 0,018 mmol) fosse adicionado. A solução foi agitada à mesma temperatura por 3 horas. Água (0,5 mL) foi adicionada à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A purificação, utilizando HPLC de fase reversa (PHENOMENEX® Luna Axia 5μ cl8 30 x 100 mm, corrida de 10 minutos, Solvente A: MeOH 10ó: H20 90ó: TFA 0,ló, Solvente B: MeOH 90ó, H20 10ó, TFA 0,ló), concentração e liofilização forneceram di-hidrogenofosfato de ((IR,3S)-l-amino-3-((R)- 6-hexil- 5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il) ciclopentil)metil (4 mg, S,3 8 μπιοί) em forma de sólido branco. LC/MS M±L = 410. Tempo de retenção em HPLC = 3,96 minutos (Condição C). ΧΗ NMR (400 MHz, metanol-d4±CDCl3) δ 7,10-6,83 (m, 3H) , 4,06-3,77 (m, 2H) , 3,20-3,06 (m, 1H) , 2,85-2,74 (m, 2H) , 2,48 (dd, J=12 ,9; 6,9 Hz, 1H), 2,40-2,28 (m, 1H), 2,19-2,08 (m, 1H) , 2,05-1,90 (m, 4H) , 1,80-1,62 (m, 2H) , 1,48-1,22 (m, 12H) , 0,95-0,86 (m, 3H) .
Preparação alternativo do exemplo 10
Preparação alternativo 10A: ((IR,3S)-3-((R)-6-hexil- 5.6.7.8- tetra-hidronaftalen-2-il) -1-(hidroximetil)ciclopentil)carbamato de terc-butil
(10A) A uma solução agitada de ((1R,3S)-l-amino-3-((R)-6-hexil- 5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metanol (Exemplo 2, 270 mg, 0,819 mmol) em diclorometano anidro (6 mL) , adicionou-se dicarbonato de terc-butil (536 mg, 2,458 mmol) . A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas. A mistura foi concentrada. A purificação por cromatografia ultrarrãpida (coluna com 24 g de sílica-gel, eluição com gradiente de 10 para 60S de acetato de etil em hexanos) forneceu ((IR,3S)-3-((R)-6-hexil- 5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)-1- (hidroximetil)ciclopentil)carbamato de terc-butil (337 mg, 0,784 mmol, 960 de rendimento) em forma de sólido banco. LC/MS M*1 = 430.
Preparação alternativo 10B: ((IR,3S)-1-(((bis(2- (trimetilsilil)etoxi)fosforil)oxi)metil)-3-((R)-6-hexil- 5.6.7.8- tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)carbamato de terc-butil
(10B) A uma solução agitada de ((IR,3S)-3-((R)-6-hexil- 5.6.7.8- tetra-hidronaftalen-2-il) -1- (hidroximetil)ciclopentil)carbamato de terc-butil (Preparação 10A, 336 mg, 0,782 mmol) em cloreto de metileno anidro (7 mL), adicionou-se bis(2-(trimetilsilil)etil)di-isopropilfosforamidita (858 mg, 2,346 mmol) em uma porção a 0 °C sob azoto. Em seguida, 1, 2, 4-lH-triazol (162 mg, 2,346 mmol) foi então adicionado. A mistura de reação foi agitada a 40 °C por 18 horas. A solução foi arrefecida para 0 °C antes que peróxido de hidrogénio (0,781 mL, 7,82 mmol) fosse adicionado. A mistura foi agitada a 0 °C por 30 minutos e â temperatura ambiente por 1 horas antes que metanol (3 mL) fosse adicionado para tornar a mistura uma solução homogénea. A solução foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. Uma solução aquosa saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) foi adicionada para interromper a reação. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e extraída com acetato de etil (3 x 4 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) e concentradas sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia ultrarrãpida (coluna com 24 g de sílica-gel, eluição com gradiente de 5 para 25% de acetato de etil em hexanos) forneceu ((IR,3S)-1-(((bis(2- (trimetilsilil)etoxi)fosforil)oxi)metil)-3-((R)-6-hexil- 5.6.7.8- tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)carbamato de terc-butil (514 mg, 0,724 mmol) em forma de líquido.
Exemplo 10: A uma solução agitada de ((IR,3S)-1-(((bis (2-(trimetilsilil)etoxi)fosforil)oxi)metil)-3-((R)-6-hexil- 5,6,7,S-tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil) carbamato de terc-butil (Preparação 10B, 500 mg, 0,704 mmol) em diclorometano (6 mL) , adicionou-se TFA (6 mL) lentamente a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas antes que 90 mL de heptanos fossem adicionados, A solução foi concentrada sob pressão reduzida. Em seguida, 70 mL de metanol foram adicionados ao resíduo sólido, seguido por NaOH IN aq (4 mL) . HOAc (0,4 mL) foi então adicionado a 60 °C para acidificar a solução para pH = 4. A mistura de sólido-líquido foi agitada a 60 °C por 1 hora. 0 sólido foi separado, lavado com metanol, água, metanol, acetato de etil e metanol. A liofilização forneceu di-hidrogenofosfato de ((IR,3S)-l-amino-3-((R)-6-hexil- 5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)ciclopentil)metil (257 mg, 0,619 mmol, 880 de rendimento) em forma de sólido banco. LC/MS M±_l = 410; 1H NMR (4 00 MHz, metanol -d4) (+K0H) δ 7,00- 6,86 (m, 3H), 3,78-3,62 (m, 2H), 3,09-2,97 (m, 1H), 2,84- 2,67 (m, 3H), 2,38-2,22 (m, 2H), 2,03-1,/4 (m, 4H), 1,73- 1,60 (m, 2H), 1,50 (t, u=12,3 Hz, 1H), 1,44-1,27 (m, 11H), 0,95-0,86 (m, 3H) .
Composto comparativo 11 (IR,3R)-1-Amino-3-(6-(pentiloxi)naftalen-2-il) ciclopentil)metanol
(11) 0 Composto comparativo 11 foi descrito em WO 2008/079382, Exemplo Q.l.
Intermediário 11A: (5R,7R)- 7 -(6 -(pentiloxi)naftalen-2-il)- 3-oxa-1-azaspiro[4.4] nonan-2-ona
(I-11A)
Uma mistura de 1-pentanol (6.13 mL, 56.4 mmol), ácido p-toluenossulfónico monoidratado (4,60 mg, 0,024 mmol) e trimetoximetano (0,353 mL, 3,22 mmol) foi agitada a 100 °C por 3 horas com uma corrente lenta de ar circulando sobre a mistura para remover metanol e algum pentanol. 0 líquido
residual obtido foi misturado com (5R,7R)-7-(6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-il)-3~oxa~1-azaspiro[4.4]nonan-2 ~ona (Intermediário 7, 230 mg, 0,806 mmol) e agitado a 100 °C sob azoto por 2,5 horas. A solução foi deixada arrefecida para a temperatura ambiente antes que paládio suportado em carbono (172 mg, 0,081 mmol) fosse adicionado, seguido por acetato de etil (4 mL) . A mistura foi deixada agitar sob uma pressão de hidrogénio em balão à temperatura ambiente durante a noite. As misturas resultantes foram filtradas através de uma membrana filtrante e o filtrado foi concentrado. A purificação por cromatografia ultrarrápida (coluna com 24 g de sílica-gel, acetato de etil Oó para 70ó em hexanos) forneceu 180 mg de material com necessidade de purificação adicional. A separação cromatográfica em fluido supercrítico forneceu uma fração principal, identificada por análise UV como (5R,7R)- 7 -(6 -(pentiloxi)naftalen-2 -il)- 3-oxa-1-azaspiro[4.4]nonan-2-ona (36 mg) em forma de sólido. Instrumento: Thar 350 Thar Analytical SFC-MS; Condições: Condições analíticas: Coluna analítica: AD-H (0,46 x 25 cm, 5 pm) ; Pressão BPR: 100 bars; Temperatura: 45 °C; Vazão: 3,0 mL/minuto; Fase móvel: C02/Me0H (70/30); Comprimento de onda do detetor: UV 200-400 nm. Condições preparativas: Coluna preparativa: AD-H (3 x 25 cm, 5 pm) ; Pressão BPR: 100 bars; Temperatura: 35 °C; Vazão: 120 mL/minuto; Fase móvel: C02/Me0H (70/30); Comprimento de onda do detetor: 220 nm; Programa de separação: Injeção Stack; Injeção: 2,5 mL com tempo de ciclo de 480 segundos. (Tempo de retenção em SFC analítica = 11,68 minutos, pureza >99,50 ). Tempo de retenção em HPLC = 1,11 minutos Condição G); LC/M5 M±L = 354. 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,68 (d, J=8,4 Hz, 2H) , 7,55 (s, 1H) , 7,30 (s, 1H) , 7,21-7,04 (m, 2H) , 6,48 (br. s., 1H) , 4,50-4,28 (m, 2H) , 4,07 (t, u = 6,6 Hz, 2H) , 3,49-3,31 (m, 1H), 2,46 idd, <J"=13,3; 7,6 Hz, 1H) , 2,39-2,24 (m, 1H) , 2,24-2,12 (m, 1H) , 2,12-2,00 (m, 1H) , 2,00-1,90 (m, 1H) , 1,90-1,76 (m, 3H) , 1,58-1,30 (m, 4H), 0,96 (t, J=7,0 Hz, 3H).
Composto comparativo 11: A uma solução de (5R,7R)-7-(6-(pentiloxi)naftalen-2-il)-3-oxa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-ona (36 mg, 0,102 mmol) em dioxano (2 mL) e água (0.8 mL), adicionou-se LiOH (36,6 mg, 1,528 mmol) . A solução foi aquecida para 90 °C e deixada agitar por 15 horas. A mistura de reação foi arrefecida para a temperatura ambiente e foi despejada em acetato de etil e lavada com água. 0 material bruto foi então purificado por HPLC de fase reversa [Coluna: Luna Axia 30*100 mm; Tempo de gradiente: 10 minutos; Vazão = 40 mL/minuto; Solvente A = MeOH 100 -Água 900 -TFA 0,10 ; Solvente B = MeOH 900 -água 100 -TFA 0,10 ; 0 inicdalB = 20; õ final de B = 100]. As frações contendo produto foram recolhidas e secas sob alto vácuo para fornecer ((1R,3R)-1-amino-3-(6 -(pentiloxi)naftalen-2-il)ciclopentil)metanol, TFA (31 mg) em forma de sólido. Tempo de retenção em HPLC = 0,90 minutos (Condição G); LC/MS M*1 = 328. LH NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7,75-7,66 (m, 2H) , 7,66-7,59 (m, 1H) , 7,40-7,33 (m, 1H) , 7,17 (d, J= 2,6 Hz, 1H) , 7,14-7,08 (m, 1H) , 4,07 (t, J"=6,5 Hz, 2H), 3,74-3,60 (m, 2H), 3,59-3,41 (m, 1H), 2,39-2,22 (m, 3H), 2,04-1,80 (m, 5H), 1,55-1,34 (m, 4H), 1,01-0,89 (m, 3H).
ENSAIOS BIOLÓGICOS
ENSAIO DE FOSFORILAÇAO EM SANGUE TOTAL (WBP) DE MURGANHOS
Os compostos da Formula (III) requerem bioativação através da fosforilação do álcool para fornecer um composto ativo de éster de fosfato da Fórmula (II) . De acordo com Brinkmann, V. et al., (J. Biol. Chem. 277:21453-21457 (2002)), a configuração estereoisomérica da amina tendo o centro de carbono pode influenciar a extensão em relação à qual essa fosforilação acontece. A extensão relativa da fosforilação dos Exemplos 1 e 2 e dos Compostos 3-8 foi avaliada pela incubação dos compostos alcoólicos no sangue total de um murganho. 0 aparecimento do composto fosforilado foi aferido depois de 4 horas para determinar a extensão relativa da formação do éster de fosfato. Sangue total fresco foi obtido de murganhos BALB/C por sangramento retro-orbital e recolhido em tubos contendo EDTA. Alíquotas do sangue total tratado com EDTA foram introduzidas em tubos de polipropileno de 1,4 mL no formato de 96 poços (100 pL por amostra) e reforçadas com o composto em teste (lmM em DMSO) até uma concentração final de 10 μΜ (n=2 por composto) . Os tubos foram fechados com vedação e centrifugados, depois transferidos para um agitador orbital para incubação a 37 °C, 225 RPM por 4 horas. No final da incubação, gotas das amostras foram aplicadas sobre o Papel para Recolha de Espécimes Ahlstrom 226, sem tratamento (25 pL por gota n=2), e deixadas secarem ao ar durante a noite. Os Cartões de Gota de Sangue Seco (DBS) foram armazenados à temperatura ambiente em bolsas fechadas de plásticos contendo dessecante. Quando prontas para análise, uma punção de 6 mm (equivalente a 12,5 pL de sangue húmido) foi retirada em n=l e colocada em uma placa filtrante rasa de 96 poços. Em seguida, adicionou-se 105 pL de uma mistura de acetonitrilo 75% e água 25% contendo o Padrão Interno que foi suavemente agitada em vórtice por 30 minutos e depois centrifugada. 0 sobrenadante foi separado do precipitado contendo proteína e 5 pL foram injetados. 0 composto original (álcool) e os compostos ativos de éster de fosfato foram analisados quantitativamente, utilizando uma curva de calibração de DBS, por LC/MS/MS em um Instrumento com Quadrupolo Triplo. As razões da área do composto fosforilado para o composto original (álcool) foram determinadas. Um valor maior para a razão do composto fosforilado para o composto original (álcool) indicava maior formação do composto de éster de fosfato proveniente do composto original (álcool). A Tabela 2 mostra os resultados (média de dois experimentos) para os Exemplos 1-2 e os Compostos 3-8 em 4 horas. Para os Exemplos 1-2 e o Composto 6, as razões da área do composto de éster de fosfato formado a partir dos compostos originais (álcool) em 4 horas eram pelo menos 0,59. Por outro lado, as razões da área do composto de éster de fosfato formado a partir de compostos originais (álcool) para os Compostos 3-5 e 7-8 eram 0,17 ou menos. Nesse estudo, os Exemplos 1 e 2 e o Composto 6 demonstraram sofrer fosforilação em maior extensão do que os Compostos 3 a 5 e 7 e 8. _TABELA 2_
FORMAÇÃO IN VIVO DE ÉSTER DE FOSFATO EM MURGANHOS
Murganhos BALB/c receberam por via oral doses do Exemplo 1, Exemplo 2, Composto 3 e do Composto 4 (10 mg/kg em forma de solução ou suspensão no veículo, polietilenoglicol 300, "PEG300"). O sangue foi recolhido em 24 horas, aplicado sobre Cartões de Gota de Sangue Seco (DBS) e analisado como descrito para o ensaio WBP. Para otimizar o ensaio por LC-MS/MS e permitir que os dados fossem relatados em concentrações, foi efetuada a análise de material de referência (álcool original e éster de fosfato), Curvas padrão de DBS, contendo compostos originais de álcool e de éster de fosfato, foram preparadas e analisadas da mesma maneira que as amostras em estudo, além de analisadas pelo método otimizado de LC-MS/MS para quantificar a quantidade formada do composto de éster de fosfato. Os resultados na Tabela 3 representam os resultados médios de todos os animais dentro de cada grupo de tratamento (n = 3) . Um valor maior para a concentração de composto de éster de fosfato formado a partir do composto original (álcool) indicava formação maior do composto de éster de fosfato a partir do composto original (álcool). Nesse estudo, os Exemplos 1 e 2 demonstraram sofrer formação de éster de fosfato em extensão maior do que os Compostos 3 e 4. Os resultados desse estudo in vivo são compatíveis com os resultados obtidos no estudo acima de Fosforilação em Sangue Total de Murganhos. TABELA 3
ENSAIO DE LIGAÇÃO A S1P:L
Foram preparadas membranas de células CEO que expressavam SlPi humano. Os precipitados celulares (lxlO9 células/precipitado) foram suspensos em tampão contendo HEPES 20 mM (ácido 4 -(2-hidroxietil)-1-piperazina etanossulfõnico) , pH 7,5, NaCl 50 mM, EDTA 2 mM (ácido etilenodiaminatetracético) e coquetel de Inibidores de Proteases (Roche), e rompidos em gelo utilizando o homogeneizador Polytron. 0 homogenato foi centrifugado a 20.000 rpm (48.000 g) e o sobrenadante foi descartado. Os precipitados das membranas foram ressuspensos em tampão contendo HEPES 50 mM, pH 7,5, NaCl 100 mM, MgCl2 1 mM, EDTA 2 mM e armazenados em alí quotas a -80 °C após a determinação da concentração proteica.
Membranas (2 pg/poço) e o ligante j3P-S1P à concentração final de 0,03 nM (1 mCi/mL, Perkin Elmer ou American Radiolabeled Chemicals), diluídos em tampão de ensaio (HEPES 50 mM, pH 7,4, MgCl2, 5 mM, CaCl2 1 mM, BSA (albumina sérica bovina) 0,5õ livre de ácidos gordos, NaF 1 mM) , foram adicionados às placas dos compostos (placa com fundo em v 384 FALCON® (0,5 pL/poço numa diluição de 3 vezes em 11 pontos). A ligação foi realizada por 45 minutos à temperatura ambiente, encerrada pela recolha das membranas em placas filtrantes de 384 poços Millipore FB e a radioatividade foi medida pelo TOPCOUNT®. Os dados de competição dos compostos em teste sobre uma faixa de concentrações foram traçados num gráfico de percentagem de inibição da ligação específica ao radioligante. IC50 e definida como a concentração de ligante concorrente necessária para reduzir a ligação específica em 50ó. Para o Exemplo 10, foi determinado que a IC50 era de 0,01 nM. ENSAIOS DE LIGAÇAO AO RECETOR [JDS] GTPyS
Compostos foram carregados em uma placa de fundo em v 384 FALCON® (0,5 pL/poço numa diluição de 3 vezes em 11 pontos). Membranas preparadas de células SlPi/CHO ou células EDG3-Gal5-bla HEK293T (EDG3 equivalente a S1P3) foram adicionadas à placa dos compostos (40 pL/poço, concentração proteica final de 3 pg/poço) com MULTIDROP®. [35S] GTP (1250 Ci/mmol, Perkin Elmer) foi diluído no tampão de ensaio: HEPES 2 0 mM, pH 7,5, MgCl2 10 mM, MaCl 150 mM, EGTA 1 mM (ácido etilenoglicol tetracético) , DTT 1 mM (Ditiotreitol), GDP 10 pM, BSA 0,1% livre de ácidos gordos, e Saponina 10 pg/mL para 0,4 nM. 40 pL da solução de [3dS] GTP foram adicionados à placa dos compostos com concentração final de 0,2 nM. A reação foi mantida à temperatura ambiente por 45 minutos. Mo final da incubação, todas as misturas na placa dos compostos foram transferidas para placas filtrantes Millipore FB com 384 poços através do manipulador de líquidos VEL0CITY11® Vprep. A placa filtrante foi lavada quatro vezes com água, utilizando o lavador múltiplo de placas Embla, e seca a 60 °C por 45 minutos. 0 líquido de cintilação MicroScint 20 (30 pL) foi adicionado a cada poço para contagem no TOPCOUNT® da Packard. EC50 é definida como a concentração agonista que corresponde a 50% do Ymax (resposta máxima) obtido para cada composto individualmente testado. Para o Exemplo 10, foi determinado que a EC50 era de 0,9 nM no ensaio, utilizando membranas preparadas a partir de células
SlPi/CHO. Para o Exemplo 10, foi determinado que a ECSo era >62.500 nM no ensaio utilizando membranas preparadas a partir de células EDG3-Gal5-bla HEK293T.
Um valor menor para o valor de ECS0 de GTPyS SlPi indicava atividade maior para o composto no ensaio de ligação ao GTPyS SlPi. Um valor maior para o valor de EC50 de GTPyS SlPi indicava menos atividade no ensaio de ligação ao GTPyS S1P3. 0 Exemplo 10, que é o éster de fosfato ativo do Exemplo 2, possuía atividade como agonista de SlPi e é seletivo em relação ao S1P3. Assim, os compostos da presente invenção, que incluem os Exemplos 1 e 2 e 9 e 10, podem ser utilizados para tratar, prevenir ou curar várias condições relacionadas com o recetor SlPi, enquanto reduzindo ou minimizando os efeitos secundários decorrentes da atividade de S1P3. A seletividade surpreendente dos compostos da presente invenção indica a sua utilização potencial para tratar, prevenir ou curar doenças autoimunes e inflamat0 rias tais como esclerose múltipla, artrie reumatoide, doença intestinal inflamatória, lúpus ou psoríase, enquanto reduzindo ou minimizando os possíveis efeitos secundários decorrentes da atividade de S1P3. Outros usos potenciais dos compostos da presente invenção incluem minimizar ou reduzir a rejeição de órgãos transplantados, enquanto reduzindo ou minimizando os efeitos secundários decorrentes da atividade de S1P3. ENSAIO DE INTERNALIZAÇÃO DO RECETOR S1P1 Células CH0-K1 expressando um recetor S1P1 com etiqueta GFP foram semeadas em placas de cultura de tecido com 384 poços, revestidas com poli-D-lisina, a 4xl03 células/poço em 50 pL de meio do ensaio (F12 com L-glutamina, FBS 100 tratado com carvão/dextrano, IX penicilina-estreptomicina, HEPES 1M). As placas com as células foram incubadas durante a noite a 37 °C/C02 50 . Os compostos em teste foram introduzidos na placa de células a partir de uma placa de fonte de compostos, diluídos três vezes em série de 11 pontos, e depois as placas do ensaio foram incubadas a 37 0C/'C02 50 por 45 minutos. As células foram fixadas e coradas com formaldeído 60 e coranè da Hoechst 15 pg/mL em PBS (Ca2±/Mg2± livre) à temperatura ambiente por 15 minutos. As placas com as células foram lavadas 4 vezes com PBS (Ca“±/Mg2± livre) com a adição de 50 pL/PBS antes do fechamento com vedação das placas. Foram adquiridas imagens pelo gerador de imagens de alto conteúdo Cellomics ARRAYSCAN® VTI. A análise dos dados para a determinação de EC50 em relação ao composto de controlo interno foi realizada utilizando o Compartmental Analysis BioApplication on the Array Scan. A EC50 é definida como a concentração agonista que corresponde a 5Qó do Ymax (resposta máxima) obtido para cada composto individual e foi quantificada utilizando a equação logística de 4 parâmetros para ajuste dos dados. Para o Exemplo 9, foi determinado que a EC50 era de 361 nM no ensaio
ENSAIO DE REDUÇÃO DE LINFÓCITOS SANGUÍNEOS (BLR) EM
ROEDORES
Ratos Lewis receberam por via oral o veículo apenas (polietilenoglicol 300, "PEG300") ou 2-amino-2-[2 -(4 - octilfenil)etil]-1,3-propanodiol, cloridrato (CAS: 162359-56-0) em solução no veículo a doses de 0,1 mg/kg, 0,5 mg/kg e 3,0 mg/kg, ajustadas para refletir a quantidade livre do item em teste. Os resultados são fornecidos na Tabela 4a e o nível de redução de linfócitos em 24 horas após a dose foi máxima a 3,0 mg/kg. A redução percentual em linfócitos é relacionada à dose, mas a relação não é linear, sendo necessários aumentos não proporcionais na dose para suscitar reduções sequencialmente maiores em contagens de linfócitos. Por exemplo, neste estudo, para demonstrar uma mudança de 13ó (de 69ó de redução para 82ó de redução) foi necessário aumentar a dose cinco vezes (de 0,1 mg/kg para 0,5 mg/kg). Além disso, para demonstrar uma mudança adicional de 7ó neste estudo (de 82ó de redução para 89ó de redução) foi necessário aumentar a dose seis vezes (de 0,5 mg/kg para 3,0 mg/kg) . Murganhos BALB/c receberam por via oral o veículo apenas (polietilenoglicol 300, "PEG300") ou o Exemplo 1, o Exemplo 2, o Composto 6, o Composto 8 ou o Composto Comparativo 11. Os compostos foram administrados em solução ou suspensão no veículo, ajustados para refletir a quantidade livre do item em teste no caso de serem utilizadas formas em sal. 0 sangue foi recolhido em 24 horas, e as contagens de linfócitos sanguíneos foram determinadas em um analisador ADVIA® 120 Hematology Analyzer (Siemens Healthcare Diagnostics). Os resultados foram aferidos em termos de redução na percentagem de linfócitos circulantes, quando comparados ao grupo tratado com veículo no momento da aferição. Os resultados representam os resultados médios de todos os animais dentro de cada grupo de tratamento (n = 2-4) . Os resultados do ensaio de Redução de Linfócitos Sanguíneos (BLR) em murganho, descrito acima, são mostrados na Tabela 4b. _TABELA 4 a_
_TABELA 4b_
ENSAIO DE TOXICIDADE PULMONAR A análise de níveis proteicos no líquido de lavado broncoalveolar (BAL) obtido de um animal foi utilizada para graduar efeitos secundários pulmonares. Níveis aumentados de proteínas no líquido de BAL eram indicativos de efeitos pulmonares indesejados, tais como edema pulmonar. 0 Exemplo 1, o Exemplo 2, o Composto 6, o Composto 8 e o Composto 11 foram administrados por via oral a murganhos a uma dose de 30 mg/kg. Em 24 horas após a dose, os murganhos foram sacrificados com superdose de barbitúricos por via intraperitoneal. Os animais foram colocados em posição supina, uma incisão na pele foi efetuada e a dissecção romba seguinte expôs a traqueia. Abriu-se a traqueia com uma incisão e um cateter foi inserido 4-6 mm na traqueia. Solução salina com tampão fosfato (PBS; 1 mL/murganho) foi infundida nos pulmões e depois aspirada. A concentração de proteína no BAL no líquido de BAL recuperado foi determinada em um analisador ADVIA® 1800 Chemistry Analyzer (Siemens Healthcare Diagnostics). Os resultados do ensaio no lavado broncoalveolar (BAL) são mostrados na Tabela 5. Os resultados representam os resultados médios de todos os animais dentro de cada grupo de tratamento (n = 2-4). TABELA 5
A Tabela 5 mostra os níveis relativos de proteína no BAL em 24 horas para os compostos testados em comparação à administração do veículo apenas. Um valor para a proteína relativa no BAL versus controlo superior a 1 indicava aumento na toxicidade pulmonar em comparação à administração do veículo apenas. Neste estudo, como relatado na Tabela 5, a administração dos Exemplos 1 e 2 forneceu níveis proteicos relativos no BAL de 0,99 e 0,96, indicando não haver aumento na toxicidade pulmonar. A administração do Composto 8 forneceu um nível proteico relativo no BAL de 1,03, que indicou ligeiro aumento ou nenhum na toxicidade pulmonar. Em contraste, a administração do Composto 6 e do Composto 11 forneceu níveis proteicos relativos no BAL de 1,94 e 1,33, indicando toxicidade pulmonar aumentada.
Os compostos da presente invenção, conforme representados pelos Exemplos 1 e 2, foram comparados a a) os Compostos 6 e 8 e ao b) Composto Comparativo 11, descrito em WO 2008/079382, e demonstraram ser especialmente vantajosos. Os compostos da presente invenção ofereceram a vantagem surpreendente da combinação de atividade em reduzir os linfócitos sanguíneos e minimizar os efeitos secundários pulmonares, tais como edema pulmonar. Tal como mostrado nas Tabelas 4b e 5, nos testes relatados, os Exemplos 1 e 2 desta invenção mostram a vantagem surpreendente em eficácia na redução de linfócitos sanguíneos sem aumentar o nível proteico no BAL, uma medida de efeitos secundários pulmonares. Por exemplo, quando comparados aos Compostos 6, 8 e 11, os compostos exemplificados da invenção relatados na Tabela 4b e 5 reduziram os linfócitos sanguíneos em 880 e 900 e forneceram níveis proteicos relativos no BAL de 0,99 e 0,96, respetivamente, o que indicou não haver aumento em efeitos secundários pulmonares. Em contraste, em testes similares, o Composto 6 e o Composto Comparativo 11 reduziram os linfócitos sanguíneos em 780 e 520 e forneceram níveis proteicos relativos no BAL de 1,96 e 1,33, respetivamente, indicando risco aumentado de efeitos secundários pulmonares. 0 Composto 8 reduziu os linfócitos sanguíneos em 59õ e forneceu níveis proteicos relativos no BAL de 1,03, que indicaram nenhum ou leve aumento em efeitos secundários pulmonares. _TABELA 6_
Os compostos da presente invenção têm atividade como agonistas do recetor SlPi, levando à redução de linfócitos sanguíneos circulantes e, assim, podem ser utilizados para tratar, prevenir ou curar várias condições relacionadas com o recetor SlPi, enquanto reduzindo ou minimizando efeitos secundários pulmonares, tais como edema pulmonar. A seletividade surpreendente dos compostos da presente invenção indica a sua utilização potencial para tratar, prevenir ou curar doenças autoimunes e inflamatórias, tais como esclerose múltipla, artrite reumatoide, doença intestinal inflamatórias, lúpus ou psoríase, enquanto reduzindo ou minimizando possíveis efeitos secundários pulmonares. Outros usos potenciais dos compostos da presente invenção incluem minimizar ou reduzir a rejeição de órgãos transplantados, enquanto reduzindo ou minimizando possíveis efeitos secundários pulmonares.
ENSAIO DE ARTRITE (AA) INDUZIDA POR ADJUVANTE EM RATOS O modelo de artrite induzida por adjuvante em ratos é um modelo animal para artrite reumatoide humana.
Ratos Lewis machos (150-175 g; Harlan, n=8 por grupo de tratamento) foram imunizados na base do rabo com 100 pL de Mycobacterium butyricum 10 mg/mL recentemente triturado (Difco Laboratories) em adjuvante incompleto de Freund (sigma) . Os animais receberam uma dose uma vez ao dia do item em teste (em solução ou suspensão no veículo) ou do veículo apenas (polietilenoglicol 300, "PEG300") a partir do dia da imunização. Os volumes de suas patas traseiras foram medidos pelo deslocamento de água em um pletismómetro (Ugo Basile, Itália) . As medidas basais da pata foram obtidas antes do aparecimento da doença (entre o Dia 7 e Dia 10). As patas foram medidas três vezes por semana até o final do estudo no Dia 20 a 21. Todos os procedimentos envolvendo animais foram revistos e aprovados pela Comissão Institucional de Ética na utilização de Animais. 0 Exemplo 2 da presente invenção foi testado no ensaio de artrite induzida por adjuvante em ratos descrito acima, e os resultados são mostrados na Tabela 7. 0 composto desta invenção, conforme representado pelo Exemplo 2, no teste relatado, mostrou inibir a progressão da doença, conforme aferida por inchaço das patas no rato Lewis utilizando um esquema de administração oral profilática. _ TABELA 7_
ENSAIO DE COLITE INDUZIDA POR TRANSFERENCIA DE CÉLULAS T EM MURGANHOS O ensaio de colite induzida por transferência de células T em murganhos é um modelo animal para colite humana,
Foi induzida colite em murganhos CB-17 SCID pela transferência adotiva de células T CD4±CD4 5RBhigh separadas por FACS de murganhos BALB/c (3xlOb/murganho, i.p.). As atividades da doença foram monitoradas uma vez por semana nas 3 semanas iniciais e 3x/semana nas semanas subsequentes com base no peso corporal, fezes amolecidas ou diarreia e prolapso anorretal. Os animais receberam por via oral, em dias alternados, uma dose do item em teste ou do veículo, a partir do dia da transferência de células T. Os murganhos foram sacrificados 6 semanas depois da reconstituição de células T e analisados quanto à inflamação intestinal com base no exame histológico de tecidos do cólon corados com hematoxilina e eosina. Todos os procedimentos envolvendo animais foram revistos e aprovados pela Comissão Institucional de Ética na utilização de Animais. 0 Exemplo 2 foi testado no modelo descrito acima de colite induzida pela transferência de células T em murganhos, e os resultados são mostrados na Tabela 8. 0 composto desta invenção, conforme representado pelo Exemplo 2, no teste relatado, mostrou inibir a progressão da doença, conforme aferido pela menor perda de peso corporal ou aumento do peso corporal e redução na inflamação e dano, no ensaio de colite induzida por transferência de células T em murganhos. TABELA 8
ENSAIO NO MODELO DE LÚPUS ERITEMATOSO ESPONTÂNEO EM MURGANHOS MRL/lpr O modelo de lúpus eritematoso espontâneo em murganhos MRL/lpr é um modelo animal para lúpus eritematoso espontâneo.
Murganhos MRL/lpr machos (14 semanas de idade; Jackson Laboratories; n=12-13) receberam por via oral uma dose do Exemplo 2 (em solução no veículo) ou do veículo apenas (polietilenoglicol 300), duas vezes por semana por 11 semanas a partir do Dia 0. Os níveis proteicos na urina (por Albustix) foram medidos no Dia 0 e por todo o estudo. A Tabela 9 indica a percentagem de murganhos em cada grupo de tratamento que demonstrou níveis elevados de proteinúria (acima de 100 mg/dL) em 25 semanas de idade. Grupos adicionais de murganhos receberam uma dose oral diária de dexametasona (Dex), seja independentemente ou em combinação com a administração duas vezes por semana do Exemplo 2. Os níveis proteicos na urina (por Albustix) foram medidos no Dia 0 e por todo o estudo. A Tabela 9 indica a percentagem de murganhos em cada grupo de tratamento que demonstrou níveis elevados de proteinúria (acima de 100 mg/dL) em 24 semanas de idade. Todos os procedimentos envolvendo animais foram revistos e aprovados pela Comissão Institucional de Ética na utilização da Animais. 0 Exemplo 2 foi testado no ensaio descrito acima com o modelo de lúpus eritematoso espontâneo em murganhos MRL/lpr, e os resultados são mostrados na Tabela 9. 0 composto desta invenção, conforme representado pelo Exemplo 2, no teste relatado, mostrou inibir a progressão da doença, conforme aferido por uma percentagem mais baixa de murganhos com nível de proteinúria acima de 100 mg/dL. TABELA 9
0 Exemplo 2 e dexametasona (Dex), seja independentemente ou em combinação, foram testados no ensaio descrito acima com o modelo de lúpus eritematoso espontâneo em murganhos MRL/lpr, e os resultados são mostrados na Tabela 10. Tanto o composto desta invenção, conforme representado pelo Exemplo 2, como a dexametasona, no teste relatado, mostraram inibir a progressão da doença, como aferido por uma percentagem mais baixa de murganhos com nível de proteinúria acima de 100 mg/rnL. Neste teste, nenhum murganho que recebeu a combinação do Exemplo 2 e dexametasona apresentou nível de proteinúria acima de 100 mg,/mL. TABELA 10
DlFRATOMETRIA DE RAIOS-X EM CRISTAL ÚNICO
Os dados do cristal único foram recolhidos em um sistema Bruker-AXS APEX2 CCD utilizando radiação Cu Κα (λ= 1,5418 Á). A indexação e o processamento dos dados medidos de intensidade foram realizados com a suite de programas de softwares APEX2. Quando indicado, os cristais foram arrefecidos na corrente fria de um sistema Cryo de Oxford durante a recolha de dados. As estruturas foram resolvidas pelos métodos diretos e refinadas com base nos reflexos observados utilizando o programa SHELXTL. Os parâmetros derivados (coordenadas e fatores de temperatura) foram refinados através dos quadros mínimos da matriz completa. A função minimizada nos refinamentos foi Ew (]F0 ] | Fc |)2. R é definido como Σ j [F0| [Fc| j/Σ |F01 enquanto Rv = [Σν(|F0[ |Fc|)2/Zw IF012]1/2, onde é uma função de ponderação apropriada com base em nas intensidades observadas. Tipicamente, todos os átomos que não eram de H foram refinados anisotropicamente e todos os átomos de H, além daqueles ligados a átomos de N e 0, foram calculados por métodos geométricos e refinados utilizando um modelo conhecido como riding model.
DlFRATOMETRIA DE RAIOS-X EM PÓ
Os dados de difração de raios-X em pó (PXRD) foram obtidos utilizando um goniómetro de plataforma qui manual Bruker GADDS (Sistema de Difração Deteção de Área Geral). Amostras de pó foram colocadas em capilares de paredes finas de vidro com 0,7mm de diâmetro; os capilares foram rodados durante a recolha de dados. A distância da amostra para o detetor foi mantida em 17 cm. Os dados foram recolhidos com radiação Cu Κα (λ = 1,5418 Ã) na faixa de 2,5 < 2Θ < 35° com tempo de exposição da amostra de 600 segundos.
DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO
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Claims (13)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Composto de Fórmula (I) :
    (I) e/ou um sal do mesmo; em que R é -OH ou -0P(0)(0H)2.
  2. 2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal do mesmo, em que R é -OH.
  3. 3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal do mesmo, em que R é -0P(0)(0H)2.
  4. 4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal do mesmo, que tem a estrutura:
  5. 5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal do mesmo, que tem a estrutura:
  6. 6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, ou um sal do mesmo, em que o referido composto ou o referido sal é um sólido cristalino.
  7. 7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal do mesmo, que tem a estrutura:
  8. 8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal do mesmo, que tem a estrutura:
  9. 9. Composição farmacêutica que compreende um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e um veículo farmaceuticamente aceitável.
  10. 10. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou um sal do mesmo, para utilização em terapia.
  11. 11. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para utilização no tratamento de uma doença ou transtorno associado com a atividade do recetor SlPi acoplado à proteína G.
  12. 12. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para utilização no tratamento de uma doença autoimune ou uma doença inflamatória crónica.
  13. 13. Composto, de acordo com a reivindicação 12, em que a dita doença autoimune ou doença inflamatória crónica é selecionada de entre lúpus, esclerose múltipla, doença inflamatória intestinal e artrite reumatoide.
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