RS55703B1 - Biciklična jedinjenja - Google Patents

Description

Predmetni pronalazak se generalno odnosi na biciklična jedinjenja korisna kao SIPi agonisti. Ovde su obezbedjena biciklična jedinjenja, kompozicije koje sadrže takva jedinjenja, i takva jedinjenja za primenu u terapiji. Predmetni pronalazak dalje se odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže najmanje jedno jedinjenje prema predmetnom pronalasku i koje su korisne za lečenje stanja povezana sa modulacijom SIPi, poput autoimunih bolesti i vaskularne bolesti.

Sfingozin-1-fosfat (S1P) je cviterjonski lizofosfolipidni metabolit sfingozina (Sph), koji sa druge strane potiče od enzimskog cepanja ceramida. Enzimska fosforilacija Sph sa dve kinaze (SphKl i SphK2) dovodi do produkcije S1P uglavnom iz eritrocita, ali takodje iz izvora otpornog na zračenje, moguće limfnog endotela. (Pappu, R. et al., Science, 316:295-298 (2007)). Prvobitno se mislilo da funkcioniše samo kao intraćelijski signalni molekul, S1P je zatim identifikovan kao ligand sa visokim afinitetom za pet pripadnika diferencijacionih gena endotela (EDG) klase G-protein spregnutih receptora (GPCR-i) nazvanih SIPi ili SIPI, S1P2ili S1P2, SIP3ili S1P3, S1P4ili S1P4, i S1P5ili S1P5 (ranije zvanih EDG-1, EDG-5, EDG-3, EDG-6, i EDG-8, redom) (Chun, J. et al., Pharmacological Rev., 62:579-587 (2010)). Interakcija SIP sa SIP receptorima igra fundamentalnu fiziološku ulogu u velikom broju procesa uključujući ćelijsku proliferaciju, ćelijsku morfologiju, invaziju tumorskih ćelija, angiogenezu, tumorogenezu, preuredjivanje citoskeleta, vaskularni razvoj, i migraciju limfocita (Olivera, A. et al., Adv. Exp. Med. Biol, 716:123-142 (2011)). SIP receptori su stoga dobre mete za širok spektar terapeutskih aplikacija poput inhibicije rasta tumora, vaskularnog oboljenja, i autoimunih bolesti.

Medju pet SIP receptora, SIPi ima široku distribuciju. On je dominantan član porodice izražen na limfocitima i igra važnu ulogu u migraciji limfocita. Potrebna je interakcija SIP sa njegovim receptorom SIPi za izlazak imunih ćelija iz limfnih organa (kao što je timus i limfni čvorovi) u limfne sudove. Nishodna regulacija SIPi receptora (koja se može postići kroz delovanje agonistima SIPi preko internalizacije receptora) remeti migraciju limfocita i njihovo udomljenje u različitim tkivima. Ovo rezultira u sekvestraciji limfocita u limfnim organima smanjujući broj migrirajućih limfocita koji su sposobni da migriraju do zahvaćenih tkiva. Razvoj modulirajućeg agensa SIPi receptora koji suzbija limfocitnu migraciju do ciljanih mesta povezan je sa autoimunim i aberantnim inflamatornim procesima, može biti efikasan u brojnim autoimunim i inflamatornim stanjima bolesti.

Prijave koje slede opisale su jedinjenja kao agoniste SIPi: WO 03/061567 (Američka objava patenta broj 2005/0070506), WO 03/062248 (Američki patent br. 7,351,725), WO 03/062252 (Američki patent br. 7,479,504), WO 03/073986 (Američki patent br. 7,309,721), WO 03/105771, WO 05/058848, WO 05/000833, WO 05/082089 (U.S. Patentna Publikacija No. 2007/0203100), WO 06/047195, WO 06/100633, WO 06/115188, WO 06/131336, WO 2007/024922, WO 07/109330, WO 07/116866, WO 08/023783 (U.S. Patentna Publikacija No. 2008/0200535), WO 08/029370, WO 08/074820, WO 08/079382, WO 08/114157, WO 09/043889, WO 09/057079, i američki patent br. 6,069,143. Videti takodje Hale et al., J. Med. Chem., 47:6662 (2004).

Ostaje potreba za jedinjenjima korisnim kao agonisti SIPi i koja još imaju selektivnost za SIP3(receptor). Nadalje, još uvek ostaje potreba za jedinjenjima korisnim kao agonistima SIPi koja imaju selektivnost za SIP3i takodje imaju minimale ili nikakve neželjene pulmonalne efekte.

Podnosioci su našli snažna jedinjenja koja imaju aktivnost kao agonisti SIPi. Nadalje, podnosioci su našli jedinjenja koja imaju aktivnost kao agonisti SIPi i selektivni su za SIP3. Još dalje, podnosioci su našli jedinjenja koja imaju aktivnost kao SIPi agonisti, selektivni su za SIP3, i imaju minimalne ili nikakve neželjene pulmonarne efekte. Ova jedinjenja su obezbedjena da se koriste kao farmaceutska sredstva sa željenom stabilnošću, biološkom raspoloživošću, terapeutskim indeksom, i vrednostima toksičnosti koji su važni za njihovu upotrebu u vidu lekova.

REZIME PREDMETNOG PRONALASKA

Ovaj predmetni pronalazak obezbedjuje biciklična jedinjenja, koja su korisna kao modulatori aktivnosti SIPi, uključujući soli tih jedinjenja.

Ovaj predmetni pronalazak takodje obezbedjuje farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje Formule (I) i/ili farmaceutski prihvatljivu so tog jedinjenja; i farmaceutski prihvatljiv nosač.

Ovaj predmetni pronalazak takodje obezbedjuje jedinjenje Formula (I) i/ili farmaceutski prihvatljivu so tog jedinjenja za primenu u lečenju bolesti ili poremećaja povezanih sa aktivnošću G-protein-spregnutog receptora SIPi.

Ovaj predmetni pronalazak takodje obezbedjuje postupke i intermedijere za izradu jedinjenja Formule (I) i/ili soli tog jedinjenja.

Ovaj predmetni pronalazak takodje obezbedjuje jedinjenje Formule (I) i/ili farmaceutski prihvatljivu so tog jedinjenja, za primenu u terapiji.

Ovaj predmetni pronalazak takodje obezbedjuje upotrebu jedinjenja Formule (I) i/ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja, za proizvodnju leka za lečenje ili profilaksu SIPi receptor-povezanih stanja, kao što su autoimune i vaskularne bolesti.

Jedinjenja Formule (I) i kompozicije koje sadrže jedinjenja Formule (I) mogu biti korišćena za tretman, prevenciju, ili lečenje različitih SIPi povezanih stanja. Farmaceutske kompozicije sadrže ova jedinjenja koja su korisna u lečenju, prevenciji, ili usporavanju progresije bolesti ili poremećaja u različitim terapeutskim oblastima, kao što su autoimune i vaskularne bolesti.

Ove i druge karakteristike predmetnog pronalaska biće navedene u proširenom obliku u nastavku predmetne objave.

KRATAK OPIS NACRTA

Predmetni pronalazak je ilustrovan pozivanjem na priložene nacrte opisane u nastavku. FIG. 1 prikazuje eksperimentalne i simulirane PXRD obrasce (CuKa X=1.5418A na približno 25 °C) N-l Oblika jedinjenja Primera 2. FIG. 2 prikazuje eksperimentalne i simulirane PXRD obrasce (CuKaX= 1.5418A5418A na približno 25 °C) monohidrat H-l Oblika mono-HCl so jedinjenja iz Primera 2. FIG. 3 prikazuje eksperimentalne i simulirane PXRD obrasce (CuKaX= 1.5418A5418A na približno 25 °C) monohidrat H-2 Oblika mono-HCl soli jedinjenja iz Primera 2. FIG. 4 prikazuje eksperimentalne i simulirane PXRD obrasce (CuKa A,=1.5418A na približno 25 °C) N-3 Oblika mono-HCl soli jedinjenja iz Primera 2. FIG. 5 prikazuje eksperimentalne i simulirane PXRD obrasce (CuKa X=1.5418A na približno 25 °C) N-4 Oblika mono-HCl soli jedinjenja iz Primera 2. FIG. 6 prikazuje eksperimentalne i simulirane PXRD obrasce (CuKa A,=1.5418A na približno 25 °C) monohidrat H-l Oblika soli hemi-L-jabučne kiseline jedinjenja iz Primera 2.

FTG. 7 prikazuje eksperimentalne i simulirane PXRD obrazce (CuKa A.=1.5418A na približno 25 °C) monohidrat H-l Oblika soli hemi-malonske kiseline jedinjenja iz Primera 2. FIG. 8 prikazuje eksperimentalne i simulirane PXRD obrasce (CuKa A,=1.5418A na približno 25 °C) 1/3-hidrat H.33-1 Oblika od soli 2/3 fosforne kiseline jedinjenja iz Primera 2. FIG. 9 prikazuje simulirani PXRD obrazac, izračunat na -70 °C (CuKa ^=1.5418A) N-1 Oblika soli /?-(+)-bademove kiseline jedinjenja iz Primera 2.

DETALJANOPIS

Prvi aspekt predmetnog pronalaska obezbedjuje najmanje jedno jedinjenje Formule

(I):

i/ili so tog jedinjenja; gde Rje -OH ili -OP(0)(OH)2.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenja Formule (I) i/ili soli tog jedinjenja, gde R je - OP(0)(OH)2. Jedinjenja ovog prikaza imaju strukturu Formule (II):

U ovom prikazu uključeni su jedinjenje Formule (Ha) i i jedinjenje Formule (Hb):

Jedinjenja Formula (II) i/ili soli tih jedinjenja, su korisna kao selektivni agonisti SIPi.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenja Formule (I) i/ili soli tih jedinjenja, gde Rje -OH. Jedinjenja ovog prikaza imaju strukturu Formule (III):

U ovom prikazu uključeni su jedinjenje Formule (lila) i i jedinjenje Formule (Illb):

Jedinjenja Formule (III) i/ili soli tih jedinjenja, su korisna kao prolekovi jedinjenja Formule (II). Jedinjenja Formule (III) se aktiviraju- in vivokroz fosforilaciju dajući jedinjenja Formule (II). Jedinjenja Formule (II) su aktivna kao selektivni agonisti SIPi.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenja Formula (I) i/ili soli tih jedinjenja, koja imaju strukturu Formule (IV):

gde Rje -OH ili -OP(0)(OH)2. U ovom prikazu su uključena jedinjenja Formule (Ha) i Formule (lila).

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenja Formule (I) i/ili soli tih jedinjenja, koja imaju strukturu Formule (V):

gde Rje -OH or -OP(0)(OH)2. U ovom prikazu su uključena jedinjenja Formule (Ilb) i Formule (Illb).

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (Ha) i/ili njegove soli.

Jedan prikaz jedinjenje Formule (Ilb) i/ili njegove soli.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (lila) i/ili njegove soli.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (Illb) i/ili njegove soli.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (Ha).

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (Ilb).

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (lila).

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (Illb).

Jedan prikaz obezbedjuje jednu ili više soli jedinjenja Formule (Ha).

Jedan prikaz obezbedjuje jednu ili više soli jedinjenja Formule (Ilb).

Jedan prikaz obezbedjuje jednu ili više soli jedinjenja Formule (lila).

Jedan prikaz obezbedjuje jednu ili više soli jedinjenja Formule (Illb).

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (III) kao so HC1.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (lila) kao so HC1.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (Illb) kao so HC1.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (III) kao so fosforne kiseline. Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (lila) kao so fosforne kiseline. Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (Illb) kao so fosforne kiseline. Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (Illb) kao so L-jabučne kiseline. Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (III) kao so malonske kiseline. Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (lila) ka so malonske kiseline.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (Illb) kao so malonske kiseline.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (TTTb)kao so /?-(+)-bademove kiseline.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (III) kao so izabranu od soli HC1, soli fosforne kiseline, i soli malonske kiseline.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (TTTa) kao so izabranu od soli HC1, soli fosforne kiseline, i soli malonske kiseline.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje Formule (Illb) kao so izabranu od soli HC1, soli fosforne kiseline, soli L-jabučne kiseline, soli malonske kiseline, i soli i?-(+)-bademove kiseline.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje izabrano od ((lR,3R)-l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metanola i ((1 R,3S)-1 -amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metanola; i soli tih jedinjenja.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje izabrano od ((lR,3R)-l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metil dihidrogen fosfata i ((lR,3S)-l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7, 8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metil dihidrogen fosfata; i soli tih jedinjenja.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje izabrano od ((1R,3R)-1-amino-3-((R)-6-heksi1-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metanol i ((lR,3R)-l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metil dihidrogen fosfat; i soli tih jedinjenja.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenje izabrano od ((lR,3S)-l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metanola i ((lR,3S)-l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metil dihidrogen fosfata; i soli tih jedinjenja.

Soli i Kristalni Oblici Jedinjenja iz Primera 2:

Oblik N-l Primera 2, Slobodna bazaU jednom prikazu, jedinjenje Primera 2

je obezbedjeno kao kristalni materijal koji sadrži prvu kristalnu formu. Prva kristalna forma jedinjenja Primera 2 sadrži čistu kristalnu formu označenu ovde kao "Oblik N-l" ili "N-l Oblik" Primera 2.

U jednom prikazu, N-l Oblik Primera 2 je okarakterisan parametrima jedinične ćelije približno jednakim sledećem:

Dimenzije Ćelije:

a = 5.54 A

b = 7.37A

c = 48.85 A

a = 90.0°

<p>= 90.0°

y = 90.0°

Prostorna grupa: P2i2i2i

Molekuli Primera 2/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji= 499 A<3>

Gustina (izračunato) = 1.098 g/cm<3>,

Gde su parametri jedinične ćelije Oblika N-l Primera 2 mereni na temperaturi od oko -70 °C.

U drugom prikazu, N-l Oblik Primera 2 je okarakterisan obrascem simulirane difrakcije praha X-zracima (PXRD) koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 1 i/ili posmatranim PXRD obrascem koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 1.

U još jednom prikazu, N-l Oblik Primera 2 je okarakterisan PXRD obrascem (CuKa A=1.5418A na temperaturi od oko 25 °C) koji sadrži četiri ili više, radije pet ili više, 20 vrednosti odabranih od: 3.6±0.2, 7.2±0.2, 12.5±0.2, 14.0±0.2, 15.0±0.2, 17.5±0.2, 19.4±0.2, 20.4±0.2, i 23.8±0.2, gde je PXRD obrazac Oblika N-1 meren na temperaturi od oko 25 °C.

U još jednom još daljem prikazu, N-l Oblik Primera 2 je značajno čist.

U još jednom daljem prikazu, N-l Oblik Primera 2 sadrži najmanje oko 90 tež.%, poželjno najmanje oko 95 tež.%, i još poželjnije najmanje oko 99 tež.%, na osnovu težine Oblika N-l Primera 2.

U još jednom prikazu, značajno čist Oblik N-1 Primera 2 ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 10%, poželjno manje od oko 5%, i još poželjnije manje od oko 2% ukupne površine pika eksperimetalno izmerenog PXRD obrasca koji nastaje od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu. Najpoželjnije, značajno čist kristalni Oblik N-1 Primera 2 ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 1% od ukupne površine pika eksperimentalno izmerenog PXRD obrasca koji nastaje od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu.

U drugom prikazu, kristalna forma Primera 2 sastoji se u suštini od Oblika N-l. Kristalna forma iz ovog prikaza može sadržati najmanje oko 90 tež.%, poželjno najmanje oko 95 tež.%o, i još poželjnije najmanje oko 99 tež.%, na osnovu težine kristalne forme, Oblik N-l Primera 2.

U još jednom prikazu, obezbedjenaje farmaceutska kompozicija koja uključuje Oblik N-l Primera 2; i najmanje jedan farmaceutski-prihvatljiv nosač i/ili diluent.

U još jednom prikazu, farmaceutska kompozicija sadrži suštinski čist Oblik N-lPrimera 2; i najmanje jedan farmaceutski-prihvatjiv nosač i/ili diluent.

U još jednom još daljem prikazu, terapeutski efikasna količina Oblika N-l Primera 2 je kombinovana sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem i/ili diluentom da obezbedi najmanje jednu farmaceutsku kompoziciju.

HC1 Soli Primera 2

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao so hlorovodonične kiseline.

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao so mono-hlorovodonične kiseline koja sadrži jedan mol HC1 po svakom molu Primera 2.

U jednom prikazu, so mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 je obezbedjen kao kristalni materijal koji sadrži jednu ili više kristalnih formi. Primeri pogodnih kristalnih formi soli mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 uključuju Oblike H-l, H-2, N-3, i N-4.

U jednom prikazu, so mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 je obezbedjena kao monohidrat.

U jednom prikazu, monohidrat so mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 je obezbedjen kao kristalni materijal koji sadrži jednu ili više kristalnih formi. Primeri pogodnih kristalnih formi monohidrata soli mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 uključuju Oblike H-l i H-2.

U jednom prikazu, monohidrat so mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 je obezbedjen u drugoj kristalnoj formi ovde označenenoj kao Oblik H-l" ili "H-l Oblik" Primera 2, so HC1. H-l Oblik Primera 2, HC1 so obuhvata jedan molekul vode i jedan molekul HC1 po svakom molekulu Primera 2.

U jednom prikazu, H-l Oblik so mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 je okarakterisan parametrima jedinične ćelije približno jednakim sledećim:

Dimenzije Ćelije:

a = 6.30 A

b = 6.42 A

c = 55.28 A

a = 90.0°

<p>= 90.0°

y = 90.0°

Prostorna grupa: P2i2i2i

Molekuli Primera 2/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/broj molekula u jediničnoj ćeliji= 560 A3

Gustina (izračunato) = 1.14 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika H-l soli mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 mereni na temperaturi od oko -70 °C.

U drugom prikazu, H-l Oblik soli mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 je okarakterisan obrascem simulirane difrakcije praha X-zracima (PXRD) koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 2 i/ili posmatranim PXRD obrascem koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 2.

U još jednom prikazu, monohidrat H-l oblik soli mono-HCl Primera 2 je okarakterisan PXRD obrascem (CuKa A=1.5418A na temperaturi od oko 25 °C) koji sadrži četiri ili više, poželjno pet ili više, 29 vrednosti odabranih od: 3.2±0.2, 6.4±0.2, 9.6±0.2, 13.9±0.2, 14.6±0.2, 17.0±0.2, 19.0±0.2, 20.1±0.2, 21.3±0.2, 21.9±0.2, i 24.5±0.2, gde je PXRD obrazac meren na temperaturi od oko 25 °C.

U još jednom još daljem prikazu, H-l Oblik soli mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 je značajno čist.

U još jednom daljem prikazu, H-l Oblik soli mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 sadrži najmanje oko 90 tež.%, poželjno najmanje oko 95 tež.%, i još poželjnije najmanje oko 99 tež.%, na osnovu težine druge kristalne forme, Oblik H-l Primera 2, HC1 so.

U još jednom prikazu, značajno čista druga kristalna forma ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 10%, poželjno manje od oko 5%, i još poželjinije manje od oko 2% ukupne površine pika eksperimentalno izmerenog PXRD obrasca koji nastaje od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu. Najpoželjnije, značajno čista druga kristalna forma ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 1% ukupne površine pika eksperimentalno izmerenog PXRD obrasca koji potiče od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu.

U još jednom prikazu, značajno čist Oblik N-1 Primera 2 ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 10%, poželjno manje od oko 5%, i još poželjnije manje od oko 2% ukupne površine pika eksperimetalno izmerenog PXRD obrasca koji nastaje od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu. Najpoželjnije, značajno čist kristalni Oblik N-1 Primera 2 ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 1% od ukupne površine pika eksperimentalno merenog PXRD obrasca koji nastaje od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu.

U drugom prikazu, druga kristalna forma soli mono-HCl Primer 2 sastoji se u suštini od Oblika H-l. Druga kristalna forma ovog prikaza može sadržati najmanje oko 90 tež.%, poželjno najmanje oko 95 tež.%, i još poželjnije najmanje oko 99 tež.%, na osnovu težine druge kristalne forme, Oblika H-l.

U jednom prikazu, monohidrat so mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 je obezbedjen u trećoj kristalnoj formi ovde označenoj kao "Oblik H-2" ili "H-2 Oblik" Primera 2, HC1 so. H-2 Oblik Primera 2, HC1 so sadrži jedan molekul vode i jedan molekul HC1 po svakom molekulu Primera 2.

U jednom prikazu, H-2 Oblik soli mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 je okarakterisan parametrima jedinične ćelije približno jednakim sledećem:

Dimenzije Ćelije:

a = 6.30 A

b = 6.43 A

c = 27.88 A

a = 90.0°

<p>= 96.0°

y = 90.0°

Prostorna grupa: P2i

Molekuli Primera 2/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/broj molekula u jediničnoj ćeliji= 562 A3

Gustina (izračunato) = 1.135 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije H-2 Oblika Primera 2, soli HC1 mereni na temperaturi od oko -70 °C.

U drugom prikazu, H-2 Oblik Primera 2, so HC1 je okarakterisan obrascem simulirane difrakcije praha X-zracima (PXRD) koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 3 i/ili posmatranim PXRD obrascem koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 3.

U još jednom prikazu, monohidrat so H-2 oblik mono-HCl Primera 2 je okarakterisan PXRD obrascem (CuKa A=1.5418A na temperaturi od oko 25 °C) koji sadrži četiri ili više, poželjno pet ili više, 20 vrednosti odabranih od: 3.2±0.2, 6.4±0.2, 9.6±0.2, 14.1±0.2, 15.2±0.2, 16.8±0.2, 18.8±0.2, 20.2±0.2, 21.3±0.2, 22.6±0.2, i 26.6±0.2, gde je PXRD obrazac meren na temperaturi od oko 25 °C.

U još jednom još daljem prikazu, H-2 Oblik Primera 2, HC1X soje značajno čist.

U još jednom daljem prikazu, H-2 Oblik Primera 2, so HC1 sadrži najmanje oko 90 tež.%, poželjno najmanje oko 95 tež.%, i još poželjnije najmanje oko 99 tež.%, na osnovu težine trećeg kristalnog oblika.

U još jednom prikazu, značajno čist H-2 Oblik Primera 2, so HC1 ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 10%, poželjno manje od 5%>, i još poželjnije manje od oko 2% ukupne površine eksperimentalno merenog PXRD obrascem koji nastaje od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu. Najpoželjnije, značajno kristalni H-2 Oblik Primera 2, HC1 so ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 1% ukupne površine pika eksperimentalno izmerenog PXRD obrasca koji potiče od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu.

U drugom prikazu, treća kristalna forma jedinjenja Primera 2 se u suštini sastoji od H-2 Oblika Primera 2, HC1 so. Treća kristalna forma ovog prikaza može sadržati najmanje oko 90 tež.%o, poželjno najmanje oko 95 tež.%, i još poželjnije najmanje oko 99 tež.%, na osnovu težine treće kristalne forme.

U jednom prikazu, so mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 je obezbedjena kao čist kristalni materijal koji sadrži jednu ili više kristalnih formi. Primeri pogodnih kristalnih formi čiste soli mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 uključuju Forme N-3 i N-4.

U jednom prikazu, čista so mono-hlorovodonične kiseline Primera 2 je obezbedjena u četvrtoj kristalnoj formi ovde označenoj kao "Oblik N-3" ili "N-3 Oblik" Primera 2, HC1 so. N-3 Oblik Primera 2, HC1 so sadrži jedan molekul HC1 po svakom molekulu Primera 2.

U jednom prikazu, N-3 Oblik HC1 soli Primera 2 je okarakterisan parametrima jedinične ćelije približno jednakim sledećem:

Dimenzije Ćelije:

a = 5.98 A

b = 7.24 A

c = 25.74 A

a = 90.0° 13 = 91.7°

y = 90.0°

Prostorna grupa: P2i

Molekuli Primera 2/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/broj molekula u jediničnoj ćeliji= 556 A3

Gustina (izračunato) = 1.092 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika N-3 HC1 soli Primera 2 mereni na temperaturi od oko 27 °C.

U jednom prikazu, N-3 Oblik HC1 soli Primera 2 je okarakterisan parametrima jedinične ćelije približno jednakim sledećem:

Dimenzije Ćelije:

a = 5.93 A

b = 7.20 A

c = 25.24 A

a = 90.0°

<p>= 90.2°

y = 90.0°

Prostorna grupa: P2i

Molekuli Primera 2/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/broj molekula u jediničnoj ćeliji= 538 A3

Gustina (izračunato) = 1.128 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika N-3 soli HC1 Primera 2 mereni na temperaturi od oko -70 °C.

U drugom prikazu, N-3 Oblik Primera 2, so HC1 je okarakterisana obrascem simulirane difrakcije praha X-zracima (PXRD) koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 4 i/ili posmatranim PXRD obrascem koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 4.

U drugom prikazu, N-l Oblik Primera 2 je okarakterisan obrascem simulirane difrakcije praha X-zracima (PXRD) koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 1 i/ili posmatranim PXRD obrascem koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 1.

U još jednom prikazu, N-3 oblik soli mono-HCl Primera 2 okarakterisan je PXRD obrascem (CuKa X=1.5418A na temperaturi od oko 25 °C) sadrži četiri ili više, poželjno pet ili više, 20 vrednosti odabranih od: 3.4±0.2, 6.9±0.2, 10.4±0.2, 12.7±0.2, 14.0±0.2, 16.1±0.2, 19.7±0.2, 20.6±0.2, 22.1±0.2, i 24.0±0.2, gde je PXRD obrazac meren na temperaturi od oko 25 °C.

U još jednom još daljem prikazu, N-3 Oblik HC1 so Primera 2 je značajno čist.

U još jednom daljem prikazu, N-3 Oblik soli HC1 Primera 2 sadrži najmanje oko 90 tež.%, poželjno najmanje oko 95 tež.%, i još poželjnije najmanje 99 tež.%, na osnovu težine četvrte kristalne forme, Oblika N-3.

U još jednom prikazu, značajno čist Oblik N-3 soli HC1 Primera 2 ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 10%, poželjno manje od oko 5%, i još poželjnije manje od oko 2% ukupne površine pika eksperimentalno izmerenog PXRD obrasca koji proizilazi od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu. Najpoželjnije, suštinski kristalni Oblik N-3 HC1 so Primera 2 ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 1%> ukupne površine pika eksperimentalno izmerenog PXRD obrasca koji potiče od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu.

U još jednom još daljem prikazu, Oblik N-3 HC1 soli Primera 2 je značajno čist.

U drugom prikazu, kristalna forma Primera 2 se u suštini sastoji od Oblika N-3. Kristalna forma ovog prikaza može sadržati najmanje oko 90 tež.%, poželjno najmanje oko 95 tež.%, i još poželjnije najmanje oko 99 tež.%, na osnovu težine kristalne forme, Oblik N-3 Primera 2.

U još jednom prikazu, farmaceutska kompozicija sadrži Oblik N-3 Primera 2; i najmanje jedan farmaceutski-prihvatljiv nosač i/ili diluent.

U još jednom prikazu, farmaceutska kompozicija sadrži značajno čist Oblik N-3 Primera 2; i najmanje jedan farmaceutski-prihvatljiv nosač i/ili diluent.

U još jednom još daljem prikazu, terapijski efikasna količina Oblika N-3 Primera 2 je kombinovana sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem i/ili diluentom da obezbedi najmanje jednu farmaceutsku kompoziciju.

U drugom prikazu, četvrta kristalna forma soli HC1 Primera 2 suštinski se sastoji od Oblika N-3. Četvrta kristalna forma ovog primera može sadržati najmanje oko 90 tež.%, poželjno najmanje oko 95 tež.%, i još poželjnije najmanje oko 99 tež.%, na osnovu težine četvrte kristalne forme, Oblik N-3.

U jednom prikazu, čista mono-hlorovodonična kiselina so Primera 2 je obezbedjena u petoj kristalnoj formi ovde označenoj kao "Oblik N-4" ili "N-4 Oblik" Primera 2, HC1 so. N-4 Oblik Primera 2, HC1 so sadrži jedan molekul HC1 po svakom molekulu Primera 2.

U jednom prikazu, N-4 Oblik soli HC1 Primera 2 je okarakterisan parametrima jedinične ćelije približno jednakim sledećem:

Dimenzije Ćelije:

a = 5.95 A

b = 7.27 A

c = 51.60 A

a = 90.0°

<p>= 90.0°

y = 90.0°

Prostorna grupa: P2i2i2i

Molekuli Primera 2/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/broj molekula u jediničnoj ćeliji= 558 A<3>

Gustina (izračunato) = 1.088 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika N-4 Primera 2, HC1 so mereni na temperaturi od oko 27 °C.

U jednom prikazu, N-4 Oblik soli HC1 Primera 2 je okarakterisan parametrima jedinične ćelije približno jednakim sledećem:

Dimenzije Ćelije:

a = 5.92 A

b = 7.25 A

c = 50.61 A

a = 90.0°

p = 90.0°

y = 90.0°

Prostorna grupa: P2i2i2i

Molekuli Primera 2/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/broj molekula u jediničnoj ćeliji= 543 A3

Gustina (izračunato) = 1.119 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika N-4 Primera 2, HC1 so mereni na temperaturi od oko -70 °C.

U drugom prikazu, N-4 Oblik Primera 2, HC1 soje okarakterisan obrascem simulirane difrakcije praha X-zracima (PXRD) koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 5 i/ili posmatranim PXRD obrascem koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 5.

U još jednom prikazu, N-4 Oblik mono-HCl soli Primera 2 je okarakterisan PXRD obrascem (CuKa X=1.5418A na temperaturi od oko 25 °C) koji sadrži četiri ili više, poželjno pet ili više, 20 vrednosti odabranih od: 3.4±0.2, 6.9±0.2, 10.3±0.2, 12.7±0.2, 13.3±0.2, 15.0±0.2, 19.7±0.2,20.4±0.2,21.2±0.2,22.9±0.2, i 24.9±0.2, gde je PXRD obrazac meren na temperaturi od oko 25 °C.

U još jednom još daljem prikazu, N-4 Oblik HC1 soli Primer 2 je značajno čist.

U još jednom daljem prikazu, N-4 Obli HC1 so Primera 2 sadrži najmanje oko 90 tež.%, poželjno najmanje oko 95 tež.%>, i još poželjnije najmanje oko 99 tež.%, na osnovu težine četvrte kristalne forme, Oblika N-4.

U još jednom prikazu, značajno čist Oblik N-4 HC1 soli Primera 2 ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 10%, poželjno manje od oko 5%, i još poželjnije manje od oko 2% ukupne površine pika eksperimentalno izmerenog PXRD obrasca koji nastaje od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu. Najpoželjnije, suštinski kristalni Oblik N-4 HC1 so Primera 2 ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 1% ukupne površine pika eksperimentalno izmerenog PXRD obrascem koji potiče od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu.

U još jednom još daljem prikazu, Oblik N-4 HC1 so Primera 2 je značajno čist.

U drugom prikazu, kristalna forma Primera 2 suštinski sadrži Oblik N-4. Kristalna forma ovog prikaza može sadržati najmanje oko 90 tež.%, poželjno najmanje oko 95 tež.%, i još poželjnije najmanje oko 99 tež.%, na osnovu težine kristalne forme, Oblika N-4 Primera 2.

U još jednom prikazu, farmaceutska kompozicija je obezbedjena obuhvatajući Oblik N-4 Primera 2; i najmanje jedan farmaceutski-prihvatljiv nosač i/ili diluent.

U još jednom prikazu, farmaceutska kompozicija sadrži značajno čist Oblik N-4 Primera 2; i najmanje jedan farmaceutski-prihvatljiv nosač i/ili diluent.

U još jednom još daljem prikazu, terapijski efikasna količina Oblika N-4 Primera 2 je kombinovana sa najmanje jednim farmaceutski-prihvatljivim nosačem i/ili diluentom da obezbedi najmanje jednu farmaceutsku kompoziciju.

U jednom prikazu, kompozicija je obezbedjena obuhvatajući Oblik N-3, Oblik N-4, ili njihovu smešu čiste soli mono-hlorovodonične kiseline Primera 2.

So L-Jabučne Kiseline

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao so L-jabučne kiseline.

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao so hemi-L-jabučne kiseline koja sadrži 0.5 mola L-jabučne kiselina po svakom molu Primera 2.

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao monohidrat so hemi-L-jabučne kiseline koji sadrži jedan mol vode i 0.5 mola L-jabučne kiseline po svakom molu Primera 2.

U jednom prikazu, monohidrat so hemi-L-jabučne kiseline Primera 2 obezbedjen je u šestoj kristalnoj formi ovde označenom kao "Oblik H-l" ili "H-l Oblik " Primera 2, so hemi-L-jabučne kiseline. H-l Oblik Primera 2, so hemi-L-jabučne kiseline sadrži jedan molekul vode i 0.5 molekula L-jabučne kiseline po svakom molekulu Primera 2.

U jednom prikazu, H-l Oblik so hemi-L-jabučne kiseline Primera 2 je okarakterisan parametrima jedinične ćelije približno jednakim sledećem:

Dimenzije Ćelije:

a = 6.13 A

b= 13.83 A

c = 28.75 A

a = 103.4°

<p>= 94.0°

y = 92.6°

Prostorna grupa: Pl

Molekuli Primera 2/asimetrična jedinica: 4

Volume/broj molekula u jediničnoj ćeliji= 591 A<3>

Gustina (izračunato) = 1.165 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika H-l soli hemi-L-jabučne kiseline Primera 2 mereni na temperaturi od oko -70 °C.

U drugom prikazu, H-l oblik soli hemi-L-jabučne kiseline Primera 2 je okarakterisan obrascem simulirane difrakcije praha X-zracima (PXRD) koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 6 i/ili posmatranim PXRD obrascem koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 6.

U još jednom prikazu, H-l oblik soli hemi-L-jabučne kiseline Primera 2 je okarakterisan PXRD obrascem (CuKa X=1.5418A na temperaturi od oko 25 °C) koji sadrži četiri ili više, poželjno pet ili više, 29 vrednosti odabranih od: 3.2±0.2, 6.3±0.2, 9.5±0.2, 12.8±0.2, 14.3±0.2, 18.0±0.2, 22.4±0.2, i 24.8±0.2, gde je PXRD obrazac meren na temperaturi od oko 25 °C.

So Malonske Kiseline

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao so malonske kiseline.

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao so hemi-malonske kiseline koji sadrži 0.5 mola malonske kiseline po svakom molu Primera 2.

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao so monohidrat hemi-malonske kiseline koji sadrži jedan mol vode i 0.5 mola malonske kiseline po svakom molu Primera 2.

U jednom prikazu, so monohidrat hemi-malonske kiseline Primera 2 je obezbedjen u sedmoj kristalnoj formi ovde označenoj kao "Oblik H-l" ili "H-l Oblik" Primera 2, soli hemi-malonske kiseline. H-l Oblik Primera 2, so hemi malonske kiseline sadrži jedan molekul vode i 0.5 molekula malonske kiseline po svakom molekulu Primera 2.

U jednom prikazu, H-l Oblik soli hemi-malonske kiseline Primera 2 je okarakterisan parametrima jedinične ćelije približno jednakim sledećem:

Dimenzije Ćelije:

a = 14.73 A

b = 6.27 A

c = 25.36 A

a = 90.0°

p = 93.8-

y = 90.0°

Prostorna grupa: P2i

Molekuli Primera 2/asimetrična jedinica: 2

Zapremina/broj molekula u jediničnoj ćeliji= 584 A3

Gustina (izračunato) = 1.137 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika H-l mereni na temperaturi od oko -70 °C.

U jednom prikazu, H-l oblik soli hemi-malonske kiseline Primera 2 je okarakterisan obrascem simulirane difrakcije praha X-zracima (PXRD) koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 7 i/ili posmatranim PXRD obrascem koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 7.

U još jednom prikazu, H-l oblik soli hemi-malonske kiseline Primera 2 je okarakterisan PXRD obrascem (CuKa A=1.5418A na temperaturi od oko 25 °C) koji sadrži četiri ili više, poželjno pet ili više, 20 vrednosti odabranih od: 3.5±0.2, 7.1±0.2, 12.3±0.2, 13.5±0.2, 15.5±0.2, 17.6±0.2, 19.1±0.2, 20.2±0.2, 20.6±0.2, 21.7±0.2, i 23.8±0.2, gde je PXRD obrazac meren na temperaturi od oko 25 °C.

So Fosforne Kiseline

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao so fosforne kiseline.

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao 1/3-hidrat soli fosforne kiseline.

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao so fosforne kiseline koja sadrži 0.67 mola fosforne kiseline po svakom molu Primera 2.

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao 1/3-hidrat soli fosforne kiseline koji sadrži 0.33 mola vode i 0.67 mola fosforne kiseline po svakom molu Primera 2.

U jednom prikazu, 1/3-hidrat soli fosforne kiseline Primera 2 je obezbedjen u osmoj kristalnoj formi ovde označenoj kao "Oblik H.33-1" ili "H.33-1 Oblik" Primera 2, so fosforne kiseline. H.33-1 Oblik Primera 2, so fosforne kiseline sadrži 0.33 molekula vode i 0.67 molekula fosforne kiseline po svakom molekulu Primera 2.

U jednom prikazu, H.33-1 Oblik je okarakterisan parametrima jedinične ćelije približno jednak sledećem:

Dimenzije Ćelije:

a=59.12 A

b = 6.89A

c = 16.62 A

a = 90.0°

p = 94.7°

y = 90.0°

Prostorna grupa: C2

Molekuli Primera 2/asimetrična jedinica: 3

Zapremina /broj molekula u jediničnoj ćeliji= 563 A<3>

Gustina (izračunato) = 1.181 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika H.33-1 mereni na temperaturi od oko -70 °C.

U jednom prikazu, H.33-1 oblik soli 1/3-fosforne kiseline Primera 2 je okarakterisan obrascem simulirane difrakcije praha X-zracima (PXRD) koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 8 i/ili posmatranim PXRD obrascem koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 8.

U još jednom prikazu, H.33-1 oblik soli 1/3-fosforne kiseline Primera 2 je okarakterisan PXRD obrascem (CuKa X=1.5418A na temperaturi od oko 25 °C) koji sadrži četiri ili više, poželjno pet ili više, 20 vrednosti izabranih od: 2.9±0.2, 5.9±0.2, 8.8±0.2, 13.9±0.2, 15.8±0.2,16.7±0.2, 17.4±0.2, 18.4±0.2, 19.4±0.2, i 20.4±0.2, gde je PXRD obrazac meren na temperaturi od oko 25 °C.

So R-(+)-BademoveKiseline

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao so R-(+)-bademove kiseline. U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao monohidrat R-(+)-bademove kiseline.

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao so R-(+)-bademove kiseline koji sadrži jedan mol R-(+)-bademove kiseline po svakom molu Primera 2.

U jednom prikazu, Primer 2 je obezbedjen kao so monohidrat R-(+)-bademove kiseline koji sadrži jedan mol vode i jedan mol R-(+)-bademove kiseline po svakom molu Peimera 2.

U jednom prikazu, so monohidrat R-(+)-bademove kiseline Primera 2 je obezbedjena u devetoj kristalnoj formi ovde označenoj kao " Oblik N-l" ili "N-1 Oblik " Primera 2, so R-(+)-bademove kiseline. N-l Oblik Primera 2, so R-(+)-bademove kiseline sadrži jedan molekul vode ijedan molekul R-(+)-bademove kiseline po svakom molekulu Primera 2.

U jednom prikazu, N-l Oblik Primera 2, so R-(+)-bademove kiseline je okarakterisan parametrima jedinične ćelije približno jednakim sledećem:

Dimenzije Ćelije:

a = 6.31 A b= 10.03 A c = 21.79 A a = 98.2° p = 91.3° 7 = 91.7°

Prostorna grupa: Pl

Molekuli Primera 2/asimetrična jedinica: 2

Zapremina /broj molekula u jediničnoj ćeliji= 683 A<3>

Gustina (izračunato) = 1.171 g/cm<3>,

gde su u parametrima jedinične ćelije Obik N-l Primera 2, so R-(+)-bademove kiseline mereni na temperaturi od oko -70 °C.

U drugom prikazu, N-l Oblik Primera 2, so R-(+)-bademove kiseline je okarakterisan obrascem simulirane difrakcije praha X-zracima (PXRD) koji je suštinski u skladu sa obrascem prikazanim na Slici 9.

U još jednom još daljem prikazu, N-l Oblik Primera 2, so R-(+)-bademove kiseline je značajno čist.

U još jednom daljem prikazu, N-l Oblik Primera 2, so R-(+)- bademove kiseline sadrži najmanje oko 90 tež.%, poželjno najmanje oko 95 tež.%, i još poželjnije najmanje oko 99 tež.%o, na osnovu težine Oblika N-l Primera 2, soli R-(+)-bademove kiseline.

U još jednom daljem prikazu, značajno čist Oblik N-l Primera 2, so R-(+)- bademove kiseline ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 10%, poželjno manje od oko 5%>, i još poželjnije manje od oko 2% ukupne površine pika eksperimentalno izmerenog PXRD obrasca koji nastaje od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu. Najpoželjnije, suštinski čist kristalni Oblik N-l Primera 2, so R-(+)-bademove kiseline ima suštinski čistu faznu homogenost sa manje od oko 1% ukupne površine pika eksperimentalno izmerenog PXRD obrascem koji potiče od pikova koji su odsutni u simuliranom PXRD obrascu.

U drugom prikazu, kristalna forma Primer 2, so R-(+)- bademove kiseline suštinski se sastoji od Oblik N-l. Kristalna forma ovog prikaza može sadržati najmanje oko 90 tež.%>, poželjno najmanje oko 95 tež.%, i još poželjnije najmanje oko 99 tež.%, na osnovu težine kristalne forme, Oblika N-l Primera 2, so R-(+)-bademove kiseline.

U još jednom prikazu, farmaceutska kompozicija je obezbedjena obuhvatajući Oblik N-l Primera 2, so R-(+)- bademove kiseline; i najmanje jedan farmaceutski-prihvatljiv nosač i/ili diluent.

U još jednom prikazu, farmaceutska kompozicija sadrži značajno čist Oblik N-l Primera 2, so R-(+)-bademove kiselinet; i najmanje jedan farmaceutski-prihvatljiv nosač i/ili diluent.

U još jednom daljem prikazu, terapijski efikasna količina Oblika N-l Primera 2, so R-(+)- bademove kiseline je kombinovana sa najmanje jednim farmaceutski-prihvatljivim nosačem i/ili diluentom da bezbedi najmanje jednu farmaceutsku kompoziciju.

DEFINICIJE

Karakteristike i prednosti predmetnog pronalaska mogu biti mnogo lakše razumljive prosečnom poznavaoci oblasti nakon čitanja sledećeg detaljnog opisa. Treba da se razume da odredjene karakteristike predmetnog pronalaska koje su, zbog jasnoće, opisane iznad i ispod u kontekstu odvojenih prikaza, mogu takodje da se kombinuju da formiraju jedan prikaz. Obrnuto, različite karakteristike predmetnog pronalaska koji su, zbog jasnoće, opisane u kontekstu jednog prikaza, mogu takodje da se kombinuju tako da formiraju njihove pod-kombinacije. Prikazi identifikovani ovde kao primer ili prioritet nameravaju da budu ilustrativni a ne ograničavajući.

Osim ako nije drugačije izričito navedeno, spominjanja u jednini može takodje da uključe i množinu. Na primer, "a" i "an" može se odnositi na jedan, ili jedan i više.

Kao što je ovde korišćeno, fraza "jedinjenja i/ili njihove soli" odnosi se na najmanje jedno jedinjenje, najmanje jednu so tog jedinjenja, ili njihovu kombinaciju. Na primer, jedinjenja Formule (I) i/ili njegove soli uključuje jedinjenje Formule (I); dva jedinjenja Formule (I); so jedinjenja Formule (I); jedinjenje Formule (I) ijedno ili više soli jedinjenja Formule (I); I dva ili više soli jedinjenja Formule (I).

Ukoliko nije drugačije naznačeno, bilo koji atom sa nezadovoljavajućim valencama pretpostavlja se da ima dovoljno vodonikovih atoma da zadovolji valence.

Ispod su definicije različitih termina koji se koriste da opišu predmetni pronalazak. Ove definicije se odnose na uslove kako su korišćeni kroz predmetnu specifikaciju (osim ako su drugačije ograničeni u specifičnim slučajevima) ili pojedinačno ili kao deo veće grupe.

U specifikaciji, grupe i supstituenti tih grupa mogu biti izabrani od strane prosečnog poznavaoca oblasti da obezbede stabilne grupe i jedinjenja.

Fraza "farmaceutski prihvatljiva" je ovde korišćena da označi ona jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili dozne oblike koji su, u okviru medicinske procene, pogodni za primenuu kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez preterane toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugog problema ili komplikacije, proporcionalno razumnom odnosu korist/rizik.

Jedinjenja Formule (I) mogu formirati soli koje su takodje u okviru predmetnog pronalaska. Ukoliko nije drugačije naznačeno, pozivanjem na inventivno jedinjenje se podrazumeva da uključuje i pozivanje na jednu ili više soli tog jedinjenja. Termin "so(li)" označava kisele i/ili bazne soli formirane sa neorganskim i/ili organskim kiselinama i bazama. Pored toga, termin "so(li)" može uključivati cviterjone (unutrašnje soli),npr.,kada jedinjenje Formule (I) sadrži obe grupe, baznu grupu, kao što je amin ili piridin ili imidazolov prsten, i kiselu grupu, kao što je karboksilna kiselina. Farmaceutski prihvatljive( t. j.,netoksične, fiziološki prihvatljive) soli su poželjne, kao što su, na primer, prihvatljive soli metala i amina u kojima katjon ne doprinosi značajno toksičnosti ili biološkoj aktivnosti soli. Medjutim, druge soli mogu biti korisne,npr.,u koracima izolovanja ili prečišćavanja i mogu da se koriste tokom pripreme, i tako su i posmatrane u okviru predmetnog pronalaska. Soli jedinjenja formule (I) mogu biti formirane, na primer, reakcijom jedinjenja Formule (I) sa količinom kiseline ili baze, kao što je ekvivalentna količina, u medijumu kao što je onaj u kome se so taloži ili u vodenom medijumu praćeno liofilizacijom.

Primeri kiselih adicionih soli uključuju acetate (kao što su oni formirani sa sirćetnom kiselinom il trihalosirćetnom kiselinom, na primer, trifluorosirćetnom kiselinom), adipate, alginate, askorbate, aspartate, benzoate, benzenesulfonate, bisulfate, borate, butirate, citrate, kamforate, kamforsulfonate, ciklopentanpropionate, diglukonate, dodecilsulfate, etansulfonate, fumarate, glukoheptanoate, glicerofosfate, hemisulfate, heptanoate, heksanoate, hidrohloride (formirane sa hlorovodoničnom kiselinom), hidrobromide (formirane sa vodonik bromidom), hidrojodide, maleate (formirane sa maleinskom kiselinom), 2-hidroksietansulfonate, laktate, metansulfonate (formirane sa metansulfonskom kiselinom), 2-naftalenesulfonate, nikotinate, nitrate, oksalate, pektinate, persulfate, 3-fenilpropionate, fosfate, pikrate, pivalate, propionate, salicilate, sukcinate, sulfate (kao što su oni formirani sa sumpornom kiselinom), sulfonate (kao što su oni ovde pomenuti), tartrate, tiocijanate, toluensulfonate kao što su tozilati, undekanoati, i slično.

Primeri baznih soli obuhvataju amonijum soli, soli alkalnih metala kao što su soli natrijuma, litijuma, i kalijuma; soli zemnoalkalnih metala kao što su soli kalcijuma i magnezijuma; soli barijuma, cinka, i aluminijuma; soli sa organskim bazama (na primer, organski amini) kao što su trialkilamini kao što je trietilamin, prokain, dibenzilamin, N-benzil-P-fenetilamin, 1-efenamin, N,N'-dibenziletilen-diamin, dehidroabietilamin, N-etilpiperidin, benzilamin, dicikloheksilamin ili slični farmaceutski prihvatljivi amini i soli sa amino kiselinama kao što su arginin, lizin i slično. Bazne grupe koje sadrže azotove grupe mogu biti kvaternizovane sa agensima kao što su niži alkil halidi (npr., metil, etil, propil, i butil hloridi, bromidi i jodidi), dialkil sulfati( npr.,dimetil, dietil, dibutil, i diamil sulfati), halidi dugog lanca{ npr.,decil, lauril, miristil i stearil hloridi, bromidi i jodidi), aralkil halidi npr{ npr.,benzil i fenetil bromidi), i drugi. Prioritetne soli uključuju monohidrohloridne, vodoniksulfatne, metansulfonatne, fosfatne ili nitratne soli.

Jedinjenja Formule (I) mogu biti obezbedjene kao amorfne čvrste supstance ili kristalne čvrste supstance. Može se koristiti liofilizacija da obezbedi jedinjenja Formule (I) kao čvrstu supstancu.

Dalje bi trebalo razumeti da solvati{ npr.,hidrati) Jedinjenja Formule (I) su takodje u okviru predmetnog pronalaska. Termin "solvat" označava fizičko udruživanje jedinjenje Formule (I) sa jednim ili više molekula rastvarača, bilo organski ili neorganski. Ova fizička asocijacija uključuje vezivanje vodonika. U nekim slučajevima solvat će biti podložan izolovanju, na primer kada su jedan ili više molekula rastvartača inkorporirani u kristalnu rešetku kristalne čvrste supstance. "Solvat" obuhvata obe i fazu- rastvora i izolabilne solvate. Primeri solvata uključuju hidrate, etanolate, metanolate, izopropanolate, acetonitril solvate, i etil acetat solvate. Postupci solvatacije su poznati u oblasti.

Različiti oblici prolekova su dobro poznati u oblasti i opisani su u:

a) Wermuth, CG. et al., The Practice of Medicinal Chemistrv, Chapter 31, Academic Press (1996); b) Bundgaard, H. ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985); c) Bundgaard, H., Chapter 5, "Design and Application of Prodrugs", Krogsgaard-Larsen, P. et al., eds., A Textbook of Drug Design and Development, str. 113-191, Harwood

Academic Publishers (1991); i

d) Testa, B. et al, Hydrolysis in Dug and Prodrug Metabolism, Wiley-VCH (2003).

Dodatno, jedinjenja Formule (I), nakon njihovog dobijanja, mogu biti izolovana i

prečišćena da se dobije kompozicija koja sadrži količinu po masi jednaku ili veću od 99% jedinjenja Formule (I) ("suštinski čist"), koja je onda korišćena ili formulisana kao što je ovde opisano. Takva "suštinski čista" jedinjenja Formule (I) su takodje razmatrana ovde kao deo predmetnog pronalaska.

"Stabilno jedinjenje" i "stabilna struktura" su namenjeni da ukažu na jedinjenje koje je dovoljno robusno, da iz reakcione smeše, preživi izolaciju do korisnog stepena čistoće, i da se formuliše u efikasno terapeutsko sredstvo. Predmetni pronalazak je namenjen da personalizuj e stabilna j edinj enj a.

"Terapijski efikasna količina" je namenjena da uključi količinu samog jedinjenja predmetnog pronalaska ili količinu kombinacije zahtevanog jedinjenja ili količinu jedinjenja predmetnog pronalaska kombinovanog sa drugim aktivnim sastojcima efikasnim da deluju kao agonisti SIPi, ili efikasnim za lečenje ili prevenciju autoimunih i/ili inflamatornih bolesnih stanja, kao što je multipla skleroza i reumatoidni artritis.

Kao što je ovde korišćeno, "lečenje" ili "tretman" pokrivaju tretman bolesnog-stanja kod sisara, posebno kod ljudi, i uključuju: (a) prevenciju bolesnog-stanja koje se javlja kod sisara, posebno, kada je takav sisar predisponiran za bolesno-stanje ali još uvek nije dijagnostifikovano da ga ima; (b) inhibiranje bolesnog-stanja,t. j.,zaustavljanjenjegovog razvoja; i/ili(c) olakšavanje stanja bolesti,t. j.,izazivanjeregresije stanja bolesti.

Jedinjenja predmetnog pronalaska su namenjena da uključe sve izotope atoma u okviru ovih jedinjenja. Izotopi uključuju atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Putem opšteg primera i bez ograničenja, izotopi vodonika uključuju deuterijum (D) i tricijum (T). Izotopi ugljenika uključuju<13>C i<14>C. Izotopski-obeležena jedinjenja predmetnog pronalaska mogu generalno biti dobijena konvencionalnim tehnikama znanim prosečnom poznavaocu oblasti ili procesima analognim onima opisanim ovde, korišćenjem odgovarajućeg izotopski-obeleženog reagensa umesto ne-obeleženog reagensa inače korišćenim(zaposlenim).

Jedinjenja u skladu sa Formulom (I) i/ili farmaceutski prihvatljive soli tih jedinjenja mogu biti administrirana na bilo koji način pogodan za stanje koje se tretira, što može da zavisi od potrebe za mesto-specifičnim tretmanom ili od količine jedinjenja Formule (I).

Takodje klasa farmaceutskih kompozicija obuhvaćena ovim predmetnim pronalaskom koja sadrže jedinjenje Formule (I) i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; i jedno ili više ne-toksičnih, farmaceutski-prihvatljivih nosača i/ili diluenata i/ili adjuvanasa (označenih ovde kolektivno kao "nosač" materijala) i, ako je potrebno, drugih aktivnih sastojaka. Jedinjenja Formule (I) mogu biti administrirana bilo kojim pogodnim putem, poželjno u obliku farmaceutske kompozicije prilagodjene tom putu, i u dozi efektivnoj za nameravani tretman. Jedinjenja i kompozicije predmetnog pronalaska mogu, na primer, biti administrirana oralno, mukozno, ili parentalno uključujući intravaskularno, intravenozno, intraperitonealno, subkutano, intramuskularno, i intrasternalno u formulacijama jedinične doze koja sadrži konvencionalne farmaceutski prihvatljive transportere, adjuvanse, i nosače. Na primer, farmaceutski transporter može sadržati mešavinu manitola ili laktoze i mikrokristalne celuloze. Smeša može sadržati dodatne komponente kao što su lubrikantni agens, npr., magnezijum stearat i agens za dezintegraciju kao što je krospovidon. Smeša transportera može biti punjena u želatinske kapsule ili komprimovana kao tableta. Farmaceutska kompozicija može biti administrirana u formi oralne doze ili infuzije, na primer.

Za oralnu administraciju, farmaceutska kompozicija može biti u obliku, na primer,

tablete, kapsule, tečne kapsule, suspenzije, ili tečnosti. Farmaceutska kompozicija poželjno je da bude napravljena u obliku jedinične doze koja sadrži odredjenu količinu aktivnog sastojka. Na primer, farmaceutska kompozicija može biti obezbedjena kao tableta ili kapsula koja sadrži količinu aktivnog sastojka u opsegu od oko 0.1 do 1000 mg, poželjno od oko 0.25 do 250 mg, i još poželjnije od oko 0.5 do 100 mg. Pogodna dnevna doza za čoveka ili drugog sisara može široko da varira u zavisnosti od stanja pacijenta i drugih faktora, ali, može biti odredjena i korišćenjem rutinskih metoda.

Bilo koja farmaceutska kompozicija razmatrana ovde može, na primer, biti dostavljena oralno preko bilo kojih prihvatljivih ili pogodnih oralnih preparata. Primeri oralnih priprema, uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, tabelete, pastile, lozenge, vodene i uljane suspenzije, disperzibilne praškove ili granule, emulzije, tvrde i meke kapsule, tečne kapsule, sirupe, i eliksire. Farmaceutske kompozicije namenjene za oralnu primenu mogu biti pripremljene prema bilo kojim metodama znanim u struci za proizvodnju farmaceutskih kompozicija namenjenim za oralnu administraciju. U cilju obezbedjivanja farmaceutski ukusnih preparata, farmaceutska kompozicija u skladu sa predmetnim pronalaskom može da sadrži barem jedan agens izabran od zasladjivača, agenasa za poboljšanje ukusa, agenasa bojenja, demulcenasa, antioksidanasa, i konzervanasa.

Tableta, na primer, može biti pripremljena mešanjem najmanje jednog jedinjenja Formule (I) i/ili najmanje jedne njegove farmaceutski prihvatljive soli sa najmanje jednim ne-tosičnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom pogodnim za proizvodnju tableta. Primeri ekscipijenasa uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, inertne diluente, kao što su, na primer, kalcijum karbonat, natrijum karbonat, laktoza, kalcijum fosfat, i natrijum fosfat; granulirane i dezintegrisane agense, kao što su, na primer, mikrokristalna celuloza, natrijum kroskarmeloza, kukuruzni škrob, i alginska kiselina; vezujuća sredstva kao što su, na primer, škrob, želatin, polivinil-pirolidon, i akacija; i lubrikanti agensi, kao što su, na primer, magnezijum stearat, stearinska kiselina, i talk. Dodatno, tableta može biti neobložena, ili obložena poznatim tehnikama da ili maskiraju loš ukus leka neprijatnog ukusa, ili odlože dezintegraciju i apsorpciju aktivnog sastojka u gastrointestinalnom traktu na taj način održavajući efekate aktivnog sastojka za duži period. Primeri u vodi rastvornih materijala za maskiranje ukusa, uključuju, ali nisu limitirani na, hidroksipropil-metilcelulozu i hidroksipropilcelulozu. Primeri materijala vremenskog kašnjenja, uključuju, ali nisu limitirani na, etil celulozu i celuloza acetat butirat.

Tvrde želatinske kapsule mogu, na primer, biti pripremljene mešanjem najmanje jednog jedinjenja Formule (I) i/ili najmanje jedne soli tog jedinjenja sa najmanje jednim inertnim čvrstim diluentom, kao što je, na primer, kalcijum karbonat; kalcijum fosfat; i kaolin.

Meke želatinske kapsule mogu, na primer, biti pripremljene mešanjem najmanje jednog jedinjenja Formule (I) i/ili najmanje jedne farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja sa najmanje jednim u vodi rastvornim nosačem, kao što je, na primer, polietilen glikol; i najmanje jednim uljanim medijumom, kao što je, na primer, ulje kikirikija, tečni parafin, i maslinovo ulje.

Vodena suspenzija može biti pripremljena, na primer, mešanjem najmanje jednog jedinjenja Formule (I) i/ili najmanje jedne farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja sa najmanje jednim ekscipijensom pogodnim za proizvodnju vodene suspenzije. Primeri ekscipijenasa pogodnih za proizvodnju vodene suspenzije, uključuju, ali nisu limitirani na, na primer, agense za suspendovanje, kao što su, na primer, natrijum karboksimetilceluloza, metilceluloza, hidroksipropilmetil-celuloza, natrijum alginat, alginska kiselina, polivinil-pirolidon, guma tragakanta, i guma akacija; disperziona ili sredstva za vlaženje, kao što su, na primer, prirodni fosfatid,t. j.,lecitin; kondenzacioni proizvodi alkilen oksida sa masnim kiselinama, kao što su, na primer, polioksietilen stearat; kondenzacioni proizvodi etilen oksida sa alifatičnim alkoholiam dugog lanca, kao što su, na primer heptadekaetilen-oksicetanol; kondenzacioni proizvodi etilen oksida sa parcijalnim estrima izvedenim od masnih kiselina i heksitola, kao što su, na primer, polioksietilen sorbitol monooleat; i kondenzacioni proizvodi etilen oksida sa parcijalnim estrima izvedenim od masnih kiselina i heksitol anhidrida, kao što su, na primer, polietilen sorbitan monooleat. Vodena suspenzija može takodje sadržati najmanje jedan konzervans, kao što su, na primer, etil i n-propil p-hidroksibenzoat; najmanje jedan agens za bojenje; najmanje jedan agens za ukus; i/ili najmanje jedan zasladjivač, uključujući ali ne ograničavajući se na, na primer, saharozu, saharin, i aspartam.

Uljane suspenzije mogu, na primer, biti pripremljene suspendovanjem najmanje jednog jedinjenja Formule (I) i/ili najmanje jedne farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja bilo u biljnom ulju, kao što je, na primer, ulje kikirikija, maslinovo ulje; susamovo ulje; i kokosovo ulje; ili u mineralnom ulju, kao što je, na primer, tečni parafin. Uljana suspenzija može takodje da sadrži najmanje jedno sredstvo za zgušnjavanje, kao što su, na primer, pčelinji vosak; težak parafin; i cetil alkohol. U cilju obezbedjivanja ukusne uljane suspenzije, najmanje jedan od zasladjivača već opisanih u predhodnom tekstu, i/ili najmanje jedan agens ukusa mogu biti dodati uljanoj suspenziji. Uljana suspenzija može dalje sadržati najmanje jedan konzervans, uključujući, bez ograničenja, na primer, anti-oksidant, kao što je, na primer, butilovani hidroksianizol, i alfa-tokoferol.

Disperzibilni praško vi i granule mogu, na primer, biti pripremljeni mešanjem najmanje jednog jedinjenja Formule (I) i/ili najmanje jedne farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja sa najmanje jednim sredstvom za dispergovanje i/ili agensom za kvašenje; najmanje jednim agensom za suspendovanje; i/ili najmanje jednim konzervansom. Pogodni agensi za dispergovanje, agensi za kvašenje, i agensi za suspendovanje su već prethodno opisani. Primeri konzervanasa uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, anti-oksidanse,npr.,askorbinsku kiselinu. Dodatno, disperzibilni praškovi i granule mogu takodje sadržati najmanje jedan ekscipijent, uključujući, bez ograničenja, na primer, sredstva za zasladjivanje; sredstva za korigovanje ukusa; i sredstva za bojennje.

Emulzija najmanje jednog jedinjenja Formule (I) i/ili najmanje jedne farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja može, na primer, biti pripremljena kao emulzija ulje-u-vodi. Uljana faza emulzija sadrži jedinjenja Formule (I) koja može biti sastavljena od poznatih sastojaka na poznati način. Uljana faza može biti obezbedjena, ali nije ograničena na, na primer, biljna ulja, kao što su, na primer, maslinovo ulje i ulje kikirikija; mineralno ulje, kao što je, na primer, tečni parafin; i njihove smeše. Iako faza može da sadrži samo emulgator, ovo može da sadrži smešu najmanje jednog emulgatora sa masti ili uljem ili sa oba, mast i ulje. Pogodni agensi za emulgovanje uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, prirodne fosfatide,npr.,soja lecitin; estre ili parcijalne estre izvedene iz masnih kiselina i anhidrida heksitola, kao što je, na primer, sorbitan monooleat; i kondenzacione proizvode parcijalnih estara sa etilen oksidom, kao što je, na primer, polioksietilen sorbitan monooleat. Poželjno, hidrofilni emulgator je uključen zajedno sa lipofilnim emulgatorom koji deluje kao stabilizator. Takodje je poželjno da se uključe oba i ulje i mast. Zajedno, emulgator(i) sa ili bez stabilizatorom(ima) prave takozvani emulgujući vosak, i vosak zajedno sa uljem i mašću pravi takozvanu emulgujuću bazu za mast koja formira uljanu disperzionu fazu kremaste formulacije. Emulzija može takodje da sadrži zasladjivač, agens ukusa, konzervans, i/ili antioksidant. Emulgatori i stabilizatori emulzija pogodni za primenu u formulaciji predmetnog pronalaska uključuju Tween 60, Span 80, cetostearil alkohol, miristil alkohol, gliceril monostearat, natrijum lauril sulfat, gliceril distearat sam ili sa voskom, ili druge materijale dobro znane u oblasti.

Jedinjenja Formule (I) i/ili najmanje jedna farmaceutski prihvatljiva so tog jedinjenja mogu, na primer, takodje biti oslobodjene intravenozno, subkutano, i/ili intramuskularno preko bilo kog farmaceutski prihvatljivog i pogodnog injekcionog oblika. Primeri injekcionih oblika uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, sterilne vodene rastvore koji sadrže pogodne nosače i rastvarače, kao što je, na primer, voda, Ringerov rastvor, i izotonični rastvor natrijum hlorida; sterilne mikroemulzije ulje-u-vodi; i vodene ili uljane suspenzije.

Formulacije za parenteralnu administraciju mogu biti u obliku vodenih ili nevodenih izotoničnih sterilnih injekcionih rastvora ili suspenzija. Ovi rastvori i suspenzije mogu biti pripremljeni od sterilnih praškova ili granula korišćenjem jednog ili više nosača ili diluenata pomenutih za primenuu formulacijama za oralnu administraciju ili korišćenjem drugih pogodnih disperzionih ili agenasa za kvašenje i agenasa za suspendovanje. Jedinjenja mogu biti rastvorena u vodi, polietilen glikolu, propilen glikolu, etanolu, kukuruznom ulju, lanenom ulju, ulju kikirikija, susamovom ulju, benzil alkoholu, natrijum hloridu, tragakant gumi, i/ili različitim puferima. Drugi adjuvansi i načini administriran i a su dobro i široko poznati u farmaceutskoj praksi. Aktivni sastojak takodje može biti administriran injekcijom kao kompozicijom sa pogodnim nosačima uključujući fiziološki rastvor, dekstrozu, ili vodu, ili sa ciklodekstrinom( t. j.,CAPTISOL®), korastvarač rastvaranja( t. j.,propilen glikol) ili micelarnim rastvaranjem (7./.,Tween 80).

Sterilni preparat za injekcije može takodje biti sterilan injekcioni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom diluentu ili rastvaraču, na primer kao rastvor u 1,3-butandiolu. Medju prihvatljivim nosačima i rastvaračima koji mogu biti korišćeni su voda, Ringerov rastvor, i izotonični rastvor natrijum hlorida. Dodatno, sterilna, fiksirana ulja se konvencionalno koriste kao rastvarač ili medij um za suspendovanje. Za ovu svrhu bilo koje blago fiksno ulje može biti korišćeno, uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Dodatno, masne kiseline kao što je oleinska kiselina je takodje našla upotrebu u pripremanju injekcija.

Sterilne injekcione mikroemulzije ulje-u-vodi mogu, na primer, biti pripremljene 1) rastvaranjem najmanje jednog jedinjenja Formule (I) u uljanoj fazi, kao što je, na primer, smeša soj inog ulja i lecitina; 2) kombinovanjem uljane faza koja sadrži Formulu (I) sa smešom vode i glicerola; i 3) obradom kombinacije da se formira mikroemulzija.

Sterilna vodena ili uljana suspenzija može biti pripremljena u skladu sa metodama već poznatim u oblasti. Na primer, sterilni vodeni rastvor ili suspenzija mogu biti pripremljeni sa ne-toksičnim parenteralno-prihvafljivim diluentom ili rastvaračem, kao što je, na primer, 1,3-butan diol; i sterilna uljana suspenzija može biti pripremljena sa sterilnim netoksičnim prihvatljivim rastvaračem ili medijumom za suspenziju, kao što su, na primer, sterilno fiksna ulja, npr., sintetički mono-ili digliceridi; i masne kiseline, kao što je, na primer, oleinska kiselina.

Farmaceutski prihvatljivi transporteri, adjuvansi, i nosači koji mogu biti korišćeni u farmaceutskim kompozicijama ovog predmetnog pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na, jonske izmenjivače, aluminijum, aluminijum stearat, lecitin, samostalno - sistemi za isporučivanje samo-emulgovanih lekova (self-emulsifying drug delivery systems) (SEDDS) kao što je d-alfa-tokoferol polietilenglikol 1000 sukcinat, surfaktanti korišćeni u farmaceutskim doznim formama kao što je Tweens, polietoksilovano ricinusovo ulje oil kao što je CREMOPHOR® surfaktant (BASF), ili druge slične polimerne matrice za otpuštanje, proteine seruma, kao što je humani serum albumin, puferne supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum sorbat, delimično gliceridne smeše zasićenih biljnih masnih kiselina, voda, soli ili elektroliti, kao što je protamin sulfat, dinatrijum vodonik fosfat, kalijum vodonik fosfat, natrijum hlorid, soli cinka, kolidni silicijum, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilen glikol, natrijum karboksimetilceluloza, poliakrilati, voskovi, poletilen-polioksipropilen-blok polimeri, polietilen glikol i vunena mast. Ciklodekstrini kao što je alfa-, beta-, i gama-ciklodekstrin, ili hemijski modifikovani derivati kao što je hidroksialkilciklodekstrini, uključujući 2- i 3-hidroksipropil-ciklodekstrine, ili druge rastvorene derivate koji mogu biti dobro korišćeni za poboljšanje isporuke jedinjenja formula ovde opisanih.

Farmaceutski aktivna jedinjenja ovog predmetnog pronalaska mogu biti obradjena u skladu sa konvencionalnim metodama farmacije da proizvedu medicinske agense za administraciju pacijentima, uključujući ljude i druge sisare. Farmaceutske kompozicije mogu biti podvrgnute konvencionalnim farmaceutskim operacijama kao što je sterilizacija i/ili mogu sadržati konvencionalne adjuvanse, kao što su konzervansi, stabilizatori, agensi za vlaženje, emulgatori, puferi itd. Tablete i pilule mogu dodatno biti pripremljeni sa enteričnim oblogama. Takve kompozicije takodje mogu sadržati adjuvanse, kao što su agensi za kvašenje, zasladjivači, agensi ukusa, i parfemska sredstva.

Količine jedinjenja koja se administriraju i dozni režim za lečenje bolesnog stanje sa jedinjenjima i/ili kompozicijama ovog predmetnog pronalaska zavise od različitih faktora, uključujući starost, težinu, pol, medicinsko stanje subjekta, tip bolesti, ozbiljnost bolesti, put i učestalost administrirani a, i odredjeno angažovano jedinjenje. Stoga, režim doziranja može široko varirati, ali se može rutinski odrediti korišćenjem standardnih metoda. Dnevna doza od oko 0.001 do 100 mg/kg telesne težine, poželjno izmedju oko 0.0025 i oko 50 mg/kg telesne težine i najpoželjnije izmedju oko 0.005 do 10 mg/kg telesne težine, može biti odgovarajuća. Dnevna doza može biti administrirana u jednoj do četiri doze dnevno. Ostali dozni rasporedi uključuju jednu dozu nedeljno ili jednu dozu u ciklusu od dva dana.

Za terapeutske svrhe, aktivna jedinjenja ovog predmetnog pronalaska su obično kombinovana sa jednim ili više adjuvanasa koja odgovaraju naznačenom načinu primene. Ako se primenjuju oralno, jedinjenja mogu biti pomešana sa laktozom, saharozom, škrobnim praškom, celuloznim estrima alkanskih kiselina, celuloznim alkil estrima, talkom, stearinskom kiselinom, magnezijum stearatom, magnezijum oksidom, natrijumovim i kalcijumovim solima fosforne i sumporne kiseline, želatinom, akcija gumom, natrijum alginatom, polivinilpirolidonom, i/ili polivinil alkoholom, i onda tabletirana ili inkapsulirana za uobičajenu administraciju. Takve kapsule ili tablete mogu da sadrže formulaciju sa kontrolisanim oslobadjanjem koje mogu biti obezbedjene u disperziji aktivnog jedinjenja u hidroksipropilmetil celulozi.

Farmaceutske kompozicije ovog predmetnog pronalaska sadrže najmanje jedno jedinjenje Formule (I) i/ili najmanje jednu njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i po izboru dodatni agens izabran od bilo kog farmaceutski prihvatljivog transportera, adjuvansa, i nosača. Alternativne kompozicije ovog predmetnog pronalaska sadrže jedinjenje Formule (I) opisano ovde, i farmaceutski prihvatljiv transpoter, adjuvans, ili nosač.

KORISNOST

Imuni sistem čoveka evoluirao je da brani organizam od mikroorganizama, virusa, i parazita koji mogu izazvati infekciju, bolest ili smrt. Složeni regulatorni mehanizmi obezbedjuju da različite ćelijske komponente imunog sistema ciljaju strane supstance ili organizme, dok ne izazivaju stalnu ili značajnu štetu pojedincu. Iako inicirajući dogadjaji nisu dobro razjašnjeni u ovom trenutku, u autoimunim stanjima bolesti imuni sistem usmerava svoj inflamatorni odgovor na ciljane organe obolelog pojedinca. Različite autoimune bolesti tipično su karakterisane prevladjujućim ili početnim ciljnim organom ili pogodjenim tkivima; kao što je zglob u slučaju reumatoidnog artritisa, tiroidna žlezda u slučaju Hašimoto tireoiditisa, centralni nervni sistem u slučaju multiple skleroze, pankreas u slučaju diajabetesa tipa I, i creva u slučaju inflamatorne bolesti creva. Tako je primećeno da terapeutski agensi koji deluju na imuni sistem ili odredjene tipove ćelija imunog sistema (kao što su B-limfociti, i T limfociti, T ćelije) mogu da se koriste kod više od jedne autoimune bolesti.

Dobro je poznato u struci, uključujući literaturne reference ovde citirane, da su SIP receptori dobre mete za širok spektar terapeutskih aplikacija, uključujući autoimmune bolesti. SIP receptori čine dobre mete lekova, zato što su pojedini receptori i tkivno i što se njihovog odgovora tiče specifični. Tkivna specifičnost SIP receptora je važna, zato razvoj selektivnih agonista ili antagonista za jedan receptor lokalizuje ćelijski odgovor na tkiva koja sadrže taj receptor, ograničavajući neželjne sporedne efekte. Specifičnost odgovora SIP receptora je takodje važna jer omogućava razvoj agonista ili antagonista koji pokreću ili potiskuju odredjenje ćelijske odgovore bez delovanja na druge procese. Prema tome, jedinjenja koja deluju na neke članove familije receptora SIP dok imaju smanjenu ili nemaju aktivnost na ostale članove familije su poželjna i očekuje se da obezbede terapeutski efekat sa poboljšanim profilom sporednog efekta (V-, smanjenjem ili ukidanjem neželjenih sporednih efekata).

Kao što je ovde korišćeno, termin "agonist" u odnosu na SIPi se odnosi na sredstvo koje ispoljava farmakološke efekte kao što je smanjena pokretljivost T ćelija, smanjena migracija T ćelija, ili smanjen izlazak T ćelija iz limfnih tkiva. (Rosen et al., Trends in Immunologv, 28:102 (2007)).

Na osnovu njihove SIPi aktivnosti kao agonista, jedinjenja predmetnog pronalaska su imunoregulatorni agensi korisni za lečenje ili prevenciju autoimunih ili hroničnih inflamatornih bolesti. Jedinjenja predmetnog pronalaska su korisna da suzbiju imuni sistem u slučajevima gde je imunosupresija u redu, kao što je u koštanoj srži, odbacivanju organa ili transplantata, autoimunim i hronično inflamatornim bolestima, uključujući sistemski lupus eritematozus, reumatoidni artritis, dijabetes melitus tip I, inflamatornu bolest creva, žučnu cirozu, uveitis, multiplu sklerozu, Kronovu bolest, ulcerativni kolitis, bulozni pemfigoid, sarkoidozu, psorijazu, autoimuni miozitis, Wegener-ovu granulomatozu, ihtiozu, Graves-ovu oftalmopatiju, i astmu.

Preciznije, jedinjenja predmetnog pronalaska korisna za lečenje ili prevenciju bolesti ili poremećaja izabranih iz grupe koja se sastoji od: transplantacionih organa ili tkiva, bolesti kalem protiv domaćina izazvanih transplantacijom, autoimunih sindroma uključujući reumatoidni artritis, juvenilni idiopatski artritis, sistemski lupus eritematozus, kožni lupus eritematozus (diskoidni lupus eritematozus, subakutni lupus eritematozus) i lupus nefritis, Hašimotov tiroiditis, multiplu sklerozu, mijasteniju gravis, dijabetes tip I, uveitis, zadnji uveitis, alergijski encefalomijelitis, glomerulonefritis, post-infektivne autoimmune bolesti uključujući reumatsku groznicu i post-infektivni glomerulonefritis, inflamatorne i hiperproliferative kožne bolesti, psorijazu, psorijatični artritis, atopični dermatitis, kontaktni dermatitis, ekcematozni dermatitis, seboroeični dermatitis, lihen planus, pemfigus, bulozni pemfigoid, buloznu epidermolizu, urtikariju, angioedem, vaskulitis uključujući ANCA-povezani vaskulitis, arteritis džinovskih ćelija, Takavasu arteritis, mikroskopski poliangitis, vaskulitis centralnog nervnog sistema, Čarg-Strausov Sindrom, i reumatoidni vaskulitis, eritem, kožnu eozinofiliju, akne, alopecia areata, keratokonjunktivitis, vernalni konjunktivitis, uveitis povezan sa Behcetovom bolešću, keratitis, herpetički keratitis, keratokonus, epitelijalnu distrofiju rožnjače, leukom rožnjače, očni pemfigus, Murenov ulcer, skleritis, Gravesova oftalmopatiju, Vogt-Koyanagi-Harada sindrom, sarkoidozu, alergije na polen, reverzibilno opstruktivnu bolest disajnih puteva, bronhijalnu astmu, alergijsku astmu, unutrašnju astmu, spoljašnju astmu, astmu na prašinu, hroničnu ili okorelu astmu, kasnu astmu ili hiper-osetljivost disajnog puta, bronhitis, gastrične čireve, vaskularna oštećenja izazvana ishemijskim bolestima i trombozom, ishemijske bolesti creva, inflamatorne bolesti creva, nekrotizirajući enterokolitis, crevne lezije povezane sa termalnim opekotinama, celijačne bolesti, proktitis, eozinofilni gastroenteritis, mastocitozu, Kronovu bolest, ulcerozni kolitis, migrenu, rinitis, ekcem, intersticijalni nefritis, Goodpasture-ov sindrom, hemolitičko-uremijski sindrom, dijabetičku nefropatiju, multipli miozitis, Guillain-Barreov sindrom, Menijeroa bolest, polineuritis, multipli neuritis, mononeuritis, radikulopatiju, hipertiroidizam, Bazedovljevu bolest, čistu aplaziju crvenih krvnih zrnaca, aplastičnu anemiju, hipoplastičnu anemiju, idiopatsku trombocitopeničnu purpuru, autoimunu hemolitičku anemiju, agranulocitozu, pernicioznu anemiju, megaloblastnu anemiju, aneritroplaziju, osteoporozu, sarkoidozu, fibroid pluća, idiopatsku intersticijsku pneumoniju, dermatomiozitis, leukoderma vulgaris, ihtiozu vulgaris, fotoalergijsku osetljivost, kožni limfom T ćelija, arterosklerozu, aterosklerozu, aortitis sindrom, poliarteritis nodosa, miokarditis, sklerodermu, Wegener-ovu granulomatozu, Sjogrenov sindrom, adiposis, eozinofilni fascitis, lezije gingive, periodoncijum periodontium, alveolarnu kost, substantia ossea dentis, glomerulonefritis, muški model alopecije ili alopecije senilis sprečavanjem epilacije ili omogućavanjem klijanja kose i/ili promocije generisanja kose i rasta kose, distrofiju mišića, piodermu i Sezary sindrom, Adisonovu bolest, ishemijska-reperfuziona povreda organa koja se dešava tokom čuvanja, transplantaciju ili ishemijsku bolest, endotoksinski-šok, pseudomembranozni kolitis, kolitis izazvan lekom ili zračenjem, ishemijsku akutnu bubrežnu insuficijenciju, hroničnu bubrežnu insuficijenciju, toksikoze izazvane plućnim-kiseonikom ili lekovima, kancer pluća, plućni emfizem, kataraktu, siderozu, retinitis pigmentosa, senilnu makularnu degeneraciju, vitreo ožiljak, opekotinu rožnjače alkalijama, multiforme dermatitis eritema, IgA linearni bulozni dermatitis i cementni dermatitis, gingivitis, periodontitis, sepsu, pankreatitis, bolesti uzrokovane zagadjenjem životne sredine, starenje, karcinogenezu, metastaze karcinoma i hipobaropatiju, bolest izazvanu oslobadjanjem histamina ili leukotriena-C4, Behcet-ovu bolest, autoimuni hepatitis, primarnu bilijarnu cirozu, sklerotični holangitis, parcijalnu resekciju jetre, akutnu nekrozu jetre, nekrozu izazvanu toksinom, virusni hepatitis, šok, ili anoksiju, virus hepatitisa B, ne-A/ne-B hepatitis, cirozu, alkoholnu cirozu, insuficijenciju jetre, fulminantnu insuficijenciju jetre, insuficijenciju jetre kasnog-početka, "akutnu-i-hroničnu" insuficijenciju jetre, povećanje hemoterapeutskog efekta, citomegalovirusnu infekciju, HCMV infekciju, AIDS, kancer, senilnu demenciju, traumu, neuropatički bol, hroničnu bakterijsku infekciju, trombocitopeniju, IgA nefropatiju, mezangioproliferativni glomerulonefritis, IgG4-povezane bolesti, ankilozirajući spondilitis, i relapsni polihondritis. Juvenilni idiopatski artritis uključuje juvenilni idiopatski artritis sa početkom oligoartritisa, juvenilni idiopatski artritis sa početkom poliartritisa, juvenilni idiopatski artritis sa početkom kao sistemski, juvenilni psorijazni artritis, i entezitis-povezani juvenilni idiopatski artritis.

Jedan prikaz obezbedjuje jedinjenja Formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tih jedinjenja, za primenu u terapiji za lečenje autoimunih i/ili inflamatornih bolesti. U drugom prikazu, obezbedjena je upotreba jedinjenja Formule (I) ili farmaceutski prihvatljivih soli tih jedinjenja, za proizvodnju leka za lečenje ili profilaksu autoimmune i/ili inflamatorne bolesti. Terapijski efikasna količina može biti angažovana u ovim prikazima. Poželjno, u ovim prikazima, autoimune i inflamatorne bolesti su odabrane od multiple skleroze, reumatoidnog artritisa, inflamatorne bolesti creva (uključujući Kronovu bolest i ulcerativni kolitis), psorijaze, i kao sredstvo koje sprečava odbacivanje transplatiranih organa.

U drugom prikazu, obezbedjeno je najmanje jedno jedinjenje Formule (I) ili farmaceutski prihvatljiva so tog jedinjenja za primenu u lečenju vaskularnog oboljenja. Drugi prikaz obezbedjuje jedinjenja Formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tih jedinjenja, za primenu u terapiji za lečenje vaskularne bolesti. U drugom prikazu, obezbedjena je primena jedinjenja Formule (I) ili farmaceutski prihvatljivih soli tog jedinjenja, za proizvodnju leka za lečenje vaskularne bolesti. Terapijski efikasna količina može biti korišćena u ovim prikazima. Poželjno, u ovim prikazima, vaskularna bolest je izabrana od ateroskleroze i ishemije-reperfuzione povrede.

U drugom prikazu, obezbedjeno je najmanje jedno jedinjenje Formule (I) ili farmaceutski prihvatljiva so tog jedinjenja za primenu u lečenju inflamatorne bolesti creva. Drugi prikaz obezbedjuje jedinjenja Formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja, za primenu u terapiji za lečenje inflamatornog oboljenja creva. U drugom prikazu, obezbedjena je primena jedinjenja Formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja, za proizvodnju leka za lečenje inflamatornog oboljenja creva. Terapijski efikasna količina može biti korišćena u ovim prikazima. Poželjno, u ovim prikazima, inflamatorno oboljenja creva je izabrano od Kronove bolesti, ulcerativnog kolitisa, kolagenog kolitisa, limfocitnog kolitisa, ishemijskog kolitisa, preusmerenog kolitisa, Behcetove bolesti, i nadredjenog kolitisa.

U drugom prikazu, obezbedjeno je najmanje jedno jedinjenje Formule (I) ili farmaceutski prihvatljiva so tog jedinjenja za primenu u lečenju lupusa. Drugi prikaz obezbedjuje jedinjenja Formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tih jedinjenja, za primenu u terapiji za lečenje lupusa. U drugom prikazu, obezbedjena je primena jedinjenja Formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja, za proizvodnju leka za lečenje lupusa. Terapijski efikasna količina može biti korišćena u ovim prikazima. Lupus uključuje sistemski lupus eritematozus, kožni lupus eritematozus, diskoidni lupus eritematozus, potkožni lupus eritematozus i lupus nefritis.

U drugom prikazu, obezbedjeno je najmanje jedno jedinjenje Formule (I) ili farmaceutski prihvatljiva so tog jedinjenja za primenu u lečenju multiple skleroze. Drugi prikaz obezbedjuje jedinjenja Formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tih jedinjenja, za primenu u terapiji za lečenje multiple skleroze. U drugom prikazu, obezbedjena je primena jedinjenja Formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tih jedinjenja, za proizvodnju leka za lečenje multiple skleroze. Terapijski efikasna količina može biti korišćena u ovim prikazima. Poželjno, u ovim prikazima, multipla skleroza uključuje relapsirajuću remitentnu multiplu sklerozu, primarnu progresivnu multiplu sklerozu, sekundarno progresivnu multiplu sklerozu, i progresivno relapsnu multiplu sklerozu.

Kada se leče SIPl-povezana stanja, jedinjenja Formule (I) mogu biti administrirana sama ili jednog jedinjenja sa drugim i/ili sa drugim pogodnim terapijskim agensima korisnim u lečenju takvih stanja. Shodno tome, "terapijski efikasna količina" je takodje namenjena da uključi količinu kombinacije jedinjenja za koje se tvrdi da je efikasno da deluje kao agonist na SIPI receptor. Kombinacija jedinjenja je pretežno sinergistička kombinacija. Sinergija, kao što je opisano, na primer, kod Chou et al., Adv. Enzvme Regul., 22:27-55 (1984), nastaje kada je efekat jedinjenja kada se administriraju u kombinaciji veći od zbirnog efekta jedinjenja kada se administriraju sama kao pojedinačni agens. Uopšteno, sinergistički efekat je najjasnije pokazan na suboptimalnim koncentracijama jedinjenja. Sinergija može biti u smislu niže citotoksičnosti, povećane efikasnosti, ili nekog drugog korisnog efekta kombinacije u poredjenju sa pojedinačnim komponentama.

Primeri tih drugih terapijskih agenasa uključuju kortikosteroide ili glukokortikoide kao što je deksametazon, metilprednizolon, prednizolon, i prednizon; PDE4 inhibitori kao što je rolipram, cilomilast, roflumilast, i oglemilast; citokin-supresivni anti-inflamatorni lekovi

(CSAID) i inhibitori p38 kinaze, 4-substituisani imidazo [l,2-A]hinoksalini kao što je stavljeno na uvid javnosti u američkom patentu br. 4,200,750; antitela ili fuzioni proteini usmereni na molekule ćelijske površine kao što je CD2, CD3, CD4, CD8, CD20 kao što je RITUXAN®, CD25, CD30, CD40, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90, CTLA, na primer abatacept (ORENCIA®), belatacept, ili njihovi ligandi uključujući CD154 (GP39, ili CD40L); antitela na, fuzioni proteini, ili rastvorljivi receptori humanih citokina ili faktora rasta, na primer, TNF kao što je, infliksimab (REMICADE®), etanercept (Embrel), adalimumab (HUMIRA®), LT, II-1 kao što je anakinra (KINERET®) (IL-1 receptor antagonist), 1L-2, IL-4, 1L-5, 11-6, kao što je CNTO 328 (a himerno anti-IL-6 antitelo), 11-7, 11-8, 11-12, 11-15, 11-16, 11-17, 11-21, 11-23 kao što je Ustekinumab (humano anti-IL-12/23 monoklonsko antitelo), i interferoni kao što je interferon beta la (AVONEX®, REBIF®), interferon beta lb (BETASERON®); integrin receptor antagonisti kao što je TYSABRI®; polimerni agensi kao što je glatiramer acetat (COPAXONE®); sulfasalazin mesalamin, hidroksihlorohin, ne-steroidni antiinflamatorni lekovi (NSAID-i) kao što su salicilati uključujući aspirin, salsalat, i magnezijum salicilat, i ne-salicilate kao što su, ibuprofen, naproksen, meloksikam, celekoksib i rofekoksib; antivirusni agensi kao što su abakavir; antiproliferativni agensi kao što su metotreksat, merkaptopurin, lefiunomid, ciklosporin, mikofenololat, FK506 (takrolimus, PROGRAF®); citotoksični lekovi kao što su azatioprin i ciklofosfamide; inhibitori nuklearne translokacije, kao što je deoksispergualin (DSG); proizvodi koji sadrže zlato kao što su auronofin; peniclamin, i rapamicin (sirolimus ili RAPAMUNE®) ili njihovi derivati.

Gore navedeni drugi terapijski agensi, kada se koriste u kombinaciji sa jedinjenjem predmetnog pronalaska, mogu se koristiti, na primer, u onim količinama naznačenim uPhysicians' Desk Reference(PDR) ili kako je drugačije odredjeno od strane prosečnog poznavaoca oblasti. Takav drugi terapijski agens(i) može biti administriran pre, istovremeno sa, ili praćenjem administracije jedinjenja pronalaska.

PRIMERI

Predmetni pronalazak je dalje definisan u sledećim primerima. Treba da bude jasno da su primeri dati jedino putem ilustracije. Iz gornje diskusije i primera, prosečan poznavalac oblasti može utvrditi bitne karakteristike predmetnog pronalaska, i bez udaljavanja od obima predmetnog pronalaska, može napraviti različite promene i modifikacije da bi prilagodio predmetni pronalazak za razne namene i stanja. Kao rezultat toga, predmetni pronalazak nije ograničen ilustrovanim primerima utvrdjenim u daljem tekstu, već je radije definisan priloženim patentnim zahtevima.

HPLC Stanja:

Stanje C: Kolona: YMC COMBISCREEN® S5 50 x 4.6mm (Linearni gradijent od 0 do 100% Rastvarač B preko 4 min, onda 1-4 min držati u 100%B; Rastvarač A = voda 90%/MeOH 10%/ H3P04, 0.2%; Rastvarač B = MeOH 90%/voda 10%/ H3P040.2%. Protok 4 mL/min; Proizvodi detektovani na 220 nm.

Stanje G: Kolona: Waters Acquity BEH C18 2.1 x 50 mm 1.7um; Linearni gradijent od 0-100% Rastvarač B preko 3 min, onda 0.75 min držati u 100%B; Protok 1.11 mL/min; Rastvarač A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Rastvarač B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura = 50 °C; Proizvodi detektovani na 220 nm vvavelength.

Stanje H: Kolona: SunFire C18, (150 x 3.0 mm), 3.5 um; Linearni gradijent od 10 do 100% Rastvarač B preko 25 min, onda 5 min držati u 100%B; Protok 1 mL/min; Pufer: 0.5% TFA, u vodi sa pH podešenim na 2.5 pomoću razblaženog amonijaka; Rastvarač A: Pufer: acetonitril (95:5); Rastvarač B: Pufer: acetonitril (5:95); Proizvodi detektovani na 220 nm.

Stanje I: Kolona: Waters Acquity SD BEH Cl8, 2.1 x 50 mm, 1.7-um čestice; Mobilna faza A: 100%H2O sa 0.05%TFA; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Temperatura: 50 °C; gradijent od 98:2 do 2:98 (A%:B%) preko 1 min i držati 2:98 za 0.5 min.; Flow: 0.800 mL/min Proizvodi detektovani na 220 nm.

Stanje J: Kolona: CHROMOL1TH® SpeedROD (4.6 x 50 mm); Linearni gradijent od 0 do 100%o Rastvarač B preko 4 min, sa 1 min držati u 100% B; Rastvarač A: 10% MeOH, 90% H20, 0.1% TFA; Rastvarač B: 90% MeOH, 10% H20, 0.1% TFA; Protok 4 mL/min; Proizvodi detektovani na 220 nm.

Intermedijer 1

(1R,3S)-Metil l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilat

Intermedijer1A:(S)-3-(4-Bromofenil)eielopentanon

Rastvor 4-bromofenilborne kiseline (20 g, 100 mmol) u 1,4-dioksanu (120 mL) u balonu od 500 ml produvan je azotom tokom 5 minuta. S-BINAP (0.992 g, 1.593 mmol) i bis(norbornadien)rodijum (I) tetrafluoroborat (0.559 g, 1.494 mmol) su dodati redom u rastvor pod pozitivnim pritiskom azota. Nakon 2 sata žestokog mešanja na sobnoj temperaturi, dodata je voda (20 mL) praćena ciklopent-2-enon-om (8.06 mL, 100 mmol) i Et3N (13.88 mL, 100 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Nastala tamna čvrsta supstanca je uklonjena cedjenjem i filtrat je sipan u 250 ml etil acetata. Rastvor je ispran vodom dva puta i organski sloj je koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (podeljen u dve gomile, svaka je prošla kroz 330g silicijum dioksid kolonu 0%-25% etil acetata u heksanu) da se dobije 12.1 grama (S)-3-(4-bromofenil)ciklopentanona. HPLC čistoća je bila >98% i Hiralna HPLC analiza pokazuje oko 90% ee. Materijal je bio dalje prečišćen pod Hiralnim SFC uslovima opisanim dole. Eksperimentalni Detalji: Instrument: Berger SFC MGIII; Preparativni uslovi: Kolona: CHIRALPAK® AD-H 25 x 5cm, 5um; Temperatura Kolone: 40 °C; Protok 200mL/min; Mobilna faza: CO2/ MeOH= 80/20; Detektor Talasne dužine: 225 nm; Ubrizgavanje Vol.: I. OmL; Priprema Uzorka: 12.lg u; 210 mL MeOH (Konc.60 mg/ml); Analitički uslovi: Kolona: CHIRALPAK® AD 25 x 0.46cm, lOum; Temperatura Kolone: 40 °C; Protok 2.0min; Mobilna faza: C02/MeOH = 70/30; Detektor Talasne dužine: 220nm; Ubrizgavanje Vol.: 5uL.

Željeni enantiomer (glavni izomer) je izolovan i imenovan kao "PK2" na osnovu redosleda eluiranja. Enantiomerna čistoća izolovanog izomera odredjeno je da je veća od 99.6%o na SFC/UV površini % na 220 nm. Nakon uparavanja, 10.5 grama željenog enantiomera je oporavljeno. HPLC retenciono vreme= LC/MS M<+1>= 239/241. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 ppm 7.43-7.51 (2 H, m), 7.10-7.19 (2 H, m), 3.32-3.46 (1 H, m), 2.67 (1 H, dd, 7=18.27, 7.48 Hz), 2.39-2.54 (2 H, m), 2.23-2.39 (2 H, m), 1.97 (1 H, ddd, J=12.98, II. 00, 9.02 Hz).

Intermedijer 1B: (7S)-7-(4-Bromofenil)-l,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion

Ukupno 9.8g (S)-3-(4-bromofenil)ciklopentanona je korišćeno, podeljeno u 2 šarže od kojih svaka sadrži 4.9g. Dve šarže su obradjene pod identičnim uslovima kao što je opisano u nastavku.

Smeši (S)-3-(4-bromofenil)ciklopentanona (I-1A, 4.9 g, 20.49 mmol) i kalijum cijanida (1.935 g, 29.7 mmol) u EtOH (40 mL) i vodi (20 mL) u staklenoj posudi pod pritiskom dodat je amonijum karbonat (4.92 g, 51.2 mmol). Reakciona posuda je bila zapečaćena i stavljena u uljano kupatilo zagrejano na 80 °C tokom 24 sata, što rezultira formiranjem bele čvrste supstance. Nakon hladjenja reakcione posude u ledenom kupatilu, posuda je otvorena i dodato je 30 ml vode što rezultira formiranjem dodatne čvrste supstance. Čvrste supstance su sakupljene cedjenjem, isprane dva puta sa 5ml vode, i onda osušene pod visokim naponom. Dve šarže su spojene da obezbede 13.9 g (7S)-7-(4-bromofenil)-l,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion) što je korišćeno za sledeće reakcije bez daljeg prečišćavanja. HPLC retenciono vreme= 0.82 min (Stanje G) LC/MS M<+Na>=331, 2M<+H>=619.

Intermedijer1C:(3S)-l-Amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilna kiselina

U (7S)-7-(4-bromofenil)-l,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion (I-1B, 13.9 g, 45.0 mmol) u 1,4-dioksanu (40 mL) u balonu sa okruglim dnom dodat je vodeni NaOH (2N, 100 mL, 200 mmol). Smeša je zagrejana do 95 °C i mešana tokom 24 sata. Dodatni NaOH (25 mL, 50 mmol) je dodat i zagrevanje je nastavljeno još dva dana. Rastvor je ohladjen na ledenom kupatilu, neutralisan sa 5N HC1 do oko pH 7 što dovodi do formiranja belog taloga. Čvrste supstance su sakupljene cedjenjem i osušene pod visokim vakumom tokom 2 dana da obezbede 14 g (3S)-l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilnu kiselinu kao belu čvrstu supstancu koja je korišćena kao takva u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. HPLC retenciono vreme= 0.64 min (Stanje G) LC/MS M<+1>= 284/ 286.

Intermedijer 1D: (3S)-Metil l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilat

U heterogenu smešu (3S)-l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilne kiseline (I-1C, 14 g, 49.3 mmol) u MeOH (250 mL) dodat je tionil hlorid (36.0 mL, 493 mmol) kap po kap tokom perioda od 20 minuta na sobnoj temperaturi preko dodatnog levka (egzotermno). Reakciona smeša je postavljena u uljano kupatilo i zagrevana do 70 °C tokom 4 sata. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, sa ostatkom koji je bio rastvoren u etil acetatu (200 mL) i ispran dva puta sa 1N NaOH. Organski sloj je onda osušen iznad Na2S04i koncentrisan dajući 10.8 g (3S)-metil l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilat. HPLC retenciono vreme= 0.68 min (Stanje G);LC/MS M<+1>= 298/300.

Intermedijer 1: (1R,3S)-Metil l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilat

Smeša diastereomera (I-1D, 9.5g) je razdvojena Hiralnom SFC. Apsolutno stereohemijsko obeležavanje Intermedijera 1 i njegovog diastereomera je prethodno opisano (Wallace, G.A. et al., J. Org. Chem., 74:4886-4889 (2009)). Eksperimentalni Detalji: Instrument: Preparativni: Thar SFC350; Analitički: Berger Analitički SFC; Preparativni Uslovi: Kolona: Lux-Celuloza-4 25 x 3cm, 5 um; Temperatura Kolone: 35 °C; Protok 200ml/min; Mobilna faza: C02/ (MeOH sa 0.1% DEA) = 87/13; Detektor Talasne dužine: 220 nm; Ubrizgavanje Vol.: 0.6 ml; Priprema Uzorka: 9.5 g u 400 ml MeOH (Conc.23.7mg/ml). Analitički Uslovi: Kolona: Lux-Celuloza-4 25 x 0.46cm, 5um; Kolona Temp. 35 °C; Protok 3 ml/min; Mobilna faza: C02/ (MeOH sa 0.1% DEA) = 85/15; Detektor Talasne dužine: 220 nm; Ubrizgavanje Vol: 5 uL.

Intermedijer 1: Pik 2: 4.06g; ret. vreme = 6.64 min u uslovima analitičke hiralne SFC iznad. Optička čistoća: 98.2%; LC/MS M<+1>= 298/300; Pik 1: 3.96g; ret. vreme = 5.47 min na uslovima analitičke hiralne SFC iznad. Optička čistoća: 99.4%.

Alternativno Dobijanje:HC1So Intermedijera 1

Rastvor (3S)-l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilna kiseline (10.2 g, 35.9 mmol) u MeOH (100 mL) je ohladjen na ledenom kupatilu, praćeno dodatkom SOCb (15.72 mL, 215 mmol) u kapima. Nakon što je dodavanje završeno, rastvor je refluktovan tokom 3 sata, nakon čega je odredjeno HPLC-om daje reakcija završena. Rastvor je koncentrovan da se odstrani metanol dajući čvrstu supstancu. Čvrsta supstanca je prebačena u 50 ml 3% H2O u EtOAc i mešano je tokom 30 minuta. Formirana bela čvrsta supstanca je sakupljena cedjenjem. Vlažna bela čvrsta supstanca je prebačena u 50 ml 4% H2O u 1,2-dimetoksietanu i zagrevano je do 50 °C tokom 3 sata, i onda je mešano na sobnoj temperaturi tokom noći. Nastala bela čvrsta supstanca je sakupljena cedjenjem i osušena dajući (lR,3S)-metil 1-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilat hidrohlorid (3.5 g, 10.35 mmol). HPLC retenciono vreme= 6.6 min (Stanje H) LC/MS M<+1>= 298/ 300. 'H NMR (400MHz, DMSO-d6) 5 8.95 (br. s, 3H) 7.50-7.53 (m, 2H), 7.35-7.37 (m, 2H), 3.81 (s, 3H) 3.17-3.28 (m, IH), 2.57 (dd,J=14,7Hz, IH), 2.0-2.28 (m, 5H).

Intermedijer 2

(1R,3R)-Metil l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilat

Intermedijer2A:(R)-3-(4-Bromofenil)eielopentanon

Rastvor 4-bromofenilborne kiseline (20 g, 100 mmol) u 1,4-dioksanu (120 mL) je produvan sa azotom tokom 10 min. (R)-BINAP (0.992 g, 1.593 mmol) i bis(norbornadien)rodijum (I) tetrafluoroborat (0.559 g, 1.494 mmol) je dodat sekvencijalno, i suspenzija je sonifikovana tokom 5 min. Smeša je mešana tokom 20 min. Voda (20 mL) je dodata, i reakciona smeša je postala homogena. Nakon 10 minuta, ciklopent-2-enon (8.06 mL, 100 mmol) je dodat, i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. HPLC i LCMS analize ukazuju daje reakcija nastavljena, ali bilo je više polaznog materijala nego proizvoda. Reakciona smeša je procedjena kroz filter CELITE®, i CELITE® je ispran sa etil acetatom (100 mL). Filtrat je razblažen sa dodatnim etil acetatom (150 mL), ispran sa vodom (2x), ispran fiziološkim rastvorom, i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Smeša proizvoda je prečišćena fleš hromatografijom na silika gelu korišćenjem smeše etil acetata i heksana da daju (R)-3-(4-bromofenil)ciklopentanon (6.09 g, 25.5 mmol) kao belu čvrstu supstancu. Proizvod je bio 98% čistoće HPLC sa retencionim vremenom= 2.11 min. -

(Stanje J). LC/MS M<+1>= 241<>>H NMR (400MHz, hloroform-d) 5 7.57-7.39 (m, 2H), 7.22-

7.06 (m, 2H), 3.39 (ddd, J=10.9, 6.8, 4.1 Hz, IH), 2.67 (dd, J=18.2, 7.4 Hz, IH), 2.57-2.38 (m, 2H), 2.38-2.21 (m, 2H), 1.99-1.85 (m, IH).

Hiralni HPLC ukazuje da je jedinjenje bilo 90-95% enantiomemo čisto. Jedinjenje (6.03 g) je bilo dalje prečišćeno Hiralnim SFC korišćenjem uslova navedenim u nastavku. Željeni enantiomer je izolovan i imenovan kao "PK1" u elucionom redu. Enantiomerna čistoća izolovanog izomera je odredjena da bude veća 99.9% u SFC/UV oblasti % na 220 nm. 5.45 grama željenog enantiomera je oporavljeno posle koncentrovanja. Eksperimentalni Detalji: Instrument: Berger SFC MGIII; Prep. Stanja; Kolona: CHIRALPAK® AD-H 25 x 3cm, 5um; Temperatura Kolone: 40 °C; Protok 180mL/min; Mobilna faza: CO2/ MeOH= 87/13; Detektor Talasne dužine: 225 nm; Ubrizgavanje Vol: 0.5mL; Pripremanje Uzorka: 6.03g u 100 mL MeOH (Conc. 60 mg/ml). Analitički Uslovi: Kolona: CHIRALPAK® AD 25 x 0.46cm, 10 um; Temperatura Kolone: 40 °C; Protok 2.0 min; Mobilna faza: CO2/ MeOH = 70/30; Detektor Talasne dužine: 220 nm; Ubrizgavanje Vol.: 5 uL.

Intermedijer 2B: (7R)-7-(4-Bromofenil)-l,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion

Smeši (R)-3-(4-bromofenil)ciklopentanona (I-2A, 5.4 g, 22.58 mmol) i kalijum cijanida (2.132 g, 32.7 mmol) u EtOH (40 mL) i vodi (20 mL) u staklenoj posudi pod pritiskom dodat je amonijum karbonat (5.42 g, 56.5 mmol). Reakciona posuda je zapečaćena i stavljena u uljano kupatilo zagrejano na 80 °C tokom 20 sati. Velika količina bele, slobodno plutajuće čvrste supstance je formirana u svetio žutom rastvoru. Analiza LCMS-om ukazuje daje preostao polazni materijal tako daje reakcija nastavljena tokom dodatnih 24 sata. Kako je konverzija bila nekompletna, temperatura uljanog kupatila je podignuta na 120 °C. Bela čvrsta supstanca kompletno je rastvorena na višoj temperaturi. Nakon 3 sata rastvor je ohladjen do sobne temperature. Rastvor je dalje ohladjen u ledenom kupatilu, dodata je voda (30 mL) i nastala bela supstanca je sakupljena cedjenjem, isprana sa vodom, osušena na vazduhu, zatim postavljena pod visok napon dajući ciljno jedinjenje (6.9 g, 22.32 mmol) koje je korišćeno u sledećoj reakciji bez dajeg prečišćavanja. HPLC retenciono vreme= 0.81 min (Stanje G); LC/MS M<H>= 309/ 311; 2M<+H>= 619.

Intermedijer 2C: (3R)-l-Amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilna kiselina

Rastvor (7R)-7-(4-bromofenil)-l,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion (I-2B, 6.80 g, 22 mmol) u dioksanu (20 mL) i NaOH (2N aq) (120 mL, 240 mmol) je zagrevan u uljanom kupatilu podešenom na 95 °C. Dobijeni bistri, bledo žuti rastvor je ostavljen da se meša preko vikenda. Rastvor je ohladjen u ledenom kupatilu i neutralisan na oko pH 7 sa 6 N HC1 što dovodi do formiranja taloga. Čvrste supstance su sakupljene i ostavljene da se osuše na vazduhu preko noći. Bela čvrsta supstanca je razmućena u toplom etanolu (-100 mL) i ponovo sakupljena cedjenjem i čvrsta supstanca je postavljena pod visok napon. (5.8 g, 20.41 mmol). HPLC retenciono vreme= 0.64 min (Stanje G); LC/MS M<+1>= 284/ 286. 'H NMR (500MHz, metanol-oU) 5 7.52-7.38 (m, 2H), 7.31-7.17 (m, 2H), 3.55-3.40 (m, IH), 2.68 (dd, J=13.3, 6.7 Hz, IH od jednog diastereomera), 2.58-2.39 (m, IH), 2.26-2.15 (m, IH), 2.10-1.98 (m, IH), 1.98-1.81 (m, IH), 1.70 (dd, J=13.2, 11.8 Hz, IH od jednog diastereomera).

Intermedijer 2D: (3R)-Metil l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilat

U balonu sa okruglim dnom od 500 mL koji sadrži mešalicu, (3R)-l-amino-3-(4-bromofenil) ciklopentankarboksilna kiselina (I-2C, 5.4 g, 19.00 mmol) je suspendovana u metanolu (100 mL) dajući beli mulj. Levak za kapanje je napunjen sa tionil hloridom (13.87 mL, 190 mmol) i reagens je dodat u kapima brzinom da omogući da smeša ne postigne temperaturu refluksa. Nakon što je dodavanje završeno, svetio žuti, mlečni rastvor je stavljen u uljano kupatilo podešeno na 70 °C i vazdušnim-hladjenjem refluks kondenzator je zakačen. Rastvor je zagrevan tokom nekoliko sati a zatim je ostavljen da se ohladi do sobne temperature preko noći. Rastvarač je uparen pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u etil acetatu, ispran sa 1N NaOH (aq), ispran sa vodom, onda osušen preko MgS04pre nego što je bio procedjen i uparen. Nastala žuta čvrsta supstanca je razmućena u toplom etil acetatu, sa ultrazvukom i onda je procedjena. Čvrsta supstanca je osušena na vazduhu i stavljena pod vakuum i filtrat je uparen da se dobije Čvrsta supstanca 1: bela čvrsta supstanca, 4.28 g LCMS prikazuje >98% AP. Filtrat je uparen da se dobije žuta čvrsta supstanca (1.89 g).

Čvrsta supstanca iz filtrata je razmućena u minimalnoj količini vrućeg etil acetata, sa ultrazvukom, onda ohladjena (ledeno kupatilo) i hladno procedjena. Čvrsta supstanca je osušena na vazduhu i stavljena pod vakuum da se dobije Čvrsta supstanca 2: 1.44 g bela čvrsta supstanca. Spojene čvrste supstance (5.7g).

Intermedijer 2: (1R,3R)-Metil l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilat

Spojene čvrste supstance (3R)-metil l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilata (I-2D, 4 g) su odvojene korišćenjem Hiralnog SFC odvajanja diastereomera. Apsolutno stereohemijsko označavanje Intermedijera 2 i njegovog diastereomera je prethodno opisano. (Wallace, G.A. et al, J. Organic Chem., 74:4886-4889

(2009)). Eksperimentlni Detalji: Instrument: Preparativni: Thar SFC350; Analitički: Thar Analitički MDS. Preparativni Uslovi: Kolona: CHIRALPAK® AD-H 25 x 5cm, 5 um; Temperatura Kolone: 35 °C; Protok 300ml/min; Mobilna faza: C02/ (MeOH with 0.1%DEA) = 82/18; Detektor Talasne dužine: 230 nm; Ubrizgavanje Vol.: 0.4-0.5 ml; Priprema Uzorka: 4 g in 120 ml MeOH (Konc. 33mg/ml). Analitička Stanja: Kolona: CHIRALPAK® AD-H 25 x 0.46 cm, 5 um; Temperatura Kolone: 35 °C; Protok 3 ml/min; Mobilna faza: CO2/ (MeOH sa 0.1%DEA) = 80/20; Detektor Talasne dužine: 222 nm; Ubrizgavanje Vol.: 5 uL.

Intermedijer 2 (Pik 1): 1.56 g (99.3% Optička čistoća na 222 nm) Ret. Vreme = 7.18 min na Analitički hiralnoj SFC. 'H NMR (500MHz, metanol-oU) 5 7.45-7.39 (m, 2H), 7.23-7.17 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.40-3.48 (m, IH), 2.40 (ddd, J=13.0, 8.9, 3.6 Hz, IH), 2.28-2.21 (m, IH), 2.18 (dd, J=13.0, 11.7 Hz, IH), 2.04 (dd, J=13.0, 7.2 Hz, IH), 1.88-1.79 (m, IH), 1.79-1.70 (m, IH).

Pik 2: 1.8 g (97.2% Optička čistoća na 222 nm). Ret. Vreme = 7.71 min na Analitički hiralnoj SFC. 'H NMR (500MHz, metanol-oU) 5 7.45-7.38 (m, 2H), 7.26-7.20 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.28-3.20 (m, IH), 2.66-2.57 (m, IH), 2.25 (ddd, J=12.8, 11.0, 7.2 Hz, IH), 2.10 (dt, J=12.2, 6.8 Hz, IH), 2.03-1.93 (m, IH), 1.84 (ddd, J=13.0, 7.8, 2.2 Hz, IH), 1.65 (dd, J=13.3, 11.1 Hz, IH).

Intermedijer 3

(5R,7S)-7-(4-Bromofenil)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on

Intermedijer 3A: ((lR,3S)-l-Amino-3-(4-bromofenil)ciklopentil)metanol

Smeši (lR,3S)-metil l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilata, HC1 (1-1 HC1, 15 g, 44.8 mmol) u MeOH (100 mL) na 0 °C dodat je natrijum borohidrid (4 g, 106 mmol) u porcijama. Reakciona smeša je zagrevana do sobne temperature i natrijum borhidrid je dodat u porcijama dok HPLC analizom nije odredjeno da je reakcija završena. Voda je dodata da kvenčuje reakciju. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i isprana sa zasićenim NaCl. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan nekoliko puta. Kombinovani organski sloj je osušen sa MgS04, procedjen i koncentrovan. Proizvod (11 g) je oporavljen posle koncentrovanja. HPLC retenciono vreme= 0.65 min (Stanje G); LC/MS M<+1>= 272: 'H NMR (400MHz, DMSO-de) 8 7.51-7.40 (m, 2H), 7.27 (d, J=8.4 Hz, 2H), 3.32-3.20 (m, 2H), 3.09-2.92 (m, IH), 2.11 (dd,J=12.9,8.7 Hz, IH), 1.98-1.87 (m, IH), 1.80 (qd,7=11.1,7.9 Hz, IH), 1.69-1.58 (m, IH), 1.48 (ddd, J=12.4, 7.9, 2.2 Hz, IH), 1.32 (dd, J=12.8, 10.1 Hz, IH).

Intermedijer 3: (5R,7S)-7-(4-Bromofenil)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on

U smešu ((lR,3S)-l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentil)metanola (11 g, 40.7 mmol) piridina (1-3A, 3.29 mL, 40.7 mmol) u dioksanu (300 mL) dodat je l,l'-karbonildiimidazol (19.81 g, 122 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 4 sata. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i isprana sa IM HC1, fiziološkim rastvorom i zasićenim NaHC03. Smeša je ponovo ekstrahovana nekoliko puta. Organski sloj je osušen sa MgS04, procedjen i koncentrovan da se dobije 10.5 g željenog proizvoda kao bež čvrsta supstanca. HPLC retenciono vreme= 0.87 min (Stanje G). LC/MS M<+1>= 297.9; 'H NMR (400MHz, hloroform-d) 8 7.45 (d,J=8.6Hz, 2H), 7.12 (d, J=8.4 Hz, 2H), 6.42 (br. s., IH), 4.41-4.21 (m, 2H), 3.17-2.91 (m, IH), 2.34 (dd, 7=13.3, 7.4 Hz, IH), 2.23-2.11 (m, 2H), 2.01-1.90 (m, 2H), 1.88-1.74 (m, IH).

Intermedijer 4

(5R,7R)-7-(4-Bromofenil)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on

Intermedijer 4A: ((lR,3R)-l-Amino-3-(4-bromofenil)ciklopentil)metanol

(1R,3R)-Metil l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentankarboksilat (1-2, 3.88 g, 13.01 mmol) je rastvoren u MeOH (65.1 ml) i natrijum borohidrid (1.477 g, 39.0 mmol) je dodat u porcijama. Dodatni natrijum borohidrid je dodat (0.5 ekv. svakih lh) u porcijama dok nije utvrdjeno HPLC analizom da je reakcija završena. Nakon 2 sata utvrdjeno je da je reakcija završena. Reakciona smeša je kvenčovana vodom i razblažena sa etil acetatom. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan tri puta sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, isprani sa zasićenim NaCl, osušeni izand MgS04, procedjeni i koncentrovani da se dobije ((lR,3R)-l-amino-3-(4-bromofenil)ciklopentil)metanol (3.19 g, 11.81 mmol). HPLC ret vreme = 0.68 min; LC/MS M<+1>= 272: 'H NMR (400MHz, CDC13) 8 7.42 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.13 (d, J=8.4 Hz, 2H), 3.49 (s, 2H), 3.32-3.41 (m, IH), 2.19-2.25 (m, IH), 1.98-2.07 (m, IH), 1.90-1.95 (m, IH), 1.66-1.74 (m, 2H), 1.52-1.60 (m, IH).

Intermedijer 4: (5R,7R)-7-(4-Bromofenil)-3-oxa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on

((lR,3R)-l-Amino-3-(4-bromofenil)ciklopentil)metanol (I-4A, 3.19 g, 11.81 mmol) je rastvoren u THF (59.0 ml). Piridin (0.955 ml, 11.81 mmol) i 1,1'-karbonildiimidazol (5.74 g, 35.4 mmol) su dodati u porcijama. Reakciona smeša je mešana tokom 4 h i bilo je praćeno LCMS-om. Po završetku, smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sa IM HC1. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan dva puta sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, isprani sa zasićenim NaCl, osušeni iznad MgS04, procedjeni i koncentrovani da se dobije (5R,7R)-7-(4-bromofenil)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on (2.5 g, 8.44 mmol) posle fleš hromatografije (24g silika gel Kolona; eluent: heksan 2 CV zatim gradijent do 100% EtOAc preko 15 CV). HPLC ret vreme = 0.91 min; LC/MS M<+1>= 298. 'H NMR (400MHz, CDCb) 8 7.46 (d, J=8.5

Hz, 2H), 7.09 (d, J=8.5 Hz, 2H), 5.72- 5.81 (m, IH), 4.35 (dd, J=13Hz, 8Hz, 2H), 3.19-3.24 (m, IH), 2.38-2.44 (m, IH), 2.15-2.26 (m, IH), 2.11-2.14 (m, IH), 1.99-2.05 (m, IH), 1.79-1.85 (m, IH), 1.65-1.72 (m, IH).

Intermedijer 5

(5R,7S)-7-(6-Okso-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on

Intermedijer 5A:ferc-Butil2-(4-((5R,7S)-2-okso-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-7-il) fenil)acetat

U smešu (5R,7S)-7-(4-bromofenil)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on (1-3, 1 g, 3.38 mmol) u dioksanu (10 mL) na sobnoj temperaturi dodat je litijum bis(trimetilsilil)amid (3.71 mL, 3.71 mmol). Smeša je mešana tokom 30 minuta, onda su dodati 1,2,3,4,5-pentafenil-l'-(di-^-butilfosfmo)ferocen (0.121 g, 0.169 mmol), Pd2(dba)3(0.155 g, 0.169 mmol) i{ 2-( terc-butoksi)-2-oksoetii)cinc(H) hlorid (8.10 mL, 4.05 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 80 °C tokom 2 sata, onda je ohladjena do sobne temperature, razblažena sa etil acetatom i isprana sa IM HC1. Organski sloj je osušen sa MgS04, procedjen i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na silika gel kertridžu (40 g) korišćenjem EtOAc/heksan gradijenta (0-100% EtOAc preko 20 minuta) da se dobije 950 mg of terc-butil 2-(4-((5R,7S)-2-okso-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-7-il)fenil)acetata. HPLC retenciono vreme= 0.93 min (Stanje G); LC/MS M<+1>= 332.

Intermedij er 5B: 2-(4-((5R,7S)-2-Okso-3-oksa-l-azaspiro [4.4] nonan-7-il)fenil)sirćetna kiselina

U smešuterc-butil2-(4-((5R,7S)-2-okso-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-7-il)fenil)acetata (I-5A, 1 g, 3.02 mmol) u DCM (20 mL) dodat je TFA (10 mL). Nakon 2h, rastvor je koncentrovanin vacuoi koršćen kao takav u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. HPLC retenciono vreme= 0.65 min (Stanje G); LC/MS M<+1>= 276.

Intermedijer 5: (5R,7S)-7-(6-Okso-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspir o [4.4] nonan-2-on

U smešu 2-(4-((5R,7S)-2-okso-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-7-il)fenil)sirćetne kiseline (I-5B, 800 mg, 2.91 mmol) u DCM (20 mL) dodat je oksalil hlorid (1 ml, 11.42 mmol) i nekoliko kapi DMF. Posle jednog sata, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo.Ostatak je ponovo rastvoren u DCM (20 mL) u staklenoj posudi pod pritiskom. Granularni aluminijum hlorid (1550 mg, 11.62 mmol) je dodat u reakciona smešu i ohladjena je do -78 °C. Etilen je produvavan mehurićima kroz rastvor tokom 5 minuta i onda je reakciona posuda zapečaćena. Reakciona smeša je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature i mešana je tokom 4 sata. Smeša je sipana u led, razblažena sa dihlormetanom i isprana sa IM HC1. Organski sloj je osušen sa MgS04, procedjen i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na silika gel kertridžu (80 g) korišćenjem MeOH/DCM gradijenta (0-10% MeOH over 13CV). Frakcije koje sadrže proizvod su sakupljene i osušenein vacuoda se dobije 770 mg (5R,7S)-7-(6-okso-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on. HPLC retenciono vreme= 0.74 min (Stanje G); LC/MS M<+1>= 286: 'H NMR (400MHz, hloroform-d) 5 7.20-7.00 (m, 3H), 5.49 (br. s., IH), 4.45-4.25 (m, 2H), 3.59 (s, 2H), 3.08 (t, J=6.8 Hz, 3H), 2.58 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.38 (dd, J=13.2, 7.3 Hz, IH), 2.27-2.11 (m, 2H), 2.05-1.92 (m, 2H), 1.92-1.74 (m, IH).

Intermedijer 6

6-((5R,7S)-2-Okso-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-7-il)-3,4-dihidronaftalen-2-il trifluorometansulfonat

U smešu (5R,7S)-7-(6-okso-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-1 - azaspiro[4.4]nonan-2-on (1-5, 340 mg, 1.192 mmol) i DMPU (0.431 mL, 3.57 mmol) u THF (10 mL) na -78 °C dodat je LDA (1.456 mL, 2.62 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 30 minuta onda je dodat l,l,l-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometil)sulfonil metansulfonamid (639 mg, 1.787 mmol) u THF (10 mL). Reakciona smeša je zagrejana do 0 °C. Nakon 1 sat, reakcija je kvenčovana sa vodom. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom isprana zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Organski sloj je osušen sa MgS04, procedjen i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na silika gel kertridžu (40 g) korišćenjem EtOAc/heksan gradijenta (0-100% EtOAc preko 20 minuta) da se dobije 400 mg 6-((5R,7S)-2-okso-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-7-il)-3,4-dihidronaftalen-2-il trifluorometansulfonat. HPLC retenciono vreme= 1.01 min (Stanje G); LC/MS M<+1>= 418. 'H NMR (400MHz, hloroform-d) 8 7.17-6.95 (m, 3H), 6.74 (s, IH), 6.48 (s, IH), 4.48-4.20 (m, 2H), 3.17-2.95 (m, 3H), 2.81-2.60 (m, 2H), 2.33 (dd, 7=13.3, 7.2 Hz, IH), 2.24-2.08 (m, 2H), 2.05-1.74 (m, 3H).

Intermedijer 7

(5R,7R)-7-(6-Okso-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on

Intermedijer7A:terc-Butil2-(4-((5R,7R)-2-okso-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-7-

il)fenil)acetat

U rastvor (5R,7R)-7-(4-bromofenil)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on (Int. 4, 2.1 g, 7.09 mmol) u THF (25.3 ml) na sobnoj temperaturi dodat je LiHMDS (7.80 ml, 7.80 mmol). Rastvor je mešan tokom 15 min. Sledeće, Pd2(dba)3(0.195 g, 0.213 mmol), 1,2,3,4,5-pentafenil-r-(di-?-butilfosfino)ferocen (0.151 g, 0.213 mmol), i (2-(terc-butoksi)-2-oksoetil)cink(II) bromid, tetrahidrofuran (7.07 g, 21.27 mmol) su redom dodavani. Smeša je mešana na 24 °C tokom 2 h. LCMS analiza je pokazala da je potpuno potrošen početni materijal. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i isprana sa IM HC1. Organski sloj je osušen iznad MgSCM, procedjen i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na silika gel kertridžu (40 g) korišćenjem heksan: aceton 100:0 to 0:100 preko 25 CV. terc-Butil 2-(4-((5R,7R)-2-okso-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-7-il)fenil)acetat (2.35 g, 7.09 mmol) je izolovan. HPLC retenciono vreme= 0.95 min (Stanje I): LC/MS M<+1>= 332: 'H NMR (400MHz, hloroform-d) 5 7.27-7.21 (m, 2H), 7.21-7.15 (m, 2H), 5.11 (br. s., IH), 4.40-4.26 (m, 2H), 3.53 (s, 2H), 3.22-3.01 (m, IH), 2.36 (dd, J=13.2, 7.3 Hz, IH), 2.25-2.10 (m, 2H), 2.04-1.92 (m, 2H), 1.91-1.76 (m, IH), 1.47 (s, 9H).

Intermedijer 7: (5R,7R)-7-(6-Okso-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspir o [4.4] nonan-2-on

Braon tečnostferobutil 2-(4-((5R,7R)-2-okso-3-oksa-1-azaspiro[4.4]nonan-7-il)fenil)acetat (I-7A, 2.35 g, 7.09 mmol) je rastvoren u DCM (60 mL) praćeno dodatkom trifluorosirćetne kiseline (20 mL, 260 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom lh, za to vreme je rastvarač uklonjen pod sniženim pritiskom. Dobijeni materijal je razblažen u DCM (60 mL), prečišćen kiselo/baznom ekstrakcijom i stavljen je pod vakuum tokom 1 h. Dobijena braon guma 2-(4-((5R,7R)-2-okso-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-7-il)fenil)sirćetna kiselina (1.952 g, 7.09 mmol) je rastvoren u DCM (60 mL) praćeno dodatkom oksalil hlorida (1.862 mL, 21.27 mmol), i DMF (0.027 mL, 0.355 mmol). Nastali rastvor je mešan dok nije prestalo razvijanje gasa (oko 30 min) na sobnoj temperaturi. LCMS alikvot kvenčovan sa MeOH dok nije pokazana potpuna potrošnja kiseline (RT = 0.65 min, Stanje I) i pojava pretpostavljenog metil estra usled kvenčovanja metanolom (RT = 0.77 min, Stanje I) kao jedinog proizvoda. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i proizvod je stavljen pod vakuum. Braon guma je prenesena u zapečaćenu epruvetu sa DCM (60 mL) (nije potpuno rastvoreno, dobija se braon suspenzija). Reakciona smeša je ohladjena do -78 °C praćeno dodatkom granularnog aluminujum hlorida (2.84 g, 21.27 mmol). Etilen je propušten kroz rastvor u obliku mehurića tokom 7 min i epruveta je zapečaćena. Formiranje talog i reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 15 min i onda je ohladjena do sobne temperature. Reakciona smeša je mešana tokom 2 h na sobnoj temperaturi i zatim oslobođena pritiska. LCMS analiza je pokazala nestanak početnog materijala i pojavu tetralon proizvoda. Reakciona smeša je sipana preko leda, razblažena sa DCM i mešana dok se led nije istopio. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanjem na silika gelu dobijen je (5R,7R)-7-(6-okso-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on (1.05 g, 3.68 mmol). HPLC retenciono vreme= 0.74 min (Stanje I); LC/MS M<+1>=286; 'H NMR (400MHz, hloroform-d) 5 7.23-7.11 (m, 3H), 5.68 (br. s., IH), 4.45-4.30 (m, 2H), 3.59 (s, 2H), 3.31-3.18 (m, IH), 3.08 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.58 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.42-2.39 (m, IH), 2.32-2.15 (m, 2H), 2.09-1.99 (m, IH), 1.91-1.83 (m, IH), 1.82-1.72 (m, IH).

Intermedijer 8

(l-Amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metanol

Intermedijer 8A: 6-Jodo-3,4-dihidronaftalen-l(2H)-on

U bistar rastvor koji se meša 6-amino-3,4-dihidronaftalen-l(2H)-on (15 g, 93 mmol) u sirćetnoj kiselini (150 mL) i vodi (150 mL) dodata je sumporna kiselina (5.5 mL, 101 mmol) u kapima na 0 °C. Rastvor natrijum nitrita (12.90 g, 187 mmol) u vodi (100 mL) je onda dodat u kapima tokom preko 40 min na istoj temperaturi. Smeša je mešana na 0 °C tokom 10 min pre nego što je bila dodata u rastvor koji se meša natrijum jodida (55.8 g, 372 mmol) u vodi (600 mL) polako preko 2 h at 0 °C. Nastala braon suspenzija je mešana na 0 °C tokom 30 min i na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (400 mL, 2 x 100 mL). Spojeni ekstrakti etil acetata su isprani sa vodom (60 mL), zasićenim vodenim rastvorom Na2S203dok braon boja nije nestala, i zasićenim vodenim rastvorom K3PO4(60 mL), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje fleš hromatografijom (330g silika gel Kolona, elucioni gradijent od 5 do 15% etil acetata u heksanima) daje 6-jodo-3,4-dihidronaftalen-l(2H)-on (17.3 g, 63.6 mmol) kao čvrstu supstancu. LC/MS M<+1>=273.

Intermedijer 8B: (S)-N-(6-Jodo-3,4-dihidronaftalen-l(2H)-iliden)-2-(metoksimetil) pirolidin-l-amin

U smešu koja se meša 6-jodo-3,4-dihidronafta1en-l(2H)-on (T-8A, 20.90 g, 77 mmol), monohidrat p-toluensulfonske kiseline (0.584 g, 3.07 mmol), i cikloheksana (40 mL) dodat je (S)-2-(metoksimetil)pirolidin-l-amin (10 g, 77 mmol) u kapima na sobnoj temperaturi pod azotom. Smeša je zagrevana sa azeotropnim uklanjanjem odvajanjem vode tokom 5 h. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (20 mL) i pomešana sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (15 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa etil acetatom (2 x 30 mL). Spojeni organski rastvori su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje Fleš hromatografijom (330g silica gel Kolona, elucioni gradijent od 0% do 20% EtOAc u heksanima) daje (S)-N-(6-jodo-3,4-dihidronaftalen-l(2H)-iliden)-2-(metoksimetil)pirolidin-l-amin (29.1 g, 76 mmol) kao žutu tečnost. LC/MS M<+1>=385.

Intermedijer 8C: (R)-2-Heksil-6-jodo-3,4-dihidronaftalen-l(2H)-on

U rastvor koji se meša diizopropilamina (19.43 mL, 136 mmol) u anhidovanom tetrahidrofuranu (250 mL) dodat je butil litijum rastvor (2.5 M u heksanima, 39.4 mL, 98 mmol) u kapima na 0 °C pod azotom. Nastali rastvor je mešan na istoj at the same temperaturi tokom 15 min pre nego što je rastvor (S)-N-(6-jodo-3,4-dihidronaftalen-l(2H)-iliden)-2-(metoksimetil)pirolidin-1-amin (I-8B, 29.1 g, 76 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (100 mL) dodat u kapima. Reakcioni rastvor je mešan na 0 °C tokom 2 h. Rastvor 1-jodoheksana (22.35 mL, 151 mmol) u tetrahidrofuranu (50 mL) je dodat u kapima na -78 °C i smeša je mešana na istoj temperaturt tokom 2 h. Temperatura je podignuta na sobnu temperaturu preko 1.5 h. Reakciona smeša je kvenčovana sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (50 mL) i vodom (50 mL). Smeša je ekstrahovana sa heksanima (200 mL) i etil acetatom (3 x 50 mL). Kombinovani ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani su pod sniženim pritiskom da daju ulje. Ulje je rastvoreno u THF (200 mL). Rastvor bakar hlorid, dihidrat (52 g) u vodi (220 mL) dodat je na 0 °C u kapima i smeša je energično mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Vodeni rastvor amonijaka dodat je da se podigne pH na približno 9. Smeša je ekstrahovana sa heksanom (100 mL) i dietil etrom (2 x 100 mL). Kombinovani ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani. Prečišćavanjem fleš hromatografijom (330 g silika gel Kolona, eluacioni gradijent od 0 do 15% EtOAc u heksanima) nastaje (R)-2-heksil-6-jodo-3,4-dihidronaftalen-l(2H)-on (21.6 g, 60.6 mmol) kao bela čvrsta supstanca koja sadrži neki od (S) izomera, koji je uklonjen u sledećem stupnju. LC/MS M<+1>= 357.

Intermedijer 8D: (R)-2-Heksil-6-jodo-1,2,3,4-tetrahidronaftalen

U rastvor koji se meša (R)-2-heksil-6-jodo-3,4-dihidronaftalen-l(2H)-on (I-8C, 21.6 g, 60.6 mmol) u dihlormetanu (10 mL) i 100% EtOH (100 mL) dodat je natrijum borohidrid (4.59 g, 121 mmol) u porcijama. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h pre nego što je bila kvenčovana dodatkom acetona polako (hladjeno na vodenom kupatilu). Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je pomešan sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (100 mL) i vodom (50 mL) i ekstrahovan sa etil acetatom (100 mL, 2 x 50 mL). Kombinovani etil acetat ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom da nastane ulje. Ulje je rastvoreno u trietilsilanu (70 mL, 438 mmol). TFA (100 mL, 1298 mmol) je dodat uz energično mešanje. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod azotom tokom 2.5 h. Nakon što je dodata voda (150 mL), smeša je ekstrahovana sa heksanima (100 mL, 2 x 50 mL). Kombinovani ekstrakti su isprani vodom (50 mL) i onda zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 mL), osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovani dajući žutu tečnost. Prečišćavanjem fleš hromatografijom (330g silika gel Kolona, eluacioni gradijent od 0 do 12% EtOAc u heksanima) nastaje (R)-2-heksil-6-jodo-l,2,3,4-tetrahidronaftalen (18.4 g, 53.8 mmol) kao bezbojna tečnost. 'H NMR (400MHz, hloroform-d) 5 7.41 (s, IH), 7.38 (dd, 7=7.9, 1.8 Hz, IH), 6.79 (d, 7=8.1 Hz, IH), 2.82-2.71 (m, 3H), 2.31 (dd, 7=16.5, 10.6 Hz, IH), 1.93-1.85 (m, IH), 1.72-1.60 (m, IH), 1.41-1.24 (m, 11H), 0.92-0.85 (m, 3H). Hiralno SFC odvajanje (CHIRALPAK® AS-H 25 x 3.0 cm, 5um, C02/MeOH =95/5, 180mL/min, 230 nm) dalo je (R)-2-heksil-6-jodo-l,2,3,4-tetrahidronaftalen (11.8 g, PK2) i njegov (S)-izomer (1.4 g, PK1) kao tečnosti.

Intermedijer 8E: 3-((R)-6-Heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentanon

Gas azota propušta se u mehurićima kroz smešu (R)-2-heksil-6-jodo-1,2,3,4-tetrahidronaftalena (I-8D, 11.8 g, 34.5 mmol), tetrabutilamonijum hlorida (9.58 g, 34.5 mmol), kalijum acetata (10.15 g, 103 mmol), paladijum (II) acetata (0.774 g, 3.45 mmol), i anhidrovanog DMF (100 mL) tokom 3 min pre nego što je dodat ciklopent-2-enol (6.8 g, 81 mmol, pripremljen prema Larock, R.C. et al., Tetrahedron, 50(2):305-321 (1994)). Gas azota propušta se u mehurićima kroz rastvor tokom dodatnih 2 min. Smeša je mešana na 80 °C pod azotom tokom 2.5 h i onda je koncentrovana da se ukloni DMF. Ostatak je pomešan sa vodom (150 ml) i ekstrahovan sa etil acetatom (4 x 50 mL). Kombinovani rastvori etil acetata su isprani sa vodom (30 mL), osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, procedjeni kroz silika gel filter, i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanjem fleš hromatografijom (220 g silika gel kolona, eluacioni gradijent od 5 do 50% etil acetata u heksanimas) nastaje 3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il) ciklopentanon (5.96 g, 19.97 mmol) LC/MS M<+1>= 299.

Intermedijer 8F: Metil l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)

ciklopentankarboksilat

Smeša 3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentanona (I-8E, 5.96 g, 19.97 mmol), amonijum hlorida (5.34 g, 100 mmol), natrijum cijanida (4.89 g, 100 mmol), 7 M metanolnog rastvora amonijaka (28.5 ml, 200 mmol), i dihlormetana (15 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 dana. Dodatnih 7 M metanolnog rastvora amonijaka (15 mL) je dodata. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 dana i onda koncentrovana. Ostatak je podeljen izmedju etil acetata (70 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (100 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa etil acetatom (3 x 50 mL). Kombinovani etil acetatni rastvori su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom da se dobije l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il) ciklopentankarbonitril kao polu čvrsta supstanca. Polu čvrst materijal je pomešan sa smešom koncentrovane hlorovodonične kiseline (56 ml, 1843 mmol), vode (28 ml, 1554 mmol), sirćetne kiseline (35 ml), i dioksana (35 ml). Smeša je mešana na 100 °C pod azotom tokom 10 h i onda je koncentrovana da se dobije čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je rastvorena u metanolu (20 mL) i pomešana sa toluenom (20 mL). Smeša je koncentrovana do suva. Ovaj proces sušenja je ponovljen još jednom dajući suvu čvrstu supstancu. Čvrsta supstanca je rastvorena u anhidrovanom metanolu (300 mL). Tionil hlorid (11.66 mL, 160 mmol) je dodat u kapima na 0 °C pod azotom. Reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 7 h pre nego što je bila koncentrovana. Ostatak je učinjen baznim sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (100 mL) i nešto čvrstog kalijum karbonata i ekstrahovan sa etil acetatom (100 mL, 3 x 30 mL). Kombinovani etil acetatni ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanjem fleš hromatografijom (80 g silika gel kolona, eluacioni gradijent od 20 do 100% etil acetata u heksanima) nastaje metil 1-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentankarboksilat (5.7 g, 15.94 mmol) kao tečnost. LC/MS M<+1>=358.

Intermedijer 8:

Metil 1 -amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il) ciklopentankarboksilat (I-8F, 5.7 g, 16 mmol) je rastvoren u EtOH (60 mL) i metilen hloridu (15 mL). Natrijum borohidrid (2.5 g, 67 mmol) je dodat. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Hlorovodonična kiselina (6 N vodena, 40 mL) je dodata polako na 0 °C da učini pH otprilike 1. Nakon toga smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 60 min, dodat je natrijum hidroksid (lOg in 20 mL of voda) da podesi pH vrednost oko 12. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 min pre nego što je bila koncentrovana da se uklone organski rastvarači. Vodeni ostatak je razblažen sa vodom (20 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (100 mL, 2 x 50 mL). Spojeni etil acetatni ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, dekolorisani ugljeni, procedjeni kroz CELITE® filter, i koncentrovani pod sniženim pritiskom dajući (l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metanol (5.0 g, 15 mmol) kao belu čvrstu supstancu.

PrimeriT i 2 iJedinjenja3 i 4

Intermedijer 8 je podeljen u tri frakcije: Fl (Pik 1), F2 (Pik 2 i Pik 3), F3 (Pik 4)) korišćenjem hiralnog SFC (Kolona: CHIRALPAK® AD-H 25 x 3cm, 5um; Mobilna faza: C02/ (MeOH +0.1%DEA) =88/12;Protok 200 mL/min; Detektor Talasne dužine: 220 nm; Temperatura Kolone: 35 °C). Druga frakcija (F2) je ponovo odvojena korišćenjem hiralne SFC (Kolona: CHIRALPAK® AS-H 25 x 3cm, 5 um; Mobilna faza: C02/ [MeOH-MeCN (1:1) +0.5% DEA] =88/12; Protok 180mL/min; Detektor Talasne dužine: 220 nm; Temperatura Kolone: 35 °C) dajući Pik 2 i Pik 3. Sva četiri izomera su bele čvrste supstance sa LC/MS M<+1>= 330.

Primer 1 (Pik 2): 'HNMR (400MHz, hloroform-d) 5 7.07-6.95 (m, 3H), 3.54-3.44 (m, 2H), 3.34 (tt, 7=11.0, 7.0 Hz, IH), 2.92-2.74 (m, 3H), 2.39 (dd, 7=16.4, 10.7 Hz, IH), 2.29-2.14 (m, IH), 2.08-1.84 (m, 3H), 1.76-1.65 (m, 3H), 1.46-1.26 (m, 12H), 0.99-0.85 (m, 3H).

Primer 2 (Pik 4): 'H NMR (400MHz, hloroform-d) 5 7.06-6.92 (m, 3H), 3.52-3.37 (m, 2H), 3.09-2.93 (m, IH), 2.88-2.72 (m, 3H), 2.35 (dd, 7=15.8, 10.6 Hz, IH), 2.26 (dd, 7=12.7, 7.8 Hz, IH), 2.11-2.00 (m, IH), 1.97-1.84 (m, 2H), 1.78-1.60 (m, 3H), 1.43-1.22 (m, 12H), 0.95-0.83 (m, 3H).

Jedinjenje 3 (Pik 1): 'H NMR (400MHz, hloroform-d) 5 7.03-6.92 (m, 3H), 3.46 (s, 2H), 3.39-3.24 (m, IH), 2.88-2.72 (m, 3H), 2.36 (dd, 7=16.3, 10.8 Hz, IH), 2.27-2.13 (m, IH), 2.08-1.82 (m, 3H), 1.76-1.63 (m, 3H), 1.43-1.20 (m, 12H), 0.94-0.85 (m, 3H).

Jedinjenje 4 (Pik 3): 'H NMR (400MHz, hloroform-d) S 7.02-6.92 (m, 3H), 3.51-3.37 (m, 2H), 3.08-2.94 (m, IH), 2.87-2.71 (m, 3H), 2.35 (dd, 7=16.2, 11.1 Hz, IH), 2.25 (dd, 7=13.1, 7.8 Hz, IH), 2.12-1.97 (m, IH), 1.97-1.83 (m, 2H), 1.81-1.59 (m, 3H), 1.43-1.21 (m, 12H), 0.96-0.74 (m, 3H).

Jedinjenja 5-8 su dobijena prema opštim sintezama i procedurama odvajanja za Intermedijer 8, Primeri 1-2, i Jedinjenja 3-4 korišćenjem (S)-enantiomera (PK1) jodid Intermedijer I-8D. Sva četiri izomera (Jedinjenja 5-8) su imala MW = 329.5; LC/MS M<+1>= 330; HPLC Stanje: C.

Alternativno Dobij anje Primera 2

Dobijanje 2A: (5R,7S)-7-(6-Heksil-7,8-dihidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspir o [4.4] nonan-2-on

U smešu 6-((5R,7S)-2-okso-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-7-il)-3,4-dihidronaftalen-2-il trifluorometansulfonata (Int. 6, 1 g, 2.396 mmol) i NMP (2.306 mL, 23.96 mmol) u THF (20 mL) na -40 °C dodat je rastvor litijum bis(trimetilsilil) amida u THF (2.396 mL, 2.396 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 15 minuta, i onda su dodati gvoždje acetilacetonat (0.042 g, 0.120 mmol) i heksilmagnezijum bromid u etru (2.396 mL, 4.79 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 30 minuta i kvenčovana sa vodom. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i isprana sa IM HC1. Organski sloj je osušen sa MgS04, procedjen i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na silika gel kertridžu (40 g) korišćenjem EtOAc/heksan gradijenta (0-100% EtOAc preko 12 CV) da se dobije 662 mg (5R,7S)-7-(6-heksil-7,8-dihidronaftalen-2-il)-3-okssa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on kao bela čvrsta supstanca. HPLC retenciono vreme= 1.28 min (Stanje G); LC/MS M<+1>= 354: 'H NMR (400MHz, hloroform-d) 8 7.03-6.88 (m, 3H), 6.21 (s, IH), 5.16 (br. s., IH), 4.44-4.15 (m, 2H), 3.13-2.96 (m, IH), 2.80 (t, J=8.0 Hz, 2H), 2.47-2.08 (m, 6H), 2.05-1.93 (m, 2H), 1.90-1.73 (m, IH), 1.68-1.43 (m, 4H), 1.41-1.22 (m, 5H), 1.01-0.83 (m, 3H).

Dobijanje 2B: (5R,7S)-7-((R)-6-HeksU-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspir o [4.4] nonan-2-on

Smeša (5R,7S)-7-(6-heksil-7,8-dihidronaftalen-2-il)-3-oksa-1 -azaspiro[4.4]nonan-2-on (2A, 760 mg, 2.15 mmol) i (-)-2,3-bis[(2R,5R)-2,5-dimetilfosfolanil]-N-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]maleiimide(l,5-ciklooktadien)rodijum(I) tetrafluoroborat (273 mg, 0.43 mmol) u MeOH (27 mL) je hidrogenizovan na 850 PSI tokom 1000 minuta korišćenjem 100 mL HEL autoklava. Reakciona smeša je procedjena i koncentrovanain vacuo.Sirovi materijal je prečišćen na silika gel kertridžu (40 g) korišćenjem EtOAc/heksan gradijenta (0-100% EtOAc preko 20 minuta) da se dobije 640 mg (5R,7S)-7-(6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on u 1:2 odnosu dva izomera. Željeni glavni izomer je odvojen korišćenjem CHIRALPAK® AS-H Kolona pod SFC stanjem (35%o MeOH in C02). Retenciono vreme= 5.14 min. Oporavljen 400 mg (5R,7S)-7-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on. 'H NMR (400MHz, metanol-oU) 8 7.02-6.91 (m, 3H), 4.47-4.20 (m, 2H), 3.02 (tt, J=11.0, 7.2 Hz, IH), 2.87-2.74 (m, 3H), 2.41-2.24 (m, 2H), 2.17-2.03 (m, 2H), 2.00-1.89 (m, 3H), 1.86-1.74 (m, IH), 1.73-1.61 (m, IH), 1.51-1.28 (m, 11H), 0.99-0.88 (m, 3H).

Alternativno Dobijanje Primera 2B:

Smeša (5R,7S)-7-(6-heksil-7,8-dihidronaftalen-2-il)-3-oksa-1 -azaspiro[4.4]nonan-2-on (2A, 2.1g, 5.94 mmol) u DCM (lOml) dodata je u kapima rastvoru ((lR,2S,3R,5R)-2,6,6-trimetilbiciklo[3.1.1]heptan-3-il)borana u DCM (30 ml) na -35 °C pod azotom. (Boran reagens je napravljen na sledeći način: U smešu S-Alpin-Boramina (8.4g, 20.18 mmol) u THF (35ml) dodat je BF3etereat (5.11ml), 40.4mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5h, procedjena pod azotom, i kolač je ispran sa hladnim THF (2x6ml). Filtrat i ispiranja su spojeni i koncentrovani pod vakuumom. Ostatku je dodat DCM (20 ml) i rastvor je ponovo koncentrovan. Dobijeni reagens je ponovo rastvoren u DCM (30 ml) i korišćen direktno u koraku hidroboracije). Posle mešanja na -35 °C do -30 °C tokom 4 h i na -25 °C do -20 °C tokom 2 h, MeOH (3.6 mL) dodat je i reakciona smeša je mešana na -10 °C tokom 10 min i na 0 °C tokom 10 min. Smeša je razblažena sa THF (25 ml), onda je rastvor NaOH (6N, 9.9 ml, 59.4 mmol) dodat u kapima praćeno sa H2O2(30%, 6.07ml, 59.4mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Smeši je dodat DCM (100 ml) i voda (50 ml). Ceo rastvor je procedjen kroz filter CELITE® i kolač je ispran sa DCM. Dva sloja su razdvojena, vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (50 ml) i spojen sa organskim slojem. Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (100 ml) i fiziološkim rastvorom (100 ml), osušeni iznad anhidrovanog Na2S04i koncentrovaniin vacuo.Sirovi materijal je prečišćen na silika gel kertridžu (40 g) korišćenjem EtOAc/heksan gradijent (0-50% EtOAc preko 55 minuta) da se dobije 1.9 g (86%>) (5R,7S)-7-(6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on u 8:1 odnosu dva izomera. Smeša je preneta u sledeći korak bez razdvajanja diastereomera.

U (5R,7S)-7-(6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-1 -azaspiro[4.4]nonan-2-on (3.2g, 8.61 mmol) u MeOH (30 ml) dodat je Pd/C (10%>, 1.1 g). Slab vakum je primenjen na reakcionom balonu, praćeno punjenjem od pozadi sa vodonikom iz vodoničnog balona. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 6 h, EtOAc (20 ml) je dodat da se rastvori talog. Slab vakum je primenjen na reakcionom balonu, praćeno punjenjem od pozadi sa vodonikom iz vodoničnog balona i sadržaj je mešan na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Smeša je procedjena kroz filter CELITE® i kolač je ispran sa vodom i kolač je ispran sa EtOAc, DCM, MeOH i EtOAc. Spojeni rastvarači su koncentrovaniin vacuodajući sirovu smešu (3.06g) kao 8:1 diastereomernu smešu. Glavni izomer je odvojen korišćenjem CHIRALPAK® AS-H Kolone pod SFC uslovima (35% MeOH in CO2). Retenciono vreme= 4.64 min. Oporavljen 2.35g (77%) (5R,7S)-7-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on.

Primer2:

U smešu (5R,7S)-7-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-ona (400 mg, 1.125 mmol) u dioksanu (30 mL) dodat je vodeni NaOH (IN, 20 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 100 °C tokom 3 dana, ohladjena do sobne temperature, razblažena sa etil acetatom i isprana sa vodom. Organski sloj je osušen sa MgS04, procedjen i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na silika gel kertridžu (24 g) korišćenjem 20% (2N NH3/MeOH) u DCM/DCM gradijenta (0-75% od 20% (2N NH3/MeOH) u DCM preko 13 CV) da se dobije 290 mg ((lR,3S)-l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metanol. HPLC retenciono vreme= 10.09 min

(Stanje H); LC/MS M<+1>= 330; 'H NMR (400MHz, metanol-oU) 5 7.03-6.91 (m, 3H), 3.54-3.41 (m, 2H), 3.01 (tt, J=ll.l, 7.2 Hz, IH), 2.87-2.69 (m, 3H), 2.34 (dd, J=16.2, 10.5 Hz, IH), 2.20 (dd, J=13.0, 7.5 Hz, IH), 2.07-1.84 (m, 3H), 1.83-1.60 (m, 3H), 1.60-1.48 (m, IH), 1.47-1.25 (m, 11H), 1.00-0.88 (m, 3H).

Primer 2, Slobodna Baza, Oblik N-l:

Primer 2, slobodna baza, Oblik N-l je dobijena pripremom štoka rastvora koji sadrži 385 mg Primera 2 rastvorenog u smeši 18 ml THF i 1.25 ml H2O (20 mg/ml). Sledeće, 52 ul štok rastvora je uparen do suva. Osušenom materijalu dodat je 52 ul rastvora 50:50 odnos etanokheptan. Nastali rastvor je uparen da se dobiju ploče kristalnog materijala.

Primer 2, So Mono-HCl, Monohidrat, Oblik H-l:

Monohidrat, so mono-HCl Primera 2, Oblik H-l je dobijen pripremom 50:50 vodenog rastvora metanola (200 ul) koji sadrži 3.2 mg Primera 2. Sledeće, 400 ul 0.025M vodenog rastvora HC1 je dodato u kapima uz mešanje. Dobijeni rastvor je uparen dajući ploče kristalnog materijala.

Primer 2, So Mono-HCl, Monohidrat, Oblik H-2:

Monohidrat, so mono-HCl Primera 2, Oblik H-2 je dobijen pripremom 50:50 vodenog rastvora THF (200ul) solution koji sadrži 3.2 mg Primera 2. Sledeće, 400ul 0.025M vodenog rastvora HC1 je dodato u kapima uz mešanje. Rastvor je onda uparen da nastanu ploče monohidratnog H-2 oblika soli mono-HCl Primera 2.

Primer 2, So Mono-HCl, Oblik N-3:

Mono-HCl so Primera 2, Oblik N-3 je dobijen pripremom 200ul rastvora izopropil alkohola koji sadrži 3.2 mg Primera 2. Sledeće, 400 ul 0.025 M alkoholnog rastvora HC1 dodat je u kapima uz mešanje. Rastvor je uparen da se dobiju ploče N-3 oblika soli mono-HCl Primera 2.

Primer 2, So Mono-HCl, Oblik N-4:

So Mono-HCl Primera 2, Oblik N-3 je dobijena pripremom 200 ul 50:50 metanol/THF rastvora koji sadrži 3.2 mg Primera 2. Sledeće, 400ul 0.025 M alkoholni rastvor HC1 je dodat u kapima uz mešanje. Nastali rastvor je uparen da se dobiju ploče N-4 oblika soli mono-HCl Primera 2.

Primer 2, Monohidrat, So Hemi-L-Jabučne Kiseline, Oblik H-l:

Monohidrat, so hemi-L-jabučne kiseline, Oblik H-l je dobijen pripremom 200 ul 50:50 vodenog rastvora THF koji sadrži 3.2 mg Primera 2. Sledeće, 240ul 0.042 M alkoholnog rastvora L-jabučne kiseline dodat je u kapima uz mešanje. Nastali rastvor je uparen da se dobiju ploče H-l oblika soli hemi-L-jabučne kiseline Primera 2.

Primer 2, Monohidrat, So Hemi-Malonske Kiseline, Oblik H-l:

Monohidrat, so hemi-malonske kiseline, Oblik H-l je dobijen pripremom 200 ul 50:50 vodenog rastvora THF koji sadrži 3.2 mg Primera 2. Sledeće, 193 ul 0.052 M alkoholni rastvor malonske kiseline dodat je u kapima uz mešanje. Nastali rastvor je uparen da se dobiju ploče H-l oblika soli hemi-malonske kiseline Primera 2.

Primer 2,1/3-Hidrat, So Fosforne Kiseline, Oblik H.33-1:

1/3-hidrata, so fosforne kiseline, Oblik H.33-1 je dobijen propremom 200 ul 50:50 vodenog rastvora metanola koji sadrži 3.2 mg Primera 2. Sledeće, 136 ul 0.073 M alkoholnog rastvora fosforne kiseline dodat je u kapima uz mešanje. Nastali rastvor je uparen da se dobiju ploče H.33-1 oblik soli fosforne kiseline Primera 2.

Primer 2, So tf-(+)-Bademove Kiseline, Oblik N-l:

So R-(+)-bademove kiseline, Oblik N-l je dobijen dodavanjem Primera 2 i ekvimolarne količine i?-(+)-bademove kiseline u smešu metanola i acetonitrila. Rastvor je uparen da se dobiju ploče N-1 oblika soli mono-R-(+)-bademove kiseline Primera 2.

Primer 9

((lR,3R)-l-Amino-3-((R)-6-heksU-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metil dihidrogen fosfat

U rastvor koji se meša ((lR,3R)-l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il) ciklopentil)metanola (Primer 1,10 mg, 0.030 mmol) u anhidrovanom acetonitrilu (1 mL) na 0 °C dodat je pirofosforil hlorid (0.042 mL, 0.303 mmol). Bistar rastvor dobijen je mešanjem na istoj temperaturi tokom 5 min i na RT preko noći. Nakon toga je dodata voda (0.4 mL), smeša je mešana na RT tokom 1 h. Prečišćavanje korišćenjem reverzno fazne HPLC (Luna Axia 5u cl8 30 x 100 mm, 10 min. gradijent od 40% do 100% Rastvarača B, Rastvarača A: 0.1% TFA u vodi, Rastvarač B: 0.1% TFA u MeCN), koncentrovanje i liofilizacija dali su ((lR,3R)-l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metil dihidrogen fosfat (2 mg, 4.15 umol, 13.68% prinos) kao belu čvrstu supstancu. HPLC retenciono vreme= 3.94 min (Stanje C); LC/MS M<+1>= 410; 'H NMR (500MHz, metanol-d4+ KOH) 5 6.97-6.87 (m, 3H), 3.77-3.71 (m, IH), 3.71-3.66 (m, IH), 2.83-2.70 (m, 3H), 2.32 (dd, J=16.2, 10.7 Hz, IH), 2.14-1.98 (m, 2H), 1.96-1.83 (m, 2H), 1.74-1.60 (m, 3H), 1.59-1.49 (m, IH), 1.45-1.26 (m, 11H), 0.94-0.87 (m, 3H), jedan proton pod pikom metanolnog rastvarača (~3.3ppm).

Primer 10

((lR,3S)-l-Amino-3-((R)-6-heksU-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)

ciklopentil)metil dihidrogen fosfat

Smeša fosfor pentoksida (150 mg, 0.528 mmol) i 85% fosforne kiseline (0.15 mL, 10.01 umol) je mešana na 100 °C pod azotom tokom lh pre nego što je dodat ((1R,3S)-1-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metanola (Primer 1, 6 mg, 0.018 mmol). Rastvor je mešan na istoj temperaturi tokom 3 h. Voda (0.5 mL) je dodata na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Prečišćavanje korišćenjem reverzno fazne HPLC (PHENOMENEX®) Luna Axia 5 u cl8 30 x 100 mm, izvođenje od 10 minuta, Rastvarač A: 10% MeOH: 90% H20: 0.1% TFA, Rastvarač B: 90% MeOH, 10% H20, 0.1%. TFA), koncentracija, i liofilizacija, dala je ((lR,3S)-l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il) ciklopentil)metil dihidrogen fosfat (4 mg, 9.38 umol) kao belu čvrstu supstancu. LC/MS M<+1>= 410. HPLC retenciono vreme= 3.96 min (Stanje C).

'H NMR (400MHz, metanol-cMCDCh) 8 7.10-6.83 (m, 3H), 4.06-3.77 (m, 2H), 3.20-3.06 (m, IH), 2.85-2.74 (m, 2H), 2.48 (dd, J=12.9, 6.9 Hz, IH), 2.40-2.28 (m, IH), 2.19-2.08 (m, IH), 2.05-1.90 (m, 4H), 1.80-1.62 (m, 2H), 1.48-1.22 (m, 12H), 0.95-0.86 (m, 3H).

Alternativno dobijanje Primera 10

Alternativno dobijanje 10A:fcrc-Butil((lR,3S)-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-l-(hidroksimetil)ciklopentil)karbamata

U rastvor koji se meša ((lR,3S)-l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metanol (Primer 2, 270 mg, 0.819 mmol) i anhidrovani dihlormetan (6 mL) dodat je di-ferc-butil dikarbonat (536 mg, 2.458 mmol). Nastali rastvor je mešan na sobnoj temperaturifor 3 h. Smeša je koncentrovana. Prečišćavanje fleš hromatografijom (24g silika gel Kolona, eluacioni gradijent od 10 do 60% etil acetata u heksanima) dalo jetert- butil((lR,3S)-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-l-(hidroksimetil)ciklopentil)karbamat (337 mg, 0.784 mmol, 96% prinos) kao belu čvrstu supstancu. LC/MS M<+1>= 430.

Alternativno dobijanje 10B:terc-Butil((lR,3S)-l-(((bis(2-(trimetilsilil)etoksi)fosforil)oksi)metil)-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-

il)ciklopentil)karbamata

U rastvor koji se mešaterc-butil((lR,3S)-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-l-(hidroksimetil)ciklopentil)karbamat (Dobijanje 10A, 336 mg, 0.782 mmol) u anhidrovanom metilen hloridu (7 mL) dodat je bis(2-(trimeti1si1i1)etil)diizopropilfosforamidit (858 mg, 2.346 mmol) u jednoj porciji na 0 °C pod azorom. Sledeće, 1, 2, 4-lH-triazol (162 mg, 2.346 mmol) je onda dodat. Reakciona smeša je mešana na 40 °C tokom 18 h. Rastvor je ohladjen do 0 °C pre nego stoje dodat vodonik peroksid (0.781 mL, 7.82 mmol). Smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi tokom 1 h pre nego što je dodat metanol (3 mL) da napravi od smeše homogeni rastvor. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Zasićeni vodeni rastvor natrijum tiosulfata (5 mL) je dodat je da kvenčuje reakciju. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ekstrahovan sa etil acetatom (3x4 mL). Kombinovani organski rastvori su osušeni (Na2S04) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje fleš hromatografijom (24 g silika gel Kolona, eluacioni gradijent od 5 do 25%> of etil acetat u heksanima) daloterc-butil((1R,3S)-1-(((bis(2-(trimetilsilil)etoksi)fosforil)oksi)metil)-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)karbamat (514 mg, 0.724 mmol) kao tečnost.

Primer 10:

U rastvor koji se terc-butil ((lR,3S)-l-(((bis(2-(trimetilsilil)etoksi)fosforil)oksi)metil)-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil) karbamat (Dobijanje 10B, 500 mg, 0.704 mmol) u dihlormetanu (6 mL) dodat je TFA (6 mL) polako na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h pre nego što je dodato 90 mL heptana. Rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Zatim, 70 mL metanola je dodato čvrstom ostatku, praćeno IN aq NaOH (4 mL). HOAc (0.4 mL) je onda dodat na 60 °C da zakiseli rastvor do pH = 4. Čvrsto-tečna smeša je mešana na 60 °C tokom 1 h. Čvrsta supstanca je odvojena, isprana sa metanolom, vodom, metanolom, etil acetatom, i metanolom. Liofilizacija je dala ((lR,3S)-l-amino-3-((R)-6-heksil-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)ciklopentil)metil dihidrogen fosfat (257 mg, 0.619 mmol, 88% prinos) kao belu čvrstu supstancu. LC/MS M<+1>= 410; 'H NMR (400MHz, metanol-oUK+KOH) 8 7.00-6.86 (m, 3H), 3.78-3.62 (m, 2H), 3.09-2.97 (m, IH), 2.84-2.67 (m, 3H), 2.38-2.22 (m, 2H), 2.03-1.74 (m, 4H), 1.73-1.60 (m, 2H), 1.50 (t, J=12.3 Hz, IH), 1.44-1.27 (m, 11H), 0.95-0.86 (m, 3H).

Komparativno Jedinjenje 11

(lR,3R)-l-Amino-3-(6-(pentiloksi)naftalen-2-il)ciklopentil)metanol

Komparativno Jedinjenje 11 je stavljeno na uvid javnosti u WO 2008/079382, Primer Q.l.

Intermedijer 11A: (5R,7R)-7-(6-(Pentiloksi)naftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]

nonan-2-on

Smeša 1-pentanola (6.13 mL, 56.4 mmol), monohidrat p-toluenesulfonske kiseline (4.60 mg, 0.024 mmol), i trimetoksimetana (0.353 mL, 3.22 mmol) je mešana na 100 °C tokom 3 hr sa sporim strujanjem vazduha koji teče preko smeše da ukloni metanol i deo pentanola. Preostala dobijena tečnost je pomešana sa (5R,7R)-7-(6-okso-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on (Int. 7, 230 mg, 0.806 mmol) i mešana na 100 °C pod azotom tokom 2.5 hr. Rastvor je ohladjen do sobne temperature pre nego što je dodat paladijum na ugljeniku (172 mg, 0.081 mmol), zatim etil acetat (4 mL). Smeša je ostavljena da se meša u balonu pod pritiskom vodonika na sobnoj temperaturi preko noći. Nastale smeše su procedjene kroz membranski filter i filtrat je koncentrovan. Prečišćavanjem Fleš hromatografijom (24g silika gel kolona, 0% do 70% etil acetat u heksanima) dobijeno je 180 mg materijala koji zahteva dodatno prečišćavanje. Odvajanjem Superkritičnom Fluidnom Hromatografijom dobijen je veliki deo frakcije koji je UV analizom identifikovan kao (5R,7R)-7-(6-(pentiloksi)naftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on (36 mg) kao čvrsta supstanca. Instrument: Thar 350 Thar Analitički SFC-MS; Uslovi: Analitički Uslovi: Analitička Kolona: AD-H (0.46 x 25cm, 5um); BPR pritisak: 100 bara; Temperatura: 45 °C; Protok 3.0 mL/min; Mobilna faza: CO2/ MeOH (70/30); Detektor Talasne dužine: UV 200-400 nm. Preparativni Uslovi: Preparativna Kolona: AD-H (3 x 25cm, 5um); BPR pritisak: 100 bara; Temperatura: 35 °C; Protok 120 mL/min; Mobilna faza: CO2/ MeOH (70/30); Detektor Talasne dužine: 220 nm; Separacioni program: Stack Ubrizgavanje ; Ubrizgavanje : 2.5mL sa cikličnim vremenom 480 sek.

(Analitički SFC ret. vreme= 11.68 min, čistoća >99.5%) HPLC retenciono vreme= 1.11 min (Stanje G); LC/MS M<+1>= 354.<*>H NMR (400MHz, hloroform-d) 8 7.68 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.55 (s, IH), 7.30 (s, IH), 7.21-7.04 (m, 2H), 6.48 (br. s., IH), 4.50-4.28 (m, 2H), 4.07 (t, J=6.6 Hz, 2H), 3.49-3.31 (m, IH), 2.46 (dd, J=13.3, 7.6 Hz, IH), 2.39-2.24 (m, IH), 2.24-2.12 (m, IH), 2.12-2.00 (m, IH), 2.00-1.90 (m, IH), 1.90-1.76 (m, 3H), 1.58-1.30 (m, 4H), 0.96 (t, J=7.0 Hz, 3H). ;Komparativno Jedinjenje 11: ;Rastvoru (5R,7R)-7-(6-(pentiloksi)naftalen-2-il)-3-oksa-l-azaspiro[4.4]nonan-2-on (36mg, 0.102 mmol) u dioksanu (2 mL) i vode (0.8 mL) dodat je LiOH (36.6 mg, 1.528 mmol). Rastvor je zagrevan do 90 °C i mešanje tokom 15 sati. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature i sipana je u etil acetat i isprana sa vodom. Sirovi materijal je prečišćen reverzno faznom HPLC [Kolona: Luna Axia 30<*>lOOmm; Gradijent vreme: 10 min; Protok = 40 ml/min; Rastvarač A = 10% MeOH-90%, Voda-0.1%. TFA; Rastvarač B = 90%. MeOH-10% voda-0.1% TFA; Start % B = 20; Finalno % B = 100]. Frakcije koje sadrže proizvod su sakupljene i osušene pod visokim vakumom da daju ((lR,3R)-l-amino-3-(6-(pentiloksi)naftalen-2-il)ciklopentil)metanol, TFA (31 mg) kao čvrstu supstancu. HPLC retenciono vreme= 0.90 min (Stanje G); LC/MS M<+1>= 328. 'H NMR (400MHz, metanol-d4) 8 7.75-7.66 (m, 2H), 7.66-7.59 (m, IH), 7.40-7.33 (m, IH), 7.17 (d, J=2.6 Hz, IH), 7.14-7.08

(m, IH), 4.07 (t, J=6.5 Hz, 2H), 3.74-3.60 (m, 2H), 3.59-3.41 (m, IH), 2.39-2.22 (m, 3H), 2.04-1.80 (m, 5H), 1.55-1.34 (m, 4H), 1.01-0.89 (m, 3H).

BIOLOŠKI ESEJI

EsejFosforilacije Pune krvi Miša (WBP)

Jedinjenja Formule (III) zahtevaju bioaktivaciju kroz fosforilaciju alkohola da obezbede aktivni fosfatni estar jedinjenja Formule (II). Prema Brinkmann, V. et al., (J. Biol. Chem. 277:21453-21457 (2002)), stereoizomerna konfiguracija amina koja sadrži ugljenikov centar može uticati na relativni obim u kojoj se ova fosforilacija odvija.

Relativni obim fosforilacije Primera 1-2 i Jedinjenja 3-8 procenjen je inkubacijom jedinjenja alkohola u punoj krvi miša. Pojava fosforilisanog jedinjenja je merena posle 4 sata da se odredi relativni obim formiranja fosfatnog estra. Puna krv je sveže dobijena od BALB/C miša retro-orbitalnim krvarenjem i sakupljena u epruvete koje sadrže EDTA. Puna krv tretirana EDTA-om je alikvotirana u 1.4 mL propilenskim epruvetama u formatu 96 bunara (lOOuL po uzorku) i izložena test jedinjenju (lmM u DMSO) do finalne koncenracije od 10 uM (n=2 po jedinjenju). Epruvete su zapečaćene i vorteksovane, onda prebačene u orbitalni šejker da se inkubiraju na 37 °C, 225 RPM tokom 4 sata. Na kraju inkubacije, uzorci su naneti na Ahlstrom 226 netretirani Specimen Collection Papir (2uL po tački n=2) i ostavljeni su da se osuše na vazduhu preko noći. Sušene Blood Spot (DBS) Kartice čuvane su na sobnoj temperaturi u zatvorenim plastičnim kesama sa dodatim isušivačem. Kada su spremne za analizu, a isečak od 6 mm (ekvivalent 12.5ul mokre krvi) je prenet na n=l i smeštena u plitku filter ploču sa 96-bunara. Sledeće, dodato je 105 uL smeše 75% acetonitrila i 25% vode koja sadrži Interni Standard i nežno vorteksovano tokom 30 min i onda centrifugirano. Supernatant je odvojen od proteinskog taloga i ubrizgano je 5 ul. Parentalno jedinjenje (alkohol) i aktivna jedinjenja fosfatnog estra su kvantitativno analizirani, korišćenjem DBS kalibracione krive, pomoću LC/MS/MS na Triple Quadrapole Instrumentu. Odredjeni su odnosi oblasti fosforilisanih jedinjenje prema parentalnom (alkohol) jedinjenju. Veća vrednost za odnos fosforilisanog jedinjenja prema parentalnom (alkohol) jedinjenju ukazuje na veće formiranje jedinjenja fosfatnog estra od parentalnog (alkohol) jedinjenja. Tabela 2 prikazuje rezultate (prošek od dva eksperimenta) za Primere 1-2 i Jedinjenja 3-8 na

4 sata. Za Primere 1-2 i Jedinjenje 6, odnosi oblasti formiranja jedinjenja fosfatnog estra od ishodnog (alkohol) jedinjenja na 4 sata su bili najmanje 0.59. Nasuprot tome, odnosi oblasti formiranja jedinjenja fosfatnog estra od iparentalnog(alkohol) jedinjenja za Jedinjenja 3-5 i 7-8 su bili 0.17 ili manje. U ovoj studiji, nadjeno je da Primeri 1-2 i Jedinjenje 6 podležu fosforilaciji u većem obimu od Jedinjenja 3-5 i 7-8.

In VivoFormacija Fosfat Estra kod Miša

BALB/c miševi su oralno dozirani sa Primerom 1, Primerom 2, Jedinjenjem 3, i Jedinjenjem 4 (10 mg/kg kao rastvor ili suspenzija na nosaču, polietilen glikol 300, "PEG300"). Krv je uzeta na 24 hr, nanesena na Suve Blood Spot (DBS) Karte, i analizirana kako je opisano za WBP testu. Referentni materijal (parentalnialkohol i fosfatni estar) je analiziran da optimizuje LC-MS/MS test i omogući izražavanje podataka u koncentracijama. DBS standardne krive sadrže oba i parentalnialkohola i jedinjenja fosfatnog estra koja su pripremljena i raščlanjena na isti način kao uzorci studije i analizirani su optimizovanim LC-MS/MS da se kvantifikuje količina formiranog jedinjenja fosfatnog estra. Rezultati u Tabeli 3 predstavljaju prosečne rezultate svih životinja u svakoj tretiranoj grupi (n = 3). Veća vrednost za koncentraciju jedinjenja fosfatnog estra ukazuje na veće formiranje jedinjenja fosfatnog estra od parentalnog (alkohol) jedinjenja. U ovoj studiji, nadjeno je da Primeri 1-2 podležu formiranju fosfatnog estra u većem obimu od Jedinjenja 3-4. Rezultati ovein vivostudije su u saglasnosti sa rezultatima dobijenih u prethodnom testu Fosforilacije Pune Krvi Miša.

SIPi Test Vezivanja

Membrane su pripremljene iz CHO ćelija koje eksprimiraju humani SIPi. Celijski taloži (lxl0<9>ćelije/talog) su suspendovani u puferu koji sadrži 20 mM HEPES (4-(2-hidroksietil)-l-piperazinetansulfonske kiseline), pH 7.5, 50 mM NaCl, 2 mM EDTA (Etilenediamintetrasirćetna kiselina) i koktel Proteaza Inhibitoru (Roche), i prekinuti na ledu korišćenjem Polvtron homogenizatora. Homogenat je centrifugiran na 20,000 rpm (48,000g) i supernatant je odbačen. Talog membrana je resuspendovan u puferu koji sadrži 50 mM HEPES, pH 7.5, 100 mM NaCl, 1 mM MgCk, 2 mM EDTA i čuvanje u alikvotima na -80 °C nakon odredjivanja koncentracije proteina.

Membrane (2 ug/bunar) i 0.03 nM finalne koncentracije<33>P-S1P Uganda (1 mCi/ml, Perkin Elmer ili American Radiolabeled Chemicals) razblaženi su u puferu za esej (50 mM HEPES, pH7.4, 5 mM MgCb, 1 mM CaCb, 0.5% bez masne kiseline BSA (govedji serum albumin), 1 mM NaF) su dodati pločama sa jedinjenjem (384 FALCON® ploče sa v-dnom

(0.5 ul/bunar u tački 11, 3-strukog razblaženja). Vezivanje je izvedeno tokom 45 minuta na sobnoj temperaturi, prekinuto je sakupljenjem membrana na filter pločama sa 384-bunara Millipore FB, i merena je radioaktivnost pomoću TOPCOUNT®. Kompetitivni podaci testiranih jedinjenja u opsegu koncentracija su pokazani kao procenat inhibicije specifičnog vezivanja radioliganda. IC50 je definisana kao koncentracija kompetitivnog Uganda potrebnog da smanji specifično vezivanje za 50%. Odredjeno je daje IC500.01 nM za Primer 10.

Receptor [<35>S] GTPyS Test Vezivanja

384 FALCON® ploča sa v-dnom (0.5 ul/bunar u 11 tačaka 3-strukog razblaženja) napunjena je jedinjenjima. Membrane dobijene od SIPi/CHO ćelija ili EDG3-Gal5-bla HEK293T ćelija (EDG3 ekvivalent SIP3) su dodate ploči jedinjenja (40 ul/bunar, finalni protein 3 ug/bunar) sa MULTIDROP®. [<35>S]GTP (1250 Ci/mmol, Perkin Elmer) je razblažen u puferu za esej: 20 mM HEPES, pH7.5, 10 mM MgCb, 150 mM NaCl, 1 mM EGTA(etilen glikol tetrasirćetna kiselina), 1 mM DTT(Ditiotreitol), 10 uM GDP, 0.1% bez masne kiseline BSA, i 10 ug/ml Saponina do 0.4 nM. 40 jul [<35>S] GTP rastvora je dodato ploči jedinjenja sa finalnom koncentracijom od 0.2 nM. Reakcija je čuvana na sobnoj temperaturi tokom 45 min. Na kraju inkubacije, sve smeše u ploči jedinjenja su prebačene na filter ploče Millipore sa 384-bunara FB preko VELOCITYll® Vprep tečnog manipulatora. Filter ploča je isprana 4 puta sa vodom korišćenjem višestrukog perača ploča Embla i osušena na 60 °C tokom 45 min. MicroScint 20 scintilaciona tečnost (30 ul) je dodata u svaki bunar zbog brojanja na Packard TOPCOUNT®. EC50 je definisana kao koncentracija agonista koja odgovara 50% od Ymax (maksimalni odgovor) dobijenog za svako pojedinačno testirano jedinjenje. Odredjeno je da je EC500.9 nM za Primer 10 u testu koji koristi membrane dobijene od SIPi/CHO ćelija. Odredjeno je da je EC50>62,500 nM za Primer 10 u testu koji koristi membrane dobijene od EDG3-Gal5-bla HEK293T ćelija.

Manja vrednost EC50vrednost za GTPyS SIPi ukazuje na veću aktivnost za jedinjenja u testu vezivanja GTPyS SIPi. Veća vrednost za EC50vrednost za GTPyS SIP3EC50vrednost ukazuje na manju aktivnost u testu vezivanja GTPyS SIP3. Primer 10, koji je aktivni fosfatni estar Primera 2, imao je aktivnost kao i agonist od SIPi i selektivan je na SIP3. Tako jedinjenja predmetnog pronalaska, koja uključuju Primere 1-2 i 9-10 mogu biti korišćena za lečenje, prevenciju, ili izlečenja različitih SIPi receptor-povezanih stanja uz smanjenje ili minimalizovanje sporednih efekata usled S1P3aktivnosti. Iznenadjujuća selektivnost jedinjenja predmetnog pronalaska ukazuje na njihovu potencijalnu primenu u lečenju, prevenciji ili izlečenju autoimunih i inflamatornih bolesti kao što je multipla skleroza, reumatoidni artritis, inflamatorna bolest creva, lupus, ili psorijaza, uz smanjenje ili minimalizovanje mogućih sporednih efekata usled SIP3aktivnosti. Druga potencijalna primena jedinjenja predmetnog pronalaska uključuje minimalizovanje ili smanjenje odbacivanja transplantiranih organa, uz smanjenje ili minimalizovanje sporednih efekata usled SIP3aktivnosti.

Esej Internalizacije SIPi Receptora

CHO-K1 ćelije koje eksprimiraju GFP-obeležen SIPI receptor su zasejane u ploče sa 384-bunara obložene poli-D-lizinom za kulturu tkiva pri 4x10<3>ćelije/bunar u 50ul esejnog medijuma (F12 sa L-glutaminom, 10% ugalj/dekstran-tretirani FBS, IX penicilin-streptomicin, IM HEPES). Ploče sa ćelijama su inkubirane preko noći na 37 °C/5% CO2. Testirano jedinjenje je ubačeno u ploču za ćelije iz izvorne ploče jedinjenja na tački 11, 3-trukim serijskim razblaženjima i onda su esejne ploče inkubirane na 37 °C/5%> CO2tokom 45 min. Ćelije su fiksirane i obojene sa 6% formaldehidom i 15 ug/ml Hoechst boja u PBS (bez Ca<2+>/Mg<2+>free) na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Ploče sa ćelijama su isprane 4 puta sa PBS-om (bez Ca<2+>/Mg<2+>free) uz dodatak 50ul/PBS-a pre zatvaranja ploče. Slike su dobijene od Cellomics ARRAYSCAN® VTI sa visokim sadržajem lasera. Analiziranje podataka za odredjivanje EC50u odnosu na interno kontrolno jedinjenje je postignuto korišćenjem Compartmental Analvsis BioApplication na Array Scan-u. EC50je definisana kao koncentracija agonista koja odgovara 50%> Ymax (maksimalni odgovor) dobijena za svako pojedinačno testirano jedinjenje i izmerena je korišćenjem logističke jednačine sa parametra da se podese podaci. U testu je odredjeno daje EC50361 nM za Primer 9.

Test Smanjenja Limfocita u Krvi (BLR) Glodara

Pacovi Lewis su oralno dozirani samo sa nosačem (polietilen glikol 300, "PEG300") ili sa 2-amino-2-[2-(4-oktilfenil)etil]-l,3-propandiol, hidrohloridom (CAS: 162359-56-0) kao rastvorom na nosaču u dozama od 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg i 3.0 mg/kg korigovano tako da odrazi slobodnu količinu testiranog jedinjenja. Rezultati su dati u Tabeli 4a i nivo smanjenja limfocita na 24 sata nakon doziranja je bio maksimalan na 3.0 mg/kg. Procenat smanjenja u limfocitima je dozno-zavistan ali odnos nije linearan, sa neproporcionalnim povećanjem doze koja je zahtevana da izmami redom veće smanjenje u brojanju limfocita. Na primer, da se pokaže, u ovoj studiji, promena od 13% (od 69% smanjenja do 82%> smanjenja) zahteva povećanje doze pet puta (od 0.1 mg/kg do 0.5 mg/kg). Nadalje, da se pokaže dodatna promena od 7% u ovoj studiji (od 82% smanjenja do 89%> smanjenja) zahteva povećanje doze šest puta (od 0.5 mg/kg do 3.0 mg/kg). Miševi BALB/c su oralno dozirani samo sa nosačem (polietilen glikol 300, "PEG300") ili sa Primerom 1, Primerom 2, Jedinjenjem 6, Jedinjenjem 8, ili Komparativnim Jedinjenjem 11. Jedinjenja su dozirana kao rastvor ili suspenzija na nosaču, prilagodjeni da odraze slobodnu količinu testiranog jedinjenja u slučaju da se koriste forme soli. Krv je uzeta na 24 sata i limfociti krvi su brojani i odredjeni na ADV1A® 120 Hematologv Analvzer (Siemens Healthcare Diagnostics). Rezultati su mereni kao smanjenje procenta cirkulisanja limfocita kao poredjenje sa grupom tretiranom nosačem tokom vremena merenja. Rezultati predstavljaju prosečne rezultate od svih životinja unutar svake tretirane grupe (n = 2-4). Rezultati testa Smanjenja Limfocita Krvi (BLR) kod miša opisani ovde u prethodnom tekstu su pokazani u Tabeli 4b.

Test Plućne Toksičnosti

Analiza nivoa proteina u bronhoalveolarnoj (BAL) tečnosti dobijenoj od životinje korišćena je da proceni sporedne efekte pluća. Povećani nivo proteina u BAL tečnosti je indikacija neželjenih plućnih efekata, kao što je pulmonarni edem. Oralno su administrirani mišu Primer 1, Primer 2, Jedinjenje 6, Jedinjenje 8, i Jedinjenje 11 u dozi od 30 mg/kg. 24 sata nakon davanja doze, miševi su eutanazirani sa intraperitonealnim barbituratnim predoziranjem. Životinje su stavljene u ležeći položaj, napravljena je incizija na koži i praćena je tupom disekcijom da se razotkrije traheja. Traheja je zasečena i kateter je umetnut 4-6mm u traheju. Fosfat-Puferovani fiziološki rastvor (PBS; lmL/miš) je davan infuzijom u pluća i onda je usisan. Koncentracija BAL proteina u obnovljenoj BAL tečnosti je odredjena na ADVIA® 1800 Chemistrv Analvzer (Siemens Healthcare Diagnostics). Rezultati testa bronhoalveolarnog nivoa (BAL) su prikazani u Tabeli 5. Rezultati predstavljaju prosečne rezultate od svih životinja unutar svake tretirane grupe (n = 2-4).

Tabela 5 prikazuje relativne nivoe BAL proteina na 24 sata za testirana jedinjenja u poredjenju sa administrirani em samog nosača. Vrednost za relativni BAL protein nasuprot kontroli veća od 1 ukazuje na povećanje toksičnosti pluća u poredjenu sa administracijom samog nosača. U ovoj studiji, kako je navedeno u Tabeli 5, administriranje Primera 1 i 2 dalo je nivoe relativnog BAL proteina od 0.99 i 0.96, ukazujući da nema povećanja u pulmonarnoj toksičnosti. Administriranje Jedinjenja 8 dalo je nivo relativnog BAL proteina od 1.03, što ukazuje na neznatno ili da nema povećanja u pulmonarnoj toksičnosti. Nasuprot tome, administriranje Jedinjenja 6 i Jedinjenja 11 dalo je nivoe relativnog BAL proteina od 1.94 i 1.33, ukazujući na povećanje pulmolarne toksičnosti.

Jedinjenja predmetnog pronalaska, kao što je ilustrovano Primerima 1 i 2, koja su poredjena sa a) Jedinjenjima 6 i 8, i b) Komparativnim Jedinjenjem 11, stavljena na uvid javnosti u WO 2008/079382, i za koje je nadjeno da su posebno korisna. Jedinjenja predmetnog pronalaska imala su iznenadjujuće povoljnu kombinaciju u aktivnosti smanjenja limfocita krvi i minimiziranju pulmonarnih sporednih efekata, kao što je pulmonarni edem. Kao što je prikazano u Tabelama 4b i 5, u objavljenim testovima, Primeri 1 i 2 ovog predmetnog pronalaska pokazuju iznenadjujuću prednost u efikasnosti smanjenja limfocita krvi bez povećanja BAL proteina, mere sporednih efekata pluća. Na primer, u poredjenju sa Jedinjenjima 6, 8, i 11, prikazanim kroz jedinjenja predmetnog pronalaska objavljenim u Tabelama 4b i 5 smanjuju limfocite u krvi od 88% i 90%, i daju nivoe relativnog BAL proteina od 0.99 i 0.96, redom, što ukazuje da nema povećanja plućnih sporednih efekata. Nasuprot tome, u sličnim testovima, Jedinjenje 6 i Komparativno Jedinjenje 11 smanjuju limfocite krvi od 78% i 52%, i dali su relativne nivoe BAL proteina od 1.96 i 1.33, redom, ukazujući na povećan rizik od sporednih efekata pluća. Jedinjenje 8 smanjuje limfocite krvi od 59% i dalo je relativne nivoe BAL proteina od 1.03, što ukazuje na nikakav ili blagi porast sporednih efekata pluća.

Jedinjenja predmetnog pronalaska poseduju aktivnost kao agonisti SIPi receptora, vodeći do smanjenja cirkulišućih limfocita krvi, i time mogu biti korišćena za lečenje, prevenciju, ili izlečenje različitih SIPi receptor-povezanih stanja uz smanjenje ili minimiziranje plućnih sporednih efekata, kao što je plućni edem. Iznenadjujuća selektivnost jedinjenja predmetnog pronalaska ukazuje na njihovu potencijalnu primenu u lečenju, prevenciji, ili izlečenju autoimunih i inflamatornih bolesti kao što su multipla skleroza, reumatoidni artritis, inflamatorne bolesti creva, lupus, ili psorijaza, uz smanjenje ili minimiziranje mogućih plućnih sporednih efekata. Druga potencijalna primena jedinjenja predmetnog pronalaska uključuje minimalizovanje ili smanjenje odbacivanja transplantiranih organa, uz smanjenje ili minimalizovanje mogućih plućnih sporednih efekata.

Test Adjuvansom Indukovanog Artritisa kod pacova (AA)

Model Adjuvansom-idukovani artritis kod pacova je životinjski model za humani reumatoidni artritis.

Muški Lewis pacovi (150-175 g; Harlan, n=8 treatirana grupa) su imunizovani u bazu repa sa 100 ul 10 mg/ml sveže mlevenihMycobacterium butyricum(Difco Laboratories) u nekompletnom Freund-ovom adjuvansu (sigma). Životinje su dozirane jednom dnevno sa test jedinjenjem (kao rastvor ili suspenzija na nosaču) ili samim nosačem (polietilen glikol 300, "PEG300") počev od dana imunizacije. Zapremine njihovih zadnjih šapa su merene u vodenom displacement plethvsmometer (Ugo Basile, Italija). Osnovna merenja šape su izvedena pre početka bolesti (izmedju dana 7 do dana 10). Merenja šape su onda izvedena tri puta nedeljno do kraja studije na dane 20 do 21. Sve procedure koje uključuju životinje su pregledane i odobrene od Komiteta "Institutional Animal Care Use Committee".

Primer 2 predmetnog pronalaska je testiran u modelu Adjuvansom-indukovanog artritisa kod pacova opisanom ovde u predhodnom tekstu i rezultati su prikazani u Tabeli 7. Jedinjenje ovog predmetnog pronalaska, kao što svedoči Primer 2, u saopštenom testu, pokazalo je sprečavanje progresije bolesti merenjem smanjenja oticanja šape kod pacova Lewis korišćenjem profilaktičkog oralnog doznog režima.

Test kolitisa indukovanog transferom T ćelija miša

Kolitis indukovan transferom T ćelija kod miša je životinjski model za humani kolitis.

Kolitis je indukovan kod CB-17 SCTD miša adoptivnim transferom FACS sortiranih CD4<+>CD45RB<hlgh>T ćelija iz BALB/c miša (3xl0<5>/miš, i.p.). Aktivnosti bolesti su praćene jednom nedeljno u prve 3 nedelje i 3x/nedeljno narednih nedelja na osnovu telesne težine, meke stolice ili dijareje, i anorektalnog prolapsa. Životinje su oralno dozirane svakog drugog dana (q.o.d.) sa jedinjenjem testa ili nosačem počev od dana transfera T ćelije. Miš je žrtvovan 6 nedelja nakon rekonstrukcije T ćelije i analiziran je na inflamaciju creva na osnovu histoloških ispitivanja H&E obojenim tkivima debelog creva. Sve procedure koje uključuju životinje su pregledane i odobrene od "Institutional Animal Care Use Committee".

Primer 2 je testiran u modelu kolitia koji je indukovanom transferom T ćelija kod miša opisanom ovde u prethodnom tekstu i rezultati su prikazani u Tabeli 8. Jedinjenje ovog predmetnog pronalaska, kao što je ilustrovano Primerom 2, u testu izveštaja, pokazalo je sprečavanje progresije bolesti mereno smanjenjem telesne težine ili povećanjem telesne težine, i smanjenjem inflamacije i oštećenja u testu transferom T ćelija indukovanog kolitisa.

MRL/lprMišji Model za test Spontanog Lupus Eritematozusa

MRL/lpr mišji model za testspontanog lupus eritematozus je životinjski model za spontani lupus eritematozus.

Muški MRL/lpr miš (14 nedelja star; Jackson Laboratories; n=12-13) je oralno doziran sa Primerom 2 (kao rastvor na nosaču) ili samo nosačem (polietilen glikol 300) dva puta nedeljno tokom 11 nedelja počevši od nultog dana. Nivoi proteina u urinu (od Albustix) su mereni nultog dana i tokom studije. Tabela 9 pokazuje procenat miševa u svakoj grupi za tretman koji su pokazali visoke nivoe proteinurije (veći od 100 mg/dL) na 25 nedelja starosti. Dodatne grupe miševa dobijaju dnevnu oralnu dozu deksametazona (Dex) samostalno ili u kombinaciji sa doziranjem Primera 2 dva puta nedeljno. Nivoi proteina u urinu (od Albustix) su mereni nultog dana i tokom studije. Tabela 9 pokazuje procenat miševa u svakoj grupi za tretman koji su pokazali visoke nivoe proteinurije (veći od 100 mg/dL) na 24 nedelja starosti. Sve procedure koje uključuju životinje su pregledane i odobrene od "Institutional Animal Care Use Committee".

Primer 2 je testiran u mišjem modelu MRL/lpr za test spontanog lupus eritematozusa opisanom u prethodnom tektu i rezultati su prikazani u Tabeli 9. Jedinjenje ovog predmetnog pronalaska, kao što je ilustrovao Primer 2, u testu izveštaja, pokazalo je inhibiciju progresije bolesti merenu nižim procentom miševa sa nivoom proteinurije većim od 100 mg/dL.

Primer 2 i deksametazon (Dex) samostalno ili u kombinaciji, su testirani u MRL/lpr mišjem modelu za test spontanog lupus eritematozusa opisanom u prehodnom tekstu i rezultati su prikazani u Tabeli 10. Oba jedinjenja ovog predmetnog pronalaska, kao što je ilustrovano Primerom 2, i deksametazonom u testu izveštaja, pokazala su inhibiciju progresije bolesti merenu nižim procentom miševa sa nivoom proteinurije većim od 100 mg/mL. U ovom testu, nijedan miš kome je administrirana kombinacija Primera 2 i deksametazona nije immao nivo proteinurije veći od 100 mg/mL.

Rendgensko strukturna analiza pojedinačnog kristala (Difraktometrija X-zracima)

Podaci za pojedinačni kristal su sakupljeni na na Bruker-AXS APEX2 CCD sistemu korišćenjem Cu Ka radijacije (A= 1.5418 A). Numerisanje i obrada podataka izmerenih intenziteta je izvedena sa APEX2 paketom softverskog programa. Kada je naznačeno, kristali se hlade u hladnoj struji Oxford krio sistema tokom sakupljanja podataka. Strukture su rešene direktnim metodama i obrađene na osnovu uočenih refleksija korišćenjem programa SHELXTL. Izvedeni parametri atoma (koordinate i temperaturni faktori) su obrađeni metodom najmanjih kvadrata u punoj matrici. Funkcija minimizirana u obrađivanjima bila je Iw(|F0| - |FC|)<2>. Rje definisan kao YJ|F0| - |FC||/I|F0|dokRw =EW(|F0| - |FC|)2/Iw |F0|<2>]<1/2>gde je w odgovarajuća težinska funkcija bazirana na greškama posmatranih intenziteta. Tipično, svi nevodonični atomi su anizotropno utačnjeni i svi H-atomi, osim onih vezanih za N i O atome su izračunati geometrijskim metodama i obrađeni korišćenjem "riding" modela.

Difraktometrija Praha pomoću X zraka

Podaci dobijeni rendgenskom strukturnom analizom (X-zracima) difrakcijom na prahu (PXRD) su dobijeni korišćenjem "Bruker GADDS (General Area Detektor Diffraction System) manual chi platform goniometer". Uzorci praha su postavljeni u kapilare sa tankim staklenim zidovima prečnika 0.7mm; Kapilare su rotirane tokom sakupljanja podataka. Udaljenost uzorak-detektor održavanje na 17 cm. Podaci su prikupljeni sa Cu Ka radijacijom( X =1.5418 A) u opsegu 2.5 < 20 < 35° sa vremenom izloženosti uzorka od 600 sekundi.

Claims (13)

1. Jedinj enj e Formule (I): i/ili so tog jedinjenja; gde Rje -OH ili -OP(0)(OH)2.

2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili so tog jedinjenja, gde Rje -OH.

3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili so tog jedinjenja, gde Rje -OP(0)(OH)2.

4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili so tog jedinjenja, ima strukturu:

5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili so tog jedinjenja, ima strukturu:

6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5 ili so tog jedinjenja, gde je navedeno jedinjenje ili navedena so čvrsta kristalna supstanca.

7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili so tog jedinjenja, ima strukturu:

8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili so tog jedinjenja, ima strukturu:

9. Farmaceutska kompozicija sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8 ili farmaceutski prihvatljivu so tog jedinjenja; i farmaceutski prihvatljiv nosač.

10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8 ili so tog jedinjenja, za primenu u terapiji.

11. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8 ili farmaceutski prihvatljiva so tog jedinjenja za primenu u lečenju bolesti ili poremećaja povezanih sa aktivnošću G-protein-spregnutog receptora SIPi.

12. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8 ili farmaceutski prihvatljiva so tog jedinjenja za primenu u lečenju autoimune bolesti ili hronične inflamatorne bolesti.

13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 12 gde je navedena autoimuna bolest ili hronična inflamatorna bolest izabrana od lupusa, multiple skleroze, inflamatorne bolesti creva, i reumatoidnog artritisa.