EA025294B1

EA025294B1 - Бициклические соединения в качестве модуляторов активности сопряженного с g-белком рецептора s1p

Info

Publication number: EA025294B1
Application number: EA201591409A
Authority: EA
Inventors: Т.Г. Мурали Дхар; Хай-Юнь Сяо; Аларик Дж. Дикман; Эрик Дж. Чан; Марта Даброс; Дэниэл Ричард Робертс
Original assignee: Бристол-Майерс Сквибб Компани
Priority date: 2013-02-21
Filing date: 2014-02-21
Publication date: 2016-12-30
Also published as: US9115054B2; CY1118641T1; BR112015019919A2; DK2958888T3; MA38425A1; US20140235591A1; US9359286B2; EP2958888B1; SMT201700115B; TN2015000356A1; SI2958888T1; WO2014130752A3; RS55703B1; EP2958888A2; KR20150119352A; PT2958888T; SG11201506408TA; MA38425B1; ES2613262T3; PH12015501793B1

Abstract

Описаны соединения формулы (I)и/или их соли; где R представляет собой -ОН или -ОР(О)(ОН). Также описаны способы применения таких соединений в качестве селективных агонистов в отношении сопряженного с G-белком рецептора S1Pи содержащие такие соединения фармацевтические композиции. Указанные соединения применимы в лечении, профилактике или замедлении прогрессирования заболеваний или нарушений, таких как аутоиммунные заболевания и воспалительные заболевания.

Description

Изобретение в общем относится к бициклическим соединениям, применимым в качестве агонистов 81Ρι. Согласно настоящему документу предусмотрены бициклические соединения, содержащие такие соединения композиции и способы их применения. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим по меньшей мере одно соединение согласно изобретению, которое является применимым для лечения таких связанных с модулированием 81Ρ₁ состояний, как аутоиммунные заболевания и сосудистое заболевание.

Сфингозин-1-фосфат (81Ρ) представляет собой цвиттерионный лизофосфолипидный метаболит сфингозина (8рЬ), который в свою очередь является результатом ферментативного расщепления церамидов. Ферментативное фосфорилирование 8рЬ двумя киназами (8рЬК1 и 8рЬК2) приводит к продукции 81Ρ, главным образом, из эритроцитов, а также из устойчивого к облучению источника, возможно лимфатического эндотелия ^арри К. е! а1., 8с1епсе, 316:295-298 (2007)). Изначально считали, что 81Ρ функционирует исключительно в качестве внутриклеточной сигнальной молекулы, впоследствии установили, что 81Ρ функционирует как высокоаффинный лиганд для пяти представителей класса генов эндотелиальной дифференциации (БИС) сопряженных с О-белком рецепторов (ΟΡΟΚ), носящих названия 81Ρι или 81Ρι, 81Ρ₂ или 81Ρ₂, 81Ρ₃ или 81Ρ₃, 81Ρ₄ или 81Ρ₄ и 81Ρ₅ или 81Ρ₅ (ранее именуемые ЕИС-1, ЕИС-5, ЕИС-3, ЕИС-6 и ЕИС-8 соответственно) (СЬип 1. е! а1., ΡΕα™α^1ο§κα1 Кеу., 62:579-587 (2010)). Взаимодействие 81Ρ с рецепторами 81Ρ играет фундаментальную физиологическую роль в большом количестве процессов, включая в себя клеточную пролиферацию, клеточную морфологию, инвазию опухолевых клеток, ангиогенез, образование опухолей, реорганизацию цитоскелета, развитие сосудов и миграцию лимфоцитов (Ойуега А. е! а1., Α6ν. Ехр. Меб. Βίο1., 716:123-142 (2011)). Следовательно, рецепторы 81Ρ представляют собой хорошие мишени для широкого спектра таких терапевтических применений, как ингибирование опухолевого роста, заболевание сосудов и аутоиммунные заболевания.

Среди пяти рецепторов 81Ρ широкой распространенностью характеризуется 81Ρ₃. Он представляет собой преобладающего представителя семейства, экспрессируемого на лимфоцитах, и играет важную роль в миграции лимфоцитов. Взаимодействие 81Ρ со своим рецептором 81Ρ1 необходимо для выхода иммунных клеток из лимфоидных органов (таких как тимус и лимфатические узлы) в лимфатические сосуды. Отрицательная регуляция рецептора 81Ρ₁ (которая может осуществляться посредством лечения с помощью агонистов 81Ρ₁ через интернализацию рецептора) нарушает миграцию лимфоцитов и хоминг в различные ткани. Это приводит к секвестрации лимфоцитов в лимфатических органах, тем самым снижая количество циркулирующих лимфоцитов, которые способны мигрировать в подверженные воздействию ткани. Разработка модулирующего рецептор 81Ρ₃ средства, которое подавляет миграцию лимфоцитов к целевым сайтам, связанным с аутоиммунными и нарушенными воспалительными процессами, сможет быть эффективной при ряде аутоиммунных и воспалительных болезненных состояний.

В следующих заявках описаны соединения в качестве агонистов 81Ρ₄: международная патентная публикация \УО 03/061567 (патентная публикация США №2005/0070506), международная патентная публикация \УО 03/062248 (патент США №7351725), международная патентная публикация \УО 03/062252 (патент США №7479504), международная патентная публикация \УО 03/073986 (патент США №7309721), международная патентная публикация \УО 03/105771, международная патентная публикация \УО 05/058848, международная патентная публикация \УО 05/000833, международная патентная публикация \УО 05/082089 (патентная публикация США № 2007/0203100), международная патентная публикация \УО 06/047195, международная патентная публикация \УО 06/100633, международная патентная публикация \УО 06/115188, международная патентная публикация \УО 06/131336, международная патентная публикация \УО 2007/024922, международная патентная публикация \УО 07/109330, международная патентная публикация \УО 07/116866, международная патентная публикация \УО 08/023783 (патентная публикация США №2008/0200535), международная патентная публикация \УО 08/029370, международная патентная публикация \УО 08/074820, международная патентная публикация \УО 08/079382, международная патентная публикация \УО 08/114157, международная патентная публикация \УО 09/043889, международная патентная публикация \УО 09/057079 и патент США №6069143. Также см. На1е е! а1., I Меб. СЬет., 47:6662 (2004).

Все еще сохраняется потребность в соединениях, применимых в качестве агонистов 81Ρ₁ и при этом не характеризующихся селективностью в отношении 81Ρ₃. Кроме того, также остается необходимость в соединениях, применимых в качестве агонистов 81Ρ₃, которые не характеризуются селективностью в отношении 81Ρ₃, а также характеризуются минимальными нежелательными легочными эффектами или их отсутствием.

Заявители обнаружили высокоактивные соединения, характеризующиеся активностью в качестве агонистов 81Ρι. Кроме того, заявители обнаружили соединения, которые характеризуются активностью активность в качестве агонистов 81Ρ₄ и не являются селективными в отношении 81Ρ₃. Более того, заявители обнаружили соединения, которые характеризуются активностью активность в качестве агонистов 81Ρ₄, не являются селективными в отношении 81Ρ₃ и характеризуются минимальными нежелательными легочными эффектами или их отсутствием. Предусмотрено, что указанные соединения применимы в качестве фармацевтических средств с требуемой стабильностью, биодоступностью, терапевтическим индексом и значениями токсичности, которые важны для их применимости в качестве лекарственных средств.

- 1 025294

Сущность изобретения

Согласно изобретению предусмотрены бициклические соединения, которые являются применимыми в качестве модуляторов активности 81Ρι, включая в себя их соли и пролекарственные соединения.

Согласно настоящему изобретению также предусмотрены фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый носитель.

Согласно настоящему изобретению также предусмотрен способ лечения заболевания или нарушения, связанного с активностью сопряженного с О-белком рецептора 81Р₁, включающий введение пациенту - млекопитающему соединения формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно настоящему изобретению также предусмотрены способы и промежуточные соединения для получения соединений формулы (I) и/или их солей.

Согласно настоящему изобретению также предусмотрено соединение формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии.

Согласно настоящему изобретению также предусмотрено применение соединений формулы (I) и/или их фармацевтически приемлемых солей для производства лекарственного средства для лечения или профилактики таких связанных с рецептором к §1Р₁ состояний, как аутоиммунные и сосудистые заболевания.

Соединения формулы (I) и композиции, содержащие соединения формулы (I), можно использовать в лечении, профилактике или излечении различных связанных с 81Р₁ состояний. Фармацевтические композиции, содержащие указанные соединения, являются применимыми в лечении, профилактике или замедлении прогрессирования заболеваний или нарушений в таких разнообразных терапевтических областях, как аутоиммунные и сосудистые заболевания.

Указанные и другие признаки настоящего изобретения будут представлены в развернутом виде в качестве продолжения раскрытия.

Краткое описание чертежей

Настоящее изобретение проиллюстрировано со ссылкой на прилагаемые графические материалы, описанные ниже.

На фиг. 1 показаны экспериментальные и смоделированные порошковые рентгенограммы (СиКа λ=1,5418 А приблизительно при 25°С) формы N-1 соединения примера 2;

на фиг. 2 - экспериментальные и смоделированные порошковые рентгенограммы (СиКа λ=1,5418 А приблизительно при 25°С) формы моногидрата Н-1 моносоли НС1 соединения примера 2;

на фиг. 3 - экспериментальные и смоделированные порошковые рентгенограммы (СиКа λ=1,5418 А приблизительно при 25°С) формы моногидрата Н-2 моносоли НС1 соединения примера 2;

на фиг. 4 - экспериментальные и смоделированные порошковые рентгенограммы (СиКа λ=1,5418 А приблизительно при 25°С) формы N-3 моносоли НС1 соединения примера 2;

на фиг. 5 - экспериментальные и смоделированные порошковые рентгенограммы (СиКа λ=1,5418 А приблизительно при 25°С) формы N-4 моносоли НС1 соединения примера 2;

на фиг. 6 - экспериментальные и смоделированные порошковые рентгенограммы (СиКа λ=1,5418 А приблизительно при 25°С) формы моногидрата Н-1 гемисоли Ь-яблочной кислоты соединения примера 2;

на фиг. 7 - экспериментальные и смоделированные порошковые рентгенограммы (СиКа λ=1,5418 А приблизительно при 25°С) формы моногидрата Н-1 гемисоли малоновой кислоты соединения примера 2;

на фиг. 8 - экспериментальные и смоделированные порошковые рентгенограммы (СиКа λ=1,5418 А приблизительно при 25°С) формы 1/3-гидрата Н 33-1 соли 2/3-ортофосфорной кислоты соединения примера 2;

на фиг. 9 - смоделированная порошковая рентгенограмма, рассчитанная при -70°С (СиКа λ= 1,5418 А) формы N-1 соли К-(+)-миндальной кислоты соединения примера 2.

Подробное описание изобретения

Согласно первому аспекту настоящего изобретения предусмотрено по меньшей мере одно соединение формулы (I)

и/или его соль, где К представляет собой -ОН или -ОР(О)(ОН)₂.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрены соединения формулы (I) и/или их соли, где К представляет собой -ОР(О)(ОН)₂ Соединения согласно указанному варианту осуществления характеризуются структурой формулы (II)

- 2 025294

Настоящий вариант осуществления включает в себя соединение формулы (11а) и и соединение формулы (ПЬ)

Соединения формулы (II) и/или их соли применимы в качестве селективных агонистов §1Ρ₁. Согласно одному варианту осуществления предусмотрены соединения формулы (I) и/или их соли, где К представляет собой -ОН. Соединения согласно указанному варианту осуществления характеризуются структурой формулы (III)

Настоящий вариант осуществления включает в себя соединение формулы (Ша) и и соединение формулы (ШЬ)

Соединения формулы (III) и/или их соли применимы в качестве пролекарственных средств соединений формулы (II). Соединения формулы (III) активируются ίη νίνο посредством фосфорилирования для получения соединений формулы (II). Соединения формулы (II) являются активными в качестве селективных агонистов §1Ρ₁.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрены соединения формулы (I) и/или их соли, характеризующиеся структурой формулы (IV)

где К представляет собой -ОН или -ОР(О)(ОН)₂. Настоящий вариант осуществления включает в себя соединения формулы (Па) и формулы (Ша).

Согласно одному варианту осуществления предусмотрены соединения формулы (I) и/или их соли, характеризующиеся структурой формулы (V)

где К представляет собой -ОН или -ОР(О)(ОН)₂ Настоящий вариант осуществления включает в себя соединения формулы (ПЬ) и формулы (ШЬ).

- 3 025294

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (11а) и/или его соли.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (ПЬ) и/или его соли.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (Ша) и/или его соли.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (ШЬ) и/или его соли.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (11а).

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (ПЬ).

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (111а).

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (ШЬ).

Согласно одному варианту осуществления предусмотрена одна или несколько солей соединения формулы (11а).

Согласно одному варианту осуществления предусмотрена одна или несколько солей соединения формулы (ПЬ).

Согласно одному варианту осуществления предусмотрена одна или несколько солей соединения формулы (111а).

Согласно одному варианту осуществления предусмотрена одна или несколько солей соединения формулы (ШЬ).

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (III) в виде соли НС1.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (Ша) в виде соли НС1.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (ШЬ) в виде соли НС1.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (III) в виде соли ортофосфорной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (Ша) в виде соли ортофосфорной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (ШЬ) в виде соли ортофосфорной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (ШЬ) в виде соли Ь-яблочной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (III) в виде соли малоновой кислоты.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (Ша) в виде соли малоновой кислоты.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (ШЬ) в виде соли малоновой кислоты.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (ШЬ) в виде соли К-(+)-миндальной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (III) в виде соли, выбранной из соли НС1, соли ортофосфорной кислоты и соли малоновой кислоты.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (Ша) в виде соли, выбранной из соли НС1, соли ортофосфорной кислоты и соли малоновой кислоты.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение формулы (ШЬ) в виде соли, выбранной из соли НС1, соли ортофосфорной кислоты, соли Ь-яблочной кислоты, соли малоновой кислоты и соли К-(+)-миндальной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение, выбранное из ((1К,3К)-1амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метанола и ((1К,3§)-1-амино-3((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метанола; и их солей.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение, выбранное из ((1К,3К)-1амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метилдигидрофосфата и ((1К,3§)-1амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метилдигидрофосфата; и их солей.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение, выбранное из ((1К,3К)-1амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метанола и ((1К,3К)-1-амино-3((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метилдигидрофосфата; и их солей.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрено соединение, выбранное из ((1К,3§)-1амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метанола и ((1К,3§)-1-амино-3((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метилдигидрофосфата; и их солей.

Соли и кристаллические формы соединения примера 2.

- 4 025294

Таблица 1. Соли и кристаллические формы примера 2

Пример 2	Форма
свободное основание	Ν-1
моносоль НС1 (моногидрат)	Н-1
моносоль НС1 (моногидрат)	Н-2
моносоль НС1	Ν-3
моносоль НС1	Ν-4
гемисоль Ь-яблочной кислоты (моногидрат)	Н-1
гемисоль малоновой кислоты (моногидрат)	Н-1

соль 2/3-ортофосфорной кислоты (1/3-гидрат)	Н.33-1
соль К-(+)-миндальной кислоты	Ν-1

Форма N-1 примера 2, свободное основание.

Согласно одному варианту осуществления соединение примера 2

предусмотрено в виде кристаллического материала, содержащего первую кристаллическую форму. Первая кристаллическая форма соединения примера 2 содержит чистую кристаллическую форму, которая в настоящем документе называется форма N-1 или N-1 форма примера 2.

Согласно одному варианту осуществления форма N-1 примера 2 характеризуется параметрами элементарной ячейки, приблизительно равными следующим.

Размеры элементарной ячейки: а =5,54 А, Ь = 7,37 А, с = 48,85 Α, α = 90,0°, β = 90,0°, γ = 90,0°.

Пространственная группа: Р2₁2₁2₁.

Молекулы примера 2/асимметричный элемент: 1.

Объем/Количество молекул в элементарной ячейке = 499 А³.

Плотность (расчетная) = 1,098 г/см³, причем параметры элементарной ячейки формы N-1 примера 2 измерены при температуре, составляющей приблизительно -70°С.

Согласно другому варианту осуществления форма N-1 примера 2 характеризуется смоделированной порошковой рентгенограммой (РХКП), по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 1, и/или наблюдаемой порошковой рентгенограммой, по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 1.

Согласно другому варианту осуществления форма N-1 примера 2 характеризуется порошковой рентгенограммой (СиКа λ=1,5418 А при температуре, составляющей приблизительно 25°С), содержащей четыре или больше, предпочтительно пять или больше значений 2θ, выбранных из 3,6±0,2, 7,2±0,2, 12,5±0,2, 14,0±0,2, 15,0±0,2, 17,5±0,2, 19,4±0,2, 20,4±0,2 и 23,8±0,2, причем порошковая рентгенограмма формы N-1 измерена при температуре, составляющей приблизительно 25°С.

Согласно дополнительному варианту осуществления форма N-1 примера 2 является, по существу, чистой.

Согласно еще одному варианту осуществления форма N-1 примера 2 содержит по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы формы N-1 примера 2.

Согласно другому варианту осуществления, по существу, чистая форма N-1 примера 2 характеризуется гомогенностью, по существу, чистой фазы, при которой менее чем приблизительно 10%, предпочтительно менее чем приблизительно 5% и более предпочтительно менее чем приблизительно 2% от общей площади пиков экспериментально измеренной порошковой рентгенограммы являются результатом пиков, которые отсутствуют в смоделированной порошковой рентгенограмме. Наиболее предпочтительно, что, по существу, чистая кристаллическая форма N-1 примера 2 характеризуется гомогенностью, по существу, чистой фазы, при которой менее чем приблизительно 1% от общей площади пиков экспериментально измеренной порошковой рентгенограммы являются результатом пиков, которые отсутствуют в смоделированной порошковой рентгенограмме.

Согласно другому варианту осуществления кристаллическая форма примера 2 состоит, по сущест- 5 025294 ву, из формы N-1. Кристаллическая форма согласно настоящему варианту осуществления может содержать по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы кристаллической формы, формы N-1 примера 2.

Согласно другому варианту осуществления предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая форму N-1 примера 2 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель.

Согласно другому варианту осуществления фармацевтическая композиция содержит, по существу, чистую форму N-1 примера 2 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель.

Согласно дополнительному варианту осуществления терапевтически эффективное количество формы N-1 примера 2 скомбинировано по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем для получения по меньшей мере одной фармацевтической композиции.

Соли НС1 примера 2.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде соли соляной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде моносоли соляной кислоты, содержащей один моль НС1 на каждый моль примера 2.

Согласно одному варианту осуществления моносоль соляной кислоты примера 2 предусмотрена в виде кристаллического материала, содержащего одну или несколько кристаллических форм. Примеры подходящих кристаллических форм моносоли соляной кислоты примера 2 включают в себя формы Н-1, Н-2, N-3 и N-4.

Согласно одному варианту осуществления моносоль соляной кислоты примера 2 предусмотрена в виде моногидрата.

Согласно одному варианту осуществления моногидратная моносоль соляной кислоты примера 2 предусмотрена в виде кристаллического материала, содержащего одну или несколько кристаллических форм. Примеры подходящих кристаллических форм моногидратной моносоли соляной кислоты примера 2 включают в себя формы Н-1 и Н-2.

Согласно одному варианту осуществления моногидратная моносоль соляной кислоты примера 2 предусмотрена во второй кристаллической форме, которая в настоящем документе называется форма Н1 или Н-1 форма примера 2, соль НС1. Форма Н-1 примера 2, соль НС1 содержит одну молекулу воды и одну молекулу НС1 на каждую молекулу примера 2.

Согласно одному варианту осуществления форма Н-1 моносоли соляной кислоты примера 2 характеризуется параметрами элементарной ячейки, приблизительно равными следующим.

Размеры элементарной ячейки: а = 6,30 А, Ь = 6,42 А, с = 55,28 Α, α = 90,0°, β = 90,0°, γ = 90,0°.

Пространственная группа: Р2₁2₁2₁.

Молекулы примера 2/асимметричный элемент: 1.

Объем/количество молекул в элементарной ячейке = 560 А³.

Плотность (расчетная) = 1,14 г/см³, причем параметры элементарной ячейки формы Н-1 моносоли соляной кислоты примера 2 измерены при температуре, составляющей приблизительно -70°С.

Согласно другому варианту осуществления форма Н-1 моносоли соляной кислоты примера 2 характеризуется смоделированной порошковой рентгенограммой (ΡΧΡΌ), по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 2, и/или наблюдаемой порошковой рентгенограммой, по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 2.

Согласно другому варианту осуществления форма моногидрата Н-1 моносоли НС1 примера 2 характеризуется порошковой рентгенограммой (СиКа λ=1,5418Α при температуре, составляющей приблизительно 25°С), содержащей четыре или больше, предпочтительно пять или больше значений 2θ, выбранных из 3,2±0,2, 6,4±0,2, 9,6±0,2, 13,9±0,2, 14,6±0,2, 17,0±0,2, 19,0±0,2, 20,1±0,2, 21,3±0,2, 21,9±0,2 и 24,5±0,2, причем порошковая рентгенограмма измерена при температуре, составляющей приблизительно 25°С.

Согласно дополнительному варианту осуществления форма Н-1 моносоли соляной кислоты примера 2 является, по существу, чистой.

Согласно еще одному варианту осуществления форма Н-1 моносоли соляной кислоты примера 2 содержит по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы второй кристаллической формы, формы Н-1 примера 2, соли НС1.

Согласно другому варианту осуществления, по существу, чистая вторая кристаллическая форма характеризуется гомогенностью, по существу, чистой фазы, при которой менее чем приблизительно 10%, предпочтительно менее чем приблизительно 5% и более предпочтительно менее чем приблизительно 2% от общей площади пиков экспериментально измеренной порошковой рентгенограммы являются результатом пиков, которые отсутствуют в смоделированной порошковой рентгенограмме. Наиболее предпочтительно, что, по существу, чистый вторая кристаллическая форма характеризуется гомогенностью, по

- 6 025294 существу, чистой фазы, при которой менее чем приблизительно 1% от общей площади пиков экспериментально измеренной порошковой рентгенограммы являются результатом пиков, которые отсутствуют в смоделированной порошковой рентгенограмме.

Согласно другому варианту осуществления вторая кристаллическая форма моносоли НС1 примера 2 состоит, по существу, из формы Н-1. Вторая кристаллическая форма согласно настоящему варианту осуществления может содержать по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы второй кристаллической формы, формы Н-1.

Согласно одному варианту осуществления моногидратная моносоль соляной кислоты примера 2 предусмотрена в третьей кристаллической форме, которая в настоящем документе называется форма Н2 или Н-2 форма примера 2, соль НС1. Форма Н-2 примера 2, соль НС1 содержит одну молекулу воды и одну молекулу НС1 на каждую молекулу примера 2.

Согласно одному варианту осуществления форма Н-2 моносоли соляной кислоты примера 2 характеризуется параметрами элементарной ячейки, приблизительно равными следующим.

Размеры элементарной ячейки: а = 6,30 А, Ь = 6,43 А, с = 27,88 Α, α = 90,0°, β = 96,0°, γ = 90,0°.

Пространственная группа: Р2₁.

Молекулы примера 2/асимметричный элемент: 1.

Объем/количество молекул в элементарной ячейке = 562 А³.

Плотность (расчетная) = 1,135 г/см³, причем параметры элементарной ячейки формы Н-2 примера 2, соли НС1, измерены при температуре, составляющей приблизительно -70°С.

Согласно другому варианту осуществления форма Н-2 примера 2, соль НС1, характеризуется смоделированной порошковой рентгенограммой (ΡΧΡΌ), по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 3, и/или наблюдаемой порошковой рентгенограммой, по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 3.

Согласно другому варианту осуществления форма моногидрата Н-2 моносоли НС1 примера 2 характеризуется порошковой рентгенограммой (СиКа λ=1,5418 А при температуре, составляющей приблизительно 25°С), содержащей четыре или больше, предпочтительно пять или больше значений 2θ, выбранных из 3,2±0,2, 6,4±0,2, 9,6±0,2, 14,1±0,2, 15,2±0,2, 16,8±0,2, 18,8±0,2, 20,2±0,2, 21,3±0,2, 22,6±0,2 и 26,6±0,2, причем порошковая рентгенограмма измерена при температуре, составляющей приблизительно 25°С.

Согласно дополнительному варианту осуществления форма Н-2 примера 2, соль НС1 является, по существу, чистой.

Согласно еще одному варианту осуществления форма Н-2 примера 2, соль НС1 содержит по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы третьей кристаллической формы.

Согласно другому варианту осуществления, по существу, чистая форма Н-2 примера 2, соль НС1 характеризуется гомогенностью, по существу, чистой фазы, при которой менее чем приблизительно 10%, предпочтительно менее чем приблизительно 5% и более предпочтительно менее чем приблизительно 2% от общей площади пиков экспериментально измеренной порошковой рентгенограммы являются результатом пиков, которые отсутствуют в смоделированной порошковой рентгенограмме. Наиболее предпочтительно, что, по существу, чистая кристаллическая форма Н-2 примера 2, соль НС1 характеризуется гомогенностью, по существу, чистой фазы, при которой менее чем приблизительно 1% от общей площади пиков экспериментально измеренной порошковой рентгенограммы являются результатом пиков, которые отсутствуют в смоделированной порошковой рентгенограмме.

Согласно другому варианту осуществления третья кристаллическая форма соединения примера 2 состоит, по существу, из формы Н-2 примера 2, соли НС1. Третья кристаллическая форма согласно настоящему варианту осуществления может содержать по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы третьей кристаллической формы.

Согласно одному варианту осуществления моносоль соляной кислоты примера 2 предусмотрена в виде чистого кристаллического материала, содержащего одну или несколько кристаллических форм. Примеры подходящих кристаллических форм чистой моносоли соляной кислоты примера 2 включают в себя формы N-3 и N-4.

Согласно одному варианту осуществления чистая моносоль соляной кислоты примера 2 предусмотрена в четвертой кристаллической форме, которая в настоящем документе называется форма N-3 или N-3 форма примера 2, соль НС1. Форма N-3 примера 2, соль НС1, содержит одну молекулу НС1 на каждую молекулу примера 2.

Согласно одному варианту осуществления форма N-3 соли НС1 примера 2 характеризуется параметрами элементарной ячейки, приблизительно равными следующим.

Размеры элементарной ячейки: а =5,98 А, Ь = 7,24 А, с = 25,74 А, а = 90,0°, β = 91,7°, γ = 90,0°.

- 7 025294

Пространственная группа: Ρ2₁.

Молекулы примера 2/асимметричный элемент: 1.

Объем/количество молекул в элементарной ячейке = 556 А³.

Плотность (расчетная) = 1,092 г/см³, причем параметры элементарной ячейки формы N-3 соли НС1 примера 2 измерены при температуре, составляющей приблизительно 27°С.

Размеры элементарной ячейки: а = 5,93 А, Ь = 7,20 А, с = 25,24 А, α = 90,0°, β = 90,2°, γ = 90,0°.

Пространственная группа: Ρ21.

Молекулы примера 2/асимметричный элемент: 1.

Объем/количество молекул в элементарной ячейке = 538 А³.

Плотность (расчетная) = 1,128 г/см³, причем параметры элементарной ячейки формы N-3 соли НС1 примера 2 измерены при температуре, составляющей приблизительно -70°С.

Согласно другому варианту осуществления форма N-3 примера 2, соль НС1, характеризуется смоделированной порошковой рентгенограммой (ΡΧΚΌ), по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 4, и/или наблюдаемой порошковой рентгенограммой, по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 4.

Согласно другому варианту осуществления форма N-3 моносоли НС1 примера 2 характеризуется порошковой рентгенограммой (СиКа λ=1,5418 А при температуре, составляющей приблизительно 25°С), содержащей четыре или больше, предпочтительно пять или больше значений 2θ, выбранных из 3,4±0,2, 6,9±0,2, 10,4±0,2, 12,7±0,2, 14,0±0,2, 16,1±0,2, 19,7±0,2, 20,6±0,2, 22,1±0,2 и 24,0±0,2, причем порошковая рентгенограмма измерена при температуре, составляющей приблизительно 25°С.

Согласно дополнительному варианту осуществления форма N-3 соли НС1 примера 2 является, по существу, чистой.

Согласно еще одному варианту осуществления форма N-3 соли НС1 примера 2 содержит по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы четвертой кристаллической формы, формы N-3.

Согласно другому варианту осуществления, по существу, чистая форма N-3 соли НС1 примера 2 характеризуется гомогенностью, по существу, чистой фазы, при которой менее чем приблизительно 10%, предпочтительно менее чем приблизительно 5% и более предпочтительно менее чем приблизительно 2% от общей площади пиков экспериментально измеренной порошковой рентгенограммы являются результатом пиков, которые отсутствуют в смоделированной порошковой рентгенограмме. Наиболее предпочтительно, что, по существу, кристаллическая форма N-3 соли НС1 примера 2 характеризуется гомогенностью, по существу, чистой фазы, при которой менее чем приблизительно 1% от общей площади пиков экспериментально измеренной порошковой рентгенограммы являются результатом пиков, которые отсутствуют в смоделированной порошковой рентгенограмме.

Согласно другому варианту осуществления кристаллическая форма примера 2 состоит, по существу, из формы N-3. Кристаллическая форма согласно настоящему варианту осуществления может содержать по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы кристаллической формы, формы N-3 примера 2.

Согласно другому варианту осуществления предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая форму N-3 примера 2 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель.

Согласно другому варианту осуществления фармацевтическая композиция содержит, по существу, чистую форму N-3 примера 2 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель.

Согласно дополнительному варианту осуществления терапевтически эффективное количество формы N-3 примера 2 скомбинировано по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем для получения по меньшей мере одной фармацевтической композиции.

Согласно другому варианту осуществления четвертая кристаллическая форма соли НС1 примера 2 состоит, по существу, из формы N-3. Четвертая кристаллическая форма согласно настоящему варианту осуществления может содержать по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы четвертой кристаллической формы, формы N-3.

Согласно одному варианту осуществления чистая моносоль соляной кислоты примера 2 предусмот- 8 025294 рена в пятой кристаллической форме, которая в настоящем документе называется форма N-4 или N-4 форма примера 2, соль НС1. Форма N-4 примера 2, соль НС1 содержит одну молекулу НС1 на каждую молекулу примера 2.

Согласно одному варианту осуществления форма N-4 соли НС1 примера 2 характеризуется параметрами элементарной ячейки, приблизительно равными следующим.

Размеры элементарной ячейки: а =5,95 А, Ь = 7,27 А, с = 51,60 Α, α = 90,0°, β = 90,0°, γ = 90,0°.

Пространственная группа: Р2₁2₁2₁.

Молекулы примера 2/асимметричный элемент: 1.

Объем/количество молекул в элементарной ячейке = 558 А.

Плотность (расчетная) = 1,088 г/см³, причем параметры элементарной ячейки формы N-4 примера 2, соли НС1 измерены при температуре, составляющей приблизительно 27°С.

Размеры элементарной ячейки: а =5,92 А, Ь = 7,25 А, с = 50,61 Α, α = 90,0°, β = 90,0°, γ = 90,0°.

Пространственная группа: Р212121.

Молекулы примера 2/асимметричный элемент: 1.

Объем/количество молекул в элементарной ячейке = 543 А³.

Плотность (расчетная) = 1,119 г/см³, причем параметры элементарной ячейки формы N-4 примера 2, соли НС1 измерены при температуре, составляющей приблизительно -70°С.

Согласно другому варианту осуществления форма N-4 примера 2, соль НС1, характеризуется смоделированной порошковой рентгенограммой (ΡΧΡΌ), по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 5, и/или наблюдаемой порошковой рентгенограммой, по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 5.

Согласно другому варианту осуществления форма N-4 моносоли НС1 примера 2 характеризуется порошковой рентгенограммой (СиКа λ=1,5418 А при температуре, составляющей приблизительно 25°С), содержащей четыре или больше, предпочтительно пять или больше значений 2θ, выбранных из 3,4±0,2, 6,9±0,2, 10,3±0,2, 12,7±0,2, 13,3±0,2, 15,0±0,2, 19,7±0,2, 20,4±0,2, 21,2±0,2, 22,9±0,2 и 24,9±0,2, причем порошковая рентгенограмма измерена при температуре, составляющей приблизительно 25°С.

Согласно дополнительному варианту осуществления форма N-4 соли НС1 примера 2 является, по существу, чистой.

Согласно еще одному варианту осуществления форма N-4 соли НС1 примера 2 содержит по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы четвертой кристаллической формы, формы N-4.

Согласно другому варианту осуществления, по существу, чистая форма N-4 соли НС1 примера 2 характеризуется гомогенностью, по существу, чистой фазы, при которой менее чем приблизительно 10%, предпочтительно менее чем приблизительно 5% и более предпочтительно менее чем приблизительно 2% от общей площади пиков экспериментально измеренной порошковой рентгенограммы являются результатом пиков, которые отсутствуют в смоделированной порошковой рентгенограмме. Наиболее предпочтительно, что, по существу, кристаллическая форма N-4 соли НС1 примера 2 характеризуется гомогенностью, по существу, чистой фазы, при которой менее чем приблизительно 1% от общей площади пиков экспериментально измеренной порошковой рентгенограммы являются результатом пиков, которые отсутствуют в смоделированной порошковой рентгенограмме.

Согласно другому варианту осуществления кристаллическая форма примера 2 состоит, по существу, из формы N-4. Кристаллическая форма согласно настоящему варианту осуществления может содержать по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы кристаллической формы, формы N-4 примера 2.

Согласно другому варианту осуществления предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая форму N-4 примера 2, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель.

Согласно другому варианту осуществления фармацевтическая композиция содержит, по существу, чистую форму N-4 примера 2 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель.

Согласно дополнительному варианту осуществления терапевтически эффективное количество формы N-4 примера 2 скомбинировано по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем для получения по меньшей мере одной фармацевтической композиции.

- 9 025294

Согласно одному варианту осуществления предусмотрена композиция, содержащая форму N-3, форму N-4 или их смесь чистой моносоли соляной кислоты примера 2.

Соль Ь-яблочной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде соли Ь-яблочной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде гемисоли Ь-яблочной кислоты, содержащей 0,5 моль Ь-яблочной кислоты на каждый моль примера 2.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде моногидратной гемисоли Ь-яблочной кислоты, содержащей один моль воды и 0,5 моль Ь-яблочной кислоты на каждый моль примера 2.

Согласно одному варианту осуществления моногидратная гемисоль Ь-яблочной кислоты примера 2 предусмотрена в шестой кристаллической форме, которая в настоящем документе называется форма Н1 или Н-1 форма примера 2, гемисоль Ь-яблочной кислоты. Форма Н-1 примера 2, гемисоль Ьяблочной кислоты содержит одну молекулу воды и 0,5 молекул Ь-яблочной кислоты на каждую молекулу примера 2.

Согласно одному варианту осуществления форма Н-1 гемисоли Ь-яблочной кислоты примера 2 характеризуется параметрами элементарной ячейки, приблизительно равными следующим.

Размеры элементарной ячейки: а = 6,13 А, Ь= 13,83 А, с = 28,75 Α, α =103,4°, β = 94,0°, γ = 92,6°.

Пространственная группа: Р1

Молекулы примера 2/асимметричный элемент: 4.

Объем/количество молекул в элементарной ячейке = 591 А³.

Плотность (расчетная) = 1,165 г/см³, причем параметры элементарной ячейки формы Н-1 гемисоли Ь-яблочной кислоты примера 2 измерены при температуре, составляющей приблизительно -70°С.

Согласно другому варианту осуществления форма Н-1 гемисоли Ь-яблочной кислоты примера 2 характеризуется смоделированной порошковой рентгенограммой (ΡΧΡΌ), по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 6, и/или наблюдаемой порошковой рентгенограммой, по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 6.

Согласно другому варианту осуществления форма Н-1 гемисоли Ь-яблочной кислоты примера 2 характеризуется порошковой рентгенограммой (СиКа λ=1,5418 А при температуре, составляющей приблизительно 25°С), содержащей четыре или больше, предпочтительно пять или больше значений 2θ, выбранных из 3,2±0,2, 6,3±0,2, 9,5±0,2, 12,8±0,2, 14,3±0,2, 18,0±0,2, 22,4±0,2 и 24,8±0,2, причем порошковая рентгенограмма измерена при температуре, составляющей приблизительно 25°С.

Соль малоновой кислоты.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде соли малоновой кислоты.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде гемисоли малоновой кислоты, содержащей 0,5 моль малоновой кислоты на каждый моль примера 2.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде моногидратной гемисоли малоновой кислоты, содержащей один моль воды и 0,5 моль малоновой кислоты на каждый моль примера 2.

Согласно одному варианту осуществления моногидратная гемисоль малоновой кислоты примера 2 предусмотрена в седьмой кристаллической форме, которая в настоящем документе называется форма Н-1 или Н-1 форма примера 2, гемисоль малоновой кислоты. Форма Н-1 примера 2, гемисоль малоновой кислоты содержит одну молекулу воды и 0,5 молекул малоновой кислоты на каждую молекулу примера 2.

Согласно одному варианту осуществления форма Н-1 гемисоли малоновой кислоты примера 2 характеризуется параметрами элементарной ячейки, приблизительно равными следующим.

Размеры элементарной ячейки: а= 14,73 А, Ь = 6,27 А, с = 25,36 А, а = 90,0°, β = 93,8°, γ = 90,0°.

Пространственная группа: Ρ2ι.

Молекулы примера 2/асимметричный элемент: 2.

Объем/количество молекул в элементарной ячейке = 584 А³.

Плотность (расчетная) = 1,137 г/см³, причем параметры элементарной ячейки формы Н-1 измерены при температуре, составляющей приблизительно -70°С.

Согласно другому варианту осуществления форма Н-1 гемисоли малоновой кислоты примера 2 характеризуется смоделированной порошковой рентгенограммой (ΡΧΡΌ), по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 7, и/или наблюдаемой порошковой рентгенограммой, по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 7.

Согласно другому варианту осуществления форма Н-1 гемисоли малоновой кислоты примера 2 характеризуется порошковой рентгенограммой (СиКа λ=1,5418 А при температуре, составляющей приблизительно 25°С), содержащей четыре или больше, предпочтительно пять или больше значений 2θ, выбранных из 3,5±0,2, 7,1±0,2, 12,3±0,2, 13,5±0,2, 15,5±0,2, 17,6±0,2, 19,1±0,2, 20,2±0,2, 20,6±0,2, 21,7±0,2 и 23,8±0,2, причем порошковая рентгенограмма измерена при температуре, составляющей приблизительно 25°С.

- 10 025294

Соль ортофосфорной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде соли ортофосфорной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде 1/3-гидрата соли ортофосфорной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде соли ортофосфорной кислоты, содержащего 0,67 моль ортофосфорной кислоты на каждый моль примера 2.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде 1/3-гидрата соли ортофосфорной кислоты, содержащего 0,33 моль воды и 0,67 моль ортофосфорной кислоты на каждый моль примера 2.

Согласно одному варианту осуществления 1/3-гидрат соли ортофосфорной кислоты примера 2 предусмотрен в восьмой кристаллической форме, которая в настоящем документе называется форма Н.331 или Н.33-1 форма примера 2, соль ортофосфорной кислоты. Форма Н.33-1 примера 2, соль ортофосфорной кислоты, содержит 0,33 молекул воды и 0,67 молекул ортофосфорной кислоты на каждую молекулу примера 2.

Согласно одному варианту осуществления форма Н.33-1 характеризуется параметрами элементарной ячейки, приблизительно равными следующим.

Размеры элементарной ячейки: а =59,12 А, Ь = 6,89 А, с= 16,62 Α, α = 90,0°, β = 94,7°, γ = 90,0°.

Пространственная группа: С2.

Молекулы примера 2/асимметричный элемент: 3.

Объем/количество молекул в элементарной ячейке = 563 А³.

Плотность (расчетная) = 1,181 г/см³, причем параметры элементарной ячейки формы Н.33-1 измерены при температуре, составляющей приблизительно -70°С.

Согласно другому варианту осуществления форма Н.33-1 1/3-гидрата соли ортофосфорной кислоты примера 2 характеризуется смоделированной порошковой рентгенограммой (ΡΧΡΌ), по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 8, и/или наблюдаемой порошковой рентгенограммой, по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 8.

Согласно другому варианту осуществления форма Н.33-1 1/3-гидрата соли ортофосфорной кислоты примера 2 характеризуется порошковой рентгенограммой (СиКа λ=1,5418 А при температуре, составляющей приблизительно 25°С), содержащей четыре или больше, предпочтительно пять или больше значений 2θ, выбранных из 2,9±0,2, 5,9±0,2, 8,8±0,2, 13,9±0,2, 15,8±0,2, 16,7±0,2, 17,4±0,2, 18,4±0,2, 19,4±0,2 и 20,4±0,2, причем порошковая рентгенограмма измерена при температуре, составляющей приблизительно 25°С.

Соль К-(+)-миндальной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде соли К-(+)-миндальной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде моногидрата К-(+)миндальной кислоты.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде соли К-(+)-миндальной кислоты, содержащей один моль К-(+)-миндальной кислоты на каждый моль примера 2.

Согласно одному варианту осуществления пример 2 предусмотрен в виде моногидратной соли К(+)-миндальной кислоты, содержащей один моль воды и один моль К-(+)-миндальной кислоты на каждый моль примера 2.

Согласно одному варианту осуществления моногидратная соль К-(+)-миндальной кислоты примера 2 предусмотрена в девятой кристаллической форме, которая в настоящем документе называется форма N-1 или N-1 форма примера 2, соль К-(+)-миндальной кислоты. Форма N-1 примера 2, соль К-(+)миндальной кислоты содержит одну молекулу воды и одну молекулу К-(+)-миндальной кислоты на каждую молекулу примера 2.

Согласно одному варианту осуществления форма N-1 примера 2, соль К-(+)-миндальной кислоты, характеризуется параметрами элементарной ячейки, приблизительно равными следующим.

Размеры элементарной ячейки: а = 6,31 А, Ь = 10,03 А, с = 21,79 А, а= 98,2°, β = 91,3°, γ = 91,7°.

Пространственная группа: Р1.

Молекулы примера 2/асимметричный элемент: 2.

Объем/количество молекул в элементарной ячейке = 683 А³.

Плотность (расчетная) = 1,171 г/см³, причем параметры элементарной ячейки формы N-1 примера 2, соли К-(+)-миндальной кислоты, измерены при температуре, составляющей приблизительно -70°С.

Согласно другому варианту осуществления форма N-1 примера 2, соль К-(+)-миндальной кислоты, характеризуется смоделированной порошковой рентгенограммой (ΡΧΚΌ), по существу, соответствующей порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. 9.

Согласно дополнительному варианту осуществления форма N-1 примера 2, соль К-(+)-миндальной

- 11 025294 кислоты, является, по существу, чистой.

Согласно еще одному варианту осуществления форма N-1 примера 2, соль К-(+)-миндальной кислоты, содержит по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы формы N-1 примера 2, соли К-(+)-миндальной кислоты.

Согласно другому варианту осуществления, по существу, чистая форма N-1 примера 2, соль К-(+)миндальной кислоты, характеризуется гомогенностью, по существу, чистой фазы, при которой менее чем приблизительно 10%, предпочтительно менее чем приблизительно 5% и более предпочтительно менее чем приблизительно 2% от общей площади пиков экспериментально измеренной порошковой рентгенограммы являются результатом пиков, которые отсутствуют в смоделированной порошковой рентгенограмме. Наиболее предпочтительно, что, по существу, чистая кристаллическая форма N-1 примера 2, соль К-(+)-миндальной кислоты, характеризуется гомогенностью, по существу, чистой фазы, при которой менее чем приблизительно 1% от общей площади пиков экспериментально измеренной порошковой рентгенограммы являются результатом пиков, которые отсутствуют в смоделированной порошковой рентгенограмме.

Согласно другому варианту осуществления кристаллическая форма примера 2, соль К-(+)миндальной кислоты, состоит, по существу, из формы N-1. Кристаллическая форма согласно настоящему варианту осуществления может содержать по меньшей мере приблизительно 90 мас.%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95 мас.% и более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99 мас.% на основании массы кристаллической формы, формы N-1 примера 2, соли К-(+)-миндальной кислоты.

Согласно другому варианту осуществления предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая форму N-1 примера 2, соль К-(+)-миндальной кислоты, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель.

Согласно другому варианту осуществления фармацевтическая композиция содержит, по существу, чистую форму N-1 примера 2, соль К-(+)-миндальной кислоты, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель.

Согласно дополнительному варианту осуществления терапевтически эффективное количество формы N-1 примера 2, соли К-(+)-миндальной кислоты, скомбинировано по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем для получения по меньшей мере одной фармацевтической композиции.

Настоящее изобретение можно осуществить в других конкретных формах, не отклоняясь от его сущности или существенных признаков. Настоящее изобретение охватывает все комбинации аспектов и/или вариантов осуществления настоящего изобретения, указанных в настоящем документе. Следует понимать, что любой и все варианты осуществления настоящего изобретения могут быть рассмотрены совместно с любым другим вариантом осуществления или вариантами осуществления для описания дополнительных вариантов осуществления. Также следует понимать, что каждый конкретный элемент вариантов осуществления понимается как комбинируемый с любым и всеми другими элементами из любого варианта осуществления для описания дополнительного варианта осуществления.

Определения

Признаки и преимущества настоящего изобретения станут более понятными специалистам в настоящей области техники при прочтении следующего ниже подробного описания. Следует понимать, что определенные признаки настоящего изобретения, которые для целей ясности описаны выше и ниже в контексте отдельных вариантов осуществления, также могут быть скомбинированы с образованием одного варианта осуществления. Наоборот, различные признаки настоящего изобретения, которые для целей краткости описаны в контексте одного варианта осуществления, также могут быть скомбинированы так, чтобы образовывать их подкомбинации. Предусмотрено, что варианты осуществления, идентифицированные в настоящем документе в качестве иллюстративных или предпочтительных, являются иллюстративными и не ограничивающими.

Если иное не указано конкретно, ссылки на форму в единственном числе также включают в себя ссылку на формы во множественном числе. Например, форма в единственном числе может относиться либо к одному, либо к одному или нескольким.

Используемая в настоящем документе фраза соединения и/или их соли относится по меньшей мере к одному соединению, по меньшей мере одной соли соединений или их комбинации. Например, соединения формулы (I) и/или их соли включает в себя соединение формулы (I); два соединения формулы (I); соль соединения формулы (I); соединение формулы (I) и одну или несколько солей соединения формулы (I); и две или больше солей соединения формулы (I).

Если не установлено иное, допускается, что любой атом с ненасыщенными валентностями содержит атомы водорода, достаточные для насыщения валентностей.

Ниже перечислены определения различных терминов, используемых для описания настоящего изобретения. Эти определения применяются к терминам в том виде, в котором они используются в пределах настоящего описания (если только они не ограничены иным образом в конкретных случаях) либо инди- 12 025294 видуально, либо в качестве части большей группы. Определения, представленные в настоящем документе, обладают приоритетом по сравнению с определениями, изложенными в любом патенте, патентной заявке и/или публикации патентной заявки, включенной посредством ссылки в настоящий документ.

В настоящем описании изобретения группы и их заместители могут быть выбраны специалистом в настоящей области техники для получения подходящих фрагментов и соединений.

Фраза фармацевтически приемлемый используется в настоящем документе для обозначения тех соединений, материалов, композиций и/или лекарственных форм, которые, по результатам тщательной медицинской оценки, являются подходящими для применения в контакте с тканями людей и животных, не вызывая чрезмерную токсичность, раздражение, аллергическую реакцию или другую проблему или осложнение, в соответствии с целесообразным соотношением риск-польза.

Соединения формулы (I) могут образовывать соли, которые также находятся в пределах объема настоящего изобретения. Если не указано иное, ссылку на соединение согласно настоящему изобретению следует понимать как включающую в себя ссылку на одну или несколько его солей. Термин соль(и) означает кислые и/или основные соли, образованные неорганическими и/или органическими кислотами и основаниями. Кроме того, термин соль(и) может включать в себя цвиттерионы (внутренние соли), например, если соединение формулы (I) содержит как основный фрагмент, такой как амин или пиридиновое или имидазольное кольцо, и кислотный фрагмент, такой как карбоновую кислоту. Предпочтительными являются такие фармацевтически приемлемые (т.е. нетоксические, физиологически приемлемые) соли, как, например, приемлемые соли металлов и аминов, в которых катион не вносит существенного вклада в токсичность или биологическую активность соли. Тем не менее могут применяться другие соли, например, на стадиях выделения или очищения, которые могут использоваться во время получения, и, таким образом, они предусмотрены в пределах объема настоящего изобретения. Соли соединений формулы (I) могут быть образованы, например, путем реакции соединения формулы (I) с определенным количеством кислоты или основания, таким как эквивалентное количество, в такой среде, как среда, в которой соль осаждается или в водной среде с последующей лиофилизацией.

Иллюстративные соли присоединения кислоты включают в себя ацетаты (такие как образованные уксусной кислотой или тригалоуксусной кислотой, например трифторуксусной кислотой), адипаты, альгинаты, аскорбаты, аспартаты, бензоаты, бензолсульфонаты, бисульфаты, бораты, бутираты, цитарты, камфораты, камфорсульфонаты, циклопентанпропионаты, диглюконаты, додецилсульфаты, этансульфонаты, фумараты, глюгептаноаты, глицерофосфаты, гемисульфаты, гептаноаты, гексаноаты, гидрохлориды (образованные соляной кислотой), гидробромиды (образованные бромоводородом), гидройодиды, малеаты (образованные малеиновой кислотой), 2-гидроксиэтансульфонаты, лактаты, метансульфонаты (образованные метансульфоновой кислотой), 2-нафталинсульфонаты, никотинаты, нитраты, оксалаты, пектинаты, персульфаты, 3-фенилпропионаты, фосфаты, пикраты, пивалаты, пропионаты, салицилаты, сукцинаты, сульфаты (такие как образованные серной кислотой), сульфонаты (такие как те, что упомянуты в настоящем документе), тартраты, тиоцианаты, толуолсульфонаты, такие как тозилаты, ундеканоаты и тому подобное.

Иллюстративные основные соли включают в себя аммонийные соли, такие соли щелочных металлов, как соли натрия, лития и калия; такие соли щелочноземельных металлов, как соли кальция и магния; соли бария, цинка и алюминия; соли с органическими основаниями (например, органическими аминами), такие как триалкиламины, такие как триэтиламин, прокаин, дибензиламин, Ν-бензил-З-фенэтиламин, 1эфенамин, Ν,Ν'-дибензилэтилендиамин, дегидроабиетиламин, Ν-этилпиперидин, бензиламин, дициклогексиламин или сходные фармацевтически приемлемая амины и соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин и тому подобное. Основные азотосодержащие группы могут быть кватернизованными с помощью таких средств, как низшие галоидные алкилы (например, метил-, этил-, пропил- и бутилхлориды, бромиды и йодиды), диалкилсульфаты (например, диметил-, диэтил-, дибутил- и диамилсульфаты), длинноцепочечные галогениды (например, децил-, лаурил-, миристил- и стеарилхлориды, бромиды и йодиды), аралкилгалогениды (например, бензил- и фенэтилбромиды) и другие. Предпочтительные соли включают в себя соли моногидрохлорид, гидросульфат, метансульфонат, фосфат или нитрат.

Соединения формулы (I) могут быть предусмотрены в виде аморфных твердых веществ или кристаллических твердых веществ. Лиофилизиция может применяться для получения соединений формулы (I) в виде твердого вещества.

Также следует понимать, что сольваты (например, гидраты) соединений формулы (I) также находятся в пределах объема настоящего изобретения. Термин сольват означает физическую ассоциацию соединения формулы (I) с одним или несколькими молекулами растворителя, будь то органического или неорганического. Указанная физическая ассоциация включает в себя водородную связь. В определенных случаях сольват возможно выделить, например, если одна или несколько молекул растворителя встроены в кристаллическую решетку кристаллического твердого вещества. Сольват охватывает как сольваты жидкой фазы и поддающиеся выделению сольваты. Иллюстративные сольваты включают в себя гидраты, этанолаты, метанолаты, изопропанолаты, ацетонитрильные сольваты и этилацетатные сольваты. Способы сольватации известны в настоящей области техники.

Различные формы пролекарственных соединений хорошо известны в настоящей области техники и

- 13 025294 описаны в:

a) ХУегтшЬ С.О. с1 а1., ТЬе РгасЬсе оГ Мейк1па1 СЬеш181гу, СЬар1ет 31, Асайетэс Ргевв (1996);

b) Випйдаагй Н. ей., Эевщп оГРгойгндв, Екеу1ет (1985);

c) Випйдаагй Н., СЬар1ег 5, Ое51дп апй ЛррЬсайоп оГ Ргойгидв, Кгодвдаагй-Ьагвеп Р. е1 а1., ейв., А Тех1Ьоок оГ Эгид Не81дп апй Пеуе1оршеп1, рр. 113-191, Нагетоой Асайешк РиЬЬвЬегв (1991); и

й) Те81а В. е1 а1., Нуйто1у818 ίη Эгид апй Ргойгид Ме1аЬоЬ8ш, \УПеу-УСН (2003). Кроме того, соединения формулы (I), после их получения, могут быть выделены и очищены с получением композиции, содержащей количество по массе, равное или больше чем 99% соединения формулы (I) (по существу, чистого), которую затем используют или вводят в состав так, как описано в настоящем документе. Такие по существу, чистые соединения формулы (I) также предусмотрены в настоящем документе как часть настоящего изобретения.

Стабильное соединение и стабильная структура означают соединение, которое является достаточно устойчивым, чтобы сохраниться при выделении до применимой степени чистоты из реакционной смеси и введении в состав эффективного терапевтического средства. Настоящее изобретение включает стабильные соединения.

Предусмотрено, что терапевтически эффективное количество включает в себя количество соединения согласно настоящему изобретению отдельно или количество комбинации заявленных соединений или количество соединения согласно настоящему изобретению в комбинации с другими активными ингредиентами, эффективно действующими в качестве агониста 81Р₁ или эффективными в лечении или профилактике таких аутоиммунных и/или воспалительных болезненных состояний, как рассеянный склероз и ревматоидный артрит.

Используемые в настоящем документе осуществление лечения или лечение охватывают лечение болезненного состояния у млекопитающего, в частности у человека, и включают в себя: (а) профилактику возникновения болезненного состояния у млекопитающего, в частности, если такое млекопитающее предрасположено к болезненному состоянию, но у которого еще не диагностировали его наличие; (Ь) ингибирование болезненного состояния, т.е. прекращение его развития и/или (с) облегчение болезненного состояния, т.е. регрессию болезненного состояния.

Предусмотрено, что соединения согласно настоящему изобретению включают в себя все изотопы атомов, встречающихся в настоящих соединениях. Изотопы включают в себя атомы, характеризующиеся одинаковым атомным числом, но различными массовыми числами. В качестве общего примера и без ограничения изотопы водорода включают в себя дейтерий (Ό) и тритий (Т). Изотопы углерода включают в себя ¹³С и ¹⁴С. Меченные изотопами соединения согласно настоящему изобретению, как правило, можно получить с помощью общепринятых техник, известных специалистам в настоящей области техники, или с помощью способов, аналогичных способам, описанным в настоящем документе, с использованием соответствующего меченного изотопами реагента вместо немеченого реагента, используемого в другом случае.

Соединения в соответствии с формулой (I) и/или его фармацевтически приемлемые соли можно вводить с помощью любых средств, подходящих для подлежащего лечению состояния, которые могут зависеть от потребности в сайт-спецефическом лечении или количества соединения формулы (I), которое необходимо доставить.

Также согласно настоящему изобретению предусмотрен класс фармацевтических композиций, содержащих соединение формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемые соли и один или несколько нетоксических, фармацевтически приемлемых носителей и/или разбавителей и/или адъювантов (которые обобщенно в настоящем документе называются материалы - носители) и при необходимости другие активные ингредиенты. Соединения формулы (I) могут быть введены любым подходящим путем, предпочтительно в форме фармацевтической композиции, адаптированной в такому пути, и в дозе, эффективной для предусмотренного лечения. Соединения и композиции согласно настоящему изобретению, например, могут быть введены перорально, мукозально, или парентерально, включая в себя внутрисосудисто, внутривенно, интраперитонеально, подкожно, внутримышечно и интрастернально в составах единиц дозирования, содержащих общепринятые фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и инертные носители. Например, фармацевтический носитель может содержать смесь маннита или лактозы и микрокристаллической целлюлозы. Смесь может содержать такие дополнительные компоненты, как способствующие скольжению средства, например стеарат магния и способствующее распадаемости таблеток средство, такое как кросповидон. Смесь носителей может быть наполнена в желатиновую капсулу или составлена в виде таблетки. Фармацевтическая композиция может быть введена, например, в виде пероральной лекарственной формы или инфузии.

Для перорального введения фармацевтическая композиция может находиться в форме, например, таблетки, капсулы, заполненной жидкостью капсулы, суспензии или жидкости. Фармацевтическую композицию предпочтительно получают в форме единицы дозировки, содержащей конкретное количество активного ингредиента. Например, фармацевтическая композиция может быть предоставлена в виде таблетки или капсулы, содержащей количество активного ингредиента в диапазоне от приблизительно 0,1 до 1000 мг, предпочтительно от приблизительно 0,25 до 250 мг и более предпочтительно от приблизи- 14 025294 тельно 0,5 до 100 мг. Подходящая ежедневная дозировка для человека или другого млекопитающего может варьировать в зависимости от состояния пациента и других факторов, но может быть определена с использованием рутинных способов.

Любая предусмотренная в настоящем документе фармацевтическая композиция может быть доставлена, например, перорально с помощью любых приемлемых и подходящих пероральных препаратов. Иллюстративные пероральные препараты включают в себя без ограничения, например таблетки, пастилки, леденцы, водные и масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии, твердые и мягкие капсулы, заполненные жидкостью капсулы, сиропы и эликсиры. Фармацевтические композиции, предназначенные для перорального введения, могут быть получены согласно любым способам, известным в настоящей области техники для производства фармацевтических композиций, предназначенных для перорального введения. Для получения фармацевтически приемлемых по вкусу препаратов фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может содержать по меньшей мере одно средство, выбранное из подсластителей, вкусовых агентов, красителей, мягчительных средств, антиоксидантов и консервантов.

Таблетку, например, можно получить путем смешивания по меньшей мере одного соединения формулы (I) и/или по меньшей мере одной его фармацевтически приемлемой соли по меньшей мере с одним нетоксическим фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, подходящим для производства таблеток. Иллюстративные вспомогательные вещества включают в себя без ограничения, например, такие инертные разбавители, как, например, карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция и фосфат натрия; гранулирующие и улучшающие распадаемость таблеток средства, такие как, например, микрокристаллическая целлюлоза, кроскармеллоза натрия, кукурузный крахмал и альгиновая кислота; такие связующие, как, например, крахмал, желатин, поливинилпирролидон и гуммиарабик; и такие способствующие скольжению средства, как, например, стеарат магния, стеариновая кислота и тальк. Кроме того, таблетка может либо не содержать оболочку, либо может быть покрыта оболочкой с помощью известных техник либо для маскировки плохого вкуса неприятного на вкус лекарственного средства, либо для замедления разрушения и абсорбции активного ингредиента в желудочно-кишечном тракте, тем самым пролонгируя эффекты активного ингредиента в течение более длительного периода. Иллюстративные водорастворимые маскирующие вкус материалы включают в себя без ограничения гидроксипропилметилцеллюлозу и гидроксипропилцеллюлозу. Иллюстративные материалы для замедленного действия включают в себя без ограничения этилцеллюлозу и ацетатбутират целлюлозы.

Твердые желатиновые капсулы, например, можно получить путем смешивания по меньшей мере одного соединения формулы (I) и/или по меньшей мере одной его соли по меньшей мере с одним инертным твердым разбавителем, таким как, например, карбонат кальция; фосфат кальция; и каолин.

Мягкие желатиновые капсулы, например, можно получить путем смешивания по меньшей мере одного соединения формулы (I) и/или по меньшей мере одной его фармацевтически приемлемой соли по меньшей мере с одним водорастворимым носителем, таким как, например, полиэтиленгликоль; и по меньшей мере одной масляной средой, такой как, например, арахисовое масло, вазелиновое масло и оливковое масло.

Водную суспензию можно получить, например, путем смешивания по меньшей мере одного соединения формулы (I) и/или по меньшей мере одной его фармацевтически приемлемой соли по меньшей мере с одним вспомогательным веществом, подходящим для производства водной суспензии. Иллюстративные вспомогательные вещества, подходящие для производства водной суспензии, включают в себя без ограничения, например, такие суспендирующие средства, как, например, карбоксиметилцеллюлоза натрия, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, альгиновая кислота, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь, и аравийская камедь; такие диспергирующие или смачивающие средства, как, например, встречающийся в природе фосфатид, например, лецитин; такие продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами, как, например, полиоксиэтиленстеарат; такие продукты конденсации этиленоксида с длинноцепочечными алифатическими спиртами, как, например, гептадекаэтиленоксиэтанол; такие продукты конденсации этиленоксида с неполными сложными эфирами, полученными из жирных кислот и гексита, как, например, полиоксиэтиленсорбитмоноолеат; и такие продукты конденсации этиленоксида с неполными сложными эфирами, полученными из жирных кислот и ангидридов гексита, как, например, полиэтиленсорбитмоноолеат. Водная суспензия также может содержать по меньшей мере один консервант, такой как, например, этил и η-пропил р-гидроксибензоат; по меньшей мере один краситель; по меньшей мере один вкусовой агент и/или по меньшей мере один подсластитель, включая в себя без ограничения, например, сахарозу, сахарин и аспартам.

Масляные суспензии, например, можно получить путем суспендирования по меньшей мере одного соединения формулы (I) и/или по меньшей мере одной его фармацевтически приемлемой соли либо в таком растительном масле, как, например, арахисовое масло; оливковое масло, кунжутное масло и кокосовое масло; или в таком минеральном масле, как, например, вазелиновое масло. Масляная суспензия также может содержать по меньшей мере один загуститель, такой как, например, пчелиный воск; твердый парафин и цетиловый спирт. Для получения приятной на вкус масляной суспензии к ней можно добавить по меньшей мере один из подсластителей, описанных ранее в настоящем документе и/или по

- 15 025294 меньшей мере один вкусовой агент. Масляная суспензия может дополнительно содержать по меньшей мере один консервант, включая в себя без ограничения, например, такой антиоксидант, как, например, бутилированный гидроксианизол и альфа-токоферол.

Диспергируемые порошки и гранулы можно получить, например, путем смешивания по меньшей мере одного соединения формулы (I) и/или по меньшей мере одной его фармацевтически приемлемой соли по меньшей мере с одним диспергирующим и/или смачивающим средством; по меньшей мере одним суспендирующим средством; и/или по меньшей мере одним консервантом. Подходящие диспергирующие, смачивающие и суспендирующее средства являются такими, как описано выше. Иллюстративные консерванты включают в себя без ограничения, например, антиоксиданты, например, аскорбиновую кислоту. Кроме того, диспергируемые порошки и гранулы также могут содержать по меньшей мере одно вспомогательное вещество, включая в себя без ограничения например, подсластители; вкусовые агенты и красители.

Эмульсию по меньшей мере одного соединения формулы (I) и/или по меньшей мере одной его фармацевтически приемлемой соли можно получить, например, в виде эмульсии масло-в-воде. Масляная фаза эмульсий, содержащих соединения формулы (I), может быть составлена из известных ингредиентов известным способом. Масляная фаза может быть получена без ограничения с помощью, например, такого растительного масла, как, например, оливковое масло и арахисовое масло; такого минерального масла, как, например, вазелиновое масло; и их смесей. Наряду с тем, что фаза может содержать только эмульгатор, она может содержать смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом или как с жиром, так и малом. Подходящие эмульгирующие средства включают в себя без ограничения, например, встречающийся в природе фосфатиды, например, соевый лецитин; сложные эфиры или неполные сложные эфиры, полученные из жирных кислот и ангидридов гексита, такие как, например, сорбитмоноолеат; и продукты конденсации неполных сложных эфиров с этиленоксидом, такие как, например, полиоксиэтиленсорбитмоноолеат. Гидрофильный эмульгатор предпочтительно включен вместе с липофильным эмульгатором, который действует в качестве стабилизатора. Он также предпочтительно включает в себя как масло, так и жир. Совместно эмульгатор(ы) со стабилизатором(ами) или без него(них) образует так называемый эмульгирующий воск, и воск вместе с маслом и жиром образует так называемую эмульгирующую мазевую основу, которая образует масляную дисперсную фазу кремовых составов. Эмульсия также может содержать подсластитель, вкусовой агент, консервант и/или антиоксидант. Эмульгаторы и стабилизаторы эмульсии, подходящие для применения в составе согласно настоящему изобретению включают в себя Т\уссп 60, §раи 80, цетостеариловый спирт, миристиловый спирт, глицерилмоностеарат, лаурилсульфат натрия, глицерилдистеарат отдельно или с воском или другие материалы, хорошо известные в настоящей области техники.

Соединения формулы (I) и/или по меньшей мере одну его фармацевтически приемлемая соль, например, также можно доставить внутривенно, подкожно и/или внутримышечно посредством любой фармацевтически приемлемой и подходящей инъекционной формы. Иллюстративные инъекционные формы включают в себя без ограничения, например, стерильные водные растворы содержащие приемлемые инертные носители и растворители, такие как, например, вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия; стерильные микроэмульсии масло-в-воде; и водные или масляные суспензии.

Составы для парентерального введения могут находиться в форме водных или неводных изотонических стерильных инъекционных растворов или суспензий. Указанные растворы и суспензии можно получить из стерильных порошков или гранул с использованием одного или нескольких носителей или разбавителей, упомянутых для применения в составах для перорального введения или с использованием других подходящих диспергирующих или смачивающих средств и суспендирующих средств. Соединения можно растворить в воде, полиэтиленгликоле, пропиленгликоле, этаноле, кукурузном масле, хлопковом масле, арахисовом масле, кунжутном масле, бензиловом спирте, хлориде натрия, трагакантовой камеди и/или различных буферах. Другие адъюванты и способы введения хорошо и широко известны в фармацевтической области. Активный ингредиент также можно вводить путем инъекции в виде композиции с подходящими носителями, включая в себя солевой раствор, декстрозу или воду, или с циклодекстрином (т.е. САРТРЗОЬ®), путем солюбилизации совместного растворителя (т.е. пропиленгликоля) или солюбилизации мицелл (т.е. Т\\ееп 80).

Стерильный инъекционный препарат также может представлять собой стерильный инъекционный раствор или суспензию в нетоксическом парентерально приемлемом разбавителе или растворитель, например как раствор в 1,3-бутандиоле. Среди приемлемых инертных носителей и растворителей, которые можно использовать, можно упомянуть воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные, нелетучие масла традиционно используются в качестве растворителя или суспендирующей среды. С этой целью можно использовать любое безвкусное нелетучее масло, включая в себя синтетические моно-или диглицериды. Кроме того, такие жирные кислоты, как олеиновая кислота, находят применение в получении инъекционных препаратов.

Стерильную инъекционную микроэмульсию масло-в-воде можно получить, например, путем 1) растворения по меньшей мере одного соединения формулы (I) в масляной фазе, такой как, например, смесь соевого масла и лецитина; 2) комбинирования содержащей формулу (I) масляной фазы со смесью

- 16 025294 воды и глицерина; и 3) обработки комбинации с образованием микроэмульсии.

Стерильную водную или масляную суспензию можно получить в соответствии со способами, уже известными в настоящей области техники. Например, стерильный водный раствор или суспензию можно получить с помощью нетоксического парентерально приемлемого разбавителя или растворителя, такого как, например, 1,3-бутандиол; и стерильную масляную суспензию можно получить с помощью такого стерильного нетоксического приемлемого растворителя или суспендирующей среды, как, например, стерильные нелетучие масла, например, синтетические моно- или диглицериды; и таких жирных кислот, как, например, олеиновая кислота.

Фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и инертные носители, которые можно использовать в фармацевтических композициях согласно настоящему изобретению, включают в себя без ограничения ионообменники, глинозем, стеарат алюминия, лецитин, самоэмульгирующиеся системы доставки лекарственных средств (8ΕΌΌ8), такие как б-альфа-токоферолполиэтиленгликоль 1000 сукцинат, поверхностно-активные вещества, используемые в фармацевтических лекарственных формах, такие как Т\уссп. полиэтоксилированное касторовое масло, такое как поверхностно-активное вещество СКЕМОРНОК® (ВЛ8Р), или другие аналогичные полимерные матрицы для доставки, белки сыворотки, такие как альбумин сыворотки человека, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота, калия сорбат, смеси неполного глицерида и насыщенных растительных жирных кислот, вода, соли или электролиты, такие как протаминсульфат, двузамещенный фосфат натрия, двузамещенный фосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидная двуокись кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, карбоксиметилцеллюлоза натрия, полиакрилаты, воски, блокполимеры полиэтилена и полиоксипропилена, полиэтиленгликоль и ланолин. Такие циклодекстрины, как альфа-, бета- и гамма-циклодекстрин, или такие химически модифицированные производные, как гидроксиалкилциклодекстрины, включая в себя 2- и 3-гидроксипропилциклодекстрины, или другие солюбилизированные производные также могут успешно применяться для улучшения доставки соединений описанных в настоящем документе формул.

Фармацевтически активные соединения согласно настоящему изобретению можно олбработать в соответствии с общепринятыми способами фармацевтики для получения медицинских средств для введения пациентам, включая в себя людей и других млекопитающих. Фармацевтические композиции могут быть подвергнуты общепринятым фармацевтическим операциям, таким как стерилизация, и/или могут содержать общепринятые адъюванты, такие как консерванты, стабилизаторы, смачивающие средства, эмульгаторы, буферы и т.д. Таблетки и драже дополнительно могут быть покрыты кишечнорастворимыми оболочками. Такие композиции также могут содержать такие адъюванты, как смачивающие средства, подсластители, вкусовые агенты и ароматизаторы.

Количества вводимых соединений и режим дозирования для лечения болезненного состояния с помощью соединений и/или композиций согласно настоящему изобретению зависит от разнообразных факторов, включая в себя возраст, массу тела, пол, состояние здоровья субъекта, тип заболевания, тяжесть заболевания, путь и частоту введения и конкретное используемое соединение. Таким образом, режим дозирования может варьировать в широком диапазоне, но его можно рутинно определить с использованием стандартных способов. Ежедневная доза, составляющая приблизительно 0,001-100 мг/кг массы тела, предпочтительно от приблизительно 0,0025 до приблизительно 50 мг/кг массы тела и наиболее предпочтительно от приблизительно 0,005 до 10 мг/кг массы тела, может быть приемлемой. Ежедневная доза может быть введена за одну-четыре дозы в день. Другие схемы дозирования включают в себя одну дозу в неделю и одну дозу в два дня.

Для терапевтических целей активные соединения согласно настоящему изобретению необязательно комбинируют с одним или несколькими адъювантами, приемлемыми для предусмотренного пути введения. При пероральном введении соединения можно смешивать с лактозой, сахарозой, крахмальной пудрой, сложными эфирами целлюлозы и алканоевых кислот, сложными алкилэфирами целлюлозы, тальком, стеариновой кислотой, стеаратом магния, оксидом магния, натриевыми и кальциевыми солями ортофосфорной и серной кислот, желатином, аравийской камедью, альгинатом натрия, поливинилпирролидоном и/или поливиниловым спиртом и затем таблетировать или инкапсулировать для удобного введения. Такие капсулы или таблетки могут содержать состав контролируемого высвобождения, который можно получить в виде дисперсии активного соединения в гидроксипропилметилцеллюлозе.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I) и/или по меньшей мере одну его фармацевтически приемлемую соль и необязательно дополнительное средство, выбранное из любого фармацевтически приемлемого носителя, адъюванта или инертного носителя. Альтернативные композиции согласно настоящему изобретению содержат соединение формулы (I), описанной в настоящем документе, или его пролекарственное средство и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или инертный носитель.

Применимость.

Иммунная система человека эволюционировала для осуществления борьбы организма с микроорганизмами, вирусами и паразитами, которые могут вызывать инфекцию, заболевание или смерть. Сложные регуляторные механизмы обеспечивают то, что различные клеточные компоненты иммунной системы

- 17 025294 нацелено воздействуют на чужеродные вещества или организмы, при этом не вызывая необратимого или существенного повреждения в отношении индивидуума. Наряду с тем, что инициирующие события в настоящее время не вполне ясны, при аутоиммунных заболеваниях иммунная система направляет свой воспалительный ответ для нацеленного воздействия на органы у больного. Различные аутоиммунные заболевания, как правило, характеризуются преобладающим или начальным целевым пораженным органом или тканями; например, сустав в случае ревматоидного артрита, щитовидная железа в случае тиреоидита Хашимото, центральная нервная система в случае рассеянного склероза, поджелудочная железа в случае сахарного диабета I типа и кишечник в случае воспалительного заболевания кишечника. Таким образом, получили наблюдения о том, что терапевтические средства, которые действуют на иммунную систему или определенные типы клеток иммунной системы (такие как В-лимфоциты и Т-лимфоциты, Тклетки), могут характеризоваться применимостью при более чем одном аутоиммунном заболевании.

В настоящей области техники, включая в себя литературные ссылки, процитированные в настоящем документе, широко известно, что рецепторы §1Р представляют собой хорошие мишени для широкого разнообразия терапевтических применений, включая в себя аутоиммунные заболевания. Рецепторы 81Р представляют собой хорошие мишени для лекарственных средств, поскольку отдельные рецепторы являются специфическими как в отношении ткани, так и в отношении ответа. Тканевая специфичность рецепторов §1Р важна, поскольку разработка агониста или антагониста, селективного в отношении одного рецептора, локализует клеточный ответ к тканях, содержащих указанный рецептор, ограничивая нежелательные побочные эффекты. Специфичность в отношении ответа рецепторов §1Р также важна, поскольку она позволяет разработать агонисты или антагонисты, которые инициируют или подавляют определенные клеточные ответы, не воздействуя на другие процессы. Следовательно, необходимы соединения, которые действуют на некоторые представители семейства рецепторов §1Р, наряду с тем, что они характеризуются пониженной активностью или отсутствием активности на другие представителей семейства и, как предполагают, они обеспечивают терапевтический эффект с улучшенным профилем побочных эффектов (т.е. со снижением или устранением нежелательных побочных эффектов).

Используемый в настоящем документе термин агонист со ссылкой на 5>1Р] относится к средству, которое проявляет такие фармакологические эффекты, как пониженная подвижность Т-клеток, пониженная миграция Т-клеток или пониженный выход Т-клеток из лимфоидных тканей. (Кокеи с1 а1., Ттеибк ίη 1ттиио1оду, 28:102 (2007)).

В силу их активности 31Р1 в качестве агонистов соединения согласно настоящему изобретению представляют собой иммунорегуляторные средства, применимые для лечения или профилактики аутоиммунных или хронических воспалительных заболеваний. Соединения согласно настоящему изобретению применимы для подавления иммунной системы в случаях, когда подавление иммунитета является целесообразным, например, при отторжении спинного мозга, органа или трансплантата, аутоиммунных и хронических воспалительных заболеваниях, включая в себя системную красную волчанку, ревматоидный артрит, сахарный диабет I типа, воспалительное заболевание кишечника, холангиолитический цирроз печени, увеит, рассеянный склероз, болезнь Крона, язвенный колит, буллезный пемфигоид, саркоидоз, псориаз, аутоиммунный миозит, гранулематоз Вегенера, ихтиоз, эндокринную офтальмопатию и бронхиальную астму.

Более конкретно, соединения согласно настоящему изобретению применимы для лечения или профилактики заболевания или нарушения, выбранного из группы, состоящей из следующего: трансплантация органов или ткани, вызванная трансплантацией реакция трансплантат против хозяина, такие аутоиммунные синдромы, как ревматоидный артрит, ювенильный идиопатический артрит, системная красная волчанка, кожная красная волчанка (дискоидная красная волчанка, подострая красная волчанка) и волчаночный нефрит, тиреоидит Хашимото, рассеянный склероз, тяжелая миастения, сахарный диабет I типа, увеит, задний увеит, аллергический энцефаломиелит, гломерулонефрит, послеинфекционные аутоиммунные заболевания, включая в себя ревматическую атаку и послеинфекционный гломерулонефрит, воспалительные и гиперпролиферативные кожные заболевания, псориаз, псориатический артрит, атопический дерматит, контактный дерматит, зудящий дерматит, себорейный дерматит, красный плоский лишай, вульгарная пузырчатка, буллезный пемфигоид, буллезный эпидермолиз, крапивница, ангионевротический отек, васкулит, включая в себя связанный с ЛИСА васкулит, гигантоклеточный артериит, синдром Такаясу, микроскопический полиангиит, васкулит центральной нервной системы, синдром ЧаргаСтросса и ревматоидный васкулит, эритема, кожная эозинофилия, акне, очаговая алопеция, кератоконъюнктивит, весенний конъюнктивит, связанный с болезнью Бехчета увеит, кератит, герпетический кератит, коническая роговица, дистрофия роговицы Фукса, бельмо роговицы, пузырчатка глаз, разъедающая язва роговицы, склерит, эндокринная офтальмопатия, синдром Фогта-Коянаги-Харада, саркоидоз, поллинозы, обратимое обструктивное заболевание дыхательных путей, бронхиальная астма, аллергическая бронхиальная астма, врожденная бронхиальная астма, приобретенная бронхиальная астма, вызванная пылью бронхиальная астма, хроническая или застарелая бронхиальная астма, бронхиальная астма с поздним началом и гиперчувствительность дыхательных путей, бронхит, язвы желудка, повреждение сосудов, вызванное ишемическими заболеваниями и тромбозом, ишемические заболевания кишечника, воспалительные заболевания кишечника, некротизирующий энтероколит, поражения кишечника, связан- 18 025294 ные с термическими ожогами, глютеновые энтеропатии, проктит, эозинофильный гастроэнтерит, мастоцитоз, болезнь Крона, язвенный колит, мигрень, ринит, экзема, межуточный нефрит, синдром Гудпасчура, гемолитико-уремический синдром, диабетическая нефропатия, множественный миозит, синдром Гийена-Барре, болезнь Меньера, полиневрит, полиневрит, мононеврит, радикулопатия, гипертиреоидит, диффузный токсический зоб, истинная эритроцитарная аплазия, апластическая анемия, гипопластическая анемия, идиопатический тромбоцитпеническая пурпура, аутоиммунная гемолитическая анемия, агранулоцитоз, пернициозная анемия, мегалобластная анемия, анеритроплазия, остеопороз, саркоидоз, пневмофиброз, идиопатическая межуточная пневмония, дерматомиозит, вульгарная лейкодерма, выльгарный ихтиоз, фотоаллергическая чувствительность, кожная Т-клеточная лимфома, артериосклероз, атеросклероз, аортит, нодозный полиартериит, миокардоз, склеродермия, гранулема Вегенера, синдром Шегрена, адипоз, эозинофильный фасцит, поражения десен, периодонта, альвеорлярного отростка, зубной эмали, гломерулонефрит, алопеция по мужскому типу или сенильная алопеция вследствие профилактики выпадения волос или обеспечения прорастания волос и/или стимуляции прорастания волос и роста волос, мышечная дистрофия, пиодермия и синдром Цезари, болезнь Аддисона, ишемически-реперфузионное повреждение органов, которое возникает при хранении, трансплантации или ишемическом заболевании, эндотоксиновый шок, псевдомембранный колит, колит, вызванный лекарственным средством или облучением, ишемическая острая почечная недостаточность, хроническая почечная недостаточность, токсикоз, вызванный кислородом в легких или лекарственными средствами, злокаческенная опухоль легких, эмфизема легких, катаракта, сидероз, пигментная дистрофия сетчатки, возрастная дегенерация желтого пятная, рубцевание стекловидного тела, щелочной ожог роговицы, дерматит, многоформная эритема, линеарный 1дА-зависимый буллезный дерматит и цементный дерматит, гингивит, периодонит, сепсис, панкреатит, заболевания, вызванные загрязнением окружающей среды, старение, онкогенез, метастазирование карциномы и гипобаропатия, заболевание, вызванное высвобождением гистамина или лейкотриена-С₄, болезнь Бехчета, аутоиммунный гепатит, первичный билиарный цирроз, склерозирующий холангит, частичная резекция печени, острый некроз печени, вызванный токсином некроз, вирусный гепатит, шок, или аноксия, вирусный гепатит В, не-А/не-В гепатит, цирроз, алкогольный цирроз, печеночная недостаточность, молниеносная печеночная недостаточность, печеночная недостаточность с поздним началом, обострение хронической печеночной недостаточности, нарастание химиотерапевтического эффекта, цитомегаловирусная инфекция, инфекция ЦМВ, СПИД, злокачественная опухоль, сенильная деменция, травма, невропатическая боль, хроническая бактериальная инфекция, тромбоцитопения, 1дА нефропатия, мезангиопролиферативный гломерулонефрит, связанное с 1§О4 заболевание, анкилозирующий спондилит и рецидивирующий полихондрит. Ювенильный идиопатический артрит включает в себя начинающийся с олигоартрита ювенильный идиопатический артрит, начинающийся с полиартрита ювенильный идиопатический артрит, ювенильный идиопатический артрит с системным началом, ювенильный псориатический артрит и связанный с энтезитом ювенильный идиопатический артрит.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрен способ лечения аутоиммунных и/или воспалительных заболеваний, включающий введение нуждающемуся в этом млекопитающему по меньшей мере одного соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Согласно другому варианту осуществления предусмотрены соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли для применения в терапии для лечения аутоиммунных и/или воспалительных заболеваний. Согласно другому варианту осуществления предусмотрено применение соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей для производства лекарственного средства для лечения или профилактики аутоиммунного и/или воспалительного заболевания. В указанных вариантах осуществления может использоваться терапевтически эффективное количество. Предпочтительно согласно указанным вариантам осуществления аутоиммунные и воспалительные заболевания выбраны из рассеянного склероза, ревматоидного артрита, воспалительного заболевания кишечника (включая в себя болезнь Крона и язвенный колит), псориаза, и в качестве средства для профилактики отторжения трансплантированных органов. Способ согласно настоящему варианту осуществления включает в себя введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически эффективной соли.

Согласно другому варианту осуществления предусмотрен способ лечения сосудистого заболевания, включающий введение нуждающемуся в этом млекопитающему по меньшей мере одного соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Согласно другому варианту осуществления предусмотрены соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли для применения в терапии для лечения сосудистого заболевания. Согласно другому варианту осуществления предусмотрено применение соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей для производства лекарственного средства для лечения сосудистого заболевания. В указанных вариантах осуществления может использоваться терапевтически эффективное количество. Предпочтительно согласно указанным вариантам осуществления сосудистое заболевание выбрано из атеросклероз и ишемическиреперфузионное повреждение.

Согласно другому варианту осуществления предусмотрен способ лечения воспалительного заболевания кишечника, включающий введение нуждающемуся в этом млекопитающему по меньшей мере одного соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Согласно другому варианту

- 19 025294 осуществления предусмотрены соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли для применения в терапии для лечения воспалительного заболевания кишечника. Согласно другому варианту осуществления предусмотрено применение соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей для производства лекарственного средства для лечения воспалительного заболевания кишечника. В указанных вариантах осуществления может использоваться терапевтически эффективное количество. Предпочтительно согласно указанным вариантам осуществления воспалительное заболевание кишечника выбрано из болезни Крона, язвенного колита, коллагенозного колита, лимфоцитарного колита, ишемического колита, колита отключенной толстой кишки, болезни Бехчета и неопределенного колита.

Согласно другому варианту осуществления предусмотрен способ лечения обыкновенной волчанки, включающий введение нуждающемуся в этом млекопитающему по меньшей мере одного соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Согласно другому варианту осуществления предусмотрены соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли для применения в терапии для лечения обыкновенной волчанки. Согласно другому варианту осуществления предусмотрено применение соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей для производства лекарственного средства для лечения обыкновенной волчанки. В указанных вариантах осуществления может использоваться терапевтически эффективное количество. Обыкновенная волчанка включает в себя системную красную волчанку, кожную красную волчанку, дискоидную красную волчанку, подострую красную волчанку и волчаночный нефрит.

Согласно другому варианту осуществления предусмотрен способ лечения рассеянного склероза, включающий введение нуждающемуся в этом млекопитающему по меньшей мере одного соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Согласно другому варианту осуществления предусмотрены соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли для применения в терапии для лечения рассеянного склероза. Согласно другому варианту осуществления предусмотрены соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли для применения в терапии для лечения обыкновенной волчанки. Согласно другому варианту осуществления предусмотрено применение соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей для производства лекарственного средства для лечения рассеянного склероза. В указанных вариантах осуществления может использоваться терапевтически эффективное количество. Предпочтительно согласно указанным вариантам осуществления рассеянный склероз включает в себя рецидивирующе-ремиттирующий рассеянный склероз, первично-прогрессирующий рассеянный склероз, вторично-прогрессирующий рассеянный склероз и прогрессирующий рецидивирующий рассеянный склероз.

Способы лечения связанных с δ1Ρ₁ состояний могут включать введение соединений формулы (I) отдельно или в комбинации друг с другом и/или другими подходящими терапевтическими средствами, применимыми в лечении таких состояний. Соответственно, предусмотрено, что терапевтически эффективное количество также включает в себя количество комбинации заявленных соединений, которое эффективно действует в качестве агониста на рецептор δ1Ρ₁. Комбинация соединений предпочтительно представляет собой синергическую комбинацию. Синергизм в соответствии с описанным, например, СНои с1 а1., Λάν. Еп/уте Кеди1., 22:27-55 (1984), возникает, когда эффект соединений при введении в комбинации, больше чем аддитивный эффект соединений при введении отдельно в качестве единственного средства. Как правило, синергический эффект наиболее ясно демонстрируется при субоптимальных концентрациях соединений. Синергизм может проявляться в отношении пониженной цитотоксичности, повышенной эффективности или некотором другом благоприятном эффекте комбинации по сравнению с отдельными компонентами.

Иллюстративные примеры таких других терапевтических средств включают в себя такие кортикостероиды или глюкокортикоиды, как дексаметазон, метилпреднизолон, преднизолон и преднизон; такие ингибиторы ΡΌΕ4, как ролипрам, циломиласт, рофлумиласт и оглемиласт; цитокин-супрессивные противовоспалительные лекарственные средства (С8ЛГО) и ингибиторы р38 киназы, 4-замещенные имидазо[1,2-А]хиноксалины, раскрытые в патенте США №4200750; такие антитела или слитые белки, направленные на молекулы клеточной поверхности, как СИ2, СЭ3. СЭ4. СЭ8. СЭ20. такие как ЫТиХАЫ®, СИ25, СИ30, СИ40, СИ69, СИ80 (В7,1), СИ86 (В7,2), СИ90, СТЬА, например абатацепт (ОКЕМ^А®), белатацепт или их лиганды, включая в себя СИ154 (ОР39, или СИ40Ь); антитела, слитые белки или растворимые рецепторы цитокинов или факторов роста человека, например, такой 'ТИР, как инфликсимаб (КЕМШАЭЕ®), этанерцепт (ЕтЬге1), адалимумаб (НиМГОА®), ЬТ, Ш-1, такой как анакинра (КШЕКЕТ®) (антагонист рецептора Ш-1), !И-2, !И-4, !И-5, [К-6, такие как СОТО 328 (химерное антитело к РЪ-6), Ш-7, Ш-8, Ш-12, РШ-15, Ш-16, Ш-17, Ш-21, Ш-23, такие как устекинумаб (моноклональное антитело к Ш-12/23 человека) и такие интерфероны, как интерферон бета 1а (ЛУОКЕХ®, КЕВШ®), интерферон бета 1Ь (ВΕТЛ§ΕКОN®); такие антагонисты рецептора интегрина, как ТУБАВЫ®; такие полимерные средства, как глатирамер ацетат (СОРАХОХЕ®); сульфасалазин, месаламин, гидроксихлорохин, такие нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (НПВС), как салицилаты, включая в себя аспирин, салсалат и салицилат магния, и такие не относящиеся к салицилатам, как ибупрофен, напроксен, мелоксикам, целекоксиб и рофекоксиб; такие противовирусные средства, как абакавир; такие

- 20 025294 антипролиферативные средства, как метотрексат, меркаптопурин, лефлуномид, циклоспорин, микофенололат, РК506 (такролимус, ΡΚΟΟΚΑΡ®); такие цитотоксические лекарственные средства, как азатиоприн и циклофосфамид; такие ингибиторы ядерной транслокации, как дезоксиспергуалин (И§0); такие содержащие золото продукты, как ауронофин; пеницилламин и рапамицин (сиролимус или КАΡАΜυNΕ®) или их производные.

Вышеперечисленные другие терапевтические средства при использовании в комбинации с соединениями согласно настоящему изобретению можно использовать, например, в тех количествах, которые указаны в ΡΗνδίοίηηδ' Ие^к КеГегепсе (ΡΌΚ) или которые иным образом определены специалистом в настоящей области техники. В способах согласно настоящему изобретению такое(ие) другое(ие) терапевтическое(ие) средство(а) можно вводить перед, одновременно или после введения соединений согласно настоящему изобретению.

Примеры

Изобретение также определено в следующих примерах. Следует понимать, что примеры представлены только в целях иллюстрации. Исходя из вышеописанного обсуждения и примеров, специалист настоящей области техники может определять основополагающие характеристики настоящего изобретения и без отклонения от его сущности и объема может делать различные изменения и модификации, чтобы адаптировать настоящее изобретение к различным применениям и условиям. Таким образом, настоящее изобретение не ограничено изложенными далее иллюстративными примерами, а скорее определено приложенной к настоящему описанию формулой изобретения.

Аббревиатуры.

Ас - ацетил; безв. - безводный; водн. - водный;

Βη - бензил;

Ви - бутил;

Вос - трет-бутоксикарбонил;

Ον - объемы колонки;

ИСМ - дихлорметан;

ИЕА - диэтиламин;

ИМА - ГС^диметилацетамид;

ИМР - диметилформамид;

ΌΜΡυ - 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1Н)-пиримидинон;

ИМЕЮ - диметилсульфоксид;

ЕЮАс - этилацетат;

Εΐ - этил;

ΕΐзN - триэтиламин;

ЕЮН - этанол;

Н или Н_{2 -} водород; ч - час(ы);

Нех - гексан; ί - изо;

НОАс - уксусная кислота;

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография;

ЖХ - жидкостная хроматография;

ЬИА - диизопропиламид лития;

ЫНМИЗ - бис(триметилсилил)амид лития;

М - молярный; мМ - миллимолярный;

Ме - метил;

ΜеСN - ацетонитрил;

МеОН - метанол;

МГц - мегагерц; мин - минута(ы);

М+¹ - (М+Н)+^;

МС - масс-спектроскопия; н. или Н - нормальность; нМ - наномолярный;

NΜΡ - ^метилпирролидин;

Ρά/С - палладиевый катализатор на углеродном носителе;

Ρά₂((άЬа)з - трис-(дибензилиденацетон)дипалладий;

ΡΗ - фенил;

- 21 025294

Рг - пропил;

Р§[ - фунтов на кв.дюйм;

Κ.-ΒΓΝΑΡ - (К)-(+)-2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил; врем. удерж. или КТ - время удержания; нас. - насыщенный;

δ-ΒΓΝΑΡ - (§)-(-)-2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил;

СФХ - сверхкритическая флюидная хроматография;

ТРА - трифторуксусная кислота;

ТНР - тетрагидрофуран.

Условия ВЭЖХ.

Условие С: колонка: УМС СОМВШСКЕЕЫ® §5 50x4,6 мм (градиентный режим от 0 до 100% растворителя В в течение 4 мин, затем 1-4 мин удерживания при 100% В; растворитель А = воды 90%/МеОН 10%/ Н₃РО₄, 0,2%; растворитель В = МеОН 90%/воды 10%/ Н₃РО₄ 0,2%; скорость потока: 4 мл/мин. Продукты определяли при 220 нм.

Условие С: колонка: ^а(егк АссцШу ВЕН С18 2,1x50 мм 1,7 мкм; градиентный режим 0-100% растворителя В в течение 3 мин, затем 0,75 мин удерживания при 100% В; скорость потока: 1,11 мл/мин; растворитель А: 5:95 ацетонитрила:воды с 10 мМ ацетата аммония; растворитель В: 95:5 ацетонитрила:воды с 10 мМ ацетата аммония; температура = 50°С. Продукты определяли при длине волны 220 нм.

Условие Н: колонка: §ииР1ге С18, (150x3,0 мм), 3,5 мкм; градиентный режим от 10 до 100% растворителя В в течение 25 мин, затем 5 мин удерживания при 100% В; скорость потока: 1 мл/мин; буфер: 0,5% ТРА в воде с отрегулированным значением рН до 2,5 с применением разбавленного аммиака; растворитель А: буфер: ацетонитрил (95:5); растворитель В: буфер: ацетонитрил (5:95). Продукты определяли при 220 нм.

Условие I: колонка: ^а(егк АссцШу §Ό ВЕН С18, 2,1x50 мм, частицы 1,7 мкм; подвижная фаза А: 100% Н₂О с 0,05%ТРА; подвижная фаза В: 100% ацетонитрила с 0,05% ТРА; температура: 50°С; градиент от 98:2 до 2:98 (А%:В%) в течение 1 мин и удерживали 2:98 в течение 0,5 мин; поток: 0,800 мл/мин. Продукты определяли при 220 нм.

Условие I: колонка: СНКОМОЫТН® §реебКОЭ (4,6x50 мм); градиентный режим от 0 до 100% растворителя В в течение 4 мин с 1 мин удержания при 100% В; растворитель А: 10% МеОН, 90% Н₂О, 0,1% ТРА; растворитель В: 90% МеОН, 10% Н₂О, 0,1% ТРА; скорость потока: 4 мл/мин. Продукты определяли при 220 нм.

Промежуточное соединение 1. (1К,3§)-Метил-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоксилат ЛоСН;, ° (1-1)

Промежуточное соединение 1 А. (§)-3-(4-Бромфенил)циклопентанон

Раствор 4-бромфенилбороновой кислоты (20 г, 100 ммоль) в 1,4-диоксане (120 мл) в 500 мл колбе продували азотом в течение 5 мин. К раствору последовательно добавляли §-ВШАР (0,992 г, 1,593 ммоль) и бис(норборнадиен)родия (I) тетрафторборат (0,559 г, 1,494 ммоль) при избыточном давлении азота. Через 2 ч взбалтывания при комнатной температуре добавляли воду (20 мл), а затем циклопент-2енон (8,06 мл, 100 ммоль) и Εΐ₃Ν (13,88 мл, 100 ммоль). Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 16 ч. Полученные темные твердые вещества удаляли фильтрацией и фильтрат выливали в 250 мл этилацетата. Раствор промывали дважды водой и органический слой концентрировали. Остаток очищали при помощи колоночной флеш-хроматографии (разделяли на две партии, каждую анализировали на колонке с 330 г диоксида кремния с 0-25% этилацетата в гексане) с получением 12,1 грамм (§)-3-(4-бромфенил)циклопентанона. Чистота по ВЭЖХ составляла >98%, и анализ при помощи хиральной ВЭЖХ показывал приблизительно 90% э.и. Вещество дополнительно очищали при описанных ниже условиях хиральной СФХ. Подробности эксперимента: устройство: Вегдег §РС МСШ; подготовительные условия: колонка: СШКАЬРАК® АЭ-Н 25x5 см, 5 мкм; температура колонки: 40°С; скорость потока: 200 мл/мин; подвижная фаза: СО₂/МеОН= 80/20; длина волны детектора: 225 нм; вводимый объем: 1,0 мл; приготовление образцов: 12,1 г в 210 мл МеОН (конц. 60 мг/мл); аналитические условия: колонка: СШКАЬРАК® АО 25x0,46 см, 10 мкм; температура колонки: 40°С; скорость потока: 2,0 мин; подвижная фаза: СО₂/МеОН = 70/30; длина волны детектора: 220 нм; вводимый объем: 5 мкл.

Требуемый энантиомер (основной изомер) выделяли и называли как РК2 на основе порядка элюирования. Определяли, что энантиомерная чистота выделенного изомера была более чем 99,6% по площади пика методом СФХ/УФ при 220 нм. После выпаривания восстанавливали 10,5 г требуемого энантиомера. Время удержания при ВЭЖХ = ЖХ/МС М+¹ = 239/241. 'Н ЯМР (400 МГц, СО₃ОЭ) δ ррт 7.437.51 (2Н, т), 7.10-7.19 (2Н, т), 3.32-3.46 (1Н, т), 2.67 (1Н, бб, 1=18.27, 7.48 Гц), 2.39-2.54 (2Н, т), 2.23- 22 025294

2.39 (2Н, т), 1.97 (1Н, άάά, 1=12.98, 11.00, 9.02 Гц).

Промежуточное соединение 1В. (78)-7-(4-Бромфенил)-1,3-диазаспиро[4.4]нонан-2,4-дион

Использовали в общем 9,8 г (8)-3-(4-бромфенил)циклопентанона, разделенного на 2 партии, каждая включала в себя 4,9 г. Две партии обрабатывали при идентичных условиях, как описано ниже.

К смеси (8)-3-(4-бромфенил)циклопентанона (соединение 1-1А, 4,9 г, 20,49 ммоль) и цианида калия (1,935 г, 29,7 ммоль) в ЕЮН (40 мл) и воде (20 мл) в стеклянном сосуде под давлением добавляли карбонат аммония (4,92 г, 51,2 ммоль). Реакционный сосуд закупоривали и помещали в масляную баню, нагреваемую при 80°С в течение 24 ч, что приводило к образованию белого твердого вещества. После охлаждения реакционного сосуда в ледяной бане этот сосуд открывали и добавляли 30 мл воды, что приводило к образованию дополнительных твердых веществ. Твердые вещества собирали фильтрацией, дважды промывали 5 мл воды, а затем сушили под высоким вакуумом. Две партии объединяли с получением 13,9 г (78)-7-(4-бромфенил)-1,3-диазаспиро[4.4]нонан-2,4-дион), который использовали в последующих реакциях без дополнительной очистки. Время удержания при ВЭЖХ = 0,82 мин (условие С); ЖХ/МС \1'^: = 331, 2М+^Н = 619.

Промежуточное соединение 1С. (38)-1-Амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоновая кислота

К (78)-7-(4-бромфенил)-1,3-диазаспиро[4 4]нонан-2,4-диону (соединение Ι-1Β, 13,9 г, 45,0 ммоль) в 1,4-диоксане (40 мл) в круглодонной колбе добавляли водный №ОН (2 н, 100 мл, 200 ммоль) Смесь нагревали до 95°С и перемешивали в течение 24 ч. Добавляли дополнительное количество №ОН (25 мл, 50 ммоль) и нагревание продолжали еще в течение двух суток Раствор охлаждали при помощи ледяной бани, нейтрализовали 5н. НС1 до приблизительного значения рН 7, что приводило к образованию белого осадка Твердые вещества собирали фильтрацией и сушили под высоким вакуумом в течение 2 суток с получением 14 г (38)-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоновой кислоты в виде белого твердого вещества, которое использовали в таком виде на следующей стадии без дополнительной очистки Время удержания при ВЭЖХ = 0,64 мин (условие С), ЖХ/МС М+¹ = 284/286.

Промежуточное соединение 1Ό. (38)-Метил-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоксилат

К гетерогенной смеси (38)-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоновой кислоты (соединение 1-1С, 14 г, 49,3 ммоль) в МеОН (250 мл) по каплям добавляли тионилхлорид (36,0 мл, 493 ммоль) в течение 20 мин при комнатной температуре через дополнительную воронку (экзотремич) Реакционную смесь помещали в масляную баню и нагревали до 70°С в течение 4 ч. Растворитель удаляли под вакуумом с остатком, растворенным в этилацетате (200 мл), и промывали дважды 1н. №ОН Органический слой затем сушили над №₂8О₄ и концентрировали с получением 10,8 г (38)-метил-1-амино-3-(4бромфенил)циклопентанкарбоксилата Время удержания при ВЭЖХ = 0,68 мин (условие С), ЖХ/МС М'¹ = 298/300.

Промежуточное соединение 1. (1К,38)-Метил-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоксилат

(1Р..ЗЗ) (15,35)

Пик 2 (СЖХ) Пик 1 (СЖХ)

Смесь диастереомеров (соединение Ι-1Ό, 9,5 г) разделяли при помощи хиральной СФХ. Абсолютное стереохимическое отнесение промежуточного соединения 1 и его диастереомера было описано ранее (Аа11асе С.А. с( а1., 1. Огд. Сйет., 74:4886-4889 (2009)) Подробности эксперимента устройство подготовительное Тйаг 8РС350, аналитическое аналитическое устройство для СФХ Вегдег, подготовительные условия колонка Рих-Се11и1о8е-4 25x3 см, 5 мкм, температура колонки 35°С, скорость потока 200 мл/мин, подвижная фаза СО₂/(МеОН с 0,1% ИЕА) = 87/13, длина волны детектора 220 нм, вводимый объем 0,6 мл, приготовление образцов 9,5 г в 400 мл МеОН (конц 23,7 мг/мл). Аналитические условия колонка йих-Се11и1о5е-4 25x0,46 см, 5 мкм, темп колонки 35°С, скорость потока 3 мл/мин, подвижная фаза СО₂/(МеОН с 0,1% ИЕА) = 85/15, длина волны детектора 220 нм, вводимый объем 5 мкл.

- 23 025294

Промежуточное соединение 1: пик 2 4,06 г, время удерж. = 6,64 мин при вышеуказанных условиях аналитической хиральной СФХ. Оптическая чистота 98,2%, ЖХ/МС М+¹ = 298/300, пик 1 3,96 г, время удерж. = 5,47 мин при вышеуказанных условиях аналитической хиральной СФХ. Оптическая чистота 99,4%.

Альтернативное получение НС1. Соль промежуточного соединения 1 ΝΗ₂ НС1 ' ' ОСНз (1-1 НС1 соль)

Раствор (38)-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоновой кислоты (10,2 г, 35,9 ммоль) в МеОН (100 мл) охлаждали в ледяной бане, а затем по каплям добавляли 8ОС1₂ (15,72 мл, 215 ммоль) После завершения добавления раствор нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч, при этом при помощи ВЭЖХ устанавливали завершение реакции. Раствор концентрировали с удалением метанола с получением твердого вещества. Твердое вещество поглощали в 50 мл 3% Н₂О в ЕЮАс и тщательно перемешивали в течение 30 мин. Образованное белое твердое вещество собирали фильтрацией. Влажное белое твердое вещество поглощали в 50 мл 4% Н₂О в 1,2-диметоксиэтане и нагревали до 50°С в течение 3 ч, а затем перемешивали при комнатной температуре всю ночь. Полученное белое твердое вещество собирали фильтрацией и сушили с получением (1К,38)-метил-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоксилата гидрохлорида (3,5 г, 10,35 ммоль) Время удержания при ВЭЖХ = 6,6 мин (условие Н), ЖХ/МС М+¹ = 298/300. ^!Н ЯМР (400 МГц, НМ8О-б₆) δ 8 95 (Ьг 5, 3Н) 7 50-7.53 (т, 2Н), 7.35-7.37 (т, 2Н),

3.81 (5, 3Н) 3.17-3.28 (т, 1Н), 2.57 (бб, 6=14, 7 Гц, 1Н), 2 0-2.28 (т, 5Н).

Промежуточное соединение 2. (1К,3К)-Метил-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоксилат

Промежуточное соединение 2А. (К)-3-(4-Бромфенил)циклопентанон Вг--0~Т (Ι-2Α)

Раствор 4-бромфенилбороновой кислоты (20 г, 100 ммоль) в 1,4-диоксане (120 мл) продували азотом в течение 10 мин. Последовательно добавляли (Κ)-ΒΙΝΑΡ (0,992 г, 1,593 ммоль) и бис(норборнадиен)родия (I) тетрафторборат (0,559 г, 1,494 ммоль) и суспензию обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин. Смесь перемешивали в течение 20 мин. Добавляли воду (20 мл) и реакционная смесь становилась гомогенной. Через 10 мин добавляли циклопент-2-енон (8,06 мл, 100 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь. При помощи анализов ВЭЖХ и ЖХМС определяли, что реакция была выполнена, но оставалось все еще больше исходного вещества, чем продукта. Реакционную смесь фильтровали через прокладку СЕПТЕ®, а СЕПТЕ® промывали этилацетатом (100 мл). Фильтрат разбавляли дополнительным количеством этилацетата (150 мл), промывали водой (2х), промывали солевым раствором и сушили над безводным сульфатом натрия. Смесь продукта очищали флеш-хроматографией на силикагеле с применением смеси этилацетата и гексана с получением (К)-3-(4-бромфенил)циклопентанона (6,09 г, 25,5 ммоль) в виде белого твердого вещества. Продукт был 98% чистоты по ВЭЖХ с временем удержания = 2,11 мин (условие 1) ЖХ/МС М+¹ = 241. ¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 7.57-7.39 (т, 2Н), 7.22-7.06 (т, 2Н), 3.39 (ббб, 1=10.9, 6.8, 4.1 Гц, 1Н), 2.67 (бб, 1=18.2, 7.4 Гц, 1Н), 2.57-2.38 (т, 2Н), 2.38-2.21 (т, 2Н), 1.99-1.85 (т, 1Н).

При помощи хиральной ВЭЖХ определяли, что соединение было на 90-95% энантиомерно чистым. Соединение (6,03 г) дополнительно очищали при помощи хиральной СФХ с применением перечисленных ниже условий. Требуемый энантиомер выделяли и называли как ΡΚ1 в порядке элюирования. Определяли, что энантиомерная чистота выделенного изомера была более чем 99,9% по площади пика методом СФХ/УФ при 220 нм. После концентрирования восстанавливали 5,45 г требуемого энантиомера. Подробности эксперимента: устройство: Вегдег 8РС ΜΟΙΙΙ; подготовительные условия: колонка: СН1ΚΑΕΡΑΚ® ΑΌ-Н 25 х3 см, 5 мкм; температура колонки: 40°С; скорость потока: 180 мл/мин; подвижная фаза: СО₂/МеОН = 87/13; длина волны детектора: 225 нм; вводимый объем: 0,5 мл; приготовление образцов: 6,03 г в 100 мл МеОН (конц. 60 мг/мл). Аналитические условия: колонка: ΕΉΙΚΑΕΡΑΚ® ΑΌ 25x0,46 см, 10 мкм; температура колонки: 40°С; скорость потока: 2,0 мин; подвижная фаза: СО₂/МеОН = 70/30; длина волны детектора: 220 нм; вводимый объем: 5 мкл.

Промежуточное соединение 2В. (7К)-7-(4-Бромфенил)-1,3-диазаспиро[4.4]нонан-2,4-дион

О (Ι-2Β)

К смеси (К)-3-(4-бромфенил)циклопентанона (соединение Ι-2Α, 5,4 г, 22,58 ммоль) и цианида калия

- 24 025294 (2,132 г, 32,7 ммоль) в ЕЮН (40 мл) и воде (20 мл) в стеклянном сосуде под давлением добавляли карбонат аммония (5,42 г, 56,5 ммоль). Реакционный сосуд закупоривали и помещали в масляную баню, нагреваемую при 80°С в течение 20 ч. В бледно-желтом растворе образовывалось большое количество белого сыпучего твердого вещества. При помощи анализа ЖХМС определяли оставшееся исходное вещество, поэтому реакцию продолжали в течение дополнительных 24 ч. Поскольку превращение было неполным, температуру масляной бани повышали до 120°С. При более высокой температуре белое твердое вещество полностью растворялось. Через 3 ч раствор охлаждали до комнатной температуры. Раствор дополнительно охлаждали в ледяной бане, добавляли воду (30 мл) и полученное белое твердое вещество собирали фильтрацией, промывали водой, подвергали воздушной сушке, затем помещали под высокий вакуум с получением названного соединения (6,9 г, 22,32 ммоль), которое использовали в последующей реакции без дополнительной очистки. Время удержания при ВЭЖХ = 0,81 мин (условие О); ЖХ/МС М^Н= 309/311; 2М+^Н = 619.

Промежуточное соединение 2С. (3К)-1-Амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоновая кислота

О (1-2С)

Раствор (7К)-7-(4-бромфенил)-1,3-диазаспиро[4.4]нонан-2,4-диона (соединение !-2В„ 6,80 г, 22 ммоль) в диоксане (20 мл) и №ОН (2 н, водн.) (120 мл, 240 ммоль) нагревали на масляной бане, установленной на 95°С. Полученный прозрачный, бледно-желтый раствор оставляли перемешиваться в течение выходных. Раствор охлаждали в ледяной бане и нейтрализовали до приблизительного значения рН 7 при помощи 6 н НС1, что приводило к образованию осадка. Твердые вещества собирали и подвергали воздушной сушке всю ночь. Из белого твердого вещества образовывали взвесь в горячем этаноле (~100 мл) и повторно собирали фильтрацией и твердое вещество подвергали воздушной сушке, затем помещали под высокий вакуум. (5,8 г, 20,41 ммоль). Время удержания при ВЭЖХ = 0,64 мин (условие О); ЖХ/МС М+¹ = 284/286. Ή ЯМР (500 МГц, метанол-б₄) δ 7.52-7.38 (т, 2Н), 7.31-7.17 (т, 2Н), 3.55-3.40 (т, 1Н), 2.68 (бб, 6=13.3, 6.7 Гц, 1Н от простого диастереомера), 2.58-2.39 (т, 1Н), 2.26-2.15 (т, 1Н), 2.10-1.98 (т, 1Н), 1.98-1.81 (т, 1Н), 1.70 (бб, 6=13.2, 11.8 Гц, 1Н от простого диастереомера).

Промежуточное соединение 2Ό. (3К)-Метил-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоксилат о П-213)

В 500 мл круглодонной колбе, содержащей магнитную мешалку, (3К)-1-амино-3-(4бромфенил)циклопентанкарбоновую кислоту (соединение Е2С, 5,4 г, 19,00 ммоль) суспенидровали в метаноле (100 мл) с получением белой взвеси. Капельную воронку заполняли тионилхлоридом (13,87 мл, 190 ммоль) и реагент добавляли по каплям при такой скорости, при которой смесь избегала достижения температуры флегмы. После завершения добавления бледно-желтый непрозрачный раствор помещали в установленную на 70°С масляную баню и присоединяли обратный холодильник с воздушным охлаждением. Раствор нагревали несколько часов, а затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры всю ночь. Растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток растворяли в этилацетате, промывали 1н. №ЮН (водн.), промывали водой, затем сушили над Мд§О₄ перед фильтрацией и концентрированием. Из полученного желтого твердого вещества получали взвесь в теплом этилацетате при обработке ультразвуком, а затем фильтровали. Твердое вещество подвергали воздушной сушке и помещали под вакуумом, и фильтрат выпаривали с получением твердого вещества 1: белое твердое вещество, 4,28 г, ЖХМС показывала >98% АР. Фильтрат выпаривали с получением желтого твердого вещества (1,89 г). Из твердого вещества из фильтрата получали взвесь в минимальном количестве горячего этилацетата при обработке ультразвуком, затем охлаждали (ледяная баня) и фильтровали холодным. Твердое вещество подвергали воздушной сушке и помещали под вакуумом с получением твердого вещества 2: 1,44 г белого твердого вещества. Твердые вещества объединяли (5,7 г).

Объединенные твердые вещества (3К)-метил-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоксилата (соединение !-2О, 4 г) разделяли с применением разделения диастереомеров при помощи хиральной СФХ. Абсолютное стереохимическое отнесение промежуточного соединения 2 и его диастереомера было описано ранее (Аа11асе О.А. с1 а1., 1. Огдатс СЬет., 74:4886-4889 (2009)). Подробности эксперимента:

- 25 025294 устройство: подготовительное: Тйат 8РС350; аналитическое: аналитическое устройство ТЬат с ΜΌ8. Подготовительные условия: колонка: СНШЛЬРЛК® ΆΌ-Η 25x5 см, 5 мкм; температура колонки: 35°С; скорость потока: 300 мл/мин; подвижная фаза: СО₂/(МеОН с 0,1% ΌΕΆ) = 82/18; длина волны детектора: 230 нм; вводимый объем: 0,4-0,5 мл; приготовление образцов: 4 г в 120 мл МеОН (конц. 33 мг/мл). Аналитические условия: колонка: СШКАЬРАК® АЭ-Н 25x0,46 см, 5 мкм; температура колонки: 35°С; скорость потока: 3 мл/мин; подвижная фаза: СО₂/(МеОН с 0,1%ΏΕΑ) = 80/20; длина волны детектора: 222 нм; вводимый объем: 5 мкл.

Промежуточное соединение 2 (пик 1): 1,56 г (99,3% оптической чистоты при 222 нм). Время удерж. = 7,18 мин при аналитической хиральной СФХ. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-б₄) δ 7.45-7.39 (т, 2Н), 7.237.17 (т, 2Н), 3.78 (5, 3Н), 3.40-3.48 (т, 1Н), 2.40 (άάά, 1=13.0, 8.9, 3.6 Гц, 1Н), 2.28-2.21 (т, 1Н), 2.18 (άά, 1=13.0, 11.7 Гц, 1Н), 2.04 (άά, 1=13.0, 7.2 Гц, 1Н), 1.88-1.79 (т, 1Н), 1.79-1.70 (т, 1Н).

Пик 2: 1,8 г (97,2% оптической чистоты при 222 нм). Время удерж. = 7,71 мин при аналитической хиральной СФХ. Ή ЯМР (500 МГц, метанол-άζ,) δ 7.45-7.38 (т, 2Н), 7.26-7.20 (т, 2Н), 3.78 (5, 3Н), 3.283.20 (т, 1Н), 2.66-2.57 (т, 1Н), 2.25 (άάά, 1=12.8, 11.0, 7.2 Гц, 1Н), 2.10 (άΐ, 1=12.2, 6.8 Гц, 1Н), 2.03-1.93 (т, 1Н), 1.84 (άάά, 1=13.0, 7.8, 2.2 Гц, 1Н), 1.65 (άά, 1=13.3, 11.1 Гц, 1Н).

Промежуточное соединение 3. (5К,78)-7-(4-Бромфенил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-он о

(1-3)

Промежуточное соединение 3А. ((1К,38)-1-Амино-3-(4-бромфенил)циклопентил)метанол ΝΗ₂

.....θ' .он (Ι-3Α)

К смеси (1К,3§)-метил-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоксилата, НС1 (соединение 1-1 НС1, 15 г, 44,8 ммоль) в МеОН (100 мл) при 0°С порционно добавляли боргидрид натрия (4 г, 106 ммоль). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и порционно добавляли боргидрид натрия, пока при помощи анализа ВЭЖХ не определяли завершение реакции. Для гашения реакции добавляли воду. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали насыщенным №С1. Водный слой повторно экстрагировали несколько раз. Объединенные органические слои сушили с Мд§О₄, фильтровали и концентрировали. Продукт (11 г) восстанавливали после концентрирования. Время удержания при ВЭЖХ = 0,65 мин (условие О); ЖХ/МС М+¹ = 272. Ή ЯМР (400 МГц, ЭМБО-бД δ 7.51-7.40 (т, 2Н), 7.27 (ά, 1=8.4 Гц, 2Н), 3.323.20 (т, 2Н), 3.09-2.92 (т, 1Н), 2.11 (άά, 1=12.9, 8.7 Гц, 1Н), 1.98-1.87 (т, 1Н), 1.80 (ςά, 1=11.1, 7.9 Гц, 1Н), 1.69-1.58 (т, 1Н), 1.48 (άάά, 1=12.4, 7.9, 2.2 Гц, 1Н), 1.32 (άά, 1=12.8, 10.1Гц, 1Н).

Промежуточное соединение 3. (5К,78)-7-(4-Бромфенил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-он.

К смеси ((1К,38)-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентил)метанола (11 г, 40,7 ммоль) и пиридина (соединение 1-3А, 3,29 мл, 40,7 ммоль) в диоксане (300 мл) добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (19,81 г, 122 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали 1М НС1, солевым раствором и насыщенным NаΗСОз. Смесь повторно экстрагировали несколько раз. Органический слой сушили с Мд§О₄, фильтровали и концентрировали с получением 10,5 г требуемого продукта в виде беловатого твердого вещества. Время удержания при ВЭЖХ = 0,87 мин (условие О). ЖХ/МС М+¹ = 297,9. Ή ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ 7.45 (ά, 1=8.6 Гц, 2Н), 7.12 (ά, 1=8.4 Гц, 2Н), 6.42 (Ьг. 5., 1Н), 4.41-4.21 (т, 2Н), 3.17-2.91 (т, 1Н), 2.34 (άά, 1=13.3, 7.4 Гц, 1Н), 2.23-2.11 (т, 2Н), 2.01-1.90 (т, 2Н), 1.88-1.74 (т, 1Н).

Промежуточное соединение 4. (5К,7К)-7-(4-Бромфенил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-он

О

Промежуточное соединение 4А. ((1К,3К)-1-Амино-3-(4-бромфенил)циклопентил)метанол (1-4)

(1К,3К)-метил-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентанкарбоксилат (соединение 1-2, 3,88 г, 13,01 ммоль) растворяли в МеОН (65,1 мл) и порционно добавляли боргидрид натрия (1,477 г, 39,0 ммоль). Порционно добавляли дополнительное количество боргидрида натрия (0,5 эквив. каждый 1 ч), пока при помощи анализа ВЭЖХ не определяли завершение реакции. Реакция была завершена через 2 ч. Реакционную смесь гасили водой и разбавляли этилацетатом. Водный слой повторно экстрагировали трижды ЕЮАс. Органические слои объединяли, промывали насыщенным №С1, сушили над Мд§О₄, фильтровали и концентрировали с получением ((1К,3К)-1-амино-3-(4-бромфенил)циклопентил)метанола (3,19 г, 11,81 ммоль). Время удерж., при ВЭЖХ = 0,68 мин; ЖХ/МС М+¹ = 272. Ή ЯМР (400 МГц, СЭС1₃) δ 7.42 (ά, 1=8.4 Гц, 2Н), 7.13 (ά, 1=8.4 Гц, 2Н), 3.49 (5, 2Н), 3.32-3.41 (т, 1Н), 2.19-2.25 (т, 1Н), 1.98-2.07 (т, 1Н),

- 26 025294

1.90-1.95 (т, 1Н), 1.66-1.74 (т, 2Н), 1.52-1.60 (т, 1Н).

Промежуточное соединение 4. (5К,7К)-7-(4-Бромфенил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-он. ((1К,3К)-1-Амино-3-(4-бромфенил)циклопентил)метанол (соединение Ь4А, 3,19 г, 11,81 ммоль) растворяли в ТНР (59,0 мл). Порционно добавляли пиридин (0,955 мл, 11,81 ммоль) и 1,1'карбонилдиимидазол (5,74 г, 35,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч и подвергали анализу ЖХМС. После завершения смесь разбавляли ЕЮАс и промывали 1М НС1. Водный слой повторно экстрагировали дважды ЕЮАс. Органические слои объединяли, промывали насыщенным ЫаС1, сушили над М§§0₄, фильтровали и концентрировали с получением (5К,7К)-7-(4-бромфенил)-3-окса-1азаспиро[4.4]нонан-2-она (2,5 г, 8,44 ммоль) после флеш-хроматографии (колонка для 24 г силикагеля; элюент: гексан, 2 СУ с последующим градиентом до 100% ЕЮАс более 15 СУ). Время удерж., при ВЭЖХ = 0,91 мин; ЖХ/МС М+¹ = 298. Ή ЯМР (400 МГц, СОСЕ) δ 7.46 (ά, 1=8.5 Гц, 2Н), 7.09 (ά, 1=8.5 Гц, 2Н), 5.72- 5.81 (т, 1Н), 4.35 (άά, 1=13Гц, 8Гц, 2Н), 3.19-3.24 (т, 1Н), 2.38-2.44 (т, 1Н), 2.15-2.26 (т, 1Н), 2.11-2.14 (т, 1Н), 1.99-2.05 (т, 1Н), 1.79-1.85 (т, 1Н), 1.65-1.72 (т, 1Н).

Промежуточное соединение 5. (5К,78)-7-(6-оксо-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1азаспиро [4.4] нонан-2-он

Промежуточное соединение 5А. трет-Бутил-2-(4-((5К,78)-2-оксо-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-7ил)фенил)ацетат

^снз (Ι-5Α)

К смеси (5К,78)-7-(4-бромфенил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-она (соединение 1-3, 1 г, 3,38 ммоль) в диоксане (10 мл) при комнатной температуре добавляли бис(триметилсилил)амид лития (3,71 мл, 3,71 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин, затем добавляли 1,2,3,4,5-пентафенил-1'-(дитрет-бутилфосфино)ферроцен (0,121 г, 0,169 ммоль), Ρά₂(άόα)₃ (0,155 г, 0,169 ммоль) и (2-(трет-бутокси)2-оксоэтил)цинка(П) хлорид (8,10 мл, 4,05 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 80°С в течение 2 ч, затем охлаждали до комнатной температуры, разбавляли этилацетатом и промывали 1М НС1. Органический слой сушили с М§§0₄, фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество очищали на картридже с силикагелем (40 г) с применением градиента ЕЮАс/гексан (0-100% ЕЮАс в течение 20 мин) с получением 950 мг трет-бутил-2-(4-((5К,78)-2-оксо-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-7-ил)фенил)ацетата. Время удержания при ВЭЖХ = 0,93 мин (условие О); ЖХ/МС М+¹ = 332.

Промежуточное соединение 5В. 2-(4-((5К,78)-2-оксо-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-7-ил)фенил)уксусная кислота о

К смеси трет-бутил-2-(4-((5К,78)-2-оксо-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-7-ил)фенил)ацетата (соединение Е5А. 1 г, 3,02 ммоль) в ЭСМ (20 мл) добавляли ТРА (10 мл). Через 2 ч раствор концентрировали ίη уасио и использовали в таком виде на следующей стадии без дополнительной очистки. Время удержания при ВЭЖХ = 0,65 мин (условие О); ЖХ/МС М+¹ = 276.

Промежуточное соединение 5. (5К,78)-7-(6-оксо-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1азаспиро[4.4]нонан-2-он.

К смеси 2-(4-((5К,78)-2-оксо-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-7-ил)фенил)уксусной кислоты (соединение Ь5В, 800 мг, 2,91 ммоль) в ЭСМ (20 мл) добавляли оксалилхлорид (1 мл, 11,42 ммоль) и несколько капель ΌΜΡ. Через один час реакционную смесь концентрировали ίη уасио. Остаток повторно растворяли в ЭСМ (20 мл) в стеклянном сосуде под давлением. Добавляли гранулированный хлорид алюминия (1550 мг, 11,62 ммоль) и реакционную смесь охлаждали до -78°С. Этилен барботировали через раствор в течение 5 минут, и затем реакционный сосуд закупоривали. Реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Смесь выливали в лед, разбавляли дихлорметаном и промывали 1М НС1. Органический слой сушили с М§§0₄, фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество очищали на картридже с силикагелем (80 г) с применением градиента МеОН/ОСМ (0-10% МеОН более 13СУ). Содержащий фракции продукт собирали и сушили ίη уасио с получением 770 мг (5К,78)-7-(6-оксо-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2она. Время удержания при ВЭЖХ = 0,74 мин (условие О); ЖХ/МС М+¹ = 286. Ή ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ 7.20-7.00 (т, 3Н), 5.49 (Ьг. 5., 1Н), 4.45-4.25 (т, 2Н), 3.59 (5, 2Н), 3.08 (ί, 1=6.8 Гц, 3Н), 2.58 (ί, 1=6.7 Гц, 2Н), 2.38 (άά, 1=13.2, 7.3 Гц, 1Н), 2.27-2.11 (т, 2Н), 2.05-1.92 (т, 2Н), 1.92-1.74 (т, 1Н).

- 27 025294

-окса-1 -азаспиро [4.4]нонан-7-ил)-3,4Промежуточное соединение 6. 6-((5К,7§)-2-оксо-3 дигидронафталин-2-ил трифторметансульфонат о

К смеси (5К,7§)-7-(6-оксо-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-она (соединение Т5, 340 мг, 1,192 ммоль) и ΌΜΡυ (0,431 мл, 3,57 ммоль) в ТНР (10 мл) при -78°С добавляли ЬЭА (1,456 мл, 2,62 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, затем добавляли 1,1,1трифтор-Ы-фенил-Ы-(трифторметил)сульфонила метансульфонамид (639 мг, 1,787 ммоль) в ТНР (10 мл). Реакционную смесь нагревали до 0°С. Через 1 ч реакцию гасили водой. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали насыщенным водным ЫаС1. Органический слой сушили с Μ§δΟ₄, фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество очищали на картридже с силикагелем (40 г) с применением градиента ЕЮАс/гексан (0-100% ЕЮАс в течение 20 мин) с получением 400 мг 6-((5К,7§)-2-оксо-3окса-1-азаспиро[4.4]нонан-7-ил)-3,4-дигидронафталин-2-ил трифторметансульфоната. Время удержания при ВЭЖХ =1,01 мин (условие О); ЖХ/МС М+¹ = 418. Ή ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 7.17-6.95 (т, 3Н), 6.74 (5, 1Н), 6.48 (5, 1Н), 4.48-4.20 (т, 2Н), 3.17-2.95 (т, 3Н), 2.81-2.60 (т, 2Н), 2.33 (бб, 6=13.3, 7.2 Гц, 1Н), 2.24-2.08 (т, 2Н), 2.05-1.74 (т, 3Н).

Промежуточное соединение 7. (5К,7К)-7-(6-оксо-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1азаспиро[4.4]нонан-2-он

Промежуточное соединение 7А. трет-Бутил-2-(4-((5К,7К)-2-оксо-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-7ил)фенил)ацетат

К раствору (5К,7К)-7-(4-бромфенил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-она (промеж. соедин. 4, 2,1 г, 7,09 ммоль) в ТНР (25,3 мл) при комнатной температуре добавляли ЫНМО5> (7,80 мл, 7,80 ммоль). Раствор перемешивали в течение 15 мин. Далее последовательно добавляли Рб₂(бЬа)з (0,195 г, 0,213 ммоль), 1,2,3,4,5-пентафенил-1'-(ди-трет-бутилфосфино)ферроцен (0,151 г, 0,213 ммоль) и (2-(трет-бутокси)-2оксоэтил)цинка(П) бромид, тетрагидрофуран (7,07 г, 21,27 ммоль). Взвесь перемешивали при 24°С в течение 2 ч. Анализ при помощи ЖХМС показывал полное использование исходного вещества. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали 1М НС1. Органический слой сушили над Μ§δΟ₄, фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество очищали на картридже с силикагелем (40 г) с применением гексана:ацетона 100:0-0:100 более 25 СУ. трет-Бутил-2-(4-((5К,7К)-2-оксо-3-окса-1азаспиро[4.4]нонан-7-ил)фенил)ацетат (2,35 г, 7,09 ммоль) выделяли. Время удержания при ВЭЖХ = 0,95 мин (условие I): ЖХ/МС М+¹ = 332. Ή ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 7.27-7.21 (т, 2Н), 7.21-7.15 (т, 2Н), 5.11 (Ьг. 5., 1Н), 4.40-4.26 (т, 2Н), 3.53 (5, 2Н), 3.22-3.01 (т, 1Н), 2.36 (бб, 1=13.2, 7.3 Гц, 1Н), 2.252.10 (т, 2Н), 2.04-1.92 (т, 2Н), 1.91-1.76 (т, 1Н), 1.47 (5, 9Н).

Промежуточное соединение 7. (5К,7К)-7-(6-оксо-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1азаспиро[4.4]нонан-2-он.

Коричневый жидкий трет-бутил-2-(4-((5К,7К)-2-оксо-3 -окса-1 -азаспиро [4.4]нонан-7 ил)фенил)ацетат (соединение Σ-7Α, 2,35 г, 7,09 ммоль) растворяли в ЭСМ (60 мл), а затем добавляли трифторуксусную кислоту (20 мл, 260 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, при этом растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное вещество разбавляли в ЭСМ (60 мл), очищали кислотной/основной экстракцией и помещали под вакуумом на 1 ч. Полученную коричневую камедь 2-(4-((5К,7К)-2-оксо-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-7-ил)фенил)уксусной кислоты (1,952 г, 7,09 ммоль) растворяли в ЭСМ (60 мл), а затем добавляли оксалилхлорид (1,862 мл, 21,27 ммоль) и ΌΜΡ (0,027 мл, 0,355 ммоль). Полученный раствор перемешивали до прекращения выделения газа (приблизительно 30 мин) при комнатной температуре. ЖХМС аликвоты, которую гасили МеОН, показывала полное расходование кислоты (КТ = 0,65 мин, условие I) и возникновение предполагаемого метилового сложного эфира из-за гашения метанола (КТ = 0,77 мин, условие I) в виде единственного продукта. Растворитель удаляли при пониженном давлении и продукт помещали под вакуумом. Коричневую камедь переносили в закупоренную пробирку с ЭСМ (60 мл) (полностью не растворялась, по- 28 025294 лучалась коричневая суспензия). Реакционную смесь охлаждали до -78°С, а затем добавляли гранулированный хлорид алюминия (2,84 г, 21,27 ммоль). Этилен барботировали через раствор в течение 7 мин и пробирку закупоривали. Образовывался осадок, и реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 15 мин, а затем оставляли достигать комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре, а затем снижали давление. Анализ ЖХМС показывал исчезновение исходного вещества и образование тетралонового продукта.

Реакционную смесь выливали на лед, разбавляли ЭСМ и перемешивали, пока таял лед. Органический слой промывали солевым раствором, сушили и концентрировали при пониженном давлении. Очисткой на силикагеле получали (5К,7К)-7-(6-оксо-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1азаспиро[4.4]нонан-2-он (1,05 г, 3,68 ммоль). Время удержания при ВЭЖХ = 0,74 мин (условие I); ЖХ/МС М+¹ =286. Ή ЯМР (400 МГц, хлороформ-й) δ 7.23-7.11 (т, 3Н), 5.68 (Ьг. 5., 1Н), 4.45-4.30 (т, 2Н), 3.59 (5, 2Н), 3.31-3.18 (т, 1Н), 3.08 (ί, 1=6.8 Гц, 2Н), 2.58 (ί, 1=6.7 Гц, 2Н), 2.42-2.39 (т, 1Н), 2.32-2.15 (т, 2Н), 2.09-1.99 (т, 1Н), 1.91-1.83 (т, 1Н), 1.82-1.72 (т, 1Н).

Промежуточное соединение 8. (1-Амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метанол

Промежуточное соединение 8А. 6-Иод-3,4-дигидронафталин-1(2Н)-он

К перемешиваемому прозрачному раствору 6-амино-3,4-дигидронафталин-1(2Н)-она (15 г, 93 ммоль) в уксусной кислоте (150 мл) и воде (150 мл) по каплям добавляли серную кислоту (5,5 мл, 101 ммоль) при 0°С. Затем по каплям добавляли раствор нитрита натрия (12,90 г, 187 ммоль) в воде (100 мл) в течение 40 мин при той же температуре. Смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин перед медленным добавлением к перемешиваемому раствору йодида натрия (55,8 г, 372 ммоль) в воде (600 мл) в течение 2 ч при 0°С. Полученную коричневую суспензию перемешивали при 0°С в течение 30 мин и при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь экстрагировали этилацетатом (400 мл, 2x100 мл). Объединенные экстракты этилацетата промывали водой (60 мл), насыщенным водным раствором №₂8₂О₃ до исчезновения коричневого цвета и насыщенным водным раствором К₃РО₄ (60 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Очисткой при помощи флешхроматографии (колонка для 330 г силикагеля, градиентное элюирование от 5 до 15% этилацетата в гексанах) получали 6-йод-3,4-дигидронафталин-1(2Н)-он (17,3 г, 63,6 ммоль) в виде твердого вещества ЖХ/МС М+¹ = 273.

Промежуточное соединение 8В. (§)-Ы-(6-Иод-3,4-дигидронафталин-1(2Н)-илиден)-2-(метоксиметил)пирролидин-1 -амин

К перемешиваемой смеси 6-йод-3,4-дигидронафталин-1(2Н)-она (соединение 1-8А, 20,90 г, 77 ммоль), моногидрата пара-толуолсульфоновой кислоты (0,584 г, 3,07 ммоль) и циклогексана (40 мл) по каплям добавляли (8)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-амин (10 г, 77 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере азота. Смесь нагревали с азеотропическим удалением воды в течение 5 ч. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (20 мл) и смешивали с насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (15 мл). Водный слой разделяли и экстрагировали этилацетатом (2x30 мл). Объединенные органические растворы сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Очисткой при помощи флеш-хроматографии (колонка для 330 г силикагеля, градиентное элюирование от 0 до 20% ЕЮЛс в гексанах) получали (8)-Ы-(6-йод-3,4-дигидронафталин-1(2Н)-илиден)-2(метоксиметил)пирролидин-1-амин (29,1 г, 76 ммоль) в виде желтой жидкости ЖХ/МС М+¹ = 385.

Промежуточное соединение 8С. (К)-2-Гексил-6-йод-3,4-дигидронафталин-1(2Н)-он

- 29 025294

К перемешиваемому раствору диизопропиламина (19,43 мл, 136 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (250 мл) по каплям добавляли раствор бутила лития (2,5М в гексанах, 39,4 мл, 98 ммоль) при 0°С в атмосфере азота. Полученный раствор перемешивали при той же температуре в течение 15 мин перед добавлением по каплям раствора (8)-Ы-(6-йод-3 ,4-дигидронафталин-1 (2Н)-илиден)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-амина (соединение Е8В, 29,1 г, 76 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (100 мл). Реакционный раствор перемешивали при 0°С в течение 2 ч. По каплям добавляли раствор 1-йодгексана (22,35 мл, 151 ммоль) в тетрагидрофуране (50 мл) при -78°С и смесь перемешивали при той же температуре в течение 2 ч. Температуру повышали до комнатной температуры в течение 1,5 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (50 мл) и водой (50 мл). Смесь экстрагировали гексанами (200 мл) и этилацетатом (3x50 мл). Объединенные экстракты сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением масла. Масло растворяли в ТНР (200 мл). По каплям добавляли раствор хлорида меди дигидрата (52 г) в воде (220 мл) при 0°С и смесь энергично перемешивали при комнатной температуре всю ночь. Водный раствор аммиака добавляли для повышения значения рН приблизительно до 9. Смесь экстрагировали гексаном (100 мл) и диэтиловым эфиром (2x100 мл). Объединенные экстракты сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали. Очисткой при помощи флеш-хроматографии (колонка для 330 г силикагеля, градиентное элюирование от 0 до 15% ЕЮАс в гексанах) получали (К)-2-гексил-6-йод-3,4-дигидронафталин-1(2Н)-он (21,6 г, 60,6 ммоль) в виде белого твердого вещества, содержащего некоторое количество (8) изомера, который удаляли на следующей стадии. ЖХ/МС М+¹ = 357.

Промежуточное соединение 8Ό. (К)-2-Гексил-6-йод-1,2,3,4-тетрагидронафталин

К перемешиваемому раствору (К)-2-гексил-6-йод-3,4-дигидронафталин-1(2Н)-она (соединение Е8С, 21,6 г, 60,6 ммоль) в дихлорметане (10 мл) и 100% ЕЮН (100 мл) порционно добавляли боргидрид натрия (4,59 г, 121 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч перед гашением медленным добавлением ацетона (охлажденный на водной бане). Смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток смешивали с насыщенным водным раствором хлорида аммония (100 мл) и водой (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл, 2x50 мл). Объединенные экстракты этилацетата сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением масла. Масло растворяли в триэтилсилане (70 мл, 438 ммоль). Добавляли ТРА (100 мл, 1298 ммоль) при энергичном перемешивании. Смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 2,5 ч. После добавления воды (150 мл) смесь экстрагировали гексанами (100 мл, 2x50 мл). Объединенные экстракты промывали водой (50 мл), а затем насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали с получением желтой жидкости. Очисткой при помощи флеш-хроматографии (колонка для 330 г силикагеля, градиентное элюирование от 0 до 12% ЕЮАс в гексанах) получали (К)-2-гексил-6-йод-1,2,3,4-тетрагидронафталин (18,4 г, 53,8 ммоль) в виде бесцветной жидкости. ¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ 7.41 (8, 1Н), 7.38 (άά, 1=7.9, 1.8 Гц, 1Н), 6.79 (ά, 1=8.1 Гц, 1Н), 2.82-2.71 (т, 3Н), 2.31 (άά, 1=16.5, 10.6 Гц, 1Н), 1.93-1.85 (т, 1Н), 1.72-1.60 (т, 1Н), 1.41-1.24 (т, 11Н), 0.92-0.85 (т, 3Н). Разделением при помощи хиральной СФХ (СШКАЬРАК® А8-Н 25x3,0 см, 5 мкм СО₂/МеОН = 95/5, 180 мл/мин, 230 нм) получали (К)-2-гексил-6-йод-1,2,3,4тетрагидронафталин (11,8 г, РК2) и его (8)-изомер (1,4 г, РК1) в виде жидкостей.

Промежуточное соединение 8Е. 3-((К)-6-Гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентанон

Газообразный азот барботировали через смесь (К)-2-гексил-6-йод-1,2,3,4-тетрагидронафталина (соединение N80, 11,8 г, 34,5 ммоль), тетрабутиламмоний хлорида (9,58 г, 34,5 ммоль), ацетата калия (10,15 г, 103 ммоль), ацетата палладия (II) (0,774 г, 3,45 ммоль) и безводного ΌΜΕ (100 мл) в течение 3 мин перед добавлением циклопент-2-енола (6,8 г, 81 ммоль, полученного согласно Ьагоск К.С. е! а1., ТеКаМгоп, 50(2):305-321 (1994)). Газообразный азот барботировали через раствор в течение дополнительных 2 мин. Смесь перемешивали при 80°С в атмосфере азота в течение 2,5 ч, а затем концентрировали с удалением ΌΜΕ. Остаток смешивали с водой (150 мл) и экстрагировали этилацетатом (4x50 мл). Объединенные растворы этилацетата промывали водой (30 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали через прокладку силикагеля и концентрировали при пониженном давлении. Очисткой при помощи флеш-хроматографии (колонка для 220 г силикагеля, градиентное элюирование от 5 до 50% этилацетата в гексанах) получали 3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентанон (5,96 г, 19,97 ммоль) ЖХ/МС М+¹ = 299.

- 30 025294

Промежуточное соединение 8Р. Метил-1-амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2ил)циклопентанкарбоксилат

Смесь 3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентанона (соединение Р8Е, 5,96 г, 19,97 ммоль), хлорида аммония (5,34 г, 100 ммоль), цианида натрия (4,89 г, 100 ммоль), 7М метанольного раствора аммиака (28,5 мл, 200 ммоль) и дихлорметана (15 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 суток. Добавляли дополнительное количество 7М метанольного раствора аммиака (15 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 суток, а затем концентрировали. Остаток разделяли между этилацетатом (70 мл) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (100 мл). Водный слой разделяли и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные растворы этилацетата сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением 1-амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентанкарбонитрила в виде полутвердого вещества. Полутвердое вещество смешивали со смесью концентрированной хлористоводородной кислоты (56 мл, 1843 ммоль), воды (28 мл, 1554 ммоль), уксусной кислоты (35 мл) и диоксана (35 мл). Смесь перемешивали при 100°С в атмосфере азота в течение 10 ч и затем концентрировали с получением твердого вещества. Твердое вещество растворяли в метаноле (20 мл) и смешивали с толуолом (20 мл). Смесь концентрировали досуха. Эту процедуру сушки повторяли еще раз с получением сухого твердого вещества. Твердое вещество растворяли в безводном метаноле (300 мл). По каплям добавляли тионилхлорид (11,66 мл, 160 ммоль) при 0°С в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 7 ч перед концентрированием. Остаток делали щелочным при помощи насыщенного раствора водного бакарбоната натрия (100 мл) и некоторого количества твердого карбоната калия и экстрагировали этилацетатом (100 мл, 3x30 мл). Объединенные экстракты этилацетата сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Очисткой при помощи флешхроматографии (колонка для 80 г силикагеля, градиентное элюирование от 20 до 100% этилацетата в гексанах) получали метил-1-амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентанкарбоксилат (5,7 г, 15,94 ммоль) в виде жидкости. ЖХ/МС М'¹ = 358.

Промежуточное соединение 8. Метил-1-амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2ил)циклопентанкарбоксилат (соединение Р8Р, 5,7 г, 16 ммоль) растворяли в ЕЮН (60 мл) и метиленхлориде (15 мл). Добавляли боргидрид натрия (2,5 г, 67 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь. Медленно добавляли хлористоводородную кислоту (6н., водная, 40 мл) при 0°С для получения значения рН приблизительно 1. Затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 60 мин, добавляли гидроксид натрия (10 г в 20 мл воды) для получения значения рН приблизительно 12. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 мин перед концентрированием с удалением органических растворителей. Водный остаток разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали ЕЮАс (100 мл, 2x50 мл). Объединенные экстракты этилацетата сушили над безводным сульфатом натрия, обесцвечивали при помощи древесного угля, фильтровали через прокладку СЕЫТЕ® и концентрировали при пониженном давлении с получением (1-амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2ил)циклопентил)метанола (5,0 г, 15 ммоль) в виде белого твердого вещества.

Примеры 1 и 2 и соединения 3 и 4.

Промежуточное соединение 8 разделяли на 3 фракции: Р1 (пик 1), Р2 (пик 2 и пик 3), Р3 (пик 4) с применением хиральной СФХ (колонка: СШКАЬРАК® АЭ-Н 25x3 см, 5 мкм; подвижная фаза: СО₂/(МеОН+0,1% ЭЕА) =88/12; скорость потока: 200 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм; температура колонки: 35°С). Вторую фракцию (Р2) снова разделяли с применением хиральной СФХ (колонка: СШКАЬРАК® А8-Н 25x3 см, 5 мкм; подвижная фаза:СО₂/[МеОН-МеСМ (1:1)+0,5% ЭЕА| =88/12; скорость потока: 180 мл/мин; длина волны детектора: 220 нм; температура колонки: 35°С) с получением пика 2 и пика 3. Все четыре изомера были белыми твердыми веществами с ЖХ/МС М+¹ = 330.

Пример 1 (пик 2). ^!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-й) δ 7.07-6.95 (ш, 3Н), 3.54-3.44 (ш, 2Н), 3.34 (й, 1=11.0, 7.0 Гц, 1Н), 2.92-2.74 (ш, 3Н), 2.39 (йй, 1=16.4, 10.7 Гц, 1Н), 2.29-2.14 (ш, 1Н), 2.08-1.84 (ш, 3Н), 1.76-1.65 (ш, 3Н), 1.46-1.26 (ш, 12Н), 0.99-0.85 (ш, 3Н).

Пример 2 (пик 4). ^!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-й) δ 7.06-6.92 (ш, 3Н), 3.52-3.37 (ш, 2Н), 3.09-2.93 (ш, 1Н), 2.88-2.72 (ш, 3Н), 2.35 (йй, 1=15.8, 10.6 Гц, 1Н), 2.26 (йй, 1=12.7, 7.8 Гц, 1Н), 2.11-2.00 (ш, 1Н), 1.97-1.84 (ш, 2Н), 1.78-1.60 (ш, 3Н), 1.43-1.22 (ш, 12Н), 0.95-0.83 (ш, 3Н).

Соединение 3 (пик 1). ^!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-й) δ 7.03-6.92 (ш, 3Н), 3.46 (в, 2Н), 3.39-3.24 (ш, 1Н), 2.88-2.72 (ш, 3Н), 2.36 (йй, 1=16.3, 10.8 Гц, 1Н), 2.27-2.13 (ш, 1Н), 2.08-1.82 (ш, 3Н), 1.76-1.63 (ш, 3Н), 1.43-1.20 (ш, 12Н), 0.94-0.85 (ш, 3Н).

Соединение 4 (пик 3). ^!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-й) δ 7.02-6.92 (ш, 3Н), 3.51-3.37 (ш, 2Н), 3.082.94 (ш, 1Н), 2.87-2.71 (ш, 3Н), 2.35 (йй, 1=16.2, 11.1 Гц, 1Н), 2.25 (йй, 1=13.1, 7.8 Гц, 1Н), 2.12-1.97 (ш,

- 31 025294

1Н), 1.97-1.83 (т, 2Н), 1.81-1.59 (т, 3Н), 1.43-1.21 (т, 12Н), 0.96-0.74 (т, 3Н).

Соединения 5-8 получали согласно общему синтезу и процедурам разделения для промежуточного соединения 8, примеры 1-2 и соединения 3-4, с применением (8)-энантиомера (РК1) йодида промежуточного соединения Ι-8Ό. Все четыре изомера (соединения 5-8) обладали М\У = 329,5; ЖХ/МС М+¹ = 330; условие ВЭЖХ: С.

Таблица 1

№ примера	Структура	Название	ВЭЖХ КТ (мин)
1	ГУ™² ^НзСэ XX “	((1К,ЗК)-1-амино-3-((К)-6гексил-5,6,7,8тетрагидронафталин-2-ил) циклопентил)метанол	3,78
2	ΝΗ₂ ^нзсэ 1 II Э он	((1К,35)-1-амино-3-((К)-6гексил-5,6,7,8тетрагидронафталин- 2-ил) циклопентил)метанол	3,78

Таблица 2

№ соединения	Структура	Название	Время удерж, при ВЭЖХ (мин)
3	г-у <ΝΗ₂ Н₃С 1 II X он	((15,35)-1-амино-3-((К)-6гексил-5,6,7,8тетрагидронафталин-2-ил) циклопентил )метанол	3,78
4	Г\Т^Н2 X?	((15,ЗК)-1-амино-3-((К)-6гексил-5.6,7,8тетрагидронафталин-2-ил) циклопентил )метанол	3,78
5	г^\ ₄ΝΗ₂ ^НзСЭ ) АД ^он	((15,35)-1-амино-3-((5)-6гексил-5,6,7,8тетрагидронафталин-2-ил) циклопентил )метанол	3,78
6	ГУ™² X	((1 К,ЗК)-1 -амино-3 -((8)-6гексил-5,6,7,8тетрагидронафталин-2-ил) циклопентил)метанол	3,78
7	ΓΤ^ΝΗ2 X	((15,ЗК)-1-амино-3-((5)-6- гексил-5,6,7,8- тетрагидронафталин-2-ил) циклопентил)метанол	3,77
8	^НзС> 7 кк ^он	((1К,3$)-1-амино-3-((5)-б- гексил-5,6,7,8- тетрагидронафталин-2-ил) циклопентил)метанол	3,77

Альтернативное получение соединения согласно примеру 2.

Получение соединения 2А. (5К,78)-7-(6-Гексил-7,8-дигидронафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро [4.4]нонан-2-он

К смеси 6-((5К,78)-2-оксо-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-7-ил)-3,4-дигидронафталин-2-ил трифторметансульфоната (промеж. соедин. 6, 1 г, 2,396 ммоль) и ЫМР (2,306 мл, 23,96 ммоль) в ТНР (20 мл) при

-40°С добавляли раствор бис(триметилсилил)амида лития в ТНР (2,396 мл, 2,396 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин и затем добавляли ацетилацетонат железа (0,042 г, 0,120 ммоль) и гексилмагния бромид в эфире (2,396 мл, 4,79 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин и гасили водой. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали 1М НС1. Органический слой сушили с Мд§О₄, фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество очищали на картридже с силикагелем (40 г) с применением градиента ЕЮАс/гексан (0-100% ЕЮАс более 12 СУ) с получением 662 мг (5К,78)-7-(6-гексил-7,8-дигидронафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-она в виде белого твердого вещества. Время удержания при ВЭЖХ = 1,28 мин (условие С); ЖХ/МС М+¹ = 354. ¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 7.03-6.88 (т, 3Н), 6.21 (5, 1Н), 5.16 (Ьг. 5., 1Н), 4.44-4.15 (т, 2Н), 3.13-2.96 (т,

- 32 025294

1Н), 2.80 (ΐ, 1=8.0 Гц, 2Н), 2.47-2.08 (т, 6Н), 2.05-1.93 (т, 2Н), 1.90-1.73 (т, 1Н), 1.68-1.43 (т, 4Н), 1.411.22 (т, 5Н), 1.01-0.83 (т, 3Н).

Получение соединение 2В. (5К,7§)-7-((К)-6-Гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1азаспиро[4.4]нонан-2-он

Смесь (5К,7§)-7-(6-гексил-7,8-дигидронафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-она (соединение 2А, 760 мг, 2,15 ммоль) и (-)-2,3-бис[(2К,5К)-2,5-диметилфосфоланил]-Н-[3,5-бис(трифторметил)фенил|\1алеици\1ид(1.5-циклооктадиен)родия(4) тетрафторбората (273 мг, 0,43 ммоль) в МеОН (27 мл) гидрировали при 850 ΡΜ в течение 1000 мин с применением 100 мл НЕЬ автоклава. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали ίη νасиο. Неочищенное вещество очищали на картридже с силикагелем (40 г) с применением градиента ЕЮАс/гексана (0-100% ЕЮАс в течение 20 мин) с получением 640 мг (5К,7§)-7-(6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-она при соотношении 1:2 двух изомеров. Требуемый основной изомер отделяли с применением колонки СЖКАБТАК® А8-Н при условиях СФХ (35% МеОН в СО₂). Время удержания = 5,14 мин. Восстанавливали 400 мг (5К,7§)-7-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-она. ¹Н ЯМР (400 МГц, метанол-а₄) δ 7.02-6.91 (т, 3Н), 4.47-4.20 (т, 2Н), 3.02 (й, 1=11.0, 7.2 Гц, 1Н), 2.87-2.74 (т, 3Н), 2.41-2.24 (т, 2Н), 2.17-2.03 (т, 2Н), 2.00-1.89 (т, 3Н), 1.86-1.74 (т, 1Н), 1.73-1.61 (т, 1Н), 1.51-1.28 (т, 11Н), 0.99-0.88 (т, 3Н).

Альтернативное получение соединения 2В.

Смесь (5К,7§)-7-(6-гексил-7,8-дигидронафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-она (соединение 2А, 2,1 г, 5,94 ммоль) в ИСМ (10 мл) добавляли по каплям к раствору ((1К,2§,3К,5К)-2,6,6триметилбицикло[3.1.1]гептан-3-ил)борана в ИСМ (30 мл) при -35°С в атмосфере азота. (Борановый реагент получали следующим образом: к смеси §-альпин-борамина (8,4 г, 20,18 ммоль) в ТНР (35 мл) добавляли эфират ВР₃ (5,11 мл, 40,4ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч, фильтровали в атмосфере азота, а фильтрационный осадок промывали холодным ТНР (2x6 мл). Фильтрат и промывки объединяли и концентрировали под вакуумом. К остатку добавляли ИСМ (20 мл) и раствор снова концентрировали. Полученный реагент повторно растворяли в ИСМ (30 мл) и использовали непосредственно на стадии гидроборирования). После перемешивания при от -35 до -30°С в течение 4 ч и при от -25 до -20°С в течение 2 ч добавляли МеОН (3,6 мл) и реакционную смесь перемешивали при -10°С в течение 10 мин и при 0°С в течение 10 мин. Смесь разбавляли ТНР (25 мл), затем по каплям добавляли раствор №ЮН (6н., 9,9 мл, 59,4 ммоль), а затем Н₂О₂ (30%, 6,07 мл, 59,4 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. К смеси добавляли ИСМ (100 мл) и воду (50 мл). Весь раствор фильтровали через прокладку СЕЫТЕ® и фильтрационный осадок промывали ИСМ. Два слоя разделяли, водный слой экстрагировали ИСМ (50 мл), который объединяли с органическим слоем. Объединенные органические слои промывали водой (100 мл) и солевым раствором (100 мл), сушили над безводным №₂8О₄ и концентрировали ίη νасиο. Неочищенное вещество очищали на картридже с силикагелем (40 г) с применением градиента ЕЮАс/гексан (0-50% ЕЮАс в течение 55 мин) с получением 1,9 г (86%) (5К,7§)-7-(6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1азаспиро[4.4]нонан-2-она в соотношении 8:1 двух изомеров. Смесь переносили на следующую стадию без разделения диастереомеров.

К (5К,7§)-7-(6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-ону (3,2 г, 8,61 ммоль) в МеОН (30 мл) добавляли Ρά/С (10%, 1,1 г). К реакционному сосуду применяли низкий вакуум с последующим обратным заполнением водородом из баллона с водородом. После перемешивания при комнатной температуре для растворения осадка в течение 6 ч добавляли ЕЮАс (20 мл). К реакционному сосуду применяли низкий вакуум с последующим обратным заполнением водородом из баллона с водородом и содержимое перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь фильтровали через прокладку СЕЫТЕ® и фильтрационный осадок промывали ЕЮАс, ИСМ, МеОН и ЕЮАс. Объединенные растворители концентрировали ίη νасиο с получением неочищенного вещества (3,06 г) в виде диастереомерной смеси 8:1. Основной изомер отделяли с применением колонки СНIКА^ΡАК® А8-Н при условиях СФХ (35% МеОН в СО₂). Время удержания = 4,64 мин. Восстанавливали 2,35 г (77%) (5К,7§)-7-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-она.

Пример 2.

К смеси (5К,7§)-7-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2она (400 мг, 1,125 ммоль) в диоксане (30 мл) добавляли водный №ЮН (1 н, 20 мл). Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 3 суток, охлаждали до комнатной температуры, разбавляли этилацетатом и промывали водой. Органический слой сушили с Мд§О₄, фильтровали и концентрировали. Неочищен- 33 025294 ное вещество очищали на картридже с силикагелем (24 г) с применением 20% (2 н ИН₃/МеОН) с градиентом ЭСМ/ЭСМ (0-75% 20% (2н. \Н_;/МеОН) в ЭСМ более 13 СУ) с получением 290 мг ((1К,38)-1-амино-3((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метанола. Время удержания при ВЭЖХ = 10,09 мин (условие Н); ЖХ/МС М+¹ = 330. Ή ЯМР (400 МГц, метанол-й₄) δ 7.03-6.91 (т, 3Н), 3.54-3.41 (т, 2Н), 3.01 (й, 1=11.1, 7.2 Гц, 1Н), 2.87-2.69 (т, 3Н), 2.34 (άά, 1=16.2, 10.5 Гц, 1Н), 2.20 (άά, 1=13.0, 7.5 Гц, 1Н), 2.07-1.84 (т, 3Н), 1.83-1.60 (т, 3Н), 1.60-1.48 (т, 1Н), 1.47-1.25 (т, 11Н), 1.00-0.88 (т, 3Н).

Соединение согласно примеру 2, свободное основание, форма N-1.

Соединение согласно примеру 2, свободное основание, форму N-1 получали при помощи приготовления базового раствора, содержащего 385 мг соединения согласно примеру 2, растворенного в смеси 18 мл ТНР и 1,25 мл Н₂О (20 мг/мл). Далее 52 мкл базового раствора выпаривали досуха. К сухому веществу добавляли 52 мкл раствора этанол:гептан в соотношении 50:50. Полученный раствор выпаривали с получением листов кристаллического вещества.

Соединение согласно примеру 2, моно-НС1 соль, моногидрат, форма Н-1.

Моногидрат, моно-НС1 соль соединения согласно примеру 2, форму Н-1 получали при помощи приготовления водного метанольного (200 мкл) раствора 50:50, содержащего 3,2 мг соединения согласно примеру 2. Далее по каплям добавляли 400 мкл 0,025М водного раствора НС1 при перемешивании. Полученный раствор выпаривали с получением листов кристаллического вещества.

Соединение согласно примеру 2, моно-НС1 соль, соль, форма Н-2.

Моногидрат, моно-НС1 соль соединения согласно примеру 2, форму Н-2 получали при помощи приготовления водного раствора ТНР (200 мкл) 50:50, содержащего 3,2 мг соединения согласно примеру 2. Далее по каплям добавляли 400 мкл 0,025М водного раствора НС1 при перемешивании. Раствор затем выпаривали с получением листов моногидрата формы Н-2 моно-НС1 соли соединения согласно примеру 2.

Соединение согласно примеру 2, моно-НС1 соль, форма N-3.

Моно-НС1 соль соединения согласно примеру 2, форму N-3 получали при помощи приготовления 200 мкл раствора изопропилового спирта, содержащего 3,2 мг соединения согласно примеру 2. Далее по каплям добавляли 400 мкл 0,025М спиртового раствора НС1 при перемешивании. Раствор выпаривали с получением листов N-3 формы моно-НС1 соли соединения согласно примеру 2.

Соединение согласно примеру 2, моно-НС1 соль, форма N-4.

Моно-НС1 соль соединения согласно примеру 2, форму N-3 получали при помощи приготовления 200 мкл раствора 50:50 метанола/ТНР, содержащего 3,2 мг соединения согласно примеру 2. Далее по каплям добавляли 400 мкл 0,025М спиртового раствора НС1 при перемешивании. Полученный раствор выпаривали с получением листов N-4 формы моно-НС1 соли соединения согласно примеру 2.

Соединение согласно примеру 2, моногидрат, соль геми-Ь-яблочной кислоты, форма Н-1.

Моногидрат, соль геми-Ь-яблочной кислоты, форму Н-1 получали при помощи приготовления 200 мкл водного ТНР раствора 50:50, содержащего 3,2 мг соединения согласно примеру. Далее по каплям добавляли 240 мкл 0,042М спиртового раствора Ь-яблочной кислоты при перемешивании. Полученный раствор выпаривали с получением листов Н-1 формы соли геми-Ь-яблочной кислоты соединения согласно примеру 2.

Соединение согласно примеру 2, моногидрат, соль геми-малоновой кислоты, форма Н-1.

Моногидрат, соль геми-малоновой кислоты, форму Н-1 получали при помощи приготовления 200 мкл водного ТНР раствора 50:50, содержащего 3,2 мг соединения согласно примеру. Далее по каплям добавляли 193 мкл 0,052М спиртового раствора малоновой кислоты при перемешивании. Полученный раствор выпаривали с получением листов Н-1 формы соли геми-малоновой кислоты соединения согласно примеру 2.

Соединение согласно примеру 2, 1/3-гидрат, соль фосфорной кислоты, форма Н.33-1.

1/3-гидрат, соль фосфорной кислоты, форму Н.33-1 получали при помощи приготовления 200 мкл водного метанольного раствора 50:50, содержащего 3,2 мг соединения согласно примеру. Далее по каплям добавляли 136 мкл 0,073М спиртового раствора фосфорной кислоты при перемешивании. Полученный раствор выпаривали с получением листов Н.33-1 формы соли фосфорной кислоты соединения согласно примеру 2.

Соединение согласно примеру 2, соль К-(+)-миндальной кислоты, форма N-1. Соль К-(+)миндальной кислоты, форму N-1 получали добавлением соединения согласно примеру 2 и эквимолярного количества К-(+)-миндальной кислоты к смеси метанола и ацетонитрила. Раствор выпаривали с получением листов N-1 формы соли моно-К-(+)-миндальной кислоты соединения согласно примеру 2.

Пример 9. ((1К,3К)-1-амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метилдигидрофосфат

К перемешиваемому раствору ((1К,3К)-1-амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2- 34 025294 ил)циклопентил)метанола (соединение согласно примеру 1, 10 мг, 0,030 ммоль) в безводном ацетонитриле (1 мл) при 0°С добавляли пирофосфорилхлорид (0,042 мл, 0,303 ммоль) Полученный прозрачный раствор перемешивали при той же температуре в течение 5 мин и при к.т. всю ночь После добавления воды (0,4 мл) смесь перемешивали при к.т. в течение 1 ч Очисткой с применением обращенно-фазовой ВЭЖХ (Ьииа Ах1а 5μ с 18 30x100 мм, 10 мин градиент от 40 до 100% растворителя В, растворитель А 0,1% ТРА в воде, растворитель В 0,1% ТРА в МеСИ), концентрированием и лиофилизацией получали ((1К,3К)-1амино-3-((К)-б-гексил-5,б,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метилдигидрофосфат (2 мг, 4,15 мкмоль, выход 13,68%) в виде белого твердого вещества. Время удержания при ВЭЖХ = 3,94 мин (условие С), ЖХ/МС М+¹ = 410. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-б₄ + КОН) δ б 97-6.87 (т, 3Н), 3.77-3.71 (т, 1Н), 3.71-3.66 (т, 1Н), 2.83-2.70 (т, 3Н), 2.32 (бб, 6=16 2, 10 7 Гц, 1Н), 2 14-1.98 (т, 2Н), 1.96-1.83 (т, 2Н), 1.74-1.60 (т, 3Н), 1.59-1.49 (т, 1Н), 1.45-1.26 (т, 11Н), 0.94-0.87 (т, 3Н), один протон под пиком метанольного растворителя (~3,3 ррт).

Пример 10. ((1К,3§)-1-амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метилдигидрофосфат

Смесь пентаоксида фосфора (150 мг, 0,528 ммоль) и 85% фосфорной кислоты (0,15 мл, 10,01 мкмоль) перемешивали при 100°С в атмосфере азота в течение 1 ч перед добавлением ((1К,3§)-1-амино3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метанола (соединение согласно примеру 1, 6 мг, 0,018 ммоль). Раствор перемешивали при той же температуре в течение 3 ч. При комнатной температуре добавляли воду (0,5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Очисткой с применением обращенно-фазовой ВЭЖХ (РНЕИОМЕИЕХ® Ьииа Ах1а 5μ с 18 30х 100 мм, анализ 10 мин, растворитель А: 10% МеОН: 90% Н₂О: 0,1% ТРА, растворитель В: 90% МеОН, 10% Н₂О, 0,1% ТРА), концентрированием и лиофилизацией получали ((1К,3§)-1-амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)метилдигидрофосфат (4 мг, 9,38 мкмоль) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС М+¹ = 410. Время удержания при ВЭЖХ = 3,96 мин (условие С).'Н ЯМР (400 МГц, метанол-б₄+СБС1₃) δ 7.10-6.83 (т, 3Н), 4.06-3.77 (т, 2Н), 3.20-3.06 (т, 1Н), 2.85-2.74 (т, 2Н), 2.48 (бб, 6=12.9, 6.9 Гц, 1Н), 2.40-2.28 (т, 1Н), 2.19-2.08 (т, 1Н), 2.05-1.90 (т, 4Н), 1.80-1.62 (т, 2Н), 1.48-1.22 (т, 12Н), 0.95-0.86 (т, 3Н).

Альтернативное получение соединения согласно примеру 10.

Альтернативное получение соединения 10А. трет-Бутил-((1К,3§)-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8тетрагидронафталин-2-ил)-1 -(гидроксиметил)циклопентил)карбамат

К перемешиваемому раствору ((1К,3§)-1-амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2ил)циклопентил)метанола (соединение согласно примеру 2, 270 мг, 0,819 ммоль) в безводном дихлорметане (6 мл) добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (536 мг, 2,458 ммоль). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь концентрировали. Очисткой при помощи флешхроматографии (колонка для 24 г силикагеля, градиентное элюирование от 10 до 60% этилацетата в гексанах) получали трет-бутил-((1К,3§)-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)-1(гидроксиметил)циклопентил)карбамат (337 мг, 0,784 ммоль, выход 96%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС М⁺¹ = 430.

Альтернативное получение соединения 10В. трет-Бутил-((1К,3§)-1-(((бис(2-(триметилсилил) этокси)фосфорил)окси)метил)-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)карбамат

К перемешиваемому раствору трет-бутил-((1К,3§)-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2ил)-1 -(гидроксиметил)циклопентил)карбамата (соединение получения 10А, 336 мг, 0,782 ммоль) в безводном метиленхлориде (7 мл) добавляли одну порцию бис(2-(триметилсилил)этил)диизопропилфосфорамидита (858 мг, 2,346 ммоль) при 0°С в атмосфере азота. Далее добавляли 1,2,4-1Н-триазол (162

- 35 025294 мг, 2,346 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 18 ч. Раствор охлаждали до 0°С перед добавлением пероксида водорода (0,781 мл, 7,82 ммоль). Смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин при комнатной температуре в течение 1 ч перед добавлением метанола (3 мл), чтобы сделать смесь гомогенным раствором. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Для гашения реакции добавляли насыщенный водный раствор тиосульфата натрия (5 мл). Смесь концентрировали при пониженном давлении и экстрагировали этилацетатом (3x4 мл). Объединенные органические растворы сушили (№₂8О₄) и концентрировали при пониженном давлении. Очисткой при помощи флешхроматографии (колонка для 24 г силикагеля, градиентное элюирование от 5 до 25% этилацетата в гексанах) получали трет-бутил-((1К,38)-1-(((бис(2-(триметилсилил)этокси)фосфорил)окси)метил)-3 -((К)-6гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)карбамат (514 мг, 0,724 ммоль) в виде жидкости.

Пример 10.

К перемешиваемому раствору трет-бутил-((1К,38)-1-(((бис(2-(триметилсилил)этокси)фосфорил)окси)метил)-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ил)циклопентил)карбамата (соединение получения 10В, 500 мг, 0,704 ммоль) в дихлорметане (6 мл) медленно добавляли ТРА (6 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч перед добавлением 90 мл гептанов. Раствор концентрировали при пониженном давлении. Далее добавляли 70 мл метанола к остатку твердого вещества, а затем 1н. водн. №ЮН (4 мл). Затем добавляли НОАс (0,4 мл) при 60°С для подкисления раствора до значения рН 4. Смесь твердого вещества и жидкости перемешивали при 60°С в течение 1 ч. Твердое вещество разделяли, промывали метанолом, водой, метанолом, этилацетатом и метанолом. При помощи лиофилизации получали ((1К,38)-1-амино-3-((К)-6-гексил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2ил)циклопентил)метилдигидрофосфат (257 мг, 0,619 ммоль, выход 88%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС М+¹ = 410. Ή ЯМР (400 МГц, метанол-й₄)(+КОН) δ 7.00-6.86 (т, 3Н), 3.78-3.62 (т, 2Н), 3.092.97 (т, 1Н), 2.84-2.67 (т, 3Н), 2.38-2.22 (т, 2Н), 2.03-1.74 (т, 4Н), 1.73-1.60 (т, 2Н), 1.50 (ί, 1=12.3 Гц, 1Н), 1.44-1.27 (т, 11Н), 0.95-0.86 (т, 3Н).

Сравнительное соединение 11. (1К,3К)-1-амино-3-(6-(пентилокси)нафталин-2-ил)циклопентил)метанол

Сравнительное соединение 11 было раскрыто в \УО 2008/079382, пример Ц.1.

Промежуточное соединение 11А. (5К,7К)-7-(6-(пентилокси)нафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-он

Смесь 1-пентанола (6,13 мл, 56,4 ммоль), моногидрата пара-толуолсульфоновой кислоты (4,60 мг, 0,024 ммоль) и триметоксиметана (0,353 мл, 3,22 ммоль) перемешивали при 100°С в течение 3 ч с медленной струей воздуха, протекающей через смесь с удалением метанола и некоторого количества пентанола. Полученную остаточную жидкость смешивали с (5К,7К)-7-(6-оксо-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-оном (промеж. соедин. 7, 230 мг, 0,806 ммоль) и перемешивали при 100°С в атмосфере азота в течение 2,5 ч. Раствор оставляли охлаждаться до комнатной температуры перед добавлением палладиевого катализатора на углеродном носителе (172 мг, 0,081 ммоль), а затем этилацетата (4 мл). Смесь оставляли перемешиваться под давлением баллона с водородом при комнатной температуре всю ночь. Полученные смеси фильтровали через мембранный фильтр и фильтрат концентрировали. Очисткой при помощи флеш-хроматографии (колонка для 24 г силикагеля, 0-70% этилацетата в гексанах) получали 180 мг вещества, которое требовало дополнительной очистки. Разделением при помощи сверхкритической флюидной хроматографии получали основную фракцию, определенную при помощи УФ-анализа как (5К,7К)-7-(6-(пентилокси)нафталин-2-ил)-3-окса-1-азаспиро[4.4]нонан-2-он (36 мг), в виде твердого вещества. Устройство: аналитическое устройство ТЬаг 350 ТЬаг 8РС-М8; условия: аналитические условия: аналитическая колонка: АЭ-Н (0,46x25 см, 5 мкм); давление ВРК: 100 бар; температура: 45°С; скорость потока: 3,0 мл/мин; подвижная фаза: СО₂/МеОН (70/30); длина волны детектора: УФ 200-400 нм. Подготовительные условия: препаративная колонка: АЭ-Н (3x25 см, 5 мкм); давление ВРК: 100 бар; температура: 35°С; скорость потока: 120 мл/мин; подвижная фаза: СО₂/МеОН (70/30); длина волны детектора: 220 нм; программа разделения: режим многократного ввода; вводимый объем: 2,5 мл с циклом обработки 480 с (время удерж. при аналитической СФХ = 11,68 мин, чистота >99,5%) Время удержания при ВЭЖХ = 1,11 мин (условие С); ЖХ/МС М+¹ = 354. ¹Н ЯМР (400 МГц, хлороформ- 36 025294

б) δ 7.68 (б, 1=8.4 Гц, 2Н), 7.55 (5, 1Н), 7.30 (5, 1Н), 7.21-7.04 (т, 2Н), 6.48 (Ьг. 5., 1Н), 4.50-4.28 (т, 2Н), 4.07 (ί, 1=6.6 Гц, 2Н), 3.49-3.31 (т, 1Н), 2.46 (бб, 1=13.3, 7.6 Гц, 1Н), 2.39-2.24 (т, 1Н), 2.24-2.12 (т, 1Н), 2.12-2.00 (т, 1Н), 2.00-1.90 (т, 1Н), 1.90-1.76 (т, 3Н), 1.58-1.30 (т, 4Н), 0.96 (ί, 1=7.0 Гц, 3Н).

Сравнительное соединение 11. К раствору (5К,7К)-7-(6-(пентилокси)нафталин-2-ил)-3-окса-1азаспиро[4.4]нонан-2-она (36 мг, 0,102 ммоль) в диоксане (2 мл) и воде (0,8 мл) добавляли ЫОН (36,6 мг, 1,528 ммоль). Раствор нагревали до 90°С и оставляли перемешиваться в течение 15 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали в этилацетат и промывали водой. Неочищенное вещество затем очищали при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ [колонка: Ьипа Ах1а 30x100 мм; время градиентного элюирования: 10 мин; скорость потока = 40 мл/мин; растворитель А = 10% МеОН-90%, вода-0,1% ТРА; растворитель В = 90% МеОН-10% вода-0,1% ТРА; начало с % растворителя В = 20; конец с % растворителя В = 100].

Содержащий фракции продукт собирали и сушили под высоким вакуумом с получением ((1К,3К)-1амино-3-(6-(пентилокси)нафталин-2-ил)циклопентил)метанола, ТРА (31 мг) в виде твердого вещества. Время удержания при ВЭЖХ = 0,90 мин (условие О); ЖХ/МС М+¹ = 328. ¹Н ЯМР (400 МГц, метанол-б₄) δ 7.75-7.66 (т, 2Н), 7.66-7.59 (т, 1Н), 7.40-7.33 (т, 1Н), 7.17 (б, 1=2.6 Гц, 1Н), 7.14-7.08 (т, 1Н), 4.07 (ί, 1=6.5 Гц, 2Н), 3.74-3.60 (т, 2Н), 3.59-3.41 (т, 1Н), 2.39-2.22 (т, 3Н), 2.04-1.80 (т, 5Н), 1.55-1.34 (т, 4Н), 1.01-0.89 (т, 3Н).

Биологические анализы.

Анализ фосфорилирования в цельной крови мышей (АВР).

Соединения формулы (III) нуждаются в биоактивации посредством фосфорилирования спирта с получением активных фосфатэфирных соединений формулы (II). В соответствии с Вппктапп V. еί а1., (I Βίο1. СЬет. 277:21453-21457 (2002)) стереоизомерная конфигурация несущего амин углеродного центра может оказывать воздействие на относительную степень, в которой указанное фосфорилирование имеет место.

Относительную степень фосфорилирования примеров 1-2 и соединений 3-8 оценивали путем инкубации спиртовых соединений в цельной крови мыши. Появление фосфорилированного соединения измеряли через 4 ч для определения относительной степени формирования фосфатэфиров. Свежую цельную кровь получали от мышей линии ВАЬВ/С путем ретро-орбитального крвоизвлечения и собирали в содержащие ΕΌΤΛ пробирки. Из обработанной ΕΌΤΛ цельной крови отбирали аликвоты в 1,4 мл полипропиленовые пробирки в 96-луночном формате (100 мкл на образец) и вводили туда исследуемое соединение (1 мМ в ОМ8О) до конечной концентрации, составляющей 10 мкМ (п=2 на соединение). Пробирки герметично закрывали и перемешивали вихревым способом, затем переносили на орбитальный встряхиватель для инкубации при 37°С, 225 об/мин в течение 4 ч. По окончанию инкубации образцы наносили каплями на необработанную бумагу для сбора образцов АЬЫгот 226 (25 мкл на каплю, п=2) и оставляли сохнуть на воздухе в течение ночи. Карты сухой капли крови (ЭВ8) хранили при окружающей температуре в герметично закрытых пластиковых пакетах с добавленным влагопоглотителем. При готовности к анализу пробивают 6 мм отверстие (эквивалент 12,5 мкл крови) п=1 и помещают в неглубокий 96луночный планшет с фильтром. Далее добавляют 105 мкл смеси 75% ацетонитрила и 25% воды, содержащей внутренний стандарт и аккуратно перемешивали вихревым способом в течение 30 мин, затем центрифугировали. Супернатант отделяли от белкового осадка и наносили пробу, составляющую 5 мкл. Исходные (спиртовые) и активные фосфатэфирные соединения количественно анализировали с использованием калибровочной кривой ОВ8. с помощью ЖХ/МС/МС на устройстве Тпр1е Оиабгаро1е ЬМгитеШ. Определяли отношения площадей фосфорилированного соединения к исходному (спиртовому) соединению. Большее значение для отношения фосфорилированного соединения к исходному (спиртовому) соединению указывало на большее образование фосфатэфирного соединения из исходного (спиртового) соединения. В табл. 2 показаны результаты (среднее от двух экспериментов) для примеров 1-2 и соединений 3-8 через 4 ч. Для примеров 1-2 и соединения 6 отношения площадей образования фосфатэфирных соединений из исходных (спиртовых) соединений через 4 ч составляло по меньшей мере 0,59. Напротив, отношения площадей образования фосфатэфирных соединений из исходных (спиртовых) соединений для соединений 3-5 и 7-8 составляло 0,17 или меньше. В настоящем исследовании обнаружили, что примеры 1-2 и соединение 6 подвергались фосфорилированию в большей степени, чем соединения 35 и 7-8.

- 37 025294

Таблица 2. Фосфорилирование в цельной крови мышей - степень фосфорилирования

№ примера или соединения	Отношение площадей фосфата в цельной крови мышей через 4 ч
1	1,60
2	0,59
3	0,07
4	0,14
5	0,03
6	0,60
7	0,02
8	0,17

Образование фосфатэфиров ίη νίνο у мышей.

Мышам линии ΒΑΣΒ/с перорально вводили дозу примера 1, примера 2, соединения 3 и соединения 4 (10 мг/кг в виде раствора или суспензии в инертном носителе, полиэтиленгликоле 300, ΡЕС300). Забор крови проводили через 24 ч, наносили каплями на карты сухой капли крови (ΌΒ8) и анализировали, как описано для анализа νΒΡ. Эталонный материал (исходный спирт и фосфатэфир) анализировали для оптимизации анализа ЖХ-МС/МС и предоставления данных в отношении концентраций. Стандартные кривые ΌΒ8, содержащий как исходные спиртовые, так и фосфатэфирные соединения, получали и анализировали таким же образом, как и исследуемые образцы и анализировали с помощью оптимизированного анализа ЖХ-МС/МС для количественного определения количества образованных фосфатэфирных соединений. Результаты в табл. 3 представляют собой средние результаты всех животных в каждой группе лечения (п=3). Большее значение концентрации фосфатэфирного соединения указывало на большее образование фосфатэфирного соединения из исходного (спиртового) соединения. В настоящем исследовании было обнаружено, что примеры 1-2 подвергались образованию фосфатэфиров в большей степени, чем соединения 3-4. Результаты настоящего исследования ίη νίνο согласуются с результатами, полученными в описанном выше исследовании фосфорилирования в цельной крови у мышей.

Таблица 3. Образование фосфата ίη νίνο у мышей

№ примера или	Дозировка	Фосфат через 24 ч
соединения	(мг/кг)	(нМ)
1	10	475
2	10	202
3	10	14
4	10	46

Анализ связывания 81Ρχ.

Мембраны получали из клеток СНО, экспрессирующих 81Ρ₃ человека. Клеточные осадки (1х10⁹клеток/осадок) суспендировали в буфере, содержащем 20 мМ НЕΡЕ8 (4-(2-гидроксиэтил)-1пиперазинэтансульфоновая кислота), рН 7,5, 50 мМ №С1, 2 мМ ΞΩΤΑ (этилендиаминтетрауксусная кислота) и коктейль ингибиторов протеазы (КцсЬе) и разрушали на льду с использованием политронного гомогенизатора. Гомогенат центрифугировали при 20000 об/мин (48000 §) и супернатант отбирали. Мембранные осадки ресуспендировали в буфере, содержащем 50 мМ НЕΡЕ8, рН 7,5, 100 мМ №С1, 1 мМ МдС1₂, 2 мМ εΩΤΑ. и хранили в аликвотах при -80°С после определения концентрации белка.

Мембраны (2 мкг/лунка) и 0,03 нМ конечной концентрации лиганда ³³Ρ-81Ρ (1 мКи/мл, Ρе^к^η Е1тег ογ ΑιικγΠπι Кабю1аЬе1еб СЬеткак), разбавленного в буфере для анализа (50 мМ НЕΡЕ8, рН7,4, 5 мМ М§С1₂, 1 мМ СаС1₂, 0,5% не содержащего жирные кислоты Β8Α (бычий сывороточный альбумин), 1 мМ NаΡ) добавляли к планшетам с соединениями (384-луночный планшет с ν-образным дном ΡΑ^СОN® (0,5 мкл/лунка в 11 точках, 3-кратное разведение). Связывание проводили в течение 45 мин при комнатной температуре, останавливали его путем сбора мембран на 384-луночные планшеты с фильтром М1Шрο^е ΡΒ и измеряли радиоактивность с помощью ΤОΡСОυNΤ®. Конкурентные данные исследуемых соединений в диапазоне концентраций помещали на график как процентное ингибирование специфического в отношении радиоактивного лиганда связывания. Ιί\₀ определяли как концентрацию конкурирующего лиганда, необходимую для снижения специфического связывания на 50%. Определили, что Ιί'.'₅₀ для примера 10 составляла 0,01 нМ.

Анализы связывания рецептора с [³⁵8] 0ΤΡγ8.

Соединения наносили в 384-луночный планшет с ν-образным дном ΡΑ^СОN® (0,5 мкл/лунка в 11 точках, 3-кратное разведение). Мембраны, полученные из клеток З^/СНО или клеток ЕОС3-Са15-Ь1а НЕК293Т (ЕЭС3 эквивалентный 81Ρ₃) добавляли к планшету с соединением (40 мкл/лунка, конечная

- 38 025294 концентрация белка 3 мкг/лунка) с помощью МиЬТГОКОР®. [³⁵8]СТР (1250 Ки/ммоль, Регкш Е1тег) разводили в буфере для анализа: 20 мМ НЕРЕ8, рН 7,5, 10 мМ МдС12, 150 мМ №С1, 1 мМ ЕСТА (этиленгликольтетрауксусная кислота), 1 мМ ЭТТ (дитиотреитол), 10 мкМ СИР, 0,1% не содержащего жирные кислоты В8А и 10 мкг/мл сапонина до 0,4 нМ. 40 мкл раствора [³⁵8] СТР добавляли к планшету с соединением с конечной концентрацией, составляющей 0,2 нМ. Реакцию проводили при комнатной температуре в течение 45 мин. В конце инкубации все смеси в планшете с соединением переносили на 384луночные планшеты с фильтром РВ МПНроге с помощью манипуляционного механизма для подачи жидкости УЕЬОСГГУИ® Ургер. Планшет с фильтром отмывали водой 4 раза с использованием устройство для одновременной отмывки нескольких планшетов ЕтЬ1а и высушивали при 60°С в течение 45 мин. Сцинтилляционную жидкость М1сго8сшГ 20 (30 мкл) добавляли к каждой лунке для подсчета на РаскаМ ТОРСОИЭТ®. ЕС50 определяли как концентрацию агониста, которая соответствует 50% Утах (максимальный ответ), полученного для каждого отдельного исследуемого соединения. Определили, что ЕС₅₀для примера 10 составляла 0,9 нМ в анализе с использованием мембран, полученных из клеток 81Р1/СНО. Определили, что Тйе ЕС₅₀ для примера 10 составляла > 62500 нМ в анализе с использованием мембран, полученных из клеток ЕИС3-Са15-Ь1а НЕК293Т.

Меньшее значение для величины ЕС₅₀ СТΡγ8 81Рх указывало на большую активность соединения в анализе связывания СТΡγ8 с 81Рх. Большее значение для величины ЕС₅₀ СТΡγ8 81Р₃ указывало на меньшую активность в анализе связывания СТΡγ8 с 81Р₃. Пример 10, который представляет собой активный фосфатэфир примера 2, обладает активностью в качестве агониста 81Р₁ и не является селективным в отношении 81Р3. Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению, которые включают в себя примеры 1-2 и 9-10, можно использовать в лечении, профилактике или излечении различных связанных с рецептором 81Р1 состояний, при этом снижая или минимизируя побочные эффекты, обусловленные активностью 81Р3. Неожиданная селективность соединений согласно настоящему изобретению указывает на их потенциальное применение в лечении, профилактике или излечении таких аутоиммунных и воспалительных заболеваний, как рассеянный склероз, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, обыкновенная волчанка или псориаз, при этом снижая или минимизируя возможные побочные эффекты, обусловленные активностью 81Р₃. Другие потенциальные применения соединений согласно изобретению включают в себя минимизацию или снижение отторжения трансплантированных органов, при этом снижая или минимизируя побочные эффекты, обусловленные активностью 81Р₃.

Анализ интернализации рецептора 81Р₁.

Клетки СНО-К1, экспрессирующие меченный СРР рецептор 81Р|. помещали в 384-луночные покрытые поли-Э-лизином планшеты для тканевых культур с плотностью 4х10³ клеток/лунка в 50 мкл средах для анализа (Р12 с Ь-глютамином, 10% обработанного древесным углем/декстраном РВ8, 1Χ пенициллин-стрептомицин, 1М НЕРЕ8). Клеточные планшеты инкубировали в течение ночи при 37°С/5% СО2. Исследуемое соединение вносили в клеточный планшет из планшета-источника соединения в 11 точках с 3-кратными серийными разведениями и затем планшеты для анализы инкубировали при 37°С/5% СО2 в течение 45 мин. Клетки фиксировали и окрашивали с помощью 6% формальдегида и 15 мкг/мл красителя Хехста в РВ8 (не содержащем Са ^'/Мд ^') при комнатной температуре в течение 15 мин. Клеточные планшеты отмывали 4 раза с помощью РВ8 (не содержащего Са^2'/Мд^2') с добавлением 50 мкл/РВ8 перед запечатыванием планшетов. Изображения получали с помощью устройства для одновременного формирования многочисленных изображений Се11опис5 АККАУ8САК® УТ1. Анализ данных для определения ЕС50 относительно соединения внутреннего контроля осуществляли с использованием Сотраг1теи1а1 Апа1у818 ВюАррйсайои на Аггау 8сап. ЕС50 определяли как концентрацию агониста, которая соответствует 50% Утах (максимального ответа), полученного для каждого отдельного исследуемого соединения, и ее количественно определяли с использованием 4-параметрического логистического уравнения для определения соответствия данных. Определили, что ЕС₅₀ для примера 9 составляла 361 нМ в анализе.

Анализ снижения содержания лимфоцитов в крови (ВЬК) у грызуна.

Крысам линии ЬсМк перорально вводили дозы инертного носителя отдельно (полиэтиленгликоль 300, РЕС300) или с гидрохлоридом 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]-1,3-пропандиола (СА8: 16235956-0) в виде раствора в инертном носителе в дозах, составляющих 0,1, 0,5 и 3,0 мг/кг, отрегулированных, чтобы отражать свободное количество исследуемого изделия. Результаты представлены в табл. 4а и уровень снижения лимфоцитов через 24 ч после введения дозы был максимальным в дозе 3,0 мг/кг. Снижение содержания лимфоцитов в процентах зависело от дозы, но эта взаимосвязь была нелинейной, при которой непропорциональные увеличения дозы были необходимы, чтобы вызвать последовательно большие снижения количества лимфоцитов. Например, в настоящем исследовании для того, чтобы продемонстрировать изменение на 13% (от 69% снижения до 82% снижения) потребовалось пятикратное повышение дозы (от 0,1 до 0,5 мг/кг). Более того, чтобы продемонстрировать дополнительное изменение на 7% в настоящем исследовании (от 82% снижения до 89% снижения), потребовалось шестикратное увеличение дозы (от 0,5 до 3,0 мг/кг). Мышам линии ВЛЬВ/с перорально вводили дозы инертного носителя отдельно (полиэтиленгликоль 300, РЕС300) или с примером 1, примером 2, соединением 6, соеди- 39 025294 нением 8 или соединением сравнения 11. Соединения дозировали в виде раствора или суспензии в инертном носителе, регулируя так, чтобы отразить свободное количество исследуемого изделия в случае, при котором используют солевые формы. Забор крови проводили через 24 ч и количество лимфоцитов в крови определяли на гематологическом анализаторе АЭУМ® 120 (§1етеп8 НеаНЬсате П1адпо8Ьс8). Результаты измеряли как снижение в процентном отношении циркулирующих лимфоцитов по сравнению с обработанной инертным носителем группой во время измерения. Результаты представляют средние результаты всех животных в пределах каждой группы лечения (η = 2-4). Результаты анализа снижения содержания лимфоцитов в крови (ВЬК) у мышей, описанного выше в настоящем документе, показаны в табл. 4Ь.

Таблица 4а. Гидрохлорид 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]-1,3-пропандиола

Дозировка (мг/кг)	Анализ снижения содержания лимфоцитов в крови у крыс через 24 часа после введения дозы
Соединение	Контроль - инертный носитель	Снижение по сравнению с контролем в процентах
Среднее	5ЕМ	Среднее	5ЕМ
ол	2,78	0,17	9,01	0,19	69%
0,5	1,64	0,25	9,01	0,19	82%
3,0	1,02	0,06	9,01	0,19	89%

Таблица 4Ь

№ примера или соединения	Дозировка (мг/кг)	Анализ снижения содержания лимфоцитов в крови у мышей через 24 часа после введения дозы
Соединение	Контроль - инертный носитель	Снижение по сравнению с контролем в процентах
Среднее	5ЕМ	Среднее	5ЕМ
1	1	0.7	0.11	5,39	0.67	88%

2	1	0,54	0,20	5,39	0,67	90%
6	1	1,2	0,21	5,9	1,75	78%
8	1	2,4	0,35	5,9	1,75	59%
11	1	2,18	0,63	4,58	0.14	52%

Анализ легочной токсичности.

Анализ содержаний белка в жидкости бронхоальвеолярного лаважа (ВАЬ), полученной от животного, использовали для измерения легочных побочных эффектов. Повышенные содержания белка в жидкости ВАЬ являются характерными для таких нежелательных легочных эффектов, как отек легких. Пример 1, пример 2, соединение 6, соединение 8 и соединение 11 вводили перорально мышам в дозе, составляющей 30 мг/кг. Через 24 ч после введения дозы мышам проводили эвтаназию с помощью интраперитонеальной передозировки барбитурата. Животных помещали в положение лежа на спине, делали разрез кожи и методом тупой диссекции проводили извлечение трахеи. Проводили разрез трахеи и вставляли катетер на 4-6 мм в трахею. Проводили инфузию фосфатно-солевого буфера (РВ§; 1 мл/мышь) в легкие и затем проводил аспирацию. Концентрацию белка ВАЬ в выделенной жидкости ВАЬ определяли на химическом анализаторе АЭУМ® 1800 (§1етеп§ НеаИЬсате П1адпо8Ьс8). Результаты анализа бронхоальвеолярного лаважа (ВАЬ) показаны в табл. 5. Результаты представляют средние результаты от всех животных в пределах каждой группы лечения (η = 2-4).

Таблица 5

№ примера или соединения	Дозировка (мг/кг)	Содержание белка в ВАЬ (мг/дл) у мышей (24 часа после введения дозы)
Соединение	Контроль - инертный носитель	Относительное содержание белка в ВАЬ по сравнению с контролем
Среднее	8ЕМ	Среднее	8ЕМ
1	30	8,25	1,0	8,3	0,33	0,99
2	30	8,0	0,0	8,3	0,33	0,96
6	30	14,3	2,0	7,3	1,3	1,96

- 40 025294

№ примера или соединения	Дозировка (мг/кг)	Содержание белка в ВАЬ (мг/дл) у мышей (24 часа после введения дозы)
Соединение	Контроль - инертный носитель	Относительное содержание белка в ВАЬ по сравнению с контролем
Среднее	8ЕМ	Среднее	8ЕМ
8	30	7.5	1.0	7,3	1,0	1.03
11	30	13,3	0,5	10,0	1,0	1,33

В табл. 5 показаны относительные содержания белка в ВАЬ через 24 ч для исследуемых соединений по сравнению с введением только инертного носителя. Значение относительного содержания белка в ВАЬ по сравнению с контролем, составляющее больше чем 1, указывало на увеличение легочной токсичности по сравнению с введением только инертного носителя. В настоящем исследовании, как показано в табл. 5, введение примеров 1 и 2 дало относительные содержания белка в ВАЬ, составляющие 0,99 и 0,96, что указывало на отсутствие увеличения легочной токсичности. Введение соединения 8 дало относительное содержание белка в ВАЬ, составляющее 1,03, что указывало на небольшую легочную токсичность или ее отсутствие. Напротив, введение соединения 6 и соединения 11 дало относительного относительные содержания белка в ВАЬ, составляющие 1,94 и 1,33, что указывало на повышенную легочную токсичность.

Соединения согласно настоящему изобретению, проиллюстрированные примерами 1 и 2, сравнивали с а) соединениями 6 и 8, и Ь) соединением сравнения 11, раскрытым в международной патентной публикации \АО 2008/079382 и, как было обнаружено, являющимся особенно эффективным. Соединения согласно настоящему изобретению характеризовались неожиданным преимуществом в комбинации активности в снижении количества лимфоцитов в крови и минимизации таких легочных побочных эффектов, как отек легких. Как показано в табл. 4Ь и 5, в описанных исследованиях примеры 1 и 2 согласно настоящему изобретению показали неожиданное преимущество в эффективности снижения содержания лимфоцитов в крови, не повышая содержания белка в ВАЬ, показателя легочных побочных эффектов. Например, по сравнению с соединениями 6, 8 и 11, иллюстративные соединения согласно настоящему изобретению, представленные в табл. 4Ь и 5, снижали содержание лимфоцитов в крови на 88 и 90%, и давали относительные содержания белка в ВАЬ, составляющие 0,99 и 0,96 соответственно, что указывало на отсутствие увеличения легочных побочных эффектов. Напротив, в аналогичных исследованиях соединение 6 и соединение сравнения 11 снижали содержание лимфоцитов в крови на 78 и 52% и давали относительные содержания белка в ВАЬ, составляющие 1,96 и 1,33 соответственно, что указывало на повышенный риск легочных побочных эффектов. Соединение 8 снижало содержание лимфоцитов в крови на 59% и давало относительные содержания белка в ВАЬ, составляющие 1,03, что указывало на небольшое повышение легочных побочных эффектов или их отсутствие.

Таблица 6. Снижение содержания лимфоцитов в крови у мышей и содержания белка в ВАЬ у мышей из табл. 4Ь и 5

№ примера или соединения	Анализ снижения содержания лимфоцитов в крови у мышей через 24 часа после введения дозы (процентное снижение по сравнению с контролем) в дозе 1 мг/кг	Содержание белка в ВАЬ у мышей (через 24 часа после введения дозы) Относительное содержание белка в ВАЬ по сравнению с контролем в дозе 30 мг/кг
1	88%	0,99
2	90%	0,96
6	78%	1,96
8	59%	1,03
11	52%	1,33

Соединения согласно настоящему изобретению обладают активностью в качестве агонистов рецептора 81Ρι, приводя к снижению количества циркулирующих в крови лимфоцитов, и, таким образом, их можно использовать в лечении, профилактике или излечении различных связанных с рецептором §1Р₃состояний, при этом снижая или минимизируя такие легочные побочные эффекты, как отек легких. Удивительная селективность соединений согласно настоящему изобретению указывает на их потенциальное

- 41 025294 применение в лечении, профилактике или излечении таких аутоиммунных и воспалительных заболеваний, как рассеянный склероз, ревматоидный артрит, воспалительные заболевания кишечника, обыкновенная волчанка или псориаз, при этом снижая или минимизируя возможные легочные побочные эффекты. Другие потенциальные применения соединений согласно настоящему изобретению включают в себя минимизацию или снижение отторжения трансплантированных органов, при этом снижая или минимизируя возможные легочные побочные эффекты.

Анализ вызванного адъювантом артрит (АА) у крыс.

Модель вызванного адъюванта артрита у крыс представляет собой животную модель ревматоидного артрита человека.

Самцов крыс линии Ьедаз (150-175 г; Нат1аи, η = 8 на группу лечения) иммунизировали в основание хвоста с помощью 100 мкл 10 мг/мл свежеизмельченных МусоЬас1етшт ЬШупсит (ИТсо ЬаЬога1ог1е5) в неполном адъюванте Фрейнда (81дта). Животным вводили дозу исследуемого соединения один раз в день (в виде раствора или суспензии в инертном носителе) или инертный носитель вводили отдельно (полиэтиленгликоль 300, РЕО300), начиная с дня иммунизации. Объемы их задних лап измеряли в плетизмометре с вытеснением воды (Идо ВазПе, Италия). Исходные измерения лап проводили до возникновения заболевания (с 7 до 10 дня). Измерения лап проводили три раза в неделю до окончания исследования на 20-21 день. Все процедуры, в которые были вовлечены животные, рассмотрены и одобрены институциональным комитетом по уходу за животными.

Пример 2 согласно настоящему изобретению исследовали в анализе вызванного адъювантом артрит у крыс, описанном выше в настоящем документе, и результаты показаны в табл. 7. Соединение согласно настоящему изобретению, проиллюстрированное примером 2, в настоящем исследовании показало ингибирование прогрессирование заболевания, что измерили по сниженной припухлости лап у крысы линии ЬеМк с использованием профилактического режима перорального дозирования.

Таблица 7

Группа	Припухлость лапы (мл) на 20 день
Инертный носитель	Среднее	1,78
ЗЕМ	0,14
Пример 2	Среднее	1,64
(0,15 мг/кг)	ЗЕМ	0,10
Пример 2	Среднее	0,70
(0,5 мг/кг)	ЗЕМ	0,13
Пример 2	Среднее	0,16
(1,5 мг/кг)	ЗЕМ	0,04

Анализ вызванного переносом Т-клеток колита у мышей.

Анализ вызванного переносом Т-клеток колита у мышей представляет собой животную модель колита человека.

Колит вызывали у мышей линии СВ-17 8СГО путем адоптивного переноса отсортированных с помощью РАС8 СИ4⁺СИ45КВ^ЫдЬ Т-клеток от мышей линии ВАЬВ/с (3х10⁵ /мышь, и/п). Активности заболевания подвергали мониторингу один раз в неделю в течение первых 3 недель и 3 раза в неделю в течение последующих недель в отношении массы тела, жидкого стула или диареи и аноректального пролапса. Животным вводили перорально дозу через день (через день) исследуемого соединения или инертного носителя, начиная с дня Т-клеточного переноса. Мышей умерщвляли через 6 недель после восстановления Т-клеток и анализировали в отношении воспаления кишечника на основании гистологического исследования окрашенных Н&Е тканей толстой кишки. Все процедуры, в которые были вовлечены животные, рассмотрены и одобрены институциональным комитетом по уходу за животными.

Пример 2 исследовали в модели вызванного Т-клеточным переносом колит у мышей, описанной выше в настоящем документе, и результаты показаны в табл. 8. Соединение согласно настоящему изобретению, проиллюстрированное примером 2, в настоящем исследовании показало ингибирование прогрессирования заболевания, что оценивали по снижению потери массы тела или увеличению массы тела и снижению воспаления и повреждения в анализе вызванного Т-клеточным переносом колита у мышей.

- 42 025294

Таблица 8

Группа	6 неделя Изменения массы тела в процентах	Воспаление/повреждение (гистология)
Инертный носитель	Среднее	100%/ 96,8%	Среднее	6,79
	2,4%	5ЕМ	0,36
Пример 2 (1 мг/кг; через день)	Среднее	100% 98,7%	Среднее	5,46
	1,5%	5ЕМ	0,32
Пример 2 (5 мг/кг, через день)	Среднее	100% 103.7%	Среднее	3,71
	1,3%	5 ЕМ	0,50

Анализ модели спонтанной красной волчанки у мышей линии ΜΚΣ/ΙρΓ.

Анализ модели спонтанной красной волчанки у мышей линии ΜΚΣ/ΙρΓ представляет собой модель спонтанной красной волчанки.

Самцам мышей линии ΜΚΣ/1ρΓ (возраст 14 недель; 1аск5оп ЬаЬога1опе5; η = 12-13) перорально вводили дозу примера 2 (в виде раствора в инертном носителе) или вводили инертный носитель отдельно (полиэтиленгликоль 300) дважды в неделю в течение 11 недель, начиная с 0 дня. Содержания белка в моче (с помощью А1Ьи511\) измеряли в 0 день и в течение всего исследования. В табл. 9 показано процентное отношение мышей в каждой из групп лечения, которые продемонстрировали высокие уровни протеинурии (больше чем 100 мг/дл) в возрасте 25 недель. Дополнительные группы мышей получали ежедневно пероральную дозу дексаметазона (Эе\) либо независимо, либо в комбинации с введение дозы примера 2 дважды в неделю. Содержания белка в моче (с помощью А1Ьи511\) измеряли в 0 день и в течение настоящего исследования. В табл. 9 показано процентное отношение мышей в каждой из групп лечения, которые продемонстрировали высокие уровни протеинурии (больше чем 100 мг/дл) в возрасте 24 недель. Все процедуры, в которые были вовлечены животные, рассмотрены и одобрены институциональным комитетом по уходу за животными.

Пример 2 исследовали в анализе модели спонтанной красной волчанки у мышей линии ΜΚΣ/1ρΓ, описанном выше в настоящем документе, и результаты показаны в табл. 9. Соединение согласно настоящему изобретению, проиллюстрированное примером 2, в настоящем исследовании показало ингибирование прогрессирования заболевания, что оценивали по сниженному процентному отношению мышей с уровнем протеинурии, больше чем 100 мг/дл.

Таблица 9. Протеинурия в возрасте 25 недель

Группа	% мышей с протеинурией >100 мг/дл
Инертный носитель	54
Пример 2	25
(0,05 мг/кг; 2х неделя)
Пример 2	17
(0,4 мг/кг; 2х неделя)
Пример 2	10
(2 мг/кг; 2х неделя)

Пример 2 и дексаметазон (Эе\) либо независимо, либо в комбинации, исследовали в анализе модели спонтанной красной волчанки у мышей линии ΜΚΣ/1ρΓ, описанном выше в настоящем документе, и результаты показаны в табл. 10. Как соединение согласно настоящему изобретению, проиллюстрированное примером 2, так и дексаметазон в настоящем исследовании показали ингибирование прогрессирования заболевания, что оценивали по сниженному процентному отношению мышей с уровнем протеинурии, больше чем 100 мг/мл. В настоящем исследовании ни одна мышь, которой вводили комбинацию примера 2 и дексаметазона, не продемонстрировала уровень протеинурии больше чем 100 мг/мл.

- 43 025294

Таблица 10. Протеинурия в возрасте 24 недель

Группа	% мышей с протеинурией >100 мг/дл
Инертный носитель	64
Оех (0,1 мг/кг один раз в день)	50
Оех (0,5 мг/кг один раз в день)	10
Пример 2 (2 мг/кг; 2х неделя)	20
Пример 2 (2 мг/кг, 2х неделя) + Оех (0,1 мг/кг один раз в день)	0

Рентгеновская дифрактометрия отдельного кристалла.

Данные в отношении отдельного кристалла собирали с помощью системы Вгикег-АХ§ АРЕХ2 ССЭ с использованием излучения СиКа (λ = 1,5418 А). Индексирование и обработку измеренных данных в отношении интенсивности проводили с помощью пакета программного обеспечения АРЕХ2. Если необходимо кристаллы охлаждали в холодном потоке криосистемы Οχ&Γά в течение сбора данных. Структуры выявляли прямыми способами и уточняли на основании наблюдаемых отраженных сигналов с использованием программы ЗНЕЬХТЬ. Выведенные параметры атомов (координаты и температурные факторы) уточняли посредством методики наименьших квадратов в полноматричном приближении. Функция, минимизированная при уточнениях, представляла собой

Σνν(ΙΡοΙ - 1Рс1)²

К определяли как

Σ ||Р₀| - |Ρ_ε||/Σ 1Р₀1, тогда как = [Σ_ΐν(ΙΡ_οΙ - 1Р_С1)7Х_И |Р₀|²]^1/2( где № представляет собой соответствующую весовую функцию на основании ошибок в наблюдаемых интенсивностях. Как правило, все не являющиеся атомы Н уточняли анизотропно, и все атомы Н, отличные от атомов Н, прикрепленных к атомам N и О, рассчитывали с помощью геометрических способов и уточняли с использованием модели наездника.

Рентгеновская порошковая дифрактометрия.

Данные в отношении порошковой рентгеновской дифракции (РХКЭ) получали с использованием неавтоматизированного гониометра с хи-платформой Вгикег ΟΛΩΟδ (Оепега1 Агеа Эе1ес1ог ИШтасЦоп 8у51ет). Образцы порошка помещали в тонкостенные стеклянные капилляры диаметром 0,7 мм; капилляры подвергали вращению во время сбора данных. Расстояние от образца до датчика поддерживали на 17 см. Данные собирали с помощью излучения СиКа (λ = 1,5418 А) в диапазоне 2,5 < 2Θ < 35°, при этом время воздействия на образец составляло 600 с.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I) и/или его соль, где К представляет собой -ОН или -ОР(О)(ОН)2.
2. Соединение по п.1 или его соль, где К представляет собой -ОН.
3. Соединение по п.1 или его соль, где К представляет собой -ОР(О)(ОН)₂.
4. Соединение по п.1 или его соль со структурой
5. Соединение по п.1 или его соль со структурой
6. Соединение по п.5 или его соль, причем указанное соединение или указанная соль представляет собой кристаллическое твердое вещество.

- 44 025294
7. Соединение по п.1 или его соль со структурой
8. Соединение по п.1 или его соль со структурой
9. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения аутоиммунного заболевания или хронического воспалительного заболевания, содержащая соединение по п.2 или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый носитель.
10. Способ лечения заболевания или нарушения, связанного с активностью сопряженного с Обелком рецептора 81Р_Ь включающий введение пациенту - млекопитающему соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли.
11. Способ лечения аутоиммунного заболевания или хронического воспалительного заболевания, включающий введение пациенту - млекопитающему соединения по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли.
12. Способ по п.11, при котором указанное аутоиммунное заболевание или хроническое воспалительное заболевание выбрано из обыкновенной волчанки, рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника и ревматоидного артрита.