KR102242265B1 - 비시클릭 화합물 - Google Patents

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하이-윈 샤오
앨러릭 제이. 다이크먼
에릭 제이. 찬
마르타 댑로스
대니얼 리처드 로버츠
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Abstract

하기 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염이 개시되어 있다. 또한, G 단백질-커플링된 수용체 S1P1에 대한 선택적 효능제로서의 이러한 화합물의 사용 방법, 및 이러한 화합물을 포함하는 제약 조성물이 개시되어 있다. 이들 화합물은 다양한 치료 영역의 질환 또는 장애, 예컨대 자가면역 질환 및 혈관 질환의 진행을 치료, 예방 또는 지연시키는데 유용하다.
<화학식 I>
Figure 112015089898473-pct00094

상기 식에서, R은 -OH 또는 -OP(O)(OH)2이다.

Description

비시클릭 화합물 {BICYCLIC COMPOUNDS}
본 발명은 일반적으로 S1P1 효능제로서 유용한 비시클릭 화합물에 관한 것이다. 비시클릭 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 조성물 및 그의 사용 방법이 본원에 제공된다. 본 발명은 추가로 S1P1 조절과 관련된 상태, 예컨대 자가면역 질환 및 혈관 질환의 치료에 유용한, 본 발명에 따른 하나 이상의 화합물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
스핑고신-1-포스페이트 (S1P)는 스핑고신 (Sph)의 쯔비터이온성 리소인지질 대사물이며, 이는 결국 세라미드의 효소적 절단으로부터 유래된다. 2종의 키나제 (SphK1 및 SphK2)에 의한 Sph의 효소적 인산화는 대체로 적혈구로부터, 및 또한 방사선 저항성 공급원, 가능하게는 림프 내피로부터 S1P의 생산을 유도한다 (Pappu, R. et al., Science, 316:295-298 (2007)). 원래 세포내 신호전달 분자로서 단독으로 작동하는 것으로 생각되므로, S1P는 후속적으로, S1P1 또는 S1P1, S1P2 또는 S1P2, S1P3 또는 S1P3, S1P4 또는 S1P4, 및 S1P5 또는 S1P5 (이전에 각각 EDG-1, EDG-5, EDG-3, EDG-6 및 EDG-8로 지칭됨)로 명명된, G-단백질 커플링된 수용체 (GPCR)의 내피 분화 유전자 (EDG) 부류의 5종의 구성원에 대한 고친화도 리간드로서 확인되었다 (Chun, J. et al., Pharmacological Rev., 62:579-587 (2010)). S1P와 S1P 수용체와의 상호작용은 세포 증식, 세포 형태, 종양 세포 침습, 혈관신생, 종양발생, 세포골격 재배열, 혈관 발생 및 림프구 트래픽킹을 비롯한 다수의 과정에서 기본적 생리학적 역할을 수행한다 (Olivera, A. et al., Adv. Exp. Med. Biol., 716:123-142 (2011)). 따라서, S1P 수용체는 매우 다양한 치료 용도, 예컨대 종양 성장 억제, 혈관 질환 및 자가면역 질환을 위한 우수한 표적이 된다.
5종의 S1P 수용체 중에서, S1P1은 광범위한 분포를 갖는다. 이것은 림프구 상에 발현되는 우세한 패밀리 구성원이고, 림프구 트래픽킹에서 중요한 역할을 한다. S1P와 그의 수용체 S1P1과의 상호작용은 림프성 기관 (예컨대 흉선 및 림프절)으로부터 림프관 내로의 면역 세포의 방출을 위해 필요하다. S1P1 수용체의 하향조절 (이는 수용체 내재화를 통한 S1P1의 효능제로의 치료를 통하여 달성될 수 있음)은 다양한 조직으로의 림프구 이동 및 회귀를 파괴한다. 이는 림프 기관에서 림프구의 격리를 유발하여, 이환 조직으로 이동할 수 있는 순환 림프구의 수를 감소시킨다. 자가면역 및 이상 염증 과정과 연관된 표적 부위로의 림프구 이동을 억제하는 S1P1 수용체 조절제의 개발은 다수의 자가면역 및 염증성 질환 상태에 효능이 있을 수 있다.
하기 출원은 S1P1 효능제로서의 화합물을 기재한 바 있다: WO 03/061567 (미국 특허 공개 번호 2005/0070506), WO 03/062248 (미국 특허 번호 7,351,725), WO 03/062252 (미국 특허 번호 7,479,504), WO 03/073986 (미국 특허 번호 7,309,721), WO 03/105771, WO 05/058848, WO 05/000833, WO 05/082089 (미국 특허 공개 번호 2007/0203100), WO 06/047195, WO 06/100633, WO 06/115188, WO 06/131336, WO 2007/024922, WO 07/109330, WO 07/116866, WO 08/023783 (미국 특허 공개 번호 2008/0200535), WO 08/029370, WO 08/074820, WO 08/079382, WO 08/114157, WO 09/043889, WO 09/057079 및 미국 특허 번호 6,069,143. 또한 문헌 [Hale et al., J. Med. Chem., 47:6662 (2004)]을 참조한다.
S1P1 효능제로서 유용하며 또한 S1P3에 비해 선택성을 갖는 화합물에 대한 필요성이 여전히 남아있다. 또한, S1P3에 비해 선택성을 가지며 또한 바람직하지 않은 폐 영향을 최소로 갖거나 또는 전혀 갖지 않는, S1P1 효능제로서 유용한 화합물에 대한 필요성이 여전히 남아있다.
본 출원인은 S1P1 효능제로서 활성을 갖는 강력한 화합물을 발견하였다. 또한, 본 출원인은 S1P1 효능제로서 활성을 가지며 S1P3에 비해 선택적인 화합물을 발견하였다. 또한, 본 출원인은 S1P1 효능제로서 활성을 가지며 S1P3에 비해 선택적이고, 바람직하지 않은 폐 영향을 최소로 갖거나 또는 전혀 갖지 않는 화합물을 발견하였다. 이들 화합물은 이들의 약물성에 중요한 바람직한 안정성, 생체이용률, 치료 지수 및 독성 값을 갖는 제약으로서 유용한 것으로 제공된다.
본 발명은 S1P1 활성의 조절제로서 유용한 비시클릭 화합물 (그의 염 및 전구약물 포함)을 제공한다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 포유동물 환자에게 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, G 단백질-커플링된 수용체 S1P1의 활성과 연관된 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염을 제조하기 위한 방법 및 중간체를 제공한다.
본 발명은 또한 요법에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
본 발명은 또한 S1P1 수용체-관련 상태, 예컨대 자가면역 및 혈관 질환의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한, 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다.
화학식 I의 화합물, 및 화학식 I의 화합물을 포함하는 조성물은 다양한 S1P1 관련 상태를 치료, 예방 또는 치유하는데 사용될 수 있다. 이들 화합물을 포함하는 제약 조성물은 다양한 치료 영역에서의 질환 또는 장애, 예컨대 자가면역 및 혈관 질환의 진행을 치료, 예방 또는 지연시키는데 유용하다.
본 발명의 이들 및 다른 특징은 개시내용이 계속됨에 따라 확장된 형태로 설명될 것이다.
본 발명은 하기 기재된 첨부 도면을 참조하여 예시된다.
도 1은 실시예 2의 화합물의 N-1 형태의 실험 및 모의 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 대략 25℃에서)을 나타낸다.
도 2는 실시예 2의 화합물의 모노-HCl 염의 1수화물 H-1 형태의 실험 및 모의 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 대략 25℃에서)을 나타낸다.
도 3은 실시예 2의 화합물의 모노-HCl 염의 1수화물 H-2 형태의 실험 및 모의 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 대략 25℃에서)을 나타낸다.
도 4는 실시예 2의 화합물의 모노-HCl 염의 N-3 형태의 실험 및 모의 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 대략 25℃에서)을 나타낸다.
도 5는 실시예 2의 화합물의 모노-HCl 염의 N-4 형태의 실험 및 모의 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 대략 25℃에서)을 나타낸다.
도 6은 실시예 2의 화합물의 헤미-L-말산 염의 1수화물 H-1 형태의 실험 및 모의 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 대략 25℃에서)을 나타낸다.
도 7은 실시예 2의 화합물의 헤미-말론산 염의 1수화물 H-1 형태의 실험 및 모의 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 대략 25℃에서)을 나타낸다.
도 8은 실시예 2의 화합물의 2/3 인산 염의 1/3-수화물 H.33-1 형태의 실험 및 모의 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 대략 25℃에서)을 나타낸다.
도 9는 실시예 2의 화합물의 R-(+)-만델산 염의 N-1 형태의 모의 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, -70℃에서 계산)을 나타낸다.
본 발명의 제1 측면은 하기 화학식 I의 하나 이상의 화합물 및/또는 그의 염을 제공한다.
<화학식 I>
Figure 112015089898473-pct00001
상기 식에서, R은 -OH 또는 -OP(O)(OH)2이다.
한 실시양태는 R이 -OP(O)(OH)2인 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염을 제공한다. 이러한 실시양태의 화합물은 하기 화학식 II의 구조를 갖는다.
<화학식 II>
Figure 112015089898473-pct00002
이러한 실시양태에는 하기 화학식 IIa의 화합물
<화학식 IIa>
Figure 112015089898473-pct00003
및 하기 화학식 IIb의 화합물
<화학식 IIb>
Figure 112015089898473-pct00004
이 포함된다.
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 염은 S1P1의 선택적 효능제로서 유용하다.
한 실시양태는 R이 -OH인 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염을 제공한다. 이러한 실시양태의 화합물은 하기 화학식 III의 구조를 갖는다.
<화학식 III>
Figure 112015089898473-pct00005
이러한 실시양태에는 하기 화학식 IIIa의 화합물
<화학식 IIIa>
Figure 112015089898473-pct00006
및 하기 화학식 IIIb의 화합물
<화학식 IIIb>
Figure 112015089898473-pct00007
이 포함된다.
화학식 III의 화합물 및/또는 그의 염은 화학식 II의 화합물의 전구약물로서 유용하다. 화학식 III의 화합물은 인산화를 통해 생체내 활성화되어 화학식 II의 화합물을 제공한다. 화학식 II의 화합물은 S1P1의 선택적 효능제로서 활성이다.
한 실시양태는 하기 화학식 IV의 구조를 갖는 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염을 제공한다.
<화학식 IV>
Figure 112015089898473-pct00008
상기 식에서, R은 -OH 또는 -OP(O)(OH)2이다. 이러한 실시양태에는 화학식 IIa 및 화학식 IIIa의 화합물이 포함된다.
한 실시양태는 하기 화학식 V의 구조를 갖는 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염을 제공한다.
<화학식 V>
Figure 112015089898473-pct00009
상기 식에서, R은 -OH 또는 -OP(O)(OH)2이다. 이러한 실시양태에는 화학식 IIb 및 화학식 IIIb의 화합물이 포함된다.
한 실시양태는 화학식 IIa의 화합물 및/또는 그의 염을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIb의 화합물 및/또는 그의 염을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIa의 화합물 및/또는 그의 염을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIb의 화합물 및/또는 그의 염을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIa의 화합물을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIb의 화합물을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIa의 화합물을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIb의 화합물을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIa의 화합물의 하나 이상의 염을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIb의 화합물의 하나 이상의 염을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIa의 화합물의 하나 이상의 염을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIb의 화합물의 하나 이상의 염을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 III의 화합물을 HCl 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIa의 화합물을 HCl 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIb의 화합물을 HCl 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 III의 화합물을 인산 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIa의 화합물을 인산 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIb의 화합물을 인산 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIb의 화합물을 L-말산 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 III의 화합물을 말론산 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIa의 화합물을 말론산 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIb의 화합물을 말론산 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIb의 화합물을 R-(+)-만델산 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 III의 화합물을 HCl 염, 인산 염 및 말론산 염으로부터 선택된 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIa의 화합물을 HCl 염, 인산 염 및 말론산 염으로부터 선택된 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 화학식 IIIb의 화합물을 HCl 염, 인산 염, L-말산 염, 말론산 염 및 R-(+)-만델산 염으로부터 선택된 염으로서 제공한다.
한 실시양태는 ((1R,3R)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메탄올 및 ((1R,3S)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메탄올; 및 그의 염으로부터 선택된 화합물을 제공한다.
한 실시양태는 ((1R,3R)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메틸 디히드로겐 포스페이트 및 ((1R,3S)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메틸 디히드로겐 포스페이트; 및 그의 염으로부터 선택된 화합물을 제공한다.
한 실시양태는 ((1R,3R)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메탄올 및 ((1R,3R)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메틸 디히드로겐 포스페이트; 및 그의 염으로부터 선택된 화합물을 제공한다.
한 실시양태는 ((1R,3S)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메탄올 및 ((1R,3S)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메틸 디히드로겐 포스페이트; 및 그의 염으로부터 선택된 화합물을 제공한다.
실시예 2의 화합물의 염 및 결정 형태:
<표 1>
실시예 2의 염 및 결정질 형태
Figure 112015089898473-pct00010
실시예 2, 유리 염기의 형태 N-1
한 실시양태에서, 하기 실시예 2의 화합물
Figure 112015089898473-pct00011
은 제1 결정질 형태를 포함하는 결정질 물질로서 제공된다. 실시예 2의 화합물의 제1 결정질 형태는 실시예 2의 "형태 N-1" 또는 "N-1 형태"로서 본원에 언급된 순수한 결정질 형태를 포함한다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 N-1 형태는 하기와 대략 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:
셀 치수:
a = 5.54 Å
b = 7.37 Å
c = 48.85 Å
α = 90.0°
β = 90.0°
γ = 90.0°
공간군: P212121
실시예 2의 분자/비대칭 단위: 1
단위 셀에서 분자의 부피/수 = 499 Å3
밀도 (계산치) = 1.098 g/cm3,
여기서 실시예 2의 형태 N-1의 단위 셀 파라미터는 약 -70℃의 온도에서 측정된다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 N-1 형태는 실질적으로 도 1에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 1에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 N-1 형태는 3.6±0.2, 7.2±0.2, 12.5±0.2, 14.0±0.2, 15.0±0.2, 17.5±0.2, 19.4±0.2, 20.4±0.2 및 23.8±0.2로부터 선택된 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 약 25℃의 온도에서)을 특징으로 하며, 여기서 형태 N-1의 PXRD 패턴은 약 25℃의 온도에서 측정된다.
추가 실시양태에서, 실시예 2의 N-1 형태는 실질적으로 순수하다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 N-1 형태는 실시예 2의 N-1 형태의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 함유한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 실질적으로 순수한 형태 N-1은 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 보다 바람직하게는 약 2% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다. 가장 바람직하게는, 실시예 2의 실질적으로 순수한 결정질 형태 N-1은 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 1% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 결정질 형태는 본질적으로 형태 N-1로 이루어진다. 이러한 실시양태의 결정질 형태는 실시예 2의 결정질 형태, 형태 N-1의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 형태 N-1; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 실질적으로 순수한 형태 N-1; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
추가 실시양태에서, 치료 유효량의 실시예 2의 형태 N-1은 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제와 조합되어 하나 이상의 제약 조성물을 제공한다.
실시예 2의 HCl 염
한 실시양태에서, 실시예 2는 염산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2는 실시예 2의 각 mol에 대해 HCl 1 mol을 포함하는 모노-염산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 모노-염산 염은 하나 이상의 결정질 형태를 포함하는 결정질 물질로서 제공된다. 실시예 2의 모노-염산 염의 적합한 결정질 형태의 예는 형태 H-1, H-2, N-3 및 N-4를 포함한다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 모노-염산 염은 1수화물로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 1수화물 모노-염산 염은 하나 이상의 결정질 형태를 포함하는 결정질 물질로서 제공된다. 실시예 2의 1수화물 모노-염산 염의 적합한 결정질 형태의 예는 형태 H-1 및 H-2를 포함한다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 1수화물 모노-염산 염은 실시예 2, HCl 염의 "형태 H-1" 또는 "H-1 형태"로서 본원에 언급된 제2 결정질 형태로 제공된다. 실시예 2, HCl 염의 H-1 형태는 실시예 2의 각 분자에 대해 물 분자 1개 및 HCl 분자 1개를 포함한다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 모노-염산 염의 H-1 형태는 하기와 대략 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:
셀 치수:
a = 6.30 Å
b = 6.42 Å
c = 55.28 Å
α = 90.0°
β = 90.0°
γ = 90.0°
공간군: P212121
실시예 2의 분자/비대칭 단위: 1
단위 셀에서 분자의 부피/수 = 560 Å3
밀도 (계산치) = 1.14 g/cm3,
여기서 실시예 2의 모노-염산 염의 형태 H-1의 단위 셀 파라미터는 약 -70℃의 온도에서 측정된다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 모노-염산 염의 H-1 형태는 실질적으로 도 2에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 2에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 모노-HCl 염의 1수화물 H-1 형태는 3.2±0.2, 6.4±0.2, 9.6±0.2, 13.9±0.2, 14.6±0.2, 17.0±0.2, 19.0±0.2, 20.1±0.2, 21.3±0.2, 21.9±0.2 및 24.5±0.2로부터 선택된 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 약 25℃의 온도에서)을 특징으로 하며, 여기서 PXRD 패턴은 약 25℃의 온도에서 측정된다.
추가 실시양태에서, 실시예 2의 모노-염산 염의 H-1 형태는 실질적으로 순수하다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 모노-염산 염의 H-1 형태는 실시예 2, HCl 염의 제2 결정질 형태, 형태 H-1의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 함유한다.
또 다른 실시양태에서, 실질적으로 순수한 제2 결정질 형태는 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 보다 바람직하게는 약 2% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다. 가장 바람직하게는, 실질적으로 순수한 제2 결정질 형태는 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 전체 피크 면적의 약 1% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 모노-HCl 염의 제2 결정질 형태는 본질적으로 형태 H-1로 이루어진다. 이러한 실시양태의 제2 결정질 형태는 제2 결정질 형태, 형태 H-1의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 1수화물 모노-염산 염은 실시예 2, HCl 염의 "형태 H-2" 또는 "H-2 형태"로서 본원에 언급된 제3 결정질 형태로 제공된다. 실시예 2, HCl 염의 H-2 형태는 실시예 2의 각 분자에 대해 물 분자 1개 및 HCl 분자 1개를 포함한다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 모노-염산 염의 H-2 형태는 하기와 대략 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:
셀 치수:
a = 6.30 Å
b = 6.43 Å
c = 27.88 Å
α = 90.0°
β = 96.0°
γ = 90.0°
공간군: P21
실시예 2의 분자/비대칭 단위: 1
단위 셀에서 분자의 부피/수 = 562 Å3
밀도 (계산치) = 1.135 g/cm3,
여기서 실시예 2, HCl 염의 H-2 형태의 단위 셀 파라미터는 약 -70℃의 온도에서 측정된다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2, HCl 염의 H-2 형태는 실질적으로 도 3에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 3에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 모노-HCl 염의 1수화물 H-2 형태는 3.2±0.2, 6.4±0.2, 9.6±0.2, 14.1±0.2, 15.2±0.2, 16.8±0.2, 18.8±0.2, 20.2±0.2, 21.3±0.2, 22.6±0.2 및 26.6±0.2로부터 선택된 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 약 25℃의 온도에서)을 특징으로 하며, 여기서 PXRD 패턴은 약 25℃의 온도에서 측정된다.
추가 실시양태에서, 실시예 2, HCl 염의 H-2 형태는 실질적으로 순수하다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2, HCl 염의 H-2 형태는 제3 결정질 형태의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 함유한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2, HCl 염의 실질적으로 순수한 H-2 형태는 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 총 피크 면적의 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 보다 바람직하게는 약 2% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다. 가장 바람직하게는, 실시예 2, HCl 염의 실질적으로 결정질 H-2 형태는 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 총 피크 면적의 약 1% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 화합물의 제3 결정질 형태는 본질적으로 실시예 2, HCl 염의 H-2 형태로 이루어진다. 이러한 실시양태의 제3 결정질 형태는 제3 결정질 형태의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 모노-염산 염은 하나 이상의 결정질 형태를 포함하는 순수한 결정질 물질로서 제공된다. 실시예 2의 순수한 모노-염산 염의 적합한 결정질 형태의 예는 형태 N-3 및 N-4를 포함한다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 순수한 모노-염산 염은 실시예 2, HCl 염의 "형태 N-3" 또는 "N-3 형태"로서 본원에 언급된 제4 결정질 형태로 제공된다. 실시예 2, HCl 염의 N-3 형태는 실시예 2의 각 분자에 대해 HCl 분자 1개를 포함한다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 N-3 형태는 하기와 대략 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:
셀 치수:
a = 5.98 Å
b = 7.24 Å
c = 25.74 Å
α = 90.0°
β = 91.7°
γ = 90.0°
공간군: P21
실시예 2의 분자/비대칭 단위: 1
단위 셀에서 분자의 부피/수 = 556 Å3
밀도 (계산치) = 1.092 g/cm3,
여기서 실시예 2의 HCl 염의 형태 N-3의 단위 셀 파라미터는 약 27℃의 온도에서 측정된다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 N-3 형태는 하기와 대략 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:
셀 치수:
a = 5.93 Å
b = 7.20 Å
c = 25.24 Å
α = 90.0°
β = 90.2°
γ = 90.0°
공간군: P21
실시예 2의 분자/비대칭 단위: 1
단위 셀에서 분자의 부피/수 = 538 Å3
밀도 (계산치) = 1.128 g/cm3,
여기서 실시예 2의 HCl 염의 형태 N-3의 단위 셀 파라미터는 약 -70℃의 온도에서 측정된다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2, HCl 염의 N-3 형태는 실질적으로 도 4에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 4에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 모노-HCl 염의 N-3 형태는 3.4±0.2, 6.9±0.2, 10.4±0.2, 12.7±0.2, 14.0±0.2, 16.1±0.2, 19.7±0.2, 20.6±0.2, 22.1±0.2 및 24.0±0.2로부터 선택된 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 약 25℃의 온도에서)을 특징으로 하며, 여기서 PXRD 패턴은 약 25℃의 온도에서 측정된다.
추가 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 N-3 형태는 실질적으로 순수하다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 N-3 형태는 제4 결정질 형태, 형태 N-3의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 함유한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 실질적으로 순수한 형태 N-3은 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 총 피크 면적의 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 보다 바람직하게는 약 2% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 나타낸다. 가장 바람직하게는, 실시예 2의 HCl 염의 실질적으로 결정질 형태 N-3은 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 총 피크 면적의 약 1% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다.
추가 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 형태 N-3은 실질적으로 순수하다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 결정질 형태는 본질적으로 형태 N-3으로 이루어진다. 이러한 실시양태의 결정질 형태는 실시예 2의 결정질 형태, 형태 N-3의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 형태 N-3; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 실질적으로 순수한 형태 N-3; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
추가의 실시양태에서, 치료 유효량의 실시예 2의 형태 N-3은 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제와 조합되어 하나 이상의 제약 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 제4 결정질 형태는 본질적으로 형태 N-3으로 이루어진다. 이러한 실시양태의 제4 결정질 형태는 제4 결정질 형태, 형태 N-3의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 순수한 모노-염산 염은 실시예 2, HCl 염의 "형태 N-4" 또는 "N-4 형태"로서 본원에 언급된 제5 결정질 형태로 제공된다. 실시예 2, HCl 염의 N-4 형태는 실시예 2의 각 분자에 대해 HCl 분자 1개를 포함한다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 N-4 형태는 하기와 대략 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:
셀 치수:
a = 5.95 Å
b = 7.27 Å
c = 51.60 Å
α = 90.0°
β = 90.0°
γ = 90.0°
공간군: P212121
실시예 2의 분자/비대칭 단위: 1
단위 셀에서 분자의 부피/수 = 558 Å3
밀도 (계산치) = 1.088 g/cm3,
여기서 실시예 2, HCl 염의 형태 N-4의 단위 셀 파라미터는 약 27℃의 온도에서 측정된다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 N-4 형태는 하기와 대략 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:
셀 치수:
a = 5.92 Å
b = 7.25 Å
c = 50.61 Å
α = 90.0°
β = 90.0°
γ = 90.0°
공간군: P212121
실시예 2의 분자/비대칭 단위: 1
단위 셀에서 분자의 부피/수 = 543 Å3
밀도 (계산치) = 1.119 g/cm3,
여기서 실시예 2, HCl 염의 형태 N-4의 단위 셀 파라미터는 약 -70℃의 온도에서 측정된다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2, HCl 염의 N-4 형태는 실질적으로 도 5에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 5에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 모노-HCl 염의 N-4 형태는 3.4±0.2, 6.9±0.2, 10.3±0.2, 12.7±0.2, 13.3±0.2, 15.0±0.2, 19.7±0.2, 20.4±0.2, 21.2±0.2, 22.9±0.2 및 24.9±0.2로부터 선택된 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 약 25℃의 온도에서)을 특징으로 하며, 여기서 PXRD 패턴은 약 25℃의 온도에서 측정된다.
추가 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 N-4 형태는 실질적으로 순수하다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 N-4 형태는 제4 결정질 형태, 형태 N-4의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 함유한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 실질적으로 순수한 형태 N-4는 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 총 피크 면적의 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 보다 바람직하게는 약 2% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 나타낸다. 가장 바람직하게는, 실시예 2의 HCl 염의 실질적으로 결정질 형태 N-4는 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 총 피크 면적의 약 1% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다.
추가 실시양태에서, 실시예 2의 HCl 염의 형태 N-4는 실질적으로 순수하다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 결정질 형태는 본질적으로 형태 N-4로 이루어진다. 이러한 실시양태의 결정질 형태는 실시예 2의 결정질 형태, 형태 N-4의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 형태 N-4; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 실시예 2의 실질적으로 순수한 형태 N-4; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함한다.
추가 실시양태에서, 치료 유효량의 실시예 2의 형태 N-4는 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제와 조합되어 하나 이상의 제약 조성물을 제공한다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 순수한 모노-염산 염의 형태 N-3, 형태 N-4 또는 그의 혼합물을 포함하는 조성물이 제공된다.
L-말산 염
한 실시양태에서, 실시예 2는 L-말산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2는 실시예 2의 각 mol에 대해 L-말산 0.5 mol을 포함하는 헤미-L-말산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2는 실시예 2의 각 mol에 대해 물 1 mol 및 L-말산 0.5 mol을 포함하는 1수화물 헤미-L-말산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 1수화물 헤미-L-말산 염은 실시예 2, 헤미-L-말산 염의 "형태 H-1" 또는 "H-1 형태"로서 본원에 언급된 제6 결정질 형태로 제공된다. 실시예 2, 헤미-L-말산 염의 H-1 형태는 실시예 2의 각 분자에 대해 물 분자 1개 및 L-말산 분자 0.5개를 포함한다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 헤미-L-말산 염의 H-1 형태는 하기와 대략 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:
셀 치수:
a = 6.13 Å
b = 13.83 Å
c = 28.75 Å
α = 103.4°
β = 94.0°
γ = 92.6°
공간군: P1
실시예 2의 분자/비대칭 단위: 4
단위 셀에서 분자의 부피/수 = 591 Å3
밀도 (계산치) = 1.165 g/cm3,
여기서 실시예 2의 헤미-L-말산 염의 형태 H-1의 단위 셀 파라미터는 약 -70℃의 온도에서 측정된다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 헤미-L-말산 염의 H-1 형태는 실질적으로 도 6에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 6에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 헤미-L-말산 염의 H-1 형태는 3.2±0.2, 6.3±0.2, 9.5±0.2, 12.8±0.2, 14.3±0.2, 18.0±0.2, 22.4±0.2 및 24.8±0.2로부터 선택된 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 약 25℃의 온도에서)을 특징으로 하며, 여기서 PXRD 패턴은 약 25℃의 온도에서 측정된다.
말론산 염
한 실시양태에서, 실시예 2는 말론산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2는 실시예 2의 각 mol에 대해 말론산 0.5 mol을 포함하는 헤미-말론산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2는 실시예 2의 각 mol에 대해 물 1 mol 및 말론산 0.5 mol을 포함하는 1수화물 헤미- 말론산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 1수화물 헤미-말론산 염은 실시예 2, 헤미-말론산 염의 "형태 H-1" 또는 "H-1 형태"로서 본원에 언급된 제7 결정질 형태로 제공된다. 실시예 2, 헤미 말론산 염의 H-1 형태는 실시예 2의 각 분자에 대해 물 분자 1개 및 말론산 분자 0.5개를 포함한다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 헤미-말론산 염의 H-1 형태는 하기와 대략 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:
셀 치수:
a = 14.73 Å
b = 6.27 Å
c = 25.36 Å
α = 90.0°
β = 93.8°
γ = 90.0°
공간군: P21
실시예 2의 분자/비대칭 단위: 2
단위 셀에서 분자의 부피/수 = 584 Å3
밀도 (계산치) = 1.137 g/cm3,
여기서 형태 H-1의 단위 셀 파라미터는 약 -70℃의 온도에서 측정된다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 헤미-말론산 염의 H-1 형태는 실질적으로 도 7에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 7에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 헤미-말론산 염의 H-1 형태는 3.5±0.2, 7.1±0.2, 12.3±0.2, 13.5±0.2, 15.5±0.2, 17.6±0.2, 19.1±0.2, 20.2±0.2, 20.6±0.2, 21.7±0.2 및 23.8±0.2로부터 선택된 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 약 25℃의 온도에서)을 특징으로 하며, 여기서 PXRD 패턴은 약 25℃의 온도에서 측정된다.
인산 염
한 실시양태에서, 실시예 2는 인산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2는 1/3-수화물 인산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2는 실시예 2의 각 mol에 대해 인산 0.67 mol을 포함하는 인산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2는 실시예 2의 각 mol에 대해 물 0.33 mol 및 인산 0.67 mol을 포함하는 1/3-수화물 인산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2의 1/3-수화물 인산 염은 실시예 2, 인산 염의 "형태 H.33-1" 또는 "H.33-1 형태"로서 본원에 언급된 제8 결정질 형태로 제공된다. 실시예 2, 인산 염의 H.33-1 형태는 실시예 2의 각 분자에 대해 물 분자 0.33개 및 인산 분자 0.67개를 포함한다.
한 실시양태에서, H.33-1 형태는 하기와 대략 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:
셀 치수:
a = 59.12 Å
b = 6.89 Å
c = 16.62 Å
α = 90.0°
β = 94.7°
γ = 90.0°
공간군: C2
실시예 2의 분자/비대칭 단위: 3
단위 셀에서 분자의 부피/수 = 563 Å3
밀도 (계산치) = 1.181 g/cm3,
여기서 형태 H.33-1의 단위 셀 파라미터는 약 -70℃의 온도에서 측정된다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 1/3-인산 염의 H.33-1 형태는 실질적으로 도 8에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴 및/또는 실질적으로 도 8에 나타낸 패턴에 따른 관찰 PXRD 패턴을 특징으로 한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2의 1/3-인산 염의 H.33-1 형태는 2.9±0.2, 5.9±0.2, 8.8±0.2, 13.9±0.2, 15.8±0.2, 16.7±0.2, 17.4±0.2, 18.4±0.2, 19.4±0.2 및 20.4±0.2로부터 선택된 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 PXRD 패턴 (CuKα λ=1.5418Å, 약 25℃의 온도에서)을 특징으로 하며, 여기서 PXRD 패턴은 약 25℃의 온도에서 측정된다.
R-(+)-만델산 염
한 실시양태에서, 실시예 2는 R-(+)-만델산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2는 1수화물 R-(+)-만델산으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2는 실시예 2의 각 mol에 대해 R-(+)-만델산 1 mol을 포함하는 R-(+)-만델산 염으로서 제공된다.
한 실시양태에서, 실시예 2는 실시예 2의 각 mol에 대해 물 1 mol 및 R-(+)-만델산 1 mol을 포함하는 1수화물 R-(+)-만델산 염으로서 제공된다.
한 실시양태, 실시예 2의 1수화물 R-(+)-만델산 염은 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 "형태 N-1" 또는 "N-1 형태"로서 본원에 언급된 제9 결정질 형태로 제공된다. 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 N-1 형태는 실시예 2의 각 분자에 대해 물 분자 1개 및 R-(+)-만델산 분자 1개를 포함한다.
한 실시양태, 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 N-1 형태는 하기와 대략 동등한 단위 셀 파라미터를 특징으로 한다:
셀 치수:
a = 6.31 Å
b = 10.03 Å
c = 21.79 Å
α = 98.2°
β = 91.3°
γ = 91.7°
공간군: P1
실시예 2의 분자/비대칭 단위: 2
단위 셀에서 분자의 부피/수 = 683 Å3
밀도 (계산치) = 1.171 g/cm3,
여기서 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 형태 N-1의 단위 셀 파라미터는 약 -70℃의 온도에서 측정된다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 N-1 형태는 실질적으로 도 9에 나타낸 패턴에 따른 모의 분말 X선 회절 (PXRD) 패턴을 특징으로 한다.
추가 실시양태, 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 N-1 형태는 실질적으로 순수하다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 N-1 형태는 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 형태 N-1의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 함유한다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 실질적으로 순수한 형태 N-1은 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 총 피크 면적의 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 보다 바람직하게는 약 2% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다. 가장 바람직하게는, 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 실질적으로 순수한 결정질 형태 N-1은 실험적으로 측정된 PXRD 패턴의 총 피크 면적의 약 1% 미만이 모의 PXRD 패턴에는 없는 피크로부터 발생한 것인 실질적으로 순수한 상 균질성을 갖는다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 결정질 형태는 본질적으로 형태 N-1로 이루어진다. 이러한 실시양태의 결정질 형태는 결정질 형태, 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 형태 N-1의 중량을 기준으로 하여 약 90 중량% 이상, 바람직하게는 약 95 중량% 이상, 보다 바람직하게는 약 99 중량% 이상 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 형태 N-1; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 실시예 2, R-(+)-만델산 염의 실질적으로 순수한 형태 N-1; 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
추가 실시양태에서, 치료 유효량의 실시예 2, R-(+)-의 만델산 염의 형태 N-1은 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제와 조합되어 하나 이상의 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 본 발명의 취지 또는 본질적인 속성에서 벗어나지 않으면서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다. 본 발명은 본원에 언급된 본 발명의 측면 및/또는 실시양태의 모든 조합을 포괄한다. 본 발명의 임의의 및 모든 실시양태는 추가 실시양태를 기재하기 위해 임의의 다른 실시양태 또는 실시양태들과 함께 취합될 수 있는 것으로 이해된다. 또한, 실시양태의 각각의 개별 요소가 임의의 실시양태로부터의 임의의 및 모든 다른 요소와 조합되어 추가 실시양태를 기재하는 것으로 의도되는 것으로 이해된다.
정의
본 발명의 특징 및 이점은 하기 상세한 설명을 읽음으로써 통상의 기술자에 의해 보다 용이하게 이해될 수 있다. 명확성을 위해 개별 실시양태와 관련하여 상기 및 하기에 기재된 본 발명의 특정 특징이 또한 조합되어 단일 실시양태를 형성할 수 있음이 인지되어야 한다. 반대로, 간결성을 위해 단일 실시양태와 관련하여 기재된 본 발명의 다양한 특징이 조합되어 그의 하위조합을 형성할 수도 있다. 본원에서 예시적이거나 또는 바람직한 것으로서 확인되는 실시양태는 예시하려는 의도이며, 제한하려는 의도가 아니다.
본원에 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 단수형으로의 언급은 또한 복수형을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단수형은 하나 또는 하나 이상을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 어구 "화합물 및/또는 그의 염"은 하나 이상의 화합물, 상기 화합물의 하나 이상의 염 또는 그의 조합물을 지칭한다. 예를 들어, 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염은 화학식 I의 화합물; 화학식 I의 2종의 화합물; 화학식 I의 화합물의 염; 화학식 I의 화합물 및 화학식 I의 화합물의 하나 이상의 염; 및 화학식 I의 화합물의 2종 이상의 염을 포함한다.
달리 나타내지 않는 한, 충족되지 않은 원자가를 갖는 임의의 원자는 원자가를 충족시키기에 충분한 수소 원자를 갖는 것으로 간주된다.
본 발명을 기재하는데 사용된 다양한 용어의 정의를 하기에 열거한다. 이들 정의는 개별적으로 또는 보다 큰 군의 일부로서 (구체적인 경우에 달리 제한되지 않는 한) 명세서 전반에 걸쳐 사용된 경우의 용어에 적용된다. 본원에 기재된 정의는 본원에 참조로 포함된 임의의 특허, 특허 출원 및/또는 특허 출원 공개에 기재된 정의보다 우선한다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 기 및 그의 치환기는 안정한 모이어티 및 화합물을 제공하도록 통상의 기술자에 의해 선택될 수 있다.
어구 "제약상 허용되는"은, 타당한 의학적 판단의 범위 내에서, 합리적인 이익/위험 비에 상응하여 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증없이 인간 및 동물의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합한 그러한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭하기 위해 본원에서 사용된다.
화학식 I의 화합물은 또한 본 발명의 범주 내에 있는 염을 형성할 수 있다. 달리 나타내지 않는 한, 본 발명의 화합물에 대한 지칭은 그의 하나 이상의 염에 대한 지칭을 포함하는 것으로 이해된다. 용어 "염(들)"은 무기 및/또는 유기 산 및 염기로 형성된 산성 및/또는 염기성 염을 나타낸다. 또한 용어 "염(들)"은, 예를 들어 화학식 I의 화합물이 염기성 모이어티, 예컨대 아민 또는 피리딘 또는 이미다졸 고리 및 산성 모이어티, 예컨대 카르복실산을 둘 다 함유하는 경우에 쯔비터이온 (내부 염)을 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 (즉, 비-독성, 생리학상 허용되는) 염, 예컨대 예를 들어 양이온이 염의 독성 또는 생물학적 활성에 유의하게 기여하지 않는, 허용되는 금속 및 아민 염이 바람직하다. 그러나, 다른 염이 예를 들어 제조 동안 사용될 수 있는 단리 또는 정제 단계에서 유용할 수 있으며, 따라서 이는 본 발명의 범위 내로 고려된다. 화학식 I의 화합물의 염은, 예를 들어 화학식 I의 화합물을 매질, 예컨대 염이 침전되는 것 또는 수성 매질 중에서 예컨대 등량의 산 또는 염기의 양과 반응시킨 후 동결건조함으로써 형성될 수 있다.
예시적인 산 부가염은 아세테이트 (예컨대, 아세트산 또는 트리할로아세트산, 예를 들어 트리플루오로아세트산으로 형성된 것들), 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히드로클로라이드 (염산으로 형성됨), 히드로브로마이드 (브로민화수소로 형성됨), 히드로아이오다이드, 말레에이트 (말레산으로 형성됨), 2-히드록시에탄술포네이트, 락테이트, 메탄술포네이트 (메탄술폰산으로 형성됨), 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥살레이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 살리실레이트, 숙시네이트, 술페이트 (예컨대, 황산으로 형성된 것들), 술포네이트 (예컨대, 본원에 언급된 것들), 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔술포네이트, 예컨대 토실레이트, 운데카노에이트 등을 포함한다.
예시적인 염기성 염은 암모늄 염, 알칼리 금속 염, 예컨대 나트륨, 리튬 및 칼륨 염; 알칼리 토금속 염, 예컨대 칼슘 및 마그네슘 염; 바륨, 아연 및 알루미늄 염; 유기 염기 (예를 들어, 유기 아민)와의 염, 예컨대 트리알킬아민, 예컨대 트리에틸아민, 프로카인, 디벤질아민, N-벤질-β-페네틸아민, 1-에페나민, N,N'-디벤질에틸렌-디아민, 데히드로아비에틸아민, N-에틸피페리딘, 벤질아민, 디시클로헥실아민 또는 유사한 제약상 허용되는 아민, 및 아미노산, 예컨대 아르기닌, 리신 등과의 염을 포함한다. 염기성 질소-함유 기는 작용제, 예컨대 저급 알킬 할라이드 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드), 디알킬 술페이트 (예를 들어, 디메틸, 디에틸, 디부틸 및 디아밀 술페이트), 장쇄 할라이드 (예를 들어, 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테아릴 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드), 아르알킬 할라이드 (예를 들어, 벤질 및 페네틸 브로마이드) 등을 사용하여 4급화될 수 있다. 바람직한 염은 모노히드로클로라이드, 히드로겐술페이트, 메탄술포네이트, 포스페이트 또는 니트레이트 염을 포함한다.
화학식 I의 화합물은 무정형 고체 또는 결정질 고체로서 제공될 수 있다. 동결건조는 화학식 I의 화합물을 고체로 제공하기 위해 사용될 수 있다.
또한, 화학식 I의 화합물의 용매화물 (예를 들어, 수화물)도 또한 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 추가로 이해되어야 한다. 용어 "용매화물"은 유기 또는 무기든지 1개 이상의 용매 분자와 화학식 I의 화합물과의 물리적 회합물을 의미한다. 이러한 물리적 회합물은 수소 결합을 포함한다. 특정 경우에, 예를 들어 1개 이상의 용매 분자가 결정질 고체의 결정 격자에 혼입되는 경우에, 용매화물은 단리가능할 것이다. "용매화물"은 용액-상 및 단리가능한 용매화물을 둘 다 포괄한다. 예시적인 용매화물은 수화물, 에탄올레이트, 메탄올레이트, 이소프로판올레이트, 아세토니트릴 용매화물과 에틸 아세테이트 용매화물을 포함한다. 용매화의 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
다양한 형태의 전구약물이 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 하기에 기재되어 있다:
a) Wermuth, C.G. et al., The Practice of Medicinal Chemistry, Chapter 31, Academic Press (1996);
b) Bundgaard, H. ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985);
c) Bundgaard, H., Chapter 5, "Design and Application of Prodrugs", Krogsgaard-Larsen, P. et al., eds., A Textbook of Drug Design and Development, pp. 113-191, Harwood Academic Publishers (1991); 및
d) Testa, B. et al., Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Wiley-VCH (2003).
또한, 화학식 I의 화합물은, 그의 제조에 후속적으로, 단리 및 정제하여 99 중량% 이상의 양의 화학식 I의 화합물 ("실질적으로 순수한")을 함유하는 조성물을 수득하고, 이어서 이를 본원에 기재된 바와 같이 사용하거나 또는 제제화한다. 이러한 "실질적으로 순수한" 화학식 I의 화합물은 또한 본원에서 본 발명의 일부로서 고려된다.
"안정한 화합물" 및 "안정한 구조"는 반응 혼합물로부터 유용한 정도의 순도로의 단리를 견디고 효과적인 치료제로 제제화되기에 충분히 강건한 화합물을 나타내는 것으로 의도된다. 본 발명은 안정한 화합물을 실시하는 것으로 의도된다.
"치료 유효량"은 본 발명의 화합물의 양을 단독으로, 또는 S1P1에 대한 효능제로서 작용하는데 효과적이거나 또는 자가면역 및/또는 염증성 질환 상태, 예컨대 다발성 경화증 및 류마티스 관절염을 치료 또는 예방하는데 효과적인 다른 활성 성분과 조합하여, 청구된 화합물의 조합물의 양 또는 본 발명의 화합물의 양을 포함하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 "치료하는" 또는 "치료"는 포유동물에서, 특히 인간에서 질환-상태의 치료를 포함하고, (a) 질환-상태를 포유동물에서, 특히 이러한 포유동물이 질환-상태의 소인이 있지만 아직 이것을 갖는 것으로 진단되지 않은 경우에, 발병하는 것을 예방하는 것; (b) 질환-상태를 억제하는 것, 즉 그의 진행을 저지하는 것; 및/또는 (c) 질환-상태를 경감시키는 것, 즉 질환 상태의 퇴행을 유발하는 것을 포함한다.
본 발명의 화합물은 본 발명의 화합물에서 발생하는 원자의 모든 동위원소를 포함하는 것으로 의도된다. 동위원소는 동일한 원자 번호를 갖지만 상이한 질량수를 갖는 원자를 포함한다. 일반적인 예로서 및 비제한적으로, 수소의 동위원소는 중수소 (D) 및 삼중수소 (T)를 포함한다. 탄소의 동위원소는 13C 및 14C를 포함한다. 동위원소-표지된 본 발명의 화합물은 일반적으로 통상의 기술자에게 공지된 통상의 기술에 의해 또는 본원에 기재된 것과 유사한 방법에 의해, 달리 사용되는 비-표지된 시약 대신 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 제조될 수 있다.
화학식 I에 따른 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염은 치료할 상태에 적합한 임의의 수단에 의해 투여될 수 있으며, 이는 부위-특이적 치료에 대한 필요 또는 전달하려는 화학식 I 화합물의 양에 따라 달라질 수 있다.
또한, 본 발명에는 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 하나 이상의 비-독성의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제 및/또는 보조제 (본원에서 집합적으로 "담체" 물질로서 지칭됨), 및 원하는 경우에 다른 활성 성분을 포함하는 제약 조성물의 부류가 포괄된다. 화학식 I의 화합물은 임의의 적합한 경로에 의해, 바람직하게는 이러한 경로에 적합한 제약 조성물의 형태로, 및 의도된 치료에 유효한 용량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물 및 조성물은, 예를 들어 통상의 제약상 허용되는 담체, 보조제 및 비히클을 함유하는 투여 단위 제제로, 경구로, 점막으로, 또는 비경구로, 예컨대 혈관내로, 정맥내로, 복강내로, 피하로, 근육내로 및 흉골내로 투여될 수 있다. 예를 들어, 제약 담체는 만니톨 또는 락토스 및 미세결정질 셀룰로스의 혼합물을 함유할 수 있다. 혼합물은 추가의 성분, 예컨대 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘, 및 붕해제, 예컨대 크로스포비돈을 함유할 수 있다. 담체 혼합물은 젤라틴 캡슐 내로 충전되거나 또는 정제로서 압축될 수 있다. 제약 조성물은, 예를 들어 경구 투여 형태 또는 주입물로서 투여될 수 있다.
경구 투여를 위해, 제약 조성물은, 예를 들어 정제, 캡슐, 액체 캡슐, 현탁액 또는 액체의 형태일 수 있다. 제약 조성물은 바람직하게는 특정한 양의 활성 성분을 함유하는 투여 단위의 형태로 제조된다. 예를 들어, 제약 조성물은 약 0.1 내지 1000 mg, 바람직하게는 약 0.25 내지 250 mg, 보다 바람직하게는 약 0.5 내지 100 mg 범위의 활성 성분의 양을 포함하는 정제 또는 캡슐로서 제공될 수 있다. 인간 또는 다른 포유동물에게 적합한 1일 용량은 환자의 상태 및 다른 인자에 따라 매우 광범위하게 달라질 수 있으나, 통상 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
본원에서 고려되는 임의의 제약 조성물은, 예를 들어 임의의 허용되는 및 적합한 경구 제제를 통해 경구로 전달될 수 있다. 예시적인 경구 제제는 예를 들어 정제, 트로키, 로젠지, 수성 및 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 및 연질 캡슐, 액체 캡슐, 시럽 및 엘릭시르를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 경구 투여를 위해 의도되는 제약 조성물은 경구 투여를 위해 의도되는 제약 조성물을 제조하기 위한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 따라 제조될 수 있다. 제약상 맛우수한 제제를 제공하기 위해, 본 발명에 따른 제약 조성물은 감미제, 향미제, 착색제, 완화제, 항산화제 및 보존제로부터 선택된 하나 이상의 작용제를 함유할 수 있다.
정제는, 예를 들어 화학식 I의 하나 이상의 화합물 및/또는 하나 이상의 그의 제약상 허용되는 염을 정제의 제조에 적합한 하나 이상의 비-독성의 제약상 허용되는 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 예시적인 부형제는, 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대, 예를 들어, 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 및 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예컨대, 예를 들어, 미세결정질 셀룰로스, 나트륨 크로스카르멜로스, 옥수수 전분 및 알긴산; 결합제, 예컨대, 예를 들어, 전분, 젤라틴, 폴리비닐-피롤리돈 및 아카시아; 및 윤활제, 예컨대, 예를 들어, 스테아르산마그네슘, 스테아르산 및 활석을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 추가로, 정제는 비코팅되거나, 또는 불쾌한 맛의 약물의 나쁜 맛을 차폐하거나 또는 위장관에서 활성 성분의 붕해 및 흡수를 지연시켜 이에 의해 활성 성분의 효과를 더 장기간 동안 지속시키기 위해 공지된 기술에 의해 코팅될 수 있다. 예시적인 수용성 맛 차폐 물질은 히드록시프로필-메틸셀룰로스 및 히드록시프로필-셀룰로스를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 시간 지연 물질은 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트 부티레이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
경질 젤라틴 캡슐은, 예를 들어 화학식 I의 하나 이상의 화합물 및/또는 하나 이상의 그의 염을 하나 이상의 불활성 고체 희석제, 예컨대, 예를 들어, 탄산칼슘; 인산칼슘; 및 카올린을 혼합함으로써 제조될 수 있다.
연질 젤라틴 캡슐은, 예를 들어 화학식 I의 하나 이상의 화합물 및/또는 하나 이상의 그의 제약상 허용되는 염을 하나 이상의 수용성 담체, 예컨대, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜; 및 하나 이상의 오일 매질, 예컨대, 예를 들어, 땅콩 오일, 액상 파라핀 및 올리브 오일과 혼합함으로써 제조될 수 있다.
수성 현탁액은, 예를 들어, 화학식 I의 하나 이상의 화합물 및/또는 하나 이상의 그의 제약상 허용되는 염을 수성 현탁액의 제조에 적합한 하나 이상의 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 수성 현탁액의 제조에 적합한 예시적인 부형제는, 예를 들어 현탁화제, 예컨대, 예를 들어, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필-메틸셀룰로스, 알긴산나트륨, 알긴산, 폴리비닐-피롤리돈, 트라가칸트 검 및 아카시아 검; 분산화제 또는 습윤화제, 예컨대, 예를 들어, 자연-발생 포스파티드, 예를 들어, 레시틴; 알킬렌 옥시드와 지방산과의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트; 알콜 에틸렌 옥시드와 장쇄 지방족 알콜과의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어 헵타데카에틸렌-옥시세탄올; 지방산 및 헥시톨로부터 유래된 부분 에스테르와 에틸렌 옥시드와의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레에이트; 및 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 부분 에스테르와 에틸렌 옥시드와의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어, 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 수성 현탁액은 또한 하나 이상의 보존제, 예컨대, 예를 들어, 에틸 및 n-프로필 p-히드록시벤조에이트; 하나 이상의 착색제; 하나 이상의 향미제; 및/또는 하나 이상의 감미제, 예컨대 비제한적으로 수크로스, 사카린 및 아스파르탐을 함유할 수 있다.
유성 현탁액은, 예를 들어 화학식 I의 하나 이상의 화합물 및/또는 하나 이상의 그의 제약상 허용되는 염을 식물성 오일, 예컨대, 예를 들어, 아라키스 오일; 올리브 오일; 참깨 오일; 및 코코넛 오일 중에; 또는 미네랄 오일, 예컨대, 예를 들어, 액상 파라핀 중에 현탁화시킴으로써 제조될 수 있다. 유성 현탁액은 또한 하나 이상의 증점제, 예컨대, 예를 들어, 밀랍; 경질 파라핀; 및 세틸 알콜을 포함할 수 있다. 맛우수한 유성 현탁액을 제공하기 위해, 상기 이미 기재된 하나 이상의 감미제 및/또는 하나 이상의 향미제가 유성 현탁액에 첨가될 수 있다. 유성 현탁액은 하나 이상의 보존제, 예컨대 비제한적으로 예를 들어, 항산화제, 예컨대, 예를 들어, 부틸화 히드록시아니솔 및 알파-토코페롤을 추가로 함유할 수 있다.
분산성 분말 및 과립은, 예를 들어 화학식 I의 하나 이상의 화합물 및/또는 하나 이상의 그의 제약상 허용되는 염을 하나 이상의 분산화제 및/또는 습윤화제; 하나 이상의 현탁화제; 및/또는 하나 이상의 보존제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 적합한 분산화제, 습윤화제 및 현탁화제는 상기 이미 기재된 바와 같다. 예시적인 보존제는, 예를 들어 항산화제, 예를 들어, 아스코르브산을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 추가로, 분산성 분말 및 과립은 또한, 하나 이상의 부형제, 예컨대 비제한적으로 예를 들어, 감미제; 향미제; 및 착색제를 함유할 수 있다.
화학식 I의 하나 이상의 화합물 및/또는 하나 이상의 그의 제약상 허용되는 염의 에멀젼은, 예를 들어 수중유 에멀젼으로서 제조될 수 있다. 화학식 I의 화합물을 포함하는 에멀젼의 유성 상은 공지된 성분으로부터 공지된 방식으로 구성될 수 있다. 유상은 이에 제한되지는 않지만 예를 들어, 식물성 오일, 예컨대, 예를 들어, 올리브 오일 및 아라키스 오일; 미네랄 오일, 예컨대, 예를 들어, 액상 파라핀; 및 그의 혼합물에 의해 제공될 수 있다. 상이 단지 유화제만을 포함할 수 있는 경우에, 이는 하나 이상의 유화제의, 지방 또는 오일과의 또는 지방 및 오일 둘 다와의 혼합물을 포함할 수 있다. 적합한 유화제는, 예를 들어 자연-발생 포스파티드, 예를 들어, 대두 레시틴; 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 에스테르 또는 부분 에스테르, 예컨대, 예를 들어, 소르비탄 모노올레에이트; 및 부분 에스테르와 에틸렌 옥시드와의 축합 생성물, 예컨대, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 친수성 유화제는 안정화제로서 작용하는 친지성 유화제와 함께 포함된다. 또한 오일 및 지방 둘 다를 포함하는 것이 바람직하다. 동시에, 안정화제(들)와 함께 또는 이들 없이 유화제(들)는 소위 유화 왁스를 제조하고, 오일 및 지방과 함께 왁스는 소위 유화 연고 베이스를 제조하며, 이는 크림 제제의 유성 분산 상을 형성한다. 에멀젼은 또한 감미제, 향미제, 보존제 및/또는 항산화제를 함유할 수 있다. 본 발명의 제제에 사용하기 위해 적합한 유화제 및 에멀젼 안정화제는 트윈(Tween) 60, 스팬(Span) 80, 세토스테아릴 알콜, 미리스틸 알콜, 글리세릴 모노스테아레이트, 나트륨 라우릴 술페이트, 글리세릴 디스테아레이트를 단독으로, 또는 왁스 또는 관련 기술분야에 널리 공지된 다른 물질과 함께 포함한다.
화학식 I의 화합물 및/또는 하나 이상의 그의 제약상 허용되는 염은, 예를 들어 또한 정맥내로, 피하로 및/또는 근육내로 임의의 제약상 허용되는 및 적합한 주사가능한 형태를 통해 전달될 수 있다. 예시적인 주사가능한 형태는, 예를 들어 허용되는 비히클 및 용매, 예컨대, 예를 들어, 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액을 포함하는 멸균 수용액; 멸균 수중유 마이크로에멀젼; 및 수성 또는 유성 현탁액을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
비경구 투여용 제제는 수성 또는 비-수성 등장성 멸균 주사 용액 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 이들 용액 및 현탁액은 경구 투여용 제제에서의 사용을 위해 언급된 담체 또는 희석제 중 하나 이상을 사용하거나, 또는 다른 적합한 분산화제 또는 습윤화제 및 현탁화제를 사용함으로써 멸균 분말 또는 과립으로부터 제조될 수 있다. 화합물은 물, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 에탄올, 옥수수 오일, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 참깨 오일, 벤질 알콜, 염화나트륨, 트라가칸트 검 및/또는 다양한 완충제 중에 용해될 수 있다. 다른 보조제 및 투여 방식은 제약 업계에 널리 광범위하게 공지되어 있다. 활성 성분은 또한 염수, 덱스트로스 또는 물을 비롯한 적합한 담체, 또는 시클로덱스트린 (즉, 캅티솔(CAPTISOL)®), 공용매 가용화제 (즉, 프로필렌 글리콜) 또는 미셀 가용화제 (즉, 트윈 80)를 함유하는 조성물로서 주사에 의해 투여될 수 있다.
멸균 주사가능한 제제는 또한 비-독성의 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사가능한 용액 또는 현탁액, 예를 들어 1,3-부탄디올 중의 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균 고정유가 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로서 사용된다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노글리세라이드 또는 디글리세라이드를 비롯한 임의의 완하성 고정 오일이 사용될 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산이 주사제의 제조에 사용된다.
멸균 주사가능한 수중유 마이크로에멀젼은, 예를 들어 1) 화학식 I의 하나 이상의 화합물을 유성 상, 예컨대, 예를 들어, 대두 오일과 레시틴의 혼합물 중에 용해시키고; 2) 화학식 I을 함유하는 유상을 물과 글리세롤의 혼합물과 합하고; 3) 조합물을 가공하여 마이크로에멀젼을 형성함으로써 제조될 수 있다.
멸균 수성 또는 유성 현탁액은 관련 기술분야에 이미 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 예를 들어, 멸균 수용액 또는 현탁액은 비-독성의 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매, 예컨대, 예를 들어, 1,3-부탄 디올과 함께 제조될 수 있고; 멸균 유성 현탁액은 멸균 비-독성의 허용되는 용매 또는 현탁 매질, 예컨대, 예를 들어, 멸균 고정 오일, 예를 들어, 합성 모노글리세리드 또는 디글리세리드; 및 지방산, 예컨대, 예를 들어, 올레산과 함께 제조될 수 있다.
본 발명의 제약 조성물에 사용될 수 있는 제약상 허용되는 담체, 보조제 및 비히클은 이온 교환체, 알루미나, 스테아르산알루미늄, 레시틴, 자기-유화 약물 전달 시스템 (SEDDS), 예컨대 d-알파-토코페롤 폴리에틸렌글리콜 1000 숙시네이트, 제약 투여 형태에 사용되는 계면활성제, 예컨대 트윈, 폴리에톡실화 피마자 오일, 예컨대 크레모포르(CREMOPHOR)® 계면활성제 (BASF(바스프)), 또는 다른 유사한 중합체 전달 매트릭스, 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민, 완충 물질, 예컨대 포스페이트, 글리신, 소르브산, 소르브산칼륨, 포화 식물성 지방산의 부분 글리세리드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예컨대 프로타민 술페이트, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연 염, 콜로이드성 실리카, 삼규산마그네슘, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스계 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 양모 지방을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 시클로덱스트린, 예컨대 알파-, 베타- 및 감마-시클로덱스트린, 또는 화학적으로 개질된 유도체, 예컨대 히드록시알킬시클로덱스트린, 예컨대 2- 및 3-히드록시프로필-시클로덱스트린, 또는 다른 가용화된 유도체가 또한 본원에 기재된 화학식의 화합물의 전달을 증진시키는데 유리하게 사용될 수 있다.
본 발명의 제약 활성 화합물을 제약학의 통상의 방법에 따라 가공하여 인간 및 다른 포유동물을 비롯한 환자에게 투여하기 위한 의약제를 제조할 수 있다. 제약 조성물은 통상의 제약 작업, 예컨대 멸균화에 적용될 수 있고/거나 통상의 보조제, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤화제, 유화제, 완충제 등을 함유할 수 있다. 정제 및 환제는 추가로 장용 코팅을 사용하여 제조될 수 있다. 이러한 조성물은 또한 보조제, 예컨대 습윤화제, 감미제, 향미제 및 방향제를 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물 및/또는 조성물로 질환 상태를 치료하기 위해 투여되는 화합물의 양 및 투여 요법은 대상체의 연령, 체중, 성별, 의학적 상태, 질환의 유형, 질환의 중증도, 투여 경로 및 빈도, 및 사용된 특정한 화합물을 비롯한 다양한 인자에 따라 좌우된다. 따라서, 투여 요법은 광범위하게 달라질 수 있으나, 표준 방법을 사용하여 통상적으로 결정될 수 있다. 약 0.001 내지 100 mg/kg 체중, 바람직하게는 약 0.0025 내지 약 50 mg/kg 체중, 가장 바람직하게는 약 0.005 내지 10 mg/kg 체중의 1일 용량이 적절할 수 있다. 1일 용량은 1일에 1 내지 4회 용량으로 투여될 수 있다. 다른 투여 스케줄은 1주에 1회 용량 및 2일에 1회 용량의 주기를 포함한다.
치료 목적을 위해, 본 발명의 활성 화합물은 지시된 투여 경로에 적절한 하나 이상의 보조제와 통상적으로 조합된다. 경구로 투여되는 경우에, 화합물은 락토스, 수크로스, 전분 분말, 알칸산의 셀룰로스 에스테르, 셀룰로스 알킬 에스테르, 활석, 스테아르산, 스테아르산마그네슘, 산화마그네슘, 인산 및 황산의 나트륨 및 칼슘 염, 젤라틴, 아카시아검, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈 및/또는 폴리비닐 알콜과 혼합한 다음, 편리한 투여를 위해 정제화 또는 캡슐화될 수 있다. 이러한 캡슐 또는 정제는 히드록시프로필메틸 셀룰로스 중 활성 화합물의 분산액으로 제공될 수 있기 때문에 제어-방출 제제를 함유할 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 화학식 I의 하나 이상의 화합물 및/또는 하나 이상의 그의 제약상 허용되는 염, 및 임의로, 임의의 제약상 허용되는 담체, 보조제 및 비히클로부터 선택된 추가의 작용제를 포함한다. 본 발명의 대안적 조성물은 본원에 기재된 화학식 I의 화합물 또는 그의 전구약물, 및 제약상 허용되는 담체, 보조제 또는 비히클을 포함한다.
유용성
인간 면역계는 감염, 질환 또는 사망을 유발할 수 있는 미세-기관, 바이러스 및 기생충으로부터 신체를 방어하기 위해 진화해 왔다. 복잡한 조절 메카니즘은 면역계의 다양한 세포 성분이, 개체에 영구적 또는 중요한 손상을 유발하지 않으면서 외래 물질 또는 유기체를 표적으로 하는 것을 보장한다. 개시 사건은 현재 잘 이해되어 있지 않더라도, 자가면역 질환 상태에서 면역계는 앓는 개체에서 그의 염증 반응이 표적 기관으로 향하게 한다. 다양한 자가면역 질환은 전형적으로 이환된 우세한 또는 초기 표적 기관 또는 조직, 예컨대, 류마티스 관절염의 경우에는 관절, 하시모토 갑상선염의 경우에는 갑상선, 다발성 경화증의 경우에는 중추신경계, 제I형 당뇨병의 경우에는 췌장, 및 염증성 장 질환의 경우에는 장을 특징으로 한다. 따라서, 면역계 또는 면역계의 특정 세포 유형 (예컨대, B-림프구, 및 T 림프구, T 세포)에 작용하는 치료제가 하나 초과의 자가면역 질환에서 유용성을 가질 수 있다는 것이 관찰되었다.
S1P 수용체가 자가면역 질환을 비롯하여 광범위한 치료 적용을 위한 우수한 표적이라는 것은 본원에 인용된 참고문헌을 비롯하여 관련 기술분야에 잘 인지되어 있다. S1P 수용체는 개별적 수용체가 조직- 및 반응-특이적 둘 다이기 때문에 우수한 약물 표적이 된다. S1P 수용체의 조직 특이성은, 1가지 수용체에 대해 선택적인 효능제 또는 길항제의 개발이 해당 수용체를 함유하는 조직에 대한 세포 반응을 국한시켜 불필요한 부작용을 제한하기 때문에 중요하다. S1P 수용체의 반응 특이성은 또한, 이것이 다른 과정에 영향을 미치지 않으면서 특정 세포 반응을 개시 또는 억제하는 효능제 또는 길항제의 개발을 가능하게 하기 때문에 중요하다. 따라서, 일부 S1P 수용체 패밀리 구성원에 작용하는 반면에 다른 패밀리 구성원에서는 감소된 활성을 갖거나 또는 활성을 전혀 갖지 않는 화합물이 바람직하며, 개선된 부작용 프로파일 (즉, 불필요한 부작용의 감소 또는 제거)과 함께 치료 효과를 제공할 것으로 기대된다.
본원에 사용된, S1P1에 관한 용어 "효능제"는 약리 효과, 예컨대 T 세포의 감소된 운동성, T 세포의 감소된 트래픽킹, 또는 림프성 조직으로부터 T 세포의 감소된 유출을 나타내는 작용제를 지칭한다 (Rosen et al., Trends in Immunology, 28:102 (2007)).
효능제로서의 그의 S1P1 활성에 의해, 본 발명의 화합물은 자가면역 또는 만성 염증성 질환을 치료 또는 예방하기에 유용한 면역조절제이다. 본 발명의 화합물은 면역억제가 적절한 경우에, 예컨대 골수, 기관 또는 이식 거부, 자가면역 및 만성 염증성 질환, 예컨대 전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 제I형 당뇨병, 염증성 장 질환, 담즙성 간경변증, 포도막염, 다발성 경화증, 크론병, 궤양성 결장염, 수포성 유천포창, 사르코이드증, 건선, 자가면역 근염, 베게너 육아종증, 어린선, 그레이브스 안병증 및 천식에서 면역계를 억제하는데 유용하다.
보다 구체적으로, 본 발명의 화합물은 기관 또는 조직의 이식, 이식에 의해 유발된 이식편-대-숙주 질환, 자가면역 증후군, 예컨대 류마티스 관절염, 소아 특발성 관절염, 전신 홍반성 루푸스, 피부 홍반성 루푸스 (원판상 홍반성 루푸스, 아급성 홍반성 루푸스) 및 루푸스 신염, 하시모토 갑상선염, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 제I형 당뇨병, 포도막염, 후방 포도막염, 알레르기성 뇌척수염, 사구체신염, 후-감염성 자가면역 질환, 예컨대 류마티스성 열 및 후-감염성 사구체신염, 염증성 및 과다증식성 피부 질환, 건선, 건선성 관절염, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 습진성 피부염, 지루성 피부염, 편평 태선, 천포창, 수포성 유천포창, 수포성 표피박리증, 두드러기, 혈관부종, 혈관염, 예컨대 ANCA-연관 혈관염, 거대 세포 동맥염, 다카야스 동맥염, 현미경적 다발혈관염, 중추 신경계 혈관염, 처그-스트라우스 증후군, 및 류마티스 혈관염, 홍반, 피부 호산구증가증, 여드름, 원형 탈모증, 각결막염, 춘계 결막염, 베체트병과 연관된 포도막염, 각막염, 포진성 각막염, 원추 각막, 각막 상피 이영양증, 각막 백반, 안구 천포창, 무렌 궤양, 공막염, 그레이브스 안병증, 보그트-코야나기-하라다 증후군, 사르코이드증, 화분 알레르기, 가역성 폐쇄성 기도 질환, 기관지 천식, 알레르기성 천식, 내인성 천식, 외인성 천식, 먼지 천식, 만성 또는 난치성 천식, 후기 천식 및 기도 과민-반응, 기관지염, 위 궤양, 허혈성 질환 및 혈전증에 의해 유발된 혈관 손상, 허혈성 장 질환, 염증성 장 질환, 괴사성 소장결장염, 열 화상과 연관된 장 병변, 복강 질환, 직장염, 호산구성 위장염, 비만세포증, 크론병, 궤양성 결장염, 편두통, 비염, 습진, 간질성 신염, 굿패스쳐 증후군, 용혈성-요독성 증후군, 당뇨병성 신병증, 다발성 근염, 길랑-바레 증후군, 메니에르병, 다발신경염, 다발성 신경염, 단일신경염, 신경근병증, 갑상선기능항진증, 바세도우병, 순적혈구 무형성증, 재생불량성 빈혈, 형성부전성 빈혈, 특발성 혈소판감소성 자반증, 자가면역 용혈성 빈혈, 무과립구증, 악성 빈혈, 거대적모구성 빈혈, 적혈구무형성증, 골다공증, 사르코이드증, 유섬유종 폐, 특발성 간질성 폐렴, 피부근염, 심상성 백피증, 심상성 어린선, 광알레르기성 과민증, 피부 T 세포 림프종, 동맥경화증, 아테롬성동맥경화증, 대동맥염 증후군, 결절성 다발동맥염, 심근증, 경피증, 베게너 육아종, 쇼그렌 증후군, 지방증, 호산구성 근막염, 치은 병변, 치주, 치조골, 치아 골질, 사구체신염, 탈모 방지 또는 모발 발생 제공 및/또는 모발 생성 및 모발 성장 촉진에 의한 남성형 탈모증 또는 노인성 탈모증, 근육 이영양증, 농피증 및 세자리 증후군, 애디슨병, 보존, 이식 또는 허혈성 질환에 따라 발생하는 기관의 허혈-재관류 손상, 내독소-쇼크, 가막성 결장염, 약물 또는 방사선에 의해 유발된 결장염, 허혈성 급성 신기능부전, 만성 신기능부전, 폐-산소 또는 약물에 의해 유발된 중독증, 폐암, 폐기종, 백내장, 철침착증, 색소성 망막염, 노인성 황반 변성, 유리체 반흔형성, 각막 알칼리 화상, 피부염 다형성 홍반, 선상 IgA 수포성 피부염 및 시멘트 피부염, 치은염, 치주염, 패혈증, 췌장염, 환경 오염, 노화, 발암, 암종의 전이 및 저기압병증에 의해 유발된 질환, 히스타민 또는 류코트리엔-C4 방출에 의해 유발된 질환, 베체트병, 자가면역 간염, 원발성 담즙성 간경변증, 경화성 담관염, 부분 간 절제, 급성 간 괴사, 독소, 바이러스성 간염, 쇼크 또는 무산소증에 의해 유발된 괴사, B형-바이러스 간염, 비-A형/비-B형 간염, 간경변증, 알콜성 간경변증, 간부전, 전격성 간부전, 후기-발병 간부전, "급만성" 간부전, 화학요법 효과의 증대, 시토메갈로바이러스 감염, HCMV 감염, AIDS, 암, 노인성 치매, 외상, 신경병증성 통증, 만성 박테리아 감염, 혈소판감소증, IgA 신병증, 사구체간질증식성 사구체신염, IgG4-관련 질환, 강직성 척추염 및 재발성 다발연골염으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는데 유용하다. 소아 특발성 관절염은 소수관절염-발병 소아 특발성 관절염, 다발관절염-발병 소아 특발성 관절염, 전신-발병 소아 특발성 관절염, 소아 건선성 관절염 및 골부착부염-관련 소아 특발성 관절염을 포함한다.
한 실시양태는 자가면역 및/또는 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 하나 이상의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 및/또는 염증성 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 실시양태는 자가면역 및/또는 염증성 질환의 치료를 위한 요법에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 자가면역 및/또는 염증성 질환의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 제공된다. 치료 유효량이 이러한 실시양태에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 실시양태에서, 자가면역 및 염증성 질환은 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 염증성 장 질환 (크론병 및 궤양성 결장염 포함), 건선으로부터, 및 이식된 기관의 거부를 예방하기 위한 작용제로서 선택된다. 본 실시양태의 방법은 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 유효한 염의 투여를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 혈관 질환의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 하나 이상의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 혈관 질환을 치료하는 방법이 제공된다. 또 다른 실시양태는 혈관 질환의 치료를 위한 요법에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 혈관 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 제공된다. 치료 유효량이 이러한 실시양태에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 실시양태에서, 혈관 질환은 아테롬성동맥경화증 및 허혈 재관류 손상으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 염증성 장 질환을 치료하기 위한 방법은 상기 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 하나 이상의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하여 제공된다. 또 다른 실시양태는 염증성 장 질환의 치료를 위한 요법에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 염증성 장 질환의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 제공된다. 치료 유효량이 이러한 실시양태에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 실시양태에서, 염증성 장 질환은 크론병, 궤양성 결장염, 콜라겐성 결장염, 림프구성 결장염, 허혈성 결장염, 전환 결장염, 베체트병 및 불확정 결장염으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 루푸스를 치료하기 위한 방법은 상기 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 하나 이상의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하여 제공된다. 또 다른 실시양태는 루푸스의 치료를 위한 요법에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 루푸스의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 제공된다. 치료 유효량이 이러한 실시양태에 사용될 수 있다. 루푸스는 전신 홍반성 루푸스, 피부 홍반성 루푸스, 원판상 홍반성 루푸스, 아급성 홍반성 루푸스 및 루푸스 신염을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 다발성 경화증을 치료하기 위한 방법은 상기 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I의 하나 이상의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하여 제공된다. 또 다른 실시양태는 다발성 경화증의 치료를 위한 요법에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 다발성 경화증의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 제공된다. 치료 유효량이 이러한 실시양태에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 실시양태에서, 다발성 경화증은 재발 완화형 다발성 경화증, 원발성 진행성 다발성 경화증, 속발성 진행성 다발성 경화증 및 진행성 재발 다발성 경화증을 포함한다.
S1P1-연관 상태의 치료 방법은, 이러한 상태의 치료에 유용한 화학식 I의 화합물을 단독으로, 또는 서로 및/또는 다른 적합한 치료제와 조합하여 투여하는 것을 포함할 수 있다. 따라서, "치료 유효량"은 S1P1 수용체에서 효능제로서 작용하는데 효과적인 청구된 화합물의 조합물의 양을 포함하는 것으로 의도된다. 화합물의 조합물은 바람직하게는 상승작용적 조합물이다. 예를 들어 문헌 [Chou et al., Adv. Enzyme Regul., 22:27-55 (1984)]에 기재된 바와 같은 상승작용은, 조합물로 투여되는 경우에 화합물의 효과가 단독 작용제로서 단독으로 투여되는 경우의 화합물에서의 상가 효과보다 더 큰 경우에 발생한다. 일반적으로, 상승작용 효과는 화합물의 준-최적 농도에서 가장 명백하게 입증된다. 개별 성분과 비교하여 더 낮은 세포독성, 증가된 효능, 또는 조합물의 일부 다른 유익한 효과의 관점에서 상승작용이 있을 수 있다.
이러한 다른 치료제의 예는 코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코이드, 예컨대 덱사메타손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 및 프레드니손; PDE4 억제제, 예컨대 롤리프람, 실로밀라스트, 로플루밀라스트 및 오글레밀라스트; 시토카인-억제성 항염증 약물 (CSAID) 및 p38 키나제의 억제제, 4-치환된 이미다조 [1,2-A]퀴녹살린 (미국 특허 번호 4,200,750에 기재된 바와 같음); 세포 표면 분자, 예컨대 CD2, CD3, CD4, CD8, CD20, 예컨대 리툭산(RITUXAN)®, CD25, CD30, CD40, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90, CTLA, 예를 들어 아바타셉트 (오렌시아(ORENCIA)®), 벨라타셉트, 또는 그의 리간드, 예컨대 CD154 (GP39 또는 CD40L)에 지정된 항체 또는 융합 단백질; 인간 시토카인 또는 성장 인자에 대한 항체, 인간 시토카인 또는 성장 인자의 융합 단백질 또는 가용성 수용체, 예를 들어, TNF, 예컨대 인플릭시맙 (레미카드(REMICADE)®), 에타네르셉트 (엠브렐(Embrel)), 아달리무맙 (휴미라(HUMIRA)®), LT, Il-1, 예컨대 아나킨라 (키네레트(KINERET)®) (IL-1 수용체 길항제), IL-2, IL-4, IL-5, Il-6, 예컨대 CNTO 328 (키메라 항-IL-6 항체), Il-7, Il-8, Il-12, Il-15, Il-16, Il-17, Il-21, Il-23, 예컨대 우스테키누맙 (인간 항-IL-12/23 모노클로날 항체), 및 인터페론, 예컨대 인터페론 베타 1a (아보넥스(AVONEX)®, 레비프(REBIF)®), 인터페론 베타 1b (베타세론(BETASERON)®); 인테그린 수용체 길항제, 예컨대 티사브리(TYSABRI)®; 중합체 작용제, 예컨대 글라티라머 아세테이트 (코팍손(COPAXONE)®); 술파살라진, 메살라민, 히드록시클로로퀸, 비-스테로이드성 항염증 약물 (NSAID), 예컨대 살리실레이트, 예컨대 아스피린, 살살레이트 및 마그네슘 살리실레이트, 및 비-살리실레이트, 예컨대 이부프로펜, 나프록센, 멜록시캄, 셀레콕시브 및 로페콕시브; 항바이러스제, 예컨대 아바카비르; 항증식제, 예컨대 메토트렉세이트, 메르캅토퓨린, 레플루노미드, 시클로스포린, 미코페놀롤레이트, FK506 (타크롤리무스, 프로그라프(PROGRAF)®); 세포독성 약물, 예컨대 아자티오프린 및 시클로포스파미드; 핵 전위 억제제, 예컨대 데옥시스페르구알린 (DSG); 금 함유 제품, 예컨대 아우로노핀; 페니실라민 및 라파마이신 (시롤리무스 또는 라파문(RAPAMUNE)®) 또는 그의 유도체를 포함한다.
상기 다른 치료제는, 본 발명의 화합물과 조합되어 사용되는 경우에, 예를 들어 의사 처방 참고집 (PDR)에 제시된 양 또는 다르게는 통상의 기술자에 의해 결정된 바와 같은 양으로 사용될 수 있다. 본 발명의 방법에서, 이러한 다른 치료제(들)는 본 발명의 화합물의 투여 전, 그와 동시, 또는 그 후에 투여될 수 있다.
실시예
본 발명은 하기 실시예에서 추가로 정의된다. 실시예가 단지 예시의 방식으로 주어지는 것으로 이해되어야 한다. 상기 논의 및 실시예로부터, 통상의 기술자는 본 발명의 필수적인 특징을 확인할 수 있으며, 본 발명의 취지 및 범주에서 벗어나지 않으면서, 본 발명을 다양한 용도 및 조건에 적합하도록 다양하게 변화 및 변형시킬 수 있다. 결과적으로, 본 발명은 하기 기재된 예시적인 실시예에 의해 제한되지 않으며, 본원에 첨부된 특허청구범위에 의해 규정된다.
약어
Ac 아세틸
anhyd. 무수
aq. 수성
Bn 벤질
Bu 부틸
Boc tert-부톡시카르보닐
CV 칼럼 부피
DCM 디클로로메탄
DEA 디에틸아민
DMA N,N-디메틸아세트아미드
DMF 디메틸포름아미드
DMPU 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라히드로-2(1H)-피리미디논
DMSO 디메틸술폭시드
EtOAc 에틸 아세테이트
Et 에틸
Et3N 트리에틸 아민
EtOH 에탄올
H 또는 H2 수소
h, hr 또는 hrs 시간
hex 헥산
i 이소
HOAc 아세트산
HPLC 고압 액체 크로마토그래피
LC 액체 크로마토그래피
LDA 리튬 디이소프로필아미드
LiHMDS 리튬 비스(트리메틸실릴) 아미드
M 몰
mM 밀리몰
Me 메틸
MeCN 아세토니트릴
MeOH 메탄올
MHz 메가헤르츠
min. 분
mins 분
M+ 1 (M+H)+
MS 질량 분광측정법
n 또는 N 노르말
nM 나노몰
NMP N-메틸피롤리딘
Pd/C 탄소 상 팔라듐
Pd2(dba)3 트리스-(디벤질리덴아세톤)디팔라듐
Ph 페닐
Pr 프로필
PSI 제곱 인치당 파운드
R-BINAP (R)-(+)-2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-비나프틸
Ret Time 또는 RT 체류 시간
sat. 포화
S-BINAP (S)-(-)-2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-비나프틸
SFC 초임계 유체 크로마토그래피
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라히드로푸란
HPLC 조건:
조건 C: 칼럼: YMC 콤비스크린(COMBISCREEN)® S5 50 x 4.6mm (4분에 걸친 0에서 100% 용매 B의 선형 구배, 이어서 100%B에서 1-4분 유지; 용매 A = 물 90%/MeOH 10%/ H3PO4, 0.2%; 용매 B = MeOH 90%/물 10%/ H3PO4 0.2%. 유량: 4 mL/min; 생성물을 220 nm에서 검출함.
조건 G: 칼럼: 워터스 액퀴티(Waters Acquity) BEH C18 2.1 x 50 mm 1.7μm; 3분에 걸친 0-100% 용매 B의 선형 구배, 이어서 100%B에서 0.75분 유지; 유량: 1.11 mL/min; 용매 A: 5:95 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 용매 B: 95:5 아세토니트릴:물, 10 mM 아세트산암모늄 함유; 온도 = 50℃; 생성물을 220 nm 파장에서 검출하였다.
조건 H: 칼럼: 선파이어(SunFire) C18, (150 x 3.0 mm), 3.5 μm; 25분에 걸친 10에서 100% 용매 B의 선형 구배, 이어서 100%B에서 5분 유지; 유량: 1 mL/min; 완충제: 물 중 0.5% TFA, pH를 묽은 암모니아를 사용하여 2.5로 조정함; 용매 A: 완충제: 아세토니트릴 (95:5); 용매 B: 완충제: 아세토니트릴 (5:95); 생성물을 220 nm에서 검출함.
조건 I: 칼럼: 워터스 액퀴티 SD BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-μm 입자; 이동상 A: 100% H2O, 0.05%TFA 함유; 이동상 B: 100% 아세토니트릴, 0.05% TFA 함유; 온도: 50℃; 1분에 걸친 98:2에서 2:98 (A%:B%)의 구배 및 0.5분 동안 2:98에서 유지; 유량: 0.800 mL/min; 생성물을 220 nm에서 검출함.
조건 J: 칼럼: 크로모리스(CHROMOLITH)® 스피드로드(SpeedROD) (4.6 x 50 mm); 4분에 걸친 0에서 100% 용매 B의 선형 구배, 100% B에서 1분 유지; 용매 A: 10% MeOH, 90% H2O, 0.1% TFA; 용매 B: 90% MeOH, 10% H2O, 0.1% TFA; 유량: 4 mL/min; 생성물을 220 nm에서 검출함.
중간체 1
(1R,3S)-메틸 1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실레이트
Figure 112015089898473-pct00012
(I-1)
중간체 1A: (S)-3-(4-브로모페닐)시클로펜타논
Figure 112015089898473-pct00013
(I-1A)
500 ml 플라스크 내 1,4-디옥산 (120 mL) 중 4-브로모페닐보론산 (20 g, 100 mmol)의 용액을 5분 동안 질소로 퍼징하였다. S-BINAP (0.992 g, 1.593 mmol) 및 비스(노르보르나디엔)로듐 (I) 테트라플루오로보레이트 (0.559 g, 1.494 mmol)를 용액에 정압의 질소 하에 순차적으로 첨가하였다. 실온에서 교반 2시간 후, 물 (20 mL)을 첨가하고, 이어서 시클로펜트-2-에논 (8.06 mL, 100 mmol) 및 Et3N (13.88 mL, 100 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반되도록 하였다. 생성된 암색 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 에틸 아세테이트 250 ml에 부었다. 용액을 물로 2회 세척하고, 유기 층을 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (2개 배치로 분리함, 각각 330g 실리카 칼럼 상에서 헥산 중 0%-25% 에틸 아세테이트로 진행함)에 의해 정제하여 (S)-3-(4-브로모페닐)시클로펜타논 12.1 g을 수득하였다. HPLC 순도는 >98%였고, 키랄 HPLC 분석은 대략 90% ee를 나타내었다. 물질을 하기 기재된 키랄 SFC 조건 하에 추가로 정제하였다. 실험 상세사항: 기기: 베르게르(Berger) SFC MGIII; 정제 조건: 칼럼: 키랄팩(CHIRALPAK)® AD-H 25 x 5cm, 5μm; 칼럼 온도: 40℃; 유량: 200mL/min; 이동상: CO2/ MeOH= 80/20; 검출기 파장: 225 nm; 주입 부피: 1.0mL; 샘플 제제: 210 mL MeOH 중 12.1g (농도 60 mg/ml); 분석 조건: 칼럼: 키랄팩® AD 25 x 0.46cm, 10μm; 칼럼 온도: 40℃; 유량: 2.0분; 이동상: CO2/MeOH = 70/30; 검출기 파장: 220nm; 주입 부피: 5μL.
목적 거울상이성질체 (주요 이성질체)를 단리시키고, 단리 순서에 따라 "PK2"로서 명명하였다. 단리된 이성질체의 거울상이성질체 순도는 220 nm에서의 SFC/UV 면적%에 대해 99.6% 초과인 것으로 결정되었다. 증발시킨 후, 목적 거울상이성질체 10.5 g을 회수하였다. HPLC 체류 시간 =
Figure 112015089898473-pct00014
중간체 1B: (7S)-7-(4-브로모페닐)-1,3-디아자스피로[4.4]노난-2,4-디온
Figure 112015089898473-pct00015
(I-1B)
총 9.8g의 (S)-3-(4-브로모페닐)시클로펜타논을 사용하여 각각 4.9g을 함유하는 2개 배치로 나누었다. 2개 배치를 하기 기재된 바와 같은 동일한 조건 하에 처리하였다.
유리 압력 용기에 들은 EtOH (40 mL) 및 물 (20 mL) 중 (S)-3-(4-브로모페닐)시클로펜타논 (I-1A, 4.9 g, 20.49 mmol) 및 시안화칼륨 (1.935 g, 29.7 mmol)의 혼합물에 탄산암모늄 (4.92 g, 51.2 mmol)을 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉하고, 오일 조 내 80℃에서 24시간 동안 가열하여 백색 고체를 형성하였다. 빙조 내에서 반응 용기를 냉각시킨 후, 용기를 열고, 물 30 ml를 첨가하여 추가의 고체를 형성하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 5ml 물로 2회 세척한 다음, 고진공 하에 건조시켰다. 2개 배치를 합하여 (7S)-7-(4-브로모페닐)-1,3-디아자스피로[4.4]노난-2,4-디온) 13.9 g을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 후속 반응에 사용하였다. HPLC 체류 시간 = 0.82분 (조건 G) LC/MS M+Na =331, 2M+H =619.
중간체 1C: (3S)-1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실산
Figure 112015089898473-pct00016
(I-1C)
둥근 바닥 플라스크에 들은 1,4-디옥산 (40 mL) 중 (7S)-7-(4-브로모페닐)-1,3-디아자스피로[4.4]노난-2,4-디온 (I-1B, 13.9 g, 45.0 mmol)에 수성 NaOH (2N, 100 mL, 200 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 95℃로 가열하고, 24시간 동안 교반하였다. 추가의 NaOH (25 mL, 50 mmol)를 첨가하고, 가열을 추가로 2일 동안 계속하였다. 용액을 빙조로 냉각시키고, 5N HCl을 사용하여 대략 pH 7로 중성화시켜 백색 침전물을 형성하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 고진공 하에 2일 동안 건조시켜 (3S)-1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실산 14 g을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에 그대로 사용하였다. HPLC 체류 시간 = 0.64분 (조건 G) LC/MS M+1 = 284/ 286.
중간체 1D: (3S)-메틸 1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실레이트
Figure 112015089898473-pct00017
(I-1D)
MeOH (250 mL) 중 (3S)-1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실산 (I-1C, 14 g, 49.3 mmol)의 불균질 혼합물에 20분의 기간에 걸쳐 실온에서 첨가 깔때기를 통해 티오닐 클로라이드 (36.0 mL, 493 mmol)를 첨가하였다 (발열). 반응 혼합물을 오일 조에 넣고, 70℃로 4시간 동안 가열하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (200 mL) 중에 용해시키고, 1N NaOH로 2회 세척하였다. 이어서, 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 (3S)-메틸 1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실레이트 10.8 g을 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 0.68분 (조건 G);LC/MS M+1 = 298/300.
중간체 1: (1R,3S)-메틸 1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실레이트
Figure 112015089898473-pct00018
부분입체이성질체의 혼합물 (I-1D, 9.5g)을 키랄 SFC로 분리하였다. 중간체 1 및 그의 부분입체이성질체의 절대 입체화학적 할당은 이전에 기재된 바 있다 (Wallace, G.A. et al., J. Org. Chem., 74:4886-4889 (2009)). 실험 상세사항: 기기: 정제용: 타르(Thar) SFC350; 분석: 베르게르 분석용 SFC; 정제 조건: 칼럼: 룩스(Lux)-셀룰로스-4 25 x 3cm, 5 μm; 칼럼 온도: 35℃; 유량: 200mL/min; 이동상: CO2/ (MeOH, 0.1% DEA 함유) = 87/13; 검출기 파장: 220 nm; 주입 부피: 0.6 ml; 샘플 제제: 400 ml MeOH 중 9.5 g (농도 23.7mg/ml). 분석 조건: 칼럼: 룩스-셀룰로스-4 25 x 0.46cm, 5μm; 칼럼 온도. 35℃; 유량: 3 mL/min; 이동상: CO2/ (MeOH, 0.1% DEA 함유) = 85/15; 검출기 파장: 220 nm; 주입 부피: 5 μL.
중간체 1: 피크 2: 4.06g; 체류 시간 = 상기 분석용 키랄 SFC 조건 상에서 6.64분. 광학 순도: 98.2%; LC/MS M+1 = 298/300; 피크 1: 3.96g; 체류 시간 = 상기 분석용 키랄 SFC 조건 상에서 5.47분. 광학 순도: 99.4%.
대안적 제조: 중간체 1의 HCl 염
Figure 112015089898473-pct00019
(I-1 HCl 염)
MeOH (100 mL) 중 (3S)-1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실산 (10.2 g, 35.9 mmol)의 용액을 빙조에서 냉각시킨 다음, SOCl2 (15.72 mL, 215 mmol)를 적가하였다. 첨가가 완결된 후, 용액을 3시간 동안 환류시키고, 이 때 반응은 HPLC에 의해 완결된 것으로 결정되었다. 용액을 농축시켜 메탄올을 제거하여 고체를 수득하였다. 고체를 EtOAc 중 3% H2O 50 ml에 녹이고, 30분 동안 잘 교반하였다. 형성된 백색 고체를 여과에 의해 수집하였다. 습윤 백색 고체를 1,2-디메톡시에탄 중 4% H2O 50 ml에 녹이고, 50℃로 3시간 동안 가열한 다음, 실온에서 밤새 교반하였다. 생성된 백색 고체를 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 (1R,3S)-메틸 1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실레이트 히드로클로라이드 (3.5 g, 10.35 mmol)를 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 6.6분 (조건 H)
Figure 112015089898473-pct00020
중간체 2
(1R,3R)-메틸 1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실레이트
Figure 112015089898473-pct00021
(I-2)
중간체 2A: (R)-3-(4-브로모페닐)시클로펜타논
Figure 112015089898473-pct00022
(I-2A)
1,4-디옥산 (120 mL) 중 4-브로모페닐보론산 (20 g, 100 mmol)의 용액을 질소로 10분 동안 퍼징하였다. (R)-BINAP (0.992 g, 1.593 mmol) 및 비스(노르보르나디엔)로듐 (I) 테트라플루오로보레이트 (0.559 g, 1.494 mmol)를 순차적으로 첨가하고, 현탁액을 5분 동안 초음파처리하였다. 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 물 (20 mL)을 첨가하였고, 반응 혼합물은 균질해졌다. 10분 후, 시클로펜트-2-에논 (8.06 mL, 100 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. HPLC 및 LCMS 분석은 반응이 진행되었지만, 출발 물질이 생성물보다 더 많이 존재한다는 것을 나타내었다. 반응 혼합물을 셀라이트(CELITE)®의 패드를 통해 여과하고, 셀라이트®를 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세척하였다. 여과물을 추가의 에틸 아세테이트 (150 mL)로 희석하고, 물 (2x)로 세척하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 생성 혼합물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 에틸 아세테이트 및 헥산의 혼합물을 사용하여 정제하여 (R)-3-(4-브로모페닐)시클로펜타논 (6.09 g, 25.5 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 생성물은 HPLC에 따라 98% 순도였고, 체류 시간 = 2.11분 - (조건 J)이었다.
Figure 112015089898473-pct00023
키랄 HPLC은 화합물이 90-95% 거울상이성질체적으로 순수하였음을 나타내었다. 화합물 (6.03 g)을 키랄 SFC에 의해 하기 열거된 조건을 사용하여 추가로 정제하였다. 목적 거울상이성질체를 단리시키고, 용리 순서에 따라 "PK1"로서 명명하였다. 단리된 이성질체의 거울상이성질체 순도는 220 nm에서의 SFC/UV 면적%에 대해 99.9% 초과인 것으로 결정되었다. 목적 거울상이성질체 5.45 g을 농축 후에 회수하였다. 실험 상세사항: 기기: 베르게르 SFC MGIII; 정제 조건; 칼럼: 키랄팩® AD-H 25 x 3cm, 5μm; 칼럼 온도: 40℃; 유량: 180mL/min; 이동상: CO2/ MeOH= 87/13; 검출기 파장: 225 nm; 주입 부피: 0.5mL; 샘플 제제: 100 mL MeOH 중 6.03g (농도 60 mg/ml). 분석 조건: 칼럼: 키랄팩® AD 25 x 0.46cm, 10 μm; 칼럼 온도: 40℃; 유량: 2.0분; 이동상: CO2/ MeOH = 70/30; 검출기 파장: 220 nm; 주입 부피: 5 μL.
중간체 2B: (7R)-7-(4-브로모페닐)-1,3-디아자스피로[4.4]노난-2,4-디온
Figure 112015089898473-pct00024
(I-2B)
유리 압력 용기에 들은 EtOH (40 mL) 및 물 (20 mL) 중 (R)-3-(4-브로모페닐)시클로펜타논 (I-2A, 5.4 g, 22.58 mmol) 및 시안화칼륨 (2.132 g, 32.7 mmol)의 혼합물에 탄산암모늄 (5.42 g, 56.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉하고, 오일 조 내에 넣고, 80℃에서 20시간 동안 가열하였다. 다량의 백색의 자유 유동 고체를 연황색 용액으로 형성하였다. LCMS에 의한 분석은 남아있는 출발 물질을 나타내므로, 반응을 추가로 24시간 동안 계속하였다. 전환이 불완전하기 때문에, 오일 조의 온도를 120℃로 상승시켰다. 백색 고체를 더 높은 온도에서 완전히 용해시켰다. 3시간 후, 용액을 실온으로 냉각시켰다. 용액을 빙조 내에서 추가로 냉각시키고, 물 (30 mL)을 첨가하고, 생성된 백색 고체를 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 공기 건조시킨 다음, 고진공 하에 두어 표적 화합물 (6.9 g, 22.32 mmol)을 수득하였으며, 이를 후속 반응에 추가 정제 없이 사용하였다. HPLC 체류 시간 = 0.81분 (조건 G); LC/MS MH = 309/ 311; 2M+H = 619.
중간체 2C: (3R)-1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실산
Figure 112015089898473-pct00025
(I-2C)
디옥산 (20 mL) 및 NaOH (2N 수성) (120 mL, 240 mmol) 중 (7R)-7-(4-브로모페닐)-1,3-디아자스피로[4.4]노난-2,4-디온 (I-2B, 6.80 g, 22 mmol)의 용액을 오일 조 세트에서 95℃로 가열하였다. 생성된 투명한 연황색 용액을 주말 동안 교반되도록 두었다. 용액을 빙조에서 냉각시키고, 6 N HCl에 의해 대략 pH 7로 중화시켜 침전물을 형성하였다. 고체를 수집하고, 밤새 공기 건조되도록 두었다. 백색 고체를 뜨거운 에탄올 (~100 mL)로 슬러리로 만들고, 여과에 의해 재수집하고, 고체를 공기-건조시킨 다음, 고진공 하에 두었다. (5.8 g, 20.41 mmol). HPLC 체류 시간 = 0.64분 (조건 G);
Figure 112015089898473-pct00026
중간체 2D: (3R)-메틸 1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실레이트
Figure 112015089898473-pct00027
(I-2D)
교반용 막대가 들은 500 mL 둥근 바닥 플라스크에서, (3R)-1-아미노-3-(4-브로모페닐) 시클로펜탄카르복실산 (I-2C, 5.4 g, 19.00 mmol)을 메탄올 (100 mL) 중에 현탁시켜 백색 슬러리를 수득하였다. 적하 깔때기에 티오닐 클로라이드 (13.87 mL, 190 mmol)를 채우고, 혼합물이 환류 온도에 도달하지 못하게 유지하는 속도로 시약을 적가하였다. 첨가가 완결된 후, 연황색의 우윳빛 용액을 70℃로 오일 조 세트에 넣고, 공기-냉각된 환류 응축기를 부착하였다. 용액을 수시간 동안 가열한 다음, 밤새 실온으로 냉각되도록 하였다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 1N NaOH (수성)로 세척하고, 물로 세척한 다음, MgSO4 상에서 건조시킨 후에, 여과하고, 농축시켰다. 생성된 황색 고체를, 초음파처리하면서 따뜻한 에틸 아세테이트로 슬러리로 만든 다음, 여과하였다. 고체를 공기-건조시키고, 진공 하에 두고, 여과물을 증발시켜 고체 1: 백색 고체, 4.28 g을 수득하고, LCMS는 >98% AP를 나타내었다. 여과물을 증발시켜 황색 고체 (1.89 g)를 수득하였다. 여과물로부터의 고체를, 초음파처리하면서 최소량의 뜨거운 에틸 아세테이트 중에 슬러리로 만들고, 이어서 냉각시키고 (빙조), 저온 여과하였다. 고체를 공기-건조시키고, 진공 하에 두어 고체 2: 1.44 g 백색 고체를 수득하였다. 합한 고체 (5.7g).
중간체 2: (1R,3R)-메틸 1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실레이트
Figure 112015089898473-pct00028
(3R)-메틸 1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실레이트 (I-2D, 4 g)의 합한 고체를 부분입체이성질체의 키랄 SFC 분리를 사용하여 분리하였다. 중간체 2 및 그의 부분입체이성질체의 절대 입체화학적 할당은 이전에 기재된 바 있다 (Wallace, G.A. et al., J. Organic Chem., 74:4886-4889 (2009)). 실험 상세사항: 기기: 정제용: 타르 SFC350; 분석: 타르 분석 MDS. 정제 조건: 칼럼: 키랄팩® AD-H 25 x 5cm, 5 μm; 칼럼 온도: 35℃; 유량: 300mL/min; 이동상: CO2/ (MeOH, 0.1%DEA 함유) = 82/18; 검출기 파장: 230 nm; 주입 부피: 0.4-0.5 ml; 샘플 제제: 120 ml MeOH 중 4 g (농도 33mg/ml). 분석 조건: 칼럼: 키랄팩® AD-H 25 x 0.46 cm, 5 μm; 칼럼 온도: 35℃; 유량: 3 mL/min; 이동상: CO2/(MeOH, 0.1%DEA 함유) = 80/20; 검출기 파장: 222nm; 주입 부피: 5 μL.
중간체 2 (피크 1): 1.56 g (222 nm에서 99.3% 광학 순도) 체류 시간 = 분석용 키랄 SFC 상에서 7.18분.
Figure 112015089898473-pct00029
피크 2: 1.8 g (222 nm에서 97.2% 광학 순도). 체류 시간 = 분석용 키랄 SFC 상에서 7.71분.
Figure 112015089898473-pct00030
중간체 3
(5R,7S)-7-(4-브로모페닐)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온
Figure 112015089898473-pct00031
(I-3)
중간체 3A: ((1R,3S)-1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜틸)메탄올
Figure 112015089898473-pct00032
(I-3A)
0℃에서 MeOH (100 mL) 중 (1R,3S)-메틸 1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실레이트, HCl (I-1 HCl, 15 g, 44.8 mmol)의 혼합물에 수소화붕소나트륨 (4 g, 106 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 반응이 HPLC 분석에 의해 완결된 것으로 결정될 때까지 수소화붕소나트륨을 조금씩 첨가하였다. 물을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 NaCl로 세척하였다. 수성 층을 수회 역추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성물 (11 g)을 농축 후 회수하였다. HPLC 체류 시간 = 0.65분 (조건 G);
Figure 112015089898473-pct00033
중간체 3: (5R,7S)-7-(4-브로모페닐)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온
디옥산 (300 mL) 중 ((1R,3S)-1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜틸)메탄올 (11 g, 40.7 mmol) 및 피리딘 (I-3A, 3.29 mL, 40.7 mmol)의 혼합물에 1,1'-카르보닐디이미다졸 (19.81 g, 122 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 1M HCl, 염수 및 포화 NaHCO3으로 세척하였다. 혼합물을 수회 역추출하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 목적 생성물 10.5 g을 회백색 고체로서 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 0.87분 (조건 G).
Figure 112015089898473-pct00034
중간체 4
(5R,7R)-7-(4-브로모페닐)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온
Figure 112015089898473-pct00035
(I-4)
중간체 4A: ((1R,3R)-1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜틸)메탄올
Figure 112015089898473-pct00036
(I-4A)
(1R,3R)-메틸 1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜탄카르복실레이트 (I-2, 3.88 g, 13.01 mmol)를 MeOH (65.1 ml) 중에 용해시키고, 수소화붕소나트륨 (1.477 g, 39.0 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 반응이 HPLC 분석에 의해 완결된 것으로 결정될 때까지 추가의 수소화붕소나트륨을 조금씩 첨가하였다 (1시간마다 0.5 당량). 반응은 2시간 후에 완결된 것으로 나타났다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 희석하였다. 수성 층을 EtOAc로 3회 역추출하였다. 유기 층을 합하고, 포화 NaCl로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 ((1R,3R)-1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜틸)메탄올 (3.19 g, 11.81 mmol)을 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 0.68분;
Figure 112015089898473-pct00037
중간체 4: (5R,7R)-7-(4-브로모페닐)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온
((1R,3R)-1-아미노-3-(4-브로모페닐)시클로펜틸)메탄올 (I-4A, 3.19 g, 11.81 mmol)을 THF (59.0 ml) 중에 용해시켰다. 피리딘 (0.955 ml, 11.81 mmol) 및 1,1'-카르보닐디이미다졸 (5.74 g, 35.4 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하고, 이어서 LCMS하였다. 완결된 후, 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 1M HCl로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 역추출하였다. 유기 층을 합하고, 포화 NaCl로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (5R,7R)-7-(4-브로모페닐)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 (2.5 g, 8.44 mmol)을 플래쉬 크로마토그래피 (24g 실리카 겔 칼럼; 용리액: 헥산 2 CV에 이어서 15 CV에 걸친 100% EtOAc로의 구배) 후에 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 0.91분;
Figure 112015089898473-pct00038
중간체 5
(5R,7S)-7-(6-옥소-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온
Figure 112015089898473-pct00039
(I-5)
중간체 5A: tert-부틸 2-(4-((5R,7S)-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-7-일) 페닐)아세테이트
Figure 112015089898473-pct00040
(I-5A)
실온에서 디옥산 (10 mL) 중 (5R,7S)-7-(4-브로모페닐)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 (I-3, 1 g, 3.38 mmol)의 혼합물에 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (3.71 mL, 3.71 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반한 다음, 1,2,3,4,5-펜타페닐-1'-(디-t-부틸포스피노)페로센 (0.121 g, 0.169 mmol), Pd2(dba)3 (0.155 g, 0.169 mmol) 및 (2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)아연(II) 클로라이드 (8.10 mL, 4.05 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 1M HCl로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 카트리지 (40 g) 상에서 EtOAc/헥산 구배 (0-100% EtOAc, 20분에 걸침)을 사용하여 정제하여 tert-부틸 2-(4-((5R,7S)-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-7-일)페닐)아세테이트 950 mg을 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 0.93분 (조건 G); LC/MS M+1 = 332.
중간체 5B: 2-(4-((5R,7S)-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-7-일)페닐)아세트산
Figure 112015089898473-pct00041
(I-5B)
DCM (20 mL) 중 tert-부틸 2-(4-((5R,7S)-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-7-일)페닐)아세테이트 (I-5A, 1 g, 3.02 mmol)의 혼합물에 TFA (10 mL)를 첨가하였다. 2시간 후, 용액을 진공 하에 농축시키고, 후속 단계에 추가 정제 없이 그대로 사용하였다. HPLC 체류 시간 = 0.65분 (조건 G); LC/MS M+1 = 276.
중간체 5: (5R,7S)-7-(6-옥소-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온
DCM (20 mL) 중 2-(4-((5R,7S)-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-7-일)페닐)아세트산 (I-5B, 800 mg, 2.91 mmol)의 혼합물에 옥살릴 클로라이드 (1 ml, 11.42 mmol) 및 몇 방울의 DMF를 첨가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 유리 압력 용기 내 DCM (20 mL) 중에 재용해시켰다. 과립상 염화알루미늄 (1550 mg, 11.62 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시켰다. 에틸렌을 용액을 통해 5분 동안 버블링한 다음, 반응 용기를 밀봉하였다. 반응 혼합물을 실온으로 천천히 가온되도록 하고, 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 얼음에 붓고, 디클로로메탄으로 희석하고, 1M HCl로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 카트리지 (80 g) 상에서 MeOH/DCM 구배 (0-10% MeOH, 13CV에 걸침)을 사용하여 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 수집하고, 진공 하에 건조시켜 (5R,7S)-7-(6-옥소-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 770 mg을 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 0.74분 (조건 G);
Figure 112015089898473-pct00042
중간체 6
6-((5R,7S)-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-7-일)-3,4-디히드로나프탈렌-2-일 트리플루오로메탄술포네이트
Figure 112015089898473-pct00043
(I-6)
-78℃에서 THF (10 mL) 중 (5R,7S)-7-(6-옥소-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 (I-5, 340 mg, 1.192 mmol) 및 DMPU (0.431 mL, 3.57 mmol)의 혼합물에 LDA (1.456 mL, 2.62 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반한 다음, THF (10 mL) 중 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸)술포닐 메탄술폰아미드 (639 mg, 1.787 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 가온하였다. 1시간 후, 반응물을 물로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 수성 NaCl로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 카트리지 (40 g) 상에서 EtOAc/헥산 구배 (0-100% EtOAc, 20분에 걸침)를 사용하여 정제하여 6-((5R,7S)-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-7-일)-3,4-디히드로나프탈렌-2-일 트리플루오로메탄술포네이트 400 mg을 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 1.01분 (조건 G);
Figure 112015089898473-pct00044
중간체 7
(5R,7R)-7-(6-옥소-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온
Figure 112015089898473-pct00045
(I-7)
중간체 7A: tert-부틸 2-(4-((5R,7R)-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-7-일)페닐)아세테이트
Figure 112015089898473-pct00046
(I-7A)
실온에서 THF (25.3 ml) 중 (5R,7R)-7-(4-브로모페닐)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 (중간체 4, 2.1 g, 7.09 mmol)의 용액에 LiHMDS (7.80 ml, 7.80 mmol)를 첨가하였다. 용액을 15분 동안 교반하였다. 다음에, Pd2(dba)3 (0.195 g, 0.213 mmol), 1,2,3,4,5-펜타페닐-1'-(디-t-부틸포스피노)페로센 (0.151 g, 0.213 mmol) 및 (2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)아연(II) 브로마이드, 테트라히드로푸란 (7.07 g, 21.27 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 슬러리를 24℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 완전한 소모를 나타내었다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 1M HCl로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 카트리지 (40 g) 상에서 25 CV에 걸쳐 헥산: 아세톤 100:0에서 0:100을 사용하여 정제하였다. tert-부틸 2-(4-((5R,7R)-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-7-일)페닐)아세테이트 (2.35 g, 7.09 mmol)를 단리시켰다. HPLC 체류 시간 = 0.95분 (조건 I):
Figure 112015089898473-pct00047
중간체 7: (5R,7R)-7-(6-옥소-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온
갈색 액체 tert-부틸 2-(4-((5R,7R)-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-7-일)페닐)아세테이트 (I-7A, 2.35 g, 7.09 mmol)를 DCM (60 mL) 중에 용해시키고, 이어서 트리플루오로아세트산 (20 mL, 260 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였으며, 이 때 용매를 감압 하에 제거하였다. 생성된 물질을 DCM (60 mL)으로 희석하고, 산/염기 추출에 의해 정제하고, 진공 하에 1시간 동안 두었다. 생성된 갈색 검 2-(4-((5R,7R)-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-7-일)페닐)아세트산 (1.952 g, 7.09 mmol)을 DCM (60 mL) 중에 용해시키고, 이어서 옥살릴 클로라이드 (1.862 mL, 21.27 mmol) 및 DMF (0.027 mL, 0.355 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 기체의 발생이 그칠 때까지 (약 30분) 교반하였다. MeOH로 켄칭된 분취액의 LCMS는 산의 완전한 소모 (RT = 0.65분, 조건 I), 및 메탄올 켄칭으로 인한, 유일한 생성물로서 추정된 메틸 에스테르의 출현 (RT = 0.77분, 조건 I)을 나타내었다. 용매를 감압 하에 제거하고, 생성물을 진공 하에 두었다. 갈색 검을 밀봉된 튜브에 DCM (60 mL)과 함께 옮겼다 (완전히 용해되지 않고, 갈색 현탁액이 수득됨). 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, 이어서 과립상 염화알루미늄 (2.84 g, 21.27 mmol)을 첨가하였다. 에틸렌을 용액을 통해 7분 동안 버블링하고, 튜브를 밀봉하였다. 형성된 침전물 및 반응 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반한 다음, 실온에 도달하도록 하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 감압시켰다. LCMS 분석은 출발 물질의 소멸 및 테트랄론 생성물의 출현을 나타내었다. 반응 혼합물을 얼음에 붓고, DCM으로 희석하고, 얼음이 녹을 때까지 교반하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 정제하여 (5R,7R)-7-(6-옥소-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 (1.05 g, 3.68 mmol)을 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 0.74분 (조건 I);
Figure 112015089898473-pct00048
중간체 8
(1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메탄올
Figure 112015089898473-pct00049
(8)
중간체 8A: 6-아이오도-3,4-디히드로나프탈렌-1(2H)-온
Figure 112015089898473-pct00050
(I-8A)
아세트산 (150 mL) 및 물 (150 mL) 중 6-아미노-3,4-디히드로나프탈렌-1(2H)-온 (15 g, 93 mmol)의 교반된 투명한 용액에 0℃에서 황산 (5.5 mL, 101 mmol)을 적가하였다. 이어서, 물 (100 mL) 중 아질산나트륨 (12.90 g, 187 mmol)의 용액을 40분에 걸쳐 동일한 온도에서 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반한 후, 0℃에서 2시간에 걸쳐 물 (600 mL) 중 아이오딘화나트륨 (55.8 g, 372 mmol)의 교반 용액에 천천히 첨가하였다. 생성된 갈색 현탁액을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (400 mL, 2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 추출물을 물 (60 mL), 포화 수성 Na2S2O3 용액 (갈색이 사라질 때까지) 및 포화 수성 K3PO4 (60 mL) 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (330g 실리카 겔 칼럼, 헥산 중 5에서 15% 에틸 아세테이트의 구배로 용리함)에 의해 정제하여 6-아이오도-3,4-디히드로나프탈렌-1(2H)-온 (17.3 g, 63.6 mmol)을 고체로서 수득하였다. LC/MS M+1 = 273.
중간체 8B: (S)-N-(6-아이오도-3,4-디히드로나프탈렌-1(2H)-일리덴)-2-(메톡시메틸) 피롤리딘-1-아민
Figure 112015089898473-pct00051
(I-8B)
6-아이오도-3,4-디히드로나프탈렌-1(2H)-온 (I-8A, 20.90 g, 77 mmol), p-톨루엔술폰산 1수화물 (0.584 g, 3.07 mmol) 및 시클로헥산 (40 mL)의 교반 혼합물에 질소 하에 실온에서 (S)-2-(메톡시메틸)피롤리딘-1-아민 (10 g, 77 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 물의 공비 제거와 함께 5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (15 mL)과 혼합하였다. 수성 층을 분리하고, 에틸 아세테이트 (2 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (330g 실리카 겔 칼럼, 헥산 중 0%에서 20% EtOAc의 구배로 용리함)에 의해 정제하여 (S)-N-(6-아이오도-3,4-디히드로나프탈렌-1(2H)-일리덴)-2-(메톡시메틸)피롤리딘-1-아민 (29.1 g, 76 mmol)을 황색 액체로서 수득하였다. LC/MS M+1 = 385.
중간체 8C: (R)-2-헥실-6-아이오도-3,4-디히드로나프탈렌-1(2H)-온
Figure 112015089898473-pct00052
(I-8C)
무수 테트라히드로푸란 (250 mL) 중 디이소프로필아민 (19.43 mL, 136 mmol)의 교반 용액에 질소 하에 0℃에서 부틸 리튬 용액 (헥산 중 2.5 M, 39.4 mL, 98 mmol)을 적가하였다. 생성된 용액을 동일한 온도에서 15분 동안 교반한 후, 무수 테트라히드로푸란 (100 mL) 중 (S)-N-(6-아이오도-3,4-디히드로나프탈렌-1(2H)-일리덴)-2-(메톡시메틸)피롤리딘-1-아민 (I-8B, 29.1 g, 76 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 용액을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 테트라히드로푸란 (50 mL) 중 1-아이오도헥산 (22.35 mL, 151 mmol)의 용액을 -78℃에서 적가하고, 혼합물을 동일한 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 온도를 1.5시간에 걸쳐 실온으로 상승시켰다. 반응 혼합물을 포화 수성 염화암모늄 용액 (50 mL) 및 물 (50 mL)로 켄칭하였다. 혼합물을 헥산 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 추출물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 오일을 수득하였다. 오일을 THF (200 mL) 중에 용해시켰다. 물 (220 mL) 중 염화제2구리, 2수화물 (52 g)의 용액을 0℃에서 적가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 격렬히 교반하였다. 수성 암모니아 용액을 첨가하여 pH를 대략 9로 상승시켰다. 혼합물을 헥산 (100 mL) 및 디에틸 에테르 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 추출물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (330 g 실리카 겔 칼럼, 헥산 중 0에서 15% EtOAc의 구배로 용리함)로 정제하여 일부 (S) 이성질체 (이는 후속 단계에서 제거함)를 함유하는 (R)-2-헥실-6-아이오도-3,4-디히드로나프탈렌-1(2H)-온 (21.6 g, 60.6 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS M+1 = 357.
중간체 8D: (R)-2-헥실-6-아이오도-1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌
Figure 112015089898473-pct00053
(I-8D)
디클로로메탄 (10 mL) 및 100% EtOH (100 mL) 중 (R)-2-헥실-6-아이오도-3,4-디히드로나프탈렌-1(2H)-온 (I-8C, 21.6 g, 60.6 mmol)의 교반 용액에 수소화붕소나트륨 (4.59 g, 121 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 아세톤을 천천히 첨가하여 (수조로 냉각시키면서) 켄칭하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 포화 수성 염화암모늄 용액 (100 mL) 및 물 (50 mL)과 혼합하고, 에틸 아세테이트 (100 mL, 2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 추출물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 오일을 수득하였다. 오일을 트리에틸실란 (70 mL, 438 mmol) 중에 용해시켰다. TFA (100 mL, 1298 mmol)를 격렬히 교반하면서 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 물 (150 mL)을 첨가한 후, 혼합물을 헥산 (100 mL, 2 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 추출물을 물 (50 mL)에 이어서 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 황색 액체를 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (330g 실리카 겔 칼럼, 헥산 중 0에서 12% EtOAc의 구배로 용리함)에 의해 정제하여 (R)-2-헥실-6-아이오도-1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌 (18.4 g, 53.8 mmol)을 무색 액체로서 수득하였다.
Figure 112015089898473-pct00054
키랄 SFC 분리 (키랄팩® AS-H 25 x 3.0 cm, 5μm, CO2/MeOH =95/5, 180mL/min, 230 nm)로 (R)-2-헥실-6-아이오도-1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌 (11.8 g, PK2) 및 그의 (S)-이성질체 (1.4 g, PK1)를 액체로서 수득하였다.
중간체 8E: 3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜타논
Figure 112015089898473-pct00055
(I-8E)
질소 기체를 (R)-2-헥실-6-아이오도-1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌 (I-8D, 11.8 g, 34.5 mmol), 테트라부틸암모늄 클로라이드 (9.58 g, 34.5 mmol), 아세트산칼륨 (10.15 g, 103 mmol), 아세트산팔라듐 (II) (0.774 g, 3.45 mmol) 및 무수 DMF (100 mL)의 혼합물을 통해 3분 동안 버블링한 후에, 시클로펜트-2-엔올 (6.8 g, 81 mmol, 문헌 [Larock, R.C. et al., Tetrahedron, 50(2):305-321 (1994)]에 따라 제조됨)을 첨가하였다. 질소 기체를 용액을 통해 추가로 2분 동안 버블링하였다. 혼합물을 질소 하에 80℃에서 2.5시간 동안 교반한 다음, 농축시켜 DMF를 제거하였다. 잔류물을 물 (150 ml)과 혼합하고, 에틸 아세테이트 (4 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 용액을 물 (30 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 실리카 겔 패드를 통해 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (220 g 실리카 겔 칼럼, 헥산 중 5에서 50% 에틸 아세테이트의 구배로 용리함)에 의해 정제하여 3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일) 시클로펜타논 (5.96 g, 19.97 mmol)을 수득하였다. LC/MS M+1 = 299.
중간체 8F: 메틸 1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일) 시클로펜탄카르복실레이트
Figure 112015089898473-pct00056
(I-8F)
3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜타논 (I-8E, 5.96 g, 19.97 mmol), 염화암모늄 (5.34 g, 100 mmol), 시안화나트륨 (4.89 g, 100 mmol), 암모니아의 7 M 메탄올 용액 (28.5 ml, 200 mmol) 및 디클로로메탄 (15 mL)의 혼합물을 실온에서 1일 동안 교반하였다. 추가의 암모니아의 7 M 메탄올 용액 (15 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1일 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (70 mL)와 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (100 mL) 사이에 분배하였다. 수성 층을 분리하고, 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 용액을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일) 시클로펜탄카르보니트릴을 반고체로서 수득하였다. 반고체 물질을 진한 염산 (56 ml, 1843 mmol), 물 (28 ml, 1554 mmol), 아세트산 (35 ml) 및 디옥산 (35 ml)의 혼합물과 혼합하였다. 혼합물을 질소 하에 100℃에서 10시간 동안 교반한 다음, 농축시켜 고체를 수득하였다. 고체를 메탄올 (20 mL) 중에 용해시키고, 톨루엔 (20 mL)과 혼합하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 이 건조 절차를 1회 더 반복하여 건조 고체를 수득하였다. 고체를 무수 메탄올 (300 mL) 중에 용해시켰다. 티오닐 클로라이드 (11.66 mL, 160 mmol)를 질소 하에 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 7시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (100 mL) 및 약간의 탄산칼륨 고체에 의해 염기성화시키고, 에틸 아세테이트 (100 mL, 3 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 추출물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (80 g 실리카 겔 칼럼, 헥산 중 20에서 100% 에틸 아세테이트의 구배로 용리함)에 의해 정제하여 메틸 1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜탄카르복실레이트 (5.7 g, 15.94 mmol)를 액체로서 수득하였다. LC/MS M+1 = 358.
중간체 8:
메틸 1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일) 시클로펜탄카르복실레이트 (I-8F, 5.7 g, 16 mmol)를 EtOH (60 mL) 및 메틸렌 클로라이드 (15 mL) 중에 용해시켰다. 수소화붕소나트륨 (2.5 g, 67 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 염산 (6 N 수성, 40 mL)을 0℃에서 천천히 첨가하여 pH를 대략 1로 만들었다. 혼합물을 실온에서 60분 동안 교반한 후, 수산화나트륨 (물 20 mL 중 10g)을 첨가하여 pH를 대략 12로 만들었다. 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반한 다음, 농축시켜 유기 용매를 제거하였다. 수성 잔류물을 물 (20 mL)로 희석하고, EtOAc (100 mL, 2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 추출물을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 목탄에 의해 탈색시키고, 셀라이트® 패드를 통해 여과하고, 감압 하에 농축시켜 (1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메탄올 (5.0 g, 15 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
실시예 1 및 2 및 화합물 3 및 4
중간체 8을 키랄 SFC (칼럼: 키랄팩® AD-H 25 x 3cm, 5μm; 이동상: CO2/ (MeOH +0.1%DEA) =88/12;유량: 200 mL/min; 검출기 파장: 220 nm; 칼럼 온도: 35℃)를 사용하여 3개 분획: F1 (피크 1), F2 (피크 2 및 피크 3), F3 (피크 4))으로 분리하였다. 제2 분획 (F2)을 키랄 SFC (칼럼: 키랄팩® AS-H 25 x 3cm, 5μm; 이동상: CO2/ [MeOH-MeCN (1:1) +0.5% DEA] =88/12; 유량:180mL/min; 검출기 파장: 220 nm; 칼럼 온도: 35℃)를 사용하여 다시 분리하여 피크 2 및 피크 3을 수득하였다. 모든 4종의 이성질체는 LC/MS M+1 = 330을 갖는 백색 고체였다.
실시예 1 (피크 2):
Figure 112015089898473-pct00057
실시예 2 (피크 4):
Figure 112015089898473-pct00058
화합물 3 (피크 1):
Figure 112015089898473-pct00059
화합물 4 (피크 3):
Figure 112015089898473-pct00060
화합물 5-8을 아이오다이드 중간체 I-8D의 (S)-거울상이성질체 (PK1)를 사용하여 중간체 8, 실시예 1-2 및 화합물 3-4에 대한 일반적 합성 및 분리 절차에 따라 제조하였다. 모든 4종의 이성질체 (화합물 5-8)는 MW = 329.5; LC/MS M+1 = 330; HPLC 조건: C를 가졌다.
<표 1>
Figure 112015089898473-pct00061
<표 2>
Figure 112015089898473-pct00062
실시예 2의 대안적 제조
제조예 2A: (5R,7S)-7-(6-헥실-7,8-디히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온
Figure 112015089898473-pct00063
(2A)
-40℃에서 THF (20 mL) 중 6-((5R,7S)-2-옥소-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-7-일)-3,4-디히드로나프탈렌-2-일 트리플루오로메탄술포네이트 (중간체 6, 1 g, 2.396 mmol) 및 NMP (2.306 mL, 23.96 mmol)의 혼합물에 THF 중 리튬 비스(트리메틸실릴) 아미드의 용액 (2.396 mL, 2.396 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, 제2철 아세틸아세토네이트 (0.042 g, 0.120 mmol) 및 에테르 중 헥실마그네슘 브로마이드 (2.396 mL, 4.79 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하고, 물로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 1M HCl로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 카트리지 (40 g) 상에서 EtOAc/헥산 구배 (0-100% EtOAc, 12 CV에 걸침)를 사용하여 정제하여 (5R,7S)-7-(6-헥실-7,8-디히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 662 mg을 백색 고체로서 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 1.28분 (조건 G);
Figure 112015089898473-pct00064
제조예 2B: (5R,7S)-7-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온
Figure 112015089898473-pct00065
(2B)
MeOH (27 mL) 중 (5R,7S)-7-(6-헥실-7,8-디히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 (2A, 760 mg, 2.15 mmol) 및 (-)-2,3-비스[(2R,5R)-2,5-디메틸포스폴라닐]-N-[3,5-비스(트리플루오로메틸)페닐]말레산 이미드(1,5-시클로옥타디엔)로듐(I) 테트라플루오로보레이트 (273 mg, 0.43 mmol)의 혼합물을 850 PSI에서 1000분 동안 100 mL HEL 오토클레이브를 사용하여 수소화시켰다. 반응 혼합물을 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 카트리지 (40 g) 상에서 EtOAc/헥산 구배 (0-100% EtOAc, 20분에 걸침)를 사용하여 정제하여 (5R,7S)-7-(6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 640 mg을 1:2 비율의 2종 이성질체로 수득하였다. 목적하는 주요 이성질체를 SFC 조건 (CO2 중 35% MeOH) 하에 키랄팩® AS-H 칼럼을 사용하여 분리하였다. 체류 시간 = 5.14분. (5R,7S)-7-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 400 mg을 회수하였다.
Figure 112015089898473-pct00066
제조예 2B의 대안적 제조:
DCM (10ml) 중 (5R,7S)-7-(6-헥실-7,8-디히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 (2A, 2.1g, 5.94 mmol)의 혼합물을 DCM (30 ml) 중 ((1R,2S,3R,5R)-2,6,6-트리메틸비시클로[3.1.1]헵탄-3-일)보란의 용액에 질소 하에 -35℃에서 적가하였다. (보란 시약을 다음에 따라 제조하였다: THF (35ml) 중 S-알핀-보라민 (8.4g, 20.18 mmol)의 혼합물에 실온에서 BF3 에테레에이트 (5.11ml, 40.4mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 질소 하에 여과하고, 케이크를 차가운 THF (2x6ml)로 세척하였다. 여과물 및 세척물을 합하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물에 DCM (20 ml)을 첨가하고, 용액을 다시 농축시켰다. 수득한 시약을 DCM (30 ml) 중에 재용해시키고, 직접 히드로붕소화 단계 에 사용하였다). -35℃ 내지 -30℃에서 4시간 동안, 그리고 -25℃ 내지 -20℃에서 2시간 동안 교반한 후, MeOH (3.6 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 -10℃에서 10분 동안 교반하고, 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 THF (25 ml)로 희석한 다음, NaOH의 용액 (6N, 9.9 ml, 59.4 mmol) 및 이어서 H2O2 (30%, 6.07ml, 59.4mmol)를 적가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물에 DCM (100 ml) 및 물 (50 ml)을 첨가하였다. 전체 용액을 셀라이트®의 패드를 통해 여과하고, 케이크를 DCM으로 세척하였다. 2개의 층을 분리하고, 수성 층을 DCM (50 ml)으로 추출하고, 이를 유기 층과 합하였다. 합한 유기 층을 물 (100 ml) 및 염수 (100 ml)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 카트리지 (40 g) 상에서 EtOAc/헥산 구배 (0-50% EtOAc, 55분에 걸침)를 사용하여 정제하여 (5R,7S)-7-(6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 1.9 g (86%)을 8:1 비율의 2종 이성질체로 수득하였다. 혼합물을 후속 단계에 부분입체이성질체의 분리 없이 사용하였다.
MeOH (30 ml) 중 (5R,7S)-7-(6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 (3.2g, 8.61 mmol)에 Pd/C (10%, 1.1g)를 첨가하였다. 가벼운 진공을 반응 플라스크에 적용한 다음, 수소 풍선으로부터의 수소로 다시 채웠다. 실온에서 6시간 동안 교반한 후, EtOAc (20 ml)를 첨가하여 침전물을 용해시켰다. 가벼운 진공을 반응 플라스크 적용한 다음, 수소 풍선으로부터의 수소로 다시 채우고, 내용물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트®의 패드를 통해 여과하고, 케이크를 EtOAc, DCM, MeOH 및 EtOAc로 세척하였다. 합한 용매를 진공 하에 농축시켜 조 혼합물 (3.06g)을 8:1 부분입체이성질체 혼합물로서 수득하였다. 주요 이성질체를 SFC 조건 (CO2 중 35% MeOH) 하에 키랄팩® AS-H 칼럼을 사용하여 분리하였다. 체류 시간 = 4.64분. (5R,7S)-7-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 2.35g (77%)을 회수하였다.
실시예 2:
디옥산 (30 mL) 중 (5R,7S)-7-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 (400 mg, 1.125 mmol)의 혼합물에 수성 NaOH (1N, 20 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 3일 동안 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 카트리지 (24 g) 상에서 DCM 중 20% (2N NH3/MeOH)/DCM 구배 (DCM 중 0-75%의 20% (2N NH3/MeOH), 13 CV에 걸침)를 사용하여 정제하여 ((1R,3S)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메탄올 290 mg을 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 10.09분 (조건 H);
Figure 112015089898473-pct00067
실시예 2, 유리 염기, 형태 N-1:
실시예 2, 유리 염기, 형태 N-1을 18 ml THF 및 1.25 ml H2O의 혼합물 중 용해시킨 실시예 2 385 mg을 함유하는 원액 (20 mg/ml)을 제조함으로써 수득하였다. 다음에, 원액 52 μl를 증발 건조시켰다. 건조된 물질에 50:50 비율 에탄올:헵탄 용액 52 μl를 첨가하였다. 생성된 용액을 증발시켜 결정질 물질의 판을 수득하였다.
실시예 2, 모노-HCl 염, 1수화물, 형태 H-1:
실시예 2, 모노-HCl 염, 1수화물, 형태 H-1을 실시예 2 3.2 mg을 함유하는 50:50 수성 메탄올 (200 μl) 용액을 제조함으로써 수득하였다. 다음에, 0.025M 수성 HCl 용액 400 μl를 교반하면서 적가하였다. 생성된 용액을 증발시켜 결정질 물질의 판을 수득하였다.
실시예 2, 모노-HCl 염, 1수화물, 형태 H-2:
실시예 2, 모노-HCl 염, 1수화물, 형태 H-2를 실시예 2 3.2 mg을 함유하는 50:50 수성 THF (200μl) 용액을 제조함으로써 수득하였다. 다음에, 0.025M 수성 HCl 용액 400μl를 교반하면서 적가하였다. 이어서, 용액을 증발시켜 실시예 2의 모노-HCl 염의 1수화물의 H-2 형태의 판을 수득하였다.
실시예 2, 모노-HCl 염, 형태 N-3:
실시예 2의 모노-HCl 염, 형태 N-3을 실시예 2 3.2 mg을 함유하는 이소프로필 알콜의 200μl 용액을 제조함으로써 수득하였다. 다음에, 0.025 M 알콜성 HCl 용액 400 μl를 교반하면서 적가하였다. 용액을 증발시켜 실시예 2의 모노-HCl 염의 N-3 형태의 판을 수득하였다.
실시예 2, 모노-HCl 염, 형태 N-4:
실시예 2의 모노-HCl 염, 형태 N-3을 실시예 2 3.2 mg을 함유하는 50:50 메탄올/THF 용액 200 μl를 제조함으로써 수득하였다. 다음에, 0.025 M 알콜성 HCl 용액 400μl를 교반하면서 적가하였다. 생성된 용액을 증발시켜 실시예 2의 모노-HCl 염의 N-4 형태의 판을 수득하였다.
실시예 2, 1수화물, 헤미-L-말산 염, 형태 H-1:
1수화물, 헤미-L-말산 염, 형태 H-1을 실시예 2 3.2 mg을 함유하는 200 μl 50:50 수성 THF 용액을 제조함으로써 수득하였다. 다음에, 0.042 M 알콜성 L-말산 용액 240μl를 교반하면서 적가하였다. 생성된 용액을 증발시켜 실시예 2의 헤미-L-말산 염의 H-1 형태의 판을 수득하였다.
실시예 2, 1수화물, 헤미-말론산 염, 형태 H-1:
1수화물, 헤미-말론산 염, 형태 H-1을 실시예 2 3.2 mg을 함유하는 200 μl 50:50 수성 THF 용액을 제조함으로써 수득하였다. 다음에, 0.052 M 알콜성 말론산 용액 193 μl를 교반하면서 적가하였다. 생성된 용액을 증발시켜 실시예 2의 헤미-말론산 염의 H-1 형태의 판을 수득하였다.
실시예 2, 1/3-수화물, 인산 염, 형태 H.33-1:
1/3-수화물, 인산 염, 형태 H.33-1을 실시예 2 3.2 mg을 함유하는 200 μl 50:50 수성 메탄올 용액을 제조함으로써 수득하였다. 다음에, 0.073 M 알콜성 인산 용액 136 μl를 교반하면서 적가하였다. 생성된 용액을 증발시켜 실시예 2의 인산 염의 H.33-1 형태의 판을 수득하였다.
실시예 2, R-(+)-만델산 염, 형태 N-1:
R-(+)-만델산 염, 형태 N-1을 실시예 2 및 동몰량의 R-(+)-만델산을 메탄올 및 아세토니트릴의 혼합물에 첨가함으로써 제조하였다. 용액을 증발시켜 실시예 2의 모노-R-(+)-만델산 염의 N-1 형태의 판을 수득하였다.
실시예 9
((1R,3R)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메틸 디히드로겐 포스페이트
Figure 112015089898473-pct00068
(9)
0℃에서 무수 아세토니트릴 (1 mL) 중 ((1R,3R)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일) 시클로펜틸)메탄올 (실시예 1, 10 mg, 0.030 mmol)의 교반 용액에 피로포스포릴 클로라이드 (0.042 mL, 0.303 mmol)를 첨가하였다. 수득한 투명한 용액을 동일한 온도에서 5분 동안 교반하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 물 (0.4 mL)을 첨가한 후, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 역상 HPLC (루나 악시아(Luna Axia) 5μ c18 30 x 100 mm, 40%에서 100%의 용매 B의 10분 구배, 용매 A: 물 중 0.1% TFA, 용매 B: MeCN 중 0.1% TFA)를 사용하여 정제하고, 농축시키고, 동결건조시켜 ((1R,3R)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메틸 디히드로겐 포스페이트 (2 mg, 4.15 μmol, 13.68% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 3.94분 (조건 C);
Figure 112015089898473-pct00069
실시예 10
((1R,3S)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일) 시클로펜틸)메틸 디히드로겐 포스페이트
Figure 112015089898473-pct00070
(10)
오산화인 (150 mg, 0.528 mmol) 및 85% 인산 (0.15 mL, 10.01 μmol)의 혼합물을 질소 하에 100℃에서 1시간 동안 교반한 후, ((1R,3S)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메탄올 (실시예 1, 6 mg, 0.018 mmol)을 첨가하였다. 용액을 동일한 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 물 (0.5 mL)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 역상 HPLC (페노메넥스(PHENOMENEX)® 루나 악시아 5μ c18 30 x 100 mm, 10분 실행, 용매 A: 10% MeOH: 90% H2O: 0.1% TFA, 용매 B: 90% MeOH, 10% H2O, 0.1% TFA)를 사용하여 정제하고, 농축시키고, 동결건조시켜 ((1R,3S)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일) 시클로펜틸)메틸 디히드로겐 포스페이트 (4 mg, 9.38 μmol)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS M+1 = 410. HPLC 체류 시간 = 3.96분 (조건 C).
Figure 112015089898473-pct00071
실시예 10의 대안적 제조
대안적 제조예 10A: tert-부틸 ((1R,3S)-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-1-(히드록시메틸)시클로펜틸)카르바메이트
Figure 112015089898473-pct00072
(10A)
무수 디클로로메탄 (6 mL) 중 ((1R,3S)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메탄올 (실시예 2, 270 mg, 0.819 mmol)의 교반 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트 (536 mg, 2.458 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (24g 실리카 겔 칼럼, 헥산 중 10에서 60%의 에틸 아세테이트의 구배로 용리함)에 의해 정제하여 tert-부틸 ((1R,3S)-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-1-(히드록시메틸)시클로펜틸)카르바메이트 (337 mg, 0.784 mmol, 96% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LC/MS M+1 = 430.
대안적 제조예 10B: tert-부틸 ((1R,3S)-1-(((비스(2-(트리메틸실릴)에톡시)포스포릴)옥시)메틸)-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)카르바메이트
Figure 112015089898473-pct00073
(10B)
무수 메틸렌 클로라이드 (7 mL) 중 tert-부틸 ((1R,3S)-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-1-(히드록시메틸)시클로펜틸)카르바메이트 (제조예 10A, 336 mg, 0.782 mmol)의 교반 용액에 질소 하에 0℃에서 비스(2-(트리메틸실릴)에틸)디이소프로필포스포르아미다이트 (858 mg, 2.346 mmol)를 한 번에 첨가하였다. 다음에, 이어서, 1, 2, 4-1H-트리아졸 (162 mg, 2.346 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 18시간 동안 교반하였다. 용액을 0℃로 냉각시킨 후, 과산화수소 (0.781 mL, 7.82 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 및 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 메탄올 (3 mL)을 첨가하여 혼합물을 균질 용액으로 만들었다. 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 포화 수성 티오황산나트륨 용액 (5 mL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 에틸 아세테이트 (3 x 4 mL)로 추출하였다. 합한 유기 용액을 건조 (Na2SO4)시키고, 감압 하에 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (24 g 실리카 겔 칼럼, 헥산 중 5에서 25%의 에틸 아세테이트의 구배로 용리함)에 의해 정제하여 tert-부틸 ((1R,3S)-1-(((비스(2-(트리메틸실릴)에톡시)포스포릴)옥시)메틸)-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)카르바메이트 (514 mg, 0.724 mmol)를 액체로서 수득하였다.
실시예 10:
디클로로메탄 (6 mL) 중 tert-부틸 ((1R,3S)-1-(((비스(2-(트리메틸실릴)에톡시)포스포릴)옥시)메틸)-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸) 카르바메이트 (제조예 10B, 500 mg, 0.704 mmol)의 교반 용액에 TFA (6 mL)를 0℃에서 천천히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 헵탄 90 mL를 첨가하였다. 용액을 감압 하에 농축시켰다. 다음에, 메탄올 70 mL를 고체 잔류물에 첨가하고, 이어서 1N 수성 NaOH (4 mL)를 첨가하였다. 이어서, HOAc (0.4 mL)를 60℃에서 첨가하여 용액을 pH = 4로 산성화시켰다. 고체-액체 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 고체를 분리하고, 메탄올, 물, 메탄올, 에틸 아세테이트 및 메탄올로 세척하였다. 동결건조시켜 ((1R,3S)-1-아미노-3-((R)-6-헥실-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메틸 디히드로겐 포스페이트 (257 mg, 0.619 mmol, 88% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112015089898473-pct00074
비교 화합물 11
(1R,3R)-1-아미노-3-(6-(펜틸옥시)나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메탄올
Figure 112015089898473-pct00075
(11)
비교 화합물 11은 WO 2008/079382, 실시예 Q.1에 개시되어 있다.
중간체 11A: (5R,7R)-7-(6-(펜틸옥시)나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온
Figure 112015089898473-pct00076
(I-11A)
1-펜탄올 (6.13 mL, 56.4 mmol), p-톨루엔술폰산 1수화물 (4.60 mg, 0.024 mmol) 및 트리메톡시메탄 (0.353 mL, 3.22 mmol)의 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 혼합물 상에서 느린 공기 스트림 흐름과 함께 교반하여 메탄올 및 약간의 펜탄올을 제거하였다. 수득한 잔류 액체를 (5R,7R)-7-(6-옥소-5,6,7,8-테트라히드로나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 (중간체 7, 230 mg, 0.806 mmol)과 혼합하고, 질소 하에 100℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 용액을 실온으로 냉각되도록 한 후에, 탄소 상 팔라듐 (172 mg, 0.081 mmol)을 첨가하고, 이어서 에틸 아세테이트 (4 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 수소 풍선-압력 하에 교반되도록 하였다. 생성된 혼합물을 막 필터를 통해 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (24g 실리카 겔 칼럼, 헥산 중 0%에서 70% 에틸 아세테이트)로 정제하여 물질 180 mg을 수득하였고, 이는 추가 정제가 필요하였다. 초임계 유체 크로마토그래피 분리하여 UV 분석에 의해 (5R,7R)-7-(6-(펜틸옥시)나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 (36 mg)으로 확인된 주 분획을 고체로서 수득하였다. 기기: 타르 350 타르 분석용 SFC-MS; 조건: 분석 조건: 분석 칼럼: AD-H (0.46 x 25cm, 5μm); BPR 압력: 100 bars; 온도: 45℃; 유량: 3.0 mL/min; 이동상: CO2/ MeOH (70/30); 검출기 파장: UV 200-400 nm. 정제 조건: 정제용 칼럼: AD-H (3 x 25cm, 5μm); BPR 압력: 100 bar; 온도: 35℃; 유량: 120 mL/min; 이동상: CO2/ MeOH (70/30); 검출기 파장: 220 nm; 분리 프로그램: 적층 주입; 주입: 2.5mL, 순환 시간 480초. (분석용 SFC 체류 시간 = 11.68분, 순도 >99.5%) HPLC 체류 시간 = 1.11분 (조건 G);
Figure 112015089898473-pct00077
비교 화합물 11:
디옥산 (2 mL) 및 물 (0.8 mL) 중 (5R,7R)-7-(6-(펜틸옥시)나프탈렌-2-일)-3-옥사-1-아자스피로[4.4]노난-2-온 (36mg, 0.102 mmol)의 용액에 LiOH (36.6 mg, 1.528 mmol)를 첨가하였다. 용액을 90℃로 가열하고, 15시간 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트에 붓고, 물로 세척하였다. 이어서, 조 물질을 역상 HPLC [칼럼: 루나 악시아 30*100mm; 구배 시간: 10분; 유량 = 40 mL/min; 용매 A = 10% MeOH-90% 물-0.1% TFA; 용매 B = 90% MeOH-10% 물-0.1% TFA; 출발 % B = 20; 최종 % B = 100]에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 수집하고, 고진공 하에 건조시켜 ((1R,3R)-1-아미노-3-(6-(펜틸옥시)나프탈렌-2-일)시클로펜틸)메탄올, TFA (31 mg)를 고체로서 수득하였다. HPLC 체류 시간 = 0.90분 (조건 G);
Figure 112015089898473-pct00078
생물학적 검정
마우스 전혈 인산화 (WBP) 검정
화학식 III의 화합물은 화학식 II의 활성 포스페이트 에스테르 화합물을 제공하기 위해 알콜의 인산화을 통한 생물활성화가 필요하다. 문헌 [Brinkmann, V. et al., (J. Biol. Chem. 277:21453-21457 (2002)]에 따라, 탄소 중심을 보유한 아민의 입체이성질체 배위는 이러한 인산화가 발생하는 상대적 정도에 영향을 미칠 수 있다.
실시예 1-2 및 화합물 3-8의 인산화의 상대적 정도는 알콜 화합물을 마우스로부터의 전혈 중에서 인큐베이션함으로써 평가하였다. 인산화된 화합물의 출현을 4시간 후에 측정하여, 포스페이트 에스테르 형성의 상대적 정도를 평가하였다. 전혈을 BALB/C 마우스로부터 안와후 출혈에 의해 새로 채혈하고, EDTA 함유 튜브 내로 수집하였다. EDTA 처리된 전혈을 1.4 mL 폴리프로필렌 튜브 내로 96웰 포맷으로 분취하고 (샘플당 100μL), 최종 농도 10 μM을 위해 시험 화합물 (DMSO 중 1mM)로 스파이킹하였다 (화합물당 n=2). 튜브를 밀봉하고, 와류시킨 다음, 37℃, 225 RPM에서 4시간 동안 인큐베이션하기 위해 오비탈 진탕기에 옮겼다. 인큐베이션 말미에, 샘플을 알스트롬(Ahlstrom) 226 미처리 시편 수집 페이퍼 상에 스팟팅하고 (스팟당 25μL, n=2), 밤새 공기 건조되도록 하였다. 건조 혈반(Dried Blood Spot; DBS) 카드를 건조제가 첨가된 밀봉된 플라스틱 백 내에 주위 온도에서 저장하였다. 분석을 위한 준비가 되면, 6 mm 펀치 (습윤 혈액 12.5μl와 동등함)를 n=1에서 취하고, 얕은 96-웰 필터 플레이트에 위치시켰다. 그 다음, 내부 표준물을 함유한, 75% 아세토니트릴 및 25% 물의 혼합물 105 μL를 첨가하고, 30분 동안 부드럽게 와류시킨 다음 원심분리하였다. 상청액을 단백질 펠릿으로부터 분리하고, 5 μl를 주입하였다. 모 (알콜) 및 활성 포스페이트 에스테르 화합물을 트리플 콰드라폴 인스트루먼트(Triple Quadrapole Instrument) 상에서 LC/MS/MS에 의해 DBS 검정 곡선을 사용하여 정량적으로 분석하였다. 인산화 화합물 대 모 (알콜) 화합물의 면적비를 결정하였다. 인산화 화합물 대 모 (알콜) 화합물의 비에 대한 값이 더 클수록 모 (알콜) 화합물로부터 포스페이트 에스테르 화합물 형성이 더 크다는 것을 나타내었다. 표 2는 4시간에서 실시예 1-2 및 화합물 3-8에 대한 결과 (2개 실험의 평균)를 나타낸다. 실시예 1-2 및 화합물 6의 경우에, 4시간에서 모 (알콜) 화합물로부터 포스페이트 에스테르 화합물 형성의 면적비는 적어도 0.59이다. 반면, 화합물 3-5 및 7-8의 경우에 모 (알콜) 화합물로부터 포스페이트 에스테르 화합물 형성의 면적비는 0.17 이하였다. 이 연구에서, 실시예 1-2 및 화합물 6은 화합물 3-5 및 7-8보다 더 큰 정도의 인산화를 겪는 것으로 밝혀졌다.
<표 2>
마우스 전혈 인산화 - 인산화 정도
Figure 112015089898473-pct00079
마우스에서의 생체내 포스페이트 에스테르 형성
BALB/c 마우스에게 실시예 1, 실시예 2, 화합물 3 및 화합물 4 (비히클, 폴리에틸렌 글리콜 300, "PEG300" 중 용액 또는 현탁액으로서 10 mg/kg)를 경구로 투여하였다. 혈액을 24시간에 채혈하고, 건조 혈반 (DBS) 카드 상에 스팟팅하고, WBP 검정에 대해 기재된 바와 같이 분석하였다. 참조 물질 (모 알콜 및 포스페이트 에스테르)을 분석하여 LC-MS/MS 검정을 최적화하고, 데이터를 농도로 보고하는 것이 가능하였다. 모 알콜 및 포스페이트 에스테르 화합물 둘 다를 함유한 DBS 표준 곡선을 준비하고, 연구 샘플과 동일한 방식으로 분석하고, 최적화된 LC-MS/MS에 의해 분석하여 형성된 포스페이트 에스테르 화합물의 양을 정량화하였다. 표 3에서의 결과는 각 치료군 내의 모든 동물 (n = 3)의 평균 결과를 나타낸다. 포스페이트 에스테르 화합물 농도에 대한 값이 더 클수록 모 (알콜) 화합물로부터 포스페이트 에스테르 화합물 형성이 더 큰 것으로 나타났다. 이 연구에서, 실시예 1-2는 화합물 3-4보다 더 큰 정도의 포스페이트 에스테르 형성을 겪는 것으로 밝혀졌다. 이러한 생체내 연구의 결과는 상기 마우스 전혈 인산화 연구에서 획득한 결과와 일치한다.
<표 3>
마우스에서의 생체내 포스페이트 형성
Figure 112015089898473-pct00080
S1P1 결합 검정
막을 인간 S1P1을 발현하는 CHO 세포로부터 준비하였다. 세포 펠릿 (1x109개 세포/펠릿)을 20 mM HEPES (4-(2-히드록시에틸)-1- 피페라진에탄술폰산), pH 7.5, 50 mM NaCl, 2 mM EDTA (에틸렌디아민테트라아세트산) 및 프로테아제 억제제 칵테일 (로슈(Roche))을 함유한 완충제 중에 현탁시키고, 폴리트론(Polytron) 균질화기를 사용하여 얼음 상에서 분쇄하였다. 균질물을 20,000 rpm (48,000g)에서 원심분리하고, 상청액을 따라버렸다. 막 펠릿을 50 mM HEPES, pH 7.5, 100 mM NaCl, 1 mM MgCl2, 2 mM EDTA를 함유한 완충제 중에 재현탁시키고, 단백질 농도 결정 후에 -80℃에서 분취액으로 저장하였다.
검정 완충제 (50 mM HEPES, pH7.4, 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 0.5% 지방산 무함유 BSA(소 혈청 알부민), 1 mM NaF) 중에 희석된 막 (2 μg/웰) 및 0.03 nM 최종 농도의 33P-S1P 리간드 (1 mCi/ml, 퍼킨 엘머(Perkin Elmer) 또는 아메리칸 라디오라벨드 케미칼스(American Radiolabeled Chemicals))를 화합물 플레이트 (384 팔콘(FALCON)® v-바닥 플레이트 (11개 포인트에서 0.5 μl/웰, 3-배 희석))에 첨가하였다. 결합을 실온에서 45분 동안 수행하고, 384-웰 밀리포어(Millipore) FB 필터 플레이트 상에 막을 수집함으로써 종결시키고, 방사성을 탑카운트(TOPCOUNT)®에 의해 측정하였다. 농도 범위에 걸친 시험 화합물의 경쟁 데이터를 방사성리간드 특이적 결합의 억제 백분율로서 플롯팅하였다. IC50은 특이적 결합을 50% 감소시키는데 필요한 경쟁 리간드의 농도로서 정의된다. 실시예 10에 대한 IC50은 0.01 nM인 것으로 결정되었다.
수용체 [35S] GTPγS 결합 검정
화합물을 384 팔콘® v-바닥 플레이트 (11 포인트에서 0.5 μl/웰, 3-배 희석) 상에 로딩하였다. S1P1/CHO 세포 또는 EDG3-Ga15-bla HEK293T 세포 (EDG3은 S1P3의 등가물임)로부터 제조된 막을 화합물 플레이트 (40 μl/웰, 최종 단백질 3 μg/웰)에 멀티드롭(MULTIDROP)®을 사용하여 첨가하였다. [35S]GTP (1250 Ci/mmol, 퍼킨 엘머)를 검정 완충제: 20 mM HEPES, pH7.5, 10 mM MgCl2, 150 mM NaCl, 1 mM EGTA(에틸렌 글리콜 테트라아세트산), 1 mM DTT(디티오트레이톨), 10 μM GDP, 0.1% 지방산 무함유 BSA 및 10 μg/ml 사포린 중에 0.4 nM로 희석하였다. 40 μl의 [35S] GTP 용액을 화합물 플레이트에 최종 농도 0.2 nM로 첨가하였다. 반응을 실온에서 45분 동안 유지하였다. 인큐베이션 말미에, 화합물 플레이트 내의 모든 혼합물을 밀리포어(Millipore) 384-웰 FB 필터 플레이트에 벨로시티(VELOCITY)11® Vprep 액체 취급기를 통해 옮겼다. 필터 플레이트를 다양한 엠블라(Embla) 플레이트 세척기를 사용함으로써 물로 4회 세척하고, 60℃에서 45분 동안 건조시켰다. 마이크로신트(MicroScint) 20 섬광 유체 (30 μl)를 팩커드(Packard) 탑카운트® 상에서의 카운팅을 위해 각 웰에 첨가하였다. EC50은 시험된 각 개별 화합물에 대해 획득한 Ymax (최대 반응)의 50%에 상응하는 효능제 농도로서 정의된다. 실시예 10에 대한 EC50은 S1P1/CHO 세포로부터 제조된 막을 사용하는 검정에서 0.9 nM인 것으로 결정되었다. 실시예 10에 대한 EC50은 EDG3-Ga15-bla HEK293T 세포로부터 제조된 막을 사용하는 검정에서 >62,500 nM인 것으로 결정되었다.
GTPγS S1P1 EC50 값에 대한 값이 더 작을수록 GTPγS S1P1 결합 검정에서 화합물에 대한 활성이 더 큰 것으로 나타났다. GTPγS S1P3 EC50 값에 대한 값이 더 클수록 GTPγS S1P3 결합 검정에서의 활성이 더 작은 것으로 나타났다. 실시예 2의 활성 포스페이트 에스테르인 실시예 10은 S1P1의 효능제로서의 활성을 보유하였으며, S1P3에 비해 선택적이다. 따라서, 실시예 1-2 및 9-10을 포함하는 본 발명의 화합물은 S1P3 활성으로 인한 부작용을 감소 또는 최소화시키면서 다양한 S1P1 수용체-관련 상태를 치료, 예방 또는 치유하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물의 놀라운 선택성은 S1P3 활성으로 인한 가능한 부작용을 감소 또는 최소화시키면서 자가면역 및 염증성 질환, 예컨대 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 염증성 장 질환, 루푸스 또는 건선을 치료, 예방 또는 치유하는데 잠재적인 용도를 나타낸다. 본 발명의 화합물의 다른 잠재적 용도는 S1P3 활성으로 인한 부작용을 감소 또는 최소화시키면서 이식된 기관의 거부를 최소화 또는 감소시키는 것을 포함한다.
S1P1 수용체 내재화 검정
GFP-태그부착된 S1P1 수용체를 발현하는 CHO-K1 세포를 50μl 검정 배지 (L-글루타민, 10% 목탄/덱스트란-처리된 FBS, 1X 페니실린-스트렙토마이신, 1M HEPES를 함유한 F12) 중 4x103개 세포/웰로 384-웰 폴리-D-리신 코팅된 조직 배양 플레이트에 플레이팅하였다. 세포 플레이트를 37℃/5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다. 시험 화합물을 11 포인트에서, 3배 연속 희석으로 화합물 공급 플레이트로부터 세포 플레이트로 도입하고, 이어서 검정 플레이트를 37℃/5% CO2에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 고정시키고, PBS (Ca2 +/Mg2 + 무함유) 중 6% 포름알데히드 및 15 μg/ml 훽스트(Hoechst) 염료로 실온에서 15분 동안 염색하였다. 세포 플레이트를 PBS (Ca2 +/Mg2 + 무함유)로 4회 세척하고, 50μl/PBS를 첨가한 후에 플레이트를 밀봉하였다. 이미지를 셀로믹스 어레이스캔(Cellomics ARRAYSCAN)® VTI 고함량 이미저에 의해 획득하였다. 내부 대조 화합물과 관련한 EC50 측정을 위한 데이터 분석은 어레이 스캔(Array Scan) 상에서 컴파트멘탈 어날리시스 바이오어플리케이션(Compartmental Analysis BioApplication)을 사용하여 달성하였다. EC50은 시험된 각 개별 화합물에 대해 획득한 Ymax (최대 반응)의 50%에 상응하는 효능제 농도로서 정의되며, 4 파라미터 로지스틱 방정식을 사용하여 정량화하여 데이터를 적합화하였다. 실시예 9에 대한 EC50은 검정에서 361 nM인 것으로 결정되었다.
설치류에서의 혈액 림프구 감소 (BLR) 검정
루이스(Lewis) 래트에게 단독 비히클 (폴리에틸렌 글리콜 300, "PEG300") 또는 2-아미노-2-[2-(4-옥틸페닐)에틸]-1,3-프로판디올, 히드로클로라이드 (CAS: 162359-56-0)를 비히클 중 용액으로서 시험 물품의 유리 양을 반영하도록 조정된 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg 및 3.0 mg/kg의 용량으로 경구로 투여하였다. 그 결과를 표 4a에 제공하고, 투여 후 24시간에서 림프구 감소 수준은 3.0 mg/kg에서 최대였다. 림프구에서의 감소 퍼센트는 용량-관련된 것이지만, 그 관계는 선형이 아니며, 용량에서의 비-비례적 증가는 림프구수에서 순차적으로 더 큰 감소를 도출하기 위해 요구되었다. 예를 들어, 13%의 변화 (69% 감소로부터 82% 감소까지)를 입증하는 이러한 연구에서는 용량에서의 5-배 상승 (0.1 mg/kg에서 0.5 mg/kg으로의 상승)이 필요하였다. 또한, 이 연구에서 7%의 추가 변화 (82% 감소로부터 89% 감소까지)를 입증하기 위해서는 용량에서의 6-배 상승 (0.5 mg/kg에서 3.0 mg/kg으로의 상승)이 필요하였다. BALB/c 마우스에게 단독 비히클 (폴리에틸렌 글리콜 300, "PEG300") 또는 실시예 1, 실시예 2, 화합물 6, 화합물 8, 또는 비교 화합물 11을 경구로 투여하였다. 화합물을, 염 형태가 사용되는 경우에 시험 물품의 유리 양을 반영하도록 조정된, 비히클 중 용액 또는 현탁액으로서 투여하였다. 혈액을 24시간에 채혈하고, 혈액 림프구수를 아드비아(ADVIA)® 120 혈액 분석기 (지멘스 헬스케어 다이고스틱스(Siemens Healthcare Diagnostics)) 상에서 결정하였다. 측정시의 비히클 처리군과 비교하여 순환 림프구의 감소 백분율로서 결과를 측정하였다. 그 결과는 각 치료군 내의 모든 동물의 평균 결과를 나타낸다 (n = 2-4). 상기 본원에 기재된 마우스에서의 혈액 림프구 감소 검정 (BLR)의 결과는 하기 표 4b에 나타내었다.
<표 4a>
2-아미노-2-[2-(4-옥틸페닐)에틸]-1,3-프로판디올, 히드로클로라이드
Figure 112015089898473-pct00081
<표 4b>
Figure 112015089898473-pct00082
폐 독성 검정
동물로부터 획득된 기관지폐포 세척 (BAL) 유체 중 단백질 수준의 분석은 폐 부작용을 판단하는데 사용하였다. BAL 유체 중 단백질의 증가된 수준은 바람직하지 않은 폐 효과, 예컨대 폐 부종의 지표였다. 실시예 1, 실시예 2, 화합물 6, 화합물 8 및 화합물 11을 30 mg/kg의 용량으로 마우스에게 경구 투여하였다. 투여 후 24시간에, 마우스를 복강내 바르비투레이트 과다용량으로 안락사시켰다. 동물을 앙와위로 위치시키고, 피부 절개부를 만들고, 비절개 박리 후에 기관을 노출시켰다. 기관을 절개하고, 카테터를 기관 내로 4-6mm 삽입하였다. 포스페이트-완충 염수 (PBS; 1mL/마우스)를 폐 내로 주입하고, 이어서 흡인시켰다. 회수된 BAL 유체 중 BAL 단백질의 농도는 아드비아® 1800 화학 분석기 (지멘스 헬스케어 다이고스틱스) 상에서 결정하였다. 기관지폐포 세척 (BAL) 검정의 결과는 표 5에 나타낸다. 그 결과는 각 치료군 내의 모든 동물의 평균 결과를 나타낸다 (n = 2-4).
<표 5>
Figure 112015089898473-pct00083
표 5는 비히클 단독 투여와 비교하여 시험된 화합물에 대해 24시간에서의 상대적 BAL 단백질 수준을 나타낸다. 대조군에 대한 상대적 BAL 단백질의 값 1 초과는 비히클 단독 투여와 비교하여 폐 독성에서의 증가를 나타내었다. 이 연구에서, 표 5에 보고된 바와 같이, 실시예 1 및 2의 투여는 0.99 및 0.96의 상대적 BAL 단백질 수준을 제공하였으며, 이는 폐 독성에서의 어떠한 증가도 나타내지 않는 것이다. 화합물 8의 투여는 1.03의 상대적 BAL 단백질 수준을 제공하였으며, 이는 폐 독성에서의 증가가 경미하거나 또는 전혀 없었음을 나타내는 것이다. 반면, 화합물 6 및 화합물 11의 투여는 1.94 및 1.33의 상대적 BAL 단백질 수준을 제공하였으며, 이는 증가된 폐 독성을 나타내는 것이다.
실시예 1 및 2에 의해 예시된 바와 같은 본 발명의 화합물을 a) 화합물 6 및 8, 및 b) WO 2008/079382에 개시되어 있는 비교 화합물 11과 비교하였으며, 특히 유리한 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 화합물은 혈액 림프구의 감소 및 폐 부작용, 예컨대 폐 부종의 최소화에 있어서 활성 조합의 놀라운 이점을 갖는다. 보고된 시험에서 표 4b 및 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 및 2는 BAL 단백질 (폐 부작용의 척도)에서의 증가 없이 혈액 림프구 감소의 효능에서 놀라운 이점을 나타낸다. 예를 들어, 화합물 6, 8 및 11과 비교하여, 표 4b 및 5에 보고된 본 발명의 예시된 화합물은 혈액 림프구를 88% 및 90% 감소시켰고, 각각 0.99 및 0.96의 상대적 BAL 단백질을 제공하였으며, 이는 폐 부작용에서의 증가가 없었음을 나타내는 것이다. 반면, 유사한 시험에서, 화합물 6 및 비교 화합물 11은 혈액 림프구를 78% 및 52% 감소시켰고, 각각 1.96 및 1.33의 상대적 BAL 단백질을 제공하였으며, 이는 증가된 폐 부작용의 위험을 나타내는 것이다. 화합물 8은 혈액 림프구를 59% 감소시켰고, 1.03의 상대적 BAL 단백질 수준을 제공하였으며, 이는 폐 부작용에서의 증가가 전혀 없거나 약간 증가하였음을 나타내는 것이다.
<표 6>
표 4b 및 5로부터의 마우스 혈액 림프구 감소 및 마우스 BAL 단백질 수준
Figure 112015089898473-pct00084
본 발명의 화합물은 S1P1 수용체의 효능제로서 활성을 보유하고, 순환 혈액 림프구의 감소로 이어지며, 따라서 폐 부작용, 예컨대 폐 부종을 감소 또는 최소화하면서 다양한 S1P1 수용체-관련 상태를 치료, 예방 또는 치유하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물의 놀라운 선택성은, 가능한 폐 부작용을 감소 또는 최소화시키면서 자가면역 및 염증성 질환, 예컨대 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 염증성 장 질환, 루푸스 또는 건선을 치료, 예방 또는 치유하는데 있어서의 그의 잠재적 사용을 나타낸다. 본 발명의 화합물의 다른 잠재적 사용은 가능한 폐 부작용을 감소 또는 최소화시키면서 이식된 기관의 거부를 감소 또는 최소화시키는 것을 포함한다.
래트 아주반트 유도된 관절염 검정 (AA)
래트 아주반트-유도된 관절염 모델은 인간 류마티스 관절염을 위한 동물 모델이다.
수컷 루이스 래트 (150-175 g; 하를란(Harlan), n=8 치료군)를 불완전 프로인트(Freund) 아주반트 (sigma(시그마)) 중 100 μl의 10 mg/ml 새로 분쇄된 미코박테리움 부티리쿰(Mycobacterium butyricum) (디프코 래보러토리즈(Difco Laboratories))으로 꼬리 기저에서 면역화시켰다. 동물에게 면역화 당일부터 시작하여 시험 물품 (비히클 중 용액 또는 현탁액으로서) 또는 단독 비히클 (폴리에틸렌 글리콜 300, "PEG300")을 1일 1회 투여하였다. 뒷발의 부피를 수치환 체적변동측정기 (유고 바실(Ugo Basile), 이탈리아)에서 측정하였다. 기준 발 측정을 질환 발병 전에 수행하였다 (제7일 내지 제10일 사이). 이어서, 발 측정을 제20일 내지 제21일의 연구 종료시까지 주 3회 수행하였다. 동물과 관련된 모든 절차는 동물 실험 윤리 위원회에 의해 검토되고 승인되었다.
본 발명의 실시예 2는 상기 본원에 기재된 래트 아주반트 유도된 관절염 검정에서 시험하였고, 그 결과는 표 7에 나타낸다. 실시예 2에 의해 예시된 바와 같은 본 발명의 화합물은, 보고된 시험에서, 예방용 경구 투여 요법을 사용하는 루이스 래트에서 감소된 발 종창에 의해 측정된 바와 같이 질환 진행의 억제를 나타내었다.
<표 7>
Figure 112015089898473-pct00085
마우스 T 세포 전달 유도된 결장염 검정
마우스 T 세포 전달 유도된 결장염 검정은 인간 결장염을 위한 동물 모델이다.
BALB/c 마우스로부터 FACS 분류된 CD4+CD45RB고 T 세포 (3x105개/마우스, i.p.)의 입양 전달에 의해 CB-17 SCID 마우스에서 결장염을 유도하였다. 질환 활성을 체중, 연변 또는 설사, 및 항문직장 탈출증을 기준으로 하여 초기 3주 동안은 주 1회 및 후속 주 동안에는 3x/주 모니터링하였다. 동물에게 시험 물품 또는 비히클을 T 세포 전달 당일부터 시작하여 매 2일 (q.o.d.)마다 경구로 투여하였다. 마우스를 T 세포 재구성 6주 후에 희생시키고, H&E 염색 결장 조직의 조직학적 검사를 기준으로 하여 장 염증에 대해 분석하였다. 동물과 관련된 모든 절차는 동물 실험 윤리 위원회에 의해 검토되고 승인되었다.
실시예 2를 상기 본원에 기재된 T 세포 전달 유도된 결장염 모델에서 시험하고, 그 결과는 표 8에 나타낸다. 실시예 2에 예시된 바와 같은 본 발명의 화합물은, 보고된 시험에서, 마우스 T 세포 전달 유도된 결장염 검정에서 감소된 체중 손실 또는 체중 증가, 및 염증 및 손상에서의 감소에 의해 측정된 바와 같이 질환 진행의 억제를 나타내었다.
<표 8>
Figure 112015089898473-pct00086
자발성 홍반성 루푸스 검정의 MRL/lpr 마우스 모델
자발적 홍반성 루푸스 검정의 MRL/lpr 마우스 모델은 자발적 홍반성 루푸스를 위한 동물 모델이다.
수컷 MRL/lpr 마우스 (14주령; 잭슨 래보러토리즈(Jackson Laboratories); n=12-13)에게 실시예 2 (비히클 중 용액으로서) 또는 단독 비히클 (폴리에틸렌 글리콜 300)을 제0일에 시작하여 11주 동안 주 2회 경구로 투여하였다. 뇨단백질 수준 (알부스틱스(Albustix)에 의함)을 제0일 및 연구 전체에 걸쳐 측정하였다. 표 9는 25주령에서 높은 수준의 단백뇨 (100 mg/dL 초과)를 입증하는 각 치료군에서의 마우스 백분율을 나타낸다. 추가 군의 마우스는 덱사메타손 (Dex)을 매일 경구 투여로 독립적으로 또는 실시예 2의 주 2회 투여와 조합하여 투여받았다. 뇨단백질 수준 (알부스틱스에 의함)을 제0일 및 연구 전체에 걸쳐 측정하였다. 표 9는 24주령에서 높은 수준의 단백뇨 (100 mg/dL 초과)를 입증하는 각 치료군에서의 마우스 백분율을 나타낸다. 동물과 관련된 모든 절차는 동물 실험 윤리 위원회에 의해 검토되고 승인되었다.
실시예 2는 상기 본원에 기재된 자발성 홍반성 루푸스 검정의 MRL/lpr 마우스 모델에서 실험하였고, 그 결과는 표 9에 나타낸다. 실시예 2에 의해 예시된 바와 같은 본 발명의 화합물은, 보고된 시험에서, 100 mg/dL 초과의 단백뇨 수준을 갖는 마우스의 백분율이 더 낮은 것으로 측정된 바와 같이 질환 진행의 억제를 나타내었다.
<표 9>
25주령에서의 단백뇨
Figure 112015089898473-pct00087
실시예 2 및 덱사메타손 (Dex)을 독립적으로 또는 조합하여 상기 본원에 언급된 자발적 홍반성 루푸스 검정의 MRL/lpr 마우스 모델에서 시험하였고, 그 결과를 표 10에 나타낸다. 실시예 2에 의해 예시된 바와 같은 본 발명의 화합물 및 덱사메타손 둘 다는, 보고된 시험에서, 100 mg/mL 초과의 단백뇨 수준을 갖는 마우스의 백분율이 더 낮은 것으로 측정된 바와 같이 질환 진행의 억제를 나타내었다. 이 시험에서, 실시예 2 및 덱사메타손의 조합물을 투여한 어떠한 마우스도 100 mg/mL 초과의 단백뇨 수준을 갖지 않았다.
<표 10>
24주령에서의 단백뇨
Figure 112015089898473-pct00088
단결정 X선 회절측정법
단결정 데이터를 Cu Kα 방사선 (λ= 1.5418 Å)을 사용하는 브루커(Bruker)-AXS APEX2 CCD 시스템 상에서 수집하였다. 측정된 강도 데이터의 색인 및 가공은 APEX2 소프트웨어 프로그램 스위트로 수행하였다. 나타난 경우에, 결정은 데이터 수집 동안 옥스포드 크리오 시스템(Oxford cryo system)의 저온 스트림에서 냉각시켰다. 구조를 직접 방법에 의해 풀하고, SHELXTL을 사용하여 관찰된 반사를 기준으로 하여 정밀화하였다. 유도된 원자 파라미터 (좌표 및 온도 인자)를 전체 행렬 최소 제곱법을 통해 정밀화하였다. 정밀화에서 최소화된 함수는 Σw(|Fo| - |Fc|)2이다. Rw = [Σw(|Fo| - |Fc|)2/Σw|Fo|2]1/2이면, R은 Σ||Fo| - |Fc||/Σ|Fo|로서 정의되고, 이때 w는 관찰된 강도에서의 오차를 기준으로 하는 적절한 중량 함수이다. 전형적으로, 모든 비-H 원자를 이방성으로 정밀화하고, N 및 O 원자에 부착된 것 이외의 모든 H-원자를 기하학적 방법으로 계산하고, 라이딩 모델을 이용하여 정밀화하였다.
X선 분말 회절측정법
X선 분말 회절 (PXRD) 데이터는 브루커 GADDS (제너럴 에리어 디텍터 디프랙션 시스템(General Area Detector Diffraction System)) 매뉴얼 카이 플랫폼 측각기를 사용하여 수득하였다. 분말 샘플을 직경 0.7mm의 박벽 유리 모세관에 넣고; 모세관을 데이터 수집 동안 회전시켰다. 샘플-검출기 거리는 17cm에서 유지하였다. 데이터는 2.5 < 2θ < 35° 범위에서 샘플 노출 시간 600초로 Cu Kα 방사선 (λ = 1.5418 Å)을 사용하여 수집하였다.

Claims (12)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염.
    <화학식 I>
    Figure 112015089898473-pct00089

    상기 식에서, R은 -OH 또는 -OP(O)(OH)2이다.
  2. 제1항에 있어서, R이 -OH인 화합물 또는 그의 염.
  3. 제1항에 있어서, R이 -OP(O)(OH)2인 화합물 또는 그의 염.
  4. 제1항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 염.
    Figure 112015089898473-pct00090
  5. 제1항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 염.
    Figure 112015089898473-pct00091
  6. 제5항에 있어서, 결정질 고체인 화합물 또는 그의 염.
  7. 제1항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 염.
    Figure 112015089898473-pct00092
  8. 제1항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 염.
    Figure 112015089898473-pct00093
  9. 제1항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는, 포유동물 환자에서 자가면역 질환 또는 만성 염증성 질환을 치료하기 위한 제약 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 자가면역 질환 또는 만성 염증성 질환이 루푸스, 다발성 경화증, 염증성 장 질환 및 류마티스 관절염으로부터 선택된 것인 제약 조성물.
  11. 삭제
  12. 삭제
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