PT2501703E - Compostos espiropiperidina como antagonistas do recetor orl-1 - Google Patents

Description

ΡΕ2501703 1

DESCRIÇÃO

"COMPOSTOS ESPIROPIPERIDINA COMO ANTAGONISTAS DO RECETOR ORL-1"

Orfanina FQ (OFQ)/Nociceptina é um péptido de 17 aminoácidos que possui alta afinidade para o recetor acoplado à proteina G ORL-1 (GPCR). 0 recetor ORL-1 é um GPCR da Classe A que é primeiramente expresso no sistema nervoso central e sistema nervoso periférico assim como no trato gastrointestinal, músculo liso, e sistema imunitário. Embora estruturalmente relacionado com péptidos/recetores opioides o sistema OFQ/Nociceptina não exibe reatividade cruzada significativa com péptidos/recetores opioides clássicos e exibe atividade anti-opioide in vivo (por exemplo foi reportado que ORQ/Nociceptina exibem propriedades anti-nociceptivas).

Antagonistas do recetor Nociceptina/orfanina FQ (NOC/OFQ), especificamente antagonistas do recetor ORL-1 demonstraram atividade anti-depressiva e atividade anorética em numerosos estudos com modelos animais para depressão e comportamento alimentar. Como tal, antagonistas de ORL-1 são considerados úteis no tratamento de depressão e/ou no tratamento de excesso de peso, obesidade, e/ou manutenção de peso após tratamento por excesso de peso ou obesidade. 2 ΡΕ2501703 WO 2003/095427 descreve certos compostos espi-ropiperidinilo como antagonistas de ORL-1 para utilização como analgésicos.

Yoshizumi, Takashi et al. (2008), Design, synthesis, and structure-activiy relationship study of a novel class of ORL-1 recetor antagonists based on N-biarylmethyl spiropiperidine, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters vol. 18, págs. 3778-3782, descreve certos compostos N-biarilmetil-espiropiperidina como antagonistas de ORL-1 seletivos. A presente invenção proporciona uma família de compostos 4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano] com alta potência antagonista para o recetor ORL-1 e alta ocupação in vivo do recetor ORL-1 no CNS. Para além disto, alguns dos compostos possuem um perfil cardio-toxicológico favorável tal como determinado através da seletividade sobre a atividade do canal hERG, assim como alta seletividade sobre outros recetores fisiologicamente importantes (e.g. opioides mu, kappa e delta, serotonina, e recetores de dopamina). Além disso, alguns dos compostos da presente invenção possuem propriedades biofarmacêuticas e farmacocinéticas favoráveis (e.g. solubilidade, exposição oral, e permeabilidade do CNS) . Alguns dos compostos da presente invenção exibem metabolismo oxidante reduzido resultando em biodisponibilidade oral favorável. Certos compostos demonstraram também através de modelos animais 3 ΡΕ2501703 que os compostos da presente invenção são úteis no tratamento de enxaqueca. A presente invenção proporciona compostos da Fórmula I:

I em que R1 é fluoro ou cloro; R2a e R2b são cada um hidroqénio ou são cada um fluoro; R3 é hidroqénio, metilo, hidroximetilo, ou (C1-C3) - alcoximetilo; R4 é selecionado a partir do grupo constituído por fluoro, cloro, ciano, cianometilo, (C1-C3) alquilo, ciclopropilo, hidroximetilo, metoxi, ci-clopropilmetoxi, aminocarbonilmetoxi, (C1-C3) al coximetilo, ciclopropiloximetilo, ciclopropilme-toximetilo, 1-hidroxi-l-metiletilo, aminocarbo-niloximetilo, metilaminocarboniloximetilo, dime-tilaminocarboniloximetilo, aminocarbonilo, amino-carbonilmetilo, -CH2-NR5R6, hidroxi-imina, metoxi-imina, morfolin-4-ilo, morfolin-4-ilmetilo, Ar1, 4 ΡΕ2501703 -CH2Ar1, tetra-hidrofuran-2-ilo, 3-oxomorfolin-4-ilmetilo, 2-oxopirrolidin-l-ilmetilo, e 2-oxopi-peridin-l-ilmetilo; R5 é hidrogénio, C1-C3 alquilo, cianometilo, -C(0)- CH3, ou aminocarbonilmetilo; R6 é hidrogénio ou metilo; e

Ar1 é uma porção selecionada a partir do grupo cons tituído por imidizol-l-ilo, imidizol-2-ilo, 2-metilimidizol-l-ilo, pirazol-l-ilo, 1,2,3-tri-azol-l-ilo; 1,2,3-triazol-2-ilo; 1,2,4-triazol-l-ilo, isoxazol-3-ilo, oxazol-5-ilo, e 3-metil-1,2,4-oxadiazol-5-ilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Num outro aspeto da invenção é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um composto da Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, combinado com um veículo farmaceuticamente aceitável, diluente, ou excipiente. Num modelo de realização deste aspeto da invenção, a composição farmacêutica compreende ainda pelo menos um ingrediente terapêutico adicional, como por exemplo um anti-depressivo SSRI, como por exemplo fluoxetina. Além disso, este aspeto da invenção proporciona uma composição farmacêutica adaptada para o tratamento de depressão compreendendo um composto da Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em combinação com um ou mais dos seus excipientes, veiculos, ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. Num outro modelo de realização 5 ΡΕ2501703 deste aspeto da invenção é proporcionada uma composição farmacêutica adaptada ao tratamento de excesso de peso, obesidade e/ou manutenção de peso, compreendendo um composto da Fórmula I ou um seu sal f armaceuticamente aceitável, em combinação com um ou mais dos seus exci-pientes, veiculos, ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. Um modelo de realização adicional proporciona uma composição farmacêutica adaptada ao tratamento de enxaqueca compreendendo um composto da Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em combinação com um ou mais dos seus excipientes, veiculos, ou diluentes farmaceu-ticamente aceitáveis. A presente invenção proporciona ainda um método para tratar a depressão num mamifero compreendendo a administração a um mamifero com necessidade desse tratamento de uma quantidade eficaz de um composto da Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Um modelo de realização adicional proporciona um método para tratamento da depressão num mamifero compreendendo a administração a um mamifero com necessidade desse tratamento de uma quantidade eficaz de um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e uma quantidade eficaz de um anti-depressivo SSRI, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como por exemplo fluoxetina. Outros modelos de realização da invenção proporcionam métodos para tratar excesso de peso e/ou obesidade, e/ou um método para manutenção de peso compreendendo administração a um mamifero com necessidade desse tratamento de uma quantidade 6 ΡΕ2501703 eficaz de um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Num modelo de realização especifico destes aspetos da invenção, o mamifero é um humano.

Esta invenção proporciona também um composto da Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para utilização em terapia. Dentro deste aspeto, a invenção proporciona um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento de depressão em mamíferos, particularmente humanos. A invenção proporciona também um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em combinação com um anti-depressivo SSRI, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como por exemplo fluoxetina, para utilização no tratamento de depressão em mamíferos, particularmente humanos. Além disso, este aspeto da invenção inclui qualquer um dos seguintes: um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento de excesso de peso; um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento de obesidade; um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização na manutenção de peso (para manutenção de peso), particularmente após tratamento de excesso de peso ou obesidade; um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento de enxaqueca.

Outro aspeto desta invenção proporciona a 7 ΡΕ2501703 utilização do composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, no fabrico de um medicamento para o tratamento de depressão. Outro modelo de realização da invenção proporciona a utilização de um composto da Fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, no fabrico de um medicamento para o tratamento de excesso de peso, obesidade, e/ou a manutenção de peso. Ainda outro modelo de realização da invenção proporciona a utilização de um composto da Fórmula I, ou um seu sal f armaceuticamente aceitável, no fabrico de um medicamento para o tratamento de enxaqueca.

Compostos desta invenção são bases, e consequentemente reagem com diversos ácidos orgânicos e inorgânicos para formar sais farmaceuticamente aceitáveis. Sais farma-ceuticamente aceitáveis de cada um dos compostos da presente invenção estão contemplados dentro do âmbito do presente pedido de patente. 0 termo "sal farmaceuticamente aceitável" tal como aqui é utilizado, refere-se a qualquer sal de um composto da Fórmula I que é substancialmente não tóxico para organismos vivos. Tais sais incluem aqueles que estão listados no Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977), os quais são conhecidos pelos especialistas da técnica.

Abreviaturas aqui utilizadas são definidas como se segue: "BSA" significa albumina do soro bovino. ΡΕ2501703 "mCPP" significa meta-clorofenilpiperazina, um agonista do recetor de serotonina não seletivo. "EDTA" significa ácido de etilenodiamino-tetra-acético. "EGTA" significa ácido etilenoglicol-tetra-acético. "GTP" significa trifosfato de guanosina. "HEPES" significa ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazino-etanossulfónico. "HPLC" significa cromatografia liquida de alta pressão. "IC50" significa a concentração à qual 50% da inibição máxima é alcançada. "LC/MS" significa cromatografia liquida seguida de espetroscopia de massa. "LC/MS/MS" significa cromatografia liquida seguida de espetroscopia de massa, seguida de uma segunda espetroscopia de massa ionizante. "mFST" significa teste de natação forçada do ratinho; um modelo animal para atividade anti-depressiva. "MS" significa espetroscopia de massa. "MS (ES+)" significa espetroscopia de massa utilizando ionização por eletropulverização. "NMR" significa ressonância magnética nuclear. "RO Tracer" significa 2-[(2-Fluorofenil)metil]-3-(2-fluoro-espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1' -il)-N,N-dimetil-propanamida. "RO" significa ocupação do recetor. "coluna SCX" significa coluna de permuta catiónica forte. "SNAr" significa substituição aromática nucleofilica. "SSRI" significa inibidor seletivo de recaptação de serotonina . 9 ΡΕ2501703 "tBu" significa uma porção butilo terciário. "TLC" significa cromatografia de camada fina. "XRD" significa difração de Raios X.

Compostos preferidos da presente invenção são compostos em que: 1) R1 é cloro; 2) R2a e R2b são cada um fluoro; 3) R1 é cloro e R2a e R2b são cada um fluoro; 4) R1 é fluoro e R2a e R2b são cada um hidrogénio; 5) R3 é hidrogénio, metilo, hidroximetilo, ou metoximetilo; 6) R3 é metilo; 7) R3 é hidroximetilo; 8) R1 é cloro, R2a e R2b são cada um fluoro, e R3 é metilo; 9) R1 é cloro, R2a e R2b são cada um fluoro, e R3 é hidroximetilo; 10) R4 é fluoro, hidroximetilo, metoximetilo, ou pirazol-1-ilmetilo; 11) R4 é fluoro; 12) R4 é hidroximetilo; 13) R4 é metoximetilo; 14) R4 é pirazol-l-ilmetilo; 15) qualquer um dos modelos de realização preferidos 1) a 9) em que R4 é fluoro; 16) qualquer um dos modelos de realização preferidos 1) a 9) em que R4 é hidroximetilo; 17) qualquer um dos modelos de realização preferidos 1) a 9) em que R4 é metoximetilo; 10 ΡΕ2501703 18) qualquer um dos modelos de realização preferidos 1) a 9) em que R4 é pirazol-l-ilmetilo;

Certos compostos preferidos são [2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3- piridil]metanol; 2-cloro-4,4-difluoro-l'-[[3-metil-l-[3-(pirazol-l-ilmetil)-2-piridil]pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]; e [4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-1-(3-fluoro-2-piridil)pirazol-3-il]metanol; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, (i.e. Exemplos 1, 23, 53, 62, e 63)

Um composto particularmente preferido da presente invenção é [2-[4-[ (2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno-[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il] -3-piridil]metanol, ou um seu sal farmaceu-ticamente aceitável, como por exemplo o sal L-tartarato e/ ou o sal HC1, tal como exemplificado nos exemplos 1, 62 e 63.

Compostos em que R2a e R2b são cada um fluoro são preferidos uma vez que os compostos possuem um perfil farmacocinético mais favorável, sendo mais estáveis ao 11 ΡΕ2501703 metabolismo oxidante. Isto tem o efeito geral de melhorar a biodisponibilidade oral dos compostos.

Quimica Geral

Os compostos da presente invenção podem ser preparados de acordo com os seguintes esquemas sintéticos através de métodos bem conhecidos e tidos em conta na técnica. Condições de reação adequadas para os passos destes esquemas são bem conhecidas na técnica e substituições apropriadas de solventes e co-reagentes encontram-se dentro da competência da técnica. Do mesmo modo, será tido em conta pelos especialistas na técnica que intermediários sintéticos possam ser isolados e/ou purificados através de diversas técnicas bem conhecidas conforme necessário ou desejado, e que frequentemente, seja possivel utilizar diversos intermediários diretamente nos passos sintéticos subsequentes com pouca ou nenhuma purificação. Além disso, os especialistas na técnica irão ter em conta que em algumas circunstâncias, o facto de a ordem pela qual as porções são introduzidas não é critica. A ordem especifica de passos necessários para produzir os compostos da Fórmula I depende do composto especifico a ser sintetizado, do composto de partida, e da instabilidade relativa das porções substituídas, tal como é bem considerado pelos químicos especialistas. Todos os substituintes, a não ser que seja indicado de outra forma, são tal como previamente definidos, e todos os reagentes são bem conhecidos e tidos em conta na técnica. ΡΕ2501703 12

Esquema 1

Utilizando condições de reação de aminação redu-tiva, o composto III é sujeito a reação com um pirazole-carbaldeído substituído apropriado e um reagente redutor tal como triacetoxiboro-hidreto de sódio, num solvente adequado tal como tetra-hidrofurano à temperatura ambiente para proporcionar o composto II. Sob uma condição de acoplamento apropriada, o composto II é acoplado com o composto IV, em que Hal é cloro, bromo, ou iodo, com um catalisador adequado tal como iodeto de cobre, uma base apropriada tal como carbonato de potássio, num solvente tal como tolueno a temperatura elevada para dar o composto I' , em que R4 é R4 ou um precursor de R4. Quando Hal no composto IV é F ou Cl, a substituição aromática nucleofílica (SNAr) é um método alternativo para fazer o composto I'. Mais especificamente, o composto II pode 13 ΡΕ2501703 reagir com o composto IV num solvente apropriado tal como dimetilformamida com uma base adequada tal como carbonato de potássio a temperatura elevada para proporcionar o composto I'. 0 composto III pode também reagir com um composto aldeido apropriadamente substituído V sob condições de aminação redutiva tal como já referido para dar o desejado composto I'. Quando R4 é um precursor de R4, é então convertido em R4 através de métodos conhecidos.

Esquema 2

xi x ix me

Compostos Illa, Illb, e IIIc podem ser obtidos tal como ilustrado no Esquema 2. Os compostos XIV e XV são sujeitos a reação num solvente apropriado tal como diclorometano na presença de um ácido adequado tal como ácido trifluoroacético. 0 trifluoroacetato resultante é basificado com solução aquosa de hidróxido de sódio para dar o composto XIII como uma base livre. 0 composto XIII num solvente adequado tal como éter metil-t-butilico é tratado com uma solução de cloreto de sulfurilo em ácido 14 ΡΕ2501703 acético à temperatura ambiente para dar o composto VIII como um sal hidrocloreto. 0 composto VIII é então protegido com um grupo protetor de azoto sob condições bem conhecidas dos técnicos especialistas para dar o composto VII. (Por exemplo, ver: Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Terceira Edição, Capítulos 2 e 7, John Wiley and Sons Inc., (1999)). Tipicamente, o grupo protetor é um grupo Boc (tert-Butiloxicarbonilo) . 0 composto VII é feito reagir com N-bromossuccinimida num solvente apropriado tal como clorobenzeno com irradiação de uma fonte de luz para dar um composto brometo, o qual é então tratado com uma solução base tal como bicarbonato de sódio aquoso para obter um composto hidroxilo. Com ou sem isolamento, o composto hidroxilo pode ser ainda oxidado sob condições de oxidação adequadas tais como em brometo de potássio, tetrametilpiperidina-I7-óxido, e solução aquosa de hipoclo-reto de sódio para proporcionar o composto cetona VI desejado. 0 composto VI é então sujeito a reação com trifluo-reto de (bis(2-metiletil)amino)enxofre num solvente apropriado tal como tetra-hidrofurano a temperatura elevada, o produto obtido é desprotegido para proporcionar o composto Illa. 0 composto da fórmula XIII é protegido para dar o composto XII com um método similar ao utilizado para fazer o composto VII. 0 composto XII num solvente apropriado tal como tetra-hidrofurano a temperatura reduzida é tratado com uma base adequada tal como lítio-tetrametilpiperidina, seguida de adição de N-fluorobenzenossulfonimida para obter um composto fluoreto, o qual é desprotegido com HCl aquoso 15 ΡΕ2501703 e basificado com solução aquosa de NaOH para proporcionar o composto Illb.

Através do mesmo método utilizado para fazer o referido composto VI, pode ser obtido o composto IX a partir do composto XII através de uma síntese de três passos, tal como bromação, hidroxilação, e oxidação. Cada intermediário pode ser isolado como composto puro para reação adicional ou sujeito a reação sem isolamento tal como descrito na síntese do composto VI. 0 composto IX é então tratado com um reagente de permuta de halogénio-metal adequado tal como butil-lítio num solvente próprio tal como tetra-hidrofurano sob temperatura reduzida, seguido de um reagente de fluoração tal como N-fluoro-benzenossulfonimida para obter o produto fluorado desejado, que é então desprotegido de forma apropriada para dar o composto IIIc desej ado.

Esquema 3

Z=CMO. COOR R= Alquilo

Compostos da Fórmula V podem ser obtidos tal como 16 ΡΕ2501703 ilustrado no Esquema 3. 0 composto XVI é sujeito a reação com o composto XVII para obter o composto da fórmula XV sob SNAr ou condições de acoplamento anteriormente referidas para a conversão do composto II em composto I'. Quando Z é um grupo éster, pode ser reduzido a um álcool primeiro com um reagente redutor apropriado tal como alumino-hidreto de litio num solvente apropriado tal como tetra-hidrofurano. 0 álcool é então oxidado até aldeído com um reagente de oxidação apropriado tal como óxido de manganês (IV) num solvente tal como diclorometano.

Quando R4' é o precursor de R4, a transformação de R4' em R4 irá incluir mas não se limita a reações tais como aminação redutiva para proporcionar uma nova amina desejada; redução de um éster, cetona, ou aldeído até um álcool, o qual pode ser adicionalmente convertido num composto alcoxi ou um carbamato; redução de um nitrilo até uma amida ou até uma amina; a transformação de um éster num heterociclo tal como oxadiazole sob condição apropriada. (Para mais exemplos, ver: Richard C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, Segunda Edição, Capítulos 2 e 7, John Wiley and Sons Inc., (1999)).

As Preparações e Exemplos que se seguem são ilustrativos dos métodos úteis para a síntese dos compostos da presente invenção. Os nomes para muitos dos compostos ilustrados nas preparações e exemplos são proporcionados a partir de estruturas desenhadas com 'Symyx Draw 3.1' ou 'Autonom 2000 Name'. 17 ΡΕ2501703

Preparação 1: 4',5'-Di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno- [2,3-c]pirano]

N H 3-Tiofeno-etanol (123,03 mL, 1,11 mol) é adicionado a uma solução de I7-teri-butoxicarbonil-4-piperidona (185 g, 928,48 mmol) em diclorometano (1300 mL) e agitado à temperatura ambiente. Depois é adicionado gota a gota ácido trifluoroacético (280,82 mL, 3,71 moles) (5 min) enquanto arrefece com um banho de gelo/água (temperatura interna = 14°C-30°C, cuidado: libertação de CO2) . A mistura de reação é gradualmente aquecida até à temperatura ambiente e agitada a essa temperatura durante 20 h. O solvente é evaporado para proporcionar um sólido cristalino beje após arrefecimento in vacuo. 0 sólido é transformado em lama em éter metil-t-butílico (200 mL), filtrado, lavado com éter metil-t-butílico (2 x 1000 mL) e seco sob vácuo para obter trifluoroacetato de 4',5'-di-hidroespiro[pipe-ridina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-io como um sólido branco com 95% de rendimento. MS = (m/z) : 210 (M+l) . É adicionado hidróxido de sódio 10M (220,36 mL, 2,20 mol) a uma suspensão agitada de 4', 5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno-[2,3-c]piran]-1-io trifluoroacetato (285 g, 881,44 mmol) em diclorometano (1 L) com arrefecimento (banho de gelo/água) e a mistura resultante é agitada até se obter uma mistura bifásica. As fases são separadas e a camada aquosa é 18 ΡΕ2501703 extraída com diclorometano (2x200 mL). Os orgânicos combinados são concentrados sob vácuo para obter um óleo espesso que é triturado com água para obter um precipitado amarelo claro. O precipitado é filtrado, lavado com água (300 mL) e hexano (200 mL) e seco sob vácuo a 35°C durante 20 h para produzir o composto em epígrafe como um sólido amarelo claro com 86% de rendimento. MS (m/z): 210 (M+l).

Preparação 2: Espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-carboxilato de tert-butilo

Espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] (60 g, 286,6 mmol) em 2-metiltetra-hidrofurano (600 mL) é agitado a 22°C durante 10 min. Depois, é adicionado gota a gota carbonato de tert-butoxicarbonilo e tert-butilo (65,6 g, 301 mmol) em 2-metiltetra-hidrofurano (300 mL). Após 12 h, uma solução aquosa de cloreto de sódio (250 mL) é adicionada e a camada orgânica é separada. A camada aquosa é lavada duas vezes com 2-metiltetra-hidro-furano (2 x 50 mL) e as camadas orgânicas são combinadas e lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio, filtradas, e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe com 99% de rendimento. MS (m/z): 310 (M+l). 19 ΡΕ2501703

Preparação 3: 2-Fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,2-c]pira-no-7,4'-piperidina]

1. 2-Fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-pipe-ridina]-1'-carboxilato de tert-butilo 2,2,6,6-Tetrametilpiperidina (18,7 mL, 110,5 mmol) é adicionada sobre tetra-hidrofurano (200 mL) , e a solução é arrefecida sob azoto a -78°C. Solução 2,5M de butil-litio em hexano (37,2 mL, 93 mmol) é adicionada e a mistura é agitada durante 30 min a -78°C. Sobre uma solução recente de litio-2,2,6,6-tetrametilpiperidina é adicionada uma solução de espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-carboxilato de tert-butilo (20 g, 58,2 mmol) em tetra-hidrofurano (90 mL) mantendo a temperatura abaixo de -70°C. Após 20 min é adicionada via cânula uma solução de N-fluorobenzenossulfonimida (30,26 g, 93,07 mmol) em tetra-hidrofurano (200 mL) previamente arrefecida sob azoto a -20°C. Após agitação durante 1 h, água (20 mL) e solução aquosa de cloreto de amónio (50 mL) são adicionados. Depois, a camada orgânica é separada e a aquosa é lavada duas vezes com éter metil-t-butilico (2 x 25 mL) . As orgânicas são combinadas e o solvente é evaporado sob pressão reduzida. O material bruto é purificado através de HPLC de fase normal utilizando hexano/éter metil-t-butilico como solventes para dar 2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno- 20 ΡΕ2501703 [2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-carboxilato de tert-butilo com 50% de rendimento. MS (m/z): 328 (M+l). 2. 2-Fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,2-c]pirano-7,4'-piperidina] 37% Ácido clorídrico (11,75 mL, 125,22 mmol) é adicionado a uma solução de 2'-fluoro-4',5'-di-hidro-lH-espiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano]-1-carboxilato de tert-butilo (8,2 g, 25,04 mmol) em álcool isopropílico (57,4 mL) a 45°C. A solução resultante é agitada a 45°C durante 6,5 h. 0 solvente é concentrado numa suspensão amarela. Água (50 mL) é adicionada e a mistura é basificada com solução aquosa de hidróxido de sódio 5N. A fase aquosa é extraída com acetato de etilo (3 x 100 mL) e os extratos orgânicos combinados são lavados com salmoura (50 mL) , secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe com 96% de rendimento. MS (m/z): 228 (M+l).

Preparação 4 : Hidrocloreto de 2'-cloro-4',5'-di-hidroes-piro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano]

Uma solução de 4', 5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano] (50 g, 238,88 mmol) numa mistura de ácido acético (400 mL) e éter metil-t-butílico (40 mL) é 21 ΡΕ2501703 arrefecida até 15°C. Depois, uma solução de cloreto de sulfurilo (21,20 mL, 262,77 mmol) em ácido acético (100 mL) é adicionada gota a gota ao longo de 40 min a essa temperatura (temperatura interna = 15°C-22°C) e a mistura é agitada à temperatura ambiente durante 20 h. Depois, uma solução de cloreto de sulfurilo (11,56 mL, 143,33 mmol) em ácido acético (50 mL) é adicionada gota a gota à temperatura ambiente. A mistura de reação é agitada à temperatura ambiente durante 30 min e depois é adicionada gota a gota (30 min) sobre éter metil-t-butí lico (1 L) arrefecendo com banho de gelo/água com agitação. Uma suspensão branca forma-se e o sólido é filtrado. Para obter uma segunda colheita de material, o filtrado é concentrado (reenchimento com éter metil-t-butílico via rotavap). O sólido resultante é suspenso em éter metil-t-butílico (300 mL), suspensão é agitada em refluxo (banho: 100°C) e metanol (30 mL) é adicionado até se formar uma suspensão turva. Depois, a suspensão é arrefecida até à temperatura ambiente de um dia para o outro. A suspensão é arrefecida adicionalmente num banho de gelo/água e filtrada. O sólido é lavado com éter metil-t-butílico (50 mL) e combinado com a primeira colheita para dar o composto em epígrafe com 60% rendimento. MS (m/z): 244 (M+l).

Preparação 5: 2'-Cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro-[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano]

22 ΡΕ2501703 1. 2-Cloroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-pipe-ridina]-1'-carboxilato de fcerfc-butilo A uma suspensão de sal clorídrico de 2-cloroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,2-c]pirano-7,4'-piperidina] (140 g, 0,49 moles) em diclorometano (1,12 L) é adicionada trietilamina (67,25 mL, 1,05 mole), 4-piridinamina, N,N-dimetil- (3,05 g, 0,025 mole) e dicarbonato de di-t-butilo (111,22 g, 0,509 mole) em porções e a mistura resultante é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A reação é lavada com HC1 IN (2 x) e água. A fase orgânica é seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter 2-cloroespiro[4,5-di-hidrotieno [2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-carboxilato de tert-butil com 53% de rendimento. MS (m/z): 244 (M+l-Boc). 2. 4'-Oxo-2'-cloro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4, 7 ' -tieno[2,3-c]pirano]-1-carboxilato de fcerfc-butilo

Num reator de 5L revestido, N-bromossuccinimida (115,02 g, 639,77 mmol) é adicionada a uma solução de 2-cloroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] -1'-carboxilato de tert-butilo (200 g, 581,61 mmol) em clorobenzeno (1,60 L) à ta. A suspensão resultante é irradiada 3 X com lâmpadas de balão de 100 W colocadas quase em contacto com a parede externa do reator e a temperatura do reator é ajustada a 45°C. Após 4 h, N-bromossuccinimida (26,14 g, 145,40 mmol) é adicionada e a temperatura é 23 ΡΕ2501703 mantida nos 40°C durante 15 h. A mistura de reação é arrefecida até 0°C e é adicionado éter metil-t-butilico (500 mL). O sólido é filtrado e a solução é concentrada até cerca de 1000 mL de solução em clorobenzeno. Depois, é adicionado éter metil-t-butilico (1000 mL), os sólidos são filtrados e o filtrado é concentrado para obter 600 mL de uma solução de clorobenzeno. São adicionados dimetilsulfó-xido (806,47 mL, 11,35 mol) e bicarbonato de sódio (95,38 g, 1,14 mol) à temperatura ambiente. Após agitação durante 24 h à temperatura ambiente, água/gelo (1000 mL) é adicionada e as fases são separadas. A fase orgânica é lavada com água (2 x 1 L) e concentrada para obter uma solução em clorobenzeno. Depois, é adicionado diclorometano (1,2 L) e a mistura é arrefecida até 5°C (banho de gelo/água). Brometo de potássio (20,27 g, 170,31 mmol) e 2,2, 6, 6-tetrametilpiperidina-W-óxido (4,43 g, 28,38 mmol) são adicionados. Depois, uma solução de hipoclorito de sódio a 6% em água (644,40 mL, 567,68 mmol) ajustada a pH = 9 com bicarbonato de sódio (s) é adicionada à mistura de reação a 5°C e a mistura resultante é agitada durante lha 5°C até à temperatura ambiente. É adicionada água (1 L) e as fases são separadas. Fase orgânica é lavada com água (2 x 0,5 L) e foi arrefecida com banho de gelo/água. Depois, Brometo de Potássio (2,03 g, 17,03 mmol), 2,2,6,6-tetra-metilpiperidina-Àf-óxido (0,05 g, 0,32 mmoles) e uma solução de hipoclorito de sódio a 6% em água (128,88 mL, 113,54 mmol) ajustada a pH = 9 com bicarbonato de sódio sólido são adicionados à mistura de reação a 5°C e uma mistura resultante é agitada durante lha partir de 5°C até à tempe- - 24 - ΡΕ2501703 ratura ambiente. Depois, é adicionada água (1 L) e as fases são separadas. A fase orgânica é lavada com água (2 x 1 L) seca e concentrada para obter um sólido castanho escuro. 0 sólido é triturado com hexano (500 mL) , éter metil-t-butí lico/hexano a 5% (250 mL) e éter metil-t- butílico/hexano a 10% (250 mL) para obter 4'-oxo-2'-cloro- 4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano]-1-carboxilato de tert-butilo como um sólido castanho claro com um rendimento de 66%. MS (m/z): 258 (M+l (Boc)). 3. 2'-Cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano]-1-carboxilato de tert-butilo

Num balão de PFA de 500 mL carregado com tetra-hidrofurano (81 mL) é adicionado trifluoreto de (bis (2-metoxietil)amino)enxofre (183,62 g, 829,94 mmol) e 4'-oxo-2'-cloro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano]-1-carboxilato de tert-butilo (135 g, 377,24 mmol). A suspensão resultante é agitada a 70°C durante 24h. Depois, é arrefecida até à temperatura ambiente e lentamente vertida sobre uma mistura de gelo e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (4 L) com agitação (libertação de gás). Éter metil-t-butílico é utilizado para transferir o material remanescente dos balões. Depois da libertação do gás cessar, é adicionado bicarbonato de sódio sólido com agitação até ser atingido pH 8. A mistura resultante é extraída com éter metil-t-butílico (3 x 500 mL) até que não se detete nenhum produto por TLC na fase 25 ΡΕ2501703 aquosa. Os orgânicos combinados são lavados com água (3 x 500 mL) e salmoura (500 mL) , secos sobre sulfato de sódio e concentrados para obter um óleo escuro espesso (250 g) . 0 material bruto é dissolvido em diclorometano e filtrado através de um tampão de gel de silica eluindo com éter metil-t-butílico/hexano a 10% (6 L) e éter metil-t-butílico/hexano (4 L) . As frações são colhidas até não se detetar nenhum produto através de TLC (éter metil-t-butílico a 20%/hexano UV, Rf = 0,5). O filtrado é concentrado para obter um sólido castanho claro o qual é seco sob vácuo a 40°C até peso constante para obter 2'-cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano]-1-carboxilato de tert-butilo com um rendimento de 70%. MS (m/z): 324 (M+l tBu). 4. 2'-Cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano] Ácido clorídrico a 37% (74,12 mL, 789,78 mmol) é adicionado a uma solução de 2'-cloro-4',4'-difluoro-4',5 ' -di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano]-1-carboxilato de tert-butilo (60 g, 157,96 mmol) em álcool isopropílico (420 mL) a 45°C. A solução resultante é agitada a 45°C durante 15 h. Depois, a mistura é concentrada até 1/4 do volume para obter uma suspensão branca. Água (100 mL) é adicionada e a suspensão é basificada com solução aquosa de hidróxido de sódio 6N para obter uma mistura de duas camadas que é extraída com éter metil-t-butílico (3 x 100 mL) . Orgânicos combinados são 26 ΡΕ2501703 lavados com salmoura (50 mL), secos sobre sulfato de sódio e concentrados para obter um sólido castanho claro o qual é seco sob vácuo até peso constante para produzir o composto em epigrafe a 97%. MS (m/z): 280 (M+l).

Preparação 6: 2,4,4-Trifluoroespiro[5H-tieno[2,3-c]pirano- 7,4'-piperidina]

H

F 1. 2-Bromo-4-hidroxi-espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-carboxilato de terfc-butilo N-bromossuccinimida (2,2 equiv) é adicionada a uma solução de espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-carboxilato de tert-butilo (13,5 g) em clorobenzeno (108 mL) . A suspensão resultante é irradiada com lâmpada de balão de 260 W de um dia para o outro. Mais AHoromossuccinimida (1,7 g) é adicionada à mistura e a mistura é irradiada com lâmpada de balão De 260 W durante 3 horas. 0 solvente é eliminado sob pressão reduzida proporcionando um residuo que é dissolvido em acetona (650 mL) e uma solução de nitrato de prata (8,8 g) em água (650

mL) é adicionada. A mistura é agitada à temperatura ambiente no escuro de um dia para o outro. A mistura é separada por filtração e a acetona é evaporada. Acetato de etilo é adicionado e a camada orgânica é lavada com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e salmoura. A 27 ΡΕ2501703 camada orgânica é seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente é evaporado sob pressão reduzida. 0 resíduo é purificado através de cromatografia de fase normal Isco (eluente: hexano/acetato de etilo a 15-60%) para obter 2-bromo-4-hidroxi-espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-carboxilato de tert-butilo com 38% de rendimento. MS (m/z): 426/428 (M+23/M+2+23) 2. 2'-Bromo-4'-oxo-espiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pira-no]-1-carboxilato de tert-butilo

Brometo de potássio (535,67 mg, 4,50 mmol) é adicionado a uma solução de 2-bromo-4-hidroxi-espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-ciclo-hexano]-1'-carboxilato de tert-butilo (7,28 g) e 2,2,6,6-tetrame-tilpiperidina-iV-óxido (281,33 mg, 1,80 mmol,) em diclorome-tano (70 mL) a 0°C. Num outro recipiente é adicionado bicarbonato de sódio em água hipoclorito de sódio a 10% (22,34 mL, 36,01 mmol) até pH 9. Esta solução de hipoclorito de sódio-bicarbonato de sódio é adicionada gota a gota a 0°C e a suspensão escura resultante é agitada a 0°C durante 15 min. Diclorometano (20 mL) e água (20 mL) são adicionados e as fases são separadas. A fase orgânica é lavada com água (20 mL) e seca sobre sulfato de sódio. O solvente é eliminado sob pressão reduzida para obter 2'-bromo-4'-oxo-espiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano]-1-carboxilato de tert-butilo com 99% de rendimento. MS (m/z): 346/348 (M+l tBu/M+3-tBu) 28 ΡΕ2501703 3. 2-Bromo-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-carboxilato de terfc-butilo

Num balão de perf luoroalcoxi de 100 mL é adicionado trifluoreto de (bis(2-metoxietil)amino)enxofre (5,16 mL, 27, 96 mmol) a tetra-hidrofurano seco (3,5 mL) . Depois é adicionado 2'-bromo-4'-oxo-espiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano]-1-carboxilato de tert-butilo (4,5 g, 11,19 mmol) . A solução é agitada a 70°C de um dia para o outro. Após esse período, é adicionado éter metil-t-butílico (30 mL) , e a mistura de reação é cuidadosamente vertida sobre bicarbonato de sódio (solução aquosa saturada) com arrefecimento num banho de gelo. Libertação de CO2 é observada e bicarbonato de sódio (solução aquosa saturada) é adicionado até pH 8. A mistura é extraída com éter metil-t-butílico. A camada orgânica é decantada, lavada com salmoura (2 x), seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco eluindo com éter metil-t-butílico/hexano para produzir 3,2 g de 2-bromo-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-carboxilato de tert-butilo. MS (m/z): 368/370 (M+l-tBu/M+3-tBu). 4. 2,4,4-Trifluoroespiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] -1 ' -carboxilato de terfc-butilo

Butil-lítio 2,5M em hexano (47 mL) é adicionado 29 ΡΕ2501703 sobre uma solução de 2-bromo-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno-[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-carboxilato de tert-buti-lo (1,99 g, 4,69 mmol) em tetra-hidrofurano (50 mL) sob azoto e a -78°C. A mistura é agitada a -78°C durante 1 hora e N-fluoro-benzenossulfonimida sólida (3,69 g, 11,73 mmol) é adicionada. A mistura é deixada a aquecer até à temperatura ambiente e agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Solução aquosa saturada de cloreto de amónio é adicionada e a fase orgânica é extraída com acetato de etilo, seco sobre sulfato de sódio e o solvente eliminado sob pressão reduzida. O material bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco (hexano/acetato de etilo a 3-12%) para produzir 1,3 g de 2,4,4-trifluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-carboxilato de tert-butilo que é ainda purificado através de HPLC para obter 0,818 g desse composto. MS (m/z): 308 (M+l-tBu). 5. 2,4,4-Trifluoropiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] 2,4,4-Trifluoroespiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-carboxilato de t-butilo (2,00 g, 5,50 mmol) é dissolvido em ácido clorídrico (4N em dioxano) (10 mL, 40 mmol) . A mistura é agitada à temperatura ambiente durante lh e depois passada através de um cartucho SCX de 50 g (permuta catiónica sólida) para produzir 1,3 g do composto em epígrafe após evaporação da fração de amoníaco 2N em metanol. MS (m/z): 264 (M+l). 30 ΡΕ2501703

Preparação 7: 2-Cloro-4,4-difluoro-l'-[(3-metil-lH-pirazol-4-il)metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]

A uma solução de 2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina (105 g, 375 mmol) em tetra-hidrofurano (1,58 L) é adicionado 3-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (43,40 g, 394,12 mmol) e a mistura é agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Depois, triacetoxiboro-hidreto de sódio em pó (95,46 g, 450,42 mmol) é adicionado em 3 porções. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 15 h. Depois, a mistura de reação é vertida sobre uma solução aquosa saturada de gelo-bicarbonato de sódio (400 mL) . As fases são separadas. A fase aquosa é extraída com acetato de etilo (100 mL). Camadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura a 50% e precipita-se um sólido na fase orgânica. A fase orgânica é concentrada para dar 170 g do composto em epígrafe. MS (m/z): 374 (M+l).

Os compostos das Preparação 8-11 são preparados essencialmente tal como descrito na Preparação 7 utilizando 1,2-dicloroetano as solvente. 31 ΡΕ2501703

Prep. Nome químico Estrutura Rendimen- Dados físicos: N°. to (%) MS (m/z) 2-Fluoro-l'-[(3-metil-lH-pirazol-4- -¾ 8 il)metil]espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3- L y 93 322 (MEL) c]pirano-7,4'-piperidina] 2-Cloro-l'-[(3-metil-lH-pirazol-4- y^Go 9 il)metil]espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3- \ j 99 338 (M+l) c]pirano-7,4'-piperidina] & 2,4,4-Trifluoro-l'-[(3-metil-lH- 10 pirazol-4-il)metil]espiro[5H-tieno[2,3- 0 99 358 (MEL) c]pirano-7,4'-piperidina] 2-Cloro-l'-(lH-pirazol-4- 11 ilmetil)espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3- y 99 324 (Mfl) c]pirano-7,4'-piperidina] fj

Preparação 12: 2-[4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tie- no[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carbaldeído

A um balão de 250 mL são adicionados iodeto de cobre (I) (1,91 g, 10,03 mmol), 2-cloro-4,4-difluoro-1' - [(3-metil-lH-pirazol-4-il)metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pira-no-7,4'-piperidina] (25 g, 66,87 mmol), carbonato de 32 ΡΕ2501703 potássio (19,60 g, 140,43 mmol), tolueno (50 mL) e uma barra de agitação. A mistura de reação é desgaseifiçada através de 5 ciclos de vácuo/reenchimento. Depois, são adicionados 2-bromo-3-formil-piridina (18,66 g, 100,31 mmol) e trans-N,N'-dimetilciclo-hexano-1,2-diamina (3,16 mL, 20,06 mmol). A reação é agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos. Depois, é imersa num banho de óleo pré-aquecido a 115°C e agitado durante 15 h a essa temperatura. A mistura de reação é arrefecida até à temperatura ambiente, diluida com 300 mL de acetato de etilo e filtrada através de celite. É lavada com acetato de etilo (100 mL) e solução aquosa de hidróxido de amónio (3%) (4 x 100 mL) para remover vestígios de cobre, e depois, é lavada com água (50 mL) e salmoura (50 mL) . A solução é seca sobre sulfato de sódio. O solvente é evaporado in vacuo para dar um sólido tanado. O sólido foi filtrado através de uma almofada de gel de silica utilizando como eluente 2-propanol/diclorometano (3% a 5% de 2-propanol) para dar o composto em epígrafe com rendimento de 69%. MS (m/z): 479 (M+l).

Preparação 13: 2-[4-[(2-Fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carbaldeído

ΡΕ2501703 33 0 composto da Preparação 13 é essencialmente preparado tal como descrito na Preparação 12 utilizando 2-bromopiridino-3-carbaldeído e 2-fluoro-l'-[(3-metil-lH-pirazol-4-il)metil]espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]. 0 residuo é purificado através de cromatograf ia de fase normal Isco para produzir 83% do composto em epígrafe. MS (m/z): 427 (M+l).

Preparação 14 : N- [ (2-Cloro-3-pirid.il) metil] acetamida

A uma solução de (2-cloro-3-piridil)metanamina (300 mg, 2,10 mmol) em diclorometano (2 mL) à temperatura ambiente é adicionado ácido acético anidro (198,88 yL, 2,10 mmol) e trietilamina (293,26 yL, 2,10 mmol). Após lh a reação é temperada com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi separada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado in vacuo para obter 184 mg de N-[ (2-cloro-3-piridil)metil]acetamida. MS (m/z): 185 (M+l)

Preparação 15: Metanossulfonato de (2-bromo-3-piridil)- metilo

Br

34 ΡΕ2501703 1. (2-Bromo-3-piridil)metanol A um balão de fundo redondo de 2L (equipado com barra de agitação, sob azoto e a 0°C) contendo 2-bromo-3-piridina-carboxaldeido (22,15 g, 119,08 mmol) e metanol (200 mL), é adicionado boro-hidreto de sódio (1,35 g, 35,72 mmol) em três porções. Após 1 h a 0°C é adicionada água (200 mL) e a reação é concentrada sob pressão reduzida para remover o metanol. O residuo resultante é dissolvido em acetato de etilo e lavado com água (200 mL) . A extração orgânica é lavada com salmoura, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada para obter 22 g de (2-bromo-3-piridil)metanol como um sólido branco. MS (m/z): 188 (M+l), 190 (M+3). 2. Metanossulfonato de (2-bromo-3-piridil)metilo

Trietilamina (8,90 mL) é adicionada a um balão de fundo redondo contendo uma solução de (2-bromopiridin-3-il)metanol (8 g, 42,55 mmol) em diclorometano (212 mL) a 0°C, depois é adicionado cloreto de metanossulfonilo (3,95 mL) e a mistura é agitada a essa temperatura durante 1,5 h. Após esse período a mistura é lavada com água e a camada orgânica é decantada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado sob pressão reduzida para produzir 10,4 g do composto em epígrafe utilizado sem mais purificação. MS (m/z): 266, 268 (M+l; M+3). 35 ΡΕ2501703

Preparação 16: 2- (2-Bromo-3-pirid.il) propan-2-ol

Br I Ν'γζ) Lítio-di-isopropilamida (2M, 12,5 mL, 25 mmol) é dissolvida em tetra-hidrofurano (40 mL) e arrefecida até -78°C. 2-Bromopiridina (3,9 g, 25 mmol) é adicionada gota a gota e a reação é agitada durante 3 h antes de adicionar acetona (1 mL, seca sobre crivos moleculares recentemente ativados) e permitir aquecimento até à temperatura ambiente. A reação é temperada com cloreto de amónio saturado e extraida com acetato de etilo. A camada orgânica é seca sobre sulfato de magnésio e evaporada. 0 residuo é purificado através de cromatografia de coluna flash sobre silica, eluindo com hexano a 20%/éter metil-tert-butílico para dar o composto em epígrafe (1,4 g, 26%). 1H-NMR (d6-dimetilsulfóxido) : 8,23 (dd, <J=1,9, 4,5 Hz, 1H) , 8,19 (dd, J=2,0, 7,8 Hz, 1H) , 7,44 (dd, J=4,5, 7,7 Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 2,12 (s, 1H), 1,46 (s, 6H).

Preparação 17: 3-Metil-lH-pirazole-4-carboxilato de etilo

É adicionado ácido sulfúrico (18 mL, 337,69 mmol) a uma suspensão de ácido lH-pirazole-4-carboxílico, 3-metil- (10 g, 79,29 mmol) em etanol (90 mL) e a mistura é agitada a 85°C durante 20 h. Após esse período, o solvente é parcialmente removido. 0 resíduo é basifiçado com solução 36 ΡΕ2501703 de hidróxido de sódio 1M até pH 6-7 e extraído com diclorometano. A camada orgânica é decantada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado sob pressão reduzida para produzir 10,3 g do composto em epígrafe que é utilizado sem mais purificação. MS (m/z): 155 (M+l).

Preparação 18: 2-Fluoropiridino-3-carboxilato de metilo

O Lítio-di-isopropilamida 2M (11,3 mL, 22,5 mmol) é lentamente adicionada sobre uma solução de 2-fluoropiridina (2 g, 20,5 mmol) em tetra-hidrofurano (90 mL) sob atmosfera de azoto a -78°C. Após 4 h a essa temperatura é adicionado cloroformato de metilo (1,9 mL, 24,6 mmol) e a mistura é agitada durante mais uma hora a -78°C e deixada a atingir a temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura de reação é lentamente vertida sobre água e extraída em éter dietílico. A camada orgânica é lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio e solvente é evaporado in vacuo. O resíduo é purificado através de cromatografia de fase normal Isco eluindo com hexano/éter dietílico (9/1) para dar 495,2 mg do composto em epígrafe. MS (m/z): 156 (M+l).

Preparação 19: 1- (3-Fluoro-2-pirid.il) -3-metil-pirazole-4- carbaldeído 37 ΡΕ2501703 A potássio-álcool t-butílico (29,25 g, 260,68 mmol) é adicionada a uma solução de 3-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (26,00 g, 236,12 mmol) em dimetilformamida (250 mL) arrefecida com um banho aquoso. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 10 min. Depois, é adicionada 2,3-difluorpiridina (25 g, 217,24 mmol) e a mistura é agitada à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura é vertida sobre uma mistura de gelo/água e extraida em acetato de etilo (3 x 20 mL) . Orgânicos são secos sobre sulfato de magnésio e solvente evaporado in vacuo. O residuo é purificado através de cromatografia de gel de silica utilizando como eluente hexano/álcool isopropílico para obter um material bruto com dimetilformamida residual. O material é então dissolvido em acetato de etilo (100 mL) e lavado com água (3 x 20 mL). A fase aquosa é extraida com acetato de etilo (2 x 20 mL) . Orgânicos combinados são secos sobre sulfato de sódio e concentrados para dar 19 g do composto em epígrafe. MS (m/z): 206 (M+l).

Preparação 20: 2-(4-Formil-3-metil-pirazol-l-il)piridino-3-carbonitrilo o

O composto da Preparação 20 é essencialmente 38 ΡΕ2501703 preparado tal como descrito na Preparação 19 utilizando 3-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído e 2-fluoropiridino-3-carbo-nitrilo. É obtido o composto em epígrafe com um rendimento de 23%. MS (m/z): 213 (M+l).

Preparação 21: 2-(4-Formil-3-metil-pirazol-l-il)piridino-3-carboxilato de metilo o

Uma mistura de 3-metil-lH-pirazole-4-carbaldeído (300 mg, 2,72 mmol) , carbonato de potássio (565 mg, 4,08 mmol), 2-fluoropiridino-3-carboxilato de metilo (507 mg, 3,27 mmol) e dimetilf ormamida (2 mL) é agitada a 60°C durante 16 h. Água é adicionada e o composto é extraído em acetato de etilo. A camada orgânica é lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio e o solvente é evaporado. A mistura bruta é purificada através de cromatografia de fase normal Isco utilizando hexano:acetato de etilo, 2:1 como eluente para produzir 422 mg do composto em epígrafe. MS (m/z): 246 (M+l). O composto das Preparações 22-23 pode ser essencialmente preparado como descrito na Preparação 21 utilizando o reagente 2-cloro-piridilo correspondente. 39 ΡΕ2501703

Preparação 24: 1-[3-(Dimetilaminometil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4-carbaldeído

1. 1-[3-(dimetilaminometil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4- carboxilato de etilo

Este composto é preparado essencialmente como descrito na Preparação 7 utilizando 1-(3-formil-2-piridil)-3-metil-pirazole-4-carboxilato de etilo e dimetilamina com um rendimento de 95% e é utilizado sem mais purificação após processamento. MS (m/z): 289 (M+l) 2. [1-[3-(Dimetilaminometil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4- il]metanol A uma solução de 1-[3-(dimetilaminometil)-2- 40 ΡΕ2501703 piridil]-3-metil-pirazole-4-carboxilato de etilo (217,7 g, 0,75 mmol) em tetra-hidrofurano (5 mL) arrefecida até aos 0°C e sob azoto, é adicionado alumino-hidreto de litio 1M em tetra-hidrofurano (0,9 mL, 0,9 mmol) e a mistura é agitada a essa temperatura durante 5 minutos. A reação é temperada com solução aquosa saturada de cloreto de amónio e o produto bruto é extraido com acetato de etilo. A camada orgânica é separada, seca sobre sulfato de sódio e o solvente é evaporado in vacuo. Neste exemplo particular o composto não é isolado na extração orgânica e é finalmente separado da solução aquosa com um cartucho SCX para obter 146 mg (78%) de [1-[3-(dimetilaminometil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metanol que é utilizado sem mais purificação. MS (m/z): 247 (M+l). 3. 1-[3-(Dimetilaminometil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4- carbaldeido 3,3,3-Triacetoxi-3-iodoftalida (0,553 g, 1,3 mmol) é adicionado a uma solução de [1-[3-(dimetilaminometil) -2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metanol (0,146 g, 0,59 mmol) em diclorometano (4 mL) à temperatura ambiente. Após um hora a reação é temperada através de adição de solução de carbonato de sódio 2N e o composto é extraido em diclorometano. A camada orgânica é separada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado in vacuo para obter 126 mg de 1-[3-(dimetilaminometil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4-carbaldeído que é utilizado sem mais purificação. MS (m/z): 245 (M+l). 41 ΡΕ2501703

Preparação 25: 1-(3-Fluoro-2-piridil)-3-(isopropoximetil)- pirazole-4-carbaldeído

1. 3-(Bromometil)-1-(3-fluoro-2-piridil)pirazole-4-carboxi-lato de etilo A uma solução de 1-(3 — fluoro-2-piridil)-3-metil-pirazole-4-carboxilato de etilo (10,2 g, 40,9 mmol) em clorobenzeno (205 mL) , é adicionada N-bromossuccinimida (8 g) à temperatura ambiente. A mistura de reação é agitada e irradiada sob uma lâmpada de 100 W à temperatura ambiente de um dia para o outro. Depois é adicionada mais N- bromossuccinimida (2 g) e após 2 h, nenhum material de partida é detetado. Os sólidos são filtrados e o solvente é evaporado. O produto bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando como eluente diclorometano e metanol para dar 5,3 g de 3-(bromometil)-1-(3 — fluoro-2-piridil)pirazole-4-carboxilato de etilo. MS (m/z): 328; 330 (M+l; M+3). 2. 1-(3-Fluoro-2-piridil)-3-(isopropoximetil)pirazole-4- carboxilato de isopropilo A uma solução de 3-(bromometil)-1-(3-fluoro-2-piridil)pirazole-4-carboxilato de etilo (1,5 g, 4,57 mmol), 42 ΡΕ2501703 em propan-2-ol (23 mL), é adicionado isopropóxido de litio (3,02 g) e a mistura é agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após esse período é adicionado mais isopróxido de litio (4,5 g) em três porções de 1,5 g cada a cada 16 horas. Após a última adição, a mistura de reação é finalmente agitada a 40°C durante 16 horas. O solvente é evaporado e o resíduo dissolvido em acetato de etilo e lavado com salmoura. A camada orgânica é decantada e seca sobre sulfato de sódio. O solvente é evaporado e o resíduo é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando como eluente diclorometano e metanol para dar 317 mg de 1-(3-fluoro-2-piridil)-3-(isopropoximetil)pirazo-le-4-carboxilato de isopropilo. MS (m/z): 322 (M+l). 3. [1-(3-Fluoro-2-piridil)-3-(isopropoximetil)pirazol-4- il]metanol A uma solução de 1-(3-fluoro-2-piridil)-3-(isopropoximetil) pirazole-4-carboxilato de isopropilo (316 mg, 0,98 mmol) em éter dietílico (4,9 mL) sob azoto e arrefecida até aos 0°C, é adicionado alumino-hidreto de litio 1M em tetra-hidrofurano (1,2 mL). A mistura é agitada a 0°C durante 1 hora. É adicionada água (46 pL) e agitada durante 5 min, depois solução aquosa de NaOH a 15% (46 pL) e água (138 pL) são sucessivamente adicionadas. Os sólidos são filtrados e o solvente evaporado para obter 241 mg de [1-(3-fluoro-2-piridil)-3-(isopropoximetil)pirazol-4-iljmetanol que é utilizado sem mais purificação. MS (m/z): 266 (M+l). 43 ΡΕ2501703 4. 1-(3-Fluoro-2-piridil)-3-[isopropoximetil]pirazole-4- carbaldeido

Uma mistura de [1-(3-fluoro-2-piridil)-3-(isopropoximetil) pirazol-4-il]metanol (241 mg; 0,91 mmol) e óxido de manganês (IV) (791 mg) é agitada em diclorometano (5 mL) à temperatura ambiente de um dia para o outro. Após esse periodo, a mistura de reação é filtrada sobre celite e o solvente evaporado para obter 197 mg do composto em epigrafe que é utilizado sem mais purificação. MS (m/z): 264 (M+l).

Preparação 26: 1-(3-Fluoro-2-piridil)-3-(metoximetil)pira- zole-4-carbaldeído

1. 1-(3-Fluoro-2-piridil)-3-(metoximetil)pirazole-4-carbo- xilato de etilo A uma solução de éster de etilo de ácido 3-bromometil-1-(3-fluoro-piridin-2-il)-lH-pirazole-4-carboxi-lico (1,13 g, 3,44 mmol) em acetona (23 mL) , são adicionados iodeto de potássio (200,1 mg), carbonato de potássio (865, 33 mg) e metanol (4,18 mL) . A mistura é agitada a temperatura ambiente durante 48 horas. São detetados éster de metilo e éster de etilo do composto desejado. Os sol- 44 ΡΕ2501703 ventes são evaporados. 0 resíduo é diluído com diclorome-tano e lavado com água. A camada orgânica é decantada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado. 0 produto bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando como eluente acetato de etilo e hexano para produzir 599 mg de uma mistura de ésteres de metilo e de etilo. MS (m/z) : 266 (M+l) e 280 (M+l). 2. [1-(3-Fluoro-2-piridil)-3-(metoximetil)pirazol-4-il]me- tanol

Este composto é essencialmente preparado tal como descrito no passo 3 da preparação 25 (passo de redução) com um rendimento de 93% e utilizando como material de partida 1-(3-fluoro-2-piridil)-3-(metoximetil)pirazole-4-carboxila-to de etilo (numa mistura contendo também o éster de metilo) . [1-(3-Fluoro-2-piridil)-3-(metoximetil)pirazol-4-il]- metanol é utilizado sem mais purificação. MS (m/z): 238 (M+l). 3. 1-(3-Fluoro-2-piridil)-3-(metoximetil)pirazole-4-carbal-deido

Este composto é essencialmente preparado tal como descrito no passo 4 da preparação 25 (passo de oxidação) com um rendimento de 91% e utilizando como material de partida [1-(3-fluoro-piridin-2-il)-3-metoximetil-lH-pira-zol-4-il]-metanol. 0 composto em epígrafe é utilizado sem mais purificação. MS (m/z): 236 (M+l). 45 ΡΕ2501703

Preparação 27 : 3-Metil-l- (3-morfolino-2-pirid.il) pirazole-4-carbaldeído o

Uma mistura de 1-(3 — fluoro-2-piridil)-3-metil-pirazole-4-carbaldeído (230 mg, 1,12 mmol) e morfolina (2 mL, 22,93 mmol) é aquecida sob irradiação de micro-ondas (temperatura 160°C, tempo de rampa: 2 min, tempo de manutenção: 10 min, potência: 250 W) . 0 excesso de morfolina é eliminado in vacuo e o resíduo é diluído em diclorometano e lavado em solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A camada orgânica é separada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado in vacuo. 0 resíduo é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando hexano/acetato de etilo como eluente (de 50 a 100% em acetato de etilo) para produzir 72% do composto em epígrafe. MS (m/z): 273 (M+l).

Preparação 28: 2-Bromo-3-(metoximetil)piridina

A uma solução de (2-bromopiridin-3-il)metanol (20 g, 106,37 mmoles) em 140 mL de tetra-hidrofurano é adicionado hidreto de sódio a 60% em óleo mineral (6,38 g, 46 ΡΕ2501703 155,5 mmol) a 0°C sob atmosfera de azoto. A solução é agitada a 0°C durante 30 minutos. É adicionado iodeto de metilo (7,95 mL, 127,6 mmol) sobre a solução e a mistura é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura é temperada adicionando água e o produto bruto é extraído com acetato de etilo. A camada orgânica é separada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado in vacuo para obter 2-bromo-3-(metoximetil)piri-dina com um rendimento de 98% que é utilizado sem mais purificação. MS (m/z): 202 (M+l), 204 (M+3).

Os compostos da Preparação 29-30 são preparados essencialmente como descrito na Preparação 28 utilizando os reagentes de iodeto de alquilo correspondentes.

Preparação 31: 2-Bromo-3-(isopropoximetil)-piridina 47 ΡΕ2501703 1. 2-Bromo-3-(bromometil)-piridina

Um balão Schlenk de 25 mL é carregado com álcool 2-bromo-3-piridina benzílico (1 g, 5,32 mmol) e diclorome-tano (15 mL) . A solução resultante foi arrefecida até 0°C num banho de sal-água/gelo com agitação magnética vigorosa. É depois adicionado tribrometo de fósforo (0,55 mL, 5,80 mmol) gota a gota para controlar a exotermia para menos de 10°C. Resultou uma lama espessa e após a adição, o banho é removido e a lama aquecida até à temperatura ambiente. Depois a mistura é gradualmente aquecida até refluxo durante 3 h e depois até à temperatura ambiente de um dia para o outro.

Sobre a mistura previamente arrefecida a 0°C, é adicionado gelo-água e depois pH ajustado para básico adicionando solução de carbonato de sódio 2M. A camada orgânica é separada e a solução aquosa é lavada duas vezes com diclorometano (2 x 10 mL) . Todos os orgânicos são combinados, secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e o solvente evaporado sob pressão reduzida para produzir 1,2 g de 2-bromo-3-bromometil-piridina que é utilizada sem mais purificação. 2. 2-Bromo-3-(isopropoximetil)-piridina A uma solução de álcool isopropílico (7,31 mL, 95, 65 mmol) em dimetilformamida (50 mL) a 0°C é adicionado hidreto de sódio (3,63 g, 90,87 mmol) e a mistura é agitada 48 ΡΕ2501703 à temperatura ambiente durante 30 minutos (esta reação é executada utilizando um escudo como proteção especial). Depois, é adicionada 2-bromo-3-bromometil-piridina (6 g, 23,91 mmol) em 10 mL de dimetilformamida via seringa e a mistura é agitada à temperatura ambiente durante 1 h. É adicionada água e a mistura é extraida com acetato de etilo, lavada com salmoura e água, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O material bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando acetato de etilo e hexano como eluente (gradiente de 5 a 25% de acetato de etilo) para produzir 3, 67 g do composto em epigrafe. MS (m/z): 230, 232 (M+l, M+3)

Preparação 32 : 2- (2-Bromo-3-pirid.il) acetonitrilo

Br

Uma mistura de 2-bromo-3-bromometil-piridina (840 mg, 3,35 mmol) e cianeto de sódio (187,99 mg, 3,68 mmol) é agitada e sujeita a refluxo durante 1 h numa mistura de água (10 mL)-etanol (2 mL) . A mistura de reação é diluída com diclorometano e lavada com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A camada orgânica é separada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado in vacuo para dar 83% do composto em epígrafe que é utilizado sem mais purificação. MS (m/z): 197 (M+l), 199 (M+3). 49 ΡΕ2501703

Preparação 33: 1-[3-(Ciclopropoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4-carbaldeído

1. 1-[3-(Hidroximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4- carboxilato de etilo A uma solução de éster de etilo de ácido 1- (3-formil-piridin-2-il)-3-metil-lH-pirazole-4-carboxílico (1 g, 3,9 mmol) em metanol (25 mL), é adicionado boro-hidrato de sódio (220,2 mg, 5,8 mmol) . A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 2 h. O solvente é eliminado e o produto bruto é dissolvido em acetato de etilo e lavado com solução aquosa saturada de cloreto de amónio. A camada orgânica é separada, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar 1 g de 1-[3-(hidroximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4-carboxilato de etilo. MS (m/z): 262 (M+l) 2. 3-Metil-l-[3-(viniloximetil)-2-piridil]pirazole-4- carboxilato de etilo

Trifluoroacetato Paládio (II) (5,1 mg, 15,3 ymoles) e 4,7-difenil-fenantrolina (5,1 mg, 15,3 pmoles) são dissolvidos em éter n-butil-vinilico (6,1 mL, 61,2 mmol) e éster de etilo de ácido 1-(3-hidroximetil-piridin- 50 ΡΕ2501703 2-il)-3-metil-lH-pirazole-4-carboxílico (800 mg, 3,1 iranol) e são adicionadas algumas gotas de trietilamina. O balão é selado e agitado a 75°C durante 24 horas. Depois a mistura é arrefecida até 24°C e filtrada através de uma almofada de celite. 0 solvente é eliminado sob pressão reduzida e o residuo é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando hexano e acetato de etilo como eluentes (5-20% em acetato de etilo) para dar 605 mg de 3-metil-1-[3-(viniloximetil)-2-piridil]pirazole-4-carboxilato de etilo. MS (m/z): 288 (M+l) 3. 1-[3-(Ciclopropoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4- carboxilato de etilo

Dietilzinco 1,0M em hexano (365,7 pL, 3,5 mmol) é adicionado sob azoto a diclorometano (0,9 mL). A solução é arrefecida até 0°C e uma solução de ácido trifluoroacético (268,4 pL, 3,5 mmol) em diclorometano (0,9 mL) é adicionada muito lentamente. Após 20 min é adicionada uma solução de di-iodometano (286,1 pL, 3,5 mmol) em diclorometano (0,9 mL) . Depois de mais 20 min, é adicionada uma solução de éster de etilo de ácido 3-metil-l-(3-viniloximetil-piridin-2-il)-lH-pirazole-4-carboxilico (510 mg, 1,8 mmol) em diclorometano (0,9 mL) . A mistura é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. HC1 a 5% é adicionado e a camada aquosa é extraida com acetato de etilo. A camada orgânica é separada, seca sobre sulfato de sódio e o solvente é eliminado sob pressão reduzida. O produto bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco 51 ΡΕ2501703 utilizando hexano e acetato de etilo como eluentes (5-20% em acetato de etilo) para obter 310 mg de 1 — [ 3 — (ciclopropoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4-carboxilato de etilo. MS (m/z): 302 (M+l) 4. 1-[3-(Ciclopropoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4- carbaldeido A uma solução de éster de etilo de ácido l-(3-ciclopropoximetil-piridin-2-il)-3-metil-lH-pirazole-4-car-boxilico (410 mg, 1,03 mmol) em tetra-hidrofurano (0,15 M) a 0°C sob azoto, é adicionado alumino-hidreto de litio 1,0M em tetra-hidrofurano (1,2 equiv). A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 1 h e é adicionada solução aquosa saturada de cloreto de amónio e a camada aquosa é extraida com acetato de etilo. A camada orgânica é separada, seca sobre sulfato de sódio e o solvente eliminado sob pressão reduzida. O material bruto é dissolvido em diclorometano (14 mL) e é adicionado óxido de manganês (IV) (1,2 g, 13,9 mmol) . A mistura é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e depois filtrada através de uma almofada de celite e o solvente é evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto é passado através de uma almofada de gel de silica (eluente: acetato de etilo e diclorometano) . O solvente é eliminado sob pressão reduzida para produzir 90 mg do produto em epigrafe. MS (m/z): 258 (M+l). 52 ΡΕ2501703

Preparação 34 : 1-[3-(Metoximetil)-2-piridil]-3-metil-pira- zole-4-carbaldeído

O

1. 1-[3-(Metoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4-carbo- xilato de etilo

Este composto é preparado essencialmente como descrito na Preparação 12 utilizando 3-metil-lH-pirazole-4-carboxilato de etilo e 2-bromo-3-(metoximetil)piridina com 83% de rendimento. MS (m/z): 276 (M+l). 2. [1-[3-(Metoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]me- tanol

Este composto é preparado essencialmente como descrito na Preparação 24 (passo 2) utilizando 1—[3 — (metoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4-carboxilato de etilo com 88% de rendimento. MS (m/z): 234 (M+l). 3. 1-[3-(Metoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazole-4-carbal-deido

Uma mistura de [1-[3-(metoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metanol (2,2 g, 9,4 mmol) e óxido de manganês (IV) (19 g, 188,8 mmol) é agitada em diclorometano 53 ΡΕ2501703 (20 mL) à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura de reação é filtrada sobre celite e o solvente evaporado sob pressão reduzida para produzir 1,8 g do composto em epígrafe que é utilizado sem mais purificação. MS (m/z): 232 (M+l).

Preparação 35: 2-Bromo-3-(imidazol-l-ilmetil)piridina

A uma solução de metanossulfonato de (2-bromo-3-piridil)metilo (2,5 g, 9,39 mmol) em etanol (46,97 mL) à temperatura ambiente, são adicionados carbonato de potássio (2,62 g) e lH-imidazole (1,31 g) . A mistura é agitada a 50°C. Forma-se uma espécie de emulsão espessa e são adicionados 10 mL de etanol e a espécie de emulsão é agitada a 50 °C de um dia para o outro. É adicionada água até todos os sólidos serem dissolvidos. Depois, concentra-se sob pressão reduzida e o resíduo é diluído com acetato de etilo e lavado com bicarbonato de sódio (solução aquosa saturada). A camada orgânica é decantada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado in vacuo. O material bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando como eluente diclorometano e metanol (98/2 até 90/10) para produzir 1,42 g do composto em epígrafe. MS (m/z): 238, 240 (M+l, M+3). 54 ΡΕ2501703

Os compostos das Preparações 36-40 são preparados essencialmente como descrito na Preparação 35 a partir dos heteroanéis azotados correspondentes.

Prep. N°. Nome químico Estrutura Rendimento (%) Dados físicos: MS (m/z) 36 2-Bromo-3-(1,2,4-triazol-l-ilmetil)piridina r\ Br N (V 39 239, 241 (MH, M+3) 37 2-Bromo-3-(triazol-2-ilmetil)piridina /ΓΛ & 33a 239, 241 (MH, IYH-3) 38 2-Bromo-3- (triazol-l-ilrretil) piridina O (V 63a 239, 241 (MH, Mt3) 39 2-Bromo-3-(pirazol-l-ilmetil)piridina OH Br 41 238, 240 (MH, Mt3) 40 2-Bromo-3-[(2-metilimidazol-l-il)metil]piridina r 61 252, 254 (MH, M+3) a) Arribos os compostos são obtidos na mesma reação.

Preparação 41: 2-[(2-Bromo-3-piridil)oxi]acetamida

Br O

A uma solução de 2-bromo-3-piridinol (1,5 g, 8,49 mmol) em tetra-hidrofurano (15 mL) a 0°C é adicionado 55 ΡΕ2501703 hidreto de sódio a 60% em óleo mineral (509, 44 mg, 12,74 mmol) e a mistura é agitada a essa temperatura durante 30 min. Depois é adicionada acetamida, 2-cloro- (16,98 mmol) e a mistura é agitada à temperatura ambiente ao longo do fim-de-semana. A mistura é temperada com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica é separada seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado in vacuo para dar o composto em epígrafe com um rendimento de 75%. O composto é utilizado sem qualquer purificação adicional. MS (m/z): 231 (M+l), 233 (M+3).

Preparação 42: 2-Bromo-3-(ciclopropilmetoxi)piridina

A uma solução de 2-bromo-3-piridinol (500 mg 2,83 mmol) em dimetilformamida (3 mL) é adicionado a 0°C hidreto de sódio a 60% em óleo mineral (169,81 mg, 4,25 mmol). A mistura é agitada a essa temperatura durante 15 min e é adicionado bromometilciclopropano (329,66 yL, 3,40 mmol) . Depois a reação é agitada à temperatura ambiente durante lhe temperada com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica é separada, lavada com salmoura, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado in vacuo. O produto bruto é passado através de um tampão de gel de sílica curto e o composto foi eluído com diclo-rometano para produzir 23% do composto em epígrafe. MS (m/z): 228 (M+l), 230 (M+3). 56 ΡΕ2501703

Preparação 43: 1- (3-Fluoro-2-pirid.il) -4-formil-pirazole-3- carboxilato de etilo

1. 4-Formil-lH-pirazole-3-carboxilato de etilo

Um balão de fundo redondo de 100 mL é carregado com hidrocloreto de semicarbazida (2 g, 17,93 mmol), piruvato de etilo (11,8 mL) e etanoato de sódio (2,97 g) . Depois a água (9 mL) é adicionada. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 90 minutos, depois é filtrada e os sólidos são lavados com mais água. 0 sólido branco é seco sob vácuo num forno (40°C) de um dia para o outro. São obtidos 2,66 g de 2-(carbamoil-hidrazono)propanoato de etilo puro. Cloreto de fosforilo (3,28 mL) é adicionado gota a gota a dimetilformamida (7,13 mL) a 0°C. 0 banho de arrefecimento é removido para alcançar a temperatura ambiente. Depois, a mistura é aquecida até 40°C e 2-(carbamoil-hidrazono)propanoato de etilo previamente obtido (2,66 g, 15,36 mmol) é adicionado em várias porções ao longo de 15-20 min (libertação do gás durante a adição). Quando a temperatura interna é 55°C, banho de aquecimento é removido de modo a que a temperatura interna seja mantida na gama de 60-70°C. Depois, a mistura é aquecida até 80°C. 57 ΡΕ2501703

Quase não é observada mais libertação do gás uma vez que a reação esteja estabilizada nos 80°C. A suspensão resultante é agitada a 80°C durante 2 h. A mistura de reação é vertida sobre gelo/água (30 mL) misturada e agitada para obter uma suspensão. Solução de hidróxido de sódio a 50% é adicionada gota a gota até atingir o pH 10. A solução é agitada a 50°C durante 5 min. A solução é então arrefecida com banho de gelo/água e solução aquosa de ácido clorídrico a 35% é adicionada até atingir pH 7. A mistura é extraida com acetato de etilo. A camada orgânica é decantada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente é evaporado sob pressão reduzida. O residuo é triturado com hexano e algumas gotas de diclorometano para dar 1,6 g de 4-formil-lH-pirazole-3-carboxilato de etilo que é utilizado no próximo passo sem mais purificação. MS (m/z): 169 (M+l). 2 . 1- (3-Fluoro-2-pirid.il) -4-formil-pirazole-3-carboxilato de etilo

Uma mistura de 4-formil-lH-pirazole-3-carboxilato de etilo (1,6 g, 9,52 mmol), 2,3-difluorpiridina (1,20 g) e carbonato de potássio (1,97 g) em dimetilformamida (8 mL) é aquecida e agitada a 100°C durante 1,5 h. Depois, a mistura de reação é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Água é adicionada, e a fase orgânica é extraida com acetato de etilo, decantada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto bruto é purificado através de cromatografia de fase normal 58 ΡΕ2501703

Isco utilizando acetato de etilo e hexano para dar 711 mg do composto em epigrafe. MS (m/z): 264 (M+l).

Preparação 44: 3-Metil-l-(3-(tetra-hidrofuran-2-il)piridin-2-il)-lH-pirazole-4-carbaldeido

1. 3-(2,5-Di-hidrofuran-2-il)-2-fluoropiridina A um tubo de teste com tampa roscada contendo acetato de potássio (440 mg, 4,5 mmol), brometo de tetra-butilamónio (1,4 g, 4,5 mmol) e crivos moleculares 4A em dimetilformamida seca (1,8 mL) são adicionados sob azoto 2-fluoro-3-iodopiridina (400 mg, 1,8 mmol), 2,3-di-hidrofura-no (1,4 mL, 18 mmol) e acetato de paládio (20 mg, 0,09 mmol) . O tubo de reação é rapidamente selado e agitado de um dia para o outro à temperatura ambiente. A mistura é diluida com éter dietilico e a mistura filtrada sobre celi-te. o filtrado é lavado com água, seco sobre sulfato de magnésio, filtrado e o solvente evaporado in vacuo. O resíduo resultante é purificado através de gel de sílica utilizando cromatografia de fase normal Isco eluindo com hexano: acetona (gradiente de 5 a 30% em acetona) para dar 170 mg de 3-(2,5-di-hidrofuran-2-il)-2-fluoropiridina. MS (m/z): 166 (M+l). 59 ΡΕ2501703 2. 2-Fluoro-3-(tetra-hidrofuran-2-il)piridina

Um balão de fundo redondo contendo 3-(2,5-di-hidrofuran-2-il)-2-fluoropiridina (170 mg, 1 mmol) e Pd a 10%/C em metanol (3,1 mL) é evacuado sob vácuo e cheio com hidrogénio com a ajuda de um balão. A reação é agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e filtrada sobre celite. O solvente é evaporado in vacuo para dar 148 mg de 2-fluoro-3-(tetra-hidrofuran-2-il)piridina. MS (m/z): 168 (M+l). 3. 3-Metil-l-(3-(tetra-hidrofuran-2-il)piridin-2-il)-1H-pirazole-4-carbaldeído A um tubo de teste com tampa roscada contendo 2-fluoro-3-(tetra-hidrofuran-2-il)piridina (148 mg, 0,88 mmol) em dimetilformamida (2,2 mL) são adicionados 3-metil-lH-pirazole-4-carbaldeido (81 mg, 0,74 mmol) e carbonato de potássio (152 mg, 1,1 mmol). O tubo de reação é rapidamente selado (atenção: possível aumento de pressão; utilize um escudo de segurança) e agitado num banho de óleo pré-aguecido a 110°C durante 18 h com a ajuda de um agitador magnético. A mistura é diluída com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica é separada, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e o solvente evaporado in vacuo. O resíduo resultante é purificado através de gel de sílica utilizando cromatografia de fase normal Isco eluindo com hexano: acetona (gradiente de 5 a 20% em acetona) para dar 116 mg do composto em epígrafe. MS (m/z): 258 (M+l). 60 ΡΕ2501703

Preparação 45: 3-(2-Bromo-pirid-3-il)isoxazole

1. 2-Bromopiridino-3-carbaldeido-oxima A uma solução de 2-bromopiridino-3-carbaldeído (2,04 g) em etanol (25 mL) é adicionado hidrocloreto de hidroxilamina (948 mg, 13,16 mmol) e etanoato de sódio (1,09 g, 13,16 mmol). A mistura é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. 0 solvente é evaporado sob pressão reduzida e o residuo é partilhado entre diclorome-tano e água. A camada orgânica é separada, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado in vacuo para dar 2 g de 2-bromopiridino-3-carbaldeido-oxima. MS (m/z): 201/203 (M+l/M+3) 2 . [3- (2-Bromo-3-pirid.il) isoxazol-5-il] -trimetil-silano A uma suspensão em agitação de 2-bromopiridino-3-carbaldeído-oxima (400 mg, 1,99 mmol) em diclorometano (3,98 mL) a 0°C, são adicionados em porções piridina (201,13 μΐ, 2,49 mmol) seguida de N-clorossuccinimida (337,19 mg, 2,49 mmol). Depois, são adicionados trimetil-silil)acetileno (350,60 μΐ, 2,49 mmol) seguido de trietil- 61 ΡΕ2501703 amina (346,68 yL, 2,49 mmol). A mistura é agitada desde 0°C até à temperatura ambiente. Após duas horas, são adicionadas mais piridina (321,81 pL, 3,98 mmol) e IV-clorossuc-cinimida (539,51 mg, 3,98 mmol) e a mistura é agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura de reação é então temperada com solução saturada de cloreto de amónio. A camadas são separadas e os orgânicos são secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar [3-(2-bromo-3-piridil)isoxazol-5-il]-trimetil-silano em rendimento quantitativo. MS (m/z): 297/299 (M+l/M+3) 3. 3-(2-Bromo-3-piridil)isoxazole A uma solução de [3-(2-bromo-3-piridil)isoxazol-5-il]-trimetil-silano (620 mg, 2,09 mmol) em metanol (18 mL) , é adicionado carbonato de potássio (29,12 mg, 208,59 pmoles) numa porção. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 24 h. O solvente é removido em vácuo. O produto bruto é partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de cloreto de amónio. Os orgânicos são lavados com água e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando como eluente hexano/acetato de etilo desde 66/33 até 50/50 de forma a dar 140 mg do composto em epígrafe como um sólido branco. MS (m/z): 225/227 (M+l/M+3) 62 ΡΕ2501703

Preparação 4 6: 1-(3-Cloro-2-piridil)-3-metil-pirazole-4- carbaldeido

H

A uma solução de 3-metil-pirazole-4-carbaldeído (0,5 g, 4,5 iranol) em dimetilf ormamida seca (15 mL) é adicionado carbonato de potássio (2,5 g, 18 mmol,) à temperatura ambiente. A mistura de reação é agitada a 40°C durante 30 min e depois é adicionada 1-fluoro-2-cloropiri-dina (0,77 g, 6 mmol,). A mistura de reação é aquecida a 70°C durante 16 h. Após conclusão, a mistura de reação é arrefecida até à temperatura ambiente, diluida com água e depois extraída com acetato de etilo. A camada orgânica é seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. A mistura bruta é purificada através de cromatografia de gel de sílica eluindo com hexano/acetato de etilo (75:25, 65:35) para produzir 0,525 g (52%) do composto em epígrafe. MS (m/z): 222 (M+l).

Preparação 47: 1-(3-Ciclopropil-2-piridil)-3-metil-pirazo- le-4-carbaldeido 63 ΡΕ2501703 1. Éster de etilo de ácido 1-(3-bromo-piridin-2-il)-3-metil-pirazole-4-carboxílico A uma solução de éster de etilo de ácido 3-metil-pirazole-4-carboxílico (2,0 g, 13 mmol) em dimetilformamida seca (30 mL) é adicionado carbonato de potássio (7,2 g, 52 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reação é agitada a 40°C durante 30 min e depois 1-fluoro-2-bromopiridina (3,0 g, 17 mmol) é adicionada. A mistura de reação é agitada a 7 0°C durante 4 h. A mistura de reação é arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com água e depois extraída com acetato de etilo. A camada orgânica é seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. A mistura bruta foi purificada através de cromatografia de gel de sílica eluindo com hexano/acetato de etilo (85:15, 80:20) para produzir 3,2 g (79%) de éster de etilo de ácido 1-(3-bromo-piridin-2-il)-3-metil-pirazo-le-4-carboxílico. MS (m/z): 312 (M+3), 310 (M+l). 2. Éster de etilo de ácido 1-(3-Ciclopropil-piridin-2-il)-3 -metil-pirazole-4-carboxilico

Uma mistura de éster de etilo de ácido 1- (3-bromo-piridin-2-il)-3-metil-pirazole-4-carboxílico (1,5 g, 5,5 mmol), fosfato de potássio (4,0 g, 19,2 mmol), ácido ciclopropil-borónico (0,7 g, 8,2 mmol) e tolueno/água (2:1, 15 mL) é desgaseifiçada com azoto e são adicionados triciclo-hexilfosfeno (0,153 g, 0,54 mmol) e acetato de paládio (0,061 g, 0,27 mmol). A mistura é desgaseifiçada 64 ΡΕ2501703 outra vez com azoto e o recipiente de reação é selado e aquecido a 100°C durante 16 h. A mistura de reação é concentrada, diluída com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica é seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. A mistura bruta é purificada através de cromatograf ia de gel de sílica eluindo com hexano/acetato de etilo (85:15) para produzir 1,6 g (93%) de éster de etilo de ácido 1-(3-ciclopropil-piridin-2-il)-3-metil-pirazole-4-carboxílico. MS (m/z): 272 (M+l). 3. [1-(3-Ciclopropil-piridin-2-il)-3-metil-pirazol-4-il]- metanol A uma suspensão agitada de alumino-hidreto de lítio (0,44 g, 11,7 mmol) em tetra-hidrofurano seco (25 mL) é adicionada uma solução de éster de etilo de ácido 1- (3-bromo-piridin-2-il)-3-metilpirazole-4-carboxílico (1,6 g, 5,8 mmol) em tetra-hidrofurano seco (5 mL) sob atmosfera de azoto a -78°C. Após adição completa a mistura de reação é aquecida até à temperatura ambiente e depois agitada de um dia para o outro. A mistura de reação é temperada com hidróxido de sódio IN depois filtrada através de celite. A camada orgânica é separada e a camada aquosa é extraída com acetato de etilo. A camada orgânica combinada é lavada com água e salmoura, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada para produzir 1,1 g (84%) de [ 1-(3-ciclopropil-piridin-2-il)-3-metil-pirazol-4-il]-metanol. MS (m/z): 230 (M+l). 65 ΡΕ2501703 4 . 1- (3-Ciclopropil-2-pirid.il) -3-metil-pirazole-4-carbal- deido A uma solução de [ 1-(3-ciclopropil-piridin-2-il)-3-metil-pirazol-4-il]-metanol (1,1 g, 5,0 mmol) em diclo-rometano seco (15 mL) é adicionado clorocromato de piri-dínio (1,2 g, 5,5 mmol) sob atmosfera de azoto. A mistura de reação é agitada à temperatura ambiente durante 2 h e depois filtrada através de celite. 0 filtrado é concentrado sob pressão reduzida. A mistura bruta é purificada em gel de silica eluindo com hexano/acetato de etilo (90:10, 80:20) para produzir 0,2 g (20%) do composto em epigrafe. MS (m/z): 228 (M+l).

Preparação 48: 4-[(2-Bromo-3-piridil)metil]morfolin-3-ona

Br O

A uma solução de 2-bromo-3-bromometil-piridina (0,68 g, 2,36 mmol) em dimetilformamida (10 mL) são adicionados hidreto de sódio (0,11 g, suspensão a 60%, 2,82 mmol), morfolin-3-ona (0,20 g, 1,97 mmol) e iodeto de tetrabutilamónio (catalítico) a 0°C. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. Após conclusão, a mistura de reação é partilhada entre acetato de etilo (25 mL) e água (25 mL). A camada aquosa é extraída com acetato de etilo (2 x 25 mL) e os extratos orgânicos combinados são 66 ΡΕ2501703 secos sobre sulfato de sódio e concentrados in vacuo. 0 material bruto é purificado através de cromatografia de coluna sobre gel de sílica eluindo com hexano/acetato de etilo (55:45) para produzir 0,35 g (66%) do composto em epígrafe. MS (m/z): 271/273 (M+l, M+3).

Os compostos das Preparações 49-50 são preparados essencialmente como descrito na Preparação 48 a partir do correspondente reagente lactame.

Prep. N°. Nome químico Estrutura Rendimento (%) Dados físicos: MS (m/z) 49 1-[(2-Bromo-3-piridil)metil]-pirrolidin-2-ona Br o çró 80 255/257 (M+l, M+3) 50 1- [ (2-Brcnio-3-piridil)metil] -piperidin-2-ona Br 0 συ 59 269/271 (M+l/M+3)

Preparação 51: 1- (3-Cloro-2-pirid.il) -4-formil-pirazole-3- carboxilato de etilo

EtO

A uma solução de 4-formil-pirazole-3-carboxilato de etilo (1,70 g, 10,1 mmol) e 3-cloro-2-fluoropiridina (1,99 g, 15,1 mmol) em dimetilformamida (20 mL) é adicionado carbonato de potássio (2,80 g, 20,2 mmol) e a mistura é agitada a 100°C durante 16 horas. Após conclusão, 67 ΡΕ2501703 a mistura de reação é partilhada entre água (25 mL) e acetato de etilo (25 mL) . A camada aquosa é extraida com acetato de etilo (3 x 25 mL) e os extratos orgânicos combinados são secos sobre sulfato de sódio, concentrados in vacuo e purificados através de cromatografia de coluna sobre gel de silica eluindo com hexano/acetato de etilo (50:50) para produzir 1,5 g (54 %) do composto em epigrafe. MS (m/z): 280 (M+l).

Preparação 52 : 1- (3-Metil-2-pirid.il) -4-formil-pirazole-3- carboxilato de etilo

Uma mistura de 1-(3-cloro-2-piridil)-4-formil-pi-razole-3-carboxilato de etilo (1,0 g, 3,5 mmol), trimetil-boroxina (0,44 g, 3,50 mmol) e carbonato de potássio (1,4 g, 10,1 mmol) em dioxano (18 mL) e água (2 mL) é desgasei-ficada com gás azoto durante 10 min e depois é adicionada paládio-trifenilfosfina (0,40 g, 0,3 mmol) e agitada a 110°C durante 16 h. Após conclusão, a mistura de reação é partilhada entre diclorometano (50 mL) e água (25 mL) . A camada aquosa é extraida com diclorometano (2 x 25 mL) e os extratos orgânicos combinados são secos sobre sulfato de sódio e concentrados in vacuo. A mistura bruta é purificada através de cromatografia de coluna sobre gel de silica eluindo com hexano/acetato de etilo (70:30) para produzir 0,12 g (13%) do composto em epigrafe. MS (m/z): 260 (M+l). 68 ΡΕ2501703

Exemplo 1: (L)-Tartarato de [2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metanol

A uma solução de 2-[4-[ (2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2, 3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carbaldeido (12,50 g, 26,10 mmol) em diclorometano (125 mL) a 0°C é adicionado boro-hidreto de sódio (0,395 g, 10,44 mmol) e metanol (37,50 mL) . O banho de gelo é removido e a reação é agitada à temperatura ambiente durante 30 min. Água (50 mL) é adicionada e a mistura é concentrada para metade do volume resultando num precipitado sólido branco pegajoso. É adicionado diclorometano (100 mL) e a mistura bifásica é separada. A camada orgânica é lavada com água (50 mL), seca sobre sulfato de sódio e concentrada para metade do volume (cerca de 100 mL) . Éter metil-tert-butilico (100 mL) é adicionado e a solução é concentrada para proporcionar um precipitado. O sólido é filtrado e seco sob vácuo para dar 12 g de [2-[4-[ (2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il ]-3-piridil]metanol. MS (m/z): 481 (M+l). 69 ΡΕ2501703 A base livre do composto em epígrafe (0,48 g, 1 mmol) é dissolvida em 3 mL de metanol e é adicionada uma solução de ácido (L)-tartárico (0,15 g, 1 mmol) em metanol. A mistura é agitada durante dez minutos. O solvente é evaporado e o resíduo é seco in vacuo de um dia para o outro para dar (L)-tartarato de [2-[4-[(2-cloro-4,4-difluo-ro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)me-til]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metanol num rendimento quantitativo. MS (m/z): 481 (M+l).

Exemplo 2: 2-Cloro-4,4-difluoro-l'-[[1-[3-(4H-imidazol-2-il)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno-[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]

Uma solução de glioxal a 40% em água (4, 69 mL, 40,71 mmol) e amoníaco 2N em metanol (54,29 mL, 108,57 mmol) é adicionada a uma suspensão de 2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1' -il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carbaldeído (6,50 g, 13,57 mmol) em metanol (10 mL) . A mistura de reação é agitada durante cinco minutos a 0°C e depois a 40°C durante 1 h. Diclorometano (10 mL) é adicionado a uma suspensão dissolvendo quase todo o material. A mistura é agitada durante 4 h resultando numa solução castanha clara. A 70 ΡΕ2501703 solução é agitada durante 8 h a 40°C. Glioxal a 40% em água (2,34 mL, 20,36 mmol) e amoníaco 2N em metanol (27,14 mL, 54,29 mmol) são adicionados e a mistura é agitada a 40°C durante 15 h. A mistura de reação é concentrada até aproximadamente 100 mL e vertida sobre gelo/água (400 mL) e forma-se um precipitado sólido beige. O sólido é filtrado, lavado com água e seco sob vácuo (7 g). O sólido é combinado com outros materiais brutos preparados essencialmente através do mesmo método (10 g). O sólido combinado é dissolvido em diclorometano e filtrado através de uma almofada de gel de sílica eluindo com diclorome-tano/metanol (96/4). As frações contendo produto são combinadas e concentradas para obter um sólido amarelo claro (11 g) . O sólido é extraído com hexano a 10%/diclorometano sob refluxo e o filtrado é concentrado. O sólido é ainda purificado via cromatografia de gel de sílica eluindo com hidróxido de amónio 2N em misturas de metanol/diclorometano, para obter 6,5 g do composto em epígrafe. MS (m/z): 518 (M+l).

Exemplo 3: 2-Fluoro-l'-[[1-[3-(lH-imidazol-2-il)-2-piri- dil]-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[4,5-di-hidrotieno-[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]

Este composto é preparado essencialmente como 71 ΡΕ2501703 descrito no Exemplo 2 utilizando 2-[4-[ (2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-l'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carbaldeído. 0 resíduo é purificado através de cromatografia de fase normal Isco para produzir 32% do composto em epígrafe: espetro de massa (m/z): 465 (M+l).

Exemplo 4: 5-(2-(4-((2'-Cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hi-droespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-l-il)metil)-3-metil-lH-pirazol-l-il)piridin-3-il)oxazole

A um tubo de teste com tampa roscada contendo 2-(4- ( (2'-cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4, 7'-tieno[2,3-c]piran]-l-il)metil)-3-metil-lH-pirazol-1-il)nicotinaldeído (0,120 g, 0,25 mmol) em metanol (2,5 mL) são adicionados carbonato de potássio (0,104 g, 0,75 mmol) e isocianeto de p-toluenossulfonilmetilo (0,054 g, 0,28 mmol) sob azoto. O tubo de reação é rapidamente selado (atenção: possível aumento de pressão; utilize um escudo de segurança) e é agitado num banho de óleo pré-aquecido a 65°C durante 3 h com a ajuda de um agitador magnético. A mistura é diluída com metanol e purificada utilizando um cartucho SCX de 2 g. O solvente é evaporado in vacuo. O resíduo resultante é purificado através de cromatografia de 72 ΡΕ2501703 fase normal Isco eluindo com hexano/etanol (5-30%) para dar 0,093 g do composto em epígrafe. MS (m/z): 518 (M+l)

Exemplo 5: (L)-Tartarato de 2-cloro-4,4-difluoro-l-[[1-(3- fluoro-2-piridil)-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]

A uma solução de 2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] (19,99 g, 64,33 mmol) em 1,2-dicloroetano (120 mL) é adicionado 1-(3-fluoro-2-piridil)-3-metil-pirazole-4-carbaldeído (12 g, 58,48 mmol) e a mistura é agitada à temperatura ambiente durante 15 min. Depois, triacetoxiboro-hidreto de sódio em pó (18,59 g, 87,72 mmol) é adicionado (temperatura interna 25-35°) e a suspensão resultante é agitada à temperatura ambiente durante 15 h. Uma mistura de solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio em gelo (200 mL) é adicionada em porções com agitação. As fases são separadas. A fase aquosa é extraída com éter metil-tert-butílico (30 mL). As camadas orgânicas combinadas são lavadas com água (50 mL) e salmoura a 50% (50 mL), secas sobre sulfato de sódio e concentradas para obter um óleo espesso o qual é purificado via cromatografia de gel de sílica utilizando misturas de diclorometano/metanol como eluente para dar 18 g de um óleo 73 ΡΕ2501703 espesso o qual é triturado com hexano e éter metil-tert-butílico a 10%/hexano para obter 16,5 g de 2-cloro-4,4-dif luoro-1' - [ [1- (3 — fluoro-2-piridil)-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]. MS (m/z): 469 (M+l). 0 sal tartarato é essencialmente preparado como descrito no Exemplo 1. MS (m/z): 469 (M+l).

Os compostos dos Exemplos 6-15 são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 5 utilizando o correspondente aldeido.

Ex. Nome químico Estiutura Rendimento % Dados físicos: MS (m/z) 6 (I/) -Tartarato de 1— [2— [4— [ (2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il] -3-piridil] -N,i7-dimetil-metanamina F .F <^fT] Ό \ Ϊ* N_/1 /-\ <X X^S M— 39 508 (M+l) 23 523 (M+l) 7 (t)-Tartarato de N- [[2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metil]acetamida Fx/F q-çO /yçó Η-/ OM 46a 443 (M+l) 8 (L)-Tartarato de 2-fluoro-1'—[[1—[3— (metoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] -¾ \ V °H Λ °^θΗ O-v - 38a 417 (M+l) 9 (L)-Tartarato de 2-fluoro-1'-[[1-(3-fluoro-2-piridil)-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] \ Ϊ /N rs- X \—/ .__--— ΡΕ2501703 - 74 - (continuação)

Ex. Nome químico Estrutura Rendimento % Dados físicos: MS (m/z) (L)-Tartarato de 2,4,4-trifluoro-l'-[[1-[3- F F S"><·0 10 (metoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'- J yv 72 479 (MEL) piperidina] c5-> (L)-Tartarato de 2-cloro-4,4-difluoro-l'-[[1- l‘D S- "ΐ “ 11 (3-fluoro-2-piridil) -3- (metoximetil)pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] 64 499 (M+l) (L)-Tartarato de 2,4,4-trifluoro-l'-[[1-(3- t/F -ÇO 12 fluoro-2-piridil)-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'- O 51 453 (M+l) piperidina] (L)-Tartarato de 2-cloro-4,4-difluoro-l'-[[3- O - yy? OH V y-N 0 13 metil-1-(3-morfolino-2-piridil)pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] 60 536 (M+l) (L)-Tartarato de 2-cloro-1'-[[1-[3- 14 (metoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] )y^ y-oy / 76 459 (M+l) (L)-Tartarato de 2-cloro-l'-[[1-[3- F f --ΟΤΙ Ό \ j fj Η°"·Α0 \=ΛΛ 0H <f 15 (ciclopropoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metil]-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] 69 521 (M+l) a As reações são realizadas utilizando tetra-hidrofurano como solvente. 75 ΡΕ2501703

Exemplo 16: 2-Cloro-4,4-difluoro-l'-[[3-metil-l-(3-tetra-hidrofuran-2-il-2-pirid.il) pirazol-4-il] me til] espiro [5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]

A um tubo de teste com tampa roscada contendo uma mistura de 3-metil-l-(3-(tetra-hidrofuran-2-il)piridin-2-il)-lH-pirazole-4-carbaldeído (192 mg, 0,75 mmol), 2'- cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano (209 mg, 0,75 mmol) e ácido acético (43 yL, 0,75 mmol) em 1,2-dicloroetano (2,6 mL) é adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (238 mg, 1,1 mmol). 0 tubo de reação é selado e agitado à temperatura ambiente durante 18 h com a ajuda de um agitador magnético. A mistura é diluída com metanol e purificada utilizando um cartucho SCX de 10 g e o solvente evaporado ín vacuo. 0 resíduo resultante é ainda purificado através de cromatografia de fase normal Isco eluindo com hexano:acetona (gradiente de 5 a 30% em acetona) para dar 113 mg do composto em epígrafe como um mistura racémica. MS (m/z): 521 (M+l). A resolução enantiomérica é levada a cabo sob condições SCF (cromatografia de fluído supercrítico) utili- 76 ΡΕ2501703 zando Chiralpak AD-H® (Chiral Technologies, Inc., West Chester, Pennsylvania, USA) como fase estacionária e dióxido de carbono/metanol/dimetiletilamina (0,2%) como fase móvel. O primeiro eluente é o enantiómero desejado.

Exemplo 17 : (L)-Tartarato de 2-cloro-4,4-difluoro-l'-[[1- (3-fluoro-2-piridil)-3-(isopropoximetil)pirazol-4-il]me-til]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]

A uma solução de 2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] (170 mg, 0,61 mmol) em diclorometano (2,4 mL), é adicionado 1-(3-fluoro-2-piri-dil)-3- (isopropoximetil)pirazole-4-carbaldeído (192 mg). A mistura é agitada 10 min à temperatura ambiente. Depois, é adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (268,3 mg), e a reação é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura é diluida com diclorometano e temperada lentamente com bicarbonato de sódio (solução saturada). A fase orgânica é então extraída com mais diclorometano, decantada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 resíduo é purificado através de HPLC de fase reversa para dar 67,9 mg de 2- 77 ΡΕ2501703 cloro-4,4-difluoro-l'-[[1-(3-fluoro-2-piridil)-3-(isopropo-ximetil)pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]. MS (m/z): 527 (M+l). 0 sal tartarato é essencialmente preparado como descrito no Exemplo 1. MS (m/z): 527 (M+l).

Exemplo 18: (L)-Tartarato de 2-cloro-4,4-difluoro-l'-[[1- [3-(metoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro [5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]

A um tubo de teste com tampa roscada é adicionado iodeto de cobre (I) (1,15 g, 6,02 mmol), 2-cloro-4,4-di fluoro-l '-[(3-metil-lH-pirazol-4-il)metil]espiro[5H-tieno-[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] (15 g, 40,12 mmol), carbonato de potássio (11,76 g, 84,26 mmol), 15 mL de tolueno (previamente borbulhado com azoto durante 20 minutos) e uma barra de agitação. A mistura de reação é borbulhada com azoto durante mais 10 min e depois são adicionados 2-bromo-3-metoximetil-piridina (10,54 g, 52,16 mmol), e trans-N,N'-dimetilciclo-hexano-1,2-diamina (1,90 mL, 12,04 mmol). O tubo de reação é rapidamente selado (atenção: possivel aumento de pressão; utilize um escudo de segurança), agitado 78 ΡΕ2501703 à temperatura ambiente durante 5 min e imerso num banho de óleo pré-aquecido a 115°C durante 24 h. A amostra é arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com acetato de etilo e filtrada através de celite. 0 solvente é evaporado in vacuo. 0 residuo é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando hexano/acetato de etilo (30-70%). As frações desejadas são colhidas e evaporadas. Algumas frações impuras (<2 g) são repurifiçadas através de cromatografia de fase normal Isco utilizando hexano/acetato de etilo (20-60% em acetato de etilo) como eluente. Todas as frações contendo composto final são combinadas e evaporadas até à secura in vacuo. O residuo é dissolvido em di-clorometano e lavado com solução aquosa de hidróxido de amónio a 10% para remover resíduos de cobre. O solvente orgânico é evaporado e o composto é seco de um dia para o outro para produzir 13 g de 2-cloro-4,4-difluoro-l'-[[1-[3-(metoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro [5H-tieno [2, 3-c] pirano-7, 4 ' -piperidina] . MS (m/z): 495 (M+l). O sal tartarato é essencialmente preparado como descrito no Exemplo 1. MS (m/z): 495 (M+l).

Os compostos dos Exemplos 19-35 são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 18 a partir das correspondentes 2-bromo-3-substituída-piridina (exemplos 19-32 & 34-35) ou 2-iodo-3-substituída-piridina (exemplo 33) . 79 ΡΕ2501703 Εχ. No. Nome químico Estrutura Rendimento (%) Dados físicos: MS (m/z) 19 (L)-Tartarato de 2-cloro-1'—[[1—[3— (etoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metil]-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7, 4' -piperidina] ~ÇÕ < 50 509 (MEL) 20 (L)-Tartarato de 2-cloro-1'—[[1—[3— (ciclopropilmetoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metil]-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] ^í -,V ^0 v> 65 535 (M+l) 21 (L)-Tartarato de 2-cloro-4,4-difluoro-1'—[[1—[3— (isopropoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] (ri r·°μ V /-\ OH / 59 523 (M+l) 22 (L)-Tartarato de 2-cloro-4,4-difluoro-1'-[[3-metil-l-(3-metil-2-piridil)pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] ζ$- L OH 53 465 (M+l) 23 (L)-Tartarato de 2-cloro-4,4-difluoro-1'-[[3-metil-l-[3-(pirazol-1-ilmetil)-2-piridil]pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] f Ολ - N—n O 30 531 (M+l) 24 (L)-Tartarato de 2-cloro-4,4-difluoro-1'-[[3-metil-l-[3-(triazol-2-ilmetil)-2-piridil]pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] Y 'O v j O Htv^o 44 532 (M+l) ΡΕ2501703 80 (continuação)

Ex. No. Nome químico Estrutura Rendimento (%) Dados físicos: MS (m/z) (L)-Tartarato de 2-cloro-4,4- difluoro-1'-[[3-metil-l-[3-(1,2,4- 44 25 triazol-l-ilmetil)-2-piridil]pirazol-4- oh _/N 62 532 (MEL) il]metil]espiro[5H-tieno[2,3- // \\ T °M \ /—\ OH c]pirano-7,4'-piperidina] 43 (L)-Tartarato de 2-fluoro-1'-[[3- -Cg 26 metil-1-[3-(1,2,4-triazol-l-ilmetil) -2-piridil]pirazol-4- Ν^ΗγΙο 70 480 (MEL) il]metil]espiro[4,5-di-hidroti-eno[2,3—c]pirano-7,4'-piperidina] <f~K L '* .n-n 4.3 N (L)-Tartarato de 2-cloro-4,4- \ W difluoro-1'-[[1-[3-(imidazol-1- 27 ilmetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol- 37 531 (MEL) 4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] & 4x3 N (L)-Tartarato de 2-[2-[4-[(2-cloro- ci^jO 4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3- O 28 c]pirano-7,4'-piperidina]-1'- V"-vt 51 490 (MEl) il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]acetonitrilo Cw (L)-Tartarato de 2-[[2-[4-[(2-cloro- \/F 4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3- O P v j n 1 / Ou N—< 29 c]pirano-7,4'-piperidina]-1'- 13 524 (MEL) il) metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3- piridil]oxi]acetamida (L)-Tartarato de 2-fluoro-1'-[[3- -rO ‘0 . N metil-1-[3-[(2-metilimidazol-l- 30 il)metil]-2-piridil]pirazol-4- 3 X o _/ y. 0 57 493 (MEL) il]metil]espiro[4,5-di-hidroti- N—Λ Y OH // 1 \ / OH eno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] '- N-, H 81 ΡΕ2501703 (continuação)

Exemplo 36: 2-Cloro-4,4-difluoro-l'-[[1-(3-metoxi-2-piri-dil)-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pira-no-7,4'-piperidina] 82 ΡΕ2501703

A um tubo de teste com tampa roscada são adicionados iodeto de cobre (I) (23,74 mg, 0,125 mmol), 2-cloro- 4,4-difluoro-1'-[(3-metil-lH-pirazol-4-il)metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] (233,00 mg, 0,623 mmol), carbonato de potássio (182,71 mg, 1,31 mmol), tolueno (2 mL) (previamente borbulhado com azoto durante 20 min) e uma barra de agitação. A mistura de reação é borbulhada com azoto durante 20 minutos e depois são adicionados 2-iodo-3-metoxipiridina (302,01 mg, 1,25 mmol) e trans-N,N'-dimetilciclo-hexano-1,2-diamina (39,31 pL, 0,25 mmol). O tubo de reação é rapidamente selado (atenção: possivel aumento de pressão; utilize um escudo de segurança) e imerso num banho de óleo pré-aquecido a 110°C durante 24 horas com a ajuda de um agitador magnético. Depois, a mistura é vertida em coluna SCX (25 g) e eluida com metanol e depois solução de amoniaco 2N em metanol. A fração básica é concentrada e o residuo resultante é purificado através de HPLC básica para dar 162 mg do composto em epígrafe. MS (m/z): 481 (M+l).

Exemplo 37: 2-Cloro-4,4-difluoro-l'-[[1-(3-isoxazol-3-il-2-piridil)-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]-pirano-7,4'-piperidina] 83 ΡΕ2501703

Este composto é essencialmente preparado tal como descrito no Exemplo 36 utilizando 2-cloro-4,4-difluoro-1'-[(3-metil-lH-pirazol-4-il)metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pira-no-7,4'-piperidina] e 3-(2-bromo-pirid-3-il)isoxazole como material de partida. 0 residuo é purificado através de cro-matografia de fase normal Isco (acetato de etilo é utilizado como eluente) para produzir 45% do composto em epígrafe: espetro de massa (m/z): 518 (M+l)

Exemplo 38 : 2-(2-(4-((2'-Cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hi-droespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-l-il)metil)-3-metil-lH-pirazol-l-il)piridin-3-il)propan-2-ol

A um tubo de teste com tampa roscada contendo 2-(2-bromo-3-piridil)propan-2-ol (520 mg, 2,41 mmol) em dime-tilf ormamida seca (3,2 mL) são adicionados sob azoto 4-((2'-cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina- 84 ΡΕ2501703 4,7 ' - tieno[2,3-c]piran]-l-il)metil)-3-metil-lH-pirazole (600 mg, 1,6 mmol), óxido de cobre (I) (23 mg, 160 ymoles), (R,R)-(-)-N,N'-dimetil-1,2-ciclo-hexanodiamina (68 mg, 480 ymoles) e carbonato de césio (1040 mg, 3,2 mmol). O tubo de reação é rapidamente selado (atenção: possivel aumento de pressão; utilize um escudo de segurança) e agitado num banho de óleo pré-aquecido a 110°C durante 16 h com a ajuda de um agitador magnético. A mistura é diluída com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica é separada, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e o solvente evaporado in vacuo. O resíduo resultante é purificados através de gel de sílica utilizando cromatografia de fase normal Isco eluindo com hexano:etanol (gradiente de 2 a 15% em etanol) para dar 310 mg do composto em epígrafe. MS (m/z): 509 (M+l)

Exemplo 39: (L)-Tartarato de 1-[2- [4-[(2-cloro-4,4-difluo- ro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)me-til]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]-N-metil-metanamina

A base livre do composto em epígrafe é preparada essencialmente como descrito na Preparação 7 utilizando 2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano- 85 ΡΕ2501703 7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piri-dino-3-carbaldeído e metilamina com um rendimento de 51%. MS (m/z): 494 (M+l). 0 sal tartarato é essencialmente preparado como descrito no Exemplo 1. MS (m/z): 551 (M+l).

Os compostos dos Exemplos 40-44 são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 39 a partir dos correspondentes aldeído e amina. (Exemplo 43 é preparado utilizando 1,2-dicloroetano como solvente)

Ex. No. Ncme químico Estrutura Rendimento (%) Dados físicos: MS (m/z) 40 (L)-Tartarato de N- [[2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metil]propan-2-amina -y+í 34 522 (MEL) 41 (L)-Tartarato de 2-[[2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metilamino]acetonitrilo r>c a'HOTl ‘0 r OH 70 519 (MEL) 42 (L) -Tartarato de 2- [ [2- [4- [ (2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metilamino]acetonitrilo . r N-y H C*l 27 453 (M+l) 86 ΡΕ2501703

Exemplo 45: (L)-Tartarato de 2-[4-[ (2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carbaldeido-oxima

A uma solução de 2-[4-[ (2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-l'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carbaldeido (0,210 g, 0,438 mmol) em etanol (3 mL) são adicionados hidrocloreto de hidroxilamina (0,038 g, 0,526 mmol) e etanoato de sódio 87 ΡΕ2501703 (0,044 g, 0,526 iranol) e a mistura é agitada sob refluxo durante 1 h. O solvente é evaporado e o resíduo é extraído com acetato de etilo e água. A camada orgânica é separada, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e o solvente é evaporado in vacuo. O resíduo é purificado através de HPLC de fase reversa básica para produzir 0,110 g de 2—[4— [ (2 — cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carbaldeído-oxima. MS (m/z): 494 (M+l). O sal tartarato é essencialmente preparado como descrito no Exemplo 1. MS (m/z): 494 (M+l).

Os compostos dos Exemplos 46-47 são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 45 a partir dos correspondentes aldeído e hidroxilamina.

88 ΡΕ2501703

Exemplo 48: (L)-Tartarato de [2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metanamina

1. 2-[[2-[4-[1(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3- c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il] -3-piridil]metil]isoindolino-1,3-diona

Azodicarboxilato de di-isopropilo (0,105 mL, 0,54 mmol) é adicionado a uma solução de [2-[4-[ (2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1' -il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metanol (0,173 g, 0,36 mmol), ftalimida (0,079 mg, 0,54 mmol) e trifenilfos-fina (0,142 g, 0,54 mmol) em tolueno (3 mL) a 0°C. A mistura é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. O solvente é removido e o residuo é purificado primeiro utilizando um cartucho SCX de 2 g e após evaporação da fração amoníaco 2N em metanol através de cromatografia de fase normal Isco eluindo com hexano/etanol (3% — 30%) para dar 0,201 g de 2-[[2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno-[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pira- 89 ΡΕ2501703 zol-1-il]-3-piridil]metil]isoindolino-1,3-diona. MS (m/z): 610 (M+l). 2. (L)-Tartarato de [2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metanamina A um balão contendo 2-[[2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro [5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metil]isoindolino-1 , 3-diona (0,201 g, 0,33 mmol) e 24 μΐ de água em etanol (2,5 mL) é adicionado mono-hidrato de hidrazina (0,04 g, 0,79 mmol). A mistura de reação é sujeita a refluxo durante 2,5 h e depois diluída com metanol e purificada utilizando um cartucho SCX de 2 g. Após evaporação da fração amoníaco 2N em de metanol, o produto resultante é purificado através de cromatografia de fase normal Isco eluindo com etanol e uma solução de hidróxido de amónio a 15% (7N em metanol) em etanol (gradiente de 25-90% do eluente básico) produzindo 129 mg do composto em epígrafe. MS (m/z): 480 (M+l). O sal tartarato é essencialmente preparado como descrito no Exemplo 1. MS (m/z): 480 (M+l).

Exemplo 49: (L)-Tartarato de 2-[4-[ (2-fluoroespiro[4,5-di- hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil] -3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carboxamida 90 ΡΕ2501703

1._2-[4-[(2-Fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano- 7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piri-dino-3-carbonitrilo:

Este composto é essencialmente preparado tal como descrito na Preparação 7 utilizando 2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] e 2-(4-formil-3-metil-pirazol-l-il)piridino-3-carbonitrilo. O resíduo é purificado através de SCX para dar 2-[4-[(2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carbonitrilo com um rendimento de 32%. MS (m/z): 424 (M+l). 2. (L)-Tartarato de 2-[4-[(2-fluoroespiro[4,5-di-hidro- tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il] piridino-3-carboxami da A uma solução de 2-[4-[(2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-l'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carbonitrilo (0,71 mmol, 0,30 g) em dimetilsulfóxido (7,5 mL) , carbonato de potássio (0,049 g, 0,35 mmol) é adicionado e a mistura é arrefecida até 0-5°C antes de adicionar solução de peróxido de 91 ΡΕ2501703 hidrogénio em água a 33% (0,39 mL, 3,78 mmol). A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Depois, é adicionada água cuidadosamente e a mistura de reação é extraída com acetato de etilo. A camada orgânica é decantada, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente é evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando como eluente misturas de diclorometano/metanol para dar 0,252 g que são ainda purificadas através de HPLC de fase reversa para produzir 0,198 g de 2-[4-[(2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-l'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carboxamida. MS (m/z): 442 (M+l). O sal tartarato é essencialmente preparado como descrito no Exemplo 1. MS (m/z): 442 (M+l).

Exemplo 50 : (L)-Tartarato de 2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro- espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carboxamida

O composto em epígrafe é preparado essencialmente como descrito no Exemplo 49 utilizando 2-cloro-4,4-difluo- 92 ΡΕ2501703 ro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] e 2 —(4 — formil-3-metil-pirazol-l-il)piridino-3-carbonitrilo como materiais de partida com um rendimento global de 15% (rendimento de 22% no primeiro passo e rendimento de 66% no segundo passo). MS (m/z): 494 (M+l).

Exemplo 51: (L)-Tartarato de 2-[2-[4-[(2-cloro-4,4-difluo- ro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)me-til]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]acetamida

A uma solução de 2-[2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]acetonitrilo (170 mg, 346,96 ymoles) em dimetilsulfóxido (4 mL) é adicionado carbonato de potássio (23,98 mg, 173,48 ymoles) e a mistura é arrefecida até 0-5°C. É adicionada solução de peróxido de hidrogénio a 33% em água (189,54 yL, 1,84 mmol). A mistura é agitada à temperatura ambiente 16 h e depois são adicionados mais solução de peróxido de hidrogénio a 33% em água (189,54 pL, 1,84 mmol) e carbonato de potássio (23,98 mg, 173,48 pmoles). Água é adicionada e a mistura é 93 ΡΕ2501703 extraída com acetato de etilo. A camada orgânica é separada, lavada com salmoura, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado in vacuo. 0 composto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando diclorometano e amoníaco 2N em metanol como eluentes (1,5 a 6% em amoníaco 2N em metanol) para produzir 19% da base livre do composto em epígrafe. MS (m/z) : 508 (M+l). 0 sal tartarato é preparado essencialmente como descrito no Exemplo 1. MS (m/z): 508 (M+l).

Exemplo 52: (L)-Tartarato de W-metilcarbamato de [2—[4—[(2— cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-pipe-ridina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metilo

Isocianato de metilo (5,80 pL, 0,096 mmol) é adicionado a uma solução de 2-[ 4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro [5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-l'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metanol (0,042 g, 0,087 mmol) em diclorometano (1 mL) à temperatura ambiente. Após 94 ΡΕ2501703 1 h sem se observar evolução da reação através de LC/MS, são adicionados trietilamina (12,17 pL, 87,32 pmoles) e isocianato de metilo (5,8 pL, 0,096 mmol) e a reação é agitada de um dia para o outro. São adicionados mais trietilamina (12,17 pL, 87,32 pmoles) e isocianato de metilo (5,8 pL, 0, 096 mmol) e após 24 h o solvente é evaporado e o residuo é purificado através de cromatografia de fase normal Isco com diclorometano/hidróxido de amónio 2N em metanol (0 a 5% em hidróxido de amónio 2N em metanol) como eluente para produzir 0,041 g de T7-metilcarbamato de [2 —[4 —[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-l'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metilo. MS (m/z): 538 (M+l). O sal tartarato é essencialmente preparado como descrito no Exemplo 1. MS (m/z): 538 (M+l).

Exemplo 53: (L)-Tartarato de [4-[(2-cloro-4,4-difluoro- espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-1-(3-fluoro-2-piridil)pirazol-3-il]metanol

95 ΡΕ2501703 1. 4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano- 7,4' -piperidina] -1' -il)metil] -1- (3-fluoro-2-pirid.il) pira-zole-3-carboxilato de etilo A uma solução de 1-(3-fluoro-2-piridil)-4-formil-pirazole-3-carboxilato de etilo (342,5 mg) em 1,2-dicloroetano (6,7 mL) , é adicionada 2-cloro-4,4-difluoro-espiro [5H-tieno [2, 3-c] pirano-7, 4 '-piperidina] (280 mg, 1 mmol). A mistura é agitada durante 10 min. Depois, triacetoxiboro-hidreto de sódio (442 mg) é adicionado e a mistura é agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Bicarbonato de sódio (solução aquosa saturada) é adicionado e a fase orgânica extraida com diclorometano, seca sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado in vacuo. 0 produto bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando como eluente acetato de etilo e hexano para dar 450 mg de 4- [ (2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-1-(3-fluoro-2-piridil)pirazole-3-carboxilato de etilo. MS (m/z): 527 (M+l). 2. (L)-Tartarato de [4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H- tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-1-(3-fluoro-2-piridil)pirazol-3-il]metanol A uma solução de 4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro [5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-1-(3-fluoro-2-piridil)pirazole-3-carboxilato de etilo (250 mg, 0,47 mmol) em tetra-hidrofurano (2,37 mL) sob atmosfera 96 ΡΕ2501703 de azoto e arrefecida até 0°C, é adicionado lentamente alumino-hidreto de litio 1M em tetra-hidrofurano (569,3 pL) . A mistura é agitada a essa temperatura durante 30 minutos. Depois, 22 pL de água são adicionadas e o banho de arrefecimento é removido e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 5 min antes de adicionar 22 pL de solução aquosa de hidróxido de sódio a 15% e 65 pL de água. Os sólidos são separados por filtração e o solvente evaporado. O produto bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando como eluente diclorometano e metanol para dar 141 mg do composto em epigrafe como base livre. MS (m/z): 485 (M+l). O sal tartarato é essencialmente preparado como descrito no Exemplo 1. MS (m/z): 485 (M+l).

Um método alternativo para fazer a base livre do Exemplo 53: 1. 4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-lH-pirazole-3-carboxilato de etilo

A uma suspensão de 2-cloro-4,4-difluoro-espi- 97 ΡΕ2501703 ro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina (18,3 g, 65,42 mmol) em tetra-hidrofurano (0,2 L) é adicionado 4-formil-lH-pirazole-3-carboxilato de etilo (10 g, 59,47 mmol) e a mistura é agitada à temperatura ambiente durante 10 min. Depois, triacetoxiboro-hidreto de sódio em pó (16,39 g, 77,31 mmol) é adicionado. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h. Depois, a mistura de reação é vertida sobre uma solução aquosa saturada de gelo-bicarbonato de sódio (200 mL) . As fases são separadas. A fase aquosa é basificada com solução saturada de NaHCCb e extraída com acetato de etilo (100 mL) . Camadas orgânicas combinadas são lavadas com solução saturada de NaHCCb, secas sobre sulfato de sódio e concentradas para dar 22,5 g do composto em epígrafe. MS (m/z): 432 (M+l). 2. 4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano- 7,4' -piperidina] -1' -il)metil] -1- (3-fluoro-2-pirid.il) pirazo-le-3-carboxilato de etilo

A uma solução de 4-[ (2-cloro-4,4-difluoro-espiro [5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]—1'— i1)metil]-1H-pirazole-3-carboxilato de etilo (22,5 g, 52,10 mmoles) em dimetilformamida (225,00 mL) são adicionados Carbonato de Potássio (10,80 g, 78,14 mmoles) e 2,3-difluoropiridina 98 ΡΕ2501703 (7,19 g, 62,52 mmoles) e a suspensão resultante é agitada a 60°C durante 15 h. Depois, a mistura de reação é vertida sobre Gelo/salmoura (30 mL) e CH2CI2 (50 mL) é adicionado à suspensão resultante. A solução é lavada com H20 (2 x 50 mL). Os orgânicos são secos sobre sulfato de sódio e concentrados para dar um produto bruto que é purificado via filtração com Si02 eluindo com misturas de 2-propanol/CH2Cl2 para dar 18 g do composto em epígrafe. MS (m/z): 527 (M+l). 3. [4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano- 7,4' -piperidina] -1' -il)metil] -1- (3-fluoro-2-pirid.il) pira -zol-3-il]metanol

A uma solução de 4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espi-ro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-1-(3 — fluoro-2-piridil)pirazole-3-carboxilato de etilo (2,6 g, 4,93 mmoles) em tetra-hidrofurano (26,00 mL) sob atmosfera de N2 e arrefecida até -10°C, é adicionado lentamente gota a gota Hidreto de Di-isobutilo-alumínio 1M em tolueno (23:68 mL, 23,68 mmoles). Depois, a mistura de reação é agitada a essa T durante 15 min e depois, o banho frio é removido e a mistura é aquecida até à temperatura ambiente. Depois, H20 (100 mL) é adicionado gota a gota a -10°C. A suspensão resultante é extraida com EtOAc (2 x 30 mL) . Os 99 ΡΕ2501703 orgânicos combinados são lavados com H20 (50 mL) e salmoura (50 mL) , secos sobre Na2S04 e concentrados para obter um óleo castanho claro que é dissolvido em éter metil-t-butílico (10 mL) e cristais brancos cristalizados. A suspensão formada é agitada e é adicionado hexano (10 mL) gota a gota enquanto decorre agitação. O sólido é filtrado para dar 2 g do composto em epigrafe. MS (m/z): 485 (M+l).

Exemplo 54 : 2-(4-((2'-Cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidro- espiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-l-il)metil)-3-metil-lH-pirazol-l-il)-3-(3-metil-l,2,4-oxadiazol-5-il)-piridina

1. Éster de metilo de ácido 2-(4-((2'-Cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-il)metil)-3-metil-pirazol-l-il)-nicotinico A um tubo de teste com tampa roscada são adicionados óxido de cobre (I) (11 mg, 0,08 mmol), 2-cloro- 4,4-difluoro-l'-[(3-metil-lH-pirazol-4-il)metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] (300 mg, 0,8 mmol), carbonato de césio (523 mg, 1,6 mmol), dimetilformamida seca (1,6 mL) e uma barra de agitação. A mistura de reação 100 ΡΕ2501703 é borbulhada com azoto durante 20 minutos e depois são adicionados 2-iodopiridino-3-carboxilato de metilo (511 mg, 1,9 mmol) e trans-N,N'-dimetilciclo-hexano-1,2-diamina (0,24 mmol; 34 mg). O tubo de reação é rapidamente selado (atenção: possivel aumento de pressão; utilize um escudo de segurança) e imerso num banho de óleo pré-aquecido a 110°C durante 16 horas com a ajuda de um agitador magnético. Depois, a mistura é vertida sobre coluna SCX (10 g) e eluída com metanol e depois solução de amoníaco 2N em metanol. A fração básica é concentrada e o resíduo resultante é purificado através de gel de sílica utilizando cromatografia de fase normal Isco eluindo com hexano:etanol (gradiente de 2 a 15% em etanol) para dar 307 mg de éster de metilo de ácido 2-(4-((2'-cloro-4', 4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-il)metil)-3-metil-lH-pirazol-l-il)-nicotínico. MS (m/z): 309 (M+l). 2. 2-(4-((21-Cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro[pi peridina-4 ,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-il)metil)-3-metil-lH-pirazol-l-il)-3-(3-metil-l,2,4-oxadiazol-5-il)-piridina A uma solução de acetamida-oxima (154 mg, 2,1 mmol) em 7 mL de tetra-hidrofurano, são adicionados sob árgon 139 mg de crivos moleculares 4A moídos e hidreto de sódio (2,1 mmol; 84 mg a 60% em óleo mineral) . A mistura é deixada a agitar durante 30 min a 50°C. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, é adicionado éster de metilo de ácido 2-(4-((2'-cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro-[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-il)metil)-3-metil-lH- 101 ΡΕ2501703 pirazol-l-il)-nicotínico (309 mg, 0,6 mmol) e depois a mistura é aquecida a 50°C durante 40 min. É temperada após arrefecimento com água e extraida com diclorometano. Após secagem da fase orgânica com sulfato de magnésio e evaporação do solvente, o residuo é diluido em metanol e purificado utilizando um cartucho SCX de 5 g. O residuo resultante é ainda purificado através de HPLC de fase reversa semipreparativa_MS utilizando uma coluna Xbridge (5 um, 19 x 100 mm) e um gradiente entre 60 e 80% de B em A em 5 min a um fluxo de 25 mL/min (condições básicas de A: bicarbonato de amónio 20 mM pH 9 e B: acetonitrilo) para dar 71 mg do composto em epigrafe. MS (m/z): 533 (M+l).

Exemplo 55: (L)-Tartarato de 2-cloro-l'-[[1-(3-cloro-2- piridil)-3-metil-pirazol-4-il]metil]-4,4-difluoro-espiro-[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]

A uma solução de 2'-cloro-4',4'-difluoro-4' , 5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano] (0,2 g, 0,71 mmol) em 1,2-dicloroetano (5 mL) são adicionados 1—(3 — cloro-2-piridil)-3-metil-pirazole-4-carbaldeído (0,19 g, 0,86 mmol) e algumas gotas de ácido acético. A mistura de reação é agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. 102 ΡΕ2501703

Triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,315 g, 1,43 mmol) é adicionado e agita-se à temperatura ambiente durante 14 horas. Após conclusão, a mistura de reação é diluída com diclorometano e lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio e salmoura. A fase orgânica é seca sobre sulfato de sódio e concentrada in vacuo. A mistura bruta é purificada através de HPLC para produzir 0,195 g (56%) de 2-cloro-1'-[[1-(3-cloro-2-piridil)-3-metil-pirazol-4-il]me-til]-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-pipe-ridina]. MS (m/z): 485 (M+l). O sal tartarato é essencialmente preparado como descrito no Exemplo 1. MS (m/z): 485 (M+l).

Exemplo 56: (L)-Tartarato de 2-cloro-l'-[[1-(3-ciclopropil-2-piridil)-3-metil-pirazol-4-il]metil]-4,4-difluoro-espiro-[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]

O composto em epígrafe é preparado essencialmente como descrito no Exemplo 55 utilizando 2'-cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano] e 1-(3-ciclopropil-2-piridil)-3-metil-pirazole-4-carbaldeído como materiais de partida com uma rendimento de 41%. MS (m/z): 491 (M+l). 103 ΡΕ2501703

Exemplo 57 : 4-[[2-[4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tie-no[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pira-zol-l-il]-3-piridil]metil]morfolin-3-ona

Uma mistura de 2-cloro-4,4-difluoro-l'-[(3-metil-lH-pirazol-4-il)metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] (0,20 g, 0,53 mmol), 4-[(2-bromo-3-piridil)me- til]morfolin-3-ona (0,21 g, 0,77 mmol), iodeto de cobre (I) (0,015 g, 0,078 mmol) e carbonato de césio (0,36 g, 1,10 mmol) em dimetilformamida (5 mL) é desgaseifiçada borbulhando com árgon durante 15 minutos. É adicionada (1R,2R)~ N,N '-dimetilciclo-hexano-1,2-diamina (0,02 g, 0,14 mmol) enquanto ocorre desgaseificação durante 15 minutos e depois a mistura é aquecida até aos 130°C durante 16 horas. Após conclusão, a mistura de reação é deixada a arrefecer até à temperatura ambiente e filtrada através de celite. O residuo é lavado com acetato de etilo (2 x 25 mL) e o filtrado é lavado com água (30 mL) . A camada aquosa foi extraida com acetato de etilo (2 x 25 mL) e os extratos orgânicos combinados são secos sobre sulfato de sódio e concentrados in vacuo. A mistura bruta é purificada através de cromatografia de coluna sobre gel de silica eluindo com diclorometano/metanol (96:4) para produzir 0,09 g (30%) do composto em epígrafe. MS (m/z): 564 (M+l). 104 ΡΕ2501703

Os compostos dos Exemplos 58-59 são preparados essencialmente como descrito no Exemplo 57 a partir dos intermediários descritos nas Preparações 49 e 50 respetivamente .

Exemplo 60: [4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3- c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-1-(3-cloro-2-piri-dil)pirazol-3-il]metanol F.

F

Cl

N

Cl HO N.' tf Ν'

105 ΡΕ2501703 1. 4-((21-Cloro-4' , 4 '-difluoro-4' , 5'-di-hidroespiro[piperi-dina-4,71-tieno[2,3-c]piran]-l-il)metil)-1-(3-cloro-2-piridil)-lH-pirazole-3-carboxilato de etilo A uma solução de hidrocloreto de 2'-cloro-4 ' ,4 ' -difluoro-41,5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-cjpirano] (0,35 g, 1,1 mmol) e 1-(3-cloropiridin-2-il)-4-formil-pirazole-3-carboxilato de etilo (0,3 g, 1,0 mmol) em 1,2-dicloroetano (20 mL) é adicionada W-metilmorfolina (0,33 g, 3,2 mmol) e crivos moleculares (0,10 g). A mistura de reação é agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,58 g, 2,7 mmol) é adicionado e agitado à temperatura ambiente durante 16 h. Após conclusão, a mistura de reação é filtrada através de celite e partilhada entre diclorometano (15 mL) e água (15 mL). A fase aquosa é extraida com diclorometano (3 x 30 mL) e os extratos orgânicos combinados são secos sobre sulfato de sódio e concentrados in vacuo. A mistura bruta é purificada através de cromatografia de coluna sobre gel de silica eluindo com diclorometano/metanol (98:2) para produzir 0,4 g (67%) de 4-( (2'-cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-il)metil)-1-(3-cloro-2-piridil)-lH-pirazole-3-carboxilato de etilo. MS (m/z): 543 (M+l). 2. [4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-1-(3-cloro-2-piridil)pirazol-3-il]metanol 106 ΡΕ2501703 A uma solução de 4-( (2'-cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-il)metil)-1-(3-cloro-2-piridil)-lH-pirazole-3-carboxilato de etilo (0,4 g, 0,73 mmol) em tetra-hidrofurano (5 mL) e etanol (5 mL) é adicionado boro-hidreto de litio (1,80 mL, solução 2,0M em tetra-hidrofurano, 3,68 mmol) a 0°C e agita-se à temperatura ambiente durante 16 h. Após conclusão, a mistura de reação foi temperada com água (10 mL) e extraida com acetato de etilo (2 x 25 mL) . Os extratos orgânicos combinados são secos sobre sulfato de sódio e concentrados in vacuo. A mistura bruta é purificada através de cromatografia de coluna sobre gel de silica eluindo com diclorometano/metanol (97:3) para produzir 0,14 g (39%) do composto em epígrafe. MS (m/z): 500 (M+l).

Exemplo 61: [4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3- c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-1-(3-metil-2-piri-dil)pirazol-3-il]metanol

O composto em epígrafe é preparado essencialmente como descrito no Exemplo 60 utilizando hidrocloreto de 2'- 107 ΡΕ2501703 cloro-4',4'-difluoro-4', 5'-di-hidroespiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pirano] e 1-(3-metilpiridin-2-il)-4-formil-pirazole-3-carboxilato como materiais de partida com um rendimento de 14%. MS (m/z): 481 (M+l).

Exemplo 62: [2-[4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno- [2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pira-zol-l-il]-3-piridil]metanol

1. 2-[4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3- c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carbaldeido

Uma mistura de 2-cloro-4,4-difluoro-l'-[(3-metil-lH-pirazol-4-il)metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] (158,4 g, 451 mmol), Cul (12,9 g, 57,7 mmol) e carbonato de potássio (131 g, 947 mmol) em tolueno anidro (340 mL) é desgaseifiçada à temperatura ambiente durante 30 min. 2-Bromo-piridino-3-carbaxaldeído (125 g, 677 mmol) e trans-N,N'-dimetilciclo-hexano-1,2-diamina (21,3 mL, 135,4 mmol) são adicionados sequencialmente. Os conteúdos são desgaseifiçados durante 30 min antes de aquecimento a 105°C enquanto ocorre agitação durante 18 h. Análise por LC/MS da 108 ΡΕ2501703 mistura de reação revela consumo completo de 2-cloro-4,4-difluoro-1'-[(3-metil-lH-pirazol-4-il)metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]. A mistura de reação é arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com acetato de etilo (1,5 L), agitada e filtrada através de uma almofada de celite. O líquido-mãe é lavado sequencialmente com hidróxido de amónio a 10% (5 x 100 mL) , água (3 x 100 mL) , e salmoura. É então seco (sulfato de sódio), filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo é purificado em gel de sílica utilizando acetato de etilo a 50% em hexano contendo trietilamina a 1% para obter 2—[4— [ (2 — cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] -1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-car-baldeído como um sólido (156 g, 72% de rendimento) . MS (m/z): 479 (M+l). 2. [2-[4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pira no-7 ,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metanol A uma solução de 2-[4-[ (2-cloro-4,4-difluoro-espiro [5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]piridino-3-carbaldeído (180 g, 377 mmol) em diclorometano anidro de (1,5 L) a 0°C é sequencialmente adicionado boro-hidreto de sódio (7,2 g, 188,5 mmol) e metanol anidro de (0,5 L) e os conteúdos são deixados a alcançar a temperatura ambiente enquanto ocorre agitação durante 30 min. Análise por LC/MS da mistura de reação revela conclusão. Os voláteis são removidos sob 109 ΡΕ2501703 pressão reduzida e o resíduo obtido é partilhado entre diclorometano (2 L) e água (300 mL). As camadas são separadas e a camada orgânica é sequencialmente lavada com solução aquosa de hidróxido de sódio IN (300 mL), água (3 x 300 mL) , salmoura, seca (sulfato de sódio), filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo é purificado em gel de sílica utilizando acetato de etilo a 50-55% em he-xano contendo trietilamina a 1% para obter [2-[4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-l'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metanol como um sólido (167 g, com 92% de rendimento) . MS (m/z) : 481 (M+l).

Exemplo 63 Sal clorídrico de [2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metanol

[2-[4 - [ (2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-l'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il ]-3-piridil]metanol (157,4 g, 328 mmol) em acetato de etilo (1,5 L) é aquecido a 80°C até ser obtido uma solução transparente. À solução quente contendo base livre é 110 ΡΕ2501703 lentamente adicionado HC1 5-6N em isopropanol (65,6 mL, 328 mmol) e os conteúdos são agitados vigorosamente enquanto se deixa a mistura a alcançar a temperatura ambiente durante 2 h. É observada precipitação a meio da adição de HC1. O sólido branco resultante é filtrado, lavado com éter dietilico (3 x 1 L) , seco sob vácuo a 50°C durante 3 dias para obter sal clorídrico de [2-[4-[ (2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metanol como um sólido esbranquiçado (165 g, com 97% de rendimento). MS (m/z): 481 (M+l).

Composto marcador de ocupação de recetor: (L) -Tartarato de 2-[(2-fluorofenil)metil]-3-(2-fluoroespiro[4,5-di-hidroti-eno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)-N,N-dimetil-propanamida

1. 3-(2-Fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'- piperidina]-1'-il)propanoato de tert-butilo 2-Fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,2-c]pirano-7,4'-piperidina] (2,7 g, 11,9 mmol) é dissolvido em metanol (60 mL). Depois, trietilamina (2,65 mL) e acrilato de tert-butilo (3,55 mL, 23,76 mmol) são adicionados e a mistura é 111 ΡΕ2501703 aquecida até 65°C durante 5 h. 0 aquecimento é removido e a mistura de reação é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. 0 solvente é evaporado e o produto bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando acetato de etilo/hexano 1/1 como eluente para produzir 4,2 g do composto desejado como um óleo incolor. MS (m/z): 356 (M+l). 2. 2-[(2-Fluorofenil)metil]-3-(2-fluoroespiro[4,5-di-hidro- tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)propanoato_de tert-butilo A uma solução agitada de 3- (2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)propa-noato de tert-butilo (4,9 g, 13,78 mmol) em tetra-hidro-furano (41 mL) sob N2 e arrefecida até -78°C, é adicionado gota a gota bis(trimetilsilil)amideto de litio 1M (41,35 mL, 41,45 mmol). A mistura resultante é agitada a essa temperatura durante 3 horas. Depois, é adicionada 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetra-hidro-2(1H)-pirimidinona (1,33 mL, 11,03 mmol), e a solução resultante é agitada à mesma temperatura durante 30 min. À mistura resultante, é adicionado brometo de 2-fluorobenzilo (2,33 mL, 19,3 mmol) em tetra-hidrofurano seco (1 mL) e a agitação é continuada. A temperatura é deixada subir desde -78°C até à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura de reação bruta é temperada com solução aquosa saturada de cloreto de amónio e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica é decantada, seca sobre sulfato de magnésio, o solvente é 112 ΡΕ2501703 evaporado e o produto bruto obtido é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando acetato de etilo/hexano desde 5/95 até 20/80 para produzir 5,06 g do composto em epígrafe obtido como um óleo incolor. MS (m/z): 464 (M+l). 3. Sal trifluoroacético de ácido 2-[(2-fluorofenil)metil]-3-(2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)propanóico

Uma mistura de 2-[(2-fluorofenil)metil]-3-(2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] -1'-il)propanoato de tert-butilo (5,06 g, 10,91 mmol) e ácido trifluoroacético (26,20 mL, 218 mmol) é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. O solvente é evaporado até à secura e o produto bruto é utilizado sem mais purificação. 4. 2-[(2-Fluorofenil)metil]-3-(2-fluoroespiro[4,5-di-hidro-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)-tf,tf-dimetil-propanamida

Sal trifluoroacético de ácido 2- [ (2-fluoro-fenil)metil]-3-(2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7, 4 '-piperidina]-1'-il)propanóico (5,68 g, 10,89 mmol) é dissolvido em diclorometano (218 mL), depois trietilamina (12,14 mL, 87,13 mmol), hidrocloreto de dimetilamina (1,80 g, 21,78 mmol), Hidrocloreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (4,18 g, 21,78 mmol), e hidrato de 1- 113 ΡΕ2501703 hidroxibenzotriazole (3,34 g, 21,78 mmol) são subsequen-cialmente adicionados à solução a 0°C. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura de reação é tratada com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e extraída com diclorometano (3 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas são secas sobre sulfato de magnésio e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto é purificado através de cromatografia de fase normal Isco utilizando diclorometano/amónio 2N em metanol desde 100/0 até 90/10 como eluente para dar 4,0 g (84,5%) do composto em epigrafe. MS (m/z): 435 (M+l). 5. (L)-Tartarato de 2-[(2-fluorofenil)metil]-3-(2-fluo- roespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,41-piperidina]-1' -il) -N,N-dimetil-propanamida A resolução enantiomérica de 2-[(2-fluorofenil)-metil]-3-(2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4' -piperidina] -1' -il) -i7,W-dimetil-propanamida racémica (2,3 g, 5,29 mmol) é realizada com uma coluna Chiralpak AD® (Chiral Technologies, Inc., West Chester, Pennsylvania, USA) utilizando hexano/dimetiletilamina a 0,2% em etanol 9/1. O composto desejado é obtido com um rendimento de 36% como o primeiro enantiómero de eluição. O sal tartarato é essencialmente preparado como descrito no Exemplo 1. MS (m/z): 435 (M+l). 114 ΡΕ2501703

Difração de Raios X do pó 0 padrão XRD do sólido cristalino é obtido num difratómetro de Raios X do pó Bruker D4 Endeavor, equipado com uma fonte de CuKa λ = 1,54060 Â) e um detetor Vantec, que opera a 3 5 kV e 50 mA. A amostra é submetida a varrimento entre 4 e 40° em 20, com um tamanho de passo de 0, 0087° em 2Θ e uma taxa de varrimento de 0,5 segun-dos/passo, e com 0,6 mm de divergência, anti-dispersão fixada em 5,28, e fendas do detetor de 9,5 mm. O pó seco é enpacotado num suporte de amostra de quartzo e é obtida uma superfície lisa utilizando uma lâmina de vidro. Os padrões de difração da forma cristalina são recolhidos à tempe ratura e humidade relativa ambiente. O fundo foi removido antes da seleção do pico. É bem conhecido da técnica da cristalografia que, para qualquer dada forma cristalina, as intensidades relativas dos picos de difração podem variar devido à orientação preferida resultante de fatores tais como morfologia e hábito cristalinos. Quando os efeitos da orientação preferida estão presentes, as intensidades dos picos são alteradas, mas as posições características dos picos do polimorfo não se alteram. Ver, e.g., The United States Pharmacopeia #23, National Formulary #18, páginas 1843-1844, 1995. Além disso, é também bem sabido na técnica da cristalografia que para qualquer dada forma cristalina as posições angulares do pico podem variar ligeiramente. Por exemplo, posições do pico podem desviar-se devido a uma variação na temperatura ou humidade à qual uma amostra é analisada, deslocamento da amostra, ou a presença ou 115 ΡΕ2501703 ausência de um padrão interno. Neste caso, uma variabilidade na posição do pico de ± 0,1° em 20 vai ter em conta estas variações potenciais sem impedir a identificação inequívoca da forma cristalina indicada. A confirmação de uma forma cristalina pode ser feita com base numa qualquer combinação única de picos distintos (em unidades de ° 2Θ), tipicamente os picos mais proeminentes.

Deste modo, uma amostra cristalina preparada da base livre de (2-{4-[ (2'-cloro-4',4'-difluoro-4', 5'-di-hidro-lH-espiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-il)metil]-3-metil-lH-pirazol-l-il}piridin-3-il)metanol é caracterizada por um padrão XRD utilizando radiação CuKa como tendo picos de difração (valores 2-teta) tal como descrito na Tabela 1 que se segue. A forma cristalina única pode ser confirmada com um subconjunto de picos dintintos a partir deste padrão de difração completo. Deste modo, num modelo de realização a presente invenção proporciona uma forma cristalina de (2-{4-[(2'-cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidro-lH-espiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-il)metil]-3-metil-lH-pirazol-l-il}piridin-3-il)metanol caracterizada por um padrão XRD utilizando radiação CuKa possuindo picos de difração em 11,1 em combinação com um ou mais dos picos selecionados a partir do grupo constituído por 5,5, 13,5, 17,8, e 22,3 ± 0,1° em 2Θ. Num outro modelo de realização, a presente invenção proporciona uma forma cristalina de hidrocloreto de (2-{4-[ (2'-cloro-4' , 4 ' -difluoro-4',5'-di-hidro-lH-espiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-il)metil]-3-metil-lH-pirazol-l- 116 ΡΕ2501703 il}piridin-3-il)metanol caracterizada por um padrão XRD utilizando radiação CuKa possuindo picos de difração em 5,5, 11,1, 13,5, 17,8, e 22,3 ± 0,1° em 2Θ.

Tabela 1: Picos de difração de Raios X do pó da base livre de (2-{4-[(2,-cloro-4,,4'-difluoro-4',5'-di-hidro-lH-espiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-il)metil]-3-metil-lH-pirazol-l-il}piridin-3-il)metanol

Pico Ângulo (°2 teta) Intensidade % 1 5, 5 53,2 2 11,1 100 3 12,3 9,9 4 13,5 12 5 15,4 5,1 6 16, 6 4,8 7 17,0 5,5 8 17,8 12,1 9 19, 3 4,2 10 19, 5 5,5 11 19, 7 5, 6 12 21,0 11,1 13 22,3 25, 8 14 23,3 10,3 15 23, 9 5,7 16 26, 5 7,2 17 27,0 7,1 117 ΡΕ2501703

Da mesma forma, uma amostra cristalina preparada do sal HC1 de (2-{4-[ (2'-cloro-4',4'-difluoro-4', 5 '-di-hidro-lH-espiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-il)me-til]-3-metil-lH-pirazol-l-il}piridin-3-il)metanol é carac-terizada por um padrão XRD utilizando radiação CuKa como tendo picos de difração (valores 2-teta) tal como descrito na Tabela 2 que se segue. A forma cristalina única pode ser confirmada com um subconjunto de picos distintos a partir do padrão de difração completo. Deste modo, num modelo de realização a presente invenção proporciona uma forma cristalina de hidrocloreto de (2-{4-[ (2'-cloro-4',4'-difluoro-4' , 4'-di-hidro-lH-espiro[piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]pi-ran]-l-il)metil]-3-metil-lH-pirazol-l-il}piridin-3-il)metanol caracterizada por um padrão XRD utilizando radiação CuKa possuindo picos de difração em 16,2 em combinação com um ou mais dos picos selecionados a partir do grupo constituído por 10,8, 12,1, e 21,1 ± 0,1° em 2Θ. Num outro modelo de realização, a presente invenção proporciona uma forma cristalina de hidrocloreto de (2-{4-[(2'-cloro-4', 4 ' -difluoro-4',5'-di-hidro-lH-espiro[piperidina-4,7'-tieno-[2,3-c]piran]-l-il)metil]-3-metil-lH-pirazol-l-il}piridin-3-il)metanol caracterizada por um padrão XRD utilizando radiação CuKa possuindo picos de difração em 10,8, 12,1, 16,2, e 21,2° ± 0,1° em 2Θ.

Tabela 2: Picos de difração de Raios X do pó do sal HC1 de (2-{4-[ (2'-cloro-4',4'-difluoro-4',5'-di-hidro-lH-espiro [piperidina-4,7'-tieno[2,3-c]piran]-1-il)metil]-3-metil-lH-pirazol-l-il}piridin-3-il)metanol 118 ΡΕ2501703

Pico Ângulo (°2 teta) Intensidade % 1 10,8 70,5 2 12,1 41,4 3 16,2 80,1 4 18,7 60,8 5 19, 5 38, 6 6 20, 6 49, 5 7 21,1 64, 9 8 22,3 33, 1 9 23, 0 89, 6 10 23,5 100 11 24,0 43, 8

Dados da literatura (Przydzial e Heisler, 2008, supra; Reinscheid, 2006, supra) e dados gerados a partir de estudos não clínicos com animais apoiam um papel para os antagonistas de nociceptina no tratamento de depressão, obesidade e distúrbios alimentares, e enxaqueca. Especi-ficamente é considerado que antagonistas do recetor nociceptina são eficazes em modelos de depressão em roedores quer isoladamente quer em combinação com anti-depressivos inibidores da reabsorção serotonérgica seletiva (SSRI) ou tricíclicos, em modelos de de inibição de hiperfagia em roedores, de inibição de recuperação de peso que se segue a uma perda prévia de peso, e em modelos para enxaqueca. Além disso, estudos conduzidos em ratinhos knockout de recetores de nociceptina demonstraram que a ação de antagonistas de nociceptina no teste de natação 119 ΡΕ2501703 forçada (medida da atividade anti-depressiva) e na alimentação induzida após jejum (atividade anti-obesidade) depende do genotipo, suportando um mecanismo especifico de ação antagonista de nociceptina nestes modelos animais. Uma vez que as perturbações previamente descritas representam estados clínicos co-mórbidos comuns um antagonista do recetor nociceptina pode ser particularmente eficaz nestas populações de pacientes específicos, tal como pacientes com perturbação de depressão profunda, perturbação de comer em excesso, excesso de peso, obesidade, e obesidade com perturbações de humor clínicas co-mórbidas.

Para ir mais além na demonstração das caracte-rísticas dos presentes compostos, compostos representativos são testados nos ensaios in vitro e in vivo que se seguem:

Ligação ao Recetor In Vitro

Ensaios de ligação a radioligandos são comummente utilizados para determinar a afinidade (Κ±) ou potência de um composto para se ligar a um recetor particular ou proteína alvo. Um ensaio de ligação ao recetor de [3 H ] — OFQ/nociceptina com base em filtração é desenvolvido com base em formatos de ensaio prévios (Ardati A, Henningsen RA, Higelin J, Reinscheid RK, Civelli 0, Monsma FJ Jr. Mol Pharmacol. 1997 May; 51(5) : 816-24.) com modificações menores. Ensaios de ligação de [3H]-OFQ/nociceptina são realizados em placas de 96 cavidades de cavidades profundas. Estudos de competição [3H]0FQ (concentração final do ensaio 0,2 nM) são realizados com 5-10 yg de 120 ΡΕ2501703

proteína de membrana (isolada a partir de células de óvario de hamster Chinês (células CHO) que expressam recetores ORL1 humanos clonados) num volume final de ensaio de 0,5 mL de tampão contendo HEPES 20 mM, pH 7,4, MgCl2 5 mM, EGTA 1 mM, NaCl 100 mM, albumina do soro bovino a 0,1%. As amostras são incubadas durante 60 min à temperatura ambiente, que se considera ser ótima para ensaios de competição. Os ensaios são terminados por filtração através de filtros de fibra de vidro (Tapete de filtração Wallac A) [pré-tratado com polietilenoimina a 0,3% (Sigma) durante 1 h] num coletor de células Tometc, e os filtros são lavados três vezes com 5 mL de Tris-HCl 50 mM arrefecido por gelo, pH 7,4. Os tapetes de filtração são depois secos e embebidos em cintilante Meltilex A e a radioatividade contada num Contador de cintilações Wallac Microbeta. A ligação específica é determinada por deslocamento com nociceptina 100 nM não marcada. As curvas são traçadas como a percentagem de ligação específica e os valores IC50 são determinados utilizando uma curva de resposta de dose sigmoidal com declive variável. Os valores de K± são calculados a partir do IC50 através da equação de Cheng e Prusoff (Cheng, Y.C., and Prusoff, W.H, Biochem. Pharmacol. 22, 3099-3108 (1973)) onde Ki = IC50 x (1+D x Kd-1)"1.

Da mesma forma, Ki para os opióides mu, kappa e delta, recetores de serotonina, dopamina, adrenérgicos, mucarínicos, e histamina, assim como ligação ao transportador de norepinefrina, canal de sódio, canal de cloreto, e canal de cálcio pode ser determinada utilizando membranas que expressam os desejados canais do rece- 121 ΡΕ2501703 tor/transportador e moléculas que competem com os radio-ligandos correspondentes apropriados.

Os compostos exemplificados são testados essencialmente como descrito anteriormente e considera-se que possuem alta afinidade para o Recetor ORL-1. K± para o Recetor ORL-1 para os compostos exemplificados mostraram ser menores que 2 nM, enquanto que as K2 para outros recetores/transportadores/canais testados mostraram ser significativamente maiores. Os compostos dos Exemplos 62, 23, e 53 são testados essencialmente como descrito anteriormente e mostraram ter afinidades tal como demonstrado na Tabela 3 que se segue.

Tabela 3. Dados de seletividade

Ki (nM) Exemplo 62 Exemplo 23 Exemplo 53 ORL-1 0,18 0,79 0,45 Opióide Mu >451 >451 >451 Opióide Kappa >430 >430 >430 Opióide Delta >479 >479 >479 5-HT1a >3180 ND >3180 5-HT1b >3580 ND >3580 5-HTlc ND ND ND 5-HT1d >8550 ND >8550 5-HT1e >5370 ND >5370 5-HTif >8520 ND >8520 5-HT2a >5000 ND >5000 5-HT2b 693 ND 220 122 ΡΕ2501703 (continuação)

Ki (nM) Exemplo 62 Exemplo 23 Exemplo 53 5-HT2c >5650 ND >5650 5-HT4 >4120 ND >4120 5-HTs >9090 ND >90 90 5-HT6 ND ND >5830 5-HTv >3980 ND >3980 Dopamina Di >5000 ND >5000 Dopamina D2 >5000 ND >5000 Adenosina A3 >5000 ND >5000 Adrenérgico Alfai >5000 ND >5000 Adrenérgico Alfa2 >5000 ND >5000 Adrenérgico Betai >5000 ND >5000 Adrenérgico Beta2 >5000 ND >5000 Histamina Hl >5000 ND >5000 Muscarinico M2 >500 ND >5000 Muscarinico M3 >5000 ND >5000 Transportador de Norepinefrina >500 ND >500 Canal de Na+ 235 ND >500 Canal de Cl” >500 ND >500 Canal de Ca+2 (local DHP) >5000 ND >5000 Canal de Ca+2 (local diltiazem) >500 ND >500 Canal de Ca+2 (local verapamil) >500 ND >5000 ND = não determinado

Assim sendo, não se espera que doses fisiolo-gicamente relevantes dos compostos da invenção interajam 123 ΡΕ2501703 substancialmente com estes locais in vivo, e portanto espera-se prevenir efeitos indesejados associados a tal atividade.

Bloqueio Funcional In Vitro de Ligação de GTPy-[35S] de Ativação de proteina-G Mediada por Agonista

Estimulação mediada por agonista de recetores acoplados a proteina-G resulta na ativação de complexos de proteína-GaPY heterotrímero associada a membrana, e representa o primeiro passo na transdução de sinais extracelulares para modificação das vias intracelulares. 0 primeiro passo na ativação de proteínas-GaPY heterotrímero mediada por recetor é a permuta de difosfato de guanosina ligado a subunidade de Ga (GDP) por trifosfato de guanosina (GTP). A ligação de GTP à subunidade Ga provoca dissociação das subunidades do heterotrímero, GP e Gy, resultando na modulação de várias cascatas sinalizadoras intracelulares. Medição da ativação da proteína-G mediada por recetor pode ser medida utilizando o análogo radiomarcado não hidrolizável de GTP, GTP-y~[35S]. Utilizando esta metodologia, a afinidade do antagonista (Kb) é medida em membranas que expressam recetores 0RL1/nociceptina humanos clonados utilizando um ensaio de ligação GTP~y-[35S] de acordo com os protocolos previamente descritos com modificações menores (DeLapp et al., J Pharmacol Exp Ther. 1999 May; 289(2) : 946-55; Ozaki et al., Eur J Pharmacol. 2000 Aug 18; 402(1-2) : 45-53). Os ensaios são conduzidos num volume de 200-μ1 com a seguinte composição do tampão: NaCl 100 mM, HEPES 20 mM, MgCl2 5 mM, EDTA 1 mM, BSA a 124 ΡΕ2501703 0,1%, GDP 3 μΜ, [35S]GTPyS 0,5 nM. A suspensão da membrana do recetor ORL1 é adicionada a uma concentração de 20 yg de proteína por cavidade e a estimulação do recetor é alcançada utilizando nociceptina/OFQ 300 nM. As pérolas SPA revestidas de aglutinina de gérmen de trigo (Amersham, Arlington Hts., IL) são adicionadas a 1 mg por cavidade para detetar [35S]GTPyS ligado a membrana. As placas são seladas e incubadas durante 2 h à temperatura ambiente. As placas são depois colocadas a 4°C de um dia para o outro para permitir que as pérolas SPA repousem e depois são contadas num Wallac Microbeta. A ligação específica [35S]GTPyS é determinada como sendo a diferença em CPM observada na ausência e presença de GTPyS 10 μΜ não marcado. Os dados são apresentados graficamente como a percentagem de ligação de [35S]GTPyS específica. As curvas são traçadas como a percentagem de ligação específica e valores IC50 são determinados utilizando a curva de

resposta de dose sigmoidal com declive variável. A afinidade do antagonista (¾) é estimada de acordo com DeLapp et al., 1999 utilizando uma modificação da equação de Cheng e Prusoff (1973) onde Kb = IC50 x (1+D x EC50”1)”1.

Os compostos exemplificados são testados essencialmente como descrito anteriormente e mostraram ser antagonistas potentes do Recetor ORL-1. Kb para o Recetor ORL-1 para os compostos exemplificados mostrou ser menor que 6 nM. Os compostos dos Exemplos 1, 23, e 53 são testados essencialmente como descrito anteriormente e mostraram possuir Kb para o Recetor ORL-1 de 0,20, 1,52, e 0,62 nM, respetivamente. 125 ΡΕ2501703

Ocupação do Recetor In Vivo A ocupação do recetor (RO) utilizando LC/MS/MS foi estabelecida como uma forma de medir o comprometimento alvo central do putativo antagonista ORL-1 in vivo. A ocupação do recetor nociceptina/ORLl (RO) é medida no hipotálamo, uma estrutura que contém uma alta densidade de locais de ligação de nociceptina/ORLl que se encontram na barreira hematoencefálica, utilizando um novo marcador RO protegido de antagonista de nociceptina/ORLl, 2 — [ (2 — fluorofenil)metil]-3-(2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)-N,N-dimetil-propanamida, (Marcador RO). Estas medições são feitas sem necessidade de um marcador radiomarcado tal como previamente publicado para outros recetores com modificações (Chernet E, Martin LJ, Li D, Need AB, Barth VN, Rash KS, Phebus LA. Use of LC/MS to access brain tracer distribution in preclinical, in vivo receptor occupancy studies: dopamine D2, serotonin 2A and NK-1 receptors as examples. Life Sei. 78(4) : 340-6, 2005.).

Uma correlação positiva foi estabelecida entre RO nociceptina/ORLl central e eficácia na modulação do comportamento alimentar e teste de natação forçada em roedores. RO nociceptina/ORLl central é medido 6 ou 24 horas depois da administração oral do composto de teste a ratazanas. Ratazanas Sprague-Dawley machos (Harlan Sprague-Dawley, Indianapolis, IN) são tratados oralmente com um 126 ΡΕ2501703 composto de teste, ou veículo (Captisol a 20%, tampão de fosfato 25 mM, pH 2,0). 6 ou 24 horas a seguir à administração do composto de teste/veículo, é administrada intravenosamente a todos os animais, uma dose de 3 yg/kg de Marcador RO. É no momento da administração do Marcador RO que RO é considerado para medição. Quarenta minutos após administração do Marcador RO, as ratazanas são sacrificados através de deslocação cervical e o hipotálamo é removido. O nível de Marcador RO é medido em cada amostra de tecido. O padrão de referência da literatura ativo centralmente (-)-cis-l-metil-7-[[4-(2,6-diclorofenil)piperi-din-l-il]metil]-6,7,8,9-tetra-hidro-5H-benzociclo-heptan-5-ol (SB612111, ver Magdalena e Heisler, supra), um potente antagonista seletivo do recetor nociceptina/ORLl, é utilizado como um controlo positivo para estabelecer o nível do Marcador RO associado a RO nociceptina/ORLl a 100%. SB612111 é administrado intravenosamente numa dose de 30 mg/kg 1 h antes do Marcador RO (uma dose que resulta em aproximadamente RO a 100% de recetores nociceptina/ORLl hipotalâmicos).

Amostras hipotalâmicas são homogeneizadas em 4 volumes (p/v) de acetonitrilo contendo ácido fórmico a 0,1% e centrifugadas a 14000 RPM durante 16 min. Os sobrena-dantes são recolhidos e diluídos até um volume final de 0,3 mL com água esterilizada. A medição do Marcador RO é realizada utilizando HPLC Agilent modelo 1200 (Agilent Technologies, Paio Alto, CA) e um espetómetro de massa API 127 ΡΕ2501703 4000. A separação cromatográfica utiliza uma coluna C18 de 2,1 X 50 mm (Agilent part number 971700-907) e uma fase móvel constituída por acetonitrilo a 38% em água com um conteúdo global de 0, 1% de ácido fórmico. A deteção do Marcador RO é alcançada através da monitorização da transição do precursor para ião do produto com uma razão de massa para carga (m/z) de 435 a 239, com niveis quantificados por comparação com padrões preparados nos homogenatos do tecido cerebral. A percentagem zero de RO é calculada como o nivel de Marcador RO no hipotálamo de animais pré-tratados com veiculo, que representa a soma das ligações não especifica e especifica (todos os recetores disponíveis para o marcador). O nível mais baixo de Marcador RO em animais pré-tratados com a dose intravenosa muito elevada de SB612111, o grupo de controlo positivo, representa a ligação não específica e é atribuído o valor de ocupação 100% (nenhum recetor disponível para o marcador). O nível do Marcador RO encontrado no hipotálamo a partir do grupo tratado com o composto de teste é linearmente interpolado entre estes dois pontos para calcular RO para o composto de teste.

Os compostos exemplificado são testados essencialmente como descrito anteriormente e mostraram possuir alta ocupação do recetor no Recetor ORL-1. As ocupações do Recetor para os compostos exemplificados mostraram estar entre cerca de 40 a cerca de 130% para dose de 3 mg/kg após 6 h ou entre cerca de 20 e cerca de 96% RO para dose de 3 mg/kg após 24 h. As ocupações do recetor 128 ΡΕ2501703 para os compostos dos Exemplos 62, 23 e 53 são ensaiadas essencialmente como descrito anteriormente para dose de 3 mg/kg após 6 h e mostraram possuir RO 104, 80 e 83%, respetivamente. Como tal, é esperado que os compostos da presente invenção possuam biodisponibilidade e penetração no CNS favoráveis para os Recetores ORL-1 alvo.

Atividade do canal hERG O bloqueio da condutância do canal K+ no coração está associado com a cardiotoxicidade sob a forma de prolongamento de onda QT. A afinidade (K±) dos antagonistas do recetor nociceptina exemplificados para o canal K+ ERG humano (hERG) é determinada em células HEK293 que expressam hERG clonado utilizando o radioligando [3H]astemizole antagonista do canal hERG (2 nM de concentração final do ensaio) de acordo com procedimentos bem conhecidos (ver por exemplo Finlayson K, et al. (Eur J Pharmacol. 412(3) : 203- 12, 2001). Ensaios de ligação a [3H]Astemizole são realizados na empresa de investigação contratada Cerep (Paris França) de acordo com procedimentos padrão.

Exemplos 62, 23, e 53 são ensaiados essencial mente como descrito anteriormente e mostraram possuir atividade reduzida, com Ki de 6,08, 1,21, e 8,6 μΜ respe tivamente. Comparação da concentração de plasma in vivo necessária para produzir 80 por cento de RO (RO ECso) de recetores nociceptina/ORLl no CNS para o composto do exemplo 62 é aproximadamente 41 nM. Como tal, existe uma 129 ΡΕ2501703 grande separação entre as concentrações necessárias para produzir ocupação do recetor in vivo fisiologicamente relevante dos recetores de nociceptina/ORLl e as concentrações necessárias para atividade do canal K+-hERG. Consequentemente, não é esperado que doses fisiologicamente relevantes dos compostos da invenção interajam substancialmente com locais hERG in vivo, e portanto é esperado que não tenham efeito substancial no prolongamento QT.

Teste de Natagão-Forçada em Ratinhos (mFST) mFST é um ensaio estabelecido in vivo para atividade anti-depressiva (Li et ai. J Pharmacol Exp Ther. 319(1) : 254-9, 2006.). Ratinhos tratados com anti-depressivos clinicamente eficazes conhecidos (inibidores seletivos de reabsorção de serotonina e/ou anti-depressivos triciclicos) exibem o comportamento de passarem pouco tempo em imobilidade depois de serem colocados num tanque de água, um comportamento associado ao desespero. O mFST foi utilizado para avaliar potencial atividade semelhante a anti-depressiva dos novos antagonistas de nociceptina/ORLl de acordo com os métodos previamente publicados (Li et al. J Pharmacol Exp Ther. 319(1):254-9, 2006.). Resumidamente, são utilizados ratinhos NIH-Swiss machos (Harlan Sprague-Dawley, Indianapolis, IN) pesando entre 25-30 g. Os animais a viver em grupo são removidos do viveiro para área de teste nas suas próprias gaiolas e deixados a adaptarem-se ao novo meio durante pelo menos 1 hora antes de testar. Em alternativa, os ratinhos macho do tipo selvagem 129S6 e 130 ΡΕ2501703 knockout relativamente a recetores de ORL1/nociceptina foram utilizados para confirmar que a dependência da resposta ao composto era dependente do recetor ORLl/no-ciceptina. Todos os compostos são preparados em Captisol a 20%, tampão de fosfato 25 mM, pH 2,0 no dia de utilização. Os ratinhos são colocados num cilindro (diâmetro: 10 cm; altura: 25 cm) cheio com 6 cm de água (22-25°C) durante 6 min. A duração de imobilidade durante os últimos 4 min do periodo de 6 min do teste foi anotada. Um ratinho é registado como imóvel quando flutua sem movimento ou fazendo apenas ao movimentos necessários para manter a cabeça fora de água.

Os compostos representativos são testados essencialmente como descrito anteriormente e mostraram reduzir significativamente os tempos de imobilização dos ratinhos de tipo selvagem. Os compostos dos Exemplos 62, 23, e 53, são ensaiados essencialmente como descrito anteriormente e mostraram possuir ΕΌβο de 24,9, 9,5, e 12,9 mg/Kg respetivamente, com efeitos máximos de 45%, 58%, e 54% de reduções no tempo de imobilização, respetivamente. Assim sendo é esperado que os compostos da presente invenção possuam atividade anti-depressiva in vivo.

Além disso, os compostos da presente invenção podem ser utilizados em combinação com outros anti-depressivos conhecidos para produzir eficácia melhorada. O composto do Exemplo 62 é testado essencialmente como 131 ΡΕ2501703 descrito anteriormente em combinação com 10 mg/kg de fluoxetina e mostrou reduzir significativamente mais o tempo de imobilização relativamente quer a fluoxetina quer ao composto do Exemplo 62 isoladamente. Ver Tabela 4 que se segue.

Tabela 4 Teste de natação forçada de Ratinhos - Tratamento

Combinado com fluoxetina

Tratamento Tempo de Imobilização (seg) Desvio padrão da média (seg)(n=8) Veiculo 174 16 3 mg/Kg do Ex. 62 163 17 10 mg/Kg do Ex. 62 129 19 10 mg/Kg de fluoxetina 168 14 3 mg/Kg do Ex. 62+10 mg/Kg de fluoxetina 97* 19 10 mg/Kg do Ex. 62+10 mg/Kg de fluoxetina 85* 15 15 mg/kg de Imiprimina (controlo positivo anti-depressivo) 96* 20 * Redução Estatisticamente significativa relativamente ao veiculo, Ex 62 isoladamente, e fluoxetina isoladamente.

Além disso, estes efeitos de tempos de imobi- 132 ΡΕ2501703 lização reduzida não são observados quando ratinhos knockout ORL-1, uma estirpe de ratinhos criada de forma a não possuir recetor ORL-1, são utilizados, demonstrando que de facto o efeito é mediado pelo recetor ORL-1. 0 composto do Exemplo 62 é testado essencialmente como descrito anteriormente utilizando ratinhos do tipo selvagem num dos grupos do estudo e ratinhos knockout ORL-1 no segundo grupo do estudo, e mostrou reduzir significativamente o tempo de imobilização nos ratinhos do tipo selvagem, mas não mostrou qualquer efeito nos ratinhos knockout. Um anti-depressivo inibidor da reabsorção de norepineferina, imiprimina, é testado como um controlo positivo e demonstrou reduzir os tempos de imobilização quer no tipo selvagem quer nos ratinhos knockout para um grau equivalente, demonstrando que o efeito comportamental mediado pelo mecanismo de reabsorção de norepineferina está intacto na estirpe do ratinho knockout.

Bloqueio de Hiperfagia Induzida após Jejum em ratinhos. 0 bloqueio de hiperfagia induzida após jejum em roedores é um modelo aceite para distúrbios alimentares hiperfágicos. (Hollopeter G, Erickson JC, Seeley RJ, Marsh DJ, Palmiter RD. Response of neuropeptide Y-deficient mice to feeding effectors. Regul Pept. 1998 Sep 25; 75-76 : 383-9.) Todas as experiências são realizadas em ratinhos naif macho do tipo selvagem de doze semanas de idade e ratinhos knockout ORL mantidos num ambiente congénito 129S6. Os 133 ΡΕ2501703 ratinhos são individuamente alojados no mínimo 3 dias antes do início dos testes para eliminar quaisquer efeitos de stresse devido à mudança de alojamento de grupo para alojamento individual. Três ratinhos/genótipo são aleatoriamente atribuídos a cada grupo de tratamento no dia do teste. São feitas medições de peso corporal pré-jejum, e a comida é então removida das gaiolas de um dia para o outro. Os ratinhos são sujeitos a jejum durante aproximadamente 15 h. Na manhã seguinte, é dada aos ratinhos uma de três doses do fármaco ou veículo por via oral por sonda gástrica 30 min antes de obterem o acesso à comida. Os fármacos são dissolvidos em Captisol a 20% dissolvido em tampão de fosfato 25 mM, pH 2,0. Medições de peso corporal são realizadas imediatamente antes do tratamento pelo fármaco ou 24 h após o acesso à comida ser restaurado. Vale a pena notar que todos os ratinhos independentemente do genótipo perdem ~5-10% do peso corporal a seguir ao jejum de um dia para o outro. Medições de ingestão de comida são registadas lha seguir ao acesso à comida, tal como indicado, através do peso da comida remanescente ao fim de 1 h. Deverá ser tido em conta que a medição da ingestão de comida é medida durante a fase de luz, um período durante o qual os ratinhos estão tipicamente a descansar e normalmente não estão a comer. A seguir ao teste inicial, os ratinhos descansaram durante 1 semana com acesso a ração ilimitada. A seguir à semana de descanso, os ratinhos são testados novamente de acordo com o protocolo de quadrado latino apresentado na Tabela 5. 134 ΡΕ2501703

Tabela 5. Um protocolos de quadrado latino é utilizado para determinar as curvas de resposta à dose da ação anorética dos novos antagonistas ORL em ratinhos do tipo selvagem e ratinhos knockout ORL.

Período de Tratamento Grupo de Tratamento A B C D 1 Veículo A c B 2 A B Veículo C 3 B C A Veículo 4 C Veículo B A

Compostos representativos são testados essencialmente como descrito anteriormente e mostraram reduzir significativamente a hiperfagia induzida após jejum em ratinhos. Exemplos 62, 23, e 53, são ensaiados essencialmente como descrito anteriormente e mostraram bloquear substancialmente a hiperfagia induzida após jejum. 0 efeito não foi observado na estirpe de ratinhos knockout ORL-1, demonstrando que o efeito é mediado através do recetor ORL-1. 0 agonista 5-HT2o mCPP é utilizado como um controlo positivo e mostrou reduzir significativamente a hiperfagia induzida por jejum igualmente quer em ratinhos do tipo selvagem quer na estirpe de ratinhos knockout ORL-1. Como tal, é esperado que os compostos da presente invenção sejam úteis no tratamento de excesso de peso e/ou obesidade e/ou para manutenção de peso, como por exemplo o tratamento de comer em excesso. 135 ΡΕ2501703

Modelo de Estravasamento de Proteina do Plasma (PPE) Durai em Ratazanas - Protocolo de Dosagem Oral

Todos os composto de teste são preparados numa solução de veículo contendo Captisol a 20% em tampão de fosfato 25 mM (pH 2,0) . O composto de controlo positivo, sumatriptano, é dissolvido em solução salina. Às ratazanas Sprague-Dawley macho de Harlan Laboratories (250 a 350 g) , que foram sujeitas a jejum de um dia para o outro, são dadas doses do composto de teste, sumatriptano ou veículo através de sonda gástrica oral (2 mL/kg). Cinquenta min após a dose as ratazanas são anestesiadas com Nembutal (60 mg/kg, ip) e colocadas numa grelha estereotáxica com a barra incisora ajustada a -2,5 mm. A seguir a uma incisão longitudinal na linha média do escalpe, foram perfurados 2 pares de buracos bilaterais através do crânio (3,2 mm posteriormente, 1,8 e 3,8 mm lateralmente, todas as coordenadas referenciadas em relação a bregma). Pares de elétrodos estimuladores de aço inoxidável (Rhodes Medicai Systems Inc) , isolados exceto nas extremidades, são descidos através dos buracos em ambos os hemisférios até uma profundidade de 9,2 mm abaixo da dura.

Uma solução de albumina do soro bovino (BSA) marcada com corante isotiocianato de fluorosceína (FITC) (FITC-BSA) (20 mg/kg, iv) , é injetada na veia femoral 2 minutos antes da estimulação elétrica do gânglio trigeminal para funcionar como marcador para o estravasamento da proteína. Sessenta minutos a seguir à dosagem com composto 136 ΡΕ2501703 de teste ou veículo, o gânglio trigeminal esquerdo é eletricamente estimulado durante 5 minutos a uma intensidade de corrente de 1,0 mA (5 Hz, 5 minutos de duração).

Cinco minutos depois da estimulação, as ratazanas são mortas por exsanguinação com 40 mL de solução salina que também remove por enxaguamento o FITC/BSA residual dos vasos sanguíneos. O topo do crânio é removido para recolher as membranas durais. As amostras de membrana são removidas de ambos os hemisférios, enxaguadas com água, e espalhadas na horizontal em lamelas de microscópio. As lamelas são secas durante 15 minutos num aquecedor de lamelas e cobertas com uma lamela com solução de glicerina a 70%/água.

Um microscópio de fluorescência equipado com um monocromador com rede e um espetrofotómetro é utilizado para quantificar a quantidade de corante FITC-BSA em cada amostra durai. O microscópio é equipado com uma plataforma monitorizada com interface com um computador pessoal. Isto facilita o movimento da plataforma controlado pelo computador, com medições de fluorescência em 25 pontos (passos de 500 ym) em cada amostra durai. O estravasamento induzido por estimulação elétrica do gânglio trigeminal é um efeito ipsilateral (que acontece apenas do lado da dura onde o gânglio trigeminal é estimulado). Isto permite que a outra metade (não estimulada) da dura seja utilizada como um controlo. É calculada a razão do estravasamento (que é a 137 ΡΕ2501703 razão da quantidade de estravasamento na dura do lado estimulado comparado com o lado não estimulado). Os animais aos quais foram administradas doses apenas com veiculo ou uma dose ineficaz do composto de teste apresentam uma razão de estravasamento de aproximadamente 2, enquanto que tratamentos totalmente eficazes resultam numa razão de aproximadamente 1.

Os resultados são expressos como valores médios com desvios padrão da média (± SEM) . Todas as avaliações estatísticas são conduzidas utilizando ANOVA seguida de comparação com o grupo de controlo através de Método de Dunnett. A significância estatística é assumida quando p<0,05. Análises estatísticas são realizadas utilizando software de análise estatística JMP (SAS Research Institute, versão 6.0.2). O composto do Exemplo 62 é testado essencialmente como descrito anteriormente e mostrou bloquear eficazmente o estravasamento de uma forma dependente da dose. (Ver Tabela 5 que se segue.) Como resultado, é esperado que os compostos da presente invenção sejam úteis no tratamento de enxaqueca.

Tabela 5. Ensaio de estravasamento da proteína do plasma (PPE) durai em ratazanas para o composto do Exemplo 62. * Estatisticamente significativo vs. Veículo. 138 ΡΕ2501703

Tratamento (po) Razão de Estravasamento (média) s.e.m. n Veiculo 1, 91 0, 04 4 Ex. 62 (0,1 mg/kg) 1,83 0, 06 3 Ex. 62 (1,0 mg/kg) 1,44* 0, 08 3 Ex. 62 (10,0 mg/kg) 1,20* 0, 03 3 Ex. 62 (30,0 mg/kg) 1,14* 0, 05 3 Sumatriptano (1,0 mg/kg) 1,06* 0,01 3

Estabilidade para formação do metabolito reativo

Literatura anterior sugere uma correlação entre a formação do metabolito reativo e toxicidades clinicas conhecidas como reações idiossincráticas a fármacos (IDRs), apesar de não ter sido estabelecido um efeito causal direto. Assumindo que metabolitos reativos podem desempenhar um papel nas IDRs clinicas, foi proposta a mini-mização do potencial para bioativação oxidante como um meio para melhorar o perfil global de segurança de compostos contendo caracteristicas estruturais associadas a tal reatividade. (ver Baillie, Thomas A., Approaches to the Assessment of Stable e Chemically Reactive Drug Metabolites in Early Clinicai Trials, Chemical Research in Toxicology, vol 22(2) 2009.) Com este fim, compostos representativos da presente invenção e compostos relacionados são rastreados utilizando um ensaio de captura microssomática hepática em ratazanas, utilizando glutationa como um nucleófilo endógeno, para compreender o potencial de bioativação oxidante 139 ΡΕ2501703 da porção tienilo. Dos compostos testados, aqueles em que R2a e R2b são hidrogénio mostraram evidências de formação conjugada de glutationa sugestiva de oxidação na porção tienilo. Dos compostos testados, aqueles em que R2a e R2b são fluoro não mostraram formação conjugada de glutationa. (Ver Tabela 3, que se segue.) A ausência de formação conjugada de glutationa para as moléculas contendo gem-difluoro sugere que o substituinte gem-difluoro reduz a propensão quimica inerente para a bioativação tal como testado no ensaio.

Tabela 3. Formação conjugada de Glutationa em homogenato microsomático hepático

Composto Formação conjugada de glutationa (L) Tartarato de 3-fluoro-2-[4-[(2-fluoroespiro[4,5-di-hidrotieno-[2,3-c]pirano-7,4' -piperidina] -1-il) rretil] -3-rretil-pirazol-l-il]benzamida Sim (L) Tartarato de 3-fluoro-2-[4-[(2,3-difluoroespiro[4,5-di-hidro-tieno [2,3-c]pirano-7,4' -piperidina] -1' -il) rretil] -3-rretil-pirazol-l-il]benzamida Sim (Ex. 14) (L) Tartarato de 2-cloro-l'-[ [l-[3-(rretoxirretil)-2-piridil]-3-rretil-pirazol-4-il ] rretil ] espiro [ 4,5-di-hidrotieno [ 2,3-c ] pirano-7,4'-piperidina] Sim (Ex. 10) (L) Tartarato de 2,4,4-trifluoro-l'-[[1-[3-(metoximetil)-2-piridil]-3-metil-pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina] Não (Ex. 18) (L) Tartarato de 3-fluoro-2-[3-metil-4-[(2,4,4-trifluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]pirazol-l-il]benzamida Não 140 ΡΕ2501703

Embora seja possível administrar compostos empregues nos métodos desta invenção diretamente sem qualquer formulação, os compostos são normalmente administrados sob a forma de composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um composto da Fórmula I, ou um seu sal farma-ceuticamente aceitável, como um ingrediente ativo e pelo menos um veículo diluente e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Estas composições podem ser administradas através de uma variedade de vias incluindo oral, intranasal, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, e pulmonar. Tais composições farmacêuticas e processos para sua preparação são bem conhecidos da técnica. Ver, e.g., Remington: The Science and Practice de Pharmacy (University of the Sciences in Philadelphia, ed., 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins Co. , 2005) .

As composições são preferencialmente formuladas numa forma de dosagem unitária, contendo cada dosagem entre cerca de 0,1 até cerca de 500 mg, mais usualmente entre cerca de 1,0 até cerca de 200 mg, como por exemplo entre cerca de 5 e 50 mg do ingrediente ativo. O termo "forma de dosagem unitária" refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas enquanto dosagens unitárias para sujeitos humanos e outros mamíferos, contendo cada unidade uma quantidade pré-determinada de material ativo calculado para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com pelo menos um veículo, diluente e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável adequado. 141 ΡΕ2501703

Os compostos da Fórmula I são geralmente eficazes sobre uma gama alargada de dosagens. Por exemplo, dosagens diárias normalmente encontram-se dentro da gama entre cerca de 0,01 até cerca de 50 mg/kg, mais usualmente entre cerca de 0,05 até 5,0 mg/kg, e como por exemplo entre 0,1 e 1,0 mg/kg de peso corporal. Em alguns casos niveis de dosagem abaixo do limite inferior da gama supracitada podem ser mais do que adequados, enquanto que noutros casos doses ainda maiores podem ser empregues sem causar qualquer efeito secundário prejudicial, e por isso não se pretende que a gama de dosagem referida seja de nenhuma forma limitativa do âmbito da invenção. Será entendido que a quantidade do composto realmente administrado será determinada por um médico, à luz das circunstâncias relevantes, incluindo o estado a ser tratado, a via de administração escolhida, o composto ou compostos reais administrados, a idade, peso, e resposta do paciente individual, e a gravidade dos sintomas do paciente.

Lisboa, 20 de novembro de 2013

Claims (7)

1. ΡΕ2501703 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto da fórmula:

   em que R1 é fluoro ou cloro; R2a e R2b são cada um hidrogénio ou são cada um fluoro; R3 é hidrogénio, metilo, hidroximetilo, ou (C1-C3) alcoxi-metilo; R4 é selecionado a partir do grupo constituído por fluoro, cloro, ciano, cianometilo, (C1-C3)alquilo, ciclopropilo, hidroximetilo, metoxi, ciclopropilmetoxi, aminocarbonilme-toxi, (C1-C3)alcoximetilo, ciclopropiloximetilo, ciclopro-pilmetoximetilo, 1-hidroxi-l-metiletilo, aminocarboniloxi-metilo, metilaminocarboniloximetilo, dimetilaminocarbonilo-ximetilo, aminocarbonilo, aminocarbonilmetilo, -CH2-NR5R6, hidroxi-imina, metoxi-imina, morfolin-4-ilo, morfolin-4-ilmetilo, Ar1, -CH2Ar1, tetra-hidrofuran-2-ilo, 3-oxomor-folin-4-ilmetilo, 2-oxopirrolidin-l-ilmetilo, e 2-oxopipe-ridin-l-ilmetilo; 2 ΡΕ2501703 R5 é hidrogénio, C1-C3 alquilo, cianometilo, -C(0)CH3, ou aminocarbonilmetilo; R1 é hidrogénio ou metilo; e Ar1 é a porção selecionada a partir do grupo constituído por imidizol-l-ilo, imidizol-2-ilo, 2-metilimidizol-l-ilo, pirazol-l-ilo, 1,2,3-triazol-l-ilo; 1,2,3-triazol-2-ilo; 1,2,4-triazol-l-ilo, isoxazol-3-ilo, oxazol-5-ilo, e 3-metil-1,2,4-oxadiazol-5-ilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 2. 0 composto de Reivindicação 1 em que R1 é cloro, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 3. 0 composto da Reivindicação 1 ou 2 em que R2a e R2b são cada um fluoro, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 4. 0 composto de Reivindicação 1 em que R1 é fluoro e R2a e R2b são cada um hidrogénio, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 5. 0 composto de qualquer uma das Reivindi cações 1 a 4 em que R3 é metilo, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 1 0 composto de qualquer uma das Reivindi cações 1 a 5 em que R4 é fluoro, hidroximetilo, metoxi-metilo, ou pirazol-l-ilmetilo, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 3 ΡΕ2501703 7. 0 composto de acordo com a Reivindicação 1 que é [2-[4-[(2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]-pirano-7,4'-piperidina]-1'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridi1]metanol; 2-cloro-4,4-difluoro-1'-[[3-metil-l-[3-(pirazol-l-ilmetil) -2-piridil]pirazol-4-il]metil]espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]; ou [4 - [ (2-cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]pirano-7,4'-piperidina]-l'-il)metil]-l-(3 — fluoro-2-piridil)pira-zol-3-il]metanol; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável . 8. 0 composto de acordo com Reivindicação 1 o qual é [2-[4-[(2-Cloro-4,4-difluoro-espiro[5H-tieno[2,3-c]-pirano-7,4'-piperidina]-l'-il)metil]-3-metil-pirazol-l-il]-3-piridil]metanol, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável .
2. 9. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 8, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um veiculo, diluente, ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.
3. 10. A composição farmacêutica da Reivindicação 9 compreendendo ainda pelo menos um ingrediente terapêutico adicional. 11. A composição farmacêutica de Reivindicação 4 ΡΕ2501703 10 onde o ingrediente terapêutico adicional é um anti-depressivo SSRI.
4. 12. Um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 8, ou um seu sal f armaceuticamente aceitavel, para utilização em
5. 13. Um composto ou aceitável, para utilização de no tratamento de obesidade ou
6. 14. Um composto ou aceitável, para utilização de no tratamento de enxaqueca.
7. 15. Um composto ou aceitável, para utilização de no tratamento de depressão. terapia. um seu sal farmaceuticamente acordo com a Reivindicação 12 excesso de peso num humano. um seu sal farmaceuticamente acordo com a Reivindicação 12 um seu sal farmaceuticamente acordo com a Reivindicação 12 Lisboa, 20 de novembro de 2013 1 ΡΕ2501703 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição * WQ 20930SS427 A Literatura que não é de patentes citada na Descrição * YOSHIZUtt!; TAKASHI et al. Design, synthesis, and stnjcture-actstfiy t»íatkmsbip study ssf a novei dass of ORL-1 recepter antagorsists fcased on M-bi-asyimethyi spíropíperidirie. Sioorgarsic <6 Medicinal Gbemis&y LMers-, 2:008,. voí. 18, 3778-3782 * Journal of Pharmaceu&cal Science. 1377, vd, 68, 2-19 * O RE ENE ; WUTS. Proiecíivs Grougs in Organie Synthesb. John Wiiey and Sons Inc. 19% * RÍCHARD C. LAROCK. Cen^reheosfvs Ofganic TraraforroaUons. John Witey and Sons Soe, 1933 * 77» Ufídeo' Sfeias Ptismaeopam #23, Nadoasl for-msteryitiS, 1395, 1843-1844 * ARDÀT1A ; HENNtNGSEN RA; HSGEUN J ; REÍN-SCHEiD RK; CSVELLÍ O; HONSKA FJ JR. McJ PharmscsL, May 1897. voí. S1 (5), 816-24 * CHENG, Y.C.; PRUSOFF. W.H, Bmcheni. Pterma-eoL 1973, voí. 22, 3089-3188 - DELAPP et al, J Pftannacoi Bsp Th&r,. May 1999, voí. 283 jf2}> 346-55 * GZAK! «1 «L EwJ Phatmacoi,, 18 Atjgust 2000. voí 402 (1-2), 45-53 * CHERNET E ; MARTiN LJ ; Li D ; NEED A8 ; BAR-IH YN ; RASH KS ; PHEBUS LA. Use of LGftIS io asuss bratn ífscsr disiributíon trs precSmcai. « vivo recsptoroccupafssy siudfesí dopardne 02, serotofiin 2A and NK-1 reoepíof-sassxamples, Life S«., 2005, voí. 76 i4). 340-8' * FiMLAYSON K «f aí, Ear J PtiarmacoL 2001, vai. 412 (3), 203-12 * L! et aí. J Pbanrnooi Exp 7ber., 2006, voí. 319 (1), 254-3 « HOLLOPETER S ; ERiCKSON JC ; SEELEY RJ ; MARSH DJ ; PALMiTER RD. Response of nso-ropepíideY-dsfk.:efitfnics Scfeeding sffocfors. Regai PepL, 25 Saplambat 1938, voí. 75-76, 383-9 * BAtLLÍE, TH08SAS A, Approaehes k> tbs Asssss-merá of Stabie and Chefnkxssiy Rssciive Drug Me-iaboiifes tn Ear(y Ciinicsí Tíisis. Cltemisa! Res&srch in TasiedGgy. 2809. voí, 22 (2 * REMíNGT QN. The Science and Píactice of Phatma-cy, Lippincot; VViifens & VViíkina Co, 2895